ES2940466T3 - Métodos y composiciones para tratar trastornos asociados al complemento - Google Patents

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Abstract

La presente descripción se refiere, entre otras cosas, a composiciones que contienen un inhibidor del complemento humano y al uso de las composiciones en métodos para tratar o prevenir trastornos asociados al complemento. En algunas realizaciones, el inhibidor se administra de forma crónica a los pacientes. En algunas realizaciones, el inhibidor se administra a un paciente en una cantidad y con una frecuencia para mantener la inhibición del complemento sistémico y evitar la ruptura. En algunas realizaciones, la composición contiene un anticuerpo, o la unión al antígeno del mismo, que se une a una proteína C5 del componente del complemento humano oa un fragmento de la proteína tal como C5a o C5b. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos y composiciones para tratar trastornos asociados al complemento
Referencia cruzada a solicitudes relacionadas
Esta aplicación reivindica el beneficio de las Solicitudes de Patentes Provisionales U.S. Series núms.: 61/198.803, presentada el 10 de noviembre de 2008; 61/199.563, presentada el 18 de noviembre de 2008; 61/199.562, presentada el 18 de noviembre de 2008; 61/199.569, presentada el 18 de noviembre de 2008; 61/199.764, presentada el 19 de noviembre de 2008; 61/200.640, presentada el 1 de diciembre de 2008; 61/200.634, presentada el 1 de diciembre de 2008; 61/200.635, presentada el 1 de diciembre de 2008; 61/181.788, presentada el 28 de mayo de 2009; y 61/228.047, presentada el 23 de julio de 2009.
Campo técnico
El campo de la invención es la medicina, la inmunología, la biología molecular, y la química de proteínas.
Antecedentes
El sistema del complemento actúa junto con otros sistemas inmunológicos del cuerpo para defenderse contra la intrusión de patógenos celulares y virales. Hay al menos 25 proteínas del complemento, que se encuentran como una colección compleja de proteínas plasmáticas y cofactores de membrana. Las proteínas plasmáticas constituyen alrededor del 10% de las globulinas en el suero de los vertebrados. Los componentes del complemento consiguen sus funciones defensivas inmunitarias interactuando en una serie de acontecimientos intricados, pero precisos, de escisión enzimática y unión a membrana. La reacción en cadena del complemento da lugar a la producción de productos con funciones opsónicas, inmunorreguladoras y líticas. En The Manual Merck, 16a edición, por ejemplo, se proporciona un resumen conciso de las actividades biológicas asociadas con la activación del complemento.
La cascada del complemento puede progresar a través de la ruta clásica (CP), la ruta de la lectina, o la ruta alternativa (AP). La ruta de la lectina normalmente se inicia con la unión de la lectina de unión a manosa (MBL) a sustratos ricos en manosa. La AP puede ser independiente de anticuerpos, y puede iniciarse mediante determinadas moléculas en superficies de patógenos. La CP se inicia típicamente mediante el reconocimiento de anticuerpos de, y unión a, un sitio antigénico en una célula diana. Estas rutas convergen en la C3 convertasa, el pinto donde el componente C3 del complemento se escinde por una proteasa activa para producir C3a y C3b.
La C3 convertasa de AP se inicia por la hidrólisis espontánea del componente C3 del complemento, que es abundante en el plasma en la sangre. Este proceso, también conocido como "activación basal" se produce a través de la escisión espontánea de un enlace tioéster en C3 para formar C3i o C3(H2Ü). La activación basal se facilita por la presencia de superficies que mantienen la unión de C3 activada y/o tienen características de carga neutra o positiva (por ejemplo, superficies celulares bacterianas). Esta formación de C3(H2Ü) permite la unión de la proteína plasmática Factor B, que a su vez permite que el Factor D escinda el Factor B en Ba y Bb. El fragmento Bb permanece unido a C3 para formar un complejo que contiene C3(H2Ü)Bb, la C3 convertasa de "fase líquida" o "inicio". Aunque solamente se produce en pequeñas cantidades, la C3 convertasa en fase líquida puede escindir múltiples proteínas C3 en C3a y C3b y provoca la generación de C3b y su posterior unión covalente a una superficie (por ejemplo, una superficie bacteriana). El Factor B unido a la C3b unida a superficie se escinde por el Factor D para formar, por tanto, el complejo de C3 convertasa de AP unido a superficie que contiene C3b,Bb. (Véase, por ejemplo, Müller-Eberhard (1988) Ann Rev Biochem 57:321-347.)
La C5 convertasa de AP, (C3b)2,Bb, se forma tras la adición de un segundo monómero de C3b a la C3 convertasa de AP. (Véase, por ejemplo, Medicus et al. (1976) J Exp Med 144:1076-1093 y Fearon et al. (1975) J Exp Med 142:856-863.) La función de la segunda molécula de C3b es unirse a C5 y presentarla para escisión por Bb. (Véase, por ejemplo, Isenman et al. (1980) J Immunol 124:326-331.) Las convertasas AP C3 y C5 se estabilizan mediante la adición de la proteína trimérica properdina, como se describe, por ejemplo, en Medicus et al. (1976), más arriba. Sin embargo, no se requiere la unión de properdina para formar una C3 o C5 convertasa de la ruta alternativa que funcione. (Véanse, por ejemplo, Schreiber et al. (1978) Proc Natl Acad Sci USA 75: 3948-3952 y Sissons et al. (1980) Proc Natl Acad Sci USA 77: 559-562.)
La C3 convertasa de CP se forma tras la interacción del componente C1 del complemento, que es un complejo de C1q, C1r y C1s, con un anticuerpo que se une a un antígeno diana (por ejemplo, un antígeno microbiano). La unión de la parte C1q de C1 al complejo de anticuerpo-antígeno provoca un cambio conformacional en C1 que activa Clr. C1 r activa entonces escinde la C1 s asociada a C1 para generar de ese modo una serina proteasa activa. C1 s activa escinde el componente C4 del complemento en C4b y C4a. Como C3b, el fragmento C4b recién generado contiene un tiol altamente reactivo que forma fácilmente enlaces amida o éster con moléculas adecuadas en una superficie diana (por ejemplo, una superficie celular microbiana). C1s también escinde el componente C2 del complemento en C2b y C2a. El complejo formado por C4b y C2a es la C3 convertasa de CP, que puede procesar C3 en C3a y C3b. La C5 convertasa de CP, C4b,C2a,C3b, se forma tras la adición de un monómero C3b a la C3 convertasa de CP. (Véanse, por ejemplo, Müller-Eberhard (1988), más arriba y Cooper et al. (1970) J Exp Med 132:775-793.)
Además de su función en las C3 y C5 convertasas, C3b también funciona como una opsonina a través de su interacción con receptores del complemento presentes en las superficies de células presentadoras de antígeno tales como macrófagos y células dendríticas. La función opsónica de C3b se considera en general una de las funciones antiinfecciosas más importantes del sistema del complemento. Pacientes con lesiones genéticas que bloquean la función de C3b son propensos a infección por una amplia diversidad de organismos patógenos, mientras que se encuentra que pacientes con lesiones posteriores en la secuencia de reacción en cadena del complemento, es decir, pacientes con lesiones que bloquean las funciones de C5 son más propensos solamente a infección por Neisseria, y entonces solamente algo más propensos.
Las convertasas AP y CP C5 escinden C5, que es una beta globulina de 190 kDa que se encuentra en el suero normal a aproximadamente 75 pg/ml (0,4 pM). C5 está glucosilada, con aproximadamente un 1,5-3 por ciento de su masa atribuida a carbohidrato. C5 madura es un heterodímero de una cadena alfa de 999 aminoácidos de 115 kDa que está unida por disulfuro a una cadena beta de 655 aminoácidos de 75 kDa. C5 se sintetiza como un producto de proteína precursora de una sola cadena de un gen de una sola copia (Haviland et al. (1991) J. Immunol. 146:362-368). La secuencia de ADNc del transcrito de este gen predice un precursor pro-C5 segregado de 1658 aminoácidos, junto con una secuencia líder de 18 aminoácidos (véase, por ejemplo, la patente U.S. núm. 6.355.245).
El precursor pro-C5 se escinde después de los aminoácidos 655 y 659, para producir la cadena beta como un fragmento aminoterminal (residuos aminoacídicos 1 a 655 de la secuencia anterior) y la cadena alfa como un fragmento carboxiterminal (residuos aminoacídicos 660 a 1658 de la secuencia anterior), con cuatro aminoácidos (residuos aminoacídicos 656-659 de la secuencia anterior) eliminados entre los dos.
C5a se escinde de la cadena alfa de C5 por la C5 convertasa alternativa o clásica como un fragmento aminoterminal que comprende los primeros 74 aminoácidos de la cadena alfa (es decir, los residuos aminoacídicos 660-733 de la secuencia anterior). Aproximadamente un 20 por ciento de la masa de 11 kDa de C5a se atribuye a carbohidrato. El sitio de escisión para la acción de la convertasa está en el resto de aminoácido 733 de la secuencia anterior, o inmediatamente adyacente a él. Un compuesto que se uniría en, o adyacente a, este sitio de escisión tendría el potencial de bloquear el acceso de las enzimas C5 convertasa al sitio de escisión, y por lo tanto actuaría como un inhibidor del complemento.
C5 también puede activarse por un medio distinto de la actividad C5 convertasa. La digestión limitada de tripsina (véanse, por ejemplo, Minta y Man (1997) J Immunol. 119:1597-1602 y Wetsel y Kolb (1982) J lmmunol. 128:2209-2216) y el tratamiento ácido (Yamamoto y Gewurz (1978) J Immunol. 120:2008 y Damerau et al. (1989) Molec. Immunol.
26:1133-1142) también pueden escindir C5 y producir C5b activo.
La escisión de C5 libera C5a, una anafilotoxina potente y factor quimiotáctico, y da lugar a la formación del complejo terminal lítico del complemento, C5b-9. C5a y C5b-9 también tienen propiedades de activación celular pleiotrópicas, amplificando la liberación de factores inflamatorios posteriores, tales como enzimas hidrolíticas, especies reactivas de oxígeno, metabolitos de ácido araquidónico y diversas citocinas.
La primera etapa en la formación del complejo terminal del complemento implica la combinación de C5b con C6, C7 y C8 para formar el complejo C5b-8 en la superficie de la célula diana. Tras la unión del complejo C5b-8 con varias moléculas C9, se forma el complejo de ataque a la membrana (MAC, C5b-9, complejo del complemento terminal -TCC). Cuando un número suficiente de MAC se inserta en las membranas de las células diana, las aberturas que crean (poros MAC) median la lisis osmótica rápida de las células diana. Concentraciones no líticas inferiores de MAC pueden producir otros efectos. En particular, la inserción en la membrana de pequeños números de los complejos C5b-9 en células endoteliales y plaquetas pueden provocar activación celular perjudicial. En algunos casos, la activación puede preceder a la lisis celular.
Como se mencionó anteriormente, C3a y C5a son anafilatoxinas. Estos componentes del complemento activados pueden desencadenar la desgranulación de mastocitos, lo que libera histamina desde basófilos y mastocitos, y otros mediadores de inflamación, provocando la contracción del músculo liso, permeabilidad vascular aumentada, activación de leucocitos y otros fenómenos inflamatorios incluyendo proliferación celular que provoca hipercelularidad. C5a también funciona como un péptido quimiotáctico que sirve para atraer granulocitos proinflamatorios al sitio de activación del complemento.
Se encuentran receptores de C5a en las superficies de células epiteliales bronquiales y alveolares y células de músculo liso bronquiales. También se han encontrado receptores de C5a en eosinófilos, mastocitos, monocitos, neutrófilos y linfocitos activados.
Si bien un sistema del complemento que funciona correctamente proporciona una defensa sólida contra los microbios infecciosos, la regulación o activación inapropiada del complemento se ha visto implicada en la patogénesis de una variedad de trastornos, incluyendo, por ejemplo, artritis reumatoide (AR); nefritis lúpica; lesión por isquemia-reperfusión; síndrome urémico hemolítico atípico (aHUS); enfermedad por depósitos densos (DDD); degeneración macular (por ejemplo, degeneración macular relacionada con la edad (AMD)); síndrome hemolítico, de enzimas hepáticas elevadas, y plaquetas bajas (HELLP); púrpura trombocitopénica trombótica (PTT); pérdida fetal espontánea; vasculitis pauciinmune; epidermólisis ampollosa; pérdida fetal recurrente; esclerosis múltiple (EM); lesión cerebral traumática; y lesiones resultantes de infarto de miocardio, circulación extracorpórea y hemodiálisis. (Véase, por ejemplo, Holers et al. (2008) Immunological Reviews 223:300-316.) Würzner y Zimmerhackl, 2006, en libro: Complement and Kidney Disease (págs.149-163), Loirat et al. 2008, Pediatric Nephrology 23, 1957-1972 y Kavanagh et al., 2008, Annu. Rev. Med. 59:293-309, todos describen estrategias terapéuticas aHUS.
Sumario
La presente invención proporciona un anticuerpo para uso en el tratamiento del síndrome urémico hemolítico atípico (aHUS) en un paciente, en el que el anticuerpo es eculizumab.
Por tanto, la presente invención se refiere al tratamiento del aHUS. El tratamiento de otros trastornos asociados al complemento no cae dentro del alcance de la presente invención.
La presente descripción se refiere a composiciones que contienen un inhibidor del complemento humano (por ejemplo, un inhibidor del componente C5 del complemento, tal como un anticuerpo anti-C5), y a métodos para usar las composiciones para tratar o prevenir trastornos asociados al complemento. En algunas realizaciones, las composiciones contienen un anticuerpo, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a una proteína C5 del componente del complemento humano. En algunas realizaciones, las composiciones contienen un anticuerpo, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une al fragmento C5a o C5b de C5 humano. En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 es una molécula pequeña o un ácido nucleico, tal como, por ejemplo, un ARNip o un ARN antisentido que se une y promueve la inactivación del ARNm de C5 en un mamífero.
Los trastornos asociados al complemento incluyen cualquier trastorno médico en un ser humano, cuyo tratamiento se beneficiaría directa o indirectamente de la inhibición del sistema del complemento. Los trastornos se caracterizan generalmente por una regulación inapropiada del sistema del complemento tal como: (i) activación inapropiada del sistema del complemento o (ii) duración inapropiada de un sistema del complemento activado en un sujeto. Los trastornos asociados al complemento incluyen, sin limitación, trastornos inflamatorios y autoinmunes. Un trastorno asociado al complemento puede ser, por ejemplo, RA; síndrome de anticuerpos antifosfolípidos (APS); nefritis lúpica; lesión por isquemia-reperfusión; aHUS; síndrome urémico hemolítico (tHUS) típico (también conocido como diarreico o infeccioso); DDD; neuromielitis óptica (NMO); neuropatía motora multifocal (MMN); EM; degeneración macular (por ejemplo, AMD); síndrome HELLP; TTP; pérdida fetal espontánea; vasculitis pauciinmune; epidermólisis ampollosa; pérdida fetal recurrente; y lesión cerebral traumática. Los: trastornos asociados al complemento incluyen un trastorno vascular asociado al complemento, tal como un trastorno cardiovascular, miocarditis, un trastorno cerebrovascular, un trastorno vascular periférico (por ejemplo, musculoesquelético), un trastorno renovascular, un trastorno vascular mesentérico/entérico, vasculitis, nefritis púrpura de Henoch-Schonlein, vasculitis asociada con lupus eritematoso sistémico, vasculitis asociada con artritis reumatoide, vasculitis por complejos inmunes, enfermedad de Takayasu, miocardiopatía dilatada, angiopatía diabética, enfermedad de Kawasaki (arteritis), embolia gaseosa venosa (VGE), y reestenosis después de la colocación de endoprótesis, aterectomía rotacional, y angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA). Otros trastornos asociados al complemento incluyen, sin limitación, miastenia grave (MG), enfermedad por crioaglutinina (CAD), dermatomiositis, hemoglobinuria paroxística por frío (PCH), enfermedad de Graves, aterosclerosis, enfermedad de Alzheimer, respuesta inflamatoria sistémica, septicemia, choque séptico, lesión medular espinal, glomerulonefritis, tiroiditis de Hashimoto, diabetes tipo I, psoriasis, pénfigo, anemia hemolítica autoinmune (AIHA), púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), síndrome de Goodpasture, enfermedad de Degos, y APS catastrófico (CAPS).
La descripción presenta un método para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento en un ser humano. El método incluye administrar a un ser humano que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende un inhibidor del complemento humano (por ejemplo, un inhibidor del componente C5 del complemento humano).
La descripción presenta un método para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento en un ser humano, método el cual comprende administrar a un ser humano que lo necesite una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del complemento humano (por ejemplo, un inhibidor del componente C5 del complemento humano).
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, que no entran dentro del objeto reivindicado, el inhibidor puede inhibir la expresión de una proteína del componente C5 del complemento humano. El inhibidor puede inhibir la expresión proteica de una proteína del componente C5 del complemento humano, o inhibir la expresión de un ARNm que codifica la proteína. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el inhibidor puede inhibir la escisión del componente C5 del complemento humano en los fragmentos C5a y C5b.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el inhibidor se une e inhibe uno o ambos de C5a y C5b. El inhibidor puede ser, por ejemplo, un anticuerpo que se une a C5a o C5b. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo que se une a C5a, pero no se une a C5 de longitud completa. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo que se une a C5b, pero no se une a C5 de longitud completa. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo que se une a una proteína C5a humana o un fragmento de la misma que tiene una secuencia de aminoácidos que contiene, o consiste en, al menos cuatro (por ejemplo, al menos cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 17 o más) aminoácidos consecutivos representados en una cualquiera de SEQ ID NOs: 12-25. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo que se une a la proteína C5a humana que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO:12. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo que se une una proteína C5b humana o fragmento de la misma que tiene una secuencia de aminoácidos que contiene, o consiste en, al menos cuatro (por ejemplo, al menos cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, o 17 o más) aminoácidos consecutivos representados en una cualquiera de SEQ ID NOs: 4 o 26. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo que se une a la proteína C5b humana que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 4 o 26.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el inhibidor se puede seleccionar del grupo que consiste en un polipéptido, un análogo de polipéptido, un ácido nucleico, un análogo de ácido nucleico, y una molécula pequeña. El polipéptido puede ser, o consistir en, un anticuerpo, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a una proteína del componente C5 del complemento humano, tal como cualquiera de los descritos aquí. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede unirse a la cadena alfa de la proteína del componente C5 del complemento. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede unirse a la cadena beta de la proteína del componente C5 del complemento. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede unirse a la cadena alfa del componente C5 del complemento humano, y el anticuerpo puede (i) inhibir la activación del complemento en un fluido corporal humano, (ii) inhibir la unión del componente C5 del complemento humano purificado al componente C3b del complemento humano o al componente C4b del complemento humano, y/o (iii) no se une a C5a libre del producto de activación del complemento humano (o una combinación de cualquiera de las propiedades anteriores). El anticuerpo puede unirse a la proteína del componente C5 del complemento humano que tiene, o consiste en, la secuencia de aminoácidos representada en una cualquiera de SEQ ID NOs: 1-11. El anticuerpo puede unirse a un oligopéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos correspondiente a la posición de aminoácido 8 a la posición de aminoácido 12 de SEQ ID NO:5. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo monocatenario, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo completamente humano, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo recombinante, un diacuerpo, un anticuerpo quimerizado o quimérico, un anticuerpo humano desinmunizado, un anticuerpo completamente humano, un anticuerpo monocatenario, un fragmento Fv, un fragmento Fd, un fragmento Fab, un fragmento Fab', o un fragmento F(ab')2. En algunas realizaciones, el anticuerpo puede ser eculizumab o pexelizumab.
En la presente invención, el anticuerpo es eculizumab.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar por vía intravenosa al ser humano. Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el trastorno asociado al complemento es un trastorno asociado a la ruta alternativa del complemento. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el trastorno asociado al complemento es un trastorno asociado a la ruta clásica del complemento. En algunas realizaciones, el trastorno asociado al complemento se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide, lesión por isquemia-reperfusión, síndrome urémico hemolítico atípico, púrpura trombocitopénica trombótica, enfermedad por depósitos densos, degeneración macular relacionada con la edad, pérdida fetal espontánea, vasculitis pauciinmune, epidermólisis ampollosa, pérdida fetal recurrente, esclerosis múltiple, HELLP, preeclampsia, lesión cerebral traumática, enfermedad de Alzheimer, miastenia grave, enfermedad de las crioaglutininas, dermatomiositis, enfermedad de Graves, tiroiditis de Hashimoto, diabetes tipo I, psoriasis, pénfigo, anemia hemolítica autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, síndrome de Goodpasture, síndrome antifosfolípido, síndrome antifosfolípido catastrófico, neuromielitis óptica (NMO), neuropatía motora multifocal (MMN), enfermedad de Degos, y cualquier otro trastorno asociado al complemento descrito aquí.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además la etapa de identificar que el ser humano tiene, se sospecha que tiene, o está en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí también puede incluir, después de la administración, controlar al ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas del trastorno asociado al complemento.
En la presente invención, el trastorno asociado al complemento es el síndrome urémico atípico (aHUS). El aHUS puede ser de forma genética, adquirida, o idiopática. En algunas realizaciones, el aHUS puede ser aHUS asociado al factor H del complemento (CFH) (por ejemplo, debido a mutaciones en CFH, o la presencia de anticuerpos en el sujeto que se unen a CFH), aHUS asociado a la proteína del cofactor de membrana (MCP), aHUS asociado al factor I del complemento (CFI), aHUS asociado a la proteína de unión a C4b (C4BP), un trastorno asociado al factor de von Willibrand (vWF), aHUS asociado al factor B del complemento (CFB), o un trastorno de la ruta alternativa que da como resultado niveles bajos de C3 como resultado de un mayor consumo de C3.
En algunas realizaciones no según la invención reivindicada, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además la identificación del sujeto como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar aHUS.
En algunas realizaciones no según la invención reivindicada, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el sujeto para detectar una mejora en uno o más síntomas de aHUS.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar al sujeto antes, durante o después de una terapia con plasma (por ejemplo, intercambio de plasma o infusión de plasma). En algunas realizaciones, la administración del inhibidor de C5 al sujeto puede aliviar la necesidad de terapia con plasma por parte de un paciente. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la administración (por ejemplo, administración crónica) del inhibidor de C5 al sujeto puede aliviar o reducir sustancialmente la necesidad de terapia con plasma por parte de un paciente durante al menos 2 meses (por ejemplo, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, o 12 meses, o 1,2, 3, 4, 5, o 6 años o más). En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al sujeto de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar el HUS típico o el aHUS. El uno o más agentes activos adicionales pueden seleccionarse, por ejemplo, del grupo que consiste en antihipertensivos, agentes antiplaquetarios, prostaciclina, agentes fibrinolíticos, y antioxidantes.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, el ser humano es un infante. El infante puede tener, por ejemplo, 0,5 (por ejemplo, 1, 1,5, 2 2.5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, o 9,5) años. El infante puede tener menos
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de 10 (por ejemplo, 9,5, 9 8.5, 8, 7,5, 7, 6,5, 6, 5,5, 5, 4,5, 4, 3,5, 3, 2,5, 2, 1,5, 1, o 1) años.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es HUS típico, el HUS típico puede estar asociado con una infección por E. coli en o sobre el ser humano. La infección por E. coli puede ser, por ejemplo, una infección por E. coli O157 (por ejemplo, O157:H7), O26, O103, O111, u O145. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el síndrome urémico hemolítico típico puede estar asociado con una infección por Shigella dysenteriae en o sobre el ser humano. La infección por Shigella dysenteriae puede ser una infección por Shigella dysenteriae tipo 1.
Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además la identificación del ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar el síndrome urémico hemolítico típico.
Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas del síndrome urémico hemolítico típico.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es CAPS, el CAPS puede estar asociado con una afección precipitante. Las afecciones precipitantes pueden incluir, por ejemplo, un cáncer, trasplante, una infección, cirugía, síndrome antifosfolípido primario, o un trastorno autoinmune tal como artritis reumatoide o lupus eritematoso sistémico. Por consiguiente, en algunas realizaciones, el CAPS puede asociarse con un cáncer tal como, pero no limitado a, cáncer gástrico, cáncer de ovario, linfoma, leucemia, cáncer de endometrio, adenocarcinoma, cáncer de pulmón, o cualquier otro cáncer conocido en la técnica por precipitar o estar asociado con CAPS. En algunas realizaciones, el CAPS puede ser idiopático.
Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir también la identificación del ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar CAPS. Cualquiera de los métodos descritos aquí
puede incluir, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas de CAPS.
La composición se puede administrar al ser humano antes, durante o después de un intercambio de plasma, plasmaféresis, IVIG, o cualquier otra terapia adicional para tratar CAPS.
Cualquiera de los métodos descritos aquí también puede incluir la administración al ser humano de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar CAPS. El uno o más agentes activos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste en antihipertensivos, agentes anticitocinas, esteroides, anticoagulantes, o agentes fibrinolíticos.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es TTP, la TTP se puede heredar. Por ejemplo, un ser humano puede portar una o más (por ejemplo, dos, tres, cuatro, o cinco o más) mutaciones en el gen ADAMTS 13. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la TTP puede ser una forma adquirida. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el ser humano puede producir anticuerpos que se unen, e inhiben, la metaloproteinasa ADAMTS 13. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la TTP puede ser una forma recurrente. Por ejemplo, el humano puede ser alguien que ha tenido TTP. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la TTP (o la TTP recurrente) está asociada con una afección precipitante tal como, pero sin limitarse a, un cáncer, embarazo, infección bacteriana o viral, cirugía, o cualquier otra afección asociada a la TTP conocida en la técnica o descrita aquí. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la TTP (o la TTP recurrente) está asociada con el uso de un agente terapéutico asociado con la TTP. Por ejemplo, la TTP puede estar asociada con el uso de, por ejemplo, un inhibidor de la agregación plaquetaria, tal como ticlopidina o clopidogrel, o un inmunosupresor (por ejemplo, ciclosporina, mitomicina C, FK506, o interferón-alfa).
Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir identificar el ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas de TTP.
En cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar al ser humano antes, durante o después de un intercambio de plasma, una infusión de plasma, una plasmaféresis, o una esplenectomía. Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al ser humano de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar o prevenir TTP. El uno o más agentes activos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste en antihipertensivos, esteroides, anticoagulantes, o agentes fibrinolíticos.
En cualquiera de los métodos descritos aquí en los que el trastorno asociado al complemento es DDD, la DDD puede ser una forma hereditaria del trastorno. Por ejemplo, un ser humano puede tener una mutación asociada con DDD en el gen del factor H del complemento, el gen 5 relacionado con el factor H del complemento, o el gen del componente C3 del complemento.
Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la identificación del ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar DDD. Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas de DDD.
En cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar al ser humano antes, durante o después de un intercambio de plasma, reemplazo de plasma, plasmaféresis, o terapia con gammaglobulina intravenosa. Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al ser humano de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar DDD. El uno o más agentes activos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste en antihipertensivos, corticosteroides, anticoagulantes, o agentes fibrinolíticos.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es MG, el ser humano puede ser aquel que exprese un autoanticuerpo asociado a MG, tal como, pero sin limitarse a, un anticuerpo anti-AChR asociado a MG, un anticuerpo anti-MuSK asociado a MG, o un anticuerpo antiproteína estriacional asociado a MG. La MG puede ser MG ocular y/o una forma de MG inducida por fármacos, tal como MG inducida por D-penicilamina. En algunas realizaciones, el ser humano puede estar en, o estar en riesgo de desarrollar, una crisis miasténica. En algunas realizaciones, el ser humano puede ser un neonato que tiene MG neonatal, en el que una madre con MG transmite anticuerpos asociados con MG a través de la placenta a un lactante.
Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además la identificación del ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar MG. Cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas de MG. La composición se puede administrar al ser humano antes, durante o después de un intercambio de plasma, plasmaféresis, IVIG, o terapia de inmunoadsorción.
Las siguientes realizaciones en estas páginas no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al ser humano de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar o prevenir MG. El uno o más agentes activos adicionales pueden ser, por ejemplo, inhibidores de la acetilcolinesterasa, agentes inmunosupresores, o cualquier otro agente activo adicional útil para tratar MG que se conoce en la técnica o se describe aquí.
En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es hemoglobinuria paroxística por frío (PCH), la PCH puede estar asociada con una infección (por ejemplo, una infección viral o bacteriana) o una neoplasia. Por ejemplo, el PCH puede estar asociada con una infección por Treponema palladium, una infección por el virus de la gripe, una infección por el virus de la varicela-zoster, una infección por citomegalovirus (CMV), una infección por el virus de Epstein-Barr (EBV), una infección por adenovirus, una infección por parvovirus B19, una infección por Coxsackie A9, una infección por Haemophilus influenza, una infección por Mycoplasma pneumoniae, o una infección por Klebsiella pneumoniae. En algunas realizaciones, la PCH puede estar asociada con el linfoma no de Hodgkin. En algunas realizaciones, la PCH puede estar asociada con una inmunización (por ejemplo, una inmunización contra el sarampión). En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la PCH puede ser aguda o recurrente.
En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la identificación del ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar PCH. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas de PCH.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar al ser humano antes, durante o después de un intercambio de plasma, una infusión de plasma, una terapia con IVIG, una transfusión de glóbulos rojos, o una plasmaféresis. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al ser humano de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar o prevenir PCH. El uno o más agentes activos adicionales se pueden seleccionar del grupo que consiste en antihipertensivos, esteroides, inmunosupresores (por ejemplo, rituximab), antibióticos, agentes antivirales, y agentes quimioterapéuticos.
En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es CAD, la CAD puede estar asociada con una infección (por ejemplo, una infección viral o bacteriana) o una neoplasia. Por ejemplo, la CAD puede estar asociada con una infección por VIH, una infección por citomegalovirus (CMV), una infección por el virus de Epstein-Barr (EBV), o una infección por Mycoplasma pneumoniae. La CAD puede estar asociada con el linfoma no de Hodgkin. En cualquiera de los métodos descritos aquí, la CAD puede ser primaria o secundaria.
Las siguientes realizaciones en estas páginas no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la identificación del ser humano como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar CAD. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el ser humano para detectar una mejora en uno o más síntomas de CAD.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar al ser humano antes, durante o después de un intercambio de plasma, reemplazo de plasma, una terapia con IVIG, o una plasmaféresis. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al ser humano de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar o prevenir CAD. El uno o más agentes activos adicionales se pueden seleccionar del grupo que consiste en antihipertensivos, esteroides, inmunosupresores (por ejemplo, rituximab), antibióticos, agentes antivirales, y agentes quimioterapéuticos.
En realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí en las que el trastorno asociado al complemento es síndrome HELLP, la mujer afectada puede estar embarazada o puede ser una mujer que ha estado embarazada recientemente. Por ejemplo, la mujer puede ser aquella que ha dado a luz hace menos de 14 días (por ejemplo, menos de 13 días, 12 días, 11 días, 10 días, nueve días, ocho días, siete días, seis días, cinco días, cuatro días, tres días, dos días, 24 horas, 18 horas, 12 horas, 6 horas, o menos de 4, 3, 2 o 1 horas) antes de la administración. En algunas realizaciones, la mujer ha estado embarazada más de una vez. En algunas realizaciones, la mujer puede ser aquella que ha desarrollado preeclampsia o síndrome HELLP durante al menos un embarazo anterior.
En realizaciones en las que el trastorno asociado al complemento es el síndrome HELLP, los métodos descritos aquí pueden incluir además la etapa de identificar a la mujer como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar el síndrome HELLP. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además la etapa de, después de la administración, monitorizar a la mujer para detectar una mejora en uno o más síntomas del síndrome HELLP.
Las siguientes realizaciones en estas páginas no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, la composición se puede administrar a la mujer antes, durante o después de un intercambio de plasma, plasmaféresis, transfusión de plaquetas, o transfusión de glóbulos rojos.
En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la etapa de administrar a la mujer al menos uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar o prevenir el síndrome HELLP en una mujer. El uno o más agentes activos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste en un antihipertensivo, un esteroide, un agente anticonvulsivo, y un agente antitrombótico.
La descripción presenta un artículo de fabricación, que incluye (o consiste en) un recipiente con una etiqueta y una composición que contiene un inhibidor del complemento humano (por ejemplo, un inhibidor del componente C5 del complemento humano). La etiqueta indica que la composición se va a administrar a un ser humano que tenga, se sospeche que tenga o que esté en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento, tal como cualquiera de los trastornos asociados al complemento descritos aquí. El inhibidor puede ser, por ejemplo, un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que se une al componente C5 del complemento o a un fragmento del mismo, tal como C5a o C5b. En algunas realizaciones, el artículo de fabricación contiene uno o más agentes activos adicionales que son útiles para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento (por ejemplo, mejorar uno o más síntomas del trastorno).
La descripción también se basa, en parte, en el descubrimiento de los inventores de que, tras el tratamiento con el inhibidor de C5 eculizumab, un paciente con el trastorno asociado al complemento aHUS y microangiopatía trombótica (MAT) en el riñón experimentó una resolución completa de la MAT en el riñón, sin desarrollo posterior de MAT. Por consiguiente, la descripción presenta un método para tratar la microangiopatía trombótica (MAT), o reducir la aparición o la gravedad de la MAT, en un paciente que tiene, se sospecha que tiene o que está en riesgo de desarrollar MAT. El método incluye administrar al paciente (si lo necesita) un inhibidor del complemento, tal como un inhibidor del componente C5 del complemento, para tratar de ese modo la MAT en el paciente. El inhibidor puede ser, por ejemplo, cualquiera de los inhibidores de C5 descritos aquí, por ejemplo eculizumab. La administración del inhibidor de C5 puede reducir la aparición o la gravedad de la MAT en el cerebro y/o el riñón del paciente. En algunas realizaciones, la administración del inhibidor de C5 trata o promueve la resolución de la MAT preexistente en el paciente, por ejemplo una MAT preexistente en el cerebro o el riñón del paciente.
Los inventores también han descubierto que la administración de eculizumab a pacientes con, por ejemplo, aHUS o CAPS da como resultado una mejora inesperadamente rápida de uno o más síntomas de las enfermedades. Por ejemplo, los inventores han descubierto que la hipertensión, la producción reducida de orina, y los niveles bajos de plaquetas mejoran en pacientes con aHUS tratados con eculizumab en menos de un mes (por ejemplo, menos de dos semanas) desde el inicio del tratamiento crónico con eculizumab. En otro ejemplo, los inventores descubrieron que la proteinuria en un paciente con glomerulonefritis membranoproliferativa mejoró dentro del mes siguiente al inicio del tratamiento crónico con eculizumab. Por consiguiente, la descripción presenta un método para mejorar uno o más síntomas asociados con un trastorno asociado al complemento, tal como cualquiera de los trastornos asociados al complemento descritos aquí, con la excepción de la hemoglobinuria paroxística nocturna. El método incluye administrar a un paciente que lo necesite un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor del componente C5 del complemento) en una cantidad eficaz para mejorar uno o más síntomas asociados con un trastorno asociado al complemento, en el que los síntomas mejoran en menos de dos meses (por ejemplo, menos de 7, 6, 5, 4, 3, o 2 semanas; menos de 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o 1 día(s); o menos de 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso menos de 5 horas) después de administrar el inhibidor. Los síntomas de los trastornos asociados al complemento son bien conocidos en la técnica de la medicina, y se describen aquí. El inhibidor del complemento puede ser cualquiera de los inhibidores de C5 descritos aquí, por ejemplo eculizumab. Los síntomas ejemplares que pueden mejorarse con el inhibidor de C5 en menos de 2 meses incluyen, por ejemplo, proteinuria, hipertensión, recuentos de plaquetas reducidos, y producción reducida de orina del riñón. En algunas realizaciones, al menos uno de los síntomas mejora dentro de 40 (por ejemplo, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31,30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21,20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o incluso 1) % de su nivel o valor normal. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la administración del inhibidor de C5 eculizumab a un paciente hipertenso con aHUS puede mejorar la hipertensión del paciente hasta un 40% de la tensión arterial normal (diastólica y/o sistólica) del paciente. En algunas realizaciones, la administración del inhibidor de C5 puede mejorar completamente uno o más síntomas del trastorno asociado al complemento en el sujeto. En algunas realizaciones, el paciente se ha sometido a un trasplante de riñón, por ejemplo un paciente con aHUS que se ha sometido recientemente a un trasplante de riñón. El trastorno asociado al complemento puede ser cualquiera de los descritos aquí, por ejemplo glomerulonefritis membranoproliferativa, enfermedad de Degos, síndrome urémico hemolítico atípico, rechazo mediado por anticuerpos, síndrome HELLP, y síndrome antifosfolípido catastrófico.
Muchos de los trastornos asociados al complemento descritos aquí se caracterizan por la presentación de síntomas episódicos o esporádicos, e históricamente solo se han tratado cuando se manifiestan los síntomas. Sin embargo, los inventores han descubierto que un trastorno subyacente asociado al complemento permanece presente incluso cuando los pacientes están asintomáticos. Los inventores también han descubierto que las recurrencias o recaídas de los trastornos pueden prevenirse, o al menos minimizarse, mediante un tratamiento crónico usando un inhibidor mediado por el complemento. Tal administración crónica del inhibidor es útil para prevenir o minimizar el daño, a menudo irreversible (por ejemplo, pérdida de un órgano como un riñón), infligido a pacientes con trastornos graves relacionados con el complemento (por ejemplo, aHUS o CAPS) cuando ocurren las recaídas. En consecuencia, es de suma importancia administrar al paciente un inhibidor del complemento en una cantidad y con una frecuencia suficientes para mantener continuamente una concentración del inhibidor que sea lo suficientemente alta para prevenir o inhibir sustancialmente la actividad sistémica del complemento en los pacientes.
De este modo, la descripción no abarcada por el texto de las reivindicaciones presenta un método para tratar un trastorno asociado al complemento, método el cual incluye la administración crónica a un paciente que lo necesita de un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5, tal como un anticuerpo anti-C5) en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener la inhibición sistémica del complemento en los pacientes, con la condición de que el trastorno asociado al complemento no sea hemoglobinuria paroxística nocturna.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
Como se usa aquí, "administrado crónicamente", "tratamiento crónico", "tratar crónicamente", o variaciones gramaticales similares de los mismos, se refieren a un régimen de tratamiento que se emplea para mantener una cierta concentración umbral de un agente terapéutico en la sangre de un paciente para suprimir completa o sustancialmente la actividad sistémica del complemento en el paciente durante un período de tiempo prolongado. En consecuencia, un paciente tratado crónicamente con un inhibidor del complemento puede ser tratado por un período de tiempo mayor o igual a 2 semanas (por ejemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52 semanas; 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses, o 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, o 12 años o durante el resto de la vida del paciente) con el inhibidor en una cantidad y con una frecuencia de dosificación que sean suficientes para mantener una concentración del inhibidor en la sangre del paciente que inhiba o inhiba sustancialmente la actividad sistémica del complemento en el paciente. En algunas realizaciones, el inhibidor del complemento se puede administrar de forma crónica a un paciente que lo necesite en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener la actividad hemolítica sérica en menos de o igual a 20 (por ejemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso por debajo del 5) %, y para mantener la actividad hemolítica sérica en menos de o igual al 20%. Véase, por ejemplo, Hill et al. (2005) Blood 106(7):2559. En algunas realizaciones, el inhibidor del complemento se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener los niveles de lactato deshidrogenasa (LDH) en suero dentro de al menos 20 (por ejemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso por debajo del 5) % del intervalo normal para LDH. Véase Hill et al. (2005), más arriba. En algunas realizaciones, el inhibidor del complemento se administra al paciente en una cantidad y con una frecuencia que son eficaces para mantener un nivel de LDH en suero menor que 550 (por ejemplo, menor que 540, 530, 520, 510, 500, 490,480,470,460,450,430,420,410,400,390,380,370,360,350,340,330,320, 310, 300, 290, 280, o menor que 270) IU/l. Para mantener la inhibición sistémica del complemento en un paciente, el inhibidor del complemento se puede administrar de forma crónica al paciente, por ejemplo una vez a la semana, una vez cada dos semanas, dos veces a la semana, una vez al día, una vez al mes, o una vez cada tres semanas. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5) se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia de administración eficaces para mantener una concentración de al menos 0,7 (por ejemplo, al menos 0,8, 0,9, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o 10 o más) molécula o moléculas de inhibidor divalente de C5 (por ejemplo, un anticuerpo completo anti-C5, tal como eculizumab) por cada molécula de C5 en la sangre del paciente. "Divalente" o "bivalente", con respecto a un inhibidor de C5, se refiere a un inhibidor de C5 que contiene al menos dos sitios de unión para una molécula de C5. Cuando el inhibidor de C5 es monovalente (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 monocatenario, o un Fab que se une a C5), el inhibidor puede administrarse al paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener una concentración de al menos 1,5 (por ejemplo, al menos 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, o 5 o más) de los inhibidores de C5 monovalentes por cada molécula de C5 en la sangre. En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 monovalente se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener una relación de inhibidor de C5 monovalente a C5 de al menos 2:1 (por ejemplo, al menos 3:1, al menos 4:1, al menos 5:1, o al menos 6:1 o más). En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, un anticuerpo anti-C5 completo (bivalente) se administra al paciente en una cantidad y con una frecuencia que son eficaces para mantener una concentración de al menos 40 (por ejemplo, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51,52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, o 120 o más) pg del anticuerpo por mililitro de sangre del paciente. En realizaciones preferidas, un anticuerpo anti-C5 completo (por ejemplo, eculizumab) se administra en una cantidad y con una frecuencia para mantener el anticuerpo en una concentración de al menos 50 pg por mililitro de sangre del paciente. En realizaciones preferidas, un anticuerpo anti-C5 completo (por ejemplo, eculizumab) se administra en una cantidad y con una frecuencia para mantener el anticuerpo en una concentración de al menos 100 pg por mililitro de sangre del paciente.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, un anticuerpo anti-C5 monovalente (por ejemplo, un anticuerpo monocatenario, o un fragmento Fab) se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener una concentración de al menos 80 (por ejemplo, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, o 170 o más) gg del anticuerpo por mililitro de sangre del paciente. Se describen aquí estrategias ejemplares de dosificación crónica.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
La descripción presenta un método para tratar un trastorno asociado al complemento, método el cual incluye la administración crónica a un paciente que lo necesite de un anticuerpo anti-C5 en una cantidad y con una frecuencia que son eficaces para mantener la inhibición sistémica del complemento en los pacientes. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se puede administrar de forma crónica a un paciente que lo necesite en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener la actividad hemolítica sérica en menos de o igual a 20 (por ejemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso por debajo del 5) %, y para mantener la actividad hemolítica sérica en menos de o igual al 20%. Véase, por ejemplo, Hill et al. (2005) Blood 106(7):2559. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener los niveles de lactato deshidrogenasa (LDH) en suero dentro de: al menos 20 (por ejemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso por debajo del 5) % del intervalo normal para LDH; o menor o igual a 550 (por ejemplo, menor o igual a 550, 540, 530, 520, 510, 500, 490, 480, 470, 460, 450, 430, 420, 410, 400, 390, 380, 370, 360, 350, 340, 330, 320, 310, 300, 290, 280, o menor que 270) Ul/l. Véase, por ejemplo, Hill et al. (2005), más arriba. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se administra al paciente en una cantidad y con una frecuencia para mantener una concentración de al menos 0,7 (por ejemplo, al menos 0,8, 0,9, 1, 2, 3, o 4 o más) molécula o moléculas de anticuerpo anti-C5 completo (bivalente) por cada molécula de C5 en la sangre del paciente. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener una relación de anticuerpo anti-C5 completo (bivalente) a C5 en la sangre de al menos 1:1 (por ejemplo, al menos 3:2, 2:1, 5:2, o 3:1). Cuando el anticuerpo anti-C5 es monovalente, el anticuerpo anti-C5 se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener una concentración de al menos 2 de los anticuerpos monovalentes anti-C5 por cada molécula de C5 en la sangre. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 monovalente se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener una relación de anticuerpo anti-C5 monovalente a C5 de al menos 2:1 (por ejemplo, al menos 3:1, al menos 4:1, al menos 5:1, o al menos 6:1 o más). El anticuerpo anti-C5 puede ser, por ejemplo, eculizumab. El paciente puede tener, sospechar que tiene o estar en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento, con la condición de que el trastorno no sea hemoglobinuria paroxística nocturna. Por ejemplo, el trastorno asociado al complemento puede ser uno seleccionado del grupo que consiste en glomerulonefritis membranoproliferativa, enfermedad de Degos, síndrome urémico hemolítico atípico, rechazo mediado por anticuerpos, síndrome HELLP, y síndrome antifosfolípido catastrófico.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, un anticuerpo anti-C5 se puede administrar de forma crónica a un paciente en función de su peso. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, un anticuerpo anti-C5 (por ejemplo, eculizumab) se puede administrar de forma crónica a un paciente en función de su peso y según el programa de dosificación expuesto en la Tabla 1.
Tabla 1. Programas ejemplares de dosificación crónica para un anticuerpo anti-C5 completo (por ejemplo, eculizumab por peso del paciente
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Se puede administrar un anticuerpo anti-C5 (por ejemplo, eculizumab) a un paciente en función de su peso según los programas de dosificación establecidos en la Tabla 2.
Tabla 2. Programas ejemplares de dosificación crónica para un anticuerpo anti-C5 completo (por ejemplo, eculizumab por peso del paciente
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Se entiende que los programas de dosificación ejemplares en las Tablas 1 o 2 se pueden ajustar (en frecuencia, duración y/o en la cantidad total de anticuerpo administrado) por un médico, según sea necesario para mantener una inhibición completa o sustancialmente completa de la actividad sistémica del complemento en el paciente durante todo el régimen de dosificación.
No abarcada por la redacción de las reivindicaciones, la descripción presenta un método para tratar un trastorno asociado al complemento, incluyendo el método la administración crónica a un paciente que lo necesita de un anticuerpo anti-C5 en una cantidad y con una frecuencia que son eficaces para mantener una concentración de al menos 40 (por ejemplo, al menos 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67,68,69,70,75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, o 120 o más) pg del anticuerpo por mililitro de sangre del paciente, en el que el paciente tiene, se sospecha que tiene o está en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento, con la condición de que el trastorno no sea hemoglobinuria paroxística nocturna.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se administra al paciente al menos una vez cada dos semanas. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se administra al paciente una vez por semana. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se administra al paciente durante al menos 9 semanas (por ejemplo, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52 semanas; 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses; o 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, o 12 años o durante el resto de la vida del paciente) con el siguiente programa de dosificación: al menos 800 (por ejemplo, al menos 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5, una vez por semana durante cuatro semanas consecutivas; al menos 800 (por ejemplo, al menos 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 una vez durante la quinta semana; y al menos 800 (por ejemplo, al menos 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 cada dos semanas a partir de entonces durante el resto del programa de dosificación. En realizaciones preferidas, se administran al paciente al menos 900 mg del anticuerpo anti-C5, una vez por semana durante cuatro semanas; se administran al paciente al menos 1200 mg durante la quinta semana; y se administran al paciente al menos 1200 mg del anticuerpo anti-C5 cada dos semanas a partir de entonces durante el resto del programa de dosificación crónica.
No abarcada por la redacción de las reivindicaciones, la descripción presenta un método para trasplantar un órgano o tejido. El método incluye trasplantar un órgano o tejido a un paciente que lo necesite, en el que antes y de forma crónica después del trasplante se administra al paciente un inhibidor del complemento humano en una cantidad y con una frecuencia eficaces para inhibir sustancialmente la actividad sistémica del complemento en el paciente. El inhibidor del complemento puede ser, por ejemplo, un inhibidor de C5, tal como un anticuerpo anti-C5 (por ejemplo, eculizumab). Como se describe aquí, el inhibidor de C5 (por ejemplo, el anticuerpo anti-C5) se puede administrar en una cantidad y con una frecuencia para mantener una concentración de al menos 0,7 molécula o moléculas de inhibidor de C5 bivalente (o al menos 1,5 molécula o moléculas de inhibidor de C5 monovalente) por cada molécula de C5 en la sangre del paciente.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 (por ejemplo, el anticuerpo anti-C5) se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia para mantener una concentración de al menos 40 (por ejemplo, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53,54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67,68,69, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, o 120 o más) gg del inhibidor (por ejemplo, el anticuerpo anti-C5) en la sangre del paciente. En algunas realizaciones, al menos 800 (por ejemplo, al menos 810, 820, 830, 840, 850,860,870,880,890,900,910,920,930,940,950,960,970,980,990,1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 se administra al paciente menos de 24 (por ejemplo, menos de 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, o menos de 2) horas antes de trasplantar el órgano o tejido al paciente. En algunas realizaciones, los métodos también pueden incluir, antes del trasplante, poner en contacto (por ejemplo, empapar) el órgano o tejido con un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, tal como eculizumab) durante un período de tiempo y en condiciones que inhiban la activación del complemento en el órgano o tejido tras el trasplante. El órgano puede ser, por ejemplo, piel, riñón, corazón, pulmón, miembro (por ejemplo, dedo de la mano o del pie), ojo, población de células madre, médula ósea, tejido vascular, músculo, tejido nervioso, o hígado. El paciente puede tener, estar en riesgo de desarrollar o ser sospechoso de tener aHUS. En algunas realizaciones, al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800,810,820,830,840,850,860,870,880,890,900,910,920,930,940,950,960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 se administra al paciente menos de 24 (por ejemplo, menos de 23, 22, 21,20,19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4,3, o menos de 2) horas después del trasplante. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se administra de forma crónica al paciente después del trasplante. Por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 se puede administrar de forma crónica al paciente durante al menos 9 semanas (por ejemplo, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52 semanas; 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses; o 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, o 12 años o durante el resto de la vida del paciente) con el siguiente programa de dosificación: al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790,800,810,820,830,840,850,860,870,880,890,900,910,920,930,940,950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 menos de 24 horas después del trasplante del órgano o tejido; al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730,740,750,760,770,780,790,800,810,820,830,840,850,860,870,880,890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 una vez por semana durante cuatro semanas después de la dosis inicial posterior al trasplante; al menos 700 (por ejemplo, a menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820,830,840,850,860,870,880,890,900,910,920,930,940,950,960,970,980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 una vez durante la quinta semana; y al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810,820,830,840,850,860,870,880,890,900,910,920,930,940,950,960,970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 cada dos semanas a partir de entonces durante el resto del programa de dosificación. Un anticuerpo anti-C5 se puede administrar a un paciente que se somete a una operación de trasplante según el siguiente programa de dosificación: se administran al paciente al menos 1200 mg del anticuerpo anti-C5 menos de 24 horas antes del trasplante; se administran al paciente al menos 900 mg del anticuerpo anti-C5 dentro de las 24 horas posteriores al trasplante; se administran al paciente al menos 1200 mg del anticuerpo anti-C5 una vez a la semana durante cuatro semanas después de la primera administración postoperatoria del anticuerpo anti-C5; se administran al paciente 1200 mg en la quinta semana siguiente a la primera administración postoperatoria del anticuerpo anti-C5; y se administran al paciente al menos 1200 mg del anticuerpo anti-C5 cada dos semanas a partir de entonces durante el resto del régimen de tratamiento crónico.
Los métodos pueden incluir además la administración al paciente de uno o más agentes inmunosupresores, tales como, pero sin limitarse a, rapamicina, ciclosporina A, un agente anti-IL-2, OKT3, y tacrolimus. El uno o más agentes inmunosupresores pueden administrarse antes, durante, o después del trasplante. El uno o más agentes inmunosupresores también se pueden administrar antes, simultáneamente con, o después de la administración del inhibidor de C5.
No abarcada por el texto de la reivindicación, la descripción también presenta un método para reducir la lesión mediada por el complemento en un órgano o tejido cuando se trasplanta a un paciente. El método incluye, antes de trasplantar un órgano o tejido a un paciente que lo necesite, poner en contacto el órgano o tejido con una disolución farmacéutica que comprende un inhibidor de C5 durante un período de tiempo y en condiciones que reduzcan la lesión del órgano o tejido mediada por el complemento cuando se trasplanta al paciente. El inhibidor de C5 también se puede administrar al paciente antes, durante, y/o después del trasplante del órgano o tejido. La disolución también pueden contener uno o más agentes inmunosupresores, tales como, pero sin limitarse a, rapamicina, ciclosporina A, un agente anti-IL-2, OKT3, y tacrolimus.
Los inventores también han descubierto que en pacientes que han tenido trastornos graves asociados al complemento, tales como CAPS y APS, y han entrado en remisión, todavía queda en los pacientes un bajo nivel de actividad del complemento que predispone a los pacientes a la recaída o recurrencia. Como se señaló anteriormente, la recurrencia de los síntomas en pacientes que han tenido estos trastornos graves puede presentar lesiones inmediatas, y a veces irreversibles, en órganos importantes tal como el riñón. Por lo tanto, aunque la descripción no está limitada de ninguna manera por una teoría o mecanismo de acción particular, los inventores afirman que para prevenir una recaída o recurrencia repentina, un paciente con un trastorno asociado al complemento (por ejemplo, aHUS y CAPS) debe ser tratado crónicamente con un inhibidor de C5 incluso después de que uno o más síntomas del trastorno hayan mejorado, y/o incluso después de que el paciente entre en remisión clínica. Por lo tanto, la descripción presenta un método para tratar un trastorno asociado al complemento, con la condición de que el trastorno no sea hemoglobinuria paroxística nocturna, que está fuera de la materia objeto de la reivindicación. El método incluye la administración a un paciente afectado por un trastorno asociado al complemento de un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, tal como eculizumab) en una cantidad eficaz para tratar el trastorno asociado al complemento. El inhibidor de C5 se administra al paciente incluso después de que se hayan mejorado uno o más (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, o seis o más) síntomas del trastorno. El inhibidor de C5 se puede administrar al paciente incluso después de que uno o más síntomas hayan mejorado completamente. El inhibidor de C5 se puede administrar al paciente incluso después de que el paciente haya entrado en remisión clínica. El inhibidor de C5 se puede administrar, por ejemplo administrar de forma crónica, al paciente durante al menos 8 semanas (por ejemplo, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52 semanas; 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses; o 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, o 12 años o durante el resto de la vida del paciente) después de que uno o más síntomas hayan mejorado en el paciente y/o el paciente entre en remisión clínica. El trastorno asociado al complemento puede ser cualquiera de los descritos aquí, por ejemplo glomerulonefritis membranoproliferativa, enfermedad de Degos, síndrome urémico hemolítico atípico, rechazo mediado por anticuerpos, síndrome HELLP, y síndrome antifosfolípido catastrófico.
Si bien la descripción no está limitada de ninguna manera por una teoría o mecanismo de acción particular, en base a las observaciones del efecto de eculizumab en, por ejemplo, pacientes con aHUS, los inventores han concluido que la actividad biológica del componente C5a del complemento puede contribuir sustancialmente a la vasoconstricción e hipertensión asociada a aHUS. Por consiguiente, la inhibición de C5a usando un inhibidor de C5a es útil para tratar aHUS y/o mejorar la vasoconstricción y la hipertensión asociadas con aHUS. El método incluye administrar a un paciente que lo necesite un inhibidor del componente C5a del complemento en una cantidad eficaz para tratar el aHUS en el paciente. La vasoconstricción y la hipertensión asociadas con el aHUS pueden mejorar en menos de dos meses (por ejemplo, menos de 7, 6, 5, 4, 3, o 2 semanas; menos de 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o 1 día(s); o menos de 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso menos de 5 horas) después de administrar el inhibidor de C5a. El inhibidor de C5a es un anticuerpo (o un fragmento del mismo que se une al antígeno) que se une a una proteína C5a humana o un fragmento de la misma que tiene una secuencia de aminoácidos que contiene, o consiste en, al menos cuatro (por ejemplo, al menos cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, o 17 o más) aminoácidos consecutivos representados en cualquiera de SEQ ID NOs: 12-25. Se describe aquí un anticuerpo que se une a la proteína C5a humana que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO:12. El inhibidor de C5a no inhibe la escisión de C5 en los fragmentos C5a y C5b. El inhibidor de C5a tampoco inhibe C5b ni la formación del complejo de ataque a la membrana. Como se describe aquí, el inhibidor de C5a (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5a) puede inhibir la interacción entre C5a y un receptor de C5a (por ejemplo, C5aR o C5L2). El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo monocatenario, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo completamente humano, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo recombinante, un diacuerpo, un anticuerpo quimerizado o quimérico, un anticuerpo humano desinmunizado, un anticuerpo completamente humano, un anticuerpo monocatenario, un fragmento Fv, un fragmento Fd, un fragmento Fab, un fragmento Fab', o un fragmento F(ab')2.
En la presente invención, el trastorno asociado al complemento es el síndrome urémico atípico (aHUS). El aHUS puede ser de forma genética, adquirida, o idiopática. En algunas realizaciones, el aHUS puede ser aHUS asociado con el factor H del complemento (CFH) (por ejemplo aHUS asociado con mutaciones en el factor H, o autoanticuerpos que se unen a e inactivan el factor H), aHUS asociado con la proteína del cofactor de membrana (MCP), aHUS asociado con el factor I del complemento (CFI), aHUS asociado con la proteína de unión a C4b (C4BP), aHUS asociado con el factor B del complemento (CFB), un trastorno del vWF, o aHUS asociado con cualquier otra mutación en la ruta alternativa de activación del complemento que cause bajos niveles de C3 como resultado de un mayor consumo de C3.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir además la identificación del paciente como que tiene, se sospecha que tiene, o está en riesgo de desarrollar aHUS. En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir, después de la administración, monitorizar el paciente para detectar una mejora en uno o más síntomas de aHUS. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el inhibidor de C5a se puede administrar al paciente antes, durante o después de una terapia con plasma (por ejemplo, intercambio de plasma o infusión de plasma). En algunas realizaciones, la administración del inhibidor de C5a al paciente puede aliviar la necesidad de terapia con plasma por parte de un paciente. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la administración (por ejemplo, administración crónica) del inhibidor de C5a al paciente puede aliviar o reducir sustancialmente la necesidad de terapia con plasma por parte de un paciente durante al menos 2 meses (por ejemplo, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, o 12 meses, o 1, 2, 3, 4, 5, o 6 años o más). En algunas realizaciones, cualquiera de los métodos descritos aquí puede incluir la administración al paciente de uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar el HUS típico o el aHUS. El uno o más agentes activos adicionales pueden seleccionarse, por ejemplo, del grupo que consiste en antihipertensivos, agentes antiplaquetarios, prostaciclina, agentes fibrinolíticos, y antioxidantes.
El humano puede ser un infante. El infante puede tener, por ejemplo, 0,5 (por ejemplo, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5.5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, o 9,5) años. El infante puede tener menos de 10 (por ejemplo, 9,5, 9, 8,5, 8, 7,5, 7, 6,5, 6, 5.5, 5, 4,5, 4, 3,5, 3, 2,5, 2, 1,5, 1, o 1) años.
"Polipéptido", "péptido", y "proteína" se usan indistintamente, y significan cualquier cadena de aminoácidos unida a péptido, independientemente de la longitud o la modificación postraduccional. Las proteínas del componente C5 del complemento descritas aquí pueden contener o ser proteínas de tipo salvaje, o pueden ser variantes que no tienen más de 50 (por ejemplo, no más de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, o 50) sustituciones conservativas de aminoácidos. Las sustituciones conservativas incluyen típicamente sustituciones dentro de los siguientes grupos: glicina y alanina; valina, isoleucina y leucina; ácido aspártico y ácido glutámico; asparagina, glutamina, serina y treonina; lisina, histidina y arginina; y fenilalanina y tirosina.
Las proteínas del componente C5 del complemento humano descritas aquí también incluyen "fragmentos de péptidos antigénicos'' de las proteínas, que son más cortos que las proteínas C5 de longitud completa y/o inmaduras (pre-pro), pero retienen al menos 10% (por ejemplo, al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, al menos 99,5%, o 100% o más) de la capacidad de la proteína de longitud completa para inducir una respuesta antigénica en un mamífero (véase más abajo en "Métodos para producir un anticuerpo"). Los fragmentos de péptidos antigénicos de una proteína C5 incluyen variantes de deleción tanto terminal como interna de la proteína. Las variantes de deleción pueden carecer de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 segmentos de aminoácidos (de dos o más aminoácidos) o aminoácidos individuales no contiguos. Los fragmentos de péptidos antigénicos pueden tener al menos 6 (por ejemplo, al menos 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, o 600 o más) restos de aminoácidos de longitud (por ejemplo, al menos 6 restos de aminoácidos contiguos en cualquiera de SEQ ID NOS: 1-11). En algunas realizaciones, un fragmento de péptido antigénico de una proteína C5 humana tiene menos de 500 (por ejemplo, menos de 450, 400, 350, 325, 300, 275, 250, 225, 200, 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 95,90,85,80,75,70,65,60,55,50,49,48,47,46,45, 44, 43, 42, 41,40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31,30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21,20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7 ó 6) restos de aminoácidos de longitud (por ejemplo, menos de 500 restos de aminoácidos contiguos en cualquiera de SEQ ID NOS: 1-11). En algunas realizaciones, un fragmento de péptido antigénico de una proteína C5 humana inmadura de longitud completa (prepro-proteína C5) tiene al menos 6, pero menos de 500, restos de aminoácidos de longitud.
En algunas realizaciones, la proteína del componente C5 del complemento humano puede tener una secuencia de aminoácidos mayor o igual a 70 (por ejemplo, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82,83,84,85,86,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99, o 100) % idéntica a la proteína C5 humana que tiene las secuencias de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 1 (véase más abajo).
El porcentaje (%) de identidad de secuencia de aminoácidos se define como el porcentaje de aminoácidos en una secuencia candidata que son idénticos a los aminoácidos en una secuencia de referencia, después de alinear las secuencias e introducir espacios, si es necesario, para lograr el máximo porcentaje de identidad de secuencia. La alineación con el fin de determinar el porcentaje de identidad de secuencia se puede lograr de diversas maneras que están dentro de la pericia en la técnica, por ejemplo usando software disponible públicamente como BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 o software Megalign (DNASTAR). Los parámetros apropiados para medir la alineación, incluyendo los algoritmos necesarios para lograr la alineación máxima en la longitud total de las secuencias que se comparan, pueden determinarse mediante métodos conocidos.
Las secuencias de aminoácidos para ejemplos de proteínas C5 humanas, así como sus fragmentos peptídicos antigénicos, son conocidas en la técnica, y se exponen a continuación.
Como se usa a lo largo de la presente descripción, el término "anticuerpo" se refiere a una molécula de anticuerpo completa o intacta (por ejemplo, IgM, IgG, IgA, IgD o IgE) que se genera mediante cualquiera de una variedad de métodos que se conocen en la técnica y se describen aquí. El término "anticuerpo" incluye un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimerizado o quimérico, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano desinmunizado, y un anticuerpo completamente humano. El anticuerpo se puede producir o derivar de cualquiera de una variedad de especies, por ejemplo mamíferos tales como seres humanos, primates no humanos (por ejemplo, monos, babuinos, o chimpancés), caballos, vacas, cerdos, ovejas, cabras, perros, gatos, conejos, conejillos de Indias, jerbos, hámsters, ratas y ratones. El anticuerpo puede ser un anticuerpo purificado o uno recombinante.
Como se usa aquí, la expresión "fragmento de anticuerpo", "fragmento de unión a antígeno'', o términos similares, se refieren a un fragmento de un anticuerpo que retiene la capacidad de unirse a un antígeno (por ejemplo, una proteína componente C5 del complemento), por ejemplo un anticuerpo monocatenario, un fragmento Fv monocatenario (scFv), un fragmento Fd, un fragmento Fab, un fragmento Fab', o un fragmento F(ab')2. Un fragmento scFv es una cadena polipeptídica individual que incluye las regiones variables de cadena pesada y ligera del anticuerpo del que deriva el scFv. Además, los diacuerpos (Poljak (1994) Structure 2(12):1121-1123; Hudson et al. (1999) J. Immunol. Methods 23(1-2):177-189, cuyas descripciones se incorporan aquí como referencia en su totalidad) e intracuerpos (Huston et al. (2001) Hum. Antibodies 10(3-4):127-142; Wheeler et al. (2003) Mol Ther 8(3):355-366; Stocks (2004) Drug Discov. Today 9(22): 960-966, cuyas descripciones se incorporan aquí como referencia en su totalidad) que se unen a una proteína componente C5 del complemento pueden incorporarse en las composiciones y usarse en los métodos descritos aquí.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados aquí tienen el mismo significado que entienden comúnmente los expertos en la técnica a la que se refiere esta descripción. En caso de conflicto, prevalecerá el presente documento, incluidas las definiciones. A continuación se describen métodos y materiales preferidos, aunque también se pueden usar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos aquí en la práctica o ensayo de los métodos y composiciones descritos aquí.
Otras características y ventajas de la presente descripción, por ejemplo métodos para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento, serán evidentes a partir de la siguiente descripción, los ejemplos, y las reivindicaciones.
Descripción detallada
La presente descripción proporciona composiciones que contienen un inhibidor del componente C5 del complemento humano (por ejemplo, un anticuerpo que se une a una proteína del componente C5 del complemento humano, o un fragmento biológicamente activo de la misma, tal como C5a y C5b), y métodos para usar las composiciones para tratar o prevenir un trastorno mediado por el complemento en un ser humano. Aunque de ningún modo se pretende que sean limitativos, a continuación se elaboran ejemplos de composiciones (por ejemplo, composiciones y formulaciones farmacéuticas) y métodos para usar las composiciones.
Composiciones
Las composiciones descritas aquí contienen un inhibidor del complemento humano. Cualquier compuesto que se una o bloquee de otro modo la generación y/o la actividad de cualquiera de los componentes del complemento humano puede utilizarse de acuerdo con la presente descripción. Por ejemplo, un inhibidor del complemento puede ser, por ejemplo, una molécula pequeña, un ácido nucleico o un análogo de ácido nucleico, un peptidomimético, o una macromolécula que no sea un ácido nucleico o una proteína. Estos agentes incluyen, pero no se limitan a, moléculas orgánicas pequeñas, aptámeros de ARN, aptámeros de L-ARN, Spiegelmers, compuestos antisentido, ARN bicatenario, ARN de interferencia pequeño, inhibidores de ácidos nucleicos bloqueados, e inhibidores de ácidos nucleicos peptídicos. En algunas realizaciones, un inhibidor del complemento puede ser una proteína o un fragmento de proteína.
Las composiciones contienen anticuerpos específicos para un componente del complemento humano. Algunos compuestos incluyen anticuerpos dirigidos contra los componentes C1, C2, C3, C4, C5 (o un fragmento del mismo; véase más abajo), C6, C7, C8, C9, Factor D, Factor B, Factor P, MBL, MASP-1, y Ma SP-2, del complemento, impidiendo así la generación de la actividad anafilotóxica asociada a C5a y/o impidiendo el ensamblaje del complejo de ataque a la membrana asociado a C5b.
Las composiciones también pueden contener formas naturales o solubles de compuestos inhibidores del complemento, tales como CR1, LEX-CR1, MCP, DAF, CD59, factor H, factor de veneno de cobra, FUT-175, compestatina y K76 COOH. Otros compuestos que se pueden utilizar para unirse o bloquear la generación y/o actividad de cualquiera de los componentes del complemento humano incluyen, pero no se limitan a, proteínas, fragmentos de proteínas, péptidos, moléculas pequeñas, aptámeros de a Rn , incluido ARC187 (que está disponible comercialmente de Archemix Corporation, Cambridge, MA), aptámeros de L-ARN, spiegelmers, compuestos antisentido, inhibidores de serina proteasa, moléculas que pueden utilizarse en la interferencia de ARN (ARNi), tal como el ARN bicatenario, incluyendo el ARN de interferencia pequeño (ARNip), inhibidores de ácidos nucleicos bloqueados (LNA), inhibidores de ácidos nucleicos peptídicos (PNA), etc.
El inhibidor del complemento inhibe la activación del complemento. Por ejemplo, el inhibidor del complemento puede unirse e inhibir la actividad de activación del complemento de C1 (por ejemplo, C1q, C1r o C1s), o el inhibidor del complemento puede unirse e inhibir (por ejemplo, inhibir la escisión de) C2, C3 o C4. El inhibidor puede inhibir la formación o ensamblaje de la convertasa C3 y/o la convertasa C5 de las rutas alternativa y/o clásica del complemento.
El inhibidor del complemento inhibe la formación del complemento terminal, por ejemplo la formación del complejo de ataque a la membrana C5b-9. Por ejemplo, un inhibidor del complemento de un anticuerpo puede incluir un anticuerpo anti-C5. Dichos anticuerpos anti-C5 pueden interactuar directamente con C5 y/o C5b, a fin de inhibir la formación y/o la función fisiológica de C5b.
Las composiciones descritas aquí pueden contener un inhibidor del componente C5 del complemento humano (por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a una proteína del componente C5 del complemento humano o un fragmento biológicamente activo de la misma, tal como C5a o C5b). Como se usa aquí, un "inhibidor del componente C5 del complemento" es cualquier agente que inhibe: (i) la expresión, o el tráfico intracelular adecuado o la secreción por una célula, de una proteína del componente C5 del complemento; (ii) la actividad de los fragmentos de escisión de C5 C5a o C5b (por ejemplo, la unión de C5a a sus receptores celulares afines, o la unión de C5b a C6 y/u otros componentes del complejo del complemento terminal; véase más arriba); (iii) la escisión de una proteína C5 humana para formar C5a y C5b; o (iv) el tráfico intracelular adecuado, o la secreción por una célula, de una proteína del componente C5 del complemento. La inhibición de la expresión de la proteína del componente C5 del complemento incluye: inhibición de la transcripción de un gen que codifica una proteína C5 humana; aumento de la degradación de un ARNm que codifica una proteína C5 humana; inhibición de la traducción de un ARNm que codifica una proteína C5 humana; aumento de la degradación de una proteína C5 humana; inhibición del procesamiento adecuado de una pre-pro proteína C5 humana; o inhibición del tráfico o secreción apropiados por una célula de una proteína C5 humana. Los métodos para determinar si un agente candidato es un inhibidor del componente C5 del complemento humano se conocen en la técnica y se describen aquí.
Un inhibidor del componente C5 del complemento humano puede ser, por ejemplo, una molécula pequeña, un polipéptido, un análogo de polipéptido, un ácido nucleico, o un análogo de ácido nucleico.
"Molécula pequeña", tal como se usa aquí, se refiere a un agente que tiene un peso molecular de menos de alrededor de 6 kDa, y más preferiblemente de menos de alrededor de 2,5 kDa. Muchas compañías farmacéuticas tienen extensas bibliotecas de mezclas químicas y/o biológicas que comprenden conjuntos de moléculas pequeñas, a menudo extractos de hongos, bacterias o algas, que pueden examinarse con cualquiera de los ensayos de la solicitud. Esta solicitud contempla usar, entre otras, pequeñas bibliotecas químicas, bibliotecas de péptidos, o colecciones de productos naturales. Tan et al. describieron una biblioteca con más de dos millones de compuestos sintéticos que es compatible con ensayos basados en células miniaturizadas (J. Am. Chem. Soc. (1998) 120:8565-8566). Está dentro del alcance de esta solicitud que dicha biblioteca pueda usarse para seleccionar inhibidores del componente C5 del complemento humano. Existen numerosas bibliotecas de compuestos disponibles comercialmente, tal como Chembridge DIVERSet. También hay disponibles bibliotecas de investigadores académicos, tal como el conjunto Diversity del programa de terapias del desarrollo del NCI. También se puede emplear el diseño racional de fármacos. Por ejemplo, el diseño racional de fármacos puede emplear el uso de información estructural de cristal o disolución en la proteína del componente C5 del complemento humano. Véanse, por ejemplo, las estructuras descritas en Hagemann et al. (2008) J Biol Chem 283(12):7763-75 y Zuiderweg et al. (1989) Biochemistry 28(1): 172-85. El diseño racional de fármacos también se puede lograr en base a compuestos conocidos, por ejemplo un inhibidor conocido de C5 (por ejemplo, un anticuerpo, o fragmento del mismo que se une a antígeno, que se une a una proteína componente C5 del complemento humano).
Los peptidomiméticos pueden ser compuestos en los que se modifica al menos una parte de un polipéptido en cuestión, y la estructura tridimensional del peptidomimético sigue siendo sustancialmente la misma que la del polipéptido en cuestión. Los peptidomiméticos pueden ser análogos de un polipéptido objeto de la descripción que son, ellos mismos, polipéptidos que contienen una o más sustituciones u otras modificaciones dentro de la secuencia polipeptídica objeto. Alternativamente, al menos una parte de la secuencia polipeptídica en cuestión puede reemplazarse por una estructura no peptídica, de modo que la estructura tridimensional del polipéptido en cuestión se retenga sustancialmente. En otras palabras, uno, dos o tres restos de aminoácidos dentro de la secuencia polipeptídica en cuestión pueden reemplazarse por una estructura no peptídica. Además, otras porciones peptídicas del polipéptido en cuestión pueden, pero no necesitan, ser reemplazadas por una estructura no peptídica. Los peptidomiméticos (análogos peptídicos y no peptídicos) pueden tener propiedades mejoradas (por ejemplo, disminución de la proteólisis, aumento de la retención o aumento de la biodisponibilidad). Los peptidomiméticos generalmente tienen una disponibilidad oral mejorada, lo que los hace especialmente adecuados para el tratamiento de trastornos en seres humanos o animales. Cabe señalar que los peptidomiméticos pueden o no tener estructuras químicas bidimensionales similares, pero comparten características estructurales tridimensionales y geometría comunes. Cada peptidomimético puede tener además uno o más elementos de unión adicionales únicos.
Los inhibidores de ácidos nucleicos pueden usarse para disminuir la expresión de un gen endógeno que codifica el componente C5 del complemento humano. El antagonista de ácido nucleico puede ser, por ejemplo, un ARNip, un ARNbc, una ribozima, un formador de triple hélice, un aptámero, o un ácido nucleico antisentido. Los ARNip son pequeños ARN bicatenarios (ARNbc) que opcionalmente incluyen salientes. Por ejemplo, la región dúplex de un ARNip tiene una longitud de alrededor de 18 a 25 nucleótidos, por ejemplo una longitud de alrededor de 19, 20, 21,22, 23 o 24 nucleótidos. Las secuencias de ARNip pueden ser exactamente complementarias al ARNm diana. Los ARNbc y los ARNip en particular pueden usarse para silenciar la expresión génica en células de mamíferos (por ejemplo, células humanas). Véanse, por ejemplo, Clemens et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:6499- 6503; Billy et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:14428-14433; Elbashir et al. (2001) Nature 411 :494-8; Yang et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:9942-9947, y las Publicaciones de Solicitudes de Patentes U.S. nos 20030166282, 20030143204, 20040038278, y 20030224432. Los agentes antisentido pueden incluir, por ejemplo, de alrededor de 8 a alrededor de 80 nucleobases (es decir, de alrededor de 8 a alrededor de 80 nucleótidos), por ejemplo de alrededor de 8 a alrededor de 50 nucleobases, o de alrededor de 12 a alrededor de 30 nucleobases. Los compuestos antisentido incluyen ribozimas, oligonucleótidos (oligozimas) de secuencia guía externa (EGS), y otros ARN catalíticos cortos u oligonucleótidos catalíticos que se hibridan con el ácido nucleico diana y modulan su expresión. Los compuestos antisentido pueden incluir un tramo de al menos ocho nucleobases consecutivas que son complementarias a una secuencia en el gen diana. Un oligonucleótido no necesita ser 100% complementario a su secuencia de ácido nucleico diana para ser hibridable específicamente. Un oligonucleótido es hibridable específicamente cuando la unión del oligonucleótido a la diana interfiere con la función normal de la molécula diana para causar una pérdida de utilidad, y hay un grado suficiente de complementariedad para evitar la unión no específica del oligonucleótido a secuencias no diana en condiciones en las que se desea la unión específica, es decir, en condiciones fisiológicas en el caso de ensayos in vivo o tratamientos terapéuticos, o, en el caso de ensayos in vitro, en las condiciones en las que se llevan a cabo los ensayos. La hibridación de oligonucleótidos antisentido con ARNm (por ejemplo, un ARNm que codifica una proteína C5 humana) puede interferir con una o más de las funciones normales del ARNm. Las funciones del ARNm con las que se interfiere incluyen todas las funciones clave tales como, por ejemplo, la translocación del ARN al sitio de traducción de la proteína, la traducción de la proteína a partir del ARN, el ayuste del ARN para producir una o más especies de ARNm, y la actividad catalítica en las que se pueden implicar por el ARN. La unión de proteína o proteínas específicas al ARN también puede verse interferida por la hibridación de oligonucleótidos antisentido con el ARN. Los compuestos antisentido ejemplares incluyen secuencias de ADN o ARN que se hibridan específicamente con el ácido nucleico diana, por ejemplo el ARNm que codifica una proteína del componente C5 del complemento humano. La región complementaria puede extenderse entre alrededor de 8 y alrededor de 80 nucleobases. Los compuestos pueden incluir una o más nucleobases modificadas.
Las nucleobases modificadas pueden incluir, por ejemplo, pirimidinas 5-sustituidas, tales como 5-yodouracilo, 5-yodocitosina, y C5-propinilpirimidinas, tales como C5-propinilcitosina y C5-propiniluracilo. Otras nucleobases modificadas adecuadas incluyen, por ejemplo, 7-sustituido-8-aza-7-deazapurinas y 7-sustituido-7-deazapurinas, tales como, por ejemplo, 7-yodo-7-deazapurinas, 7-ciano-7-deazapurinas, 7-aminocarbonil-7-deazapurinas. Ejemplos de estos incluyen 6-amino-7-yodo-7-deazapurinas, 6-amino-7-ciano-7-deazapurinas, 6-amino-7-aminocarbonil-7-deazapurinas, 2-amino-6-hidroxi-7-yodo-7-deazapurinas, 2-amino-6-hidroxi-7-ciano-7-deazapurinas, y 2-amino-6-hidroxi-7-aminocarbonil-7-deazapurinas. Véanse, por ejemplo, las patentes U.S. núms. 4.987.071; 5.116.742; y 5.093.246; "Antisense RNA and DNA," D.A. Melton, Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988); Haselhoff y Gerlach (1988) Nature 334:585-59; Helene, C. (1991) Anticancer Drug D 6:569-84; Helene (1992) Ann. Ny . Acad. Sci. 660:27-36; y Maher (1992) Bioassays 14:807-15.
Los aptámeros son secuencias oligonucleotídicas cortas que se pueden usar para reconocer y unirse específicamente a casi cualquier molécula, incluidas las proteínas de la superficie celular. La evolución sistemática de ligandos por proceso de enriquecimiento exponencial (SELEX) es poderosa, y puede usarse para identificar fácilmente dichos aptámeros. Los aptámeros se pueden fabricar para una amplia gama de proteínas de importancia para la terapia y el diagnóstico, tales como factores de crecimiento y antígenos de superficie celular. Estos oligonucleótidos se unen a sus dianas con afinidades y especificidades similares a las de los anticuerpos (véase, por ejemplo, Ulrich (2006) Handb Exp Pharmacol. 173:305-326).
El inhibidor de C5 humano es un anticuerpo, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a una proteína del componente C5 del complemento humano. (En lo sucesivo, el anticuerpo puede denominarse a veces "anticuerpo anti-C5").
El anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo en la pro-proteína precursora C5 humana. Por ejemplo, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo en la proteína del componente C5 del complemento humano que comprende, o consiste en, la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 1 (n° de acceso NCBI AAA51925 y Haviland et al., más arriba).
Un "epítopo" se refiere al sitio en una proteína (por ejemplo, una proteína del componente C5 del complemento humano) que se une a un anticuerpo. Los "epítopos solapantes" incluyen al menos uno (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, o seis) restos de aminoácidos comunes.
Las siguientes realizaciones referidas a anticuerpos anti-C5 en general no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. Solo eculizumab está cubierto por la redacción de la presente reivindicación.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se une a un epítopo en la pro-proteína precursora de C5 humana que carece de la secuencia líder. Por ejemplo, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo en la proteína del componente C5 del complemento humano que comprende, o consiste en, la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 2, que es una proteína C5 humana que carece de la secuencia líder amino terminal.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo en la cadena alfa de la proteína del componente C5 del complemento humano. Por ejemplo, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo dentro de, o que solapa con, una proteína que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 3, que es la proteína de la cadena alfa del componente C5 del complemento humano. Los anticuerpos que se unen a la cadena alfa de C5 se describen, por ejemplo, en Ames et al. (1994) J Immunol 152:4572-4581.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo en la cadena beta de la proteína del componente C5 del complemento humano. Por ejemplo, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo dentro de, o que solapa con, una proteína que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 4, que es la proteína de la cadena beta del componente C5 del complemento humano. Los anticuerpos que se unen a la cadena beta de C5 se describen, por ejemplo, en Moongkarndi et al. (1982) Immunobiol. 162:397; Moongkarndi et al. (1983) Immunobiol. 165:323; y Mollnes et al. (1988) Scand. J. Immunol. 28:307-312.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo dentro de, o que solapa con, un fragmento peptídico antigénico de una proteína del componente C5 del complemento humano. Por ejemplo, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo dentro de, o que solapa con, un fragmento peptídico antigénico de una proteína del componente C5 del complemento humano, conteniendo el fragmento, o consistiendo en, la siguiente secuencia de aminoácidos: VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5) o KSSKC (SEQ ID NO:6).
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 puede unirse a un epítopo dentro de, o que solapa con, un fragmento de una proteína del componente C5 del complemento humano, conteniendo el fragmento, o consistiendo en, cualquiera de las siguientes secuencias de aminoácidos (que son fragmentos antigénicos ejemplares de SEQ ID NO:1): NFS LETWFGKEILVKTLRVVPEGVKRES Y S GVTLDPRGIY GTISRRKEFP YRIP LDLVPKTEIKRILS VKGLLV GEILS AVLS QEGINILTHLPKGS AEAELMS VVPVF YVFHYLETGNHWNIFHSD (SEQ ID NO:7);
SESPVIDHQGTKSSKCVRQKVEGSSSHLVTFTVLPLEIGLHNINFSLETWFGKEI LVKTLRVVPEGVKRES YSGVTLDPRGIY GTISRRKEFP YRIPLDLVPKTEIKRIL SVKGLLVGEILSAYLSQEGINILTHLPKGSAEAELMSVVPVFYVFHYLETGNH WNIFHSDPLIEKQKLKKKLKEGMLSIMSYRNADYSYS (SEQ ID NO:8);
SHKDMQLGRLHMKTLLPVSKPEIRSYFPES (SEQ ID NO:9);
SHKDMQLGRLHMKTLLPVSKPEIRSYFPESWLWEVHLVPRRKQLQFALPDSL TTWEIQGIGISNTGICVADTVKAKVFKDVFLEMNIPYSVVRGEQIQLKGTVYN YRTSGMQFCVKMSAVEGICTSESPVIDHQGTKSSKCVRQKVEGSSSHLVTFTV LPLEIGLHNMFSLETWFGKEILVKTLRVVPEGVKRESYSGVTLDPRGIYGTISR RKEFPYRIPLDLVPKTEIKRILSVKGLLVGEILSAVLSQEGINILTHLPKGSAEAE LMSVVPVFYVFHYLETGNHWNIFHSDPLIEKQKLKKKLKEGMLSIMSYRNAD YSYS (SEQ ID NOYO);
y DHQGTKSSKCVRQKVEG (SEQ ID NO:11).
Fragmentos antigénicos ejemplares adicionales del componente C5 del complemento humano se describen, por ejemplo, en la patente U.S. núm. 6.355.245.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se une específicamente a una proteína del componente C5 del complemento humano (por ejemplo, la proteína C5 humana que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 1). Las expresiones "unión específica" o "se une específicamente" se refieren a dos moléculas que forman un complejo (por ejemplo, un complejo entre un anticuerpo y una proteína componente C5 del complemento) que es relativamente estable en condiciones fisiológicas. Típicamente, la unión se considera específica cuando la constante de asociación (Ka) es mayor que 106 M-1. De este modo, un anticuerpo puede unirse específicamente a una proteína C5 con una Ka de al menos (o mayor que) 106 (por ejemplo, al menos o mayor que 107, 108, 109, 1010, 10111012, 1013, 1014, o 1015 o mayor) M-1. Los ejemplos de anticuerpos que se unen específicamente a una proteína del componente C5 del complemento humano se describen, por ejemplo, en la patente U.S. núm. 6.355.245.
Los métodos para determinar si un anticuerpo se une a un antígeno proteínico y/o la afinidad de un anticuerpo por un antígeno proteínico son conocidos en la técnica. Por ejemplo, la unión de un anticuerpo a un antígeno proteico puede detectarse y/o cuantificarse usando una variedad de técnicas tales como, pero sin limitarse a, transferencia Western, transferencia de mancha, método de resonancia de plasmones superficiales (por ejemplo, sistema BIAcore; Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suecia y Piscataway, N.J.), o ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA). Véanse, por ejemplo, Harlow y Lane (1988) "Antibodies: A Laboratory Manual" Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Benny K. C. Lo (2004) "Antibody Engineering: Methods and Protocols," Humana Press (ISBN: 1588290921); Borrebaelc (1992) "Antibody Engineering, A Practical Guide," W.H. Freeman and Co., NY; Borrebaek (1995) "Antibody Engineering," 2a edición, Oxford University Press, NY, Oxford; Johne et al. (1993) J. Immunol. Meth.
160:191-198; Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; y Jonsson et al. (1991) Biotechniques 11:620-627. Véase también, la patente U.S. núm. 6.355.245.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 puede bloquear de forma cruzada la unión de otro anticuerpo que se une a un epítopo dentro de, o que solapa con, una proteína del componente C5 del complemento humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 puede bloquear de forma cruzada la unión de un anticuerpo que se une a un epítopo dentro de, o que solapa con, un fragmento peptídico de una proteína del componente C5 del complemento humano. El fragmento peptídico puede ser un fragmento de una proteína del componente C5 del complemento humano que tiene la secuencia de aminoácidos representada en cualquiera de SEQ ID NOS: 1-11. Por ejemplo, el fragmento peptídico puede contener, o consistir en, la siguiente secuencia de aminoácidos: VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5).
Como se usa aquí, la expresión "anticuerpo de bloqueo cruzado" se refiere a un anticuerpo que reduce la cantidad de unión del anticuerpo anti-C5 a un epítopo en una proteína del componente C5 del complemento con respecto a la cantidad de unión del anticuerpo anti-C5 al epítopo en la ausencia del anticuerpo. En la técnica se conocen métodos adecuados para determinar si un primer anticuerpo bloquea de forma cruzada la unión de un segundo anticuerpo a un epítopo. Por ejemplo, los anticuerpos de bloqueo cruzado se pueden identificar comparando la unión del anticuerpo monoclonal anti-C55G1.1 (producido por la línea celular de hibridoma designación ATCC HB-11625; véase la patente U.S. núm. 6.355.245) en presencia y ausencia de un anticuerpo de ensayo. La unión reducida del anticuerpo 5G1.1 en presencia del anticuerpo de ensayo, en comparación con la unión del anticuerpo 5G1.1 en ausencia del anticuerpo de ensayo, indica que el anticuerpo de ensayo es un anticuerpo de bloqueo cruzado.
También se conocen en la técnica métodos para identificar el epítopo al que se une un anticuerpo particular (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5). Por ejemplo, el epítopo de unión de un anticuerpo anti-C5 se puede identificar midiendo la unión del anticuerpo a varios (por ejemplo, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 15, 20, o 30 o más) fragmentos peptídicos solapantes de una proteína del componente C5 del complemento (por ejemplo, varios fragmentos solapantes de una proteína que tiene la secuencia de aminoácidos representada en cualquiera de SEQ ID NO: 1-11). Después, cada uno de los diferentes péptidos solapantes se une a una dirección única en un soporte sólido, por ejemplo pocillos separados de una placa de ensayo de múltiples pocillos. A continuación, el anticuerpo anti-C5 se interroga poniéndolo en contacto con cada uno de los péptidos en la placa de ensayo durante un período de tiempo y en condiciones que permitan que el anticuerpo se una a su epítopo. El anticuerpo anti-C5 no unido se elimina lavando cada uno de los pocillos. A continuación, un anticuerpo secundario marcado de forma detectable que se une al anticuerpo anti-C5, si está presente en un pocillo de la placa, se pone en contacto con cada uno de los pocillos, y el anticuerpo secundario no unido se elimina mediante etapas de lavado. La presencia o la cantidad de la señal detectable producida por el anticuerpo secundario marcado de forma detectable en un pocillo es una indicación de que el anticuerpo anti-C5 se une al fragmento peptídico particular asociado con el pocillo. Véanse, por ejemplo, Harlow y Lane (más arriba), Benny K. C. Lo (más arriba), y la Publicación de Solicitud de Patente U.S. núm. 20060153836. Un epítopo particular al que se une un anticuerpo también se puede identificar usando técnicas cromatográficas BIAcore (véase, por ejemplo, Pharmacia BIAtechnology Handbook, "Epitope Mapping, Sección 6.3.2, (mayo de 1994); y Johne et al. (1993) J. Immunol. Methods 160:20191-8).
Los anticuerpos anti-C5 descritos aquí pueden tener actividad bloqueando la generación o la actividad de los fragmentos activos C5a y/o C5b de una proteína del componente C5 del complemento (por ejemplo, una proteína C5 humana). A través de este efecto de bloqueo, los anticuerpos anti-C5 inhiben, por ejemplo, los efectos proinflamatorios de C5a y la generación del complejo de ataque de membrana (MAC) C5b-9 en la superficie de una célula. Los anticuerpos anti-C5 que tienen la capacidad de bloquear la generación de C5a se describen, por ejemplo, en Moongkarndi et al. (1982) Immunobiol. 162:397 y Moongkarndi et al. (1983) Immunobiol. 165:323.
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-C5, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, puede reducir la capacidad de una proteína C5 para unirse al componente C3b del complemento humano (por ejemplo, C3b presente en un complejo de AP o CP C5 convertasa) en más de 50 (por ejemplo, más de 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, o 95 o más) %. En algunas realizaciones, al unirse a una proteína C5, el anticuerpo anti-C5 o su fragmento de unión a antígeno puede reducir la capacidad de la proteína C5 para unirse al componente C4b del complemento (por ejemplo, C4b presente en una CP C5 convertasa) en más de 50 (por ejemplo, más de 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, o 95 o más) %. Los métodos para determinar si un anticuerpo puede bloquear la generación o la actividad de los fragmentos activos C5a y/o C5b de una proteína del componente C5 del complemento, o la unión al componente C4b o C3b del complemento, se conocen en la técnica, y se describen, por ejemplo, en la patente U.S. núm. 6.355.245 y Wurzner et al. (1991) Complement Inflamm 8:328-340. (Véase también más abajo).
En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-C5 se une a una región amino-terminal de la cadena alfa de una proteína del componente C5 del complemento, pero no se une a C5a libre. Los epítopos para un anticuerpo anti-C5 dentro de la región amino-terminal de la cadena alfa incluyen, por ejemplo, epítopos dentro de la secuencia humana VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5).
En algunas realizaciones, la composición comprende, y/o el anticuerpo es, eculizumab (Soliris®; Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT). (Véanse, por ejemplo, Kaplan (2002) Curr Opin Investig Drugs 3(7):1017-23; Hill (2005) Clin Adv Hematol Oncol 3(11):849-50; y Rother et al. (2007) Nature Biotechnology 25(11):1256-1488.)
En alguna realización no según la invención reivindicada, la composición comprende, y/o el anticuerpo es, pexelizumab (Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT). (Véanse, por ejemplo, Whiss (2002) Curr Opin Investig Drugs 3(6):870-7; Patel et al. (2005) Drugs Today (Barc) 41 (3):165-70; y Thomas et al. (1996) Mol Immunol. 33(17-18):1389-401.)
Las siguientes realizaciones relacionadas con los inhibidores de C5 no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 es un anticuerpo que se une a C5a (a veces denominado aquí "un anticuerpo anti-C5a"). En algunas realizaciones, el anticuerpo se une a C5a, pero no a C5 de longitud completa. Como se discutió anteriormente, la proforma de C5, una proteína precursora de 1676 restos de aminoácidos, se procesa mediante una serie de eventos de escisión proteolítica. Los primeros 18 péptidos (numerados -18 a -1) constituyen un péptido señal que se escinde de la proteína precursora. La proteína restante de 1658 aminoácidos se escinde en dos sitios para formar las cadenas alfa y beta. El primer acontecimiento de escisión se produce entre los residuos aminoacídicos 655 y 656. El segundo evento de escisión ocurre entre los restos de aminoácidos 659 a 660. Los dos acontecimientos de escisión provocan la formación de tres fragmentos polipeptídicos distintos: (i) un fragmento que comprende los aminoácidos 1 a 655, que se denomina cadena beta; (ii) un fragmento que comprende los aminoácidos 660 a 1658, que se denomina cadena alfa; y (iii) un fragmento tetrapeptídico que consiste en los aminoácidos 656 a 659. Los fragmentos polipeptídicos de la cadena alfa y la cadena beta se conectan entre sí mediante enlace disulfuro y constituyen la proteína C5 madura. La C5 convertasa de CP o AP activa C5 madura escindiendo la cadena alfa entre los residuos 733 y 734, lo que provoca la liberación del fragmento C5a (aminoácidos 660 a 733). La parte restante de C5 madura es el fragmento C5b, que contiene los residuos 734 a 1658 de la cadena alfa unida por disulfuro a la cadena beta.
In vivo, C5a se metaboliza rápidamente mediante una enzima sérica, la carboxipeptidasa B, a una forma de 73 aminoácidos denominada "C5a des-Arg", que ha perdido el resto de arginina carboxiterminal. Por consiguiente, en algunas realizaciones, un anticuerpo que se une a C5a también se une a C5a desarginado. En algunas realizaciones, un anticuerpo que se une a C5a no se une a C5a desarginado.
En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 es un anticuerpo que se une a un neoepítopo presente en C5a, es decir, un epítopo que queda expuesto tras la liberación de C5a del fragmento de cadena alfa de C5 madura. Los anticuerpos que se unen a C5a (por ejemplo, un neoepítopo presente en C5a) son conocidos en la técnica, al igual que los métodos para producir dichos anticuerpos. Por ejemplo, un anticuerpo que se une a C5a puede tener la especificidad de unión de un anticuerpo específico de neoepítopo de C5a descrito en cualquiera de, por ejemplo, Publicación PCT núm. WO 01/15731; Ames et al. (1994) J Immunol 152(9):4572-4581; Inoue (1989) Complement Inflamm 6(3):219-222; y patente U.S. núm. 6.866.845. En otro ejemplo, un anticuerpo que se une a C5a puede tener la especificidad de unión de un anticuerpo específico de neoepítopo de C5a comercial, tal como, pero sin limitarse a, sc-52633 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, California), 152-1486 (BD Pharmingen/BD Biosciences), ab11877 (Abcam, Cambridge, Massachusetts) y HM2079 (clon 2952; HyCult Biotechnology, Países Bajos). En algunas realizaciones, un anticuerpo que se une a C5a puede bloquear de forma cruzada la unión de cualquiera de los anticuerpos específicos de neoepítopo de C5a mencionados anteriormente.
En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 puede ser un anticuerpo que se une a una proteína C5a de mamífero (por ejemplo, humana). Por ejemplo, el anticuerpo puede unirse a una proteína C5a humana que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTE CCVVASQLRANISHKDMQLGR (SEQ ID NO:12). El anticuerpo puede unirse a C5a humana en un epítopo dentro de o que solapa con la secuencia de aminoácidos: CCYDGACVNNDETCEQRAAR (SeQ ID NO:13); KCCYDGACVNNDETCEQR (SEQ ID NO:14); VNNDETCEQR (SEQ ID NO:15); VNNDET (SEQ ID NO:16); AARISLGPR (SEQ ID NO:17); CCYDGACVNNDETCEQRAA (SEQ ID NO:18); CCYDGACVNNDETCEQRA (SEQ ID NO:19); CCYDGACVNNDETCEQR (SEQ ID NO:20); CCYDGACVNNDETCEQ (SEQ ID NO:21); CCYDGACVNNDETCE (SEQ ID NO:22); CYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:23); YDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:24); o CYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:25). En algunas realizaciones, un anticuerpo puede unirse a una proteína C5a humana o un fragmento de la misma que contiene una secuencia de aminoácidos que contiene, o consiste en, al menos cuatro (por ejemplo, al menos cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, o 17 o más) aminoácidos consecutivos representados en una cualquiera de SEQ ID NO: 12-25. Los fragmentos de proteína C5a adicionales a los que se puede unir un anticuerpo descrito aquí, y los métodos para generar sitios de combinación de antígenos específicos de C5a adecuados, se exponen, por ejemplo, en la patente U.S. núm. 4.686.100.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, la unión de un anticuerpo a C5a puede inhibir la actividad biológica de C5a. Los métodos para medir la actividad de C5a incluyen, por ejemplo, ensayos de quimiotaxis, los RIA, o los ELISA (véanse, por ejemplo, Ward y Zvaifler (1971) J Clin Invest 50(3):606-16 y Wurzner et al. (1991) Complement Inflamm 8:328-340). En algunas realizaciones, la unión de un anticuerpo a C5a puede inhibir la interacción entre C5a y C5aR1. Los métodos adecuados para detectar y/o medir la interacción entre C5a y C5aR1 (en presencia y ausencia de un anticuerpo) se conocen en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Mary y Boulay (1993) Eur J Haematol 51(5):282-287; Kaneko et al. (1995) Immunology 86(1 ):149-154: Giannini et al. (1995) J Biol Chem 270(32):19166-19172; y la Publicación de Solicitud de Patente U.S. núm. 20060160726. Por ejemplo, la unión de células mononucleares de sangre periférica que expresan C5a marcadas de forma detectable (por ejemplo, marcadas radiactivamente) a C5aR1 puede evaluarse en presencia y ausencia de un anticuerpo. Una disminución en la cantidad de C5a marcada de forma detectable que se une a C5aR1 en presencia del anticuerpo, en comparación con la cantidad de unión en ausencia del anticuerpo, es una indicación de que el anticuerpo inhibe la interacción entre C5a y C5aR1. En algunas realizaciones, la unión de un anticuerpo a C5a puede inhibir la interacción entre C5a y C5L2 (véase más abajo). Los métodos para detectar y/o medir la interacción entre C5a y C5L2 son conocidos en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Ward (2009) J Mol Med 87(4):375-378 y Chen et al. (2007) Nature 446(7132):203-207 (véase más abajo).
El inhibidor de C5 puede ser un anticuerpo que se une a C5b (algunas veces denominado aquí "anticuerpo anti-C5b"). En algunas realizaciones, el anticuerpo se une a C5b, pero no se une a C5 de longitud completa. La estructura de C5b se describe anteriormente, y también se detalla en, por ejemplo, Müller-Eberhard (1985) Biochem Soc Symp 50:235-246; Yamamoto y Gewurz (1978) J Immunol 120(6):2008-2015; y Haviland et al. (1991), más arriba. Como se describió anteriormente, C5b se combina con C6, C7 y C8 para formar el complejo C5b-8 en la superficie de la célula diana. Los intermedios de complejos de proteínas formados durante la serie de combinaciones incluyen C5b-6 (incluyendo C5b y C6), C5b-7 (incluyendo C5b, C6 y C7), y C5b-8 (incluyendo C5b, C6, C7 y C8). Tras la unión de varias moléculas C9, se forma el complejo de ataque a la membrana (MAC, complejo del complemento terminal C5b-9 (TCC)). Cuando se inserta un número suficiente de MAC en las membranas de las células diana, las aberturas que crean (poros MAC) median la lisis osmótica rápida de las células diana.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En algunas realizaciones, la unión de un anticuerpo a C5b puede inhibir la interacción entre C5b y C6. En algunas realizaciones, la unión del anticuerpo a C5b puede inhibir el ensamblaje o la actividad de C5b-9 MAC-TCC. En algunas realizaciones, la unión de un anticuerpo a C5b puede inhibir la lisis celular dependiente del complemento (por ejemplo, in vitro y/o in vivo). Los métodos adecuados para evaluar si un anticuerpo inhibe la lisis dependiente del complemento incluyen, por ejemplo, ensayos hemolíticos u otros ensayos funcionales para detectar la actividad de C5b-9 soluble. Por ejemplo, una reducción en la capacidad de lisis celular del complemento en presencia de un anticuerpo puede medirse mediante un ensayo de hemólisis descrito por Kabat y Mayer (eds.), "Experimental Immunochemistry, 2a edición," 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), páginas 135-139, o una variación convencional de ese ensayo, tal como el método de hemólisis de eritrocitos de pollo, como se describe, por ejemplo, en Hillmen et al. (2004) N Engl J Med 350(6):552.
Los anticuerpos que se unen a C5b, así como los métodos para producir tales anticuerpos, son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, la patente U.S. núm. 6.355.245. Los anticuerpos anti-C5b comercialmente disponibles están disponibles de varios proveedores, incluyendo, por ejemplo, Hycult Biotechnology (número de catálogo: HM2080; clon 568) y Abeam™ (ab46151 o ab46168).
El inhibidor de C5 puede ser un anticuerpo que se une a una forma de mamífero (por ejemplo, humana) de C5b. Por ejemplo, el anticuerpo se puede unir a una porción de una proteína C5b humana que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: QEQTYVISAPKIFRVGASENIVIQVYGYTEAFDATISIKSYPDKKFSYSSGHVHL SSENKFQNSAILTIQPKQLPGGQNPVSYVYLEVVSKHFSKSKRMPITYDNGFLF IHTDKPVYTPDQSVKVRVYSLNDDLKPAKRETVLTFIDPEGSEVDMVEEIDHI GIISFPDFKIPSNPRYGMWTIKAKYKEDFSTTGTAYFEVKEYVLPHFSVSIEPEY NFIGYKNFKNFEITIKARYFYNKVVTEADVYITFGIREDLKDDQKEMMQTAM QNTMLINGIAQVTFDSETAVKELSYYSLEDLNNKYLYIAVTVIESTGGFSEEAE IPGIKYVLSPYKLNLVATPLFLKPGIPYPIKVQVKDSLDQLVGGVPVILNAQTID VNQETSDLDPSKSVTRVDDGVASFVLNLPSGVTVLEFNVKTDAPDLPEENQA REGYRAIAYSSLSQSYLYIDWTDNHKALLVGEHLNIIVTPKSPYIDKITHYNYL ILSKGKIIHFGTREKFSDASYQSINIPVTQNMVPSSRLLVYYIVTGEQTAELVSD SVWLNIEEKCGNQLQVHLSPDADAYSPGQTVSLNMATGMDSWVALAAVDS AVYGVQRGAKKPLERVFQFLEKSDLGCGAGGGLNNANVFHLAGLTFLTNAN ADDSQENDEPCKEIL (SEQ ID NO:4). El anticuerpo se puede unir a una porción de una proteína C5b humana que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: LHMKTLLPVSKPEIRSYFPESWLWEVHLVPRRKQLQFALPDSLTTWEIQGIGIS NTGICVADTVKAKVFKDVFLEMNIPYSVVRGEQIQLKGTVYNYRTSGMQFCV KMSAVEGICTSESPVIDHQGTKSSKCVRQKVEGSSSHLVTFTVLPLEIGLHNIN
FSLETWFGKEILVKTLRVVPEGVKRESYSGVTLDPRGIYGTISRRKEFPYRIPL DLVPKTEIKRILSVKGLLVGEILSAVLSQEGINILTHLPKGSAEAELMSVVPVFY VFHYLETGNHWNIFHSDPLIEKQKLKKKLKEGMLSIMSYRNADYSYSVWKG GSASTWLTAFALRVLGQVNKYVEQNQNSICNSLLWLVENYQLDNGSFKENS QYQPIKLQGTLPVEARENSLYLTAFTVIGIRKAFDICPLVKlDTALIKADNFLLE NTLPAQSTFTLAISAYALSLGDKTHPQFRSIVSALKREALVKGNPPIYRFWKD NLQHKDSSVPNTGTARMVETTAYALLTSLNLKDINYVNPVIKWLSEEQRYGG GFYSTQDTINAIEGLTEYSLLVKQLRLSMDIDVSYKHKGALHNYKMTDKNFL GRPVEVLLNDDLIVSTGFGSGLATVHVTTVVHKTSTSEEVCSFYLKIDTQDIEA SHYRGYGNSDYKRIVACASYKPSREESSSGSSHAVMDISLPTGISANEEDLKA LVEGVDQLFTDYQIKDGHVILQLNSIPSS DFLCVRFRIFELFEVGFLSPATFTVYEYHRPDKQCTMFYSTSNIKIQKVCEGAA CKCVEADCGQMQEELDLTISAETRKQTACKPEIAYAYKVSITSITVENVFVKY KATLLDIYKTGEAVAEKDSEITFIKKVTCTNAELVKGRQYLIMGKEALQIKYN FSFRYIYPLDSLTWIEYWPRDTTCSSCQAFLANLDEFAEDIFLNGC (SEQ ID NO:26). El anticuerpo se puede unir a la proteína C5b humana o a un fragmento de la misma que contenga una secuencia de aminoácidos que contenga, o consista en, al menos cuatro (por ejemplo, al menos cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 o más) aminoácidos consecutivos representados en s Eq ID NO:4 o SEQ ID NO:26.
Los subfragmentos ejemplares adicionales de C5b o C5a humano a los que se puede unir un anticuerpo inhibidor de C5 se describen, por ejemplo, en la patente U.S. núm. 6.355.245.
El inhibidor puede ser un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido C5a (por ejemplo, el polipéptido C5a humano que tiene la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 12). El inhibidor puede ser un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido C5b.
Los métodos para determinar si un agente particular es un inhibidor del componente C5 del complemento humano se describen aquí, y son conocidos en la técnica. Por ejemplo, la concentración y/o actividad fisiológica de C5a y C5b en un fluido corporal puede medirse mediante métodos bien conocidos en la técnica. Los métodos para medir la concentración o actividad de C5a incluyen, por ejemplo, ensayos de quimiotaxis, los RIA, o los ELISA (véanse, por ejemplo, Ward y Zvaifler (1971) J Clin Invest. 50(3):606-16 y Wurzner et al. (1991) Complement Inflamm. 8:328-340). Para C5b, pueden usarse ensayos hemolíticos o ensayos para C5b-9 soluble, como se describe aquí. También se pueden usar otros ensayos conocidos en la técnica. Usando ensayos de estos u otros tipos adecuados, los agentes candidatos capaces de inhibir el componente C5 del complemento humano, tal como un anticuerpo anti-C5, pueden examinarse para, por ejemplo, identificar compuestos que son útiles en los métodos descritos aquí y determinar los niveles de dosificación adecuada de tales compuestos.
Los métodos para detectar la inhibición de la expresión de ARNm o de la proteína (por ejemplo, la inhibición de la expresión de la proteína C5 humana o la expresión de un ARNm que codifica la proteína C5 humana) son bien conocidos en el campo de la biología molecular, e incluyen, por ejemplo, transferencia Northern y RT-PCR (o RT-PCR cuantitativa) para ARNm y para detección de proteínas, técnicas de transferencia Western, transferencia de punto, o ELISA. (Véase, por ejemplo, Sambrook et al. (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition," Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)
Los métodos para determinar si un compuesto candidato inhibe la escisión de C5 humano en las formas C5a y C5b son conocidos en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Moongkarndi et al. (1982) Immunobiol. 162:397; Moongkarndi et al. (1983) Immunobiol. 165:323; Isenman et al. (1980) JImmunol. 124(1 ):326-31; Thomas et al. (1996) Mol. Immunol. 33(17-18):1389-401; y Evans et al. (1995) Mol. Immunol. 32(16):1183-95.
La inhibición del componente C5 del complemento humano también puede reducir la capacidad del complemento para lisar células en los fluidos corporales de un sujeto. Dichas reducciones de la capacidad de lisis celular del complemento presente pueden medirse mediante métodos bien conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, mediante un ensayo hemolítico convencional tal como el ensayo de hemólisis descrito por Kabat y Mayer (eds), "Experimental Immunochemistry, 2a edición" 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), páginas 135-139, o una variación convencional de ese ensayo, tal como el método de hemólisis de eritrocitos de pollo como se describe, por ejemplo, en Hillmen et al. (2004) N Engl J Med 350(6):552.
Composiciones y Formulaciones Farmacéuticas. Las composiciones que contienen un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor del componente C5 del complemento humano, tal como un anticuerpo anti-C5 o un fragmento de unión a antígeno del mismo) pueden formularse como una composición farmacéutica, por ejemplo para administración a un sujeto para tratar aHUS, CAPS, enfermedad de Degos, o TMA. Las composiciones farmacéuticas generalmente incluirán un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se usa aquí, un "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere e incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y similares, que son fisiológicamente compatibles. Las composiciones pueden incluir una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo una sal de adición de ácido o una sal de adición de base (véase, por ejemplo, Berge et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19).
Las composiciones se pueden formular según métodos estándar. La formulación farmacéutica es una técnica bien establecida, y se describe con más detalle en, por ejemplo, Gennaro (2000) "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," 20a edición, Lippincott, Williams & Wilkins (ISBN: 0683306472); Ansel et al. (1999) "Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems," 7a edición, Lippincott Williams & Wilkins Publishers (ISBN: 0683305727); y Kibbe (2000) "Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association," 3a edición (ISBN: 091733096X). En algunas realizaciones, una composición se puede formular, por ejemplo, como una disolución amortiguada a una concentración adecuada, y adecuada para el almacenamiento a 2-8°C. En algunas realizaciones, una composición se puede formular para almacenamiento a una temperatura por debajo de 0°C (por ejemplo, -20°C o -80°C).
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en una variedad de formas. Estas formas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas, tales como disoluciones líquidas (por ejemplo, disoluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, comprimidos, píldoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma preferida depende, en parte, del modo previsto de administración y aplicación terapéutica. Por ejemplo, las composiciones que contienen un anticuerpo anti-C5 destinado a la administración sistémica o local pueden estar en forma de disoluciones inyectables o para infusión. Por consiguiente, las composiciones se pueden formular para la administración por vía parenteral (por ejemplo, inyección intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, o intramuscular). "Administración parenteral", "administrado por vía parenteral", y otras frases gramaticalmente equivalentes, tal como se usan aquí, se refieren a modos de administración distintos de la administración entérica y tópica, generalmente mediante inyección, e incluyen, sin limitación, inyección e infusión intravenosa, intranasal, intraocular, pulmonar, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbitaria, intracardíaca, intradérmica, intrapulmonar, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural, intracerebral, intracraneal, intracarotídea e intraesternal (véase más abajo).
Las composiciones se pueden formular como disolución, microemulsión, dispersión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para almacenamiento estable a alta concentración. Las disoluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando un anticuerpo descrito aquí, en la cantidad requerida, en un disolvente apropiado, con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de la esterilización por filtración. En general, las dispersiones se preparan incorporando un inhibidor del componente C5 del complemento humano (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5) descrito aquí en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los demás ingredientes requeridos entre los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos de preparación incluyen secado a vacío y liofilización, que producen un polvo del anticuerpo descrito aquí más cualquier ingrediente adicional deseado procedente de una disolución previamente filtrada de forma estéril. La fluidez adecuada de una disolución se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión, y mediante el uso de tensioactivos. La absorción prolongada de composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un reactivo que retrase la absorción, por ejemplo sales de monoestearato y gelatina.
El inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un fragmento de unión a antígeno del mismo) se puede preparar con un vehículo que protegerá al compuesto contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de administración microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables y biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. En la técnica se conocen muchos métodos para la preparación de dichas formulaciones. (Véase, por ejemplo, J.R. Robinson (1978) "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems," Marcel Dekker, Inc., Nueva York.)
Un anticuerpo descrito aquí se puede formular en una composición adecuada para la administración intrapulmonar (por ejemplo, para la administración a través de un nebulizador) a un mamífero tal como un ser humano. Los métodos para preparar dichas composiciones son bien conocidos en la técnica, y se describen, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. núm. 20080202513; las patentes U.S. núms. 7.112.341 y 6.019.968; y las Publicaciones PCT núms. WO 00/061178 y WO 06/12225 7. Las formulaciones de inhaladores de polvo seco, y los sistemas adecuados para la administración de las formulaciones, se describen, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. núm. 20070235029, la Publicación PCT núm. WO 00/69887; y la patente U.S. núm. 5.997.848.
Un inhibidor de C5 humano (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un fragmento de unión a antígeno del mismo) descrito aquí se puede modificar, por ejemplo, con un resto que mejore su estabilización y/o retención en circulación, por ejemplo en sangre, suero u otros tejidos. El resto de estabilización puede mejorar la estabilidad o la retención del anticuerpo en al menos 1,5 (por ejemplo, al menos 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, o 50 o más) veces.
Los inhibidores de ácido nucleico del componente C5 del complemento humano descritos aquí (por ejemplo, un ácido nucleico antisentido o ARNip) se pueden incorporar en un constructo génico para uso como parte de un protocolo de terapia génica para administrar ácidos nucleicos que se pueden usar para expresar y producir agentes dentro de las células. Los constructos de expresión de dichos componentes se pueden administrar en cualquier vehículo biológicamente eficaz, por ejemplo cualquier formulación o composición capaz de administrar eficazmente el gen componente a las células in vivo. Los enfoques incluyen la inserción del gen en cuestión en vectores virales que incluyen retrovirus recombinantes, adenovirus, virus adenoasociados, lentivirus, y virus del herpes simple tipo 1 (HSV-1), o plásmidos bacterianos o eucarióticos recombinantes. Los vectores virales pueden transfectar células directamente; el ADN del plásmido se puede administrar con la ayuda de, por ejemplo, liposomas catiónicos (lipofectina) o derivados (por ejemplo, conjugado con anticuerpos), conjugados de polilisina, gramicidina S, envolturas virales artificiales u otros portadores intracelulares similares, así como la inyección directa del constructo génico, o precipitación con CaPO4 llevada a cabo in vivo. (Ver también, "Enfoques ex-vivo", más abajo). Los ejemplos de retrovirus adecuados incluyen pLJ, pZIP, pWE y pEM, que son conocidos por los expertos en la técnica (véanse, por ejemplo, Eglitis et al. (1985) Science 230:1395-1398; Danos y Mulligan (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. u Sa 85:6460-6464; Wilson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:3014-3018; Armentano et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6141-6145; Huber et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8039-8043; Ferry et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8377-8381; Chowdhury et al. (1991) Science 254:1802-1805; van Beusechem et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7640-7644; Kay et al. (1992) Human Gene Therapy 3:641-647; Dai et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10892-10895; Hwu et al. (1993) J. Immunol. 150:4104-4115; patentes U.S. núms. 4.868.116 y 4.980.286; Publicaciones PCT núms. WO89/07136, WO89/02468, WO89/05345, y WO92/07573). Otro sistema de administración de genes virales utiliza vectores derivados de adenovirus (véanse, por ejemplo, Berkner et al. (1988) BioTechniques 6:616; Rosenfeld et al. (1991) Science 252:431-434; y Rosenfeld et al. (1992) Cell 68:143-155). Los vectores adenovirales adecuados derivados de la cepa de adenovirus Ad tipo 5 dl324 u otras cepas de adenovirus (por ejemplo, Ad2, Ad3, Ad7, etc.) son conocidos por los expertos en la técnica. Aún otro sistema de vector viral útil para el suministro del gen en cuestión es el virus adenoasociado (AAV). Véanse, por ejemplo, Flotte et al. (1992) Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 7:349-356; Samulski et al. (1989) J. Virol. 63:3822-3828; y McLaughlin et al. (1989) J. Virol 62: 1963-1973.
Se pueden coformular más de uno (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o 10 o más) inhibidores (por ejemplo, uno o más inhibidores de C5 humano). Por ejemplo, se pueden formular juntos un ARNip específico de C5 y un anticuerpo anti-C5. Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En algunas realizaciones, un inhibidor del complemento humano (por ejemplo, un inhibidor de C5 humano, tal como un anticuerpo anti-C5 o un fragmento de unión a antígeno del mismo) descrito aquí puede formularse con uno o más agentes activos adicionales útiles para tratar un trastorno asociado al complemento (por ejemplo, cualquiera de los trastornos asociados al complemento descritos aquí, tales como APS, CAPS, aHUS, enfermedad de Degos, síndrome HELLP) o mejorar un síntoma de los mismos. Por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 se puede formular con un antihipertensivo, un anticoagulante y/o un esteroide (por ejemplo, un corticosteroide). Los ejemplos de anticoagulantes incluyen, por ejemplo, warfarina (Coumadin), aspirina, heparina, fenindiona, fondaparinux, idraparinux, e inhibidores de la trombina (por ejemplo, argatroban, lepirudin, bivalirudin, o dabigatrán). Un inhibidor de C5 humano (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, un anticuerpo anti-C5a, o un anticuerpo anti-C5b) también se puede formular con un agente fibrinolítico (por ejemplo, ancrod, ácido £-aminocaproico, antiplasmina-a1, prostaciclina, y defibrotida), ciclofosfamida, o un agente anticitocina para el tratamiento de CAPS. Los agentes anticitocinas incluyen, por ejemplo, anticuerpos o receptores solubles que se unen y modulan la actividad de la citocina (por ejemplo, una citocina proinflamatoria tal como TNF). Los ejemplos de agentes anticitocinas incluyen, por ejemplo, un inhibidor de TNF tal como un receptor de TNF soluble (por ejemplo, etanercept; Enbrel®) o un anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, infliximab; Remicade®). En algunas realizaciones, el inhibidor se puede formular con un agente anti-CD20 tal como rituximab (Rituxan™; Biogen Idec, Cambridge, MA). En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 humano se puede formular para la administración a un sujeto junto con terapia de inmunoglobulina intravenosa (IVIG) o con intercambio de plasma.
Cuando el inhibidor de C5 humano se va a usar en combinación con un segundo agente activo, o cuando se van a usar dos o más inhibidores de C5 humano (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5a y un anticuerpo anti-C5b), los agentes pueden formularse por separado o juntos. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas respectivas pueden mezclarse, por ejemplo justo antes de la administración, y administrarse juntas, o pueden administrarse por separado, por ejemplo al mismo tiempo o en momentos diferentes (véase más abajo).
Como se describió anteriormente, una composición se puede formular de modo que incluya una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de C5 humano (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un fragmento de unión a antígeno del mismo), o la composición se puede formular para incluir una cantidad subterapéutica del inhibidor y una cantidad subterapéutica de uno o más agentes activos adicionales, de manera que los componentes en total sean terapéuticamente efectivos para tratar un trastorno asociado al complemento, tales como cualquiera de los descritos aquí. En algunas realizaciones, una composición se puede formular para incluir dos o más inhibidores de C5 humano, cada uno en dosis subterapéuticas, de modo que los inhibidores en total estén en una concentración que sea terapéuticamente eficaz para tratar un trastorno asociado al complemento, tal como, por ejemplo, aHUS, CAPS, enfermedad de Degos, o síndrome HELLP. Los métodos para determinar una dosis terapéuticamente eficaz (por ejemplo, una dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-C5) son conocidos en la técnica, y se describen aquí.
Métodos para producir un anticuerpo
En la técnica se conocen métodos adecuados para producir un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, un anticuerpo anti-C5a, y/o un anticuerpo anti-C5b), o fragmentos de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la descripción (véase, por ejemplo, la patente U.S. núm. 6.355.245), y se describen aquí. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales anti-C5 pueden generarse usando células que expresan el componente C5 del complemento, un polipéptido C5, o un fragmento antigénico del polipéptido C5 (por ejemplo, C5a o C5b), como un inmunógeno, aumentando así una respuesta inmunitaria en animales, de los cuales pueden aislarse células productoras de anticuerpos y, a su vez, anticuerpos monoclonales. La secuencia de dichos anticuerpos puede determinarse, y los anticuerpos o variantes de los mismos pueden producirse mediante técnicas recombinantes. Pueden usarse técnicas recombinantes para producir anticuerpos quiméricos, injertados con CDR, humanizados y completamente humanos en base a la secuencia de los anticuerpos monoclonales, así como polipéptidos capaces de unirse al componente C5 del complemento humano.
Además, los anticuerpos derivados de bibliotecas recombinantes ("anticuerpos de fagos") se pueden seleccionar usando, por ejemplo, células que expresan C5, o polipéptidos derivados de las mismas, como cebo para aislar los anticuerpos o polipéptidos sobre la base de la especificidad de la diana. La producción y el aislamiento de anticuerpos anti-C5 no humanos y quiméricos están dentro del alcance del experto.
La tecnología de ADN recombinante se puede usar para modificar una o más características de los anticuerpos producidos en células no humanas. Por lo tanto, se pueden construir anticuerpos quiméricos para disminuir la inmunogenicidad de los mismos en aplicaciones diagnósticas o terapéuticas. Además, la inmunogenicidad se puede minimizar humanizando los anticuerpos mediante injerto de CDR y, opcionalmente, modificación del marco. Véanse las patentes U.S. núms. 5.225.539 y 7.393648.
Los anticuerpos se pueden obtener a partir de suero animal o, en el caso de anticuerpos monoclonales o fragmentos de los mismos, producir en cultivo celular. La tecnología de ADN recombinante se puede usar para producir los anticuerpos según el procedimiento establecido, incluyendo procedimientos en cultivos de células bacterianas o preferiblemente de mamíferos. El sistema de cultivo celular seleccionado segrega preferiblemente el producto de anticuerpo.
En otra realización, un procedimiento para la producción de un anticuerpo descrito aquí incluye el cultivo de un hospedante, por ejemplo E. coli o una célula de mamífero, que se ha transformado con un vector híbrido. El vector incluye uno o más casetes de expresión que contienen un promotor ligado operativamente a una primera secuencia de ADN que codifica un péptido señal ligado en el marco de lectura adecuado a una segunda secuencia de ADN que codifica la proteína del anticuerpo. A continuación, la proteína del anticuerpo se recoge y se aísla. Opcionalmente, el casete de expresión puede incluir un promotor ligado operativamente a secuencias de ADN policistrónico (por ejemplo, bicistrónico) que codifican proteínas de anticuerpos, cada una de ellas ligada operativamente de forma individual a un péptido señal en el marco de lectura adecuado.
La multiplicación de células de hibridoma o células hospedantes de mamífero in vitro se lleva a cabo en medios de cultivo adecuados, que incluyen los medios de cultivo estándar habituales (tales como, por ejemplo, medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) o medio RPMI 1640), opcionalmente reabastecidos con suero de mamífero (por ejemplo, suero fetal de ternero), u oligoelementos y suplementos de mantenimiento del crecimiento (por ejemplo, células alimentadoras tales como células normales de exudado peritoneal de ratón, células de bazo, macrófagos de médula ósea, 2-aminoetanol, insulina, transferrina, lipoproteína de baja densidad, ácido oleico, o similares). La multiplicación de células hospedantes que son células bacterianas o células de levadura se lleva a cabo igualmente en medios de cultivo adecuados conocidos en la técnica. Por ejemplo, para bacterias, los medios de cultivo adecuados incluyen medio LE, NZCYM, NZYM, NZM, caldo Terrific Broth, So B, s Oc , 2 xYT, o Medio Mínimo M9. Para la levadura, los medios de cultivo adecuados incluyen medio YPD, YEPD, Medio Mínimo, o Medio de Abandono Mínimo Completo.
La producción in vitro proporciona preparaciones de anticuerpos relativamente puras, y permite aumentar la producción para dar grandes cantidades de los anticuerpos deseados. Las técnicas para el cultivo de células bacterianas, levaduras, vegetales, o células de mamíferos son conocidas en la técnica, e incluyen cultivo en suspensión homogéneo (por ejemplo, en un reactor de aire o en un reactor de agitación continua) y cultivo de células inmovilizadas o atrapadas (por ejemplo, en fibras huecas, microcápsulas, en microesferas de agarosa, o cartuchos de cerámica).
También se pueden obtener grandes cantidades de los anticuerpos deseados multiplicando células de mamífero in vivo. Para este fin, las células de hibridoma que producen los anticuerpos deseados se inyectan en mamíferos histocompatibles para provocar el crecimiento de tumores productores de anticuerpos. Opcionalmente, los animales se ceban con un hidrocarburo, especialmente aceites minerales tal como pristano (tetrametilpentadecano), antes de la inyección. Después de una a tres semanas, los anticuerpos se aíslan de los fluidos corporales de esos mamíferos. Por ejemplo, las células de hibridoma obtenidas mediante la fusión de células de mieloma adecuadas con células de bazo productoras de anticuerpos procedentes de ratones Balb/c, o células transfectadas derivadas de la línea celular de hibridoma Sp2/0 que producen los anticuerpos deseados, se inyectan por vía intraperitoneal en ratones Balb/c opcionalmente tratados previamente con pristano. Después de una o dos semanas, se extrae líquido ascítico de los animales.
Las técnicas anteriores, y otras, se analizan, por ejemplo, en Kohler y Milstein, (1975) Nature 256:495-497; patente U.S. núm. 4.376.110; Harlow y Lane, Antibodies: a Laboratory Manual, (1988) Cold Spring Harbor, cuyas descripciones se incorporan aquí como referencia. Las técnicas para la preparación de moléculas de anticuerpos recombinantes se describen en las referencias anteriores, y también, por ejemplo, en: WO97/08320; patente U.S. núm. 5.427.908; patente U.S. núm. 5.508.717; Smith (1985) Science 225:1315-1317; Parmley y Smith (1988) Gene 73:305-318; De La Cruz et al. (1988) Journal of Biological Chemistry 263:4318-4322; patente U.S. núm. 5.403.484; patente U.S. núm.
5.223.409; WO88/06630; WO92/15679; patente U.S. núm. 5.780.279; patente U.S. núm. 5.571.698; patente U.S. núm.
6.040.136; Davis et al. (1999) Cancer Metastasis Rev. 18(4):421 -5; y Taylor et al. (1992) Nucleic Acids Research 20: 6287-6295; Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(2): 722-727.
Los sobrenadantes del cultivo celular se analizan en busca de los anticuerpos deseados, preferentemente mediante tinción inmunofluorescente de células que expresan el componente C5 del complemento, mediante inmunotransferencia, mediante un inmunoensayo enzimático, por ejemplo un ensayo sándwich o un ensayo de puntos, o un radioinmunoensayo.
Para el aislamiento de los anticuerpos, las inmunoglobulinas en los sobrenadantes del cultivo o en el líquido ascítico pueden concentrarse, por ejemplo, mediante precipitación con sulfato de amonio, diálisis frente a material higroscópico tal como polietilenglicol, filtración a través de membranas selectivas, o similares. Si es necesario y/o se desea, los anticuerpos se purifican mediante los métodos cromatográficos habituales, por ejemplo filtración en gel, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía sobre DEAE-celulosa y/o cromatografía de (inmuno)afinidad, por ejemplo cromatografía de afinidad con uno o más polipéptidos de superficie derivados de una línea celular que expresa el componente C5 del complemento, o con Proteína-A o -G.
Otra realización proporciona un procedimiento para la preparación de una línea celular bacteriana que segrega anticuerpos dirigidos contra una proteína C5 en un mamífero adecuado. Por ejemplo, un conejo se inmuniza con muestras reunidas procedentes de tejido o células que expresan C5, o con polipéptido C5 o fragmentos del mismo. Se construye una biblioteca de presentación de fagos producida a partir del conejo inmunizado, y se criba para los anticuerpos deseados según métodos bien conocidos en la técnica (tales como, por ejemplo, los métodos descritos en las diversas referencias).
También se describen células de hibridoma que segregan los anticuerpos monoclonales. Las células de hibridoma preferidas son genéticamente estables, segregan los anticuerpos monoclonales descritos aquí de la especificidad deseada, y pueden expandirse a partir de cultivos ultracongelados mediante descongelación y propagación in vitro o como líquido ascítico in vivo.
Se proporciona un procedimiento para la preparación de una línea celular de hibridoma que segrega anticuerpos monoclonales contra una proteína del componente C5 del complemento. En ese procedimiento, un mamífero adecuado, por ejemplo un ratón Balb/c, se inmuniza con uno o más polipéptidos o fragmentos antigénicos de C5, o con uno o más polipéptidos o fragmentos antigénicos derivados de una célula que expresa C5, la propia célula que expresa C5, o un vehículo antigénico que contiene un polipéptido purificado como se describe. Las células productoras de anticuerpos del mamífero inmunizado se hacen crecer brevemente en cultivo, o se fusionan con células de una línea celular de mieloma adecuada. Las células híbridas obtenidas en la fusión se clonan, y se seleccionan los clones celulares que segregan los anticuerpos deseados. Por ejemplo, células de bazo de ratones Balb/c inmunizados con una línea celular de leucemia linfocítica crónica (LLC) que expresa C5 se fusionan con células de la línea celular de mieloma PAI o la línea celular de mieloma Sp2/0-Ag 14. Las células híbridas obtenidas se criban entonces para detectar la secreción de los anticuerpos deseados, y las células de hibridoma positivas se clonan.
Los métodos para preparar una línea celular de hibridoma incluyen inmunizar ratones Balb/c inyectando por vía subcutánea y/o intraperitoneal una composición inmunogénica que contiene proteína C5 humana (o un fragmento inmunogénico de la misma) varias veces, por ejemplo cuatro a seis veces, durante varios meses, por ejemplo entre dos y cuatro meses. Las células de bazo de los ratones inmunizados se toman dos a cuatro días después de la última inyección, y se fusionan con células de la línea celular de mieloma PAI en presencia de un promotor de fusión, preferiblemente polietilenglicol. Preferiblemente, las células de mieloma se fusionan con un exceso de tres a veinte veces de células de bazo de los ratones inmunizados, en una disolución que contiene alrededor de 30% a alrededor de 50% de polietilenglicol de un peso molecular de alrededor de 4000. Después de la fusión, las células se expanden en medios de cultivo adecuados como se describe más arriba, complementados con un medio de selección, por ejemplo medio HAT, a intervalos regulares para evitar que las células de mieloma normales crezcan más que las células de hibridoma deseadas.
Los anticuerpos y fragmentos de los mismos pueden ser "quiméricos". Los anticuerpos quiméricos y sus fragmentos de unión a antígeno comprenden porciones de dos o más especies diferentes (por ejemplo, ratón y ser humano). Los anticuerpos quiméricos se pueden producir con regiones variables de ratón de especificidad deseada empalmadas en segmentos de genes de dominio constante humano (por ejemplo, patente U.S. núm. 4.816.567). De esta manera, los anticuerpos no humanos pueden modificarse para hacerlos más adecuados para la aplicación clínica humana (por ejemplo, métodos para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento en un sujeto humano).
Los anticuerpos monoclonales de la presente descripción incluyen formas "humanizadas" de los anticuerpos no humanos (por ejemplo, de ratón). Los mAbs humanizados o injertados con CDR son particularmente útiles como agentes terapéuticos para seres humanos debido a que no se eliminan de la circulación tan rápidamente como los anticuerpos de ratón y normalmente no provocan una reacción inmunitaria adversa. Los métodos para preparar anticuerpos humanizados son generalmente bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la humanización se puede realizar esencialmente siguiendo el método de Winter y colaboradores (véanse, por ejemplo, Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; and Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536), sustituyendo las CDR o secuencias de CDR de roedor por las secuencias correspondientes de un anticuerpo humano. Véase también, por ejemplo, Staelens et al. (2006) Mol Immunol 43:1243-1257. En algunas realizaciones, las formas humanizadas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, de ratón) son anticuerpos humanos (anticuerpo receptor) en los que los restos de la región hipervariable (CDR) del anticuerpo receptor se reemplazan por restos de la región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como un ratón, rata, conejo o primate no humano que tenga la especificidad, afinidad y capacidad de unión deseadas. En algunos casos, los restos de la región marco de la inmunoglobulina humana también se reemplazan por restos no humanos correspondientes (las denominadas "mutaciones retroactivas"). Además, las bibliotecas de presentación de fagos se pueden usar para variar los aminoácidos en las posiciones escogidas dentro de la secuencia del anticuerpo. Las propiedades de un anticuerpo humanizado también se ven afectadas por la elección de la región estructural humana. Además, los anticuerpos humanizados y quimerizados se pueden modificar para que comprendan restos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante, a fin de mejorar aún más las propiedades del anticuerpo, tal como, por ejemplo, la afinidad o la función efectora.
En la descripción también se proporcionan anticuerpos completamente humanos. La expresión "anticuerpo humano" incluye anticuerpos que tienen regiones variables y constantes (si están presentes) derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos humanos pueden incluir restos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica del sitio in vitro, o por mutación somática en vivo). Sin embargo, la expresión "anticuerpo humano" no incluye anticuerpos en los que las secuencias de CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, se han injertado en secuencias estructurales humanas (es decir, anticuerpos humanizados). Los anticuerpos humanos o completamente humanos pueden derivar de ratones transgénicos que portan genes de anticuerpos humanos (que portan los exones variable (V), diversidad (D), unión (J), y constante (C)), o de células humanas. Por ejemplo, ahora es posible producir animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que son capaces, tras la inmunización, de producir un repertorio completo de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena. (Véanse, por ejemplo, Jakobovits et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551; Jakobovits et al. (1993) Nature 362:255-258; Bruggemann et al. (1993) Year in Immunol. 7:33; y Duchosal et al. (1992) Nature 355:258.) Las cepas de ratones transgénicos pueden diseñarse para que contengan secuencias génicas de genes de inmunoglobulina humana no reordenados. Las secuencias humanas pueden codificar tanto las cadenas pesadas como las ligeras de los anticuerpos humanos y funcionarían correctamente en los ratones, experimentando un reordenamiento para proporcionar un amplio repertorio de anticuerpos similar al de los humanos. Los ratones transgénicos se pueden inmunizar con la proteína diana (por ejemplo, una proteína del componente C5 del complemento, fragmentos de la misma, o células que expresan la proteína C5) para crear un conjunto diverso de anticuerpos específicos y su ARN codificante. Los ácidos nucleicos que codifican los componentes de la cadena de anticuerpos de dichos anticuerpos pueden clonarse entonces a partir del animal en un vector de presentación. Típicamente, se clonan poblaciones separadas de ácidos nucleicos que codifican secuencias de cadenas ligeras y pesadas, y las poblaciones separadas se recombinan después al insertarlas en el vector, de modo que cualquier copia dada del vector recibe una combinación aleatoria de una cadena pesada y una ligera. El vector está diseñado para expresar cadenas de anticuerpos para que puedan ensamblarse y presentarse en la superficie exterior de un paquete de presentación que contiene el vector. Por ejemplo, las cadenas de anticuerpos se pueden expresar como proteínas de fusión con una proteína de cubierta de fago de la superficie exterior del fago. Posteriormente, los paquetes de presentación pueden examinarse para detectar anticuerpos que se unen a una diana.
Además, los anticuerpos humanos pueden derivar de bibliotecas de presentación de fagos (Hoogenboom et al. (1991) J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597; and Vaughan et al. (1996) Nature Biotech 14:309 (1996)). Se pueden crear bibliotecas de fagos sintéticos que usan combinaciones aleatorias de regiones V de anticuerpos humanos sintéticos. Por selección sobre antígeno, pueden fabricarse anticuerpos totalmente humanos en los que las regiones V son de naturaleza muy parecida a la humana. Véase, por ejemplo, las patentes U.S. núms.
6.794.132, 6.680.209, 4.634.666, y Ostberg et al. (1983), Hybridoma 2:361-367.
Para la generación de anticuerpos humanos, véanse también Mendez et al. (1998) Nature Genetics 15:146-156, Green and Jakobovits (1998) J. Exp. Med. 188:483-495, Los anticuerpos humanos se analizan y describen con más detalle en las patentes U.S. núms.: 5.939.598; 6.673.986; 6.114.598; 6.075.181; 6.162.963; 6.150.584; 6.713.610; y 6.657.103, así como en las Publicaciones de Solicitudes de Patentes U.S. núms. 2003-0229905 A1, 2004-0010810 A1, US 2004-0093622 A1, 2006-0040363 A1, 2005-0054055 A1, 2005-0076395 A1, 2005-0287630 A1. Véanse también las Publicaciones Internacionales núms. WO 94/02602, w O 96/34096, y WO 98/24893, y la patente europea núm. EP 0463 151 B1.
En un enfoque alternativo, otros, incluido GenPharm International, Inc., han utilizado un enfoque de "minilocus". En el enfoque de minilocus, se imita un locus Ig exógeno mediante la inclusión de piezas (genes individuales) del locus Ig. Así, uno o más genes Vh, uno o más genes Dh, uno o más genes Jh, una región constante mu, y una segunda región constante (preferiblemente una región constante gamma) se forman en un constructo para la inserción en un animal. Este enfoque se describe, por ejemplo, en las patentes U.S. núms.: 5.545.807; 5.545.806; 5.625.825; 5.625.126; 5.633.425; 5.661.016; 5.770.429; 5.789.650; y 5.814.318; 5.591.669; 5.612.205; 5.721.367; 5.789.215; 5.643.763; 5.569.825; 5.877.397; 6.300.129; 5.874.299; 6.255.458; y 7.041 871. Véanse también la Patente Europea núms. 0 546 073 B1, las Publicaciones de Patentes Internacionales Nos. WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852, y WO 98/248 84. Véanse además, Taylor et al. (1992) Nucleic Acids Res. 20: 6287; Chen et al. (1993) Int. Immunol. 5: 647; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 3720-4; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4: 117; Lonberg et al. (1994) Nature 368: 856-859; Taylor et al. (1994) International Immunology 6: 579-591; Tuaillon et al. (1995) J. Immunol. 154: 6453-65; Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845; y Tuaillon et al. (2000) Eur. J. Immunol. 10: 29983005.
En ciertas realizaciones, se proporcionan anticuerpos anti-C5 desinmunizados, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos. Los anticuerpos desinmunizados, o sus fragmentos de unión a antígeno, son anticuerpos que se han modificado para hacer que el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno no sea inmunogénico, o sea menos inmunogénico, para una especie dada (por ejemplo, para un ser humano). La desinmunización se puede lograr modificando el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno del mismo utilizando cualquiera de una variedad de técnicas conocidas por los expertos en la técnica (véanse, por ejemplo, las Publicaciones PCT núms. WO 04/108158 y WO 00/34317). Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo puede desinmunizarse identificando epítopos de células T y/o epítopos de células B potenciales dentro de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, y eliminando uno o más de los posibles epítopos de células T y/o epítopos de células B del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, por ejemplo usando técnicas recombinantes. El anticuerpo modificado o fragmento de unión a antígeno del mismo puede entonces opcionalmente producirse y analizarse para identificar anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos que han retenido una o más actividades biológicas deseadas, tal como, por ejemplo, afinidad de unión, pero tienen inmunogenicidad reducida. Los métodos para identificar epítopos de células T y/o epítopos de células B potenciales pueden llevarse a cabo usando técnicas conocidas en la técnica, tales como, por ejemplo, métodos computacionales (véase, por ejemplo, la Publicación PCT núm. WO 02/069232), técnicas in vitro o in silico, y ensayos biológicos o métodos físicos (tales como, por ejemplo, la determinación de la unión de péptidos a moléculas MHC, la determinación de la unión de complejos péptido:MHC a los receptores de células T de la especie que va a recibir el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, el ensayo de la proteína o partes peptídicas de la misma usando animales transgénicos con las moléculas MHC de la especie que va a recibir el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo, o el ensayo con animales transgénicos reconstituidos con células del sistema inmune de la especie que va a recibir el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, etc.). En diversas realizaciones, los anticuerpos anti-C5 desinmunizados descritos aquí incluyen fragmentos de unión a antígeno desinmunizados, Fab, Fv, scFv, Fab' y F(ab')2, anticuerpos monoclonales, anticuerpos murinos, anticuerpos manipulados (tales como, por ejemplo, anticuerpos quiméricos, monocatenarios, injertados con CDR, humanizados, totalmente humanos, y anticuerpos seleccionados artificialmente), anticuerpos sintéticos y anticuerpos semisintéticos.
Se produce un ADN recombinante que comprende un inserto que codifica un dominio variable de cadena pesada y/o un dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo anti-C5 o una línea celular que expresa la proteína C5. El término ADN incluye ADN codificantes monocatenarios, ADN bicatenarios que consisten en dichos ADN codificantes y en ADN complementarios a los mismos, o estos mismos ADN complementarios (monocatenarios).
Además, un ADN que codifica un dominio variable de cadena pesada y/o un dominio variable de cadena ligera de anticuerpos anti-C5 puede sintetizarse enzimática o químicamente para que contenga la secuencia de ADN auténtica que codifica un dominio variable de cadena pesada y/o el dominio variable de cadena ligera, o un mutante del mismo. Un mutante del ADN auténtico es un ADN que codifica un dominio variable de cadena pesada y/o un dominio variable de cadena ligera de los anticuerpos mencionados anteriormente en el que se eliminan, insertan o intercambian uno o más aminoácidos con uno o más aminoácidos. Preferiblemente, dicha o dichas modificaciones están fuera de las CDR del dominio variable de la cadena pesada y/o del dominio variable de la cadena ligera del anticuerpo en aplicaciones de humanización y optimización de la expresión. La expresión ADN mutante también abarca mutantes silenciosos en los que uno o más nucleótidos se reemplazan por otros nucleótidos con los nuevos codones que codifican el o los mismos aminoácidos. La expresión secuencia mutante también incluye una secuencia degenerada. Las secuencias degeneradas son degeneradas dentro del código genético en el sentido de que un número ilimitado de nucleótidos se reemplazan por otros nucleótidos sin que se produzca un cambio de la secuencia de aminoácidos codificada originalmente. Tales secuencias degeneradas pueden ser útiles debido a sus diferentes sitios de restricción y/o frecuencia de codones particulares que son preferidos por el hospedante específico, particularmente E. coli, para obtener una expresión óptima del dominio variable murino de cadena pesada y/o un dominio variable murino de cadena ligera.
El término mutante pretende incluir un mutante de ADN obtenido por mutagénesis in vitro del ADN auténtico según métodos conocidos en la técnica.
Para el ensamblaje de moléculas de inmunoglobulina tetrámeras completas y la expresión de anticuerpos quiméricos, los insertos de ADN recombinante que codifican dominios variables de cadena ligera y pesada se fusionan con los ADN correspondientes que codifican dominios constantes de cadena ligera y pesada, después se transfieren a las células hospedantes apropiadas, por ejemplo después de la incorporación en vectores híbridos.
Se pueden usar ADN recombinantes que incluyen un inserto que codifica un dominio variable murino de cadena pesada de un anticuerpo anti-C5 o una línea celular que expresa C5, fusionado con un dominio constante humano IgG, por ejemplo y 1, y 2, y3 o y4, en realizaciones particulares, y 1 or y 4. También se proporcionan ADN recombinantes que incluyen un inserto que codifica un dominio variable murino de cadena ligera de un anticuerpo, fusionado con un dominio constante humano k o A, preferiblemente k .
Otra realización se refiere a los ADN recombinantes que codifican un polipéptido recombinante en el que el dominio variable de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena ligera están unidos por medio de un grupo espaciador, que comprende opcionalmente una secuencia señal que facilita el procesamiento del anticuerpo en la célula hospedante y/o una secuencia de ADN que codifica un péptido que facilita la purificación del anticuerpo y/o un sitio de escisión y/o un espaciador peptídico y/o un agente.
En consecuencia, los anticuerpos monoclonales o de unión a antígeno pueden ser anticuerpos desnudos o fragmentos de unión a antígeno que no están conjugados con otros agentes, por ejemplo un agente terapéutico o un marcador detectable. Alternativamente, el anticuerpo monoclonal o fragmento de unión a antígeno puede conjugarse con un agente tal como, por ejemplo, un agente citotóxico, una molécula pequeña, una hormona, una enzima, un factor de crecimiento, una citocina, una ribozima, un peptidomimético, un sustancia química, un profármaco, una molécula de ácido nucleico que incluye secuencias codificantes (tales como antisentido, ARNi, constructos dirigidos contra genes, etc.), o una etiqueta detectable (por ejemplo, un agente de contraste de RMN o rayos X, molécula fluorescente, etc.). En ciertas realizaciones, un anticuerpo anti-C5 o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, Fab, Fv, scFv monocatenario, Fab', y F(ab')2) está unido a una molécula que aumenta la vida media del anticuerpo o fragmento de unión al antígeno (véase más arriba).
Para la expresión de genes clonados de cadena pesada y cadena ligera en células de mamífero, hay disponibles varios sistemas de vectores posibles. Una clase de vectores se basa en la integración de las secuencias génicas deseadas en el genoma de la célula hospedante. Las células que tienen ADN integrado de forma estable se pueden seleccionar introduciendo simultáneamente genes de resistencia a fármacos, tales como E. co ligpt (Mulligan and Berg (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78:2072) o Tn5 neo (Southern and Berg (1982) Mol. Appl. Genet. 1:327). El gen marcador seleccionable puede ligarse a las secuencias del gen de ADN que se va a expresar, o introducirse en la misma célula mediante cotransfección (Wigler et al. (1979) Cell 16:77). Una segunda clase de vectores utiliza elementos de ADN que confieren capacidades de replicación autónomas a un plásmido extracromosómico. Estos vectores pueden derivar de virus animales, tales como el virus del papiloma bovino (Sarver et al. (1982) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79:7147), virus del polioma (Deans et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:1292), o virus SV40 (Lusky and Botchan (1981) Nature 293:79).
Dado que un ADNc de inmunoglobulina se compone únicamente de secuencias que representan el ARNm maduro que codifica una proteína de anticuerpo, para la síntesis de ARNm de inmunoglobulina se requieren elementos de expresión génica adicionales que regulan la transcripción del gen y procesan el ARN. Estos elementos pueden incluir señales de ayuste, promotores de la transcripción, incluyendo promotores inducibles, potenciadores, y señales de terminación. Los vectores de expresión de ADNc que incorporan dichos elementos incluyen los descritos por Okayama y Berg (1983) Mol. Cell Biol. 3:280; Cepko et al. (1984) Cell 37:1053; y Kaufman (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:689.
Como es evidente a partir de la descripción, los anticuerpos que se unen a los componentes del complemento humano (por ejemplo, anticuerpos que se unen a C5, C5b, o C5a) pueden usarse en terapias (por ejemplo, terapias para un trastorno asociado al complemento), incluyendo terapias de combinación, como así como en la monitorización de la progresión de la enfermedad.
En las realizaciones terapéuticas de la presente descripción, se contemplan anticuerpos biespecíficos. Los anticuerpos biespecíficos son anticuerpos monoclonales, preferiblemente humanos o humanizados, que tienen especificidades de unión para al menos dos antígenos diferentes. En el presente caso, una de las especificidades de unión es para el antígeno del componente C5 del complemento humano y la otra es para cualquier otro antígeno.
Los métodos para producir anticuerpos biespecíficos están dentro del alcance de los expertos en la técnica. Tradicionalmente, la producción recombinante de anticuerpos biespecíficos se basa en la coexpresión de dos pares de cadena pesada/cadena ligera de inmunoglobulina, en la que las dos cadenas pesadas tienen especificidades diferentes (Milstein y Cuello (1983) Nature 305:537-539). Los dominios variables de anticuerpos con las especificidades de unión deseadas (sitios de combinación de anticuerpo-antígeno) pueden fusionarse con secuencias de dominios constantes de inmunoglobulina. La fusión preferiblemente es con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina, que incluye al menos parte de las regiones bisagra, CH2, y CH3. Los ADN que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y, si se desea, la cadena ligera de inmunoglobulina, se insertan en vectores de expresión separados, y se cotransfectan en un organismo hospedante adecuado. Para obtener más detalles de los métodos actualmente conocidos ilustrativos para generar anticuerpos biespecíficos, véanse, por ejemplo, Suresh et al. (1986) Methods in Enzymology 121:210; Publicación PCT núm. WO 96/27011; Brennan et al. (1985) Science 229:81; Shalaby et al., J. Exp. Med. (1992) 175:217-225; Kostelny et al. (1992) J. Immunol.
148(5):1547-1553: Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Gruber et al. (1994) J. Immunol.
152:5368; y Tutt et al. (1991) J. Immunol. 147:60. Los anticuerpos biespecíficos también incluyen anticuerpos reticulados o heteroconjugados. Los anticuerpos heteroconjugados pueden generarse usando cualquier método de reticulación conveniente. Los agentes de reticulación adecuados son bien conocidos en la técnica, y se divulgan en la patente de Estados Unidos núm. 4.676.980, junto con varias técnicas de reticulación.
También se han descrito diversas técnicas para producir y aislar fragmentos de anticuerpos biespecíficos directamente a partir de cultivos de células recombinantes. Por ejemplo, se han producido anticuerpos biespecíficos usando cremalleras de leucina. (Véase, por ejemplo, Kostelny et al. (1992) J. Immunol 148(5):1547-1553). Los péptidos con cremallera de leucina de las proteínas Fos y Jun pueden unirse a las porciones Fab' de dos anticuerpos diferentes mediante fusión génica. Los homodímeros de anticuerpos pueden reducirse en la región bisagra para formar monómeros, y luego volver a oxidarse para formar los heterodímeros de anticuerpos. Este método también se puede utilizar para la producción de homodímeros de anticuerpos. La tecnología de "diacuerpo" descrita por Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 ha proporcionado un mecanismo alternativo para obtener fragmentos de anticuerpos biespecíficos. Los fragmentos comprenden un dominio variable de la cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de la cadena ligera (VL) mediante un conector que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena. Por consiguiente, los dominios VH y VL de un fragmento se obligan a emparejarse con los dominios VL y VH complementarios de otro fragmento, formando de ese modo dos sitios de unión a antígeno. También se ha dado a conocer otra estrategia para producir fragmentos de anticuerpos biespecíficos mediante el uso de dímeros de Fv monocatenario (scFv). (Véase, por ejemplo, Gruber et al. (1994) J. Immunol. 152:5368.) Alternativamente, los anticuerpos pueden ser "anticuerpos lineales", como se describe, por ejemplo, en Zapata et al. (1995) Protein Eng. 8(10):1057-1062. Brevemente, estos anticuerpos comprenden un par de segmentos Fd en tándem (Vn-CH1-Vn-Cn1) que forman un par de regiones de unión a antígeno. Los anticuerpos lineales pueden ser biespecíficos o monoespecíficos.
No de acuerdo con la invención reivindicada, la descripción también abarca formas variantes de anticuerpos biespecíficos, tales como las moléculas tetravalentes de inmunoglobulina de dominio variable dual (DVD-Ig) descritas en Wu et al. (2007) Nat Biotechnol 25(11):1290-1297. Las moléculas DVD-Ig se diseñan de modo que dos dominios variables de la cadena ligera (VL) diferentes de dos anticuerpos originales diferentes se liguen en tándem directamente o mediante un conector corto por técnicas de ADN recombinante, seguido del dominio constante de la cadena ligera. Los métodos para generar moléculas DVD-Ig a partir d dos anticuerpos originales se describen adicionalmente en, por ejemplo, las publicaciones PCT n.° WO 08/024188 y WO 07/024715.
Métodos de tratamiento
Las referencias a los métodos de tratamiento mediante terapia o cirugía, o métodos de diagnóstico in vivo en los ejemplos X, Y y Z de esta descripción, deben interpretarse como referencias a compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para uso en esos métodos".
Las composiciones descritas anteriormente (por ejemplo, cualquiera de los inhibidores de C5 descritos aquí, o composiciones farmacéuticas de los mismos) son útiles en, entre otros, métodos para tratar o prevenir una variedad de trastornos asociados con el complemento (por ejemplo, trastornos asociados con la AP o trastornos asociados con la CP) en un sujeto. Las composiciones se pueden administrar a un sujeto, por ejemplo un sujeto humano, usando una variedad de métodos que dependen, en parte, de la vía de administración. La vía puede ser, por ejemplo, inyección o infusión intravenosa (IV), inyección subcutánea (SC), inyección intraperitoneal (IP), inyección intrapulmonar, intraocular, o intramuscular. Ciertos inhibidores, por ejemplo moléculas pequeñas, se pueden administrar por vía oral a un sujeto.
La administración puede lograrse, por ejemplo, por infusión local, inyección, o por medio de un implante. El implante puede ser de un material poroso, no poroso, o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas sialastic, o fibras. El implante se puede configurar para la liberación sostenida o periódica de la composición al sujeto. (Véanse, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente U.S. núm. 20080241223; las patentes U.S. núms. 5.501.856; 4.863.457; y 3.710.795; EP488401; y EP 430539) La composición se puede administrar al sujeto por medio de un dispositivo implantable basado, por ejemplo, en sistemas de difusión, erosionables, o convectivos, por ejemplo bombas osmóticas, implantes biodegradables, sistemas de electrodifusión, sistemas de electroósmosis, bombas de presión de vapor, bombas electrolíticas, bombas efervescentes, bombas piezoeléctricas, sistemas basados en erosión, o sistemas electromecánicos.
Una dosis adecuada de un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5, tal como un anticuerpo anti-C5) descrito aquí, dosis la cual es capaz de tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento en un sujeto, puede depender de una variedad de factores que incluyen, por ejemplo, la edad, el sexo, y el peso de un sujeto a tratar, y el compuesto inhibidor particular usado. Por ejemplo, se puede requerir una dosis diferente de un anticuerpo anti-C5 para tratar a un sujeto con AR en comparación con la dosis de una molécula de ARNip específica de C5 que se requiere para tratar al mismo sujeto. Otros factores que afectan a la dosis administrada al sujeto incluyen, por ejemplo, el tipo o la gravedad del trastorno asociado al complemento. Por ejemplo, un sujeto que tiene AR puede requerir la administración de una dosis diferente de un anticuerpo anti-C5 que un sujeto con AMD. Otros factores pueden incluir, por ejemplo, otros trastornos médicos que afecten concurrente o previamente al sujeto, la salud general del sujeto, la disposición genética del sujeto, la dieta, el momento de la administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, y cualquier otra sustancia terapéutica adicional que se administra al sujeto. También debe entenderse que una dosificación específica y un régimen de tratamiento para cualquier sujeto en particular dependerán del criterio del médico tratante (por ejemplo, médico o enfermera).
Un anticuerpo descrito aquí se puede administrar como una dosis fija, o en una dosis de miligramo por kilogramo (mg/kg). En algunas realizaciones, la dosis también se puede escoger para reducir o evitar la producción de anticuerpos u otras respuestas inmunitarias del hospedante contra uno o más de los anticuerpos activos en la composición. Aunque de ninguna manera pretende ser limitante, las dosis ejemplares de un anticuerpo incluyen, por ejemplo, 1-100 pg/kg, 0.5-50 pg/kg, 0.1-100 pg/kg, 0.5-25 pg/kg, 1-20 pg/kg, y 1-10 pg/kg, 1-100 mg/kg, 0.5-50 mg/kg, 0.1-100 mg/kg, 0.5-25 mg/kg, 1-20 mg/kg, y 1-10 mg/kg. Las dosis ejemplares de un anticuerpo descrito aquí incluyen, sin limitación, 0.1 pg/kg, 0.5 pg/kg, 1.0 pg/kg, 2.0 pg/kg, 4 pg/kg, y 8 pg/kg, 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4 mg/kg, y 8 mg/kg. Se proporcionan aquí cantidades y programas de dosificación ejemplares adicionales (véanse, por ejemplo, las Tablas 1 y 2).
Una composición farmacéutica puede incluir una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5, tal como un anticuerpo anti-C5) descrito aquí. Dichas cantidades eficaces se pueden determinar fácilmente por un experto en la técnica basándose, en parte, en el efecto del anticuerpo administrado, o el efecto combinatorio del anticuerpo y uno o más agentes activos adicionales, si se usa más de un agente. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo descrito aquí también puede variar según factores tales como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo, y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo (y uno o más agentes activos adicionales) para provocar una respuesta deseada en el individuo, por ejemplo mejora de al menos un parámetro de la afección, por ejemplo mejora de al menos un síntoma del trastorno asociado al complemento. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo que se une a C5a y C5b puede inhibir (disminuir la gravedad o eliminar la aparición de) y/o prevenir un trastorno particular, y/o cualquiera de los síntomas del trastorno particular conocidos en la técnica o descritos aquí. Una cantidad terapéuticamente eficaz también es aquella en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial de la composición se ve compensado por los efectos terapéuticamente beneficiosos.
Las dosis humanas adecuadas de un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5) descritas aquí pueden evaluarse adicionalmente en, por ejemplo, estudios de escalada de dosis de Fase I. Véanse, por ejemplo, van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-171 S; Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, parte 1):523-531; y Hetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
Las expresiones "cantidad terapéuticamente eficaz" o "dosis terapéuticamente eficaz", o expresiones similares usadas aquí, pretenden significar una cantidad de un agente (por ejemplo, un inhibidor de C5) que provocará la respuesta biológica o médica deseada (por ejemplo, una mejora en uno o más síntomas de un trastorno asociado al complemento). En algunas realizaciones, una composición descrita aquí contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-C5. En algunas realizaciones, una composición descrita aquí contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un ARNip, que se une específicamente y promueve la inactivación del ARNm de C5 en una célula de mamífero. En algunas realizaciones, una composición descrita aquí contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo, que se une específicamente a C5a. En algunas realizaciones, la composición contiene cualquiera de los anticuerpos descritos aquí y uno o más (por ejemplo, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, u 11 o más) agentes terapéuticos adicionales, de manera que la composición en su conjunto es terapéuticamente eficaz. Por ejemplo, una composición puede contener un anticuerpo anti-C5 descrito aquí y un agente inmunosupresor, en la que el anticuerpo y el agente están cada uno en una concentración que, cuando se combinan, son terapéuticamente eficaces para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento en un sujeto.
La toxicidad y la eficacia terapéutica de dichas composiciones se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos conocidos en cultivos celulares o animales de experimentación (por ejemplo, modelos animales de cualquiera de los trastornos asociados al complemento descritos aquí). Estos procedimientos se pueden usar, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La relación de dosis entre efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico, y se puede expresar como la relación LD50/ED50. Se prefiere un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5, tal como un anticuerpo anti-C5, un anticuerpo anti-C5a, o un ácido nucleico que se une y promueve la inactivación del ARNm de C5 en una célula de mamífero) que muestra un alto índice terapéutico. Si bien pueden usarse composiciones que muestran efectos secundarios tóxicos, se debe tener cuidado para diseñar un sistema de administración que dirija dichos compuestos al sitio del tejido afectado y minimice el daño potencial a las células normales y, por lo tanto, reduzca los efectos secundarios.
Los datos obtenidos de los ensayos de cultivos celulares y los estudios en animales se pueden usar para formular un intervalo de dosificación para uso en seres humanos. La dosificación de dicho inhibidor generalmente se encuentra dentro de un intervalo de concentraciones circulantes del inhibidor que incluyen la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Para un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un anticuerpo anti-C5a) usado como se describe aquí (por ejemplo, para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento), la dosis terapéuticamente eficaz se puede estimar inicialmente a partir de ensayos de cultivos celulares. Se puede formular una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración plasmática circulante que incluya la IC50 (es decir, la concentración del compuesto de ensayo que consigue una inhibición de los síntomas a la mitad de la máxima) según se determina en cultivo celular. Dicha información se puede usar para determinar con mayor precisión las dosis útiles en seres humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de alta resolución o mediante ELISA.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, los métodos se pueden llevar a cabo junto con otras terapias para trastornos asociados al complemento. Por ejemplo, la composición se puede administrar a un sujeto al mismo tiempo, antes o después de la plasmaféresis, la terapia con IVIG, la infusión de plasma, o el intercambio de plasma. Véase, por ejemplo, Appel et al. (2005) J Am. Soc Nephrol. 16:1392-1404. En algunas realizaciones, un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un anticuerpo anti-C5a) descrito aquí no se administra junto con IVIG. En algunas realizaciones, la composición se puede administrar a un sujeto al mismo tiempo, antes o después de un trasplante de riñón. Se proporcionan aquí ejemplos de métodos para trasplantar un órgano (por ejemplo, un riñón) o tejido junto con ejemplos de programas de dosificación para un anticuerpo anti-C5.
Un "sujeto", como se usa aquí, puede ser cualquier mamífero. Por ejemplo, un sujeto puede ser un ser humano (por ejemplo, un paciente), un primate no humano (por ejemplo, mono, babuino, o chimpancé), un caballo, una vaca, un cerdo, una oveja, una cabra, un perro, un gato, un conejo, un conejillo de indias, un jerbo, un hámster, una rata, o un ratón. En algunas realizaciones, el sujeto es un infante (por ejemplo, un infante humano). En algunas realizaciones, el sujeto es una mujer.
Como se usa aquí, un sujeto "que necesita prevención", "que necesita tratamiento", o "que lo necesita", se refiere a alguien que, a juicio de un médico apropiado (por ejemplo, un médico, una enfermera, o una enfermera especialista en el caso de los seres humanos, un veterinario en el caso de los mamíferos no humanos), se beneficiaría razonablemente de un tratamiento determinado (tal como el tratamiento con una composición que comprende un inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5 tal como un anticuerpo anti-C5, un anticuerpo anti-C5a, o un ácido nucleico (por ejemplo, un ARNip, o ácido nucleico antisentido) que se une y promueve la inactivación de un ARNm del C5 en una célula de mamífero).
Como se describió anteriormente, los inhibidores del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5, tal como un anticuerpo anti-C5) descritos aquí pueden usarse para tratar una variedad de trastornos asociados al complemento, tales como, por ejemplo, trastornos asociados a la AP y/o trastornos asociados a la CP. Dichos trastornos incluyen, sin limitación, artritis reumatoide (AR); síndrome de anticuerpos antifosfolípidos; nefritis lúpica; lesión por isquemiareperfusión; síndrome urémico hemolítico atípico (aHUS); síndrome urémico hemolítico infeccioso o típico (tHUS); enfermedad por depósitos densos (DDD); neuromielitis óptica (NMO); neuropatía motora multifocal (MMN); esclerosis múltiple (EM); degeneración macular (por ejemplo, degeneración macular relacionada con la edad (AMD)); síndrome de hemólisis, enzimas hepáticas elevadas y plaquetas bajas (HELLP); púrpura trombocitopénica trombótica (TTP); pérdida fetal espontánea; vasculitis pauciinmune; epidermólisis ampollosa; pérdida fetal recurrente; y lesión cerebral traumática. (Véanse, por ejemplo, Holers (2008) Immunological Reviews 223:300-316 y Holers y Thurman (2004) Molecular Immunology 41:147-152.)
El trastorno asociado al complemento descrito aquí puede ser un trastorno vascular asociado al complemento, tal como un trastorno cardiovascular, miocarditis, un trastorno cerebrovascular, un trastorno vascular periférico (por ejemplo, musculoesquelético), un trastorno renovascular, un trastorno vascular mesentérico/entérico, vasculitis, púrpura de Henoch-Schonlein, nefritis, vasculitis asociada a lupus eritematoso sistémico, vasculitis asociada con artritis reumatoide, vasculitis por complejos inmunes, enfermedad de Takayasu, miocardiopatía dilatada, angiopatía diabética, enfermedad de Kawasaki (arteritis), embolia gaseosa venosa (VGE), y reestenosis después de la colocación de endoprótesis, aterectomía rotacional, y angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA). (Véase, por ejemplo, la Publicación de Solicitud de Patente U.S. núm. 20070172483.) Otros trastornos asociados al complemento incluyen, sin limitación, MG, CAD, dermatomiositis, enfermedad de Graves, aterosclerosis, enfermedad de Alzheimer, septicemia de respuesta inflamatoria sistémica, choque séptico, lesión de la médula espinal, glomerulonefritis, tiroiditis de Hashimoto, diabetes tipo I, psoriasis, pénfigo, AIHA, ITP, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Degos, síndrome antifosfolípido (APS), y APS catastrófico (CAPS).
Como se usa aquí, un sujeto "en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento" (por ejemplo, un trastorno asociado a la AP o un trastorno asociado a la CP) es un sujeto que tiene uno o más (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, u ocho o más) factores de riesgo para desarrollar el trastorno. Los factores de riesgo variarán dependiendo del trastorno particular asociado al complemento, pero son bien conocidos en la técnica de la medicina. Por ejemplo, los factores de riesgo para desarrollar DDD incluyen, por ejemplo, una predisposición a desarrollar la afección, es decir, antecedentes familiares de la afección o una predisposición genética a desarrollar la afección, tal como, por ejemplo, una o más mutaciones en el gen que codifica el factor H del complemento (CFH), 5 relacionado con el factor H del complemento (CFHR5), y/o componente C3 del complemento (C3). Dichas mutaciones asociadas a DDD, así como los métodos para determinar si un sujeto porta una o más de las mutaciones, son conocidas en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Licht et al. (2006) Kidney Int. 70:42-50; Zipfel et al. (2006) "The role of complement in membranoproliferative glomerulonephritis," En: Complement and Kidney Disease, Springer, Berlin, pages 199-221; Ault et al. (1997) J Biol. Chem. 272:25168-75; Abrera-Abeleda et al. (2006) J Med. Genet 43:582-589; Poznansky et al. (1989) J Immunol. 143:1254-1258; Jansen et al. (1998) Kidney Int. 53:331-349; y Hegasy et al. (2002) Am J Pathol 161:2027-2034. De este modo, un ser humano en riesgo de desarrollar DDD puede ser, por ejemplo, aquel que tiene una o más mutaciones asociadas a DDD en el gen que codifica CFH, o aquel con antecedentes familiares de desarrollo de la enfermedad.
Los factores de riesgo para la TTP son bien conocidos en el campo de la medicina, e incluyen, por ejemplo, una predisposición a desarrollar la afección, es decir, antecedentes familiares de la afección, o una predisposición genética a desarrollar la afección, tal como, por ejemplo, una o más mutaciones en el gen ADAMTS 13. Las mutaciones de ADAMTS 13 asociadas a TTP se revisan en detalle, por ejemplo, en Levy et al. (2001) Nature 413:488-494; Kokame et al. (2004) Semin. Hematol. 41:34-40; Licht et al. (2004) Kidney Int. 66:955-958; y Noris et al. (2005) J. Am. Soc. Nephrol. 16:1177-1183. Los factores de riesgo para la TTP también incluyen aquellas afecciones o agentes que se sabe que precipitan la TTP, o la recurrencia de la TTP, tales como, pero sin limitarse a, cáncer, infecciones bacterianas (por ejemplo, infecciones por Bartonella sp.), infecciones virales (por ejemplo, VIH y virus del sarcoma de Kaposi), embarazo, o cirugía. Véase, por ejemplo, Avery et al. (1998) American Journal of Hematology 58:148-149 y Tsai, más arriba). La TTP, o recurrencia de la TTP, también se ha asociado con el uso de ciertos agentes terapéuticos (fármacos) que incluyen, por ejemplo, ticlopidina, FK506, corticosteroides, tamoxifeno, o ciclosporina A (véase, por ejemplo, Gordon et al. (1997) Seminars in Hematology 34(2):140-147). Aquí en lo sucesivo, tales manifestaciones de TTP pueden denominarse, cuando corresponda, como, por ejemplo, "TTP asociada a infección", "TTP asociada al embarazo" o "TTP asociada a fármacos". De este modo, un ser humano en riesgo de desarrollar TTP puede ser, por ejemplo, aquel que tenga una o más mutaciones asociadas a TTP en el gen ADAMTS13. Un ser humano en riesgo de desarrollar una forma recurrente de TTP puede ser, por ejemplo, aquel que ha tenido TTP y tiene una infección, está embarazada, o se somete a una cirugía.
Los factores de riesgo para aHUS son bien conocidos en el técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, una predisposición a desarrollar la enfermedad, es decir, antecedentes familiares de la enfermedad, o una predisposición genética a desarrollar la enfermedad, tales como, por ejemplo, una o más mutaciones en el factor H del complemento (CFH), la proteína del cofactor de membrana (MCP; CD46), la proteína de unión a C4b, el factor B del complemento (CFB), o el factor I del complemento (CFI). (Véanse, por ejemplo, Warwicker et al. (1998) Kidney Int. 53:836-844; Richards et al. (2001) Am J Hum Genet 68:485-490; Caprioli et al. (2001) Am Soc Nephrol 12:297-307; Neuman et al. (2003) J Med Genet 40:676-681; Richards et al. (2006) Proc Natl Acad Sci USA 100:12966-12971; Fremeaux-Bacchi et al. (2005) J Am Soc Nephrol 17:2017-2025; Esparza-Gordillo et al. (2005) Hum Mol Genet 14:703-712; Goicoechea de Jorge et al. (2007) Proc Natl Acad Sci USA 104(1):240-245; Blom et al. (2008) J Immunol. 180(9):6385-91; y Fremeaux-Bacchi et al. (2004) J Medical Genet 41:e84). (Véase también Kavanagh et al. (2006) más arriba.) Los factores de riesgo también incluyen, por ejemplo, infección con Streptococcus pneumoniae, embarazo, cáncer, exposición a agentes anticancerígenos (por ejemplo, quinina, mitomicina C, cisplatino, o bleomicina), exposición a agentes inmunoterapéuticos (por ejemplo, ciclosporina, OKT3, o interferón), exposición a agentes antiplaquetarios (por ejemplo, ticlopidina o clopidogrel), infección por VIH, trasplante, enfermedad autoinmune, y aciduria metilmalónica y homocistinuria combinadas (cblC). Véanse, por ejemplo, Constantinescu et al. (2004) Am J Kidney Dis 43:976-982; George (2003) Curr Opin Hematol 10:339-344; Gottschall et al. (1994) Am J Hematol 47:283-289; Valavaara et al. (1985) Cancer 55:47-50; Miralbell et al. (1996) J Clin Oncol 14:579-585; Dragon-Durey et al. (2005) J Am Soc Nephrol 16:555-63; y Becker et al. (2004) Clin Infect Dis 39:S267-S275.
Los factores de riesgo de HELLP son bien conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, embarazo multípara, edad materna superior a 25 años, raza caucásica, aparición de preeclampsia o HELLP en un embarazo anterior, y antecedentes de embarazos deficientes. (Véanse, por ejemplo, Sahin et al. (2001) Nagoya Med J 44(3):145-152; Sullivan et al. (1994) Am J Obstet Gynecol 171:940-943; y Padden et al. (1999) Am Fam Physician 60(3):829-836.) Por ejemplo, una mujer caucásica embarazada que desarrolló preeclampsia durante un primer embarazo puede estar en riesgo de desarrollar el síndrome HELLP durante, o después, de un segundo embarazo.
Los factores de riesgo para CAD son bien conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, afecciones o agentes que se sabe que precipitan CAD, o recurrencia de CAD, tales como, pero sin limitarse a, neoplasias o infecciones (por ejemplo, infecciones bacterianas y virales). Las afecciones que se sabe que están asociadas al desarrollo de CAD incluyen, por ejemplo, infección por VIH (y SIDA), infección por hepatitis C, infección por Mycoplasma pneumoniae, infección por el virus de Epstein-Barr (EBV), infección por citomegalovirus (CMV), rubéola, o mononucleosis infecciosa. Las neoplasias asociadas con CAD incluyen, sin limitación, linfoma no de Hodgkin. Aquí en lo sucesivo, tales manifestaciones de CAD pueden denominarse, cuando corresponda, como, por ejemplo, "CAD asociada a infección" o "CAD asociada a neoplasia". Por lo tanto, un ser humano en riesgo de desarrollar CAD puede ser, por ejemplo, aquel que tenga una infección por VIH, rubéola, o un linfoma. Véanse también, por ejemplo, Gertz (2006) Hematology 1:19-23; Horwitz et al. (1977) Blood 50:195-202; Finland y Barnes (1958) AMA Arch Intern Med 191:462-466; Wang et al. (2004) Acta Paediatr Taiwan 45:293-295; Michaux et al. (1998) Ann Hematol 76:201-204; y Chang et al. (2004) Cancer Genet Cytogenet 152:66-69.
Los factores de riesgo de una microangiopatía trombótica (TMA) son bien conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, antecedentes médicos de aHUS, TTP, u otras afecciones asociadas con TMA, tales como lupus, cánceres, coagulación intravascular diseminada y otras coagulopatías, y preeclampsia. Véase, por ejemplo, Copelovitch y Kaplan (2008) Pediatr Nephrol 23(10):1761 -7.
Los factores de riesgo de la PCH son bien conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, afecciones o agentes que se sabe que precipitan la PCH, o la recurrencia de la PCH, tales como, pero sin limitarse a, neoplasias, infecciones (por ejemplo, infecciones bacterianas y virales), o ciertas vacunas (por ejemplo, vacuna contra el sarampión). Las afecciones que se sabe que están asociadas al desarrollo de PCH incluyen, por ejemplo, sífilis (una infección por Treponema palladium), sarampión, paperas, infección por el virus de la gripe, infección por el virus de la varicela-zoster, infección por citomegalovirus (CMV), infección por el virus de Epstein-Barr (EBV), infección por adenovirus, infección por parvovirus B19, infección por Coxsackie A9, infección por Haemophilus influenza, infección por Mycoplasma pneumoniae, e infección por Klebsiella pneumoniae. Véase, por ejemplo, Bunch et al. (1972) Arch Dis Child 47(252):299-300; Ziman et al. (2004) Transfusion 44(8): 1127-1128; Sokol et al. (1984) Acta Haematol 72(4): 245-257; Papalia et al. (2000) Br J Haematol 109(2): 328-9; Sokol et al. (1982) Acta Haematol 68(4):268-277; y Bell et al. (1973) Transfusion 13(3):138-141. Las neoplasias asociadas a PCH incluyen, sin limitación, tanto neoplasias sólidas como hematopoyéticas, tales como mielofibrosis, leucemia linfocítica crónica (LLC), y linfoma no de Hodgkin. Véanse, por ejemplo, Sharara et al. (1994) South Med J. 87(3):397-9; Sivakumaran et al. (1999) Br J Haematol 105(1): 278-9; Breccia et al. (2004) Eur J Haematol 73(4):304-6; y Wynn et al. (1998) Clin Lab Haematol 20(6):373-5. Aquí en lo sucesivo, tales manifestaciones de PCH pueden denominarse, cuando corresponda, como, por ejemplo, "PCH asociada a infección" o "PCH asociada a neoplasia". Por lo tanto, un ser humano en riesgo de desarrollar PCH puede ser, por ejemplo, aquel que tenga una infección por EBV o un linfoma.
Los factores de riesgo de MG son bien conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, una predisposición a desarrollar la afección, es decir, antecedentes familiares de la afección, o una predisposición genética a desarrollar la afección, tal como MG familiar. Por ejemplo, algunos tipos de HLA están asociados a un mayor riesgo de desarrollar MG. Los factores de riesgo para la Mg incluyen la ingestión o la exposición a ciertos fármacos que inducen la MG, tales como, pero sin limitarse a, D-penicilamina. Véanse, por ejemplo, Drosos et al. (1993) Clin Exp Rheumatol. 11 (4):387-91 y Kaeser et al. (1984) Acta Neurol Scand Suppl. 100:39-47. Como la MG puede ser episódica, un sujeto que haya experimentado previamente uno o más síntomas de MG puede estar en riesgo de recaída. Por lo tanto, un ser humano en riesgo de desarrollar MG puede ser, por ejemplo, aquel que tiene antecedentes familiares de MG, y/o aquel que ha ingerido o se le ha administrado un fármaco inductor de MG, tal como D-penicilamina.
Como se usa aquí, un sujeto "en riesgo de desarrollar CAPS" es un sujeto que tiene uno o más (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, u ocho o más) factores de riesgo para desarrollar el trastorno. Aproximadamente el 60% de las incidencias de CAPS están precedidas por un evento precipitante, tal como una infección. Por lo tanto, los factores de riesgo para CAPS incluyen aquellas afecciones que se sabe que precipitan CAPS, tales como, pero sin limitarse a, ciertos tipos de cáncer (por ejemplo, cáncer gástrico, cáncer de ovario, linfoma, leucemia, cáncer de endometrio, adenocarcinoma, y cáncer de pulmón), embarazo, puerperio, trasplante, APS primario, artritis reumatoide (AR), lupus eritematoso sistémico (SLE), cirugía (por ejemplo, cirugía ocular), y ciertas infecciones. Las infecciones incluyen, por ejemplo, infección por parvovirus B19 e infección por hepatitis C. Aquí en lo sucesivo, dichas manifestaciones de CAPS pueden denominarse, por ejemplo, "CAPS asociado a cáncer", "CAPS asociado a trasplante", "CAPS asociado a AR", "CAPS asociado a infección", o "CAPS asociado a SLE". Véanse, por ejemplo, Soltész et al. (2000) Haematologia (Budep) 30(4):303-311; Ideguchi et al. (2007) Lupus 16(1):59-64; Manner et al. (2008) Am J Med. Sci.
335(5):394-7; Miesbach et al. (2006) Autoimmune Rev. 6(2):94-7; Gómez-Puerta et al. (2006) Autoimmune Rev.
6(2):85-8; Gómez-Puerta et al. (2006) Semin. Arthritis Rheum. 35(5):322-32; Kasamon et al. (2005) Haematologia 90(3):50-53; Atherson et al. (1998) Medicine 77(3):195-207; y Canpolat et al. (2008) Clin Pediatr 47(6):593-7. Por lo tanto, un ser humano en riesgo de desarrollar CAPS puede ser, por ejemplo, aquel que tiene CAPS primario y/o un cáncer que se sabe que está asociado a CAPS.
De lo anterior quedará claro que los sujetos "en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento" (por ejemplo, un trastorno asociado con la AP o un trastorno asociado con la CP) no son todos los sujetos dentro de una especie de interés.
Un sujeto "sospechoso de tener un trastorno asociado al complemento" (por ejemplo, un trastorno asociado a la ruta alternativa del complemento) es aquel que tiene uno o más (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o 10 o más) síntomas de la enfermedad. Los síntomas de estos trastornos variarán dependiendo del trastorno particular, pero los expertos en la técnica de la medicina los conocen. Por ejemplo, los síntomas de DDD incluyen, por ejemplo: uno o ambos de hematuria y proteinuria; síndrome nefrítico agudo; desarrollo de drusas y/o discapacidad visual; lipodistrofia parcial adquirida y complicaciones de la misma; y la presencia del factor nefrítico C3 sérico (C3NeF), un autoanticuerpo dirigido contra C3bBb, la C3 convertasa de la ruta alternativa del complemento. (Véase, por ejemplo, Appel et al. (2005), más arriba). Los síntomas de aHUS incluyen, por ejemplo, hipertensión grave, proteinuria, uremia, letargo/fatiga, irritabilidad, trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática, y deterioro de la función renal (por ejemplo, insuficiencia renal aguda). Los síntomas de TTP incluyen, por ejemplo, microtrombos, trombocitopenia, fiebre, baja expresión o actividad de la ADAMTS 13 metaloproteinasa, anomalías fluctuantes del sistema nervioso central, insuficiencia renal, anemia hemolítica microangiopática, hematomas, púrpura, náuseas y vómitos (por ejemplo, como resultado de isquemia en el tubo digestivo o por afectación del sistema nervioso central), dolor torácico debido a isquemia cardíaca, convulsiones, y dolor muscular y articular. Los síntomas de la AR pueden incluir, por ejemplo, rigidez, hinchazón, fatiga, anemia, pérdida de peso, fiebre, y a menudo, dolor paralizante. Algunos síntomas comunes de la artritis reumatoide incluyen rigidez en las articulaciones al despertar, que dura una hora o más; hinchazón en un dedo específico o en las articulaciones de la muñeca; hinchazón en el tejido blando alrededor de las articulaciones; e hinchazón en ambos lados de la articulación. La hinchazón puede ocurrir con o sin dolor, y puede empeorar progresivamente o permanecer igual durante años antes de progresar. Los síntomas de HELLP son conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, malestar, dolor epigástrico, náusea, vómitos, cefalea, dolor en el cuadrante superior derecho, hipertensión, proteinuria, visión borrosa, hemorragia gastrointestinal, hipoglucemia, parestesia, enzimas hepáticas elevadas/daño hepático, anemia (anemia hemolítica), y recuento bajo de plaquetas, cualquiera de los cuales en combinación con embarazo o embarazo reciente. (Véanse, por ejemplo, Tomsen (1995) Am J Obstet Gynecol 172:1876-1890; Sibai (1986) Am J Obstet Gynecol 162:311-316; y Padden (1999), más arriba.)
Los síntomas de CAPS son bien conocidos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, evidencia histopatológica de múltiples oclusiones de vasos pequeños; la presencia de anticuerpos antifosfolípido (generalmente en títulos altos), trombosis vasculares, disfunción multiorgánica grave, hipertensión maligna, síndrome disneico agudo, coagulación intravascular diseminada, anemia hemolítica microangiopática, esquistocitos, y trombocitopenia. CAPS se puede distinguir de APS en que los pacientes con CAPS generalmente presentan disfunción o fallo multiorgánico grave, que se caracteriza por isquemia rápida y difusa de vasos pequeños y trombosis que afectan predominantemente a los órganos parenquimatosos. Por el contrario, el APS se asocia a oclusiones de vasos sanguíneos medianos a grandes venosos o arteriales individuales. Los síntomas de la MG incluyen, por ejemplo, fatigabilidad y una variedad de afecciones relacionadas con la debilidad muscular, que incluyen: ptosis (de uno o ambos ojos), diplopía, marcha inestable, expresiones faciales deprimidas o distorsionadas, y dificultad para masticar, hablar, o tragar. En algunos casos, un sujeto puede presentar parálisis parcial o completa de los músculos respiratorios. Los síntomas de CAD incluyen, por ejemplo, dolor, fiebre, palidez, anemia, flujo sanguíneo reducido a las extremidades (por ejemplo, con gangrena), y enfermedad renal o insuficiencia renal aguda. En algunas realizaciones, los síntomas pueden ocurrir después de la exposición a temperaturas frías.
De lo anterior quedará claro que los sujetos "sospechosos de tener un trastorno asociado al complemento" no son todos los sujetos dentro de una especie de interés.
Los métodos pueden incluir la identificación del sujeto como alguien que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento en un sujeto. Los métodos adecuados para identificar al sujeto son conocidos en la técnica. Por ejemplo, los métodos adecuados (por ejemplo, técnicas de secuenciación o uso de micromatrices) para determinar si un sujeto humano tiene una mutación asociada a DDD en un gen CFH, CFHR5, o C3 se describen, por ejemplo, en Licht et al. (2006) Kidney Int. 70:42-50; Zipfel et al. (2006), más arriba; Ault et al. (1997) J Biol. Chem. 272:25168-75; Abrera-Abeleda et al. (2006) J Med Genet 43:582-589; Poznansky et al. (1989) J Immunol. 143:1254-1258; Jansen et al. (1998) Kidney Int. 53:331-349; y Hegasy et al. (2002) Am J Pathol 161:2027-2034. Los métodos para detectar la presencia de depósitos densos en electrones característicos asociados a DDD también son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, un médico puede obtener una biopsia de tejido del riñón de un paciente, y someter el tejido a microscopía electrónica. El médico también puede examinar el tejido por inmunofluorescencia, para detectar la presencia de C3 usando un anticuerpo anti-C3, y/o microscopía óptica, para determinar si hay glomerulonefritis membranoproliferativa. Véanse, por ejemplo, Walker et al. (2007) Mod. Pathol.
20:605-616 y Habib et al. (1975) Kidney Int. 7:204-215. En algunas realizaciones, la identificación de un sujeto como aquel que tiene DDD puede incluir analizar una muestra de sangre para detectar la presencia de C3NeF. Los métodos para detectar la presencia de C3NeF en sangre se describen, por ejemplo, en Schwertz et al. (2001) Pediatr Allergy Immunol. 12:166-172.
El médico puede determinar si existe una mayor activación del complemento en el suero de un sujeto. Los indicios de una mayor activación del complemento incluyen, por ejemplo, una reducción de CH50, una disminución de C3, y un aumento de C3dg/C3d. Véase, por ejemplo, Appel et al. (2005), más arriba. En algunas realizaciones, un médico puede examinar el ojo de un sujeto en busca de signos del desarrollo de drusas y/u otras patologías visuales tales como AMD. Por ejemplo, un médico puede usar ensayos de la función retiniana, tales como, pero sin limitarse a, adaptación a la oscuridad, electrorretinografía, y electrooculografía (véase, por ejemplo, Colville et al. (2003) Am J Kidney Dis. 42:E2-5).
También se conocen en la técnica métodos para identificar a un sujeto como aquel que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar TTP. Por ejemplo, Miyata et al. describen una variedad de ensayos para medir la actividad de ADAMTS 13 en una muestra biológica obtenida de un sujeto (Curr Opin Hematol (2007) 14(3):277-283). Los ensayos de actividad de ADAMTS13 adecuados, así como los intervalos fenotípicamente normales de actividad de ADAMTS13 en un sujeto humano, se describen, por ejemplo, en Tsai (2003) J. Am. Soc. Nephrol 14:1072-1081; Furlan et al. (1998) New Engl J Med. 339:1578-1584; Matsumoto et al. (2004) Blood 103:1305-1310; y Mori et al. (2002) Transfusion 42:572-580. Los métodos para detectar la presencia de inhibidores de ADAMTS13 (por ejemplo, autoanticuerpos que se unen a ADAMTS13) en una muestra biológica obtenida de un sujeto son conocidos en la técnica. Por ejemplo, una muestra de suero de un paciente puede mezclarse con una muestra de suero de un sujeto sin TTP para detectar la presencia de anticuerpos anti-ADAMTS 13. En otro ejemplo, la proteína de inmunoglobulina puede aislarse del suero de un paciente y usarse en ensayos de actividad de ADAMTS13 in vitro para determinar si está presente un anticuerpo anti-ADAMTS13. Véase, por ejemplo, Dong et al. (2008) Am J Hematol. 83(10):815-817. En algunas realizaciones, el riesgo de desarrollar TTP puede determinarse evaluando si un paciente porta una o más mutaciones en el gen ADAMTS13. Los métodos adecuados (por ejemplo, matrices de ácidos nucleicos o secuenciación de ADN) para detectar una mutación en el gen ADAMTS 13 se conocen en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Levy et al., más arriba; Kokame et al., más arriba; Licht et al., más arriba; y Noris et al., más arriba.
Además, se conocen en la técnica métodos para identificar a un sujeto como aquel que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar aHUS. Por ejemplo, se pueden realizar ensayos de laboratorio para determinar si un sujeto humano tiene trombocitopenia, anemia hemolítica microangiopática, o insuficiencia renal aguda. La trombocitopenia puede ser diagnosticada por un profesional médico como uno o más de: (i) un recuento de plaquetas inferior a 150.000/mm3 (por ejemplo, inferior a 60.000/mm3); (ii) una reducción en el tiempo de supervivencia de las plaquetas, lo que refleja una mayor alteración de las plaquetas en la circulación; y (iii) plaquetas gigantes observadas en un frotis periférico, lo que es compatible con la activación secundaria de la trombocitopoyesis. La anemia hemolítica microangiopática puede ser diagnosticada por un profesional médico como uno o más de: (i) concentraciones de hemoglobina que son menores que 10 mg/dl (por ejemplo, menores que 6,5 mg/dl); (ii) concentraciones sérica aumentadas de lactato deshidrogenasa (LDH) (>460 U/l); (iii) hiperbilirrubinemia, reticulocitosis, hemoglobina libre circulante, y concentraciones bajas o indetectables de haptoglobina; y (iv) la detección de glóbulos rojos fragmentados (esquistocitos) con el típico aspecto de células en rebaba o casco en el frotis periférico junto con una prueba de Coombs negativa. (Véanse, por ejemplo, Kaplan et al. (1992) "Hemolytic Uremic Syndrome and Thrombotic Thrombocytopenic Purpura," Informa Health Care (ISBN 0824786637) y Zipfel (2005) "Complement and Kidney Disease," Springer (ISBN 3764371668).)
También se puede identificar que un sujeto tiene aHUS evaluando las concentraciones en sangre de C3 y C4 como una medida de la activación o desregulación del complemento. Además, como queda claro a partir de la descripción anterior, se puede identificar que un sujeto tiene aHUS genético al identificar que el sujeto alberga una o más mutaciones en un gen asociado con aHUS, tal como CFI, CFB, CFH o MCP (más arriba). Los métodos adecuados para detectar una mutación en un gen incluyen, por ejemplo, secuenciación de ADN y técnicas de matrices de ácidos nucleicos. (Véanse, por ejemplo, Breslin et al. (2006) Clin Am Soc Nephrol 1:88-99 y Goicoechea de Jorge et al. (2007) Proc Natl Acad Sci USA 104:240-245.)
Los síntomas característicos de la TMA incluyen, por ejemplo, fiebre, anemia hemolítica microangiopática (esquistocitos en un frotis de sangre), insuficiencia renal, trombocitopenia, y manifestaciones neurológicas.
También se conocen en la técnica de la medicina métodos para diagnosticar a un sujeto que tiene, se sospecha que tiene, o que está en riesgo de desarrollar AR. Por ejemplo, un médico puede examinar las pequeñas articulaciones de las manos, las muñecas, los pies, y las rodillas para identificar la inflamación en una distribución simétrica. El médico también puede realizar una serie de pruebas para excluir otros tipos de inflamación de las articulaciones, incluyendo artritis debida a una infección o gota. Además, la artritis reumatoide se asocia con anticuerpos anormales en la circulación sanguínea de los pacientes afectados. Por ejemplo, un anticuerpo denominado "factor reumatoideo" se encuentra en aproximadamente el 80% de los pacientes. En otro ejemplo, el anticuerpo anti-citrulina está presente en muchos pacientes con artritis reumatoide, y de este modo es útil en el diagnóstico de artritis reumatoide cuando se evalúan pacientes con inflamación articular inexplicable. Véase, por ejemplo, van Venrooij et al. (2008) Ann NY Acad Sci 1143:268-285 y Habib et al. (2007) Immunol Invest 37(8):849-857. Otro anticuerpo denominado "anticuerpo antinuclear" (ANA) también se encuentra con frecuencia en pacientes con artritis reumatoide. Véanse, por ejemplo, Benucci et al. (2008) Clin Rheumatol 27(1 ):91 -95; Julkunen et al. (2005) Scan J Rheumatol 34(2):122-124; y Miyawaki et al. (2005) J Rheumatol 32(8):1488-1494.
Un médico también puede examinar la velocidad de sedimentación de glóbulos rojos para ayudar a diagnosticar la AR en un sujeto. La velocidad de sedimentación se puede usar como una medida bruta de la inflamación de las articulaciones, y habitualmente es más rápida durante los brotes de la enfermedad y más lenta durante las remisiones. Otro análisis de sangre que se puede usar para medir el grado de inflamación presente en el cuerpo es la proteína C reactiva.
Además, las radiografías de las articulaciones también se pueden usar para diagnosticar que un sujeto tiene artritis reumatoide. A medida que avanza la AR, las radiografías pueden mostrar erosiones óseas típicas de la artritis reumatoide en las articulaciones. Las radiografías articulares también pueden ser útiles para monitorizar la progresión de la enfermedad y el daño articular a lo largo del tiempo. La gammagrafía ósea, un procedimiento de ensayo radiactivo, puede demostrar las articulaciones inflamadas.
Los métodos para identificar a un sujeto como alguien que tiene, se sospecha que tiene o que está en riesgo de desarrollar HELLP son conocidos en la técnica de la medicina. Los síntomas distintivos del síndrome HELLP incluyen hemólisis, enzimas hepáticas elevadas, y recuento plaquetario bajo. Por lo tanto, se puede realizar una variedad de pruebas en la sangre de un sujeto para determinar el nivel de hemólisis, la concentración de cualquiera de una variedad de enzimas hepáticas, y el nivel de plaquetas en la sangre. Por ejemplo, la presencia de esquistocitos y/o niveles elevados de hemoglobina libre, bilirrubina o LDH sérica es una indicación de hemólisis intravascular. Los ensayos de laboratorio habituales se pueden usar para determinar el recuento de plaquetas así como el nivel sanguíneo de enzimas hepáticas, tales como, pero sin limitarse a, la aspartato aminotransferasa (AST) y la alanina transaminasa (ALT). Los métodos adecuados para identificar a un sujeto que tiene el síndrome HELLP también se describen, por ejemplo, en Sibai et al. (1993), más arriba; Martin et al. (1990), más arriba Padden (1999), más arriba; y Gleicher y Buttino (1998) "Principles & Practice of Medical Therapy in Pregnancy," 3.a edición, Appleton & Lange (ISBN 083857677X).
Los métodos adecuados para identificar al sujeto que tiene MG pueden ser cualitativos o cuantitativos. Por ejemplo, un médico puede examinar el estado de las funciones motoras de un sujeto mediante un examen físico. Otras pruebas cualitativas incluyen, por ejemplo, una prueba de bolsa de hielo, en la que se aplica una bolsa de hielo al ojo de un sujeto (en un caso de MG ocular) para determinar si uno o más síntomas (por ejemplo, ptosis) mejoran con el frío (véase, por ejemplo, Sethi et al. (1987) Neurology 37(8):1383-1385). Otras pruebas incluyen, por ejemplo, la "prueba del sueño", que se basa en la tendencia de los síntomas de MG a mejorar después del descanso. En algunas realizaciones, un médico puede emplear pruebas cuantitativas o semicuantitativas para determinar si un sujeto tiene, se sospecha que tiene o que está en riesgo de desarrollar MG. Por ejemplo, un médico puede realizar un ensayo para detectar la presencia o cantidad de autoanticuerpos asociados a MG en una muestra de suero obtenida de un sujeto. Los autoanticuerpos asociados a MG incluyen, por ejemplo, anticuerpos que se unen y modulan la actividad del receptor de acetilcolina (AChR), la tirosina cinasa receptora específica del músculo (MuSK), y/o la proteína del cuerpo estriado. (Véase, por ejemplo, Conti-Fine et al. (2006), más arriba). Los ensayos adecuados útiles para detectar la presencia o la cantidad de un anticuerpo asociado a MG en una muestra biológica se conocen en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Hoch et al. (2001) Nat Med 7:365-368; Vincent et al. (2004) Semin Neurol. 24:125-133; McConville et al. (2004) Ann. Neurol. 55:580-584; Boneva et al. (2006) J Neuroimmunol. 177:119-131; y Romi et al. (2005) Arch Neurol. 62:442-446.
Los métodos adicionales para diagnosticar la MG incluyen, por ejemplo, pruebas de electrodiagnóstico (por ejemplo, electromiografía de fibra única) y la prueba de Tensilon (o edrofonio), que consiste en inyectar a un sujeto el inhibidor de la acetilcolinesterasa edrofonio y monitorizar al sujeto para ver si mejora uno o más síntomas. Véanse, por ejemplo, Pascuzzi (2003) Semin Neurol 23(1):83-88; Katirji et al. (2002) Neurol Clin 20:557-586; y "Guidelines in Electrodiagnostic Medicine. American Association of Electrodiagnostic Medicine," Muscle Nerve 15:229-253.
Se puede identificar que un sujeto tiene CAD usando un ensayo para detectar la presencia o la cantidad (título) de autoanticuerpos aglutinantes que se unen al antígeno I en los glóbulos rojos. Los anticuerpos pueden ser monoclonales (por ejemplo, IgM o IgA monoclonales) o policlonales. Los métodos adecuados para detectar estos anticuerpos se describen, por ejemplo, en Christenson y Dacie (1957) Br J Haematol 3:153-164 y Christenson et al. (1957) Br J Haematol 3:262-275. También se puede diagnosticar que un sujeto tiene CAD usando uno o más de un hemograma completo (CBC), análisis de orina, estudios bioquímicos, y una prueba de Coombs para evaluar la hemólisis en sangre. Por ejemplo, pueden usarse estudios bioquímicos para detectar niveles elevados de lactasa deshidrogenasa, niveles elevados de bilirrubina no conjugada, niveles bajos de haptoglobina, y/o la presencia de hemoglobina plasmática libre, todo lo cual puede ser indicativo de hemólisis aguda. Otras pruebas que se pueden usar para detectar CAD incluyen la detección de niveles del complemento en el suero. Por ejemplo, debido al consumo durante la fase aguda de la hemólisis, los niveles de complemento plasmático medidos (por ejemplo, C2, C3 y C4) disminuyen en la CAD.
El HUS típico (o infeccioso), a diferencia del aHUS, a menudo se identifica por un pródromo de diarrea, a menudo de naturaleza sanguinolenta, que resulta de la infección con un microorganismo productor de toxina shiga. Se puede identificar que un sujeto tiene HUS típico cuando se detectan toxinas shiga y/o anticuerpos séricos contra la toxina shiga o LPS en las heces de un individuo. En la técnica se conocen métodos adecuados para analizar anticuerpos contra la toxina shiga o LPS. Por ejemplo, los métodos para detectar anticuerpos que se unen a las toxinas shiga Stx1 y Stx2 o LPS en seres humanos se describen, por ejemplo, en Ludwig et al. (2001) J Clin Microbiol 39(6):2272-2279.
Los síntomas de esta afección son conocidos por los expertos en la técnica de la medicina, e incluyen, por ejemplo, dolor, fiebre, palidez, ictericia, erupción dérmica urticarial, hemoglobinuria, hemoglobinemia, anemia, y enfermedad renal o insuficiencia renal aguda. En algunas realizaciones, los síntomas pueden ocurrir después de la exposición a temperaturas frías.
Los métodos pueden incluir la identificación del sujeto como alguien que tiene, se sospecha que tiene o que está en riesgo de desarrollar PCH. Los métodos adecuados para identificar al sujeto son conocidos en la técnica. Por ejemplo, se puede diagnosticar que un sujeto tiene PCH utilizando una prueba de Donath-Landsteiner, que es un ensayo para detectar la presencia del anticuerpo de Donath-Landsteiner en el suero de un sujeto. El procedimiento implica la incubación de tres muestras: (1) el suero del sujeto; (2) suero normal; y (3) una mezcla de suero del sujeto y suero normal - con glóbulos rojos que expresan antígeno P a una temperatura de 0 a 42C. A continuación, la muestra se calienta a 37°C y se inspecciona visualmente en busca de hemólisis. Si el anticuerpo de Donath-Landsteiner está presente, debería ocurrir hemólisis en las muestras (1) y (3), pero no en la (2). Véanse, por ejemplo, Funato et al. (2007) Eur J Haematol 79(5):462; Win et al. (2005) Transfus Med. 15(3):254; Sokol et al. (1998) Immunohematology 14(3):109-12; Eder (2005) Immunohematology 21(2):56-62; y Dacie et al. (1957) Br J Haematol 3:77-87. También se puede diagnosticar a un sujeto que tiene PCH usando uno o más de un hemograma completo (CBC), análisis de orina, estudios bioquímicos, y una prueba de Coombs. Por ejemplo, pueden usarse estudios bioquímicos para detectar niveles elevados de lactasa deshidrogenasa, niveles elevados de bilirrubina no conjugada, niveles bajos de haptoglobina, y/o la presencia de hemoglobina plasmática libre, todo lo cual puede ser indicativo de hemólisis aguda. Otras pruebas que se pueden usar para detectar PCH incluyen la detección de niveles del complemento en el suero. Por ejemplo, debido al consumo durante la fase aguda de la hemólisis, los niveles de complemento plasmático medidos (por ejemplo, C2, C3 y C4) disminuyen en la PCH. Véanse también, por ejemplo, Nordhagen et al. (1984) Acta Paediatr Scand 73(2):258-262; Lindgren et al. (1985) Transfusion 25(2):142-4; Nordhagen et al. (1991) Transfusion 31 (2):190-1; y Garratty (2001) Transfusion 41(8):1073-4.
La composición se puede administrar a un sujeto de manera profiláctica para prevenir, o prevenir la recaída o recurrencia de, PCH. Por ejemplo, a un sujeto que previamente tenía una infección avanzada por Mycoplasma, o a quien se le acaba de diagnosticar una neoplasia asociada a PCH, se le puede administrar una composición descrita aquí para prevenir, disminuir la gravedad, o prevenir una recurrencia de PCH.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5) descrito aquí puede administrarse a un sujeto como monoterapia. Alternativamente, como se describió anteriormente, el anticuerpo se puede administrar a un sujeto como una terapia de combinación con otro tratamiento, por ejemplo otro tratamiento para DDD, TTP, aHUS, AR, HELLP, MG, CAD, CAPS, tHUS, enfermedad de Degos, o cualquier otro trastorno asociado al complemento descrito aquí. Por ejemplo, la terapia de combinación puede incluir administrar al sujeto (por ejemplo, un paciente humano) uno o más agentes adicionales (por ejemplo, anticoagulantes, antihipertensivos, o corticosteroides) que proporcionen un beneficio terapéutico al sujeto que tiene, o está en riesgo de desarrollar, DDD. En algunas realizaciones, la terapia de combinación puede incluir la administración al sujeto (por ejemplo, un paciente humano) de un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un anticuerpo anti-C5a) y un agente inmunosupresor, tal como Remicade®, para uso en el tratamiento de la AR. En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 y uno o más agentes activos adicionales se administran al mismo tiempo. En otras realizaciones, un inhibidor de C5 se administra primero en el tiempo, y uno o más agentes activos adicionales se administran en segundo lugar. En algunas realizaciones, uno o más agentes activos adicionales se administran primero en el tiempo, y el inhibidor de C5 se administra en segundo lugar.
Un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5) descrito aquí puede reemplazar o aumentar una terapia administrada anteriormente o actualmente. Por ejemplo, tras el tratamiento con un anticuerpo anti-C5, la administración de uno o más agentes activos adicionales puede cesar o disminuir, por ejemplo puede administrarse a niveles más bajos. En algunas realizaciones, se puede mantener la administración de la terapia anterior. En algunas realizaciones, se mantendrá una terapia anterior hasta que el nivel del inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 o un anticuerpo anti-C5a) alcance un nivel suficiente para proporcionar un efecto terapéutico. Las dos terapias se pueden administrar en combinación.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, el inhibidor de C5, se puede administrar a un paciente de forma crónica . Por ejemplo, un paciente tratado crónicamente con un agente inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5 o un inhibidor de C5a) puede ser tratado durante un período mayor o igual a 2 semanas (por ejemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52 semanas; 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses, o 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, o 12 años o durante el resto de la vida del paciente) con el agente en una cantidad y con una frecuencia de dosificación que son suficientes para mantener una concentración del agente en la sangre del paciente que inhibe o inhibe sustancialmente la actividad sistémica del complemento en el paciente. Para mantener la inhibición sistémica del complemento en un paciente, un inhibidor de C5 se puede administrar de forma crónica al paciente, por ejemplo, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, dos veces a la semana, una vez al día, una vez al mes, o una vez cada tres semanas. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, el inhibidor de C5 se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia de administración eficaces para mantener una concentración de al menos: 0,7 (por ejemplo, al menos 0,8, 0,9, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o 10 o más) molécula o moléculas de inhibidor de C5 bivalente (por ejemplo, un anticuerpo completo) por cada molécula de C5 en la sangre del paciente; o 1,5 (por ejemplo, al menos 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o 10 o más) molécula o moléculas de inhibidor de C5 monovalente (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5 monocatenario o un fragmento Fab del anticuerpo) por cada molécula de C5 en la sangre del paciente. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un anticuerpo anti-C5 monovalente (por ejemplo, un anticuerpo monocatenario o un fragmento de anticuerpo Fab) se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia eficaces para mantener una concentración de al menos 1,5 (por ejemplo, al menos 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 6, o 7 o más) anticuerpos anti-C5 monovalentes por molécula de C5 en la sangre. En algunas realizaciones de cualquiera de los métodos descritos aquí, un anticuerpo anti-C5 se administra al paciente en una cantidad y con una frecuencia que son eficaces para mantener una concentración de al menos 40 (por ejemplo, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, o 120 o más) pg del anticuerpo por mililitro de sangre del paciente. Se describen aquí estrategias ejemplares de dosificación crónica (véanse, por ejemplo, las Tablas 1 y 2).
Las siguientes realizaciones en estas páginas no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 (o inhibidor de C5a) se puede administrar a un sujeto incluso después de que se hayan mejorado uno o más síntomas. Monitorizar un sujeto (por ejemplo, un paciente humano) en busca de una mejora en un trastorno asociado al complemento, como se define aquí, significa evaluar al sujeto en busca de un cambio en un parámetro de la enfermedad, por ejemplo una mejora en uno o más síntomas de la enfermedad. Dichos síntomas incluyen cualquiera de los síntomas de los trastornos asociados al complemento descritos aquí. En algunas realizaciones, la evaluación se realiza al menos 1 hora, por ejemplo al menos 2, 4, 6, 8, 12, 24, o 48 horas, o al menos 1 día, 2 días, 4 días, 10 días, 13 días, 20 días o más, o al menos 1 semana, 2 semanas, 4 semanas, 10 semanas, 13 semanas, 20 semanas o más, después de una administración. El sujeto se puede evaluar en uno o más de los siguientes períodos: antes del inicio del tratamiento; durante el tratamiento; o después de que se hayan administrado uno o más elementos del tratamiento. La evaluación puede incluir evaluar la necesidad de un tratamiento adicional, por ejemplo evaluar si se debe modificar una dosis, frecuencia de administración, o duración del tratamiento. También puede incluir evaluar la necesidad de añadir o eliminar una modalidad terapéutica seleccionada, por ejemplo añadir o eliminar cualquiera de los tratamientos para cualquiera de los trastornos asociados al complemento descritos aquí.
En algunas realizaciones, el inhibidor del complemento se puede administrar de forma crónica a un paciente que lo necesite en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para reducir y mantener la actividad hemolítica sérica en menos de o igual a 20 (por ejemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso por debajo de 5) %. Véase, por ejemplo, Hill et al. (2005) Blood 106(7):2559. En algunas realizaciones, el inhibidor del complemento se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia que sean eficaces para mantener los niveles de lactato deshidrogenasa (LDH) en suero dentro de al menos 20 (por ejemplo, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, o incluso por debajo del 5) % del intervalo normal para LDH. Véase Hill et al. (2005), más arriba. En algunas realizaciones, el inhibidor del complemento se administra al paciente en una cantidad y con una frecuencia que son eficaces para mantener un nivel de LDH en suero inferior a 550 (por ejemplo, inferior a 540, 530, 520, 510, 500, 490, 480, 470, 450, 440, 430, 420, 410, 400, o menos de 300) Ul/l. En algunas realizaciones, la administración (por ejemplo, administración crónica) de un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, tal como eculizumab) o un inhibidor de C5a (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5a) da como resultado la mejora de uno o más de los síntomas de un paciente en un 40 (por ejemplo, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21,20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o incluso 1) % de su nivel o valor normal. Por ejemplo, la tensión arterial elevada en un paciente con aHUS tratado (por ejemplo, tratado crónicamente) con un anticuerpo anti-C5 puede reducirse a un nivel que esté dentro del 40% del nivel normal para una persona de la edad, raza, altura, peso, sexo, y salud física del paciente.
El inhibidor del complemento (por ejemplo, un inhibidor de C5 o un inhibidor de C5a) puede administrarse a un sujeto incluso después de que el paciente haya entrado en remisión clínica. La determinación de la remisión clínica de un trastorno asociado al complemento está dentro del conjunto de habilidades del experto en medicina. Por ejemplo, los elementos determinantes de la remisión clínica de aHUS se describen, por ejemplo, en Nürnberger et al. (2009) N Engl J Med 360(5):542-544. La remisión clínica para CAPS se describe, por ejemplo, en Manner et al. (2008) Am J Med Sci 335(5):394-397.
La descripción también proporciona métodos para el trasplante alogénico de órganos o tejidos. El método incluye trasplantar un órgano o tejido a un paciente que lo necesite, en el que antes y después del trasplante se administra al paciente un inhibidor de C5 en una cantidad y con una frecuencia eficaces para inhibir sustancialmente la actividad sistémica del complemento en el paciente. Como se describe aquí, el inhibidor de C5 (por ejemplo, el anticuerpo anti-C5) se puede administrar en una cantidad y con una frecuencia para mantener una concentración de al menos una molécula de inhibidor de C5 (por ejemplo, al menos un anticuerpo anti-C5) por molécula de C5 en la sangre del paciente.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-C5 monovalente (por ejemplo, un anticuerpo monocatenario o un fragmento de anticuerpo Fab) se puede administrar a un paciente en una cantidad y con una frecuencia eficaces para mantener una concentración de al menos 1,5 (por ejemplo, al menos 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 6, o 7 o más) anticuerpos anti-C5 monovalentes por molécula de C5 en la sangre. En algunas realizaciones, el inhibidor de C5 (por ejemplo, el anticuerpo anti-C5) se puede administrar al paciente en una cantidad y con una frecuencia para mantener una concentración de al menos 40 (por ejemplo, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 48, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, o 120 o más) pg del inhibidor (por ejemplo, el anticuerpo anti-C5) en la sangre del paciente. En algunas realizaciones, al menos 800 (por ejemplo, al menos 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 (por ejemplo, eculizumab) se administran al paciente menos de 24 (por ejemplo, menos de 23, 22, 21,20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, o menos de 2) horas antes de trasplantar el órgano o tejido al paciente. En algunas realizaciones, los métodos también pueden incluir, antes del trasplante, poner en contacto (por ejemplo, empapar) el órgano o tejido del donante con un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, tal como eculizumab) durante un período de tiempo y en condiciones que inhiben la activación del complemento en el órgano o tejido tras el trasplante. El órgano puede ser, por ejemplo, piel, un riñón, corazón, pulmón, extremidad (por ejemplo, dedo de la mano o del pie), o hígado. En algunas realizaciones, los métodos pueden incluir administrar un inhibidor de C5 (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5) al paciente donante antes de la extracción del órgano o tejido para el trasplante. El paciente puede tener, estar en riesgo de desarrollar o ser sospechoso de tener aHUS. En algunas realizaciones, al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 se administran al paciente menos de 24 (por ejemplo, menos de 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, o menos de 2) horas después del trasplante. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C5 se administra de forma crónica al paciente después del trasplante. Por ejemplo, el anticuerpo anti-C5 se puede administrar crónicamente al paciente durante al menos 9 semanas (por ejemplo, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52 semanas; 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses; o 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 10,5, o 12 años o durante el resto de la vida del paciente) con el siguiente programa de dosificación: al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 menos de 24 horas después del trasplante del órgano o tejido; al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 una vez por semana durante cuatro semanas después de la dosis inicial posterior al trasplante; al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 una vez durante la quinta semana; y al menos 700 (por ejemplo, al menos 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1100, o 1200 o más) mg del anticuerpo anti-C5 cada dos semanas a partir de entonces durante el resto del programa de dosificación. En una realización preferida, el anticuerpo anti-C5 se administra de manera que las primeras cuatro dosis sean al menos 900 mg del anticuerpo; se administran 1200 mg en la quinta semana; y se administran al paciente 1200 mg cada dos semanas a partir de entonces durante el resto del programa de tratamiento crónico. Los programas de dosificación ejemplares adicionales se proporcionan en las Tablas 1 y 2.
Las siguientes realizaciones no están incluidas en el texto de las reivindicaciones, pero se consideran útiles para comprender la invención.
En algunas realizaciones, los métodos incluyen administrar un inmunosupresor al paciente. Los inmunosupresores adecuados para uso en los métodos incluyen, pero no se limitan a, ATG o ALG, OKT3, daclizumab, basiliximab, corticosteroides, 15-desoxiespergualina, ciclosporinas, tacrolimus, azatioprina, metotrexato, micofenolato mofetilo, 6-mercaptopurina, bredinina, brequinar, leflunamida, ciclofosfamida, sirolimus, anticuerpos monoclonales anti-CD4, CTLA4-Ig, anticuerpos monoclonales anti-CD154, anticuerpos monoclonales anti-LFAl, anticuerpos monoclonales anti-LFA-3, anticuerpos monoclonales anti-CD2, y anticuerpos anti-CD45.
Los tipos de órganos o tejidos que se pueden trasplantar usando los métodos descritos aquí incluyen, por ejemplo, corazón, riñón, pulmón, páncreas, hígado, tejido vascular, ojo, córnea, cristalino, piel, médula ósea, músculo, tejido conjuntivo, tejido gastrointestinal, tejido nervioso, hueso, células madre, islotes, cartílago, hepatocitos, y células hematopoyéticas.
En algunas realizaciones, los métodos de trasplante darán como resultado la prolongación del injerto en el paciente receptor en al menos un mes (por ejemplo, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, 10, 11, o 12 meses, o 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o incluso 10 años o más).
Enfoques ex vivo . Una estrategia ex vivo para tratar o prevenir un trastorno asociado al complemento (por ejemplo, un trastorno asociado a la AP o un trastorno asociado a la CP) puede implicar transfectar o transducir una o más células obtenidas de un sujeto con un polinucleótido que codifica un inhibidor del complemento (por ejemplo, un anticuerpo anti-C5, anticuerpo anti-C5a, o un ácido nucleico (por ejemplo, un ARNip) que se une y promueve la inactivación de un ARNm de C5 en una célula de mamífero) descrito aquí. Por ejemplo, las células se pueden transfectar con un único vector que codifica una cadena pesada y ligera de un anticuerpo que se une a la proteína C5, o las células se pueden transfectar con un primer vector que codifica una cadena pesada y un segundo vector que codifica una cadena ligera del anticuerpo.
A continuación, las células transfectadas o transducidas se devuelven al sujeto. Las células pueden ser de una amplia gama de tipos, que incluyen, sin limitación, células hematopoyéticas (por ejemplo, células de la médula ósea, macrófagos, monocitos, células dendríticas, células T, o células B), fibroblastos, células epiteliales, células endoteliales, queratinocitos, o células musculares. Dichas células pueden actuar como una fuente (por ejemplo, fuente sostenida o periódica) del inhibidor de C5 (por ejemplo, anticuerpo anti-C5, anticuerpo anti-C5a, o ácido nucleico (anteriormente)) durante todo el tiempo que sobrevivan en el sujeto. En algunas realizaciones, los vectores y/o las células se pueden configurar para la expresión inducible o reprimible del inhibidor de C5 (véanse, por ejemplo, Schockett et al. (1996) Proc Natl Acad Sci USA 93: 5173-5176 y la patente U.S. núm. 7.056.897).
Preferiblemente, las células se obtienen del sujeto (autólogas), pero pueden obtenerse potencialmente de un sujeto de la misma especie distinta del sujeto (alogénicas).
Los métodos adecuados para obtener células de un sujeto y transducir o transfectar las células se conocen en la técnica de la biología molecular. Por ejemplo, la etapa de transducción se puede lograr por cualquier medio estándar usado para terapia génica ex vivo, incluyendo fosfato de calcio, lipofección, electroporación, infección vírica (véase más arriba), y transferencia génica biolística. (Véanse, por ejemplo, Sambrook et al. (más arriba) y Ausubel et al. (1992) "Current Protocols in Molecular Biology," Greene Publishing Associates.) Alternativamente, se pueden usar liposomas o micropartículas poliméricas. Las células que se han transducido con éxito pueden seleccionarse, por ejemplo, para la expresión de la secuencia codificante o de un gen de resistencia a fármacos.
Kits
No abarcada por la redacción de la reivindicación, la descripción también incluye artículos de fabricación o kits, que incluyen un recipiente con una etiqueta; y una composición que contiene uno o más inhibidores del complemento descritos aquí. Por ejemplo, el kit puede contener uno o más de un anticuerpo anti-C5a, un anticuerpo anti-C5, y un ácido nucleico (por ejemplo, un ARNip, o ácido nucleico antisentido) que se une y promueve la inactivación de un ARNm del C5 en una célula de mamífero. La etiqueta indica que la composición se administrará a un sujeto (por ejemplo, un ser humano) que tenga, se sospeche que tenga o que esté en riesgo de desarrollar un trastorno asociado al complemento (por ejemplo, un trastorno asociado con la AP o la CP) tal como DDD, aHUS, TTP, HELLP, AR, AMD, tHUS, MG, CAD, PCH, CAPS, enfermedad de Degos, o cualquier otro trastorno asociado a la ruta del complemento descrito aquí. El kit puede, opcionalmente, incluir un medio para administrar la composición al sujeto. Por ejemplo, los kits pueden incluir una o más jeringas.
Los kits pueden incluir además uno o más agentes activos adicionales, tales como cualquiera de los descritos aquí. Por ejemplo, los kits pueden incluir uno o más corticosteroides, antihipertensivos, inmunosupresores, y agentes anticonvulsivos.
Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar, no limitar, la invención.
Ejemplo 1
Un médico identifica a un paciente adulto con una forma hereditaria de aHUS. Una vez por semana, durante cuatro semanas, se administra al paciente una composición que contiene eculizumab, a una dosis de 900 mg. El paciente recibe entonces al menos 1200 mg de eculizumab una vez durante la quinta semana, y al menos 1200 mg de eculizumab cada dos semanas a partir de entonces. El paciente y el médico observan una mejora sustancial en al menos dos síntomas conocidos de aHUS durante el tratamiento inicial. Eculizumab se administra de forma crónica al paciente incluso después de que el médico determine que el aHUS está en remisión.
Ejemplo 2
Un médico identifica a un paciente humano que pesa alrededor de 25 kg con aHUS. Una vez a la semana, durante dos semanas, se administra al paciente una composición que contiene eculizumab, a una dosis de al menos 600 mg. El paciente recibe entonces al menos 600 mg de eculizumab una vez durante la tercera semana, y al menos 600 mg de eculizumab cada dos semanas a partir de entonces. El paciente y el médico observan una mejora sustancial en al menos dos síntomas conocidos de aHUS durante el tratamiento inicial. Eculizumab se administra de forma crónica al paciente, incluso después de que el médico determine que el aHUS está en remisión, para prevenir una recurrencia del aHUS en el paciente.
Ejemplo 3
Un médico identifica a un paciente humano que pesa alrededor de 35 kg con CAPS. Una vez a la semana, durante dos semanas, se administra al paciente una composición que contiene eculizumab, a una dosis de al menos 600 mg. El paciente recibe entonces al menos 900 mg de eculizumab una vez durante la tercera semana, y al menos 900 mg de eculizumab cada dos semanas a partir de entonces.
El paciente y el médico observan una mejora sustancial en al menos dos síntomas conocidos de CAPS durante el tratamiento inicial. Eculizumab se administra de forma crónica al paciente, incluso después de que el médico determine que el CAPS está en remisión, para prevenir o reducir sustancialmente la probabilidad de recurrencia del CAPS en el paciente.
Ejemplo 4
Un médico identifica a un paciente humano que pesa alrededor de 7 kg con aHUS. La paciente tiene TMA en sus riñones como consecuencia del aHUS. Durante una semana se administra al paciente una composición que contiene eculizumab, a una dosis de al menos 300 mg. El paciente recibe entonces al menos 300 mg de eculizumab una vez durante la segunda semana, y al menos 300 mg de eculizumab cada tres semanas a partir de entonces.
El paciente y el médico observan una mejora sustancial en al menos dos síntomas conocidos de aHUS durante el tratamiento inicial. El médico también observa que la TMA en los riñones del paciente se resuelve y no se produce una nueva TMA mientras el paciente recibe eculizumab de forma crónica. Eculizumab se administra de forma crónica al paciente, incluso después de que el médico determine que el aHUS está en remisión, para prevenir o reducir sustancialmente la probabilidad de una recurrencia del aHUS en el paciente y cualquier daño adicional a sus riñones que podría resultar de la recurrencia.
Ejemplo 5
A un paciente humano que necesita un trasplante de riñón se le administra eculizumab por vía intravenosa a una dosis de 1200 mg menos de 24 horas antes de la operación de trasplante. Se trasplanta un riñón alogénico al paciente. Menos de 24 horas después del trasplante renal, se administran al paciente otros 1200 mg de eculizumab. Una vez por semana, durante cuatro semanas después de la primera dosis postoperatoria de eculizumab, el paciente recibe 900 mg de eculizumab. El paciente recibe 1200 mg de eculizumab en la quinta semana después de la dosis posoperatoria inicial de eculizumab, y entonces se mantiene en un programa de dosificación que incluye 1200 mg de eculizumab cada dos semanas a partir de entonces. El médico observa una mejora sustancial en la supervivencia del riñón trasplantado en el paciente.

Claims (1)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo para uso en el tratamiento del síndrome urémico hemolítico atípico (aHUS) en un paciente, en el que el anticuerpo es eculizumab.
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