ES2948564T3

ES2948564T3 - Moduladores de adhesión celular, métodos y composiciones de los mismos

Info

Publication number: ES2948564T3
Application number: ES18792765T
Authority: ES
Inventors: Orest Blaschuk; Arkadii Vaisburg
Original assignee: Zonula Inc
Current assignee: Zonula Inc
Priority date: 2017-10-03
Filing date: 2018-10-03
Publication date: 2023-09-14
Anticipated expiration: 2038-10-03
Also published as: US20200048200A1; EP3692018B1; US10494345B2; US10647672B2; WO2019070816A1; EP3692018A1; US20190100493A1; EP3692018C0

Abstract

Se describen compuestos con actividad como moduladores de la adhesión celular. Los compuestos son derivados de piperidin-4-amina. En algunas realizaciones, un compuesto puede unirse a un agente de direccionamiento, una sustancia farmacéuticamente activa y/o un material de soporte. También se describen métodos para mejorar o inhibir funciones clásicas mediadas por cadherina. Los compuestos se pueden usar para el tratamiento o prevención de una variedad de enfermedades, incluido el cáncer. También se describen composiciones y dispositivos, incluidos parches para la piel que comprenden un compuesto. Además, se proporcionan métodos de síntesis de los compuestos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Moduladores de adhesión celular, métodos y composiciones de los mismos

Campo

La presente invención se refiere en general a compuestos de molécula pequeña, composiciones y métodos para modular funciones mediadas por cadherina.

Introducción

La adhesión celular está mediada por moléculas de adhesión a la superficie celular (CAM) específicas. Hay muchas familias diferentes de CAM, que incluyen las superfamilias de inmunoglobulina, integrina, selectina y cadherina, y cada tipo de célula expresa una combinación única de estas moléculas. Las cadherinas (también denominadas en el presente documento como CAD) son una familia de CAM dependientes de calcio (Hulpiau, P., van Roy, F., Int. J. Biochem. Cell Biol. 41: 349-369, 2009). Las cadherinas clásicas (CAD clásicas abreviadas) son glicoproteínas de membranas integrales que generalmente median la adhesión celular a través de interacciones homofílicas (una CAD sobre la superficie de una célula se une a una CAD idéntica sobre la superficie de otra célula), aunque las CAD clásicas también parecen ser capaces de formar complejos heterotípicos entre sí bajo determinadas circunstancias y con menor afinidad. Se ha demostrado que las CAD clásicas regulan la adhesión de células epiteliales, endoteliales, murales, estromales, neurales, cancerosas y madre, con diferentes CAD expresadas sobre diferentes tipos de células. La cadherina N (neural) se expresa predominantemente en las células neurales, células endoteliales, células del músculo liso (por ejemplo, pericitos), células del estroma (por ejemplo, fibroblastos) y una variedad de tipos de células cancerosas. La cadherina E (epitelial) se expresa predominantemente en células epiteliales y células madre. Otras CAD son la cadherina P (placentaria), que se encuentra en la piel humana y ciertos tipos de células cancerosas (por ejemplo, células cancerosas de la vejiga) y la cadherina R (retiniana). Se proporcionan discusiones detalladas de las cadherinas clásicas en Blaschuk, O.W., Phil. Trans. R. Soc. B 370: 1661, 2015, Harrison, O.J., et al., Structure 19: 244-256, 2011 and Hulpiau, P., and van Roy, F., Int. J. Biochem. Cell Biol. 41: 349-369, 2009.

Las estructuras de las CAD clásicas son generalmente similares. Como se ilustra en la FIG. 1, las CAD clásicas se componen de cinco dominios extracelulares (EC1-EC5), un solo dominio hidrofóbico (TM) que atraviesa la membrana plasmática (PM) y dos dominios citoplasmáticos (CP1 y CP2). Los motivos de unión al calcio se muestran mediante DXNDN (SEQ ID NO: 1), DXD, XDXE (SEQ ID NO: 2), DYNE (SEQ ID NO: 3) y LDRE (SEQ ID NO: 4). La secuencia clásica de reconocimiento de adhesión celular (CAR) (HAV) y una secuencia CAR que contiene Trp (D/E-W-V-IN/M-P/A-P, SEQ ID NO: 5) se muestran dentro de EC1. Cada uno de los dominios extracelulares comprende alrededor de 110 aminoácidos.

Aunque se requiere la adhesión celular para ciertas funciones fisiológicas normales, existen situaciones en las que el nivel de adhesión celular es indeseable. Por ejemplo, muchas patologías (tales como enfermedades autoinmunitarias, cáncer y enfermedades inflamatorias) implican una adhesión celular anormal. La adhesión celular también puede desempeñar una función en el rechazo del injerto. En dichas circunstancias, puede ser deseable la modulación de la adhesión celular.

La N-cadherina ha surgido como una importante diana terapéutica en oncología. Media en la formación de vasos sanguíneos (angiogénesis) y está implicada en el mantenimiento de la integridad estructural de los vasos sanguíneos (Blaschuk, O.W. and Devemy, E., European J. Pharmacol. 625: 195-198, 2009). El crecimiento tumoral depende de estos procesos. La expresión de N-cadherina también se ha documentado en numerosos tipos de tumores pobremente diferenciados. Esta CAM también está implicada en la regulación de la proliferación, supervivencia, invasividad y metástasis de las células cancerosas. La interrupción de las interacciones intercelulares homofílicas de N-cadherina utilizando antagonistas presenta, por lo tanto, una posible estrategia para las terapias contra el cáncer. Se proporciona una discusión detallada del potencial para los antagonistas de N-cadherina que sirven como agentes contra el cáncer en Blaschuk, O.W., Phil. Trans. R. Soc. B 370:1661, 2015.

Varias referencias divulgan antagonistas de la actividad de cadherina. La patente US 8,883,501 otorgada a Ward divulga antagonistas biológicos de E-cadherina. Esta referencia no divulga ni discute antagonistas que no sean proteínas u otras moléculas producidas biológicamente. Lammens, T., et al., PLoS ONE 7: e31206, 2012, Beasley G.M., et al. Cancer 115: 4766-4774, 2009, Perotti A., et al., Ann. Oncol. 20: 741-745, 2009 and Augustine, C.K., et al., Cancer Res. 68: 3777-3784. 2008 divulgan ADH-1, un péptido cíclico antagonista de N-cadherina que contiene el sitio de reconocimiento de adhesión celular His-Ala-Val que se considera importante en la adhesión mediada por N-cadherina. La Patente US 7,456,153 otorgada a Blaschuk y Michaud divulga un compuesto que facilita el suministro transdérmico de hidrocortisona a través de la piel sin pelo del ratón en un ensayo de células de Franz.

Actualmente no existen tratamientos adecuados para una variedad de cánceres, tales como cánceres de páncreas y de próstata. De acuerdo con lo anterior, subsiste la necesidad de compuestos que inhiban la adhesión celular que se puedan utilizar en tratamientos contra el cáncer.

Los parches para la piel son una herramienta conveniente para administrar fármacos a través de la piel. Sin embargo, el uso de parches para la piel se ha limitado a moléculas hidrofóbicas pequeñas debido a las barreras de permeabilidad de las células epiteliales y endoteliales que surgen de la adhesión celular clásica mediada por cadherina. Dichas barreras crean dificultades para el suministro de fármacos a tejidos y tumores específicos dentro del cuerpo. De manera similar, las células endoteliales hacen que los capilares sanguíneos sean en gran medida impermeables a los fármacos, y la barrera hematoencefálica dificulta la dirección de los fármacos al sistema nervioso central. Además, muchos tumores sólidos desarrollan barreras de permeabilidad interna que limitan el suministro de fármacos y anticuerpos contra el cáncer a las células cancerosas que residen dentro de los tumores.

Los intentos de facilitar el paso de fármacos a través de dichas barreras generalmente se basan en receptores específicos o proteínas transportadoras que transportan moléculas a través de las barreras in vivo. Sin embargo, dichos métodos suelen ser ineficaces debido a las bajas tasas de transporte endógeno o al mal funcionamiento de una proteína transportadora con fármacos. Si bien se ha potenciado la eficiencia utilizando una variedad de agentes químicos que interrumpen la adhesión celular, dichos agentes normalmente se asocian con efectos secundarios indeseables, pueden requerir procedimientos invasivos para administración y pueden provocar efectos irreversibles.

El sistema inmunitario desempeña una función importante en la destrucción de células cancerosas (Joyce, J.A. and Fearon, D.T., Science 348:74-80, 2015). Desafortunadamente, las barreras formadas por fibroblastos en el microambiente del estroma impiden que las células T citotóxicas del sistema inmunitario entren en contacto y destruyan las células cancerosas de los tumores sólidos. Se necesitan métodos para potenciar la permeabilidad del estroma del tumor para que las células T puedan acceder a las células cancerosas.

También se evita que las nanopartículas que portan fármacos accedan a las células cancerosas de los tumores sólidos mediante el estroma. Se necesitan métodos para aumentar la permeabilidad del estroma tumoral, lo que permite que las nanopartículas accedan a las células cancerosas.

De acuerdo con lo anterior, subsiste la necesidad de compuestos que modulen la adhesión celular y potencien el suministro de células T, nanopartículas y fármacos a través de las barreras de permeabilidad.

Actualmente no existen tratamientos adecuados para la fibrosis pulmonar, en particular la fibrosis pulmonar idiopática. De acuerdo con lo anterior, subsiste la necesidad de compuestos moduladores de la adhesión celular que se puedan utilizar en el tratamiento de la fibrosis.

Amin et al se refieren a la inhibición de la invasión en células de cáncer de páncreas por conjugado de EPA con 133,3-Pip-OH a través de la Ruta PI3K/Akt/NF-kB (ACS MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, 2015, vol. 6, no. 10, páginas 1071-1074).

Resumen

Los presentes inventores divulgan un antagonista de la adhesión celular de molécula pequeña y métodos para la inhibición de la adhesión celular mediada por CAD, que incluyen, sin limitación, la inhibición de la adhesión celular mediada por CAD clásica y la inhibición de la adhesión celular mediada por CAD no clásica. El antagonista descrito en el presente documento, en diversas realizaciones, se puede utilizar para modular una función celular mediada por una cadherina clásica o por otra clase de molécula de adhesión celular, tal como una cadherina no clásica. En varias configuraciones, el antagonista de las presentes enseñanzas puede interferir con la actividad de una CAD clásica expresada en una célula. En varias configuraciones, se puede seleccionar una CAD clásica del grupo que consiste en E-cadherina, N-cadherina, P-cadherina, R-cadherina y cualquier combinación de las mismas.

De acuerdo con la invención se proporciona un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto es (S)-1-(3,4-diclorofenoxi)-3-(4-(((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propil)amino)piperidin-1-il)propan-2-ol

En algunas realizaciones, las presentes enseñanzas incluyen composiciones que comprenden el antagonista de la adhesión celular descrito en el presente documento y un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una composición de las presentes enseñanzas puede comprender adicionalmente uno o más compuestos heterólogos. En varias configuraciones, un compuesto heterólogo puede ser, sin limitación, una sustancia farmacéuticamente activa, un agente dirigido a una diana específica, un marcador detectable, o un soporte sólido. Un soporte sólido puede ser, por ejemplo y sin limitación, una matriz polimérica, un plato de plástico, un tubo de plástico, una sutura, una membrana, una película ultrafina, un biorreactor, una nanopartícula o una micropartícula. Un marcador detectable puede tener, por ejemplo y sin limitación, un antígeno tal como un polipéptido que se puede detectar con un anticuerpo, o una enzima que se puede detectar con un sustrato cromogénico o fluorogénico.

En varias realizaciones, las presentes enseñanzas incluyen métodos para sintetizar el antagonista de adhesión celular divulgada en el presente documento. Los métodos de las presentes enseñanzas incluyen esquemas de síntesis para el compuesto (S)-1-(3,4-diclorofenoxi)-3-(4-(((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propil)amino)piperidin-1-il)propan-2-ol (15).

Una composición que comprende el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas puede comprender adicionalmente un ligador. En varias configuraciones, se puede utilizar un ligador para conectar dos o más antagonistas de las presentes enseñanzas. En algunos aspectos, también se puede utilizar un ligador, o alternativamente, para adherir uno o más antagonistas de la adhesión celular divulgados en el presente documento a una molécula o material de soporte, como se describe a continuación. En varias configuraciones, un ligador puede ser una fracción que no contiene una secuencia CAR y que se puede ligar covalentemente a al menos dos secuencias de péptidos. En varias configuraciones, un ligador puede ser, por ejemplo y sin limitación, un aminoácido, un péptido y/o una secuencia no peptídica, por ejemplo (H₂N(CH₂)nCO₂H)m en el que n es un entero desde 1 hasta 10 y m es un entero desde 1 hasta 4000 tal como glicina (H₂NCH₂CO₂H, es decir, n=1 y m=1), ácido aminopropanoico, ácido aminobutanoico, ácido aminopentanoico, ácido aminohexanoico, ácido 2,3-diaminopropanoico, lisina, ornitina o un multímero del mismo. En varios aspectos, un ligador peptídico o no peptídico se puede incorporar o adherir al antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas utilizando cualquier método conocido en la técnica. En varias realizaciones, un ligador se puede extender entre múltiples compuestos de las presentes enseñanzas, y las secuencias de péptidos o proteínas se pueden unir de cabeza a cola (es decir, el ligador se puede adherir covalentemente al grupo carboxilo o amino de cada secuencia de péptidos), cadena de cabeza a lado y/o cadena de cola a lado. En algunas configuraciones, un antagonista que comprende uno o más ligadores pueden formar estructuras lineales o ramificadas.

Las referencias a métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción se deben interpretar como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) por terapia (o para el diagnóstico).

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para inhibir la adhesión celular en un sujeto. En varias configuraciones, estos aspectos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, un método para inhibir la adhesión celular en un sujeto puede comprender poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con una composición de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, la administración a un sujeto puede comprender la administración transdérmica. En algunas configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero, tal como un humano, un animal de granja o un animal de compañía.

En varias realizaciones, la administración del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede utilizar en el tratamiento de varias enfermedades y trastornos. En varias realizaciones, la administración del antagonista de las presentes enseñanzas a un mamífero se puede utilizar, por ejemplo y sin limitación, para reducir la adhesión celular excesiva o no deseada, para inhibir el desarrollo del cáncer, para disminuir el tamaño de un tumor, para inhibir la angiogénesis, para modular la adipogénesis, para inhibir la fibrosis, para aumentar la vasopermeabilidad, para modular el sistema inmunitario, para modular la diferenciación de células madre y/o células progenitoras, para inhibir el sobrecrecimiento de neuritas, para prevenir el engrosamiento de la íntima al inhibir la migración de células del músculo liso y/o para estimular una respuesta inmunitaria a los tumores. Por ejemplo, las enfermedades que se someten a tratamiento con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas incluyen, sin limitación, cáncer, artritis, diabetes, obesidad, restenosis y fibrosis.

Un uso en el método para inhibir la adhesión celular puede comprender poner en contacto células que expresan una o más cadherinas (tales como, por ejemplo, E-cadherina o N-cadherina) con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En varias configuraciones, una célula que expresa cadherina puede ser, por ejemplo y sin limitación, una célula epitelial, una célula endotelial, una célula neural, una célula tumoral, una célula madre, una célula progenitora, una célula mural, una célula estromal o un linfocito El contacto puede incluir el contacto de una célula con una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para inducir la apoptosis en una célula que expresa CAD. En varias configuraciones, estos métodos comprenden poner en contacto una célula que expresa CAD con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas en una cantidad farmacológicamente efectiva para inhibir la adhesión celular mediada por CAD.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para reducir la progresión de un cáncer en un mamífero. El cáncer puede ser cualquier tipo de cáncer, tal como, por ejemplo y sin limitación, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, mieloma múltiple, leucemia mielógena crónica, melanoma, o neuroblastoma. En varias configuraciones, estos usos comprenden administrar a un mamífero que tiene un cáncer, el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, un método para inhibir metástasis de cáncer puede comprender administrar a un mamífero que tiene un cáncer el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas en una cantidad terapéuticamente efectiva.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para modular las barreras de permeabilidad tumoral a un fármaco, tal como, por ejemplo y sin limitación, un agente quimioterapéutico. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa CAD con el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, un uso en un método para modular una barrera de permeabilidad tumoral a un fármaco tal como un agente quimioterapéutico, puede comprender administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, un uso en un método para modular las barreras de permeabilidad tumoral a células T citotóxicas puede comprender poner en contacto una célula del estroma que expresa CAD con el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, un uso en un método para modular las barreras de permeabilidad tumoral a células T citotóxicas puede comprender administrar a un mamífero el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas en una cantidad efectiva.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para modular adipogénesis (un proceso que depende de la angiogénesis). En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa CAD con el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, un uso en un método para modular adipogénesis puede comprender administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para estimular la regresión de los vasos sanguíneos. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un mamífero el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas en una cantidad efectiva para inhibir la adhesión celular mediada por CAD. En algunas configuraciones, el uso en métodos para el tratamiento de condiciones de enfermedad que dependen de la angiogénesis y la neovascularización puede comprender poner en contacto una célula que expresa N-cadherina con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, el uso en métodos para el tratamiento de las condiciones de enfermedad que dependen de la angiogénesis y la neovascularización puede comprender administrar a un mamífero el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para modular el sistema inmunitario de un mamífero. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un mamífero una cantidad farmacológicamente efectiva del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para modular la adhesión, proliferación, migración y/o supervivencia celular, de células de músculo liso vascular (VSMC) o pericitos. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto un VSMC o pericito que expresa CAD con, o administrar a un mamífero, el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para regular el sobrecrecimiento y/o la migración de las VSMC o pericitos. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto células que expresan CAD tales como VSMC o pericitos con un antagonista de la adhesión celular mediada por CAD de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, el uso en métodos para regular el sobrecrecimiento y/o la migración de VSMC o pericitos en un mamífero puede comprender administrar a un mamífero un antagonista de la adhesión celular mediada por CAD de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, estos usos se pueden utilizar para prevenir la formación o el avance de la reestenosis, falla del injerto de derivación de vena, vasculopatía del aloinjerto, falla del injerto de diálisis, fibroateroma de capa fina y otras estenosis de vasos. En algunas configuraciones, la administración del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede utilizar para tratar hipertensión esencial y secundaria, ateroma, arteriesclerosis u otras indicaciones en las que se ha producido lesión o trauma endotelial. En algunas configuraciones, el uso en métodos para mantener el área luminal del vaso después de un traumatismo vascular puede comprender poner en contacto una célula que expresa CAD con el antagonista de adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, los métodos de uso para mantener el área luminal del vaso tras un traumatismo vascular pueden comprender administrar a un mamífero una cantidad farmacológicamente efectiva del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, el uso en métodos para tratar un vaso traumatizado puede comprender poner en contacto una célula que expresa CAD con un antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En algunas configuraciones, el uso en métodos para tratar un vaso traumatizado puede comprender administrar a un mamífero el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En algunas realizaciones, estos usos se pueden utilizar para tratar una lesión traumática, tal como, por ejemplo y sin limitación, daño que ocurre durante la colocación de stent, trasplante de órganos, derivación de vena, angioplastia o colocación de injerto de diálisis.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para tratar la fibrosis pulmonar en un mamífero. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un mamífero el antagonista de la adhesión celular en una cantidad efectiva para inhibir el desarrollo de fibrosis pulmonar.

En algunas realizaciones, las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para mejorar el suministro de una sustancia farmacéuticamente activa a través de la piel de un mamífero. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto células epiteliales de un mamífero con una sustancia farmacéuticamente activa y el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En varias configuraciones, el contacto se puede realizar en condiciones y durante un tiempo suficiente para promover el paso de la sustancia a través de las células epiteliales. En algunas configuraciones, los métodos para potenciar el suministro de una sustancia farmacéuticamente activa a un tumor en un mamífero pueden comprender poner en contacto el tumor con cantidades farmacéuticamente eficaces de una sustancia farmacéuticamente activa y el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. El contacto se puede realizar bajo condiciones y durante un tiempo suficiente para promover el paso de la sustancia a las células del tumor.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para potenciar el suministro de nanopartículas a un tumor en un mamífero. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto el tumor con nanopartículas y una cantidad farmacéuticamente efectiva del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. El contacto se puede realizar en condiciones y durante un tiempo suficiente para promover el paso de la nanopartícula al interior de las células del tumor.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para potenciar el suministro de una sustancia farmacéuticamente activa al sistema nervioso central de un mamífero. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un mamífero una cantidad farmacéuticamente efectiva del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para potenciar el suministro de compuestos inhalados a un mamífero. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto células epiteliales pulmonares de un mamífero con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto células epiteliales pulmonares de un mamífero con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, junto con una sustancia farmacéuticamente activa.

Uno o más antagonistas de la adhesión celular de las presentes enseñanzas pueden ser un componente activo de un dispositivo médico. En algunas configuraciones, el dispositivo médico puede ser, por ejemplo y sin limitación, un globo, un stent, una derivación, un catéter, un injerto de stent, un injerto vascular, un parche vascular, un filtro, una envoltura adventicia, un sistema de pavimento intraluminal, un stent cerebral, una bobina de filtro de aneurisma cerebral, un tapón de miocardio, un cable de marcapasos, un injerto de acceso de diálisis o una válvula cardíaca. En algunas configuraciones, el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede ligar a, recubrir y/o dispersar esencialmente dentro de cualquier dispositivo médico para permitir el suministro del antagonista a las células o tejidos.

El antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede suministrar a una célula que expresa CAD, o a un sujeto, mediante cualquier enfoque de suministro adecuado para una indicación dada y compatible con el suministro del antagonista de la adhesión celular. En algunas configuraciones, la administración del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede realizar a través de un catéter. En algunas configuraciones, la administración del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede realizar a través de una aguja de infusión.

Las presentes enseñanzas incluyen un parche que comprende una matriz y el antagonista de la adhesión celular divulgado en el presente documento. En algunas configuraciones, un parche puede incluir además al menos un agente farmacéutico adicional, tal como, por ejemplo y sin limitación, un quimioterapéutico para el tratamiento del cáncer. En varias realizaciones, un parche de las presentes enseñanzas puede ser un parche transdérmico que se puede utilizar para administrar el antagonista de la adhesión celular a un sujeto que lo necesita mediante absorción transdérmica. Un parche de las presentes enseñanzas se puede utilizar para administrar una sustancia farmacéutica a un sujeto que lo necesita, por lo que la presencia de un antagonista de las presentes enseñanzas promueve la absorción transdérmica del agente farmacéutico. Se puede utilizar un parche de las presentes enseñanzas para potenciar la permeabilidad de la piel. Un parche de las presentes enseñanzas se puede utilizar junto con un agente farmacéutico administrado por separado para potenciar la absorción transdérmica del agente en un sujeto que lo necesita, por lo que la presencia del antagonista de la adhesión celular promueve la absorción transdérmica.

En varias configuraciones, el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, administrado a través de un parche o a través de otra ruta de administración, con o sin un agente farmacéutico adicional, se puede utilizar, por ejemplo y sin limitación, para modular la angiogénesis, neovascularización, función del sistema inmunitario, adhesión celular, proliferación celular, migración celular y/o supervivencia celular.

En varias configuraciones, el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se puede utilizar para modular una barrera tumoral para las células T citotóxicas.

Las presentes enseñanzas incluyen kits que comprenden componentes que se pueden utilizar para potenciar la administración transdérmica de una sustancia farmacéuticamente activa. En varias configuraciones, un kit puede comprender un parche para la piel y el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Se puede administrar una cantidad efectiva del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas en condiciones y durante tiempos eficaces para el tratamiento. La determinación de la cantidad efectiva, las condiciones apropiadas y el período de tiempo suficiente puede estar dentro de los conocimientos habituales en la técnica y/o lograr en vista de las enseñanzas proporcionadas en el presente documento.

Las presentes enseñanzas incluyen compuestos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos del compuesto de la estructura (S)-1-(3,4-diclorofenoxi)-3-(4-(((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propil)amino)piperidin-1-il)propan-2-ol

Se divulga en el presente documento, pero no se reivindica, un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con las presentes enseñanzas que puede ser (R)-1-(3,4-diclorofenoxi)-3-(4-(((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propil)amino) piperidin-1 -il)propan-2-ol

Las presentes enseñanzas incluyen composiciones que comprenden el compuesto 15 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se divulga en el presente documento, y un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. En algunas configuraciones, la composición puede comprender adicionalmente un compuesto heterólogo. En algunas configuraciones, el compuesto heterólogo puede ser un compuesto farmacéuticamente activo. En varias configuraciones, el compuesto heterólogo puede ser un marcador detectable. En varias configuraciones, la composición puede comprender adicionalmente un soporte sólido. En algunas configuraciones, el soporte sólido puede ser una matriz polimérica. En varias configuraciones, el soporte sólido se puede seleccionar del grupo que consiste en un plato de plástico, un tubo de plástico, una sutura, una membrana, una película ultrafina, un biorreactor, una nanopartícula y una micropartícula.

Las presentes enseñanzas incluyen un parche para el suministro transdérmico. Un parche de las presentes enseñanzas can puede comprender el antagonista de la adhesión celular descrito en el presente documento, y una matriz. En algunas configuraciones, un parche para el suministro transdérmico puede comprender adicionalmente al menos un agente farmacéutico adicional.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular en un sujeto. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En varias configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En varias configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con una composición de acuerdo con las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir el desarrollo del cáncer en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En varias configuraciones, el cáncer puede ser cáncer de páncreas. En varias configuraciones, el cáncer puede ser mieloma múltiple. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para reducir el tamaño de un tumor en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición de acuerdo con las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, el tumor puede ser un tumor de cáncer de páncreas. En varias configuraciones, el tumor puede ser un tumor de mieloma múltiple. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la angiogénesis en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para aumentar la vasopermeabilidad en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, los usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición como se divulga en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir el sobrecrecimiento de neuritas en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para potenciar la apoptosis en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para modular el sistema inmunitario en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición de acuerdo con las presentes enseñanzas. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para modular la diferenciación de células madre y células progenitoras en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la migración de células de músculo liso vascular en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición divulgada en el presente documento. En algunas configuraciones, la cantidad administrada puede ser una cantidad suficiente para prevenir el engrosamiento de la íntima. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para estimular una respuesta inmunitaria a un tumor en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición de acuerdo con las presentes enseñanzas. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir fibrosis, que incluye el crecimiento o adhesión de un tumor de fibrosis, en un sujeto que lo necesita. En algunas configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición como se divulga en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en un método para inhibir la adhesión celular que comprende poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con una composición como se divulga en el presente documento, en la que la célula que expresa cadherina clásica puede expresar una cadherina clásica seleccionada del grupo que consiste en E-cadherina, N-cadherina, P-cadherina, R-cadherina y una combinación de las mismas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con una composición como se divulga en el presente documento, en la que la célula que expresa cadherina clásica puede expresar E-cadherina.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con una composición como se divulga en el presente documento, en la que la célula que expresa cadherina clásica puede expresar N-cadherina.

Un compuesto de las presentes enseñanzas puede ser para uso en el tratamiento de una enfermedad tal como, sin limitación, un cáncer, artritis, diabetes, obesidad, restenosis o fibrosis. En algunas configuraciones, el cáncer se puede seleccionar del grupo que consiste en cáncer de páncreas, cáncer de próstata, mieloma múltiple, leucemia mielógena crónica, melanoma y neuroblastoma. En algunas configuraciones, el cáncer puede ser cáncer de páncreas. En algunas configuraciones, el cáncer puede ser mieloma múltiple. En algunas configuraciones, la artritis puede ser artritis reumatoide.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para tratar cáncer de páncreas. En algunas configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita una composición como se divulga en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para tratar un cáncer tal como mieloma múltiple. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita un antagonista de N-cadherina como se divulga en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía. En algunas configuraciones, la administración del antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas:

puede reducir la viabilidad celular del mieloma múltiple (MM). En algunas configuraciones, la administración de un antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas puede reducir la carga tumoral del mieloma múltiple.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para tratar artritis reumatoide. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita una composición como se divulga en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para prevenir la ovulación. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita una composición como se divulga en el presente documento. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen composiciones y métodos para el control de la natalidad. En algunas configuraciones, estos métodos incluyen administrar a un sujeto que lo necesita una composición como se divulga. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen composiciones y métodos para prevenir la ovulación. En algunas configuraciones, estos métodos incluyen administrar a un sujeto que lo necesita una composición como se divulga. En varias configuraciones, la administración al sujeto puede comprender administración transdérmica. En varias configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen un parche para el suministro transdérmico. Un parche divulgado en el presente documento puede comprender una matriz, y el antagonista de adhesión celular divulgada en las presentes enseñanzas, tal como, sin limitación, el antagonista de adhesión celular de la estructura

Se proporciona un parche para el suministro transdérmico de fármacos, que comprende: una matriz; y un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto es (S)-1-(3,4-diclorofenoxi)-3-(4-(((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propil)amino)piperidin-1-il)propan-2-ol en el presente documento. En algunas configuraciones, un parche de las presentes enseñanzas puede comprender adicionalmente al menos un agente farmacéutico adicional.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular en un sujeto. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

En varias configuraciones, la administración a un sujeto puede comprender administración transdérmica. En algunas configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular. En varias configuraciones, estos métodos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con el antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir el desarrollo del cáncer en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para reducir el tamaño de un tumor en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos incluyen administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la angiogénesis en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para aumentar la vasopermeabilidad en un sujeto que lo necesita. En algunas configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir sobrecrecimiento de neuritas en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden incluir administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para potenciar la apoptosis en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, los usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para modular el sistema inmunitario en un sujeto que lo necesita, comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para modular diferenciación de células madre y células progenitoras en un sujeto que lo necesita, comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

En algunas configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir migración de células de músculo liso vascular en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para estimular una respuesta inmunitaria a un tumor en un sujeto que lo necesita. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir tumor de fibrosis en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del antagonista de adhesión celular de la estructura

En varias configuraciones, la administración a un sujeto puede comprender administración transdérmica. En algunas configuraciones, el sujeto puede ser un mamífero. En algunas configuraciones, el mamífero puede ser un humano. En varias configuraciones, el mamífero puede ser un animal de granja. En varias configuraciones, el mamífero puede ser un animal de compañía.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para inhibir la adhesión celular. En varias configuraciones, los usos pueden comprender poner en contacto una célula que expresa cadherina clásica con el antagonista de adhesión celular de la estructura

en la que la célula que expresa cadherina clásica expresa una cadherina clásica seleccionada del grupo que consiste en E-cadherina, N-cadherina, P-cadherina, R-cadherina y una combinación de las mismas. En varias configuraciones, la célula que expresa cadherina clásica expresa E-cadherina. En varias configuraciones, la célula que expresa cadherina clásica expresa N-cadherina.

Las presentes enseñanzas incluyen un compuesto de la estructura

para uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en un cáncer, artritis, diabetes, obesidad, restenosis y fibrosis. En algunas configuraciones, el cáncer se puede seleccionar del grupo que consiste en cáncer de páncreas, cáncer de próstata, mieloma múltiple, leucemia mielógena crónica, melanoma y neuroblastoma. En varias configuraciones, la artritis puede ser artritis reumatoide.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en los métodos para reducir la viabilidad de un fibroblasto asociado a cáncer. En varias configuraciones, estos usos pueden comprender poner en contacto un antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas, tal como un compuesto de la estructura

con un fibroblasto asociado a cáncer. El contacto puede ser in vitro o in vivo.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso de un antagonista de N-cadherina divulgado en el presente documento que es,

para tratar la artritis reumatoide (RA) y otras enfermedades inflamatorias crónicas de las articulaciones. Sin estar limitado por la teoría, se considera que los sinoviocitos similares a fibroblastos humanos (FLS) son una diana para el tratamiento de la RA, y que la adhesión de las células FLS está mediada por la cadherina 11 y la N-cadherina (Agarwal, S. K., et al., Arthritis & Rheumatism 58, 1044-1054, 2018). En varias configuraciones, un antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas se puede aplicar por vía tópica, oral o sistémica para interrumpir la adhesión de los sinoviocitos y tratar de esta manera la artritis reumatoide (RA) y otras enfermedades inflamatorias crónicas de las articulaciones.

Las presentes enseñanzas incluyen el antagonista de cadherina divulgado en el presente documento,

para uso en métodos para inhibir la formación del cuerpo lúteo. Por tanto, un antagonista de cadherina de las presentes enseñanzas se puede utilizar como anticonceptivo.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 es un diagrama que representa la estructura de las CAD clásicas.

Las FIG. 2A-D ilustran las estructuras moleculares de los antagonistas de la adhesión celular de la presente enseñanza, el compuesto 15 y otros compuestos no reivindicados.

Las FIG. 3A-I ilustran imágenes de microscopía óptica de células cancerosas Panc-1 que se han tratado con antagonistas de adhesión celular de las presentes enseñanzas.

La FIG. 4 ilustra la capacidad del Compuesto 16 antagonista de la adhesión celular (FIG. 2C) (no reivindicado) para causar la muerte de células cancerosas Panc-1.

La FIG. 5 ilustra la capacidad del Compuesto 15 antagonista de la adhesión celular (FIG. 2C) para causar la muerte de células cancerosas Panc-1.

La FIG. 6 ilustra la capacidad de un Compuesto 15 antagonista de la adhesión celular (FIG. 2C) para interrumpir la adhesión celular mediada por N-cadherina, como se muestra en un ensayo de cultivo celular de gota colgante.

La FIG. 7 ilustra la capacidad de un Compuesto 16 antagonista de la adhesión celular (FIG. 2C) (no reivindicado) para interrumpir la adhesión celular mediada por N-cadherina, como se muestra en un ensayo de cultivo celular de gota colgante.

La FIG. 8 ilustra que el Compuesto 15 antagonista de N-cadherina reduce la viabilidad in vitro de los fibroblastos asociados con el cáncer humano (CAF010415).

La FIG. 9 ilustra la interrupción de la adhesión celular en células FLS al aumentar las concentraciones del Compuesto 15.

La FIG. 10 es un esquema que muestra la inyección de hormonas en ratones para provocar la maduración del folículo y la inyección del Compuesto 15.

La FIG. 11 ilustra la interrupción de la ovulación en ratones mediante la administración del Compuesto 15.

La FIG. 12 ilustra que el Compuesto 15 disminuye la carga tumoral de MM en ratones.

La FIG. 13 ilustra la destrucción de células MM.1S mediante el Compuesto 15.

Descripción detallada

Las presentes enseñanzas incluyen descripciones que no pretenden limitar el alcance de ningún aspecto o reivindicación. Los ejemplos y métodos se proporcionan para ilustrar adicionalmente las presentes enseñanzas. Aquellos expertos en la técnica, a la luz de la presente divulgación, apreciarán que se pueden realizar muchos cambios en las realizaciones específicas que se divulgan y aún obtener un resultado semejante o similar sin apartarse del alcance de las presentes enseñanzas. El alcance de la invención se establece en las reivindicaciones acompañantes. Como se utiliza en el presente documento, las formas singulares “un”, “una” y “el” pretenden incluir también las formas plurales, a menos que el contexto indique lo contrario.

Métodos

Los métodos y composiciones descritos en el presente documento utilizan técnicas de laboratorio bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Dichas técnicas se pueden encontrar en manuales de laboratorio tales como Sambrook, J., et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001; Spector, D. L. et al., Cells: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1998; Behringer, R., et al., Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, Fourth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2014; Harlow, E., Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1999; Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988; and Carruthers, W., y Coldham, I., Modern Methods of Organic Synthesis (4th Edition), Cambridge University Press, Cambridge, U.K., 2004. Los métodos de administración de productos farmacéuticos y los regímenes de dosificación se pueden determinar de acuerdo con los principios estándar de farmacología bien conocidos por los expertos, utilizando métodos proporcionados por textos de referencia estándar tales como Remington: the Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed. 19th ed. 1995); Hardman, J.G., et al., Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ninth Edition, McGraw-Hill, 1996; y Rowe, R.C., et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, Fourth Edition, Pharmaceutical Press, 2003.

Dentro de ciertos ensayos de adhesión celular, la adición de un antagonista de la adhesión celular a las células que expresan una cadherina da como resultado la interrupción de la adhesión celular. Una “célula que expresa cadherina”, como se utiliza en el presente documento, puede ser cualquier tipo de célula que exprese al menos una cadherina sobre la superficie celular a un nivel detectable, utilizando una técnica estándar tal como protocolos inmunocitoquímicos (por ejemplo, Devemy, E. y Blaschuk, O.W., Peptides 30:1539-1547, 2009). Los ejemplos no limitantes de células que expresan cadherina incluyen células madre, progenitoras, estromales, murales, linfocíticas, endoteliales, epiteliales, neurales y cancerosas.

Estudios previos han demostrado que los tumores de páncreas pueden estar compuestos por un 90 % de células estromales (Olive, K.P., et al., 2009, Science 324, 1457-1461; Olive, K.P., Clin. Cancer Res. 21, 3366-3368, 2015). Los fibroblastos asociados al cáncer (CAF) son uno de los principales tipos de células presentes en el estroma tumoral (revisado por Pandol, S., et al., 2009, Clin. Gastroenterol. Hepatol. 7, S44-47; Karagiannis, G.S., et al., 2012, Mol. Cancer Res. 10, 1403-1418; Joyce, J.A. and Fearon, D.T., Science 348, 74-80, 2015). Se agregan peritumoralmente y rodean las células cancerosas que invaden los tejidos normales adyacentes. Los CAF apoyan la supervivencia de las células del cáncer de páncreas (PC) y protegen a estas células del ataque del sistema inmunitario (Joyce, J.A. and Fearon, D.T., 2015, Science 348, 74-80), así como previenen el acceso de los fármacos contra el cáncer a las células de PC (Olive, K.P., Clin. Cancer Res. 21, 3366-3368, 2015).

Se puede utilizar un antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas para tratar la artritis reumatoide (RA) y otras enfermedades inflamatorias crónicas de las articulaciones. Un antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas también se puede utilizar para tratar perros y otros animales. Se desconoce la causa de la RA. Es una enfermedad autoinmunitaria que causa inflamación articular crónica. Los tratamientos anteriores para la RA implican atacar citoquinas tales como TNF-a e IL-6 con anticuerpos monoclonales (Mabs) para suprimir sus acciones inflamatorias. Los Mabs contra TNF-a ahora se inyectan por vía subcutánea. Se necesitan terapias no anti-TNF-a porque el 40 % de los pacientes con RA no responden a las terapias basadas en TNF-a.

Las presentes enseñanzas divulgan antagonistas de la adhesión celular, que incluyen compuestos que pueden inhibir o modular procesos mediados por cadherina clásica, tales como la adhesión celular. En varias configuraciones, un compuesto de las presentes enseñanzas puede ser un antagonista de molécula pequeña, tal como un compuesto con un peso molecular < 1,000. En varias configuraciones, un compuesto de las presentes enseñanzas puede ser un análogo de piperidin-4-amina. Las presentes enseñanzas también incluyen sales farmacéuticamente aceptables y estereoisómeros de los compuestos divulgados. Las presentes enseñanzas incluyen además varios usos de los antagonistas de la adhesión celular. Además, las presentes enseñanzas incluyen métodos para la síntesis de compuestos.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para inhibir una función celular mediada por cadherina clásica. En varias configuraciones, las células que expresan una cadherina clásica se pueden poner en contacto con un antagonista de las presentes enseñanzas in vivo o in vitro. Dicho contacto puede inhibir una función celular mediada por cadherina, tal como, pero sin limitarse a, la adhesión celular. En algunos aspectos, un antagonista de las presentes enseñanzas puede inhibir la adhesión célula-sustrato. En algunos aspectos, un antagonista de las presentes enseñanzas puede inhibir la adhesión célula-célula.

Un antagonista de las presentes enseñanzas puede comprender uno o más peptidomiméticos de una secuencia de reconocimiento de adhesión celular (CAR) que contiene cadherina Trp clásica. En algunos aspectos, un peptidomimético puede comprender una secuencia CAR que contiene Trp de cadherina clásica y una o más secuencias CAR adicionales. En algunos aspectos, se puede derivar una secuencia CAR adicional a partir de una cadherina clásica. En algunos aspectos, se puede derivar una secuencia CAR adicional a partir de una molécula de adhesión celular que no es de cadherina. Una composición de las presentes enseñanzas puede comprender además un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a un compuesto de adhesión celular.

Profármacos

El término “profármaco”, como se utiliza en el presente documento, se refiere a un compuesto que, cuando se administra a un sistema biológico, genera un compuesto de las presentes enseñanzas que modula la actividad de la cadherina. En varias configuraciones, un compuesto de las presentes enseñanzas se puede formar a partir de un profármaco como resultado de: (i) reacción(es) química(s) espontánea(s), (ii) reacción(es) química(s) catalizada(s) por enzimas, (iii) fotólisis, y/o (iv) reacción(es) química(s) metabólica(s). Un profármaco puede comprender un grupo lábil (un “resto de profármaco”) que se puede separar de un compuesto activo durante el metabolismo, sistémicamente, dentro de una célula, por hidrólisis, escisión enzimática o por algún otro proceso (Bundgaard, Hans, “Design and Application of Prodrugs” en A Textbook of Drug Design and Development (1991), P. Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Eds. Harwood Academic Publishers, pp. 113-191). Las enzimas que son capaces de un mecanismo de activación enzimática con un profármaco de las presentes enseñanzas incluyen, pero no se limitan a, amidasas, esterasas, enzimas microbianas, fosfolipasas, colinesterasas y fosfatasas. Las fracciones de profármaco pueden servir para mejorar la solubilidad, absorción y lipofilicidad para optimizar el suministro, biodisponibilidad y/o eficacia del fármaco. Una fracción del profármaco puede incluir un metabolito activo o el propio fármaco. Ejemplos de fracciones de profármacos incluyen ésteres de aciloximetilo hidrolíticamente sensibles o lábiles --CH₂OC(=O)R99 y carbonatos de aciloximetilo --CH₂C=O)OR99 donde R99 es alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, arilo C6-C20 o arilo C6-C20 sustituido.

Se puede utilizar un antagonista de las presentes enseñanzas para modular una función mediada por una cadherina clásica, tal como la adhesión celular.

Las presentes enseñanzas incluyen métodos para evaluar la actividad de un antagonista. En algunos aspectos, dicha actividad se puede evaluar utilizando, por ejemplo y sin limitación, un ensayo divulgado en el presente documento.

Modificación y formulaciones de antagonistas

Un compuesto de las presentes enseñanzas se puede ligar a una o más moléculas adicionales. En algunas configuraciones, los antagonistas de la adhesión celular múltiple (que pueden ser idénticos o diferentes) se pueden ligar a un material de soporte, como una molécula de soporte, tal como, por ejemplo y sin limitación, hemocianina de lapa californiana, o a un soporte sólido, tal como, por ejemplo y sin limitación, una matriz polimérica. En algunas configuraciones, una matriz polimérica puede ser, por ejemplo y sin limitación, una membrana o microestructura, tal como una película ultrafina, una superficie de contenedor tal como, por ejemplo, la superficie de una placa de cultivo de tejidos o la superficie interior de un biorreactor, o una perla u otra micropartícula, que se puede preparar a partir de una variedad de materiales tales como vidrio, plástico o cerámica. En algunas configuraciones, un material de soporte puede ser un material de soporte biodegradable, tal como, por ejemplo y sin limitación, celulosa, un derivado de celulosa polimérica tal como, por ejemplo, un éster de celulosa o un éter de celulosa, tal como metilcelulosa, etilcelulosa, o carboximetilcelulosa, colágeno, seda de araña o un poliéster tal como, sin limitación, un poliéster derivado de hidroxiácidos y/o lactonas, o una sutura, por ejemplo, una sutura descrita en la Patente U.S. No. 5,245,012.

Un antagonista de la adhesión celular que comprende otra(s) secuencia(s) CAR (por ejemplo, HAV, RGD o LYHY (SEQ ID NO: 6)) se puede adherir a un soporte tal como una matriz polimérica. En algunos aspectos, un antagonista que comprende otra secuencia CAR se puede adherir a un soporte en un patrón alterno con un compuesto de las presentes enseñanzas.

Los métodos para ligar el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas a un material de soporte se pueden adaptar a partir de métodos conocidos por aquellos expertos con conocimientos básicos en la técnica. En algunos aspectos, la adhesión se puede lograr a través de una asociación no covalente, tal como adsorción o afinidad. En algunos aspectos, la adhesión se puede lograr a través de la adhesión covalente. En algunos aspectos, la adhesión covalente puede ser un enlace directo entre un antagonista y los grupos funcionales del soporte. En algunos aspectos, la adhesión covalente se puede realizar a través de un agente de entrecruzamiento. En algunas configuraciones, la adhesión de un antagonista por adsorción se puede lograr por contacto, en un tampón adecuado, con un soporte sólido. En algunas configuraciones, el tiempo de contacto para establecer la adhesión por adsorción puede variar con la temperatura. En algunos aspectos, la adhesión se puede lograr mediante un contacto que dure al menos 5 segundos, o hasta 1 día o más, y puede durar entre 10 segundos y 1 hora.

En varias configuraciones, la adhesión covalente de un antagonista de las presentes enseñanzas a una molécula o soporte sólido se puede lograr al hacer reaccionar primero el material de soporte con un reactivo bifuncional que también puede reaccionar con un grupo funcional, tal como un grupo hidroxilo o amino, sobre el antagonista. Por ejemplo y sin limitación, un antagonista de las presentes enseñanzas se puede unir a un soporte o recubrimiento polimérico utilizando benzoquinona, por antagonista o por condensación de un grupo amino sobre el soporte con un ácido carboxílico en el antagonista. En algunas configuraciones, se puede generar un enlace a través de grupos amino utilizando glutaraldehído. En algunas configuraciones, un antagonista se puede ligar a la celulosa a través de enlaces éster. En algunas configuraciones, los enlaces amida se pueden utilizar para enlace con otras moléculas tales como hemocianina de lapa californiana u otros materiales de soporte. En algunas configuraciones, se pueden adherir múltiples antagonistas de la adhesión celular, por ejemplo, mediante acoplamiento aleatorio, en el que dichas moléculas se pueden mezclar con un soporte de matriz, por ejemplo, en cantidades equimolares, y permitir que se acoplen al azar.

Un compuesto farmacéuticamente activo tal como un fármaco se puede ligar a un antagonista de las presentes enseñanzas. Como se utiliza en el presente documento, el término “fármaco” se refiere a cualquier agente bioactivo destinado a la administración a un mamífero, tal como un humano, un animal de granja o un animal de compañía, para prevenir o tratar una enfermedad u otra afección indeseable. Los fármacos pueden incluir, sin limitación, antibióticos, hormonas, factores de crecimiento, proteínas y péptidos.

Las presentes enseñanzas también incluyen composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprenden uno o más antagonistas de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, una composición puede comprender uno o más antagonistas de la adhesión celular en combinación con uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéutica o fisiológicamente aceptables. En varias configuraciones, dichas composiciones pueden comprender tampones (por ejemplo, solución salina tamponada neutra o solución salina tamponada con fosfato), carbohidratos (por ejemplo, glucosa, manosa, sacarosa o dextranos), manitol, proteínas, polipéptidos o aminoácidos tales como glicina, antioxidantes, agentes quelantes tales como EDTA o glutatión, adyuvantes (por ejemplo, hidróxido de aluminio) y/o conservantes. Una composición de las presentes enseñanzas se puede formular como un liofilizado. En algunas configuraciones, uno o más antagonistas de la adhesión celular (solos o en combinación con un fármaco) se pueden encapsular dentro de los liposomas utilizando una tecnología bien conocida. En varios aspectos, una composición de las presentes enseñanzas se puede formular para cualquier modo de administración conocido por aquellos expertos en la técnica, que incluye, por ejemplo y sin limitación, administración tópica, oral, nasal, rectal, intravenosa, intracraneal, intraperitoneal, subcutánea o intramuscular.

Una composición de las presentes enseñanzas puede comprender una o más sustancias farmacéuticamente activas que se pueden ligar al antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En varios aspectos, una sustancia farmacéuticamente activa se puede ligar al antagonista de la adhesión celular mediante un enlace covalente o un enlace no covalente. En varios aspectos, una sustancia farmacéuticamente activa se puede ligar directamente al antagonista de la adhesión celular directamente o a través de un ligador tal como un ligador covalente.

Una composición de las presentes enseñanzas puede comprender una o más sustancias farmacéuticamente activas y el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En varias configuraciones, virtualmente cualquier sustancia farmacéuticamente activa se puede administrar en combinación con un antagonista de las presentes enseñanzas, para una variedad de propósitos como se describe a continuación. Los ejemplos de tipos de sustancias farmacéuticamente activas (que incluyen los fármacos) que se pueden administrar con un antagonista incluyen analgésicos, anestésicos, antianginosos, antifúngicos, antibióticos, fármacos contra el cáncer (por ejemplo, taxol o mitomicina C), antiinflamatorios (por ejemplo, ibuprofeno e indometacina), antihelmínticos, antidepresivos, antídotos, antieméticos, antihistamínicos, antihipertensivos, antipalúdicos, agentes antimicrotúbulos (por ejemplo, colchicina o alcaloides de la vinca), agentes antimigraña, antimicrobianos, antipsicóticos, antipiréticos, antisépticos, agentes antiseñalización (por ejemplo, antagonistas o antagonistas de la proteína quinasa C de la movilización de calcio intracelular), antiartríticos, agentes antitrombina, antituberculosos, antitusivos, antivirales, supresores del apetito, fármacos cardioactivos, fármacos para la dependencia química, catárticos, agentes quimioterapéuticos, vasodilatadores coronarios, cerebrales o periféricos, agentes anticonceptivos, depresores, diuréticos, expectorantes, factores de crecimiento, agentes hormonales, hipnóticos, agentes inmunosupresores, agentes inmunoestimuladores (por ejemplo, anticuerpos bloqueadores de los reguladores del punto de control inmunitario, tal como la proteína de muerte celular programada y la proteína 4 asociada a los linfocitos T citotóxicos), antagonistas de narcóticos, parasimpaticomiméticos, sedantes, estimulantes, simpaticomiméticos, toxinas (por ejemplo, la toxina del cólera), tranquilizantes y antiinfecciosos urinarios.

Un antagonista de las presentes enseñanzas se puede combinar con un agente de diagnóstico con fines de formación de imágenes. En varias configuraciones, se pueden ligar un antagonista y un agente de diagnóstico, o ambos pueden estar libres dentro de una composición. Los agentes de diagnóstico pueden incluir una sustancia que se puede administrar a un sujeto tal como un paciente humano. Un agente de diagnóstico tal como un radiotrazador se puede distribuir dentro del sujeto; la formación de imágenes de la distribución del agente de diagnóstico se puede utilizar para el diagnóstico de una enfermedad. Los ejemplos no limitantes de agentes de diagnóstico incluyen metales, isótopos radiactivos y agentes radioopacos (por ejemplo, compuestos que contienen galio, tecnecio, indio, estroncio, yodo, bario, bromo y fósforo), agentes radiolúcidos, agentes de contraste, tintes (por ejemplo, tintes fluorescentes y cromóforos) y enzimas que catalizan una reacción colorimétrica o fluorométrica. En algunas configuraciones, dichos agentes se pueden adherir a un antagonista de las presentes enseñanzas utilizando una variedad de técnicas como se describió anteriormente, y pueden estar presentes en cualquier orientación.

En varios aspectos, una composición de las presentes enseñanzas se puede administrar como parte de una formulación de liberación sostenida (es decir, una formulación tal como una cápsula o esponja que produce una liberación lenta de un antagonista después de la administración). Dichas formulaciones se pueden preparar utilizando tecnología bien conocida y administrar, por ejemplo y sin limitación, mediante implantación oral, rectal o subcutánea, o mediante implantación en el sitio diana seleccionado. En algunas configuraciones, una formulación de liberación sostenida puede contener un antagonista de las presentes enseñanzas disperso en una matriz portadora y/o contenido dentro de un depósito rodeado por una membrana de control de tasa (véase, por ejemplo, la Solicitud de Patente Europea 710,491 A). En algunos aspectos, un portador para uso con dicha formulación puede ser biocompatible. En algunos aspectos, un portador para uso con dicha formulación también puede ser biodegradable. En varios aspectos, la cantidad de antagonista contenida dentro de una formulación de liberación sostenida puede depender del sitio de implantación, la tasa y la duración esperada de la liberación y la naturaleza de la afección que se va a tratar o prevenir.

Una composición de las presentes enseñanzas se puede administrar de una manera apropiada para la enfermedad o trastorno que se va a tratar o prevenir. Las dosificaciones, duraciones y frecuencias de administración se pueden determinar por factores tales como la afección del paciente, el tipo y la gravedad de la enfermedad o trastorno del paciente y el método de administración. En algunas configuraciones, se puede determinar una dosificación y un régimen de tratamiento para proporcionar el (los) antagonista(s) en una cantidad suficiente para el beneficio terapéutico y/o profiláctico. En algunas configuraciones, una composición farmacéutica o antagonista como se describe en el presente documento se puede administrar en una dosificación que varía desde 0.001 hasta 100 mg/kg de peso corporal, preferiblemente desde 0.1 hasta 20 mg/kg, en un régimen de dosis diarias únicas o múltiples. En algunas configuraciones, un antagonista descrito en el presente documento se puede administrar por vía tópica, mediante una crema o pomada. En algunos aspectos, una crema o pomada puede comprender el antagonista en una concentración que varía desde 0.00001 % hasta el 1 %, preferiblemente desde 0.0001 % hasta el 0.002 %.

En algunas configuraciones, un antagonista de las presentes enseñanzas se puede administrar a través de una composición fluida. En algunos aspectos, una composición fluida puede comprender un antagonista de las presentes enseñanzas a una concentración de alrededor de 10 ng/ml a 5 mg/ml, preferiblemente desde alrededor de 10 μg/ml hasta 2 mg/ml de antagonista. Las dosificaciones se pueden determinar utilizando modelos experimentales y/o ensayos clínicos. En algunas configuraciones, se puede monitorizar la eficacia terapéutica de los pacientes utilizando ensayos adecuados para la afección que se va a tratar o prevenir.

Métodos terapéuticos que emplean antagonistas

El antagonista de la adhesión celular divulgado en el presente documento se puede utilizar para modular la adhesión de células que expresan cadherina (es decir, células que expresan al menos una cadherina tal como, sin limitación, E-cadherina, N-cadherina, P-cadherina o R-cadherina). Dicha modulación se puede realizar in vitro y/o in vivo, preferiblemente en un mamífero tal como un humano.

El uso en métodos que implican la interrupción de la adhesión celular descritos en el presente documento puede tener una ventaja sobre las técnicas anteriores porque pueden permitir el paso de moléculas grandes y/o cargadas a través de barreras de células que expresan cadherina. El antagonista de la adhesión celular descrito en el presente documento se puede utilizar para interrumpir o potenciar la adhesión celular en una variedad de contextos. Dentro de varios aspectos de cada uno de los métodos descritos en el presente documento, se pueden administrar uno o más antagonistas de la adhesión celular solos o dentro de una composición farmacéutica.

En varios aspectos, en un método para inhibir la adhesión celular, una célula que expresa cadherina se puede poner en contacto con un antagonista de las presentes enseñanzas en condiciones y durante un tiempo suficiente para permitir la inhibición de una función mediada por cadherina. Las células que expresan cadherina incluyen, pero no se limitan a, células epiteliales, células endoteliales, células neurales, células estromales, células murales, células madre, células progenitoras, células tumorales y linfocitos. En varios aspectos, el contacto se puede lograr in vitro o in vivo mediante la administración de una composición farmacéutica como se divulga en el presente documento.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para reducir la adhesión celular no deseada mediante la administración del antagonista de la adhesión celular, o una composición que comprende el antagonista de la adhesión celular, como se divulga en el presente documento. Se puede producir una adhesión celular no deseada, por ejemplo, entre células tumorales, entre células tumorales y células normales o entre células normales como resultado de cirugía, lesión, quimioterapia, enfermedad, inflamación u otra condición que ponga en peligro la viabilidad o función celular.

En varias configuraciones, una composición fluida para la administración tópica de antagonista(s) (que comprende, por ejemplo, solución salina fisiológica) puede comprender una cantidad de antagonista como se describió supra, por ejemplo y sin limitación, a una concentración desde 10 μg/ml hasta 1 mg/ml. Se puede formular una crema o pomada como se describió supra. En algunas configuraciones, la administración tópica en el campo quirúrgico puede darse una vez al final de la cirugía mediante irrigación de la herida o como irrigación intermitente o continua con el uso de drenajes quirúrgicos en el periodo postoperatorio o mediante el uso de drenajes específicamente insertados en un área de inflamación, lesión o enfermedad en los casos en que no es necesario realizar una cirugía. Alternativamente, se puede utilizar la administración parenteral o transcutánea para lograr resultados similares.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para potenciar el suministro de un fármaco a través de la piel de un mamífero. Si bien el suministro transdérmico de fármacos puede ser un método conveniente y no invasivo que se puede utilizar para mantener niveles sanguíneos relativamente constantes de un fármaco, puede ser necesario perturbar la adhesión entre las células epiteliales (queratinocitos) y las células endoteliales de la microvasculatura. Se puede transportar una amplia variedad de fármacos a través de las capas de células epiteliales y endoteliales de la piel, para administración sistémica o tópica a través de la permeabilización resultante del contacto con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. Por ejemplo y sin limitación, un fármaco se puede suministrar a un melanoma o puede entrar en el torrente sanguíneo de un sujeto para suministro a otros sitios dentro del cuerpo.

Para potenciar el suministro de un fármaco a través de la piel, el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas y un fármaco se pueden poner en contacto con la superficie de la piel. El contacto se puede lograr mediante la aplicación directa del antagonista, por ejemplo dentro de una composición formulada como crema o gel, o a través del uso de cualquiera de una variedad de dispositivos de contacto con la piel para aplicación transdérmica (tal como aquellos descritos en la Solicitud de Patente Europea No. 566,816 A; Patentes de Estados Unidos Nos.

5,613,958; 5,505,956). En algunos aspectos, se puede utilizar un parche para la piel para la administración, por ejemplo, para administrar una formulación de liberación lenta. En algunas configuraciones, un parche puede contener un depósito de antagonista y fármaco separado de la piel por una membrana a través de la cual se difunde el fármaco. Dentro de algunos diseños de parches, el antagonista de la adhesión celular y el fármaco se pueden disolver o suspender en una matriz de polímero o adhesivo que se puede colocar en contacto directo con la piel de un sujeto. El antagonista de la adhesión celular y el fármaco luego se pueden difundir desde la matriz hacia la piel. En varias configuraciones, el(los) antagonista(s) y fármaco(s) puede(n) estar contenido(s) dentro de la misma composición o parche para la piel. En varias configuraciones, los antagonistas y los fármacos se pueden administrar por separado. En varios aspectos, la transferencia de un fármaco a través de la piel y a un tejido diana se puede demostrar y cuantificar en base a estudios in vitro utilizando, por ejemplo y sin limitación, un aparato de células de Franz, y se puede evaluar in vivo mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo y sin limitación, la transferencia del fármaco a través de la piel se puede monitorizar al medir a lo largo del tiempo el nivel sérico de un fármaco administrado a la piel con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

El suministro transdérmico de fármacos como se describe en el presente documento se puede utilizar cuando se desea una tasa constante de suministro de fármacos. Por ejemplo, la morfina es un analgésico de uso común inmediatamente después de una cirugía. Cuando se administra intermitentemente en forma parenteral (intramuscular, intravenosa), el paciente generalmente se siente somnoliento durante la primera hora, está bien durante las siguientes 2 horas y siente dolor durante la última hora porque el nivel en sangre sube rápidamente después de la inyección y se va por debajo del nivel deseable antes de que se alcance el intervalo de 4 horas prescrito para la reinyección. La administración transdérmica como se describe en el presente documento puede permitir el mantenimiento de niveles más constantes durante largos períodos de tiempo (por ejemplo, días), lo que puede permitir un control adecuado del dolor y el estado de alerta mental al mismo tiempo. La insulina proporciona ducho ejemplo. Muchos pacientes diabéticos necesitan mantener un nivel inicial constante de insulina que es diferente de sus necesidades a la hora de las comidas. En algunos aspectos, se puede mantener un nivel inicial de insulina utilizando la administración transdérmica de insulina en combinación con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunos aspectos, también se puede administrar un antibiótico por vía transdérmica a una tasa constante, por lo que se pueden mantener niveles sanguíneos bactericidas adecuados, al tiempo que se evitan niveles tóxicos elevados (por ejemplo, niveles de gentamicina que pueden provocar toxicidad renal).

En algunos aspectos, el suministro de fármacos mediante los métodos de las presentes enseñanzas incluye métodos de administración de fármacos. La administración parenteral de un fármaco a un recién nacido o lactante puede resultar difícil debido a la necesidad de identificar venas de calibre aceptable para el cateterismo. El suministro transdérmico de fármacos de acuerdo con las presentes enseñanzas permite un manejo más sencillo de dichos pacientes. Adicionalmente, el suministro transdérmico de fármacos de acuerdo con las presentes enseñanzas puede permitir que ciertos tipos de atención que actualmente solo se pueden brindar en hospitales se administren en el hogar. Otros pacientes que normalmente tienen dificultades similares con el cateterismo venoso son los pacientes que reciben quimioterapia o los pacientes que se someten a diálisis. Además, para los pacientes que se someten a una terapia prolongada, la administración transdérmica como se describe en este documento puede ser más conveniente que la administración parenteral.

La administración transdérmica como se describe en el presente documento también permite eludir el tracto gastrointestinal en situaciones en las que la administración parenteral no sería práctica. Por ejemplo, subsiste la necesidad de métodos para administrar péptidos y proteínas terapéuticos, que normalmente se digieren en el tracto gastrointestinal. Los métodos descritos en el presente documento permiten la administración de dichos compuestos y pueden permitir la administración durante largos períodos de tiempo. En algunas configuraciones, un paciente que tiene problemas con la absorción a través de su tracto gastrointestinal debido a un íleo prolongado o una enfermedad gastrointestinal que limita la absorción del fármaco también puede beneficiarse de un fármaco administrado por vía transdérmica con un antagonista de las presentes enseñanzas.

Adicionalmente, hay situaciones clínicas en las que el cumplimiento del paciente con los métodos estándar puede ser difícil o problemático para las cuales el suministro transdérmico de acuerdo con los métodos descritos puede ser beneficioso. Por ejemplo, y sin limitación, un sujeto con un problema mental (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer o psicosis) se puede manejar mediante una tasa constante de suministro de fármaco sin tener que depender de su capacidad para tomar su medicación en momentos específicos del día. También, un sujeto que se olvida de tomar sus fármacos según lo prescrito, tal como por ejemplo un sujeto con una enfermedad con pocos o ningún síntoma, tal como por ejemplo la hipertensión, puede correr el riesgo de olvidarse de tomar su medicación según lo prescrito.

El cumplimiento del sujeto puede ser mayor si el sujeto simplemente necesita ponerse periódicamente un parche para la piel (por ejemplo, cada 3 días).

Para un sujeto que toma múltiples fármacos, se puede formular un dispositivo para aplicación transdérmica tal como un parche para la piel con una combinación de fármacos que se utilizan frecuentemente juntos. Por ejemplo, a muchos pacientes con insuficiencia cardíaca se les administra digoxina en combinación con furosemida. En varios aspectos, se puede utilizar un único parche para la piel para administrar una combinación de ambos fármacos con la ayuda del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En varios aspectos, un sistema de suministro transdérmico puede facilitar la administración, puede reducir el riesgo de errores (tomar las píldoras correctas en el momento apropiado a menudo es confuso para las personas mayores), puede reducir la tensión psicológica de tomar “tantas píldoras”, puede reducir dosificación omitida debido a actividades irregulares y/o puede potenciar el cumplimiento.

Los métodos descritos en el presente documento pueden ser aplicables no solo a seres humanos, sino que también pueden tener una variedad de usos veterinarios, tal como, en ejemplos no limitantes, la administración de factores de crecimiento u hormonas (por ejemplo, para el control de la fertilidad) a un animal tal como, sin limitación, un animal de compañía, tal como, sin limitación, un perro o un gato, o un animal de granja, tal como, sin limitación, un caballo, una vaca, una cabra, una oveja o un cerdo.

Como se indicó anteriormente, se puede administrar una amplia variedad de fármacos de acuerdo con los métodos divulgados en el presente documento. Algunos ejemplos de categorías de fármacos que se pueden administrar por vía transdérmica incluyen fármacos antiinflamatorios (por ejemplo, en artritis y en otras afecciones) tales como, sin limitación, todos los NSAID, indometacina, prednisona; analgésicos (especialmente cuando la absorción oral no está posible, tal como después de una cirugía, y cuando la administración parenteral no es conveniente o deseable), incluyendo morfina, codeína, Demerol, acetaminofeno y combinaciones de estos (por ejemplo, codeína más acetaminofeno); antibióticos tales como vancomicina (que no se absorbe en el tracto GI y con frecuencia se administra por vía intravenosa) o una combinación de INH y rifampicina (por ejemplo, para la tuberculosis); anticoagulantes tal como la heparina (que no se absorbe bien en el tracto gastrointestinal y generalmente se administra por vía parenteral, lo que resulta en una fluctuación en los niveles sanguíneos con un mayor riesgo de sangrado a niveles altos y riesgos de ineficacia a niveles más bajos) y warfarina (que se absorbe por el tracto GI, pero no se puede administrar inmediatamente después de la cirugía abdominal debido al íleo normal que sigue al procedimiento); antidepresivos (por ejemplo, en situaciones en las que el cumplimiento es un problema, tal como en la enfermedad de Alzheimer o cuando mantener niveles sanguíneos estables da como resultado una reducción significativa de los efectos secundarios anticolinérgicos y una mejor tolerancia por parte de los pacientes), tales como, por ejemplo, amitriptilina, imipramina o Prozac; fármacos antihipertensivos (por ejemplo, para mejorar el cumplimiento y reducir los efectos secundarios asociados con niveles sanguíneos fluctuantes), tales como diuréticos y bloqueadores beta (que se pueden administrar con el mismo parche; por ejemplo, furosemida y propranolol); antipsicóticos (por ejemplo, para facilitar el cumplimiento y facilitar que el cuidador y los miembros de la familia se aseguren de que se recibe el fármaco), tales como haloperidol y clorpromazina; y ansiolíticos o sedantes (por ejemplo, para evitar la reducción del estado de alerta relacionado con niveles sanguíneos elevados después de la administración oral y permitir un beneficio continuo a lo largo del día al mantener constantes los niveles terapéuticos), y esteroides como la testosterona.

Se pueden administrar muchos otros fármacos como se describe en el presente documento, incluyendo hormonas naturales y sintéticas, factores de crecimiento, proteínas y péptidos. Por ejemplo, la insulina y la hormona del crecimiento humana, factores de crecimiento tales como la eritropoyetina, interleucinas e interferones se pueden suministrar por vía transdérmica en combinación con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen kits para administrar un fármaco a través de la piel de un mamífero. En varios aspectos, un kit puede comprender un dispositivo para aplicación transdérmica (por ejemplo, un parche para la piel) en combinación con, o impregnado con, uno o más antagonistas de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunos aspectos, un fármaco también se puede incluir dentro de un kit.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para inducir la apoptosis en un fibroblasto asociado con cáncer. Estos métodos incluyen poner en contacto fibroblastos asociados con cáncer con el antagonista de la adhesión celular de las enseñanzas. Alternativamente, en algunas realizaciones, se puede administrar un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, mediado por integrina y/u ocludina) junto con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, ya sea dentro de la misma composición farmacéutica o por separado.

En algunos aspectos, los métodos de las presentes enseñanzas se pueden utilizar para la administración de uno o más fármacos contra el cáncer. En algunos aspectos, los métodos de las presentes enseñanzas se pueden utilizar para la administración de un anticuerpo monoclonal que bloquea la función de los reguladores del punto de control del sistema inmunitario, tales como, sin limitación, nivolumab, pembrolizumab y durvalumab.

En varios aspectos, las presentes enseñanzas incluyen métodos para tratar el cáncer y/o inhibir (disminuir o reducir) la metástasis del cáncer en un mamífero. La formación de nuevos capilares es un requisito previo para el crecimiento tumoral y la aparición de metástasis. La administración del antagonista de la adhesión celular como se describe en el presente documento puede interrumpir el crecimiento de dichos vasos sanguíneos, proporcionando de esta manera una terapia efectiva para el cáncer, por ejemplo, al reducir o inhibir la progresión del cáncer, que incluye la reducción del crecimiento tumoral y/o la inhibición de la metástasis. En varias configuraciones, se puede utilizar un antagonista de las presentes enseñanzas para tratar una metástasis de cáncer. En varias configuraciones, se puede utilizar un antagonista de las presentes enseñanzas para tratar una leucemia, un linfoma o un mieloma múltiple. Alternativamente, se puede administrar un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, mediado por Dsg y/o Dsc y/o integrina y/u ocludina) junto con un antagonista de las presentes enseñanzas, ya sea dentro de la misma composición farmacéutica o por separado. Los ejemplos adicionales pueden emplear fragmentos de anticuerpos o Fab dirigidos contra un compuesto de las presentes enseñanzas.

En algunos aspectos, un antagonista se puede administrar solo (por ejemplo, a través de la piel) o dentro de una composición farmacéutica. En algunos aspectos, las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para tratar melanomas y ciertos otros tumores accesibles. Estos usos pueden comprender la administración del antagonista de la adhesión celular por inyección o por administración tópica. En algunos aspectos, las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para tratar o prevenir un cáncer de ovario. En algunas configuraciones, un uso puede comprender lavar la cavidad peritoneal con una composición que comprende el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunos aspectos, las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para tratar o prevenir el crecimiento de un tumor, tal como, por ejemplo, un tumor de vejiga, un tumor bronquial o un tumor traqueal. En varias configuraciones, un tumor se puede tratar mediante la inyección del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas en la cavidad. En otros aspectos, una composición de las presentes enseñanzas se puede administrar sistémicamente y dirigirse al tumor utilizando cualquiera de una variedad de agentes de dirección específicos. En diversos aspectos, un experto en la técnica puede determinar la cantidad de antagonista de la adhesión celular administrada y la ruta de administración, utilizando métodos de rutina. En varios aspectos, la eficacia de un tratamiento contra el cáncer o la inhibición de la metástasis se puede evaluar utilizando mediciones clínicas bien conocidas, tal como, por ejemplo, la medición del nivel de un marcador tumoral en suero (por ejemplo, CEA o PSA).

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para potenciar la respuesta inmunitaria a un tumor. Estos usos pueden comprender administrar el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, en combinación con un fármaco inmunoestimulador (por ejemplo, un anticuerpo contra un regulador del punto de control del sistema inmunitario) a un mamífero portador de tumores (véase Joyce, J.A., and Fearon, D.T., Science 348:74-80, 2015). Alternativamente, se puede administrar un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, mediado por Dsg y/o Dsc y/o integrina y/u ocludina) junto con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, ya sea dentro de la misma composición farmacéutica o por separado.

Se puede administrar una amplia variedad de fármacos contra el cáncer de acuerdo con los métodos proporcionados en el presente documento. En algunos aspectos, se puede administrar un anticuerpo monoclonal para inmunoterapia, tal como, por ejemplo, nivolumab, pembrolizumab o durvalumab en combinación con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Las presentes enseñanzas incluyen el uso en métodos para potenciar o inducir la apoptosis en una célula que expresa cadherina tal como una célula cancerosa, una célula endotelial (por ejemplo, Erez, N., et al., Exp. Cell Res. 366-378, 2004) o una célula del músculo liso (por ejemplo, Koutsouki, E. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 25: 982-988, 2005) mediante la administración del antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas.

Se puede utilizar un antagonista de las presentes enseñanzas para inhibir (es decir, reducir o aminorar) la angiogénesis (es decir, el crecimiento de vasos sanguíneos a partir de vasos sanguíneos preexistentes) en un mamífero tal como un humano. La inhibición de la angiogénesis puede ser beneficiosa, por ejemplo, en pacientes afectados por enfermedades tales como el cáncer o la artritis. Alternativamente, se puede administrar un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, un modulador o la adhesión celular mediada por integrina y/u ocludina) junto con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, dentro de la misma composición farmacéutica o por separado.

En algunas configuraciones, el efecto de un antagonista de la adhesión celular particular sobre la angiogénesis se puede evaluar utilizando un ensayo estándar de formación de vasos sanguíneos tal como, por ejemplo, un ensayo de membrana corioalantoidea de pollo (Iruela-Arispe, M.L., et al., Molecular Biology of the Cell 6:327-343, 1995). Brevemente, se puede incorporar un antagonista en una malla que comprende un colágeno tal como VITROGEN (Advanced BioMatrix, Inc., San Diego, CA) a una concentración seleccionada (por ejemplo, que varía desde alrededor de 1 a alrededor de 100 μg/malla). Luego se puede aplicar una malla a las membranas corioalantoideas de los pollitos. Después de 24 horas, el efecto del antagonista de la adhesión celular se puede determinar utilizando análisis morfométrico asistido por ordenador.

En algunas configuraciones, se puede utilizar un antagonista de las presentes enseñanzas para modular el sistema inmunitario de un mamífero. Las cadherinas se expresan en células B y T inmaduras (timocitos y células pre-B de médula ósea), así como en subconjuntos específicos de linfocitos B y T activados y algunas neoplasias malignas hematológicas (véase, por ejemplo, Lee, M.G., et al., J. Immunol. 152:5653-5659, 1994; Munro, S.B., et al., Cellular Immunol. 169:309-312, 1996; Tsutsui, J., et al., J. Biochem. 120:1034-1039, 1996; Cepek, K.L., et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 93:6567-6571, 1996). En algunos aspectos, se puede utilizar un antagonista para modular etapas específicas dentro de las interacciones celulares durante una respuesta inmunitaria o durante la diseminación de linfocitos malignos.

En algunos aspectos, el antagonista como se describe en el presente documento se puede utilizar para tratar una enfermedad asociada con la generación excesiva de células T por lo demás normales. Sin estar limitado por la teoría, se considera que la interacción de las cadherinas en subconjuntos de células T y células B en maduración puede contribuir a la protección de estas células frente a la muerte celular programada. El antagonista de la adhesión celular puede disminuir dichas interacciones, lo que conduce a la inducción de la muerte celular programada. De acuerdo con lo anterior, los antagonistas de la adhesión celular de las presentes enseñanzas se pueden utilizar para tratar ciertos tipos de diabetes y artritis reumatoide, particularmente en niños pequeños donde es mayor la expresión de cadherina sobre las células pre-T.

En algunos aspectos, un antagonista de las presentes enseñanzas se puede administrar a un paciente que padece ciertos trastornos de la piel (tales como linfomas cutáneos), leucemia aguda de células B o reacciones inmunitarias excesivas que involucran el sistema inmunitario humoral y la generación de inmunoglobulinas, tales como respuestas alérgicas y rechazo de injertos mediado por anticuerpos. En algunos aspectos, se puede administrar un antagonista de las presentes enseñanzas a un paciente con células malignas positivas para cadherina circulantes (por ejemplo, durante regímenes en los que la quimioterapia o la terapia de radiación eliminan una parte importante de las células malignas en la médula ósea y otro tejido linfoide). En algunos aspectos, se puede administrar un antagonista de las presentes enseñanzas a un paciente que se somete a un trasplante con células madre de sangre periférica. En algunos aspectos, un antagonista de las presentes enseñanzas se puede administrar a un paciente junto con un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, mediado por Dsg y/o Dsc y/o integrina y/u ocludina), ya sea dentro de la misma composición farmacéutica o por separado.

Dentro de los usos anteriores en los métodos, un antagonista se puede administrar sistémicamente (por ejemplo, mediante inyección) o tópicamente. En algunos aspectos, un antagonista se puede ligar a un agente de direccionamiento. Por ejemplo, el direccionamiento a la médula ósea puede ser beneficioso. Una dosificación adecuada puede ser suficiente para efectuar una reducción estadísticamente significativa en la población de células B y/o T que expresan cadherina y/o una mejora en la manifestación clínica de la enfermedad que se está tratando. Las dosificaciones pueden variar como se describió anteriormente.

En algunos aspectos, un antagonista de las presentes enseñanzas se puede utilizar para aumentar la vasopermeabilidad en un mamífero al administrar uno o más antagonistas de las presentes enseñanzas o composiciones farmacéuticas. Dentro de los vasos sanguíneos, la adhesión de células endoteliales (mediada por N-cadherina) da como resultado una disminución de la permeabilidad vascular. De acuerdo con lo anterior, la administración de un antagonista de la adhesión mediada por N-cadherina se puede utilizar para aumentar la permeabilidad vascular. Alternativamente, se puede administrar un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, mediado por ocludina) junto con el(los) agente(s) modulador(es), ya sea dentro de la misma composición farmacéutica o por separado.

Se puede utilizar un antagonista de las presentes enseñanzas para facilitar la penetración de agentes terapéuticos o de diagnóstico antitumorales (por ejemplo, anticuerpos monoclonales) a través de barreras de permeabilidad de células endoteliales y barreras tumorales. En algunos aspectos, el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas puede comprender además una secuencia de N-cadherina HAV. En algunos aspectos, el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas y un agente modulador adicional que interrumpe la adhesión mediada por N- y/o E-cadherina se pueden administrar simultáneamente.

Las presentes enseñanzas también incluyen el uso en métodos para tratar la fibrosis, como la fibrosis pulmonar idiopática (FPI) al inhibir la función de N-cadherina utilizando el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas. En algunas configuraciones, se puede administrar un modulador separado de la adhesión celular (por ejemplo, mediado por Dsg y/o Dsc y/o integrina y/u ocludina) junto con el antagonista de la adhesión celular de las presentes enseñanzas, ya sea dentro de la misma composición farmacéutica o por separado.

Ejemplos

A menos que se presente específicamente en tiempo pasado, un ejemplo puede ser un ejemplo profético o real.

Ejemplo 1

Este ejemplo ilustra el efecto del antagonista de la adhesión celular sobre la adhesión celular en un ensayo de crecimiento de neuritas.

Dentro de un ensayo de sobrecrecimiento de neuritas representativo, las neuronas se cultivan sobre una monocapa de células (por ejemplo, fibroblastos 3T3) que expresan N-cadherina. Las neuronas cultivadas sobre dichas células (bajo condiciones adecuadas y durante un período de tiempo suficiente) extienden neuritas que son normalmente, en promedio, dos veces más largas que las neuritas extendidas a partir de neuronas cultivadas en células 3T3 que no expresan N-cadherina. Por ejemplo, las neuronas se pueden cultivar en monocapas de células 3T3 transfectadas con ADNc que codifica N-cadherina esencialmente como describen Doherty, P. and Walsh, F.S., Curr. Op. Neurobiol. 4:49-55, 1994; Williams, E.J., et al., Neuron 13:583-594, 1994; Hall, H., et al., Cell Adhesion and Commun. 3:441-450, 1996; Doherty, P. and Walsh, F.S., Mol. Cell. Neurosci. 8:99-111, 1994; and Safell, J.L., et al., Neuron 18:231-242, 1997. Brevemente, se establecen monocapas de fibroblastos 3T3 de control y fibroblastos 3T3 que expresan N-cadherina mediante cultivo durante la noche de 80,000 células en pocillos individuales de un pocillo de 8 cámaras portaobjetos de cultivo de tejidos. Se cultivan 3000 neuronas cerebelosas aisladas de cerebros de ratón del día 3 posnatal durante 18 horas en las diversas monocapas en medios de control (SATO/FCS al 2 %) o medios suplementados con diversas concentraciones del agente modulador. A continuación, los cultivos se fijan y tiñen para GAP43, que se une específicamente a las neuronas y sus neuritas. La longitud de la neurita más larga en cada neurona positiva GAP43 se mide mediante morfometría asistida por ordenador.

Bajo las condiciones descritas anteriormente, la presencia de 10 micromolar del Compuesto 15

da como resultado una disminución de la longitud media de las neuritas en al menos un 50 %, con respecto a la longitud en ausencia de agente modulador.

Ejemplo 2

Este ejemplo ilustra el efecto del antagonista de la adhesión celular sobre la adhesión celular clásica mediada por cadherina en el ensayo de adhesión celular.

En estos experimentos, las células que expresan cadherina clásica se cultivan en placas bajo condiciones estándar que, en ausencia de antagonista de la adhesión celular, permiten la adhesión celular. La interrupción de la adhesión celular se determina visualmente dentro de las 24 horas, al observar la retracción de las células entre sí. Mediante este ensayo, se observa la interrupción de la adhesión celular en presencia de 1 micromolar del Compuesto 15

Ejemplo 3

Este ejemplo ilustra el efecto del antagonista de la adhesión celular sobre la adhesión celular mediada por N-cadherina en el ensayo de adhesión celular.

Las células endoteliales de la arteria pulmonar bovina se recogen mediante ablación estéril y digestión en colagenasa al 0.1 % (tipo II; Worthington Enzymes, Freehold, NJ). Las células se mantienen en medio mínimo esencial de Dulbecco complementado con suero de ternera fetal al 10 % y antibiótico-antimicótico al 1 % a 37 °C en CO₂al 7 % en aire. Los cultivos se pasan semanalmente en tripsina-EDTA y se siembran en plástico de cultivo de tejidos a 20,000 células/cm2 Los cultivos endoteliales se utilizan en 1 semana de cultivo, que es aproximadamente 3 días después de que se establezca la confluencia de cultivos. Las células se siembran en cubreobjetos y se tratan durante 30 minutos con el Compuesto 15 antagonista

o un compuesto de control a 10 μM y luego se fijan con paraformaldehído al 1 %. La interrupción de la adhesión celular se determina visualmente dentro de las 24 horas, al observar la retracción de las células entre sí.

Ejemplo 4

Este ejemplo demuestra los efectos de los antagonistas de N-cadherina de las presentes enseñanzas (compuestos 15 y 16) sobre la adhesión de células cancerosas. El compuesto 15 forma parte de la presente invención.

En estos experimentos, las células de cáncer de páncreas humano Panc-1 se mantuvieron en medio esencial mínimo de Dulbecco complementado con suero de ternero fetal al 10 % a 37 °C en CO₂al 5 % en aire. Todos los reactivos de cultivo se adquirieron de Invitrogen (Burlington, ON). Se sembraron células Panc-1 (ATCC CRL-1469) a razón de 20,000 células por pocillo de un portaobjetos de cultivo de tejidos de 4 pocillos (NalgeNunc, Naperville, IL). Después de 24 horas de cultivo, las células se trataron durante 24 horas con medio que contenía concentraciones variables de los compuestos 15 y 16 disueltos en dimetilsulfóxido (DMSO; concentración final de DMSO al 1 % en el medio) o DMSO al 1 % solo en el medio y luego se fijaron con paraformaldehído al 4 % disuelto en solución salina tamponada con fosfato y teñido con hematoxilina. La interrupción de la adhesión celular se determinó visualmente dentro de las 24 horas, al observar la retracción de las células entre sí.

Para determinar el efecto de los compuestos sobre la muerte celular, se aspiró el medio de los cultivos tratados y no tratados y las células no adherentes se recolectaron por centrifugación (1000 rpm durante 5 min). Las células se resuspendieron en solución salina tamponada con fosfato y se combinaron con azul de tripán (Sigma). A continuación, las células se colocaron en un hemocitómetro y se contó el número de células que excluían el azul de tripano utilizando un microscopio para determinar el número de células vivas.

El compuesto 15 interrumpió la adhesión celular a concentraciones de 100 μM (FIG. 3A), 10 μM (FIG. 3B) y 1 μM (FIG.

3C). La monocapa celular no se rompió por el compuesto 15 a una concentración de 0.1 μM (FIG. 3D), en comparación con el control (FIG. 3I). El compuesto 16 interrumpió la adhesión celular a concentraciones de 100 μM (FIG. 3E), 10 μM (FIG. 3F), 1 μM (FiG. 3G) y 0.1 μM (FIG. 3H), según se evaluó mediante microscopía óptica. El compuesto 16 provocó la muerte celular a concentraciones de 1 μM, 10 μM y 100 μM (FIG. 4), mientras que el compuesto 15 causó la muerte celular a concentraciones de 10 μM y 100 μM, en comparación con el control (FIG. 5).

Este ejemplo demuestra los efectos de algunos antagonistas de N-cadherina de las presentes enseñanzas (compuestos 15 y 16) sobre la adhesión celular mediada por N-cadherina. El compuesto 15 forma parte de la presente invención.

En estos experimentos, se transfectaron un total d ex 106 fibroblastos embrionarios L929 de ratón (células L) originalmente no cohesivos mediante electroporación en 400 μl de medio de transfección (RPMI 1640, dextrosa al 1 %, p-mercaptoetanol 1 mM) con 40 μg de vector de expresión de N-cadherina de pollo μMiwcN (Miyatani, S., et al., Science, 1989, 245, 631-635; Fujimori T., et al., Development, 1990, 110. 97-104). La resistencia a neomicina (pwlneo, GIBCO) se incluyó para la selección de G418. Las células transfectadas se diluyeron 1/100 y se colocaron en un medio que contenía 800 μg/ml de G418 (GIBCO). Las células resistentes se cultivaron hasta la confluencia, se separaron mediante tratamiento con tripsina/Ca2+ y se tiñeron con un anticuerpo anti-cadherina N de pollo (NCD2, Zymed) en hielo durante 45 min. Después de varios lavados en solución salina equilibrada de Hanks, las células se mezclaron con un anticuerpo secundario conjugado con isotiocianato de fluoresceína y se colocaron en hielo durante 30 min. A continuación, las células que expresan N-cadherina se autoclonaron en placas de 96 pocillos utilizando el Sistema de Depósito Integrado CloneCyt (Becton-Dickinson Immunocytometry Systems). Los clones positivos se volvieron a analizar mediante FACS y la estirpe celular L LN5 se propagó para estos estudios.

Los esferoides 3D se generaron como sigue. Las células se retiraron de las placas casi confluentes con TC (tripsina al 0.05 % y Ca2+ 2 mM en solución de Hank durante 5 a 10 minutos), se lavaron una vez con 1 ml de solución de Hank a 4 °C y se suspendieron a una concentración de 2.5 x 106 células/ml en MEM completo complementado con CaCh 2 mM y concentraciones variables de antagonistas de N-cadherina (Crocus Laboratories, Montreal, Quebec, Canadá). Los antagonistas fueron el compuesto 15 (PM = 499.43) y el compuesto 16 (PM = 499.43). Las soluciones madre de los antagonistas se prepararon al disolver los antagonistas en DMSO a concentraciones de 30 mM. Los controles se hicieron al suspender las células como se describió anteriormente en ausencia de antagonistas con solo la cantidad respectiva de DMSO agregada. Se depositaron gotas de las suspensiones celulares (10 microlitros cada una) en la parte inferior de una tapa de placa de cultivo de tejidos de 10 cm. Luego se invirtió la tapa y se colocó sobre una placa que contenía 5 ml de PBS para hidratación. Las gotas colgantes se incubaron bajo condiciones de cultivo de tejidos durante 48 h, lo que permitió que las células se fusionaran en la base de las gotas y formaran agregados de múltiples capas. A continuación, se retiró la tapa de la placa de cultivo de tejidos y se aspiró suavemente el medio. Los agregados (N = 10-20) se fotografiaron luego con una lente de 4x y el área de la celda se analizó utilizando ImageJ. Las diferencias estadísticas se determinaron utilizando ANOVA y la prueba de comparación múltiple de Tukey.

Cada uno de los antagonistas ensayados de Crocus Laboratories contenía propiedades antagonistas de cadherina a diferentes niveles de potencia. Determinamos la concentración mínima aproximada necesaria para una respuesta de dosis antiadherencia en células de fibroblastos de ratón con N-cadherina esferoide 3D (LN5). Estas células se prepararon al formar una suspensión celular a 2.5 x 106 células/ml. A continuación, se pipetearon gotas de 10 μl de la suspensión en el interior de la tapa de una placa de Petri que luego se colocó sobre la placa de Petri que contenía 5 ml de PBS para proporcionar humedad y evitar la desecación de la suspensión celular. Sin tratamiento farmacológico, las células gravitaron hacia el fondo de la gota colgante de 10 μl y crearon un agregado esferoide 3D apretado, debido a la formación de enlaces entre los receptores de N-cadherina. El aumento de la cantidad de fármaco condujo a agregados más sueltos, o incluso a una lámina monocapa de células desconectada sin cohesión célulacélula, debido a la inhibición de la formación de enlaces de cadherina.

La concentración mínima requerida para observar la ruptura de la cohesión del compuesto 15 fue de 40 μM. La rotura completa se produjo a 75 μM (FIG. 6). Las concentraciones mínimas requeridas para observar la interrupción de la cohesión para el compuesto farmacológico 16 fueron 50 μM. La interrupción completa se produjo a 75 μM (FIG. 7). Todos los compuestos se consideraron efectivos cuando el diámetro promedio de los agregados alcanzó aproximadamente 1.5 μm2.

Ejemplos: Esquemas de síntesis

El compuesto de las presentes enseñanzas se puede preparar de acuerdo con los esquemas de reacción ilustrados a continuación utilizando métodos conocidos por aquellos expertos con conocimientos básicos en la técnica. Estos esquemas sirven para ejemplificar algunos procedimientos que se pueden utilizar para preparar los compuestos de las presentes enseñanzas. Un experto en la técnica reconocerá que se pueden utilizar otros procedimientos sintéticos generales. Los compuestos de las presentes enseñanzas se pueden preparar a partir de componentes de partida que están disponibles comercialmente. Se puede realizar cualquier tipo de sustitución de los componentes de partida para obtener los compuestos de las presentes enseñanzas de acuerdo con procedimientos que son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Todos los reactivos y solventes se obtuvieron de fuentes comerciales y se utilizaron tal como se recibieron. Los espectros de 1H-RMN se registraron en un instrumento Bruker 500 MHz Ultrashield con Bruker Avance II 500 Console en los solventes indicados. Los espectros de masas de baja resolución (LRMS) se adquirieron en un instrumento AGILENT® MSD. La HPLC analítica se realizó en un instrumento AGILENT® 1100 utilizando una columna Kinetex 2.6 C18 100 A, 30 x 4.6 mm; eluyendo con metanol/agua que contenía ácido fórmico al 0.05 %, con un gradiente de 5-95 % de metanol durante 3 minutos. Se realizó cromatografía en columna flash utilizando gel de sílice (40-63 μM, tamaño de poro 60 A, SILICYCLE®).

Este ejemplo ilustra la síntesis del Compuesto 15.

Esquema 8

(S)-1-(3,4-Diclorofenoxi)-3-(4-((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propilamino)piperidin-1-il)propan-2-ol (15).

Etapa 1. (S)-2-((4-Metoxifenoxi)metil)oxirano (14).

A una solución de 4-metoxifenol (2.48 g, 20 mmol) en MeCN (50 mL) se agregó (S)-2-(clorometil)oxirano (8.37 g, 90 mol) y carbonato de potasio (8.28 g, 60 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 72 hrs a condiciones de reflujo, se filtró y el filtrado se evaporó. El aceite restante se purificó mediante cromatografía en columna flash, eluyente 20 % de EA en hexanos para producir el compuesto 14 (2.47 g, 69 % de rendimiento) como aceite incoloro que se ha solidificado en el vacío. 1H RMN (500 MHz, CDCla) 8(ppm): 6.87 (d, J=9.4 Hz, 2H), 6.83 (d, J=9.4 Hz, 2H), 4.17 (dd, J=3.2 y 11.0 Hz, 1H), 3.92 (dd, J=5.6 y 11.0 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.35-3.32 (m, 1H), 2.89 (dd, J=4.2 y 4.9 Hz, 1H), 2.74 (dd, J=2.7 y 5.0 Hz, 1H)

Etapa 2. (S)-1-(3,4-Diclorofenoxi)-3-(4-((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propilamino)piperidin-1-il)propan-2-ol (15).

A una solución del compuesto 9 (190 mg, 0.60 mmol) en 70 % de EtOH acuoso (10 mL) a T.Amb. se agregó el oxirano 14 (107 mg, 0.60 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta reflujo durante 20 hrs, se enfrió a T.Amb. y se evaporó. El aceite restante se purificó mediante cromatografía en columna flash (eluyente 20 % de MeOH en DCM, MeOH contenía 2 % de amoniaco) para producir el compuesto 15 como material aceitoso que se convirtió en un sólido blanco en vacío. Rendimiento: 196 mg (66%). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 8(ppm): 7.50 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 2.9 y 8.9 Hz, 1H), 6.87-6.83 (m, 4H), 5.01 (bs, 1H), 4.85 (bs, 1H), 4.01-3.99 (m, 1H), 3.91-3.79 (m, 5H), 3.69 (s, 3H), 2.87-2.72 (m, 3H), 2.62-2.59 (m, 1H), 2.50-2.29 (m, 3H), 2.06-1.98 (m, 2H), 1.77 (bd, 2H), 1.30-1.23 (m, 2H). [No se ve la señal del protón NH]. (m S) (relación masa a carga; m/z): 500.0 (M+H). (CRS-00-029)

Ejemplo de Referencia 7

Este ejemplo ilustra la síntesis del Compuesto 16.

Esquema 9

(R)-1-(3,4-Didorofenoxi)-3-(4-((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propilamino)piperidin-1-il)propan-2-ol (16)

A una solución del compuesto 12 (234 mg, 0.73 mmol) en 70 % de EtOH acuoso (10 mL) a T.Amb. se agregó el oxirano 14 (132 mg, 0.73 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta reflujo durante 20 hrs, se enfrió a T.Amb. y se evaporó. El aceite restante se purificó mediante cromatografía en columna flash (eluyente 20 % de MeOH en DCM, MeOH contenía 2 % de amoniaco) para producir el compuesto 16 como material aceitoso que se convirtió en un sólido blanco en vacío. Rendimiento: 156 mg (42%). 1H RMN (500 MHz, DMSO-da) 6(ppm): 7.50 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 2.9 y 8.9 Hz, 1H), 6.87-6.82 (m, 4H), 4.98 (bs, 1H), 4.85 (bs, 1H), 4.01-3.99 (m, 1H), 3.89-3.78 (m, 5H), 3.68 (s, 3H), 2.86-2.70 (m, 3H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.41-2.37 (m, 2H), 2.33-2.29 (m, 1H), 2.06-1.98 (m, 2H), 1.76 (bt, 2H), 1.30-1.23 (m, 2H). [No se ve la señal del protón NH]. (MS) (relación masa a carga; m/z): 499.0 (M+H). (CRS-00-032)

Ejemplo 8

Este ejemplo ilustra los efectos del Compuesto 15 sobre la viabilidad de fibroblastos asociados con cáncer mediado por N-cadherina.

Estudios previos han mostrado que los tumores pancreáticos pueden estar compuestos por un 90 % de células estromales (Olive, K.P., et al., Science 324:1457-1461, 2009; Olive, K.P., Clin. Cancer Res. 21:3366-3368, 2015). Los fibroblastos asociados al cáncer (CAF) son uno de los principales tipos de células presentes en el estroma tumoral (revisado por Pandol, S., et al., 2009, Clin. Gastroenterol. Hepatol. 7, S44-47; Karagiannis et al., Mol. Cancer Res.

10:1403-14182012, Joyce and Fearon, Science 348:74-80, 2015). Se agregan peritumoralmente y rodean las células cancerosas que invaden los tejidos normales adyacentes. Los CAF respaldan la supervivencia de las células del cáncer de páncreas (PC) y protegen a estas células del ataque del sistema inmunitario (Joyce and Fearon, Science 348:74-80, 2015), así como previenen el acceso de fármacos contra el cáncer a las células PC (Olive, K.P., et al., Science 324:1457-1461, 2009).

En este estudio, los CAF se aislaron como describen Orr et al, (Orr, B., et al., Oncogene, 31, 1130-1142, 2012). Las células se cultivaron en medio Eagle modificado por Dulbecco (Multicell) con suero bovino fetal al 10 %. Los CAF son fibroblastos primarios humanos, cultivados a partir de muestras de tumores de próstata de pacientes. Estas células no son una estirpe celular establecida, ni están inmortalizadas, y en algún momento envejecerán.

En estos experimentos, las células se sembraron en una placa de 96 pocillos (Corning) (3,000 células/pocillo). Al día siguiente se agregó el fármaco a la concentración indicada (FIG. 8). Después de 24 h y 48 h, se midió la viabilidad celular utilizando CELLTITER GLO® (Promega, Madison, WI) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Todos los ensayos se repitieron al menos 3 veces por triplicado cada vez. Los resultados se representan en la FIG. 8 como SEM. Los datos indican que el compuesto antagonista de N-cadherina 15 disminuye la viabilidad in vitro de fibroblastos humanos asociados con cáncer (CAF010415) (FIG. 8). El compuesto antagonista de N-cadherina 15 disminuye de esta manera la viabilidad de las células de cáncer de páncreas humano (PC) y CAF. Estas observaciones indican que los antagonistas de la N-cadherina se pueden utilizar para tratar el PC.

Ejemplo 9

Este ejemplo demuestra los efectos del compuesto 15 antagonista de N-cadherina sobre sinoviocitos similares a fibroblastos (FLS) humanos.

Los sinoviocitos similares a fibroblastos (FLS) son una nueva diana celular para tratar la artritis reumatoide (RA). El FLS expresa N-cadherina (Agarwal, S.K., et al., Arthritis Rheum., 58, 1044-1054, 2008). La N-cadherina regula la adhesión de FLS.

En estos experimentos, se mantuvieron sinoviocitos similares a fibroblastos humanos (FLS) (ScienCell Research Laboratories (Carlsbad, CA; Cat#4700) en medios de sinoviocitos completos (ScienCell Research Laboratories Carlsbad, CA Cat#4701) a 37 °C en CO₂al 5 % en aire. Las células FLS se sembraron en placa a 1.5 x 104 células por pocillo de un portaobjetos de cultivo de tejidos de 4 pocillos (NalgeNunc, Naperville, IL). Después de 24 horas de cultivo, las células se trataron durante 24 horas con medio que contenía concentraciones variables de compuestos 15 disueltos en dimetilsulfóxido (DMSO; concentración final de DMSO al 1 % en el medio), o DMSO al 1 % solo en el medio. A continuación, las células se fijaron con paraformaldehído al 4 % disuelto en solución salina tamponada con fosfato y se tiñeron con hematoxilina. La interrupción de la adhesión celular se determinó visualmente dentro de las 24 horas, al observar la retracción de las células entre sí. La FIG. 9 muestra las células FLS tratadas fotografiadas a 400X. Como se muestra en la FIG. 9, los efectos del compuesto 15 en las células FLS se pueden ver en el rango de 5-50 |jM Estos resultados muestran que el Compuesto 15 se puede utilizar para tratar la r A.

Ejemplo 10

Existe una necesidad insatisfecha de anticonceptivos no hormonales. Las mujeres con una necesidad insatisfecha de planificación familiar se definen como el porcentaje de mujeres en edad reproductiva (15-49), ya sea casadas o en unión, que desean detener o retrasar la maternidad pero que no utilizan ningún método anticonceptivo (Departamento de las Naciones Unidas de Asuntos Económicos y Sociales, División de Población). En 2017, la necesidad insatisfecha de anticoncepción entre las mujeres en edad reproductiva era del 21.6 %, y solo el 67.9 % de la población estaba satisfecha con los métodos modernos (Cahill, N., et al., Lancet, 391, 870-882, 2018).

Este ejemplo ilustra que el Compuesto 15 inhibe la formación del cuerpo lúteo.

En estos experimentos, a dos grupos de ratones hembra (n=6 por grupo) se les inyectó i.p. (50 j l por inyección) dos veces al día con vehículo de control (solución salina que contenía DMSO al 7.5 %) o vehículo que contenía el compuesto 15 (50 mg/kg) en los días indicados en la FIG. 10. A los ratones se les inyectaron hormonas para estimular la ovulación. La FIG. 10 es un esquema que muestra la inyección de hormonas en ratones para provocar la maduración del folículo y la inyección del compuesto 15.

Como se ilustra en la FIG. 11, los ovarios tratados con el Compuesto 15 tienen menos estructuras de tipo CL claramente luteinizadas (asteriscos). Los ovarios tratados con el compuesto 15 tienen estructuras similares a folículos antrales sin romper que contienen ovocitos rodeados por un complejo de cúmulos expandido (COC) (flechas), lo que indica que el compuesto 15 inhibe la ovulación. Estos datos indican que un antagonista de N-cadherina tal como el compuesto 15 puede servir como anticonceptivo no hormonal.

Ejemplo 11

El mieloma múltiple (MM) es una neoplasia maligna hematológica caracterizada por la proliferación clonal de células plasmáticas productoras de anticuerpos dentro del microentorno de la médula ósea.

Este ejemplo ilustra que el Compuesto 15 puede inhibir el crecimiento de tumores de mieloma múltiple (MM) in vivo.

El modelo murino C57BL/KaLwRij (Rij) de Mieloma Múltiple (MM) tiene muchas de las características clínicas e histopatológicas que son características de la enfermedad de MM humana (Radl, J., et al., 1988, Am. J. Pathol., 132, 593-597; Vanderkerken, K., et al., 1997, Br. J. Cancer, 76, 451-460). Una de las estirpes celulares derivadas de ratones Rij envejecidos que presentaban MM, la estirpe 5TGM1 (Garrett, I. R., et al., 1997, Bone, 20, 515-520; Oyajobi, B.O., et al., 2007, Molecular Cancer Therapeutics, 6, 1701-1708) exhibe muchas de las propiedades de la enfermedad humana, que incluyen la reorientación de la médula ósea y enfermedad ósea osteolítica.

En estos experimentos, las células plasmáticas de MM de ratón 5TGM1 (que expresan una construcción indicadora dual de GFP y luciferasa (Noll, J.E. et al., Neoplasia 16: 572-585, 2014; Cheong, C. M., et al., Exp. Cell Res. 332:24-38, 2015) se mantuvieron en medio Dulbecco modificado de Iscove (IMDM) con suero de ternera fetal al 20 % (FCS; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE. UU.) y suplementos.

Se utilizaron ratones C57Bl/KaLwRij (6-8 semanas de edad) para todos los estudios in vivo. Para los estudios de tumores de MM, se inocularon ratones con 5 x 105 de células 5TGM1 en 100 j l de solución salina tamponada con fosfato mediante inyección intravenosa (i.v.) a través de la vena de la cola. La carga tumoral corporal total se evaluó los días 14, 21 y 28 utilizando Xenogen IVIS, como se describió anteriormente (Mrozik, K.M., et al., 2015, Br. J. Haematol. 171, 387-399.). Todos los animales utilizados para los estudios de terapia se aleatorizaron por edad, sexo y, en su caso, carga tumoral. El compuesto 15 se disolvió a una concentración de 10 mg/ml en solución salina que contenía 2-hidroxiproprol-p-ciclodextrina al 40 %. Se administró el compuesto 15 (50 mg/kg/día) (N=8) o el vehículo (2-hidroxiproprol-p-ciclodextrina al 40 % en solución salina) (N=7) a ratones i.p., comenzando 15 minutos antes de la inyección de células 5TGM1 durante 5 días. Como se muestra en la FIG. 12, el Compuesto 15 provocó una disminución de la carga tumoral. Por lo tanto, el compuesto 15 es efectivo para el tratamiento de MM.

Ejemplo 12

Este ejemplo ilustra los efectos de un antagonista de N-cadherina de las presentes enseñanzas (compuesto 15) sobre la viabilidad de células de mieloma múltiple (MM).

Se cultivaron células de mieloma MM.1S (American Type Culture Collection, Manassas, VA, EE. UU.) en medio RPMI-1640 suplementado con suero bovino fetal al 10 % (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EE. UU.), 100 U/ml. de penicilina y 100 mg/mL de estreptomicina. Las células se cultivaron a 37°C en una incubadora humidificada con CO2 al 5 %.

En estos experimentos, las células MM.1S se marcaron previamente con CellTrace Violate (Thermo Fisher Scientific), se sembraron en placas de 96 pocillos (1.5 x105 células/pocillo) y se trataron con concentraciones variables del compuesto 15 (1-100 μM) o DMSO (control de vehículos). Se utilizó un cribado de alto contenido (Celllnsight CX5, Thermo Fisher Scientific) para cuantificar el número de células vivas (es decir, células AM+ de calceína) 24 h después del tratamiento. La FIG. 13 presenta fotomicrografías (panel superior) y datos cuantitativos (panel inferior) de células tratadas con el compuesto 15. Como se muestra en la FIG. 13, el compuesto 15 provocó una disminución en el número de células vivas en el sustrato a concentraciones de 10 y 100 μM. Estos resultados ilustran además que el compuesto 15 es útil para tratar el mieloma múltiple.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto es (S)-1-(3,4-diclorofenoxi)- 3-(4-(((S)-2-hidroxi-3-(4-metoxifenoxi)propil)amino)piperidin-1-il)propan-2-ol

2. Una composición que comprende:

el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1; y

un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 2, que además comprende un compuesto heterólogo seleccionado del grupo que consiste en una sustancia farmacéuticamente activa, un agente dirigido a una diana específica, un marcador detectable y un soporte sólido.

4. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que la sustancia farmacéuticamente activa se selecciona del grupo que consiste en un analgésico, un anestésico, un antianginoso, un antifúngico, un antibiótico, un fármaco contra el cáncer, un antiinflamatorio, un antihelmíntico, un antidepresivo, un antídoto, un antiemético, un antihistamínico, un antihipertensivo, un antipalúdico, un agente antimicrotubular, un agente antimigraña, un antimicrobiano, un antipsicótico, un antipirético, un antiséptico, un agente antiseñalización, un antiartrítico, un agente antitrombina, un antituberculoso , un antitusivo, un antiviral, un supresor del apetito, un fármaco cardioactivo, un fármaco para la dependencia química, un catártico, un agente quimioterapéutico, un vasodilatador coronario, un vasodilatador cerebral, un vasodilatador periférico, un agente anticonceptivo, depresores, un diurético, un expectorante , un factor de crecimiento, un agente hormonal, un hipnótico, un agente inmunosupresor, un agente inmunoestimulador, un antagonista narcótico, un parasimpaticomimético, un sedante, un estimulante, un simpaticomimético, una toxina, un tranquilizante y un antiinfeccioso urinario.

5. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el marcador detectable se selecciona del grupo que consiste en un antígeno polipeptídico que se puede detectar con un anticuerpo y una enzima que se puede detectar con un sustrato cromogénico o un sustrato fluorogénico.

6. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el soporte sólido es una matriz polimérica.

7. Un parche para el suministro transdérmico de fármacos, que comprende:

una matriz; y

el compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la reivindicación 1.

8. Un parche para el suministro transdérmico de fármacos de acuerdo con la reivindicación 7, que además comprende al menos un agente farmacéutico adicional;

en el que, opcionalmente, el al menos un agente farmacéutico adicional se selecciona del grupo que consiste en un fármaco antiinflamatorio, un analgésico, un antibiótico, un anticoagulante, un antidepresivo, un fármaco antihipertensivo, un fármaco antipsicótico, un sedante y un esteroide.

9. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en el tratamiento del cáncer.

10. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de ovario, mieloma múltiple, leucemia mielógena crónica, melanoma, y neuroblastoma.

11. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en el tratamiento de artritis reumatoide.

12. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en la inhibición de angiogénesis.

13. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la angiogénesis se asocia con adipogénesis.

14. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la angiogénesis se asocia con crecimiento de tumor.

15. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 para uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en artritis, diabetes, obesidad, restenosis y fibrosis.