ES2912651T3 - Anticuerpos anti-CD137 - Google Patents
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Abstract
Un anticuerpo anti-CD137 humano que comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de: la SEQ ID NO: 7, en donde dicho CD137 humano está definido por la SEQ ID NO: 1.
Description
DESCRIPCIÓN
Anticuerpos anti-CD137
La presente invención pertenece al campo de la medicina. En particular, la presente invención se refiere a anticuerpos agonistas dirigidos a CD137 humano, composiciones que comprenden tales anticuerpos agonistas anti-CD137 humano y métodos para usar tales anticuerpos agonistas anti-CD137 humano para el tratamiento de tumores sólidos y hematológicos solos o en combinación con quimioterapia y otras terapias contra el cáncer.
Ahora se sabe que potenciar la respuesta inmunitaria antitumoral puede ser un medio eficaz de terapia contra el cáncer. En este sentido, CD137, también conocido como 4-1BB, pertenece a la familia de receptores de TNF y desempeña una función en la activación de las respuestas inmunitarias de linfocitos T, tal como al impulsar la proliferación de linfocitos T y las funciones efectoras, promover la memoria inmunológica e inhibir la muerte celular inducida por activación. Se ha mostrado que los anticuerpos agonistas dirigidos a CD137 son prometedores en modelos de tumores murinos como monoterapia (Melero. I. et al., Nat. Med. 3(6):682-685 (1997)), sin embargo, los anticuerpos agonistas dirigidos a CD137 humano aún no han demostrado respuestas suficientes como monoterapia o terapia combinada en pacientes humanos. En este sentido, ni utomilumab (un mAb IgG2 agonista de CD137 totalmente humano) (Fisher, T. M. et al., Cancer Immunol. Immunother. (2012) 61:1721-1733) ni urelumab (un mAb IgG4 agonista de CD137 humanizado) (Segal, N. H. Clin. Cancer Res. (2017) 23 (8): 1929-1936) han recibido aprobaciones reguladoras para su uso como monoterapia o incluso como terapia combinada. De hecho, ningún anticuerpo agonista dirigido al CD137 humano ha sido aprobado para uso terapéutico en seres humanos.
Por tanto, existe la necesidad de anticuerpos completamente humanos adicionales que sean agonistas del receptor CD137 humano y promuevan una respuesta inmunitaria robusta contra el cáncer, pero con perfiles de toxicidad aceptables. También sigue existiendo la necesidad de anticuerpos agonistas anti-CD137 humano alternativos que puedan combinarse con otras terapias para el tratamiento del cáncer. En particular, también sigue existiendo la necesidad de anticuerpos anti-CD137 humano que muestren suficiente potencia como monoterapia y/o terapia combinada contra el cáncer.
El documento US 8337850 describe anticuerpos humanos específicos para CD137 humano y de macaco cangrejero.
El documento US 7288638 describe anticuerpos humanos específicos para CD137 humano. El documento US 2016/244528 describe anticuerpos agonistas humanos contra TNFRSF9. Fisher T. S. et al., (2012) Cancer Immunol. Immunother., 61; págs. 1721-1733 describe que el direccionamiento de 4-1BB por el anticuerpo monoclonal PF-05082566 mejora la función de los linfocitos T y promueve la actividad antitumoral. Zhiqiang G. et al., (2013) J. Trans. Med., 11; pág. 215 describe que el bloqueo combinado de TIM-3 y la activación de CD137 proporciona protección a largo plazo en un modelo murino de cáncer de ovario.
Sin desear quedar limitados a teoría alguna, se cree que el uso de los anticuerpos agonistas actuales dirigidos contra CD137 como agente de monoterapia y/o combinación contra el cáncer está obstaculizado por factores tales como la fuerza agonista de dichos anticuerpos y los acontecimientos adversos relacionados con el sistema inmunitario que resultan de su uso a dosis mayores, potencialmente eficaces. En particular, los anticuerpos actuales son demasiado potentes, lo que conduce a acontecimientos adversos, o presentan una eficacia subóptima.
Los anticuerpos agonistas anti-CD137 humano descritos en el presente documento son anticuerpos nulos efectores mediados por el receptor Fcy completamente humanos, que se unen al CD137 humano y al CD137 del macaco cangrejero, estimulan la activación de linfocitos T in vitro, promueven la expresión en superficie celular de CD137 humano, mejoran la actividad de NF-k B, inhiben el crecimiento tumoral en modelos de tumores murinos de cáncer de pulmón no microcítico como monoterapia, inhiben la supresión mediada por linfocitos T reguladores in vitro, activan identificaciones de genes inmunitarios, aumentan la frecuencia de linfocitos T CD3+ intratumorales, compiten con el ligando de CD137 humano por la unión a CD137 humano y se unen a residuos de aminoácidos únicos en CD137 humano.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) que comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la Se Q ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. La presente divulgación proporciona un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de
aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. La presente divulgación proporciona un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona una célula de mamífero capaz de expresar un anticuerpo que comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7.
La presente divulgación proporciona una célula de mamífero capaz de expresar un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona un proceso para producir un anticuerpo que comprende cultivar una célula de mamífero capaz de expresar el anticuerpo y recuperar el anticuerpo; en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SeQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7.
La presente divulgación proporciona un proceso para producir un anticuerpo que comprende cultivar una célula de mamífero capaz de expresar el anticuerpo y recuperar el anticuerpo; en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo producido por un proceso que comprende cultivar una célula de mamífero capaz de expresar el anticuerpo y recuperar el anticuerpo; en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SeQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7. La presente divulgación proporciona un anticuerpo producido por un proceso que comprende cultivar una célula de mamífero capaz de expresar el anticuerpo y recuperar el anticuerpo; en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona una molécula de ADN que comprende un polinucleótido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 14 y una de las SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 17. La presente divulgación proporciona una célula de mamífero que comprende una molécula de ADN que comprende un polinucleótido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 14 y una de las SEQ ID NO: 15, SEQ iD NO: 16 o SEQ ID NO: 17. La presente divulgación proporciona una célula de mamífero que comprende un polinucleótido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 14 y un polinucleótido que tiene la secuencia de una de las s Eq ID NO: 15, SeQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 17.
La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo desvelado en el presente documento y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable. La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable; en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7. La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable; en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable; en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12. La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable; en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable; en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento
del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de vejiga. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de mama. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de las vías biliares. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de colon. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de endometrio. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de esófago. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer gástrico. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de cabeza y cuello. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de pulmón no microcítico. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de próstata. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer rectal. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es carcinoma de células renales. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es colangiocarcinoma. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es adenocarcinoma de pulmón. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es carcinoma de células escamosas de pulmón. La presente divulgación proporciona un anticuerpo desvelado en el presente documento para usar en el tratamiento del cáncer; en donde el cáncer es un carcinoma renal de células claras.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) desvelado en el presente documento para usar en terapia. La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) desvelado en el presente documento para usar en terapia; en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7. La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) desvelado en el presente documento para usar en terapia; en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) desvelado en el presente documento para usar en terapia; en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la s Eq ID NO: 7. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la s Eq ID NO: 7; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata,
cáncer de recto o cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7; en donde el cáncer es colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón o carcinoma renal de células claras. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9; en donde el cáncer es colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón o carcinoma renal de células claras. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; en donde el cáncer es colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón o carcinoma renal de células claras. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11; en donde el cáncer es colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón o carcinoma renal de células claras. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13; en donde el cáncer es colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón o carcinoma renal de células claras.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la s Eq ID NO: 7; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con radiación ionizante. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con radiación ionizante. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con radiación ionizante. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con radiación ionizante. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una
cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con radiación ionizante.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la s Eq ID NO: 7; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes quimioterapéuticos. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes quimioterapéuticos. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes quimioterapéuticos. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes quimioterapéuticos. La presente divulgación proporciona un anticuerpo para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13; en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes quimioterapéuticos.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en al menos uno de los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, en donde el anticuerpo entra en contacto con al menos dos de los residuos, preferiblemente al menos tres de los residuos, más preferiblemente al menos cuatro de los residuos; más preferiblemente al menos cinco de los residuos; más preferiblemente al menos seis de los residuos; más preferiblemente al menos siete de los residuos; más preferiblemente al menos ocho de los residuos; más preferiblemente al menos nueve de los residuos; más preferiblemente al menos diez de los residuos; más preferiblemente al menos once de los residuos; más preferiblemente al menos doce de los residuos; más preferiblemente al menos trece de los residuos; más preferiblemente al menos catorce de los residuos; más preferiblemente al menos quince de los residuos; o más preferiblemente todos los residuos. La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en al menos uno de los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, en donde el anticuerpo entra en contacto con al menos dos de los residuos, preferiblemente al menos tres de los residuos, más preferiblemente al menos cuatro de los residuos; más preferiblemente al menos cinco de los residuos; más preferiblemente al menos seis de los residuos; más preferiblemente al menos siete de los residuos; más preferiblemente al menos ocho de los residuos; más preferiblemente al menos nueve de los residuos; más preferiblemente al menos diez de los residuos; más preferiblemente al menos once de los residuos; más preferiblemente al menos doce de los residuos; más preferiblemente al menos trece de los residuos; más preferiblemente al menos catorce de los residuos; más preferiblemente al menos quince de los residuos; o más preferiblemente todos los residuos; en donde el contacto se determina mediante radiocristalografía y en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo.
La presente divulgación proporciona el uso de un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en al menos uno de los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, en donde el anticuerpo entra en contacto con al menos dos de los residuos, preferiblemente al menos tres de los residuos, más preferiblemente al menos cuatro de los residuos; más preferiblemente al menos cinco de los residuos; más preferiblemente al menos seis de los residuos; más preferiblemente al menos siete de los residuos; más preferiblemente al menos ocho de los residuos; más preferiblemente al menos nueve de los residuos; más preferiblemente al menos diez de los residuos; más preferiblemente al menos once de los residuos; más preferiblemente al menos doce de los residuos; más preferiblemente al menos trece de los residuos; más preferiblemente al menos catorce de los residuos; más preferiblemente al menos quince de los residuos; o más preferiblemente todos los residuos. La presente divulgación proporciona el uso de un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en al menos uno de los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive); opcionalmente, en donde el anticuerpo entra en contacto con al menos dos de los residuos, preferiblemente al menos tres de los residuos, más preferiblemente al menos cuatro de los residuos; más preferiblemente al menos cinco de los
residuos; más preferiblemente al menos seis de los residuos; más preferiblemente al menos siete de los residuos; más
preferiblemente al menos ocho de los residuos; más preferiblemente al menos nueve de los residuos; más preferiblemente al menos diez de los residuos; más preferiblemente al menos once de los residuos; más preferiblemente al menos doce de los residuos; más preferiblemente al menos trece de los residuos; más preferiblemente al menos catorce de los residuos; más preferiblemente al menos quince de los residuos; o más preferiblemente todos los residuos; en donde el contacto se determina mediante radiocristalografía y en donde los
residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o
una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137
humano en los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive). La
presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o una
composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano
en los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde el
contacto se determina mediante radiocristalografía y en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis
(6) angstroms o menos del anticuerpo.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o
una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137
humano en los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en
donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de
endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer
de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como
agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde
el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en los siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93
103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde el contacto se determina mediante radiocristalografía y en donde los
residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo; en donde el cáncer es
cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de
esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de
recto o cáncer de tiroides.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para
usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en los siguientes
residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive). La presente divulgación
proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento
del cáncer, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en los siguientes residuos de aminoácidos:
55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde el contacto se determina mediante
radiocristalografía y en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del
anticuerpo.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para
usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en los siguientes
residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde el cáncer es cáncer de
vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer
gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de
tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO:
1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo entra en contacto con CD137 humano en los
siguientes residuos de aminoácidos: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde el contacto
se determina mediante radiocristalografía y en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6)
angstroms o menos del anticuerpo; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías
biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer
de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o
una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo no se une a FcyRI humano,
FcyRIIa humano, FcyRIIb humano, FcYRNIa(F) humano, FcYRIIIa(V) humano o C1q humano. La presente divulgación
proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento
del cáncer, en donde el anticuerpo no se une a FcyRI humano, FcyRIIa humano, FcyRIIb humano, FcYRIIIa(F) humano,
FcYRIIIa(V) humano o C1q humano.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) o
una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo, en donde el anticuerpo no se une a FcyRI humano,
FcyRIIa humano, FcyRIIb humano, FcYRIIIa(F) humano, FcYRIIIa(V) humano o C1q humano; en donde el cáncer es
cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de
esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de
recto o cáncer de tiroides. La presente divulgación proporciona un anticuerpo que actúa como agonista del CD137
humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo no se une al FcyRI humano, FcyRIIa humano, FcyRIIb humano, FcYRIIIa(F) humano, FcYRIIIa(V) humano o C1q humano; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con al menos un residuo de aminoácido de los siguientes en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde la cadena ligera entra en contacto con al menos un residuo de aminoácido de los siguientes en el c D137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive).
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con al menos un residuo de aminoácido de los siguientes en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde la cadena ligera entra en contacto con al menos un residuo de aminoácido de los siguientes en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive); en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo, como se determina mediante radiocristalografía.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde la cadena ligera entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive).
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); en donde la cadena ligera entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive); en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo, como se determina mediante radiocristalografía.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); opcionalmente, en donde la cadena ligera entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive).
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); opcionalmente, en donde la cadena ligera entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive); en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo, como se determina mediante radiocristalografía.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); opcionalmente, en donde la cadena ligera entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive); en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo, como se determina mediante radiocristalografía.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera; en donde la cadena pesada entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 55, 59, 63, 66, 72, 93-103 (inclusive) y 112-116 (inclusive); opcionalmente, en donde la cadena ligera entra en contacto con los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 96-98 (inclusive), 100 y 114-116 (inclusive); en donde los residuos en contacto están a una distancia de seis (6) angstroms o menos del anticuerpo, como se determina mediante radiocristalografía; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo se une al menos a uno de los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97 y 115.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo se une al menos a dos de los residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97, 114 y 115.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo se une al menos a los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97, 114 y 115.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo se une al menos a uno de los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97 y 115; en donde la unión se determina usando una proteína CD137 humana mutante que tiene una mutación en uno o más de los siguientes residuos de aminoácidos: 97, 114 y 115.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1), en donde el anticuerpo se une al menos a dos de los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97, 114 y 115; en donde la unión se determina usando una proteína CD137 humana mutante que tiene una mutación en uno o más de los siguientes residuos de aminoácidos: 97, 114 y 115.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo se une a los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97, 114 y 115; en donde la unión se determina usando una proteína CD137 humana mutante que tiene una mutación en uno o más de los siguientes residuos de aminoácidos: 97, 114 y 115.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo que es un agonista del CD137 humano (SEQ ID NO: 1) para usar en el tratamiento del cáncer, en donde el anticuerpo se une a los siguientes residuos de aminoácidos en el CD137 humano: 97, 114 y 115; en donde la unión se determina usando una proteína CD137 humana mutante que tiene una mutación en uno o más de los siguientes residuos de aminoácidos: 97, 114 y 115; en donde el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides.
La presente divulgación proporciona un anticuerpo agonista de CD137 completamente humano que comprende dos o más de las siguientes características: (a) el anticuerpo compite con el ligando de CD137 humano por la unión a CD137 humano; (b) el anticuerpo no se une a FcyRI humano, FcyRIIa humano, FcyRIIb humano, FcYRIIIa(F) humano, FcYRIIIa(V) humano o C1q humano; (c) el anticuerpo se une al CD137 de macaco cangrejero; (d) el anticuerpo inhibe el crecimiento de tumores de pulmón no microcíticos humanos como monoterapia; y (e) el anticuerpo aumenta la frecuencia de linfocitos T CD3+ intratumorales.
Los ejemplos no limitantes de agentes quimioterapéuticos útiles incluyen 5-fluorouracilo, hidroxiurea, gemcitabina, metotrexato, doxorrubicina, etopósido, carboplatino, cisplatino, ciclofosfamida, melfalán, dacarbazina, taxol, camptotecina, FOLFIRI, FOLFOX, docetaxel, daunorrubicina, paclitaxel, oxaliplatino y combinaciones de los mismos.
El término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, se refiere a un complejo polipeptídico que tiene dos cadenas pesadas (HC) y dos cadenas ligeras (LC) de modo que las cadenas pesadas y las cadenas ligeras están interconectadas por enlaces disulfuro; en donde el anticuerpo es un anticuerpo de subclase IgG.
Un anticuerpo de la presente invención es un complejo polipeptídico diseñado, no natural. Una molécula de ADN de la presente invención es una molécula de ADN que comprende una secuencia polinucleotídica no natural que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de al menos uno de los polipéptidos en un anticuerpo de la presente invención.
El anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo de tipo IgG y tiene cadenas "pesadas" y cadenas "ligeras" que se entrecruzan mediante enlaces disulfuro intra e intercatenarios. Cada cadena pesada está compuesta por un HCVR N-terminal y una región constante de cadena pesada ("HCCR"). Cada cadena ligera está compuesta por una LCVR y una región constante de cadena ligera ("LCCR"). Cuando se expresan en determinados sistemas biológicos, los anticuerpos que tienen secuencias Fc humanas nativas se glucosilan en la región Fc. Normalmente, se produce glucosilación en la región Fc del anticuerpo en un sitio de N-glucosilación muy conservado. Los N-glucanos normalmente se unen a la asparagina. Los anticuerpos también se pueden glucosilar en otras posiciones.
Opcionalmente, los anticuerpos anti-CD137 humanos descritos en el presente documento contienen una porción Fc que procede de IgG1 humana. Se sabe que IgG1 se une a las proteínas de la familia de receptores Fc-gamma (FcyR) así como a C1q. La interacción con estos receptores puede inducir citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Por lo tanto, opcionalmente, los anticuerpos anti-CD137 humanos descritos en el presente documento son un anticuerpo monoclonal completamente humano que carece de función efectora Fc (IgG1, sin Fc). Para lograr un anticuerpo IgG1 sin Fc, es necesaria mutagénesis selectiva de residuos dentro de la región CH2 de su región Fc de IgG1. Se introducen sustituciones de aminoácidos L234A, L235E y G237A en IgG1 Fc para reducir la unión a FcyRI, FcyRIIa y FcyRIII, y se introducen sustituciones A330S y P331S para reducir la fijación del complemento mediada por C1q. Para reducir la posible inducción de una respuesta
inmunitaria cuando se dosifica en seres humanos, determinados aminoácidos pueden requerir retromutaciones para coincidir con las secuencias de línea germinal del anticuerpo.
Las regiones HCVR y LCVR pueden subdividirse adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad ("CDR"), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco conservadas ("FR"). Cada HCVR y LCVR está compuesta por tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amino hasta el extremo carboxilo en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. En el presente documento, las tres CDR de la cadena pesada se denominan "HCDR1, HCDR2 y HCDR3" y las tres CDR de la cadena ligera se denominan "LCDR1, LCDR2 y LCDR3". Las CDR contienen la mayoría de los restos que forman interacciones específicas con el antígeno. Para los fines de la presente invención, se usan las definiciones de CDR de North. La definición de CDR de North (North et al., "A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations", Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011)) se basa en el agrupamiento de propagación por afinidad con un gran número de estructuras cristalinas.
Un ADN aislado que codifica la región de HCVR se puede convertir en un gen de cadena pesada de longitud completa uniendo operativamente el ADN codificante de HCVR a otra molécula de ADN que codifica las regiones constantes de cadena pesada. Las secuencias de genes de región constante de cadena pesada humanos, así como otros mamíferos, son conocidas en la técnica. Los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones se pueden obtener, p. ej., mediante amplificación por PCR convencional.
Un ADN aislado que codifica una región de LCVR se puede convertir en un gen de cadena ligera de longitud completa uniendo operativamente el ADN codificante de LCVR a otra molécula de ADN que codifica una región constante de cadena ligera. Las secuencias de genes de región constante de cadena ligera humanos, así como otros mamíferos, son conocidas en la técnica. Los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones pueden obtenerse mediante amplificación por PCR convencional. La región constante de cadena ligera puede ser una región constante kappa o lambda. Preferiblemente para los anticuerpos de la presente invención, la región constante de cadena ligera es una región constante kappa.
Los polinucleótidos de la presente invención se expresarán en una célula hospedadora después de que las secuencias se hayan unido operativamente a una secuencia de control de la expresión. Los vectores de expresión se pueden replicar normalmente en los organismos hospedadores, ya sea como episomas o como parte íntegra del ADN cromosómico del hospedador. Habitualmente, los vectores de expresión contendrán marcadores de selección, p. ej., tetraciclina, neomicina y dihidrofolato reductasa, para permitir la detección de dichas células transformadas con las secuencias de ADN deseadas.
El anticuerpo de la presente invención se puede producir fácilmente en células de mamíferos, cuyos ejemplos no limitantes incluyen células CHO, NS0, HEK293 o COS. Las células hospedadoras se cultivan usando técnicas bien conocidas en este campo.
Los vectores que contienen las secuencias polinucleotídicas de interés (p. ej., los polinucleótidos que codifican los polipéptidos del anticuerpo y las secuencias de control de la expresión) pueden transferirse a la célula hospedadora mediante métodos bien conocidos, que varían dependiendo del tipo de hospedador celular.
Se pueden emplear diversos métodos de purificación de proteínas y tales métodos son conocidos en la materia y se describen, por ejemplo, en Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990) y Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3a edición, Springer, NY (1994).
En otras realizaciones de la presente invención, el anticuerpo, o los ácidos nucleicos que lo codifican, se proporciona en forma aislada. Como se usa en el presente documento, el término "aislado" se refiere a una proteína, péptido o ácido nucleico que está exento o sustancialmente exento de cualquier otra especie macromolecular que se encuentre en un entorno celular. "Sustancialmente exento", como se usa en el presente documento, significa que la proteína, el péptido o el ácido nucleico de interés comprende más del 80 % (molar) de las especies macromoleculares presentes, preferiblemente más del 90 % y más preferiblemente más del 95 %.
El anticuerpo de la presente invención, o las composiciones farmacéuticas que lo comprenden, puede administrarse por vías parenterales, un ejemplo no limitante de las cuales es la administración intravenosa. Un anticuerpo de la presente invención se puede administrar a un paciente solo con vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables en dosis individuales o múltiples. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar mediante métodos bien conocidos en la técnica (p. ej., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22a ed. (2012), A. Loyd et al., Pharmaceutical Press) y comprenden un anticuerpo, como se desvela en el presente documento, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Pueden ajustarse las pautas posológicas para proporcionar la respuesta óptima deseada (p. ej., un efecto terapéutico). Las dosis de tratamiento pueden ajustarse para optimizar la seguridad y la eficacia. Los calendarios de dosificación, para administración intravenosa (iv) o no intravenosa, localizada o sistémica, o combinaciones de las mismas, variarán normalmente desde una dosis de una única embolada o infusión continua a múltiples administraciones al día (p. ej.,
cada 4 a 6 horas), o según lo indique el médico tratante y el estado del paciente. Las cantidades y frecuencias de dosificación pueden ser determinadas por los médicos que tratan al paciente.
El término "tratar" (o "tratando" o "tratamiento") se refiere a ralentizar, interrumpir, detener, aliviar, parar, reducir o invertir el avance o gravedad de un síntoma, trastorno, afección o enfermedad existente.
"Cantidad eficaz" significa la cantidad de un anticuerpo de la presente invención o composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de la presente invención que inducirá la respuesta biológica o médica o el efecto terapéutico deseado en un tejido, sistema, animal, mamífero o ser humano que busca el investigador, médico u otro facultativo. Una cantidad eficaz del anticuerpo puede variar según factores tales como la patología, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo para inducir una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad eficaz es también una en la que cualquier efecto tóxico o perjudicial del anticuerpo se ve superado por los efectos terapéuticamente beneficiosos.
Caracterización, generación, expresión y purificación de anticuerpos
La producción de anticuerpos usando la secuencia polinucleotídica de cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 14 y la secuencia polinucleotídica de cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 17 en células de mamíferos da lugar a la producción de dos especies relacionadas con el producto del anticuerpo: (a) un anticuerpo de longitud completa (denominado en lo sucesivo "anticuerpo A1") que tiene la secuencia de aminoácidos de cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 10 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de la SEQ ID NO: 11; y (b) una forma truncada de un solo aminoácido del anticuerpo (denominado en lo sucesivo "anticuerpo A2") resultante del recorte de la alanina n-terminal de la cadena ligera, teniendo el anticuerpo A2 la secuencia de aminoácidos de cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 10 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 13. Como se usa en el presente documento, "anticuerpo A1/2" se refiere al producto de anticuerpo que resulta del uso de la secuencia polinucleotídica de cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 17 e incluye una combinación de anticuerpo A1 (~6 %) y anticuerpo A2 (~94 %). El anticuerpo A1 se puede sintetizar sin cantidades significativas de anticuerpo A2 usando la secuencia polinucleotídica de cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 14 y la secuencia polinucleotídica de cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 15. El anticuerpo A2 se puede sintetizar sin cantidades significativas de anticuerpo A1 usando la secuencia polinucleotídica de cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 14 y la secuencia polinucleotídica de cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 16.
Los anticuerpos de la presente invención pueden generarse usando métodos conocidos, incluyendo, pero sin limitación, presentación en fagos. De manera adicional, los anticuerpos obtenidos como se ha descrito anteriormente pueden examinarse adicionalmente usando los ensayos descritos en el presente documento.
Los polipéptidos de las regiones variables de la cadena pesada y la cadena ligera y las secuencias completas de aminoácidos de la cadena pesada y la cadena ligera de los anticuerpos A1 y A2, y las secuencias de nucleótidos que los codifican, se enumeran en la sección titulada "Secuencias de aminoácidos y nucleótidos". Además, las SEQ ID No para la cadena ligera, cadena pesada, región variable de cadena ligera y región variable de cadena pesada de los anticuerpos A1, A2 y A1/2 se muestran en las tablas 1 y 2.
Tabla 1
Tabla 2
Los anticuerpos de la presente invención, incluyendo, pero sin limitación, los anticuerpos A1, A2 y A1/2 se pueden preparar y purificar esencialmente de la siguiente manera. Una célula hospedadora adecuada, tal como HEK 293 o
CHO, se puede transfectar de forma transitoria o estable con un sistema de expresión para secretar anticuerpos usando una relación de vector HC:LC predeterminada óptima o un sistema de vector único que codifica tanto HC como LC. Los medios aclarados, en los que se ha secretado el anticuerpo, puede purificarse usando cualquiera de las muchas técnicas usadas habitualmente. Por ejemplo, el medio se puede aplicar convenientemente a una columna MabSelect (GE Healthcare) o una columna KappaSelect (GE Healthcare), que se ha equilibrado con un tampón compatible, tal como solución salina tamponada con fosfato (pH 7,4). La columna se puede lavar para eliminar los componentes de unión inespecífica. El anticuerpo unido se puede eluir, por ejemplo, por gradiente de pH (tal como de tampón de Tris 20 mM pH 7 a tampón de citrato de sodio 10 mM pH 3,0, o de solución salina tamponada con fosfato pH 7,4 a tampón de glicina 100 mM pH 3,0). Las fracciones de anticuerpos pueden detectarse, tal como por absorbancia UV o SDS-PAGE, y, a continuación, se pueden agrupar. La purificación adicional es optativa, dependiendo del uso previsto. El anticuerpo puede concentrarse y/o esterilizarse por filtración usando técnicas habituales. Los agregados solubles y los multímeros pueden eliminarse de forma eficaz mediante técnicas habituales, incluida la exclusión por tamaño, la interacción hidrófoba, el intercambio iónico, la cromatografía multimodal o de hidroxiapatita. El producto puede congelarse inmediatamente a -70 °C o puede liofilizarse.
Como se usa en el presente documento, BMS20H4.9 se refiere a un anticuerpo que tiene la cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 18 y la cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 19, y se ha descrito anteriormente en el documento US7288638. Como se usa en el presente documento, PF83 se refiere a un anticuerpo que tiene la cadena pesada que se muestra en la SEQ ID NO: 20 y la cadena ligera que se muestra en la SEQ ID NO: 21, y se ha descrito anteriormente en el documento US8337850.
El anticuerpo A1/2 se une al CD137 humano
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para unirse al CD137 humano puede medirse mediante ELISA. Para medir la unión al CD137 humano, una placa de 96 pocillos (Nunc) se recubre con CD137-Fc humano (R&D Systems) durante una noche a 4 °C. Los pocillos se bloquean durante 2 h con tampón de bloqueo (PBS que contiene albúmina de suero bovino al 0,2 % y Tween-20 al 0,05 %). Los pocillos se lavan tres veces con PBS que contiene Tween-20 al 0,05 %. A continuación, se añade el anticuerpo A1/2 o IgG de control (100 microlitros) a diferentes concentraciones y se incuba a temperatura ambiente durante 1 h. Después del lavado, la placa se incuba con 100 microlitros de conjugado de F(ab')2-HRP anti-IgG humano de cabra (Jackson Immuno Research Laboratories) a temperatura ambiente durante 45 minutos. Las placas se lavan y después se incuban con 100 microlitros de 3,3',5,5'-tetra-metilbencidina. La absorbancia a 650 nm se lee en un lector de microplacas SpectraMax®. La concentración eficaz semimáxima (CE50) se calcula usando el programa informático GraphPad Prism 7.
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, el anticuerpo A1/2 se une al CD137 humano con una CE50 de 0,027 nM.
El anticuerpo A1/2 se une al macaco cangrejero CD137
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para unirse al CD137 de macaco cangrejero en superficie celular se puede medir usando un ensayo de citometría de flujo. Las células estables que expresan CD137 de macaco cangrejero se generan transfectando el ADN del plásmido del receptor Cyno-CD137 en células 293 humanas (ATCC) utilizando el reactivo Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen™) según el protocolo del fabricante. Las células estables se seleccionan usando 0,5 microgramos/ml de puromicina en medio de Eagle modificado por Dulbecoo que contiene suero bovino fetal al 10 % y GlutaMAX™ al 1 %. Para la citometría de flujo, las células adherentes confluentes se separan usando el tampón de disociación de células Gibco® (Life Technologies), se bloquean en tampón FACS (solución salina tamponada con fosfato que contiene suero bovino fetal al 3 %) durante 1 hora a 4 °C y después se transfieren a una placa de fondo redondo de 96 pocillos a una densidad de 1 x 105 células/pocillo. Se añaden anticuerpo A1/2, BMS20H4.9, PF83 o IgG1 humana de control (diluida en tampón FACS 1:4 a partir de 0,5 microgramos/ml) (100 microlitros) y las células se tiñen durante 1 h a 4 °C.
Después de lavar en tampón FACS, se añade anticuerpo secundario de cabra anti-IgG humana conjugado con R-ficoeritrina, anticuerpo específico de fragmento F(ab')2 (Jackson ImmunoResearch Laboratories) a una dilución 1:200 y las células se incuban a 4 °C durante 30 minutos. Las células se lavan y se realiza tinción de células vivas/muertas utilizando el equipo de tinción de células muertas en rojo lejano fijable LIVE/DEAD® (Life Technologies) según el protocolo del fabricante. Las células se lavan en tampón FACs y se procesan en un sistema de detección IntelliCyt HTFC®. Los datos de citometría de flujo se analizan utilizando el programa informático FlowJo®. La relación de intensidad de fluorescencia media (IFM) se calcula como (IFM del anticuerpo experimental)/(IFM de la IgG de control).
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, el anticuerpo A1/2 a una concentración de 0,5 microgramos/ml presenta una relación de IFM superior de 153 en comparación con BMS20H4.9 (relación de IFM de 0,94) y PF83 (relación de IFM de 37).
La unión del anticuerpo A1/2 a las células humanas aumenta la expresión de CD137
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para modular los niveles en la superficie celular
de CD137 humano puede determinarse de la siguiente manera. Las células estables que expresan CD137 humano se generan transfectando el ADN del plásmido de CD137 humano en células 293 humanas (ATCC) utilizando el reactivo Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen™) según el protocolo del fabricante. Las células estables se seleccionan usando 0,5 microgramos/ml de puromicina en medio de Eagle modificado por Dulbecoo que contiene suero bovino fetal al 10 % y GlutaMAX™ al 1 %. Los anticuerpos para CD137 a partir de 300 nanomolar en medios se incuban con las células a 37 °C durante 24 horas. Las células se lavan con p Bs , se desprenden usando tampón de disociación celular Gibco® y se tiñen con los mismos anticuerpos para CD137 en tampón frío (PBS 1x, BSA al 1 %, azida sódica al 0,09 %) durante 2 h. Después del lavado, las células se tiñen con anticuerpo de detección anti-IgG humano de cabra conjugado con Alexa Fluor 647 (Jackson ImmunoResearch Laboratories) durante 30 minutos. Las células se lavan y se marcan diferencialmente con Zombie Green Live/Dead (BioLegend) según el protocolo del fabricante. Todas las células se procesan en un Fortessa X-20. Se realiza análisis con el programa informático FlowJo® para generar la mediana de la intensidad de fluorescencia (IFM) de Alexa Fluor 647 y se calibra con una curva patrón de moléculas de fluorocromo soluble equivalente (MESF) de Alexa Fluor 647 (Bangs Laboratories). Los valores de MESF se normalizan con respecto a controles teñidos sin tratar (100 %) y controles teñidos con isotipo sin tratar (0 %).
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, El anticuerpo A1/2 a una concentración de 300 nanomolar induce un aumento (21 %) en los niveles de CD137 en comparación con PF83 (12 %), mientras que BMS20H4.9 reduce el CD137 en la superficie celular en un 56 %. Ensayo indicador de NF-kappaB luciferasa para la actividad del anticuerpo A1/2
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para activar NF-kappaB puede medirse de la siguiente manera. Se generan células indicadoras de NF-kappaB luciferasa doblemente estables/CD137-293 humanas mediante la transfección de ADN del plásmido pGL4.32[luc2P/NF-kappaB-RE/Hygro] (Promega) en células 293 que expresan CD137 humano utilizando el reactivo Lipofectamine™ 2000 (Life Technologies) según el protocolo del fabricante. Las células estables se seleccionan usando 100 microgramos/ml de higromicina y 0,5 microgramos/ml de puromicina en medio de Eagle modificado por Dulbecoo que contiene suero bovino fetal al 10 % y GlutaMAX™ al 1 %. Las células se siembran en una placa de 384 pocillos a una densidad de 5 x 103células/pocillo utilizando el dispensador de reactivos Thermo MultiDrop Combi (Thermo Fisher Scientific) y se cultivan durante una noche a 37 °C. El anticuerpo A1/2, BMS20H4.9, PF83 o IgG1 humana de control se diluyen en solución salina tamponada con fosfato (PBS) utilizando Hamilton STAR™ (Hamilton Company) en diluciones dobles de 10 puntos dentro de la placa a partir de 9 micromolar o 1,33 micromolar y se transfieren a las células. A continuación, las células se incuban con los anticuerpos durante 5,5 h a 37 °C en CO2 al 5 % y después se procesan mediante el sistema de ensayo de luciferasa ONE-Glo™ (Promega™) y el dispensador de reactivos Thermo™ Scientifi MultiDrop™ Combi. La luminiscencia se mide usando un lector de microplacas SpectraMax® (Molecular Devices) y el análisis de datos se realiza usando un Genedata Screener® (Genedata). Los datos se normalizan de la siguiente manera: % de actividad = [(Valor del pocillo-Mediana de control mínimo)/(Mediana de control máximo-Mediana de control mínimo)] x 100 %.
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, El anticuerpo A1/2 presenta una actividad máxima del 78 % que es superior a PF83 (actividad máxima del 12 %) e inferior a BMS20H4.9 (actividad máxima del 115 %).
El anticuerpo Al/2 promueve la producción de interferón gamma procedente de linfocitos T
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para promover la producción de interferóngamma (IFN-gamma) procedente de linfocitos T puede medirse de la siguiente manera. Las células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) se aíslan de sangre completa o leucopacs mediante centrifugación en gradiente de densidad de Ficoll (Ficoll® Paque PLUS; GE Healthcare) y se cultivan en medio del Roswell Park Memorial Institute (RPMI) (Life Technologies) con suero de ternera fetal al 10 % (HyClone). El clon del anticuerpo anti-CD3 humano HIT3a (BD Biosciences) en PBS se aplica sobre una placa de 96 pocillos (intervalo habitual: 2 a 15 nanogramos/pocillo) y se incuba durante una noche a 4 °C. Después de aspirar, los pocillos se enjuagan con PBS y se transfieren PBMC humanas a una placa de 96 pocillos a una densidad de 1,5 x 105 células/pocillo. El anticuerpo A1/2, BMS20H4.9, PF83 o la IgG1 humana de control se preparan diluyendo 1:4 en RPMI que contiene suero bovino fetal al 10 % a una concentración inicial de 80 microgramos/ml. El clon de anticuerpo anti-CD28 humano CD28.2 (BioLegend) se añade a la placa (intervalo habitual de 0,2 a 2 microgramos/ml) seguido del anticuerpo de prueba y se incuba durante 96 h a 37 °C en una estufa de CO2 al 5 %. Se recogen los sobrenadantes y se miden los niveles de IFN-gamma humano usando un equipo de ELISA DuoSet de IFN-gamma humano de R&D Systems®. En resumen, el anticuerpo de captura de IFN-gamma se aplica sobre la placa (4 microgramos/ml) durante una noche a temperatura ambiente. Después de aspirar y lavar, la placa se bloquea durante 1 h a temperatura ambiente. Se añaden sobrenadantes de muestras y el patrón de IFN-gamma y se incuban durante 2 h a temperatura ambiente. Después del lavado, se añaden 100 microlitros de anticuerpo de detección de IFN-gamma, se incuban durante 2 h a temperatura ambiente y se lavan. Se añade estreptavidina-HRP (100 microlitros de dilución 1:40) durante 20 minutos a temperatura ambiente. Después del lavado, las placas se revelan añadiendo 100 microlitros de solución de sustrato durante 20 minutos seguido de 50 microlitros de solución de parada y la señal se mide a 450 nm con un lector de microplacas SpectraMax®. El análisis de datos se realiza utilizando el programa informático SoftMax Pro y GraphPad Prism (GraphPad Software). El factor de inducción se calcula como IFN-gamma medio de muestra (pg/ml)/IFN-gamma medio de hIgG1 de control (pg/ml).
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, el anticuerpo A1/2 mejora la activación subóptima de las PBMC humanas mediante la coestimulación de CD3/CD28 medida por la producción de citocinas de IFN-gamma. En este sentido, el tratamiento con el anticuerpo A1/2 a 5 microgramos/ml da lugar a un aumento de 3,8 veces en la producción de IFN-gamma que fue mayor que PF83 (aumento de 1,6 veces) e inferior a BMS20H4.9 (aumento de 9,4 veces).
Ensayo de unión en fase sólida del anticuerpo A1/2
La unión del anticuerpo A1/2 al C1q humano se puede medir usando un ensayo ELISA. El anticuerpo A1/2 y los anticuerpos de control (IgG1 de control negativo) se diluyen en serie en PBS y se aplican sobre una placa de ELISA durante una noche a 4 °C. Se añade C1q humano en tampón de caseína a una concentración de 10 miligramos/ml y se incuba durante 2 horas. El C1q humano se detecta incubando las placas con C1q-HRP antihumano (AbD Serotec Inc., dilución 1:200) durante 1 h y la placa se revela usando TMB (k Pl , Inc.). La absorbancia se mide a 450 nm con el lector multimodo híbrido Synergy Neo2 (BioTek®).
La unión del anticuerpo A1/2 a FcyRI, FcYRIIa(H), FcyRIIb, FcYRIIIa(F) y FcYRIIIa(V) se determina usando un ensayo MSD (Meso Scale Diagnostics). En resumen, los receptores Fcy se aplican sobre una placa Meso Scale durante una noche y los anticuerpos de prueba diluidos en serie se añaden a la placa y se incuban durante 2 h. El anticuerpo A1/2 se detecta utilizando un anticuerpo secundario antihumano (Meso Scale Diagnostics, D20TF-6) y la placa se revela con tampón de lectura T (Meso Scale Diagnostics, R92TC-1). La luminiscencia se mide en un SECTOR Imager 2400 (Meso Scale Diagnostics) y los datos se analizan usando el programa informático GraphPad Prism 7.0.
Tabla 3
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, El anticuerpo A1/2 no se unió a FcyRI, FcyRIIa, FcyRIIb, FcYRIIIa, FcYRIIIa o C1q (como se muestra en la tabla 3 anterior). En otros experimentos, el anticuerpo A1/2 no mostró una función efectora detectable en los ensayos de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos y citotoxicidad dependiente del complemento basados en células.
Eficacia antitumoral del anticuerpo A1/2 en un modelo tumoral establecido
La línea de células tumorales de cáncer de pulmón no microcítico (ATCC) humano HCC827 se mantiene en sus respectivos medios y se recoge para la implantación. Se inyectan células tumorales (1 x 107 células por ratón) por vía subcutánea en el flanco derecho de ratonas NOD/SCID Gamma (NSG) a las 7 semanas de edad (Jackson Laboratories). Cuando los tumores alcanzan un tamaño de aproximadamente 350 mm3 a 450 mm3, los ratones se aleatorizan en grupos de 5 a 8. Se generan linfocitos T humanos expandidos mediante la estimulación de PBMC humanas sin exposición previa con perlas Dynabeads® Human T-expander CD3/CD28 (Thermo Fisher Scientific) durante 9 a 10 días y se almacenan. Las PBMC humanas (NY Blood Center) se preparan mediante centrifugación sobre Ficoll® Paque PLUS en tubos SepMate (STEMCELL Technologies) y se almacenan. Los linfocitos T expandidos se descongelan y se inyectan 1 x 106 células en los ratones. Como control, se implantan células tumorales solas sin linfocitos T o PBMC en algunos ratones. El tratamiento comienza el día 0 o el día 1. Los grupos de tratamiento incluyen IgG de control, BMS20H4.9, PF83 y anticuerpo A1/2. Los animales reciben dosis mediante inyección intraperitoneal de 10 mg/kg de anticuerpo una vez a la semana durante 4 semanas. El peso corporal (PC) se registra dos veces a la semana y el porcentaje de cambio en PC se calcula utilizando la fórmula: (PC el día de observación - PC el día inicial)/PC el día inicial x 100 %. Los volúmenes tumorales se miden dos veces a la semana utilizando calibradores electrónicos. El volumen tumoral se calcula utilizando la fórmula: Volumen tumoral (mm3) = n/6 * Longitud * Anchura2. El %T/C se calcula utilizando la fórmula 100 x AT/AC si AT > 0 de los valores medios geométricos. AT = volumen tumoral medio del grupo tratado con fármaco el día de observación del estudio - volumen tumoral medio del grupo tratado con fármaco el día inicial de la dosificación; AC = volumen tumoral medio del grupo de control el día de observación del estudio - volumen tumoral medio del grupo de control el día inicial de la dosificación. Se realiza análisis estadístico de datos de volumen tumoral mediante análisis bidireccional de la varianza de medidas repetidas y tratamiento utilizando los procedimientos MIXTOS en el programa informático SAS (versión 9.2).
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, los ratones tratados con el anticuerpo A1/2 demostraron una inhibición significativa del crecimiento tumoral (% T/C = 30,6; P < 0,001) en contraste con los ratones tratados con PF83 (% T/C = 81,2) y BMS20H4.9 (% T/C = 96,9) que no mostraron inhibición.
Resultados de cinética/afinidad para el anticuerpo A1, el anticuerpo A2 y el anticuerpo A1/2
Se puede utilizar un instrumento Biacore T200 para medir la cinética de la unión de CD137-Fc humano inmovilizado al anticuerpo A1, al anticuerpo A2 y al anticuerpo A1/2. La proteína CD137-Fc extracelular humana recombinante (R&D Systems) se inmoviliza covalentemente en un chip sensor CM5 a través del acoplamiento de amina (GE Healthcare). Se realizan pruebas de anticuerpos para CD137 a un caudal de 30 microlitros/min en tampón HBS-EP+. Las muestras se inyectan a diversas concentraciones y se obtienen mediciones a 25 °C. La superficie se regenera después de cada inyección de muestra con glicina-HCl 10 milimolar a pH 2,0 a un caudal de 30 microlitros/min durante 24 segundos y después se estabiliza con tampón durante 10 segundos. Se evalúan sensogramas de concentraciones que oscilan entre 0,123 nanomolar y 30 nanomolar utilizando el programa informático Biacore T200. El cálculo de las constantes de velocidad de asociación (Ka) y disociación (Kd) se basa en un ajuste del modelo de unión de Langmuir 1:1. La constante de disociación en equilibrio (KD) o la constante de afinidad de unión se calcula a partir de la relación de las constantes de velocidad cinética Kd/Ka.
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, el anticuerpo A1, el anticuerpo A2 y el anticuerpo A1/2 se unen al CD137 humano con las constantes de cinética y afinidad ilustradas en la tabla 4.
Tabla 4
Ensayo indicador de NF-kappaB luciferasa que compara el anticuerpo A1, el anticuerpo A2 y el anticuerpo Al/2
La capacidad de los anticuerpos descritos en el presente documento para activar NF-kappaB se puede medir como se ha descrito anteriormente en el presente documento con la modificación de que las diluciones de anticuerpos se preparan en PBS y se realizan diluciones dobles de 10 puntos dentro de la placa a partir de 9 micromolar.
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, el anticuerpo A1/2 (actividad máxima del 70,5 %) mostró una actividad máxima similar en comparación con el anticuerpo A1 (actividad máxima del 63,4 %) y el anticuerpo A2 (actividad máxima del 72,3 %).
El anticuerpo A1 y el anticuerpo A2 promueven la producción de interferón gamma procedente de linfocitos T
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para promover la producción de interferóngamma (IFN-gamma) procedente de linfocitos T se puede medir como se ha descrito anteriormente en el presente documento. En experimentos realizados esencialmente como se describe en el presente documento, el anticuerpo A1, el anticuerpo A2 y el anticuerpo A1/2 mejoran la activación subóptima de las PBMC humanas mediante la coestimulación de CD3/CD28, medida por la producción de citocinas IFN-gamma. En este sentido, el tratamiento con el anticuerpo A1/2 a 5 microgramos/ml da lugar a un aumento de 3,1 veces en la producción de IFN-gamma que fue similar al anticuerpo A1 (aumento de 3,5 veces) y al anticuerpo A2 (aumento de 3,5 veces).
Eficacia antitumoral del anticuerpo A1 y el anticuerpo A2 en un modelo tumoral establecido
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para inhibir el crecimiento tumoral en ratones se puede medir como se ha descrito anteriormente en el presente documento.
En los experimentos realizados como se ha descrito en esencia anteriormente, el anticuerpo A1, el anticuerpo A2 y el anticuerpo A1/2 inhiben el crecimiento tumoral en el modelo tumoral establecido HCC827. El tratamiento con el anticuerpo A1/2 (% T/C = 47,1 %; P < 0,001) muestra una reducción similar en el crecimiento tumoral que el anticuerpo A1 (% T/C = 56,0 %; P < 0,001) y el anticuerpo A2 (% T/C = 48,7 %; P < 0,001).
Epítopo del anticuerpo A1 determinado mediante radiocristalografía
El anticuerpo A1-Fab se purifica a partir de un sobrenadante de células 293HEK usando una matriz de afinidad CaptureSelect IgG-CH1 de 12 ml. Se utilizan SDS-PAGE y cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) analítica para evaluar la pureza y la calidad del anticuerpo A1-Fab purificado. Se intercambia el tampón del material eluido de esta matriz con solución salina tamponada con Tris IX (TBS). El hCD137* (*(aminoácidos 22-161 de CD137 humano, AC121S)-AAA-6His) se purifica a partir de un sobrenadante de 293HEK en tres etapas que utilizan columnas Ni Sepharose® Excel, columnas Ni-NTA y columnas SEC. En resumen, se cargan dos litros de sobrenadante directamente sin ningún cambio de tampón en una columna Ni Sepharose Excel. Se intercambia el tampón del eluyente de esta etapa con PBS y se purifica adicionalmente usando una columna de flujo por gravedad Ni-NTA. El eluyente de esta etapa se purifica adicionalmente y el tampón se intercambia con TBS IX usando una columna SEC preparatoria. El flujo de la primera etapa de Ni Sepharose Excel contiene cantidades significativas de hCD137*. A continuación, se vuelve a cargar en una columna Ni Sepharose Excel seguida de las columnas Ni-NTA y SEC preparatoria. Se usa SDS-PAGE para agrupar las fracciones de hCD137* en función de su pureza. La concentración
de hCD137* es de 14,5 miligramos/ml y la del anticuerpo A1-Fab es de 7,5 miligramos/ml.
Los complejos de anticuerpo A1-Fab:CD137* se combinan en una relación molar de 1:1 y después se someten a una columna de filtración en gel, preequilibrada en Tris 20 milimolar pH 8,0, cloruro de sodio 100 milimolar. El complejo resultante se concentra a 12,5 miligramos/ml. Después de la filtración, el complejo anticuerpo A1-Fab:CD137 se establece en una relación de 1:1 con condiciones de detección de cristal de matriz escasa en placas de gotas en reposo usando un manipulador de líquidos Phoenix, tanto a 21 °C como a 8 °C. Crecen cristales grandes, en forma de prisma, en una sola condición a los 4 días en citrato trisódico 1 molar pH 6,5 a 21 °C. Los cristales se recogen y crioprotegen en glicerol al 20 % y en condiciones de depósito, se montan y se ultracongelan en nitrógeno líquido, usando, a continuación, una fuente de fotones avanzada, laboratorio nacional de Argonne, las muestras se analizan por radiografía y se recopilan los datos. Los datos del anticuerpo A1-Fab/hCD137* se procesan a 2,4 A mediante el conjunto de programas CCP4 (Winn, M.D. et al. Acta. Cryst. 2011: D67, 235-242). El cristal pertenece al grupo espacial P3121, con parámetros de celda a = b = 124,9 A, b = 112,7 A, a = p = 90° y y = 120°. La estructura se determina por reemplazo molecular con el programa Phaser (McCoy, A.J. et al. J. Appl. Cryst. 2007 40: 658-674) usando una estructura Fab interna como modelo de búsqueda. La solución de reemplazo molecular para el Fab se refina usando Refmac (Winn, M.D. et al. Acta. Cryst. 2011: D67, 235-242; Murshudov, G.N. Act. Cryst. 2011: D67, 355-367) y Buster (Bricogne, G. et al. 2016; Buster versión 2.11.6. Cambridge, Reino Unido: Global Phasing Let.). Los mapas del refinamiento se usan para construir manualmente el modelo para CD137 usando el programa COOT (Emsley, P. Acta Cryst. 2010: D66, 486-501). Los factores R refinados son R = 17,8 %, Rlibre = 20,5 %.
En experimentos realizados esencialmente como se describe en este ensayo, el complejo anticuerpo A1-Fab:hCD137* se resuelve y el epítopo/parátopo se ilustra en la tabla 5 a continuación. La tabla 5 enumera los residuos en el anticuerpo A1-Fab que están a una distancia de 6 A de los residuos enumerados en hCD137*. La cadena pesada del anticuerpo A1-Fab tiene 57 contactos (punto de corte de 6 A) con hCD137* mientras que la cadena ligera tiene 18 contactos (punto de corte de 6 A).
Tabla 5
El anticuerpo A1/2 bloquea completamente las interacciones de CD137/ligando de CD137
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para bloquear las interacciones de CD137 humano y ligando de CD137 (en lo sucesivo en el presente documento, CD137L) puede medirse con un ensayo ELISA. En primer lugar, se utiliza un ensayo ELISA para cuantificar la CE50 de unión de hCD137** (aminoácidos 22-164 de Cd 137 humano, AC121S)-AAA-FLAG a hCD137L* y el anticuerpo A1/2, BMS20H4.9 y PF83. Los pocillos de una placa ELISA Immulon® 4HBX de 96 pocillos se recubren durante una noche con 50 nanogramos de hCD137** en 100 microlitros de PBS, pH 7,2 con agitación suave a 4 °C. Después de bloquear con BSA al 5 % en PBST y lavar, se añaden una serie de diluciones quíntuples (392 nanomlar-0,005 nanomolar) de CD137L humano recombinante marcado con His (denominado en lo sucesivo en el presente documento hCD137L*) (R&D Systems), (53-0,00068 nanomolar) de BMS20H4.9, (107-0,0014 nanomolar) de PF83 o (53-0,00068 nanomolar) del anticuerpo A1/2 con cada dilución realizada por duplicado y se incuban con agitación suave durante 1 h a temperatura ambiente. A continuación,
se lavan los pocilios tratados con los anticuerpos anti-CD137 y se añade una dilución 1:10000 de anticuerpo de cabra anti-Fab conjugado con HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories) y se incuba a temperatura ambiente siguiendo el protocolo convencional. A continuación, se lavan los pocillos tratados con hCD137L* y se añade una dilución 1:5000 de anticuerpo de ratón anti-His conjugado con HRP (Sigma-Aldrich®) y las placas se incuban a temperatura ambiente siguiendo el protocolo convencional. El sustrato cromogénico de TMB peroxidasa y la solución de parada se usan según las instrucciones del fabricante para la visualización y detección de señales. Las lecturas de absorbancia se trazan en el programa informático GraphPad Prism versión 6. Los valores de CE50 se calculan mediante el análisis de ajuste de la curva de regresión no lineal de la función One Site - Specific Binding del programa informático. En los experimentos realizados como se describe, las afinidades de unión (CE50) a hCD137** se determinan como 0,6 nanomolar para hCD137L, 1,4 nanomolar para el anticuerpo 1/2, 0,43 nanomolar para BMS20H4.9 y más de 10 nanomolar para PF83.
La capacidad de hCD137L* para competir con BMS20H4.9, PF83 y el anticuerpo A1/2 por la unión a hCD137** se puede determinar de la siguiente manera. Una placa ELISA Immulon 4HBX de 96 pocillos se recubre durante una noche con 50 nanogramos de hCD137** en 100 microlitros de PBS, pH 7,2 con agitación suave a 4 °C. Después del bloqueo (con BSA al 5 % en PBST) y lavado, se mezcla una dilución quíntuple (de 196 a 0,0025 nanomolar) de hCD137L* con cantidades de saturación del anticuerpo designado: Anticuerpo A1/2 (200 nanogramos/pocillo), BMS20H4.9 (3 nanogramos/pocillo) o PF83 (1000 nanogramos/pocillo). A continuación, las mezclas se añaden a los pocillos por duplicado y se incuban con agitación suave a temperatura ambiente durante 1 hora. Después del lavado, la placa se incuba con anticuerpo de cabra anti-Fab conjugado con HRP (diluciones 1:1000, Jackson ImmunoResearch Laboratories) a temperatura ambiente siguiendo el protocolo convencional. El sustrato cromogénico de TMB peroxidasa y la solución de parada se usan según las instrucciones del fabricante para la visualización y detección de señales.
El porcentaje de mAb que permanece unido a CD137 se representa gráficamente y los valores de CI50 se calculan mediante análisis de ajuste de curva de regresión no lineal utilizando el programa informático GraphPad Prism.
En experimentos realizados esencialmente como se ha descrito anteriormente, hCD137L* bloquea completamente la unión del anticuerpo A1/2 a hCD137** con una CI50 de 0,401 nanomolar. hCD137L* también bloquea la unión de PF83 a hCD137** con una CI50 de 1,037 nanomolar (el 30 % de la señal de unión permanece en la superficie). No hay un efecto medible de hCD137L* sobre la unión de BMS20H4.9 a hCD137**.
El anticuerpo A1/2 se une al CD137 humano en residuos de aminoácidos específicos que son distintos de BMS20H4.9 y PF83
Se introducen mutaciones puntuales de CD137 humano para determinar los residuos de aminoácidos donde el anticuerpo A1/2, BMS20H4.9 y PF83 se unen a CD137 humano. Los mutantes de CD137-Fc se generan utilizando el protocolo convencional de un equipo de mutagénesis dirigida disponible en el mercado (equipo Quickchange II, Qiagen). Las proteínas CD137-Fc de tipo silvestre y mutantes se expresan y purifican. Todos los mutantes indicados aquí tienen un perfil de exclusión por tamaño similar al del CD137-Fc de tipo silvestre (es decir, las mutaciones introducidas no ponen en riesgo la integridad estructural de la proteína). Para determinar la influencia de una mutación en la unión de los anticuerpos, se utiliza un ensayo ELISA puntual contra CD137-Fc de tipo silvestre y mutantes. Los pocillos de una placa de ELISA Immulon 4HBX de 96 pocillos se recubren durante una noche con 50 nanogramos de CD137-ECD-C121S-Fc humano o sus mutantes en 100 microlitros de PBS, pH 7,2 con agitación suave a 4 °C. Después del bloqueo (con BSA al 5 % en PBST) y lavado, se añade una serie de ocho puntos de dilución quíntuple (100 - 0,00128 nanomolar) del anticuerpo designado y se incuba con agitación suave a temperatura ambiente durante 1 h. Los pocillos se lavan y se añade un anticuerpo secundario conjugado con HRP (dilución 1:10000 de anticuerpo de cabra anti-Fab conjugado con HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories) y se incuba a temperatura ambiente siguiendo el protocolo convencional. El sustrato cromogénico de TMB peroxidasa y la solución de parada se usan según las instrucciones del fabricante para la visualización y detección de señales. Las lecturas de absorbancia para cada punto de concentración se normalizan por la absorbancia de la interacción de tipo silvestre. Para cada mutante, se determina la media de la relación normalizada para las ocho concentraciones.
Las mutaciones se introdujeron individualmente en CD137 humano (SEQ ID NO: 1) en las posiciones: P27, N42, D63, Q67, A97, G98, S100, M101, Q104, K114, K115, R130, 1132, R134. La tabla 6 demuestra los perfiles de unión de BMS20H4.9 y el anticuerpo A1/2 para los mutantes mostrados de CD137 humano. La tabla 7 demuestra los perfiles de unión de PF83 y el anticuerpo A1/2 para los mutantes mostrados de CD137 humano. Colectivamente, Las tablas 6 y 7 demuestran que el anticuerpo A1/2 se une a distintos residuos de aminoácidos en CD137 humano en comparación con BMS20H4.9 y PF-83.
Tabla 6
continuación
Tabla 7
Expresión del gen de CD137 en tumores humanos
El perfil de expresión del gen de CD137 en infiltrados inmunitarios de tumores humanos se puede analizar utilizando la base de datos The Cancer Genome Atlas (TCGA) y metodologías computacionales. En resumen, se generan relaciones de expresión de CD137/CD3e a partir de los resultados de secuenciación de ARN de TCGA seleccionados por Omicsoft. Para comparar las relaciones de expresión de CD137/CD3e en muestras tumorales y normales adyacentes del mismo tejido, se realiza una prueba de t y se calcula la d de Cohen para cada tipo de tumor. Los tipos de tumores que tienen un valor de P < 0,05 en la prueba de t de la relación de expresión de tumor frente a normal y un gran tamaño del efecto de la d de Cohen > 0,8 son estadísticamente significativos. La diferencia en la relación de expresión de CD137/CD3e en tejido tumoral frente a tejido normal se calcula como el factor de cambio de logarítmico (logFC).
En los experimentos realizados como se describe, se observa un aumento de la relación tumoral CD137/CD3 en diferentes tipos de cáncer, incluyendo, pero sin limitación, de mama, de colon, de endometrio, de vejiga y de cabeza y cuello (tabla 8). Los tumores enriquecidos con linfocitos CD137+ son candidatos para la terapia con anticuerpos para CD137 usando el anticuerpo A1, el anticuerpo A2 o el anticuerpo A1/2.
Tabla 8
El anticuerpo Al/2 aumenta la infiltración tumoral de linfocitos T CD3+ in vivo
La capacidad de los anticuerpos desvelados en el presente documento para alterar la infiltración de tumores de linfocitos T en modelos de ratones humanizados se puede determinar mediante inmunohistoquímica (IHC). En resumen, se implantan células de cáncer de pulmón no microcítico humano L55 (L55-CBG-2A-GFP, Universidad de Pensilvania) en ratones NSG. Cuando los tumores alcanzan un tamaño de 250-300 mm3, se inyectan PBMC humanas (8 x 106 células) y los anticuerpos se dosifican a 10 miligramos/kg una vez por semana durante 4 semanas. Al final del estudio, los tumores se recogen en formalina, se procesan en parafina, se seccionan y se tiñen con un anticuerpo anti-CD3 (Cell Signaling Technology). Las imágenes se adquieren con un aumento 200X usando un Aperio XT ScanScope® y se analizan de manera semicuantitativa. El porcentaje de células positivas para CD3 con respecto a las células tumorales totales se calcula usando el programa informático Aperio ImageScope. Los resultados se comparan mediante ANOVA de una vía, seguido del método de Holm-Sidak para comparaciones múltiples (Sigma Plot 12.5, Systat Software).
En los experimentos realizados como se ha descrito anteriormente, el anticuerpo A1/2 induce la infiltración tumoral de linfocitos T CD3+ en tumores establecidos L55. El porcentaje de linfocitos T CD3+ en respuesta al anticuerpo A1/2 (60 %) es mayor en comparación con los tratamientos con BMS20H4.9 (18 %) o IgG humana (27 %). Cualquier referencia a un método de tratamiento practicado en el cuerpo humano o animal debe interpretarse como el anticuerpo de la presente invención, y las composiciones que lo comprenden, para su uso en tales tratamientos.
Secuencias de aminoácidos y nucleótidos
SEQ ID NO: 1 (CD137 humano)
MGNSC YNIV ATLLL VLNFERTRSLQDPC SNCP AGTFCDNNRNQIC SPCPPNSF S S A
GGQRTCDICRQCKGVFRTRKEC SSTSNAECDCTPGFHCLGAGC SMCEQDCKQGQ
ELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPAD
LSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLY
IFKQPFMRP VQTTQEEDGC SCRFPEEEEGGCEL SEQ ID NO: 2 (HCDR1) KASGGTFSSYAIS
SEQ ID NO: 3 (HCDR2) GIIPIFGTANYAQKFQG
SEQ ID NO: 4 (HCDR3) ARDLMTTAPGTYFDL
SEQ ID NO: 5 (LCDR1) QASQDIGNSLG
SEQ ID NO: 6 (LCDR2) FDASDLET
SEQ ID NO: 7 (LCDR3) QQGNSFPLT
SEQ ID NO: 8 (HCVR)
QVQLVQSGAEVKKPGS SVKVSCKASGGTF S S YAISWVRQ APGQGLEWMGGIIPIF
GTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDLMTTAPGTYF
DLWGRGTLVTV
SEQ ID NO: 9 (LCVR del anticuerpo A1)
AIRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFDASDLET
GVP SRF S GS GS GTDF SLTIS SLQPEDF AT Y Y C QQGN SFPLTF GQGTRLEIK SEQ ID NO: 10 (HC)
QVQLVQSGAEYKKPGSSVKYSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDLMTTAPGTYF DLW GRGTL VT V S S A S TKGP S VFPL AP S SK S T S GGT AALGCL VKD YFPEP VT V S WN SGALTSGVHTFPAYLQSSGLYSLSSVVTYPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKR VEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALP S SIEKTISKAKGQPREPQ VYTLPP SREEMTKNQ VSLTCL VKGF YP SDIA VEWESNGQPENNYKTTPP VLD SDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVF SC S VY1HEAL HNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 11 (LC del anticuerpo A1)
AIRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFDASDLET GVP SRF SGSGSGTDF SLTIS SLQPEDF AT Y YCQQGN SFPLTF GQGTRLEIKRT VAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KD S T Y SL S S TLTL SK AD YEKHK V Y ACE VTHQ GLS SP VTK SFNRGEC
SEQ ID NO: 12 (LCVR del anticuerpo A2)
rRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFDASDLETG VP SRF SGS GSGTDF SLTIS SLQPEDF ATYYC QQGNSFPLTF GQGTRLEIK
SEQ ID NO: 13 (LC del anticuerpo A2)
IRMTQSPPSLSASVGDRVTITCQASQDIGNSLGWYQQKPGKAPKLVIFDASDLETG
VPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFGQGTRLEIKRTVAAPS
VFIFPP SDEQLK S GT A S V V CLLNNF YPRE AK V Q WK VDNALQ S GN S QE S VTEQD S
KD STYSLSSTLTL SK AD YEKHK V Y ACE VTHQ GLS SP VTK SFNRGEC
SEQ ID NO: 14 (ADN de HC)
C AGGT GC AGCTGGT GC AGT C T GGGGC T G AGGT GA AGA AGC C T GGGTCC T C GG TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCC CTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGAT TACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGA TCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCTGATGACTACGGCCC CTGGGACGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCA GCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCAC CTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAA CCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCACTGACCAGCGGCGTGCACACCT TCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACA
AGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAA AACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAGGGGGCACCGTCA GTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAG TTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGC GGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCT GC ACC AAGACTGGCTGAATGGC AAGGAGT AC AAGT GC AAGGTCTCC A AC AAA GCCCTCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCC GAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAA CCAAGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCG TGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTC CCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGC AGGT GGC AGC AGGGGAACGTCTTCTC AT GCTCCGTGAT GC AT GAGG CTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATG A
SEQ ID NO: 15 (ADN de LC del anticuerpo A1)
ATGAGGCTGCTGCCTCTGCTGGCCCTCCTGGCCCTGTGGGGCCCAGACCCAGC CAGAGCCGCCATCCGGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTGGCAACTCTTT AGGTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCGTGATCTTCGAT GCATCAGATCTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG GCACAGATTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATTTTGCAACT TACTATTGTCAACAGGGTAACAGTTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACG ACTGGAGATTAAACGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATC CC AGAGAGGCC AAAGT AC AGT GGAAGGT GGAT AACGCCCTCC AATCGGGT AA CTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTC AGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTAC GCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCA AC AGGGGAGAGT GTT AG
SEQ ID NO: 16 (ADN de LC del anticuerpo A2)
ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGCTC CACCGGCATCCGGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAG ACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTGGCAACTCTTTAGG TTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCGTGATCTTCGATGCA T C AGATCTGGA A AC AGGGGTCC C AT C A AGGTT C AGT GGC AGT GGAT C T GGC A CAGATTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATTTTGCAACTTAC TATTGTCAACAGGGTAACAGTTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACT GGAGATTAAACGAACTGTGGCCGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTG ATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC TATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGAT AACGCCCTCC AATCGG GTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGT
CTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGC TTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO: 17 (ADN de LC del anticuerpo A1/2)
ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGCTC CACCGGCGCCATCCGGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTAG GAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTGGCAACTCTTT AGGTTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCGTGATCTTCGAT GCATCAGATCTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTG GCACAGATTTCAGTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATTTTGCAACT TACTATTGTCAACAGGGTAACAGTTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACG ACTGGAGATTAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAAC TTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAAT CGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCT ACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACA AAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAA GAGC TT C A AC AGGGGAGAGT GTT AG
SEQ ID NO: 18 (HC de BMS20H4.9)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQSPEKGLEWIGEINHG GY VT YNP SLE SR VTIS VDT SKN QF SLKL S S VT A ADT A V Y Y C ARD Y GPGN YD W YF DLW GRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW N S GALT SGVHTFP A VLQ S S GL Y SL S S V VT VP S S SLGTKT YT CN VDHKP SNTK VDKR VESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEV QFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KGLP S SIEKTISK AKGQPREPQ V YTLPP S QEEMTKN Q VSLT CL VKGF YP SDIA VEW ESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVF SC SVMHEALHNH YTQ KSLSLSLGK
SEQ ID NO: 19 (LC de BMS20H4.9)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAW YQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIP ARF S GS GS GTDFTLTIS SLEPEDF A VY Y C Q QRSNWPP ALTF GGGTK VEIKRT V AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QD SKD STYSLSSTLTL SK AD YEKHK V Y ACE VTHQGL S SP VTK SFNRGEC
SEQ ID NO: 20 (HC de PF83)
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYPG D S YTNY SP SF QGQ VTIS ADKSIST AYLQW S SLK ASDT AMYY C ARGY GIFD YWGQ GTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTS GVHTFP A VLQ S S GL Y SL S S V VT VP S SNF GTQT YT CNVDHKP SNTK VDKT VERKC C VECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVV S VLT VVHQDWLNGKEYKCKV SNKGLP APIE
Claims (14)
1. Un anticuerpo anti-CD137 humano que comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de: la SEQ ID NO: 7, en donde dicho CD137 humano está definido por la SEQ ID NO: 1.
2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo no se une al FcyRI humano, FcyRIIa humano, FcyRIIb humano, FcYRIIIa(F) humano, FcYRIIIa(V) humano o C1q humano.
3. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, que comprende:
(a) una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9; o
(b) una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12.
4. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, que comprende:
(a) una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11; o
(b) una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
5. Una célula de mamífero aislada que expresa:
(a) un anticuerpo que comprende HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7; o
(b) un anticuerpo que comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
6. Un proceso para producir un anticuerpo que comprende cultivar una célula de mamífero capaz de expresar el anticuerpo y recuperar el anticuerpo; en donde el anticuerpo comprende:
(a) HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID: 2, HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7; o
(b) una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 o la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
7. Una molécula de ADN que comprende un polinucleótido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 14 y una de las SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 17.
8. Una célula de mamífero que comprende:
(a) la molécula de ADN de la reivindicación 7; o
(b) un polinucleótido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 14 y un polinucleótido que tiene la secuencia de una de las SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 17.
9. Una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y un vehículo, diluyente o excipiente aceptable.
10. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para su uso en terapia.
11. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para su uso en el tratamiento del cáncer.
12. El anticuerpo para el uso en la reivindicación 11, en donde el cáncer es:
(a) cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de las vías biliares, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de recto o cáncer de tiroides; o
(b) colangiocarcinoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón o carcinoma renal de células claras; o
(c) carcinoma de células renales.
13. El anticuerpo para el uso en las reivindicaciones 11 o 12, en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con radiación ionizante.
14. El anticuerpo para el uso en una cualquiera de las reivindicaciones 11-13, en donde el anticuerpo se administra en combinación simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes quimioterapéuticos.
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