FI118008B - Androstaanit ja pregnaanit GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi - Google Patents

Androstaanit ja pregnaanit GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI118008B
FI118008B FI963174A FI963174A FI118008B FI 118008 B FI118008 B FI 118008B FI 963174 A FI963174 A FI 963174A FI 963174 A FI963174 A FI 963174A FI 118008 B FI118008 B FI 118008B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
pregnan
hydroxy
optionally substituted
acid
group
Prior art date
Application number
FI963174A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI963174A (fi
FI963174A0 (fi
Inventor
Ravindra B Upasani
Haiji Xia
Derk Hogenkamp
Original Assignee
Cocensys Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26892391&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI118008(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Cocensys Inc filed Critical Cocensys Inc
Publication of FI963174A0 publication Critical patent/FI963174A0/fi
Publication of FI963174A publication Critical patent/FI963174A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI118008B publication Critical patent/FI118008B/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J33/00—Normal steroids having a sulfur-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J33/002—Normal steroids having a sulfur-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of only two carbon atoms, e.g. pregnane derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0094—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing nitrile radicals, including thiocyanide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J5/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane and substituted in position 21 by only one singly bound oxygen atom, i.e. only one oxygen bound to position 21 by a single bond
    • C07J5/0007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane and substituted in position 21 by only one singly bound oxygen atom, i.e. only one oxygen bound to position 21 by a single bond not substituted in position 17 alfa
    • C07J5/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane and substituted in position 21 by only one singly bound oxygen atom, i.e. only one oxygen bound to position 21 by a single bond not substituted in position 17 alfa not substituted in position 16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/002—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa not substituted in position 16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/008—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms substituted in position 21
    • C07J7/0085—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms substituted in position 21 by an halogen atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Optical Fibers, Optical Fiber Cores, And Optical Fiber Bundles (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

, 1 1 8008 ,·
Androstaanit ja pregnaanit GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi
Esillä oleva keksintö kohdistuu koostumuksiin ja yhdisteisiin eläinten (ja ihmisten) aivojen 5 - kiihottumisen moduloimiseksi gamma-aminobutyylihappo-A- (GABAa) -reseptoriklondi-ionoforikompleksin (GRC) kautta. Erityisesti esillä oleva keksintö kohdistuu koostumuksiin ja yhdisteisiin aivojen kiihottumisen moduloimiseksi sitoutumalla GRC:n neuroste-roidireseptorikohtiin.
10 Aivojen kiihottuminen määritellään eläimen kiihottumistasona, kontinuumina, joka vaihte-lee koomasta kouristuksiin ja jota säätelevät erilaiset hermostolliset välittäjät. Yleisesti hermostolliset välittäjät ovat vastuussa ionien johtamisesta hermosolukalvojen poikki. Levossa hermostosolukalvon jännite (tai solukalvon jännite) on noin -80 mV, solun sisäosan ollessa negatiivinen suhteessa solun ulkopintaan. Jännite on tulos ionin (K>, Na+, Cl-, or-15 gaaniset anionit) tasapainosta hermoston puoliläpäisevän solukalvon läpi. Hermostollisia välittäjiä säilytetään presynaptisissa rakkuloissa ja ne vapautuvat hermostollisen toiminnan jännitteiden vaikutuksesta. Kun ne vapautuvat synaptiseen halkeamaan, kiihottava kemiallinen välittäjä kuten asetyylikoliini aiheuttaa solukalvon depolarisoitumisen (jännitteen muutos -80 mV:sta -50 mV:iin). Tätä vaikutusta välittää postsynaptiset nikotiini- f . 20 reseptorit, joita stimuloi asetyylikoliini, jolloin solukalvon Na+-ioniläpäisevyys kasvaa.
• · · *"* Pienentynyt solukalvon jännite stimuloi hermostollista kiihottumista postsynaptisen toi- • * • · · minnan jännitteen muodossa.
·*«**.
• · • * · * » · * * | ^ GRC:n tapauksessa vaikutuksen aivojen kiihottumiseen välittää GABA, hermoston välit- • · * y 25 täjäaine. GABA:lla on merkittävä vaikutus aivojen kokonaiskiihottumiseen, koska jopa 40 • · · % aivojen neuroneista käyttää GABA:aa hermoston välittäjäaineena. GABA säätelee yksit- täisten neuronien kiihottumista säätelemällä kloridi-ionien johtokykyä hermosolukalvojen :***; läpi. GABA vaikuttaa GRC:ssä olevan tunnistuskohtansa kanssa helpottaakseen kloridi- * · · ionien virtausta alas GRC:n sähkökemiallista gradienttia soluun sisälle. Tämän anioiiin ,i * · ["’·>' 30 määrän solunsisäinen kasvu aiheuttaa solukalvon jännitteen hyperpolarisoitumisen, saaden • · • < aikaan sen, että neuronit ovat vähemmän alttiita kiihottaville ärsykkeille (se on, pienenty- ... nyt neuronin kiihotuminen). Toisin sanoen, mitä suurempi kloridi-ionien konsentraatio * · • · neuronissa on sitä alempi on aivojen kiihottuminen (kiihottumisen määrä). ; 118008 ; 2
On hyvin dokumentoitua, että GRC on vastuussa ahdistuksen, halvauskohtausaktiivisuu-den ja sedaation välittämisestä. Siten GABA ja lääkkeet, jotka toimivat GABA:n tapaan tai helpottavan GABA:n vaikutuksia (esim. terapeuttisesti käyttökelpoiset barbituraatit ja bentsodiatsepiinit (BZ:t) kuten Valium) tuottavan terapeuttisesti käyttökelpoiset vaikutuk-5 set vaikuttamalla GRC:ssä olevien spesifisten säätelykohtien kautta.
On myös havaittu, että lukuisat steroidien metaboliitit toimivat GRC:n kanssa, jolloin aivojen kiihottuminen muuttuu (Majewska, M.D. et ai., "Steroid hormone metabolites are barbiturate-like modulators of the GABA receptor", Science 232:1004-1007 (1986); 10 Harrison, N.L. et al., "Structure-activity reltionship for steroid interaction with the gamma-aminobutyric acid-A receptor complex", J. Pharmacol. Exp. Ther. 241:346-353 (1987)). Ennen esillä olevaa keksintöä alan ammattimiehet eivät tunnistaneet näiden steroidien metaboliittien terapeuttista käyttökelpoisuutta johtuen voimakkuuden ja toimintapaikan epätäydellisestä ymmärtämisestä. Tämän hakemuksen keksintö kohdistuu osit-15 tain sellaisen tiedon farmaseuttiseen sovellukseen, joka on saavutettu tiettyjen steroidiyh-disteiden voimakkuuden ja toimintapaikan kehittyneemmästä ymmärtämyksestä.
• A
Munasarjahormonilla progesteronilla ja sen metaboliiteilla on osoitettu olevan huomatta- ·*· va teho aivojen kiihottumiseen (Backström, T. et ai., "Ovarian steroid hormones: effects • · · * 20 on mood, behavior and brain excitability", Acta Obstet. Gynecol. Scand. Suppl. 130:19- 24 (1985); Pfaff, D.W. ja McEwen, B.S., "Action of estrogens and progestins on nerve * * · 1' : *.· cells," Science 219:808-814 (1983); Gyermek et al., "Structure activity relationship of « · · *·:.* some steroidal hypnotic agents", J. Med. Chem. 11:117 (1968); Lambert, J. et al., "Ac- • · · • · * *·* * tions of synthetic and endogenous steroids on the GABAa receptor", Trends Pharmacol.
,. 25 8:224-227 (1987)). Progesteronin ja sen metaboliittien määrät vaihtelevat kuukautiskier- • ·· .
\..# ron vaiheiden mukana. On dokumentoitu hyvin, että progesteroni ja sen metaboliitit vä- • * • · « henevät ennen kuukautisten alkamista. Tiettyjen fysikaalisten oireiden kuukausittainen * · · • · *..! uudelleen esiintyminen ennen kuukautisten alkamista on myös hyvin dokumentoitu. Näi- • · *·* hin oireisiin, jotka liitetään premenstruaaliseen oireyhtymään (PMS), kuuluvat stressi, ... 30 ahdistuneisuus ja migreenipäänsärky. (Dalton, K., Premenstrual Syndrome and Progeste- • · • · rone Therapy, 2. painos, Chigago: Chigago yearbook, 1984). Potilailla, joilla on PMS, sellaiset oireet esiintyvät uudelleen kuukausittain, joita oireita esiintyy ennen kuukautisia mutta joita ei esiinny kuukautisten jälkeen.
. :-3 118008
Samalla tavalla progesteronin väheneminen korreloi myös ajallisesti halvauskohtausffek-5 venssin kasvun kanssa naispuolisissa epileptikoissa. (Esimerkiksi kuukautisiin liittyvä epilepsia; Laidlaw, J., "Catamenial epilepsy", Lancet, 1235-1237 (1956). Suorempi korrelaatio on havaittu progesteronin metaboliittien vähenemisen kanssa (Rosciszewska et ai., "Ovarian hormones, anticonvulsant drugs and seizures during the menstrual cycle in women with epilepsy", J. Neurol. Neurosurg. Psych. 49:47-51 (1986)). Lisäksi potilail-10 la, joilla on primäärinen yleinen petit mal -epilepsia, halvauskohtausten ajoittainen esiintyminen korreloi premenstruaalisen syndrooman oireiden esiintyvyyden kanssa (Backström, T. et ai, "Endocrinological aspects of cyclical mood changes during the menstrual cycle or the premenstrual syndrome", J. Psychosom. Obstet. Gynaecol. 2:8-20 (1983)). Deoksikortikosteroni -steroidin on havaittu olevan tehokas hoidettaessa potilaita, joilla on 15 epileptisiä kohtauksia, jotka korreloivat heidän kuukautisrytminsä kanssa (Aird, R. B. ja Gordan, G., "Anticonvulsive properties of deoxycorticosterone", J. Amer. Med. Soc.
145:715-719 (1951)).
.. Oireyhtymä, joka myös liityy pieniin progesteronimääriin, on synnytyksen jälkeinen ma- ··· *.!** 20 sennus (postnatal depression, PND). Heti synnyttämisen jälkeen progesteronimäärät las- • «· kevät dramaattisesti johtaen PND:n alkamiseen. PND:n oireet vaihtelevät lievästä masen- • · .V. nuksesta sairaalahoitoa vaativaan psykoosiin; PND liittyy vakavaan ahdistuneisuuteen ja • · : ärsyyntyvyyteen. PND:hen liittyvä masennus ei ole kunnolla hoidettavissa klassisilla • · · :*·*: antidepressanteilla ja naisilla, joilla on PND, on suurentunut PMS:n esiintyvyys (Dalton, 25 K., 1984).
• · * • · · ··· • · * V * Yhteenvetona nämä havainnot viittaavat siihen, että progesteronilla ja deoksikortikoste- ; *· ronilla ja erityisemmin niiden metaboliiteilla on tärkeä osa aivojen kiihottumisen tasapai- • · » *...· non säätelyssä, joka ilmenee halvauskohtausaktiivisuuden tai kuukautisiin liittyvään • :*: 30 epilepsiaan, PMS:ään ja PND:hen liittyvien oireiden lisääntymisenä. Korrelaatio proges-• * teronin alentuneiden määrien sekä PM S. ään, PND:hen ja kuukautisiin liittyvään epilepsiaan liittyvien oireiden välillä (Backström et ai., 1983; Dalton, K., 1984) ovat antaneet 4 118008 aiheen progesteronin käyttämiseksi niiden hoidossa (Mattson et ai., "Medroxyprogesterone therapy of catamenial epilepsy", julkaisussa Advances in epileptology: XVth Epilepsy International Symposium, Raven Press, New York, 279-282, 1984, ja Dalton, K., 1984). Progesteroni ei kuitenkaan ole yhdenmukaisen tehokas edellä mainittujen oireyhtymien 5 hoidossa. Esimerkiksi progesteronilla ei ole annos-vaste -suhdetta PMS:n hoidossa (Mad-docks, et ai., "A double-blind placebo-controlled trial of progesterone vaginal suppositories in the treatment of premenstrual syndrome", Obster. Gynecol. 154:573-581 (1986); Dennerstein, et al., British Medical Journal, 290:16-18 (1986)).
10 Julkaisut ja viitteet, joihin tässä patenttiselityksessä on edellä ja jäljempänä viitattu, sisällytetään tähän viitteenä.
Keksinnön yhteenveto 15 Esillä oleva keksintö kohdistuu menetelmiin, koostumuksiin ja yhdisteisiin aivojen kiihottumisen moduloimiseksi. Erityisemmin keksintö koskee 3a-hydroksyloitujen ste-roidijohdannaisten käyttöön, jotka toimivat nyt tunnistetuissa GR-kompleksin kohdissa, moduloimaan aivojen kiihottumista sillä tavalla, että lievitetään stressiä, ahdistuneisuutta, unettomuutta, mielialahäiriöitä (kuten masennusta), jotka reagoivat GR-aktiivisiin ainei-20 siin, ja halvauskohtausaktiivisuutta. Sellaiseen käsittelyyn tehokkaat koostumukset ja yh- • ·· disteet ovat keksinnön suojapiirin sisällä.
• · • · · • · « · i Keksinnössä käytettävät yhdisteet ja keksinnön osan muodostavat yhdisteet ovat kes- • · ♦ kushermostosysteemin kiihottumisen modulaattoreita, jota kiihottumista välittää niiden 25 kyky säädellä kloridi-ionikanavia, jotka liittyvät GABAA-reseptorikompleksiin. Keksijöi-den kokeet ovat osoittaneet, että keksinnössä käytetyillä yhdisteillä ja keksinnön mukai- * m · *.* * silla yhdisteillä on kouristuksia estävä ja ahdistusta lievittävä aktiivisuus, joka on saman- * ··· .
V* : lainen kuin tunnettujen anksiolyyttisten aineiden vaikutus, kuten bentsodiatsepiinien, • # * l...: mutta jotka toimivat GR-kompleksin erillään olevassa kohdassa.
: 30 • a * *
* J
it*·· Progesteronin endogeenisten metaboliittien suhde lisääntymiseen liittyviin prosesseihin (kuukautiskierto ja raskaus) on hyvin tunnettu (Marker, R.E., Kamm, O., ja McGrew, 5 ' ' 118008 R.V., "Isolation of epipregnanol-3-one-20 from human pregnancy urine", J. Am. Chem. Soc. 59:616-618 (1937)). Ennen esillä olevaa keksintöä ei kutenkaan tiedetty, kuinka käsitellä häiriöitä moduloimalla aivojen kiihottumista käyttämällä progesteronin metabo-liitteja ja niiden johdannaisia. Siten tämä keksintö kohdistuu menetelmiin, koostumuksiin 5 ja yhdisteisiin häiriöiden käsittelemiseksi moduloimalla aivojen kiihottumista käyttämällä keksinnön mukaisia yhdisteitä. Edustavia häiriöitä, joita hoidetaan esillä olevassa keksinnössä, ovat epilepsia, ahdistuneisuus, premenstruaalinen oireyhtymä (PMS), synnytyksen jälkeinen masennus (PND), mielialahäiriöt (kuten masennus), jotka reagoivat GR-aktii-visiin aineisiin, ja unettomuus. Yhdisteitä voidaan käyttää myös anestesian aikaansaami-10 seksi.
Piirustusten lyhyt kuvaus
Alan ammattimiehet voivat paremmin ymmärtää esillä olevaa keksintöä ja arvostaa sen 15 etuja, kun viitataan liitteenä oleviin piirustuksiin, joissa:
Kuviot IA ja IB ovat diagrammi [35S] t-butyylibisyklofosforitionaatin ([35S]TBPS) rotan aivon solukalvoihin sitoutumisen prosenttiosuus alfaksalonin ja GABA.n logaritmiste .. konsentraatioiden funktiona erilaisissa (+)-bikukulliinin konsentraatioissa.
2o
Kuvio 2 esittää aikaruuppuvuuden 2 nM [35S]TBPS:n dissosiaatiolle rotan aivokuoren P2-homogenaateista, minkä saa alkamaan 2 μΜ TBPS:n (), 1 μΜ 3α5αΡ:η (□), 100 μΜ • :*· Na-pentobarbitaalin (·) ja 1 μΜ 3α5αΡ + 100 μΜ Na-pentobarbitaalin (o) lisääminen.
• · · ··· ·*·.· • * · 25 Kuvio 3 on diagrammi, joka esittää pentobarbitaalin yksittäisannoksen vaikutuksen 3a- V..: OH-5a-pregnan-20’Onin (3a-5a-P) moduloimaan [3H]-flunitratsepamin sitoutumiseen • · · * * · V* rotan hippokampuksen homogenaatteihin.
• · · • · * · · · • · ♦ * * · ·
Kuvio 4 diagrammi, joka esitää 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin, 3a,21-dihydroksi-5a- : 30 pregnan-20-onin (5a-THDOC) ja R5020:n (promegesteroni) tehon inhiboida [35S]TBPS:n • * ·,*·: sitoummista rotan aivokuoren homegenaattiin.
118008 6
Kuvio 5 on diagrammi TBPS-sitoutumisen ja 15 erilaisen 3a-hydroksyloidun steroidin sähköfysiologisen aktiivuuden välisestä korrelaatiosta.
Kuvio 6 on diagrammi, joka esittää 3a-OH-5a-pregnan-20-onin, 5a-pregnan-3oc,20a-5 diolin ja 5a-pregnan-3a,20p-diolin tehon inhiboida [35S]TBPS:n sitoutumista rotan aivokuoren homogenaattiin.
Kuvio 7 on diagrammi, joka esittää 3a-OH-5a-pregnan-20-onin, 5a-pregnan-3a,20a-diolin ja 5a-pregnan-3a,2Qp-diolin vaikumksen GABA:n herättämään virtaan Xenopus-10 varhaismunasoluissa, joihin on injektoitu ihmisen rekombinantti-GABA-reseptorin alayksikköön alply2L.
Kuvio 8 on graafinen esitys valosta pimeään siirtymisen lukumäärästä, jotka siirtymiset tapahtuvat kymmenen minuutin sisällä 3a-OH-5a-pregnan-20-onin ja 3a-OH-5P-preg-15 nan-20-onin injektiosta.
Kuviot 9A ja 9B ovat kaksi viivagraafista esitystä (A) sisääntulojen prosenttiosuudesta ja (B) ajasta avoimissa haaroissa viiden mituutin koeaikana 3a-OH-5a-pregnan-20-onilla ja .. 3oc-OH-5B-pregnan-20-onilla käsiteltynä koholla oleva ristikkosokkelo -kokeessa.
··· :r 20 • · • · · 4#,.; Kuvio 10 on viivagrafiikka muutoksena peruslinjasta rankaistujen rottien vasteena 3a- • · . V. OH-5a-pregnan-20-onille ja 3a-OH-5p-pregnan-20-onille Gellerin ja Seiferin kokeessa.
• · • * * I * « • *·
Kuvio 11 on diagrammi, joka kuvaa useiden 3a-OH-5a-pregnan-20-onin esilääkkeiden 25 antimetratsoliaktiivisuuksien aikariippuvuuden.
* * * « t # · K* • * · '.* ' Edullisten toteutusmuotojen yksityiskohtainen kuvaus • · · • * * i t * * • · ·
Keksinnön mukaiset yhdisteet ja keksinnössä käytetyt yhdisteet ovat erilaisten 3a-hyd- ; 30 roksyloitujen pregnaanien ja 3a-hydroksyloitujen androstaanien johdannaisia, ja niiden • * t/·· esteri-, eetteri-, sulfonaatti-, sulfaatti-, fosfonaatti-, fosfaatti-, oksiimi-, tiosulfaatti-, heterosykli- ja heteroaryylijohdannaisia ja esilääkkeinä mainittujen johdannaisia. Ilmaisu 7 118008 : "esilääke" tarkoittaa tunnetun, suoraan vaikuttavan lääkkeen johdannaista, jolla on kasvaneet luovutusominaisuudet ja terapeuttinen arvo verrattuna lääkkeeseen, ja se muuttuu aktiiviseksi lääkkeeksi entsymaattisella tai kemiallisella prosessilla; katso Notari, R.E.
"Theory and Practice of Prodrug Kinetics", Methods in Enzymology, 112:309-323 5 (1985); Bodor, N., "Novel Approaches in Prodrug Design", Drugs of the Future, 6(3): 165-182 (1981); ja Bundgaard, H., "Design of Prodrugs: Bioreversible-Derivatives for Various Funktional Groups and Chemical Entities", julkaisussa Design of Prodrugs (H.
Bundgaard, toim.), Elsevier, New York (1985). On huomattava, että jotkin synteettiset johdannaiset, jotka muodostavat osan esillä olevasta keksinöstä, eivät voi olla todellisia 10 esilääkkeitä, koska, edellä olevien tunnuspiirteiden lisäksi, niillä on myös todellista aktiivisuutta. Tämän hakemuksen tarkoituksiin niihin kuitenkin viitataan esilääkkeinä.
Tutkimuksemme (Gee, K.W. et ai., "GABA-dependent modulation of the Cl ionophore by steroids in rat brain", European Journal of Pharmacology, 136:419-423, 1987) ovat 15 osoittaneet, että 3ce-hydroksyloidut steroidit, joita käytetään keksinnössä, ovat suuruusluokkia voimakkaampia kuin muiden raportoimat (Majewska, M.D. et ai (1986) ja Harrison, N.L. et ai (1987) GR-kompkleksin modulaattoreina. Majewska et ai. ja Harrison et ai. opettavat, että 3a-hydroksyloitu-5-pelkistetty-steroidit kykenevät vain paljon alhai-sempiin tehokkuustasoihin. Meidän in vitro- ja in vivo -koetuloksemme osoittavat, että * · · · 20 näiden steroidien suuri voimakkuus sallii niiden olevan terapeuttisesti käyttökelpoisia *:**: aivojen kiihottumisen moduloimisessa GR-kompleksin kautta. Tehokkaimpiin steroidei- ♦ · ♦ • *,: hin, jotka ovat käyttökelpoisia esillä olevassa keksinnössä, kuuluvat progesteronin ja deoksikortikosteronin päämetaboliittien johdannaiset. Näitä steroideja voidaan spesifisesti • · · '·' * käyttää moduloimaan aivojen kiihottumista stressissä, ahdistuneisuudessa, unettomuudes- 25 sa, mielialahäiriöissä (masennus), jotka ovat vastaanottavaisia GR-aktiivisille aineille, ja • · *... halvauskohtaushäiriöissä terapeuttisesti hyödyllisellä tavalla. Lisäksi olemme osoittaneet, • · * · *·* että nämä steroidit toimivat ainutlaatuisessa kohdassa GR-kompeksissa, joka on erillään « « · muista tunnetuista vaikutuskohdista (se on, barbituraatti, BZ ja GABA), joiden terapeut- f « * * * *" tisesti hyödyllisiä vaikutuksia sterssiin, ahdistuneisuuteen, uneen, mielialahäiriöihin ja * / 30 halvauskohtaushäiriöihin on aikaisemmin paljastettu (Gee, K.W. ja Yamamura, J.I., • · "Benzodiazepines and Barbiturates: Drugs for the Treatment of Anxiety, Insomnia and Seizure Disorders", julkaisussa In Central Nervous System Disorders, sivut 123-147, 118008 8 D.C. Horvell, toim., 1985; Lloyd, K.G. ja Morselli, P.L., "Psychopharmacology of GABAergic Drugs", julkaisun Psychopharmacology: The Third Generation of Progress, sivut 183-195, H.Y. Meltzer, toim., Raven Press, N.Y., 1987). Nämä yhdisteet ovat edullisia, koska ne ovat kestäviä, voimakkaita ja oraalisesti aktiivisia (muiden 5 annostusmuotojen joukossa).
Tämän keksinnön mukaiset steroidijohdannaiset ovat sellaisia, joilla on seuraava rakennekaava (I): 10 ^ R I4 j /** «.jr s'S) 15 1 «
Rio jossa R, Rlt R2, R3, R,, R5, R^, R7, Rg, R^ ja R10 ovat kuten tässä on tarkemmin määritel- .. ty ja pilkkuviivat ovat yksinkertaisia sidoksia tai kaksoissidoksia. Kaavan I mukainen »·· 20 rakenne käsittää androstaanit, pregnaanit (R4 = metyyli), 19-nor-androstaanit ja norpreg- t ·· naanit (R4 = H).
e. 1 9 1 ···' * · * · t Esillä oleva keksintö käsittää myös kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti » · · hyväksyttävät esterit ja suolat, mukaanlukien happoadditiosuolat. Uskotaan, että 3a-hyd-25 roksyyli voidaan myös naamioida farmaseuttisesti hyväksyttäväksi esteriksi johtuen siitä « V:.: tosiseikasta, että esteri pilkkoutuu pois kun esilääke muuttuu lääkemuotoon. Näihin viita- % · · .
v1 taan tässä yhteydessä termillä lohkaistavat esterit.
• # · • 1 · f · · * * 9 1 j *...· Määritelmät 30 * · · · Γ1.; Esillä olevan keksinnön mukaisesti ja kuten tässä käytetään, seuraavat termit määritellään seuraavin merkityksin, ellei erityisesti toisin mainita.
118008 9
Termi "alkyyli" viittaa tyydyttyneisiin alifaattisiin ryhmiin mukaan lukien suoraketjuiset, haaraketjuiset ja sykliset ryhmät, jotka kaikki voivat olla mahdollisesti substituoituja. Sopiviin alkyyliryhmiin kuuluvat metyyli, etyyli ja vastaavat, ja ne voivat mahdollisesti olla substituoituja.
5
Termi "alkenyyli" viittaa tyydyttymättömiin ryhmiin, jotka sisältävät ainakin yhden hiili-hiili-kaksoissidoksen, mukaan lukien suoraketjuiset, haaraketjuiset ja sykliset ryhmät, joista kaikki voivat olla mahdollisesti substituoituja.
10 Termi "alkynyyli" viittaa tyydyttymättömiin hiilivetyryhmiin, jotka sisältävät ainakin yhden hiili-hiili-kolmoissidoksen ja joihin kuuluvat suoraketjuiset ja haaraketjuiset ryhmät, jotka voivat mahdollisesti olla substituoituja. Sopiviin alkynyyliryhmiin kuuluvat propynyyli, pentynyyli ja vastaavat, jotka voivat mahdollisesti olla substituoituja syano-, asetoksi-, halogenidi-, hydroksi- tai ketoryhmällä. Edullisilla alkynyyliryhmillä on vii-15 destä kahdeksaantoista hiiliatomia. Edullisemmilla alkynyyliryhmillä on viidestä kahteentoista hiiliatomia. Edullisimmilla alkynyyliryhmillä on viidestä seitsemään hiiliatomia.
Termi "alkoksi" viittaa eetteriin -OR, jossa R on alkyyli.
• * -*♦· **»* 20 Termi "aryylioksi" viittaa eetteriin-OR, jossa R on aryyli.
:*·’{ Termi "aryyli" viittaa aromaattisiin ryhmiin, joilla on ainakin yksi rengas, jossa on kon- jugoitunut π-elektronisysteemi, ja joihin kuuluvat karbosykliset aryyli ja biaryyli, joista » it* l.: : molemmat voivat mahdollisesti olla substituoituja.
25 » t * * '··' Termi "karbosyklinen aryyli" viittaa ryhmään, jossa aromaattisen renkaan rengasatomit • · ί « · · \ ovat hiiliatomeja. Karbosyklisnn aryyliryhmiin kuuluvat fenyyli-ja naftyyliryhmät, jotka • r» • * * *»* * ovat mahdollisesti substituoituja. Substituoidulla fenyylillä on edullisesti yhdestä koi- f 4* J ♦ *;** meen, neljän tai viiteen substituenttia, sellaisen ollessa edullisesti alempi alkyyli, amino, * · : 30 amido, syano, karoksylaattiesteri, hydroksi, alempi alkoksi, halogeeni, alempi asyyli ja * ♦ t * * *. *: nitro.
118008 ίο
Termi "aralkyyli" viittaa alkyyliryhmään, joka on substituoitu aryyliryhmällä. Sopiviin aralkyyliryhmiin kuuluvat bentsyyli ja vastaavat ja ne voivat olla mahdollisesti substituoi-tuja.
5 Termi "alkanoyylioksi" viittaa ryhmään -0-C(0)R, jossa R on alkyyli, alkenyyli, alky-nyyli, aryyli tai aralkyyli.
Termi "karbalkoksyyli" viittaa ryhmään -C(0)0R, jossa R on alkyyli, alkenyyli, alky-nyyli, aryyli tai aralkyyli.
10
Termi "karboksamidi" viittaa ryhmään -C(0)NRR,, jossa R ja Rt ovat toisistaan riippumattomasti valittu joukosta vety, alkyyli, alkenyyli, alkynyyli, aryyli tai aralkyyli.
Termi "dialkyyliamino" viittaa ryhmään -NRR", jossa R ja R" ovat toisistaan riippumat-15 tomasti alempi alkyyliryhmä tai ne muodostavat yhdessä morfolinoryhmän osan. Sopiviin dialkyyliaminoryhmiin kuuluvat dimetyyliamino, dietyyliamino ja morfolino.
Termi "asyyli" viittaa alkanoyyliryhmään -C(0)R, jossa R on alkyyli, alkenyyli, alky-nyyli, aryyli tai aralkyyli.
¥? 20 ♦ *· •
Termi "amino" viittaa ryhmään NRR’, jossa R ja R’ ovat toisistaan riippumattomasti .’·*· vety, alempi alkyyli tai ne ovat liittyneet toisiinsa, jolloin muodostuu 5- tai 6-jäseninen t ;*! rengas, esimerkiksi pyrrolidiini-tai piperidiinirengas.
t ** • « f ' • ♦ « 4 25 Termi "mahdollisesti substitoitu" tai "substituoitu" viittaa ryhmään, joka on substituoitu Φ · · yhdestä kolmeen, neljään tai viiteen substituentilla, itsenäisesti valittuna joukosta alempi »»f «s- « · alkyyli (asyklinen tai syklinen), aryyli (karboaryyli ja heteroaryyli), alkenyyli, alkynyyli, ·# * V: alkoksi, halogeeni, halogeenialkyyli (mukaanlukien trihalogeenialkyyli, esimerkiksi trifluorimetyyli), amino, merkapto, alkyylitio, alkyylisulfinyyli, alkyylisulfonyyli, nitro, i SJi 30 alkanoyyli, alkanoyylioksi, alkanoyylioksialkanoyyli, alkoksikarboksi, karbalkoksi, • » V*i (-COOR, jossa R on alempi alkyyli), karboksamido (-CONRR’, jossa R ja R' ovat toisis taan riippumatta alempi alkyyli), formyyli, karboksyyli, hydroksi, syano, atsido, keto ja 118008 π niiden sykliset ketaalit, alkanoyyliamido, heteroaryylioksi, heterokarbosyklioksi ja hemisukkinaattiesterisuolat.
Termiä "alempi” käytetään tässä yhteydessä orgaanisten radikaalien tai yhdisteiden yh-5 teydessä määrittämään sellaisia, joissa on jopa kymmenen, edullisesti jopa kuusi, ja edullisemmin yhdestä neljään hiiliatomia. Sellaiset ryhmät voivat olla suoraketjuisia, haaraketjuisia tai syklisiä.
Termi "heterosyklinen" viittaa hiiltä sisältäviin radikaaleihin, joissa on neljä, viisi, kuusi 10 tai seitsemänjäseniset renkaat ja yksi, kaksi tai kolme O, N tai S heteroatomia, esimer- f kiksi tiatsolidiini, tetrahydrofuraani, 1,4-didoksaani, pyrrolidiini, piperidiini, kinuklidii-ni, ditiaani, tetrahydropyraani, e-kaprolaktoni, e-kaprolaktaami, ω-tiokaprolaktaami ja morfoliini.
15 Termi "heteroaryyli" viittaa hiiltä sisältäviin 5-14 jäsenisiin syklisiin tyydyttymättömiin radikaaleihin, jotka sisältävät yksi, kaksi, kolme tai neljä O, N tai S atomia ja joilla on 6, 10 tai 14 π-elektronia delokalisoituneena yhteen tai useampaan renkaaseen, esimerkiksi pyridiini, oksatsoli, indoli, puriini, pyrimidiini, imidatsoli, bentsimidatsoli, indatsoli, '··· 2H-l,2,4-triatsoli, 1,2,3-triatsoli, 2H-l,2,3,4-tetratsoli, lH-l,2,3,4-tetratsoli, bentsot- ···« 20 riatsoli, l,2,3-triatsoli[4,5-b]pyridiini, tiatsoli, isoksatsoli, pyratsoli, kinoliini, sytosiini, ·:·*: tyrniini, urasiili, adeniini, guaniini, pyratsiini, pikoliinihappo, pikoliini, furaanikarbok- * * • V syylihappo, furfuraali, furyylialkoholi, karbatsoli, 9H-pyrido[3,4-b]indoli, isokinoliini, * pyrroli, tiofeeni, furaani, 9(10H)-akridoni, fenoksatsiini ja fenotiatsiini, joista kukin voi • · · • · · *.* ' olla mahdollisesti olla substituoitu kuten edellä on selitetty.
25 • · ·
Termi "dihappo" viittaa C,.5-alkyleeniryhmiin, jotka on substituoitu kahdella karboksi- ♦ « · • · · ryhmällä, esimerkiksi malonihappo, meripihkahappo, glutaarihappo, adipiinihappo, * t * • · · ‘ pimeliinihappo ja korkkihappo. Dihappojen hemiesterisuoloihin kuuluvat niiden nat- • * rium-, litium-, kalium-, magnesium-ja kalsiumsuolat.
: 30 • · * « ♦ *· *: Termi "β-asetyyli-tiosulfaattisuola" viittauksen tarkoitetaan käsittävän natrium-, litium-, kalium-, magnesium-ja kalsiumsuolat.
; : 12 118008
Termi "farmaseuttisesti hyväksyttävät esterit tai suolat" viittaa kaavan I mukaisiin este-reihin tai suoloihin, jotka on johdettu tämän keksinnön mukaisen yhdisteen ja orgaanisen tai epäorgaanisen hapon tai emäksen yhdistelmästä.
5 Esillä olevan keksinnön mukaisesti ketaaleihin kuuluvat alempien alkanolien dieetterit, esimerkiksi dimetyyli- ja dietyyliketaalit, samoin kuin sykliset ketaalit, joihin kuuluvat C2.3-alkaanidiolien dieetterit, esimerkiksi etyleeniketaalit ja propyleeniketaalit.
Esimerkkejä substituenteista, joita voidaan käyttää kaavan I mukaisissa yhdisteissä, ovat: 10 R on vety, halogeeni, mahdollisesti substituoitu 1-alkynyyli, alempi alkoksi, alkyyli, dialkyyliamino tai substituoitu alkyyli; on substituoitu aralkynyyli, aryylialkyyli, aryylialkenyyli, aryyli, mahdollisesti substi-15 tuoitu aralkyylialkynyyli, alkanoyylioksialkynyyli, mahdollisesti substituoitu heteroaryy-lioksialkynyyli, oksoalkynyyli tai sen ketaali, syanoalkynyyli, mahdollisesti substituoitu heteroaryylialkynyyli, hydroksialkynyyli, alkoksialkynyyli, aminoalkynyyli, asyyliami-noalkynyyli, merkaptoalkynyyli, hydroksialkynyylidihapon hemiesteri tai sen suola, tai alkynyylioksialkynyyli; * * * * :*. 20 « * · *:··· R2 on vety, hydroksi, alkoksi, alkanoyylioksi, karbalkoksyyli, ketoryhmä tai aminoryh- mä; • · • · · • · · ··# * · v · R3 on asetyyliryhmä, asetyyliryhmän ketaali; alkoksiasetyyliryhmä, alkyylitioasetyyliryh- 25 mä, alkyylisulfinyyliasetyyliryhmä, alkyylisulfonyyliasetyyliryhmä, aminoasetyyliryhmä, • * * **j·’ trifluoriasetyyliryhmä; hydroksiasetyyliryhmä; alkoksialkyyliasetyyliryhmä, esimerkiksi • · * \ metoksimetyyliasetyyliryhmä tai etoksimetyyli-2'-metyleeniasetyyliryhmä; hydroksi- • * · .* * alkyyliryhmä, esim. hydroksimetyyliryhmä, Γ-hydroksietyyliryhmä, l'-hydroksipropyy- * * · ·;·* liryhmä tai 2'-hydroksi-2’-propyyliryhmä; hydroksiasetyylidihapon hemiesterisuola, • · :.· : 30 esim. sukkinyylioksiasetyyliryhmä; alkanoyylioksiasetyyliryhmä, esim. asetoksiasetyyli- * t ryhmä; tai sulfoksiasetyyliryhmä; alkyyliasetyyliryhmä; esim. metyyliasetyyliryhmä; halogeeniasetyyliryhmä; etynyyliryhmä; mahdollisesti substituoitu heteroaryyliasetyyli- 13 116008 ryhmä; mahdollisesti substituoitu heteroaralkyyliasetyyliryhmä, joka on myös mahdollisesti substituoitu alkyleenissä hydroksi-, alkoksi-, alkanoyylioksi- tai karbalkoksyyliryh-mällä; mahdollisesti substituoitu heterosykli-asetyyliryhmä; asetyylitiosulfaatttisuola; syanoryhmä; alkyylimetyleeniryhmä (yhdessä R7:n kanssa); tai alkoksimetyleeniryhmä 5 (yhdessä R7:n kanssa).
R4 on vety tai metyyli,
Rs on vety; 10 R$ on vety, alkanoyyli, aminokarbonyyli tai alkoksikarbonyyli; R7 on vety, halogeeni, hydroksi, alkoksi, alkanoyylioksi, karbalkoksyyli, metyleeniryh-mä (yhdessä R3:n kanssa), tai alkoksimetyleeniryhmä (yhdessä R3:n ksanssa); 15
Rg on vety tai halogeeni; R9 on vety, halogeeni, alkyyli, alkoksi, aryylialkoksi tai amino; ja * · * · ♦ • · · · 20 R10 on vety, halogeeni, alkyyli, halogeenialkyyli, hydroksi, alkoksi, alkanoyylioksi, *;·*: karbalkoksyyli, syano, tiosyano tai merkapto; * · • * * · :,5,: edellyttäen että kun R3 on mahdollisesti substituoitu heteroaryyliasetyyliryhmä tai asetyy- • « · \" · litiosulfaattisuola tai kun R on mahdollisesti substituoitu 1-alkynyyliryhmä, niin sitten R! 25 voi lisäksi olla vety, alkyyli, alkenyyli, aryyli, aralkyyli, alkynyyli, mahdollisesti substi- • · · tuoitu aralkynyyli, alkoksialkyyli, aminoalkyyli, syano, syanoalkyyli, tiosyanoalkyyli tai * * · * · · *. atsidoalkyyli.
• · · • » t »*·' » · · g · ·;·* Kaavan I mukaisten yhdisteiden edullinen ryhmä ovat yhdisteet, joissa R on vety tai « · : 30 alempi alkoksi. Edullisempia ovat yhdisteet, joissa R, R5, R^, R7, R8, ja R10 ovat vety.
• * • · · » 1» • · 14 118008
Toinen edullisten yhdisteiden ryhmä ovat sellaiset kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R! on substituoitu aralkynyyli, esim., R, on 4-substituoitu fenyylialkynyyli kuten 4-asetyy-lifenyylietynyyli, 4-metoksifenyylietynyyli, 4-N,N-dimetyyliaminofenyylietynyyli, 4-syanofenyylietynyyli, 4-karboksifenyylietynyylietyyliesteri, 4-N,N-dialkyyliamidofenyy-5 lietynyyli, tai joissa R, on oksoalkynyyli, hydroksialkynyyli, asetoksialkynyyli, syanoal-kynyyli tai alkoksialkynyyli.
Edullisten yhdisteiden lisäryhmä ovat sellaiset, joissa R3 on asetyyli, heteroaryyliasetyy-li, heterosykliasetyyli, hydroksialkyyli. hydroksiasetyyli ja niiden esterit fysiologisesti 10 hyväksyttävien happojen kanssa. Edullisemmin R3 on asetyyli, β-sukkinyylioksiasetyyli, alkoksiasetyyli, asetyylitiosulfaattisuolat, pyratsolyyliasetyyli tai imidatsolyyliasetyyli.
Edullisten yhdisteiden lisäryhmä on sellainen, jossa: 15 R on vety, fluori, kloori tai alempialkoksi; R[ substituoitu aryylietynyyli; ::· R2 on vety, ketoryhmä tai dimetyyliaminoryhmä; • φ · · 20 ·ί**ί R3 on β-asetyyliryhmä, β-asetyyliryhmän dimetyyliketaali, trifluoriasetyyliryhmä, β- • (hydroksiasetyyli)ryhmä, β-metoksimetyyliasetyyliryhmä, β-(etoksi)metyyli-2'-mety- leeniasetyyliryhmä, β-(Γ-hydroksietyyli)ryhmä, β-(Γ-hydroksiproρyyli)ryhmä, β-(2'- • * * • · · ’*’ * hydroksi-2'-propyylijryhmä, β-sukkinyylioksiasetyyliryhmä, β-hydroksiasetyylinatrium- 25 sukkinaattiryhmä, β-asetoksiasetyyliryhmä, β-sulfoksiasetyyliryhmä, β-metyyliasetyy- • · · • ♦ · ,*** liryhmä, β-klooriasetyyliryhmä tai β-etynyyliryhmä; • · * i · « * ·** • * · .'.·· *;[/ R, on vety tai metyyli: • * ··· · 30 R5, R^, R7, Rg, R9 ja R10 ovat vety; t · · • · · • · pilkkuviivat esittävät kaikki yksinkertaisia sidoksia; ja 118008 15 R7 on vety tai, kun R3 on β-hydroksiasetyyli, R7 on vety tai hydroksi.
Edelleen edullisia yhdisteitä ovat sellaiset kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka ovat asemissa 3, 20 ja/tai 21 olevien hydroksyyliryhmien estereitä. Edullisia estereitä ovat ne, jotka 5 saadaan niiden vastaavista hapoista ja dihapoista: etikka-, propaani-, maleiini-, fumaari-, askorbiini-, pimeliini-, meripihka-, glutaari-, bismetyleenisalisyyli-, metaanisulfoni-, etaanidisulfoni-, oksaali-, viini-, salisyyli-, sitrana-, glukoni-, itakoni-, glykoli-, p-aminobentsoe-, asparagiini-, glutamiini-, gamma-aminobutyyli-, a-(2-hydroksietyyli-aminojpropaani-, glysiini-ja muut α-aminohapot, fosfori-, rikki-, glukoroni-ja 1-metyy-10 li-l,4-dihydronikotiinihappo.
Edullisia ovat seuraavat yhdisteet: 3a-hydroksi-3p-fenyylietynyyli-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-fenyylietynyyli-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-(3’,4'-dimetoksi-fenyyIi)etynyyli-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4'-metyyIifenyyli)etynyyli-5p-preg-15 nan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-(2’-metoksifenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi- 3p-(4’-karboksifenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3a-hydroksi-3p-(4'-asetoksiasetyylifenyyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni, 3P-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3P-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-dimetyyliaminofenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-bi- • · · · : * ·.. 20 fenyylijetynyyli-3 a-hydroksi-5 p-pregnan-20-oni, 3 a-hydroksi-3 β-(4' -nitrofenyy 1 ijetynyy- « ·:··: li-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4'-metoksifenyyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni, • · J 3p (4'-trifluorimetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3p-(4'-kloori- M/ fenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3p-(4'-syanofenyyli)etynyyli-3a-hyd- • ·· !.: ** roksi-5P-pregnan-20-oni, 3P-(4'(R7S)-hydroksipentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- 25 oni, 3a-hydroksi-3p-fenyyli-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-bentsyyli-5P-pregnan- • · · 20-oni, 3a-hydroksi-3p-(2'-fenyylietyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-[2-(3',4'- » · • « · dimetoksifenyyli)etyyli]-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-[6'-okso-l'-heptynyyli]-5p- • · · * * · * pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-(7'-okso-r-oktynyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi- j * "·* 3P-(4’-okso-r-pentynyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3p-[5'-(R/S)-hydroksiheksynyyli]-3a- • · t.: : 30 hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3P-(4'-hydroksibutynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, • * * * ’· 3P-(4'-hydroksibutynyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(l'-imidatso- lyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-metyyli-21-(l',2',4'-triatsolyyli)-5a-pregnan- 118008 16 20- oni, 3p-(4'-asetoksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-asetyyli-fenyylietynyyli)-3a-hydroksi-19-nor-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-karboksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-19-nor-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3p-(4'-karboksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3P-[4'-(N,N-dietyylikarboksamido)fenyyli]e- 5 tynyy 1 i-3α-hy droksi-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-[5-okso-l-heksynyyli]-5P-preg- nan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-[5'-okso-r-heksynyyli]-5p-pregnan-20-onin syklinen 5'-(1,2-etaanidiyyliasetaali), 3p-(5-syano-l-pentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3α- * hydroksi-3P-(2-pyridyyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni, 3p-(6-hydroksi-1 -heksynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(6'-hydroksi-l'-heksynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-10 20-onin 6-hemisukkinaatin natriumsuola, 3p-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3P-(5'-hydroksi-r-pentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin 5'-he-misukkinaatin natriumsuola, 3p-(4'hydroksi-l’-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin 4'-hemisukkinaatin natriumsuola, 3p-(4’-syano-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3P-(5'-asetoksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-15 asetoksi-r-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-asetoksi-l'-hutynyyli)-3a- hydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3p-(6’-asetoksi-r-heksynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p [3-(2'-propynyylioksi)-l-propynyyli]-5P-pregnan-20-oni, 3a-hyd-roksi-3P-(3-metoksi-l-propynyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-(3-metoksi-l- :;· propynyyli)-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-[3-(4’-pyridinyylioksi)-l-propynyyli]- * * * * 20 5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-[3-(rH-l,2,3-triatsol-r-yyli)-l-propynyyli]-5P- pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-[3-(2'H-l,2,3-triatsol-2'-yyli)-l-propynyyli]-5P-preg- • a : *.·* nan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-(2'-tienyyli)etynyyli'5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(3’- * ;.i.' fenyyli r propynyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(3'-fenyylipropyyli)-5p- * · · » I · *·* * pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-[3-(l'H-pyratsol-r-yyli)-l-propynyyli]-5p-pregnan-20- , 25 oni, 3p-(3'-asetyylifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p-(3'-asetoksi-3'- I · « • · · y,‘. propynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)- I · « 21- (l-imidatsolyyli)-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksi-butyn-l-yyli)-21-(l- * * t imidatsolyyli)-5p-19-nor-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21- "* (l,2,3-triatsol-2-yyli)-5p-19-norpregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(l-imidatsolyyli)-5a- • * • · · ·;· I 30 pregnan-20-oni, natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metyyli-5a-pregnan-20-on-21-yyli)-tiosul- • * * * * faatti, natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metoksimetyyli-5a-pregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti, natrium-S-(3a-hydroksi-5P-pregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti, natrium-S-(3a-hydroksi- 118008 17 3 β-trifluorimetyy 1 i-5 p-pregnan-20-on-21 -yy 1 i)tiosulfaatti, natrium-S- [3 a-hydroksi-3 β-(4'-hydroksibutynyyli)-5p-pregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti, natriutn-S-(3a-hydroksi-5a-pregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti, ja 3β-(4'-asetyy lifenyylietynyy li)-3a ,21 -dihydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-oni, 5 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a-21-dihydroksi-5P-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaatin natriumsuola, ja 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaatin natriumsuola.
Edullisempiin neuroaktiivisiin steroideihin kuuluvat 3p-(4’-asetyylifenyyli)etynyyli-3a- 10 hydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3p(4'-karbksyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan- 20-onin etyyliesteri, 3p-(4'-aetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3p- (4'-karboksyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3β-(4'- asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-19-norpregnan-20-oni, 3P-(4'-karboksyylifenyy- li)etynyyli-3a-hydroksi-5p-19-norpregnan-20-onin etyyliesteri, 3p-(4'-dimetyyliamino- 15 fenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3p-(4'-bifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi- 5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4'-metoksifenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni, 3β- (4'-trifluorimetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni. 3p-(4'-kloorifenyy- li)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni, 3P-[4'-(R/S)-hydroksipentynyyli]-3a-hydrok- *|* si-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-hydroksibutynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3P-(4’- ·*** **·.. 20 hydroksibutynyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p[3-(2'H-l,2,3-tri- *:**: atsol-2'-yyli)-l-propynyyli]-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(l-imidatsolyyli)-5p- * · • V pregnan-20-oni, 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5Ppregnan-20-oni, 3p- l.l.! (4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan’20-oni, 3P-(4'-asetyylifenyyli- • * · • ♦ ♦ ** ’ etynyyli)-3a,21-dihydroksi-5P-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaatin natriumsuola ja 3p- 25 (4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaatin
• « I
;;; natriumsuola.
• · • · »
• I
• · « • * »
Erityisen edullisiin neuroaktiivisiin steroideihin kuuluvat 3P-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli- »***: T 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3P-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan- • · t.t t 30 20-oni, 3p-(4'-karboksyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin etyyliesteri, i • · · *· " 3p-(4'-karboksyyIifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3β-(4'- dimetyyliaminofenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-bifenyyli)etynyyli-3a-hydrok- 118008 18 si-5p-pregnan-20-oni, 3p-(4'-hydroksibutynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20oni, 3β-(4'-hydroksibutynyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni; 3a-hydroksi-3p-[3-(2'H-l,2,3-triatsol-2' -yyli)-1 -propynyyli] -5 P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(1 -imidatsolyyli)-5 β-pregnan-20-oni, 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3α?21-dihydroksi-5P-pregnan-20-oni, 3P~ 5 (4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-oni, 3p-(4’-asetyylifenyy- lietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaatin natriumsuola, 3β-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,2l-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaatin natriumsuola ja 3P-[4'-(R/S)-hydroksipentynyyli]-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni.
10 Synteettiset menetelmät
Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa millä tahansa tavanomaisella menetelmällä, esimerkiksi käyttämällä tavanomaisia tekniikoita kuten sellaisia, jotka on kuvattu kirjassa "Steroid Reactions", Djerassi, julkaistu 1963, Holden-Day, Inc., San Fransisco, 15 tai "Organic Reactions in Steroid Chemistry", Fried ja Edwards, julkaistu l972, Van Nostrand-Reinhold Co., New York.
Yleiset menetelmät • * * * * • · · · ί*·,. 20 20-hydroksipregnaanit valmistettiin pelkistämällä 20-ketopregnaanit tavanomaisilla pel- *:*·: kistysaineilla.
* · • t * • · * ♦ - 21-hemisukkinaatit valmistettiin pregnan-20-onijohdannaisista, jotka ensin bromattiin « * » : molekulaarisella bromilla, jolloin saatiin vastaavat 21-bromipregnaanit. Bromiyhdisteet ' - 25 saatettiin sitten reagoimaan erilaisten dihappojen kanssa, kuten meripihkahapon kanssa, • * · amiinin läsnäollessa, jolloin saatiin 21-hydroksiestereitä. Dihapoista syntyneet esterit • · · t * « *. muutettiin sitten natriumsuoloikseen tavanomaisilla tavoilla.
* * * • * * • i · • · » ··** Tämän tyyppiset 21-hapetetut yhdisteet voidaan valmistaan reaktiosarjalla, jossa pregnan- • * : 30 20-oni hapetetaan lyijytetra-asetaatilla, jolloin saadaan 21 -asetoksijohdannainen, ja ase-» · • * *. " taatin hydrolyysi antaa 21-alkoholin ja sitten asyloidaan sopivalla karboksyylihappojoh- 19 . .
118008 dannaisella, esimerkiksi anhydridillä tai happokloridilla tai muulla reagenssilla, joka kykenee korvaamaan hydroksyyliryhmän vedyn, kuten metaanisulfonyylikloridi.
Pregn-17-eenit voidaan muodostaa 17-ketosteroidin reaktiolla Wiggin reagenssin kanssa 5 kuten ylidin kanssa, joka on johdettu käsittelemällä n-propyylitrifenyylifosfoniumbromi-dia vahvalla emäksellä kuten kalium-t-butoksidi.
Esimerkki 1 3a-hydroksi-3-P-(2'-fenyylietyyli)-5p-pregnan-20-oni 10 3a-hydroksi-3p-fenyylietynyyli-5p-pregnan-20-onin (44 mg) liuos liuotettiin EtOAc:hen (12 ml), Pd/C:tä (5 %, 12 mg) lisättiin ja seosta hydrattiin 400 kPa:n paineessa yön yli huoneenlämpötilassa. Katalyytin suodatusta seurasi liuottimen haihdutus, jolloin saatiin raakatuote, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jolloin erotettiin puhdas 15 otsikon yhdiste (33 mg); sp. 153-154 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,4.
Esimerkki 2 3a-(3',4'-dimetoksifenyylietynyyIi)-3p-hydroksi-5p-pregnan-2-oni ja 3p-(3',4'- \ !·· dimetoksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-2-oni ···· 20 2,2-dibormi-l-(3\4'-dimetoksifenyyli)eteenin liuosta (valmistettu Wittigin reaktiolla 3,4- • ·
• dimetoksibentsaldehydistä hiilitetrabromidin kanssa trifenyylifosfiinin läsnäollessa) (966 mg, 3 mmol) kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin N2-ilmakehässä n-BuLi:lla (2,5 M
V * THF:ssä, 6 mmol, 2,4 ml) -78 °C:ssa. Seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 2 tuntia ja 25 5P-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (720 mg, 2 mmol) kuivas- * · · *·" sa THF:ssä (10 ml) lisättiin tipoittain 30 minuutin aikana. Syntyneen seoksen 2 tuntia -78 • * · * * « °C:ssa sekoittamisen jälkeen jäähdytyshaude poistettiin ja sekoitusta jatkettiin huoneen- • « · ♦ * · ’·] * lämpötilassa vielä yksi tunti. Sitten reaktio sammutettiin 2 N HCl-liuoksella (1 ml) -10 ·** °C:ssa. Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N HCl:n (10 • · : 30 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Kylläistä NaH-« · « * * ’· " C03-liuosta lisättiin neutraloimaan happo. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtO-
Ac:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, laimealla NaHC03-liuoksella, vedellä ja suo- 20 11800a laliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuotetta (1,2 g), Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageenikolonniin. Eluointi tolueeni:asetoni -seoksella (96:4) antoi fenyyliasetyleeniyhdistettä, jota ei karakterisoitu. Lisäeluoiminen samalla 5 liuottimena antoi 3a-(3',4'-dimetoksifenyylietynyyli)-3p-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (120 mg) ensimmäisenä fraktiona, ja 3β-(3',4'-dimetoksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan 2 onia toisena fraktiona (430 mg); sp. 82-88 °C.
Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa seuraavia yhdisteitä: 3p-(4'-metoksi-10 fenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-2-oni; 3p-(4'-kloorifenyylietynyyli)-3a-hydrok- si-5p-pregnan-2-oni; 3p-(2'-metoksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-2-oni; 3β-(4'-bifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-2-oni; 3p-(4'-dimetyyliaminofenyyliety-nyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-2-oni; ja 3p-(4’-syanofenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-2-oni.
15 .·_
Esimerkki 3 3P-(3',4'-dimetoksifenyylietyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-2-oni !· Pd/C:n (5 %, 28 mg) ja EtOAc:n (12 ml) seosta esikyllästettiin vedyllä sekoittamalla sitä 20 vetyilmakehässä 10 minuuttia. 3P-(3',4'-dimetoksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p- Ί*·: pregnan-20-inia (185 mg) EtOAc:ssä (5 ml) lisättiin sitten ja seosta hydrattiin 300 kPa:n L · • V paineessa yön yli huoneenlämpötilassa. Katalyytin suodatus, mitä seurasi liuottimen haih- dutus, antoi raakatuotteen, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä (heksaani:-*·’ * asetoni 4:1) puhtaan otsikon yhdisteen eristämiseksi (135 mg); TLC Rf (heksaani:asetoni 25 4:1) = 0,14.
• # ·
Ml » * · » » · • · ♦
Esimerkki 4 ς · · 3P-(4'-nitrofenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-2-oni Γ'*: • A * f · ί.ί : 30 2,2-dibormi-l-(4-nitrofenyyli)eteenin liuosta (valmistettu Wittigin reaktiolla 4-nitrobent- • * » » · ’ *· saldehydistä hiilitetrabromidin kanssa trifenyylifosfiinin läsnäollessa) (296 mg, 1 mmol) kuivassa THF:ssä (20 ml) käsiteltiin N2-ilmakeässä n-BuLi:lla (2,5 M THF:ssä, 2 mmol, 21 118008 0,8 ml) -95 °C:ssa. Seosta sekoitettiin -80 - -100 °C:ssa 0,5 tuntia ja sitten lisättiin liuosta, jossa oli 5β-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (120 mg, 0,5 mmol) kuivassa THFrssä (10 ml), tipoittain 10 minuutin aikana. Sen jälkeen, kun syntynyttä seosta oli sekoitettu -80 °C:ssa 1 tunti, ja sitten 0 °C:ssa 1 lisätunti, reaktio 5 sammutettiin NH4Cl-liuoksella (3 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N HCl:n (10 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpö-tilassa 1 tunti. Kylläistä NaHCOj-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin CH2Cl2:lla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja 10 haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuotetta (400 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonniin. Eluointi tolueeni:asetoni -seoksella (96:4) antoi otsikon yhdistettä ruskeana kiinteänä aineena (70 mg); TLC Rf (tolueeni-.asetoni 95:5) = 0,18.
15 Esimerkki 5 3p-hydroksi-3-a-fenyyli-5p-pregnan-2-oni ja 3a-hydroksi-3-P-fenyyIi-5p-pregnan-2-oni !·« 5P-pregnan-3,20-dionin syklisen 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalin) (720 mg, 2 mmol) liuosta • frt Γ'.. 20 15 ml:ssa THF:ää käsiteltiin fenyylimagnesiumbromidilla (3 M THF:ssä, 6 mmol, 2 ml) t’*i -70°C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu tässä lämpötilassa 3 tuntia ja sitten huo- t * : neenlämpötilassa 2 tuntia, reaktio sammutettiin 2 N HClillä (1 ml). Liuottimet poistettiin * **,:.· ja jäännös uutettiin CH2Cl2:lla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, laimealla NaHC03:lla, * * · vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivamisen jälkeen liuos suoda-25 tettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (1,3 g). Tämä raakatuote liuotettiin sitten * m · * ft · pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen i » · * * * tolueeni:asetoni -seoksella (95:5) antoi 3a-fenyyli-3p-hydroksdi-5p-pregnan-20-onia (420 tt* * · *·)/ mg) ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoiminen samalla liuotinseoksella antoi 3p-fenyyli- x*”: 3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (185 mg), sp. 182-184 °C.
<f * * * * M : 30 ft · « · 9 * · 3p-hydroksi-3a-bentsyyli-5p-pregnan-20-oni ja 3a-hydroksi-3p-bentsyyIi-5p- pregnan-20-oni 22 118008
Esimerkki 6 5 Bentsyylimagnesiumbromidiliuos (2M THF:ssä, 2 mmol, 1 ml) laimennettiin THF:llä (15 ml) ja sitä käsiteltiin lisäämällä tipoittain liuosta, jossa oli 5P-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (360 mg, 1 mmol) kuivassa THF:ssä (15 ml)-60 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu tässä lämpötilassa 1 Uinti ja sitten huoneenlämpötilassa 15 tuntia, reaktio sammutettiin 2 N HCl:llä (1 ml). Liuotin poistettiin ja 10 jäännös liuotettiin asetoniin (20 ml). 1 N HCl:n (5 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia. Se neutraloitiin 2 N NaOH:lla. Saostunut kiinteä aine kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin, jolloin saatiin 3P-hydroksi-3a-bentsyyli-5p-pregnan-20-onia (238 mg). Suodos uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, laim. NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän 15 MgS04:n päällä kuivamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raa-katuotetta (160 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (95:5) antoi 3P~hydroksi-3a-bentsyyli-5P-pregnan-20-onia (40 mg) ensimmäisenä fraktiona. Lisäelu-;; oiminen samalla liuotinseoksella antoi 3a-hydroksi-3p-bentsyyli-5P pregnan-20-onia (30 ΙΓ* 20 mg), joka kiteytettiin heksaani:CH2Cl2:sta (4:1) värittöminä tankoina (15 mg); sp. 133- • · t 141 °C; TLC Rf (tolueeni:asetoni 9:1) = 0,5.
* · • · • · * * · • * : Esimerkki 7 • · · 3P-[3'(R/S)-hydroksibutynyyli]-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni 25 3(R/S)-hydroksibutyynin (0,470 ml, 6 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin V * n-BuLi:lla (2,5 M THF:ssä, 12 mmol, 4,8 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli ! sekoitettu tässä lämpötilassa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuosta, jossa oli 5P-pregnan- • · · 3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (1,08 g, 3 mmol) kuivassa THF:ssä : 30 (30 ml), ja seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja seosta • · « * * • · :/.j sekoitettiin huoneenlämpötilassa vielä 1,5 tuntia. Sitten reaktio sammutettiin NH4CI- liuoksella (3 ml). Liuotin poistettiin ja jäännös liuotettiin asetoniin (10 ml). Sen jälkeen, 23 118008 kun oli lisätty 2 N HCl:ää (5 ml), liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Kylläistä NaHCOrliuosta lisättiin hapon neturaloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAcillä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, laimealla NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdu-5 tettiin, jolloin saatiin raakatuote (1,4 g). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (85:15) antoi 3p-[3'(RS)-hydroksibutynyyli]-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (145 mg) värittömänä kiinteänä aineena; TLC Rf (tolueeni:asetoni 4:1) = 0,24.
10 Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa 3p-[4'(R/S)-hydroksipentynyyli]-3a-hydroksi-5 p-pregnan-20-onia.
Esimerkki 8 3p-(4'-asetyylifenyylietyyli)-3cc-hydroksi-5a-pregnan-20-oni 15
Liuosta, jossa oli 4-jodiasetofenonia (95 mg, 0,39 mmol) ja 3p-etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onia (106 mg, 0,3 mmol) kuivassa, kaasuttomassa pyrrolidiinissä (3 ml), sekoitettiin argonilmakehässä huoneenlämpötilassa. Bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)-dikloridia (5 mg) ja Cul:tä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 20 tuntia. TLC osoitti lähtömateriaalin 100 % muuttumisen ja siten seoksen reaktio sammu- • 1 2 3 · tettiin lisäämällä NH4Cl-liuosta (15 ml) ja seos uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros * 1 pestiin vedellä, laimealla NaHC03Tiuoksella, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän « ·
MgS04:n päällä kuivamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raa-• · ♦ katuote (150 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaa-25 dettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen heksaani:asetoni -seoksella (4:1) antoi 3β-(4'-asetyylifenyylietyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onia (35 mg) värittämänä kiinteänä • · · * aineena; TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,4.
• · · 2 « 1 · • · · 3
Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa seuraavia yhdisteitä: 3a-hydroksi-3p~ : 30 (4'-trifluorimetyylifenyylietynyyli)-5P-pregnan-20-oni; 3p-(4'-aseettyylifenyylietynyyli)- !/·· 3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni; 3a-hydroksi-3P-(4'-metyylifenyylietynyyli)-5p-pregnan- 20-oni; 3a-hydroksi-3p-(4'-asetoksiasetyylifenyylietynyyli)-5p-pregnan-20-oni; 3β-(3’- 118008 24 hydroksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni; 3P-(2',4'-difluorifenyyliety-nyyli)-3a-hydroksi-5p pregnan-20-oni; 3P~(pentafluorifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni; ja 3a-hydroksi-3p-(4'-karboksifenyylietynyyli)-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri.
5
Esimerkki 9 3a-hydroksi-21-(1'-imidatsolyyli)-5P-pregnan-2 0-oni 3a-hydroksi-21-bromi-5p-pregnan-20-oni: Pulloon, joka sisälsi 3a-hydroksi-5p-10 pregnan-20-onin (5,15 g, 16,5 mmol) liuosta metanolissa (100 ml), lisättiin bromin (1,1 ml) liuosta metanolissa (30 ml) tipoittain sellaisella nopeudella, että säilytettiin bromin ruskea väri kunnes väri säilyi itsestään. Sitten vettä (200 ml) lisättiin ja seos uutettiin CH2Cl2:lla (3x100 ml). Yhdistetyt uutteet kuivattiin Na2S04:n päällä. Liuottimen poistaminen tuotti tuotteen vaahtomaisena valkoisena kiinteänä aineena (6,63 g). Muut 21-15 bromi-pregnan-20-oni-yhdisteet (3p-etynyyli-3a-hydroksi-21-bromi-5p pregnan-20-oni, 3p-metyyli-3a-hydroksi-21-bromi-5a-pregnan-20-oni ja 3a-hydroksi-3P-trifluorimetyyli-12-bromi-5p-19-norpregnan-20-oni) syntetisoitiin käyttämällä samaa menetelmää.
3a-hydroksi-21-(l'-imidatsolyyli)-5p-pregnan-20-oni: Seosta, jossa oli 3a-hydroksi-2l- • · · ·“’ 20 bromi-5p-pregnan-20-onia (0,86 g) ja imidatsolia (0,37 g) CH3CN:ssä (12 ml), kuumen- * · • · · * . nettiin Ar-ilmakehässä palautusjäähdyttäen 1 tunti ja jäähdytettiin 25 °C:seen. Sitten se • · kaadettiin erotussuppiloon, joka sisälsi NH4Cl-liuosta (100 ml, vesiliuos, ky 11.) ja tuote • * . ,·. uutettiin EtOAc:lä (3x50 ml). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin Na2S04:n päällä ja • * · • · t liuotin poistettiin tyhjössä. Raakatuote (0,59 g, 42 %) erotettiin flash-kolonninkromato- * 25 grafisesti.
* • * · • · · * · ·
Seuraavat yhdisteet syntetisoitiin esimerkin 9 mukaisesti: ·.*·*: 3a-hydroksi-21-(r-bentsimidatsolyyli)-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-[lH-(4-me- 9 i”'i tyyli-5-karbetoksyyli)imidatsol-l-yyli)-5P-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3a-hydroksi-21- • · * : .·. 30 (l'-imidatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni, 3p-etynyyli-3a-hydroksi-21-(l'-imidatsolyyli)-5p- • · · · pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(lH-3,5-dimetyylipyratsolyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a- * · hydroksi-21-(l'-imidatsolyyli)-3p-metyyli-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(l'-pyrat- 25 11809¾ solyyli)-5a-pretgnan-20-oni, 3p-etynyyli-3a-hydroksi-21-(r-pyratsolyyli)-5P-pregnan- 20- oni, 21-(1'-bentsimidatsolyyli)-3a-hydroksi-3p-metyyli-5a-pregnan-20-oni, 3a-hyd-roksi-21-(r-pyratsolyyli)-3P-metyyli-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21 (pyratsol-1 -yy-li)-5p-pregnan-20-onin, 3a-hydroksi-21-[lH-(2-metyyli)imidatsol-l-yyli]-5P-pregnan-20- 5 oni, 3a-hydroksi-21 -[ 1 H-(2' -formyyli)imidatsol-1 -yyli)]-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydrok-si-21-(lH-imidatsol-l-yyli)-3p-trifluorimetyyli-5p-19-norpregnan-20-oni ja 3a-hydroksi- 21- (pyratsol-l-yyli)-3p-trilluorimetyyli-5P-19-norpregnan-20-oni.
Esimerkki 10 10 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(l' ,2' ,4'-triatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni: 1,2,4-triatsolin (146 mg) liuokseen THF:ssä (15 ml) Ar-ilmakehässä, lisättiin NaH:ta (56 mg) ja saama seosta sekoitettiin 25 °C:ssa 20 minuuttia. Sitten lisättiin 3P-metyyli-3a-hydroksi-21-bromi-5a-pregnan-20-onin (300 mg) liuosta THF:ssä ja siten saatua seosta 15 sekoitettiin 5 tuntia. Sitten se kaadettiin erotussuppiloon, jossa oli vettä (40 ml), ja mote uutettiin CH2CI2:lla (3x50 m). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin Na2S04:n päällä ja liuotin poistettiin tyhjössä. Puhdas mote (187 mg, 64 %) erotettiin flahs-kolonnikromato-grafisesti.
• ·
• M
20 Yhdisteet 3a-hydroksi-21-(2'H-l,2,3,4-tetratsol-2'-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydrok- • · si-21-(2H-l,2,3-triatsol-2-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(9'H-purin~9'-yyli)- *· · t·,·, 5p-pregnan-20 oni, 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(2'H-r,2',3'-triatsol-2'-yyli)-5a-preg- • · . nan-20-oni, 3P-etynyyli-3a-hydroksi-21-(r,2',4'-triatsolyyli)-5P-pregnan-20-oni, 3a- * · · • · · j*:‘. hydroksi-3p-metyyli-21-(r,2',3'-triatsol-r-yyli)-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21- « 25 (r,2',4'-triatsol-l-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21 -(ΓΗ-1,2,3,4-tetrasol-l'-yy- : li)-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-[lH-(4-nitro)imidatsol-l-yyli)-5p-pregnan-20-oni, v * 3a-hydroksi-21-(7'H-purin-7'-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-[lH-(4',5'- * **·*: disuano)imidatsol-l-yyli)]-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(r-l,2,4-triatsol-l-yyli)- 3p-trifluorimetyyli-5p-19-norpregnan-20-oni ja 3a-hydroksi-21-[lH-(4',5’-dikloori)imi- : 30 datsol-l-yyli)]-5p-pregnan-20-oni, valmistettiin esimerkissä 10 esitettyjen menettelyjen • · · · ·*·.· mukaisesti.
• · 3p-(4,-asetoksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni 26 118008
Esimerkki 11 a. 3p-(4'-hydroksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni ® 5
Liuosta, jossa oli 2,2-dibromi-1 -(4-hydroksifenyyli)eteeniä (valmistettu Wittigin reaktiolla 4-hydroksibentsaldehydistä hiilitetrabromidin kanssa trifenyylifosfiinin läsnäollessa) (1,25 mg, 4,5 mmol) kuivassa THF:ssä (25 ml) käsiteltiin N2-ilmakehässä n-BuLi:llä (2,5 M THFrssä, 13,5 mmol, 5,4 ml) -70 °C:ssa. Sitten seosta sekoitettiin -70 °C läm-10 pötilassa 0,5 tuntia ja lisättiin 5P-pregnan-3,20-dionin syklisen 20-(1,2-etaanidiyyliase- taalin) (810 mg, 2,25 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (25 ml) tipoittain 10 minuutin aikana. Sen jälkeen, kun syntynyttä seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 30 minuuttia, jäähdy-tyshaude poistettiin ja sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa vielä yksi tunti. Sitten reaktio sammutettiin kylläisellä NH4Cl-liuoksella (4 ml) -10 °C:ssa. Liuotin poistettiin ja 15 sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N HCl:n (6 ml) lisäyksen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja raakatuote (1,3 g) käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
• · · ·:ί «··1 ·2·.. 20 b. 3P-(4'-asetok$ifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni • ' /ζ • m · « • · ; 51 | Edellisen vaiheen raakatuote liuotettiin CH2Cl2:een (5 ml) ja pyridiiniin (3 ml). Syntynyt *.i.: liuos lisättiin jääkylmään asetyylikloridin (3 ml) ja pyridiinin (3 ml) liuokseen. Seosta • 1 2 1 *.2 1 sekoitettiin 0 °C:ssa 30 minuuttia ja sitten kaadettiin jäähän (50 g). 2 N HCl:ää (10 ml) 25 lisättiin ja seosta laiemnettiin lisää CH2C12:11a. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin ve- * 2 dellä, suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömän MgS04:n päällä. Liuottimen poisto antoi * φ * · 11 raakasakkaa (2 g), joka puhdistettiin kolonnikromatografisesti silikageelin päällä. Elu- 2 * 2 ointi tolueeni:asetoni-seoksella (95:5) antoi 3a-(4’-asetoksifenyylietynyyli)-3p-hydroksi- • 1 3P-(4'-asetyyiifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-19-nor-5p-pregnan-20-oni 27 118008
Esimerkki 12
Liuosta, jossa oli 4-jodiasetofenonia (60 mg, 0,24 mmol), 3β-etynyyli-3α-hydroksi-19-5 nor-5 p-pregnan-20-onia (80 g, 0,24 mmol) kuivassa, kaasuttomassa trietyyliamiinissa (0,5 ml), sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)-palladium(II)-dikloridia (5 mg) ja Cul:tä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuuttia. CH2Cl2:ta (4 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 3 tuntia. TLC osoitti lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kroma-10 tografisesti silikageelillä. Eluoiminen heksaani:asetonilla (4:1) antoi 3p-(4'-asetyylife-nyylietynyyli)-3a-hydroksi-19-nor-5p-pregnan-20-onia (30 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 65-67 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0,12.
Esimerkki 13 15 3p-(4'-karboksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-19-nor-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri
Liuosta, jossa oli etyyli-4-jodibentsoaattia (70 mg, 0,24 mmol) ja 3P-etynyyli-3a-hyd-roksi-19-nor-5p-pregnan-20-onia (80 mg, 0,24 mmol) kuivassa kaasuttomassa trietyyliamiinissa (1 ml) sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)-palla- "** 20 dium(II)dikloridia (5 mg) ja CuLtä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa : ' 1 tunti. CH2Cl2:ta (4 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 3 tuntia. TLC osoitti ft · lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin ! * 4 · , kromatografisesti siligeelillä. Eluointi heksaani:asetonilla (4:1) antoi 3p-(4’-karboksi- • « · 1 * « » fenyylietynyyli)-3a-hydroksi-19-nor-5P-pregnan-20-onin etyyliesteriä (22 mg) värittömä-25 nä kiinteänä aineena; sp. 164-166 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0,27.
t » · * • * * • * # ’J 1 Esimerkki 14 * ϊ*Γ: 3P-(4'-karboksifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri ** a « : «i* ί 30 Liuosta, jossa oli etyyli-4-jodibentsoaattia (83 mg, 0,3 mmol) ja 3P-etynyyli-3a-hydrok-*»» · · si-5a-pregnan-20-onia (103 mg, 0,3 mmol) kuivassa kaasuttomassa trietyyliamiinissa (1 » * ml), sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)-palladium(II)diklori- 118008 28 dia (5 mg) ja Cul:tä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 1 tunti. CH2Cl2:ta (4 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 1,5 tuntia. TLC osoitti lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromatografi-sesti siligeelillä. Eluointi heksaani:asetonilla (4:1) antoi 3β-(4'-karboksifenyylietynyyli)-5 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin etyyliesteriä (10 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 190-192 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0,27.
Esimerkki 15 3p-[4'-(N,N-dietyylikarboksamido)fenyyli]etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 10
Liuosta, jossa 4-(N,N-dietyylikarboksamido)jodibentseeniä (91 mg, 0,3 mmol) ja 3P-etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (103 mg, 0,3 mmol) kuivassa kaasuttomassa trietyyliamiinissa (1 ml) sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfii-ni)palladium(II)dikloridia (5 mg) ja CuLtä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä läm-15 pötilassa 1 tunti. CH2C12:ta (4 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 0,5 tuntia.
TLC osoitti lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti siligeelillä. Eluointi heksaani:asetonilla (3:1) antoi 3p-[4'-(N,N-dietyylikarboksamido)fenyyli]etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin etyyliesteriä (18 mg) värittömänä kiinteänä aineena; TLC Rf (heksaani:asetoni 3:1) = 0,22.
··· ***: 20 ' , Esimerkki 16 • »Ml a * 3a-hydroksi-3P-[5-okso-l-heksynyyli]-5p-pregnan-20-onin syklinen (1,2-etaanidiyy- « * * · , liasetaali) m * 9 9ΜΨ M» • · ·
• · I
t 25 l-heksyn-5-onin syklisen (1,2-etaanidiyyliasetaalin) (493 mg, 3,52 mmol) liuosta kuivas- ϊ sa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-BuLi:llä (2,5 M THF:ssä, 3 mmol, 1,2 ml) -60 °C:ssa.
* · * • f i ' Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -78 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa f • ·*: oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (360 mg, 1 mmol) i"‘t THF:ssä (15 ml), ja seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja i 30 reaktio sammutettiin NH4Cl-liuoksella (3 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotet- t>M t ,*·,· tiin asetoniin (40 ml). 1 N HC1:n (4 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneen- lämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi.
118008 29
Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, laimealla NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (700 mg). Tämä raa-katuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin pääl-5 le. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (93:7) antoi 3a-hydroksi-3P-[5-okso-l-heksy- nyyli]-5P-pregnan-20-onin syklistä (1,2-etaanidiyyliasetaalia) (210 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 130-133 °C; TLC R, (tolueeni:asetoni 9:1) = 0,33.
Esimerkki 17 10 3a-hydroksi-3p-[5-okso-l-heksynyyli]-5p-pregnan-20-oni 3a-hydroksi-3p-[5-okso-l-heksynyyli]-5p-pregnan-20-onin syklistä (1,2-etaanidiyy-liasetaalia) (95 mg) liuotettiin asetoniin (5 ml). 2 N HCl:n (1 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon 15 neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAcrllä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakaa otsikon tuotetta (100 mg), joka sitten kiteytettiin heksaani-asetonista värittöminä tankoina, saanto 63 mg; sp. 104- .. 106 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,27.
• · · 20 « · • · ·
Analogista menetelmää käytettiin, kun valmistettiin 3a-hydroksi-3p-[6-okso-l-heptynyy- • · li]-5p-pregnan-20-onia, käyttämällä l-heptyn-6-onin syklistä 6-(l,2-etaanidiyyliasetaalia).
« 1 * * · · ··· · ... • 1 1
Esimerkki 18 25 3p-(5-syano-l-pentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni * · • · · • 1 • · 1 : 5-syanopentyynin (0,84 ml, 8 mmol) kuivassa THF:ssä (20 ml) käsiteltiin n-BuLi:llä
* I
: (2,5 M THF:ssä, 7,8 mmol, 3,2 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu • · · -75 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 30 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (720 mg, 2 mmol) THF:ssä (20 ml), ja seosta sekoitettiin * · · 1 :/.· -78 °C;ssa 0,5 tuntia. Jäähdytyshaude poistettiin ja reaktio sammutettiin NH4Cl-liuoksel- la (3 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (40 ml). 1 N HCl:n (4 118008 : 30 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (1,55 g).
5 Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageeliko-lonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (95:5) antoi 3a-(5-syano-l-penty-nyyli)-3p-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (170 mg) ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoimi-nen samalla liuotinseoksella antoi 3 p-(5-sy ano-1 -pentynyyli)-3 a-hydroksi-5 p-pregnan-20-onia (480 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 134-136 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 10 7:3) = 0,3.
Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa 3p-(4-syano-l-butynyyli)-3a-hydroksi-5 p-pregnan-20-onia.
15 Esimerkki 19 _ 3a-hydroksi-3p-(2-pyridyyli)etynyyIi-5P-pregnan-20-oni 2-etynyylipyridiinin (270 mg, 2,6 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-
BuLi:llä (2,5 M THF:ssä, 2,5 mmol, 1 ml) -60 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli * 1 1 "]1 20 sekoitettu -78 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5P-pregnan-3,20-dionin « »f 1.. .; syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (170 mg, 0,47 mmol) THF:ssä (15 ml), ja seosta • · sekoitettiin -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja reaktio sammutettiin NH4C1- • ·
. ;1; liuoksella (3 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N
• · · :1·1; HCl:n (2 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia.
25 Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jään-nös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n • « « : päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote * : (360 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin * » » 1.. ,: silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (95:5) antoi reagoimat- :1: 30 toman etynyylipyridiinin ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoiminen samalla liuotinseoksel- • · 1 t :\i la antoi 3p-(2-pyridyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onia (107 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 192-195 °C; TLC Rf (tolueeni:asetoni 87:13) = 0,21.
Esimerkki 20 3p-(6-hydroksi-l-heksynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 3i 118008 5-heksyn-l-olin (1,35 ml, 12 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-Bu-5 Li:llä (9,6 ml, 2,5 M THF:ssä, 24 mmol, 1,2 ml) -65 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -78 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5P-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (1,08 mg, 3 mmol) THF:ssä (20 ml), ja seosta se-koitettiin-78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa 45 minuuttia. Sitten reaktio sammutettiin NH4Cl-liuoksella (5 ml). Li-10 uotin poistettiin ja sitten jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, laimealla NaHCOrliuoksella, vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (1,90 g). Sitten tämä raakatuote kiteytettiin EtOAc:stä, jolloin saatiin puhdas tuote värittöminä tankoina (890 mg). Sitten tämä liuotettiin asetoniin (120 ml). 2 N HCl:n (3 ml) lisäämisen jälkeen li-15 uosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neturaloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pie-neen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:ase- !!” 20 töni -seoksella (95:5) antoi reagoimattoman heksynolin ensimmäisenä fraktiona. Lisäelu- • »·
oiminen samalla liuotinseoksella antoi 3a-(6-hydroksi-l-heksynyy1i)-3p-hydroksi-5P
φ · pregnan-20-onia (60 mg), ja sitten 3p-(6-hydroksi-l-heksynyyli)-3a-hydroksi-5p- • * . :*: pregnan-20-onia (620 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 132-134 °C; TLC Rf (hek- ·*· saaniiasetoni 7:3) = 0,23.
4 25 ...
Esimerkki 21 ··· * 3p-(6'-hydroksi-l'-heksynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin 6'-hemisukkinaat- ί tinatriumsuola tl# t : • * · * ; 30 a. 3p-(6'-hydroksi-l'-heksynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onin 6'-hemisukkinaat- • · : *·: ti * · 118008 32 3p-(6'-hydroksi-r-heksynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin (600 mg, 1,45 mmol) liuosta pyridiinissä (5 ml) käsiteltiin meripihkahapon anhydridillä (600 mg, 6 mmol) ja 4-(N,N-dimetyyli)aminopyridiinillä (20 mg). Seosta kuumennettiin 70-75 °C:ssa 1,25 tuntia. TLC osoitti 100 % konversiota. Seos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja se kaa-5 dettiinjää-2 N HC1-seokseen. Orgaaniset ainekset uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,2 N HCkllä, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuiva-misen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raaka-tuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle.
Eluoiminen heksaani:asetoni -seoksella (7:3) antoi 3p-(6'-hydroksi-l'-heksynyyli)-3a-10 hydroksi-5 p-pregnan-20-onin 6'-hemisukkinaattia (700 mg); TLC Rf (heksaani: asetoni:-
AcOH 70:30:0,5) = 0,21.
b. 3p-(6'-hydroksi-l'-heksynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onin 6'-hemisukkinaat-tinatriumsuola 15 · 1
Liuosta, jossa oli edellä valmistettua hemisukkinaattia (400 mg), NaHCO^.a (68 mg), vettä (8 ml) ja CH2Cl2:ta (1 ml), sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Liuotin poistettiin ja jäännös pakastekuivattiin, jolloin saatiin natriumsuolaa värittömänä kiinteä- ,, nä aineena (400 mg).
• · · 20 • ·
Esimerkki 22 «t1·· ♦ · 3p-(5'-hydroksi-l'-pentynyyIi)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni • · • 1 · ... ·1·' • · « :1·1: 4-pentyn-l-olin (1,1 ml, 12 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-BuLi:- 25 Uä (9,9 ml, 2,5 M THF:ssä, 24,5 mmol) -65 °C;ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitet- 'm\m1 tu -78 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklis- • · 1 * tä 20-(1,2-etaanidiyy 1 iasetaalia) (1,08 g, 3 mmol) THF;ssä (20 ml), ja seosta sekoitettiin * ;T: -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sekoitusta jatkettiin huoneenlämpötilassa • 1 · 45 minuuttia. Sitten reaktio sammutettiin NH4Cl-liuoksella (5 ml). Liuotin poistettiin ja 30 sitten jäännös liuotettiin asetoniin (30 ml). 2 N HCl:n (7 ml) lisäämisen jälkeen liuosta • · 1 · sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAcdlä. Orgaaninen kerros 118008 33 pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni:EtO-Ac-seoksella (95:5) antoi 3a-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3p-hydroksi-5p-pregnan-20-5 onia (100 mg), ja sitten 3P-(5’-hydroksi-r-pentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (650 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 160-163 °C; TLC Rf (tolueeni: asetoni :EtO-Ac 70:15:15) = 0,28.
VI
Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa seuraavia yhdisteitä: 3p-(4'-hydroksi-10 l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onia; 3p-(4'-hydroksi-l'-butynyyli)-3a-hyd- roksi-5p-19norpregnan-20-oni; 3p-(4'-hydroksi-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni; 3p-[4'(R/S)-hydroksi-l'-pentynyyli]-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onia; 3p-[3'(R/S)-hydroksi-l'-butynyyli]-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni ja 3P-(3'-hydroksi-l'-propynyyli)-3a-hydroksi-5n-pregnan-20-oni.
15
Esimerkki 23 3p-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin 5'-hemisukkinaatin natriumsuola ·· « · · V." 20 a. 3P-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin 5'-hemisukkinaat-
l M
ti • · • · • · * • · . :*· 3P-(6'-hydroksi-r-heksenyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin (350 mg, 0,87 mmol) • * * :T: liuosta pyridiinissä (3 ml) käsiteltiin meripihkahapon anhydridillä (380 mg, 3,8 mmol) ja 25 4-(N,N-dimetyyli)aminopyridiinillä (20 mg). Seosta kuumennettiin 65-70 °C:ssa 1 tunti.
TLC osoitti 100 % konversiota. Seos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja se kaadettiin * · * V * jää-2 N HC1 -seokseen. Orgaaniset ainekset uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pes- :/· ί tiin 0,2 N HCEllä, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivamisen • · · jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (900 mg). Tämä raa-: 30 katuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin pääl- :/.{ Ie. Eluoiminen heksaani:asetoni -seoksella (7:3) antoi 3P-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3a- 118008 34 hydroksi-5P-pregnan-20-onin 5'-hemisukkinaattia (350 mg); TLC Rf (heksaani: asetoni:-AcOH 70:30:0,5) = 0,25.
b. 3P-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onin 5'-hemisukkinaat-5 tin natriumsuola
Liuosta, jossa oli edellä valmistettua hemisukkinaattia (345 mg), NaHCO,:a (60 mg), vettä (5 ml), THF:ää (2 ml) ja CH2Cl2:ta (1 ml), sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Liuotin poistettiin ja jäännös pakastekuivattiin, jolloin saatiin natriumsuolaa värittömänä 10 kiinteänä aineena (340 mg),
Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa hemisukkinaattinatriumsuoloja seuraa-vista yhdisteistä: 3p-(4'-hydroksi-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni; 3-(4'-hydroksi-Γ-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-19-norpregnan*20-oni; 3β-4'-(hydroksi-1'-bu-15 tynyyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni; 3p-[4(R/S)-hydroksi-l'-pentynyyli]-3a-hyd- roksi-5a-pregnan-20-oni; 3 β-[3'(R/S)-hydroksi-1'-butynyy 1 i]-3α-hydroksi-5a-pregnan-20-oni; ja 3 p-(3'-hydroksi-1'-propynyyli)-3a-hydroksi-5 p-pregnan-20-oni.
.. Esimerkki 24 ·*· JI” 20 3P-(5'-asetoksi-r-pentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni • ·* ♦ ··««·
Pyridiinin (280 mg) liuosta CH2Cl2:ssa (2 ml) käsiteltiin asetyylikloridilla (280 mg) 0-5 • * . .*; °C:ssa. 3p-(5'-hydroksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onin (130 mg) liuosta • * · CH,Cl2:ssa (3 ml) lisättiin. Sekoittamista jatkettiin 0 DC:ssa 20 minuuttia. TLC osoitti 25 100 % konversion, joten seos kaadettiin jää- 2N HC1 -seokseen (20 g, 2 ml). Orgaaniset * i,·/ aineet uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,2 N HCl:llä, vedellä ja suolali- • · · : uoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdu- :T: tettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään • · · CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluointi tolueeni:asetoni-seoksella : 30 (9:1) antoi 3P-(5'-asetoksi-l'-pentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onia (100 mg); sp.
• · · * :\j 84-87 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 70:30) = 0,38.
3P-(4'-asetoksi-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni 35 118008
Esimerkki 25
Pyridiinin (280 mg) liuosta CH2Cl2:ssa (2 ml) käsiteltiin asetyylikloridilla (280 mg) 10 5 °C:ssa. 3p-(4'-hydroksi-r-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin (110 mg) liuosta CH2Cl2:ssa (3 ml) lisättiin. Sekoittamista jatkettiin 10 °C:ssa 30 minuuttia. TLC osoitti 100 % konversion, joten seos kaadettiin jää- 2N HC1 -seokseen (20 g, 3 ml). Orgaaniset aineet uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,2 N HCl:llä, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdu-10 tettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluointi tolueeni:asetoni -seoksella (4:1) antoi 3P-(4’-asetoksi-r-butynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onia (92 mg); sp. 170-173 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 70:30) = 0,3.
15 Esimerkki 26 3p-(6'-asetoksi-r-heksynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni
Pyridiinin (2 ml) liuosta CH2Cl2:ssa (10 ml) käsiteltiin asetyylikloridilla (2 ml) 0 °C:ssa.
3p-(6'-hydroksi-r-heksynyyli)-3a-hydroksi-5P~pregnan-20-onin (400 mg, 0,96 mmol)
'.*** 20 liuosta CH2Cl2:ssa (5 ml) lisättiin. Sekoittamista jatkettiin 0 °C:ssa 20 minuuttia. TLC
• ·· osoitti 100 % konversion, joten seos kaadettiin jää- 2N HC1 -seokseen (50 g, 11 ml).
• ·
Orgaaniset aineet uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,2 N HCl:llä, vedellä • · 118008 36
Propargyylieetterin (0,3 ml, 3 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (10 ml) käsiteltiin n-Bu-Li:llä (2,4 M THF.ssä, 3 mmol, 1,25 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -75 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (360 mg, 1 mmol) THF:ssä (10 ml), ja seosta se-5 koitettiin-78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sitten reaktio sammutettiin NHjCl-liuoksella (5 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (40 ml).
1 N HCl:n (4 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella.
10 MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (95:5) antoi 3β-hydroksi-3cc-[3-(2'-propynyylioksi)-l-propynyyli]-5p-pregnan-20-onia (31 mg) ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoiminen samalla liuotinseoksella antoi 3<x-hydroksi-3P-[3-(2'-15 propynyylioksi)-l-propynyyli]-5P-pregnan-20-onia (255 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 103-106 °C; TLC Rf (tolueeni:asetoni 95:5) = 0,39.
Esimerkki 28 3a-hydroksi-3p-(3-metoksi-l-propynyyli)-5p-pregnan-20-oni · · :r 20 • « • *♦
Metyylipropargyylieetterin (0,25 ml, 3 mmol) liuosta kuivassa THFrssä (10 ml) käsitel- » · tiin n-BuLi:llä (2,4 M THF.ssä, 2,9 mmol, 1,20 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta t · • · , »*. oli sekoitettu -75 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20- • ·· ·*·’: dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (185 mg, 0,5 mmol) THF:ssä (10 ml), ja 25 seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 20 minuuttia. Jäähdytyshaude poistettiin ja sitten reaktio *,·/ sammutettiin NH4Cl-liuoksella (2 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin ase- • * * V : toniin (25 ml). 2 N HCI:n (2 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpöti- * :T: lassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet » · ♦ poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuok-j ·*; 30 sella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saa-:**.! tiin raakatuote (250 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (93:7) antoi 118008 37 3P-hydroksi-3oc-(3-metoksi-l-propynyyli)-5p-pregnan-20-onia (19 mg) ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoiminen samalla liuotinseoksella antoi 3a-hydroksi-3 P-(3-metoksi-1 -propynyyli)-5p-pregnan-20-onia (115 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 155-159 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,25.
5
Esimerkki 29 3a-hydroksi-3P-[3-(4'-pyridinyylioksi)-l-propynyyli]-5P-pregnan-20-oni
Propargyyli-4-pyridyylieetterin (valmistettu viitteen Thummel et ai., /. Org. Chem.
10 1978, 43, 4882 mukaisesti) (173 mg, 1,3 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-BuLi:llä (2,5 M THF:ssä, 1,3 mmol, 0,52 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -75 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan- 3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (180 mg, 0,5 mmol) THFissä (15 ml), ja seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 20 minuuttia. Jäähdytyshaude poistettiin ja sekoittamista 15 jatkettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Sitten reaktio sammutettiin NH4Cl-liuoksella (2 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N HClrn (2 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 20 minuuttia. Kylläistä NaH- CO-j-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin .. EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä ··· « 20 kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (250 t ·· mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin ♦ · silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen CH2C12:asetoni -seoksella (90:10) antoi 3a-hyd- m · • » . roksi-3P-[3-(4'-pyridinyylioksi)-l-propynyyli]-5P-pregnan-20-onia (145 mg) värittömänä • · · ·1·1: kiinteänä aineena; sp. 84-90 °C; TLC R, (CH2C12:asetoni 85:15) = 0,17.
25 ϊ 0 Esimerkki 30 • · 1 V : 3a-hydroksi-3P-[3-(rH-l,2,3-triatsoi-l'-yyli)-l-propynyyli]-5P-pregnan-20-oni ♦ • · · • · · ♦ 1 t * • · φ l-(2-propynyyli)-lH-l,2,3-triatsolin (valmistettu triatsolin reaktilla propargyylibromidin :1· 30 kanssa) (77 mg, 0,72 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (10 ml) käsiteltiin n-BuLi:llä (2,5 ·«· · M THF:ssä, 0,72 mmol, 0,28 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -75 °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 20- 118008 38 (1,2-etaanidiyyliasetaalia) (130 mg, 0,36 mmol) THF:ssä (10 ml), ja seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sitten reaktio sammutettiin NH4C1-liuoksella (1 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N HCl:n (2 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia.
5 Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageeliko-lonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (85:15) antoi 3a-hydroksi~3P-[3-10 (ΓΗ-1,2,3-triatsol-r-yyli)-l-propynyyli]-5p-pregnan-20-onia (56 mg) värittömänä kiin teänä aineena; sp. 142-144 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0,33.
Esimerkki 31 3a-hydroksi-3P-[3-(2'H-l,2,3-triatsol-2'-yyIi)-l-propynyyli]-5p-pregnan-20-oni 15 2-(2-propynyyli)-2H-l,2,3-triatsolin (valmistettu triatsolin reaktilla propargyylibromidin kanssa) (35 mg, 0,33 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (10 ml) käsiteltiin n-BuLi:llä (2,5 M THF:ssä, 0,33 mmol, 0,15 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -75 ,, °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 20- #·♦ « \Y‘ 20 (1,2-etaanidiyyliasetaalia) (60 mg, 0,16 mmol) THF:ssä (10 ml), ja seosta sekoitettiin
• M
] -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sitten reaktio sammutettiin NH4CI-
liuoksella (1 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N
* · • · , HC1:n (2 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia.
··· ·***: Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jään- 25 nös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n t.t.J päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote.
·*« V : Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageeliko- * !*:*: lonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (85:15) antoi pregnan-3,20-dionia »·« (20 mg) ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoiminen samalla liuottimena antoi 3a-hydroksi- * • 30 3β-[3-(2Ή-1,2,3-triatsol-2'-yyli)-l-propynyyli]-5p pregnan-20-onia (20 mg) värittömänä • r m * i‘\: kiinteänä aineena; sp. 139-140 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0,17.
• · 3a-hydroksi-3p*(2'-tienyyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni 39
Esimerkki 32 11 δ C O 8
Liuosta, jossa 4-joditiofeeniä (63 mg, 0,3 mmol) ja 3p-etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-5 20-onia (103 mg, 0,3 mmol) kuivassa, kaasuttomassa trietyyliamiinissa (1 ml) sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)dikloridia (5 mg) ja CuLtä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuuttia. CH2Cl2:ta (5 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 0,5 tuntia. TLC osoitti lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti siligeelil-10 lä. Eluointi heksaani:asetonilla (4:1) antoi 3a-hydroksi-3p-(2’-tienyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-onia (50 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 205-206 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0,35.
Analogista menetelmää käytettiin valmistettaessa 3a-hydroksi-3P-(5'-asetyyli-2'-tienyy-15 li)etynyyli-5P-pregnan-20-onia; sp. 226-228 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni_4:l) = 0,14.
Esimerkki 33 3a-hydroksi-3p-(3'-fenyyli-r-propynyyli)-5P-pregnan-20-oni *«· « »** 20 3-fenyyli-l-propyynin (0,25 ml, 2 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (17 ml) käsiteltiin n- • *· ' · BuLi:llä (2,5 M THF:ssä, 2 mmol, 0,8 ml) -70 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli
Ti · sekoitettu -75 °C;ssa 10 minuuttia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20- * · . dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (206 mg, 0,6 mmol) THFrssä (10 ml), ja * * n seosta sekoitettiin -78 DC:ssa 20 minuuttia. Jäähdytyshaude poistettiin ja sitten reaktio 25 sammutettiin NH4Cl-liuoksella (5 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin ase- t *.·,ί toniin (15 ml). 2 N HCl:n (4 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpöti- « · · V * lassa 20 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet » i*: t poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuok- Φ ♦<« i.,,; sella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saa- » • :*· 30 tiin raakatuote (460 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja ψ*· · :\i kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni-seoksella (85:15) antoi reagoimattoman fenyylipropyynin ensimmäisenä fraktiona. Lisäeluoiminen samalla liuot- 118008 40 timella antoi 3a-hydroksi-3P-(3'-fenyyli-r-propynyyli)-5P-pregnan-20-onia (175 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 124-132 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,46.
Esimerkki 34 5 3a-hydroksi-3p-(3'-fenyylipropyyli)-5p-pregnan-20-oni
Liuosta, jossa oli edellä valmistettua fenyylipropynyylijohdannaista (50 mg) EtOAc:ssä (10 ml), hydrattiin Pd/C:n (10 mg, 5 %) päällä 2 ilmakehän H2-paineessa 45 minuuttia. Sitten seos suodatettiin pienen Celite-kerroksen läpi ja konsentroitiin, jolloin saatiin otsi-10 kon yhdistettä värittömänä kiinteänä aineena (40 mg); sp. 41-46 °C; Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,48.
Esimerkki 35 3a-hydroksi-3P-[3-(l'H-pyratsoI-r-yyIi)-l-propynyyIi]-5P-pregnan-20-oni 15 l-(2-propynyyli)-lH-pyratsolin (valmistettu pyratsolin reaktiolla propargyylinbromidin kanssa) (160 mg, 1,5 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-BuLi:llä (2,5 M THF:ssä, 1,5 mmol, 0,6 ml) -70 “C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -75 .. °C:ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 20- «·» ♦ \V1 20 (1,2-etaanidiyyliasetaalia) (180 mg, 0,5 mmol) THFtssä (15 ml), ja seosta sekoitettiin * **· ' 1 -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sitten reaktio sammutettiin NH4C1- ·
liuoksella (1 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (25 ml). 2 N
» · « · . jw. HCl:n (2 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia.
%··
Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jään- « 25 nös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n ♦ ί.ί.ϊ päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote.
• •I
V 1 Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageeliko- tT: lonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:asetoni -seoksella (9:1) antoi 3a-hydroksi-3p-[3-(l Ή- »· 4 *,„· pyratsol-l'-yyli)-l-propynyyli]-5p-pregnan-20-onia (80 mg) värittömänä kiinteänä ainee- » • ;1: 30 na; sp. 113-115 °C; TLC Rf (tolueeni:asetoni 9:1) = 0,19.
Ψ m 9 · • · v · · • # 3p-(3'-asetyylifenyylietynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 118008 41
Esimerkki 36
Liuosta, jossa 3-jodiasetofenonia (74 mg, 0,3 mmol) ja 3p-etynyyli-3a-hydroksi-5p-5 pregnan-20-onia (103 mg, 0,3 mmol) kuivassa, kaasuttomassa trietyyliamiinissa (1 ml), sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C;ssa. Bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)dikloridia (5 mg) ja CuLtä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuuttia.
CH2Cl2:ta (5 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 1,5 tuntia. TLC osoitti lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromatografi-10 sesti siligeelillä. Eluointi heksaani:asetonilla (85:15) antoi 3P-(3'-asetyylifenyylietynyy- li)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onia (30 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 4:1) = 0.
Esimerkki 37 15 3p-(3'-asetoksi-3'-propynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni
Pyridiinin (280 mg) liuosta CH2Cl2:ssa (2 ml) käsiteltiin asetyylikloridilla (280 mg) 0-5 °C:ssa. 3P-(3'-hydroksi-r-propynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-onin (130 mg) liuosta CH2Cl2:ssa (3 ml) lisättiin. Sekoittamista jatkettiin 0 °C:ssa 30 minuuttia. TLC osoitti 20 100 % konversion, joten seos kaadettiin jää- 2N HC1 -seokseen (20 g, 3 ml). Orgaaniset « · · · aineet uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,2 N HCl:llä, vedellä ja suolaliu- * ·:*·: oksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutet- • · : *.· tiin, jolloin saatiin raakatuote (150 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen mää- rään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluointi tolueeni:asetoni -seokset- * · · ’ 25 la (4:1) antoi 3P-(3'-asetoksi-3,-propynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-onia (110 mg); sp. 132-150 °C; TLC Rf (tolueeni:asetoni 70:30) = 0,37.
• · · • · · • · ♦ • ♦ · · • · *
Esimerkki 38 • ♦ · • · · 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l-imidatsolyyli)-5p-pregnan-20-oni • · *·:·* 30 • · · a. 21-bromi-3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yyii)-5P-pregnan-20-oni ' • · • ♦ * ψ ·· 118008 42
Liuosta, jossa oli 3ct-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-5p-pregnan-20-onia (386 mg, 1 mmol) MeOH:ssa (20 ml), käsiteltiin kahdella tipalla asetyylikloridia, jota seurasi bromi (1,2 mmol). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2,5 tuntia ja sitten kaadettiin jääveteen. Erotetut kiinteät aineet kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin 5 (410 mg). Tämä puolikuiva sakka liuotettiin sitten EtOAc:hen ja kuivattiin vedettömän
MgS04:n päällä. Liuottimen suodatus ja poisto antoi raa'an bromijohdannaisen, ja se käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
b. 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyIi)-21-(l-imidatsoIyyli)-5p-pregnan-20-oni 10
Suspensiota, jossa oli NaH:ta (138 mg, 95 %, 5,46 mmol) THF:ssä (10 ml), käsiteltiin liuoksella, jossa oli imidatsolia (345 mg, 5,1 mmol) THF:ssä (10 ml), huoneenlämpö-tilassa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu 30 minuuttia, lisättiin liuos, jossa oli raakaa bromijohdannaista (95 mg, 0,2 mmol) THF:ssä (10 ml). Sekoitusta jatkettiin huoneen-15 lämpötilassa 1 tunti. Kylläistä NH4Cl-liuosta lisättiin ja liuotin poistettiin. Jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (100 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen CH2Cl2:MeOH:NEt3 (95:4,5:0,5) 20 -seoksella antoi 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l-imidatsolyyli)-5p- • ♦ · ♦ pregnan-20-onia (40 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 117-119 °C; TLC Rf ♦ ♦:··: (CH2Cl2:MeOH:NEt3 95:4,5:0,5) 0,21. ; • * : * : * * ··-····
Samalla tavalla valmistettiin 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l,2,4-triatsol- • · · V : 25 l-yyli)-5p-pregnan-20-oni; sp. 208-210 °C; TLC Rf (CH2Cl2:MeOH:NEt3 95:4,5:0,5) 0,24; 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-1 -yyli)-21 -(tetratsol-1 -y y li)-5 P-pregnan-20-oni; • · · sp. 110-112 °C; TLC Rf(CH2Cl2;MeOH:NEt3 95:4,5:0,5) 0,11; 3a-hydroksi-3p-(4- i : : hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triatsol-l-yyli)-5P-pregnan-20-oni; sp. 101-104 °C; VJ TLC Rf (CH2Cl2:MeOH:NEt3 95:4,5:0,5) 0,2.
S · *:* 30 • · · ♦ · · ··*·.
♦ · ··* • ·· • · 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l-imidatsolyyli)-5p-19-norpregnan-20-
Esimerkki 39 118008 43 oni 5 a. 21-bromi-3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-5p-19-norpregnan-20-oni
Liuosta, jossa oli 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-5p-19-norpregnan-20-onia (710 mg, 1,9 mmol) MeOHissa (60 ml), kuumennettiin 33 °C:seen ja käsiteltiin kahdella tipalla asetyylikloridia, jota seurasi bromi (2,28 mmol, 0,116 ml). Seosta sekoitettiin 10 huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia ja sitten kaadettiin jääveteen. Erotemt kiinteät aineet kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin. Tämä puolikuiva sakka liuotettiin sitten EtOAc:hen ja kuivattiin vedettömän MgS04:n päällä. Liuottimen suodatus ja poisto antoi raa’an bromijohdannaisen (870 mg), ja se käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
15 b. 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l-imidatsolyyli)-5P-19-norpregnan-20-oni
Suspensiota, jossa oli NaH:ta (138 mg, 95 %, 5,46 mmol) THF:ssä (10 ml), käsiteltiin ϊ·* 20 liuoksella, jossa oli imidatsolia (345 mg, 5,1 mmol) THFrssä (10 ml), huoneenlämpö- ···* tilassa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu 30 minuuttia, lisättiin liuos, jossa oli raakaa ·:**: bromijohdannaista (90 mg, 0,2 mmol) THF:ssä (10 ml). Sekoitusta jatkettiin huoneen- « · • *,· lämpötilassa 1 tunti. Kylläistä NH4Cl-liuosta lisättiin ja liuotin poistettiin. Jäännös uutet- tiin EtOAcrllä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän • · · * * * *·* 25 MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (100 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja • · * ' *** kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen CH,Cl2:MeOH:NEt3 (95:4,5:0,5) iti -seoksella antoi 3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l-imidatsolyyli)-5P-19- « · · t · · ’**/ norpregnan-20-onia (25 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 118-127 °C; TLC Rf ‘r* 30 (CH2Cl2:MeOH:NEt3 95:4,5:0,5) 0,28.
• · • ♦ · « · · ♦ ·· · • · • · · • ·* • ·
Esimerkki 40 118008 44 3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triatsoI-2-yyli)-5p-19-norpregnan-20-oni ja 3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l ,2,3-triatsol-l-yyli)-5p-19-norpregnan-20-oni 5
Suspensiota, jossa oli NaH:ta (11 mg, 95 %, 0,44 mmol) THFrssä (10 ml), käsiteltiin liuoksella, jossa oli 1,2,3-triatsolia (30 mg, 0,44 mmol) THF.ssä (10 ml), huoneenlämpötilassa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu 30 minuuttia, lisättiin liuos, jossa oli 21-bromi-3a-hydroksi-3p-(4-hydroksi-butyn-l-yyli)-5P-pregnan-20-onia (100 mg, 0.22 10 mmol) THFissä (10 ml). Sekoitusta jatkettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Kylläistä NH4Cl-liuosta lisättiin ja liuotin poistettiin. Jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (100 mg). Tämä raaka-tuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. 15 Eluoiminen CH2C12: asetoni (4:1) -seoksella antoi 3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yy-li)-21-(2H-l,2,3-triatsol-2-yyli)-5p-l9-norpregnan-20-onia (15 mg) ensimmäisenä fraktiona; sp. 158-160 °C; TLC Rf (CH2C12:asetoni 4:1) = 0,36. Lisäeluoiminen samalla liuotinseoksella antoi 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triatsol-l-yyli)~ 5p-19-norpregnan-20-onia (15 mg); sp. 188-190 °C; TLC R, (CH2C12:asetoni 4:1) 0,2.
··:· 20 * * * * : Esimerkki 41 * 3a-hydroksi-2p-morfolinyyli-21-[l'-(l',2',4'-triatsolyyli)]-5p-pregnan-20-oni * · • * · • · • · * *”·* Liuokseen, jossa oli 1,2,4-triatsolia (108 mg, 1,57 mmol) kuivassa THF:ssä (2,5 ml), • · * • · · *·* * 25 lisättiin natriumhydridiä (36 mg, 1,50 mmol). Seosta sekoitettiin 25 °C:ssa argon-ilma- . kehässä 0,5 tuntia. Sitten lisättiin 3a-hydroksi-2P morfolinyyli-21-bromi-5a-pregnan-20- • · · • · * onia (130 mg, 0,27 mol) ja seosta sekoitettiin lisää 25 °C:ssa argonilmakehässä 2,5 tun- I · · tia. Vettä (20 ml) lisättiin hitaasti reaktioseokseen. Tuote uutettiin etyyliasetaatilla (3 x * · · • · · 25 ml). Yhdistetyt uuteet pestiin suolaliuoksella (20 ml) ja vedellä (3 x 20 ml). Saatu i : 30 orgaaninen liuos kuivattiin natriumsulfaaatin päällä ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin • · ♦ · * *·· · saatiin raakatuote (130 mg). Puhdas mote (90 mg, 71 %) saatiin flash-kromatofrafisesti ♦ · 118008 45 (30 g silikageeliä ja 300 ml sekoitettua liuotunta CH2Cl2:MeOH:Et3N = 95:4,5:0,5; Rf = 0,14).
Esimerkki 42 5 3a-hydroksi-21-(l'-urasiili)-5a-pregnan-20-oni
Suspensioon, jossa oli urasiilia (112 mg, 1 mmol) ja K2C02:ta (138 mg, 1 mmol) DMFtssä (1,5 ml), lisättiin 3a-hydroksi-21-bromi-5a-pregnan-20-onia (400 mg, 1 mmol) ja saatua seosta sekoitettiin 25 °C:ssa 65 tuntia. Sitten se kaadettiin erotussuppiloon, 10 jossa oli vettä (60 ml) ja etyyliasetaattia (100 ml). Vesikerros poistettiin ravistuksen jälkeen ja tuotteena saatiin valkoinen kiinteä aine orgaanisesta kerroksesta suodattamalla (87 mg, 20 %); sp. 262-265 °C (hajoa).
Esimerkki 43 15 Natrium-S-(3a-hydroksi-5oi-pregnan-20-oni-21-yyli)tiosulfaatti -
Liuokseen, jossa oli 21-bromi-3a-hydroksi-5ct-pregnan-20-onia (500 mg, 1,26 mmol) liuotettuna 50 ml:aan etanolia, lisättiin tipoittain natriumtiosulfaatin (199 mg, 1,26 mmol) liuosta 10 ml:ssa vettä. Reaktioseoksen annettiin sekoittua huoneenlämpötilassa •j1 20 kunnes TLC (1:1 asetoni/dikloorimetaani) osoitti lähtöbromidin täydellisen kulumisen.
• 1 • 1·· Reaktion konsentroiminen tyhjössä antoi haluttua tiosulfaattia, jossa oli epäpuhtautena natriumbromidia. Flash-kolonnikromatografia (silikageeli eluoituna gradientilla 1:1 - 3:1 • · i .1 aetoni/dikloorimetaanilla) antoi 430 mg (75 %) otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä fc 1 1 *··1 aineena. " • · · • » · * · · 1 - * 25 . Samalla tavalla valmistettiin natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metyyli-5a-pregnan-20-on-21- • · · · · yyli)tiosulfaatti, puhdistettu flashkromatografisesti kuten edellä, natrium-S-(3a-hydroksi- I · · 3 β-metoksimetyyli-5a-pregnan-2+-on-21 -yy 1 i)tiosulfaatti, puhdistettu uudelleenkiteyttä- • · · ' · ·
"... mällä 50:1 metanoli/vedestä, natrium-S-(3a-hydroksi-5p-pregnan-20-on-21-yyli)tiosuF
i : 30 faatti, puhdistettu flash-kromatografisesti silikageelillä ja 3:1 asetoni/etanolilla, natrium- • · • · · * S-[3a-hydroksi-3p-(4'-hydroksibutynyyIi)-5p-pregnan-20-on-2-yyli]tiosulfaatti, puhdis- • 4 · • 1 · 1 tettu hiertämällä kuumalla asetonilla ja natrium-S-(3a-hydroksi-3P-trifluorimetyyli-5p- 118008 46 19-norpregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti, puhdistettu hiertämällä kuumalla asetoni/kloro-formilla.
Esimerkki 44 5 3a-hydroksi-3p-(E)-(2-fenyylietenyyIi)-5a-pregnan-20-oni Bentsyylifenyylisulfoksidi
Liuokseen, jossa oli bentsyylifenyylisulfidia (Aldrich; 1,068 g, 5,33 mmol) 25 mlrssa 10 CH2Cl2:ta -78 °C:ssa, lisättiin hitaasti liuos, jossa oli m-klooriperbentsoehappoa (Aldrich, 50-60 %; 760 mg, 2,64 mmol, jos 60 %) 10 mlissa CH2Cl2:ta. Huoneenlämpö-tilaan lämmittämisen ja yön yli sekoittamisen jälkeen liuos lisättiin 20 ml:aan kylläistä NaHC03-liuosta. Vesikerros erotettiin ja uutettiin CH2Cl2:lla (2 x 10 ml). Sitten yhteen kerätyt orgaaniset kerrokset kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin 15 flash-kolonnikromatografisesti (silikageeli, 10 % asetoni/heksaani ja 15 % asetoni/hek- i, saani) antoi sulfoksidia (632 mg, 55 %) valkoisena kiinteänä aineena, sp. 123-126 °C.
20,20-etyleenidioksi-3a-hydroksi-3P-[[2-(fenyylisulfinyyli)-2-fenyyli]etyyli]-5-a-preg- naani t · · * j :·. 20 *:·*: Liuos, jossa oli di-isopropyyliamiinia (Aldrich, vastatislattu Ca2H:sta; 0,5 ml, 361 mg, | \i 3,57 mmol) 2 ml:ssa kuivaa THF:ää, jäähdytettiin -10 °C:seen ja käsiteltiin 1,6 M n-Bu-
Li-liuosta heksaaneissa (Aldric; 1,0 ml, 1,6 mmol), joka lisättiin tipoittain ruiskulla. 10 *·· ly V * minuutin jälkeen reaktio jäähdytettiin -75 °C:seen ja lisättiin liuos, jossa oli bentsyylisul- 25 foksidia (347 mg, 1,60 mmol) 5 ml:ssa kuivaa THF:ää, lisättiin tipoittain ruiskun kautta * * 30 minuutin aikana. Syntyneeseen syvän keltaiseen liukseen lisättiin 297 mg (0,79 mmol) * · 1 i kiinteää 20,20-etyleenidioksi-3(R)-5a-pregnan-3-spiro-2'-oksiraania. Reaktioseoksen • · · annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sitten lämmitettiin 50 “C.seen. 5 tunnin jälkeen · • « reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan ja lisättiin 30 ml:aan jääkylmää vet-30 tä. Syntynyt seos uutettiin EtOAc:llä (3 x 20 ml). Yhdistetyt EtOAc-kerrokset uutettiin **·’ takaisin kylläisellä NaCl-liuoksella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografisesti (silikageeli, gradientti 100 % CH2Cl2:sta 20 % 118008 47 asetoni/CH2Cl2:een) antoi sulfoksidia (405 mg, 86 %) kahden diastereomeerin seoksena (perustuen kahteen bentsyyliprotoniin lH NMR-spektrissä).
3a-hydroksi-3p-[[2-(fenyylisuIfinyyli)-2-fenyylf|etyyli]-5a-pregnan-20-oni 5
Liuosta, jossa oli 20,20-etyleenidioksi-3a-hydroksi-3p-[[2-(fenyylisulfinyyli)-2-fenyyli]-etyyli]-5-a-pregnaania (1,30 g, 2,21 mmol) 15 ml.ssa THF.ää, jäähdytettiin jää/vesi-hauteessa ja lisättiin 1 N HCl-vesiliuosta (3 ml), jota seurasi 2 ml asetonia. 70 minuuttia huoneenlämpötilassa sekoittamisen jälkeen reakioseos jäähdytettiin 0 °C:seen ja lisättiin 10 EtOAc/vesi-seokseen, joka sisälsi 6 ml kylläistä NaHC03-liuosta. Vesikerros uutettiin kaksi kertaa EtOAc:llä ja yhdistetyt orgaaniset kerrokset uutettiin kylläisellä NaCl-liuok-sella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin. Jäännös siirrettiin seuraavaan vaiheeseen ilman puhdistuksia.
15 3a-hydroksi-3P-(E)-(2-fenyylietenyyli)-5a-pregnan-20-oni _
Suspensiota, jossa oli 3a-hydroksi-3p-[[2-(fenyylisulfinyyIi)-2-fenyyli]etyyli]-5a-preg- nan-20-onia (963 mg, 1,76 mmol) 6 ml:ssa p-kymeeniä, joka sisälsi 0,95 ml 2,4,6-kolli- diinia, kuumennettiin 135 °C:ssa 1 tunti. Sen jälkeen, kun reaktioseos oli seissyt yön yli 20 0 °C:ssa, tuote oli saostunut ja se eristettiin suodattamalla. Raakatuote pestiin kylmällä : 1.· p-kymeenillä (3x5 ml) ja heksaanilla (yhteensä 120 ml) ja saatiin 445 mg otsikon yhdis- *!,,i tettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 209-213 °C.
• « : · : • 1 ... *
Esimerkki 45 • 1 · • · 1 *·’ 25 3a-hydroksi-2p-trimetyylisilyylietynyyli-5a-pregnan-20-oni * . : : : t Liuosta, jossa oli trimetyylisilyyliasetyleeniä (0,5 ml, 0,347 g, 3, 54 mmol) 4 ml:ssa • 1 1 kuivaa THF:ää, jäähdytettiin-78 °C:seen ja käsiteltiin 2,5 M n-BuLi:llä heksaanien • · 1 • · 1 liuoksessa. Puhdasta BF3-Et,0:ta (0,3 ml, 0,346 g, 2,44 mmol) lisättiin ruiskun kautta. 5 i : *" 30 minuuttia-78 °C:ssa sekoittamisen jälkeen lisättiin liuos, jossa oli 20,20-etyleenidioksi- : ·;· | 5a-pregnan-2a,3a-epoksidia (557 mg, 1,54 mmol) 3 ml:ssa kuivaa THF:ssä, 12 minuu- ·1« · • »· tin aikana. Vielä 2,5 tunnin jälkeen reaktioon lisättiin kylläistä NH4Cl-liuosta. Syntynyttä 118008 f 48 seosta uutettiin EtOAc:llä (3 x 25 ml). Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin alennetussa paineessa. Raaka reaktioseos liuotettiin 10 ml:aan asetonia, jäähdytettiin jää/vesi-hauteessa ja käsiteltiin 1 N HCl-li-uoksella (1 ml). 1 tunnin huoneenlämpötilassa olon jälkeen reaktioseokseen lisättiin 5 eetteri/vesi-seosta, joka sisälsi 1 ml kylläistä NaHC03-liuosta. Vesikerros pestiin kaksi kertaa eetterillä ja yhteen kerätyt eetterikerrokset pestiin kylläisellä NaCl-liuoksella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin. Flash-kolonnikromatografia (silikageeli, 12,5 % aseto-ni/heksaani) antoi 249 mg otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 164-167 °C.
10
Edellä olevaa menettelyä käytettiin 3a-hydroksi-2P-(3'-metoksi-l'-propynyyli)-5a-preg-nan-20-onin valmistuksessa.
Trimetyylisilyyliyhdisteen hydrolyysi K2C03/Me0H:n kanssa antoi 3a-hydroksi-2p-15 etynyyli-5a-pregnan-20-onia Valkosena kiinteänä aineena, sp. 179-189 °C (hajoaa).
Esimerkki 46 3a,21-dihydroksi-3P-etynyyli-5P-pregnan-20-oni ♦ ··· 20 a. 21-bronii-3p-etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni • · · • · · · ·
Liuosta, jossa oli 3P-etenyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onia (3 g, 8,77 mmol) • ♦ : MeOH:ssa (110 ml), käsiteltiin kahdella tipalla HBr:ää (48 %), jota seurasi bromi (0,5 a*· ml, 10,8 mmol). Seosta sekoitettiin 37 °C:ssa 1 tuntija sitten kaadettiin jääveteen. ^ 25 Erotetut kiinteät aineet kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin (3,2 g). Tämä * · : *** puolikuiva sakka liuotettiin sitten EtOAcrhen ja kuivattiin vedettömän MgS04:n päällä.
··· • · *·;* Liuottimen suodatus ja poisto antoi raa'an bromijohdannaisen. Tämä raakatuote liuotet- * * * i : tiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluointi *·· • · *·;·* heksaani;EtOAc-seoksella (85:15) antoi 21-bromi-3p-etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan- 30 20-onia (3,2 g).
• ·· • * : • * • * · b. 3a,21-dihydroksi-3p-etynyyli-5p-pregnan-20-oni 118008 49
Liuosta, jossa oli edellä valmistettua bromijohdannaista (3,2 g) asetonissa (100 ml), käsiteltiin triluorietikkahapolla (5,8 ml, 76 mmol) ja trietyyliamiinilla (8,5 ml). Seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 30 minuuttia ja sitten lisättiin trifluorietikkahapon nat-5 riumsuolaa (10 g) erissä 10 tunnin aikana. Huoneenlämpötilaan jäähtymisen jälkeen lisättiin kylläistä NaHC03-liuosta. Liuotin poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaani- j- nen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle.
10 Eluoiminen heksaani:EtOAc-seoksella (3:2) antoi 3a,21-dihydroksi-3P-etynyyli-5p-pregnan-20-onia (1,6 g), sp. 156-157 °C; TLC Rf (heksaani-.asetoni 3:1) = 0,2.
Esimerkki 47 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5P-pregnan-20-oni 15 -
Liuosta, jossa 4-jodiasetofenonia (1,22 g, 4,44 mmol) ja 3a,21-dihydroksi-3p-etynyyli- 5P-pregnan-20-onia (1,59 g, 4,44 mmol) kuivassa, kaasuttomassa trietyyliamiinissa (7 ml), sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)diklo- ridia (15 mg) ja CuLtä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuut- ^ jj* 20 tia. CH2Cl2:ta (30 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 1,5 tuntia. TLC osoitti läh-• * • *·· töaineen 100 % muutmmisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromato- grafisesti siligeelillä. Eluointi heksaani-.asetonilla (4:1) antoi 3p-(4'-asetyylifenyyliety- • · « · * ί ·* nyyli)-3a,21-dihydroksi-5P-pregnan-20-onia (1,3 g) värittömänä kiinteänä aineena; sp.
*·“* 181-183 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 3:2) = 0,14.
ti’; 25 . Esimerkki 48 • * 2 • · · ··*, 3p-(4'-asetyyiifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5P-pregnan-20-onin 21-hemisuk- # * * kinaatin natriumsuola # · · • · * ··· •. 30 a. 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5P-pregnan-20-onin 21-hemisuk- * · ♦ \ kinaatti * · ♦ ···> • ·· • · 118008 50
Liuosta, jossa oli 3 β-(4' -asetyylifenyyI ietynyyli)-3a,21 -dihydroksi-5 p-pregnan-20-onia (1,3 g, 6,76 mmol) pyridiinissä (8 ml), käsiteltiin meripihkahapon anhydridillä (680 mg, 2,5 mmol) ja 4-(N,N-dimetyyli)aminopyridiinillä (25 mg). Seosta kuumennettiin 70-75 °C:ssa 2,5 tuntia. TLC osoitti 100 % konversiota. Pyridiini poistettiin tyhjössä ja jään-5 nös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,1 N HCl:llä, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kaivamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen heksaani:asetoni -seoksella (7:3) antoi 3P (4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p-pregnan-20-onin 21-hemisukkinaat-10 tia (1,4 g).
b. 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p-pregnan-20-onin 21-hemisuk-kinaatin natriumsuola 15 Seosta, jossa oli edellä valmistettua hemisukkinaattia (1,5 g mg, 2,6 mmol), NaHC03:a (220 mg, 2,6 mmol), vettä (10 ml) ja CH2Cl2:ta (16 ml), sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Liuotin poistettiin ja jäännös pakastekuivattiin, jolloin saatiin natriumsuolaa värittömänä kiinteänä aineena (1,4 g).
**:· 20 Esimerkki 49 ·· · · • '·· 3a,21-dihydroksi-3p-etynyyli-5apregnan-20-oni
IlM* • * ϊ ·* a. 21-bromi-3p-etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni f /· l i · • « * «»· * S ! 25 Liuosta, jossa oli 3p-etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onia (2,3 g, 6,72 mmol)
MeOH:ssa (80 ml), käsiteltiin kahdella tipalla HBr:ää (48 %), jota seurasi bromi (0,4 S · · ml, 7,73 mmol). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti ja sitten kaadettiin jääve- S · · » teen. Erotetut kiinteät aineet kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin (2,5 g).
# · ♦ • · · *...i Tämä puolikuiva sakka liuotettiin sitten EtOAc:hen ja kuivattiin vedettömän MgS04:n t * 30 päällä. Liuottimen suodatus ja poisto antoi raa'an bromijohdannaisen. Tämä raakatuote | i j **,* * liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Elu- • · · t ·* • ♦ 118008 51 ointi heksaani:EtOAc-seoksella (85:15) antoi 21-bromi-3p-etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20 onia (2,1 g) b. 3a,21-dihydroksi-3p-etynyyli-5a-pregnan-20-oni 5 :
Liuosta, jossa oli edellä valmistettua bromijohdannaista (2,1 g, 5 mmol) asetonissa (40 ml), käsiteltiin triluorietikkahapolla (3,8 ml, 50 mmol) ja trietyyliamiinilla (5,5 ml). Seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 30 minuuttia ja sitten lisättiin trifluorietikkaha-pon natriumsuolaa (10 g) erissä 10 tunnin aikana. Huoneenlämpötilaan jäähtymisen jäl-10 keen lisättiin kylläistä NaHC03-liuosta. Liuotin poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote (1,6 g). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaaettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen heksaani:EtOAc-seoksella (7:3) antoi 3a,21-dihydroksi-3p-etynyyli-15 5a-pregnan-20-onia 81,5 g), sp. 214-218 °C; TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,33.
Esimerkki 50 3p-(4'-&setyyIifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-oni ::· 20 Liuosta, jossa 4-jodiasetofenonia (962 mg, 4 mmol) ja 3a,21-dihydroksi-3P-etynyyli-5a- «««· pregnan-20-onia (1,2 g, 4 mmol) kuivassa, kaasuttomassa trietyyliamiinissa (7 ml), sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)dikloridia i 1.1 (15 mg) ja CuLtä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuuttia.
i · 1 •ϊ·' CH2Cl2:ta (25 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 1,5 tuntia. TLC osoitti lähtöai- ·’ 25 neen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromatografi- , sesti siligeelillä. Eluointi heksaani:asetonilla (7:3) antoi 3p-(4’-asetyylifenyylietynyyli)- • · · # t · 3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onia (750 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 222- • 1 1 225 °C, TLC R,^^ (heksaani:asetoni 4:1) = 0,13.
• 1 · • · < ··· :X ..
« · · i *···'.·· • ·· .
* · 118008 52
Esimerkki 51 3p-(4'-asetyylifenyyIietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin 21-hemisuk-kinaatin natriumsuola 5 a. 3p-(4'-asetyylifeiiyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin 21-hemisuk-kinaatti
Liuosta, jossa oli 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onia (276 mg, 1,4 mmol) pyridiinissä (4 ml), käsiteltiin meripihkahapon anhydridillä (680 10 mg, 2,7 mmol) ja 4-(N,N-dimetyyli)aminopyridiinillä (20 mg). Seosta kuumennettiin 70-75 °C:ssa 2,5 tuntia. TLC osoitti 100 % konversiota. Pyridiini poistettiin tyhjössä ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin 0,1 N HClillä, vedellä ja suolaliuoksella. Vedettömän MgS04:n päällä kuivamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään 15 CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen heksaani:asetoni -seoksella (7:3) antoi 3p-(4’-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin 21-he-misukkinaattia (400 mg).
b. 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-omn 21-hemisuk-20 kinaatin natriumsuola ·«»· • f t t « * · ’i“i Seosta, jossa oli edellä valmistettua hemisukkinaattia (400 mg, 0,7 mmol), NaHC03:a • * ^ S ·* (60 mg, 0,7 mmol), vettä (3 ml) ja CH2Cl2:ta (5 ml), sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 * 'ί | · * <t ·*** tunti. Liuotin poistettiin ja jäännös pakastekuivattiin, jolloin saatiin natriumsuolaa värit- t * ϊ ** 25 tömänä kiinteänä aineena (390 mg).
* • * · * f *
Esimerkki 52 3a-hydroksi-3p-(3-pyridyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni « · « « « * * · * *...** **’ 30 Liuosta, jossa 3-bromipyridiimä (70 mg, 0,44 mmol) ja 3P-etynyyli-3a-hydroksi-5a- i ϊ*: *·· \ pregnan-20-onia (150 mg, 0,44 mmol) kuivassa, kaasuttamassa trietyyliamiinissa (1 ml), « · · φ «· ’ ‘ sekoitettiin argon-ilmakehässä 23 °C:ssa. Bis(trifenyylifosfiini)palladium(II)dikloridia 53 \ 118008 (10 mg) ja Cul:tä (5 mg) lisättiin ja seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuuttia. CH2Cl2:ta (4 ml) lisättiin ja seosta sekoitettiin 23 °C:ssa 1,5 tuntia. TLC osoitti lähtöaineen 100 % muuttumisen, joten liuotin poistettiin ja jäännös puhdistettiin kromatografi-sesti siligeelillä. Eluointi heksaani:asetonilla (3:1) antoi 3a-hydroksi-3P-(3-pyridyyli)-5 etynyyli-5P-pregnan-20-onia (30 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 230-35 °C, TLC Rf (heksaani:asetoni 7:3) = 0,24.
Esimerkki 53 21-bromi-3a-hydroksi-3p-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-5p-pregnan-20-oni 10
Liuosta, jossa oli 3a-hydroksi-3p-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-5p-pregnan-20-onia (483 mg, 1,3 mmol) MeOH:ssa (20 ml), kuumennettiin 33 °C:seen ja käsiteltiin kahdella tipalla HBr:ää (48 %), jota seurasi bromi (1,43 mmol, 0,73 ml). Seosta sekoitettiin 37 °C:ssa 1 tunti ja sitten kaadettiin jääveteen. Erotetut kiinteät aineet kerättiin suodattamal-15 la, pestiin vedellä ja kuivattiin. Tämä puolikuiva sakka liuotettiin sitten EtOAcrhen ja kuivattiin vedettömän MgS04:n päällä. Liuottimen suodatus ja poisto antoi raa'an 21-bromi-3a-hydroksi-3P-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-5p-pregnan-20-onin (322 mg).
Esimerkki 54 ’:· 20 3a-hydroksi-3P-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triatsol-2-yyli)-5P-pregnan-20-
• •M
ϊ *»· oni ja 3a-hydroksi-3p-(3-hydroksipropyn-l-yyli)“21-(l,2,3-triatsol-l-yyli)-5p- ”'**· pregnan-20-oni - • · j · ϊ *'ϊ·* Suspeniota, jossa oli NaH:ta (30 mg, 95 %, 1,2 mmol) THFissä (10 ml), käsiteltiin li- * ϊ · ’·* * 25 uoksella, jossa oli 1,2,3-triatsolia (69 mg, 1 mmol) THF:ssä (10 ml), huoneenlämpötilas- , sa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu 30 minuuttia, lisättiin liuos, jossa oli esimerkin • » ; > · · 53 raakaa bromijohdannaista (162 mg, 0,37 mmol) THF:ssä (10 ml). Sekoitusta jatkettiin S · · huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia. Kylläistä NH4Cl-liuosta lisättiin ja liuotin poistettiin.
·*· · 4 · *.< Jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Vedet- ifM*.
'·* 30 tömän MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin p · f f · **· \ saatiin raakatuote (250 mg). Tämä raakatuote liuotettiin sitten pieneen määrään * · ' ‘ CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen CH2C12:asetoni (6:4) 118008 54 -seoksella antoi 3a-hydroksi-3P-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triatsol-2-yyli)-5p- pregnan-20-onia (40 mg) ensimmäisenä fraktiona; sp. 188-191 °C; TLC Rt (CH2C12: asetoni 6:4) 0,56. Lisäeluoiminen samalla liuotinseoksella antoi 3a-hydroksi-3p-(3-hydrok-sipropyn-1 -yyli)-21 -(1,2,3-triatsol-1 -yyli)-5p-pregnan-20-onia (40 mg); sp. 135-140 °C; 5 TLC Rf (CH2C12:asetoni 6:4) 0,34.
Esimerkki 55 3P-(4'-hydroksi-X'-butynyy[i)-3a-hydroksi-5P-pregnan-ll,20-dioni 10 3-butyn-l-olin (0,4 ml, 5,2 mmol) liuosta kuivassa THF:ssä (15 ml) käsiteltiin n-BuLi:-llä (4 ml, 2,5 M THF:ssä, 10 mmol) -65 °C:ssa. Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu -75 °C :ssa 0,5 tuntia, seokseen lisättiin liuos, jossa oli 5p-pregnan-3,20-dionin syklistä 20-(1,2-etaanidiyyliasetaalia) (800 mg, 2,14 mmol) THFrssä (20 ml), ja seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 1 tunti. Jäähdytyshaude poistettiin ja sekoittamista jatkettiin huoneenläm-15 pötilassa 45 minuuttia. Sitten reaktio sammutettiin NH4Cl-liuoksella (5 ml). Liuotin poistettiin ja sitten jäännös liuotettiin asetoniin (30 ml). 2 N HCl:n (7 ml) lisäämisen jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Kylläistä NaHC03-liuosta lisättiin hapon neutraloimiseksi. Liuottimet poistettiin ja jäännös uutettiin EtOAc:llä. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja suolaliuoksella. MgS04:n päällä kuivaamisen jälkeen liuos I*;' 20 suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuote. Tämä raakatuote liuotettiin sitten «· • *·· pieneen määrään CH2Cl2:ta ja kaadettiin silikageelikolonnin päälle. Eluoiminen tolueeni:- asetoni -seoksella (3:1) antoi reagoimattoman butynolin ensimmäisenä fraktiona. Lisäelu- • * * · · '· 1 oiminen samalla liuotinseoksella antoi 3a-(4'-hydroksi-l'-butynyyli)-3p-hydroksi-5p- # · · *"·1 pregnan-ll,20-dionia (100 mg), ja sitten 3p-(4'-hydroksi-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5p- * 25 pregnan-ll,20-dionia (400 mg) värittömänä kiinteänä aineena; sp. 158-162 °C; TLC Rf ; , (tolueeni:asetoni 3:1) = 0,16.
rt · • * ·* · * * * · * « « · «
Alan ammattimiehelle on ilmeistä, että edellä kuvatut yhdisteet voivat olla diastereomee- « * · t » * '...t rien seoksina, jotka voidaan erottaa yksittäisiksi diastereomeereiksi. Diastereomeerien t 30 erotus voidaan suorittaa helposti kaasu-tai nestekromatografisesti tai erottamalla luonnol- i t · Ψ m 9 ·" * lisistä lähteistä. Ellei toisin ole mainittu, selitysosassa ja patenttivaatimuksissa esitettyihin • 9 » «f · yhdisteisiin, kuten edellä on selitetty, tarkoitetaan kuuluvan kaikki isomeerit, joko erotet tuina tai niiden seoksina.
55 118008 :
Kun isomeerit on erotettu, haluttu farmakologinen aktiivisuus on yleensä toisella diaste-5 reomeereistä. Kuten tässä on selitetty, yhdisteillä on hyvin suuri stereospesifisyyden aste.
Erityisesti ne yhdisteet, joilla on suurin affiniteetti GABA-reeseptroikompleksille, ovat niitä, joilla on 3P-subsitutuoitu-3a-hydroksipregnaanin steroidihiilirungot.
Keksinnön mukaisilla ja keksinnössä käytettävillä yhdisteillä, jotka ovat myrkyttömiä, 10 farmaseuttisesti hyväksyttäviä, luonnollisia ja synteettisiä, suoraan toimivia tai progesteronin, deoksikortikosteronin ja androstaanin metaboliittien "esilääke "-muotoja, on tähän saakka tuntematon aktiivisuus aivoissa GABAA-reseptorikopleksissa. Esillä oleva keksintö ottaa edun tästä aikaisemmin tuntemattoman mekanismin ja aktiivisuuden keksimisestä.
15 Tämän keksinnön mukaiset farmaseuttiset koostumukset valmistetaan tavanomaisiin yksikköannosmuotoihin, myrkyttömän farmaseuttisen kantajan kanssa hyväksyttyjen menetelmien mukaisesti, myrkyttömän määrän ollessa riittävä tuottamaan haluttu farmako-··· dynaaminen aktiivisuus kohteessa, eläimessä tai ihmisessä. Edullisesti koostumus sisältää M·» 20 aktiiviaineosan aktiivisessa, mutta myrkyttömässä määrässä, valittuna noin 1 mgrsta noin *:**: 500 mg.aan aktiiviaineosaa annosyksikköä kohti. Tämä määrä riippuu halutusta erityisestä * • · · : biologisesta aktiivisuudesta ja potilaan tilasta. Tämän keksinnön mukaisten koostumusten ja menetelmien halutut kohteet ovat stressin, ahdistuneisuuden, PMS:n, PND:n ja hai- ·*· * · * *·* vauskohtauksien hoitamisessa, kuten ne, jotka aiheuttavat epilepsiaa, jotta parannettaisiin ,, 25 tai ehkäistäisiin ahdistuneisuus-, lihasjännitys-ja masennuskohtauksia, jotka ovat yleisiä • · * ·· potilaissa, jotka kärsivät näistä keskushermostosysteemin häiriöistä. Koostumuksen ja • · 4<” menetelmien haluttu lisäkohde on unettomuuden hoito ja hypnoottisen aktiivisuuden tuot- • · · *..! tammen. Yhdisteiden ja menetelmien toinen haluttu kohde on anestesian indusoiminen, • · • · *·' erityisesti laskimonsisäisesti annosteltuna.
***** 30 M· • · *** Käytetty farmaseuttinen kantaja voi olla esimerkiksi joko kiinteä, neste tai viivevapautta- va (katso esim. Remingtons's Pharmaceutical Sciences, 14. painos, 1970). Edustavia 118008 56 kiinteitä kantajia ovat laktoosi, valkea kaoliini, sakkaroosi, talkki, gelatiini, agar, pektii-ni, akaasia, magnesiumstearaatti, steariinihappo, mikrokiteinen selluloosa, polymeeri-hydrogeelit ja vastaavat. Tyypillisiä nestemäisiä kantajia ovat propyleeniglykoli, glykofu-roli, syklodekstriiniin vesiliuokset, siirappi, maapähkinäöljy ja oliiviöljy ja vastaavat 5 emulsiot. Samoin kantaja tai laimennin voi sisältää mitä tahansa tekniikan tasossa tunnettua viivevapauttavaa ainetta, kuten glyserolimonostearaatti tai glyserolidistearaatti yksin tai vahan kanssa, mikrokapselit, mikropallot, liposomit ja/tai hydrogeelit.
Lukuisia erilaisia farmaseuttisia muotoja voidaan käyttää. Siten kun käytetään kiinteää 10 kantajaa, valmisteet voidaan tasorouhinruiskuttaa öljyyn, tabletoida, asettaa kovagelatii-ni- tai entoropäällystettyyn kapseliin mikrokiteisenä jauheena tai pellettimuodossa, tai tabletin tai pastillin muodossa. Keksinnön mukaiset ja siinä käytetyt yhdisteet voidaan myös annostella peräpuikkojen muodossa rektaalista annostelua varten. Yhdisteet voidaan sekoittaa sellaiseen aineeseen kuten kaakaovoi tai polyetyleeniglykolit tai muuhun sopi-15 vaan ärsyttämättömään aineeseen, joka on kiinteä huoneenlämpötilassa mutta nestemäinen peräsuolen lämpötilassa. Kun käytetään nestemäistä kantajaa, valmiste voi olla nesteen muodossa, kuten ampulli, tai vesipitoisena tai vedettömänä suspensiona. Nestemäiset annosmuodot tarvitsevat myös farmaseuttisesti hyväksyttäviä säilöntäaineita ja vastaavia. Lisäksi, johtuen pienistä annoksista, joita, perustuen tässä esitettyihin tuloksiin, vaati· 20 ditaan parenteraaliseen annostukseen, nenäsuihkeeseen, kielenalaiseen tai suuannoste-• * * · ·*·.. luun, ja viivevapauttavat iholaastarit ovat myös sopivia farmaseuttisia muotoja paikalli- •ft seen annostelemiseen.
• · • · · ··'·· • 5
Menetelmä ahdistuksen vastaisen, kouristuksia estävän, mielialaa muuttavan (kuten ma- • · · V* 25 sennuksen vastaisen) tai hypnoottisen aktiivisuuden tuottamiseksi, tämän keksinnön mukaisesti, käsittää sen, että annostellaan sellaisen aktiivisuuden tarpeessa olevaan kohtee- • « · * · · seen keksinnön mukaista yhdistettä, joka tavallisesti on valmistettu koostumuksen muo- • · · • · * toon, kuten edellä on kuvattu farmaseuttisen kantajan kanssa, myrkyttömässä määrässä, • * * * · * Y/ joka on riittävä tuottamaan mainittua aktiivisuutta, s*’*: *:* 30 • · • ♦ · 4 4
Kuukautisten aikana erittyneiden metaboliittien määrä vaihtelee noin nelinkertaisesti • · • # · ’· ” (Rosciszewska, et ai.). Siten hoito oireiden kontrolloimiseksi käsittää sen, että potilaassa 118008 57 on suurempi määrä progesteronimetaboliitteja kuin tavallisesti PMS-potilaissa ennen kuukautisia. Aktiivisen aineen ja päämetaboliittien plasmassa olevia määriä seurataan ennen potilaan kuukautisia ja niiden jälkeen. Annosteltavan keksinnön mukaisten yhdisteiden määrä, joko yksin tai niiden seoksina, lasketaan siten, jotta saavutetaan taso, joka käyn-5 nistää GABAA-reseptoriaktiivisuuden, joka on sama tai korkeampi kuin progesteronin metaboliittien määrä normaalissa kohteessa esikuukautistilan aikana. -
Annostelun reitti voi olla mikä tahansa reitti, joka tehokkaasti kuljettaa aktiivisen aineen GABAA-reseptoreihin, joita stimuloidaan. Annostelu voidaan suorittaa parenteraalisesti, 10 enteraalisesti, rektaalisesti, vaginan sisäisesti, ihon sisäisesti, lihaksen sisäisesti, kie-lenalaisesti tai nenän kautta; oraalinen, lihaksensisäinen ja ihoreitti ovat edullisia. Esimerkiksi yksi annos iholaastarissa voi luovuttaa aktiiviainetta potilaaseen jopa yhden viikon ajan. Parenteraalinen reitti on kuitenkin edullinen epileptisessä tilassa.
IS Voimakkuus ja tehokkuus GR-kohdassa
In vitro ja in vivo -koetulokset osoittavat, että luonnollisesti esiintyvät progestero-ni/deoksikortikosteronin metaboliitit ja niiden johdannaiset toimivat suurella affiniteetilla GR-kompleksin uudessa ja spesifisessä tunnistuskohdassa, jolloin ne helpottavat kloridi-;·· 20 ionien johtokykyä hermokalvojen läpi, jotka ovat herkkiä GABArlle (Gee et ai., 1987; im·
Harrison et ai., 1987).
* ♦ * _ • Alan ammattimiehille on tunnettua, että [35S]-t-butyylibisyklofosforitionaatin ([35S]TBPS) sitoutumisen modulaatio on GR-kompleksissa vaikuttavan lääkkeen voimakkuuden tai * * * '·' 25 vaikutuksen mitta, jolla lääkkeellä voi olla mahdollinen terapeuttinen arvo stressin, ah distuksen ja halvauskohtaushäiriöiden hoidossa (Squires, R.F., et ai., "[35S]t-Butylbi- • t * cyclophophorothionate binds with high affinity to brain-specific sites coupled to a gamma I : : aminobutyric acid-A and ion recognition site", Mol. Pharmacol., 23:326, 1983; Lawren- M* * · · *;'/ ce, L.J., et al., "Benzodiazepine anticonvulsant action: gamma-aminobutyric acid-depen- «** t 30 dent modulation of the chloride ionophore", Biochem. Biophys. Res. Comm., 123:1130- # * · ··'· '· 1137, 1984; Wood, et al., "In vitro characterization of benzodiazepine receptor agonists, • · * · * .
’· " antagonists, inverse agonists and agonist/antagonists", Pharmacol. Exp. Ther., 231:572- 118008 58 576, 1984). Suoritimme useita kokeita määrittääksemme [35S]TBPS:n modulaation luonne, minkä keksinnön mukaiset yhdisteet saavat aikaan. Havaitsimme, että nämä yhdisteet vaikuttavat uudessa kohdassa GR-kompleksissa, joka ei mene päällekkäin barbituraattien, bentsodiatsepiinien tai minkään muun aikaisemmin tunnetun vaikutuskohdan kanssa.
5 Edelleen näillä yhdistellä on suuri voimakkuus ja tehokkuus GR-kompkeksissa, jolla on tiukat rakennevaatimukset sellaista aktiivisuutta varten. Edullisten yhdisteiden, jotka ovat käyttökelpoisia esillä olevassa keksinnössä, IC50 on 2 μΜ tai pienempi [35S]TBPS-sitoutumismäärityksessä, joka on kuvattu alla.
10 Tämän määrityksen suorittamiseen tarvittavista menettelyistä on kirjoitettu täydellisesti: (1) Gee, et ai., 1987; ja (2) Ge, K.W., L.J. Lawrence ja H.I. Yamamura, "Modulation of the chloride ionophore by benzodiazepine receptor ligands: influence of gamma-aminobutyric acid and ligand efficacy", Molecular Pharmacology 30:218, 1986. Nämä menettelyt suoritettiin seuraavasti: 15
Urospuolisten Sprague-Dawley-rottien aivot poistettiin heti tappamisen jälkeen ja aivokuoret leikeltiin jään päällä. P2-homogenaatti valmistettiin kuten aikaisemmin on kuvattu (Gee, et ai., 1986). Lyhyesti aivokuoret homogenoitiin varovasti 0,32 M sakkaroosiin, mitä seurasi sentrifugointi 1000 x g:ssä 10 minuuttia. Supematantti kerättiin ja sentrifu-'··· 20 goitiin 9000 x g:ssä 20 minuuttia. Syntynyt P2-pelletti suspendoitiin 10 % (alkuperäinen M··
märkäpaino/tilavuus) suspensiona 50 mM Na/K-fosfaattipuskuriin (pH 7,4) 200 mM
* •t”i NaCl:ään homogenaatin muodostamiseksi.
* · • * · * · * · * ·
Sadan mikrolitran (/xl) osia P2-homogenaatista (0,5 milligrammaa (mg) proteiinia) inku- * · * *·' 25 boitiin 2 nanomolaarisen (nM) [35S]TBPS:n (70-110 curieta/millimooli; New England
Nuclear, Boston, MA) kanssa testattavien luonnollisesti esiintyvien steroidien tai niiden t » · • * * synteettisten johdannaisten läsnäollessa tai ilman niitä. Testatut yhdisteet liuotettiin i: : dimetyylisulfoksidiin (Baker Chem. Co. Phillipsbury, NJ) ja lisättiin inkubointiseokseen • * * » * · *·*.* 5 μ1:η osina. Inkubointiseokseen lisättiin puskuria 1 ml:n lopulliseen tilavuuteen. Epä- i"*: 30 spesifinen sitoutuminen määritettiin sitoutumisena 2 mM TBPS.n läsnäollessa. GABA:n • * • ♦ · L: *· (Sigma Chem. Co., St. Louis, MO) vaikutus ja spesifisyys arvioitiin suorittamalla kaikki * · · *· *: kokeet GABA:n ja (+)bikukulliinin (Sigma Chem. Co.) läsnäollessa. Inkuboinnit, joita . $ 118008 59 pidettiin 25 °C:ssa 90 minuuttia (valmiustilaolosuhteet), lopetettiin nopeasti suodattamalla lasikuitusuodattimien läpi (nro 32, Schleicher and Schuell, Keene, NH). Suodattuneen sitoutuneen radioaktiivisuuden määrä mitattiin nestetuikespektrofotometrisesti. Kineettiset tulokset ja yhdiste/[35S]TBPS-annos-vaste-käyrät analysoitiin epälineaarisella regres-5 siolla käyttämällä tietokoneistettua iteratiivista menetelmää, jolloin saatiin nopeusvakio ja IC50-arvot (yhdisteen konsentraatio, jossa perus-[35S]TBPS:n sitoutumisen puoli-maksimaalinen inhibointi tapahtuu).
Koetuloksia, jotka saatiin tätä mittausta varten, on julkaistu myös viitteessä Gee, et ai., 10 1987. Tässä viitejulkaisussa esitetyt arvot on esitetty diagrammeina kuvioissa IA ja IB.
Nämä diagrammit osoittavat (+)bikukulliinin vaikutuksen pregnaanisteroidi alfaksalonin (IA) ja GABA:n (IB) modulointiin 2 nM [35S]TBPS-sitoutumiseen rotan aivokuoreen.
Näissä kuvioissa (o) esittää kontrollia ilman bikukulliinia; (·) esittää 0,5 μΜ bikukul- liinin; (□) esittää 1,0 μΜ bikukulliinin: () esittää 2,0 μΜ bikukulliinin; ja (δ) esittää 15 3,0 μΜ bikukulliinin. Tässä kokeessa (+)bikukulliinin vaikutus alfaksalonin tai GABA:n kykyyn inhiboida [35S]TBPS:n sitoutumista on määritetty. Bikukulliinin tiedetään olevan kilpaileva GABA:n antagonisti ja klassinen sivuttaissiirto annos-vaste-käyrissä havaitaan kuviossa IB. Sitä vastoin steroidin sitoutumiskohta, joka on identifioitu tässä työssä, on erillään GABA/bikukulliini-kohdasta kuvassa IA. Siirtymä annos-vaste-käyrissä, jonka ::· 20 indusoi bikukulliini, kun [35S]TBPS:n sitoutumisen inhibitio saadaan aikaan alfaksalonil- « * · · ·*·., la, ei ole yhdensuuntainen. Tämä osoittaa, että GABA- ja steroidikohdat eivät mene pääl- « ·:**: lekkäin.
• « « · · • · * · » V:.; Toinen kokeiden sarja suoritettiin, jotta havainnollistettaisiin, että steroidi, barbituraatit • « · V * 25 ja bentsodiatsepiinit eivät jaa yhteistä sitoutumiskohtaa GABA-reseptorissa. Kuvio 2 esit tää [35S]TBPS:n dissosiaation rotan aivorungon P2-homogenateista ajan funktiona, jonka • t» dissosiaation saa alkuun 2 μΜ TBPS:n (), 1 μΜ 3a-hydroksi-5a-pregnan-20onin (□), * · · s * * *. 100 μΜ Na-pentobarbitaalin (·) ja 1 μΜ 3a-OH-5a-pregnan-20-onin + 100 μΜ Na- * · * * * · '•'t* pentobarbitaalin (o) lisääminen. Määritys suoritettiin edellä esitettyjen menettelyn ··.* 30 mukaisesti. Nämä kineettiset arvot osoittavat, että [35S]TBPS:n sitoutumisen dissosiaa- • · ’· tiota, jonka saa alkuun 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin kylläinen konsentraatio, voimis- • · t ·.: • * 118008 : 60 taa 100 μΜ Na-pentobarbitaali. Tämä vaikutus on osoitus siitä, että 3a-OH-5a-pregnan-20-oni (steroidi) ja pentobarbitaali (barbituraatti) sitoutuvat erillisiin kohtiin.
Kolmannella koesarjalla tutkittiin 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin (steroidi) ja pento-5 barbitaalin (barbituraatti) vuorovaikutuksia (3H)-flunitratsepaamin (FLU) sitoutumisen voimistamisessa. Nämä kokeet tukevat lisää väitettä, että steroidit eivät jaa yhteistä vai- >i kutuspaikkaa bentsodiatsepiinien ja barbituraattien kanssa. Näissä koesarjoissa 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onien erilaisten konsentraatioiden vaikutus (3H) FLU-sitoutumi-seen maksimaalisen stimuloivan Na-pentobarbitaalin pitoisuuden läsnäollessa tai ilman 10 sitä. Koska Na-barbitaalilla on suurempi maksimitehokkuus kuin 3a-hydroksi-5a-preg-nan-20-onilla (3H)-FLU-sitoutumisen tehostamisessa, 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin pitäisi lopulta antagonisoida Na-pentobarbitaalin vaikutusta, jos nämä kaksi vaikuttaisivat kilpailevasti samassa kohdassa. Tätä ei havaittu (kuvio 3). Siten tulokset tukevat lisää johtopäätöstämme, että tietyt steroidit, joihin kuuluvat keksinnön mukaiset ja keksinnössä 15 käytettävät yhdisteet, toimivat vuorovaikutuksessa uuden kohdan kanssa, joka on erillään barbituraatti- tai bentsodiatsepiini -säätelykohdasta GR-kompleksissa. Johtuen tästä itsenäisestä vaikutuspaikasta, on odotettavissa, että näillä steroidiyhdisteillä on erilaiset terapeuttiset profiilit kuin barbituraateilla tai bentsodiatsepiineillä.
’··· 20 Erilaisia yhdisteitä on seulottu, jotta määritettäisiin niiden mahdollisuus [35S]TBPS-sitou- * · · · ·**.. tumisen modulaattoreina in vitro. Nämä määritykset suoritettiin edellä selostettujen 1 ·:1" menettelyjen mukaisesti. Näihin määrityksiin perustuen olemme osoittaneet rakenne- • 1 • V aktiivisuus-vaatimukset näille spesifisille vuorovaikutuksille GR-kompleksissa ja niiden voimakkuus-ja tehokkuusarvojärjestyksen. Kuvio 4 esittää 3a-hydroksi-5a-pregnan-20- «·· *1 25 onin (£cc,5a-P), 3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onin (5a-THDOC) ja R5020:n (por- mogesteroni) [35S]TBPS-inibitiokäyrän kokeellisina esimerkkeinä, kun taas taulukko 1 • » · m · 1 esittää lukuisten yhdisteiden, mukaan lukien patenttivaatimusten kohteena olevien, IC50- • · · * 1 1 ja maksimi-inhibitioarvot. ICS0 määritellään yhdisteiden konsentraationa, joka inhiboi 50 * 1 1 • I « % kontrolli-[35S]TBPS-sitoutumisesta. Se on osoitus yhdisteiden in vitro -voimakkuudes- t**’: ’1.1 30 ta. Maksimi-inhibitio on osoitus yhdisteiden in vitro -tehokkuudesta.
• · * t · « · • · · 1 · ·»· » ·ι m 1 118008 61
Taulukko 1
Yhdiste 10¾) IMAX
___(nM) (%) 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20- 4 92 5 oni __ 3p-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni__5__93 3p-(4'-asetyylifenyyIi)etynyyli-3ahydroksi-5p-19-norpregnan-20- 6 90 oni______ 3p-(4'-karboksifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 7 79 10 etyyliesteri____ 3p-(4-karboksifenyyli)etynyyli-3oc-hydroksi-5p-pregnan-20-onin 8 98 etyyliesteri____ 3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-3oc-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__13 103 3p-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__14 103 15 3p-(4'-karboksifenyyli)etynyyU-3a-hydroksi-19-nor-5P-pregnan- 15 94 20-oni________ 3p-(4-asetoksibutyn-l-yyli)-3K-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__20__96 3p-(4’-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p-pregnan-20- 22 99 oni___ 20 3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-3a-hydroksi-5p-19-norpregnan-20-oni 22 102 “ 3p-(3'-metoksi-r-propynyyli)-3cc-hydroksi-5P-pregnan-20-oni 27 105 ·« -- "I··· • · : 3p-(4'-dimetyyliaminofenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni 28 77 ·>·» ^^ » • » . , 3p-[3-(2-propynyylioksi)propyn-l-yyli]-3adiydroksi-5p-pregnan- 28 105 t '.1 20-oni • ' · ---- ' 1 - ·. ------ t 1 · ·'1·’ 25 3P-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-3a-hydroksi-5cc-pregnan-20-oni 35 95 ΓΓ: 3a-hydroksi-5cc-pregnan-20-oni_ 37 95 3p-(4'-bifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 43 83 • » 1 " I I —-- * · 1 3a-hydroksi-3p-(4'-nitrofenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni 46 103 * - - .·1··. 3a-hvdroksi-21-(2H,1.2.3.4-tetrasol-2-vvli)-5B-Dre2nan-20-oni 46 78 f ··· i : • 1 · * • 1 • 1 « • · # • · · 1 • · 118008 62
YMUm IC50 IMAX
__faM) (%) 3ct-hydroksi-3p-(4'-metoksifenyyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni__£7__89_ 3p-(4'-trifluorimetyylifenyyli)etynyyli-3q-hydroksi-5P-pregnan-20- 52 87 oni_____ 5 3P-(5-asetyylitien-2-yyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni__52__89 21-(1 -bentsimidatsolyy li)-3 q-hydroksi-5 p-pregnan-20-oni__53 100 3P-(4-hydroksibutyn-r-yyli)-3a-hydroksi-(21-(l-imidatsolyyli)-5p- 54 93 pregnan-20-oni___ 3 oc-hydroksi-21 -(2H-1,2,3 -triatsol-2-yy li)-5P-pregnan-20-oni__56__79_ 10 3P-(4'-hydroksibutyn-r-yyli)-3a-hydroksi-21-(l,2,3-tnatsol-2-yy- 56 93 li)-5 P~ 19-norpregnan-20-oni___ 3P-(4,-kloorifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__58__89 3P-(5 ’-hydroksipentyn-1 '-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__58 100 3a-hydroksi-3p-(tien-2-yyli)-5p-pregnan-20-oni__59_ 100 15 3P-(3'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 62 100 3a-hydroksi-21-[lH-(4-metyyli-5-karboksyyli)imidatsol-l-yyli)]- 62 100 5P-pregnan-20-oni_ 3a-hydroksi-3p-[3'-(2H-l,2,3-triatsol-2-yyli)-l-propynyyli]-5p- 66 98 pregnan-20-oni_ ^1·1 2 20 3a-hydroksi-21 -(9H-1,2,3 -purin-9-yy 1 i)-5 p-pregnan-20-oni_ 69 59 • · : 3 3q-hydroksi-3P-[4'(R/S)~hydroksipentynyyli]-5p-pregnan-20-oni 71 103 ft ------- 1 * 1 ft 1 · ' .1 3q-hydroksi-21-(imidatsol-l-yyli)-5q-pregnan-20-oni 71 99 * 1 3q-hydroksi-21-(imidatsol-l-yyli)-5p-pregnan-20-oni 73 57 -—---- 3p-(4'-syanofenyyli)etynyyli-3q-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 73 92 δ · · ~~ 111 ............
25 3q,21-dihydroksi-5q-pregnan-20-oni (5q-THDOC)_ 76 100 : 3q-hydroksi-3P-(pentafluorifenyy 1 i)etynyyli-5p-pregnan-20-oni 79 69 3p-(4'-hydroksibutyn-r-yyli)-3q-hydroksi-21-(l,2,3-triatsol-l-yy- 79 96 li)-5P-pregnan-20-oni * · ft ^ - « · · *··, 3B-etvnvvli-3q-hvdroksi-21-(l '-imidatsolvvliV5p-p^^an-20-nrij__80_^_[03_
Ml * ft ft • 1 1 • ft · *·♦ · · 2 • ft · ft ft· 3 ft ·
Yhdiste ICso IMAX
__(nM) (%) 63 118008
Sa-hydroksi-Sp-P’^lH-pyratsoM-yylii-r-propynyyliJ-Sp-preg- 81 98 nan-20-oni_ 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(2H-l,2,3-triatsol-2-yyli)-5a-pregnan- 85 99 5 20-oni___ 3p-[4'-(N,N-dietyylikarboksamidofenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20- 87 94 oni__ 3a-hydroksi-3p-(4’.metyylifenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni 88 84 3 q-hydroksi-3P-(6-okso-1 -hepty nyy li)-5 p-pregnan-20-oni_ 90 101 10 3p-(4'-hydroksibutyn-r-yyli)-3q-hydroksi-21-(l,2,4-triatsol-l-yy- 93 96 li)-5 P-pregnan-20-oni_ 3p-(4-hydroksibutyn-l'-yyli)-3q-hydroksi-21-(tetratsol-l-yyli)-5p- 93 101 pregnan-20-oni_ 3q-hydroksi-3P-[4'(R/S)~hydroksipentynyyli]-5P-pregnan-20-oni 94 104 15 3p-(5'-asetoksipentyn-r-yyli)-3q-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__96 98 3 q-hydroksi-21 -(1H-3,5-dimetyy lipyratsolyyIi)-5 P-pregnan-20-oni 96 77 3q-hydroksi-21 -(1' -imidatsolyyli)-3P-metyyli-5q-pregnan-20-oni__97 95 3q-hydroksi-3P-(fenyylietynyyli)-5p-pregnan-20-oni_ 98 101 3P-(4'-hydroksibutyn-r-yyli)-3q-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)- 98 98 20 5p-pregnan-20-oni ·♦. 3q-hydroksi-21-(l'-pyratsolyyli-5q-pregnan-20-oni 100 98 • ·· -♦ 3 p-(2' -hydroksifenyyli)ety nyyli-3q-hydroksi-5 p-pregnan-20-oni__101 83 :1·1: 3q-hydroksi-3P-(3' -fenyyli-1 '-propynyyli)-5p-pregnan-20-oni__103 95 3p-etynyyH-3q-hydroksi-21-(r-pyratsolyyli)-5ppregnan-20-oni 106 99 m * 25 Natrium-S-[3q-hydroksi 3p-(4'-hydroksibutynyyli)-5p-pregnan-20- 107 97 on21-yyli]tiosulfaatti_ *,j,: 3q-hydroksi-3p-(2’-pyridyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni 108 98 • · · ϊ.ί 1 3p-(2,4-difluorifenyyli)etynyyli-3q-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__109 102 V 1 3B-bentsvvli-3q-hvdroksi-5B-nregnan-20-oni 109 102 *«« I· *·· • ...
• ♦ t 1 · • ♦ · ««· · · · » t1 • ♦ 118008 64
Yhdiste ICso IM AX
_ · _ (jM) {%) 21-(1'-bentsimidatsolyyli)-3a-hydroksi-3P-metyyli-5a-pregnan-20- 109 95 oni______ 3a-hydroksi-21 -(1' -pyratsolyyli)-3 p-metyy li-5«-pregnan-20-oni__115__98_ 5 3 cc-hydroksi-3 β-(5' -okso-1 -heksy nyy li)-5 P-pregnan-20-oni__118 101 3cc-hydroksi-21-(pyratsol-l-yyli)-5P-pregnan-20-oni__121__67 3p-(4’-hydroksibutyn-r-yyli)-3a-hydroksl-21-(l,2,3-triatsol-l-yy- 124 95 li)-5 p-19-norpregnan-20-oni___ 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(r,2',4'-triatsolyyli)-5a-pregnan-20- 125 105 10 oni___ 3P-etynyyli-3a-hydroksi-21-(l\2\4'-triatsolyyli)-5P-pregnan-20- 127 98 oni___ 3 p-(41 -syanobutynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__131__86
Natrium-S-[3a-hydroksi-3p-(metoksimetyyli)-5p-pregnan-20-on- 132 103 15 21-yyli]tiosulfaatti_____
Natrium-S-(3cc-hydroksi-5P-pregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti__133__90 3cc-hydroksi-3p-(2'-fenyylietyyli)-5p-pregnan-20-oni__135__98 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(l' ,2' ,3'-triatsol~r-yyli)-5a-pregnan- 136 99 20-oni_ _ ,. 20 3a-hydroksi-3p-[3'-hydroksipropynyyli]-5p-pregnan-20-oni 137 93 « 3a-hydroksi-3p-(3-pyridyyli)etynyyli-5p-pregnan-20-oni 138 100 ,...: 3a-hydroksi-3p-[3l(R/S)-hydroksibutynyyli]-5a-pregnan-20-oni 144 99 j‘*‘: 3«-hydroksi-3P-(4-pyridyyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni__149 103 3a-hydroksi-2l-(l' ,2' ,4'-triatsol-l-yyli)-5P-pregnan-20-oni_ 151 60 • i· * 25 Natrium-S-(3a-hydroksi-3 p-metyy li-5a-pregnan-20-on~21-yyli)tio- 151 101 sulfaatti *.·.* 3p-(5,-syanopentynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni_ 158 100 *.! 1 3P-(4'-asetoksiasetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- 171 91 oni t ,*·*. 30 3a-hydroksi-3p-fenyylipropyyli-5P-pregnan-20-oni 173 92 : *·. 3a-hydroksi-3p-[4'(R/S)-hydroksipentynyyli]-5a-pregnan-20-oni 178 101 ♦ · · ------- '* ------------ »*. : 3«-hvdroksi-3B-r37R/S')-hvdroksihutvnvvli1-5B-pregnan-20-oni 202 102 • ·
Yhdiste IC50 IMAX
__(nM) {%) 65 118008 3P-(6-hydroksiheksyn-l-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__222 99 3a-hydroksi-21-[lH-(2-metyyli)imidatsol-l-yyli)-5p-pregnan-2Q- 222 95 oni____ 5 3p-(3'-asetoksipropyn-r-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 224 104 3a-hydroksi-2 l-H-( 1 Ή-1,2,3,4-tetratsol-1' -yyli)-5 p-pregnan-20- 227 60 oni___ 3 a-hydroksi-21 -(2-formyy li-imidatsol-1 -yyli)-5 Ppregnan-20-oni 213 81 3a-hydroksi-3p-(2,-metoksifenyyIi)etynyyli-5p-pregnan-20-oni__238 99 10 3 p-(4' -hydroksi-1' -butynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-11,20-dioni 268 102 3p-[3',4'-dimetoksifenyyli)etynyyli]-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- 283 106 oni___ 3 a-hydroksi-21 - [ 1 H-(4-nitro)imidatsol-1 -yy li)] -5 p-pregnan-20-oni__267 71
Natrium-S-(3a-hydroksi-5P-pregnan-20-on-21-yyli)tiosulfaatti 268 88 15 3 p-(6 ’ -asetoksiheksyn-1' -yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 306 99
Natrium-S-(3a-hydroksi-3p-trifluorimetyyli-5p-19-norpregnan-20- 325 98 on-21-yyli)tiosulfaatti 3a-hydroksi-3P-fenyyli-5P-pregnan-20-oni_„ 382 86 3p-(3'-hydroksifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni 407 99 ··* ··' 20 3a-hydroksi-3P-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triastol-2-yy- 430 107 ! *·· li)-5p-pregnan-20-oni « ^ *i,,: 3 a-hydroksi-21-(71 H-pyrin-7' -yy 1 i)-5P-pregnan-20-oni 430 71 « · w t * l ; · 3a-hydroksi-21(l’-urasiili)-5a-pregnan-20-oni 434 90 x ϊ*ί ; '.y.' 3a-hydroksi-3p-[3'-(pyrid-4-yyIioksi)-r-propynyyli]-5p-pregnan- 465 94 * 25 20-oni 3p-[2-(3',4'-dimetoksifenyyli)etyyli]-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- 507 66 oni *·* ’ 3a-hydroksi-3p-(3'-hydroksifenyyli)etynyyIi-5p-pregnan-20-oni 619 98 V ; 3a-hydroksi-3p-[3'-(lH-l,2,3-triatsol-l-yyli)-r-propynyyli]-5p- 655 102 »’**· 30 nreenan-20-oni
·«· : ' r r/ι -I
• t * » « 9 · · 1*4 · « · « * · * ·· • * 118008 66
Yhdiste ICso MAX
|__;__(ΠΜ) (%) 3a-hydroksi-3p-[3'-(lH-l,2,4-triatsol-l-yyli)-r-propynyyli]-5p- 843 99 pregnan-20-oni__ 3a-hydroksi-3p-(3-hydroksipropyn-l-yyli)-21-(l,2,3-triatsol-l-yy- 1089 101 5 li)-5p-pregnan-20-oni__ 3p-[3’-(N,N-dimetyyliamino)-rpropynyyli]-3a-hydroksi-5p-preg- 1420 100 nan-20-oni__ 3p-(4'-asetoksifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni__1430 100 3p-(4-hydroksifenyyIi)etynyyli-3cc-hydroksi-5p-pregnan-2Q-oni 1550 88 10 3a-hydroksi-2p-morfolinyyli-21-(lH-l,2,4-tnatsol-l-yyli)-5a- 1553 97 pregnan-20-oni___ 3 q-hydroksi-3 p-(3' -oksopropynyy li)-5 p-pregnan-20-oni__1720 76 3p-(4'-karboksamidobutynyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan- 2240 98 20-oni__ 15 3p-(4,-karboksamidobutynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni__2340 102 3oc-hydroksi-3p-(3'-oksobutynyyli)-5p-pregnan-20-oni_ 2690 107 3a-hydroksi-3P-[3'-(N-imidatsolyyli)-r-propynyyli]-5p-pregnan- 2720 107 20-oni_I__ 3 p-(5' -karboksamidopentynyy 1 i)-3 a-hydroksi-5 P-pregnan-20-oni 3090 102 .. 20 Progesteroni 5200 100 «·*’ 3a-hydroksi-3P-[3'-oksobutynyyli]-5a-pregnan-20-oni 6510 104 p ft * ^ n 3p-(4'-aminofenyyli)etynyyli-3p-hydroksi-5p-pregnan-20-oni_ 22500 103 j1·*! 3p-hydroksi-5a-pregnan-20-oni (Allopregnanoloni)_ > 106 33 4-pregnen-llp,21-diol-3,20-dioni (Kortikosteroni) > 106 30 M* : 25 np-estradioli_ eaa 0,00
Kolesteroli ea 0,00
» * f 1 — I
• · * *« * a i a • · * '·' ' aea = ei aktiivinen * ·*· ^ » I « « ♦ i : ··* * • * • » » • * · ·«· · « · I 1 · * ·· • · , 67 118008
Kuten voidaan nähdä kuviosta 4 ja taulukosta 1, 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onilla, 3a,21-dihydroksi-5a-pregnan-20-onilla ja keksinnön mukaisilla ja keksinnössä käytetyillä yhdisteillä on pieni ICso, joka on se konsentraatio, joka on tarpeellinen 50 % maksimaalisen [35S]TBPS:n sitoutumisen ihhibition saavuttamiseksi, kun taas yhdisteet kuten 5 sukupuolisteroidit (R5020, estradioli ja progesteroni), glukokortikoidit (kortikosteroni) ja kolesteroli, joilla on suuri ICjo, ovat oleellisesti inaktiivisia. Siten on odotettavissa, että hormonaalisilla steroideilla ja kolesterolilla sinänsä ei ole mitään terapeuttista arvoa tässä kuvattuihin indikaatioihin. Jotta erotetaan tämä steroidien ainutlaatuinen luokka hormonaalisista steroideista, ne nimetään nyt neuroaktiivisiksi steroideiksi. Kuitenkin 10 sukupuolisteroidit kuten progesteroni, voivat metaboloitua kehossa steroideksi, jotka ovat samantapaisia kuin 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-oni. Siten progesteronin voidaan katsoa olevan esilääke. TBPS-arvot vastaavat 36Cl-ionin oton voimistumisen arvoja erilaisilla 3a-hydroksyloituneilla steroideilla, jotka on kuvattu viitteessä Purdy R.H., et ai., "Synthesis, Metabolism and Pharmacological Activity of 3a-Hydroxy Steroids Which Poten-15 tiate GABA-receptor-Mediated Chloride Ion Uptake in Rat Cerbral Cortical Synap- toneurosomes", J. Med. Chem. 33:1572-1581 (1990), joka sisällytetään tähän viitteenä ja nämä tulokset korreloivat sähköfysiologisten arvojen kanssa, jotka on saatu mittaamalla steroidien aktiivisuutta voimistaa GABA-indusoitua virtaa varhaismunasoluissa, joihin on ruiskutettu ihmisen GABA-reseptoreja, kuten kuviossa 5 on esitetty. Tämä osoittaa, että ··»* 20 TBPS-määritys on arvioiva mitta steroidien kyvystä allosteerisesti moduloida Cl'-kanavan ·;··: aktiivisuutta.
• · · ···' • · · :.:V Yhdisteet, joilla on rajoitettu tehokkuus ♦ · · .
• · · • * « • ;···,' 25 Vaikka haluttu terapeuttinen aktiivisuus pitäisi olla saatavilla potilaalle vähimmillä ei- • · : halutuilla sivuvaikutuksilla, tämän keksinnön merkillepantavaan näkökulmaan kuuluu • · • « *!* sellaisten agonistien keksiminen, joilla on osittaista aktiivisuutta niissä yhdisteissä 5a- *· · • * ♦ : ·* pregnan-3a,20a-diolin, 5p-pregnan-3a,20P-dioliryhmien kansa tai näiden yhdisteiden * ♦ **;·’ johdannaisten tai esilääkkeiden kanssa. Lisäksi muut kuin näiden kahden ryhmän neuro- ί « 30 aktiivisten steroidien osajoukko osoittavat myös osittaista tehokkuutta TBPS-analyysissä ·*· *···* (taulukko 1). Potilaille, jotka haluavat ahdistuneisuuden tai kouristuksen parantumista, hypnoosi ei ole haluttua. Potilaille, jotka haluavat unettomuuden parantumista, anestesia 68 1 1 8008 ei ole haluttua. Yhdisteillä ja aktiivisuuksila, jotka on kuvattu agonisteina, joilla on osittainen aktiivisuus, odotettiin olevan haluttu teho minimihaittavaikutusten kanssa.
! ...
Rajoitetun tehokkuuden agonistien osoittamiseksi on havainnollistettu 5a-pregnan-5 3a,20a-diolin ja 5p-pregnan-3a,20a-diolin kyky osittain moduloida [35S]TBPS-sitoutu-mista jopa hyvin suurissa pitoisuuksissa (kuvio 6).
Lisäksi näiden yhdisteiden osittainen kykyä voimistaa GABA-välitteistä Cl'-virran suurenemista verrattiin 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin kykyyn (kuvio 7) Xenophus-var-10 haismunasoluissa, joihin injektoitiin ihmisen GABAA-reseptorigeenejä, on esitetty myös.
Kun Xenopus oosyytti -ilmentymissysteemiä käytettiin testaamaan joidenkin neuroaktii- visten steroidien rajatehokkuusominaisuuksia, seuraava menettely suoritettiin. Xenopus laevis -varhaismunasoluihin (vaihe VI), joita oli "defollikuloitu" käyttämällä kolla- 15 genaasipilkkomismenetelmää (3 tuntia 18-23 °C:ssa, 2 mg ml"1 kollagenaasi "A":ta Bart- hin suolaliuoksessa, josta Ca2+-suolat oli jätetty pois) ruiskutettiin ihmisen GABAA-re- septorin alayksikön kompleksia αΐβΐ ja γ cRNA-transkriptejä. Pää-GABAA-reseptori- kompleksi koostuu αβγ-alayksiköistä. Injektoituja varhaismunasoluja pidettiin yksittäin .·. 96-kaivoisessa levyssä (200 μΐ kaivoa kohti normaalia Bardiin liuosta täydennettynä • »· · 20 penisilliinillä 50IU ml"1, streptomysiinillä 50 mg/ml ja gentomysiiniä mg/ml) 9 päivää f • ♦:··· 19-20 °C:ssa. Agonisti-indusoidut virrat tallennettiin Xenopus-varhaismunasoluista jän- :*·*: nitekiinnitettynä pitojännitteessä-60 mV, käyttämällä Axoclamp 2 A (Axon Instruments) * m t'·,: jännitepitoamplifikaattoria kaksoiselektrodi-jännitepitomoodissa. Jännitteen tunnistavat ja • « « · virtaa läpi päästävät mikroelektrodit, jotka täytettiin 3M KCl:llä, ja 1-3 M Ohmien vas- 25 tukset, kun mitattiin standardissa solunulkoisessa suolaliuoksessa. Varhaismunasoluja *·
alijäähdytettiin jatkuvasti "frog"-Ringerliuoksella (120 mM NaCl; 2 mM KC1; 1,0 mM
*”* CaCl2; 5 mM HEPES pH 7,4) nopeudella 5-7 ml/min huoneenlämpötilassa (17-21 °C).
·* « . < • · * • ♦ • · ··· • · *"** Kaikki lääkkeet levitettiin perfuusiosysteemin kautta. Steroidit (10"2 M) valmistettiin vä- * : 30 kevöitynä varastoliuoksina joko DMSO:hon tai etanoliin ja sitten laimennettiin Ringerin ··· • · *···* liuoksella sopivissa pitoisuuksissa. Lopullinen DMSO- ja etanolipitoisuus oli 0,2 % v/v, pitoisuus, jolla ei ollut mitään vaikutusta GABA-herättämään vasteeseen. Kaikkien mui- 118008 ' 69 den lääkkeiden varastoliuokset tehtiin Ringerin liuokseen. Solukalvovirtavasteet alipääs-tösuodatettiin 100 Hz:ssä ja talletettiin magneettinauhalle käyttämällä FM-kelanauhuria (Racal Store 4DS) seuraavina oleviin analyyseihin.
5 Keksinnön mukaiset ja keksinnössä käytetyt yhdisteet osoittavat osittaista tehokkuutta, joka on analoginen niille, jotka on kuvattu edellä ja myös esitetty yllä olevissa taulukoissa.
Edut progesteroniin nähden 10
Korrelaatio progesteronin alentuneiden arvojen ja PMS:aän, PND:hen ja kuukautisiin liittyvään epilepsiaan liittyvien opireiden välillä (Backström, et ai., 1983; Dalton, K., 1984) johti progesteronin käyttöön niiden hoitamiseksi (Mattson, et ai., 1984; ja Dalton, 1984). Progesteroni ei kuitenkaan ole johdonmukaisn tehokas edellä mainittujen oireyh-15 tyrnien hoidossa. Esimerkiksi progesteronilla ei esiinny annos-vaste-suhdetta PMS:n hoidossa (Maddocks, et ai., 1987). Nämä tulokset ovat ennustettavissa, kun tarkastellaan in vitro -tutkimuksiemme tulosten valossa, jotka tulokset osoittavat, että progesteronilla on hyvin pieni voimakkuus GR-kompleksissa, kuten nähdään taulukosta 1, verrattuna progesteronin tiettyihin metaboliitteihin.
• · · * :·. 20 « ··
Progesteronin hyödyllinen teho liittyy luultavasti progesteronin vaihtelevaan muuttumi-seen aktiivisiksi progesteronimetaboliiteiksi. Spesifisten progesteronimetaboliittien käyttö • · i edellä mainittujen oireyhtymien hoitamisessa on selvästi parempi verrattuna progestero- · · : nin käyttöön perustuen metaboliittien ja niiden johdanaisten suureen voimakkuuteen ja 25 tehokkuuteen (katso Gee, et alM 1987, ja taulukko 1).
* -• * · i * * ·*· • * *
| ♦ J
‘ Ei hormonaalisia sivuvaikutuksia * · · • · · • * · * · · Λ * ···’ On myös osoitettu, että neuroaktiivisilla sterodeilla ei ole hormonaalisia sivuvaikutuksia, • · · 30 koska niillä ei ole affiniteettia progesteronin ja muille hormonaalisten steroidien resepto-• * reille (taulukko 2-5). Arvot, jotka on esitetty, saatiin suorittamalla määritys edellä mainitussa viitteessä Gee, et ai., 1988 esitettyjen menetelmien mukaisesti, jotta määritettiin 118008 : 70 progesteronimetaboliittien ja niiden johdannaisten ja progestiini R5020:n teho [3H]R5020:n sitoutumiseen progesteronireseptoriin rotan kohdussa (Gee et ai. 1988).
3H-progesteronia (0,15 nM) inkuboitiin rotan kohdun soluliman kanssa koeyhdisteiden 5 läsnäollessa. Spesifinen sitoutuminen määritettiin inkuboinnin jälkeen ja verrattiin kont-rolli-inkubointiin ilman yhdisteitä. Tulokset on ilmaistu sitoutumisen inhiboitumisen pro-senttiosuutena. Jos yhdisteet sitoutuvat progesteronireseptoriin, jolla on suuri affiniteetti, 100 % sitoutumisen inhiboituminen olisi odotettavissa testatuissa pitoisuuksissa.
10 Edustavien neuroaktiivisten steroidien lukuisia hormonaalisia aktiivisuuksia tutkittiin lisää testaamalla niiden mahdollisia estrogeenisiä, mineralokortikoidisia ja glukokorti-koidisia aktiivisuuksia. Nämä aktiivisuudet anaylysoitiin monitoroimalla yhdisteiden kykyä inhiboida steroidihormonien sitoutumista niiden vastaaviin hormonireseptoreihin. Tulokset on esitetty taulukoissa 3-5. Ne on ilmaistu 3H-ligandin erilaisiin steroidihor-15 monireseptoreihin sitoutumisen inhiboitumisen prosenttiosuutena yhdisteillä 106 Missä. Kontrolliarvot on esitetty sitoutumisesta ilman koeyhdisteiden läsnäoloa.
Taulukossa 3 rotat adrenalektomisoitiin 3 päivää ennen tappamista. Mineralokortikoidi- reseptorin eristämiseksi aivojen solulimafraktiot valmistettiin kuten on kuvattu viitteessä » · · 1 j·. ^ 20 Gee, et ai. 1988. Lääkkeitä inkuboitiin 3 nMissä 3H-aldosteronia (spesifinen ligandi min- » ·:··· ralokortikoidireseptorille) selektiivisen tyypin II agonistin RU28362 (0,5 μΜ) läsnäolles- sa, joka agonisti estää 3H-aldosteronin sitoutumisen tyypin II (glukokortikoidi) -resepto- » 1· 1· reihin.
• 1 1 »at * 1 1 • 1 ·
J
• I · · V · 1 • 1 · • · · f · · I · 1 • · · ··· • 1 · ♦ • a · i : • 1 · * · • 1 · ···1 «t1 II1 • f . 71 118008
Taulukko 2.3H-progestoronin sitoutumisen inhibointi naudan kohdun progeste-ronireseptoreihin
Kilpailija (10^M)__Inhibitio-%_ 5 R5020__100_ 5 a-pregnan-3 q-ol-20-oni__ 14_ 5 q-pregnan-3 a, 21 -diol-20-oni_ 13 5 a-pregnan-3 a, 21 -dioli__6_ 5 a-pregnan-3 a-ol-3 a-metyy li-20-oni 4 10 5 p-pregnan-3 a ,21 -diol-20-oni_ 6 5a-pregnan-3 p ,20-trimetyyli-3a,20-dioli__8__ 5p-pregnan-3a.20a-dioli_ 0 5p-pregnan-3a-ol-20-oni_ ___9 _.
5 a-pregnan-20-dimetyy li-3 a, 20-dioli 0 _ 15 -
Taulukko 3.3H-aldosteronin aivoturson mineralokortikoidireseptoreihin sitoutumisen inhibointi • · «*» * » • ** 20 Kilpailija (lO^M)_ ;__Inhibitio-% _
Aldosteroni 95,5 * · *. 5a-pregnan-3a,21-diol-20-oni 76,7 S · * ™ ' ' 5 p-pregnan-3a, 21 -diol-20-oni 13,8 • # · " ^— .........
5a-pregnan-3a,ol-20-oni__0I0_ ·:*: 25 5p-pregnan-3a,ol-2Q-oni__0^0___ *.·* · 5a-pregnan-3a,20-dioli__M_ 5p-pregnan-3a,20-dioli___0^0_______ 5a-pregnan-3a, 20-diol-20-dimetyy li__(X0_ 5a-pregnan-3a,ol-3p-metyyli-20-oni _3^2_ *·.·: 30 5q-pregnan-3p,20-trimetyyli-3aT20-dioli 0,0 118008 72
Taulukkoa 4 varten valmistettiin aivojen solulimafraktiot kuten taulukkoon 3, ja yhdisteitä inkuboitiin 3 nM 3H-deksametasonin kanssa (spesifinen ligandi glukokortikoidi-reseptorille).
5 Taulukko 4.3H-deksametasonin glukokortikoidireseptoreihin sitoutumisen inhiboiminen __Kilpailija (lO^M)__Inhibitio-%
Deksametasoni__100_ 10 5«-pregnan-3q,21-diol-20-oni__29,5 5 p-pregnan-3a ,21 -diol-20-oni__8^2_ 5a-pregnan-3a-ol-20-oni___8J_' 5 P-pregnan-3q-ol-20-oni__5J^9_ 5K-pregnan-3a,20a-dioli__ ^6_ 15 5p-pregnan-3q,20a-dioli__M-_ 5q-pregnan-20-dimetyyli-3q,20-dioli__2^6_ 5 q-pregnan-3 a, ol-3 β-metyy li-20-oni__0I6_ • · M* * · 1 *.· * . 20 Taulukko 5 esittää 3H-estradiolin (spesifinen ligandi estrogeenireseptorille) naudan koh- * · . , dun solulimaan sitoutumisen inhiboinnin, valmistettu kuten aikaisemmin on kuvattu • · · .
* · 1' (Gee, et ai., 1988). 3H-estradiolia (0,15 nM) ikuboitiin soluliman kanssa yhdisteiden t · · ·*· läsnäollessa.
* « * * . V»··» ··’ *· · • • · * *♦· « · · ¥ · · • · * • · * • · · • · * · - • ·· t : ♦ · 1* * * • * · ··*' ··*♦·· .·. : ! • *· « ♦ 118008 73
Taulukko 5.3H-estradiolin sitoutumisen naudan kohdun estrogeenireseptoreihin inhiboiminen
Kilpailija (10~*M) Inhibitio-%_ 5 17p-estradioli____100_ 5a-pregnan-3a-ol-20-oni___0.00_ 5a-pregnan-3a,21-diol-20-oni__2_ 5a-pregnan-3«,20a-dioli__0,00_ 5a-pregnan-3oc-ol-3-metyyli-20-oni__0,00_ 10 5p-pregnan-3q,21-diol-20-oni__0,00_ 5q-pregnan-3β,20-trimetyy 1 i-3a,21 -dioli___0,00_- 5p-pregnan-3q,20q-dioli 8 5 p-pregnan-3a-ol-20-oni__0,00_ 5 q-pregnan-20-dimetyy li-3 q, 2Qq-dioli_0,00_ 15 ' Näiden kokeiden tulokset osoittavat selvästi, että neuroaktiivisilla steroidella ei ole suurta affiniteettiä mihinkään edellä olevista steroidien reseptoreista. Siten nillä ei ole ennustettuja hormonaalisia sivuvaikutuksia, joita aiheutuisi sellaisesta steroidireseptorisitoutu- • · misesta.
! *- 20 « * * · · ·
Kouristuksen vastainen aktiivisuus • · -» · · * · • · * : : V.*, Kokeita suoritettiin myös, jotta määritettiin neuroaktiivisen steroidin ja GABA-reseptorin * · » vuorovaikutuksen fysiologinen relevanssi määrittämällä keksinnön mukaisten ja keksin- . ,·, 25 nössä käytettyjen yhdisteiden kyky estää metratsoli-indusoituja kouristuksia hiirissä. Hii- • · » • · » j·:*. riin ruiskutettiin erilaisia annoksia keksinnön mukaisia yhdisteitä, 10 ennen metratsolin « 4.;.4 ruiskutusta. Lihasnykimisen (etukäpälän nykimisaktiivisuuden läsnäollessa), jonka in- • ♦ ♦ « ,···, dusoi metratsoli, alkamisaika määritettiin tarkkailemalla kutakin hiirtä 30 minuutin ajan.
I « • · * . *. Kontrollihiirillä metratsoli (85 mg/kg) indusoi kouristuksia 95 %:ssa eläimistä. Keksin- • · · • · · ; 30 nön mukaisten ja keksinnössä käytettyjen yhdisteiden kyky suojata hiiriä kouristuksilta ♦ ♦· on esitetty taulukossa 6.
118008 74
Taulukko 6: Neuroaktiivisten steroidien metratsolin vastainen aktiivisuus hiirissä
Nimi Reitti Vehik- Annos % keli (mg/kg) suojattu 3p-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3cc-hydroksi-5a-pregnan-20- IP 50 % 10 75 5 oni__ hpbcd___ 3P-(4'-asetyylifenyyIi)etynyyli-3a-hydroksi-19-nor-5P- IP 50 % 10 100 pregnan-20-oni___hpbcd___ 3ö-(4'-karboksifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan- IP 50 % 10 18,75 20-onin etyyliesteri___hpbcd___ 10 3P-(4'-hydroksibutyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 100 oni___hpbcd___ 3P-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 75 oni___hpbcd___ 3p-(4’-asetoksibutyn-l'-yyli)'3a-hydroksi-5P-pregnan-20- IP 50 % 10 100 15 oni_ hpbcd___ 3a-hydroksi-3p-(3’-metoksi-r-propynyyli)-5P-pregnan-20- IP 50 % 10 75 oni hpbcd 3p-(4’-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a- IP 50 % 1 87,5 pregnan-20-oni___hpbcd___ 20 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p- IP 50 % 10 75 pregnan-20-oni_ hpbcd__- 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi'5a- PO vesi 10 80 pregnam20-onin 21-hemisukkinaattisuola_____ 3P-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p- PO vesi 10 75 25 pregnan-20-onm 21-hemisulckinaattisuola_ _ 3p-(4'-hydroksi-r-butynyyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan- IP 50 % 10 50 *j1 11,20-dioni hpbcd ··1· — ” J1·., 3P-f3-(2-propynyylioksi)propyn-l-yyli]-3a-hydroksi-5P- IP 50% 10 50 • ^ pregnan-20-oni___hpbcd___ 30 3p-(4'-hydroksibutyn-r-yyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20- IP 50 % 10 50 oni hpbcd , .1· 3a-hydroksi-3p-(5’-okso-l-heksynyyli)-5P-pregnan-20-onin IP 50 % 10 50 .1.1 syklinen 5'-(1.2-etaanidivvliasetaaln hnbcd • 1 1 I1 · • 1 ·♦· • · ♦ • · « » v · • · · * # « 1 • · 1 • · · « • · 1 i : • · 1 * # • » 1 ··2 · • f 1 2 • 1 · 118008 75
Nimi Reitti Vehik- Annos % keli (mg/kg) suojattu '"" ^-J.
3P-(4'-bifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20-oni__IP__dmso__U)__0,00 3P-(5-asetyylitien-2-yyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan- IP 50 % 10 25 20-oni_ hpbcd___ 5 3p-(4’-trifluorimetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p- IP dmso 10 25 pregnan-20-oni_____ 3p-(4’-kloorifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP dmso 10 37,5 oni_______ 3P-(5'-liydroksipentyn-l'-yyli)-3a-hvdroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 12,5 10 oni_‘___hpbcd___ 3a-hydroksi-3P-(tien-2-yyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni IP 50 % 10 37,5 ___hpbcd___ 3p-(3'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 75 oni___hpbcd___ 3a-hydroksi-3P-[4'(R/S)-hydroksipentynyyli]-5p-pregnan- IP 50% 10 87,5 15 20-oni___hpbcd___ 3p-(4-syanofenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5P-pregnan-20- IP 50 % 10 43,7 oni hpbcd _ 3p-(4' -hydroksibutyn-1' -yy li)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP vesi 10 87,5 onin 4'-nemisukkinaatin Na-suola_____ 20 3a-hydroksi-3p-[3'-lH-pyratsol-l-yyli)-r-propynyyli]-5P- IP 50 % 10 25 pregnan-20-oni_ hpbcd__ 3a-hydroksi-3p-(4'-metyylifenyyli)etynyyli-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 75 oni___hpbcd___ 3a-hydroksi-3P-(6-okso-l-heptynyyli)-5P-pregnan-20-oni IP 50 % 10 62,5 hpbcd • · 11111 — — I·· »··· 25 3p-(5’-asetoksipentyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 12,5 oni hpbcd I ·· — ' H·.·—— I - < - -.--.-1. - ....I 3a-hydroksi-3p-(2'-pyridyylietynyyli)-5p-pregnan-20-oni IP 50 % 10 37,5 * * hpbcd t .* 3a-hydroksi-3P-(5’-okso-l-heksynyyli)-5P-pregnan-20-oni IP 50 % 10 25 . .·,___hpbcd___ ···. 3P-(4'-syano-l’-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni IP 50 % 10 12,5 • ^ · hpbcd 30 3a-hydroksi-3p-(3’-hydroksipropynyyli)-5p-pregnan-20-oni IP 50 % 10 25 . hpbcd . . ------ \\\ 3a-hydroksi-3p-[3'(RS)-hydroksibutynyyli|-5cc-pregnan-20- IP 50 % 10 50 < ; : oni _ hpbcd 3a-hydroksi-3p-f4'-(R/S)-hydroksipemynyyli]-5p-pregnan- IP vesi 10 50 ·,· * 20-onin 4'(R/S)-nemisukkinaatin natriumsuola_ * * * 35 3P-(5'-syanopentynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni IP 50 % 10 25 - hpbcd * * ' 1 -.-Il - - * * · ··· · 3a-hydroksi-3P-[4'(R/S)-hydroksipentynyyli]-5a-pregnan- IP 50 % 10 25 .·. : 20-oni__ hpbcd __ « · : 118008 76
Nimi Reitti Vehik- Annos % keli__(mg/kg) suojattu 3a-hydroksi-3[M3'(RS)-hydroksibutynyyli]-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 25 onin 5'-hemisukkinaatin Na-suola_"___hpbcd___ 2P-(5'-hydroksipentyn-l’-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 37,5 5 oni___hpbcd___ 3P-(3'-asetoksipropyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20- IP 50 % 10 12,5 oni hpbcd _ 3a-hvdroksi-3p-(2'-metoksifenyyii)etynyyli-5P-pregnan-20- IP dmso 10 12,5 oni_____ 10 3P-(6'-asetoksiheksyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 37,5 oni_ hpbcd___ 3a-hydroksi-3p-[3'-(pyrid-4-yylioksi)-l'-propynyylil-5P- IP 50 % 10 12,5 prcgiian-20-om hpbcd___ 3p-[2-(3’ 4'-dimetoksifenyyli)etyyli]-3a-hydroksi-5p- IP 50 % 10 12,5 15 Il pregnan-20-oni__| hpbcd __ 3P-(3'-hydroksi-3’-metyylibutyn-r-yyli)-3a-hydroksi-5P- IP 50 % 10 43,7 pregnan-20-oni_ hpbcd____ 3P-hydroksi-3P-[3’-(lH-l,2,3-triatsol-l-yyli)-r-propynyy- IP 50 % 10 25 li|-5|3-pregnan-20-oni___hpbcd___ 20 3a-hydroksb3p-[3'-(lH-l,2,4-triatsol-l-yyli)-r'propynyy- IP 50% 10 10 li]-5p-pregnan-20-oni_ hpbcd _
Natrium-S-(3a-hydroksi-5p-pregnan-20-on-21-yy- IP vesi 10 37,5 lijtiosulfaatti_____ „ _ Natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metyyli-5a-pregnan-20-on-21- IP vesi 10 62,5 25 yyli)tiosulfaatti_____
Natrium-S-[3a-hydroksi-3P-(4'-hydroksibutynyyli)-5P- PO vesi 40 33,3 pregnan-20-on-2l-yyli]tiosulfaatti • ... ... - 1 — .........
• * * * ··. Natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metoksimetyyli-5a-pregnan- IP vesi 10 62,5 * ** 20-on-21 -vylptiosulfaatti___ ****: 30 Natrium-S-(3o-hydroksi-3P-trifluorimetyyli-19-nor-5p- IP vesi 40 37,5 . . pregnan-20-on-2l-yyli)tiosulfaatti . 3a-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)-5p-pregnan-20-onin IP 50 % 10 50 I : : hemisukkinaattin natriumsuofa hpbcd III 3a-hydroksi-21-(2’H-l,2,3,4-tetratsol-2'-yyli)-5p-pregnan- IP 50 % 10 37,5 * 35 20-oni___hpbcd___ . 3a-hydroksi-21-(2H-l,2,3-triatsol-2-yyli)-5p-pregnan-20- IP 50 % 10 100 I * 1 oni hpbcd ··* “ "“,M" ' ' ' ;*·*: 3a-hydroksi-21-[lH-(4-metyyli-5-karboksyyli)imidatsol-l- IP 50 % 10 37,5 •m yyli)-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri___hpbcd__ ·,· * 40 21-[l'-(4 5-dikloori)tmidatsolyyli]-3a-hydroksi-5(J- IP 50 % 10 37,5 .., pregnan-20-oni hpbcd i : —“----- "* 3a-hydroksi-21-(r-jmidatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni IP 50 % 10 50 : " hpbcd • * · “ - ' : 3a-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)-5P-pregnan-20-oni IP 50 % 10 12,5 ·, ·; ___ hpbcd ____ 1 1 8008 77
Nimi Reitti Vehik- Annos % ______keli___(mg/kg) suojattu 3B-etynyyli-3a-hydroksi-21-(l’-imidatsolyyli)-5p-pregnan- IP 50 % 10 50 20-oni___hpbcd___ 3a-hydroksi-21-(lH-3,5-dimetyylipyratsolyyli)-5p-preanan- IP 50 % 10 50 5 20-oni___hpbcd___ 3a-hydroksi-21 -(1' -imidatsolyyli)-3P-metyy]i-5a-pregnan- IP 50 % 10 75 20-oni_ hpbcd___ 3B-etynyyli-3a-hydroksi-21 -(1' -pyratsolyyli)-5P-pregnan- IP 50 % 10 62,5 20- oni____hpbcd _ 10 3a-hydroksi-21-(l-pyratsolyyli)-3p-metyyli-5a-pregnan-20- IP 50 % 10 87,5 oni hpbcd _ 3a-hvdroksi-21-(pyratsol-l-yyli)-5(}-pregnan-20-oni IP 50 % 10 62,5 '___hpbcd___ 3a-hydroksi-3P-metyyli-21-(r,2',4'-triatsolyyli)-5a- IP 50 % 10 87,5 pregnan-20-oni _____hpbcd___ 15 3a-hydroksi-21-(r,2',4,-triatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni IP 50 % 10 37,5 ___hpbcd___ 21- [l'-(4,5-disyano)imidatsolyyli]-3a-hydroksi-5P-pregnan- IP 50 % 10 50 20-oni_ hpbcd___ 3a-hydroksi-21-flH-(2-metyyli)imidatsol-l-yyli)-5p- IP 50 % 10 6,2 pregnan-20-oni___hpbcd___ 20 3a-hydroksi-21-(r-pyratsolyyli)-3P-trifluorimetyyli-5p-19- IP 50 % 10 12,5 nor-pregnan-20-oni hpbcd__ 3a-hydroksi-21-(l '-imidatsolyyli)-3p-trifluorimetyyli-5p- IP 50 % 10 50 19-nor-pregnan-20-oni___hpbcd__ 25 II* "** Neuroaktiivisten steroidien kyky suojata eläimiä muita kemiallisia kouristuksen aiheutta- t *«· jia vastaan havainnollistettiin edelleen 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onille, 3a,21-dihy- * · * droksi-5ct-pregnan-20-onille ja 3a hydroksi-3p-metyyli-5a-pregnan-20-onille. Kouristuk- ' * * i ·*; sen vastaiset kokeet olivat samanlaisia kuin edellä on kuvattu. Kemiallisia kouristuksen i·· t*i*: 30 aiheuttajia ovat seuraavat: metratsoli (85 mg/kg); (+)bikukulliini (2,7 mg/kg); pikrotok- siini (3,15 mg/kg); strykniini (1,25 mg(kg); tai vehikkeli (0,9 % suolaliuos). Heti » *.·/ kouristuksen aiheuttajan tai vehikkelin ruiskutuksen jälkeen hiiriä tarkkailtiin 30-45 mi- »·· • » ♦ *.* * nuutin ajan. Eläimien lukumäärä, joilla oli jännittyneitä ja/tai nykiviä kouristuksia, mer- * * * **,*· ; kittiin muistiin. Maksimaalisen sähköshokin kokeessa johdettiin 50 mA:n virtaa taajuu- »** ‘..Z 35 deltaan 60 Hz sarveiskalvoelektordien kautta 200 millisekuntia yhtäjaksoisesti jännitty- * ί^ί’ί neen halvauskohtauksen indusoimiseksi. Yhdisteiden kyky kumota yhtäjaksoisesti jännit- > · !.*·· tynyt komponentti määritettiin loppupisteessä. Yleinen CNS-depressiopotentiaali määri tettiin rotorod-kokeessa 10 minuuttia yhdisteiden ruiskutuksen jälkeen, jossa määritettiin 118008 78 hiirien lukumäärä, jotka pyöryivät pyörivällä (6 rpm) sauvalla 1 minuutin ajan yhdessä kolmesta kokeesta. ED50 (annos, jossa puolimaksimaalinen vaikutus tapahtuu) määritettiin kullekin seulonnalle ja ne on esitetty taulukossa 7 alla. Tulokset osoittavat, että neu-roaktiiviset steroidit, verrattuna muihin kliinisesti käyttökelpoisiin kouristuksen vastaisiin 5 aineisiin, ovat hyvin tehokkaita ja niillä on profiili, joka on samanlainen kuin bentsidiat-sepiini klonatsepaamilla. Nämä havainnot osoittavat näiden yhdisteiden terapeuttisen käyttökelpoisuuden aivojen kiihottumisen modulaattoreina, joka on suhteessa niiden suureen affiniteetti-vuorovaikutukseen GR-kompleksin kanssa in vitro.
10 Taulukko 7. Esimerkkeinä olevien neuroaktiivisten steroidien ja valittujen kliinisesti käyttökelpoisten kouristuksen vastaisten aineiden kouristuksen vastainen aktiivisuus hiirissä ED50 (mg/kg)___r——I__T—
15 Yhdiste__RR MES MTZ BIC PICRO STR
3α5α(3)-Ρ__30 28,6 4,9 12,3 10,2 >300 5a-THDOC(a)__22,9 26,7 8,1 17,8 5,6 >300 3a-hydroksi-3p-metyyli-5a- 246,2 >100 6,3 61,9 35,4 >100 ··· "** pregnan-20-oni(b)
20 Klonatsepam* 0,184 93 0,009 0,0086 0,043 ES
* · * ^
Fenobarbitaali* 69 22 13 38 28 95 • · ______ ^ j ·*; Fenytoiini* _ 65 10 ES ES ES ** i*:‘: Progabidi***__75 30 30 105 75 - ^
Valproaatti*__426 272 149 360 387 293 v t 25 M» • · · */ · Lyhenteiden merkitys on: RR (rotorod); MES (maksimaalinen sähkösokki); MTZ (metratsoli); BIC (Biku- » ,·*·, kulliini); PICRO (pikrotoksiini); STR (strykniini); ES (ei suojausta) • · · * · · 't* (a) Liuotettu 20 % hydroksipropyyli-P-syklodekstriiniin vedessä. Steroidien ja kouristuksia aiheuttavien • · ; 30 aineiden annostelureitti oli vatsakalvonsisäisesti (ip) tai ihonalaisesti (se), vastaavasti.
i · » « * • ft 118008 79 * Kouristuksia estävät arvot ovat lähteestä Swinyard & Woodhead, "General Principles: experimental detection, quantification and evaluation of anticonvulsants", kirjassa Antiepileptic Drugs, D.M. Woodbury, J.K. Penryja C.E. Pippenger, toim., s. Ill, (Raven Press, New York), 1982.
5 w Vehikkeli sisälsi 0,32 % hydroksipropyylimetyyliselluloosaa ja 4 % tween 80:tä suolaliuoksessa.
** 50 %:n maksimisuoja 55-100 mg/kg:n annoksella.
*** Kemialliset kouristuksia aiheuttavat aineet progabidi-tutkimuksissa annosteltiin laskimonsisäisesti (iv), 10 kaikki arvot lähteestä Worms et ai., "Gamma-aminobutyric acid (GABA) reseptor stimulation. I.
Neuropharmacological profiles of progabide (SL 76002) and SL 75102, with emphasis on their anticonvulsant spectra", Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 220: 660-671 (1982).
Anksiolyyttiset vaikutukset 15
Seuraavat kokeet osoittavat, että progesteronin metaboliitit, 3a-OH-5a-pregnan-20-oni ja 3a-OH-5 p-pregnan-20-oni ovat tehokkaita anksiolyyttejä neljässä eläinmallissa ihmisen ahdistuneisuudelle, joka tehokkuus mitataan anksiolyyttisten yhdisteiden käyttäytymisvai-kutuksina. On ymmärrettävä, että nämä kaksi yhdistettä kuvaavat keksintöä valaisevalla 20 tavalla. Niiden synteettisten johdannaisten arvot, jotka saatiin näissä mittauksissa, on ::· myös esitetty taulukoissa 8-10. Neljä eläinmallia, joita käytettiin mittaamaan anksiolyyt- M·* j*·,, tisten yhdisteiden käyttäytymisvaikutuksia, ovat: 1) valo/pimeä-siirtymäkoe; 2) koholla ·:***. oleva ristikkosokkelo-koe; 3) Geller-Seiferin konfliktikoe ja 4) Vogelin koe.
• · • · • · Ψ 9 1. *25 a) Valo/pimeä-siirtymäkoe ··* • I « I · · •
Valo/pimeä-siirtymäkoe (Crawley ja Goodwin, "Preliminary report of a simple animal I - * ;;; behavior model for the anxiolytic effect of benzodiazepines", Pharmacol. Biochem. Be- t *:*: hav. 13:67-70 (1980)) perustuu havaintoon, että jyrsijät luonnollisesti pyrkivät tutkimaan ·«« • · * *♦*/ 30 uusia ympäristöjä, mutta avoimet, kirkkaasti valaistut alueet ovat vastenmielisiä jyrsijöil- •f le ja ne ehkäisevät tutkivaa käyttäytymistä (Christmas ja Maxwell, "A comparison of * * * *· effects of some benzodiazepines and other drugs on aggressive and exploratory bahavior t a · · *· " in mice and rats", Neuropharmacol. 9:17-29 (1970); File, "The use of social interactions as a method of detecting anxiolytic activity of chlordiazepoxide-like drugs", J. Neurosci.
,·· 80 118008
Meth. 2:219-238 (1980)). Lukuisia kliinisesti vakiintuneita anksiolyyttien, mukaanlukien diatsepaami, klonatsepaami ja pentobarbitaali, on osoitettu kasvattavan siirtymisten lukumäärää valoisan laatikon ja pimeän laatikon välillä, kun taas ei-anksiolyyttiset lääkkeet eivät osoita tätä käyttäytysmisvaikutusta (Crawley et ai., "Absence of intrinsic antagonist 5 actions of benzodiazepine antagonists on an exploratory model of anxiety in the mice", Neuropharmacol. 23:531-537 (1984)).
Urospulisia N.I.H. Swiss-Webster-hiiria (Harlan, Harlan, Indianapolis, IN), jotka pai-noivat 15-20 g, pidettiin neljä häkkiä kohti polyetyleenihäkeissä, joiden pohjalla oli saha-10 jauhoa. Populaatiohuoneen ympäristötekijöitä säädeltiin (22 °C) 12 tunnin valo/pimeä-kierrolla (6.00-18.00). Ruokaa ja vettä oli saatavilla ad libitum, paitsi kokeen aikana. Kokeet suoritettiin klo 7.00 - 15.00 ja ryhmät vastatasapainotettiin päivänaikavaikutuksil-le. Hiiriin annosteltiin lääkettä tai vehikkeliä vain kerran.
15 Käytetty menetelmä oli muunnelma aikaisemmin kuvatuista menetelmistä (Wieland et ai., "Anxiolytic activity of progesterone metabolite 5a-pregnan-3a-ol-20-one", Br. Res.
565:263-268 (1991)). Laitteisto sisälsi kaksi 2-lokeroista automatisoima koekammiota (Model RXYZCM16, Omnitech Electronics, Columbus, OH). Avoin osaasto yhdistettiin ’··* suljettuun osastoon 7,5 x 7,5 cm käytävällä. Avointa lokeroa valaistiin kirkkaasti käyttä- ·»*» Γ*.. 20 mällä 200 W hehkulamppua. Koehuone pidettiin pimeänä. Infrapunavalosäteiden keskey- * *ϊ**ί tykset jommassa kummassa kammiossa tallennettiin automaattisesti, yhdistettynä tietoko- • ♦ ; V neeseen Digiscan Analyzer -laitteen kautta (Omnitech Electronics) ja tulokset analysoitiin * *,ί.' käyttämällä Integrated Lab Animal Monitoring System-laitetta (Omnitech Electronics).
* · · · · ·* N.I.H. Swiss-Webster -hiirille annosteltiin vehikkeliä tai koeyhdistettä vatsaontelon sisäi- t 25 sesti (IP), 10 minuuttia myöhemmin ne asetettiin valaistun lokeron keskelle. Valaistun ja « : : *.*.*. pimeän kammion välisten siirtymisten lukumäärä, täysin aktiivisten lukumäärä valaistus ta : sa kammiossa ja valaistussa kammiossa vietetty aika mitattiin 10 minuutin koejakson «*i* * *\* aikana.
• « · I» **· : *.*; ί·ί *· 30 Kuvio 8 esittää 3a-OH-5a-pregnan-20-onin ja 3a-OH-5P-pregnan-20-onin vaikutukset «*1 i *· * valo/pimeä-siirtymäkokeessa. Molemmat yhdisteet tuottivat merkittävän annos-vaste-käy- rän suhteessa pimeän laatikon ja valoisan laatikon välillä siirtymisten lukumäärään. Post- 81 118008 hoc vertailut osoittivat, että ohikulkevien lukumäärät sekä 3a-OH-5a-pregnan-20-onille että 3a-OH-5P-pregnan-20-onille kasvoivat merkittävästi testatuilla annoksilla suhteessa kontrolliin (Dunnett'in t-testi).
5 Lisäksi sekä 3a-OH-5a-pregnan-20-oni että 3 a-OH-5 p-pregnan-20-oni tuottivat merkittävän (p < 0,01) kasvun aktiivisuudessa 10 & 20 mg/kg:lla verrattuna vertailuryhmään (Dunnettin t-testi). Ei ollut merkittäviä eroja kehden yhdisteen välillä millään testatulla annoksella.
10 b) Koholla oleva ristikkosokkelo;
Teoreettinen perusta koholla oleva ristikkosokkelo -kokeelle on samanlainen kuin valo/pimeä-siirtymiskokeelle. Kuten aikaisemmin on kuvattu (Pellow et ai., "Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat", s’ 15 J. Neuro sei. Meth. 14:149-167 (1985)), koholla oleva ristikkosokkelo -koelaitteisto on suunniteltu käyttämään hyväksi hiirten luonnollista vastenmielisyyttä avoimille paikoille.
Laitteisto koostuu kahdesta avoimesta haarasta ja kahdesta suljetusta haarasta. Koholla oleva ristikkosokkelo -koe sallii kaksi ahdistuneisuuden määritystä, avoimiin haaroihin .·. saapumisten lukumäärä ja avoimissa haaroissa vietetty aika, molemmat ilmaistaan saapu- ' ···· ;·. 20 misten lukumäärän ja sekä avoimissa haaroissa että suljetussa haaroissa kulutetun ajan % prosenttisuutena.
·· · i ··· • · * ·
Urospuolisia N.I.H. Swiss-Webster -hiiriä (Harlan, Indianapolis, IN), jotka painoivat • · * : 15-20 g, pidettiin neljä häkkiä kohti polyetyleenihäkeissä, joiden pohjalla oli sahajauhoa.
25 Populaatiohuoneen ympäristötekijöitä säädeltiin (22 °C) 12 tunnin valo/pimeä-kierrolla • · • * (6.00-18.00). Ruokaa ja vettä oli saatavilla ad libitum, paitsi kokeen aikana. Kokeet • · **"* suoritettiin klo 7.00 - 15.00 ja ryhmät vastatasapainotettiin päivänaikavaikutuksille. Hii- ·· · • * · ’ . riin annoteltiin lääkettä tai vehikkeliä vain kerran.
··· · • · ··· 30 Käytetty menetelmä on kuvattu akaisemmin (Lister, "The use of Plus-Maze to measure »·· ♦ · *···* anxiety in the mouse", Psychopharmacol. 92:180-185 (1987)). Laitteisto käsitti kaksi avointa haaraa kohtisuoraan kahteen suljettuun haaraan nähden ja kohotettuna 50 cm 82 118008 lattiasta. Kukin haara oli 50 cm pitkä ja suljetun haaran seinät olivat 40 cm pitkiä. Sokkelo valmistettiin täysin mustasta pleksilasista. 200 W:n hehkulamput olivat kunkin avoimen haaran yläpuolella vahvan kontrastin tuottamiseksi avointen haarojen ja suljettujen haarojen välille.
5
Kymmenen minuuttia ruiskutuksen jälkeen N.I.H. Swiss-Webster-hiiret laitettiin ristik-kosokkelon keskelle vastatusten avointa haaraa. 5 minuutin koejakson aikana avoimiin haaroihin ja suljettuihin haaroihin saapumisten lukumäärä, ja avoimissa haaroissa ja suljetuissa haaroissa vietetty aika mitattiin. Kaikki neljä käpälää piti olla avoimen haaran 10 sisäpuolella, jotta riippuva muuttuja mitattiin. Siten sokkelon keskustassa vietettyä aikaa ei laskettu, joten avoimissa haaroissa ja suljetuissa haaroissa vietetty kokonaisaika voi olla eri kuin 5 minuuttia. 3a-OH-5a-pregnan-20-onin ja 3a-OH-5p-pregnan-20-onin vaikutus koholla oleva ristikkosokkelo -kokeessa on esitetty kuviossa 9A. Molemmat yhdisteet osoittivat kasvanutta osuutta saaapumisissa avoimiin haaroihin eri annoksilla. 3a-15 OH-5a-pregnan-20-oni tuotti merkittävän kasvun saapumisissa annoksella 20 mg/kg (p s 0,05), kun taas 3a-OH-5P-pregnan-20-oni tuotti merkittävän kasvun saapumisissa an-noskilla 5 mg/kg (p s 0,05), 7,5 mg/kg (p s 0,01) ja 10 mg/kg (p s 0,01).
Lisäksi 3a-OH-5a-pregnan-20-oni ja 3a-OH-5p-pregnan-20-oni tuottivat annosriippuvan 20 kasvun avoimissa haaroissa vietetyssä ajassa (kuvio 9B). 3a-OH-5a-pregnan-20-oni tuotti «:··: merkittävän kasvun avoimissa haaroissa vietetyssä ajassa annoksella 10 mg/kg (p < • * S '/· 0,01), kun taas 3a-OH-5p-pregnan-20-oni motti merkittävän kasvun avoimissa haaroissa vietetyssä ajassa annoksilla 7,5 mg/kg (p s 0,01) ja 10 mg/kg (p s 0,01).
il* • * * • · * 25 Taulukko 8 esittää keksinnön mukaisten ja keksinnössä käytettyjen yhdisteiden ank- ·”* siolyyttisten aktiivisuuksien yhteenvedon käyttämällä koholla oleva ristikkosokkelo -koet- • · * • · * \ ta samoissa olosuhteissa kuten edellä on kuvattu.
··· « * * f·* 9 4* I ί ··· : » t * M* · ft· < ft f 118008 83
Taulukko 8: Aksiolyyttinen aktiivisuus koholla oleva ristikkosokkelo -kokeessa hiirissä
Nimi Reitti Annos Vehik- % mg/kg keli kontr.
5 3B-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5a-pregnan- IP 10 50 % 175,7 20-oni_____hpbcd__ 3p-(4'-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-19-nor-5P- IP 10 50 % 191 pregnan-20-oni____hpbcd__ 3P-(4'-hydroksibutyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan-20- IP 10 50 % 141 10 oni_____hpbcd__ 3p-(4’-asetoksibutyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 10 50 % 159 oni hpbcd _ 3a-hydroksi-3P-(3'-metoksi-r-propynyyli)-5P-preanan- IP 10 50 % 134 20-oni____hpbcd__ 15 3P-[3-(2-propynyylioksi)propyn-l-yyli]-3a-hydroksi-5p- IP 10 50 % 178 pregnan-20-oni hpbcd _ 3P-(4'-hydroksibutyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5a-pregnan-20- IP 10 50 % 186 oni hpbcd 3p-(4'-bifenyyli)etynyyli-3g-hydroksi-5p-pregnan-20-oni IP__K)__dmso 111 20 3P-(5-asetyylitien-2-yyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan- IP 10 50 % 83 20-oni hpbcd 3p-(4'-kloorifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 10 dmso 161 oni_ _ 3B-(5'-hydroksipentyn-l^yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan- IP 10 50 % 137 25 20-oni hpbcd ··* -....... .
3a-hydroksi-3P-(tien-2-yyli)etynyyli-5P-pregnan-20-oni IP 10 50 % 148 : hpbcd *Γ*ί 3p-(4'-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a- IP 1 50 % 150 pregnan-20-oni hpbcd a * · “ ” ...... 1 * * 3p-(4’-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p- IP 10 50 % 115 I · · 30 pregnan-20-oni hpbcd t';*; 3p-(4’-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5a- PO 10 vesi 166 3 • pregnan-20-onin Zl-hemisukkinaattisuola_ 3p-(4,-asetyylifenyylietynyyli)-3a,21-dihydroksi-5p- PO 10 vesi 248 , pregnan-20-onin Zl-hemisukkinaattisuola 1*1 •’i*» 35 3p-(4'-hydroksi-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan- IP 10 50 % 119 ’ 11,20-dioni hpbcd : ; : 3B-(3’-asetyylifenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan- IP 10 50 % 143 2Ö-oni hpbcd t : 3p-(4'-syanofenyyli)etynyyli-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 10 50 % 169 • S. 40 oni hpbcd Ψ « · ·. · 3p-(4'-hydroksibutyn-r-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20- IP 10 vesi 149 onin 4'-nemisukkinaatin Na-suola 3a-hydroksi-3B-[3'-(lH-pyratsol-l-yyli)-r-propynyyli]- IP 10 50 % 116 5P-prcgnan-20-oni_'____hpbcd _ 84 118008
Nimi Reitti Annos Vehik- % mg/kg keli kontr.
3a-hydroksi-3P-(4'-metyylifenyyli)etynyyli-5P-pregnan- IP 10 50 % 148 20-oni " hpbcd 3a-hydroksi-(6-okso-l-heptynyyli)-5p-pregnan-20-oni IP 10 50 % 130,5 hpbcd 5 3a-hydroksi-3P-(2'-pyridyylietynyyli)-5p-pregnan-20-oni IP 10 50 % 123 hpbcd _ 3p-(4’-syano-l'-butynyyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan-20-oni IP 10 50 % 184 hpbcd 3a-hydroksi-3P-(3'-hydroksipropynyyli)-5p-pregnan-20- IP 10 50 % 128 oni hpbcd 3a-hvdroksi-3P-[4'(R/S)-hydroksipentynyyli|-5a-pregnan- IP 10 50 % 102 10 Il 20-ofii_____ hpbcd _ 3a-hydroksi-3p-[3’(RS)-hydroksibutynyyli]-5p-pregnan- IP 10 50 % 137,7 20-oni____hpbcd__ 3P-(5'-hydroksipentyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5P-pregnan- IP 10 50 % 155 20-onin 5'-hemisukkinaatin Na-suola hpbcd _ 15 3p-(3'-asetoksipropyn-l'-yyli)-3a-hydroksi-5p-pregnan- IP 10 50 % 109 20-oni "__hpbcd__ 3cc-hydroksi-3p-(2’-metoksifenyyli)etynyyli-5p-pregnan- IP 10 dmso 152 20-oni____.__ 3P-(6'-asetoksiheksyn-l’-yyIi)-3a-hvdroksi-5p-pregnan- IP 10 50 % 206 20 20-oni_'__hpbcd 3cc-hydroksi-3P-[3'-(lH-l,2,3-triatsol-l-yyli)-r-propynyy- IP 10 50 % 116 li] -5 p-pregnan-20-oni_ hpbcd__ .. 3a-hydroksi-3P-f3’ -(1H-1,2,4-triatsol- l-yyli)-l'-propynyy- IP 10 50 % 122 ιβ*ϊ* lij-5p-pregnan-20-oni hpbcd * *·· 25 Natrium-S-(3a-hydroksi-5P pregnan-20-on-21 -yy- 1P 10 50 % 143 * , li)tiosulfaatti hpbcd -....... --- — • · . . Natrium-S-(3a-hydroksi-3P-metyyli-5a-pregnan-20-on-21- IP 10 vesi 125 ; · t yyli)tiosulfaatti * » ----- t:: Natrium-S-(3a-hydroksi-3P-(4'-hydroksibutynyyli)-5P- IP 10 vesi 135 30 pregnan-20-on-2l-yyli)-tiosulfaatti • · • Natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metoksimetvyli-5a-pregnan- IP 10 vesi 126 20-on-21 -yy li)tiosulfaatti_ • j*; Natrium-S-(3ct-hydroksi-3p-trifluorimetyyli-19-nor-5p- IP- 10 50 % 139 ··· pregnan-20-on-2l-yyli)tiosulfaatti hpbcd « « ; *·' 35 3a-hydroksi-21-(2'H-l,2,3,4-tetratsol-2’-yyli)-5P- IP 10 50 % 117 /„ pregnan-20-oni hpbcd • * · —----- —---— j,. 3α-hydroksi-21-(2H-l,2,3-triatsol·2-yyli)-5p-pΓcgnan-20- IP 10 50 % 164 S l oni hpbcd ··* ' ' —-..... . - Ml·— -M,·. — - — ; ,·. 3a-hydroksi-21-[lH-(4-metyyli-5-karboksyyli)imidatsol-l- IP 10 50 % 112 : 40 yyli]-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri hpbcd % *· 3a-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni IP 10 50 % 141 ___hpbcd _ 118008 85
Nimi Reitti Annos Vehik- % __mg/kg keli__kontr.
3a-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)-5P-pregnan-20-oni IP 10 50 % 138 hpbcd 3p-etynyyli-3a-hydroksi-21-(l'-imidatsolyyli)-5p-pregnan- IP 10 50 % 179 20-oni____hpbcd__ 5 3ct-hydroksi-21-(lH-3,5-dimetyylipyratsolyyli)-5P- IP 10 50 % 128 pregnan-20-oni___ hpbcd__ 3a-hydroksi-21 -(Γ -imidatsolyy li)-3p-metyyli-5a-pregnan- IP 10 50 % 144 20-oni hpbcd__ 30-etynyyli-3a-hydroksi-21-(r-pyratsolyyli)-5p-pregnan- IP 10 50 % 180 10 20-oni____hpbcd__ 3a-hydroksi-21-(l'-pyratsolyyli)-3p-metyyli-5a-pregnan- IP 10 50 % 154 20-oni hpbcd__ 3a-hydroksi-21-(pyratsol-l-yyli)-5P-pregnan-20-oni IP 10 50 % 129 hpbcd „ 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(r,2',4'-triatsolyyli)-5a- IP 10 50 % 153 15 prcgnan-20-oni_ hpbcd__ 3a-hydroksi-3p-metyyli-21-(l',2',4’-triatsol-l-yyli)-5p- IP 10 50 % 135 pregnan-20-oni____hpbcd__ 3a-hydroksi-21-[lH-(2-metyyli)imidatsol-l-yyli)-5P- IP 10 50 % 96 pregnan-20-oni _ hpbcd_ 20 c) Geller-Seifterin konfliktikoe • · · * ;;** Tämä ihmisen ahdistuneisuuden eläinmalli käyttää hyväksi ehdollistettua konfliktitilaa • « • «* ] . 25 rotissa, jotta varmistetaan lääkkeiden anksiolyyttiset ominaisuudet. Rottia ehdollistetaan • · painamaan vipua positiivista vahvistusta varten kahdessa käyttäytymisohjelmassa (Geller • · * · : ja Seifter, "The effects of meprobamate, barbiturates, d-amphetamine and promazine on • · · experimentally inudeced conflict in the rat", Psychopharmacologia 1:482-492 (1960)).
Ensimmäiseen kuuluu vivun painaminen vaihtuvasuhteisessa ohjelmassa ilman rangais- : 30 tusta. Rankaisukomponentti tuottaa konfliktitilan eläimessä. Rankaisematon komponentti • · · V · sallii minkä tahansa depressanttivaikutuksen, joka lääkkeellä voi olla, havainnoimisen.
;*·*: Anksiolyyttinen vaste kasvattaisi rangaistujen vastetta vaikuttamatta rankaisemattomien vasteeseen.
• · · ··' • · · • · · ·*· · 35 Urospuolisia albiino Sprague-Dawley -rottia (Charles River Labs, Wilmington, MA), • * jotka painoivat 250 - 300 g, käytettiin konfliktikokeisiin ja niitä pidettiin rajoitetulla 118008 86 ?'
Purina Lab Chow -ruokapellettien dietillä, vettä oli saatavilla kaikkina aikoina, jotta pidettiin paino 85 %:sesti vapaasti syövän nuoren aikuisen tasolla. Rottia pidettiin yksittäin 12-tunnin valo-pimeä-kierrossa, jolloin valot olivat päällä klo 7.00 - 19.00.
5 3a-OH-5a-pregnan-20-onin ja 3a-OH-5p-pregnan-20-onin ahdistuksen vastainen (rangaistuksen vaikutusta vähentävä) ja vastedepressanttivaikutukset mitattiin rotissa Gellerin ja Seifterin konfliktikoe (1960). Tässä 63-minuutin kokeessa nälkäiset rotat painoivat vipua, jotta ne saivat makeutettua maitoa palkkioksi. Vahvistusohjelma koostuu rangaistus- ja rankaisemattomuuskomponentista, vaihtuen noin joka 15 minuutti. Rottia 10 harjoitettiin koekammioissa (Coulburn instruments), jonka yhdelle seinälle oli asennettu vipu, pieni kauha, joka jakoi 0,1 ml:n maitopalkkion (1 osa Eagle-tiivistemaitio ja 2 osaa vettä), ja jossa oli metalliverkkolattia, jonka läpi jalkashokkirangaistus annettiin. DEC PDP 11/73 minitietokone, jossa pyrö SKED (State Systems), käytettiin ohjelmoimiseen ja tallentamiseen.
15 . /
Rotat oppivat aluksi vastaamaan jatkuvaan vahvistusohjelmaan ja ne edistyivät nopeasti 30 sekunnin, 1 minuutin ja 2 minuutin valitelevassa (variable interval; VI) ohjelmassa.
Jatkuvassa vahvistusohjelmassa rotat, jotka saivat maitoa palkkioksi jokaisen vivun pai-nalluksen jälkeen; VI-aikataulussa maitopalkkiot olivat saatavilla epäsäännöllisin ja vaih- * ;·. 20 tuvin väliajoin, lopulta keskimäärin kerran joka toinen minuutti. Neljä 3-minuutin "kon- · * * flikti"-jaksoa annettiin renkaisemattomalle VI-peruslinjalle; ensimmäinen alkoi 3 minuut-:*·*; tia VI-esityksen jälkeen ja muut vaihtelivat 12 minuutin jakois VI-vasteesta. Konfliktijak- • t i f: sojen aikana, jotka signaloitiin valaisemalla ja äänellä, jatkuva vahvistusohjelma oli jäi- * · · : leen voimassa ja kukin vivun painallus antoi sekä maitopalkinnon että lyhyen (0,25 mil- 25 lisekuntia) jalkashokkirangaistuksen. Shokin intensiteetti oli 0,2 mA aluksi, ja sitten kas-• — voi päivittäin 0,02 mA:n välein, jotta asteittain vähennettiin vivun painamista 5 kertaan • · · • · « * tai vähempään konfliktijaksoa kohti. Tämä opetus kesti 4-6 viikkoa, jonka jälkeen stabii- • · · V : lit vasteet havaittiin konfliktijaksojen aikana ja stabiilit suuret vasteet rankaisemattomina ♦ ♦♦ J * ···* jaksoina. Lääkkeen indusoimat kasvut rangaistujen vasteiden määrässä otettiin ahdistuk- • · ·.· · 30 senvastaisen aktiivisuuden indeksiksi, kun taas rankaisemattomien vasteiden määrän pie-·,**: nenemien otettiin vasteen depression tai sedaation indeksinä.
87 118008 3a-OH-5a-pregnan-20-onin ja 3a-OH-5P-pregnan-20-onin vaikutukset konfliktikokeessa on esitetty yhteenvetona kuviossa 10. Molemmat yhdisteet tuottivat suurta kasvua rankai-suvasteiden nopeudessa, ehottaen, että molemmat voisivat olla aktiivisia ahdistuksen vastaisina aineina. 3a-OH-5p-pregnan-20-onin huipputeho havaittiin 2 mg/kg:lla ja 3αΌΗ-5 5a-pregnan-20-onin huipputeho 4,4 mg/kg:lla ihonalaisesti annosteltuna. (Tilastollista analyysiä varten ja johtuen kokeiden pienestä lukumäärästä kullakin annoksella, kaikki kokeet kullakin yhdisteellä on yhdistetty vertailuun vehikkelikontrollikoetta vastaan, käyttämällä t-testiä vastaaville mittauksille: 3a-OH-5a-pregnan-20-onille p < 0,02; 3a-OH-5p-pregnan-20-onille p < 0,008).
10
Taulukko 9 esittää yhteenvetona keksinnön mukaisten ja keksinnössä käytettyjen yhdisteiden anksiolyyttisen aktiivisuuden, jotka on saatu käyttämällä Geller-Seiferin koetta edellä kuvatuissa koeolosuhteissa.
15 Taulukko 9. Ahdistusta lievittävä aktiivisuus Geller/Seifer-kokeessa rotissa
Yhdisteet Reitti Vehik- Annos Geller/ keli (mg/kg) Seifter (% kontrolli) ·.» 3a-hydroksi-3p-metoksimetyyli-5a- IP 50 % 10 958 pregnan-20-oni_ hpbcd *;*" 20 lla,-N,N-dimetyyliamino-3a-hyd- IP sitraani 20 145 ;'.*j roksi-3p-trifluorimetyyli-5p-preg- 1 nan-20-oni * * * — _ — · ,-i * * ·
Natrium-S-(3a-hydroksi-3p-metok- PO vesi 32 4487,5 ' * simetyyli-5a-pregnan-20-on-21-yy- 25 li)tiosulfaatti ’·”* 3a-hydroksi-3p-etoksimetyyIi-5a- IP 50 % 40 3743 : i ί pregnan-20-oni hpbcd — .1..,1 J- —m-, • · · • ♦ ♦ • · · • · · . *. 30 d) Vogelin koe • · · **· · « · i 4 • · · • · · · - * * 88 118008
Vogelin koe perustuu konfliktin luomiseen hyvin motivoidun käyttäytymisen ja vastenmielisyyden välille. Tätä koetta varten jano on suuri motivaatio. Eläintä pidetään veden puutteessa 12-16 tuntia, jotta luotaisiin motivaatio juoda. Opetusjakson aikana eläimet altistetaan koeympäristölle siten, että ne tottuvat juomaputkeen ja siten minimoidaan uu-5 den ympäristön pelko. Opettamisen jälkeen eläinten annetaan päästä veden luokse 2 tunnin ajan. Tänä aikana eläimet juovat ja syövät tavalliset määrät vettä ja ruokaa, mikä kompensoi puutteen ajan. Tämä aikataulu tuottaa silti vahvan motivaation juoda koejak-son aikana.
10 Sen jälkeen, kun eläintä on pidetty veden puutteessa kahdestatoista kuuteentoista tuntia, eläin asetetaan koehäkkiin, jossa sen annetaan juoda vapaasti viisi minuuttia. Tämä aika käytetään eläimen asettumiseen ympäristöön ja juomaputkeen. Opetusjakson jälkeen eläimillä on pääsy veden ja ruoan luokse niiden kotihäkissä 2 tunnin ajan. Ruokaa on saatavilla koko ajan. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin lääke annostellaan eläimeen 15 aivoselkäydinkammionsisäisesti.
Osoitetun viiveen jälkeen, joka alkaa ruiskutusajasta, eläin asetetaan jälleen koehäkkiin kymmeneksi minuutiksi. Tietokone laskee kunkin ajan, jolloin eläin nuolee, ja joka kahdennenkymmenennen nuolaisun jälkeen antaa lievän sähköärsykkeen kielen ja/tai • 1 1 · ;1, 20 jalan läpi. Sähköärsyke muodostuu 0,6 mA virrasta, jonka kesto on 100 millisekuntia.
• · · * Tämä menettely tuottaa eläimelle konfliktithan, jota pienentää kliinisesti käytettyjen ank-siolyyttisten aineiden (esim. Valium) annostelu. Annos-vaste-käyrää varten erilliset eläin- • · s ryhmät ruiskutetaan kasvavilla annoksilla koelääkettä ja testataan ennalta määrätyn aikaa.
* ·1 • · · . .
25 Näissä mittauksissa käytettyjen edustavien yhdisteiden tulokset on esitetty yhteenvetona taulukossa 10.
# 1 · * a ·
III
···.
• 1 · * · · * · · t : • 1 1 * · * · 1 • · · ·· · · * · · • · · • · 89 118008
Taulukko 10. Ahdistusta lievittävä aktiivisuus Vogelin kokessa rotissa
Yhdisteet Reitti Vehikkeli Annos Vogel (% _____(/xg/kg) kontrollista) 3a,20a-dihydroksi-2p-isopropoksi- icv g-CD 10 169,0 5 5«-pregnaani ____ 3 a, 20-dihydroksi-20-metyy li-5a- icv g-CD 20 179,0 pregnaani_____ 3a,20a-dihydroksi-21-metyyli-5a- icv g-CD 10 157,9 pregnaani_____ 10 3 q, 20a(S)-dihydroksi-5 ct-pregnaani icv g-CD__10__193,0 3 q-hydroksi-5 oc-pregnan-20-oni__icv__g-CD__10__431,1 3 a, 2Qq-dihydroksi-5q-pregnaani__icv__g-CD__10__283,3 2p-fluori-3q,20q-dihydroksi-5q- icv g-CD 20 264,9 pregnaani_____ 15 3q,20q-dihydroksi-21-etyyli-5q- icv g-CD 20 225,8 pregnaani______________ 3 q ,2Qq-dihydroksi-5 q-pregnaani__icv g-CD__20__267,3 *:* 20 Esilääkkeet ♦ · · » ♦ * « · • * *
Perusyhdisteiden 3q-hydroksi-5q-pregnan-20-onin ja 3q,21-dihydroksi-5q-pregnan-20- • · .* .* onin ja niiden johdannaisten esilääkkeiden kouristuksen vastaiset ja ahdistuneisuuden 2 * " ···* vastaiset aktiivisuudet määritettiin käyttämällä samoja menettelyjä kuin on kuvattu edellä.
· * *·' 25 Useiden 3q-hydroksi-5q-pregnan-20-onin esilääkkeiden suojausprosentti metratsoli-in- . dusoituja halvauskohtauksia vastaan mitattiin ajan funktiona yhdisteiden annostelemisen • · · ♦ · · #*".t jälkeen (kuvio 11 ja taulukko 11).
* · · * ···.·’ • · · • * ·
Perusyhdisteiden 3q-hydroksi-5q-pregnan-20-onin ja 3q,21-dihydroksi-5q-pregnan-20- 2 · ’** 30 onin muuntelu 3q-ja 21-hydroksyyleissä erilaisilla estereillä säilyttää niiden biologisen • · · *;* | aktiivisuuden ja joissakin tapauksissa sellainen muutos kasvattaa yhdisteen antamaa suo- • « «
• »I
* * jausaikaa. Siten keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan muunnella, jotta tarjotaan kouris- i 90 118008 tuksen vastaisia ja anksiolyyttisiä aktiivisuuksia tietyssä ajassa vaihtelevine suojausaikoi-neen.
Taulukko 11. 3a-hydroksi-5a-pregnan-20-onin (3a-(RCOO)-5a-pregnan-20-oni) 5 esilääke-esterin antimetratsoliaktiivisuus R % suoja 60 mg/kg 1 h, ___ ,__IP_ ..
metyyli 25 _ etyyli __.__75_ 10 propyyli__75_ butyyli_ ___33 _ 2-propyyli__75_ 4-heptyyli ___16 (4 tuntia)_ syklobutyyli__ Π_ 15 fenyyli__33_ 4-kloorifenyyli__50__ . 4-metoksifenyyli 17 ··· - ..........— — ................
* ··, 3-pyridyyli 50 (20 tuntia) • ·· ---™" ' ' ....... ' ......!- ' ~-— * ....: 3-( 1 -metyyli-1,4-dihydropyridinyyli)_____ 63 (20 tuntia)__ 20 • * • · * 4 · « • · · * * * Päin vastoin kuin bentsodiatsepiinit, neuroaktiiviset steroidit voivat myös saada aikaan * anestesian. Niiden kyvyn saada aikaan anestesia ajatellaan johtuvan niiden kyvystä avata s :]: kloridi-ionikanava GABA:n poissaollessa, mikä on ominaisuus, jota ei ole bentsodiatse-
* « I
V : 25 piineilla. Siten neurosteroidit voivat toimia suoraan reseptorissa GABA:n poissaollessa ja myös "epäsuorasti" GABA:n läsnäollessa. Tätä "epäsuoraa" toimintaa kutsutaan resepto-rin "moduloimiseksi". (Lambert et ai., "Actions of synthetic and endogenous steroids on « • the GABAa receptor", Trends Pharmacology Science 8: 224-227 (1987)).
• ♦ · ♦ ··*- « i« • · 118008 91
Keksinnön mukaisia ja keksinnössä käytettäviä yhdisteitä voidaan myös käyttää anesteet-tisiin indikaatioihin suurina annoksina. Anestesian indusoimiseksi edullinen annostelu-reitti on kuitenkin laskimonsisäinen eli intravenöösi (iv) annostelu. Eläimissä lääkkeen anesteettiset ominaisuudet mitataan lääkkeen kykynä tuottaa kääntymisrefleksin häviämi-5 nen. Kääntymisrefleksin häviäminen määritetään eläimen kyvyttömyytenä kääntää itsensä oikeinpäin 30 sekunnissa sen jälkeen, kun ne on asetettu selälleen. Hiiriin annosteltiin lääkettä iv. lateraaliseen häntälaskimoon. Annostelun jäleen hiiret asetetttiin selälleen ja tarkkailtiin kääntymisrefleksin häviämistä. Valaisevat tulokset on esitetty taulukossa 12.
10 Taulukko 12. Neuroaktiivisten steroidien anesteettinen aktiivisuus hiirissä
Yhdiste Reitti Vehikkeli Annos Kään- (mg/kg) tymisref-leksin _____häviö 3a,21-dihydroksi-3p-etynyyli-5P- iv 20 % 10 100 pregnan-20-oni___kremofori__ 15 3p-(kloorietynyyli)-3a-hydroksi- iv ruiskute- 20 100 5 p-pregnan-20-oni___liuos__ 3p-etynyyli-3a-hydroksi-5p-preg- iv 10 % 30 100 . nan-20-oni hpbcd • · « · ··. 3a-hydroksi-3p-metyyli-5a-pregn- iv ruiskute- 50 100 • ’* 20 16-en-20-oni liuos ··«·· -.·ι — -ιι. - — — • « '•t't 3a-hydroksi-5a-pregn-9-en-20-oni iv ruiskute- 10 100 • * liuos j ♦ * 3a-hydroksi-17(Z)-metoksimetylee- iv ruiskute- 5 75 V : ni-lO-nor-Sa-androstaani__* liuos 3a-hydroksi-3P-metyyli-5p-preg- iv ruiskute- 2,5 100 s 25 nan-20-oni liuos ··· ____ »I* V : 2p-etoksi-3a-hydroksi-5a-pregnan- iv 20 % 5 100 .1* 20-oni kremofori » * · ^ ““1 * ,···. 2p-fluori-3a-hydroksi-5a-pregnan- iv ruiskute- 5 100 *" 20-oni liuos • » — " "" ~ i » * \ 30 3a-hydroksi-3P metyyli-21-metok- iv ruiskute- 20 100 :,*·· s imetyy li-5 q-pregnan-20-oni_____liuos__ 92 118008
On odotettavissa, että keksinnön mukaisten ja keksinnössä käytettyjen yhdisteiden esi-lääkkeillä, joilla on samanlaiset modifikaatiot kun edellä on kuvattu, on samanlainen aktiivisuus kuin 3a-hydroksi-5-pelkistettyjen-pregnaanien esilääkkeillä.
5 Vaikka edulliset toteutusmuodot on kuvattu ja valaistu, niihin voidaan tehdä monia erilaisia korvauksia ja muunnoksia ilman, että poistutaan keksinnön piiristä. Vastaavasti on ymmärrettävä, että esillä olevaa keksintöä on kuvattu valaisevalla tavalla mutta ei rajoittavalla tavalla.
*·· * 'il • » « ♦ I ·« »•«f1 • ♦ · • · i » i • ·· · · »T: * * -*·1 « t · ...
» · · « 1 r « « « * ·♦« r · 1 « ♦ ·· t : ·♦ · • 1 • · 1 * ♦ · ·1· · · 4 · 1 * · · * 1

Claims (27)

1. Yhdiste, jolla on kaava: . ,¾ jT Tj /—^ «3.-J L\) "»o : ! -is jossa: R on vety, halogeeni, alempi alkoksi, dialkyyliamino, alkyyli, mahdollisesti substituoitu Ι-ΙΟ alkynyyli tai substituoitu alkyyli; ' S Ri on vety, mahdollisesti substituoitu alkyyli, mahdollisesti substituoitu alkenyyli, mahdollisesti substituoitu aryyli, mahdollisesti substituoitu aralkyyli, mahdollisesti substituoitu alkynyyli, mahdollisesti substituoitu aralkynyyli, alkoksialkyyli, aminoalkyyli, 15 syaani, syaanialkyyli, tiosyaanialkyyli, atsidoalkyyli, substituoitu aralkynyyli, ·· ' • * ' " aryylialkyyli, aryylialkenyyli, mahdollisesti substituoitu aralkyylialkynyyli, alkanoyylioksialkynyyli, mahdollisesti substituoitu heteroaryylioksialkynyyli, • · t • ** oksoalkynyyli tai sen kctaali, syaanialkynyyli, mahdollisesti substituoitu t • * · *”** hereroaryylialkynyyli, hydroksialkynyyli, alkoksialkynyyli, aminoalkynyyli, • · · « · 4 • . 20 asyyliaminoalkynyyli, merkaptoalkynyyli, hydroksialkynyylidihapon hemiesteri tai sen . . suola, tai alkynyylioksialkynyyli; • ♦ · ··· ····-. • ♦ · • · *·* R2 on vety, hydroksi, alkoksi,-alkanoyylioksi, karbalkoksyyli, ketoryhmä tai aminoryhmä; • · • · t • · » ··· · ··♦ • · *··*’ 25 R3 on mahdollisesti substituoitu heteroaryyliasetyyliryhmä; • · ♦ ·♦·· • * · • · I R.i on vety tai metyyli, 94 1 1 8008 R5 on vety; Rfi on vety, alkanoyyli, aminokarbonyyli tai alkoksikarbonyyli;
5 R7 on vety, halogeeni, hydroksi, alkoksi. alkanoyylioksi, karbalkoksyyli; Rg on vety tai halogeeni; Ro on vety, halogeeni, alkyyli, alkoksi, aryylialkoksi tai amino; ja 10 Rio on vety, halogeeni, alkyyli, halogeenialkyyli, hydroksi, alkoksi, alkanoyylioksi, karbalkoksyyli, syaani, tiosyaani tai merkapto; tai sen fysiologisesti hyväksyttävä 3-esteri, 15 jossa seuraavat lausekkeet, kuten tässä käytetty, kuvataan seuraavalla tavalla:- termi ’’alkyyli” tarkoittaa tyydyttyneitä alifaattisia ryhmiä mukaan lukien suoraketjuiset, haaraketjuiset ja sykliset ryhmät, jotka kaikki voivat olla mahdollisesti substituoituja, 20 termi’’alkenyvli” tarkoittaa tyydyttymättömiä ryhmiä, jotka sisältävät vähintään yhden ;*[' hiili-hiili kaksoissidoksen, mukaan lukien suoraketjuiset, haaraketjuiset ja sykliset ryhmät, • · · « joista kaikki voivat olla mahdollisesti substituoituja, • · termi ’’alkynyyli” tarkoittaa tyydyttymättömiä hiilivetyryhmiä, jotka sisältävät vähintään • · • » . yhden hiili-hiili kolmoissidoksen ja joihin kuuluvat suoraketjuiset ja haaraketjuiset ryhmät, • * · .*j*. 25 jotka voivat mahdollisesti olla substituoituja, termi ’’alkoksi” tarkoittaa eetteriä -OR, jossa R on alkyyli, * termi’’aryylioksi” tarkoittaa eetteriä-OR, jossa R on aryyli, ·♦· · termi ’’aryyli” tarkoittaa aromaattisia ryhmiä, joilla on ainakin yksi rengas, jossa on m : konjugoitunut π-elektromsysteemi, ja joihin kuuluvat karbosykliset aryyli ja biaryyli, joista • · * * * * · .*··. 30 molemmat voivat mahdollisesti olla substituoituja, • · · *. tenni "karbosyklinen aryyli” tarkoittaa ryhmää, jossa aromaattisen renkaan rengasatomit • * /···' ovat hiiliatomeja, • · termi’’aralkyyli” tarkoittaa alkyyliryhmää, joka on substituoitu aryyliryhmällä ja joka voi mahdollisesti olla substituoitu, ,5 1 1 8008 termi’’alkanoyylioksi” tarkoittaa ryhmää-0-C(0)R, jossa R on alkyyli, alkenyyli, alkynyyli, aryyli tai aralkyyli, termi’’karbalkoksyyli” tarkoittaa ryhmää-C(0)0R, jossa Ron alkyyli, alkenyyli, i alkynyyli, aryyli tai aralkyyli, „ 5 termi ’’karboksiamidi” tarkoittaa ryhmää -C(0)NRRi, jossa R ja R| ovat toisistaan riippumattomasti vety-, alkyyli-, alkenyyli-, alkynyyli-, aryyli tai aralkyyliryhmiä, termi ’’dialkyyliamino” tarkoittaa ryhmää -NRR”, jossa R ja R” ovat toisistaan riippumattomasti alempi alkyyliryhmä tai ne muodostavat yhdessä morfolinoryhmän osan, termi ’’amino” tarkoittaa ryhmää NRR’, jossa R ja R’ ovat toisistaan riippumattomasti vety, 10 alempi alkyyli tai ne ovat liittyneet toisiinsa, jollin muodostuu 5-tai 6-jäseninen rengas, termi ’’mahdollisesti substituoitu” tai ’’substituoitu” tarkoittaa ryhmää, joka on substituoitu yhdestä kolmeen, neljään tai viiteen substituentilla, jotka ovat toisistaan riippumattomasti asyklinen tai syklinen alempi alkyyli, aryyli, johon kuuluu karboaryyli tai heteroaryyli, alkenyyli alkynyyli, alkoksi, halogeeni, halogeenialkyyli, amino, merkapto, alkyylitio, 15 alkyylisulfinyyli, alkyylisulfonyyli, nitro, alkanoyyli, alkanoyylioksi, alkanoyyli- oksialkanoyyli, alkoksikarboksi, karbalkoksi -COOR, jossa R on alempi alkyyli, karboksiamido -CONRR’, jossa R ja R’ ovat toisistaan riippumattomasti alkyyli, formyyli, karboksyyli, hydroksi, syaani, atsido, keto ja niiden sykliset ketaalit, alkanoyyliamido, heteroaryylioksi, heterokarbosyklioksi ja hemisukkinaattiesterisuolat, t;# 20 termiä’’alempi” käytetään tässä yhteydessä orgaanisten radikaalien tai yhdisteiden * • * · · .... ··, yhteydessä määrittämään ryhmiä, joissa on jopa kymmenen, jossa kymmenen kuuluu • «« joukkoon, hiiliatomia, jotka voivat olla suorassa ketjussa, haarautuneena tai syklisenä, termi ’’heteroaryyli” tarkoittaa hiiltä sisältäviä 5 - 14 jäsenisiä syklisiä tyydyttymättömiä • · * . radikaaleja, jotka sisältävät yksi, kaksi, kolme tai neljä O-, N-tai S-atomia ja joilla on 6,10 • · · ;*|·. 25 tai 14 π-elektronia delokalisoituneena yhteen tai useampaan renkaaseen.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti • I» » substituoitu imidatsolyyliasetyyliryhmä. • * • · · * * « • ·· ·
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-21-(l’- • · * imidatsolyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l-imidatsoly>di)-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(l- * · imidatsolyyli)-5p-19-nor-pregnan-20-oni,3a-hydroksi-21-[lH-(4-metyyli-5-karboksyyli)imidatsol-l-yyli)-5p-pregnan-20-onin etyyliesteri, 3a-hydroksi-21- (Γ- 118008 imidatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni, 3P-etynyyli-3a-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)-5 β-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(r-imidatsolyyli)-3P-metyyli-5a-pregnan-20-oni, 3α-hydroksi-21-[lH-(2-metyyli)imidatsol-l-yyli]-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-trifluorimetyyli-21-(1-imidatsolyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-[ 1 H-(2’-5 formyyli)imidatsol-l-yyli)]-5p-pregnan-20-oni tai 3a-hydroksi-3p-trifIuorirnetyyli-21-(1-imidatsolyyli)-5p-19-nor-pregnan-20-oni.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti substituoitll pyratsolyyliaselyyliryhmä. 10
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hvdroksi-21-(pyratsoM-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(pyratsol-l-yyli)- 5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(lH'3,5-dimetyylipyratsolyyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(l‘-pyratso]yy)i)-3P-metyyli-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(pyratsol-l-yyli)-3P-trifluori- 15 metyyli-5P-pregnan-20-oni tai 3a-hydroksi-21-(pyratsol-l-yyli)-3p-trifluorimetyyli-53-19-nor-pregnan-20-oni.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti substituoitu triatsolyyliasetyyliryhmä. 20 «··
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-3P- * · • «♦ ] metyyli-21-(r,2’,4’-triatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l- • · ..#.e yyli)-21-(l,2,3-triatsol-2-yy]i)-5p-19-nor-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21-(2H-l,2,3- I .·, triatsol-2-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p'metyyli-21-(2’H'l,2\3’-triatsol-2'- * · » * · · 25 yyli)-5a-pregnan-20-oni, 3p-etynyyli-3a-hydroksi-21-(r,2’,4’-triatsolyyli)-5p-pregnan-20- • * · oni, 3a-hydroksi-3p-methyl-21 -(l’,2’,3’-triatsol-l‘-yyli)-5a-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi- • ;*; 21-(r,2’,4’-triatsol-l-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)- • p# » ;***; 21-(1,2,4-triatsol-l-yyli)-5p-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21 - * « · : [·. (l,2,3-triatsol-l-yyli)-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-2l- ; • « · .··*. 30 (lH-l,2,3-triatsol-l-yyli)-5P-19-nor-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-3P-trifluorimetyyli-21- • · *. (lH-l,2,3-triatsol-l-yyli)-5P-19-nor-pregnan-20-oni tai 3a-hydroksi-3P-trifluorinietyyli- ··« 21-(lH-l,2,3-triatsol-l-yyli)-5P-19-pregnan-20-oni. * · «t· 118008
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti substituoitu tetratsolyyliasetyyliryhmä.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-21-5 (2’H-l,2,3,4-tetratsol-2‘-yyli)-5P-pregnan-20-oni, 3a-hydroksi-21,2,3,4-tetratsol- . , r-yyli)-5P-pregnan-20-oni tai 3a-hydroksi-3p-(4-hydroksibutyn-l-yyli)-21-(tetratsol-l- yyli)-5p-pregnan-20-oni.
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti 10 substituoitu bentsimidatsolyyliasetyyliryhmä.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-21-(1 ‘-bentsimidatso)yyli)-5p-pregnan*20-oni, 21-(1 ‘-bentsimidatsolyyli)-3a-hydroksi-3P-metyyli-5a-pregnan-20-oni tai 21-(r-bentsimidatsolyyli)-3a-hydroksi-3P-metyyli-5a- 15 pregnan-20-oni.
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti substituoitu purinyyliasetyyliryhmä.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-21- ··" (9,H-purin-9’-yyli)-5P-pregnan-20-oni tai 3a-hydroksi-21-(7’H-purin-7’-yyli)-5p-pregnan- • ** 20-oni. « · • · · • * · ♦ * ♦ # . .·. 14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R on morfolinoryhmä ja ««·
25 R3 on mahdollisesti substituoitu triatsolyyliasetyyliryhmä. • ·*· 15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-2p- **· * morfolinyyli-21-(l,2,4-triatsolyyli)-5a-pregnan-20-oni. ··· » · • · · • * * • » · * ,*·*. 30 16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R3 on mahdollisesti • * M* *, substituoitu urasiiliasetyyliryhmä. ··· ♦ *·· *·· '· • · • ·
17. Patenttivaatimuksen 16 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 3a-hydroksi-21 -(r-urasiili)-5a-pregnan-20-oni. 98 11 8008 : :
18. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R on mahdollisesti substituoitu 1 -alkynyyliryhmä.
19. Farmaseuttinen koostumus, tunnettu siitä, että se käsittää jonkin patenttivaatimuksen 1 - 18 mukaista yhdistettä ja fannaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa.
20. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen valmistamiseksi, jota käytetään GABAA-reseptorikloridi-ionoforikompleksin 10 moduloimiseen eläinkohteessa sitoutumalla mainitun kompleksin neurosteroidikohtaan.
21. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen valmistamiseksi, jota käytetään stressin tai ahdistuneisuuden hoitamiseen tai estämiseen eläinkohteessa. 15
22. Jonkin patenttivaatimuksen 1 -18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen valmistamiseksi, jota käytetään halvauskohtausaktiivisuuden lievittämiseen tai estämiseen eläinkohteessa. :
23. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen **·1 2 3 ;·, valmistamiseksi, jota käytetään unettomuuden lievittämiseen tai estämiseen eläinkohteessa. • I· • · 1 1 · • ·
24. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen . valmistamiseksi, jota käytetään PMS:n tai PND:n lievittämiseen tai estämiseen ♦ 1·' • 1J\ 25 eläinkohteessa. ♦ · · • :1· 25. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen ··· « :1!1; valmistamiseksi, jota käytetään mielialahäiriöiden hoitamiseen tai estämiseen • ! ; .·. eläinkohteessa. • · « ·♦1 · 30 • · »·· *. 26. Patenttivaatimuksen 25 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että mainittu mielialahäiriö on ··· 111 masennus. • · 2 • · 3 99 11 8008 :
27. Jonkin patenttivaatimuksen 1-18 mukaisen yhdisteen käyttö sellaisen aineen valmistamiseksi, jota käytetään anestesian aikaansaamiseen eläinkohteessa.
28. Patenttivaatimuksen 27 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R| on alkoksialkyyli. 5
29. Jonkin patenttivaatimuksen 20 - 27 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että yhdiste on hapon farmaseuttisesti hyväksyttävä esteri tai diesteri, joka happo valitaan etikkahaposta, propionihaposta, maleiinihaposta, fumaarihaposta, askorbiinihaposta, pimeliinihaposta, meripihkahaposta, glutaarihaposta, bismetyleenisalisyylihaposta, metaanisulfonihaposta, 10 etaanidisulfonihaposta, oksaalihaposta, viinihaposta, salisyylihaposta, sitruunahaposta, glukonihaposta, itakonihaposta, glykolihaposta, p-aminobentsoehaposta, asparagiini-haposta, glutamiinihaposta, γ-aminovoihaposta, a-(2-hydroksietyyliamino)propioni- ; haposta, glysiinistä ja muista α-aminohapoista, fosforihaposta, rikkihaposta, glukuroni-hapostaja 1 -metyyli- 1,4-dihydronikotiinihaposta. 15
30. Jonkin patenttivaatimuksen 20 - 28 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että yhdiste on läsnä määrässä noin 1 mg - noin 100 mg annosyksikköä kohti, kun aine annetaan suonensisäisesti, ja noin 100 mg - noin 500 mg annosyksikköä kohti, kun ainetta ei anneta suonensisäisesti. • ««* * . • · · · ·» • · • ·· t • i ΐ1 *· ♦ ♦ · · • * • » *·. • » · ··· »·· ·«· .1 * ♦ · • · « • · « · · * · * • · ♦ · ··· • · • · ♦ *· • · * ♦ · • · · *·· · • · * • · , t * * * * * « · · 4 · · · I • · · • > • « • « · loo 1 1 8 0 0 8 Paten t k ra v:
FI963174A 1994-02-14 1996-08-13 Androstaanit ja pregnaanit GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi FI118008B (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19691994A 1994-02-14 1994-02-14
US19691994 1994-02-14
US34692794A 1994-11-23 1994-11-23
US34692794 1994-11-23
PCT/US1995/001712 WO1995021617A1 (en) 1994-02-14 1995-02-14 Androstanes and pregnanes for allosteric modulation of gaba receptor
US9501712 1995-02-14

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI963174A0 FI963174A0 (fi) 1996-08-13
FI963174A FI963174A (fi) 1996-09-25
FI118008B true FI118008B (fi) 2007-05-31

Family

ID=26892391

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI963174A FI118008B (fi) 1994-02-14 1996-08-13 Androstaanit ja pregnaanit GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi
FI20051271A FI118687B (fi) 1994-02-14 2005-12-09 Yhdisteet ja koostumukset GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI20051271A FI118687B (fi) 1994-02-14 2005-12-09 Yhdisteet ja koostumukset GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi

Country Status (18)

Country Link
EP (2) EP0752860B1 (fi)
JP (1) JP4066272B2 (fi)
KR (1) KR100338287B1 (fi)
AT (2) ATE375993T1 (fi)
AU (1) AU691905B2 (fi)
BR (1) BR9506779A (fi)
CA (1) CA2183231A1 (fi)
DE (2) DE69535623T2 (fi)
DK (2) DK0752860T3 (fi)
ES (2) ES2296594T3 (fi)
FI (2) FI118008B (fi)
GR (1) GR3034810T3 (fi)
HK (1) HK1014665A1 (fi)
IL (1) IL112638A (fi)
NO (1) NO308307B1 (fi)
NZ (1) NZ282939A (fi)
PT (2) PT752860E (fi)
WO (1) WO1995021617A1 (fi)

Families Citing this family (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6780853B1 (en) 1995-06-06 2004-08-24 Euro-Celtique S.A. Neuroactive steroids of the androstane and pregnane series
ATE284895T1 (de) * 1995-06-06 2005-01-15 Euro Celtique Sa Neuroaktive steroide der androstan- und pregnanreihe
US20010051599A1 (en) 1997-05-02 2001-12-13 Michael Z. Kagan Pregnan-3-ol-20-ones
EP1449846A1 (en) * 1999-04-29 2004-08-25 Euro-Celtique S.A. 3-alpha Hydroxy-3-beta methoxymethyl-21-heterocycle substituted steriods with anaesthetic activity
WO2000066614A1 (en) * 1999-04-29 2000-11-09 Purdue Pharma Ltd. 3α-HYDROXY-3β METHOXYMETHYL-21-HETEROCYCLE SUBSTITUTED STEROIDS WITH ANESTHETIC ACTIVITY
JP2001039954A (ja) * 1999-05-24 2001-02-13 Tomono Agrica Co Ltd ヘテロ環誘導体
DE60045751D1 (de) 1999-09-30 2011-04-28 Harbor Biosciences Inc Therapeutische Behandlung androgenrezeptorbedingter Leiden
US8771740B2 (en) 1999-12-20 2014-07-08 Nicholas J. Kerkhof Process for producing nanoparticles by spray drying
ES2240222T3 (es) 1999-12-20 2005-10-16 Nicholas J. Kerkhof Procedimiento para producir particulas nanometricas mediante secado por pulverizacion en lecho fluidizado.
US8569275B2 (en) 2002-08-28 2013-10-29 Harbor Therapeutics, Inc. Steroids having 7-oxgen and 17-heteroaryl substitution
KR20100095661A (ko) * 2005-06-09 2010-08-31 유로-셀띠끄 소시에떼 아노님 신경 자극성 스테로이드의 약학적 조성물 및 그 용도
EP2258359A3 (en) 2005-08-26 2011-04-06 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation with sabcomelin
EP1928437A2 (en) 2005-08-26 2008-06-11 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation
EP1940389A2 (en) 2005-10-21 2008-07-09 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by pde inhibition
CA2625210A1 (en) 2005-10-31 2007-05-10 Braincells, Inc. Gaba receptor mediated modulation of neurogenesis
US20100216734A1 (en) 2006-03-08 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
EP2377531A2 (en) 2006-05-09 2011-10-19 Braincells, Inc. Neurogenesis by modulating angiotensin
CA2651862A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Braincells, Inc. 5 ht receptor mediated neurogenesis
EP2068872A1 (en) 2006-09-08 2009-06-17 Braincells, Inc. Combinations containing a 4-acylaminopyridine derivative
US20100184806A1 (en) 2006-09-19 2010-07-22 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by ppar agents
AU2007299010B2 (en) * 2006-09-19 2013-01-31 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Estratriene derivatives and their uses as 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors
ES2662500T3 (es) 2006-11-21 2018-04-06 Asarina Pharma Ab El uso de esteroides de pregnano y androstano para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central
WO2008157460A1 (en) 2007-06-15 2008-12-24 Cook, Kevin, M. Androstane and pregnane steroids with potent allosteric gaba receptor chloride ionophore modulating properties
US20100216805A1 (en) 2009-02-25 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis using d-cycloserine combinations
CZ302050B6 (cs) * 2009-08-04 2010-09-15 Ústav organické chemie a biochemie, Akademie ved CR, v.v.i. 3alfa-Hydroxy-21ksí,22-oxido-21-homo-5alfa-pregnan-20-on, zpusob jeho výroby a jeho použití
LT2753632T (lt) 2011-09-08 2023-07-10 Sage Therapeutics, Inc. Neuroaktyvieji steroidai, jų kompozicijos ir naudojimas
WO2013043985A1 (en) 2011-09-23 2013-03-28 The Regents Of The University Of California Edible oils to enhance delivery of orally administered steroids
EP2766380B1 (en) * 2011-10-14 2019-04-24 Sage Therapeutics, Inc. 3,3 disubstituted 19-nor pregnane compounds, compositions, and uses thereof
SI2806877T1 (sl) 2012-01-23 2020-01-31 Sage Therapeutics, Inc. Nevroaktivne steroidne formulacije, ki obsegajo kompleks alopregnanolona in sulfobutil etra beta-ciklodekstrina
CN102702126B (zh) * 2012-04-26 2014-08-06 四川大学华西医院 一种可用于麻醉剂的化合物
JP2016501876A (ja) 2012-11-30 2016-01-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ステロイドの抗痙攣活性
CN105246486B (zh) 2013-03-13 2020-11-03 萨奇治疗股份有限公司 神经活性甾类化合物
WO2014169831A1 (en) 2013-04-17 2014-10-23 Sage Therapeutics, Inc. 19-nor c3,3-disubstituted c21-c-bound heteroaryl steroids and methods of use thereof
WO2014169836A1 (en) 2013-04-17 2014-10-23 Sage Therapeutics, Inc. 19-nor neuroactive steroids and methods of use thereof
CN105246909B (zh) * 2013-04-17 2020-10-13 萨奇治疗股份有限公司 刺激神经活性的19-去甲类固醇及其使用方法
US9512165B2 (en) * 2013-04-17 2016-12-06 Sage Therapeutics, Inc. 19-nor C3, 3-disubstituted C21-N-pyrazolyl steroids and methods of use thereof
BR112016000975B1 (pt) * 2013-07-19 2020-10-06 Sage Therapeutics, Inc. Compostos esteróides neuroativos e composições compreendendo os mesmos
LT3488852T (lt) * 2013-08-23 2021-02-25 Sage Therapeutics, Inc. Neuroaktyvūs steroidai, kompozicijos, ir jų naudojimas
HRP20221294T1 (hr) * 2014-05-29 2023-03-03 Sage Therapeutics, Inc. Neuroaktivni steroidi, njihovi pripravci i uporabe
EP3157528B1 (en) 2014-06-18 2023-09-13 Sage Therapeutics, Inc. Oxysterols and methods of use thereof
US10246482B2 (en) 2014-06-18 2019-04-02 Sage Therapeutics, Inc. Neuroactive steroids, compositions, and uses thereof
EP3188734A4 (en) 2014-09-02 2018-01-10 The Texas A&M University System Method of treating organophosphate intoxication
HUE051488T2 (hu) 2014-10-16 2021-03-01 Sage Therapeutics Inc Készítmények és eljárások központi idegrendszeri rendellenességek kezelésére
MY190408A (en) * 2014-10-16 2022-04-21 Sage Therapeutics Inc Compositions and methods for treating cns disorders
SI3224269T1 (sl) * 2014-11-27 2020-10-30 Sage Therapeutics, Inc. Sestavki in metode za zdravljenje CNS motenj
ES2857082T3 (es) 2015-01-26 2021-09-28 Sage Therapeutics Inc Composiciones y métodos para el tratamiento de trastornos del SNC
DK3258939T3 (da) 2015-02-20 2022-12-12 Sage Therapeutics Inc Neuroaktive steroider, sammensætninger og anvendelser heraf
ES2884086T3 (es) 2015-07-06 2021-12-10 Sage Therapeutics Inc Oxisteroles y sus procedimientos de uso
MA42409A (fr) 2015-07-06 2018-05-16 Sage Therapeutics Inc Oxystérols et leurs procédés d'utilisation
RS61718B1 (sr) 2015-07-06 2021-05-31 Sage Therapeutics Inc Oksisteroli i postupci za njihovu upotrebu
US9637514B1 (en) 2015-10-26 2017-05-02 MAX BioPharma, Inc. Oxysterols and hedgehog signaling
JOP20170059B1 (ar) 2016-03-08 2021-08-17 Sage Therapeutics Inc ستيرويدات وتركيبات نشطة عصبيًا واستخداماتها
RS63280B1 (sr) 2016-04-01 2022-06-30 Sage Therapeutics Inc Oksisteroli i postupci za njihovu upotrebu
US10752653B2 (en) 2016-05-06 2020-08-25 Sage Therapeutics, Inc. Oxysterols and methods of use thereof
PL3481846T3 (pl) 2016-07-07 2021-12-20 Sage Therapeutics, Inc. 11-podstawione 24-hydroksysterole do stosowania w leczeniu stanów związanych z NMDA
DK3481845T3 (da) 2016-07-11 2023-11-27 Sage Therapeutics Inc C17, c20 og c21 substituerede neuroaktive steroider og deres anvendelsesmetoder
MA46351A (fr) 2016-09-30 2021-06-02 Sage Therapeutics Inc Oxystérols substitués en c7 et procédés en tant que modulateurs nmda
RU2019115112A (ru) 2016-10-18 2020-11-24 Сейдж Терапьютикс, Инк. Оксистеролы и способы их применения
IL266093B2 (en) 2016-10-18 2024-02-01 Sage Therapeutics Inc Oxysterols and methods of using them
UY38213A (es) * 2018-05-04 2019-10-31 Acerus Pharmaceuticals Corp Derivados de neuroesteroides y usos de estos
CN109503694A (zh) * 2018-11-21 2019-03-22 苏州闻天医药科技有限公司 一种新型gabaa受体调节剂及其用途
WO2020143640A1 (zh) * 2019-01-08 2020-07-16 成都康弘药业集团股份有限公司 甾体类化合物、用途及其制备方法
CN111410673A (zh) * 2019-01-08 2020-07-14 成都康弘药业集团股份有限公司 甾体类化合物、用途及其制备方法
KR20210116523A (ko) * 2019-01-14 2021-09-27 베이징 슈안이 파마사이언시스 컴퍼니, 리미티드 테트라졸론 치환된 스테로이드 및 이의 용도
KR20220016098A (ko) 2019-05-31 2022-02-08 세이지 테라퓨틱스, 인크. 신경활성 스테로이드 및 이의 조성물
CN112638928B (zh) * 2019-08-07 2023-12-22 上海翰森生物医药科技有限公司 一种甾族类衍生物调节剂的盐及其晶型
CN112341511A (zh) * 2019-08-09 2021-02-09 南京诺瑞特医药科技有限公司 3-羟基-5-孕烷-20-酮衍生物及其用途
US10857163B1 (en) 2019-09-30 2020-12-08 Athenen Therapeutics, Inc. Compositions that preferentially potentiate subtypes of GABAA receptors and methods of use thereof
US20230416300A1 (en) * 2020-08-20 2023-12-28 Intra-Cellular Therapies, Inc. Organic compounds
WO2023060067A1 (en) 2021-10-04 2023-04-13 Marinus Pharmaceuticals, Inc. Amorphous solid dispersion ganaxolone formulation

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3274179A (en) * 1964-03-19 1966-09-20 Merck & Co Inc 3-haloethynyl-3-hydroxy derivatives of the androstane-17-one and pregnane-20-one series
US3953429A (en) * 1970-12-17 1976-04-27 Glaxo Laboratories Limited Anaesthetic steroids of the androstance and pregnane series
GB1430942A (en) * 1972-05-05 1976-04-07 Glaxo Lab Ltd 21-substituted 3alpha-hydroxy pregnanes
US5120723A (en) * 1987-08-25 1992-06-09 University Of Southern California Method, compositions, and compounds for modulating brain excitability
US5232917A (en) * 1987-08-25 1993-08-03 University Of Southern California Methods, compositions, and compounds for allosteric modulation of the GABA receptor by members of the androstane and pregnane series
EP0603312A4 (en) * 1991-09-13 1995-06-07 Cocensys Inc NEW GABA A RECEPTOR WITH STEROID BINDING POINTS.
AU698834B2 (en) * 1993-05-24 1998-11-12 Purdue Pharma Ltd. Methods and compositions for inducing sleep

Also Published As

Publication number Publication date
HK1014665A1 (en) 1999-09-30
EP1038880A3 (en) 2003-07-16
IL112638A (en) 2003-10-31
DE69535623D1 (de) 2007-11-29
AU691905B2 (en) 1998-05-28
EP1038880B1 (en) 2007-10-17
ATE195654T1 (de) 2000-09-15
ES2296594T3 (es) 2008-05-01
DE69518509D1 (de) 2000-09-28
GR3034810T3 (en) 2001-02-28
FI963174A (fi) 1996-09-25
JPH09510701A (ja) 1997-10-28
IL112638A0 (en) 1995-05-26
WO1995021617A1 (en) 1995-08-17
ATE375993T1 (de) 2007-11-15
PT752860E (pt) 2000-12-29
NO963355D0 (no) 1996-08-12
EP0752860A4 (en) 1998-05-06
EP0752860B1 (en) 2000-08-23
AU2090195A (en) 1995-08-29
JP4066272B2 (ja) 2008-03-26
NO963355L (no) 1996-10-11
PT1038880E (pt) 2008-01-29
DK1038880T3 (da) 2008-03-03
ES2151593T3 (es) 2001-01-01
BR9506779A (pt) 1997-10-14
FI118687B (fi) 2008-02-15
CA2183231A1 (en) 1995-08-17
DE69535623T2 (de) 2008-07-24
FI963174A0 (fi) 1996-08-13
EP0752860A1 (en) 1997-01-15
FI20051271A (fi) 2005-12-09
KR100338287B1 (ko) 2002-11-30
DK0752860T3 (da) 2000-11-13
NO308307B1 (no) 2000-08-28
DE69518509T2 (de) 2001-04-19
EP1038880A2 (en) 2000-09-27
NZ282939A (en) 1998-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI118008B (fi) Androstaanit ja pregnaanit GABA-reseptorin allosteeriseksi moduloimiseksi
US6277838B1 (en) Methods for allosteric modulation of the GABA receptor by members of the androstane and pregnane series
AU725214B2 (en) Neuroactive steroids of the androstane and pregnane series
KR100394548B1 (ko) Gaba수용체의알로스테릭조절을위한안드로스탄및프레그난계열화합물
US5120723A (en) Method, compositions, and compounds for modulating brain excitability
EP0554436B1 (en) Gaba receptor modulators
US5208227A (en) Method, compositions, and compounds for modulating brain excitability
US6780853B1 (en) Neuroactive steroids of the androstane and pregnane series
MXPA97009384A (en) Neuroactive steroids of the androstano ypregn series

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 118008

Country of ref document: FI

MM Patent lapsed