FI103122B - Menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI103122B FI103122B FI912878A FI912878A FI103122B FI 103122 B FI103122 B FI 103122B FI 912878 A FI912878 A FI 912878A FI 912878 A FI912878 A FI 912878A FI 103122 B FI103122 B FI 103122B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- pneumolysin
- leu
- asn
- asp
- ser
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 5
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 claims abstract description 88
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 27
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 27
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 9
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 8
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 4
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims 2
- XYWBPLHHAZLXAI-ASHKBJFXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C XYWBPLHHAZLXAI-ASHKBJFXSA-N 0.000 claims 1
- BHTBAVZSZCQZPT-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N BHTBAVZSZCQZPT-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N Asn-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- NLCDVZJDEXIDDL-BIIVOSGPSA-N Asn-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O NLCDVZJDEXIDDL-BIIVOSGPSA-N 0.000 claims 1
- JZRLLSOWDYUKOK-SRVKXCTJSA-N Asn-Asp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JZRLLSOWDYUKOK-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- AMGQTNHANMRPOE-LKXGYXEUSA-N Asn-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AMGQTNHANMRPOE-LKXGYXEUSA-N 0.000 claims 1
- SKQTXVZTCGSRJS-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O SKQTXVZTCGSRJS-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- XDGBFDYXZCMYEX-NUMRIWBASA-N Asp-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O XDGBFDYXZCMYEX-NUMRIWBASA-N 0.000 claims 1
- IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N Asp-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N 0.000 claims 1
- AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N Asp-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O AWPWHMVCSISSQK-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- ICRKQMRFXYDYMK-LAEOZQHASA-N Gln-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ICRKQMRFXYDYMK-LAEOZQHASA-N 0.000 claims 1
- OJGLIOXAKGFFDW-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N OJGLIOXAKGFFDW-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KLBVGHCGHUNHEA-BJDJZHNGSA-N Ile-Leu-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N KLBVGHCGHUNHEA-BJDJZHNGSA-N 0.000 claims 1
- KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 claims 1
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 claims 1
- AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N Leu-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N 0.000 claims 1
- NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CCCN=C(N)N NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- LMKSBGIUPVRHEH-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Asn Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LMKSBGIUPVRHEH-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 claims 1
- VJLJGKQAOQJXJG-CIUDSAMLSA-N Pro-Asp-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VJLJGKQAOQJXJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- OWQXAJQZLWHPBH-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OWQXAJQZLWHPBH-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N Ser-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 claims 1
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 claims 1
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 claims 1
- CYCGARJWIQWPQM-YJRXYDGGSA-N Thr-Tyr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CYCGARJWIQWPQM-YJRXYDGGSA-N 0.000 claims 1
- COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Gly Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N Val-Asp-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N 0.000 claims 1
- GBESYURLQOYWLU-LAEOZQHASA-N Val-Glu-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N GBESYURLQOYWLU-LAEOZQHASA-N 0.000 claims 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 claims 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 claims 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 claims 1
- 108010027668 glycyl-alanyl-valine Proteins 0.000 claims 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 23
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 12
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 101100148606 Caenorhabditis elegans pst-1 gene Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000942118 Homo sapiens C-reactive protein Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 1
- 208000009362 Pneumococcal Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035728 Pneumonia pneumococcal Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- -1 cyanoborohydride Chemical compound 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
- C07K14/3156—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci from Streptococcus pneumoniae (Pneumococcus)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Exchange Systems With Centralized Control (AREA)
- Manufacturing Of Steel Electrode Plates (AREA)
- Current-Collector Devices For Electrically Propelled Vehicles (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
103122
Menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi Tämä keksintö kohdistuu pneumolysiinitoksiinin mutanttien valmistamiseen.
5
Streptococcus pneumoniae (pneumokokki) on merkittävä patogeeni, joka aiheuttaa tartuntatauteja, kuten keuhkokuumetta, aivokalvontulehdusta ja bakteeriverisyyttä. Jopa alueilla, joilla on vapaasti saatavissa tehokasta antibioottihoitoa, voi pneumokokkiperäi-sen keuhkokuumeen aiheuttama kuolleisuus olla niinkin korkea kuin 19 % sairaalapoti-10 laista ja kuolleisuus nousee 30-40 %:iin potilaista, joilla on bakteeriverisyyttä. Näistä korkeista kuolleisuusluvuista on raportoitu USA:ssa, keuhkokuumeen, jonka yleisin syy on S. pneumoniae, ollessa viidenneksi suurin kuolemansyy. Keuhkokuume on ainoa tartuntatauti USA:n kymmenen ensimmäisen kuolemansyyn joukossa. USA:ssa pneumokokin aiheuttama kuolleisuusprosentti on alueella 13-45 %. Kehitysmaissa kuolee yli 15 kolme miljoonaa alle viisi vuotiasta lasta joka vuosi keuhkokuumeeseen S. pneumoniaen ollessa yleisin aiheuttaja. S. pneumoniae aiheuttaa myös vähemmän vaarallisia mutta yleisiä infektioita, kuten välikorvantulehdus ja sivuontelotulehdus, jotka vaikuttavat merkittävästi kehitysmaiden terveydenhoitokustannuksiin. Välikorvantulehdus on erityisen merkityksellinen pienissä lapsissa ja sivuontelotulehdus iskee sekä lapsiin että ai-20 kuisiin.
1970-luvun lopulla sai lisenssin rokote, joka oli tarkoitettu vakavien infektioiden, erityisesti bakteeriperäisen keuhkokuumeen, estämiseen ja tiettyjen ryhmien suojaamiseen, kuten henkilöt, joilta on poistettu perna, ja pienet lapset, jotka ovat erityisen alttiita yht-: 25 äkkiselle pneumokin aiheuttamalle sairaudelle. Rokote koostuu puhdistetuista kotelopo- lysakkarideista, jotka ovat vallitsevia pneumokokkipinta-antigeenejä. Kuitenkin jokaisella S. pneumoniaen serotyypillä (joita on 83) on rakenteellisesti erilainen kotelopolysak-karidi ja immunointi yhdellä serotyypillä ei suojaa suurta osaa muita vastaan. Australiassa lisensoitu rokote sisältää polysakkarideja, jotka on puhdistettu 23 yleisimmästä se-30 rotyypistä, mikä selittää noin 90 % tämän maan pneumokokki-infektioista. Suojaus rokotteessa olevia serotyyppejä vastaan ei ole kuitenkaan täydellinen ja on raportoitu, että suuren riskin omaavissa henkilöissä on esiintynyt useita vakavia, jopa fataalisia infek-' tioita. Rokotteen teho on heikoin pienissä lapsissa ja lukuisat tutkimukset mukaan lukien
Adelaidessa suoritetut ovat osoittaneet, että olemassa olevasta formuloinnista on vähän 35 tai ei minkäänlaista kliinistä hyötyä tässä ryhmässä. Tämä rokotteen ilmeinen puute näyttää liittyvän tiettyjen pneumokokkipolysakkaridien heikkoon immunogeenisuuteen alle 5 vuotiaissa lapsissa. Olemme osoittaneet, että vasta-ainevaste on erityisen heikko viiteen serotyyppiin, jotka useimmiten aiheuttavat lasten sairastumisen (tyypit 6, 14, 18, 2 103122 19 ja 23). Vasta-ainevaste näihin pneumokokkipolysakkarideihin saavuttaa aikuisten tason vain lapsissa, jotka ovat yli 8 vuotiaita rokotuksen aikana.
Tämä huomioon ottaen näyttää tarvittavan rokotetta, joka sisältää muita antigeenejä kuin 5 kotelopolysakkaridit, pienten lasten suojaamiseksi pneumokokki-infektiolta. Yksi tällainen antigeeni voi olla pneumolysiini, joka on kaikkien tuhoisien S. pneumonia -eristeiden tuottama proteiinitoksiini. Hiirten immunoinnin tällä proteiinilla on havaittu antavan suojatason pneumokokki-infektiolle.
10 Vaikeutena on kuitenkin se, että pneumolysiini on ihmiselle toksista. Siten rokotteeseen sisällytetyn pneumolysiinin tulee olla oleellisesti ei-toksista. Pneumolysiinin ei-tok-siseksi tekeminen useimmilla nykyisin käytetyillä menetelmillä muuttaa proteiinin pe-ruskonfiguraatiota siten, että se eroaa immunogeenisesti luontaisesta tai villintyyppisestä pneumolysiinistä. Muutetulla, immunogeenisesti luontaisesta pneumolysiinistä eroavalla 15 proteiinilla esiintuodulla immuunivasteella on laskenut suojauskyky tai ei ollenkaan suojauskykyä. Täten vaikeutena on tuottaa muutettu pneumolysiini, joka ei ole toksista ja joka on samalla riittävän immunogeenisesti samanlaista kuin toksinen muoto suo-jaavan immuunivasteen esiintuomiseksi.
20 Muutettua pneumolysiiniä, jolla on edellä mainitut ominaispiirteet, voidaan käyttää lukuisissa rokotustavoissa. Siten muutettua pneumolysiiniä voidaan käyttää yksinään im-munoimaan tai vaihtoehtoisesti muutettu pneumolysiini voidaan konjugoida pneumo-kokkipolysakkaridiin tai se voidaan sisällyttää vaihtoehtoisesti rokotteeseen, jolloin pneumokokkipolysakkaridit voidaan konjugoida toiseen proteiiniin ja muutettua pneu-25 molysiiniä on läsnä pelkästään konjugoimattomassa muodossa. Vaihtoehtoisesti sekä pneumokokkipolysakkaridia että pneumolysiiniä voidaan kumpaakin käyttää konjugoimattomassa muodossa.
Keksintö käsittää menetelmän muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi, joka pneumo-30 lysiini ei ole oleellisesti toksista ja kykenee tuomaan esille immuunivasteen eläimessä, . . . joka on reaktiivinen villintyyppiseen pneumolysiiniin.
Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.
35 Muutetulla pneumolysiinillä on edullisesti vähentynyt komplementin sitomistoiminta verrattuna villintyyppiseen pneumolysiiniin. Vähentynyt komplementin sitomistoiminta aiheuttaa vähemmän tulehdusta kohdassa, johon rokote annetaan.
3 103122
Muutetulla pneumolysiinillä on edullisesti vähentynyt Fc-sitomistoiminta verrattuna vil-lintyyppiseen pneumolysiiniin. Vähentynyt Fc-sitomistoiminta aiheuttaa vähemmän tulehdusta kohdassa, johon rokote annetaan.
5 Edullisesti pneumolysiini on muutettu yhdellä tai useammalla aminohapposubstituutiol-la suhteessa villintyyppiseen pneumolysiiniin.
Pneumolysiini voidaan muuttaa siten, että mikä tahansa yhdestä tai useammasta villin-tyyppisen pneumolysiinin tähdepaikoista 367, 384, 385, 428, 433 tai 435 korvataan, 10 poistetaan tai suojataan.
Hakemuksessa kuvataan myös rokotetta, joka sisältää muutettua pneumolysiiniä, joka ei ole toksista ja kykenee tuomaan esille immuunivasteen eläimessä, joka on reaktiivinen villintyyppiseen pneumolysiiniin.
15
Rokote käsittää edullisesti kotelopolysakkaridimateriaalin konjugoituna muutettuun pneumolysiiniin.
Kotelomateriaali voi olla johdettu yhdestä tai useammasta Streptococcus pneumoniae 20 -serotyypistä 6A, 6B, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 1, 2, 3, 4, 5, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11 A, 12F, 15B, 17F, 20, 22Fja33F.
Tässä suoritusmuodossa voidaan suuntautua erityisesti serotyyppeihin, jotka liittyvät yleisesti lasten sairauksiin ja joihin lapsilla on yleisesti heikko immuunivaste (so. tans-25 kalaiset serotyypit 6A, 6B, 14, 18C, 19A, 19F ja 23F). Muita nykyiseen 23-arvoiseen Merck Sharpin ja Dohmen rokotteeseen (Pneumovaz 23) sisältyviä yleisiä serotyyppejä voidaan myös käyttää konjugaattien syntetoimiseen (so. tyypit 1, 2, 3, 4, 5, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 15B, 17F, 20, 22F ja 33F) tai mitä tahansa muuta serotyyppiä. Minkä tahansa pneumokokkipolysakkaridin konjugointi proteiinikantajaan takaa hyvän 30 T-solusta riippuvan immunogeenisuuden lapsissa siten, että tuotetaan anti-polysakkari-divasta-aineen suojaavia tasoja.
Muutetun pneumolysiinin yhdistäminen kotelomateriaaliin takaa erikoissuojatason, erityisesti S. pneumoniaen serotyyppejä vastaan, jonka polysakkarideja ei ole sisällytetty 35 olemassa oleviin rokoteformulointeihin.
4 103122
Rokote annetaan edullisesti injektoimalla ihonalaisesti sopivan apuaineen, kuten alu-miinihydroksidigeelin, kanssa tai ilman apuainetta.
Toisessa muodossaan keksintö käsittää rekombinanttikloonin, joka sisältää replikonin ja 5 DNA-sekvenssin, joka koodaa muutettua pneumolysiiniä sanotun muutetun pneumoly-siinin ollessa ei-toksista ja kykenevä tuomaan esille immuunivasteen eläimessä, joka on reaktiivinen villintyyppiseen pneumolysiiniin.
Keksintö kohdistuu menetelmään muutetun pneumolysiinin tuottamiseksi, joka käsittää 10 vaiheina sanotun muutetun pneumolysiinin puhdistamisen ilmennysjäijestelmästä, joka sisältää rekombinanttikloonin, jossa on muutettua pneumolysiiniä koodaava DNA, sanotun pneumolysiinin ollessa oleellisesti ei-toksista ja kykenevä tuomaan esille immuunivasteen eläimessä, joka on reaktiivinen villintyyppiseen pneumolysiiniin.
15 Hmentämisjäijestelmä on edullisesti isäntäsolun, joka sisältää rekombinanttikloonin, jossa on muutettua pneumolysiiniä koodaava DNA, viljelmä.
Hakemus käsittää menetelmän rokotteen valmistamiseksi, joka sisältää vaiheen, jossa muutettu pneumolysiiniä koodaava rekombinanttiklooni vahvistetaan, sanotun kloonatun 20 materiaalin translaatio ja transkriptio indusoidaan ja muutettu pneumolysiini puhdistetaan, ja vaiheen, jossa muutettu pneumolysiini konjugoidaan kotelopolysakkaridiin muutetun pneumolysiinin toksisen aktiivisuuden ollessa oleellisesti vähentynyt verrattuna villintyyppiseen pneumolysiiniin.
25 Keksinnön erityisten suoritusmuotojen paremmaksi ymmärtämiseksi keksintöä kuvataan nyt viittaamalla kuvioihin, joissa kuvio 1 on sellaisen geenin DNA-sekvenssi, joka koodaa villintyyppistä pneumolysiiniä, 30 kuvio 2 on sellaisen muutetun geenin DNA-sekvenssi, joka koodaa villintyyppistä .· . pneumolysiiniä ja jota käytetään pneumolysiinigeenin kloonaamiseen ilmen- tämisvektoriin, kuvio 3 on villintyyppisen pneumolysiinin aminohapposekvenssi, joka on johdettu sellaisen geenin DNA-sekvenssistä, joka koodaa villintyyppistä pneumoly-35 siiniäja kuvio 4 esittää pneumolysiinin aminohapposekvenssiä, jossa on aminohapposubsti-tuutioita, jotka on viety siihen paikkakohdistetulla mutageneesillä.
5 103122
Rekombinantti-DNA-tekniikoita on käytetty ei-toksisten pneumolysiinijohdannaisten valmistamiseen, jotka johdannaiset sopivat ihmisille annettaviksi. Tämän saavuttamiseksi pneumolysiiniä koodaava S. pneumonia -geeni kloonattiin Escherichia coliin ja sen täydellinen DNA-sekvenssi määritettiin. DNA-sekvenssi on esitetty kuviossa 1 ja 5 johdettu aminohapposekvenssi on esitetty kuviossa 3.
Pneumolysiinigeenin kolme aluetta alistettiin oligonukleotidisuunnattuun mutageneesiin. Ensimmäinen alue koodaa aminohappoja 427-437 proteiinisekvenssissä ja on esitetty alleviivauksella kuviossa 3. Tämä 11 aminohapon sekvenssi on absoluuttisesti homogee-10 ninen muiden liittyvien tioliaktivoitujen toksiinien samanlaisten alueiden kanssa, joiden ajatellaan olevan vastuussa hemolyyttisestä toiminnasta ja siten toksiinin toksisesta aktiivisuudesta. Kaksi muuta aluetta koodaavat aminohappoja 257-297 ja aminohappoja 368-397 ja ne on myös esitetty alleviivattuna kuviossa 3. Nämä toksiinin kaksi aluetta ovat aminohapposekvensseiltään oleellisesti homologisia ihmisen C-reaktiivisen prote-15 iinin (CRP) kanssa ja siten interferenssiltäään niiden ajatellaan olevan vastuussa pneu-molysiinin kyvystä sitoutua immunoglobuliinien Fc-alueeseen ja aktivoida komplementti. Pneumolysiinigeeniin konstruoitiin viisitoista erillistä mutaatiota, jotka aiheuttavat erillisiä aminohapposubstituutioita, kuten kuviossa 4 on esitetty. Muutetun pneumo-lysiinin rakenteen ylläpitämiseksi tehtiin säilyttäviä substituutioita siten, että aminohapot 20 substituoitiin luonteeltaan samanlaisilla aminohapoilla.
Mitä tulee hemolyyttiseen toimintaan osallistuviin alueisiin, Cys438 -> Gly, Cys438 —> Ser, Trp434 -» Phe, GIU434 -» Asp, ja Trp435 -> Phe vähensivät jokainen hemolyyttistä toimintaa 97 %, 90 %, 99 %, 75 % ja 90 % vastaavasti. Muut mutaatiot tällä alueella : 25 (Cys428 -> Ala, Glu434 —» Gin ja Trp436 -> Phe) eivät vaikuttaneet hemolyyttiseen toi mintaan. Toksiinin erillisen alueen mutatoiminen, jonka ajatellaan olevan vastuussa sitoutumisesta kohdesolukalvoihin, vaikuttaa myös proteiinin hemolyyttiseen toimintaan. Tämä substituutio, His367 —» Arg, estää täydellisesti hemolyyttisen toiminnan. On aivan ennakoimaton havainto, että His367 -» Arg inhiboi enemmän tätä ominaisuutta kuin sub-30 stituutiot, jotka on tehty 11 aminohapon alueella, jonka ajatellaan olevan vastuussa he-molyyttisestä toiminnasta.
CRP:n kaltaisilla domeeneilla olevat mutaatiot testattiin kyvyltään aktivoida komplementtia. Tpr379 -» Phe:n, Tyr384 -» Phe:n, Asp385 -» Asn,:n ja Trp397 Phe:n osalta 35 komplementtiaktivointi laski 20 %, 70 %, 100 % ja 15 % vastaavasti. Muut kuviossa 4 esitetyt mutaatiot CRP:n kaltaisilla domeeneilla eivät vähennä komplementin aktivointia. Edellä mainitut mutaatiot, jotka vaikuttavat joko hemolyyttiseen toimintaan tai 6 103122 komplementin aktivointiin, eivät huononna proteiinien immunogeenisuutta verrattuna luontaiseen tai villintyyppiseen pneumolysiiniin.
Vaikkakin His367 -► Arg on edullinen mutaatio hemolyyttisen toiminnan vähentämisek-5 si, kahden tai useamman hemolyyttistä toimintaa vähentävän mutantin kombinaatiolla voidaan saavuttaa korkea hemolyyttisen toiminnan tason lasku. Samoin Asp385 -> Asp on edullinen mutaatio vähentyneen komplementtiaktivoinnin saavuttamiseksi, joskin kahden tai useamman muun vähemmän toimintaa vähentävän mutantin yhdistelmää voidaan myös käyttää.
10
Edullisesti rokotteessa käytettävä pneumolysiinijohdannainen sisältää tiettyjen edellä mainittujen mutaatioiden yhdistelmän siten, että proteiini ei kykene aktivoimaan komplementtia sen lisäksi että sen hemolyyttinen toiminta on nolla. Esimerkkejä tällaisista yhdistelmistä ovat: 15 1) His367 -> Arg + Asp385 -> Asn, 2) His367 -» Arg + Asp385 -» Asn + joko Cys428 Gly tai Trp433 -» Phe 3) Asp385 -> Asn + Cys428 -> Gly + Trp433 -» Phe 20 Nämä ovat joitakin edullisia yhdistelmiä, vaikkakin on ymmärrettävä, että muita mutaatioiden kombinaatioita voidaan käyttää rokotteessa käytettäväksi tarkoitetun muutetun pneumolysiinin tekemiseksi. Lisäksi muutettu pneumolysiini voi käsittää minkä tahansa yksittäisen mutaation, jossa on riittävästi vähentynyt toiminta.
25 Muutettua pneumolysiiniä koodaavasta DNA:sta peräisin olevan muutetun pneumolysiinin korkea ilmentymistaso voidaan saavuttaa käyttämällä mitä tahansa lukuisista konventionaalisista tekniikoista mukaan lukien ilmentäminen prokaiyootti-isännässä, johon DNA on kloonattu sopivasti missä tahansa monista nykyisin saatavissa olevista ilmen-tämisvektoreista tai kloonattu sopivasti isäntäkromosomissa, tai in vitro -ilmentämisjär-30 jestelmässä, kuten sellaisessa, joka voi käsittää puhdistettuja komponentteja, joita tarvi-. . taan muutetun pneumolysiinin ilmentämiseen.
Mutatoidun pneumolysiinigeenin korkean ilmentymistason saavuttamiseksi se kloonattiin vektoriin pKK233-2 Escherichia colissa tai muussa sen kaltaisessa prokaryootissa 35 ilmentämistä varten. Tämä vektori sisälsi ampisilliini- ja tetrasykliiniresistantit geenit, trc-promoottorin (jota voidaan säätää IPTG:llä [isopropyyli-p-D-tiogalaktopyranosidi] ja lac Z -ribosomia sitovalla kohdalla, joka on ATG-aloituskodonin vieressä, joka sisäl- 7 103122 tää Ncol-restriktiokohdan. Välittömästi poispäin aloituskohdasta on Pstl:n ja HindIII:n restriktiokohdat, joita seuraa voimakas TiT2-transkriptiotenninaattori. Ennen pKK233-2:een liittämistä konstruoitiin Ncol-restriktiokohta pneumolysiiniä koodaavan sekvenssin 5-päähän (aloituskodonissa) oligonukleotidisuunnatulla mutageneesillä, kuten kuvi-5 ossa 2 on esitetty. Tämä mahdollistaa pKK233-2:n Ncol-paikkaan kloonattavan muutetun pneumolysiinigeenin proksimaalipään ja pneumolysiiniterminaatiokodoniin suunnilleen 80 emästä olevaan Hindlll-paikkaa käytettiin muutetun geenin distaalipään sil-mikoimiseksi pKK233-2:ssa olevaan yhteensopivaan kohtaan. Mutanttipneumolysiini-kloonijohdannainen voidaan kuitenkin kloonata mihin tahansa lukuisista korkeista il-10 mentämisvektorijäjjestelmistä.
Mutanttipneumolysiini valmistetaan seuraavasti: E. coli -solut, joissa on edellä mainittu rekombinanttiplasmidi, viljellään ensin 9 litran viljelmissä Luria Bertani- (tai missä tahansa muussa sopivassa) väliaineessa, jota on täydennetty sopivalla antibiootilla, 15 37°C:ssa ilmastaen. Kun viljelmä saavuttaa kasvun myöhäisen logaritmisen faasin, IPGT:tä lisätään 20 μΜ:η loppupitoisuuteen (muutetun pneumolysiinigeenin ilmentymisen indusoimiseksi) ja inkubointia jatketaan toiset 2-3 tuntia.
Solut kerätään sitten sentriiugoimalla tai ultrasuodatuksella ja lysoidaan käsittelemällä 20 EDTA:lla ja lysotsyymilla, mitä seuraa sonikointi, tai hajottamalla ranskalaisessa paine- solussa. Solujäte poistetaan sentriiugoimalla ja sitten uute dialysoidaan laajasti vasten 10 mM natriumfosfaattia (pH 7,0). Sitten materiaali panostetaan DEAE-selluloosapyl-vääseen ja eluoidaan lineaarisella 10-250 μΜ natriumfosfaattigradientilla (pH 7,0). Fraktiot, jotka sisältävät pneumolysiinijohdannaisen huipputasoja, kerätään, konsent-25 roidaan ultrasuodatuksella ja panostetaan Sephacryl S-200 -pylvääseen. Tämä pylväs kehitetään 50 mM natriumfosfaatissa (pH 7,0) ja jälleen kerätään fraktiot, joissa on korkeat pneumolysiinijohdannaistasot, ne konsentroidaan ultrasuodatuksella ja varastoidaan 50 % glyserolissa -15 °C:ssa. Lopputuote on yli 95 % puhdasta määritettynä SDS-poly-akryyliamidigeelielektroforeesilla. Hydrofobinen vuorovaikutuskromatografia fenyyli-30 Sepharosella on vaihtoehtoinen puhdistus, jota voidaan myös käyttää. On kuitenkin ymmärrettävä, että se on vain yksi muutetun pneumolysiinin puhdistusmenetelmistä ja muita vaihtoehtoisia menetelmiä (mukaan lukien korkean paineen nestekromatografia) voidaan käyttää.
35 Puhdistettu muutettu pneumolysiini voidaan antaa rokotteina sopivina määrinä joko yksinään tai yhdistettynä muihin antigeeneihin. Eräässä muodossa pneumolysiini voidaan s 103122 konjugoida polysakkaridiin, joka on johdettu yhdestä tai useammasta erilaisesta edellä kuvatusta pneumokokkilajista.
Mutanttipneumolysiini voidaan konjugoida erilaisiin polysakkaridiserotyyppeihin useilla 5 menetelmillä. Ensin valmistetaan aktivoitu polysakkaridi käsittelemällä puhdas polysakkaridi (saatavissa kaupallisesti) syaanibromidilla ja adipiinihappodihydratsidilla (ADH). ADH-polysakkaridi yhdistetään sitten mutanttipneumolysiiniin 1 -etyyli-3-(3-dimetyyli-aminopropyyli)karbodi-imidi-HCl:n läsnäollessa. Konjugoitu materiaah erotetaan reagoivista aineista kromatografoimalla Sepharose CL-4B:n läpi.
10
Polysakkaridi-mutanttipneumolysiinikonjugaatit voidaan valmistaa vaihtoehtoisesti käyttämällä bifunktionaalisia reagoivia aineita, kuten N-sukkimmidyyh-6(4'-atsido-2'-nitrofenyyliamino)heksanoaatti (SANPAH). Fosfaatilla puskuroituun suolahuokseen liuotetun puhtaan polysakkaridin annetaan reagoida SANPAH:n kanssa voimakkaan 15 valkoisen valon lähteen läsnäollessa. Sitten reagoimaton SANPAH erotetaan aktivoituneesta polysakkaridista kromatografialla Sephadex G-50:llä. Sitten aktivoitunut polysakkaridi konjugoidaan mutanttipneumolysiiniin 0,2 M boraattipuskurissa (pH 8,5). Sitten mikä tahansa ylimääräisistä reaktiivisista ryhmistä suojataan lysiinillä ja polysak-karidi-proteiinikonjugaatti erotetaan muista reagoivista aineista kromatografoimalla 20 Sepharose CL-4B:llä. Konjugaatit voidaan valmistaa myös pelkistysaminoinnilla syaa-niboorihydridillä.
Toinen proteiini, kuten inaktivoitu tetanustoksiini, voidaan konjugoida vaihtoehtoisesti haluttuihin polysakkarideihin ja muutettu pneumolysiini voidaan lisätä rokotteeseen 25 konjugoimattomassa muodossa.
Edellä on kuvattu keksinnön paras suorittamismenetelmä, eikä sitä tule ymmärtää keksintöä rajoittavaksi.
Claims (15)
1. Eristetty DNA-sekvenssi, joka koodaa muutettua pneumolysiiniä, joka on oleellisesti ei-toksista ja kykenee nostattamaan immuunivasteen eläimessä, joka on reaktiivi-5 nen villityyppiselle pneumolysiinille, tunnettu siitä, että sen koodaaman muutetun pneumolysiinin aminohapposekvenssi on esitetty kuvassa 3, jota sekvenssiä on muutettu vähintään yhdellä aminohapposubstituutiolla, deleetiolla tai salpaamisella alueella, joka koodaa aminohappoja 427-437,368-397 tai 257-297.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että se koodaa muutettua pneumolysii-niä, jonka komplementin sitomisaktiivisuus on vähentynyt verrattuna villityyppiseen pneumolysiiniin.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että 15 se koodaa muutettua pneumolysiiniä, jonka Fc-sitomisaktiivisuus on vähentynyt verrattuna villityyppiseen pneumolysiiniin.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että sen koodaama muutettu pneumolysiini on konjugoitu kotelopolysakkaridimateriaa- 20 liin, joka on johdettu mistä tahansa yhdestä tai useammasta Streptococcus-serotyypistä.
5 Val Asp Arg Ala Pro Met Thr Tyr Ser De Asp Leu Pro 101 Gly Leu Ala Ser Ser Asp Ser Phe Leu Gin Val Glu Asp 111 Pro Ser Asn Ser Ser Val Arg Gly Ala Val Asn Asp Leu 10 121 Leu Ala Lys Trp His Gin Asp Tyr Gly Gin Val Asn Asn 131 141 jossa Ri on His tai Arg, R2 on Trp tai Phe, R3 on Tyr tai Phe, Rj on Asp tai Asn, R5 on 15 Trp tai Phe, R^ on Cys, Gly tai Ser, R7 on Trp tai Phe, Rg on Glu tai Asp, R9 on Trp tai Phe ja jossa vähintään yksi tähteistä Ri, R$, R7, Rg tai R9 on muu kuin villityyppinen.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että kote-lomateriaali on johdettu yhdestä tai useammasta Streptococcus pneumoniae -serotyypis-tä 6A, 6B, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 1, 2, 3, 4, 5, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11 A, 12F, 15B, 25 17F, 20, 22F ja 33F.
6. Eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että se koodaa muutettua pneumolysiiniä, jolla on seuraava aminohapposekvenssi:
30 Met Ala Asn Lys Ala Vai Asn Asp Phe Ile Leu Ala Met - v 1 11 Asn Tyr Asp Lys Lys Lys Leu Leu Thr His Gin Gly Glu 21 Ser Ile Glu Asn Arg Phe De Lys Glu Gly Asn Gin Leu 35 31 Pro Asp Glu Phe Vai Vai De Glu Arg Lys Lys Arg Ser 41 51 : Leu Ser Thr Asn Thr Ser Asp De Ser Vai Thr Ala Thr 61 103122 Asn Asp Ser Arg Leu Tyr Pro Gly Ala Leu Leu Vai Val 71 Asp Glu Thr Leu Leu Glu Asn Asn Pro Thr Leu Leu Ala 81 91
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että Ri on Arg, R2 Trp, R3 on Tyr, R4 on Asn, R5 on Trp, Rö on Cys, R7 on Trp, Rg on Glu ja R9 20 on Trp.
8. Patenttivaatimuksen 6 tai 7 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että sen koodaama muutettu pneumolysiini on konjugoitu kotelopolysakkaridimateriaaliin, joka on johdettu mistä tahansa yhdestä tai useammasta Streptococcus-serotyypistä. 25
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen eristetty DNA-sekvenssi, tunnettu siitä, että kote- ' lomateriaali on johdettu yhdestä tai useammasta Streptococcus pneumoniae -serotyypis- tä 6A, 6B, 14, 18C, 19A, 19F, 23F, 1, 2, 3, 4, 5, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 15B, 17F, 20,22F ja 33F. 30
10. Rekombinanttiplasmidi, tunnettu siitä, että se sisältää minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-7 mukaisen muutettua pneumolysiiniä koodaavan DNA-sekvenssin.
11. Hybridi-isäntäsolu, tunnettu siitä, että sisältää patenttivaatimuksen 10 mukaisen 35 rekombinanttiplasmidin, joka sisältää indusoitavan ilmentämisen ohjauksen, joka toimii sanotun muutettua pneumolysiiniä koodaavan DNA-sekvenssin ilmentämiseksi isäntäso-lussa. „ 103122
12. Menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että se käsittää jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukaisen, muutettua pneumolysiiniä koodaavan DNA-sekvenssin, joka on läsnä patenttivaatimuksen 10 mukaisessa rekombinanttiplas-midissa, transkription ja translaation, ja muutetun pneumolysiinin puhdistamisen ilmen- 5 tämissysteemistä.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää vaiheen, jossa muutettu pneumolysiini puhdistetaan isäntäsoluviljelmästä, joka sisältää rekombinanttikloonin, jossa on muutettua pneu- 10 molysiiniä koodaava, jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukainen DNA-sekvenssi.
14. Patenttivaatimuksen 12 tai 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se sisältää vaiheen, jossa konjugoidaan muutettu pneumolysiini kotelopolysakkaridin kanssa.
15 Patentkrav
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AUPJ198988 | 1988-12-16 | ||
| AUPJ198988 | 1988-12-16 | ||
| AU8900539 | 1989-12-15 | ||
| PCT/AU1989/000539 WO1990006951A1 (en) | 1988-12-16 | 1989-12-15 | Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI912878A0 FI912878A0 (fi) | 1991-06-14 |
| FI103122B true FI103122B (fi) | 1999-04-30 |
| FI103122B1 FI103122B1 (fi) | 1999-04-30 |
Family
ID=3773589
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI912878A FI103122B1 (fi) | 1988-12-16 | 1991-06-14 | Menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0449856B1 (fi) |
| JP (1) | JP3237842B2 (fi) |
| AT (1) | ATE205534T1 (fi) |
| AU (1) | AU626961B2 (fi) |
| BG (1) | BG51358A3 (fi) |
| CA (1) | CA2005704C (fi) |
| DE (1) | DE68929323T2 (fi) |
| DK (1) | DK173629B1 (fi) |
| ES (1) | ES2160570T3 (fi) |
| FI (1) | FI103122B1 (fi) |
| HU (1) | HUT58804A (fi) |
| MC (1) | MC2178A1 (fi) |
| NO (1) | NO304317B1 (fi) |
| RU (1) | RU2121481C1 (fi) |
| WO (1) | WO1990006951A1 (fi) |
Families Citing this family (93)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6716432B1 (en) * | 1988-12-16 | 2004-04-06 | James Cleland Paton | Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom |
| CA2059693C (en) * | 1991-01-28 | 2003-08-19 | Peter J. Kniskern | Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae |
| US5391712A (en) * | 1991-08-30 | 1995-02-21 | Beckman Instruments, Inc. | Non-hemolytic streptolysin O variants |
| US5928900A (en) * | 1993-09-01 | 1999-07-27 | The Rockefeller University | Bacterial exported proteins and acellular vaccines based thereon |
| WO1995016711A1 (es) * | 1993-12-17 | 1995-06-22 | Universidad De Oviedo | Anticuerpos contra la neumolisina y sus aplicaciones |
| US8791237B2 (en) | 1994-11-08 | 2014-07-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for treatment of non-hodgkins lymphoma |
| HUP0002475A3 (en) * | 1997-07-21 | 2002-01-28 | Baxter Healthcare S A Wallisel | Modified immunogenic pneumolysin compositions as vaccines |
| HU228499B1 (en) * | 1999-03-19 | 2013-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Streptococcus vaccine |
| GB9906437D0 (en) * | 1999-03-19 | 1999-05-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| GB9918319D0 (en) | 1999-08-03 | 1999-10-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| GB0022742D0 (en) * | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| AU1412702A (en) | 2000-10-27 | 2002-05-06 | Chiron Spa | Nucleic acids and proteins from streptococcus groups a and b |
| GB0109297D0 (en) | 2001-04-12 | 2001-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| PT2255826E (pt) | 2002-08-02 | 2016-06-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composições de vacina de neisseria compreendendo uma combinação de antigénios |
| AU2003278166B2 (en) | 2002-11-01 | 2009-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| ES2451620T3 (es) * | 2002-11-07 | 2014-03-28 | Synergy America, Inc. | Composiciones y métodos destinados a tratar o prevenir la infección neumocócica |
| AU2004219910B2 (en) | 2003-03-13 | 2010-06-17 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Purification process for bacterial cytolysin |
| PT1648500E (pt) | 2003-07-31 | 2014-10-10 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Composições imunogénicas para estreptococos piogenes |
| US8945589B2 (en) | 2003-09-15 | 2015-02-03 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Srl | Immunogenic compositions for Streptococcus agalactiae |
| US8574596B2 (en) | 2003-10-02 | 2013-11-05 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Pertussis antigens and use thereof in vaccination |
| US20060257421A1 (en) * | 2004-02-13 | 2006-11-16 | Martina Ochs | Pneumolysin derivatives |
| WO2005108419A1 (en) * | 2004-05-07 | 2005-11-17 | Lea-Ann Kirkham | Mutant cholesterol-binding cytolysin proteins |
| GB0410220D0 (en) * | 2004-05-07 | 2004-06-09 | Kirkham Lea Ann | Mutant pneumolysin proteins |
| EP2612679A1 (en) | 2004-07-29 | 2013-07-10 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Immunogenic compositions for gram positive bacteria such as streptococcus agalactiae |
| GB0421083D0 (en) * | 2004-09-22 | 2004-10-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Purification process |
| JP2008544949A (ja) | 2004-10-08 | 2008-12-11 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 化膿性レンサ球菌のための免疫激性組成物および治療用組成物 |
| GB0505996D0 (en) | 2005-03-23 | 2005-04-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Fermentation process |
| TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| AR058707A1 (es) | 2005-12-22 | 2008-02-20 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna, procedimiento para fabricarla y su uso |
| CA2636566C (en) | 2006-01-17 | 2018-03-13 | Arne Forsgren | A novel surface exposed haemophilus influenzae protein (protein e; pe) |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| US8273361B2 (en) | 2006-09-26 | 2012-09-25 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| PL2086582T3 (pl) | 2006-10-12 | 2013-04-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Kompozycja zawierająca adiuwant w postaci emulsji typu olej w wodzie |
| PT2086582E (pt) | 2006-10-12 | 2013-01-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina compreendendo uma emulsão adjuvante óleo em água |
| US9717788B2 (en) | 2007-03-02 | 2017-08-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Method of inducing an immune response against HIV employing HIV immunogens, adenoviral vectors encoding said immunogens, and adjuvant |
| CN105106971A (zh) | 2007-03-02 | 2015-12-02 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 疫苗组合物及其在刺激免疫反应中的用途 |
| EP2386567B1 (en) * | 2007-04-13 | 2014-10-29 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Mutants of cholesterol-dependent cytolysins and uses thereof |
| EP2167121B1 (en) | 2007-06-26 | 2015-09-02 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates |
| GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
| RU2471497C2 (ru) | 2007-09-12 | 2013-01-10 | Новартис Аг | Мутантные антигены gas57 и антитела против gas57 |
| CN101977926B (zh) | 2007-12-21 | 2014-10-08 | 诺华股份有限公司 | 链球菌溶血素o的突变形式 |
| EA201001479A1 (ru) | 2008-04-16 | 2011-06-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Вакцина |
| GB0815872D0 (en) | 2008-09-01 | 2008-10-08 | Pasteur Institut | Novel method and compositions |
| US8758766B2 (en) * | 2008-12-24 | 2014-06-24 | The Kingdom of The Netherlands, Represented by The Mininster of Health, Welfare and Sport, on Behalf of The Minster The National Institute of Public Health and The Environment | Modified Streptococcus pneumoniae pneumolysin (PLY) polypeptides |
| AU2010227220B2 (en) | 2009-03-24 | 2014-11-13 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Combinations of meningococcal factor H binding protein and pneumococcal saccharide conjugates |
| TWI494125B (zh) | 2009-06-05 | 2015-08-01 | Infectious Disease Res Inst | 合成的葡萄吡喃糖基脂質佐劑 |
| US20120237536A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-09-20 | Novartis | Combination vaccines against respiratory tract diseases |
| EP2515938A4 (en) * | 2009-12-22 | 2013-08-28 | Sanofi Pasteur Ltd | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS |
| CN102939105B (zh) | 2009-12-22 | 2016-11-16 | 赛诺菲巴斯德有限公司 | 免疫原性组合物和相关的方法 |
| DK2544693T3 (en) | 2010-03-09 | 2017-12-04 | Biomedical Res Models Inc | Hitherto UNKNOWN ACCESS TO VACCINATION THROUGH MILKHINDER AGAINST HERPES SIMPLEX VIRUS TYPE-2 |
| GB201003924D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| JP2013521326A (ja) | 2010-03-10 | 2013-06-10 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組成物 |
| WO2011130434A2 (en) | 2010-04-13 | 2011-10-20 | Celldex Therapeutics Inc. | Antibodies that bind human cd27 and uses thereof |
| GB201015132D0 (en) | 2010-09-10 | 2010-10-27 | Univ Bristol | Vaccine composition |
| WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
| GB201022007D0 (en) | 2010-12-24 | 2011-02-02 | Imp Innovations Ltd | DNA-sensor |
| US9181308B2 (en) | 2011-03-28 | 2015-11-10 | St. Jude Children's Research Hospital | Methods and compositions employing immunogenic fusion proteins |
| US9044420B2 (en) | 2011-04-08 | 2015-06-02 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| UY34073A (es) | 2011-05-17 | 2013-01-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna mejorada de streptococcus pneumoniae y métodos de preparación. |
| CN104363892A (zh) | 2012-02-07 | 2015-02-18 | 传染性疾病研究院 | 包含tlr4激动剂的改进佐剂制剂及其使用方法 |
| WO2013131983A1 (en) | 2012-03-07 | 2013-09-12 | Novartis Ag | Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens |
| EP3388835B1 (en) | 2012-05-16 | 2020-04-01 | Immune Design Corp. | Vaccines for hsv-2 |
| US9566325B2 (en) | 2013-01-07 | 2017-02-14 | Biomedical Research Models, Inc. | Therapeutic vaccines for treating herpes simplex virus type-2 infections |
| EP2964665B1 (en) | 2013-03-08 | 2018-08-01 | Pfizer Inc | Immunogenic fusion polypeptides |
| SG11201508092YA (en) | 2013-04-18 | 2015-10-29 | Immune Design Corp | Gla monotherapy for use in cancer treatment |
| US11207396B2 (en) | 2013-05-17 | 2021-12-28 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Immunization to protect against adverse cardiac events relating to pneumococcal infection |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| KR20220100041A (ko) | 2013-12-31 | 2022-07-14 | 인펙셔스 디지즈 리서치 인스티튜트 (아이디알아이) | 단일 바이알 백신 제형 |
| US9815886B2 (en) | 2014-10-28 | 2017-11-14 | Adma Biologics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency |
| US10562941B2 (en) | 2014-11-21 | 2020-02-18 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Pneumolysin mutants and methods of use thereof |
| WO2016145085A2 (en) | 2015-03-09 | 2016-09-15 | Celldex Therapeutics, Inc. | Cd27 agonists |
| GB201518684D0 (en) | 2015-10-21 | 2015-12-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| WO2017176076A1 (en) | 2016-04-06 | 2017-10-12 | Ewha University - Industry Collaboration Foundation | A peptide with ability to penetrate cell membrane |
| JP7038064B2 (ja) | 2016-04-18 | 2022-03-17 | セルデックス セラピューティクス インコーポレイテッド | ヒトｃｄ４０に結合するアゴニスト抗体およびその使用 |
| KR102483033B1 (ko) | 2016-05-16 | 2022-12-30 | 액세스 투 어드밴스드 헬스 인스티튜트 | 페길화된 리포솜 및 이의 용도 |
| EP4112638A1 (en) | 2016-05-16 | 2023-01-04 | Access to Advanced Health Institute | Formulation containing tlr agonist and methods of use |
| WO2017210364A1 (en) | 2016-06-01 | 2017-12-07 | Infectious Disease Research Institute | Nanoalum particles containing a sizing agent |
| GB201610599D0 (en) | 2016-06-17 | 2016-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic Composition |
| US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
| CA3067224A1 (en) | 2017-06-15 | 2018-12-20 | Infectious Disease Research Institute | Nanostructured lipid carriers and stable emulsions and uses thereof |
| CN111315406A (zh) | 2017-09-08 | 2020-06-19 | 传染病研究所 | 包括皂苷的脂质体调配物及其使用方法 |
| KR20210011919A (ko) | 2018-04-17 | 2021-02-02 | 셀덱스 쎄라퓨틱스, 인크. | 항-cd27 항체 및 항-pd-l1 항체 및 이중특이적 작제물 |
| US20220016168A1 (en) | 2018-12-11 | 2022-01-20 | Celldex Therapeutics, Inc. | Methods of using cd27 antibodies as conditioning treatment for adoptive cell therapy |
| US20220054632A1 (en) | 2018-12-12 | 2022-02-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified carrier proteins for o-linked glycosylation |
| BR112021023726A2 (pt) | 2019-05-25 | 2022-02-15 | Infectious Disease Res Inst | Composição e método para secagem por pulverização de uma emulsão de vacina adjuvante |
| EP3900739A1 (en) | 2020-04-21 | 2021-10-27 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Synthetic streptococcus pneumoniae saccharide conjugates to conserved membrane protein |
| EP3919076A1 (en) | 2020-06-02 | 2021-12-08 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Synthetic oligosaccharide vaccines against streptococcus pneumoniae with microparticle adjuvant formulations |
| AU2021337493A1 (en) | 2020-09-04 | 2023-05-18 | Access To Advanced Health Institute | Co-lyophilized rna and nanostructured lipid carrier |
| KR20240006541A (ko) | 2021-04-09 | 2024-01-15 | 셀덱스 쎄라퓨틱스, 인크. | Ilt4에 대한 항체, 이중특이적 항-ilt4/pd-l1 항체 및 이의 용도 |
| WO2023077521A1 (en) | 2021-11-08 | 2023-05-11 | Celldex Therapeutics, Inc | Anti-ilt4 and anti-pd-1 bispecific constructs |
| CA3237496A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Matrivax, Inc. | Immunogenic fusion protein compositions and methods of use thereof |
| WO2024052882A1 (en) | 2022-09-09 | 2024-03-14 | Access To Advanced Health Institute | Immunogenic vaccine composition incorporating a saponin |
-
1989
- 1989-12-15 AT AT90900035T patent/ATE205534T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-12-15 EP EP90900035A patent/EP0449856B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-15 DE DE68929323T patent/DE68929323T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-15 RU SU4895772A patent/RU2121481C1/ru active
- 1989-12-15 CA CA002005704A patent/CA2005704C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-15 WO PCT/AU1989/000539 patent/WO1990006951A1/en active IP Right Grant
- 1989-12-15 HU HU90433A patent/HUT58804A/hu unknown
- 1989-12-15 MC MC89@@D patent/MC2178A1/xx unknown
- 1989-12-15 AU AU47564/90A patent/AU626961B2/en not_active Expired
- 1989-12-15 JP JP50093590A patent/JP3237842B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-15 ES ES90900035T patent/ES2160570T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-06-11 NO NO912226A patent/NO304317B1/no not_active IP Right Cessation
- 1991-06-12 BG BG094614A patent/BG51358A3/xx unknown
- 1991-06-14 FI FI912878A patent/FI103122B1/fi active
- 1991-06-14 DK DK199101155A patent/DK173629B1/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BG51358A3 (en) | 1993-04-15 |
| NO912226D0 (no) | 1991-06-11 |
| MC2178A1 (fr) | 1992-05-22 |
| JPH04503948A (ja) | 1992-07-16 |
| EP0449856A1 (en) | 1991-10-09 |
| DK173629B1 (da) | 2001-05-14 |
| CA2005704C (en) | 2003-02-11 |
| CA2005704A1 (en) | 1990-06-16 |
| NO912226L (no) | 1991-07-25 |
| FI912878A0 (fi) | 1991-06-14 |
| HUT58804A (en) | 1992-03-30 |
| EP0449856B1 (en) | 2001-09-12 |
| WO1990006951A1 (en) | 1990-06-28 |
| DK115591A (da) | 1991-08-14 |
| AU626961B2 (en) | 1992-08-13 |
| AU4756490A (en) | 1990-07-10 |
| FI103122B1 (fi) | 1999-04-30 |
| ATE205534T1 (de) | 2001-09-15 |
| DE68929323T2 (de) | 2002-04-18 |
| RU2121481C1 (ru) | 1998-11-10 |
| ES2160570T3 (es) | 2001-11-16 |
| NO304317B1 (no) | 1998-11-30 |
| DE68929323D1 (de) | 2001-10-18 |
| EP0449856A4 (en) | 1992-05-20 |
| JP3237842B2 (ja) | 2001-12-10 |
| DK115591D0 (da) | 1991-06-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI103122B (fi) | Menetelmä muutetun pneumolysiinin valmistamiseksi | |
| JP3927233B2 (ja) | 肺炎双球菌感染症に対する免疫化のための肺炎双球菌多糖−組み換えニューモリシン結合体ワクチン類 | |
| ES2322306T3 (es) | Proteinas de streptpcpccus pneumoniae y fragmentos inmunogenicos para vacunas. | |
| Briles et al. | The potential for using protein vaccines to protect against otitis media caused by Streptococcus pneumoniae | |
| US7585669B2 (en) | Compositions and methods for treating or preventing pneumococcal infection | |
| ES2264419T3 (es) | Vacunas y proteinas de streptococcus pneumoniae. | |
| AU2017336806A1 (en) | Multivalent pneumococcal vaccine compositions comprising polysaccharide-protein conjugates | |
| US6716432B1 (en) | Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom | |
| EP2292644A2 (en) | Small Streptococcus pyogenes antigens and their use | |
| EP0453024B1 (en) | Actinobacillus pleuropneumoniae subunit vaccine | |
| US6342223B1 (en) | Immunogenic composition for group B Streptococcus | |
| CA2365915C (en) | Recombinant toxin a/toxin b vaccine against clostridium difficile | |
| AU689452B2 (en) | Conjugate vaccine against group B streptococcus | |
| Haeuw et al. | The recombinant Klebsiella pneumoniae outer membrane protein OmpA has carrier properties for conjugated antigenic peptides | |
| CA1341334C (en) | Synthetic peptides from streptococcal m protein and vaccines prepared therefrom | |
| JP4749641B2 (ja) | ワクチン用の肺炎球菌タンパク質の相同体および断片 | |
| AU2013203639A1 (en) | Small streptococcus pyogenes antiens and their use | |
| Paterson et al. | Construction and Immunological |