ES2927958T3 - Régimen de dosificación para antagonistas de MAdCAM - Google Patents

Régimen de dosificación para antagonistas de MAdCAM Download PDF

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Abstract

La presente invención proporciona un método para el tratamiento de un paciente que comprende administrar al paciente una dosis inicial de entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 150 mg de un anticuerpo antagonista de MAdCAM. También se proporcionan biomarcadores para evaluar la respuesta de un paciente al tratamiento anti-MAdCAM. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Régimen de dosificación para antagonistas de MAdCAM
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a regímenes de dosificación de anticuerpos antagonistas de MAdCAM. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La molécula de adhesión celular adresina mucosal (MAdCAM; también conocida como adresina) es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas de los receptores de adhesión celular. La selectividad de la dirección de los linfocitos en el tejido linfoide especializado y los sitios mucosales del tracto gastrointestinal está determinada por la expresión endotelial de MAdCAM. MAdCAM se expresa únicamente en la superficie celular de las vénulas endoteliales altas del tejido linfoide intestinal organizado, como las placas de Peyer y los ganglios linfáticos mesentéricos, pero también en otros órganos linfoides, como el páncreas, la vesícula biliar y las vénulas esplénicas y el seno marginal de la pulpa blanca esplénica.
Aunque la MAdCAM desempeña un papel fisiológico en la vigilancia inmunitaria intestinal, parece facilitar la extravasación excesiva de linfocitos en la enfermedad inflamatoria intestinal en condiciones de inflamación crónica del tracto gastrointestinal. TNFa y otras citoquinas proinflamatorias aumentan la expresión de MAdCAM endotelial y, en muestras de biopsia tomadas de pacientes con enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa (UC), hay un aumento focal de aproximadamente 2-3 veces en la expresión de MAdCAM en los sitios de inflamación. Se han observado patrones similares de expresión elevada en modelos experimentales de colitis. En otros modelos preclínicos para afecciones inflamatorias, como diabetes insulinodependiente, enfermedad de injerto contra huésped, enfermedad hepática crónica, encefalopatía inflamatoria y gastritis, también hay una reactivación de la expresión de MAdCAM fetal y participación de linfocitos a4p7+ activados en la patogénesis de la enfermedad. En estos modelos inflamatorios, así como en modelos de colitis en ratones mediados por hapteno (por ejemplo, TNBS, DSS, etc.) o de transferencia adoptiva (CD4+CD45Rbalto), el anticuerpo monoclonal (mAb) de MAdCAM anti-ratón de rata, MECA-367, que bloquea la unión de los linfocitos a4p7+ a MAdCAM, reduce el reclutamiento de linfocitos, la extravasación de tejidos, la inflamación y la gravedad de la enfermedad.
La WO2005067620 divulga anticuerpos antagonistas de MAdCAM y usos de los mismos. La WO2006096490 divulga anticuerpos antagonistas de MAdCAM y composiciones de los mismos. Vermeire et al., (2011), la WO 2004/081049, la US2009/0238820, la US2002/0147314 y la WO 2005/067620 analizan los anticuerpos de MAdCAM y las composiciones de los mismos.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La invención proporciona un anticuerpo antagonista de MAdCAM para su uso en un método de tratamiento de colitis ulcerosa en un paciente, en donde el anticuerpo antagonista de MAdCAM se administra por vía subcutánea al paciente a una dosis inicial de 75 mg del anticuerpo antagonista de MAdCAM seguido de una o más dosis posteriores de 75 mg del anticuerpo antagonista de MAdCAM, en donde la una o más dosis posteriores se dosifican cada 4 semanas, en donde la primera dosis posterior se proporciona 4 semanas después de la dosis inicial, y en donde el anticuerpo antagonista de MAdCAM comprende una cadena ligera de la SEQ ID NO:1, y una cadena pesada de la SEQ ID NO:2.
Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento o diagnóstico in vivo se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en métodos de tratamientos del cuerpo humano o animal por terapia o para diagnóstico in vivo.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 3%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 5%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 10%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 11%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 12%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 14%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 15%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 16%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 18%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 20%.
En algunas realizaciones, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, es de por lo menos aproximadamente el 23%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 28%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 30%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 35%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 38%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 40%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 45%.
En algunas realizaciones, la tasa de respuesta clínica aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 50%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 10%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 14%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 15%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 20%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 25%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 27%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 30%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 35%.
En algunas realizaciones, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial es de por lo menos aproximadamente el 37%.
En algunas realizaciones, el paciente no está tomando un antagonista de TNF o un inhibidor de TNF. El inhibidor de TNF puede ser uno o más seleccionado del grupo que consiste de infliximab, etanercept, adalimumab, psoraleno combinado con tratamiento ultravioleta A (PUVA), certolizumab pegol, metotrexato, ciclosporina, curcumina, catequinas, cannabis y equinácea purpúrea.
En algunas realizaciones, el paciente también se trata con otro agente farmacéutico seleccionado del grupo que consiste de AMG-181, adalimumab, alicaforsam, abatacept, aspirina, acetaminofén, azatioprina, AVX470, AEB-071, amitriptilina, antralina, acitretina, alefacept, alosetrón, abatacept, amelubant, anakinra, apremilast, apilimod, aceclofenaco, actarit, amoxapinet, budesonida, beclometasona, betametasona, balsalazida, benzotiazinona, benzocaína, belimumab, buprenorfina, celecoxib, ciclosporina, cortisona, certolizumab pegol, curcumina, cannabis, ciprofloxacino; calcipotrieno; ciclobenzaprina; propionato de clobetasol, codeína, alcanfor, dexametasona, doxepina, denosumab, diacereína, diclofenaco, diflunisal, deflazacort, dipiridamol, dihidrocodeína, deracoxib, duloxetina, etrolizumab, etanercept, efalizumab, etodolaco, eculizumab, etoricoxib, fluoxetina, fontolizumab, felbinac, fenoprofeno, fentanilo, golimumab, gabapentina, hmpl-004, hidromorfona, hidrocodona, indometacina, ibuprofeno, infliximab, interleucina-2, imipramina, iberogast, salicilato de imidazol, iguratimod, inmunoglobulina, hidroxicortisona, hidroxiurea, ácido hialurónico, kappaproct, krp-203, loperamida, lornoxicam, lumericoxib, leflunomida, licofelona, lumiracoxib, lidocaína, metilprednisolona 6-mercaptopurina, metotrexato, metronidazol, mesalamina, melatonina, mesalamina, meloxicam, misoprostol, salicilato de metilo, naproxeno sódico, nicotina, nortriptilina, nambumetona, nepafenac, noradrenalina, norepinefrina, olsalazina, OM-89, Otzela, oprelvekin, ofatumumab, ocrelizumab, oxicodona, oximorfona, prednisona, prednisolona, fosfatidilcolina, paroxetina, paclitaxel, prosorba, pelubiprofeno, piroxicam, pegsunercept, pralnacasan, prinaberel, parecoxib, pregabalina, rimexolona, risedronato de sodio, rosiglitazona, rofecoxib, ropivacaina, reboxetina, (S,S)-reboxetina, reumacon, sulfasalazina, sulfasalazinaloperamida, sertralina, sildenafilo, tramadol, triamcinolona, tacrolimus, talidomida, tofacitinib, trichuris suis, trazodona, tazaroteno, tegaserod, tocilizumab, temsirolimus, tenoxicam, valdecoxib, vedolizumab, Xeljanz, zolpidem, ácido zoledrónico, anticuerpo 153Sm-EDTMP, y SK-1306X y 10rT1, CP-481715, ABN-912, MLN-3897, HuMax-IL-15, RA-1, Org-37663, Org 39141, AED-9056, AMG-108, GW-274150, AT-001, 681323 (GSK) K-832, R-1503, DE-096, Cpn10, THC+CBD (GW Pharma), 856553 (GSK), ReN-1869, mm-093, SCIO-469, ABT-874, LenkoVAX, LY-2127399, TRU-015, KC-706, y TAK-715, PG 760564, VX-702, PMX-53, CF-101, tgAAV-TNFR:Fc, R-788, PMI-001, S-[2-[(1-iminoetil)amino]etil]-L-homocisteína, S-[2-[(1-iminoetil)-amino]etil]-4,4-dioxo-L-cisteína, S-[2-[(1-iminoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína, ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)-butil]tio]-5-cloro-3-piridincarbonitrilo; 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-clorobenzonitrilo, (2S,4R)-2-amino-4-[[2-cloro-5-(trifluorometil)fenil]tio]-5-tiazolbutanol, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-6-(trifluorometilo))-3 piridinacarbonitrilo, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-clorobenzonitrilo, N-[4-[2-(3-clorobencilamino)etil]fenil]tiofeno-2-carboxamidina, A/-[({2-[4-(2-etil-4,6-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)fenil]etil}amino)-carbonil]-4-metilbencenosulfonamida, ácido 4-[(1S)-1-({[5-cloro-2-(3-fluorofenoxi)piridin-3-il]carbonil}amino)etil]benzoico y ácido 1-(3-bifenil-4-ilmetilo-4-hidroxi-croman-7-il)-ciclopentanocarboxílico.
El paciente puede tratarse concurrentemente con el anticuerpo de MAdCAM y el otro agente farmacéutico. El paciente puede tratarse secuencialmente con el anticuerpo de MAdCAM y el otro agente farmacéutico.
En algunas realizaciones, el método comprende además:
(a) medir el nivel de un biomarcador en una muestra biológica de dicho paciente, en donde dicho biomarcador es: (i) cualquiera de los biomarcadores o una combinación de los mismos seleccionados del grupo que consiste de: calprotectina fecal, sMAdCAM, hsCRP, AR, CHI3L1, CXCL1, CXCL11, CXCL13, CXCL9. Dkk-1, EGF, EN-RAGE, EPO, FGF-21, GH, IL-17C, IL-6, IL-7, IL-8, MIP-1 alfa, MMP-1, MMP-10, MMP-12, MMP-3, NT-pro-BNP, OSM, PTPN22, PTX3, REG-4, RETN, TNFRSF4, TRANCE y VEGF-A; (ii) CCR9; (iii) células a4p7+ circulantes; o (iv) cualquier combinación de los anteriores; y
(b) comparar dicho nivel con un control;
de tal manera que un cambio en el nivel del biomarcador, en comparación con el control, predice una respuesta terapéutica beneficiosa en la afección.
También se divulga un método para evaluar la presencia o ausencia de una respuesta beneficiosa en un paciente con colitis ulcerosa (UC) después de administrar un anticuerpo antagonista de MAdCAM, que comprende: (a) medir el nivel de un biomarcador en una muestra biológica de dicho paciente, en donde dicho biomarcador es: (i) cualquiera de los biomarcadores o una combinación de los mismos seleccionados del grupo que consiste de: calprotectina fecal, sMAdCAM, hsCRP, AR, CHI3L1, CXCL1, CXCL11, CXCL13, CXCL9. Dkk-1, EGF, EN-RAGE, EPO, FGF-21, GH, IL-17C, IL-6, IL-7, IL-8, MIP-1 alfa, MMP-1, MMP-10, MMP-12, MMP-3, NT-pro-BNP, OSM, PTPN22, PTX3, REG-4, RETN, TNFRSF4, TRANCE y VEGF-A; (ii) CCR9; (iii) células a4p7+ circulantes; o (iv) cualquier combinación de los anteriores; y
(b) comparar dicho nivel con un control;
en donde un cambio en el nivel de biomarcador, en comparación con el control, predice una respuesta beneficiosa en dicho paciente.
También se divulga un método para identificar a un paciente con colitis ulcerosa (UC) que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM, que comprende:
(a) medir el nivel de un biomarcador en una muestra biológica de dicho paciente, en donde dicho biomarcador es: (i) cualquiera de los biomarcadores o una combinación de los mismos seleccionados del grupo que consiste de: calprotectina fecal, sMAdCAM, hsCRP, AR, CHI3L1, CXCL1, CXCL11, CXCL13, CXCL9. Dkk-1, EGF, EN-RAGE, EPO, FGF-21, GH, IL-17C, IL-6, IL-7, IL-8, MIP-1 alfa, MMP-1, MMP-10, MMP-12, MMP-3, NT-pro-BNP, OSM, PTPN22, PTX3, REG-4, RETN, TNFRSF4, TRANCE y VEGF-A; (ii) CCR9; (iii) células a4p7+ circulantes; o (iv) cualquier combinación de los anteriores;
(b) comparar dicho nivel con un control; en donde un cambio en el nivel de biomarcador, en comparación con el control, predice que dicho paciente se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM; y (c) seleccionar dicho paciente para el tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM.
La muestra biológica puede obtenerse por lo menos aproximadamente 4 semanas después de administrar un anticuerpo antagonista de MAdCAM.
La muestra biológica puede obtenerse desde aproximadamente 4 semanas hasta aproximadamente 12 semanas después de administrar un anticuerpo antagonista de MAdCAM.
La muestra biológica puede obtenerse aproximadamente 12 semanas después de administrar un anticuerpo antagonista de MAdCAM.
En algunas realizaciones, el paciente comprende además el alelo de riesgo (C) en rs11171739.
También se divulga un método para identificar a un paciente con colitis ulcerosa (UC) que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM, que comprende:
(a) ensayar una muestra biológica que comprende ADN genómico de dicho paciente; y
(b) obtener la secuencia de SNP rs1l171739 a partir de dicho ADN genómico;
en donde la presencia del alelo de riesgo (C) en rs11171739 predice que dicho paciente se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM.
También se divulga un kit que comprende:
(a) un agente de detección para detectar la presencia de un biomarcador, o para medir el nivel de un biomarcador en una muestra biológica, en donde dicho biomarcador es: (i) cualquiera de los biomarcadores enumerados en las Tablas 12, 13, 15; (ii) células a4p7+ circulantes; (iii) alelo de riesgo rs11171739; o (iv) cualquier combinación de los anteriores; y
(b) instrucciones para usar dicho agente de detección.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
Figura 1: Tasa de remisión clínica en base a la puntuación Mayo total en la semana 12 (enfoque de fracaso del tratamiento).
Figura 2: Tasa de remisión clínica en base a la población no tratada previamente y tratada previamente en la semana 12 (enfoque de fracaso del tratamiento).
Figura 3: Respuesta clínica y tasas de curación de la mucosa en la semana 12 (enfoque del fracaso del tratamiento).
Figura 4: Resultados del análisis de la tasa de remisión clínica corregida con placebo, la tasa de respuesta clínica y la tasa de curación de la mucosa en base a la puntuación de Mayo total en la semana 12 (método cmh, lectura central, población mitt).
Figura 5: Resultados del análisis de la tasa de remisión clínica corregida con placebo, la tasa de respuesta clínica y la tasa de curación de la mucosa en base a la puntuación de Mayo total en la semana 12 (método cmh, lectura local, población mitt).
Figura 6: Resultados del análisis de la proporción de sujetos con una disminución desde el valor de referencia en la puntuación de mayo parcial de <2 sin subpuntuación individual >1 en las semanas 4, 8, 12 (método cmh, población mitt).
Figura 7: Proporciones (e intervalo de confianza del 90%) de sujetos con remisión clínica (definida como una puntuación sccai total de <2 puntos) en las semanas 4, 8 y 12. *Los intervalos de confianza se calculan usando el método exacto.
Figura 8: Media geométrica (e intervalo de confianza del 90%) del cambio porcentual desde el valor de referencia en la calprotectina fecal (ug/g) (mitt, casos observados).
Figura 9: Media geométrica (e intervalo de confianza del 90%) del cambio porcentual desde el valor de referencia en madcam soluble (pmol/l) por grupo de tratamiento en la semana 12 (mitt, casos observados).
Figura 10: Media geométrica (e intervalo de confianza del 90%) del cambio porcentual desde el inicio en hscrp (mg/dl) (mitt, semana 0-12, casos observados).
Figura 11: Concentraciones de mAb 7.16.6 en suero observadas (rojo) en comparación con las predicciones del modelo (negro, mediana e intervalo de predicción del 95%), por grupo de tratamiento.
Figura 12: Tabla de eficacia: Frecuencia de deposiciones de Mayo por tratamiento y visita.
Figura 13: Tabla de eficacia: Sangrado rectal de Mayo por tratamiento y visita.
Figura 14: Tabla de eficacia: Sigmoidoscopia flexible de Mayo por tratamiento y visita.
Figura 15: Tabla de eficacia: PGA de Mayo por tratamiento y visita.
Figura 16: Eventos adversos más comunes por grupo de tratamiento.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
En un estudio de fase II, aleatorizado, multicéntrico, doble ciego, controlado con placebo sobre la seguridad y eficacia del mAb 7.16.6 en pacientes con colitis ulcerosa de moderada a grave, la emisión y la curación de la mucosa fueron significativamente mayores en los grupos de dosis de 22,5 mg y 75 mg frente a placebo, mientras que la respuesta fue significativamente mayor para los grupos de 22,5 mg y 225 mg frente a placebo.
El anticuerpo antagonista de MAdCAM se dosifica a 75 mg.
El mAb 7.16.6 cumplió con el criterio de valoración de eficacia principal en el estudio. Las tasas de remisión clínica basadas en la puntuación de Mayo total fueron estadísticamente significativas en tres de los cuatro grupos de tratamiento (7,5 mg, 22,5 mg y 75 mg). Las tasas de remisión clínica por estrato de exposición a anti-TNF (tratada previamente o no tratada previamente) fueron más altas entre los pacientes no tratados previamente. Los resultados clave de los criterios de valoración secundarios para la respuesta clínica, la curación de la mucosa y la puntuación de Mayo parcial respaldaron en general los descubrimientos del análisis del criterio de valoración primario. El mAb 7.16.6 parece seguro y bien tolerado en esta población de pacientes.
En algunos aspectos, el paciente no está tomando un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista de TNF o un inhibidor de TNF durante por lo menos aproximadamente 1 semana antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista de TNF o un inhibidor de TNF durante por lo menos aproximadamente 2 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF durante por lo menos aproximadamente 3 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF durante por lo menos aproximadamente 4 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF durante por lo menos aproximadamente 5 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF durante por lo menos aproximadamente 6 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF durante por lo menos aproximadamente 7 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente no ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF durante por lo menos aproximadamente 8 semanas antes de la dosis inicial. En algunos aspectos, el paciente nunca ha tomado un antagonista del TNF o un inhibidor del TNF antes de la dosis inicial.
Usando subpuntuaciones endoscópicas de lectura central en el cálculo de la puntuación de Mayo total (en adelante, lectura central) en la semana 12, las tasas de remisión clínica observadas (población mITT) en placebo, 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg de mAb 7.16.6 fueron del 2,7%, 11,3%, 16,7%, 15,5% y 5,7%, respectivamente; y la diferencia del placebo y los intervalos de confianza (CI) del 90% de dos caras correspondientes usando la prueba CMH fueron del 8,0% (1,9%, 14%), 12,8% (5,6%, 19,9%), 11,8% (4,8%, 18,8%) y 2,6% (-1,2%, 6,4%), respectivamente.
Usando subpuntuaciones endoscópicas de lectura local en el cálculo de la puntuación de Mayo total (en adelante, lectura local), las tasas de remisión clínica observadas (población mITT) de placebo, 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg de mAb 7.16.6 fueron del 5,5%, 14,1%, 23,6%, 18,3% y 12,9% respectivamente; y la diferencia con el placebo y los CI del 90% correspondiente usando la prueba CMH fue del 8,0% (0,2%, 15,9%), 17,8% (8,3%, 27,2%), 12,2% (3,6%, 20,8%) y 6,6% (-0,9%).%, 14,2%), respectivamente.
Por consiguiente, en algunos aspectos, la tasa de remisión clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, determinada usando la puntuación MAYO, puede seleccionarse del grupo que consiste de por lo menos aproximadamente el 3%, por lo menos aproximadamente el 5%, por lo menos aproximadamente el 10%, por lo menos aproximadamente el 11%, por lo menos aproximadamente el 12%, por lo menos aproximadamente el 13%, por lo menos aproximadamente el 14%, por lo menos aproximadamente el 15%, por lo menos aproximadamente el 16%, por lo menos aproximadamente el 17%, por lo menos aproximadamente el 18%, por lo menos aproximadamente el 19%, por lo menos aproximadamente el 20%, por lo menos aproximadamente el 21%, por lo menos aproximadamente el 21%, por lo menos aproximadamente el 22% y por lo menos aproximadamente el 23%.
Usando las subpuntuaciones de lectura central en la semana 12, las tasas de respuesta observadas de placebo, 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg fueron del 28,8%, 38,0%, 54,2%, 45,1% y 50,0%, respectivamente; y las tasas de curación de la mucosa correspondientes fueron del 8,2%, 15,5%, 27,8%, 25,4% y 14,3%, respectivamente. Cuando se usaron las subpuntuaciones de lectura local, las tasas observadas fueron más altas que la lectura central; para el placebo, 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg, las tasas de respuesta clínica fueron del 32,9%, 38,6%, 54,2%, 48,6% y 51,4%, respectivamente, y las tasas de curación de la mucosa fueron del 21,9%, 22,5%, 37,5%, 35,2% y 28,6%, respectivamente. Las tasas de respuesta clínica para los grupos de tratamiento de 22,5 mg y 225 mg sobre el grupo de placebo fueron significativamente diferentes de las del placebo independientemente de la fuente de subpuntuación endoscópica. Las tasas de curación de la mucosa usando lectura central son en general más bajas que la lectura local, y la tendencia es consistente con los otros criterios de valoración.
Por consiguiente, en algunos aspectos, la tasa de respuesta clínica observada aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina mediante la puntuación MAYO, puede seleccionarse del grupo que consiste de por lo menos aproximadamente el 25%, por lo menos aproximadamente el 27%, por lo menos alrededor 28%, por lo menos aproximadamente el 30%, por lo menos aproximadamente el 32%, por lo menos aproximadamente el 33%, por lo menos aproximadamente el 35%, por lo menos aproximadamente el 37%, por lo menos aproximadamente el 38%, por lo menos aproximadamente el 40%, por lo menos aproximadamente el 42%, por lo menos aproximadamente el 43%, por lo menos aproximadamente el 45%, por lo menos aproximadamente el 47%, por lo menos aproximadamente el 48% y por lo menos aproximadamente el 50%.
Por consiguiente, en algunos aspectos, la tasa de curación de la mucosa aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, según se determina usando la puntuación MAYO, puede seleccionarse del grupo que consiste de por lo menos aproximadamente el 10%, por lo menos aproximadamente el 14%, por lo menos aproximadamente el 15%, por lo menos aproximadamente el 20%, por lo menos aproximadamente el 25%, por lo menos aproximadamente el 27%, por lo menos aproximadamente el 30%, por lo menos aproximadamente el 35% y por lo menos aproximadamente el 37%.
El mAb 7.16.6 parece seguro y bien tolerado en esta población de pacientes. Los eventos adversos más comunes estuvieron relacionados con la enfermedad subyacente y se produjeron durante el primer mes de tratamiento en los brazos de tratamiento con placebo y de 7,5 mg.
La exposición al mAb 7.16.6 en suero fue consistente con la observada en el estudio de Fase I de UC (ClinicalTrials.gov Identificador: NCT00928681) y fue predicha adecuadamente por el modelo farmacocinético de poblacional preliminar que describe la disposición al fármaco mediada por el objetivo. Estos niveles de PK correspondían a la supresión de MAdCAM soluble (en la semana 12) que variaba entre el 68 y el 98%, consistente con las predicciones del modelo durante el diseño del estudio. La tasa positiva global confirmatoria de anticuerpos antifármacos (ADA) fue de aproximadamente el 6,4%. No hubo indicios de respuesta a ADA potenciada por el tratamiento. La evaluación preliminar en sujetos con ADA positivos confirmatorios posterior al inicio no indicó ningún efecto apreciable de los ADA sobre la exposición, la seguridad o la eficacia.
Biomarcadores
Pueden usarse biomarcadores moleculares, como mutaciones genéticas, expresión de ARN transcriptómico, marcadores de proteínas celulares y varias medidas de respuesta al tratamiento anti-MAdCAM en pacientes, especialmente aquellos con colitis ulcerosa (UC), para establecer la base mecánica subyacente para la respuesta a la dosis no monotónica observada en sujetos con colitis ulcerosa después del tratamiento con mAb 7.16.6. El tratamiento con mAb 7.16.6 da como resultado una inhibición preferencial del efector inmunitario sobre las células reguladoras a las dosis clínicamente eficaces más bajas, que se normaliza a las dosis clínicamente menos eficaces más altas. Por consiguiente, pueden usarse biomarcadores relacionados con las células reguladoras para optimizar la selección de dosis futuras. Además, los biomarcadores también pueden usarse para seleccionar subpoblaciones de pacientes con UC que responden particularmente al tratamiento con anticuerpos anti-MAdCAM.
Por ejemplo, a o por lo menos aproximadamente a las 4 semanas, a o por lo menos aproximadamente a las 8 semanas, a o por lo menos aproximadamente a las 12 semanas, después de la dosis inicial, pueden evaluarse uno o más biomarcadores en un paciente para predecir si es probable una respuesta terapéutica beneficiosa en el futuro. Un resultado positivo del ensayo de biomarcadores sugeriría que el paciente se beneficiaría de continuar con el tratamiento anti-MAdCAM. Los biomarcadores pueden evaluarse antes del tratamiento anti-MAdCAM, para seleccionar subpoblaciones de pacientes que probablemente se beneficiarían del tratamiento anti-MAdCAM. Los biomarcadores también pueden monitorizarse continuamente durante el curso del tratamiento, por ejemplo, o para ajustar la dosis o para determinar si se debería continuar el tratamiento.
En la presente se divulgan cuatro tipos de biomarcadores: biomarcadores genéticos (como SNP rs11171739), marcadores de transcripción de ARN (como la transcripción de CCR9), biomarcadores de proteínas (como calprotectina fecal, sMAdCAM y hsCRP) y biomarcadores celulares (como células a4p7+). Puede usarse cualquiera de estos biomarcadores, individualmente o en cualquier combinación, para evaluar el efecto terapéutico y/o la subpoblación de pacientes.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 20%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 25%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 30%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 35%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 40%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 45%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 50%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 55%. Los valores porcentuales anteriores pueden compararse con un control (como el nivel de calprotectina fecal previo al tratamiento). En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de la calprotectina fecal aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 60%, de por lo menos aproximadamente el 65%, de por lo menos aproximadamente el 70%, de por lo menos aproxoximadamente el 75%%, de por lo menos aproximadamente el 80%, de por lo menos aproximadamente el 85%, de por lo menos aproximadamente el 90%, o de por lo menos aproximadamente el 95%, en comparación con un control (como el nivel de calprotectina fecal previo al tratamiento).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 25%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 50%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 60%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 65%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 70%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 75%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 80%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 85%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial de por lo menos aproximadamente el 90%. Los valores porcentuales anteriores pueden compararse con un control (como el nivel de sMAdCAM previo al tratamiento). En algunos aspectos, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en sMAdCAM aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 95%, en comparación con un control (como el nivel de sMAdCAM previo al tratamiento).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 5%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 10%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 15%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 65%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 16%. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción de hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 20%. Los valores porcentuales anteriores pueden compararse con un control como el nivel de hsCRP previo al tratamiento. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona una reducción en hsCRP aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente el 25%, de por lo menos aproximadamente el 30%, de por lo menos aproximadamente el 35%, de por lo menos por lo menos aproximadamente el 40%, de por lo menos aproximadamente el 45%, de por lo menos aproximadamente el 50%, de por lo menos aproximadamente el 55%, de por lo menos aproximadamente el 60%, de por lo menos aproximadamente el 65%, de por lo menos aproximadamente el 70%, de por lo menos aproximadamente el 75%, de por lo menos aproximadamente el 80%, de por lo menos aproximadamente el 85%, de por lo menos aproximadamente el 90%, o de por lo menos aproximadamente el 95% en comparación con un control (como el nivel de hsCRP previo al tratamiento).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona un aumento en la transcripción de ARN CCR9 aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona un aumento en la transcripción de ARN CCR9 aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial, de por lo menos aproximadamente 1,1 veces, por lo menos aproximadamente 1,2 veces, por lo menos aproximadamente 1,3 veces, por lo menos aproximadamente 1,4 veces, por lo menos aproximadamente 1,5 veces, por lo menos aproximadamente 1,6 veces, por lo menos aproximadamente 1,7 veces, por lo menos aproximadamente 1,8 veces, por lo menos aproximadamente 1,9 veces, por lo menos aproximadamente 2,0 veces, por lo menos aproximadamente 2,1 veces, por lo menos aproximadamente 2,2 veces, por lo menos aproximadamente 2,3 veces, por lo menos aproximadamente 2,4 veces, por lo menos aproximadamente 2,5 veces, por lo menos aproximadamente 3,0 veces, por lo menos aproximadamente 3,5 veces, por lo menos aproximadamente 4,0 veces, por lo menos aproximadamente 4,5 veces, por lo menos aproximadamente 5,0 veces, por lo menos aproximadamente 5,5 veces, por lo menos aproximadamente 6,0 veces, por lo menos aproximadamente 6,5 veces, por lo menos aproximadamente 7,0 veces, por lo menos aproximadamente 7,5 veces, por lo menos aproximadamente 8,0 veces, por lo menos aproximadamente 8,5 veces, por lo menos aproximadamente 9,0 veces, por lo menos aproximadamente 9,5 veces, o por lo menos aproximadamente 10,0 veces, en comparación con un control (como el nivel de CCR9 previo al tratamiento).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona un aumento en las células a4p7+ circulantes aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención proporciona un aumento en las células a4p7+ circulantes aproximadamente 12 semanas después de la dosis inicial de por lo menos aproximadamente 1,1 veces, por lo menos aproximadamente 1,2 veces, por lo menos aproximadamente 1,3 veces, en por lo menos aproximadamente 1,4 veces, por lo menos aproximadamente 1,5 veces, por lo menos aproximadamente 1,6 veces, por lo menos aproximadamente 1,7 veces, por lo menos aproximadamente 1,8 veces, por lo menos aproximadamente 1,9 veces, por lo menos aproximadamente 2,0 veces, por lo menos aproximadamente 2,1 veces, por lo menos aproximadamente 2,2 veces, por lo menos aproximadamente 2,3 veces, por lo menos aproximadamente 2,4 veces, por lo menos aproximadamente 2,5 veces, por lo menos aproximadamente 3,0 veces, por lo menos aproximadamente 3,5 veces, por lo menos aproximadamente 4,0 veces, por lo menos aproximadamente 4,5 veces, por lo menos aproximadamente 5,0 veces, por lo menos aproximadamente 5,5 veces, por lo menos aproximadamente 6,0 veces, por lo menos aproximadamente 6,5 veces, por lo menos aproximadamente 7,0 veces, por lo menos aproximadamente 7,5 veces, por lo menos aproximadamente 8,0 veces, por lo menos aproximadamente 8,5 veces, por lo menos aproximadamente 9,0 veces, por lo menos aproximadamente 9,5 veces, o por lo menos aproximadamente 10,0 veces, en comparación con un control (como el nivel de células a4p7+ circulantes previo al tratamiento).
En ciertas realizaciones, el paciente que recibe tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM comprende el alelo de riesgo heterocigoto rs11171739 (C;T). En ciertas realizaciones, el paciente que recibe tratamiento con un anticuerpo antagonista de MAdCAM comprende el alelo de riesgo rs11171739 homogecigoto (C;C).
Intervalos de dosificación
La primera dosis posterior se proporciona aproximadamente 4 semanas después de la primera dosis. Las dosis posteriores se administran con una diferencia de aproximadamente 4 semanas.
La dosis posterior se administra aproximadmaente 4 semanas después de la dosis inicial.
Vía de administración
La dosis inicial de una cantidad terapéuticamente eficaz de anticuerpo antagonista de MAdCAM se administra por vía subcutánea.
La por lo menos una dosis posterior se administra por inyección subcutánea.
El anticuerpo generalmente se administrará mientras esté presente la condición.
Anticuerpos de MAdCAM de la invención
El anticuerpo antagonista de MAdCAM comprende las CDR de la SEQ ID NO:1 y la SEQ ID NO:2. El anticuerpo antagonista de MAdCAM comprende la SEQ ID NO:1 y la SEQ ID NO:2. Los anticuerpos antagonistas de MAdCAM ejemplares se enumeran en la Tabla 1 y 2. Los ejemplos de la WO2005067620 describen completamente los anticuerpos de las Tablas 1 y 2, y proporcione detalles de la información de caracterización, como afinidades de unión, Kon, Koff, Kd, y demás.
Información de depósito
Los hibridomas se depositaron según los términos del Tratado de Budapest de la European Collection of Cell Cultures (ECACC), H.P.A. en CAMR, Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG el 9 de septiembre de 2003 con los siguientes números de depósito.
Tabla 1. De ósitos de anticuer os anta onistas de MAdCAM.
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Los depósitos se realizaron en virtud de las disposiciones del Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a los Efectos del Procedimiento de Patentes y sus Reglamentos (Tratado de Budapest). Esto asegura el mantenimiento de un cultivo viable del depósito durante 30 años a partir de la fecha del depósito. ECACC pondrá el depósito a disposición según los términos del Tratado de Budapest, y sujeto a un acuerdo entre Pfizer Inc. y la ECACC, que asegura la disponibilidad permanente y sin restricciones de la progenie del cultivo del depósito para el público tras la concesión de la patente de Estados Unidos pertinente o tras abrirse al público cualquier solicitud de patente de Estados Unidos o extranjera, lo que se produzca primero, y asegura la disponibilidad de la descendencia a alguien al que el Comisionado de Patentes y Marcas Registradas de Estados Unidos ha determinado que tiene derecho a ello de acuerdo con 35 U.S.C. Sección 122 y las reglas del Comisionado de conformidad con la misma (incluyendo 37 C.F.R. Sección 1.14 con referencia particular a 886 OG 638).
El cesionario de la presente solicitud ha acordado que si un cultivo de los materiales en depósito muere, se pierde o se destruye cuando se cultiva en condiciones adecuadas, los materiales se reemplazarán inmediatamente después de la notificación con otros iguales. La disponibilidad del material depositado no debe interpretarse como una licencia para poner en práctica la invención en contravención de los derechos otorgados bajo la autoridad de cualquier gobierno de acuerdo con sus leyes de patentes.
Métodos terapéuticos de la invención.
Como se usa en la presente, una "dosis eficaz" o "cantidad eficaz" de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para afectar a uno cualquiera o más resultados beneficiosos o deseados. Para su uso profiláctico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen eliminar o reducir el riesgo, disminuir la gravedad o retrasar el inicio de la enfermedad, incluyendo los síntomas bioquímicos, histológicos y/o conductuales de la enfermedad, sus complicaciones y los fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad. Para uso terapéutico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados clínicos como disminuir la dosis de otros medicamentos requeridos para tratar la enfermedad, potenciar el efecto de otro medicamento y/o retrasar la progresión de la enfermedad de los pacientes. Una dosificación eficaz puede administrarse en una o más administraciones. Para los propósitos de esta invención, una dosis eficaz de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para lograr un tratamiento profiláctico o terapéutico, ya sea directa o indirectamente. Como se entiende en el contexto clínico, una dosificación eficaz de un fármaco, compuesto o composición farmacéutica puede lograrse o no junto con otro fármaco, compuesto o composición farmacéutica. Por tanto, puede considerarse una "dosis eficaz" en el contexto de la administración de uno o más agentes terapéuticos, y puede considerarse que un solo agente se administra en una cantidad eficaz si, junto con uno o más agentes, puede lograrse o se logra un resultado deseable.
"Cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del agente terapéutico que se está administrando que aliviará en cierta medida uno o más de los síntomas del trastorno que se está tratando.
"Tratar", "que trata" y "tratamiento" se refieren a un método para aliviar o anular un trastorno biológico y/o sus síntomas relacionados.
Un "individuo" o un "sujeto" es un mamífero, más preferiblemente, un humano. Los mamíferos también incluyen, pero no se limitan a, animales de granja, animales deportivos, mascotas, primates y caballos. En algunos aspectos, el paciente es un paciente humano.
Un anticuerpo antagonista de MAdCAM o una porción de anticuerpo del mismo puede administrarse a un paciente que expresa niveles anormalmente altos de MAdCAM.
Los anticuerpos de MAdCAM se usan para tratar la UC.
Los anticuerpos de MAdCAM para el uso de la invención pueden usarse en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticos. Los anticuerpos de MAdCAM para el uso de la invención y los otros agentes terapéuticos pueden administrarse al paciente en la misma forma de dosificación o en diferentes formas de dosificación. Además, pueden administrarse al mismo tiempo o en momentos diferentes.
Colitis ulcerosa
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención se usa en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales.
En algunas realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste de acetaminofeno, naproxeno sódico, ibuprofeno, tramadol, aspirina, celecoxib, valdecoxib, indometacina y otros AINE. En algunas realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste de beclometasona, hidroxicortisona, betametasona, metilprednisolona, budesonida, prednisolona, cortisona, prednisona, dexametasona y triamcinolona, y otros glucorticoides. En algunos aspectos, el uno o más agentes terapéuticos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste de 6-mercaptopurina, tacrolimus, azatioprina, talidomida, ciclosporina, tofacitinib, metotrexato y otros inmunosupresores/inmunomoduladores. En algunas realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste de abatacept, etrolizumab, adalimumab, golimumab, AMG-181, infliximab, anticuerpo antiip-10, interleucina-2, AVX 470, vedolizumab, certolizumab pegol y otros productos biológicos. En algunos aspectos, el uno o más agentes terapéuticos adicionales pueden seleccionarse del grupo que consiste de AEB-071, melatonina, alicaforsam, mesalamina, benzotiazinona, nicotina, cannabis, fosfatidilcolina, curcumina, células madre, hmpl-004, sulfasalazina, iberogast, trichuris suis, kappaproct, krp-203, sulfasalazina, mesalamina, balsalazida, olsalazina; y loperamida.
Por consiguiente, en algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista de MAdCAM para el uso de la invención está específicamente diseñado para su uso en combinación con estos agentes, productos y clases.
Composiciones farmacéuticas y administración
Los anticuerpos de MAdCAM para el uso de la invención pueden incorporarse en composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a un sujeto. Típicamente, la composición farmacéutica comprende un anticuerpo antagonista de MAdCAM y un portador farmacéuticamente aceptable. Como se usa en la presente, "portador farmacéuticamente aceptable" significa cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y similares que sean fisiológicamente compatibles. Algunos ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables son agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos. En muchos casos, será preferible incluir en la composición agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes como manitol, sorbitol o cloruro sódico. Ejemplos adicionales de sustancias farmacéuticamente aceptables son agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes o tampones, que mejoran la vida útil o la eficacia del anticuerpo.
Las composiciones pueden estar en una variedad de formas, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas, como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, comprimidos, píldoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma depende del modo pretendido de administración y de la aplicación terapéutica. Las composiciones típicas están en forma de soluciones inyectables o infusibles, como composiciones similares a las usadas para la inmunización pasiva de humanos. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes multidosis, con o sin conservante añadido. Las composiciones pueden adoptar formas como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para la reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso. Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando el anticuerpo antagonista de MAdCAM en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización por filtración.
Los valores de dosificación pueden variar con el tipo y la gravedad de la afección a aliviar. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos adecuados de preparación incluyen el secado al vacío y el secado por congelación que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente filtrada de manera estéril. La fluidez adecuada de una solución puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de surfactantes. La absorción prolongada de composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.
En ciertos casos, las composiciones de anticuerpos antagonistas de MAdCAM se pueden preparar con un portador que protegerá al anticuerpo contra la liberación rápida, como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Pueden usarse polímeros biodegradables y biocompatibles, como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliláctico. Pueden usarse muchos métodos para la preparación de tales formulaciones. Ver, por ejemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978.
También pueden incorporarse compuestos activos adicionales en las composiciones (incluyendo uno cualquiera o más de los agentes terapéuticos adicionales divulgados anteriormente). En algunos casos, un anticuerpo antagonista inhibidor de MAdCAM se coformula y/o coadministra con uno o más agentes terapéuticos adicionales. Estos agentes incluyen, sin limitación, anticuerpos que se unen a otros objetivos, agentes antitumorales, agentes antiangiogénicos, inhibidores de la transducción de señales, agentes antiproliferativos, agentes quimioterapéuticos o análogos de péptídos que inhiben MAdCAM. Tales terapias de combinación pueden requerir dosificaciones más bajas del anticuerpo antagonista inhibidor de MAdCAM, así como de los agentes coadministrados, evitando por tanto posibles toxicidades o complicaciones asociadas con las varias monoterapias.
Las composiciones pueden incluir una "cantidad terapéuticamente eficaz" o una "cantidad profilácticamente eficaz" de un anticuerpo. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosifiaciones y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo puede variar de acuerdo con factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo para provocar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz también es aquella en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial del anticuerpo se ve compensado por los efectos terapéuticamente beneficiosos. Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, como se usa una dosis profiláctica en sujetos antes o en una etapa más temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz puede ser menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.
En un caso, el anticuerpo se administra en una formulación como una solución acuosa estéril que tiene un pH que varía entre aproximadamente 5,0 y aproximadamente 6,5 y que comprende de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 200 mg/ml de anticuerpo, de aproximadamente 1 milimolar a aproximadamente 100 milimolar de tampón de histidina, de aproximadamente 0,01 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml de polisorbato 80 o polisorbato 20, de aproximadamente 100 milimolar a aproximadamente 400 milimolar de un azúcar no reductor seleccionado de, pero no limitado a, trehalosa o sacarosa, de aproximadamente 0,01 milimolar a aproximadamente 1,0 milimolar de EDTA disódico dihidrato y opcionalmente comprende un antioxidante farmacéuticamente aceptable además de un agente quelante. Los antioxidantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, metionina, tiosulfato de sodio, catalasa y platino. Por ejemplo, la composición puede contener metionina en una concentración que varía de 1 mM a aproximadamente 100 mM y, en particular, es de aproximadamente 27 mM. En algunos casos, una formulación contiene 5 mg/ml de anticuerpo en un tampón de citrato de sodio 20 mM, pH 5,5, NaCl 140 mM y 0,2 mg/ml de polisorbato 80.
La formulación puede ser como se expone en la WO2006/096490. La formulación puede comprender 75 mg/ml de anticuerpo, histidina 10 mM pH 5,5, 90 mg/ml de trehalosa, dihidrato, 0,1 mg/ml de EDTA disódico dihidrato y 0,4 mg/ml de polisorbato 80.
En otro aspecto, la formulación comprende: histidina 20 mM, trehalosa al 7%, 0,4 mg/ml de polisorbato 80, 0,1 mg/ml de EDTA, pH 5,5 y 25 mg/ml y 75 mg/ml de anticuerpo anti-MAdCAM.
DEFINICIONES
Anticuerpos
Un "Anticuerpo" es una molécula de inmunoglobulina capaz de unirse específicamente a un objetivo o antígeno, como un carbohidrato, polinucleótido, lípido, polipéptido, etc., a través de por lo menos un sitio de unión al antígeno, localizado en la región variable de la molécula de inmunoglobulina.
Como se usa en la presente, a menos que el contexto indique claramente lo contrario, se pretende que el término abarque no solo anticuerpos policlonales o monoclonales intactos que comprenden dos polipéptidos de cadena pesada de longitud completa idénticos y dos polipéptidos de cadena ligera idénticos, sino también fragmentos de los mismos (como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), anticuerpos de cadena sencilla (ScFv) y de dominio (dAbs), incluyendo anticuerpos de tiburón y camélido, y proteínas de fusión que comprenden una porción de anticuerpo, anticuerpos multivalentes, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos siempre que muestren la actividad biológica deseada) y fragmentos de anticuerpos como se describe en la presente, y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprenda un sitio de reconocimiento de antígeno, por ejemplo, sin limitación, minicuerpos, maxicuerpos, monocuerpos, pepticuerpos, intracuerpos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, v-NAR y bis-scFv.
Las porciones de unión a antígeno pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante o mediante escisión enzimática o química de anticuerpos intactos. Las porciones de unión a antígeno incluyen, entre otras, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dAb y fragmentos de la región determinante de la complementariedad (CDR), anticuerpos de cadena sencilla (scFv), anticuerpos quiméricos, diacuerpos y polipéptidos que contienen por lo menos una porción de una Ig que es suficiente para conferir la unión específica del antígeno al polipéptido.
Una inmunoglobulina (Ig) es una molécula heteromultimérica. En una Ig de origen natural, cada multímero está compuesto principalmente de parejas idénticas de cadenas de polipéptidos, cada pareja teniendo una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una cadena "pesada" (aproximadamente 50-70 kDa).
La porción amino-terminal de cada cadena incluye una región variable, de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos, principalmente responsables del reconocimiento del antígeno. La porción carboxi-terminal de cada cadena define una región constante responsable principalmente de la función efectora. Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras k y A. Las cadenas pesadas se clasifican como a, 8, £, y y M, y definen el isotipo del anticuerpo como IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, respectivamente. Varias de estas clases pueden subdividirse además en isotipos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2.
Dentro de las cadenas ligera y pesada, las regiones variable y constante están unidas por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos, y la cadena pesada también incluye una región "D" de aproximadamente 10 aminoácidos más (en el contexto de una secuencia completa del anticuerpo, las regiones D y J se consideran a veces partes de la región variable una vez que se han unido). Las regiones variables de cada pareja de cadena ligera/pesada forman el sitio de unión del anticuerpo de tal manera que una Ig intacta tiene 2 sitios de unión.
Los dominios variables muestran la misma estructura general de regiones marco (FR) relativamente conservadas unidas por 3 regiones hipervariables, también llamadas regiones determinantes de la complementariedad o CDR. Las CDR de las 2 cadenas de cada pareja están alineadas por las regiones marco, lo que permite la unión a un epítopo específico. Desde el extremo N terminal hasta el extremo C terminal, tanto la cadena ligera como la pesada comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4.
La identidad de los residuos de aminoácidos en un anticuerpo particular que constituye una CDR puede determinarse usando métodos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, las CDR de anticuerpos pueden identificarse como las regiones hipervariables definidas originalmente por Kabat et al. (Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed., Public Health Service, NIH, Washington DC, NIH N° de Publicación 91­ 3242). Las posiciones de las CDR también pueden identificarse como estructuras de bucle estructural descritas por Chothia y otros (Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883). Otros enfoques para la identificación de CDR incluyen la "definición de AbM", que es un compromiso entre Kabat y Chothia y se deriva del programa Abysis (www.abysis.org), o la "definición de contacto" de CDR basada en contactos de antígenos observados, establecida en MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745. North ha identificado conformaciones de CDR canónicas usando un conjunto preferido diferente de definiciones de CDR (North et al., 2011, J. Mol. Biol, 406: 228-256). En otro enfoque, al que se hace referencia en la presente como la "definición conformacional" de las CDR, las posiciones de las CDR pueden identificarse como los residuos que realizan contribuciones entálpicas a la unión del antígeno (Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166). Es posible que otras definiciones de límites de CDR no sigan estrictamente uno de los enfoques anteriores pero, sin embargo, se superpondrán con por lo menos una parte de las CDR de Kabat, aunque pueden acortarse o alargarse a la luz de la predicción o los descubrimientos experimentales de que determinados residuos o grupos de residuos o incluso las CDR completas no afectan significativamente la unión al antígeno. Como se usa en la presente, una CDR puede referirse a las CDR definidas por cualquier enfoque conocido en la técnica, incluyendo combinaciones de enfoques. Los métodos usados en la presente pueden utilizar las CDR definidas de acuerdo con cualquiera de estos enfoques. Para cualquier realización dada que contenga más de una CDR, las CDR (u otro residuo del anticuerpo) pueden definirse de acuerdo con cualquiera de las definiciones de Kabat, Chothia, North, ampliada, AbM, de contacto y/o conformacional.
Las cadenas ligeras de los mamíferos son de dos tipos, k y A, y en cualquier molécula de anticuerpo de origen natural dada sólo se produce un tipo. En humanos se producen aproximadamente el doble de moléculas k que A, pero en otros mamíferos esta proporción puede variar. Cada molécula de cadena ligera libre contiene aproximadamente 220 aminoácidos en una única cadena polipeptídica que se pliega para formar los dominios de la región variable y constante.
Las regiones constantes kappa (CLk) están codificadas por un único gen, mientras que las regiones constantes lambda (CLA) están codificadas por múltiples genes y experimentan corte y empalme. Se conocen varios marcadores asociados con especies polimórficas particulares de CLA: lgCLA1 (marcador Mcg); IgLC2 - lgCLA2 (marcador Kern-Oz-); lgCLA 3 (marcador Kern-Oz+) e lgCLA7, por ejemplo. El experto en la técnica puede establecer fácilmente todos los polimorfismos identificados hasta ahora en las cadenas CLA humanas. Las secuencias de la presente invención abarcan otros polimorfismos conocidos de CLk y CLA, y anticuerpos en general. Se han identificado dos loci polimórficos en la CLk; CLk-V/A153 y CLk-L/V191. Los tres polimorfismos identificados hasta ahora son: Km(1): CLk-V153/L191; Km(1,2): CLk-A153/L191; y Km(3): CLk-A153/V191.
El término "región Fc" como se usa en la presente generalmente se refiere a un complejo de dímero que comprende las secuencias de polipéptidos C-terminales de una cadena pesada de inmunoglobulina, en donde una secuencia de polipéptidos C-terminal es la que se puede obtener mediante la digestión con papaína de un anticuerpo intacto. La región Fc puede comprender secuencias Fc nativas o variantes. La secuencia Fc de una inmunoglobulina generalmente comprende dos dominios constantes, un dominio Ch2 y un dominio Ch3, y opcionalmente comprende un dominio Ch4. El término "polipéptido de Fc" se usa en la presente para referirse a uno de los polipéptidos que forman una región Fc. En algunas realizaciones, un polipéptido de Fc puede obtenerse o derivarse de cualquier inmunoglobulina adecuada, como de por lo menos uno de los varios subtipos de IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4, o de IgA, IgE, IgD o IgM. En algunas realizaciones, un polipéptido de Fc comprende parte o la totalidad de una secuencia bisagra de tipo salvaje (generalmente en su extremo N terminal). En algunas realizaciones, un polipéptido de Fc no comprende una secuencia bisagra de tipo salvaje. Un polipéptido de Fc puede comprender secuencias Fc nativas o variantes.
La "región bisagra similar a inmunoglobulina", "secuencia bisagra similar a inmunoglobulina" y variaciones de las mismas, como se usan en la presente, se refieren a la región bisagra y a la secuencia bisagra de una molécula similar a inmunoglobulina o similar a anticuerpo (por ejemplo, inmunoadhesinas). En algunas realizaciones, la región bisagra similar a inmunoglobulina puede ser o derivarse de cualquier subtipo de IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4, o de IgA, IgE, IgD o IgM, incluyendo sus formas quiméricas, por ejemplo, una región bisagra quimérica de IgG1/2..
Los "fragmentos de anticuerpo" comprenden solo una porción de un anticuerpo intacto, en donde la porción retiene preferiblemente por lo menos una, preferiblemente la mayoría o todas las funciones normalmente asociadas con esa porción cuando está presente en un anticuerpo intacto.
Un "anticuerpo bivalente" comprende dos sitios de unión a antígeno por molécula (por ejemplo, IgG). En algunos casos, los dos sitios de unión tienen las mismas especificidades de antígeno. Sin embargo, los anticuerpos bivalentes pueden ser biespecíficos (ver a continuación).
Un "anticuerpo monovalente" comprende un sitio de unión a antígeno por molécula (por ejemplo, IgG). En algunos casos, un anticuerpo monovalente puede tener más de un sitio de unión a antígeno, pero los sitios de unión son de diferentes antígenos.
Un "anticuerpo multiespecífico" es aquel que se dirige a más de un antígeno o epítopo. Un anticuerpo "biespecífico", "de doble especificidad" o "bifuncional" es un anticuerpo híbrido que tiene dos sitios de unión a antígeno diferentes. Los anticuerpos biespecíficos son una especie de anticuerpo multiespecífico y pueden producirse mediante una variedad de métodos que incluyen, como la fusión de hibridomas o el enlace de fragmentos Fab'. Ver, por ejemplo, Songsivilai y Lachmann (1990), Clin. Exp. inmunol. 79:315-321; y Kostelny et al. (1992), J. Immunol. 148:1547-1553. Los dos sitios de unión de un anticuerpo biespecífico se unirán a dos epítopos diferentes, que pueden residir en las mismas proteínas objetivo o en unas diferentes.
La frase "brazo de unión a antígeno", "brazo de unión a molécula objetivo" y variaciones de la misma, como se usa en la presente, se refiere a una parte componente de un anticuerpo de la invención que tiene la capacidad de unirse específicamente a una molécula objetivo de interés. Generalmente y preferiblemente, el brazo de unión al antígeno es un complejo de secuencias de polipéptidos de inmunoglobulina, por ejemplo CDR y/o secuencias de dominio variable de una cadena ligera y pesada de inmunoglobulina.
El término "anticuerpo monoclonal" como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos y se dirigen contra un único antígeno. Además, a diferencia de las preparaciones de anticuerpos policlonales que típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un solo determinante en el antígeno.
Un fragmento Fab es un fragmento monovalente que consiste de los dominios Vl, VH, Cl y Ch1; un fragmento F(ab')2 es un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd consiste de los dominios Vh y Vh1; un fragmento Fv consiste de los dominios Vl y Vh de un solo brazo de un anticuerpo; y un fragmento dAb consiste de un dominio Vh o un dominio Vl (por ejemplo, humano, de camélido o tiburón).
Un anticuerpo de cadena sencilla (scFv) es un anticuerpo en el que una región VL y VH se emparejan para formar una molécula monovalente a través de un conector sintético que les permite formar una sola cadena proteica. Los diacuerpos son anticuerpos bivalentes y biespecíficos en los que los dominios VH y VL se expresan en una sola cadena polipeptídica, pero usando un conector que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los 2 dominios en la misma cadena, lo que obliga a los dominios a emparejarse con dominios complementarios de otra cadena y creando 2 sitios de unión al antígeno. Pueden incorporarse una o más CDR en una molécula ya sea de manera covalente o no covalente para convertirla en una inmunoadhesina. Una inmunoadhesina puede incorporar la o las CDR como parte de una cadena polipeptídica mayor, puede enlazar covalentemente la o las CDR a otra cadena polipeptídica, o puede incorporar la o las CDR de manera no covalente. Las CDR permiten que la inmunoadhesina se una específicamente a un antígeno de interés particular.
Un "anticuerpo aislado" es un anticuerpo que (1) no está asociado con componentes asociados de manera natural, incluyendo otros anticuerpos asociados de manera natural, que lo acompañan en su estado nativo, (2) está libre de otras proteínas de la misma especie, (3) es expresado por una célula que no expresa de manera natural el anticuerpo, o es expresado por una célula de una especie diferente, o (4) no se produce en la naturaleza.
El término "anticuerpo humano" incluye todos los anticuerpos que tienen una o más regiones variables y constantes derivadas de secuencias de Ig humana. En algunas realizaciones de la presente invención, todos los dominios variables y constantes del anticuerpo derivan de secuencias de Ig humana (un anticuerpo completamente humano).
Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo que se deriva de una especie no humana, en el que se han mutado ciertos aminoácidos para evitar o anular una respuesta inmunitaria en humanos. Alternativamente, un anticuerpo humanizado puede producirse fusionando los dominios constantes de un anticuerpo humano con los dominios variables de una especie no humana.
El término "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo que contiene una o más regiones de un anticuerpo y una o más regiones de uno o más anticuerpos. Cada anticuerpo puede tener su origen en especies separadas (como humanos y ratones).
El término "epítopo" incluye cualquier determinante molecular capaz de unirse específicamente a un receptor de células T o Ig. Los determinantes epitópicos consisten habitualmente de agrupaciones superficiales de átomos, como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar, y habitualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Un anticuerpo se une "específicamente" a un antígeno cuando la constante de disociación es <1 uM, preferiblemente <100 nM o <10 nM.
Se espera que los anticuerpos completamente humanos minimicen las respuestas inmunogénicas y alérgicas intrínsecas a los anticuerpos monoclonales (Mab) de ratón o derivados de ratón y, por tanto, aumenten la eficacia y la seguridad de los anticuerpos administrados. Puede esperarse que el uso de anticuerpos completamente humanos proporcione una ventaja sustancial en el tratamiento de enfermedades humanas crónicas y recurrentes, como la inflamación y el cáncer, que pueden requerir administraciones repetidas de anticuerpos.
Además, pueden crearse anticuerpos de fusión en los que 2 (o más) anticuerpos de cadena sencilla se enlazan entre sí. Esto es útil si se quiere crear un anticuerpo divalente o polivalente en una única cadena de polipéptidos, o si se quiere crear un anticuerpo biespecífico.
Un tipo de anticuerpo derivatizado se produce reticulando 2 o más anticuerpos (del mismo tipo o de tipos diferentes; por ejemplo, para crear anticuerpos biespecíficos). Los reticulantes adecuados incluyen aquellos que son heterobifuncionales, que tienen 2 grupos claramente reactivos separados por un espaciador apropiado (por ejemplo, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida) u homobifuncionales (por ejemplo, suberato de disuccinimidilo).
Otro tipo de anticuerpo derivado es un anticuerpo marcado. Los agentes de detección útiles con los que puede derivatizarse un anticuerpo o una porción de anticuerpo de la invención incluyen compuestos fluorescentes, que incluyen fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, cloruro de 5-dimetilamina-1-naftalenosulfonilo, ficoeritrina, fósforos de lantánidos y similares. Un anticuerpo también puede marcarse con enzimas que son útiles para la detección, como peroxidasa de rábano picante, galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina, glucosa oxidasa y similares. Un anticuerpo también puede marcarse con biotina y detectarse mediante la medición indirecta de la unión de avidina o estreptavidina. Un anticuerpo puede marcarse con un agente magnético, como el gadolinio. Un anticuerpo también puede marcarse con un epítopo polipeptídico predeterminado reconocido por un informador secundario (por ejemplo, secuencias de parejas de cremalleras de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión a metales, etiquetas de epítopos). En algunas realizaciones, los marcadores se unen mediante brazos espaciadores de varias longitudes para reducir el posible impedimento estérico.
Como se usa en la presente, un "antagonista total" es un antagonista que, a una concentración eficaz, bloquea esencialmente por completo un efecto medible de MAdCAM. Por antagonista parcial se entiende un antagonista que es capaz de bloquear parcialmente un efecto medible, pero que, incluso a la concentración más alta, no es un antagonista total. Por esencialmente por completo se entiende que se bloquea por lo menos aproximadamente el 80%, preferiblemente, por lo menos aproximadamente el 90%, más preferiblemente, por lo menos aproximadamente el 95%, y lo más preferible, por lo menos aproximadamente el 98% o 99% del efecto medible.
Como se usa en la presente, un "anticuerpo antagonista anti-MAdCAM" o "anticuerpo antagonista de MAdCAM" se refiere a un anticuerpo antagonista de MAdCAM que es capaz de inhibir la actividad biológica de MAdCAM y/o la vía o vías en sentido descendente mediadas por la señalización de MAdCAM. Un anticuerpo antagonista de MAdCAM abarca anticuerpos que bloquean, antagonizan, suprimen o reducen (en cualquier grado, incluso significativamente) la actividad biológica de MAdCAM, incluyendo las vías en sentido descendente mediadas por la señalización de MAdCAM o la inducción de una respuesta celular a MAdCAM. Para los propósitos de la presente invención, se entenderá explícitamente que el término "anticuerpo antagonista de MAdCAM" abarca todos los términos, títulos y estados funcionales y características identificados con anterioridad en los que la propia MAdCAM, una actividad biológica de MAdCAM o las consecuencias de la actividad biológica, se anulan, se disminuyen o se neutralizan sustancialmente en cualquier grado significativo. En algunas realizaciones, un anticuerpo antagonista de MAdCAM se une a MAdCAM. Ejemplos de anticuerpos antagonistas de MAdCAM se proporcionan, por ejemplo, en la WO2005067620.
Términos generales
Como se usa en la presente, "actividad biológica" se refiere a las actividades in vivo de un compuesto, composición o mezcla, o a las respuestas fisiológicas que resultan de la administración in vivo de un compuesto, composición u otra mezcla. La actividad biológica abarca los efectos terapéuticos, los efectos de diagnóstico y la actividad farmacéutica de tales compuestos, composiciones y mezclas.
El término "biológicamente compatible", como se usa en la presente, significa algo que es biológicamente inerte o no reactivo con moléculas biológicas intracelulares y extracelulares, y no tóxico.
"Alrededor de" o "aproximadamente", cuando se usa en relación con una variable numérica medible, se refiere al valor indicado de la variable y a todos los valores de la variable que están dentro del error experimental del valor indicado (por ejemplo, dentro del intervalo de confianza del 95% para la media) o dentro del 10 por ciento del valor indicado, el que sea mayor. Los intervalos numéricos incluyen los números que definen el intervalo. Cuando se usa el término "aproximadamente" en el contexto de un período de tiempo (años, meses, semanas, días, etc.), el término "aproximadamente" significa ese período de tiempo más o menos una cantidad del siguiente período de tiempo subordinado (por ejemplo aproximadamente 1 año significa 11-13 meses; aproximadamente 6 meses significa 6 meses más o menos 1 semana; aproximadamente 1 semana significa 6-8 días, etc.), o dentro del 10 por ciento del valor indicado, el que sea mayor.
El término "competir" significa que un primer anticuerpo, o una parte de unión al antígeno del mismo, compite por la unión con un segundo anticuerpo, o una parte de unión al antígeno del mismo, donde la unión del primer anticuerpo con su epítopo afín disminuye de manera detectable en presencia del segundo anticuerpo en comparación con la unión del primer anticuerpo en ausencia del segundo anticuerpo. La alternativa, en la que la unión del segundo anticuerpo a su epítopo también disminuye de manera detectable en presencia del primer anticuerpo puede, pero no es necesariamente el caso. Es decir, un primer anticuerpo puede inhibir la unión de un segundo anticuerpo a su epítopo sin que ese segundo anticuerpo inhiba la unión del primer anticuerpo a su epítopo respectivo. Sin embargo, cuando cada anticuerpo inhibe de manera detectable la unión del otro anticuerpo con su epítopo o ligando afín, ya sea en la misma, mayor o menor medida, se dice que los anticuerpos "compiten de manera cruzada" entre sí por la unión de su o sus epítopos respectivos. Independientemente del mecanismo por el que se produce dicha competencia o competencia cruzada (por ejemplo, impedancia estérica, cambio conformacional o unión a un epítopo común, o parte del mismo), el experto en la técnica apreciaría, en base a las enseñanzas proporcionadas en la presente, que dichos anticuerpos que compiten y/o compiten de manera cruzada pueden ser útiles para los métodos divulgados en la presente.
El término "identidad", como se conoce en la técnica, se refiere a una relación entre las secuencias de dos o más moléculas de polipéptidos o dos o más moléculas de ácidos nucleicos, según se determina comparando las secuencias. En la técnica, "identidad" también significa el grado de relación de secuencia entre secuencias de moléculas de ácidos nucleicos o polipéptidos, según sea el caso, según lo determinado por la coincidencia entre cadenas de secuencias de nucleótidos o aminoácidos. La "identidad" mide el porcentaje de coincidencias idénticas entre dos o más secuencias con alineamientos con huecos abordados por un modelo matemático particular de programas informáticos (es decir, "algoritmos").
El término "similitud" es un concepto relacionado, pero a diferencia de "identidad", se refiere a una medida de similitud que incluye tanto coincidencias idénticas como coincidencias de sustituciones conservadoras. Como las sustituciones conservadoras se aplican a las moléculas de polipéptidos y no a las de ácidos nucleicos la similitud solo se refiere a las comparaciones de secuencias de polipéptidos. Si dos secuencias de polipéptidos tienen, por ejemplo, 10 de 20 aminoácidos idénticos y el resto son sustituciones no conservadoras, entonces el porcentaje de identidad y similitud sería del 50%. Si en el mismo ejemplo, hay 5 posiciones más donde hay sustituciones conservadoras, entonces el porcentaje de identidad sigue siendo del 50%, pero el porcentaje de similitud sería del 75% (15 de 20). Por lo tanto, en los casos en que hay sustituciones conservadoras, el grado de similitud entre dos secuencias de polipéptidos será más alto que el porcentaje de identidad entre esas dos secuencias.
El término "sustitución conservadora de aminoácidos" se refiere a una sustitución de un residuo de aminoácido nativo con un residuo no nativo de tal manera que hay poco o ningún efecto sobre la polaridad, la carga y el volumen aproximado del residuo de aminoácido en esa posición. Por ejemplo, una sustitución conservadora resulta del reemplazo de un residuo no polar en un polipéptido con cualquier otro residuo no polar. El término también puede referirse a una sustitución identificada como frecuente entre proteínas muy similares, como en la matriz BLOSUM62 o matrices relacionadas (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89(22), 10915-9, 1992).
Una referencia a una secuencia de nucleótidos como se usa en la presente abarca su complemento a menos que se especifique lo contrario. Por tanto, debe entenderse que una referencia a un ácido nucleico que tiene una secuencia particular abarca su cadena complementaria, con su secuencia complementaria, a menos que el contexto defina lo contrario.
El término "purificar" y variaciones gramaticales del mismo se usan para referirse a la eliminación, total o parcial, de por lo menos una impureza de una mezcla que contiene el polipéptido y una o más impurezas, lo que mejora de este modo el nivel de pureza del polipéptido en la composición (es decir, disminuyendo la cantidad (ppm) de impureza o impurezas en la composición).
El término "Kd" se refiere a la constante de equilibrio de afinidad de unión de una interacción antígenoanticuerpo particular. Se dice que un anticuerpo se une específicamente a un antígeno cuando la Kd es < 1 mM, preferiblemente < 100 nM y lo más preferible < 10 nM. Una constante de afinidad de unión Kd puede medirse mediante resonancia de plasmones superficiales (SPR), por ejemplo, usando el sistema BIACORE™. En algunos aspectos, la SPR usó un anticuerpo capturado y un objetivo en fase de solución. En algunos aspectos, la SPR usó un objetivo capturado y un anticuerpo en fase de solución.
El término "koff" se refiere a la constante de tasa de disociación de una interacción antígeno-anticuerpo particular. Una constante de tasa de disociación koff puede medirse mediante resonancia de plasmones superficiales, por ejemplo, usando el sistema BIACORE™.
El término "resonancia de plasmones superficiales" se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de interacciones bioespecíficas en tiempo real mediante la detección de alteraciones en las concentraciones de proteínas dentro de una matriz biosensora, por ejemplo, utilizando el sistema BIACORE™ (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suecia y Piscataway, N.J.). Para descripciones adicionales, ver Jonsson U. et al., Ann. Biol. clin. 51:19-26 (1993); Jonsson U. et al., Biotechniques 11:620-627 (1991); Jonsson B. et al., J. Mol. Recognit. 8:125-131 (1995); y Johnsson B. et al., Anal. Biochem. 198:268-277 (1991).
La afinidad de unión y la tasa de disociación de un anticuerpo antagonista de MAdCAM a MAdCAM pueden determinarse mediante cualquier método adecuado. La afinidad de unión puede medirse mediante ELISA, RIA, citometría de flujo y resonancia de plasmones de superficie, como BIACORE™. La tasa de disociación puede medirse mediante resonancia de plasmones superficiales. Puede determinarse si un anticuerpo tiene sustancialmente la misma Kd que un anticuerpo antagonista de MAdCAM usando cualquier método adecuado. El Ejemplo 7 de la US8188235 ejemplifica un método para determinar constantes de afinidad de anticuerpos monoclonales anti-MAdCAM.
Puede determinarse si un anticuerpo se une al mismo epítopo o compite de manera cruzada por la unión con un anticuerpo antagonista de MAdCAM usando cualquier método adecuado. En un ejemplo, se permite que un anticuerpo antagonista de MAdCAM se una a MAdCAM en condiciones de saturación y luego se mide la capacidad del anticuerpo de prueba para unirse a MAdCAM. Si el anticuerpo de prueba puede unirse a MAdCAM al mismo tiempo que el anticuerpo antagonista de MAdCAM, entonces el anticuerpo de prueba se une a un epítopo diferente que el anticuerpo antagonista de MAdCAM. Sin embargo, si el anticuerpo de prueba no puede unirse a MAdCAM al mismo tiempo, entonces el anticuerpo de prueba se une al mismo epítopo, a un epítopo superpuesto o a un epítopo que está muy cercano al epítopo al que se une el anticuerpo antagonista de MAdCAM humano. Este experimento puede realizarse usando un ELISA, un RIA, BIACORE™ o citometría de flujo (FACS).
Para probar si un anticuerpo antagonista de MAdCAM compite de manera cruzada con otro anticuerpo antagonista de MAdCAM, puede usarse el método de competencia descrito en la presente en dos direcciones, es decir, determinando si el anticuerpo de referencia bloquea el anticuerpo de prueba y viceversa. En un ejemplo, el experimento se realiza usando un ELISA.
Los anticuerpos de MAdCAM o las porciones de unión a antígeno de los mismos pueden producirse mediante una variedad de técnicas, incluyendo la metodología de anticuerpos monoclonales convencional, por ejemplo, la técnica estándar de hibridación de células somáticas de Kohler y Milstein (1975) Nature 256: 495. También pueden emplearse otras técnicas para producir anticuerpos monoclonales, como la transformación viral u oncogénica de linfocitos B.
Los anticuerpos de MAdCAM o las porciones de unión a antígeno de los mismos pueden prepararse mediante expresión recombinante de genes de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina en una célula huésped. Por ejemplo, para expresar un anticuerpo de manera recombinante, una célula huésped se transfecta con uno o más vectores de expresión recombinantes que portan fragmentos de ADN que codifican las cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina del anticuerpo de tal manera que las cadenas ligera y pesada se expresen en la célula huésped y, preferiblemente, se secreten en el medio en el que se cultivan las células huésped, del cual pueden recuperarse los anticuerpos. Se usan varias metodologías de ADN recombinante para obtener genes de cadena ligera y pesada de anticuerpos, para incorporar estos genes en vectores de expresión recombinante y para introducir los vectores en células huésped, como las descritas en Sambrook, Fritsch and Maniatis (eds), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Segunda Edición, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F. M. et al. (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) y en la Patente de Estados Unidos N° 4.816.397.
Para expresar anticuerpos de MAdCAM y porciones de unión a antígeno de los mismos, los ADN que codifican cadenas ligeras y pesadas parciales o de longitud completa, obtenidos como se describe en la presente, se insertan en vectores de expresión de tal manera que los genes se enlazan operativamente a secuencias de control transcripcionales y traslacionales. En este contexto, el término se pretende que "enlazado operativamente" signifique que un gen de anticuerpo se liga en un vector de tal manera que las secuencias de control transcripcional y traslacional dentro del vector cumplen su función prevista de regular la transcripción y traducción del gen del anticuerpo. El vector de expresión y las secuencias de control de la expresión se eligen para que sean compatibles con la célula huésped de expresión usada. Los vectores de expresión incluyen, por ejemplo, plásmidos, retrovirus, adenovirus, virus adenoasociados (AAV), virus de plantas como virus del mosaico de la coliflor, virus del mosaico del tabaco, cósmidos, YAC y episomas derivados de EBV. El gen del anticuerpo se liga en un vector de tal manera que las secuencias de control transcripcional y traslacional dentro del vector cumplan su función prevista de regular la transcripción y traducción del gen del anticuerpo. El vector de expresión y las secuencias de control de la expresión se eligen para que sean compatibles con la célula huésped de expresión usada. El gen de la cadena ligera del anticuerpo y el gen de la cadena pesada del anticuerpo pueden insertarse en vectores separados o ambos genes se insertan en el mismo vector de expresión. Los genes del anticuerpo se insertan en el vector de expresión mediante varios métodos (por ejemplo, ligadura de sitios de restricción complementarios en el fragmento del gen del anticuerpo y el vector, o ligadura de extremos romos si no hay sitios de restricción presentes).
A menos que se indique lo contrario, la "remisión clínica" se define como una puntuación de Mayo total de <2 sin una subpuntuación individual >1 y una subpuntuación de sangrado rectal de 0 o 1. Cuando se indique, la remisión clínica puede basarse en SCCAI, en cuyo caso la remisión clínica se define como una puntuación SCCAI total <2.
La "tasa de respuesta clínica" se define como una disminución con respecto al valor de referecia de por lo menos 3 puntos en la puntuación de Mayo total con por lo menos un cambio del 30%, acompañada de una disminución de por lo menos 1 punto o una puntuación absoluta de 0 o 1 en la subpuntuación de sangrado rectal La "curación de la mucosa" se define como una subpuntuación absoluta de Mayo para endoscopia de 0 o 1 Alineamientos estructurales
Los alineamientos estructurales, que suelen ser específicos de proteínas y algunas veces de secuencias de ARN, usan información sobre la estructura secundaria y terciaria de la proteína o molécula de ARN para ayudar a alinear las secuencias. Los alineamientos estructurales se usan como el "estándar de referencia" porque alinean explícitamente regiones de la secuencia de la proteína que son estructuralmente similares en lugar de depender exclusivamente de la información de la secuencia. Un algoritmo usado comúnmente para alineamientos estructurales es el TM-ALIGN (Zhang and Skolnick, Nucleic Acids Research, 33: 2302-2309 (2005)), que asigna mayor peso a las regiones más similares de la estructura durante la superposición.
Alineamiento de secuencias
Cuando no es posible el alineamiento estructural, por ejemplo debido a la ausencia de datos de NMR de la secuencia objetivo o de la estructura cristalina, puede usarse el alineamiento de secuencias. El experto en la técnica está familiarizado con las herramientas de alineamiento de secuencias (como BLAST, CLUSTAL y otras conocidas por los expertos en la técnica, como las descritas en la presente) y es capaz de alinear secuencias, en particular secuencias de dominio constante de anticuerpos de acuerdo con motivos estructurales conocidos, especialmente debido a la gran cantidad de estudios estructurales ejemplares ya existentes para dominios de inmunoglobulina, anticuerpos y dominios constantes de anticuerpos en particular, a través de subtipos y especies.
Para familias de proteínas específicas con estructura conservada, hay disponibles otros algoritmos de alineamiento. En el caso de los anticuerpos, hay disponibles varios algoritmos para asignar la numeración de Kabat. En la presente se usa el algoritmo implementado en la versión 2012 de Abysis (www.abysis.org) para asignar la numeración de Kabat a las regiones variables, a menos que se indique lo contrario.
El término "porcentaje de identidad de secuencia" en el contexto de secuencias de ácidos nucleicos significa los residuos en dos secuencias que son iguales cuando se alinean para una correspondencia máxima. La longitud de la comparación de identidad de secuencia puede ser en un tramo de por lo menos aproximadamente nueve nucleótidos, habitualmente de por lo menos aproximadamente 18 nucleótidos, más habitualmente de por lo menos aproximadamente 24 nucleótidos, típicamente de por lo menos aproximadamente 28 nucleótidos, más típicamente de por lo menos aproximadamente 32 nucleótidos, y preferiblemente de por lo menos aproximadamente 36, 48 o más nucleótidos. En la técnica hay una serie de algoritmos diferentes conocidos que pueden usarse para medir la identidad de la secuencia de nucleótidos. Por ejemplo, las secuencias de polinucleótidos pueden compararse usando FASTA, Gap o Bestfit, que son programas en Wisconsin Package Version 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. El FASTA, que incluye, por ejemplo, los programas FASTA2 y FASTA3, proporciona alineamientos y porcentaje de identidad de secuencias de las regiones de la mejor superposición entre las secuencias de consulta y de búsqueda (Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998)). A menos que se especifique lo contrario, se usan los parámetros predeterminados para un programa o algoritmo en particular. Por ejemplo, el porcentaje de identidad de secuencia entre secuencias de ácidos nucleicos puede determinarse usando FASTA con sus parámetros predeterminados (un tamaño de palabra de 6 y el factor NOPAM para la matriz de puntuación) o usando Gap con sus parámetros predeterminados como se proporciona en la versión 6.1 de GCG.
Tabla 2: Secuencias de VH VL CDR de mAb 7.16.6
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EJEMPLOS
Ejemplo 1 Diseño del estudio
El estudio fue una prueba de concepto (POC) de Fase 2B, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo, paralelo, de intervalo de dosis que se llevó a cabo para evaluar la eficacia, la seguridad y la farmacocinética del mAb 7.16.6. Se aleatorizaron sujetos con colitis ulcerosa de moderada a grave en una proporción de 1:1:1:1:1 a niveles de dosis subcutánea (SC) (7,5, 22,5, 75 y 225 mg) de mAb 7.16.6 o placebo. La participación en este estudio duró aproximadamente 38 meses, lo que incluyó un período de selección de hasta 6 semanas, un período de tratamiento de 12 semanas y un período de seguimiento de 24 meses (6 visitas mensuales seguidas de un contacto extendido de 18 meses (contactos telefónicos cada 6 meses).
Para observar por lo menos 300 sujetos con 12 semanas de datos, se aleatorizaron 357 sujetos y se trataron en 105 sitios en 21 países.
Los sujetos fueron asignados aleatoriamente a uno de los siguientes brazos: (1) 7,5 mg SC (n=60); (2) 22,5 mg SC (n=60); (3) 75 mg SC (n=60); (4) 225 mg SC (n=60); y placebo (n=60). Los pacientes recibieron una dosis inicial en la semana 0 (después de un período de selección de 6 semanas) y recibieron dosis posteriores en la semana 4 y la semana 8.
Ejemplo 2 Criterios de valoración del estudio
El objetivo principal de este estudio fue caracterizar la dosis-respuesta y la eficacia de mAb 7.16.6 para inducir la remisión clínica en base a la puntuación de Mayo total en sujetos con colitis ulcerosa de moderada a grave.
La puntuación de Mayo total consiste de 4 componentes, cada uno puntuado de 0 a 3, siendo 3 el peor. Dos de los componentes, el recuento de heces y el sangrado rectal, se obtuvieron de los registros diarios introducidos por los pacientes en un sistema interactivo de respuesta de voz (IVRS). El tercer componente de la puntuación de Mayo es la evaluación global de un médico. El componente final es una puntuación endoscópica (consultar la puntuación MAYO, a continuación). Todas las puntuaciones endoscópicas fueron evaluadas por el investigador (lector local), así como por un lector central cegado. Históricamente, los estudios clínicos de pacientes con colitis ulcerosa han calculado la puntuación de Mayo total mediante una endoscopia de lectura local.
Puntuación MAYO
Frecuencia de deposiciones!: 0 = Número normal de deposiciones para este sujeto
1 = 1 a 2 deposiciones más de lo normal
2 = 3 a 4 deposiciones más de lo normal
3 = 5 o más deposiciones más de lo normal
Subpuntuación, 0 a 3
Sangrado rectal^: 0 = No se ve sangre
1 = Rayas de sangre con heces menos de la mitad del tiempo
2 = Sangre evidente en las heces la mayor parte del tiempo
3 = Solo pasa sangre
Subpuntuación, 0 a 3
Descubrimientos en la 0 = Enfermedad normal o inactiva
endoscopia: 1 = Enfermedad leve (eritema, disminución del patrón vascular, friabilidad leve)
2 = Enfermedad moderada (eritema marcado, falta de patrón vascular, friabilidad, erosiones)
3 = Enfermedad grave (sangrado espontáneo, ulceración) Subpuntuación, 0 a3
(continuación)
Evaluación global del médico§: 0 = normales
1 = enfermedad leve
2 = enfermedad moderada
3 = enfermedad grave
Subpuntuación, 0 a 3
* La puntuación de Mayo varía de 0 a 12; las puntuaciones más altas indican una enfermedad más grave. Los datos son de Schroeder et al.
f Cada sujeto sirve como su propio control para establecer el grado de anomalía de la frecuencia de las deposiciones.
$ La puntuación de sangrado diario representa el sangrado más grave del día.
§ La evaluación global del médico reconoce los otros tres criterios, recopilación diaria del sujeto del malestar abdominal y la sensación general de bienestar, y otras observaciones, como los descubrimientos físicos y el estado funcional del sujeto. *•
Criterios de valoración de la eficacia
Criterio de valoración primario de la eficacia:
• Proporción de sujetos en remisión clínica en la semana 12 (definida como una puntuación de Mayo total de <2 sin una subpuntuación individual >1 y una subpuntuación de sangrado rectal de 0 o 1).
Criterios de valoración secundarios clave de la eficacia:
• Proporción de sujetos con una respuesta clínica en la semana 12 (definida como una disminución desde el valor de referencia de por lo menos 3 puntos en la puntuación de Mayo total con por lo menos un cambio del 30%, acompañada de una disminución de por lo menos 1 punto o una puntuación absoluta de 0 o 1 en la subpuntuación de sangrado rectal).
• Proporción de sujetos con curación de la mucosa en la semana 12 (definida como la subpuntuación absoluta de Mayo para endoscopia de 0 o 1).
• Proporción de sujetos con una disminución desde el valor de referencia en la puntuación de Mayo parcial de <2 sin ninguna subpuntuación individual >1 en las semanas 4, 8 y 12.
• Cambio desde el valor de referencia (CFB) en la puntuación de Mayo total en la semana 12 y CFB en las subpuntuaciones de Mayo individuales en las semanas 4, 8 y 12.
• CFB en calprotectina fecal y hsCRP en las semanas 4, 8 y 12.
Criterios de valoración de seguridad y PK, y PK/PD:
• Seguridad y tolerabilidad evaluadas por la frecuencia de AE, SAE, AE que llevan a la interrupción del tratamiento del estudio
• Perfil de concentración-tiempo de mAb 7.16.6
• Resumen de datos farmacocinéticos y de anticuerpos antifármaco, incluyendo la PK preliminar de la población. Criterios de valoración exploratorios:
• Proporción de sujetos con remisión clínica (definida como una puntuación SCCAI total de <2 puntos) en las semanas 4, 8 y 12
• MAdCAM soluble en sangre al inicio y en la semana 12 y CFB.
•
Ejemplo 3 Métodos de análisis
Análisis del criterio de valoración primario
El análisis del criterio de valoración primario preespecificado se basó en 1) el modelo Emax; 2) modelo lineal en dosis; o 3) método CMH usando ponderaciones mínimas de riesgo (Mehrotra y Railkar, 2000). Como los datos observados no respaldaron la tendencia monotónica creciente de dosis-respuesta para Emax y el modelo de dosis lineal, se usó el método CMH estratificado por la experiencia anterior de terapia anti-TNF para el análisis del criterio de valoración primario. Los valores de p ajustados unilateralmente usando el método de incremento de Hochberg, aunque no están especificados previamente, se presentan en este informe para respaldar el ajuste para comparaciones múltiples.
Análisis de criterios de valoración secundarios
Los criterios de valoración secundarios y exploratorios clave usando datos binarios en la semana 4, 8 o 12 se analizaron usando el método CMH. Los criterios de valoración continuos en la semana 4, 8 o 12 se analizaron mediante el modelo de análisis de covarianza (ANCOVA) y/o el modelo mixto lineal (LMM).
Imputación de valores perdidos en criterios de valoración binarios
Para la imputación del valor faltante para los sujetos que abandonaron el análisis de criterios de valoración binarios en criterios de valoración primarios, secundarios y exploratorios en los que se usó el método CMH se usó un enfoque de fracaso del tratamiento. Para los modelos ANCOVA y LMM, solo se usaron datos observados; no se hizo ninguna imputación. Para el análisis longitudinal, como el modelo mixto lineal generalizado es válido bajo el supuesto de falta aleatoria, no se realizó imputación, se usaron los datos observados.
Conjuntos de población de análisis
En base al diseño del estudio, la aleatorización original se conservó desde la Semana 0 a la 12, pero no después de la Semana 12. El conjunto de análisis de la Semana 0 a la 12 se realizó en las siguientes poblaciones:
• Población con intención de tratar modificada (mITT): el conjunto de análisis completo que consiste de todos los sujetos aleatorizados que recibieron por lo menos una dosis del producto en investigación.
• Población de análisis de seguridad: incluye todos los sujetos inscritos que recibieron por lo menos una dosis del fármaco del estudio. Esta población incluye sujetos que fueron tratados pero que por diversas razones no recibieron el producto en investigación asignado aleatoriamente.
• Población por protocolo (PP): un subconjunto de la población de análisis mITT, pero que excluye a todos los sujetos identificados con infracciones clave del protocolo.
• Población PK: incluye todos los sujetos que recibieron 1 dosis del producto en investigación y que tienen datos sobre por lo menos un punto temporal de concentración PK.
Ejemplo 4 Disposición y datos demográficos de los sujetos
Se evaluaron un total de 587 sujetos para obtener 357 sujetos aleatorizados, todos los cuales recibieron por lo menos 1 dosis del fármaco del estudio. Estos 357 sujetos constituyen la población de análisis mITT y la población de análisis de seguridad. Hubo 2 sujetos que recibieron un tratamiento diferente al asignado para las 3 dosis. Estos dos sujetos se asignaron aleatoriamente al grupo de dosis de 22,5 mg y ambos recibieron el grupo de dosis de 75 mg que se refleja en la Tabla 3 a continuación.
Para respaldar los análisis de los criterios de valoración primarios y secundarios, se realizaron análisis de sensibilidad usando la población PP que constituye 320 sujetos. Se excluyeron un total de 37 sujetos del conjunto de análisis de PP debido a la identificación de desviaciones clave del protocolo. Doce de estos sujetos recibieron una o más dosis incorrectas.
T l : Di i i n v l i n r r r mi n
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T l 4: r rí i m r fi r f r n i
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Ejemplo 5 Eficacia
Criterio de valoración primario de eficacia - Remisión clínica en la semana 12
Criterios de valoración secundarios de la eficacia clave - Respuesta clínica y curación de la mucosa en la semana 12
La Figura 1 muestra las tasas de remisión clínica observadas en la semana 12 para cada grupo de tratamiento derivadas de la lectura central y local para las poblaciones mITT y PP. En general, las tasas de remisión que usan la lectura local son más altas que las que usan la lectura central. Las tasas de remisión en la población mITT calculadas usando la lectura central para placebo, 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg de mAb 7.16.6 fueron del 2,7%, 11,3%, 16,7%, 15,5% y 5,7%, respectivamente; mientras que las tasas de remisión calculadas con lecturas locales fueron del 5,5%, 14,1%, 23,6%, 18,3% y 12,9%, respectivamente. En la población PP, las tasas correspondientes fueron ligeramente más altas, pero mantuvieron la misma tendencia, donde 22,5 mg fue la más alta entre los cuatro grupos de tratamiento, seguida de la tasa de 75 mg.
Se analizaron las tasas de remisión clínica observadas por estrato de exposición anti-TNF (tratado previamente o no tratado previamente) en la semana 12 y se presentan en la Figura 2. En general, las tasas de remisión clínica observadas en la población mITT mostraron una tendencia similar y mostraron tasas más altas entre los pacientes no tratados previamente frente a los pacientes tratados previamente. Los resultados del análisis de PP respaldaron los mismos descubrimientos que la población mITT, pero mostraron tamaños de efecto mayores entre los grupos de tratamiento y placebo.
En la Figura 4 se muestran los análisis para el criterio de valoración primario (Remisión clínica) y los criterios de valoración secundarios clave (respuesta clínica y curación de la mucosa) basados en la lectura central. Para el criterio de valoración primario Remisión clínica, tres de los cuatro grupos de tratamiento (7,5 mg, 22,5 mg y 75 mg) mostraron un beneficio de eficacia estadísticamente significativo sobre el grupo placebo. Las tasas de remisión clínica de 7,5 mg, 22,5 mg y 75 mg sobre el placebo en la semana 12 fueron del 8,0% (p=0,043), 12,8% (p=0,010) y 11,8% (p=0,012), respectivamente. En términos de respuesta clínica, tres de los cuatro grupos de tratamiento, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg, han mostrado una eficacia estadística en comparación con el placebo con tamaños del efecto (RD = Diferencia de riesgo) del 25,4% (p = 0,004), 16,3% (p =0,048) y 21,3% (p=0,016), respectivamente. Las tasas de curación de la mucosa para 22,5 mg y 75 mg sobre el placebo son significativamente diferentes de las del placebo con tamaños del efecto del 18,7% (p=0,004) y el 15,9% (p=0,008), respectivamente. Las tasas de remisión clínica y curación de la mucosa para la dosis más alta de 225 mg en comparación con el placebo son las más bajas entre todos los grupos de dosis. Por el contrario, la respuesta clínica para el grupo de dosis de 225 mg es la segunda más alta y es significativamente diferente del placebo.
Los resultados correspondientes a la lectura local siguen una tendencia similar (Figura 5). Los tamaños del efecto son, en general, más altos que aquellos que usan puntuaciones de lectura centrales. Las tasas de remisión clínica para 22,5 mg y 75 mg son estadísticamente significativas con tamaños del efecto del 17,8% (p=0,006) y 12,2% (p=0,038), respectivamente. La respuesta clínica para 22,5 mg y 225 mg también fue estadísticamente significativa con tamaños del efecto del 21,2% (p=0,023) y 18,5% (p=0,044). La respuesta clínica para 75 mg es marginalmente no significativa (p=0,065). Ninguna de las dosis se separó estadísticamente del placebo en términos de curación de la mucosa, posiblemente debido a la alta tasa de placebo (21,9%). También se observan resultados similares en la población PP bajo estos dos análisis.
Criterios de valoración secundarios clave de la eficacia - Puntuación de Mayo parcial
La Figura 6 resume la proporción de sujetos con una disminución desde el valor de referencia en la puntuación de Mayo parcial de <2 sin una subpuntuación individual >1 en las semanas 4, 8 y 12. Estos datos se analizaron usando el mismo método CMH que se usó para el análisis del criterio de valoración primario. Los resultados del cambio desde el valor de referencia en la puntuación de Mayo parcial en la semana 12 son consistentes con el análisis del criterio de valoración primario: 22,5 mg diferenciados del placebo (p = 0,004) y 75 mg, aunque no significativo, fue el siguiente tamaño del efecto más cercano. En la semana 4, las cuatro dosis habían mostrado tamaños de efecto casi similares; sin embargo, a partir de la semana 8 empezaron a diferenciarse del placebo. Los resultados del análisis con la población de PP proporcionaron la misma tendencia con una RD ligeramente más alta en cada punto temporal.
Todos los análisis presentados anteriormente para los criterios de valoración primarios y secundarios clave usaron criterios de valoración binarios. Para respaldar los descubrimientos anteriores de eficacia clínica, se analizó el cambio desde el valor de referencia usando la puntuación de Mayo total en la semana 12 ajustando un modelo ANCOVA. En la Tabla 5 se presentan 5 los resultados de ANCOVA usando los datos de lectura central. La diferencia del grupo de placebo frente a 22,5 mg pareció ser la más alta, seguida de la de 225 mg, y los cuatro grupos de tratamiento fueron estadísticamente diferentes del placebo. Estos descubrimientos son similares al análisis de la respuesta clínica, ya que la respuesta se determina en base al cambio desde el valor de referencia en la puntuación de Mayo. Los análisis que usan la lectura local también son consistentes con estos descubrimientos.
La Figura 12 muestra que la aleatorización dio como resultado puntuaciones de frecuencia de deposiciones bien equilibradas al inicio del estudio. Todos los brazos de tratamiento fueron mejores que el placebo en la semana 4 y el efecto máximo en la semana 12 se observó en el brazo de tratamiento de 22,5 mg. La frecuencia de las deposiciones es un componente tanto de la puntuación de Mayo total como de la puntuación de Mayo parcial. Se informa diariamente y se normaliza a valores premórbidos y se califica en una escala de 0-3. Una puntuación de 0 indica que la frecuencia de las deposiciones es igual al valor premórbido; una puntuación de 1 indica 1-2 deposiciones más/día de lo normal; una puntuación de 2 indica 3-4 más deposiciones/día de lo normal; y una puntuación de 3 indica >4 deposiciones más de lo normal cada día. Los datos de cada sujeto representan la media de 3 valores antes de la fecha de evaluación. Cada punto del gráfico es la media (SEM) de un tratamiento en un día de evaluación. En la tabla de datos, el valor entre paréntesis adyacente a la media es la media corregida con placebo, es decir, la media menos el valor de placebo correspondiente.
La Figura 13 muestra que esa aleatorización dio como resultado puntuaciones de sangrado rectal bien equilibradas al inicio del estudio. Todos los brazos de tratamiento fueron mejores que el placebo en la semana 4, y este efecto se mantuvo hasta la semana 12, observándose el mayor efecto en esa visita en el brazo de 22,5 mg. El sangrado rectal es un componente tanto de la puntuación de Mayo total como de la puntuación de Mayo parcial. Se informa diariamente y se califica en una escala de 0-3. Una puntuación de 0 indica que no hay sangrado; una puntuación de 1 indica que había sangre visible con heces <50% del tiempo; una puntuación de 2 indica sangre visible con las heces >50% de las veces; y una puntuación de 3 indica la expulsión de sangre sola, sin heces. Los datos de cada sujeto representan la media de 3 valores antes de la fecha de evaluación. Cada punto del gráfico es la media (SEM) de un tratamiento en un día de evaluación. En la tabla de datos, el valor entre paréntesis adyacente a la media es la media corregida con placebo, es decir, la media menos el valor de placebo correspondiente.
La Figura 14 muestra que la aleatorización dio como resultado puntuaciones de sigmoidoscopia flexible bien equilibradas al inicio del estudio. Todos los brazos de tratamiento fueron mejores que el placebo en la semana 12 y el mayor efecto en esa visita se observó en el brazo de 22,5 mg. La sigmoidoscopia flexible es un componente de la puntuación de Mayo total. Se realizó antes de la visita inicial e inmediatamente antes de la visita de la semana 12. Se puntúa en una escala de 0-3. Una puntuación de 0 indica mucosa colónica normal o enfermedad inactiva; una puntuación de 1 indica enfermedad leve caracterizada por eritema, disminución del patrón vascular y/o friabilidad leve; una puntuación de 2 indica enfermedad moderada caracterizada por eritema marcado, patrón vascular ausente, friabilidad y/o erosiones; una puntuación de 3 indica enfermedad grave con ulceración y sangrado espontáneo. Cada punto del gráfico es la media (SEM) de un tratamiento en el día de la evaluación. En la tabla de datos, el valor entre paréntesis adyacente a la media es la media corregida con placebo, es decir, la media menos el valor de placebo correspondiente.
La Figura 15 muestra que la aleatorización dio como resultado puntuaciones de PGA bien equilibradas al inicio del estudio. Como se esperaba del protocolo, la enfermedad de los sujetos se consideró de moderada a grave al inicio del estudio. Todos los brazos de tratamiento fueron mejores que el placebo en la semana 12 y el mayor efecto en esa visita se observó en el brazo de 22,5 mg. La evaluación global del médico es un componente tanto de la puntuación de Mayo total como de la puntuación de Mayo parcial. Refleja la valoración subjetiva del médico tratante teniendo en cuenta todos los aspectos de la colitis ulcerosa del sujeto. Se puntúa en una escala de 0-3. Una puntuación de 0 indica que el sujeto es normal; una puntuación de 1 indica enfermedad leve; una puntuación de 2 indica enfermedad moderada; una puntuación de 3 indica enfermedad grave. Cada punto del gráfico es la media (SEM) de un tratamiento en el día de la evaluación. En la tabla de datos, el valor entre paréntesis adyacente a la media es la media corregida con placebo, es decir, la media menos el valor de placebo correspondiente.
Tabla 5: Cambio desde el valor de referencia en la puntuación de Mayo total en la semana 12 (ANCOVA,
Tratamie B en el modelo ANCOVA*
stimad cia de Placebo Cl del 90% Placebo -1.53 7,5 mg -2.41 -0.88 (-1.623. -0.145) 22,5 mg -3.06 -1.53 (-2.254. -0.809) 75 mg
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-2.65
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-1.12
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(-1.845. -0.390)
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225 mg -2.80 -1.27 (-2.016. -0.533) *: El modelo incluye el tratamiento, la puntuación Total Mayo de referencia y el estado anti-TNF como efectos fijos.
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Ejemplo 6 Criterio de valoración exploratorio - SCCAI
La remisión clínica basada en otro sistema de puntuación preespecificado, el Índice de actividad de colitis clínica simple (SCCAI), se derivó como una verificación de la consistencia del efecto clínico (Tabla 6). El SCCAI no incluye endoscopia. La remisión clínica en un momento dado basado en SCCAI se define como una puntuación total de SCCAI <2. En la Figura se representan gráficamente 7 las tasas de remisión observadas (con enfoque de fracaso del tratamiento) y los correspondientes intervalos de confianza del 90% en las semanas 4, 8 y 12. En todo momento, las tasas de remisión correspondientes a las dosis de 22,5 mg y 75 mg son más altas que las otras dos dosis y, con el tiempo, estas dos dosis se separan aún más. Los resultados de SCCAI en la semana 12 son consistentes con los resultados de remisión clínica basados en la puntuación de Mayo.
T l : Ín i ivi li i líni im l AI
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Ejemplo 7 Seguridad
No hubo evidencia de una señal de seguridad observada en este estudio. La población de seguridad consistió de 357 sujetos que fueron aleatorizados y recibieron por lo menos una dosis del fármaco del estudio. Los sujetos se analizaron por el tratamiento recibido. La disposición de los sujetos se presenta en la Tabla 7. Hubo 2 sujetos que recibieron un tratamiento diferente al asignado para las 3 dosis. Ambos fueron asignados al grupo de dosis de 22,5 mg y ambos recibieron 75 mg. Los eventos adversos fueron ligeramente más comunes en los sujetos tratados con el fármaco (162/284 = 57%) que en los sujetos tratados con placebo (39/73 = 53%), aunque no hubo evidencias claras de relación con la dosis (Tabla 7).
T l 7: Di i i n l r l ri m n -12
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Interrupciones
Hubo 21 interrupciones durante la fase de tratamiento, incluyendo 12 debido a abandonos por eventos adversos (Tabla 8). La mayoría de los 12 abandonos por eventos adversos se debieron al empeoramiento de la colitis ulcerosa (7) y otros eventos gastrointestinales (3). La mayoría de estos eventos se produjeron en el brazo de 7,5 mg (n=6) durante los primeros 30 días del estudio. No hubo evidencia de un fármaco o respuesta a la dosis.
T l : In rr i n i v n v r
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Muertes
Hubo una muerte durante este estudio. A una mujer de 30 años que recibió 7,5 mg se le diagnosticó adenocarcinoma de colon 30 días después de la primera dosis del fármaco del estudio. Antes de ingresar al estudio, el paciente experimentó una marcada pérdida de peso durante un corto período de tiempo con un IMC en la selección de 15,8 kg/m2. La colonoscopia previa al estudio fue anormal con un área estenótica en el recto, pero la biopsia no mostró displasia. El sujeto tuvo una pérdida de peso adicional del 10% en el plazo de las primeras cuatro semanas con el fármaco del estudio. La sigmoidoscopia repetida reveló una estenosis más significativa y la biopsia de la lesión estenótica en ese momento mostró adenocarcinoma. Suspendió el fármaco del estudio y murió de cáncer de colon metastásico 3 meses después. Se consideró que el cáncer estaba presente antes del ingreso en el estudio a pesar de la biopsia negativa, y que era poco probable que este evento adverso fatal estuviera asociado con el uso del fármaco del estudio. La e-DMC también coincidió en esta causalidad.
Eventos adversos graves
La frecuencia de eventos adversos graves fue más alta en el brazo de tratamiento de 7,5 mg (n=10), pero todos los demás brazos, incluyendo el placebo, informaron de frecuencias de SAE similares (n=1-4). Hubo 26 eventos adversos graves en 22 sujetos. El SAE más común fue la colitis ulcerosa, informada por 9 sujetos, seguido de la migraña, informada por 2 sujetos. Otros SAE gastrointestinales (un evento cada uno) incluyeron dolor abdominal, adenocarcinoma de colon, absceso anal, fisura anal, apendicitis, diarrea, estreñimiento, infección por C. diffidle y vómitos. Otros SAE no gastrointestinales (un evento cada uno) incluyeron migraña complicada, migraña, epilepsia, dolor en las extremidades, embolia arterial retiniana, síncope vasovagal, embolia pulmonar y cefalea tensional.
Eventos médicamente importantes específicos del protocolo
Durante el transcurso del estudio, se implementó un programa de vigilancia muy activo para evaluar cualquier riesgo de PML y miocarditis. No se observó ninguno de estos eventos.
Eventos adversos
En general, el mAb 7.16.6 pareció tolerarse bien. La frecuencia de eventos adversos, aunque ligeramente mayor en los sujetos tratados con el fármaco (57%) que en los tratados con placebo (53%), no aumentó con la dosis. Los eventos adversos más comunes por clasificación de órganos y sistemas (SOC) fueron infecciones e infestaciones, trastornos gastrointestinales, trastornos del sistema nervioso, trastornos musculoesqueléticos y trastornos generales y afecciones en el lugar de administración (Tabla 9).
T l : Ev n v r m m n r l ifi i n r n l i m
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Fuera del tracto gastrointestinal y tejidos relacionados, la MAdCAM se encuentra constitutivamente en la mama, tejido nasal y bazo. No se informaron eventos adversos para la mama o el bazo. La incidencia de nasofaringitis e infecciones del tracto respiratorio superior no fue diferente entre los grupos de tratamiento (Tabla 10).
Tabla 10: Nasofarin itis e Infecciones del Tracto Res iratorio Su erior
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Los eventos adversos comunes (aquellos que se observaron en por lo menos 4 sujetos en 1 brazo de tratamiento) fueron dolor abdominal, colitis ulcerosa, náuseas, vómitos, dolor de cabeza, tos y anemia. El AE más común fue el dolor de cabeza, notificado por hasta un 10% de los sujetos, seguido de dolor abdominal y colitis ulcerosa. No hubo evidencia de un efecto de la dosis para ninguno de estos eventos (Tabla 11 y Figura 16).
Las reacciones en el sitio de la inyección notificadas como eritema, dolor, hinchazón y sensación de quemazón fueron poco frecuentes, observadas con mayor frecuencia en el brazo de tratamiento de 225 mg (10%), pero se distribuyeron uniformemente en los demás brazos de tratamiento (3-4%), incluyendo el placebo. mAb 7.16.6 parece seguro y bien tolerado en esta población de pacientes.
T l 11: Ev n v r rri r n n 4 m n r l m n n r r mi n
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Ejemplo 8 Biomarcadores
8.1 Biomarcadores de proteínas identificados mediante realización de perfiles de proteínas séricas Antecedentes. Se recogieron muestras de sangre y tejido en varios puntos temporales en todos los grupos de dosis y se usaron para medir un panel de proteínas usando la plataforma de ensayo de proteínas altamente multiplexadas de Olink Biosciences. Se midieron las concentraciones de 202 proteínas usando esta plataforma de ensayo sensible y precisa, y se compararon entre muestras tomadas antes del tratamiento con muestras tomadas 4 semanas y 12 semanas después de la dosificación inicial. Los biomarcadores que predicen la respuesta al tratamiento se analizan correlacionando la concentración inicial de una o varias proteínas de muestras tomadas antes del tratamiento, así como el cambio en la concentración de proteína desde el valor de referencia hasta la semana 4 o la semana 12. Estos datos de proteínas se analizan junto con datos de ARN, genotipado y datos de población celular. En las Tablas 12 y 13 se muestran los resultados de los ensayos de proteínas que muestran desviación de su valor de control respectivo. El anticuerpo anti-MAdCAM se administró cada 4 semanas.
Métodos. Las proteínas séricas de los pacientes inscritos en el estudio MAdCAM UC POC se midieron a partir de muestras tomadas antes del tratamiento y a las 4 y 12 semanas durante el período de dosificación del tratamiento usando la plataforma de ensayo de extensión de proximidad de Olink Biosciences. En total, se midieron las proteínas de 937 muestras de suero recogidas de 331 sujetos en 3 puntos temporales durante el período de tratamiento de 12 semanas. Se usaron tres ensayos comerciales, Proseek Multiplex CVD I96*96, Proseek Multiplex INF I96*96 y Proseek Multiplex ONC v2 I96*96, para medir 202 proteínas únicas en las muestras de suero de estudio por Olink.
Resultados. Muchas proteínas tienen una concentración diferente a las 4 semanas y a las 12 semanas durante el período de dosificación del tratamiento anti-MAdCAM en comparación con los valores de concentración iniciales. En la Tabla 12 se resumen las proteínas con la diferencia mediana más grande entre el pretratamiento y 4 semanas después del tratamiento anti-MAdCAM en comparación con el pretratamiento y la semana 4 del grupo de placebo. Se muestra el cambio mediano y los valores del cuartil 1, cuartil 3 para cada grupo para cada marcador. Los datos se analizan en busca de biomarcadores de respuesta usando modelado estadístico.
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continuación
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En la Tabla 13 se resumen las proteínas con la diferencia mediana más grande entre el pretratamiento y 12 semanas después del tratamiento anti-MAdCAM en comparación con el pretratamiento y la semana 12 del grupo de placebo. Se muestra el cambio mediano y los valores del cuartil 1, cuartil 3 para cada grupo. Los datos se analizan en busca de biomarcadores de respuesta usando modelado estadístico.
Además, en colaboración con el nodo IBD, puede extraerse valor adicional mediante la extracción de datos en comparación con otros conjuntos de datos IBD, para mejorar nuestra comprensión de esta enfermedad, se proponen evaluaciones de proteínas terapéuticas conocidas o novedosas de estas muestras.
En particular, tres biomarcadores proteicos: calprotectina fecal, sMAdCAM y hsCRP, son particularmente predictivos de las respuestas de los pacientes al tratamiento. Los niveles de proteína cambian en respuesta al tratamiento y los cambios en las concentraciones de proteína desde el valor de referencia hasta la semana 4 o desde elvalor de referencia hasta la semana 12 se correlacionan con los criterios de valoración clínicos (por ejemplo, respuesta clínica en la semana 12) y pueden usarse para predecir la respuesta clínica o para identificar subpoblaciones de pacientes particularmente aptas para este tratamiento.
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Calprotectina fecal. En la Figura 8 se resumen las estimaciones (y el IC del 90%) para el cambio desde el valor de referencia en los datos de calprotectina fecal. Hubo una fuerte disminución en los valores de calprotectina fecal desde el valor de referencia para los brazos activos en la semana 4, que continuó disminuyendo en las semanas 8 y 12. Como es evidente a partir de la Figura 8 el brazo de placebo mostró menos deterioro en comparación con los brazos activos. En la semana 12, las medias geométricas para el % de cambio desde el valor de referencia fueron del -19% (disminución), -60% (disminución), -59% (disminución), -55% (disminución) y -60% (disminución) para el placebo, dosis de 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg, respectivamente.
MAdCAM Soluble (sMAdCAM). En la Figura 9 se resumen as estimaciones (y el IC del 90%) para el cambio desde el valor de referencia en los datos de sMAdCAM. De acuerdo con las predicciones durante el diseño del estudio, sMAdCAM mostró una disminución muy sólida y monótona en todo el intervalo de dosis, estabilizándose en dosis >=22,5 mg. En la semana 12, las medias geométricas para el % de cambio desde el valor de referencia fueron del 4% (aumento), -68% (disminución), -90% (disminución), -94% (disminución) y -98% (disminución), para placebo, dosis de 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg, respectivamente.
hsCPR. En la Figura 10 se resumen las estimaciones (y el IC del 90%) para el cambio desde el valor de referencia en los datos de hsCRP. Hubo cierta disminución en los valores de hsCRP desde el valor de referencia para los brazos activos en la semana 4, que continuó disminuyendo hasta la semana 8, excepto en el grupo de dosis de 7,5 mg, que no mostró muchos cambios. Los brazos de tratamiento activo mostraron una tendencia a volver al valor de referencia en la semana 12, aunque de acuerdo con los descubrimientos clínicos, las reducciones mayores y más persistentes se observaron en los grupos de 22,5 mg y 75 mg. Como es evidente a partir de la Figura 2, el brazo de placebo no mostró muchos cambios con el tiempo. En la semana 12, las medias geométricas del cambio porcentual desde el valor de referencia fueron del 15% (aumento), 5% (aumento), -20% (disminución), -16% (disminución) y 2% (aumento) para el placebo, 7,5 mg, dosis de 22,5 mg, 75 mg y 225 mg, respectivamente.
8.2 Biomarcadores de ARN identificados mediante elaboración de perfiles de expresión génica para MAdCAM UC
Antecedentes. Se recogieron muestras de biopsia de sangre y tejido en varios puntos temporales en todos los grupos de dosis y se usaron para medir el transcriptoma global usando una plataforma de tecnología de secuenciación de ARN. La secuenciación de ARN es una tecnología no sesgada de elaboración de perfiles de expresión génica que permite la medición simultánea y no sesgada de los niveles de transcripción de prácticamente todas las transcripciones presentes en una célula o tipo de tejido determinado. Los transcriptomas se secuenciaron a una profundidad de lectura de ~ 40 millones de lecturas finales emparejadas por muestra, lo que permite un análisis de transcripción detallado de > 15.000 genes, incluyendo las isoformas respectivas. Las muestras tomadas antes del tratamiento se compararon con las muestras tomadas 4 semanas y 12 semanas después del tratamiento y se realizó un análisis estadístico para identificar los cambios en la transcripción en los distintos niveles de dosis en estos puntos temporales de muestreo. Los biomarcadores que predicen la respuesta al tratamiento se analizan correlacionando la concentración inicial de una o varias transcripciones de muestras tomadas antes del tratamiento, así como el cambio en el nivel de expresión de la transcripción desde el valor de referencia hasta las 4 o 12 semanas. Estos datos de expresión génica también se analizan junto con datos de proteínas y datos de población celular.
Métodos. Se midió el ARN de sangre y tejido de los pacientes inscritos en el estudio MAdCAM UC a partir de muestras tomadas antes del tratamiento y a las 4 y 12 semanas durante el período de dosificación del tratamiento usando la plataforma de tecnología de secuenciación de ARN Illumina que consiste de una generación de biblioteca de secuenciación de ARNm de TruSeq. seguido de un análisis de esta biblioteca usando un secuenciador de la serie Illumina HiSeq 2000 o 4000. En total, se midió la expresión de transcripciones en sangre de 320 pacientes al inicio y en la semana 12. A 256 pacientes de este grupo también se les realizaron análisis de transcripciones en la semana 4. Para el análisis de muestra de biopsia de tejido, se analizaron biopsias de tejido inflamado de 126 sujetos en la visita de selección y en la semana 12.
Resultados. Muchas transcripciones muestran un nivel de expresión génica diferente a las 4 y 12 semanas durante el período de dosificación del tratamiento anti-MAdCAM en comparación con los valores de referencia de expresión génica al inicio (o visita de selección). Ver la Tabla 15. En particular, se cree que el cambio de expresión en CCR9 (por ejemplo, el cambio de expresión en la semana 12 desde el inicio) se correlaciona con la eficacia clínica.
Tabla 15
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8.3 Biomarcadores celulares identificados por FACS.
Ensayo FACS de integrina B7. Se evalúan la frecuencia y la expresión del marcador B7 de superficie en subconjuntos de linfocitos mediante un ensayo FACS de sangre completa. Se incuban alícuotas (100 jl) de sangre con heparina sódica con 30 j l del cóctel de anticuerpos (CD45RO-FITC, integrina B7 o control de isotipo IgG2a de rata-PE, CD4-PerCPCy5.5, CD27-APC y CD3-APC-H7; todos de BD) a temperatura ambiente durante 30 minutos. A cada tubo se le añade 1 ml de solución BD PharmLyse 1X, se agita a mano y se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente mientras se protege de la luz durante 30 minutos. FACSCanto II adquiere la sangre lisada en el plazo de 2 horas de la preparación. El citómetro está configurado para adquirir la mayor parte de la muestra por tubo. La expresión de la proteína B7 de superficie en el subconjunto se cuantifica como MESF (moléculas de fluorocromo soluble equivalente) de unidad estándar con BD QuantiBrite-PE como calibrador.
La MAdCAM se expresa en las células endoteliales del intestino y en el tejido linfoide asociado al intestino. El anti-MAdCAM bloquea la interacción entre las células que expresan p7+ y el ligando MAdCAM, bloqueando de este modo la extravasación de células que expresan p7+ de la circulación al intestino. Por lo tanto, el tratamiento con anti-MAdCAM aumenta las células a4p7+ en la circulación. Se toman muestras de sangre al inicio del estudio, la semana 8 y la semana 12, y las células T de memoria central a4p7+ se miden mediante clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS). Los datos de porcentaje de p7+ se informan como el % de células que expresan CD4+ que también expresaron b7, número absoluto (células/jl) y MESF (moléculas de fluorocromo soluble equivalente), que es la unidad de medida de la expresión de la proteína p7 en las células T de memoria central. Los parámetros FACS se analizan usando un modelo lineal mixto usando el cambio desde el valor de referencia como respuesta, y el tratamiento, el estado del tratamiento previo con anti-TNF, la terapia IS concomitante, el valor de referencia, la visita y la interacción de tratamiento por visita como efectos fijos y sujetos como efectos aleatorios. Se cree que los linfocitos T CD4+ de memoria central b7+ circulantes aumentan en las semanas 8 y 12 en pacientes tratados con anti-MAdCAM de una manera dependiente de la dosis. Se espera que las veces de cambio en el porcentaje de células T de memoria central p7+ sean estadísticamente significativos para todas las dosis en las semanas 8 y 12. También se espera que los aumentos en el número absoluto de células T de memoria central p7+ y en MESF sean significativamente mayores para todas las dosis de grupos anti-MAdCAM en comparación con placebo en las semanas 8 y 12.
8.4 Biomarcadores genéticos identificados por genotipado.
Se generaron datos de genotipo de todo el genoma para todos los sujetos usando la matriz Illumina personalizada de Pfizer. Este chip personalizado se basa en gran medida en el diseño del chip Illimuna OmniExpressExome que tiene como objetivo cubrir la mayor parte de la variación exónica que existe en el genoma. El contenido adicional más allá de los chips OmniExpressExome tiene como objetivo cubrir variantes adicionales que se sabe que están asociadas con enfermedades en cohortes multiétnicas según estudios anteriores. Tanto el control de calidad a nivel de muestra como a nivel de genotipo se llevará a cabo en base a los siguientes criterios:
Nivel de muestra
• Comprobación de tasa de llamada de muestra - se eliminan las muestras con una tasa de llamada <95%. • Comprobación de género de muestra - se eliminan las muestras con géneros discordantes con el género autoinformado. El género se define por la tasa de homocigosidad en el cromosoma X. Para los hombres, la tasa de homocigosidad debe ser >= 0,8 y para las mujeres, debe ser <= 0,2. Por lo general, menos del 0,5% de las muestras tienen discrepancias de género.
• Tasa de heterocigosidad de la muestra - se eliminan las muestras con una tasa de heterocigosidad >3 desviaciones estándar por encima de la media.
• Comprobación de la relación de la muestra - para parejas con una puntuación PI_HAT >0,1875, se elimina la muestra con la tasa de llamadas más baja.
Nivel de genotipo
• Comprobación de la tasa de llamadas de SNP - se eliminarán los SNP con una tasa de llamadas <95%. • Comprobación de duplicados de marcadores SNP - se eliminan los SNP duplicados en el chip. Se conserva el SNP con la tasa de llamadas más alta.
Análisis de datos genotípicos. Se realizan dos análisis genéticos. Primero, se analizan los SNP candidatos para evaluar la asociación con la eficacia clínica en la semana 12. En particular, se analiza rs11171739, ya que rs11171739 es un SNP que se ha sugerido como potencialmente asociado con los niveles de expresión del gen MADCAM1. En segundo lugar, se construye una puntuación genética en base a una combinación de las principales variantes genéticas que se sabe que están asociadas con la colitis ulcerosa en base a los datos disponibles públicamente, para probar una asociación de esta puntuación genética con la respuesta clínica a MadCAM. La puntuación génica se calcula en base a una suma ponderada de alelos de riesgo para la UC. Los pesos se basarán en el tamaño del efecto conocido de cada alelo de riesgo. Se calcula una puntuación génica para cada sujeto individual y luego se prueba para la asociación en un modelo de regresión lineal para varias medidas de eficacia clínica.
Todos los análisis incluyen la ascendencia como una covariable para evitar la detección de señales asociadas con la ascendencia en lugar de la respuesta al fármaco. La ascendencia está representada por un vector cuantitativo para cada sujeto que representa sus valores a lo largo de una serie de componentes principales y se incluye en el modelo de regresión anterior como sustitución de la raza como covariable.
Ejemplo 9 Farmacocinética, cobertura objetivo y anticuerpo antifármaco
La exposición fue consistente con la observada en el estudio FIH (A7281001, colitis ulcerosa) y predicha adecuadamente por el modelo farmacocinético poblacional preliminar que describe la disposición del fármaco mediada por el objetivo. (¡Error! Fuente de referencia no encontrada).
Los valores Cmínimos medios observados en la semana 12 fueron 435 ng/ml, 1334 ng/ml, 5567 ng/ml y 19860 ng/ml a dosis de 7,5 mg, 22,5 mg, 75 mg y 225 mg, respectivamente. Estas concentraciones en suero correspondieron a la supresión de MAdCAM soluble (cambio porcentual medio geométrico desde el inicio en la semana 12) de 68, 90, 94 y 98 respectivamente, como se muestra en ¡Error! Fuente de referencia no encontrada., consistente con las predicciones del modelo durante el diseño del estudio.
En general, las concentraciones en suero de los niveles de PK en el presente estudio fueron similares a las observadas en un estudio separado de la enfermedad de Crohn, usando el mismo anticuerpo terapéutico en las dosis correspondientes.
De 758 muestras de ADA de 282 sujetos en tratamiento activo analizadas hasta la semana 12, 709 resultaron negativas. Cuarenta y nueve muestras de ADA de 29 sujetos se confirmaron como positivas; 7 sujetos con 7,5 mg, 6 sujetos con 22,5 mg, 9 sujetos con 75 mg y 7 sujetos con 225 mg. Doce sujetos tenían ADA positivos confirmatorios al inicio del estudio. Nueve sujetos de los 12 sujetos con ADA positivo confirmatorio al inicio del estudio fueron positivos después del inicio (3 sujetos con 7,5 mg, 1 sujeto con 22,5 mg, 4 sujetos con 75 mg y 1 sujeto con 225 mg), sin indicación de respuesta de ADA reforzada por el tratamiento (es decir, mayor título de ADA después del tratamiento en comparación con el valor de referencia). De las 709 muestras que se informaron como negativas, 396 (-56%) se consideraron no concluyentes y 313 (-44%) se confirmaron como negativas en base a concentraciones en suero medidas >LLOQ (>10 ng/ml) y BLQ (< 10 ng/ml), respectivamente. Nota: de los 313 valores BLOQ, 245 fueron mediciones previas a la dosis.
La tasa positiva confirmatoria general fue de aproximadamente el 6,4% con títulos generalmente bajos y cercanos al punto de corte (4,64), sin que ninguno fuera superior a 11,86.
La evaluación preliminar de los datos PK en sujetos con ADA positivos confirmatorios posteriores al inicio no indica ningún efecto apreciable de los ADA positivos sobre la exposición, la seguridad o la eficacia. Esta evaluación se realizó en base a todos los datos disponibles de sujetos con ADA positivos confirmatorios posteriores al inicio (n = 26).
Ejemplo 10 Enfermedad de Crohn
Antecedentes. La inhibición de la translocación de glóbulos blancos (WBC) del torrente sanguíneo al intestino es un nuevo enfoque prometedor para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal. El OPERA era un estudio aleatorizado, multicéntrico, de doble ciego, controlado con placebo de seguridad y eficacia de mAb 7.16.6 en sujetos con enfermedad de Crohn (EC).
Métodos. Los adultos de 18 a 75 años, con EC activa de moderada a grave (CDAI 220-450) y antecedentes de fallo o intolerancia a los fármacos anti-TNF y/o inmunosupresores eran elegibles si tenían hsCRP >3,0 mg/l y úlceras en la colonoscopia. Los sujetos se aleatorizaron a grupos de placebo, 22,5 mg, 75 mg o 225 mg. El criterio de valoración primario fue la respuesta de CDAI-70 en la semana 8 o 12. Los criterios de valoración secundarios fueron la remisión y la respuesta y seguridad de CDAI-100. Los biomarcadores de la enfermedad estudiados fueron el nivel de células T de memoria central CD4+ p7+ en sangre (frecuencia y expresión de p7) mediante FACS, PCR y MAdCAM soluble.
Resultados. Se inscribieron 267 sujetos. Aunque la respuesta de CDAI-70 no fue significativamente diferente de la del placebo para ningún tratamiento, la remisión parece ser mayor en sujetos con CRP de referencia más alta (CRP >18). La CRP mediana al inicio del estudio fue de 18 mg/l en todos los grupos. La MAdCAM soluble en los sujetos tratados, pero no en los de control, disminuyó significativamente en la semana 2 en comparación con el valor referencia, de manera relacionada con la dosis, y se mantuvo baja durante el estudio. Los linfocitos T de memoria central p7+ CD4+ circulantes aumentaron en las semanas 8 y 12, en sujetos tratados con PF de una manera dependiente de la dosis. Las características iniciales y el subconjunto de resultados de eficacia se muestran en la Tabla 14.
T l 14: r rí i l i n n n r l fi i n l m n 12
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mAb 7.16.6 parece seguro y bien tolerado en esta población de pacientes. Los eventos adversos más comunes estuvieron relacionados con la enfermedad subyacente, sin evidencia de respuesta a la dosis en ningún grupo de AE.
Conclusiones. El criterio de valoración primario no se cumplió debido a una alta respuesta al placebo, mAb 7.16.6 fue farmacológicamente activo, como lo demuestra un aumento relacionado con la dosis en los linfocitos T p7+ circulantes y una disminución sostenida relacionada con la dosis en MAdCAM. Los sujetos con CPR inicial más alta tuvieron la mejor respuesta al mAb 7.16.6. No se observó ninguna señal de seguridad en este estudio.
Ejemplo 11 Biomarcadores de ARN para la enfermedad de Crohn
Se midió el ARN derivado de la sangre de los pacientes inscritos en el estudio MAdCAM CD a partir de muestras tomadas antes del tratamiento y a las 12 semanas durante el período de dosificación del tratamiento usando la plataforma de tecnología de secuenciación de ARN Illumina que consiste de una generación de biblioteca de secuenciación de ARNm de cadenas TruSeq seguido de un análisis de esta biblioteca usando un secuenciador Illumina HiSeq de la serie 2000 o 4000. En total, se midió la expresión de la transcripción en sangre en 91 pacientes al inicio y en la semana 12.
Muchas transcripciones muestran un nivel de expresión génica diferente a las 12 semanas durante el período de dosificación del tratamiento anti-MAdCAM en comparación con los valores de referencia de expresión génica de partida. En la Tabla 16 se resumen las transcripciones de los 200 cambios estadísticamente más significativos en los diferentes niveles de dosis entre el inicio y 12 semanas después del tratamiento anti-MAdCAM. Se muestra el cambio medio de veces (AveFC) a cada nivel de dosis seguido de la significancia del cambio en las dosis de tratamiento (PValorTrt). Las dos primeras columnas muestran la ID del gen de Ensemble y la Id del gen del Comité de Nomenclatura de Genes HUGO (HGNC), respectivamente. Tabla 16
Tabla 16
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continuación
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Claims (2)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo antagonista de MAdCAM para su uso en un método de tratamiento de la colitis ulcerosa en un paciente, en donde el anticuerpo antagonista de MAdCAM se administra por vía subcutánea al paciente a una dosis inicial de 75 mg del anticuerpo antagonista de MAdCAM seguido de una o más dosis posteriores de 75 mg del anticuerpo antagonista de MAdCAM, en donde la una o más dosis posteriores se dosifican cada 4 semanas, en donde la primera dosis posterior se proporciona 4 semanas después de la dosis inicial, y en donde el anticuerpo antagonista de MAdCAM comprende una cadena ligera de la SEQ ID NO: 1, y una cadena pesada de la SEQ ID NO:2.
2. El anticuerpo antagonista de MAdCAM para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el paciente no está tomando un antagonista de TNF o un inhibidor de TNF.
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