CN105143261B - C5抗体以及用于预防和治疗补体-相关的疾病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了针对C5的抗体，以及用于使用所述抗体预防和治疗补体‑相关的疾病的方法。本发明的针对C5的所述抗体通过抑制补体激活可以有利地预防和治疗补体‑相关的疾病。

Description

C5抗体以及用于预防和治疗补体-相关的疾病的方法
技术领域
本发明涉及对抗补体成分5(C5)的抗体，以及用于使用所述抗体预防和治疗补体-相关的疾病的方法。
背景技术
补体***在多数迅速识别并破坏传染源的先天免疫中作为首要步骤。另外，补体***在桥接先天免疫和通过与免疫细胞相互作用的获得性免疫之间起重要作用。补体***由经典途径、旁路途径和凝集素途径激活，然后各种各样的补体蛋白被激活。补体蛋白激活炎症物质的分泌，通过与免疫细胞相互作用控制炎症响应，以及通过产生攻击传染源的物质有效地消除外部传染源等。已知由于补体***通过各种各样的补体调节蛋白抑制补体活性的过度增加，维持体内平衡以及通过炎症响应和免疫响应的不同步骤起关键作用，所以当补体蛋白和补体调节蛋白控制不当时，会引起各种疾病。
当补体***由经典途径、旁路途径和凝集素途径激活时，补体成分5(C5)转化酶将C5切割成C5a和C5b。
C5在细胞内被表示为在成熟的N-末端β-链与C-末端α-链之间由18个残基信号序列和富含Arg的连接体序列(RPRR)组成的1676个氨基酸的单个C5肽原。成熟的C5具有约190kDa的分子量，并且由两条多肽链(α链,115kDa和β链,75kDa)组成，所述多肽链通过二硫键连接。C5转化酶切割α链的残基74与75之间的C5以释放74位氨基酸C5a肽和C5b片段，其随后被掺入攻膜复合物(membrane-attack complex,MAC)。
C5a，其为过敏毒素，直接激活白细胞和血小板，并起到嗜中性粒细胞的趋化因子的作用。C5b连同C6、C7、C8和C9一起在补体激活的最后步骤中形成攻膜复合物以诱导溶血。
当补体***过度激活时，由于发生异常免疫响应和正常细胞损伤，所以补体***的异常活性与自身免疫疾病、补体-相关的疾病等相关。溶血性疾病为当由于遗传缺陷使血细胞不受补体蛋白攻击的保护时出现的补体-相关的疾病。已报道补体激活也与剧烈的免疫响应和组织破坏反应相关，所述免疫响应和组织破坏反应在风湿性关节炎、移植等中出现，并且诸如VEGF的物质通过组织损伤以及通过补体激活引起血管生成的免疫反应释放，所述血管生成导致老年性黄斑变性和糖尿病性视网膜病变。
即，补体***在维持健康中起重要作用；然而，其可能引起疾病或促进疾病的出现。因此，优选的是研发待用于治疗和诊断补体相关的疾病的补体***的新型抗体等。
提供了包含补体抑制剂的组合物，用于治疗或预防补体-相关的疾病的方法及其用途。
发明内容
技术问题
本发明致力于提供补体C5-结合分子(例如，C5-结合抗体或其抗原结合片段)，包含所述分子的药物组合物，用于制备所述分子和所述组合物的方法，以及使用所述分子和所述组合物的方法和所述分子和所述组合物的用途。
另外，本发明致力于提供特异性结合到C5蛋白质的抗体、或其抗原结合片段。
此外，本发明致力于提供包含编码含有重链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸，所述重链可变区与选自SEQ ID NO:7、17、27、37、47或57的任何一个具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。
另外，本发明致力于提供包含编码含有轻链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸，所述轻链可变区与选自SEQ ID NO:8、18、28、38、48或58的任何一个具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。
此外，本发明致力于提供包含如上文所述的核酸的载体和宿主细胞。
另外，本发明致力于提供药物组合物，其包含至少一个C5-结合分子(例如，C5-结合抗体或其抗原结合片段)。
此外，本发明致力于提供使用C5-结合分子治疗或诊断补体-相关的疾病的方法。
另外，本发明致力于提供用于诊断补体-相关的疾病的试剂盒，其包括C5-结合分子；和容器。
此外，本发明致力于提供所述C5-结合分子在制备用于治疗补体-相关的疾病的药剂中的用途。
此外，本发明致力于提供所述C5-结合分子在治疗补体-相关的疾病中的用途。
问题的解决方案
本发明的示例性实施方式提供特异性结合到C5蛋白质的抗体，或其抗原结合片段。本发明的抗体或其抗原结合片段可以通过特异性结合到C5蛋白质而抑制补体激活来预防或治疗补体-相关的疾病。
本发明的“抗体”包括完整抗体及其任何抗原-结合部分或单链。天然存在的“抗体”为糖蛋白，其包括通过二硫键交互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由三个结构域组成：CH1、CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步被细分为高变性区，被称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区域，被称为框架区(FR)。每个VH和VL由以下述顺序从氨基末端至羧基末端排列的三个CDR和四个FR组成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段特异性结合到C5的β链(β-链)，更具体地说，结合到C5β-链的MG4结构域，更具体地说，基于β链的氨基酸序列(氨基酸数目从成熟C5蛋白质的第一个氨基酸Gln计数)，结合到第332个至第398个氨基酸残基序列，优选地，第332个至第378个氨基酸残基序列，更优选为第332个至第364个氨基酸残基序列，更优选为第332个至第348个氨基酸残基序列和/或第350个至第420个，优选地，第369个至第409个，更优选地，第379个至第398个，更优选地，第386个至第392个氨基酸残基序列。例如，因为C5蛋白质能够被结合，所以人C5蛋白质的氨基酸序列由SEQ ID NO.61表示，人C5蛋白质的β链的氨基酸序列由SEQ ID NO.62表示，人C5蛋白质的β链的MG4结构域的氨基酸序列由SEQ ID NO.63表示。也提供与其它物种，诸如兔、大鼠、猴等的种间交叉反应性。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段具有至少1×107M-1、1×108M-1、1×109M-1、1×1010M-1或1×1011M-1的亲和常数(KA)。
在一些示例性实施方式中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段为结合到与下表1至6中显示的抗体相同的表位的抗体或其抗原结合片段，并且与相应序列具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。另外，具有补体抑制活性的抗体也包括在本发明的范围内。另外，一些在重链恒定区和轻链恒定区明显的修饰的情况下，在提供相同或类似补体抑制活性的范围内的修饰包括在本发明的范围内。此外，由于这些抗体中的每一种能够结合到C5，所以可以将编码VH、VL的核苷酸序列，全长重链序列和全长轻链序列(氨基酸序列以及编码氨基酸序列的核苷酸序列)“混合并匹配”以产生本发明的其它C5-结合抗体。
表1.C5抗体(HRA-06-H2-1)
Figure GDA0000814343430000041
Figure GDA0000814343430000051
Figure GDA0000814343430000061
表2.C5抗体(HRA-06-H2-7)
Figure GDA0000814343430000071
Figure GDA0000814343430000081
表3.C5抗体(HRA-06-H2-18)
Figure GDA0000814343430000082
Figure GDA0000814343430000091
Figure GDA0000814343430000101
表4.C5抗体(HRA-06-H2-24)
Figure GDA0000814343430000102
Figure GDA0000814343430000111
Figure GDA0000814343430000121
表5.C5抗体(HRA-06-H1-9-H2-7)
Figure GDA0000814343430000122
Figure GDA0000814343430000131
表6.C5抗体(HRA-06-H1-9-H2-24)
Figure GDA0000814343430000141
Figure GDA0000814343430000151
本发明的抗体通过使用包含与表1至6中显示的抗体相同的氨基酸的所有抗体制备；抗体具有包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区以及包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中CDR序列中的至少一种具有本发明中所述的抗体或基于其保守性修饰的特异性氨基酸序列；抗体具有本发明的C5-结合抗体的功能性质；抗体结合到与表1至6中显示的抗体相同的表位；抗体具有在本发明中被描述为起始原料以工程化修饰的抗体的至少一种VH和/或VL序列，且包括具有由起始抗体部分修饰的性质的所有抗体(包括上述抗体)。
另外，本发明的抗体包括那些抗体，在所述抗体中，已对VH和/或VL内的框架残基进行修饰以便改善抗体的性质。
此外，本发明的抗体可以为特异性结合到C5蛋白质的全人抗体。当与嵌合抗体等比较时，本发明的抗体当施用于人对象时可以具有进一步降低的抗原性。如果抗体的可变区或全长链从使用人种系免疫球蛋白基因的***获得，则人抗体包括重链可变区或轻链可变区或全长重链或轻链，其为特定种系序列的产物或来源于特定种系序列。此类***包括用所关注的抗原免疫携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠或用所关注的抗原筛选噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因库。为人种系免疫球蛋白序列的“产物”或“来源于”人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以如此鉴定：将人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较，以及选择序列上与人抗体的序列最接近的人种系免疫球蛋白序列。
另外，本发明的抗体可以为双特异性或多特异性抗体。本发明的抗体或其抗原结合片段可以为结合多于两种不同的结合位点或靶分子的双特异性分子。
在一些示例性实施方式中，本发明的抗体可以为特异性结合到C5蛋白质的单克隆抗体。例如，本发明的抗体可以为特异性结合到C5蛋白质并且包括人重链恒定区和人轻链恒定区的人或人源化单克隆抗体或嵌合抗体。另外，本发明的抗体可以为单链抗体，可以为Fab片段、单链可变片段(scFv)和IgG同种型。优选的IgG同种型包括IgG2、IgG4和/或IgG2/4。在一些示例性实施方式中，本发明的IgG同种型为IgG2/4。IgG2/4杂交恒定区可以具有形式，其中IgG2的CH1和铰链区与IgG4的CH2和CH3区融合。
单克隆抗体可以通过产生单克隆抗体的一般方法产生，可以通过将合成的抗体基因***用于表达抗体的载体，优选为pcDNA、pCI、pCMV、pCEP4等来表达和纯化。另外，单克隆抗体可以通过使用B淋巴细胞的病毒或致癌转产生，或基于使用鼠***产生的鼠单克隆抗体的序列产生。例如，编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以通过标准的分子生物学技术从鼠杂交瘤获得，并且可以含有随其一起的非鼠免疫球蛋白序列。另外，对抗C5的人单克隆抗体可以通过使用具有部分人免疫***而非小鼠免疫***的转基因或转染色体小鼠产生。
在一些示例性实施方式中，本发明提供包含框架的抗体或其抗原结合片段，在所述框架中氨基酸被替换成来自各自的人VH或VL种系序列的抗体框架。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括至少一种互补决定区(CDR)序列，其具有与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、11、12、21、22、31、32、41、42、51或52至少95％的序列同一性。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括与SEQ ID NO:1、2、3、11、12、21、22、31、32、41、42、51或52相同的至少一种重链互补决定区序列。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括与SEQ ID NO:4、5或6相同的至少一种轻链互补决定区序列。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括选自SEQ ID NO:1、11、21、31、41或51的任何一种重链互补决定区1(CDR1)，选自SEQ ID NO:2、12、22、32、42或52的任何一种重链互补决定区2(CDR2)和/或选自SEQ ID NO:3、13、23、33、43或53的任何一种重链CDR3。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:4的轻链CDR1，SEQ ID NO:5的轻链CDR2和/或SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括选自SEQ ID NO:7、17、27、37、47或57的任何一种重链可变区或包括与选自SEQID NO:7、17、27、37、47或57的任何一种重链可变区具有至少90％、95％、97％或至少99％的序列同一性的重链可变区。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:8的轻链可变区或包括与SEQ ID NO:8的轻链可变区具有至少90％、95％、97％或至少99％的序列同一性的轻链可变区。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括选自SEQ ID NO:9、19、29、39、49或59的任何一种重链，或包括与选自SEQ IDNO:9、19、29、39、49或59的任何一种重链具有至少90％、95％、97％、或至少99％的序列同一性的重链可变区。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:10的轻链或包括与SEQ ID NO:10的轻链具有至少90％、95％、97％或至少99％的序列同一性的轻链。
在一些示例性实施方式中，根据本发明特异性结合到C5蛋白质的抗体或其抗原结合片段包括结合到SEQ ID No.62的C5蛋白质的β链中的表位的那些。详细地，基于C5蛋白质的β链氨基酸序列(氨基酸数目从成熟C5蛋白质的第一个氨基酸Gln计数)，表位可以对应于第332个至第398个氨基酸残基序列，优选地，第332个至第378个，更优选地，第332个至第364个，更优选地，第332个至第348个和/或第350个至第420个，优选地，第369个至第409个，更优选地，第379个至第398个，更优选地，第386个至第392个氨基酸残基序列。
另外，本发明提供包含编码含有重链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸，所述重链可变区与选自SEQ ID NO:7、17、27、37、47或57的任何一种具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。
在一些示例性实施方式中，包含编码含有本发明的重链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸具有在下文表7中显示的序列或与其序列的任何一种具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。
表7.编码重链可变区的核苷酸序列
Figure GDA0000814343430000181
Figure GDA0000814343430000191
Figure GDA0000814343430000201
Figure GDA0000814343430000211
Figure GDA0000814343430000221
另外，本发明提供包含编码含有轻链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸，所述轻链可变区与SEQ ID NO:8具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。在一些示例性实施方式中，包含编码含有本发明的轻链可变区的多肽的核苷酸序列的核酸具有在下文表8中显示的序列或与其序列的任何一种具有至少90％、95％、97％、98％或至少99％的序列同一性。
表8.编码轻链可变区的核苷酸序列
Figure GDA0000814343430000222
Figure GDA0000814343430000231
此外，本发明提供包含如上文所述的核酸的载体和宿主细胞。在一个示例性实施方式中，本发明提供宿主细胞，其包含(1)编码本发明的抗体的重链的重组DNA片段，以及(2)编码本发明的抗体的轻链的第二重组DNA片段。在另一示例性实施方式中，本发明提供包含编码本发明的抗体的每个重链和轻链的重组DNA片段的宿主细胞。在一些示例性实施方式中，抗体或其抗原结合片段为人单克隆抗体或其抗原结合片段。
为了表达编码C5-结合抗体、链、或其结合片段的多核苷酸，可以使用不同表达载体，为了在哺乳动物宿主细胞中产生抗体，可以使用基于病毒或非病毒表达载体。可以使用诸如pcDNA、pCI、pCMV、pCEP4等的载体以及诸如HEK293、CHO、CHO-DG44等的宿主细胞。
用于容纳和表达C5-结合抗体的宿主细胞可以为真核细胞或原核细胞。可以包括大肠杆菌，优选地，大肠杆菌ER2738、HB2151、BL21等作为实例，其为可用于克隆和表达本发明的多核苷酸的原核主细胞。其它适合使用的微生物宿主细胞包括芽孢杆菌属，诸如枯草芽孢杆菌和其它肠道细菌，诸如沙门氏菌属、沙雷氏菌属和各种假单胞菌物种。其它微生物，诸如酵母，能够被用于表达本发明的C5-结合多肽，也可以使用与杆状病毒载体组合的昆虫细胞。
在一些优选的示例性实施方式中，使用哺乳动物宿主细胞以表达和产生本发明的C5-结合多肽。例如，它们可以为表达内源性免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系或容纳外源性表达载体的哺乳动物细胞系。另外，例如作为任何动物或人细胞，可以使用许多能够分泌免疫球蛋白的合适的宿主细胞系，其包括CHO细胞系、Cos细胞系、HeLa细胞、骨髓瘤细胞系、HEK细胞系、转化的B-细胞和杂交瘤，优选地，可以使用HEK293、CHO、CHO-DG44。
此外，本发明提供药物组合物，其包含至少一种C5-结合分子(例如，C5-结合抗体或其抗原结合片段)。
本发明的药物组合物对于治疗补体-相关的疾病为有效的。补体-相关的疾病包括所有疾病和病理学病患，其中疾病的发作与补体***的异常激活相关，例如，补体缺陷。例如，补体-相关的疾病包括炎症性疾病和自身免疫疾病，诸如风湿性关节炎(RA)，骨关节炎，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，局部缺血和再灌注之后的远端组织损伤，心肺旁路手术期间的补体激活，皮肌炎，天疱疮，狼疮肾炎，肾小球肾炎，肾血管炎，心肺旁路、心力衰竭诱导的冠状内皮功能障碍，II型膜增生性肾小球肾炎，急性肾衰竭，抗磷脂综合征，黄斑变性，眼内炎，新型血管疾病，同种异体移植物移植，超急性排斥，血液透析，慢性阻塞性肺病(COPD)呼吸窘迫综合征，哮喘，阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)和吸入性肺炎，但本发明并不限于此。
组合物可以另外地含有适合治疗或预防补体-相关的疾病的一种或多种其它治疗剂。药物载体增强或稳定组合物，或促进组合物的制备。药学上可接受的载体包括生理上相容的溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。
本发明的药物组合物可以通过本领域已知的多种方法施用。取决于期望结果、施用途径和/或施用模式改变。优选的是，施用可以为静脉内、肌内、腹膜内或皮下、或邻近靶位点施用。在具体示例性实施方式中，配制本发明的抗体使得可将它们玻璃体内施用入眼。取决于施用途径，可以将活性化合物(即，抗体、双特异性和多特异性分子)用材料包覆以保护化合物免于酸或其它天然条件的作用，所述作用可以使化合物失活。
组合物需要为无菌的且为流体。例如，通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)、或在分散液的情况下通过保持所要求的颗粒大小、以及通过使用表面活性剂可以保持适当的流动性。在许多情况下，优选的是在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇，诸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。可注射组合物的长期吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝或明胶来实现。
本发明的药物组合物可以根据本领域熟知且常规实践的方法制备。参见，如[Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Mack Publishing Co.,20th ed.,2000]和[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,纽约,1978]。药物组合物优选在GMP条件下制备。通常，在本发明的药物组合物中使用C5-结合抗体的治疗有效剂量或有效剂量。通过本领域技术人员已知的常规方法可将C5-结合抗体配制成药学上可接受的剂量形式。调节剂量方案以提供最佳的期望响应(如，治疗响应)。
本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可发生改变以便获得有效实现特定患者所期望的治疗响应、组合物和施用模式而对患者不具有毒性的活性成分的量。选择的剂量水平取决于多种药代动力学因素，例如，本发明使用的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，正使用的特定化合物的***速率，治疗的持续时间，与使用的特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质，正治疗的患者的年龄、性别、体重、状态、一般健康和先前病史以及其它因素。
需要滴定治疗剂量以优化安全性和功效。对于全身施用抗体而言，剂量范围为约0.0001mg/kg至100mg/kg，且更通常为0.01mg/kg至15mg/kg的宿主体重。示例性的治疗方案需要每两周全身施用一次或每月全身施用一次或每3至6个月全身施用一次。对于玻璃体内施用抗体而言，剂量范围为约0.0001mg至约10mg。示例性的治疗方案需要每两周全身施用一次或每月全身施用一次或每3至6个月全身施用一次。
在全身施用的一些方法中，调整剂量以实现血浆抗体浓度为1μg/ml至1000μg/ml，在一些方法中为25μg/ml至500μg/ml。可选地，在需要较少频率施用的情况下，可将抗体以缓释制剂施用。剂量和频率根据患者中抗体的半衰期而改变。在预防应用中，在长周期内在相对不频繁的间隔施用相对低的剂量。
此外，本发明提供使用C5-结合分子治疗或诊断补体-相关的疾病的方法。
使用本发明的C5-结合分子治疗补体-相关的疾病的方法包括：施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段或包含它们的组合物。在本发明中使用的术语“治疗有效量”表示本发明的C5-结合分子的量或包含本发明的C5-结合分子的组合物的量，其有效预防或治疗补体-相关的疾病。
当C5-结合分子或包含它们的组合物在与作为本发明治疗剂的另一试剂组合施用时，这两种物质可以依次施用或以任何顺序同时施用。与C5-结合抗体组合治疗的合适的试剂包括本领域已知的能够调节补体组分的活性的试剂。例如，所述试剂包括膦酸酯、多阴离子物质、磺酰氟、多核苷酸、海松酸、若干抗炎剂等。可以加入与至少一种治疗剂等的组合治疗，且与至少一种治疗剂等的组合治疗可以带来协同作用的结果。
本发明包括在生物样品(例如，血液、血清、细胞、组织)或来自患有补体-相关的疾病的对象或患有其风险的对象中确定C5蛋白质和/或核酸的表达以及C5蛋白质功能的诊断测定。在本发明的抗体中，例如，放射性免疫测定(REA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)和径向扩散测定可用于检测补体裂解产物。此外，可以将诊断测定、预后测定、药理学基因(pharmacological genetic)和临床监测用于预防性治疗目的为预后(预测)的对象。另外，本发明提供预后(预测)测定用于确定对象是否处于与补体途径的异常激活调节相关的疾病发作的风险中。例如，C5基因的突变可以在生物样品中测定。通过使用目的为预后或预测的该测定，在特征为C5蛋白质、核酸的表达或活性的疾病或随其相关的疾病发作之前可以预防性治疗对象。
另外，本发明提供用于诊断补体-相关的疾病的试剂盒，其包括：C5-结合分子；和容器。用于本发明诊断的试剂盒可以至少包括任何一种上述C5-结合分子。容器可以包括固体载体，C5-结合分子可以结合到固体载体，固体载体可以为多孔或非多孔的，扁平的或非平面的。
此外，本发明提供C5-结合分子在制备用于治疗补体-相关的疾病的药剂中的用途。用于制备药剂或包含它们的组合物的本发明的C5-结合分子可以与可接受的载体等混合，且可以以与其它试剂一起的复方药物制备以具有活性成分的协同作用。
另外，本发明提供C5-结合分子的用途。用于治疗本发明的补体-相关的疾病的C5-结合分子可以以治疗目的使用，以及可以以用于确定来自患有补体-相关的疾病的对象或处于其风险的对象的C5蛋白质和/或核酸的表达或C5蛋白质功能的预后测定的用途使用。
除非相互矛盾，否则本发明的用途、组合物和治疗方法的描述以彼此相同的方式应用。
本发明的C5-结合分子对诊断、预防和治疗补体-相关的疾病有效。
附图说明
图1显示根据本发明的示例性实施方式使用兔(A)和鸡(B)的免疫库在生物淘选之后随机选择的40个克隆的吸光度。
图2显示根据本发明的示例性实施方式选自兔的免疫库和鸡的免疫库的五种抗体以及依库珠单抗(其为人C5的比较性抗体)的吸光度测量结果。
图3显示由五个突变的亚库获得的对C5具有结合亲和力的许多克隆的结果。
图4显示通过使用HRA-06克隆产生的具有改善的亲和力的克隆的结合亲和力的比较性结果，所述HRA-06克隆为根据本发明的示例性实施方式作为模板的人源化克隆。
图5显示根据本发明的示例性实施方式产生的抗体在补体依赖性细胞毒性测定中具有高的补体依赖性细胞毒性抑制能力。
图6显示根据本发明的示例性实施方式产生的抗体在C5a生成测定中具有高的C5a生成抑制能力。
图7显示根据本发明的示例性实施方式产生的单克隆抗体的物种交叉反应性。
图8显示根据本发明的示例性实施方式通过尺寸排阻色谱法产生且纯化的抗体的结果。
图9显示根据本发明的示例性实施方式抗体结合到C5的β链。
图10显示根据本发明的示例性实施方式抗体结合到C5的β链的MG4结构域。
图11显示根据本发明的示例性实施方式抗体特异性结合到突变的Fc融合蛋白中的MG4结构域，在Fc融合蛋白中从β链的C端依序去除一个结构域。
图12显示根据本发明的示例性实施方式的抗体结合到突变体中β链的N-末端处第332个至第348个氨基酸残基，MG4结构域从所述突变体中依序去除，如通过免疫印迹确认。
图13显示根据本发明的示例性实施方式的抗体结合到β链的N-末端处的第379个至第398个氨基酸残基，如通过ELISA确认。
图14显示根据本发明的示例性实施方式的抗体结合到β链的N-末端处第386个至第392个氨基酸残基(基于MG4结构域序列为第55个至第61个氨基酸序列)，如通过ELISA确认。
具体实施方式
在下文中，通过以下实施例更详细地描述本发明的组分和技术特征。然而，以下实施例通过实施例的方式提供，且因此，本发明的保护范围并不限于仅以下实施例。
参考附图描述本文所述的各种实施例。在以下描述中，描述各种具体细节，例如，特定形式、组合物和制备方法等以完全理解本发明。然而，在不含至少一种具体细节或连同其它已知的方法和形式的情况下，可以实践具体实施例。在另一示例性实施方式中，未以具体细节描述已知方法和制造技术以免不必要地混淆本发明。在整个说明书中提及的“一个示例性实施方式”或“实施例”意指描述的与实施例相关的具体特征、形式、组合物或性质被包括在本发明的一个或多个实施例中。因此，在整个说明书的不同地方中表达“一个示例性实施方式”或“实施例”的情况不一定指明本发明的相同示例性实施方式。另外，通过在至少一个示例性实施方式中的任何合适的方法可以将具体特征、形式、组合物或性质彼此组合。
实施例1.C5免疫抗体库的构建
将5μG的人C5蛋白质(Calbiochem)与RIBI MPL+TDM+CWS佐剂(Sigma,St.Louis,Mo,USA)混合，皮下注入NZW兔和鸡，并在2周间隔内对兔进行三次加强免疫，对鸡进行四次加强免疫。通过使用TRI试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)从免疫完成的兔的脾脏和骨髓以及免疫完成的鸡的脾脏、骨髓和法氏囊分离总RNA，并使用oligo-dT引物和SuperScriptTM III First-Strand Synthesis System(Invitrogen)合成第一链cDNA。通过使用下文表9(兔)和表10(鸡)的引物构建单链Fv库，所述引物对免疫球蛋白的重链可变区和轻链可变区为特异的。对于兔scFv库，将VL的10个引物组合(9 X Vκ和1 X Vλ)和VH的4个组合用于扩增编码序列。对于鸡scFv库，将每个Vλ和VH的一个引物组合用于扩增编码序列。
表9.兔单链Fv库的Vκ、Vλ和VH的引物
Figure GDA0000814343430000291
Figure GDA0000814343430000301
Figure GDA0000814343430000311
表10.鸡单链Fv库的Vλ和VH的引物
Figure GDA0000814343430000321
在每个反应中，将1μl cDNA与60pmol各个引物、10μl 10X反应缓冲液、8μl 2.5mMdNTP、0.5μl Taq DNA聚合酶和水混合至100μl的最终体积。在以下条件进行PCR反应：在94℃保持15sec(秒)，在56℃保持30sec，以及在72℃保持90sec；30个循环；随后在72℃进行10min(分钟)的最终延伸。将长度大约为350个碱基对的扩增片段上样，在1.5％的琼脂糖凝胶上跑样，并用QIAEX II Gel Extraction Kit(QIAGEN,Valencia,CA,USA)纯化。在第二轮PCR中，将第一轮VL产物和VH产物通过重叠延伸PCR随机连接。在由100ng纯化的VL产物和VH产物、60pmol各个引物、10μl 10X反应缓冲液、8μl 2.5mM dNTP和0.5μl Taq DNA聚合酶组成的100μl混合物中进行每个PCR反应。在以下条件进行PCR反应：在94℃保持15sec，在56℃保持30sec以及在72℃保持2min；20个循环；随后在72℃进行10min的最终延伸。用QIAEX IIGel Extraction Kit(QIAGEN)纯化约700个碱基对大小的scFv片段。通过在50℃温育8小时，将scFv片段和pComb3XSS载体用SfiI限制性内切酶(Roche Molecular Systems,Pleasanton,CA,USA)消化。通过将反应混合物在16℃温育12小时使用T4DNA连接酶将700ngSfiI-消化的scFv与1400ng pComb3X载体连接，随后乙醇沉淀。将连接的库通过电穿孔转化入大肠杆菌ER2738。将细胞用3ml超级肉汤(SB)培养基重新悬浮并在37℃温育1小时同时在250rpm下振荡。然后，将10ml SB培养基和3μl 100mg/ml羧苄青霉素加入至培养基。通过将0.1μl、1μl和10μl培养物铺板在含有50μg/ml羧苄青霉素的Luria Broth(LB)平板上确定库大小。在温育一小时之后，将4.5μl 100mg/ml的羧苄青霉素加入至培养物并再温育一小时。将培养物加入至2ml VCSM13辅助噬菌体(>1011cfu/ml)、183ml SB培养基和92.5μl 100mg/ml的羧苄青霉素中并在37℃温育2小时同时在250rpm下振荡。将卡那霉素(280μl)加入至培养物中，并将培养物在250rpm和37℃下振荡过夜。第二天，将培养物在3000g离心15min。将细菌沉淀保存用于噬菌粒DNA制备，并将上清液转移至干净的离心瓶中。加入8g聚乙二醇-8000(PEG-8000,Sigma)和6g NaCl(Merck)，并将上清液在冰上储存30min。在4℃下将上清液在15,000g离心15min。将噬菌体沉淀重新悬浮在含有1％牛血清白蛋白(BSA)Tris-缓冲盐水(TBS)中。
实施例2：生物淘选
在室温下将3ug的人C5抗体用1X107个磁珠(Dynabeads M270-Epoxy,Invitrogen)包覆16小时。用PBS洗涤珠粒并在室温下用含有3％BSA的PBS封闭1小时。将包覆的珠粒洗涤并在室温下与噬菌体-展示的scFv一起温育2小时。将珠粒用0.5％的TPBS洗涤以去除未结合的噬菌体。将结合的噬菌体用100ul0.1M甘氨酸-HCl洗脱并用6ul 2M Tris-HCl(pH 9.0)中和。将洗脱的噬菌体感染大肠杆菌ER2738并用VCSM13辅助噬菌体救援过夜扩增。通过在37℃将噬菌体感染的细菌培养物铺在含有50μg/ml羧苄青霉素的LB平板上确定投入和产出噬菌体滴度。第二天，通过加入如在实施例1中所述的PEG-8000和NaCl沉淀噬菌体。
实施例3.通过噬菌体ELISA选择scFv克隆
针对人C5进行使用噬菌体展示scFvs的ELISA以从生物淘选中分析选择的克隆。在4℃将微量滴定96孔板用100ng的人C5/孔涂覆过夜并用含3％BSA的PBS封闭。将每个噬菌体培养物与等体积的含6％BSA的PBS混合，加入至人C5-涂覆的96-孔板中，并在37℃温育2小时。在完成温育之后，将板洗涤并用HRP偶联的抗-M13抗体(Amersham,USA)温育。在完成温育之后，洗涤板并将含1μg/ml 2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS,Amresco,OH,USA)的0.05M柠檬酸缓冲液和1.0％H2O2加入至每孔中，随后形成颜色，并在405nm处测量吸光度。
图1中显示其结果。
图1A显示兔的免疫库，图1B显示鸡的免疫库。如对人C5显示出吸光度为0.6或更多的克隆的基因序列的分析结果，从来自兔免疫库的两种克隆以及来自鸡免疫库的三种克隆获得每种具有不同序列的五个scFv克隆。
另外，将选择的五种scFv克隆和依库珠单抗(其为对照)转化成ScFv-Fc融合蛋白以通过ELISA比较针对C5的结合亲和力。根据如上文所述的相同方法通过使用HRP-结合的抗-人IgG确定结合到C5的抗体的量，且在图2中显示其结果。
如在图2中显示，所有选择的五种scFv克隆显示的吸光度比依库珠单抗显示的吸光度高。
实施例4.亲和力-成熟的且人源化抗体的构建
在来自人种系κ1/IGHV3-23的8个框架区(FRL1-4,FRH1-4)之间***对人补体C5具有结合亲和力和激活抑制能力的6个CDR(互补决定区，轻链抗原互补决定区1-3[CDRL 1-3]，重链抗原互补决定区1-3[CDRH1-3])以合成人源化抗-补体C5 scFv基因(HRA-06,Genscript,Piscataway,NJ,USA)。
为生成HRA-06的突变的亚库，使用含有简并密码子NNK或MNN(N＝A,T,G或C,K＝G或T,M＝A或C)的寡核苷酸。将HRA-06的ScFv基因用于模板DNA。在五个CDR中引入随机化的密码子，除了通过PCR的CDRH3。将扩增的scFv片段用QIAEX II Gel Extraction Kit(QIAGEN)纯化。将scFv和pComb3XSS载体用SfiI限制性内切酶(Roche Molecular Systems)消化并连接，随后乙醇沉淀。将连接的库通过与实施例1相同的方法转染大肠杆菌ER2738以构建噬菌体库。通过与实施例2相同的方法基于构建的噬菌体库选择抗原。最后，根据与实施例3相同的方法通过噬菌体ELISA确认与C5的结合亲和力。
如在图3中显示，从5种突变的亚库中获得许多对C5具有结合亲和力的克隆。
实施例5.重组抗-C5抗体以及作为对照的依库珠单抗的构建
1.抗-C5抗体至完整的IgG载体和scFv-Fc载体的亚克隆
将编码人IgG2铰链和IgG2/4杂种CH2-CH3的基因通过HindIII(New EnglandBiolabs)和XhoI(New England Biolabs)限制性内切酶***pCEP4载体中(Invitrogen)。将编码抗-C5scFv的基因通过两个SfiI限制性位点在Fc区域的5’末端进行亚克隆。对于轻链而言，将人免疫球蛋白Cκ基因亚克隆至哺乳动物表达载体中。对于重链而言，将来自人CH1和人IgG2至IgG2/4杂种CH2-CH3区的铰链的基因亚克隆至哺乳动物表达载体中。将可变轻链和可变重链亚克隆至该完整的IgG载体中。基于在“日本药品和医疗器械管理局(JapanPharmaceuticals and Medical Devices Agency(PMDA))”上贴出的依库珠单抗(产品名称：Soliris)的检查报告中陈述的抗体序列通过合成重链基因和轻链基因获得依库珠单抗的抗体序列。
2.转染和蛋白质纯化
进行转染以过表达重组蛋白质。将2μg的哺乳动物表达载体/ml培养物体积和4μg的聚乙烯亚胺/ml(PEI,Polysciences,Warrington,PA,USA)在相应于1/10培养物体积的150mM NaCl中混合，并在室温静置15min。将混合物加入至HEK293F细胞中(2 x 106个细胞/ml)并在以下条件温育5天：含有100U/ml青霉素(Invitrogen)和100U/ml链霉素(Invitrogen)的FreeStyleTM 293表达培养基，37℃，7％CO2,在轨道式振荡器上为135rpm。收获细胞培养物上清液并进行蛋白质A亲和力凝胶色谱以纯化IgG和Fc融合蛋白。
实施例6.单克隆抗体的结合亲和力的测量
进行ELISA(酶联免疫吸附测定)以测量通过实施例5产生的抗体的补体C5结合亲和力。将针对每种浓度稀释的抗体加入至用C5涂覆的96-孔板中以进行反应。将辣根过氧化物标记的抗-人IgG抗体用作第二抗体，随后用ABTS(2,2'-联氨双[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二铵盐)形成颜色并通过与实施例3相同的方法测量吸光度。
在本实验中使用的单克隆抗体为六种亲和力-成熟的且人源化抗-C5抗体(HRA-06-H2-1、HRA-06-H2-7、HRA-06-H2-18、HRA-06-H2-24、HRA-06-H1-9-H2-7、HRA-06-H1-9-H2-24)和阳性对照组抗体依库珠单抗以及阴性对照组抗体帕丽珠单抗，且图3中显示其结果。
如在图4中显示，所有抗-补体C5抗体对C5显示出结合亲和力且与依库珠单抗相比，六种亲和力成熟的和人源化人源化抗-C5抗体显示出高的吸光度。
实施例7:补体-依赖性细胞毒性(CDC)体外测定
将表达CD20的人伯基特淋巴瘤细胞系Raji保持在补充有10％FBS(Invitrogen)、100U/ml青霉素(Invitrogen)和100U/ml链霉素(Invitrogen)的RPMI 1640中。将靶细胞洗涤并以1 x 106个细胞/ml的浓度重新悬浮。将抗-CD20人IgG、利妥昔单抗(Roche)用浓度为3μg/ml的CDC溶液稀释。将等体积的靶细胞和致敏性抗体一起混合以在96-孔板中得到100μl/孔的体积，并在室温静置5min。通过加入人补体血清开始测定，加入的人补体血清导致最终体积为150μl/孔，且最终浓度为4％的血清。在温育2小时之后，向每孔加入15μl四唑盐(WST-1,Takara Bio,日本)并将板再温育2小时。通过测量450nm处的OD分析活细胞。在加入靶细胞和致敏性抗体混合物之前，通过与血清在37℃预温育30min评估抗-C5抗体的作用。将相同浓度的帕丽珠单抗用作IgG对照。用下式计算细胞活力的百分比：
活力％＝(测试抗体–背景)/(测试无抗体–背景)x 100
在图5中显示其结果。
如在图5中显示，根据本发明产生的亲和力-成熟的且人源化抗-C5抗体显示出CDC抑制能力，且与依库珠单抗相比所有抗体显示出高的细胞活力。
实施例8:C5a产生含量的体外测量
在将靶细胞、致敏性抗体和血清温育2小时之后，将细胞通过离心沉淀，并按照制造商的说明使用BD OptiEIA TM Human C5a ELISA Kit II(BD Biosciences,San Jose,CA,USA)通过夹心ELISA测定上清液的C5a含量。
在图6中显示其结果。
如在图6中显示，根据本发明产生的所有亲和力-成熟的且人源化抗-C5抗体显示出C5a产生抑制能力，且与依库珠单抗相比所有四种亲和力-成熟的且人源化抗-C5抗体显示出高的抑制能力。
实施例9:单克隆抗体的物种交叉反应性的测量
进行免疫印迹以确认单克隆抗体是否结合到其它非人物种的补体C5。将人C5蛋白质和人(Sigma)、猕猴、BALB/c小鼠、Wistar大鼠、NZW兔的血清分别进行稀释并进行SDS-PAGE，将离析的蛋白质转移至硝酸纤维素膜。通过根据本发明产生的抗-补体C5抗体HRA-06-H2-1进行免疫印迹。
在图7中显示其结果。
如在图7中显示，抗-补体C5抗体显示出至人(Sigma)、猕猴、Wistar大鼠和NZW兔的C5的结合亲和力。
实施例10:尺寸排阻色谱法
通过使用Waters 2489***(Waters Corporation,Milford,MA,USA)和Zenix-C300柱(Sepax Technologies,Inc.,Newark,DE,USA)在纯化的抗体上进行尺寸排阻色谱法(SEC)分析。流动相组合物(150mM磷酸钠,pH 7.0)和流速(1.0mL/min)在所有运行中为恒定的。通过监测柱洗出液在280nm的吸光度确定蛋白质浓度。通过将单个峰面积除以峰面积的总和计算分级浓度。
在图8中显示其结果。图8A至8D分别表示A)HRA-06-H2-1，B)HRA-06-H2-7，C)HRA-06-H2-18，D)HRA-06-H2-24，E)HRA-06-H1-9-H2-7和F)HRA-06-H1-9-H2-24。
如在图8中显示，确认了在抗-补体C5抗体的物理和化学性质中几乎检测不到聚集。
实施例11:表位作图
1.确认抗体结合到C5β-链
将补体C5蛋白质分别在非还原条件(泳道1)和还原条件(泳道2)下经历SDS-PAGE，随后使用抗-补体C5抗体进行免疫印迹以确认是否形成β-链结合。在图9中显示其结果。
图9A显示当将依库珠单抗用作抗体时的结合，图9B显示当将根据本发明的HRA-06-H2-1用作抗体时的结合。如本领域已知的，确认了依库珠单抗结合到C5(整个补体蛋白)，并在还原条件下在泳道2中结合到α-链。同时，确认了根据本发明的HRA-06-H2-1抗体结合到C5(整个补体蛋白)，并在还原条件下在泳道2中结合到β-链。
2.作为Fc融合蛋白的C5β链突变结构域的产生以及结合位点的鉴定
从cDNA扩增由C5的β链以及β链的序列删除突变体组成的六个结构域。设计引物以在5’和3’末端加入SfiI限制性位点(表11)。通过如表12中所述的引物组合扩增C5的β链的系列删除突变体。将扩增的PCR片段用SfiI消化并克隆至修饰的pCEP4载体，所述修饰的pCEP4载体在克隆位点的3’区含有人IgG1的铰链区和CH2-CH3结构域。如实施例5中所述转染这些克隆并纯化Fc融合蛋白。
表11.用于扩增β链结构域的引物序列
Figure GDA0000814343430000391
Figure GDA0000814343430000401
表12.用于构建β链结构域以及β链的删除突变体的引物组合
结构域名称 引物组合
MG1 MG1_F/MG1-R
MG2 MG2_F/MG2-R
MG3 MG3_F/MG3-R
MG4 MG4_F/MG4-R
MG5 MG5_F/MG5-R
接头 接头_F/接头-R
MG1-2 MG1_F/MG2-R
MG1-3 MG1_F/MG3-R
MG1-4 MG1_F/MG4-R
MG1-5 MG1_F/MG5-R
使包含各个结构域的蛋白质分别进行SDS-PAGE，且通过使用抗-补体C5抗体(HRA-06-H2-1)进行免疫印迹。在图10和图11中显示其结果。
图10A为显示C5β链和产生的Fc融合蛋白的结构的示意图，图10B显示免疫印迹结果。如在图10中显示，确认了根据本发明产生的HRA-06-H2-1抗体结合到具有MG4结构域的Fc融合蛋白。
图11A为显示C5β链和产生的Fc融合蛋白的结构的示意图，图11B显示免疫印迹结果。如在图11中显示，确认了根据本发明产生的HRA-06-H2-1抗体仅结合到包含MG4结构域的Fc融合蛋白。
3.作为Fc融合蛋白的MG4结构域的产生以及结合位点的鉴定
克隆β链的MG4结构域和五个突变体，来自所述突变体的MG4结构域从MG4结构域的N-末端依序去除。设计引物以在5’和3’末端加入SfiI限制性位点(表13)。将扩增的PCR片段用SfiI消化并克隆至修饰的pCEP4载体，所述修饰的pCEP4载体在克隆位点的3’区含有人IgG1的铰链区和CH2-CH3结构域。如实施例5中所述转染这些克隆并纯化Fc融合蛋白。使纯化的Fc融合蛋白经历SDS-PAGE，并如上文所述进行免疫印迹。
表13.用于扩增MG4结构域的引物序列
Figure GDA0000814343430000411
在图12中显示其结果。图12A显示MG4结构域以及通过依序去除结构域产生的Fc融合蛋白，图12B显示使用HRA-06-H2-1抗体的免疫印迹结果。如在图12中显示，确认了在突变体中未实现结合，从β链的N-末端去除来自突变体的第332个至第348个氨基酸残基序列，这可理解为β链的MG4结构域中的第332个至第348个氨基酸残基序列为具有高的抗体-结合可能性的序列。
4.来自人/小鼠杂种MG4结构域的抗体-结合位点的确认
在重叠延伸PCR中产生C5β链的人/小鼠杂种MG4结构域。设计引物以在5’和3’末端加入SfiI限制性位点(表14)。将PCR片段用SfiI消化并克隆至SfiⅠ-消化的pComb3X载体。将这些克隆转染入大肠杆菌ER 2738中。将来自每个人/小鼠MG4杂种的单个克隆温育直至在600nm的吸光度达到约1.0。通过加入VCSM13辅助噬菌体(1011pfu/ml)，随后在37℃温育2小时进行噬菌体感染。加入卡那霉素(25μg/ml)并将培养物在37℃温育过夜，同时不断摇晃。通过在3000g离心15min去除细菌。
表14.用于人/小鼠杂种MG4结构域扩增的引物序列
Figure GDA0000814343430000421
Figure GDA0000814343430000431
Figure GDA0000814343430000441
Figure GDA0000814343430000451
如下进行噬菌体ELISA：将抗-C5IgG2/4、HRA-06-H2-7在0.1M碳酸氢钠缓冲液(pH8.6)中稀释，将100ng抗体在4℃于96孔板上涂覆过夜。通过加入100μl含5％脱脂乳的TBS(含有0.05％的吐温20)封闭各孔并在37℃温育1小时。将噬菌体在6％BSA/PBS中稀释两倍，然后将50μl稀释的噬菌体加入至各孔中并在37℃温育2小时。洗涤板，加入50μl稀释的HRP-结合的抗-M13抗体(1:5000)，并将板在37℃温育1小时。洗涤板，将50μl ABTS底物溶液加入至各孔中，并在405nm处测量吸光度。
在图13和14中显示其结果。
图13A显示人/小鼠杂种MG4结构域，图13B显示ELISA结果。如在图13中显示当基于β链序列的第379个至第398个氨基酸残基序列为人序列时，HRA-06-H2-7抗体结合，这显示与抗体的相应位点的结合可能性。
图14显示通过更多特异性确认序列的结合位点获得的结果。图14A显示人/小鼠杂种MG4结构域，图14B显示ELISA结果。如在图14中显示当基于β链序列的第386个至第392个氨基酸残基序列(基于MG4结构域序列为第55至第61个氨基酸序列)为人序列时，HRA-06-H2-7抗体结合，这显示与抗体的相应位点的结合可能性。
Figure IDA0000814343440000011
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Claims (11)

1.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:1的重链CDR1、SEQ ID NO:2的重链CDR2，SEQ ID NO:3的重链CDR3、SEQ ID NO:4的轻链CDR1、SEQ ID NO:5的轻链CDR2、以及SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
2.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:11的重链CDR1、SEQ ID NO:12的重链CDR2、SEQ ID NO:3的重链CDR3、SEQ ID NO:4的轻链CDR1、SEQ ID NO:5的轻链CDR2、以及SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
3.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:21的重链CDR1、SEQ ID NO:22的重链CDR2、SEQ ID NO:3的重链CDR3、SEQ ID NO:4的轻链CDR1、SEQ ID NO:5的轻链CDR2、以及SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
4.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:31的重链CDR1、SEQ ID NO:32的重链CDR2、SEQ ID NO:3的重链CDR3、SEQ ID NO:4的轻链CDR1、SEQ ID NO:5的轻链CDR2、以及SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
5.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:41的重链CDR1、SEQ ID NO:42的重链CDR2、SEQ ID NO:3的重链CDR3、SEQ ID NO:4的轻链CDR1、SEQ ID NO:5的轻链CDR2、以及SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
6.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:51的重链CDR1、SEQ ID NO:52的重链CDR2、SEQ ID NO:3的重链CDR3、SEQ ID NO:4的轻链CDR1、SEQ ID NO:5的轻链CDR2、以及SEQ ID NO:6的轻链CDR3。
7.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含选自由SEQ ID NO:7、17、27、37、47和57组成的组的重链可变区；以及
SEQ ID NO:8的轻链可变区。
8.一种结合到人C5蛋白质的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含选自由SEQ ID NO:9、19、29、39、49和59组成的组的重链；以及
SEQ ID NO:10的轻链。
9.一种核酸，包含：编码包含选自由SEQ ID NO:7、17、27、37、47和57组成的组的重链可变区的多肽的核苷酸序列；以及
编码包含SEQ ID NO:8的轻链可变区的多肽的核苷酸序列。
10.一种载体，其包含根据权利要求9所述的核酸。
11.一种宿主细胞，其包含根据权利要求10所述的载体。
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