ES2886345T3 - Métodos y composiciones para el tratamiento de enfermedades vasculares arterioescleróticas - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de la ateroesclerosis en un sujeto, en donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura: **(Ver fórmula)** en donde cada X e Y es independientemente oxígeno o azufre; R es un hidrógeno o C(=O)alquilo C1-C8; cada R1, R2 y R3 es independientemente un hidrógeno, metilo o (CH2)m-CH3; R4 es alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, arilo, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C1-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, cicloalquilo C3-C8, y haloalquilo C1-C8; m = 1-12; y n=1-12; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos y composiciones para el tratamiento de enfermedades vasculares arterioescleróticas

Antecedentes de la invención

La ateroesclerosis (también conocida como enfermedad vascular arterioesclerótica o ASVD) es una afección en la que una pared arterial se engrosa como resultado de la acumulación de materiales grasos tales como colesterol. Es un síndrome que afecta a los vasos sanguíneos arteriales, una respuesta inflamatoria crónica en las paredes de las arterias, provocada en gran medida por la acumulación de leucocitos macrófagos y favorecida por las lipoproteínas de baja densidad (proteínas plasmáticas que portan colesterol y triglicéridos) sin una eliminación adecuada de las grasas y el colesterol de los macrófagos mediante las lipoproteínas de alta densidad funcionales (HDL), (véase la apoA-1 Milano). Se conoce habitualmente como endurecimiento o acumulación de placas en las arterias. Está provocada por la formación de múltiples placas en las arterias. La ateroesclerosis afecta a todo el árbol arterial, pero principalmente a los vasos más grandes que soportan una tensión arterial mayor, tales como las arterias coronarias, renales, femorales, cerebrales y carótidas.

La lipoproteína de baja densidad (LDL) es uno de los cinco grupos principales de lipoproteínas, que, por orden de tamaños de mayor a menor, son los quilomicrones, VLDL, IDL, LDL, y HDL. Los estudios han demostrado que los niveles mayores de partículas de LDL (tales como LDL-c, colesterol en LDL) favorecen los problemas de salud y la enfermedad cardiovascular, y a menudo se denominan de manera informal partículas de colesterol malo, (en contraposición a las partículas de HDL, que con frecuencia se denominan colesterol bueno o partículas de colesterol bueno).

Las lesiones ateroescleróticas o placas ateroescleróticas se dividen en dos categorías generales: Estables e inestables (también denominadas vulnerables). La patobiología de las lesiones ateroescleróticas es muy complicada pero, en general, las placas ateroescleróticas estables, que tienden a ser asintomáticas, son ricas en matriz extracelular y células musculares lisas, mientras las placas inestables son ricas en macrófagos y células espumosas, y la matriz extracelular que separa la lesión de la luz arterial (también conocida como cápsula fibrosa) normalmente es débil y propensa a la ruptura. Las rupturas de la cápsula fibrosa exponen material trombogénico, tal como colágeno, a la circulación y finalmente inducen la formación de trombos en la luz. Tras su formación, los trombos intraluminales pueden obstruir completamente las arterias (es decir, una oclusión coronaria), pero con más frecuencia se desprenden, se desplazan a la circulación y finalmente obstruyen las ramas posteriores más pequeñas, lo que provoca un tromboembolismo (es decir, el ictus a menudo está provocado por la formación de trombos en las arterias carótidas). Aparte del tromboembolismo, la expansión crónica de las lesiones ateroescleróticas puede provocar el cierre completo de la luz. Curiosamente, las lesiones que se expanden de manera crónica con frecuencia son asintomáticas hasta que la estenosis de la luz es tan grave que el suministro sanguíneo a el/los tejido(s) posterior(es) es insuficiente, lo que da como resultado la isquemia.

El PDGF funciona como un mitógeno primario y quimioatrayente para las células de origen mesenquimatoso. Los miembros de la familia de PDGF desempeñan un papel importante durante el desarrollo embrionario y contribuyen al mantenimiento del tejido conectivo en los adultos. La desregulación de la señalización de PDGF se ha asociado a la ateroesclerosis, la hipertensión pulmonar y la fibrosis de órganos.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para el uso en el tratamiento de la ateroesclerosis en un sujeto, en donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura:

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno o azufre; R es un hidrógeno o C(=O)alquilo C¹-C⁸ ; cada R¹, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo o (CH2)m-CH3; R⁴ es alquilo C¹-C⁸, alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸, arilo, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C¹-C⁸, alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸, cicloalquilo C³-C⁸, y haloalquilo C¹-C⁸ ; m = 1-12; y n=1 -12; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, La invención se refiere además a una composición farmacéutica para el uso según la reivindicación 5.

Breve descripción de los dibujos

Las características nuevas de la invención se exponen particularmente en las reivindicaciones adjuntas. Se obtendrá una mejor comprensión de las características y ventajas de la presente invención mediante la referencia a la siguiente descripción detallada que expone realizaciones ilustrativas, en las que se utilizan los principios de la invención, y los dibujos adjuntos, de los que:

La FIG. 1 ilustra una fotografía transversal de un vaso de ratón (HSING-CHUN CHUNG, Disertación de 2008, titulada "Novel inhibitory effect of Antrodia camphorate on smooth muscle cell migration and carotid neointima formation in mice").

Las FIG. 2A-B muestran resultados ilustrativos del efecto citotóxico del Compuesto 1 a diferentes concentraciones sobre células musculares lisas (A7r5) por medio del ensayo de MTT (2A) y el ensayo de LDH (2B).

La FIG. 3 muestra resultados ilustrativos del Compuesto 1 en la inhibición de la proliferación de células musculares lisas (A7r5) tratadas con PDGF a diferentes concentraciones.

La FIG. 4 proporciona resultados ilustrativos de un examen de 24 horas de la migración de células musculares lisas estimulada por PDGF expuestas al Compuesto 1 a diferentes concentraciones. * P< 0,05 comparado con 10 ng/ml de PDGF.

La FIG. 5 muestra resultados ilustrativos del análisis patológico de una arteria carótida en el área de la media tras el tratamiento con el Compuesto 1 al microscopio con un aumento de 400x.

La FIG. 6 muestra resultados ilustrativos del análisis patológico de una arteria carótida en el área de la neoíntima tras el tratamiento con el Compuesto 1 al microscopio con un aumento de 400x.

La FIG. 7 muestra la evaluación ilustrativa de las lesiones ateroescleróticas con el tratamiento del Compuesto 1.

La FIG. 8 muestra el análisis patológico ilustrativo de la aorta de ratones ApoE alimentados con una dieta normal y una dieta alta en grasas al microscopio.

La FIG. 9 muestra la evaluación ilustrativa de los niveles séricos de proteína C reactiva (CRP) en ratones ApoE con o sin tratamiento con el Compuesto 1.

Las FIG. 10A-B muestran los resultados de la expresión de mARN de LDLR en la línea celular HepG2 inducida mediante un Compuesto 1 de ciclohexenona ejemplar. La línea celular HepG2 se privó de suero durante la noche y se expuso a 20 pM del Compuesto 1 en los intervalos de tiempo indicados (1A). Las células se recogieron después y se detectó el nivel de expresión del mARN de LDLR y GAPDH (control interno) mediante RT-PCR. El nivel de expresión relativo de LDLR con respecto a GAPDH se cuantificó mediante densitometría (1B). Los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. La barra representó la media ± DEM. * indica p < 0,05 y ** indica p < 0,01.

Las FIG. 11A-B muestran resultados eficaces ilustrativos del Compuesto 1 de ciclohexenona ejemplar que estimula la fosforilación de ERK1/2 en la línea celular HepG2. (2A), la línea celular HepG2 se privó de suero durante la noche y se expuso a las concentraciones indicadas de Compuesto 1 durante 1 h. Los lisados celulares completos se inmunotransfirieron después con un anticuerpo hacia fosfo-ERK1/2 y se volvieron a sondear con un anticuerpo hacia p-actina. La membrana duplicada se sondeó con un anticuerpo hacia ERK1/2. (2B), se cuantificó el nivel de expresión relativo de p-ERK1/2 respecto de p-actina mediante densitometría. Los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. Las barras representaron la media ± DEM.

Descripción detallada de la invención

Cuando la ateroesclerosis provoca síntomas se pueden tratar algunos de ellos, tales como la angina de pecho. Los medios no farmacéuticos normalmente son el primer método de tratamiento, tal como el cese del tabaquismo y la práctica regular de ejercicio. Si estos métodos no funcionan, las medicinas normalmente son la siguiente etapa en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares, y, con mejoras, se han convertido cada vez más en el método más eficaz a largo plazo. Las medicinas habituales para la ateroesclerosis (o enfermedad vascular arterioesclerótica) incluyen un grupo de medicaciones denominadas estatinas. Tienen relativamente pocos efectos secundarios indeseables a corto plazo o a más largo plazo. Los compuestos de ciclohexenona de la invención, en ciertas realizaciones, se obtienen de extractos de productos naturales y proporcionan complicaciones y/o efectos secundarios reducidos. Los compuestos de ciclohexenona proporcionan un beneficio terapéutico a un sujeto que se está tratando de ateroesclerosis o sus síntomas relacionados, tales como colesterol de LDL elevado (véanse los Ejemplos 1-14).

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para el uso en el tratamiento de la ateroesclerosis en un sujeto, en donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura:

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno o azufre; R es un hidrógeno o C(=O)alquilo Ci-Cs; cada Ri, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo o (CH2)m-CH3; R⁴ es alquilo Ci-Cs, alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸, arilo, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo Ci-Cs, alquenilo C²-Cs, alquinilo C²-C⁸, cicloalquilo C3-Cs, y haloalquilo Ci-Cs; m = 1-12; y n=1 -12; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, dicho compuesto inhibe la proliferación o migración de células musculares lisas estimulada por PDGF, reduce la formación de neoíntima, o inhibe la producción o progresión de una o más lesiones ateroescleróticas en la vasculatura de un sujeto.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, la ateroesclerosis está asociada a arteriopatía coronaria, aneurisma, arteriesclerosis, infarto de miocardio, embolia, ictus, trombosis, angina de pecho, inflamación de la placa vascular, ruptura de la placa vascular, enfermedad de Kawasaki, calcificación o inflamación.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, dicho compuesto reduce el colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (LDL), o mantiene un nivel de colesterol normal de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) en el sujeto. La invención se refiere además a una composición farmacéutica para el uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad vascular arterioesclerótica relacionada con la inflamación, o en la reducción de la proteína C reactiva para prevenir o tratar una enfermedad vascular arterioesclerótica inflamatoria, en donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura:

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno o azufre;

R es un hidrógeno o C(=O)alquilo Ci-Cs;

cada Ri, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo o (CH2)m-CH3;

R⁴ es alquilo Ci-Cs, alquenilo C²-Cs, alquinilo C²-Cs, arilo, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo Ci-Cs, alquenilo C²-Cs, alquinilo C²-Cs, cicloalquilo C3-Cs, y haloalquilo Ci-Cs;

m = 1-12; y

n=1 -12; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, dicho compuesto, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra de manera parenteral, intravenosa, oral, o mediante inyección.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, dicho compuesto se aísla de Antrodia camphorata, o se prepara de manera sintética o semisintética.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, R es un hidrógeno, C(=O)C3Hs, C(=O)C²H⁵ , o C(=O)CH³.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, cada Ri, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, u octilo.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, cada Ri y R² es independientemente un hidrógeno o metilo.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, R⁴ es alquilo Ci-Cs sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo Ci-Cs, alquenilo C²-Cs, alquinilo C²-Cs, cicloalquilo C3-Cs, y haloalquilo Ci-Cs.

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, R⁴ es CH²CH=C(CH³)².

En una realización de la composición farmacéutica para el uso según la invención, dicho compuesto es

En ciertas realizaciones, el compuesto para el uso en los métodos inhibe la proliferación o migración de células musculares lisas estimulada por PDGF. En ciertas realizaciones, la ateroesclerosis está asociada a arteriopatía coronaria, aneurisma, arterioesclerosis, infarto de miocardio, embolia, ictus, trombosis, angina de pecho, inflamación de la placa vascular, ruptura de la placa vascular, enfermedad de Kawasaki, calcificación o inflamación. En ciertas realizaciones, el compuesto reduce el colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) en el sujeto. En ciertas realizaciones, el compuesto mantiene un nivel de colesterol normal de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) en el sujeto. En ciertas realizaciones, el sujeto es humano. Véanse los Ejemplos 2-14.

En ciertas realizaciones, la vasculatura comprende una arteria cardiaca. En ciertas realizaciones, la vasculatura comprende una aorta. En ciertas realizaciones, el sujeto es humano.

En ciertas realizaciones, los compuestos de ciclohexenona para el uso en el tratamiento proporcionado en la presente memoria poseen los efectos terapéuticos de inhibir la producción o progresión de las lesiones ateroescleróticas. Véase el Ejemplo 8.

La proteína C reactiva (CRP) es una proteína hallada en la sangre, cuyos niveles se elevan en respuesta a la inflamación (es decir, la proteína C reactiva es una proteína de fase aguda). Su papel fisiológico es unirse a la fosfocolina expresada en la superficie de las células muertas o moribundas (y ciertos tipos de bacterias) para activar el sistema del complemento por medio del complejo C1Q.

Según la hipótesis lipídica, los niveles anormales de colesterol (hipercolesterolemia) —es decir, las concentraciones mayores de LDL y las concentraciones menores de HDL funcional— están claramente asociadas con la enfermedad cardiovascular debido a que estos estimulan el desarrollo del ateroma en las arterias (ateroesclerosis). Este proceso de la enfermedad conduce a infarto de miocardio (ataque al corazón), ictus, y enfermedad vascular periférica. Debido a que la LDL sanguínea más alta, en especial las concentraciones más altas de partículas de LDL y el tamaño menor de las partículas de LDL, contribuyen a este proceso más que el contenido de colesterol de las partículas de HDL, las partículas de LDL (colesterol) se denominan con frecuencia "colesterol malo" debido a que se han asociado a la formación del ateroma.

Los niveles elevados de las fracciones de lipoproteínas, LDL, IDL y VLDL se consideran aterogénicas (propensas a provocar ateroesclerosis). Los niveles de estas fracciones, más que el nivel de colesterol total, se correlacionan con el grado y el progreso de la ateroesclerosis. A la inversa, el colesterol total puede estar dentro de los límites normales, y aun así estar constituido principalmente por partículas de LDL pequeñas y HDL pequeñas, en cuyas condiciones las velocidades de crecimiento del ateroma todavía serían altas. En contraste, sin embargo, si el número de partículas de LDL (colesterol de LDL o LDL-c) es bajo (principalmente grandes partículas) y un gran porcentaje de las partículas de HDL son grandes, las velocidades de crecimiento del ateroma normalmente son bajas, incluso negativas, para cualquier concentración concreta de colesterol total.

Se considera que el nivel deseable de LDL-c es menor de 100 mg/dL (2,6 mmol/L), aunque se puede considerar un nuevo límite superior de 70 mg/dL (1,8 mmol/L) en individuos de alto riesgo basándose en algunos de los ensayos anteriormente mencionados. Se cree que es más sana una proporción de colesterol total respecto de HDL —otra medida útil— de mucho menos de 5:1.

El receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDL) (LDLR) es la ruta principal para la eliminación de colesterol de la circulación (Slater HR, et al., Thrombosis, and Vascular Biology 1984;4(6):604-13). La expresión del LDLR en la superficie de las células hepáticas regula la homeostasis del colesterol de LDL (LDL-c) sanguíneo humano. La expresión incrementada de LDLR hepático mejora el aclaramiento del LDL-c sanguíneo a través de la endocitosis mediada por receptor (Brown MS, et al., Science, 4 de abril de 1986;232(4746):34-47; Goldstein JL, et al., Nature 1990;343(6257):425-30). Se considera que la captación hepática mediada por LDLR es responsable de la eliminación de más del 70% del LDL-c humano (Brown MS, et al., Science, 4 de abril de 1986;232(4746):34-47).

En ciertas realizaciones, en la presente memoria se proporcionan métodos que reducen el colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL) o que mantienen un nivel normal de colesterol de LDL en un sujeto administrando un compuesto de ciclohexenona proporcionado en la presente memoria al sujeto (p. ej., un ser humano). Los compuestos de ciclohexenona proporcionan un beneficio terapéutico a un sujeto que se trata para reducir el colesterol de LDL hasta un intervalo normal (véanse los Ejemplos 1, 10-14). Los compuestos de ciclohexenona para el uso según la invención, en ciertas realizaciones, se obtienen de extractos de productos naturales y proporcionan complicaciones y/o efectos secundarios reducidos. En ciertas realizaciones, esta invención usa el potencial terapéutico y profiláctico de los compuestos de ciclohexenona ejemplares (p. ej., el Compuesto 1) para reducir el colesterol de LDL o mantener el nivel normal de colesterol de LDL induciendo el receptor de LDL.

En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona resultados que indican que la expresión de mARN de LDLR se activa mediante los compuestos de ciclohexenona ejemplares (p. ej., el Compuesto 1, a una concentración de 20 pM). El nivel de la expresión del mARN de LDLR ya se incrementó 2 h tras la adición a las células del Compuesto 1. El incremento alcanzó un nivel significativo a las 4 h, y se incrementó continuamente hasta 6 h al final del experimento (véase el Ejemplo 10, FIG. 10A y 10B). Se ha demostrado que la activación de la quinasa regulada por señales extracelulares (ERK1/2) se correlaciona positivamente con la estabilización del mARN de LDLR en células de hepatoma (Abidi P, Zhou Y, et al., Thrombosis, and Vascular Biology 2005;25(10):2170-6; Kong W, et al. Nat Med 2004;10(12):1344-51).

En ciertas realizaciones, basándose en los resultados de la inmunotransferencia, el nivel de concentración más bajo de los compuestos de ciclohexenona ejemplares (p. ej., el Compuesto 1 a 0,5 pM) fue suficiente para inducir la activación de ERK1/2 en HepG2 (Véase el Ejemplo 11, FIG. 11A y 11B). En ciertas realizaciones, los compuestos de ciclohexenona ejemplares (p. ej., el Compuesto 1) elevan la expresión del mARN de LDLR a través de la ruta dependiente de ERK en células de hepatoma humanas.

En ciertas realizaciones, el compuesto induce la expresión de receptores de lipoproteínas de baja densidad (LDL) en el sujeto. En ciertas realizaciones, el compuesto incrementa la expresión de LDLR hepático. En ciertas realizaciones, el método induce la expresión de receptores de lipoproteínas de baja densidad (LDL) en el sujeto. En ciertas realizaciones, el método incrementa la expresión de LDLR hepático. En ciertas realizaciones, el sujeto es humano. En ciertas realizaciones, los métodos reducen o mantienen el colesterol de LDL a un nivel menor de 100 mg/dL (2,6 mmol/L) en seres humanos. Véanse los Ejemplos 10-14.

En ciertas realizaciones, el compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura

se prepara de manera sintética o semisintética a partir de cualquier material de partida adecuado. En otras realizaciones, el compuesto de ciclohexenona se prepara mediante fermentación, o similares. Por ejemplo, el Compuesto 1 (también conocido como Antroquinonol™ o "Antroq") o el Compuesto 3, en ciertos casos, se preparan a partir de 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-6-metilciclohexa-2,5-dienona. Los compuestos ejemplares no limitados se ilustran a continuación.

En otras realizaciones, el compuesto de ciclohexenona que tiene la estructura

se aísla a partir de los extractos con disolventes orgánicos de Antrodia camphorata. En ciertas realizaciones, el disolvente orgánico se selecciona de alcoholes (p. ej., metanol, etanol, propanol, o similares), ésteres (p. ej., acetato de metilo, acetato de etilo, o similares), alcanos (p. ej., pentano, hexano, heptano, o similares), alcanos halogenados (p. ej., clorometano, cloroetano, cloroformo, cloruro de metileno, y similares), y similares. Por ejemplo, los Compuestos 1-7 ejemplares se aíslan a partir de extractos con disolventes orgánicos. En ciertas realizaciones, el disolvente orgánico es un alcohol. En ciertas realizaciones, el alcohol es etanol. En ciertas realizaciones, el compuesto de ciclohexenona se aísla a partir de los extractos acuosos de Antrodia camphorata.

En ciertas realizaciones, R¹ es un hidrógeno o metilo. En ciertas realizaciones, R² es un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo. En ciertas realizaciones, R³ es un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo. En ciertas realizaciones, el compuesto es

Cierta terminología farmacéutica y médica

A menos que se indique de otra manera, los siguientes términos usados en esta solicitud, que incluye la memoria descriptiva y las reivindicaciones, tienen las definiciones proporcionadas a continuación. Se debe indicar que, tal como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un/una", "uno" y "el/la" incluyen las referencias plurales a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. A menos que se indique de otra manera, se emplean métodos convencionales de espectroscopía de masas, RMN, HPLC, química de proteínas, bioquímica, técnicas de ADN recombinante y farmacología. En esta solicitud, el uso de "o" o "y" significa "y/o", a menos que se indique de otra manera. Además, el uso de la expresión "que incluye", así como otras formas, tales como "incluyen", "incluye" e "incluido", no es limitante. Los títulos de las secciones usados en la presente memoria tienen fines organizativos solamente, y no se debe considerar que limiten la materia descrita.

Un grupo "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático. El grupo alquilo puede ser un grupo alquilo saturado (lo que significa que no contiene ningún enlace doble carbono-carbono o enlace triple carbono-carbono), o el grupo alquilo puede ser un grupo alquilo insaturado (lo que significa que contiene al menos un enlace doble carbono-carbono o enlace triple carbono-carbono). El resto alquilo, sea saturado o insaturado, puede estar ramificado o ser de cadena lineal.

El grupo "alquilo" puede tener 1 a 12 átomos de carbono (cuando aparece en la presente memoria, un intervalo numérico tal como ^"1 a ¹² " se refiere a cada número entero en el intervalo proporcionado; p. ej., ^"1 a ¹² átomos de carbono" significa que el grupo alquilo puede consistir en 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc., hasta ¹² átomos de carbono inclusive, aunque la presente definición también cubre la existencia del término "alquilo", donde no se designa ningún intervalo numérico). El grupo alquilo de los compuestos descritos en la presente memoria se puede denominar "alquilo C¹-C⁸" o denominaciones similares. A modo de ejemplo solamente, "alquilo C¹-C⁸" indica que existen uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho átomos de carbono en la cadena alquilo. En un aspecto, el alquilo se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, iso-propilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, y t-butilo. Los grupos alquilo típicos incluyen, pero no se limitan de ninguna manera a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, butilo terciario, pentilo, neopentilo, hexilo, alilo, but-2-enilo, but-3-enilo, ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo, y similares. En un aspecto, un alquilo es un alquilo C1-C8.

El término "alquileno" se refiere a un radical alquilo divalente. Cualquiera de los grupos alquilo monovalentes anteriormente mencionados puede ser un alquileno mediante la sustracción de un segundo átomo de hidrógeno del alquilo. En un aspecto, un alquileno es un alquileno C¹-C¹². En otro aspecto, un alquileno es un alquileno C¹-C⁸. Los grupos alquileno típicos incluyen, pero sin limitación, -CH²-, -CH(CH3)-, -C(CH3)2-, -CH²CH²-, -CH2CH(CH3)-, -CH2C(CH3)2-, -CH²CH²CH²-, -CH²CH²CH²CH²-, y similares.

Tal como se usa en la presente memoria, el término "arilo" se refiere a un anillo aromático en donde cada uno de los átomos que forman el anillo es un átomo de carbono. Los anillos arilo están formados por cinco, seis, siete, ocho, nueve, o más de nueve átomos de carbono. Los grupos arilo están sustituidos opcionalmente. En un aspecto, un arilo es un fenilo o un naftalenilo. En un aspecto, un arilo es un fenilo. En un aspecto, un arilo es un arilo C⁶-C¹⁰. Dependiendo de la estructura, un grupo arilo puede ser un monorradical o un dirradical (es decir, un grupo arileno). En un aspecto, un arileno es un arileno C⁶-C¹⁰. Los arilenos ejemplares incluyen, pero sin limitación, fenil-1,2-eno, fenil-1,3-eno, y fenil-1,4-eno.

El término "aromático" se refiere a un anillo plano que tiene un sistema de electrones n deslocalizados, que contiene 4n+2 electrones n, en el que n es un número entero. Los anillos aromáticos pueden estar formados por cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, o más de diez átomos. Los anillos aromáticos están sustituidos opcionalmente. El término "aromático" incluye tanto grupos arilo carbocíclicos ("arilo", p. ej., fenilo) como grupos arilo heterocíclicos (o "heteroarilo" o "heteroaromático") (p. ej., piridina). El término incluye los grupos monocíclicos o policíclicos de anillos condensados (es decir, anillos que comparten pares adyacentes de átomos de carbono).

El término "halo" o, de manera alternativa, "halógeno" o "haluro" significa fluoro, cloro, bromo o yodo.

El término "lactona" se refiere a un éster cíclico que se puede considerar el producto de condensación de un grupo alcohol -OH y un grupo ácido carboxílico -COOH en la misma molécula. Se caracteriza por un anillo cerrado que consiste en dos o más átomos de carbono y un único átomo de oxígeno, con un grupo cetona =O en uno de los carbonos adyacentes al otro oxígeno.

El término "heterociclo" o "heterocíclico" se refiere a anillos heteroaromáticos (también conocidos como heteroarilos) y anillos heterocicloalquilo (también conocidos como grupos heteroalicíclicos) que contienen de uno a cuatro heteroátomos en el/los anillo(s), donde cada heteroátomo de el/los anillo(s) se selecciona de O, S y N, en donde cada grupo heterocíclico tiene de 4 a 10 átomos en su sistema de anillos, y con la condición de que el anillo no contenga dos átomos de O o S adyacentes. Los grupos heterocíclicos no aromáticos (también conocidos como heterocicloalquilos) incluyen los grupos que tienen solamente 3 átomos en su sistema de anillos, pero los grupos heterocíclicos aromáticos deben tener al menos 5 átomos en su sistema de anillos. Los grupos heterocíclicos incluyen sistemas de anillos benzo-condensados. Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 3 miembros es aziridinilo. Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 4 miembros es azetidinilo. Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 5 miembros es tiazolilo. Un ejemplo de un grupo heterocíclico de 6 miembros es piridilo, y un ejemplo de un grupo heterocíclico de 10 miembros es quinolinilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos no aromáticos son pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, oxazolidinonilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tioxanilo, piperazinilo, aziridinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, pirrolin-2-ilo, pirrolin-3-ilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, 3H-indolilo y quinolizinilo. Los ejemplos de grupos heterocíclicos aromáticos son piridinilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo, y furopiridinilo. Los grupos anteriores pueden estar unidos en C o unidos en N, cuando sea posible. Por ejemplo, un grupo derivado de pirrol puede ser pirrol-1 -ilo (unido en N) o pirrol-3-ilo (unido en C). Además, un grupo derivado de imidazol puede ser imidazol-1 -ilo o imidazol-3-ilo (ambos unidos en N) o imidazol-2-ilo, imidazol-4-ilo o imidazol-5-ilo (todos unidos en C). Los grupos heterocíclicos incluyen sistemas de anillos benzo-condensados. Los heterociclos no aromáticos pueden estar sustituidos con uno o dos restos oxo (=O), tal como pirrolidin-2-ona.

El término "alquenilo", tal como se usa en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena lineal, ramificada, o cíclica (en cuyo caso, también se conocería como un "cicloalquenilo") que contiene 2-10 carbonos y que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono formado mediante la extracción de dos hidrógenos. En ciertas realizaciones, dependiendo de la estructura, un grupo alquenilo es un grupo monorradical o un grupo dirradical (es decir, un grupo alquenileno). En ciertas realizaciones, los grupos alquenilo están sustituidos opcionalmente. Los ejemplos ilustrativos de alquenilo incluyen, pero sin limitación, etenilo, 2-propenilo, 2-metil-2-propenilo, 3-butenilo, 4-pentenilo, 5-hexenilo, 2-heptenilo, 2-metil-1-heptenilo, y 3-decenilo.

El término "alquinilo", tal como se usa en la presente memoria, significa un hidrocarburo de cadena lineal, ramificada, o cíclica (en cuyo caso, también se conocería como un "cicloalquenilo") que contiene 2-10 carbonos y que contiene al menos un triple enlace carbono-carbono formado mediante la extracción de cuatro hidrógenos. En ciertas realizaciones, dependiendo de la estructura, un grupo alquinilo es un grupo monorradical o un grupo dirradical (es decir, un grupo alquinileno). En ciertas realizaciones, los grupos alquinilo están sustituidos opcionalmente. Los ejemplos ilustrativos de alquinilo incluyen, pero sin limitación, etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, heptinilo, y similares.

El término "alcoxilo", tal como se usa en la presente memoria, significa un grupo alquilo, como se define en la presente memoria, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno. Los ejemplos ilustrativos de alcoxilo incluyen, pero sin limitación, metoxilo, etoxilo, propoxilo, 2-propoxilo, butoxilo, terc-butoxilo, pentiloxilo, y hexiloxilo.

El término "cicloalquilo", tal como se usa en la presente memoria, significa un radical monocíclico o policíclico que contiene solamente carbono e hidrógeno, e incluye los que están saturados, parcialmente insaturados, o completamente insaturados. Los grupos cicloalquilo incluyen los grupos que tienen de 3 a 10 átomos en el anillo. Los ejemplos representativos de restos cíclicos incluyen, pero sin limitación, los siguientes restos:

En ciertas realizaciones, dependiendo de la estructura, un grupo cicloalquilo es un grupo monorradical o un grupo dirradical (p.ej., un grupo cicloalquileno).

Los términos "haloalquilo", "haloalquenilo", "haloalquinilo" y "haloalcoxilo", tal como se usan en la presente memoria, incluyen las estructuras alquilo, alquenilo, alquinilo y alcoxilo en las que al menos un hidrógeno está sustituido por un átomo de halógeno. En ciertas realizaciones en las que dos o más átomos de hidrógeno están sustituidos por átomos de halógeno, los átomos de halógeno son iguales entre sí. En otras realizaciones en las que dos o más átomos de hidrógeno están sustituidos por átomos de halógeno, los átomos de halógeno no son iguales entre sí. Los términos "fluoroalquilo" y "fluoroalcoxilo" incluyen los grupos haloalquilo y haloalcoxilo, respectivamente, en los que el halógeno es flúor. En ciertas realizaciones, los haloalquilos están sustituidos opcionalmente.

El término "glucosilo", tal como se usa en la presente memoria, incluye los grupos glucosilo de forma D o L, en los que el grupo glucosilo está unido por medio de cualquier grupo hidroxilo del anillo de glucosa.

El término "aceptable" con respecto a una formulación, composición o ingrediente, tal como se usa en la presente memoria, significa que no tiene un efecto perjudicial persistente sobre la salud general del sujeto tratado.

Antrodia es un género de hongos de la familia Meripilaceae. El género Antrodia tiene cuerpos fructíferos que generalmente son planos o se extienden sobre la superficie de crecimiento, con el himenio expuesto al exterior; los bordes se pueden curvar para formar plataformas estrechas. La mayoría de las especies se hallan en bosques templados y boreales, y provocan podredumbre marrón. Algunas de las especies en este género tienen propiedades medicinales, y se han usado en Taiwán como medicina tradicional.

El término "vehículo", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a compuestos químicos o agentes relativamente atóxicos que facilitan la incorporación de un compuesto a las células o los tejidos.

Los términos "coadministración" o similares, tal como se usan en la presente memoria, pretenden abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un paciente individual, y pretenden incluir regímenes de tratamiento en los que los agentes se administran mediante la misma vía o diferentes vías de administración o en el mismo momento o en momentos diferentes.

El término "diluyente" se refiere a compuestos químicos que se usan para diluir el compuesto de interés antes de la administración. Los diluyentes se pueden usar también para estabilizar los compuestos, ya que pueden proporcionar un medio más estable. Las sales disueltas en disoluciones tamponadas (que también pueden proporcionar un control o mantenimiento del pH) se utilizan en la técnica como diluyentes, que incluyen, pero sin limitación, una solución salina tamponada con fosfato.

Las expresiones "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz", tal como se usan en la presente memoria, se refieren a una cantidad suficiente de un agente o un compuesto a administrar que aliviará hasta cierto punto uno o más de los síntomas de la enfermedad o afección a tratar. El resultado puede ser la reducción y/o mitigación de los signos, síntomas, o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Por ejemplo, una "cantidad eficaz" para uso terapéutico es la cantidad de la composición que comprende un compuesto tal como se describe en la presente memoria necesaria para proporcionar una disminución clínicamente significativa de los síntomas de la enfermedad. Una cantidad "eficaz" adecuada, en cualquier caso individual, se puede determinar mediante el uso de técnicas tales como un estudio de escalonamiento de la dosis.

Los términos "aumentar" o "aumento", tal como se usan en la presente memoria, significan incrementar o prolongar en potencia o duración un efecto deseado. Así, con respecto a aumentar el efecto de los agentes terapéuticos, el término "aumento" se refiere a la capacidad de incrementar o prolongar, en potencia o duración, el efecto de otros agentes terapéuticos en un sistema. Una "cantidad eficaz para el aumento", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a una cantidad adecuada para aumentar el efecto de otro agente terapéutico en un sistema deseado.

Un "metabolito" de un compuesto descrito en la presente memoria es un derivado de ese compuesto que se forma cuando el compuesto se metaboliza. La expresión "metabolito activo" se refiere a un derivado biológicamente activo de un compuesto que se forma cuando el compuesto se metaboliza. El término "metabolizado", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a la suma de los procesos (que incluyen, pero sin limitación, las reacciones de hidrólisis y las reacciones catalizadas por enzimas) mediante las que un organismo cambia una sustancia particular. Así, las enzimas pueden producir alteraciones estructurales específicas a un compuesto. Por ejemplo, el citocromo P450 cataliza una diversidad de reacciones oxidativas y reductoras, mientras las uridina difosfato glucuroniltransferasas catalizan la transferencia de una molécula activada de ácido glucurónico a alcoholes aromáticos, alcoholes alifáticos, ácidos carboxílicos, aminas y grupos sulfhidrilo libres. Los metabolitos de los compuestos descritos en la presente memoria se identifican opcionalmente mediante la administración de los compuestos a un hospedador y el análisis de muestras de tejido del hospedador, o mediante la incubación de los compuestos con células hepáticas in vitro y el análisis de los compuestos resultantes.

La expresión "combinación farmacéutica", tal como se usa en la presente memoria, significa un producto que resulta de la mezcla o combinación de más de un ingrediente activo, e incluye las combinaciones tanto fijas como no fijas de los ingredientes activos. La expresión "combinación fija" significa que los ingredientes activos, p. ej. un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) y un co-agente, se administran a un paciente de manera simultánea en forma de una única entidad o dosis. La expresión "combinación no fija" significa que los ingredientes activos, p.ej. un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) y un co-agente, se administran a un paciente como entidades diferentes de manera simultánea, concurrente o secuencial sin límites específicos de tiempo intermedio, en la que tal administración proporciona niveles eficaces de los dos compuestos en el organismo del paciente. Esto último también se aplica a la terapia en cóctel, p.ej. la administración de tres o más ingredientes activos.

La expresión "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) con otros componentes químicos, tales como vehículos, estabilizantes, diluyentes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes, y/o excipientes. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. Existen múltiples técnicas para administrar un compuesto en la técnica, que incluyen, pero sin limitación: la administración intravenosa, oral, en aerosol, parenteral, oftálmica, pulmonar y tópica.

El término "sujeto" o "paciente" abarca los mamíferos. Los ejemplos de mamíferos incluyen, pero sin limitación, cualquier miembro de la clase Mammalia: seres humanos, primates no humanos tales como chimpancés, y otras especies de simios y monos; animales de granja tales como ganado bovino, caballos, ovejas, cabras, cerdos; animales domésticos tales como conejos, perros, y gatos; animales de laboratorio que incluyen roedores, tales como ratas, ratones y conejillos de Indias, y similares. En una realización, el mamífero es un ser humano.

Los términos "tratar", “que trata” o "tratamiento", tal como se usan en la presente memoria, incluyen aliviar, reducir o mejorar al menos un síntoma de una enfermedad o afección, prevenir síntomas adicionales, inhibir la enfermedad o afección, p.ej., detener el desarrollo de la enfermedad o afección, aliviar la enfermedad o afección, provocar la regresión de la enfermedad o afección, aliviar una afección provocada por la enfermedad o afección, o detener los síntomas de la enfermedad o afección profilácticamente y/o terapéuticamente.

Vías de administración

Las vías de administración adecuadas incluyen, pero sin limitación, la administración oral, intravenosa, rectal, en aerosol, parenteral, oftálmica, pulmonar, transmucosa, transdérmica, vaginal, ótica, nasal, y tópica. Además, a modo de ejemplo solamente, la administración parenteral incluye las inyecciones intramusculares, subcutáneas, intravenosas, intramedulares, así como las inyecciones intratecales, intraventriculares directas, intraperitoneales, intralinfáticas, e intranasales.

En ciertas realizaciones, se administra un compuesto descrito en la presente memoria de una manera local en vez de sistémica, por ejemplo, por medio de la inyección del compuesto directamente en un órgano, a menudo en una preparación de liberación lenta o una formulación de liberación sostenida. En realizaciones específicas, las formulaciones de acción prolongada se administran mediante implantación (por ejemplo, de manera subcutánea o intramuscular) o mediante inyección intramuscular. Además, en otras realizaciones, el fármaco se administra en un sistema selectivo de administración de fármacos, por ejemplo, en un liposoma revestido con un anticuerpo específico de un órgano. En tales realizaciones, los liposomas se transportan y absorben selectivamente en el órgano. En otras realizaciones, el compuesto descrito en la presente memoria se proporciona en forma de una formulación de liberación rápida, en forma de una formulación de liberación prolongada, o en forma de una formulación de liberación intermedia. En otras realizaciones, el compuesto descrito en la presente memoria se administra de manera tópica.

En ciertas realizaciones, el compuesto de ciclohexenona, o una sal, metabolito, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra de manera parenteral o intravenosa. En otras realizaciones, el compuesto de ciclohexenona, o una sal, metabolito, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra mediante inyección. En ciertas realizaciones, el compuesto de ciclohexenona, o una sal, metabolito, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra de manera oral.

Composición/formulación farmacéutica

En ciertas realizaciones, las composiciones para el uso según la invención comprenden además un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En ciertas realizaciones, cada R¹, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo hexilo, heptilo, u octilo. En ciertas realizaciones, R¹ es un hidrógeno o metilo. En ciertas realizaciones, R² es un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo. En ciertas realizaciones, R³ es un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo o hexilo.

En ciertas realizaciones, el compuesto se selecciona de grupo que consiste en

En ciertas realizaciones, el compuesto se selecciona de grupo que consiste en

Los compuestos descritos en la presente memoria se formulan en composiciones farmacéuticas. En realizaciones específicas, las composiciones farmacéuticas se formulan de manera convencional mediante el uso de uno o más vehículos fisiológicamente aceptables, que comprenden excipientes y agentes auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos hasta preparaciones que se pueden usar farmacéuticamente. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Se usa cualquier técnica, vehículos, y excipientes farmacéuticamente aceptables según sea adecuado para formular las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Decimonovena Ed. (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. y Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Nueva York, N.Y., 1980; y Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Séptima Ed. (Lippincott Williams & Wilkins, 1999).

En la presente memoria se proporcionan composiciones farmacéuticas para el uso como se define en las reivindicaciones, que comprenden un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) y un/varios diluyente(s), excipiente(s), o vehículo(s) farmacéuticamente aceptable(s). En ciertas reivindicaciones, los compuestos descritos se administran como composiciones farmacéuticas en las que se mezcla un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) con otros ingredientes activos, como en la terapia de combinación. En la presente memoria están abarcadas todas las combinaciones de agentes activos expuestas en la siguiente sección de terapias de combinación, y a lo largo de esta descripción. En realizaciones específicas, las composiciones farmacéuticas incluyen uno o más compuestos (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria).

Una composición farmacéutica, tal como se usa en la presente memoria, se refiere a una mezcla de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) con otros componentes químicos, tales como vehículos, estabilizantes, diluyentes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes, y/o excipientes. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. En ciertas realizaciones, en la práctica del uso proporcionado en la presente memoria, se administran cantidades terapéuticamente eficaces de los compuestos (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) en una composición farmacéutica a un mamífero que tiene una enfermedad o afección a tratar. En realizaciones específicas, el mamífero es un ser humano. En ciertas realizaciones, las cantidades terapéuticamente eficaces varían dependiendo de la gravedad de la enfermedad, la edad y salud relativa del sujeto, la potencia del compuesto usado y otros factores. Los compuestos descritos en la presente memoria se usan individualmente o en combinación con uno o más agentes terapéuticos como componentes de mezclas.

En una realización, se formula un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) en una disolución acuosa. En realizaciones específicas, la disolución acuosa se selecciona, a modo de ejemplo solamente, de un tampón fisiológicamente compatible, tal como disolución de Hank, disolución de Ringer, o tampón de solución salina fisiológica. En otras realizaciones, se formula un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) para la administración transmucosa. En realizaciones específicas, las formulaciones transmucosas incluyen agentes penetrantes que son adecuados para la barrera a penetrar. En otras realizaciones en las que los compuestos descritos en la presente memoria se formulan para otras inyecciones parenterales, las formulaciones adecuadas incluyen disoluciones acuosas o no acuosas. En realizaciones específicas, tales disoluciones incluyen tampones y/o excipientes fisiológicamente compatibles.

En otra realización, los compuestos descritos en la presente memoria se formulan para la administración oral. Los compuestos descritos en la presente memoria, que incluyen un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria), se formulan combinando los compuestos activos, p.ej., con vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables. En diversas realizaciones, los compuestos descritos en la presente memoria se formulan en formas farmacéuticas orales que incluyen, a modo de ejemplo solamente, comprimidos, polvos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, elixires, suspensiones espesas, suspensiones y similares.

En ciertas realizaciones, las preparaciones farmacéuticas para uso oral se obtienen mezclando uno o más excipientes sólidos con uno o más de los compuestos descritos en la presente memoria, opcionalmente triturando la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir agentes auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, rellenos tales como azúcares, que incluyen lactosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como: por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica; u otras, tales como: polivinilpirrolidona (PVP o povidona) o fosfato cálcico. En realizaciones específicas, se añaden opcionalmente agentes disgregantes. Los agentes disgregantes incluyen, a modo de ejemplo solamente, croscarmelosa sódica reticulada, polivinilpirrolidona, agar, o ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato sódico.

En una realización, se proporcionan formas farmacéuticas, tales como núcleos de grageas y comprimidos, con uno o más revestimientos adecuados. En realizaciones específicas, se usan disoluciones concentradas de carbohidratos para revestir la forma farmacéutica. Las disoluciones de carbohidratos contienen opcionalmente componentes adicionales, tales como, a modo de ejemplo solamente, goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, disoluciones de laca, y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. También se añaden opcionalmente colorantes y/o pigmentos a los revestimientos para su identificación. Además, los colorantes y/o pigmentos se utilizan opcionalmente para caracterizar las diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.

En ciertas realizaciones, las cantidades terapéuticamente eficaces de al menos uno de los compuestos descritos en la presente memoria se formulan en otras formas farmacéuticas orales. Las formas farmacéuticas orales incluyen las cápsulas duras hechas de gelatina, así como las cápsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante tal como glicerol o sorbitol. En realizaciones específicas, las cápsulas duras contienen los ingredientes activos en una mezcla con uno o más rellenos. Los rellenos incluyen, a modo de ejemplo solamente, lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato magnésico y, opcionalmente, estabilizantes. En otras realizaciones, las cápsulas blandas contienen uno o más compuestos activos que se disuelven o suspenden en un líquido adecuado. Los líquidos adecuados incluyen, a modo de ejemplo solamente, uno o más aceites grasos, parafina líquida, o polietilenglicol líquido. Además, se pueden añadir opcionalmente estabilizantes.

En otras realizaciones, las cantidades terapéuticamente eficaces de al menos uno de los compuestos descritos en la presente memoria se formulan para administración bucal o sublingual. Las formulaciones adecuadas para administración bucal o sublingual incluyen, a modo de ejemplo solamente, comprimidos, pastillas, o geles. En otras realizaciones, los compuestos descritos en la presente memoria se formulan para inyección parenteral, lo que incluye las formulaciones adecuadas para inyección rápida o infusión continua. En realizaciones específicas, las formulaciones para inyección se presentan en una forma farmacéutica unitaria (p. ej., en ampollas) o en recipientes multi-dosis. Opcionalmente se añaden conservantes a las formulaciones de inyección. En otras realizaciones, las composiciones farmacéuticas de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) se formulan en una forma adecuada para inyección parenteral en forma de suspensiones, disoluciones o emulsiones estériles en vehículos oleosos o acuosos. Las formulaciones para inyección parenteral contienen opcionalmente agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. En realizaciones específicas, las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen disoluciones acuosas de los compuestos activos en forma hidrosoluble. En realizaciones adicionales, las suspensiones de los compuestos activos se preparan en forma de suspensiones oleosas para inyección adecuadas. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados para el uso en las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria incluyen, a modo de ejemplo solamente, aceites grasos tales como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. En ciertas realizaciones específicas, las suspensiones acuosas para inyección contienen sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, la suspensión contiene estabilizantes adecuados o agentes que aumentan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de disoluciones muy concentradas. De manera alternativa, en otras realizaciones, el ingrediente activo está en forma de polvo para reconstitución con un vehículo adecuado, p.ej. agua estéril apirógena, antes del uso.

En un aspecto, los compuestos (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria) se preparan en forma de disoluciones para inyección parenteral como se describe en la presente memoria o como se conoce en la técnica, y se administran con un inyector automático. Se conocen los inyectores automáticos, tales como los descritos en las patentes de EE.UU. n.°s 4.031.893, 5.358.489; 5.540.664; 5.665.071,5.695.472 y en el documento WO/2005/087297. En general, todos los inyectores automáticos contienen un volumen de disolución que incluye un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) a inyectar. En general, los inyectores automáticos incluyen un depósito para albergar la disolución, que está en comunicación fluida con una aguja para administrar el fármaco, así como un mecanismo para desplegar automáticamente la aguja, insertar la aguja en el paciente y administrar la dosis al paciente. Los inyectores ejemplares proporcionan alrededor de 0,3 mL, 0,6 mL, 1,0 mL u otro volumen adecuado de disolución a alrededor de una concentración de 0,5 mg a 50 mg de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) por 1 mL de disolución. Cada inyector es capaz de administrar solamente una dosis del compuesto.

En otras realizaciones, los compuestos (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria) se administran de manera tópica. Los compuestos descritos en la presente memoria se formulan en una diversidad de composiciones administrables de manera tópica, tales como disoluciones, suspensiones, lociones, geles, pastas, barras labiales, bálsamos, cremas o pomadas. Tales composiciones farmacéuticas contienen opcionalmente solubilizantes, estabilizantes, agentes de aumento de la tonicidad, tampones y conservantes.

En otras realizaciones, los compuestos (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria) se formulan para la administración transdérmica. En realizaciones específicas, las formulaciones transdérmicas emplean dispositivos de administración transdérmica y parches de administración transdérmica, y pueden ser emulsiones lipófilas o tamponadas, disoluciones acuosas, disueltas y/o dispersadas en un polímero o un adhesivo. En diversas realizaciones, tales parches se construyen para la administración continua, pulsátil, o a voluntad de los agentes farmacéuticos. En realizaciones adicionales, la administración transdérmica de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) se lleva a cabo por medio de parches iontoforéticos y similares. En ciertas realizaciones, los parches transdérmicos proporcionan una administración controlada de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria). En realizaciones específicas, la velocidad de absorción se ralentiza mediante el uso de membranas de control de la velocidad o atrapando el compuesto dentro de una matriz de polímero o gel. En realizaciones alternativas, se usan potenciadores de la absorción para incrementar la absorción. Los potenciadores de la absorción o vehículos incluyen disolventes farmacéuticamente aceptables absorbibles que ayudan al paso a través de la piel. Por ejemplo, en una realización, los dispositivos transdérmicos están en forma de un apósito que comprende un miembro de soporte, un depósito que contiene el compuesto opcionalmente con vehículos, opcionalmente una barrera para el control de velocidad para administrar el compuesto en la piel del hospedador a una velocidad controlada y predeterminada a lo largo de un periodo prolongado de tiempo, y un medio para sujetar el dispositivo a la piel.

Las formulaciones transdérmicas descritas en la presente memoria se pueden administrar mediante el uso de una diversidad de dispositivos que se han descrito en la técnica. Por ejemplo, tales dispositivos incluyen, pero sin limitación, las patentes de EE.UU. n.2s 3.598.122, 3.598.123, 3.710.795, 3.731.683, 3.742.951,3.814.097, 3.921.636, 3.972.995, 3.993.072, 3.993.073, 3.996.934, 4.031.894, 4.060.084, 4.069.307, 4.077.407, 4.201.211, 4.230.105, 4.292.299, 4.292.303, 5.336.168, 5.665.378, 5.837.280, 5.869.090, 6.923.983, 6.929.801 y 6.946.144.

Las formas farmacéuticas transdérmicas descritas en la presente memoria pueden incorporar ciertos excipientes farmacéuticamente aceptables que son convencionales en la técnica. En una realización, las formulaciones transdérmicas descritas en la presente memoria incluyen al menos tres componentes: (1) una formulación de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria); (2) un potenciador de la penetración; y (3) un adyuvante acuoso. Además, las formulaciones transdérmicas pueden incluir componentes adicionales tales como, pero sin limitación, agentes gelificantes, cremas y bases de pomada, y similares. En ciertas realizaciones, las formulaciones transdérmicas incluyen además un material de soporte de tejido o sin tejer para aumentar la absorción e impedir la retirada de la formulación transdérmica de la piel. En otras realizaciones, las formulaciones transdérmicas descritas en la presente memoria mantienen un estado saturado o supersaturado para estimular la difusión en la piel.

En otras realizaciones, los compuestos (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria) se formulan para la administración mediante inhalación. Las diversas formas adecuadas para la administración mediante inhalación incluyen, pero sin limitación, aerosoles, vahos o polvos. Las composiciones farmacéuticas de un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) se administran de manera conveniente en forma de una presentación en espray de aerosol desde envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado (p.ej., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado). En realizaciones específicas, la unidad de dosis de un aerosol presurizado se determina proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. En ciertas realizaciones, se formulan cápsulas y cartuchos, tal como, a modo de ejemplo solamente, de gelatinas para el uso en un inhalador o insuflador que contienen una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuada, tal como lactosa o almidón.

Las formulaciones intranasales se conocen en la técnica, y se describen, por ejemplo, en las patentes de EE.UU. n.°s 4.476.116, 5.116.817 y 6.391.452. Las formulaciones, que incluyen un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria), que se preparan según estos y otros métodos muy conocidos en la técnica, se preparan en forma de disoluciones en solución salina, mediante el empleo de alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, fluorocarbonos, y/u otros solubilizantes o agentes dispersantes conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Ansel, H. C. etal., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Sexta Ed. (1995). Preferiblemente, estas composiciones y formulaciones se preparan con ingredientes farmacéuticamente aceptables atóxicos adecuados. Estos ingredientes se hallan en fuentes tales como REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 21a edición, 2005, una referencia habitual en este campo. La elección de los vehículos adecuados depende en gran medida de la naturaleza exacta de la forma farmacéutica nasal deseada, p.ej., disoluciones, suspensiones, pomadas, o geles. Las formas farmacéuticas nasales contienen en general grandes cantidades de agua, además del ingrediente activo. También puede haber presentes cantidades menores de otros ingredientes, tales como agentes de ajuste del pH, agentes emulsionantes o dispersantes, conservantes, tensioactivos, agentes gelificantes, o tamponadores y otros agentes estabilizantes y solubilizantes. Preferiblemente, la forma farmacéutica nasal debería ser isotónica respecto de las secreciones nasales.

Para la administración mediante inhalación, los compuestos descritos en la presente memoria pueden estar en forma de un aerosol, vaho o polvo. Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria se administran de manera conveniente en forma de una presentación en espray de aerosol desde envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, p.ej., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosis se puede determinar proporcionando una válvula para liberar una cantidad medida. Se pueden formular cápsulas y cartuchos, tales como, a modo de ejemplo solamente, de gelatina para el uso en un inhalador o insuflador que contienen una mezcla en polvo del compuesto descrito en la presente memoria y una base en polvo adecuada, tal como lactosa o almidón.

En otras realizaciones, los compuestos (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria) se formulan en composiciones rectales tales como enemas, geles rectales, espumas rectales, aerosoles rectales, supositorios, supositorios de gelatina, o enemas de retención, que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos, así como polímeros sintéticos tales como polivinilpirrolidona, PEG, y similares. En las formas de supositorio de las composiciones, primero se funde una cera de punto de fusión bajo tal como, pero sin limitación, una mezcla de glicéridos de ácidos grasos, opcionalmente en combinación con manteca de cacao.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se formulan de cualquier manera convencional mediante el uso de uno o más vehículos fisiológicamente aceptables, que comprenden excipientes y agentes auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos hasta preparaciones que se pueden usar farmacéuticamente. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Se usa opcionalmente cualquier técnica, vehículo, y excipiente farmacéuticamente aceptable según sea adecuado, y como se entiende en la técnica. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) se pueden fabricar de una manera convencional, tal como, a modo de ejemplo solamente, por medio de procesos convencionales de mezcla, disolución, granulación, producción de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, atrapamiento o compresión.

Las composiciones farmacéuticas incluyen al menos un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable y al menos un compuesto (es decir, un compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) descrito en la presente memoria como ingrediente activo. El ingrediente activo está en forma de ácido libre o base libre, o en forma de sal farmacéuticamente aceptable. Además, los métodos y las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria incluyen el uso de formas cristalinas (también conocidas como polimorfos), así como los metabolitos activos de estos compuestos que tienen el mismo tipo de actividad. Todos los tautómeros de los compuestos descritos en la presente memoria están incluidos dentro del alcance de los compuestos presentados en la presente memoria. Además, los compuestos descritos en la presente memoria abarcan las formas sin solvatar, así como las formas solvatadas, con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol y similares. Las formas solvatadas de los compuestos presentados en la presente memoria también se consideran descritas en la presente memoria. Además, las composiciones farmacéuticas incluyen opcionalmente otros agentes medicinales o farmacéuticos, vehículos, adyuvantes, tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de la disolución, sales para regular la presión osmótica, tampones, y/u otras sustancias terapéuticamente valiosas.

Los métodos para la preparación de las composiciones que comprenden los compuestos descritos en la presente memoria incluyen formular los compuestos con uno o más excipientes o vehículos inertes farmacéuticamente aceptables, para formar un sólido, semisólido o líquido. Las composiciones sólidas incluyen, pero sin limitación, polvos, comprimidos, gránulos dispersables, cápsulas, obleas, y supositorios. Las composiciones líquidas incluyen disoluciones en las que se disuelve un compuesto, emulsiones que comprenden un compuesto, o una disolución que contiene liposomas, micelas, o nanopartículas que comprenden un compuesto tal como se describe en la presente memoria. Las composiciones semisólidas incluyen, pero sin limitación, geles, suspensiones y cremas. La forma de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria incluyen disoluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas adecuadas para disolución o suspensión en un líquido antes del uso, o emulsiones. Estas composiciones también contienen opcionalmente cantidades menores de sustancias auxiliares atóxicas, tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes tamponadores del pH, etc.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria) de manera ilustrativa toma la forma de un líquido, en el que los agentes están presentes en disolución, en suspensión o ambas. En general, cuando la composición se administra en forma de una disolución o suspensión, una primera porción del agente está presente en la disolución, y una segunda porción del agente está presente en forma particulada, en suspensión en una matriz líquida. En ciertas realizaciones, una composición líquida incluye una formulación en gel. En otras realizaciones, la composición líquida es acuosa.

En ciertas realizaciones, las suspensiones acuosas farmacéuticas incluyen uno o más polímeros como agentes de suspensión. Los polímeros incluyen polímeros solubles en agua, tales como polímeros celulósicos, p. ej., hidroxipropilmetilcelulosa, y polímeros insolubles en agua, tales como polímeros que contienen carboxilo reticulado. Ciertas composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria incluyen un polímero mucoadhesivo, seleccionado, por ejemplo, de carboximetilcelulosa, carbómero (polímero de ácido acrílico), poli(metacrilato de metilo), poliacrilamida, policarbófilo, copolímero de ácido acrílico/acrilato de butilo, alginato sódico y dextrano.

Las composiciones farmacéuticas también incluyen opcionalmente agentes solubilizantes para ayudar a la solubilidad de un compuesto (es decir, los compuestos de ciclohexenona descritos en la presente memoria). La expresión "agente solubilizante" incluye en general los agentes que dan como resultado la formación de una disolución micelar o una disolución verdadera del agente. Ciertos tensioactivos no iónicos aceptables, por ejemplo polisorbato 80, son útiles como agentes solubilizantes, al igual que los glicoles oftálmicamente aceptables, poliglicoles, p.ej., polietilenglicol 400, y éteres de glicol.

Además, las composiciones farmacéuticas incluyen opcionalmente uno o más agentes de ajuste del pH o agentes tamponadores, que incluyen ácidos tales como los ácidos acético, bórico, cítrico, láctico, fosfórico y clorhídrico; bases tales como hidróxido sódico, fosfato sódico, borato sódico, citrato sódico, acetato sódico, lactato sódico y trishidroximetilaminometano; y tampones tales como citrato/dextrosa, bicarbonato sódico y cloruro amónico. Tales ácidos, bases y tampones se incluyen en una cantidad necesaria para mantener el pH de la composición en un intervalo aceptable.

Además, las composiciones farmacéuticas incluyen opcionalmente una o más sales en una cantidad necesaria para llevar la osmolalidad de la composición a un intervalo aceptable. Tales sales incluyen las que tienen cationes de sodio, potasio o amonio y aniones de cloruro, citrato, ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiosulfato o bisulfito; las sales adecuadas incluyen cloruro sódico, cloruro potásico, tiosulfato sódico, bisulfito sódico y sulfato amónico.

Otras composiciones farmacéuticas incluyen opcionalmente uno o más conservantes para inhibir la actividad microbiana. Los conservantes adecuados incluyen sustancias que contienen mercurio tales como merfeno y tiomersal; dióxido de cloro estabilizado; y compuestos de amonio cuaternarios tales como cloruro de benzalconio, bromuro de cetiltrimetilamonio y cloruro de cetilpiridinio.

Otras composiciones farmacéuticas incluyen uno o más tensioactivos para aumentar la estabilidad física o para otros fines. Los tensioactivos no iónicos adecuados incluyen glicéridos de ácidos grasos y polioxietileno, y aceites vegetales, p. ej., aceite de ricino hidrogenado y polioxietileno (60); y alquiléteres de polioxietileno y éteres de alquilfenilo, p. ej., octoxinol 10, octoxinol 40.

Otras composiciones farmacéuticas pueden incluir uno o más antioxidantes para aumentar la estabilidad química cuando sea necesario. Los antioxidantes adecuados incluyen, a modo de ejemplo solamente, ácido ascórbico y metabisulfito sódico.

En ciertas realizaciones, las composiciones de suspensiones acuosas farmacéuticas se envasan en recipientes de dosis individuales no resellables. De manera alternativa, se usan recipientes de dosis múltiples resellables, en cuyo caso es típico incluir un conservante en la composición.

En realizaciones alternativas, se emplean otros sistemas de administración para los compuestos farmacéuticos hidrófobos. Los liposomas y las emulsiones son ejemplos de portadores o vehículos de administración en la presente memoria. En ciertas realizaciones, también se emplean disolventes orgánicos tales como W-metilpirrolidona. En realizaciones adicionales, los compuestos descritos en la presente memoria se administran mediante el uso de un sistema de liberación sostenida, tal como matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el agente terapéutico. En la presente memoria son útiles diversos materiales de liberación sostenida. En ciertas realizaciones, las cápsulas de liberación sostenida liberan los compuestos durante unas pocas horas hasta a lo largo de 24 horas. Dependiendo de la naturaleza química y la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, se pueden emplear estrategias adicionales para la estabilización de las proteínas.

En ciertas realizaciones, las formulaciones descritas en la presente memoria incluyen uno o más antioxidantes, agentes quelantes de metales, compuestos que contienen tiol y/u otros agentes estabilizantes generales. Los ejemplos de tales agentes estabilizantes incluyen, pero sin limitación: (a) alrededor del 0,5% a alrededor del 2% p/v de glicerol, (b) alrededor del 0,1% a alrededor del 1% p/v de metionina, (c) alrededor del 0,1% a alrededor del 2% p/v de monotioglicerol, (d) EDTA de alrededor de 1 mM a alrededor de 10 mM, (e) alrededor del 0,01% a alrededor del 2% p/v de ácido ascórbico, (f) 0,003% a alrededor del 0,02% p/v de polisorbato 80, (g) 0,001% a alrededor del 0,05% p/v de polisorbato 20, (h) arginina, (i) heparina, (j) sulfato de dextrano, (k) ciclodextrinas, (l) polisulfato de pentosano y otros heparinoides, (m) cationes divalentes tales como magnesio y zinc; o (n) combinaciones de los mismos.

Tratamientos de combinación

En general, las composiciones descritas en la presente memoria y, en las realizaciones en las que se emplea la terapia combinada, otros agentes no tienen por qué administrarse en la misma composición farmacéutica, y, en ciertas realizaciones, debido a las diferentes características físicas y químicas, se administran por vías diferentes. En ciertas realizaciones, la administración inicial se hace según los protocolos establecidos, y después, basándose en los efectos observados, el médico experto modifica la dosis, los modos de administración y los tiempos de administración.

En ciertas realizaciones, las dosis terapéuticamente eficaces varían cuando los fármacos se usan en combinaciones de tratamiento. El tratamiento de combinación incluye además tratamientos periódicos que se inician y se detienen en diversos momentos para ayudar con el tratamiento clínico del paciente. Para las terapias de combinación descritas en la presente memoria, las dosis de los compuestos co-administrados varían dependiendo del tipo de co-fármaco empleado, del fármaco específico empleado, de la enfermedad, el trastorno, o la afección que se está tratando, etc.

Se entiende que, en ciertas realizaciones, el régimen de dosis para tratar, prevenir, o mejorar la(s) afección(es) para la(s) que se busca alivio se modifica de acuerdo con una diversidad de factores. Estos factores incluyen el trastorno que padece el sujeto, así como la edad, el peso, el sexo, la dieta y el estado médico del sujeto. Por tanto, en otras realizaciones, el régimen de dosis realmente empleado varía ampliamente, y por lo tanto se desvía de los regímenes de dosis expuestos en la presente memoria.

Se pretende cubrir las combinaciones de los compuestos (es decir, el compuesto de ciclohexenona para el uso como se describe en la presente memoria) con otros agentes adecuados para el tratamiento de la ateroesclerosis. En ciertas realizaciones, los ejemplos de agentes adecuados para el tratamiento de la ateroesclerosis incluyen, pero sin limitación, lo siguiente: estatinas tales como atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, simvastatina, combinaciones de las mismas, o similares; un fotosensibilizador tal como Motexafina con lutecio; MK-0524A (niacina ER y laropiprant); antioxidantes tales como AC3056; agentes antiinflamatorios tales como esteroides, fármacos antiinflamatorios no esteroideos tales como aspirina, ibuprofeno, y naproxeno u otros inhibidores de COX-2, y similares; inhibidores de ACAT tales como Pactimibe, y similares; agonistas del receptor X hepático tales como Merck T0901317, y similares; o cualquier agente relacionado derivado de los anteriores.

Las combinaciones de los compuestos de ciclohexenona y otros agentes adecuados para el tratamiento de la ateroesclerosis descritos en la presente memoria incluyen terapias y regímenes de tratamiento adicionales con otros agentes en ciertas realizaciones. Tales terapias y regímenes de tratamiento adicionales pueden incluir otros agentes para el tratamiento de la ateroesclerosis en ciertas realizaciones. De manera alternativa, en otras realizaciones, las terapias y regímenes de tratamiento adicionales incluyen otros agentes usados para tratar afecciones secundarias asociadas a la ateroesclerosis o un efecto secundario de dicho agente en la terapia de combinación. En realizaciones adicionales, se administran adyuvantes o potenciadores con una terapia de combinación descrita en la presente memoria.

Se pretende cubrir las combinaciones de compuestos (es decir, el compuesto de ciclohexenona descrito en la presente memoria) con otros agentes de reducción del colesterol de LDL (suplementos alimentarios tales como fitosteroles, o agentes terapéuticos tales como estatinas, ezetimiba, niacina, clofibrato, o similares). En ciertas realizaciones, los ejemplos de agentes de reducción del colesterol de LDL incluyen las estatinas. Las combinaciones de los compuestos de ciclohexenona y otros agentes reductores del colesterol de LDL descritos en la presente memoria incluyen terapias y regímenes de tratamiento adicionales con otros agentes en ciertas realizaciones. Tales terapias y regímenes de tratamiento adicionales pueden incluir otra terapia de reducción del colesterol de LDL en ciertas realizaciones. De manera alternativa, en otras realizaciones, las terapias y regímenes de tratamiento adicionales incluyen otros agentes usados para tratar afecciones secundarias asociadas a las enfermedades o afecciones asociadas al colesterol de LDL o un efecto secundario de dicho agente en la terapia de combinación. En realizaciones adicionales, se administran adyuvantes o potenciadores con una terapia de combinación descrita en la presente memoria.

Ejemplos

Ejemplo 1. Preparación de los compuestos de ciclohexenona ejemplares

Se colocaron cien gramos de micelios, cuerpos fructíferos o una mezcla de ambos de Antrodia camphorata en un matraz. Se añadió una cantidad adecuada de agua y alcohol (disolución de alcohol al 70-100%) al matraz y se agitó a 20-25° C durante al menos 1 hora. La disolución se filtró a través de un filtro y una membrana de 0,45 pm, y se recogió el filtrado como un extracto.

El filtrado de Antrodia camphorata se sometió a un análisis mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). La separación se llevó a cabo en una columna RP18, la fase móvil consistió en metanol (A) y 0,3% de ácido acético (B), y las condiciones del gradiente fueron de 0-10 min al 95%-20% de B, 10-20 min al 20%-10% de B, 20-35 min al 10%-10% de B, 35-40 min al 10%-95% de B, a un caudal de 1 ml/min. El efluente de la columna se monitorizó con un detector UV-visible.

Las fracciones recogidas de 21,2 a 21,4 min se recogieron y se concentraron para proporcionar el compuesto 5, un producto líquido amarillo pálido. El Compuesto 5 se analizó y fue 4-hidroxi-5-(11-hidroxi-3,7,11-trimetildodeca-2,6-dienil)-2,3-dimetoxi-6-metilciclohex-2-enona, con un peso molecular de 408 (fórmula molecular: C²⁴H⁴⁰O⁵). 1H-RMN (CDCla) 5 (ppm)= 1,21, 1,36, 1,67, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,68, 4,05, 5,71 y 5,56. 13C-RMN (CDCla) 5 (ppm): 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 25,67, 26,44, 26,74, 27,00, 30,10, 40,27, 43,34, 59,22, 60,59, 71,8, 120,97, 123,84, 124,30, 131,32, 134,61, 135,92, 138,05, 160,45, y 197,11.

Compuesto 5: 4-hidroxi-5-(11 -hidroxi-3,7,11 -trimetildodeca-2,6-dienil)-2,3-dimetoxi-6-metilciclohex-2-enona (no reivindicado)

Las fracciones recogidas de 23,7 a 24,0 min se recogieron y se concentraron para proporcionar el compuesto 7, un producto líquido amarillo pálido. El Compuesto 7 se analizó y fue 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-5-(11-metoxi-3,7,11-trimetildodeca-2,6-dienil)-6-metilciclohex-2-enona, con un peso molecular de 422 (C²⁵H⁴²O⁵). 1H-RMN (CDCla) 8 (ppm) = 1,21, 1,36, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,24, 3,68, 4,05, 5,12, 5,50, y 5,61. 13C-RMN (CDCh) 5 (ppm): 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 24,44, 26,44, 26,74, 27,00, 37,81,39,81,40,27, 43,34, 49,00, 59,22, 60,59, 120,97, 123,84, 124,30, 135,92, 138,05, 160,45 y 197,12.

Compuesto 7: 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-5-(11-metoxi-3,7,11-trimetildodeca-2,6-dienil)-6-metilciclohex-2-enona (no reivindicado)

Las fracciones recogidas de 25 a 30 min se recogieron y se concentraron para proporcionar 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-6-metil-5-(3,7,11-trimetildodeca-2,6,10-trienil)ciclohex-2-enona (compuesto 1), un producto líquido marrón-amarillo pálido. El análisis del Compuesto 1 mostró la fórmula molecular C24H38O4, peso molecular 390 con un punto de fusión de 48 a 52 °C. Los espectros de RMN mostraron que 1H-RMN (CDCta) 5 (ppm)=1,51,1,67, 1,71, 1,75, 1,94, 2,03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,68, 4,05, 5,07, y 5,14; 13C-RMN (CDCla) 5 (ppm)=12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 25,67, 26,44, 26,74, 27,00, 39,71,39,81,40,27, 43,34, 59,22, 60,59, 120,97, 123,84, 124,30, 131,32, 135,35, 135,92, 138,05, 160,45, y 197,12.

Compuesto 1: 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-6-metil-5-(3,7,11-trimetildodeca-2,6,10-trienil)ciclohex-2-enona

El compuesto 6 (no reivindicado), un metabolito del Compuesto 1, se obtuvo a partir de muestras de orina de ratas alimentadas con el Compuesto 1 en el estudio animal. Se determinó que el Compuesto 6 fue 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-6-metil-5-(ácido 3-metil-2-hexenoico)ciclohex-2-enona, con un peso molecular de 312 (C¹⁶H²⁴O⁶). El Compuesto 4, que se determinó que fue 3,4-dihidroxi-2-metoxi-6-metil-5-(3,7,11-trimetildodeca-2,6,10-trienil)ciclohex-2-enona (peso molecular de 376, C²³H³⁶O⁴), se obtuvo cuando el Compuesto 1 estuvo por encima de 40 °C durante 6 horas.

De manera alternativa, los compuestos ejemplares se pueden preparar a partir de 4-hidroxi-2,3-dimetoxi-6-metilciclohexa-2,5-dienona, o similar.

De forma similar, otros compuestos de ciclohexenona que tienen la estructura

se aíslan de Antrodia camphorata o se preparan de manera sintética o semisintética a partir de los materiales iniciales adecuados. Un experto habitual en la técnica utilizaría fácilmente condiciones adecuadas para tal síntesis.

Ejemplo 2. Modelo de células musculares lisas de rata

Materiales y métodos

Se adquirió la línea celular A7r5 (células musculares lisas aórticas de rata) de Bioresource Collection and Research Center, (Taiwán).

2.1 Ensayo de MTT

El ensayo de MTT se usa habitualmente para determinar la proliferación celular, el porcentaje de células viables, y la citotoxicidad. MTT (bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]2,5-difeniltetrazolio) es un colorante amarillo, que puede ser absorbido por las células vivas y reducirse hasta cristales de formazano azules purpúreos mediante la succinatotetrazolio reductasa en las mitocondrias. La formación de formazano se puede usar, por lo tanto, para evaluar y determinar la tasa de supervivencia de las células. Se añade una disolución de solubilización (normalmente sulfóxido de dimetilo, una disolución de etanol acidificada, o una disolución del detergente dodecilsulfato sódico en ácido clorhídrico diluido) para disolver el producto de formazano púrpura insoluble hasta una disolución coloreada. La absorbancia de esta disolución coloreada se puede cuantificar midiéndola a una cierta longitud de onda (normalmente entre 500 y 600 nm) con un espectrofotómetro. Cuantas más células supervivientes hay, mayor es la absorbancia.

El porcentaje de supervivencia celular (%) = valor de DO del grupo experimental -f valor de DO del grupo de control x 100%.

Procedimiento

1. Adherencia de las células: Se sembraron 2 x 104 *células/ml/pocillo de células A7r5 en una placa de 24 pocillos, y se incubaron a 37 °C durante 24 horas.

2. Dosis: 500 ul/pocillo de diferentes concentraciones del compuesto 1 se pretrataron en medio de cultivo que contenía un 1% de FBS/DMEM durante 20 horas. El DMEM se retiró y se añadió PDGF en un 1% de FBS/DMEM y se incubó a 37 °C durante 24 horas.

3. Ensayo de MTT: Posteriormente, en un medio oscuro se añadieron a cada pocillo de las placas 50 pl/pocillo de 5 mg/ml de MTT y se hizo reaccionar durante 3 horas. A cada mezcla de reacción se le añadieron 500 pl/pocillo de DMSO y se sometieron a vibración durante 5 minutos. Se calculó la tasa de supervivencia de las células respecto de la medida de la absorción a una longitud de onda de 570 nm mediante un lector de ELISA.

2.2 Ensayo de actividad de lactato deshidrogenasa (LDH)

Las células tienen una gran cantidad de lactato deshidrogenasa (LDH). Cuando las células están sanas, la LDH no puede atravesar libremente la membrana celular. Sin embargo, la LDH se libera en el medio circundante tras la pérdida de la integridad de la membrana provocada por la apoptosis o la necrosis, cuando las células exhiben una rápida hinchazón y detienen sus mecanismos fisiológicos. La actividad de la LDH en el medio de cultivo es directamente proporcional al número de células muertas. La viabilidad celular se puede medir cuantitativamente mediante la detección de la absorbancia usando un método colorimétrico a una longitud de onda de 492 nm. El cambio de los valores de la absorbancia proviene del hecho de que la LDH cataliza la conversión de lactato a piruvato con la producción concomitante de NADH. El NADH, en presencia de diaforasa y sal de tetrazolio INT, se usa para controlar la producción catalizada por diaforasa de un producto de formazano rojo. El presente experimento utiliza el Kit de Ensayo de Citotoxicidad (Promega) para llevar a cabo un ensayo de cuantificación de LDH en el medio de cultivo.

Procedimiento

1. Adherencia de las células: Se sembraron 2 x 104 células/ml/pocillo de células A7r5 en una placa de 24 pocillos, y se incubaron a 37 °C durante 24 horas.

2. Dosis: Se formularon 500 ul/pocillo de diferentes concentraciones del compuesto 1 en medio de cultivo que contenía un 10% de FBS/DMEM y se incubaron durante 24 horas. El medio de cultivo de cada pocillo se centrifugó durante 5 minutos a 400 x g y los sobrenadantes (50 pl) se transfirieron a otra placa de 96 pocillos.

3. Ensayo de LDH: Se añadieron 50 pl de disolución mixta de sustrato y se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante 30 min en la oscuridad. Se añadieron 50 pl de disolución de parada para finalizar la reacción. Se midió la absorbancia mediante un lector de ELISA a una longitud de onda de 490 nm.

2.3 Ensayo de rasguño de herida

Procedimiento

1. Se sembraron células A7r5 (5 x 106 células/ml) sobre una placa de cultivo celular de 6 pocillos y se incubaron a 37 °C durante la noche.

2. Se usó PBS 1 x para lavar los pocillos dos veces. Se añadió el Compuesto 1 a diferentes concentraciones en medio de cultivo DMEM que contenía un 1% de FBS y se pretrató durante 20 horas.

3. Se creó un espacio acelular en forma de cruz mediante una punta de pipeta de 200 pl estéril y se lavó dos veces con PBS 1 x .

4. Después de eliminar el PBS, se añadieron 2 ml de PDGF en medio de cultivo DMEM que contenía un 1% de FBS. Las células se fotografiaron mediante un microscopio a las 0, 6, 12 y 24 horas, respectivamente, desde el momento de la adición de PDGF.

Ejemplo 3. El modelo de ateroesclerosis en rata

3.1 Modelo de ligadura de la arteria carótida

Las arterias son vasos que transportan sangre desde el corazón. Las arterias carótidas son vasos sanguíneos que suministran sangre a la cabeza, el cuello y el cerebro. Hay una arteria carótida a cada lado del cuello. La arteria carótida común derecha se ramifica desde el tronco braquiocefálico y se prolonga hasta el lado derecho del cuello. La arteria carótida común izquierda se ramifica desde la aorta y se prolonga hasta el lado izquierdo del cuello. Cada arteria carótida se ramifica en vasos internos y externos cerca de la parte superior del tiroides. Siguiendo el estudio de Hsing-Chun Chung (Disertación, 2008, Universidad del Sur de Taiwán), se llevó a cabo la ligadura de la arteria carótida en la arteria carótida común izquierda en ratones para inducir el engrosamiento de la neoíntima.

Este experimento usó ratones macho C57BL/6J de 8 semanas de edad que tenían un peso corporal de alrededor de 25 g, que se adquirieron del Centro Nacional de Animales de Laboratorio. Estos ratones se mantuvieron en el Centro de Animales de Laboratorio del Centro Médico de Defensa Nacional con un ciclo de 12 horas de oscuridad/12 horas de luz en habitaciones con aire acondicionado (18-26 °C, 30%-70% de humedad).

1. Se administró el Compuesto 1 a los animales mediante una sonda oral tres días antes de la cirugía, y se alimentaron continuamente con el Compuesto 1 durante 28 días mediante una sonda oral.

2. Los ratones macho C57BL/6J (B6) de 8 semanas de edad se anestesiaron con pentobarbital (50 mg/kg de peso corporal). La arteria carótida común izquierda se ligó dos veces mediante una sutura de seda n.° 6 justo en el sitio proximal a la bifurcación carótida.

3. Se administró el Compuesto 1 a los animales después de realizar la sutura. Se sacrificaron 8-10 ratones de cada grupo. Se recogieron muestras de tejido de la arteria carótida y de sangre, y se almacenaron adecuadamente hasta su análisis posterior, que incluyó el análisis comparativo del grupo de tratamiento y del grupo de control.

3.2 Modelo de ateroesclerosis en rata - Ratones con inactivación de ApoE

Se adquirieron ratones ApoE KO de Jackson Laboratory y se mantuvieron en el Centro Nacional de Animales de Laboratorio. El experimento se llevó a cabo en el Centro de Animales de Laboratorio del Centro Médico de Defensa Nacional. A los ratones ApoE KO de 8 semanas de edad se les administró el tratamiento de medicación preventiva tres días antes de alimentarlos con una dieta OpenSource (40% de grasas, 0,5% de colesterol) y se alimentaron continuamente mediante sonda oral hasta el sacrificio. Durante el periodo del experimento, se recogieron los sueros sanguíneos de los carrillos y se midieron los niveles de colesterol, proteína C reactiva (CRP) y el contenido de ROS en los sueros sanguíneos.

Ejemplo 4. Medida del colesterol sérico mediante un Kit de Ensayo de Colesterol

Preparaciones de muestras de colesterol estandarizadas

Procedimiento

1. Se añadieron 50 pl de patrón de colesterol diluido o 50 pl de suero diluido de manera adecuada.

2. Se añadieron 50 pl de cóctel de ensayo recién preparado:

a. 4745 pl de tampón de ensayo

b. 150 pl de detector de colesterol

c. 50 |jl de HRP

d. 50 j l de colesterol oxidasa

e. 5 j l de colesterol esterasa

3. Se incubó a 37 °C durante 30 min en la oscuridad

4. Se midió la fluorescencia mediante un detector de fluorescencia (Excitación: DO 530-580 nm; Emisión: 585­ 595 nm)

Ejemplo 5: Análisis de proteína C reactiva mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)

En primer lugar, se añadieron 200 jl/pocillo de tampón de bloqueo en una placa de ELISA de 96 pocillos y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añadieron 100 jl/pocillo de las muestras de suero diluidas y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente. Después se añadieron 100 jl/pocillo del anticuerpo de detección y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras la finalización de cada etapa de incubación mencionada anteriormente, los pocillos se lavaron 6 veces con 400 jl/pocillo de 0,05 PBS-T (tampón de lavado). Por último, se añadieron 100 jl/pocillo de tetrametilbencidina (TMB) y se incubó durante 15 minutos en la oscuridad, y se añadieron 50 j l de disolución de parada para finalizar la incubación. Se leyó la absorbancia de cada pocillo a 450 nm mediante un lector de ELISA.

Ejemplo 6: Histomorfología

Los tejidos disecados de los animales vivos se fijaron inmediatamente en un 10% de disolución de formalina durante alrededor de 24 horas, seguido de deshidratación mediante el uso de un procesador de tejidos automatizado (Tissue-Processor, Japón). Las muestras se incrustaron con parafina completamente fundida con una consola de dispersión (Tissue-Tek, EE.UU.). Después se enfriaron las muestras durante 15 minutos a 4 °C para solidificarlas. Los bloques de parafina se cortaron en capas de células individuales de 5 jm de grosor. Los cortes de parafina se colocaron en un baño de agua caliente, y se extrajeron y se colocaron en portaobjetos de vidrio. Los portaobjetos se calentaron en un horno a 75 °C durante 30 minutos para fundir la parafina. Para desparafinarlos, los portaobjetos se colocaron en xileno durante 10 minutos y después se sumergieron en etanol del 100% durante 10 minutos. Las etapas de rehidratación se llevaron a cabo colocando posteriormente los portaobjetos durante 10 segundos en etanol del 95%, 85%, y 70%, seguido de lavado con agua corriente durante 5 minutos. Los portaobjetos se sumergieron en una disolución de hematoxilina (Surgipath Co., EE.UU.) durante 2 minutos, se lavaron con agua corriente durante 1 minuto, y después se sumergieron en alcohol ácido (1 ml de HCl concentrado en 1 L de etanol del 70%) durante 1 segundo. Los portaobjetos se sumergieron en una disolución de amoniaco durante 1 segundo, y después se lavaron con agua durante 10 minutos. Los portaobjetos se incubaron en una disolución de Eosina durante 90 segundos, se deshidrataron con etanol del 70%, 80%, 90% y 100%, y después se secaron al aire. Los portaobjetos se montaron mediante el uso de medios de montaje histológico (Histomount Co. EE.UU.). El engrosamiento de la media y la neoíntima en la arteria carótida de ratón lesionada mediante ligadura se examinó con un microscopio óptico.

Ejemplo 7: Evaluación de los vasos sanguíneos

Materiales

Se usaron los siguientes materiales.

1. Microscopio invertido de contraste de fases Olympus

2. Sistema de captura de imágenes CDF 480

3. Meta Imaging serie 5.0

Se muestra la medida de las áreas de un vaso sanguíneo de ratón tras la ligadura en la FIG. 1. LEE = lámina elástica externa; LEI = lámina elástica interna; Área de la media = área definida por LEE - área definida por LEI; Área de la neoíntima = área definida por LEI - área de la luz; Proporción N/M = área de la neoíntima/área de la media.

Ejemplo 8: Evaluación de datos y análisis estadístico

Los datos experimentales se presentaron como la media ± D.E. N representa el número de animales por cada grupo. Los datos se analizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis. Los datos multifactoriales y multigrupo se analizaron mediante ANOVA. Todos los análisis estadísticos usan SPSS 12.0 (SPSS Inc. Chicago, III). Un valor P <0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Resultados

8.1 El Compuesto 1 no exhibe citotoxicidad hacia las células musculares lisas

Se ensayó la citotoxicidad potencial del Compuesto 1 hacia las células musculares lisas. Se añadió individualmente el Compuesto 1 a diferentes concentraciones (que oscilaron en el intervalo de 0 pg/ml-3 pg/ml) a un cultivo de células A7r5 y se incubó durante 24 horas para examinar las tasas de supervivencia de las células y la citotoxicidad. Como se muestra en la FIG. 2A/2B, el efecto citotóxico del Compuesto 1 a las diferentes concentraciones en las células musculares lisas (A7r5) se determinó por medio de un ensayo de MTT (FIG. 2A) y de un ensayo de LDH (FIG. 2B). Estos resultados han demostrado que la purificación de las células no se vio afectada por el tratamiento farmacológico, y no se ha observado citotoxicidad.

8.2 El Compuesto 1 inhibe de manera eficaz la proliferación de células musculares lisas estimulada por PDGF a concentraciones adecuadas

Se investigó el efecto del Compuesto 1 hacia la proliferación de las células musculares lisas (células A7r5). Se añadió el Compuesto 1 a diferentes concentraciones (que oscilaron en el intervalo de 0,01 pg/ml-3 pg/ml) a un cultivo de células A7r5. Después de incubar durante 20 horas, se añadió el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y se incubó durante 24 horas para estimular la proliferación de las células musculares lisas. Se observaron los efectos de los fármacos sobre la proliferación de las células musculares lisas mediante el ensayo de MTT y el ensayo de rasguño de herida.

Los resultados del ensayo de MTT demostraron que el Compuesto 1 ha inhibido significativamente la proliferación de células musculares lisas estimulada por PDGF. Como se muestra en la FIG. 3, el resultado del ensayo de MTT demostró que tras la incubación con PDGF durante 24 horas, la proliferación de las células musculares lisas se redujo de manera eficaz en alrededor del 50% en los grupos de tratamiento con el Compuesto 1 (3 pg/ml).

8.3 El Compuesto 1 inhibe de manera eficaz la migración de células musculares lisas estimulada por PDGF a concentraciones adecuadas

Se investigó la inhibición del Compuesto 1 sobre la migración de las células musculares lisas (células A7r5) en un ensayo de rasguño de herida midiendo la distancia de la migración celular estimulada por PDGF. Se usó el cultivo celular estimulado por PDGF sin tratamiento con el Compuesto 1 como control positivo. El resultado demuestra que la migración de las células musculares lisas inducida por PDGF se inhibió mediante el Compuesto 1 de una manera dependiente de la dosis. Como se muestra en la FIG. 4, el tratamiento con el Compuesto 1 (3 pg/ml) muestra una disminución de alrededor del 50% en la migración de las células musculares lisas.

8.4 El Compuesto 1 redujo de manera eficaz la formación de neoíntima en ratones con ligadura de la arteria carótida

Tres días antes de la operación, los ratones se alimentaron mediante una sonda oral con el Compuesto 1 (60 mg/kg de peso corporal), después se indujo el engrosamiento de la neoíntima mediante la ligadura de la arteria carótida. Los ratones se trataron continuamente durante 28 días para estudiar el efecto del Compuesto 1 sobre la formación de la neoíntima. Para estudiar el efecto de la ligadura de la arteria carótida, se llevó a cabo una tinción de hematoxilina y eosina para examinar el engrosamiento en el área de la media y en el área de la neoíntima de la arteria carótida tras la ligadura, como se muestra en la FIG. 5 y la FIG. 6, respectivamente. La eficacia del tratamiento se evaluó respecto del área de la luz, el área de la neoíntima, el área de la media y la proporción neoíntima/media (proporción N/M). Como se muestra en la FIG. 7, la proporción N/M media fue mayor de 3,0 en los ratones de control. Sin embargo, la proporción N/M media se redujo a 1,0 en los ratones tratados con el Compuesto 1. La reducción de la formación de neoíntima fue estadísticamente significativa (p<0,001).

8.5 Tratamiento del Compuesto 1 en el arco aórtico de ratones Apo KO alimentados con una dieta alta en grasas

Como se muestra en la FIG. 8, se observaron estrías grasas y depósito de colesterol en el arco aórtico, formación de células espumosas, migración de células musculares lisas y formación de placas fibrosas inestables en los ratones deficientes de apoE (cepa C57BL/6J) alimentados con una dieta alta en grasas. Las cantidades de colesterol sanguíneo, proteína C reactiva y contenido de ROS se midieron en los ratones deficientes de apoE alimentados con una dieta alta en grasas y a los que se administró mediante una sonda el Compuesto 1 (60 mg/kg de peso corporal).

La proteína C reactiva (CRP) es una proteína única producida por el hígado, y se denominó así debido a que reacciona con el polisacárido C del neumococo. Los niveles de CRP se elevan en respuesta a las enfermedades inflamatorias agudas, infecciones bacterianas, lesión tisular o neoplasia maligna, y se reducen rápidamente tras la recuperación de las afecciones agudas. Se denomina proteína reactiva de fase aguda, y es un marcador de la inflamación. Por tanto, se midieron los niveles de CRP en los ratones ApoE tratados con el Compuesto 1 para evaluar el tratamiento de la inflamación mediante el Compuesto 1. Como se muestra en la FIG. 9, el Compuesto 1 reduce significativamente la concentración de CRP en los ratones ApoE (p<0,05). Además, también se estudió la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) en los ratones tratados con el Compuesto 1.

Ejemplo 9. Evaluación de la eficacia y seguridad del Compuesto 1 en las medidas de resultado primarias del tratamiento de la ateroesclerosis:

Cambio en la formación de neoíntima después de 8 semanas [periodo de tiempo: Cambio desde el valor inicial y después de 8 semanas de tratamiento]

Medidas de resultado secundarias:

Se mide la seguridad del Compuesto 1 en el aumento de la dosis (acontecimientos adversos y acontecimientos adversos graves). El periodo de tiempo es un año.

Criterios

Criterios de inclusión: sujetos que presentaban hipercolesterolemia primaria tipo IIa o IIb diagnosticada durante al menos 3 meses, en un contexto de prevención primaria con al menos dos factores de riesgo cardiovascular asociados y: (i) "sin tratamiento previo" con ninguna terapia de reducción de lípidos, (ii) o tratados con una estatina (tratamiento en curso o detenido durante las 8 semanas anteriores).

Brazos

Compuesto 1: Experimental. Intervención: Fármaco: Compuesto 1.

Intervención asignada

Fármaco: Compuesto 1. Forma farmacéutica: Cápsula de 100 mg dos veces al día X ciclos de 28 días (tratamiento continuo durante un máximo de 1 año).

Los resultados proporcionarán información sobre si los pacientes que toman el Compuesto 1 pueden reducir la formación de neoíntima. El experimento además proporciona información sobre cómo tratar la ateroesclerosis.

Ejemplo 10: Preparación y mantenimiento de la línea celular HepG2 y del cultivo celular

Se cultivaron células HepG2 en medio MEM alfa (Invitrogen/Gibco BRL, Grand Island, NY, EE.UU.). Las células se cultivaron a 37 °C en un 5% de CO² en medios de cultivo complementados con un 10% de suero bovino fetal (Invitrogen/Gibco BRL) y 100 U/ml de estreptomicina y penicilina (Invitrogen/Gibco BRL). Para el tratamiento, las células se sembraron en placas de seis pocillos a 6,25 x 105 células/pocillo. Al día siguiente, los medios se cambiaron a medios exentos de suero y las células se sometieron a privación de suero durante 24 h. El Compuesto 1 se disolvió en DMSO y se diluyó a la concentración requerida con medio exento de suero. Los cultivos se trataron después con el Compuesto 1 diluido durante los periodos de tiempo indicados. Después del tratamiento, las células se lavaron con solución salina tamponada con fosfato fría y se lisaron mediante el uso de tampón de lisis RIPA que contuvo inhibidores de fosfatasas y proteasas.

Ejemplo 11: Detección de la expresión génica mediante RT-PCR

El nivel de expresión de mARN de LDLR se analizó cuantitativamente mediante RT-PCR. Para la detección de mARN de LDLR hepático, se extrajo el ARN total de HepG2 con el reactivo TRIzol® (Invitrogen, Carlsbad, CA) según las recomendaciones del fabricante. A partir de 1 gg de ARN total, se sintetizaron cADNs mediante el uso de cebadores oligo(dT)20 y transcriptasa inversa SuperScript III® (Invitrogen, Carlsbad, CA). La PCR se realizó mediante el uso de la premezcla de PCR Accupower (Bioneer) y los siguientes cebadores: LDLR directo: 5' CTTTCAACACACAACAGCAGA 3'(SEQ ID NO. 1); LDLR inverso: 5' TGACAGGGCAAAGGCTAAC 3'(SEQ ID NO. 2); GAPDHdirecto: 5' GGTATCGTGGAAGGACTCAT 3' (SEQ ID NO. 3); GAPDH inverso: 5' CCTTGCCCACAGCCTTG 3'(SEQ ID NO. 4). La intensidad de los productos de PCR se cuantificó mediante densitometría con el uso del programa informático Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, MD).

Ejemplo 12: Análisis de inmunotransferencia

Sesenta microgramos de proteína total en lisado celular, que se midieron mediante el uso del ensayo de Bradford (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), se resolvieron en geles de poliacrilamida-SDS del 12,5%. La electroforesis se llevó a cabo a una tensión constante de 180 V durante 50 minutos, y se transfirió a una membrana de PVDF a una corriente constante de 280 mA durante 90 minutos. Las transferencias se bloquearon con un 3% de BSA y se sondearon con una dilución de anticuerpos 1:1.000 hacia fosfo-p44/42 (ERK1/2)(Thr202/Tyr204) (Cell Signaling Technology, EE.UU.), p44/42MAPK(ERK1/2) (Cell Signaling Technology, EE.UU.) o p-actina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), después anticuerpo secundario conjugado a peroxidasa de rábano (HRP), y se detectaron mediante el kit de sustrato de 3,3'-diaminobencidina (DAB) para peroxidasa (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Las bandas inmunorreactivas se cuantificaron mediante densitometría con el uso del programa informático Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, MD).

Ejemplo 13: Lipoproteínas plasmáticas en hámster dorado sirio tras el tratamiento con el Compuesto 1

Se investigan las características cuantitativas y cualitativas de la lipoproteína en el plasma de hámsteres sirios macho. Los hámsteres sirios macho se obtienen del Centro Nacional de Animales de Laboratorio. Este experimento usa hámsteres sirios macho, maduros sexualmente, que pesan 100-120 g y tienen una edad de 8 semanas a lo largo de este estudio. Estos hámsteres se mantienen en habitaciones con aire acondicionado (18-26 °C, 30%-70% de humedad) con un ciclo de luz de 14 h. Los hámsteres tienen acceso libre a agua y alimento hasta el día antes del sacrificio. Tras una adaptación de dos semanas, los animales se pesan y se dividen estadísticamente en grupos (n=10 por grupo). Se miden los pesos corporales de los animales (Vibra DH-R 1500N, Japón) cada semana. Se calcula y se registra el consumo de alimentos (g/jaula). Se añade el Compuesto 1 al alimento y se proporciona a los hámsteres en una cantidad de una, dos y cuatro veces más que la cantidad sugerida por el instituto experimental durante 8 semanas. Muestras de sangre

Se extrae sangre (2-3 ml/animal) en tubos que contienen EDTA y gentamicina (concentraciones finales 1 mg/ml y 0,005%, respectivamente).

Calendario de recogida de sangre: En las semanas 0 y 4, se utiliza la toma de muestra orbital; en la semana 8, se utiliza la toma de muestra en el sacrificio.

Manipulación de las muestras de sangre: Después de reposar a temperatura ambiente durante 2 horas, las muestras de sangre se centrifugan durante 10 minutos a 3600 rpm para recoger muestras de suero para el análisis. Después de finalizar el experimento en la semana 8, los animales se anestesian con dióxido de carbono y se sacrifican. Se recogen muestras de hígado, se pesan, se dividen y se almacenan a -80 °C para el análisis posterior de proteínas y enzimas. Los datos experimentales se expresan como la media /- desviación estándar (D.E.). Los datos de cada grupo experimental se analizan usando el análisis unidireccional de la varianza (ANOVA) con la prueba de Duncan para comparar la diferencia entre cada grupo (p < 0,05).

Aislamiento de lipoproteínas

Las lipoproteínas de plasma o suero de hámster y humano se subfraccionan basándose en su densidad hidratada mediante el procedimiento de ultracentrifugación isopícnica en gradiente de densidad en conocido en la técnica. Los gradientes se forman en tubos Ultraclear del rotor Beckman SW41-Ti (o similar). Al finalizar la ultracentrifugación, se recogen sucesivamente fracciones de 0,4 ml. Las fracciones de lipoproteínas se dializan exhaustivamente en tubos Spectrapor durante 24 horas a 4 °C con una disolución que contiene NaCl, HEPES, NaN3 EDTA y gentamicina, pH 7,4.

Se registran las concentraciones de lípidos en el plasma mezclado de hámsteres.

Ejemplo 14: Efectos del Compuesto 1 sobre las concentraciones séricas de colesterol de LDL

El objetivo principal de este estudio es investigar los efectos de un compuesto de ciclohexenona (Compuesto 1) sobre los niveles de LDL-colesterol en sujetos sanos con hipercolesterolemia moderada.

Tipo de estudio: Intervencional

Diseño del Estudio: Asignación: Aleatorizada

Clasificación del criterio de evaluación: Estudio de seguridad/eficacia

Modelo de intervención: Asignación en paralelo

Enmascaramiento: Enmascaramiento doble (sujeto, cuidador, investigador)

Propósito primario: Tratamiento

Medidas de resultado primarias:

Cambio desde el valor inicial en los niveles sanguíneos de LDL-colesterol a los 4 meses [periodo de tiempo: 4 meses] [designado como cuestión de seguridad: no]

Medidas de resultado secundarias:

Cambio desde el valor inicial en los niveles sanguíneos de vit. C, vit. E, polifenoles y MDA a los 4 meses [periodo de tiempo: 4 meses] [designado como cuestión de seguridad: no]

Eligibilidad

Edades elegibles para el estudio: 18 años a 55 años

Sexos elegibles para el estudio: Ambos

Se aceptan voluntarios sanos: Sí

Criterios

Criterios de inclusión: Hombres o mujeres, edad 18-55

El sujeto tiene un peso estable durante al menos tres meses antes del inicio del estudio

El sujeto es capaz y está dispuesto a cumplir el protocolo y está de acuerdo en proporcionar su consentimiento por escrito

El sujeto está afiliado a un sistema de seguridad social

El sujeto está dispuesto a ser incluido en el registro nacional de voluntarios que se prestan a la investigación biomédica

Ejemplo 15: Formulación parenteral

Para preparar una composición farmacéutica parenteral adecuada para la administración mediante inyección, se disuelven 100 mg de un compuesto o su sal descritos en la presente memoria en DMSO, y después se mezclan con 10 mL de solución salina estéril del 0,9%. La mezcla se incorpora en una forma farmacéutica unitaria adecuada para la administración mediante inyección.

Ejemplo 16: Formulación oral

Para preparar una composición farmacéutica para administración oral, se mezclaron 100 mg de un Compuesto 1 ejemplar con 100 mg de aceite de maíz. La mezcla se incorporó en una unidad de dosis oral en una cápsula, que es adecuada para la administración oral.

En ciertos casos, se mezclan 100 mg de un compuesto descrito en la presente memoria con 750 mg de almidón. La mezcla se incorpora en una unidad de dosis oral, tal como una cápsula de gelatina dura, que es adecuada para la administración oral.

Ejemplo 17: Formulación sublingual (pastilla dura)

Para preparar una composición farmacéutica para la administración bucal, tal como una pastilla dura, se mezclan 100 mg de un compuesto descrito en la presente memoria con 420 mg de azúcar en polvo mezclado con 1,6 mL de jarabe de maíz ligero, 2,4 mL de agua destilada, y 0,42 mL de extracto de menta. La mezcla se combina suavemente y se vierte en un molde para formar una pastilla adecuada para la administración bucal.

Ejemplo 18: Composición para inhalación

Para preparar una composición farmacéutica para la administración mediante inhalación, se mezclan 20 mg de un compuesto descrito en la presente memoria con 50 mg de ácido cítrico anhidro y 100 mL de disolución de cloruro sódico del 0,9%. La mezcla se incorpora en una unidad de administración mediante inhalación, tal como un nebulizador, que es adecuado para la administración mediante inhalación.

Ejemplo 19: Formulación de gel rectal

Para preparar una composición farmacéutica para la administración rectal, se mezclan 100 mg de un compuesto descrito en la presente memoria con 2,5 g de metilcelulosa (1500 mPa), 100 mg de metilparabeno, 5 g de glicerina y 100 mL de agua purificada. La mezcla de gel resultante se incorpora después en unidades de administración rectal, tales como jeringas, que son adecuadas para la administración rectal.

Ejemplo 20: Composición de gel tópico

Para preparar una composición farmacéutica de gel tópico, se mezclan 100 mg de un compuesto descrito en la presente memoria con 1,75 g de hidroxipropilcelulosa, 10 mL de propilenglicol, 10 mL de miristato de isopropilo y 100 mL de alcohol purificado USP. La mezcla de gel resultante se incorpora después en recipientes, tales como tubos, que son adecuados para la administración tópica.

Ejemplo 21: Composición de disolución oftálmica

Para preparar una composición farmacéutica de disolución oftálmica, se mezclan 100 mg de un compuesto descrito en la presente memoria con 0,9 g de NaCl en 100 mL de agua purificada y se filtra mediante el uso de un filtro de 0,2 micras. La disolución isotónica resultante se incorpora después en unidades de administración oftálmica, tales como recipientes de colirio, que son adecuados para la administración oftálmica.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de la ateroesclerosis en un sujeto, en donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura:

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno o azufre;

R es un hidrógeno o C(=O)alquilo C¹-C⁸ ;

cada R¹, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo o (CH2)m-CH3;

R⁴ es alquilo C¹-C⁸ , alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸ , arilo, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C¹-C⁸, alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸, cicloalquilo C³-C⁸, y haloalquilo C¹-C⁸ ;

m = 1-12; y

n=1 -12; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,

2. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en donde dicho compuesto inhibe la proliferación o migración de células musculares lisas estimuladas por PDGF, reduce la formación de neoíntima, o inhibe la producción o progresión de una o más lesiones ateroescleróticas en la vasculatura de un sujeto.

3. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en donde la ateroesclerosis está asociada a arteriopatía coronaria, aneurisma, arterioesclerosis, infarto de miocardio, embolia, ictus, trombosis, angina de pecho, inflamación de la placa vascular, ruptura de la placa vascular, enfermedad de Kawasaki, calcificación o inflamación.

4. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en donde dicho compuesto reduce el colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (LDL), o mantiene un nivel de colesterol normal de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) en el sujeto.

5. Una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad vascular arterioesclerótica relacionada con la inflamación, o en la reducción de la proteína C reactiva para prevenir o tratar una enfermedad vascular arterioesclerótica inflamatoria, en donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura:

en donde cada X e Y es independientemente oxígeno o azufre;

R es un hidrógeno o C(=O)alquilo C¹-C⁸ ;

cada R¹, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo o (CH2)m-CH3;

R⁴ es alquilo C¹-C⁸ , alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸ , arilo, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C¹-C⁸, alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸, cicloalquilo C³-C⁸, y haloalquilo C¹-C⁸ ;

m = 1-12; y

n=1 -12; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,

6. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde dicho compuesto, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía parenteral, vía intravenosa, vía oral, o mediante inyección.

7. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde dicho compuesto se aísla de Antrodia camphorata, o se prepara de manera sintética o semisintética.

8. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde R es un hidrógeno, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5, o C(=O)CH3.

9. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde cada R¹, R² y R³ es independientemente un hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, u octilo.

10. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 9, en donde cada R¹ y R² es independientemente un hidrógeno o metilo.

11. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en donde R⁴ es alquilo C¹-C⁸ sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C¹-C⁸, alquenilo C²-C⁸, alquinilo C²-C⁸, cicloalquilo C³-C⁸, y haloalquilo C¹-C⁸.

12. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 11, en donde R⁴ es CH²CH=C(CH³)².

13. La composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde dicho compuesto es