FI111726B

FI111726B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sulfatoitujen glykosaminoglykaanijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI111726B
Application number: FI923726A
Authority: FI
Inventors: Boeckel Constant Adriaan A Van; Maurice Petitou
Original assignee: Akzo Nv; Sanofi Synthelabo
Priority date: 1991-08-23
Filing date: 1992-08-19
Publication date: 2003-09-15
Also published as: HU211738A9; NO923297D0; NO179452C; CA2076063A1; HK1002032A1; DE69217774D1; ATE149504T1; DE69217774T2; EP0529715B1; JPH05194602A; KR930004324A; KR100274115B1; NZ244057A; TW213470B; AU656610B2; FI923726A0; CA2076063C; ES2101026T3; AU2121892A; DK0529715T3

Description

111726

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sulfatoitujen glyko saminoglykaanijohdannai s ten valmi s tamiseks i

Keksinnön kohteena on menetelmä sellaisten sul-5 fatoitujen glykosaminoglykaanijohdannaisten tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, joissa funktionaaliset N-sulfaatti-, N-asetaatti- ja hydroksiryhmät on korvattu alkoksi-, aryylioksi-, aralkoksi, O-sulfaatti- tai OALK(OALK)nOX-ryhmillä, jossa 10 ALK on alifaattinen hiilivetyryhmä, n on 0 - 5 ja X on alkyyli- tai aryyliryhmä, sillä edellytyksellä, että funktionaalisista ryhmistä vähintään kahta ei ole korvattu O-sulfaattiryhmällä. Keksinnön mukaisesti valmistetut sulfatoidut glykosaminoglykaanijohdannaiset ovat käyttökel-15 poisia lääkkeiden valmistukseen.

Sufatoidut glykosaminoglykaanijohdnnaiset ovat tunnettuja yhdisteitä. EP-patenttijulkaisussa 84 999 on esi merkiksi kuvattu glykoasaminoglykaanien kemialliseen yh-disteluokkaan kuuluvia pentasakkarideja, jotka ovat aktii-20 visia veren hyytymistä estäviä aineita. Näissä tunnetuissa yhdisteissä on paitsi hydroksiryhmiä O-sulfaatti-, N-sul-faatti- ja N-asetyyliryhmiä, kun sen sijaan anomeerinen • · hydroksiryhmä on joskus korvattu metoksiryhmällä. Kun j kaikki funktionaaliset ryhmät on korvattu O-sulfaatilla, ·'·*; 25 saadaan sellaisia EP-julkaisussa 230 023 kuvattuja persul- • · ; fatoituja hiilihydraatteja, kuten maltoosioktasulfaattia, • · jotka eivät normaalisti enää ole aktiivisia veren hyyty- • · * mistä estäviä aineita eivätkä siten sisälly esillä olevaan . keksintöön. Myöskään sellaisilla glykosaminoglykaanijoh- ’ 30 dannaisilla, joissa on sulfatoimaton anomeerinen hydroksi- i » » » t · ♦ « * I ( 2 111726 ryhmä ja joissa kaikki muut funktionaaliset ryhmät on korvattu O-sulfaatilla, ei enää ole haluttua veren hyytymistä estävää aktiivisuutta. Lukuun ottamatta anomeerista hydrok-siryhmää vähintään yhden muun ryhmän tulisi olla alkoksi, 5 aryylioksi, aralkoksi tai OALK (OALK) n0X, edullisesti alkoksi.

Päinvastoin kuin tunnetut glykosaminogykaanijohdan-naiset keksinnön mukaiset sulfatoidut glykosaminoglykaa-nijohdannaiset eivät sisällä vapaita hydroksiryhmiä eivätkä 10 myöskään N-sulfaatti- tai N-asetyyliryhmiä.

Nyt on keksitty, että keksinnön mukaisilla yhdisteillä on parempi sitomisaffiniteetti antitrombiini III:n suhteen kuin EP-julkaisussa 84 999 kuvatuilla luonnossa esiintyvillä pentasakkarideilla, minkä seurauksena kek-15 sinnön mukaisten yhdisteiden farmakokineettinen profiili on parempi, puoliintumisaika pidempi ja terapeuttiset annokset pienempiä ja sivuvaikutukset siten vähäisempiä. Lisäksi keksinnön mukaisten yhdisteiden hepariini-kofaktori II:n (HCII) välittämä antitrombiiniaktiivisuus on olennaisesti 20 parempi kuin alalla ennestään tunnetuilla yhdisteillä, joten ne ovat tehokkaampia trombiinin syntymistä estäviä .*.· aineita kuin nämä tunnetut yhdisteet. Sulfatoituja > · :/·· glykosaminoglykanoidijohdannaisia voidaan myös käyttää si- leiden lihassolujen uudiskasvua estävinä aineina ja siten ·'**: 25 verisuonten kehittymisen, syövän ja retrovirusinfektioiden, a » j kuten HIV-infektioiden, käsittelyyn.

* a

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen, sulfatoidun glykosaminoglykaanijoh- , dannaisen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan •(j;‘ 30 valmistamiseksi, jossa funktionaaliset N-sulfaatti-, N- a i a »tai » k I t k « » 3 111726 asetaatti- ja hydroksiryhmät on korvattu alkoksi-, aryylioksi-, aralkoksi-, O-sulfaatti- tai OALK (OALK) n0X-ryhmillä, jossa ALK on alifaattinen hiilivetyryhmä, n on 0 - 5 ja X on alkyyli- tai aryyliryhmä, sillä 5 edellytyksellä, että funktionaalisista ryhmistä vähintään kahta ei ole korvattu O-sulfaattiryhmällä, lukuunottamatta sellaisia hiilihydraattijohdannaisia, jotka käsittävät trisakkaridiyksikön, jolla on rakenne β-D-gluko-pyranuronosyyli-(1—>4 ) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyrano-10 syyli- (1_»4 ) -O-2-O-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli, ja niiden alkyloituja, aryloituja, aralkyloituja ja sulfatoituja j ohdannaisia.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että suojatut monosakkaridit liitetään yhteen suojatuiksi 15 disakkarideiksi, jotka valinnaisesti edelleen kytketään 3-6 sakkaridiyksikköä sisältäviksi oligosakkarideiksi, jonka jälkeen suojaryhmät osaksi tai kokonaan poistetaan ja vapaat hydroksiryhmät sulfatoidaan, jonka jälkeen mahdolliset jäljellä olevat suojaryhmät poistetaan ja yhdiste 20 valinnaisesti muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

* * · '..V Alkyyli-, aryyli- tai aralkyylifunktion omaavien . ·* yksikköjen sisällyttäminen saa lisäksi aikaan erittäin > '·. tärkeitä synteesietuja aikaisemmin tunnettuihin yhdistei- 25 siin verrattaessa. Kun hydroksiryhmiä muutetaan funktio- • · ;’*tj naalisiksi alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmiksi, niin • · useimmissa tapauksissa on tarpeetonta valmistaa väliaikai- • t » sesti suojattuja hiilihydraatteja, minkä johdosta syntee- .. . sitie on huomattavasti lyhyempi ja yksinkertaisempi, joi- « · 30 loin glukosamiiniyksiköiden korvaaminen glukoosiyksiköillä '·;·* edelleen yksinkertaistaa olennaisesti sakkaridien syntee- ·;· siä. Lisäksi keksinnön mukaisten yhdisteiden synteesissä on lisäetuna se, että sulfatoitavien hydroksiryhmien suo- • » · i · ·

Iitit 4 111726 jäämiseen välttämättömien, väliaikaisesti suojaavien ryhmien luonne ei ole kriittinen.

Keksinnön mukaisia edullisia sulfatoituja glykos-aminoglykanoidijohdannaisia ovat sellaiset, joissa on di-5 sakkaridiyksikkö, jonka kaava on I

ch2or k "Λ 10 —o.../ S-.o^v'N)— 1

/—\ °R

OR OR

15 jossa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta seuraavista: al-kyyli, aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; ja Q on karboksy-laatti tai CH2OR-ryhmä, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

20 Muita edullisia yhdisteitä ovat sulfatoitudut gly- kosaminoglykanoidijohdannaiset, joissa on disakkaridiyk-sikkö, jonka kaava on Ha tai Hb t i · _ m o-- o--

. 25 Q Q-w/ V«0R Q Q-w/ V.OR

--O......^ RO1"*^ RO OR --0 . 30 L I Ia _I L IIb - • i • joissa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen ···; R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta seuraavista: ai- • » · *...· kyyli, aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; ja kumpikin Q on 5 111726 toisistaan riippumatta karboksylaatti- tai CfoOR-ryhmä, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Erityisen käyttökelpoisia keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat sulfatoidut glykosaminoglykaanijohdannaiset, 5 joiden kaava on III

CH-tOR

"rS

10 AO../ Wo^V^ob III

) \ ÖR

OR OR

jossa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen 15 R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta seuraavista: al

kyyli, aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; Q on karboksylaatti tai CH20R-ryhmä; A on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on IV

o.

20 Vo

v/ W

: OR, OR

25 jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, ;‘-(j yksi ryhmistä Ri ja R2 on alkyyli, aryyli, aralkyyli tai sulfaatti ja toinen on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sul- • * *

faatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on V

1 1 * < · »

30 Q

Jry

OR OR

•", 35 111726 6

jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, ja B on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK(OALK) n0X (jossa ALK on alifaattinen hiilivetyryhmä, n on 0 - 5, ja X on alkyyli- tai aryyliryhmä) tai hiilihydraattiryhmä, jonka 5 kaava on VI

V- r4,\ y*°B vi

OR

jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, yksi ryhmistä R3 ja R4 on alkoksi, aryylioksi, aralkoksi tai O-sulfaatti ja toinen on suora sidos, ja B' on alkyyli, 15 aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK(OALK) n0X (jossa ALK, n ja X merkitsevät samaa kuin edellä) tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on VII

y°

2° R,*/ V/* 0R3 VII

: r3 <*3 1 · · 1 1 » » · j jossa aaltoviivat, Q ja R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin

25 edellä, jokainen R5 merkitsee toisistaan riippumatta jota-j kin R:lle ilmoitetuista merkityksistä tai on ALK (OALK) n0X

(jossa ALK n ja X merkitsevät samaa kuin edellä), tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

.. . Käyttökelpoisia sulfatoituja glykosaminoglykaani-

30 johdannaisia ovat myös sellaiset, joiden kaava on VIII

OB

Q Q W V·· OR

OAt OR

35 ^ ^ 111726

jossa aaltoviivat tarkoittavat a- tai B-sidosta, jokainen R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta seuraavista: al-kyyli, aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; kumpikin Q on toisistaan riippumatta karboksylaatti- tai CH2OR-ryhmä, toinen 5 ryhmistä Ax ja A2 on alkyyli, aryyli aralkyyli tai sulfaatti ja toinen on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on IV

Q

10 Iv

ORj OR

jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, 15 yksi ryhmistä Rj ja R2 on alkyyli, aryyli, aralkyyli tai sulfaatti ja toinen on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on V

» Λλ.

) \ V

: or OR

; · jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä,

' ” 25 ja B on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK(0ALK)n0X

: .· (jossa ALK on alifaattinen hiilivetyryhmä, n on 0 - 5, ja X on alkyyli- tai aryyliryhmä) tai hiilihydraattiryhmä, * i *

: jonka kaava on VI

Q

iv: 30 V-o R4i/v/ Y*. OB’

H

R3 OR

8 111726 jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, yksi ryhmistä R3 ja R4 on alkoksi, aryylioksi, aralkoksi tai O-sulfaatti ja toinen on suora sidos, ja B' on alkyy-li, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK(OALK)nOX (jossa ALK,

5 n ja X merkitsevät samaa kuin edellä) tai hiilihydraatti-ryhmä, jonka kaava on VII

Vo rM W ors 10 V-< VI1 r3 or5 jossa aaltoviivat, Q ja R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, jokainen R5 merkitsee toisistaan riippumatta jota-15 kin R:lle ilmoitetuista merkityksistä tai on ALK(0ALK)n0X (jossa ALK, n ja X merkitsevät samaa kuin edellä), tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

R:n, Rx:n, R2:n, A:n, Ax:n, A2:n, X:n, B:n ja B' määritelmänä oleva alkyyliryhmä on substituoimaton tai NR'R"-20 substituoitu, haara- tai suoraketjuinen alkyyliryhmä, jossa on 1 - 20 hiiliatomia, tai sykloalkyyliryhmä, jossa on 3-8 hiiliatomia. Eri R-ryhmien alkyyliryhmät voivat olla • * ♦ erilaisia. Esimerkkejä ovat metyyli, etyyli, isopropyyli, « * » *. butyyli, sek-butyyli, pentyyli, neopentyyli, heksyyli, • ’· 25 oktyyli, dekyyli, undekyyli, dodekyyli, tridekyyli, tetra- • ' : dekyyli, pentadekyyli, heksadekyyli, oktadekyyli ja eiko- : \: syyli. Edullisia ovat 1-6 hiiliatomia sisältävät alkyy- liryhmät. Edullisempia ovat 1-4 hiiliatomia sisältävät alkyyliryhmät ja edullisin on metyyliryhmä.

30 Ryhmä NR'R" on aminoryhmä, jossa R' ja R" on valit- *..! tu toisistaan riippumatta seuraavista: vety, alkyyli (edellä määritelty), asyyli (edullisesti asyyliryhmä, joka on johdettu 2-6 hiiliatomia sisältävästä alifaattisesta : hiilivetyryhmästä), bentsyylioksikarbonyyli, karboksyyli 35 tai S03'· tai R' ja R" muodostavat yhdessä typpiatomin kans- 9 111726 sa, johon ne liittyvät, syklisen amidin tai imidin (esimerkkejä ovat ftaloyyliamino-, sukkinyyliamino-, trimelli-tyyliaminoryhmät ja muut senkaltaiset ryhmät).

Ilmaisu aryyli määriteltäessä ryhmiä R, Ri, R2, A, 5 Ai, A2, X, B ja B' tarkoittaa aromaattista ryhmää, edullisesti fenyyliä, jossa voi olla substituentteina OH, 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyli- tai alkoksiryhmä, halogeeni (edullisesti fluori, kloori tai bromi), CF3 tai NR'R", jossa R' ja R" merkitsevät samaa kuin edellä. Ilmaisu aral-10 kyyli tarkoittaa aralkyyliryhmää, jonka alkyyliosassa on 1-4 hiiliatomia ja jonka aryyliosa on edellä määritelty aryyli.

Ilmaisuilla alkoksi, aryylioksi ja aralkoksi määriteltäessä ryhmiä R3 ja R4 on samat merkitykset kuin edellä 15 vastaavasti alkyyli-, aryyli- ja aralkyyliryhmillä määriteltäessä ryhmiä R, Ri, R2, A, Αχ, A2, X, B ja B'.

Ilmaisu ALK tarkoittaa alifaattista hiilivetyryhmää, jossa on 2 - 6 hiiliatomia. ALK voi olla haara- tai suoraketjuinen, tyydyttynyt tai tyydyttymätön hiilivety- 20 ryhmä. Edullisia ALK-ryhmiä ovat tyydyttyneet, edullisemmin suoraketjuiset hiilivetyryhmät. Edullisissa ALK-ryhmissä on :,·,ί 2-4 hiiliatomia. Esimerkkejä AlK-ryhmistä ovat 1,2- : etaanidiyyli, 1,3-propaanidiyyli, 1,4-butaanidiyyli, 1- ·1·.. metyyli-1,2-etaanidiyyli, 2-propeeni-l, 3-diyyli ja 2,4- 25 dimetyyli-1,4-butaanidiyyli. Edullisin on 1,2-etaanidiyyli.

.·. : Alaindeksi "n" kaavassa ALK(OALK)nOX on kokonaisluku • · · 0-5, edullisesti 1-3. Edullisimmin n on 1.

• · ♦ • · » * Ilmaisu "a- tai β-sidos" tarkoittaa, että kyseinen sidos on vastaavasti trans- tai cis-asemassa kyseisen sak- • -1 30 karidiyksikön anomeerisen sidoksen suhteen.

'...· Ilmaisu sulfatoitu glykosaminoglykaani johdannainen tarkoittaa sulfatoitua glykosaminoglykanoidijohdannaista, .·1·. jossa N-sulfaattiryhmä (t) on korvattu alkoksi-, aryyliok- I 1 si-, aralkoksiryhmillä ja edullisesti O-sulfaattiryhmillä, 10 111726 kun sen sijaan yksi tai useampi uronihappoyksiköistä voi olla korvattu hiilihydraattiyksiköllä, jossa on ryhmä CH2OR karboksylaattiryhmän sijasta. Glykosaminoglykaani on hiilihydraatti, joka kuuluu glykosaminoglykaanien tunnettuun 5 kemialliseen yhdisteluokkaan.

Edullisissa yhdisteissä R on alkyyli, edullisemmin metyyli, joka sijaitsee sellaisissa kohdissa, joissa luonnossa esiintyvissä glykosaminoglykaaneissa on vapaa hyd-roksiryhmä tai asetamidoryhmä, ja R on sulfaatti sellai-10 sissa kohdissa, joissa vastaavissa luonnossa esiintyvissä glykosaminoglykaaneissa on sulfaattiryhmä. Erityisen edullisia ovat yhdisteet, joissa on 5 - 8 sakkaridiyksikköä (pentasakkarideista oktasakkarideihin).

Yleisesti uskotaan, että polaarisella monipiste-15 avainvaikutuksella on kaikkialla molekyylibiologiassa korkean selektiivisyyden kannalta olennaista merkitystä ei-kovalenttisessa molekyylien yhdistymisessä ja että yhdenkin avainasemassa olevan hydroksiryhmän korvaaminen oligosakkaridissa hydrofobisella ryhmällä (ja säännöllisesti 20 useampien hydroksiryhmien läsnäolo on osoittautunut olennaisen tärkeäksi kompleksinmuodostuksen kannalta) voi ai-heuttaa proteiiniaf f initeetin täydellisen häviämisen. Yl- * · lättäen kuitenkin keksinnön mukaiset edulliset yhdisteet, joissa on O-alkyyli- ja O-sulf aattiryhmiä eikä lainkaan 25 vapaita hydroksiryhmiä, ovat edelleen täysin aktiivisia.

* · .·, : Sähkövarauksella varustettuja ryhmiä vastaavat vas- • 1 · • · t*;'§ taionit ovat farmaseuttisesti hyväksyttäviä vastaioneja, § · · kuten vetyioneja, edullisemmin alkalimetalli- tai maa- ,, , alkalimetalli-ioneja, esim. natrium-, kalsium- tai magne- • * 1 • ·’ 30 siumioneja.

’· Keksinnön mukaisia hiilihydraatteja voidaan valmis- ··> taa polysakkaridien synteesissä käytetyillä alalla hyvin tunnetuilla menetelmillä. Tätä koskien viitataan erityisesti edellä mainittuun EP-patenttijulkaisuun 84 999, jos-35 sa on esitetty polysakkaridien synteesimenetelmiä. Sopi- u 111726 vassa menetelmässä esillä olevan keksinnön mukaisten sul-fatoitujen glykosaminoglykanoidijohdannaisten valmistamiseksi suojatut monosakkaridit liitetään yhteen suojatuiksi disakkarideiksi, jotka valinnaisesti edelleen liitetään 3 -5 6 yksikköä sisältäviksi oligosakkarideiksi, jonka jälkeen suojaryhmät täysin tai osittain lohkaistaan ja vapaat hydroksiryhmät sulfatoidaan, jonka jälkeen mahdolliset jäljellä olevat suojaryhmät lohkaistaan ja saatu yhdiste valinnaisesti muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi 10 suolaksi.

Monosakkaridien kondensaatio on mahdollista suorittaa vaiheittain. Yleensä kuitenkin rakenneosat, jotka koostuvat D-glukoosista, L-idoosista, D-glukuronihaposta tai L-iduronihaposta ja joihin on sopivasti liitetty tar-15 vittavat funktionaaliset alkyyli-, aryyli- tai aralkyyli- ryhmät tai väliaikaisesti suojaavat ryhmät, kondensoidaan yhteen halutussa järjestyksessä. Tällä tavalla voidaan valmistaa (suojattu) sakkaridiyksikkö, joka voidaan liittää toisiin sakkaridiyksiköihin tai niiden suojattuihin 20 johdannaisiin. Sopivat suojaryhmät ovat hiilihydraattike- miassa hyvin tunnettuja. Hydroksiryhmien edullisia suoja-ryhmiä ovat bentsyyli ja asetyyli, uronihappojen karboksy-:,·>> laattiryhmän edullisia suojaryhmiä ovat metyyli ja bent- syyli. Muita suojaryhmiä, kuten levulinoyyli-, klooriase-25 tyyli-, trityyli-, bentsoyyliryhmiä ym., voidaan yhtä hyvin .·. : käyttää. Sakkaridien liittäminen suoritetaan sinänsä • - · • · tunnetulla tavalla, esim. poistamalla glykosyyli-donorin suojaryhmä 1-asemasta ja/tai aktivoimalla tämä asema (esim. ,, , muodostamalla bromidi-, pentenyyli-, fluoridi-, » · t • ·’ 30 tioglykosidi- tai triklooriasetaimidijohdannainen) ja * » liittämällä aktivoitu glykosyyli-donori yhteen valinnai-·· sesti suojatun glykosyyliakseptorin kanssa.

Laskimoveritulpan käsittelyyn tai sileiden lihasso-y lujen uudiskasvun ehkäisyyn keksinnön mukaisia yhdisteitä ·! 35 voidaan antaa ruoansulatuskanavan kautta tai sen ulkopuo- 12 111726 lisesti ihmisen päivittäisen annoksen ollessa edullisesti 0,001 - 10 mg/kehonpaino-kg. Sekoitettuina farmaseuttisesti sopivien apuaineiden kanssa yhdisteet voidaan puristaa kiinteiksi annosyksiköiksi, kuten pillereiksi ja tableteik-5 si, tai valmistaa kapseleiksi tai suppositoreiksi. Yhdisteitä voidaan myös käyttää injektiovalmisteina farmaseuttisesti sopivien nesteiden kanssa muodostettuina liuoksina, suspensioina, emulsioina, tai suihkevalmisteina, esim. nenäsuihkeina. Keksintöä kuvataan lähemmin seuraavissa 10 esimerkeissä.

Esimerkki 1 2-(fenyylimetyylioksikarbonyyliamino)etyyli-O-3,4-di-O-metyyli-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1—>4) -O- 2,3-di-0-metyyli-B-D-glukopyranuronosyyli- (1—>4) -0-2,3,6-15 tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidi-heksakisnatriumsuola a. 2-(fenyylimetyylioksikarbonyyliamino)etyyli-O-6- O-asetyyli-3,4-di-O-metyyli-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4)-0-(metyyli-2,3-di-0-metyyli-h-D-glukopyranuronaatti)-(1_»4) -0-3,4-asetyyli-2-0-fenyylimetyyli-a-D-glukopyranosidi 20 (0,0466 mmol) saippuoitiin natriumhydroksidilla, jolloin saatiin 2-(fenyylimetyylioksikarbonyyliamino)etyyli-O-2-O-fenyylimetyyli-3,4-di-O-metyyli-a-D-glukopyranosyyli-'·· (1—>4) -0-2, 3-di-0-metyyli-B-D-glukopyranuronosyyli- (1_>.4) - : h. O-2-O-fenyylimetyyli-a-D-glukopyranosidi (57 mg) , jota 25 käytettiin ilman enempää puhdistamista.

: b. 2-(fenyylimetyylioksikarbonyyliamino) etyyli-O-2- 0- fenyylimetyyli-3,4-di-O-metyyli-a-D-glukopyranosyyli- • · · (1_>4)-0-2,3-di-0-metyyli-h-D-glukopyranuronosyyli-(1—>4) - .. . 0-2-0-fenyylimetyyli-oi-D-glukopyranosidia (25 mg) sekoi- » » * 30 tettiin tert-butanolissa vetykehässä 24 tuntia 10-% risen • » ’··" Pd/C-katalysaattorin läsnä ollessa. Seos suodatettiin, ·.·· jolloin saatiin epäpuhdas 2-aminoetyyli-0-3, 4-di-O-metyyli- 01- D-glukopyranosyyli- (1_>.4) -0-2,3-di-0-metyyli-h-D-glu- ·, kopyranuronosyyli- (1—>4) -O-oi-D-glukopyranosidi, jota käy- ···· 35 tettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.

* > 13 111726 c. 2-aminoetyyli-0-3,4-di-0-metyyli-a-D-glukopyra-nosyyli- (1—>4)-0-2,3-di-0-metyyli-h-D-glukopyranuronosyyli-(1—>4)-Ο-α-D-glukopyranosidi (0,154 mmol) ja fenyylimetyy-lioksikarbonyylikloridi (0,23 mmol) saatettiin reagoimaan 5 toistensa kanssa vedessä (4 ml) natriumvetykarbonaatin (35 mg) läsnä ollessa. Reaktioseos geelisuodatettiin, jolloin liuottimen haihduttamisen jälkeen saatiin tuote (130 mg), jota käytettiin suoraan seuraavassa sulfatointi-vaiheessa.

10 d. 2-(fenyylimetyylioksikarbonyyliamino)etyyli-O- 3, 4-di-O-metyyli-a-D-glukopyranosyyli- (l-»4)-0-2,3-di-O-metyyli-fi-D-glukopyranuronosyyli-(1—>4) -O-a-D-glukopyrano-sidi (0,154 mmol) ja trietyyliamiini-rikkitrioksidikomp-leksi (0,7 g) saatettiin reagoimaan toistensa kanssa N,N-15 dimetyyliformamidissa 24 tunnin ajan 50 °C:ssa. Reaktio- seokseen lisättiin natriumvetykarbonaattia (1,2 g) ja vettä (12 ml) ja 2 tunnin kuluttua seos kaadettiin Sephadex G25 -pylvään yläosaan ja eluoitiin vedellä. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 2-20 (fenyylimetyylioksikarbonyyliamino)etyyli-0-3,4-di-0- metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4) -0-2,3- M,· di-O-metyyli^-D-glukopyranuronosyyli- (l->4) -0-2,3, 6-tri-0- sulfo-a-D-glukopyranosidi-heksakisnatriumsuola (230 mg).

Esimerkki 2 • •" · ’ · 25 Esimerkin 1 tuote muutettiin tunnetulla tavalla • · .·,: hydrogenolyysin avulla 2-aminoetyyli-0-3,4-di-0-metyyli- • ‘ · t·j·§ 2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1—>4 ) -0-2,3-di-0-me- • f · tyyli-fi-D-glukopyranuronosyyli- (l->4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo- ,, , α-D-glukopyranosidi-heksakisnatriumsuolaksi. [α]ϋ20 = +52° * » · » * i » » 14 111726 (l-»4)-0-2,3,6-tri-0-sulfο-α-D-glukopyranosidi-heptakisnat- 2 0 riumsuolaksi. [a]D = +55,4° (c = 1,5, vesi).

Tämä yhdiste saatettiin reagoimaan ftaalihappoan-hydridin kanssa, jolloin saatiin 2-(N-ftaloyyliamino)etyy-5 li-0-3,4-di-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4)-0-2,3-di-0-metyyli-5-D-glukopyranuronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-heptakisnatrium-suola. [a]D20 = +49, 9° (c = 1,23, vesi).

Samalla tavalla käyttäen vastaavia anhydridejä valio mistettiin seuraavat yhdisteet: 2-(sukkinyyliamino)etyyli-0-3,4-di-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1_»4) -0-2,3-di-0-metyyli-h-D-glukopyranuronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-heptakisnatriumsuola. [a]D20 = +100° (c = 15 0,66, vesi).

2-(N-trimellityyliamino)etyyli-0-3,4-di-0-metyyli-2, 6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4) -0-2,3-di-0-me-tyyli-h-D-glukopyranuronosyyli-(1—»4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-α-D-glukopyranosidi-heptakisnatriumsuola. [a]D20 = +47,5° 20 (c = 1,11, vesi).

Esimerkki 3 *

Me tyyli-O-4-O- (4-sulfoaminofenyyli) -2,3,6-tri-O- • · • /•j sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo- α-L-idopyranuronosyyli- (l->4) -0-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glu-25 kopyranosidi-nonakisnatriumsuola .·. : Metyyli-O-4-O-(4-nitrofenyyli)-6-0-asetyyli-2, 3-0- • * difenyylimetyyli-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4) -0- (metyyli-3- • * · O-metyyli-2-O-asetyyli-oi-L-idopyranosyyliuronaatti) - (1—>4) -... 0-2,3,6-tri-0-asetyyli-a-D-glukopyranosidi (100 mg, 0,09 • 30 mmol), joka oli saatu liittämällä tunnetulla imidaattikyt- • » kennällä yhteen 0-4-0- (4-nitrofenyyli)-6-0-asetyyli-2,3-·· O-difenyylimetyyli-a-D-glukopyranosidin triklooriasetimi- .···. daatti ja metyyli-0-(metyyli-3-0-metyyli-2-0-asetyyli-a- L-idopyranosyyliuronaatti)- (l->4) -0-2,3, 6-tri-0-asetyyli-•d 35 α-D-glukopyranosidi, liuotettiin tetrahydrofuraaniin i5 111726 (9 ml) ja liuos jäähdytettiin -5 °C:seen. Tässä lämpötilassa reaktioseokseen lisättiin vetyperoksidin 30-%:ista vesiliuosta (4,5 ml) ja 10 minuutin kuluttua lisättiin 1,25-m litiumhydroksidiliuosta (4,7 ml). Seosta sekoitet-5 tiin tunnin ajan -5 °C:ssa, jonka jälkeen lämpötila koho tettiin 0 °C:seen ja seosta sekoitettiin yön yli. Reaktio-seos tehtiin 0 °C:ssa happameksi 6-m HCl-liuoksella pH-arvoon 1,5, jonka jälkeen saippuoitu yhdiste uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaniset uutteet yhdistettiin, kui-10 vattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 63 mg (84 %) metyyli-O-4-O-(4-nitrofenyyli)-2,3-0-difenyylimetyyli-a-D-glukopyranosyyli- (1—»4)-O-3-O-metyyli-α-L-idopyranuronosyyli- (1—»4) -Ο-α-D-glukopyranosidia, joka liuotettiin metanoliin (8 ml). Liuokseen lisättiin 10-%:-15 ista Pd/C-katalysaattoria (63 mg) ja seosta hydroge- nolysoitiin yön yli. Seos suodatettiin ja suodos haihdutettiin, jolloin saatiin 27 mg (50 %) metyyli-O-4-O-(4- aminofenyyli)-α-D-glukopyranosyyli-(1_»4) -0-3-0-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli- (1_>4) -Ο-α-D-glukopyranosidia.

20 13 mg metyyli-O-4-O-(4-aminofenyyli)-a-D-glukopyra- nosyyli- (1—>4 ) -0-3-0-metyyli-oi-L-idopyranuronosyyli- (1—>4) -Ο-α-D-glukopyranosidia liuotettiin 2 ml: aan vedetöntä N, N- • · ^ -j dimetyyliformamidia ja liuokseen lisättiin typpikehässä 148 : ·.. mg trietyyliamiini-rikkitrioksidikompleksia. Seosta ·'*. 25 sekoitettiin yön yli 50 °C:ssa, sitten siihen lisättiin • * .*, : jäillä jäähdyttäen natriumvetykarbonaatin vesiliuos. Seosta • « sekoitettiin tunnin ajan huoneenlämpötilassa, seos haihdutettiin pieneen tilavuuteen ja suola poistettiin . Sephadex G-10 -pylväässä vedellä. Saatu raakatuote puh- • ;* 30 distettiin HPLC:lla käyttäen Mono-Q-anioninvaihtajapyl- • t västä, jolloin saatiin 11 mg (37 %) metyyli-O-4-O-(4-sulfo-··· aminofenyyli)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- < I · (1—>4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-(1—»4) -0-2,3, 6-tri-O-sulfo-oi-D-glukopyranosidi-nonakisnat- 16 111726 riumsuolaa. [a]D20 = +52,2° (c = 0,67, vesi). Anomeeristen protonien kemialliset siirtymät: 5,5, 5,17 ja 5,15 ppm. Esimerkki 4

Saman kaltaisilla menetelmillä kuin edellä olevissa 5 esimerkeissä kuvatut valmistettiin seuraavat yhdisteet:

Metyyli-O-3,4-di-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-glu-kopyranosyyli- (l-*4)-0-2,3-di-O-metyyli-a-L-idopyranurono-syyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1—»4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-10 (1—»4)-0-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidi-undekakis- natriumsuola. [a]D20 = +26, 5° (c = 0,46, vesi). Anomeeristen protonien kemialliset siirtymät: 5,56, 5,39, 5,14 ja 5,13 PPm, metyyli-0-2,3,4-tri-0-metyyli-6-0-sulfo-a-D-glu- 15 kopyranosyyli- (1—»4 ) -0-2,3-di-0-metyyli-5-D-glukopyranuro- nosyyli- (1—»4)-0-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4)-0-2,3-di-0-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli-(1—>4) -0- 2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-nonakisnatriumsuola.

[ajo = +55,5° (c = 1, vesi). Anomeeristen protonien ke- 20 mialliset siirtymät: 5,47, 5,42, 5,17, 5,14 ja 4,67 ppm, metyyli-0-3,4-di-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-glu- , kopyranosyyli- (1—>4 ) -0-2,3-di-0-metyyli-h-D-glukopyranuro- • · nosyyli-(1—>4 ) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- • ’ .. (1—>4 ) -0-2,3-di-O-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli- (1—»4 ) -0- • •V. 25 2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-dekakisnatriumsuola.

• * * 20 : [of] d = +53° (c = 1, vesi). Anomeeristen protonien kemial- liset siirtymät: 5, 56, 5, 45, 5, 19, 4,81 ja 4,70 ppm,

• · I

metyyli-0-4-0-metyyli-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-gluko-, pyranosyyli- (1—>4) -0-2,3-di-0-metyyli-h-D-glukopyranuro- • 30 nosyyli- (1—>4 ) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-> » (1—»4 ) -0-2,3-di-0-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli- (l-»4) -O-• 0 2,3,6-tri-O-sulfo-oi-D-glukopyranosidi-undekakisnatriumsuo- la. [α]ϋ = +47,5° (c = 1, vesi). Anomeeristen protonien ·_ kemialliset siirtymät: 5,60, 5, 42, 5, 16, 5, 09 ja 4,66 ppm, 17 111726 metyyli-0-2,3,4-tri-0-metyyli-6-0-sulfo-a-D-gluko-pyranosyyli- (1—»4 ) -0-2,3-di-O-metyyli-a-L-idopyranuronosyy-li- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—»4 ) -0-2,3-0-dimetyyli-a-L-idopyranuronosyyli-(1_>4) -0-2,3,6-5 tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidi-nonakisnatriumsuola.

[a]D = +46,2° (c = 1, vesi). Anomeeristen protonien kemialliset siirtymät: 5,43, 5,37, 5,16, 5,09 ja 5,09 ppm, metyyli-0-2,3,4-tri-0-metyyli-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—»4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulf-fi-D-glukopyra-10 nuronosyyli-(1—»4 ) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—»4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-(1—>4)-0-2,3,β-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidi-undekakis-natnumsuola. [a]D = +46,7° (c = 0,55, vesi). Anomeeristen protonien kemialliset siirtymät: 5,49, 5,48, 5,16, 5,15 ja 15 4,76 ppm, metyyli-0-4-0-metyyli-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-gluko-pyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-fi-D-glukopyra-nuronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyy-li- (1—>4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-20 (1—>4)-0-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-tridekakis- natriumsuola. [a]D20 = +42,2° (c = 1, vesi). Anomeeristen ,·,· protonien kemialliset siirtymät: 5, 61, 5, 48, 5,15, 4,86 ja .'•j 4,76 ppm, metyyli-0-3,4-di-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-glu-25 kopyranosyyli- (1—>4) -0-2,3-di-0-metyyli-a-L-idopyranuro- • * : nosyyli-(1—>4 ) -0-2,3, 6-tri-0-sulf o-a-D-glukopyranosyyli- • · .·; ·, (1—>4 ) -0-2,3-di-0-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli- (1_>4 ) -0- • » · 2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopuranosidi-dekakisnatriumsuola. [ex] d20 = +42,2° (c = 1, vesi) .

* · · • ·’ 30 Metyyli-0-2-0-metyyli-3,4, 6-tri-0-sulfo-a-D-gluko- t t pyranosyyli- (1—>4 ) -0-3-metyyli-2-0-sulfo-5-D-glukopyranu-·· ronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (1—>4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-·_ (1—>4)-0-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-tridekakis- *·· 35 natriumsuola, 18 111726 metyyli-0-2,3-di-0-metyyli-4, 6-di-O-sulfo-a-D-glu-kopyranosyyli - (1_^4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-ft-D-glukopyra-nuronosyyli- (1_*4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyy-li- (l->4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-5 (1—>4)-0-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-dodekakis- natriumsuola, metyyli-0-2,4-di-0-metyyli-3,6-di-0-sulfo-a-D-glu-kopyranosyyli- (1—^.4 ) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-fl-D-glukopyra-nuronosyyli- (1_»4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyy-10 li- (1—»4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli-(1—>4)-0-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-dodekakis-natriumsuola, metyyli-0-4-0-metyyli-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-manno-pyranosyyli- (1_>4 ) -0-2,3-di-0-metyyli-B-D-glukopyranuro-15 nosyyli- (1—>4 ) -0-2,3,6-tri-0-sulfo-oi-D-glukopyranosyyli- (1—>4)-0-2,3-di-0-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli-(1—>4 ) -O- 2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-undekakisnatriumsuo-la, metyyli-0-2,3,4-tri-0-metyyli-a-D-glukopyranosyy-20 li- (1—»4)-0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(l->4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli- (1—>.4) -0-2, 3, 6- • · *.* tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidi-undekakisnatriumsuola, j ·.. 2-(2-(4-fluorifenyylioksi) etoksi) etyyli-0-3, 4-di-0- • *·*j 25 metyyli-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1_>4) -0-2, 3- • · : di-0-metyyli-5-D-glukopyranuronosyyli- (1—»4 ) -0-2, 3, 6-tri-0- sulfo-a-D-glukopyranosyyli- (l->4 ) -0-3-0- (2-fenyylietyyli) - • t · 2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sul-,,. fo-a-D-glukopyranosidi-undekakisnatriumsuola, [a]o2° = » · t • 30 +22,0° (c = 0,3, vesi). Anomeeristen protonien kemialliset *··.' siirtymät: 4, 68, 4,93, 5,21, 5,46 ja 5,54 ppm, ·;· 2-(2 - (4-f luorifenyylioksi) etoksi) etyyli-0-4-0- (4-aminofenyyli)-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-•t (1—>4 ) -0-3-0- (2-fenyylietyyli) -2-0-sulfo-oi-L-idopyranurono- • •0 35 syyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyrapyranosidi- • · 19 111726 oktakisnatriumsuola, [a]D20 = +21,9° (c = 1,2, vesi). Ano-meeristen protonien kemialliset siirtymät: 4,92, 5,27 ja 5,51 ppm, 2-(2-(4-fluorifenyylioksi)etoksi)etyyli-0-4-0-[4-5 fenyylimetoksikarbonyyliamino)fenyyli]-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1_>4) -0-3-0-(2-fenyylietyyli)-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli- (1—>.4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyrapyranosidi-oktakisnatriumsuola, [a]D20 = +20,5° (c = 0,75, vesi). Anomeeristen protonien kemialliset siir-10 tymät: 4,93, 5,27 ja 5,52 ppm, metyyli-0-2,3-di-0-metyyli-4-0-sulfo-a-L-idopyranu-ronosyyli- (1_»4) -0-2,3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1—>4)-0-2,3-di-O-metyyli-a-L-idopyranuronosyyli-(1—»4) -O-2,3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-(1—>4) -2,3-di-0-me-15 tyyli-a-L-idopyranosyyli- (1—>.4) -0-2,3, 6-tri-O-sulfo-a-D- glukopyranosidi-tridekakisnatriumsuola. Anomeeristen protonien kemialliset siirtymät: 5,40, 5,37, 5,10, 5,05 ja 5,05.

Metyyli-0-3,4-di-0-metyyli-2,4-di-O-sulfo-a-D-ga-20 laktopyranosyyli- (1—>4 ) -0-2,3-di-0-metyyli-fi-D-glukopyranu- ronosyyli- (1—>4) -0-2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyyli-*. (1—>4 ) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranosyyli- (1—>4) -0- I » ·· 2,3, 6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosidi-undekakisnatrium- • » O Λ : suola, [ex] d = 48,8° (c = 1, vesi). Anomeeristen protonien ·**’. 25 kemialliset siirtymät: 4, 60, 5,06, 5, 06, 5,44 ja 5,52.

« *

Esimerkki 5 • r t • » • t Propyyli-O-2,6-di-0-etyyli-3,4-di-O-sulfo-fi-D-ga- • · · laktopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-cx-L-idopyra-, nuronosyyli- (1—>3) -0-2,6-di-0-etyyli-4-0-sulfo-fl-D-galakto- I I · • 30 pyranosyyli- (l->4) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuro-

I I

nosidi-heptakisnatriumsuola ·;· Propyyli-0-4-0-bentsoyyli-2,6-di-0-etyyli-B-D-ga- laktopyranosyyli- (1_>4) -0- (metyyli-2-0-bentsoyyli-3-0-etyy- * li-a-L-idopyranuronosyyliuronaatti)- (l->3)-0-4-bentsoyyli- ·· 35 2,6-di-0-etyyli-B-D-galaktopyranosyyli- (1—>4) -0- (metyyli- 20 1 1 1726 2-0-bentsoyyli-3-0-etyyli-a-L-idopyranuronosidiuronaatti) (0,028 mmol) liuotettiin tetrahydrofuraaniin (2,79 ml). Liuos jäähdytettiin -5 °C:seen ja siihen lisättiin 1,37 ml 33-%:ista vetyperoksidiliuosta. 10 minuutin sekoittamisen 5 jälkeen lisättiin 0,633 ml 1,25-m litiumhydroksidihydraatin vesiliuosta. Tunnin sekoittamisen jälkeen lämpötila korotettiin 0 °C:seen ja seosta sekoitettiin edelleen 20 tuntia. Seos lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja siihen lisättiin 2,56 ml metanolia ja 0,65 ml 4-m NaOH-liuosta. 10 Seosta sekoitettiin vielä 20 tuntia, sitten se tehtiin happameksi laimealla kloorivetyhapolla 0-5 °C:ssa. Ylimääräinen vetyperoksidi hajotettiin 10-%:isella natrium-sulfiitin vesiliuoksella ja seos haihdutettiin kuiviin. Jäännökseen lisättiin 10 ml dikloorimetaani-metanoliseosta 15 (8:2), suolat suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuiviin.

Jäännös puhdistettiin Sephadex LH20 -pylväässä ja tuotetta sisältävät puhtaat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin propyyli-O-2,6-di-0-etyyli-B-D-galaktopyranosyyli- (1—>4) -O-3-O-etyyli-a-L-ido-20 pyranuronosyyli- (1—>3) -0-2,6-di-0-etyyli-L-D-galaktopyrano-syyli-(1_>4 )-0-3-0-etyyli-a-L-idopyranuronosidi, joka liuo-tettiin vedettömän dimetyyliformamidin (1,63 ml) ja tri- ·,’·· etyyliamiini-rikkitrioksidikompleksin (0,64 mmol) seokseen.

4 * j Seosta sekoitettiin 20 tuntia 50 °C:ssa, sitten seos • ’·*: 25 jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja siihen lisättiin nat- j riumvetykarbonaatin (215 mg) seos 2,8 ml:ssa vettä. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, sitten seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin veteen, suolat poistettiin , Sephadex G25:llä ja yhdistetyt fraktiot lyofilisoitiin, » * · *t>; 30 jolloin saatiin propyyli-O-2,6-di-0-etyyli-3,4-di-O-sulfo- i · ’·· ·* β-D-galaktopyranosyyli- (1—»4 ) -0-3-0-etyyli-2-0-sulf o-a-L- *:· idopyranuronosyyli- (1_»3) -0-2, 6-di-0-etyyli-4-0-sulfo-B-D- M « l galaktopyranosyyli- (1_>4) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-a-L-idopy- ·, ranuronosidi-heptakisnatriumsuola. [a]D20 = -16,0° (c = 1, > > · 35 vesi) .

* * * * > • » 111726 21

Saman kaltaisella menetelmällä kuin esimerkissä 5 kuvattu valmistettiin:

Propyyli-0-2,6-di-0-etyyli-3,4-di-0-sulfo-B-D-ga-laktopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyra-5 nuronosyyli- (1_>3) -0-2, 6-di-0-etyyli-4-0-sulfo-B-D-galakto-pyranosyyli- (1—>4 ) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuro-nosyyli- (1—>3) -0-2, 6-di-0-etyyli-4-0-sulfo-fi-D-galaktopyra-nosyyli- (1—>4) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosi-di-dekakisnatriumsuola. [a]D = -17,5° (c = 1, vesi).

10 Propyyli-0-2,6-di-0-etyyli-3,4-di-0-sulfo-B-D-ga- laktopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-etyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyra-nuronosidi-tetrakisnatriumsuola. [a]D20 = -9,7° (c = 1, ve si) .

4-metoksifenyyli-0-3-0-metyyli-2,4-di-O-sulfo-a-L-15 idopyranuronosyyli- (1—>3) -0-6-0-metyyli-2,4-di-0-sulfo-fi-D- galaktopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-idopyranuronosyyli (1—>3) -0-6-0-metyyli-2,4-di-0-sulfo-B-D-galaktopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-ido-pyranuronosyyli- (l->3) -0-6-0-metyyli-2,4-di-0-sulfο-β-D-20 galaktopyranosidi-tridekakisnatriumsuola. Anomeeristen protonien siirtymät: 5,44, 5,42, 5,33, 5,21, 4,67 ja 4,65 ppm.

4-metoksifenyyli-0-3-0-metyyli-2,4-di-O-sulfo-a-L- ♦ · idopyranuronosyyli- (1—>3) -0-6-0-metyyli-2,4-di-0-sulfo-fi-D- :v. 25 galaktopyranosyyli- (1—>4) -0-3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L- • · ,·, ; idopyranuronosyyli- (1—>3) -0-6-0-metyyli-2,4-di-0-sulfo-fi-D- • · ♦ galaktopyranosidi-nonakisnatriumsuola. Anomeeristen pro- # · » tönien siirtymät: 5,44, 5,42, 5,22 ja 4,66 ppm.

4-metoksifenyyli-0-3-0-metyyli-2,4-di-0-sulfo-a-L- • * · ; ·' 30 idopyranuronosyyli-(1—>3) -0-6-0-metyyli-2,4-di-0-sulfo-fi-D- *...· galaktopyranosidi-pentakisnatriumsuola. Anomeeristen • j. protonien kemialliset siirtymät: 5,29 ja 5,34 ppm.

• » • · « » »

Claims

22 1117 2 6
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen, sul-fatoidun glykosaminoglykaanijohdannaisen tai sen farma-5 seuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jossa funktionaaliset N-sulfaatti-, N-asetaatti- ja hydroksiryh-mät on korvattu alkoksi-, aryylioksi-, aralkoksi-, O-sul-f aatti- tai OALK (OALK) n0X-ryhmillä, jossa ALK on alifaat-tinen hiilivetyryhmä, nonO - 5 jaXon alkyyli- tai 10 aryyliryhmä, sillä edellytyksellä, että funktionaalisista ryhmistä vähintään kahta ei ole korvattu O-sulfaattiryh-mällä, lukuunottamatta sellaisia hiilihydraattijohdannaisia, jotka käsittävät trisakkaridiyksikön, jolla on rakenne β-D-glukopyranuronosyyli-(1-4)-0-2,3,6-tri-0-sul-15 fo-a-D-glukopyranosyyli-(1-4)-0-2-0-sulfo-a-L-idopyranuro-nosyyli, ja niiden alkyloituja, aryloituja, aralkyloituja ja sulfatoituja johdannaisia, tunnettu siitä, että suojatut monosakkaridit liitetään yhteen suojatuiksi disakkarideiksi, jotka valinnaisesti edelleen kytketään 20 3-6 sakkaridiyksikköä sisältäviksi oligosakkarideiksi, jonka jälkeen suojaryhmät osaksi tai kokonaan poistetaan . ja vapaat hydroksiryhmät sulfatoidaan, jonka jälkeen mah- .·, ; dolliset jäljellä olevat suojaryhmät poistetaan ja yhdiste * valinnaisesti muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi * # · , 25 suolaksi. ·_ ·’ 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- * * · ’· ” n e t t u siitä, että valmistetaan sulfatoitu glykos- * aminoglykaanijohdannainen, joka sisältää disakkaridiyksi-kön, jonka kaava on I F V 3 0 _ FF: C^OR ‘\A, y~\ li --o ι·· ί V—o -- i J-( 0R : OR 0R 23 1 1 1726 jossa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta ryhmästä alkyyli, aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; ja Q on karboksylaatti tai CH2OR-ryhmä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan sulfatoitu gly-kosaminoglykaanijohdannainen, joka sisältää disakkaridiyk-sikön, jonka kaava on Ha tai Hb 10. o—— -- Q Q OR Q /’*' ** --O»··../ \~-o « RO·"/ VO * 15 r/cR --0 « II. J L Hb J joissa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta ryhmästä alkyyli, 20 aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; ja kumpikin Q on toisistaan riippumatta karboksylaatti tai CH2OR-ryhmä, tai sen . farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. i · » .·, : 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- * n e t t u siitä, että valmistetaan sulfatoitu gly- I., 25 kosaminoglykaanijohdannainen, jonka kaava on III • · · • · CH20R : Q. V-o
1. III 30 *>"·< /Λ « OR OR ;;; jossa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen **;·' R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta ryhmästä alkyyli, *:· 35 aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; Q on karboksylaatti tai 111726 CH20R-ryhmä; A on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on IV 5 OR1 OR jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, 10 toinen ryhmistä Ri ja R2 on alkyyli, aryyli, aralkyyli tai sulfaatti ja toinen on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on V OR OR jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, ja 20 B on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK(OALK)nOX (jossa ALK on alifaattinen hiilivetyryhmä, n on 0 - 5, ja X :.· on alkyyli- tai aryyliryhmä) tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on VI I 1 2 3 4·· Q j\: 25 %-o r4·1^ Vob’ VI f \ r3 or I1 30 jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, 2 '···' toinen ryhmistä R3 ja R4 on alkoksi, aryylioksi, aralkoksi 3 = j1 tai O-sulfaatti ja toinen on suora sidos, ja B' on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK (OALK) nOX (jossa ALK, n ja X merkitsevät samaa kuin edellä) tai hiilihydraattiryhmä, 4 35 jonka kaava on VII • » „ 111726 V" rX V^or, VII r3 or5 jossa aaltoviivat, Q ja R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, kumpikin R5 merkitsee toisistaan riippumatta jota-10 kin R:lle ilmoitetuista merkityksistä tai on ALK(OALK)nOX (jossa ALK, n ja X merkitsevät samaa kuin edellä), tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suola.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan sulfatoitu gly-15 kosaminoglykaanijohdannainen, jonka kaava on VIII OB o q ΛΛ*/ V· OR
20 V*vo' * VIII OAj or * jossa aaltoviivat tarkoittavat a- tai β-sidosta, jokainen ), , 25 R-ryhmä valitaan toisistaan riippumatta ryhmästä alkyyli, • · * ·_ ·* aryyli, aralkyyli ja sulfaatti; kumpikin Q on toisistaan * * · '· '! riippumatta karboksylaatti- tai CH2OR-ryhmä, toinen ryhmis- ·.· · tä Aj ja A2 on alkyyli, aryyli aralkyyli tai sulfaatti ja toinen on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai : ‘ : 3 0 hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on IV 35 f \ 0R1 OR 26 1 1 1726 jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, toinen ryhmistä R·,^ ja R2 on alkyyli, aryyli, aralkyyli tai sulfaatti ja toinen on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti tai hiilihydraattiryhmä, jonka kaava on V -h- OR OR 10 jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, ja B on alkyyli, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK(OALK) nOX (jossa ALK on alifaattinen hiilivetyryhmä, n on 0 - 5, ja X on alkyyli- tai aryyliryhmä) tai hiilihydraattiryhmä, 15 jonka kaava on VI Vo R4>«( V OB’
20 Rf OR . .·. jossa aaltoviivat, Q ja R merkitsevät samaa kuin edellä, • · · .·, ; toinen ryhmistä R3 ja R4 on alkoksi, aryylioksi, aralkoksi ' tai O-sulfaatti ja toinen on suora sidos, ja B' on alkyy- ), , 25 li, aryyli, aralkyyli, sulfaatti, ALK (OALK) nOX (jossa ALK, • · · ·' n ja X merkitsevät samaa kuin edellä) tai hiilihydraatti- • · · *· " ryhmä, jonka kaava on VII %-o o 30 jossa aaltoviivat, Q ja R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin 35 edellä, kumpikin R5 merkitsee toisistaan riippumatta jota-• j kin R:lle ilmoitetuista merkityksistä tai on ALK (OALK) nOX (jossa ALK, n ja X merkitsevät samaa kuin edellä) , tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 27 1 1 17 2 6