ES2881878T3 - Composición para el tratamiento del cáncer que combina el anticuerpo anti-CD26 y otro antineoplásico - Google Patents

Composición para el tratamiento del cáncer que combina el anticuerpo anti-CD26 y otro antineoplásico Download PDF

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Abstract

Un conjugado que comprende un anticuerpo anti-CD26 o un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo, que está unido a triptolida.

Description

DESCRIPCIÓN
Composición para el tratamiento del cáncer que combina el anticuerpo anti-CD26 y otro antineoplásico
Referencia cruzada
La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente n.° 2015-179672 presentada en Japón el 11 de septiembre de 2015.
Campo técnico
La presente invención se refiere a una composición para el tratamiento del cáncer, que comprende un anticuerpo anti-CD26 como principio activo, combinado con gemcitabina. La presente invención también se refiere al campo de un conjugado anticuerpo y fármaco (ADC, del inglés 'antibody-drug conjugate').
Antecedentes de la técnica
Se ha informado que, en la quimioterapia del mesotelioma, una terapia con un solo antineoplásico presenta una respuesta al fármaco tan baja como el 20 % o menos (Referencia no perteneciente a patente 1). Por consiguiente, se ha combinado una pluralidad de fármacos para un tratamiento más eficaz del mesotelioma. Por ejemplo, se ha informado que un uso combinado de cisplatino y pemetrexed ejerce un efecto terapéutico más excelente que el uso de cada fármaco solo (Referencia no perteneciente a patente 2). Por esta razón, el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed se aplica actualmente a la quimioterapia estándar del mesotelioma (Referencia
no perteneciente a patente 3). Sin embargo, incluso con esta terapia simultánea, el período de supervivencia promedio es solo un poco menos de 12 meses. Por lo tanto, es necesario desarrollar una quimioterapia más eficaz. Por otro lado, la terapia simultánea con cisplatino y pemetrexed suprime el crecimiento de células cancerosas mediante un mecanismo que implica citotoxicidad. Existe una demanda de terapia con menor efecto adverso en los pacientes, tal como el tratamiento sin platino.
La gemcitabina es un derivado nucleósido de la desoxicitidina, en la que el hidrógeno en la posición 2' de la cadena de azúcar está sustituido con flúor, que actúa como una inhibición de la síntesis de ADN. Este fármaco es de excelente seguridad (Referencia no perteneciente a patente 4) y se utiliza ampliamente como antineoplásico. Sin embargo, el efecto de la gemcitabina sola es insuficiente sobre el mesotelioma. Se espera que la combinación de gemcitabina con un antineoplásico adecuado conduzca al desarrollo de una terapia de combinación más eficaz. Por ejemplo, dado que ya se ha demostrado que pemetrexed y gemcitabina tienen un efecto anticanceroso en uso individual, se ha intentado una terapia combinada de estos fármacos, pero cuyo efecto en la prolongación del período de supervivencia promedio en el tratamiento del mesotelioma fue solo el mismo efecto que el uso individual de pemetrexed (Referencia no perteneciente a patente 5). También se ha informado que, al comparar el tratamiento con la combinación de cisplatino y pemetrexed con el tratamiento con la combinación de cisplatino y gemcitabina, el tratamiento con la combinación de cisplatino y pemetrexed del mesotelioma fue más excelente (Referencia no perteneciente a patente 6). Además, en una combinación de epirrubicina y gemcitabina, el uso combinado apenas mejoró el efecto (Referencia no perteneciente a patente 7). Asimismo, se ha informado que el uso combinado de gemcitabina y un antitumoral con alcaloides de la vinca, la vinorelbina, no mejora el efecto (Referencia no perteneciente a patente 8). Por consiguiente, estos ensayos previos sobre el uso combinado de gemcitabina no tuvieron éxito en la mejora procedente de la combinación.
Se reconoce que el uso simultáneo de docetaxel y gemcitabina produce una ligera mejora en el efecto debido a la combinación que prolonga el período de supervivencia promedio a 15 meses (Referencia no perteneciente a patente 9). Se ha informado que el uso simultáneo de gemcitabina con un metotrexato antifolato prolonga ligeramente el período de supervivencia promedio a 19,4 meses (Referencia no perteneciente a patente 10). Sin embargo, estos antineoplásicos combinados con gemcitabina tienen una actividad no selectiva de células y, por lo tanto, podrían inducir efectos adversos.
También se ha estudiado el uso simultáneo en cánceres distintos del mesotelioma. Por ejemplo, el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed tiene un efecto excelente sobre el cáncer de pulmón (Referencia no perteneciente a patente 11). Un inhibidor de EGFR, gefitinib (Iressa), también se utiliza con mucha frecuencia y se requiere para desarrollar una terapia simultánea con fármacos distintos al cisplatino y la gemcitabina.
Otra estrategia para mejorar el efecto terapéutico de la terapia simultánea con cisplatino y pemetrexed emplea una combinación adicional con fármacos adicionales. Dado que la terapia estándar del mesotelioma causa anemia, se puede administrar eritropoyetina, pero la eritropoyetina no potencia el efecto citotóxico de la combinación de cisplatino y pemetrexed en líneas celulares de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 12). Se ha informado que un inhibidor de la histona desacetilasa (HDAC), el vorinostat, no prolonga el efecto de prolongación de la vida, en comparación con un placebo, en pacientes con mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 13). Se ha informado que un inhibidor de HDAC, el valproato, utilizado como fármaco anticonvulsivo potencia la actividad antitumoral del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed en experimentos que utilizan líneas celulares de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 14). Sin embargo, el valproato a menudo provoca efectos adversos tales como náuseas o vómitos y, por lo tanto, no se considera adecuado para su administración a pacientes con cáncer que sienten cansancio intenso.
Se ha intentado el uso combinado con tratamiento genético, y se ha informado que la transfección de células con el gen SOCS-1 potencia el efecto citotóxico del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed en experimentos que utilizan líneas celulares de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 15). Se sabe que, en la mayoría de los pacientes con mesotelioma, el gen p53 es normal pero está inactivado debido a una deficiencia en p14 (ARF) o p16 (INK4A). Se ha informado que la introducción del gen p53 en líneas celulares de mesotelioma potenció de manera sinérgica el efecto citotóxico del cisplatino o el pemetrexed y, particularmente, que la introducción del gen p53 en la pleura de ratones a los que se les trasplantó mesotelioma potenció de manera intrapleural la actividad antitumoral del cisplatino (Referencia no perteneciente a patente 16). Sin embargo, el tratamiento clínico con transferencia génica tiene dificultades en la actualidad y es complicado para su uso práctico y, por lo tanto, existe una demanda de un método más conveniente y eficaz.
La expresión de un factor de crecimiento de células endoteliales vasculares (VEGF, del inglés 'vascular endothelial cell growth factor') se ha observado en la mayoría de las biopsias de mesotelioma, sugiriendo la posibilidad de que el VEGF esté implicado en el crecimiento del mesotelioma. Por consiguiente, el efecto de un anticuerpo anti-VEGF, el bevacizumab, en la terapia estándar se ha estudiado en ensayos clínicos de fase II (Referencia no perteneciente a patente 17). Sin embargo, el bevacizumab no pudo potenciar el efecto terapéutico de la terapia simultánea estándar con cisplatino y pemetrexed. La adición de un compuesto de bajo peso molecular, un inhibidor del receptor de tirosina cinasa (RTK, del inglés 'receptor tyrosine kinase'), el sunitinib, a la terapia estándar simultánea con cisplatino y pemetrexed se ha estudiado en 10 casos de cáncer no microlítico y 1 caso de mesotelioma en ensayos clínicos de fase I, pero no se observó interacción medicinal (Referencia no perteneciente a patente 18).
Se ha informado que el interferón p mejora de manera sinérgica la actividad citotóxica del cisplatino o el pemetrexed en experimentos que utilizan líneas celulares de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 19). Este efecto probablemente se basa en la expresión de p53 inducida por interferón p. Sin embargo, en su uso práctico, los efectos adversos tales como fiebre o malestar asociados con la administración del interferón p pueden convertirse en un problema.
La presentación clínica del mesotelioma se caracteriza por la invasión pleural (Referencia no perteneciente a patente 20). La disnea se manifiesta claramente como un síntoma debido a la acumulación de derrame pleural causado por la invasión pleural. Aunque el mesotelioma se caracteriza por la invasión, la actividad contra la invasión no ha sido suficientemente analizada. Se ha informado que la introducción del gen SOCS-1 antes mencionada en células de mesotelioma aumenta de manera sinérgica la actividad antiinvasiva de la combinación de cisplatino y pemetrexed (Referencia no perteneciente a patente 21). La mesotelina es una glucoproteína de 40 kDa sobreexpresada en el mesotelioma, el cáncer de páncreas y el cáncer de ovario, y se ha informado que promueve la invasión de líneas celulares de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 22). Sin embargo, no hay ningún informe sobre un fármaco eficaz de un inhibidor de compuesto de bajo peso molecular o un anticuerpo contra la mesotelina. También se ha informado que la proteína plasmática A asociada al embarazo (PAPPA, del inglés 'pregnancy-associated plasma protein A') promueve la invasión en experimentos que utilizan líneas celulares de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 23). Sin embargo, no existe ningún informe sobre una sustancia eficaz para el tratamiento del mesotelioma dirigido a la PAPPA.
Por consiguiente, no existe un método de tratamiento prácticamente aplicable que pueda resolver los problemas en el tratamiento simultáneo del mesotelioma con cisplatino y pemetrexed.
Los conjugados de anticuerpo y fármaco se encuentran en un proceso de uso práctico como terapia dirigida, principalmente para tumores malignos. La conjugación de un agente que tiene actividad anticancerosa con un anticuerpo que se une específicamente a las células tumorales tiene las ventajas de que el agente se introduce de manera eficaz en las células tumorales así como que se reducen los efectos adversos debidos a la toxicidad en las células no tumorales. Los conjugados de anticuerpo y fármaco se preparan mediante los siguientes procedimientos: un anticuerpo monoclonal de ratón contra un antígeno que se expresa de manera específica en células tumorales se humaniza mediante una técnica de modelado por ordenador, y se selecciona un fármaco que tenga una actividad antitumoral muy elevada en las células tumorales diana, que se conjuga con el anticuerpo humanizado mediante un agente de reticulación. En la actualidad, dos conjugados de anticuerpo y fármaco (indicaciones: leucemia mieloide aguda y linfoma maligno) fueron aprobados como productos farmacéuticos por la FDA de Estados Unidos, y 35 conjugados de anticuerpo y fármaco están en ensayo clínico desde 2013. En Japón no se ha aprobado ningún conjugado de anticuerpo y fármaco. Aunque los conjugados de anticuerpo y fármaco son prometedores como antineoplásicos en términos de potenciación de la eficacia y reducción de los efectos adversos, solo se han puesto en práctica unos pocos conjugados de anticuerpo y fármaco porque se requieren múltiples etapas de investigación, tales como (1) selección de un antígeno y preparación de un anticuerpo monoclonal que tenga una especificidad favorable, (2) humanización del anticuerpo, (3) transferencia del anticuerpo a las células tumorales, (4) selección de un fármaco que se una, (5) selección de un agente de reticulación y (6) seguridad. El mesotelioma maligno es una enfermedad con mal pronóstico, incluso mediante el tratamiento de modalidad combinada, por lo que se requiere el desarrollo de un método de tratamiento novedoso. Sin embargo, no se ha aprobado como fármaco ningún conjugado de anticuerpo y fármaco para el mesotelioma maligno.
CD26 es una proteína transmembrana y es una molécula coestimuladora implicada en la activación de los linfocitos T. En los últimos años se ha revelado una elevada expresión de CD26 en varios tumores malignos, incluyendo el mesotelioma maligno. Debido a la especificidad del cáncer de CD26, se esperaba el efecto antitumoral de CD26 (Bibliografías de patente 1 y 2). Dado que CD26 se sobreexpresa de manera particular en el mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 24), se considera que un anticuerpo anti-CD26 es altamente seguro. Realmente, un anticuerpo anti-CD26 suprime el crecimiento de células de mesotelioma (Referencia no perteneciente a patente 25 y bibliografía de patente 3), y un anticuerpo anti-CD26 humanizado, YS110, ya ha completado un ensayo clínico de fase I en Francia, que ha demostrado su seguridad (Referencia no perteneciente a patente 26). Sin embargo, no se ha informado del uso simultáneo de un anticuerpo anti-CD26 con otros fármacos.
Yamamoto et al. British Journal of Cancer (2014) 110, 2232-2245, divulgan un anticuerpo anti-CD26 humanizado para su uso en el tratamiento del mesotelioma pleural maligno con el agonista del receptor 4 de somatostatina (SSTR4) L-803087.
Listado de citas
Bibliografía de patentes
Bibliografía de Patente 1: Publicación internacional n.° WO02/14462
Bibliografía de Patente 2: Publicación internacional n.° WO2007/014169
Bibliografía de Patente 3: Publicación internacional n.° WO2008/114876
Referencia no perteneciente a patente
Referencia no perteneciente a patente 1: Ong T. y Vogelzang N. J., 1996
Referencia no perteneciente a patente 2: Ellis P. et al., 2006; Jaenne P. A., 2006
Referencia no perteneciente a patente 3: Vogelzang et al., 2003, Stahel R. A. et al., 2010, Boons C.C.L.M., 2013 Referencia no perteneciente a patente 4: Toschi L. et al., 2005
Referencia no perteneciente a patente 5: Janne P. A. et al., 2008
Referencia no perteneciente a patente 6: Shukuya T. et al., 2014
Referencia no perteneciente a patente 7: Okuno S. H. et al., 2008
Referencia no perteneciente a patente 8: Zauderer M. G. et al., 2014
Referencia no perteneciente a patente 9: Ralli M. et al., 2009
Referencia no perteneciente a patente 10 : Kuribayashi K. et al., 2013
Referencia no perteneciente a patente 11 : Sun J. M. et al., J Clin Oncol 33 (22) 24502015
Referencia no perteneciente a patente 12 : Palumbo C. et al., 2008
Referencia no perteneciente a patente 13 : Zauderer y Krug, 2012
Referencia no perteneciente a patente 14 : Vandermeets F. et al., 2009
Referencia no perteneciente a patente 15 : Iwahori H. et al. 2013
Referencia no perteneciente a patente 16 : Li Q. et al., 2012
Referencia no perteneciente a patente 17 : Dowell J. E. et al., 2012
Referencia no perteneciente a patente 18 : Camidge D. R. et al., 2013
Referencia no perteneciente a patente 19 : Li Q. et al., 2013
Referencia no perteneciente a patente 20 : Robinson y Lake, 2005
Referencia no perteneciente a patente 21 : Iwamoto H. et al., 2013
Referencia no perteneciente a patente 22 : Servais E. L. et al., 2012
Referencia no perteneciente a patente 23 : Huang J. et al., 2013
Referencia no perteneciente a patente 24 : Amatya V. J. et al., 2011
Referencia no perteneciente a patente 25 : Inamoto T. et al., 2007
Referencia no perteneciente a patente 26 : Angebin E. et al.
Referencia no perteneciente a patente 27 : Yamada K. et al., Plos One, 29 de abril de 2013; 8 (4): e62304
Sumario de la invención
Como se ha descrito anteriormente, para resolver los problemas de la terapia simultánea con cisplatino y pemetrexed, actualmente se están realizando muchos estudios, tales como la combinación con otros fármacos, en la quimioterapia estándar del mesotelioma. Sin embargo, su uso práctico se enfrenta a muchos desafíos. El efecto antitumoral de la terapia simultánea estándar con cisplatino y pemetrexed se basa en un efecto citotóxico y, por lo tanto, en la adición de un fármaco adicional a la terapia estándar, se requiere que el fármaco que se añade no se base en la citotoxicidad y sea altamente seguro y más eficaz. Existe una demanda adicional de un nuevo método de tratamiento altamente seguro que no se base en la citotoxicidad, a diferencia de la terapia estándar, y que se base en una terapia sin platino.
Aunque la característica patológica del mesotelioma es la invasión local, pocos estudios de fármacos para el mesotelioma se centraron en la invasión. Los inventores consideraron que podría proporcionarse un método de tratamiento más eficaz mediante el desarrollo de un método para el tratamiento del mesotelioma centrado en un efecto inhibidor de la invasión.
El CD26 se sobreexpresa en el mesotelioma y se considera muy seguro. Realmente, un anticuerpo anti-CD26 suprime el crecimiento de las células del mesotelioma y, por esto, se encuentra en un ensayo clínico de fase I en pacientes con mesotelioma. Por consiguiente, los inventores han estudiado un método de tratamiento utilizando la terapia simultánea estándar con cisplatino y pemetrexed en combinación con un anticuerpo anti-CD26 para el crecimiento e invasión de líneas celulares de mesotelioma. Como resultado, se ha revelado que la supresión del crecimiento del mesotelioma mediante la terapia estándar simultánea con cisplatino y pemetrexed se potencia cuando se combina con el anticuerpo anti-CD26. Los inventores también han descubierto que el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed suprimió una invasión solo ligeramente, mientras que la combinación del anticuerpo anti-CD26 con el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed inhibió la invasión de manera sinérgica.
Los inventores han analizado además las moléculas implicadas en la mejora del efecto inhibidor de la invasión utilizando una micromatriz de células de mesotelioma tratadas con anticuerpo anti-CD26 y han encontrado la implicación de AAMP, ESAM, FUT8, RAC1, FYN y RNF20.
Los inventores han estudiado el efecto de combinación de CD26 con varios fármacos y han descubierto que el uso simultáneo de un anticuerpo CD26 humanizado y gemcitabina o gefitinib contra el crecimiento de líneas celulares de mesotelioma puede proporcionar un método altamente eficaz y seguro para tratar el mesotelioma.
Los inventores han estudiado además los conjugados de anticuerpo y fármaco utilizando un anticuerpo anti-CD26. Como resultado, se ha obtenido con éxito un nuevo conjugado de anticuerpo y fármaco (Y-TR1) que muestra un efecto muy elevado en las células de mesotelioma maligno positivas para CD26 mediante la conjugación de un anticuerpo anti-CD26 (YS110) con triptolida que se sabe que tiene una fuerte actividad antitumoral pero que no se ha utilizado como conjugado de anticuerpo y fármaco, a través de un agente de reticulación divalente.
Por consiguiente, la presente invención se refiere a un fármaco simultáneo de un anticuerpo anti-CD26 y gemcitabina, y un conjugado que comprende un anticuerpo anti-CD26 unido a triptolida. De manera más específica, la presente invención se refiere a los siguientes aspectos:
(1) Un conjugado que comprende un anticuerpo anti-CD26 o un fragmento de unión a antígeno del mismo unido a triptolida.
(2) El conjugado de (1), en donde el anticuerpo anti-CD26 o el fragmento del mismo es un anticuerpo humanizado o un fragmento del mismo.
(3) El conjugado de (2), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7.
(4) El conjugado de (2) o (3), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14.
(5) El conjugado de uno cualquiera de (2) a (4), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 90 % o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 90 % o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18.
(6) El conjugado de uno cualquiera de (2) a (5), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos desde la posición 20 a la posición 465 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos desde la posición 21 a la posición 234 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18.
(7) El conjugado de uno cualquiera de (2) a (6), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo se une a uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 19 a 28.
(8) El conjugado de (2), en donde el anticuerpo humanizado se produce mediante una cepa denominada s604069.YST-pABMC148 (x411) con el número de depósito PTA-7695 de la American Type Culture Collection (ATCC).
(9) El conjugado de uno cualquiera de (1) a (8), en donde el fragmento se selecciona del grupo que consiste en Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv y F(ab')2.
(10) Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-CD26 o un fragmento de unión a antígeno del mismo y gemcitabina
(11) La composición farmacéutica de (10), en donde el anticuerpo anti-CD26 o el fragmento del mismo es un anticuerpo humanizado o un fragmento del mismo.
(12) La composición farmacéutica de (11), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7.
(13) La composición farmacéutica de (11), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14.
(14) La composición farmacéutica de (11), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 90 % o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 90 % o más de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18.
(15) La composición farmacéutica de (11), en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo comprende al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos desde la posición 20 a la posición 465 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos desde la posición 21 a la posición 234 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18.
(16) La composición farmacéutica de uno cualquiera de (11) a (15) en donde el anticuerpo humanizado o el fragmento del mismo se une a uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 19 a 28.
(17) La composición farmacéutica de uno cualquiera de (11) a (16), en donde el anticuerpo humanizado se produce mediante una cepa denominada s604069.YST-pABMC148 (x411) con el número de depósito PTA-7695 de la American Type Culture Collection (ATCC).
(18) La composición farmacéutica de uno cualquiera de (11) a (17) en donde el fragmento se selecciona del grupo que consiste en Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv y F(ab')2.
(19) El conjugado de cualquiera de (1) a (9) o la composición farmacéutica de cualquiera de (10) a (18) para su uso en el tratamiento del mesotelioma maligno.
(20) El conjugado o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con (19), que inhibe el crecimiento de una célula de mesotelioma maligno.
(21) El conjugado o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con (19), que lisa una célula de mesotelioma maligno.
Efectos ventajosos de la invención
La combinación de un anticuerpo CD26 humanizado con gemcitabina potencia de manera sinérgica un efecto inhibidor en la invasión que es la característica patológica y problema radical del mesotelioma, y/o mejora un efecto inhibidor en el crecimiento celular del mesotelioma y, por lo tanto, se considera muy útil en el tratamiento del mesotelioma. Debido a que el uso simultáneo de gemcitabina y un anticuerpo anti-CD26 es una terapia sin platino, puede ser una terapia con medicamentos altamente segura para el mesotelioma. Asimismo, el anticuerpo anti-CD26 humanizado conjugado con triptolida puede suprimir de manera eficaz el crecimiento de células de mesotelioma maligno en una cantidad menor de triptolida. Por consiguiente, puede proporcionarse un antitumoral menos tóxico y altamente eficaz.
Breve descripción de los dibujos
[Figura 1] La figura 1 es un gráfico de las masas inalteradas de YS110 no conjugado e Y-TR1 (SMCC) medidas mediante espectrometría de masas MALDI-TOFF. La figura 1A muestra YS110 no conjugado (valor medido: 147012,7), y la figura 1B muestra Y-TR1 (SMCC) (valor medido: 151815,6).
[Figura 2] La figura 2 es un gráfico de la unión de Y-TR1 a una línea celular de mesotelioma maligno de clon 12 de MSTO (CD26 positivo). Anticuerpo primario: Y-TR1, anticuerpo secundario: IgG antihumana de conejo conjugada con FITC. A 10 pg/ml o más, Y-TR1 presentó unión inalterada a las células positivas para CD26. La ordenada indica la intensidad de la fluorescencia y la abscisa indica el número de células.
[Figura 3] La figura 3 es un gráfico de la toxicidad de triptolida para líneas celulares de mesotelioma maligno y leucemia de linfocitos T. A: MSTO de tipo silvestre (ts); B: Clon 12 de MSTO; C: JMN; D: Jurkat CD26(-); E: Jurkat CD26(+). La ordenada indica la intensidad de la fluorescencia (%) frente al control y la abscisa indica la concentración (nM) de triptolida.
[Figura 4] La figura 4 es un gráfico de citotoxicidad in vitro de TR1 en una línea celular de mesotelioma maligno. La ordenada indica la intensidad de la fluorescencia (%) frente al control y la abscisa indica la concentración (nM) de TR1.
[Figura 5] La figura 5 es un gráfico de citotoxicidad in vitro de Y-TR1 en líneas celulares de mesotelioma maligno y leucemia de linfocitos T. La figura 5A muestra la citotoxicidad de Y-TR1 en una línea celular de mesotelioma maligno positiva para CD26, clon 12 de MSTO, comparando varios enlazadores utilizados. Y-TR1 utilizando SMCC presentó la mayor citotoxicidad. La figura 5B muestra la citotoxicidad de TR1 hacia la línea celular JMN de mesotelioma maligno positiva para CD26 en comparación con YS110 no conjugado. La figura 5C es un gráfico que muestra la citotoxicidad in vitro de Y-TR1 hacia el clon 12 de MSTO de células de mesotelioma maligno positivas para CD26, que se compara con la de la línea celular MSTO de tipo silvestre (ts) negativa para CD26. Y-TR1 presentó una mayor citotoxicidad contra el clon 12 de MSTO de células de mesotelioma maligno positivas para CD26 que contra la línea celular MSTO de tipo silvestre (ts) negativa para CD26.
[Figura 6] La figura 6 es un gráfico que compara los valores de CI50 de TR1 no conjugado e Y-TR1 en concentraciones molares.
[Figura 7] La figura 7 es un gráfico de la actividad antitumoral in vivo de Y-TR1 medida utilizando modelos de ratón de xenoinjerto NOD/SCID que han sido injertados con una línea celular JMN de mesotelioma maligno positivo para CD26. Y-TR1 se administró por vía intraperitoneal a 4 mg/kg/dosis tres veces por semana. Y-TR1 se administró 9 veces en total desde el día de la administración de 1 * 107 células JMN por vía subcutánea (día 0). Se comparó un volumen tumoral promedio estimado en el día 55 entre 3 grupos (grupo de control, grupo de administración de YS110 y grupo de administración de Y-TR1) mediante la prueba de comparación múltiple de diferencias de mínimos cuadrados protegidas (PLSD, del inglés 'protected least-square differences') de Fisher. El volumen tumoral promedio del grupo de administración de Y-TR1 fue notablemente inferior que el del grupo de control y el del grupo de administración de YS110 (p <0,05). La ordenada indica el volumen tumoral promedio estimado (mm3), y la abscisa indica el grupo.
[Figura 8] La figura 8 es un gráfico de la expresión de CD26 en una línea celular de mesotelioma. El nombre de cada célula probada se indica arriba del gráfico.
[Figura 9] La figura 9 es un gráfico de las curvas de respuesta a la dosis de cisplatino y pemetrexed. La ordenada indica células viables (turbidez: DO) y la abscisa indica la concentración de cisplatino o pemetrexed. Los gráficos de la izquierda son los resultados del uso de células MESO1 y los gráficos de la derecha son los resultados del uso de células H2452. Los gráficos superiores son resultados de cisplatino y los gráficos inferiores son resultados de pemetrexed.
[Figura 10] La figura 10 es un gráfico que muestra el efecto inhibidor del crecimiento de MESO1 del uso combinado de YS110 con cisplatino (Cis) o pemetrexed (PMT). La figura 10A muestra los resultados de cisplatino y la figura 10B muestra los resultados de pemetrexed. La ordenada indica células viables (turbidez: DO) y la abscisa indica la cantidad de cada fármaco administrado. Anti-CD26 representa el anticuerpo anti-CD26 YS110. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
[Figura 11] La figura 11 es un gráfico del efecto inhibidor del crecimiento de H2452 del uso combinado de YS110 con cisplatino (Cis) o pemetrexed (PMT). La figura 11A muestra los resultados de cisplatino y la figura 11B muestra los resultados de pemetrexed. La ordenada indica células viables (turbidez: DO) y la abscisa indica la cantidad de cada fármaco administrado. Anti-CD26 representa el anticuerpo anti-CD26 YS110. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001).
[Figura 12] La figura 12 es un gráfico del uso de la combinación inhibidora del crecimiento de cisplatino (Cis) y pemetrexed (PMT) simultánea con YS110. La figura 12A muestra los resultados de las células MESO1 y la figura 12B muestra los resultados de las células H2452. La ordenada indica células viables (turbidez: DO) y la abscisa indica el fármaco administrado. Anti-CD26 representa el anticuerpo anti-CD26 YS110. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
[Figura 13] La figura 13 es un gráfico y una fotografía que muestran el efecto de YS110 en la inhibición del crecimiento de células JMN in vivo mediante cisplatino (Cis) o pemetrexed (PMT). En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas. * p <0,05, **p <0,01.
[Figura 14] La figura 14 es un gráfico y una fotografía que muestran el efecto de YS110 en la inhibición del crecimiento de células JMN in vivo mediante el uso simultáneo de cisplatino (Cis) y pemetrexed (PMT). En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
[Figura 15] La figura 15 es un gráfico y una fotografía que muestran el efecto de YS110 en la inhibición del crecimiento de células MESO1 in vivo mediante el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed. En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas. * p <0,05, **p <0,01.
[Figura 16] La figura 16 es un gráfico y una fotografía que muestran el efecto de YS110 en la inhibición del crecimiento de células H2452 in vivo mediante el uso simultáneo de cisplatino (Cis) y pemetrexed (PMT). En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
[Figura 17] La figura 17 es un gráfico que muestra la actividad de cisplatino (Cis) o pemetrexed (PMT) en la invasión celular. La ordenada indica el número de células invasoras y la abscisa indica la concentración (|jM) de cada fármaco. Los gráficos de la izquierda muestran los resultados del uso de células MESO1 y los gráficos de la derecha muestran los resultados del uso de células H2452. Los gráficos superiores muestran los resultados del cisplatino y los gráficos inferiores muestran los resultados del pemetrexed. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
[Figura 18] La figura 18 es un gráfico del efecto inhibidor de la invasión celular del uso simultáneo de cisplatino (Cis) y pemetrexed (PMT). La ordenada indica el número de células invasoras y la abscisa indica la concentración (j M) de cada fármaco. Los gráficos superiores muestran los resultados del uso de células MESO1 y los gráficos inferiores muestran los resultados del uso de células H2452. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001.
[Figura 19] La figura 19A es un gráfico que muestra el efecto inhibidor de la invasión celular MESO1 del uso combinado de YS110 y cisplatino (Cis). La ordenada indica el número de células invasoras y la abscisa indica la concentración (|jM) de cada fármaco. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001. La figura 19B es una tabla de la interacción analizada de cisplatino con YS110 para un efecto inhibidor de la invasión de células MESO1.
[Figura 20] La figura 20A es un gráfico que muestra el efecto inhibidor de la invasión celular H2452 del uso combinado de YS110 y cisplatino (Cis). La ordenada indica el número de células invasoras y la abscisa indica la concentración (j M) de cada fármaco. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001. La figura 20B es una tabla de la interacción analizada de cisplatino con YS110 para un efecto inhibidor de la invasión de células H2452.
[Figura 21] La figura 21 es un gráfico de la curva de respuesta a la dosis de gemcitabina frente a una línea celular de mesotelioma. La ordenada indica células viables (turbidez: DO) y la abscisa indica la concentración de gemcitabina.
[Figura 22] La figura 22A es un gráfico del efecto del uso combinado de YS110 y gemcitabina (Gem) en el crecimiento de células del mesotelioma sarcomatoide MESO1. La ordenada indica el número de células (* 103 células), y la abscisa indica la cantidad de cada fármaco administrado. * p <0,05, **p <0,01. La figura 22B es una tabla de interacción analizada de gemcitabina con YS110 para un efecto inhibidor del crecimiento de células MESO1.
[Figura 23] La figura 23A es un gráfico del efecto del uso combinado de YS110 y gemcitabina (Gem) en el crecimiento de células JMN del mesotelioma sarcomatoide. La ordenada indica el número de células (* 103 células), y la abscisa indica la cantidad de cada fármaco administrado. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001. La figura 23B es una tabla de interacción analizada de gemcitabina con YS110 para un efecto inhibidor del crecimiento de células JMN.
[Figura 24] La figura 24A es un gráfico del efecto del uso combinado de YS110 y gemcitabina (Gem) en el crecimiento de células del mesotelioma epitelioide H2452. La ordenada indica el número de células (* 103 células), y la abscisa indica la cantidad de cada fármaco administrado. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001. La figura 24B es una tabla de interacción analizada de gemcitabina con YS110 para un efecto inhibidor del crecimiento de células H2452.
[Figura 25] La figura 25A es un gráfico del efecto del uso combinado del anticuerpo anti-CD26 y gemcitabina (Gem) en el crecimiento de células del mesotelioma epitelioide H226. La ordenada indica el número de células (* 103 células), y la abscisa indica la cantidad de cada fármaco administrado. * p <0,05, **p <0,01, ***p <0,001. La figura 25B es una tabla de interacción analizada de gemcitabina con YS110 para un efecto inhibidor del crecimiento de células H226.
[Figura 26] La figura 26 es un gráfico del efecto del uso combinado de gemcitabina (Gem) con cisplatino (Cis) y pemetrexed (PMT). La ordenada indica células viables (turbidez: DO) y la abscisa indica el fármaco administrado. El nombre de la línea celular utilizada se indica encima del gráfico. El cuadrado negro indica un grupo de control. El círculo negro indica un grupo de administración de gemcitabina de 3 * 10-8 M. El triángulo negro indica un grupo de administración de gemcitabina de 1 * 10-9 M.
[Figura 27] La figura 27 es un gráfico y una fotografía que muestran el efecto del uso combinado de YS110 y gemcitabina en el crecimiento in vivo de células epitelioides del mesotelioma H226 y una tabla de la interacción de gemcitabina con YS110. En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas.
[Figura 28] La figura 28 es un gráfico y una fotografía que muestran el efecto del uso combinado de YS110 con gemcitabina en el crecimiento in vivo de células JMN del mesotelioma sarcomatoide, y una tabla de la interacción de gemcitabina con YS110. En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas.
[Figura 29] La figura 29 es un gráfico que muestra el efecto del uso combinado de YS110 y cisplatino y pemetrexed en el crecimiento in vivo de células HCC827 de la línea celular de cáncer de pulmón positivas para CD26. En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado. La fotografía muestra muestras tumorales extirpadas.
[Figura 30] La figura 30 es un gráfico que muestra el efecto del uso combinado de YS110 y gefitinib en el crecimiento in vivo de células HCC4006 de la línea celular de cáncer de pulmón positivas para CD26. En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado.
[Figura 31] La figura 31 es un gráfico que muestra el efecto del uso combinado de YS110 y gefitinib en el crecimiento in vivo de células HCC827 de la línea celular de cáncer de pulmón positivas para CD26. En el gráfico, la ordenada indica el peso del tumor (mg) y la abscisa indica el fármaco administrado.
[Figura 32] La figura 32 es un gráfico que compara los efectos inhibidores del crecimiento de cisplatino y pemetrexed para células MESO1 y células JMN. La ordenada indica la tasa de inhibición del crecimiento (%) y la abscisa indica la concentración (M) de cada fármaco. La figura 32A muestra los resultados que comparan el efecto inhibidor del crecimiento de cisplatino. La figura 32B muestra los resultados que comparan el efecto inhibidor del crecimiento de pemetrexed.
[Figura 33] La figura 33 es un gráfico del efecto inhibidor del crecimiento de gemcitabina comparando células MESO1 y células JMN, y comparando células H2452 y células H226. La figura 33A muestra los resultados de comparar el efecto inhibidor del crecimiento de gemcitabina entre MESO1 y JMN. La figura 33B muestra los resultados de comparar el efecto inhibidor del crecimiento de gemcitabina entre H2452 y H226.
Descripción de las realizaciones
1. Anticuerpo
El término "anticuerpo" en el presente documento es una molécula de inmunoglobulina capaz de unirse de manera específica a una diana tal como un hidrato de carbono, un polinucleótido, un lípido o un anticuerpo a través de al menos un sitio de reconocimiento de antígeno en regiones variables de la molécula de inmunoglobulina. El anticuerpo utilizado en el presente documento incluye un anticuerpo policlonal completo o un anticuerpo monoclonal así como un fragmento del mismo (Fab, Fab', F(ab')2, Fv, etc.), un fragmento variable monocatenario (scFv), sus variantes, una proteína de fusión que contiene una fracción de anticuerpo y otras estructuras modificadas de una molécula de inmunoglobulina que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno. El anticuerpo puede ser cualquier clase de anticuerpo tal como IgG, IgA o IgM (o una subclase de las mismas) y no necesita ser de una clase particular. Las inmunoglobulinas se dividen en diferentes clases de acuerdo con las secuencias de aminoácidos de los dominios constantes de cadena pesada del anticuerpo. Las cinco clases normales de inmunoglobulinas son IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, algunas de los cuales pueden subdividirse en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Los correspondientes dominios constantes de cadena pesada de las inmunoglobulinas de diferentes clases se denominan a, 8, £, y y M, respectivamente. Las respectivas estructuras de subunidades y estructuras tridimensionales son bien conocidas para las inmunoglobulinas de diferentes clases.
El "anticuerpo monoclonal" descrito en el presente documento se refiere a un anticuerpo obtenido de una población celular que produce anticuerpos sustancialmente homogéneos. De manera específica, los anticuerpos individuales contenidos en la población celular son idénticos excepto por mutantes naturales que posiblemente podrían estar presentes. El anticuerpo monoclonal se dirige a un solo sitio de antígeno y es muy específico. En contraste con un anticuerpo policlonal normal contra diferentes antígenos que se dirige a diferentes determinantes antigénicos (epítopos), cada anticuerpo monoclonal se dirige a un único determinante antigénico de un antígeno. El modificador "monoclonal" se refiere a las propiedades del anticuerpo obtenido de la población celular que produce anticuerpos sustancialmente homogéneos y no debe interpretarse que requiera un método de producción de anticuerpos particular. El anticuerpo monoclonal utilizado de acuerdo con la presente invención se puede preparar mediante un método de ADN recombinante como se describe en, por ejemplo, la patente de Estados Unidos n.° 4.816.567. El anticuerpo monoclonal también se puede aislar de una biblioteca de fagos preparada utilizando una técnica descrita en, por ejemplo, McCafferty et al., 1990, Nature, 348: 552-554.
El anticuerpo "humanizado" utilizado en el presente documento se refiere a una forma de un anticuerpo no humano (por ejemplo, de ratón) que es una inmunoglobulina quimérica específica o un fragmento de la misma que contiene una cadena de inmunoglobulina o una secuencia mínima procedente de inmunoglobulina no humana (Fv, Fab, Fab', F(ab')2, u otras secuencias parciales de unión a antígeno de un anticuerpo, etc.). Algunos anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpos del receptor) en las que los restos procedentes de la región determinante de la complementariedad (CDR, del inglés 'complementarity determining region') de un receptor se reemplazan con restos procedentes de CDR de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como un ratón, una rata o un conejo que tenga la especificidad, afinidad y habilidad deseadas. En algunos casos, los restos de la región marco (FR, del inglés 'framework region') de Fv de la inmunoglobulina humana se reemplazan con los correspondientes restos no humanos. Algunos anticuerpos humanizados contienen al menos una, generalmente dos, regiones variables procedentes de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como, un ratón, una rata o un conejo que tengan la especificidad, afinidad y/o capacidad deseada, y uno o más restos de la región marco de Fv y/o uno o más restos de CDR de Fv se reemplazan con los restos humanos correspondientes (es decir, restos procedentes de secuencias de anticuerpos humanos). Más generalmente, al menos una pluralidad de restos de la región marco de Fv pueden reemplazarse en una o más regiones variables del anticuerpo humanizado. El anticuerpo humanizado puede contener además un resto que no se encuentra ni en el anticuerpo receptor ni en la CDR injertada o en la secuencia marco y puede contener un resto para mejorar y optimizar aún más el rendimiento del anticuerpo.
Algunos anticuerpos humanizados contienen de manera sustancial la totalidad de al menos una, generalmente dos, regiones variables. En estas regiones variables, todas o sustancialmente todas las CDR corresponden a CDR de inmunoglobulina no humana, y todas o sustancialmente todas las FR son FR de secuencias consenso de inmunoglobulinas humanas. Algunos anticuerpos humanizados contienen de manera sustancial la totalidad de al menos una, generalmente dos, regiones variables. En estas regiones variables, una gran mayoría de los restos de aminoácidos de CDR proceden de las CDR de inmunoglobulinas no humanas, y uno o más restos de aminoácidos de FR proceden de las FR de secuencias consenso de inmunoglobulinas humanas. Mucho más preferentemente, el anticuerpo humanizado puede contener al menos una porción de una región constante (Fc) de inmunoglobulina humana o un dominio (generalmente, una inmunoglobulina humana). Algunos anticuerpos humanizados tienen una región Fc modificada como se describe en la publicación internacional n.° WO99/58572. Algunas formas del anticuerpo humanizado tienen una o más (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5 o 6) CDR alteradas del anticuerpo original. Estas CDR también se denominan una o más CDR "procedentes" de una o más CDR del anticuerpo original.
La "región variable" de un anticuerpo se refiere a regiones variables de cadena ligera o cadena pesada del anticuerpo, cada una de ellas sola o en combinación. Las regiones variables de cadena pesada y cadena ligera están compuestas cada una de cuatro regiones marco (FR) unidas por tres regiones determinantes de la complementariedad (CDR) también conocidas como regiones hipervariables. Las CDR de cada cadena se mantienen muy próximas por las FR y contribuyen a la formación de un sitio de unión a antígeno del anticuerpo, junto con las CDR de la otra cadena. Se utilizan al menos dos técnicas para determinar las CDR: (1) un enfoque basado en la variabilidad de secuencia entre diferentes especies (por ejemplo, Kabat etal., Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5.a ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); y (2) un enfoque basado en estudios cristalográficos de complejos de antígeno y anticuerpo (Al-Lazikani et al., (1997) J. Molec. Biol. 273: 927-948)). En ocasiones se utilizan en la técnica la combinación de estos dos enfoques para determinar las CDR.
La "región constante" de un anticuerpo se refiere a regiones constantes de cadena ligera o cadena pesada del anticuerpo, cada una de ellas sola o en combinación.
La expresión epítopo "que se une específicamente a" un anticuerpo se comprende completamente en la materia, y los métodos para determinar la unión específica también son bien conocidos en la materia. Cuando una molécula reacciona o actúa mutuamente con una célula o sustancia en particular con más frecuencia, más rápidamente, durante más tiempo y/o con mayor afinidad en comparación con su reacción o acción mutua con otras células o sustancias, se considera que la molécula presenta una "unión específica". Cuando un anticuerpo se une a una diana con mayor afinidad o actividad de unión, más rápidamente y/o durante más tiempo en comparación con su unión a otras sustancias, el anticuerpo "se une específicamente" a la diana. Por ejemplo, un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo de CD26 es un anticuerpo que se une a este epítopo de CD26 con mayor afinidad o actividad de unión, más rápidamente y/o durante más tiempo en comparación con su unión a otros epítopos de CD26 o epítopos que no son de CD26. Debe entenderse de esta definición que, por ejemplo, un anticuerpo (o una fracción o un epítopo) que se une específicamente a una primera diana puede o no unirse específicamente a una segunda diana. Por lo tanto, la "unión específica" no requiere necesariamente (aunque puede incluir) unión exclusiva.
La "célula hospedadora" incluye cada célula individual o un cultivo celular que puede servir como receptor de un vector para la incorporación de un inserto polinucleotídico, o que ya ha sido el receptor. La célula hospedadora incluye la descendencia de una sola célula hospedadora. No se requiere necesariamente que la progenie sea idéntica a una célula parental original (morfológicamente o en complementos de ADN genómico) debido a una mutación natural, accidental o planificada. La célula hospedadora incluye una célula transfectada in vivo con el polinucleótido de la presente invención.
El anticuerpo "aislado", anticuerpo, polinucleótido, vector, célula o composición es un anticuerpo, un anticuerpo, un polinucleótido, un vector, una célula o una composición en una forma que no se encuentra de manera natural. El anticuerpo aislado, anticuerpo, polinucleótido, vector, célula o composición incluye aquella purificada en una forma que ya no se encuentra de manera natural. En una determinada realización, el anticuerpo aislado, polinucleótido, vector, célula o composición es sustancialmente pura.
El "tratamiento" utilizado en el presente documento es un enfoque para obtener resultados clínicos beneficiosos o deseados. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados para el objeto de la presente invención incluyen, aunque sin limitación, el alivio de uno o más síntomas, disminución de la extensión de una enfermedad, un estado estabilizado (es decir, no agravado) de la enfermedad, retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, recuperación o remisión de la enfermedad y alivio (parcial o total), independientemente de que sea detectable o no detectable. El "tratamiento" también significa un aumento en la esperanza de vida de un paciente con respecto a la posible esperanza de vida del paciente sin el tratamiento.
La "cantidad eficaz" es una cantidad suficiente para lograr resultados clínicos beneficiosos o deseados, incluyendo los resultados clínicos. La cantidad eficaz se puede administrar en una o más dosis. La cantidad eficaz de un conjugado de anticuerpo anti-CD26, un anticuerpo anti-CD26 y un antineoplásico adicional, o similar descrito en el presente documento para el objeto de la presente invención es una cantidad suficiente para retrasar la progresión de una afección asociada con el crecimiento tumoral. Como se entiende en la materia, por ejemplo, la cantidad eficaz del conjugado de anticuerpo anti-CD26 o del anticuerpo anti-CD26 y el antineoplásico adicional puede variar de acuerdo con, o depender de, particularmente, otros factores tales como el historial médico de un paciente y el tipo (y/o cantidad) del conjugado de anticuerpo anti-CD26 o el antineoplásico adicional utilizado.
El "vehículo farmacéuticamente aceptable" o el "excipiente farmacéuticamente aceptable" utilizado en el presente documento incluye cualquier material que sea capaz de mantener la actividad biológica de un principio activo cuando se combina con el principio activo, no reacciona con el sistema inmunitario de un sujeto de prueba cuando se administra, y no es tóxico para el sujeto de prueba. Los ejemplos de los mismos incluyen, aunque sin limitación, todos los vehículos farmacéuticos estándar, incluyendo solución salina tamponada con fosfato, agua, emulsiones tales como emulsiones de aceite/agua y diversos tipos de humectantes. Un diluyente preferido para la administración por pulverización o la administración parenteral es la solución salina tamponada con fosfato o la solución salina fisiológica (0,9 %). Una composición que contiene dicho vehículo se formula mediante un método convencional bien conocido (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a edición, A. Gennaro ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; y Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20.a Ed. Mack Publishing, 2000).
Anticuerpo anti-CD26
En una determinada realización, el anticuerpo anti-CD26 utilizado en el presente documento se une específicamente a CD26 humano. En una determinada realización, el anticuerpo anti-CD26 descrito en el presente documento se une al mismo epítopo que el de un anticuerpo monoclonal de ratón 14D10. En una determinada realización, el anticuerpo anti-CD26 descrito en el presente documento tiene la capacidad de bloquear la unión del anticuerpo monoclonal de ratón 14D10 a CD26 humano (compite con el anticuerpo monoclonal de ratón 14D10) en un ensayo competitivo. En una determinada realización, el anticuerpo anti-CD26 descrito en el presente documento tiene la capacidad de bloquear la unión de un anticuerpo monoclonal de ratón 1F7 a CD26 humano (compite con el anticuerpo monoclonal de ratón 1F7) en un ensayo competitivo. El ensayo competitivo se puede realizar mediante la puesta en contacto de un anticuerpo de prueba con un epítopo o antígeno inmovilizado, el lavado posterior de los anticuerpos no unidos, posteriormente la puesta en contacto de un anticuerpo 14D10 o un anticuerpo 1F7 marcado con el epítopo o antígeno, y el lavado de los anticuerpos no unidos, seguido de la detección del anticuerpo 14D10 o del anticuerpo 1F7 unido. Cuando la unión del anticuerpo 14D10 o el anticuerpo 1F7 al epítopo o el antígeno en contacto con el anticuerpo de prueba disminuye en comparación con la unión del anticuerpo 14D10 o el anticuerpo 1F7 a un epítopo o antígeno de control sin contacto con el anticuerpo de prueba, se puede confirmar que el anticuerpo de prueba tiene la capacidad de bloquear la unión del anticuerpo 14D10 o el anticuerpo 1F7 (por competir con el anticuerpo 14D10 o el anticuerpo 1F7) en el ensayo competitivo.
Los ejemplos de la afinidad de unión del anticuerpo anti-CD26 utilizado en el presente documento para CD26 humano incluyen la afinidad que tiene una constante de disociación (es decir, Kd) de menos de 10‘5 M, menos de 5 * 10‘5 M, menos de 10‘6 M, menos de 5 * 10‘7 M, menos de 10‘7 M, menos de 5 * 10‘8 M, menos de 10‘8 M, menos de 5 * 10' 9 M, menos de 10‘9 M, menos de 5 * 10‘10 M, menos de 10‘10 M, menos de 5 * 10’11 M o menos de 10’11 M. La constante de disociación también puede ser 10‘15 M o más, 5 * 10‘15 M o más, 10‘14 M o más, 5 * 10‘14 M o más, 10­ 13 M o más, 5 * 10‘13 M o más, 10‘12 M o más, 5 * 10‘12 M o más, 10’11 M o más, 5 * 10’11 M o más, 10‘10 M o más o 5 * 10‘10 M o más. Los métodos para determinar la afinidad se conocen en la materia. La afinidad de unión se puede determinar utilizando, por ejemplo, un biosensor BIAcore, un biosensor KinExA, un ensayo de proximidad de centelleo, ELISA, inmunoensayo ORIGEN (IGEN International, Inc.), extinción de la fluorescencia, transferencia de fluorescencia y/o presentación en levaduras. La afinidad se puede seleccionar utilizando un bioensayo adecuado.
Un método para determinar la afinidad de unión de un anticuerpo contra CD26 es la medición de la afinidad de un fragmento Fab monofuncional del anticuerpo. Para obtener el fragmento Fab monofuncional, el anticuerpo, por ejemplo, IgG, se puede escindir con papaína o expresar mediante una técnica de recombinación. La afinidad del fragmento Fab anti-CD26 de un anticuerpo monoclonal se puede determinar utilizando un sistema de resonancia de plasmón de superficie (SPR, del inglés 'surface plasmon resonance') (BIAcore 3000™, BIAcore Inc., Piscataway, NJ). Se utiliza un chip SA (estreptavidina) de acuerdo con el manual de instrucciones del proveedor. El CD26 biotinilado se puede diluir con HBS-EP (HEPES 100 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, P20 al 0,005 %) y se inyecta a una concentración de 0,005 mg/ml en el chip. Se logran dos intervalos de densidad de antígeno utilizando un tiempo de flujo variable a través de los canales de chip individuales: de 10 a 20 unidades de respuesta (UR) para pruebas cinéticas detalladas y de 500 a 600 UR para concentraciones. Una mezcla de solución tampón de elución Pierce y NaCl 4 M (2:1) elimina de manera eficaz el Fab unido mientras mantiene la actividad de CD26 en el chip durante 200 o más inyecciones. Se puede utilizar una solución tampón HBS-EP como solución tampón de ejecución en todos los ensayos BIAcore. Se inyectan diluciones en serie (de 0,1 a 10 x KD estimada) de la muestra de Fab purificada a 100 pl/min durante 2 minutos, y normalmente es aceptable un tiempo de disociación de hasta 30 minutos. La concentración de la proteína Fab se puede determinar mediante ELISA y/o electroforesis SDS-PAGE utilizando Fab estándar que tiene una concentración conocida (determinada mediante análisis de aminoácidos). Una tasa de asociación (kon) y una tasa de disociación (koff) de una tasa de reacción se obtienen al mismo tiempo utilizando el programa BIAevaluation y ajustando los datos a un modelo de unión de Langmuir 1:1 (Lofas & Johnsson, 1990). Un valor de la constante de disociación (KD) de equilibrio se calcula como koff/kon.
En una determinada realización, la presente invención se refiere a un conjugado de anticuerpo anti-CD26 y triptolida o una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo anti-CD26 y gemcitabina, que inhibe el crecimiento de células que expresan CD26. La presente invención también abarca una realización en la que el conjugado o la composición es útil en el tratamiento de una afección (enfermedad o trastorno, etc.) asociada con la expresión de CD26, por ejemplo, mesotelioma maligno. En una determinada realización, el conjugado o la composición de la presente invención puede tener una o más características de: (a) unión a CD26, (b) regulación de la actividad de CD26, (c) detención del ciclo celular de las células CD26+ en el punto de control G1/S, (d) inhibición del crecimiento de células que expresan CD26 (por ejemplo, células de mesotelioma malignas), (e) inhibición de la unión de CD26 a la matriz extracelular y/o (f) ser útil en el tratamiento de una afección asociada con la expresión de CD26. En una determinada realización, la afección asociada con la expresión de CD26 es una enfermedad o un trastorno asociado con la sobreexpresión de CD26. En una determinada realización, la afección asociada con la expresión de CD26 está mediada al menos parcialmente por CD26. En una determinada realización, la afección asociada con la expresión de CD26 es una afección asociada con el crecimiento de células que expresan CD26. En una determinada realización, la enfermedad o el trastorno es un cáncer (por ejemplo, mesotelioma maligno, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de hígado u otros tumores malignos que implican la expresión de CD26).
En una determinada realización, el anticuerpo contenido en el conjugado o la composición de la presente invención comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7. En una determinada realización, el anticuerpo contenido en el conjugado o la composición de la presente invención comprende una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14, y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7.
En una determinada realización, el anticuerpo contenido en el conjugado o la composición de la presente invención comprende al menos 5 aminoácidos consecutivos, al menos 8 aminoácidos consecutivos, al menos aproximadamente 10 aminoácidos consecutivos, al menos aproximadamente 15 aminoácidos consecutivos, al menos aproximadamente 20 aminoácidos consecutivos, al menos aproximadamente 30 aminoácidos consecutivos o al menos aproximadamente 50 aminoácidos consecutivos de una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de las SEQ ID NO: 1 a 14.
La presente invención proporciona además un conjugado de anticuerpo anti-CD26 y triptolida o una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo anti-CD26 y gemcitabina, que incluye un fragmento de la secuencia del anticuerpo descrita en el presente documento (por ejemplo, una cualquiera de las SEQ ID NO: 1 a 7, SEQ ID NO: 8 a 14, SEQ ID NO: 15 y s Eq ID NO: 16). En una determinada realización, el anticuerpo incluye un fragmento de la secuencia del anticuerpo descrita en el presente documento, que tiene una longitud de al menos aproximadamente 50 aminoácidos, al menos aproximadamente 75 aminoácidos o al menos aproximadamente 100 aminoácidos.
SEQ ID NO: 15
EVQLVX1SGX2X3X4X5QPGX6X7LRLX8CX9ASGX10X11LX12TYGVHWVRQAPG
KGLEWX13GVIWGX14GRTDYDX15X16EMSRVTISX17DX18SKX19TX2 0YLQX2
1NSLRAEDTAVYYCX22RX2 3RHDWFDYWGQGTTVTVSS
En la secuencia descrita anteriormente, X1 es E o Q, X2 es A o G, X3 es G o E, X4 es L o V, X5 es V, K o E, X6 es G o E, X7 es T o S, X8 es T o S, X9 es T o K, X10 es F o Y, X11 es S o T, X12 es T, N o S, X13 es V o M, X14 es G o D, X15 es A o S, X16 es A o S, X17 es K o R, X18 es N o T, X19 es S o N, X20 es V o A, X21 es M o L, X22 es V, M o T, y X23 es N o S.
SEQ ID NO: 16
XIIX2X3TQSPSSLSX4X5X6GX7RX8TIX9CX10ASQX11IRNX12LNWYQQKPGQ
APRLLIYYSSNLXI3X14GVPX15RFSGSGSGTDFTLTISRLX16X17EDX18AX19
YYCQQSX2 0KLPX21TFGSGTKVEIK
En la secuencia descrita anteriormente, X1 es D o E, X2 es L o E, X3 es M o L, X4 es A o V, X5 es S o T, X6 es L, P o A, X7 es D o E, X8 es V o A, X9 es T o S, X10 es S o R, X11 es G o D, X12 es S o N, X13 es H o Q, X14 es S o T, X15 es S, D o A, X16 es E o Q, X17 es P o A, X18 es F o V, X19 es T, A o I, X20 es I o N, y X21 es F o L.
La tabla 1 muestra las secuencias de aminoácidos de las variantes de VL humanizadas X376 (SEQ ID NO: 1), X377 (SEQ ID NO: 2), X378 (SEQ ID NO: 3), X379 (SEQ ID NO: 4), X380 (SEQ ID NO: 5), X381 (SEQ ID NO: 6) y X394 (SEQ ID NO: 7). Los esquemas con numeración de Kabat y numeración secuencial corresponden a regiones variables de cadena ligera.
La tabla 2 muestra las secuencias de aminoácidos de las variantes de VH humanizadas X384 (SEQ ID NO: 8), X385 (SEQ ID NO: 9), X386 (SEQ ID NO: 10), X387 (SEQ ID NO: 11), X388 (SEQ ID NO: 12), X399 (SEQ ID NO: 13) y X420 (SEQ ID NO: 14). La tabla muestra los esquemas tanto de la numeración secuencial como de la numeración de Kabat. El esquema de numeración de Kabat incluye 82a, 82b y 82c.
[Tabla 1] [Tabla 2]
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El anticuerpo puede comprender además la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17 o un fragmento o una variante de la misma. En una determinada realización, el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17. En una determinada realización, el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17 excepto por una secuencia señal (los expertos en la materia comprenderán fácilmente que en una determinada realización, la secuencia señal del anticuerpo se escinde del anticuerpo). En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región variable en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17. En una determinada realización, el anticuerpo incluye un anticuerpo (o un fragmento del mismo) que tiene al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 % o al menos aproximadamente un 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17. En una determinada realización, el anticuerpo incluye un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, que tiene una longitud de al menos aproximadamente 10 aminoácidos, al menos aproximadamente 25 aminoácidos, al menos aproximadamente 50 aminoácidos, al menos aproximadamente 75 aminoácidos o al menos aproximadamente 100 aminoácidos. En una determinada realización, el antígeno se une a CD26 humano.
Cadena pesada (SEQ ID NO: 17)
MEWSWVFLFFLSVTTGVHSEVQLVESGAGVKQPGGTLRLTCTASGFSLTTYGVHWVR
QAPGKGLEWVGVIWGDGRTDYDAAFMSRVTISKDTSKSTVYLQMNSLRAEDTAVYYC
MRNRHDWFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK
VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVS
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS
NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW
ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSPGK
El anticuerpo comprende además la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 o un fragmento o una variante de la misma. En una determinada realización, el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18. En una determinada realización, el anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 excepto por una secuencia señal (los expertos en la materia comprenderán fácilmente que en una determinada realización, la secuencia señal del anticuerpo se escinde del anticuerpo). En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región variable en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18. En una determinada realización, el anticuerpo incluye un anticuerpo (o un fragmento del mismo) que tiene al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 % o al menos aproximadamente un 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18. En una determinada realización, el anticuerpo incluye un fragmento de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18, que tiene una longitud de al menos aproximadamente 10 aminoácidos, al menos aproximadamente 25 aminoácidos, al menos aproximadamente 50 aminoácidos, al menos aproximadamente 75 aminoácidos o al menos aproximadamente 100 aminoácidos. En una determinada realización, el anticuerpo comprende además la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 o un fragmento o una variante de la misma. En una determinada realización, el antígeno se une a CD26 humano. En una determinada realización, el anticuerpo es, por ejemplo, un anticuerpo que comprende al menos una cadena pesada (por ejemplo, dos cadenas pesadas cada una) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17 excepto por una secuencia señal, y al menos una cadena ligera (por ejemplo, dos cadenas ligeras cada una) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18 excepto por una secuencia señal.
Cadena ligera (SEQ ID NO: 18)
MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDILLTQSPSSLSATPGERATITCRASQGIRNNLNWYQ
QKPGQAPRLLIYYSSNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISRLQPEDVAAYYCQQSIKL
PFTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD
NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKS
FNRGEC
El anticuerpo anti-CD26 humanizado "YS110" descrito en el presente documento significa un anticuerpo cuya región constante de cadena pesada consiste en una secuencia de aminoácidos descrita en SEQ ID NO: 17, y cuya región constante de cadena ligera consiste en una secuencia de aminoácidos descrita en SEQ ID NO: 18. Tras la unión a CD26 en la membrana de una célula tumoral maligna, se ha informado que YS110 se incorpora a la célula y después se transfiere al núcleo (Yamada K. et al., Plos One, 29 de abril de 2013; 8 (4): e62304). De manera más específica, se considera que YS110 es absorbido por el citoplasma mediante endocitosis dependiente de caveolina y transportado al núcleo mediante vesículas endocíticas tempranas. Por consiguiente, en un aspecto, el efecto antitumoral (por ejemplo, efecto terapéutico en el mesotelioma) de un conjugado de YS110 y triptolida puede basarse en dichas acción del YS110. De manera específica, el anticuerpo anti-CD26 de la presente invención puede ser un anticuerpo que es, tras la unión a CD26 en la membrana de una célula tumoral maligna, absorbido por la célula y después transferido al núcleo. Si el anticuerpo es o no, tras la unión a CD26 en la membrana de una célula tumoral maligna, absorbido por la célula y después transferido al núcleo se puede determinar poniendo en contacto un anticuerpo marcado con las células, detectando después una posición del anticuerpo basada en el marcador en un microscopio o similar, y determinando la relación posicional entre la posición y la organización intracelular.
En otro aspecto, el anticuerpo se une a uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en YSLRWIS-DHEYLY (SEQ ID NO: 19; péptido 6), LEYNYVKQWRHSY (SEQ ID NO: 20; péptido 35), TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; péptido 55), LWWSPNGTFLAYA (SEQ ID NO: 22; péptido 84), RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO: 23; péptido 132), YVKQWRHSYTASY (SEQ ID NO: 24; péptido 37), EEEVFSAYSALWW (SEQ ID NO: 25; péptido 79), DYSISP-DGQFILL (SEQ ID NO: 26; péptido 29), SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO: 27; péptido 30) y IYVKIEPNLPSYR (SEQ ID NO: 28; péptido 63). En una determinada realización, el anticuerpo se une específicamente a uno o más de los péptidos descritos anteriormente. Estos péptidos son regiones de CD26 humano. En una determinada realización, el anticuerpo se une específicamente a uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; péptido 6), LEYNYVKQWRHSY (SEQ ID NO: 20; péptido 35), TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; péptido 55), LWWSPNGTFLAYA (SEQ ID NO: 22; péptido 84), RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO: 23; péptido 132), YVKQWRHSYTASY (SEQ ID NO: 24; péptido 37), EEEVFSAYSALWW (SEQ ID NO: 25; péptido 79), DYSISPDGQFILL (SEQ ID NO: 26; péptido 29), SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO: 27; péptido 30) y IYVKIEPNLPSYR (SEQ ID NO: 28; péptido 63) en comparación con uno o más péptidos correspondientes a otras regiones de CD26 humano.
En una determinada realización, el anticuerpo se une a cada uno de los siguientes péptidos: YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; péptido 6); LEYNYVKQWRHSY (SEQ ID NO: 20; péptido 35); TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; péptido 55); LWWSPNGTFLAYA (SEQ ID NO: 22; péptido 84); y RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO: 23; péptido 132). En una determinada realización alternativa, el anticuerpo se une a cada uno de los siguientes péptidos: YSLRWISDHEYLY (SEQ ID NO: 19; péptido 6); TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; péptido 55); RISLQWLRRIQNY (SEQ ID NO: 23; péptido 132); YVKQWRHSYTASY (SEQ ID NO: 24; péptido 37); y EEEVFSAYSALWW (SEQ ID NO: 25; péptido 79). En una determinada realización, el anticuerpo se une a cada uno de los siguientes péptidos: DYSISPDGQFILL (SEQ ID NO: 26; péptido 29); SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO: 27; péptido 30); y TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; péptido 55). En una determinada realización alternativa, el anticuerpo se une a cada uno de los siguientes péptidos: DYSISPDGQFILL (SEQ ID NO: 26; péptido 29); SISPDGQFILLEY (SEQ ID NO: 27; péptido 30); TWSPVGHKLAYVW (SEQ ID NO: 21; péptido 55); y IYVKIEPNLPSYR (SEQ ID NO: 28; péptido 63).
Se puede determinar mediante ensayo competitivo si dos anticuerpos se unen al mismo epítopo mediante el reconocimiento de epítopos idénticos o que se solapan de manera estérica. Normalmente, se inmoviliza un antígeno en una placa de pocillos múltiples y se mide el rendimiento de bloqueo de un anticuerpo no marcado frente a la unión de un anticuerpo marcado. Un marcador general para dicho ensayo competitivo es un radiomarcador o un marcador enzimático. El epítopo al que se une el anticuerpo se puede determinar mediante una técnica de mapeo de epítopos conocida por los expertos en la materia.
En una determinada realización, el anticuerpo comprende una o más regiones constantes. En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región constante humana. En una determinada realización, la región constante es una región constante de cadena pesada. En una realización alternativa, la región constante es una región constante de cadena ligera. En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región constante que tiene al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 98 % o el 100 % de identidad con una región constante humana. En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región Fc. En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región Fc humana. En una determinada realización, el anticuerpo comprende una región Fc que tiene al menos aproximadamente un 80 %, al menos aproximadamente un 85 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 98 % o el 100 % de identidad con una región Fc humana.
En una determinada realización, el anticuerpo es un anticuerpo IgG. En una determinada realización, el anticuerpo es un anticuerpo IgG1. En una realización alternativa, el anticuerpo es un anticuerpo IgG2. En una determinada realización, el anticuerpo es un anticuerpo IgG humano.
El anticuerpo puede ser un anticuerpo en forma monomérica, dimérica y multimérica. Por ejemplo, se puede preparar un anticuerpo biespecífico o un anticuerpo monoclonal que tiene especificidad de unión para al menos dos antígenos diferentes utilizando el anticuerpo divulgado en el presente documento (véase, por ejemplo, Suresh et al., Methods in Enzymology, 1986, 121,210). Hasta el momento, la producción recombinante del anticuerpo biespecífico se ha basado en la expresión conjunta de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina que comprenden dos cadenas pesadas que difieren en la especificidad (Millstein, Cuello, Nature, 1983, 305, 537-539).
De acuerdo con un enfoque para preparar el anticuerpo biespecífico, las regiones variables del anticuerpo (sitios de unión a antígeno del anticuerpo) que tienen la especificidad de unión deseada se fusionan con regiones constantes de inmunoglobulina. Preferentemente, los sitios de fusión implican una región constante de cadena pesada de inmunoglobulina que incluye al menos fracciones de una bisagra y regiones CH2 y CH3. Al menos un sitio de fusión tiene preferentemente la primera región constante de cadena pesada (CH1) que contiene un sitio esencial para la unión de una cadena ligera. Los ADN que codifican las fusiones de la cadena pesada de la inmunoglobulina y, si se desea, el ADN que codifica una cadena ligera de inmunoglobulina se insertan en vectores de expresión separados, con los que luego se transfecta de manera conjunta un organismo hospedador adecuado. En una realización en la que proporciones desiguales de las tres cadenas de anticuerpos utilizadas en la construcción proporcionan el rendimiento óptimo, es posible ajustar las proporciones mutuas de estas tres cadenas de anticuerpos con elevada flexibilidad. Si la expresión de al menos dos cadenas de anticuerpos en proporciones iguales da como resultado elevados rendimientos o si las proporciones no son particularmente importantes, las secuencias codificantes para dos o las tres cadenas de anticuerpos pueden insertarse en un vector de expresión.
Un ejemplo del enfoque incluye un anticuerpo biespecífico constituido por una cadena pesada de inmunoglobulina híbrida que tiene una primera especificidad de unión en uno de los brazos, y un par híbrido de cadena pesada y cadena ligera (que tiene una segunda especificidad de unión) en el otro brazo. Esta estructura asimétrica (que tiene una cadena ligera de inmunoglobulina solo en una semifracción de anticuerpo de la molécula de anticuerpo biespecífico) facilita la separación del compuesto biespecífico deseado de las combinaciones de cadenas de inmunoglobulina no deseadas. Este enfoque se describe en la publicación internacional n.° WO94/04690 publicada el 3 de marzo de 1994.
También se incluye en el alcance del anticuerpo un anticuerpo heteroconjugado que comprende dos anticuerpos unidos de manera covalente. Dicho anticuerpo se utiliza para dirigir células del sistema inmunitario a células innecesarias (patente de Estados Unidos n.° 4.676.980) o para tratar la infección por VIH (publicaciones internacionales n.° WO91/00360 y WO92/200373, y patente europea n.° 03089). El anticuerpo heteroconjugado puede prepararse utilizando cualquier método de reticulación conveniente. Los agentes y técnicas de reticulación adecuados son bien conocidos en la materia y se describen en la patente de Estados Unidos n.° 4.676.980.
En una realización particular, el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo. En una determinada realización, el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en, por ejemplo, Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv y F(ab')2. En una determinada realización, el anticuerpo es Fab. Se han desarrollado varias técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos. Estos fragmentos se pueden obtener mediante la digestión de proteínas de un anticuerpo completo (véase, por ejemplo, Morimoto et al., 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24: 107-117; y Brennan et al., 1985, Science 229: 81), o también se pueden producir directamente a partir de células hospedadoras recombinantes. Por ejemplo, los fragmentos Fab'-SH se pueden recuperar directamente de E. coli y unirse químicamente para formar un fragmento F(ab')2 (Carter et al., 1992, Bio/Technology 10: 163-167). En una realización alternativa, F(ab')2 se forma utilizando una cremallera de leucina GCN4 que promueve el ensamblaje de moléculas F(ab')2. De acuerdo con un enfoque alternativo, el fragmento Fv, Fab o F(ab')2 se aísla directamente del cultivo de células hospedadoras recombinantes.
En una determinada realización, el anticuerpo es un fragmento variable monocatenario (scFv) del mismo, una variante, una proteína de fusión que contiene una fracción de anticuerpo, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un diacuerpo, un anticuerpo lineal, un anticuerpo monocatenario o cualquier otra molécula de inmunoglobulina que tenga una configuración modificada.
El fragmento variable monocatenario se prepara mediante la unión de regiones variables de cadena ligera y/o cadena pesada utilizando un péptido enlazador corto (Bird et al., (1988) Science 242: 423-426). El péptido enlazador es, por ejemplo, (GGGGS)3 (s Eq ID NO: 29) que reticula aproximadamente 3,5 nm entre el extremo carboxílico de una de las regiones variables y el extremo amínico de la otra región variable. También se diseñan y utilizan enlazadores que tienen otras secuencias (Bird etal., (1988)). A continuación, el enlazador se puede modificar para funciones adicionales tales como la inmovilización de un fármaco o la inmovilización sobre un vehículo sólido. La variante monocatenaria se puede producir mediante cualquier técnica de recombinación o técnica de síntesis. En la producción de scFv mediante una técnica de síntesis, se puede utilizar un sintetizador automático. En la producción de scFv mediante una técnica de recombinación, se puede transferir un plásmido adecuado que contiene un polinucleótido que codifica scFv a células hospedadoras adecuadas ya sean eucariotas (por ejemplo, células de levadura, células vegetales, células de insectos o células de mamíferos) o procariotas (E. coli). El polinucleótido que codifica el scFv de interés se puede preparar mediante una operación de rutina, tal como la unión de polinucleótidos. El scFv resultante se puede aislar utilizando una técnica estándar de purificación de proteínas conocida en la materia.
Otras formas de anticuerpos monocatenarios, tales como un diacuerpo, también están incluidos en el anticuerpo. El diacuerpo es un anticuerpo bivalente biespecífico cuyos dominios VH y VL se expresan en una sola cadena de anticuerpo, pero se ven obligados a emparejarse con dominios complementarios de otra cadena utilizando un enlazador demasiado corto para emparejar estos dominios VH y VL en la misma cadena, creando de este modo dos sitios de unión a antígeno (véase, por ejemplo, Holliger, P. et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; y Poljak, R. J. et al., (1994) Structure 2: 1121-1123).
El anticuerpo abarca una forma modificada del anticuerpo descrito en el presente documento. Los ejemplos de dicha forma modificada incluyen anticuerpos funcionalmente equivalentes sin afectar notablemente a las propiedades del anticuerpo, y variantes que tienen actividad potenciada o atenuada. La modificación del anticuerpo es una operación rutinaria en la materia y no necesita describirse en detalle en el presente documento. Los ejemplos del anticuerpo modificado incluyen anticuerpos que implican la sustitución conservadora de restos de aminoácidos, la eliminación o adición de uno o más aminoácidos sin un deterioro notable de la actividad funcional, o el uso de análogos químicos.
La inserción o adición a una secuencia de aminoácidos incluye fusión aminoterminal y/o carboxiterminal que varía en longitud desde 1 resto en un anticuerpo que contiene 100 o más restos, y la inserción intrasecuencia de restos de aminoácidos únicos o múltiples. Los ejemplos de variantes de inserción terminal incluyen un anticuerpo que tiene un resto metionilo aminoterminal o un anticuerpo fusionado con un marcador de epítopo. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo incluyen un anticuerpo aminoterminal o carboxiterminal fusionado con una enzima o un anticuerpo que aumenta la semivida en suero del anticuerpo.
La variante de sustitución tiene un resto diferente insertado en lugar de al menos un resto de aminoácido eliminado de la secuencia del anticuerpo. Las CDR se incluyen en sitios que aprovechan al máximo la mutagénesis por sustitución, pero también se contemplan alteraciones de FR. La sustitución conservadora se muestra en la tabla 3 bajo el encabezado de "sustitución conservadora". Dicha sustitución que cambia la actividad biológica se denomina "sustitución ilustrativa" en la tabla 3, o se puede introducir un cambio más sustancial, como se describe a continuación sobre las clases de aminoácidos, y se pueden examinar los productos.
[Tabla 3]
Tabla 3: Sustitución de aminoácidos
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La modificación sustancial de las propiedades biológicas del anticuerpo se logra mediante la selección de una sustitución que cambia significativamente el efecto de la modificación sobre el mantenimiento de (a) la estructura de la cadena principal del anticuerpo en una región de sustitución, por ejemplo, una conformación de hoja o de hélice, (b) la carga o la hidrofobicidad de la molécula en el sitio diana o (c) el volumen de la cadena lateral. Los restos de origen natural se clasifican en los siguientes grupos según las propiedades generales de la cadena lateral:
(1) hidrófobos: norleucina, Met, Ala, Val, Leu e Ile;
(2) hidrófilos neutros: Cys, Ser y Thr;
(3) ácidos: Asp y Glu;
(4) básicos: Asn, Gln, His, Lys y Arg;
(5) restos que influyen en la orientación de la cadena: Gly y Pro; y
(6) aromáticos: Trp, Tyr y Phe.
La sustitución no conservadora se constituye mediante el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra clase. La sustitución más conservadora incluye el intercambio de un miembro de una determinada clase por otro miembro de esta clase.
Se puede sustituir cualquier resto de cisteína que no esté implicado en el mantenimiento de la conformación adecuada del anticuerpo, generalmente por serina, para mejorar así la estabilidad oxidativa de la molécula y prevenir la reticulación anormal. Particularmente, cuando el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fab, se puede añadir un enlace de cisteína al anticuerpo para mejorar así la estabilidad del anticuerpo.
La modificación de aminoácidos varía desde el cambio o modificación en uno o más aminoácidos hasta el rediseño completo de una región tal como una región variable. El cambio en la región variable puede alterar la afinidad y/o especificidad de unión. En una determinada realización, se sustituyen de forma conservadora de 1 a 5 o menos aminoácidos dentro de un dominio CDR. En una realización alternativa, se sustituyen de forma conservadora de 1 a 3 o menos aminoácidos dentro de un dominio CDR3. En una realización alternativa adicional, el dominio CDR es CDRH3 y/o CDRL3.
El anticuerpo modificado también incluye anticuerpos glucosilados y no glucosilados y anticuerpos que tienen otras modificaciones postraduccionales, por ejemplo, glucosilación con diferentes azúcares, acetilación y fosforilación. Los anticuerpos se glucosilan en posiciones conservadas en sus regiones constantes (Jefferis y Lund, 1997, Chem. Immunol. 65: 111-128; y Wright y Morrison, 1997, TibTECH 15: 26-32). Las cadenas laterales de oligosacáridos de las inmunoglobulinas influyen en las funciones de las proteínas (Boyd et al., 1996, Mol. Immunol. 32: 1311-1318; y Wittwe y Howard, 1990, Biochem. 29: 4175-4180) y en la acción mutua intramolecular entre fracciones de una glucoproteína, que puede influir en la conformación y la estructura superficial tridimensional presentada de la glucoproteína (Hefferis y Lund, anteriormente citado; y Wyss y Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7: 409-416). Las glucoproteínas dadas pueden dirigirse a determinadas moléculas basándose en estructuras de reconocimiento específicas a través de oligosacáridos. También se ha informado que la glucosilación de anticuerpos influye en la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC, del inglés 'antibody-dependent cellular cytotoxicity'). Particularmente, se ha informado que las células CHO que expresan p(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III (GnTIII), una glucosiltransferasa que cataliza la formación de GlcNAc bisectora, bajo el control de tetraciclina presentan una actividad ADCC mejorada (Umana et al., 1999, Nature Biotech. 17:176-18o).
La glucosilación del anticuerpo suele estar ligada a N u O. La glucosilación unida a N se refiere a la unión de una fracción de hidrato de carbono a la cadena lateral de un resto de asparagina. Las secuencias de tripéptidos asparagina-X-serina, asparagina-X-treonina y asparagina-X-cisteína (en donde X es cualquier aminoácido distinto de prolina) son secuencias de reconocimiento para añadir de manera enzimática una fracción de hidrato de carbono a la cadena lateral de asparagina. Por lo tanto, cualquiera de estas secuencias de tripéptidos presentes en el anticuerpo crea un posible sitio de glucosilación. La glucosilación unida a O significa la unión de uno de los hidratos de carbono N-acetilgalactosamina, galactosa y xilosa con un hidroxiaminoácido, más generalmente serina o treonina, aunque también pueden utilizarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina.
La adición del sitio de glucosilación al anticuerpo se logra de manera conveniente mediante la alteración de la secuencia de aminoácidos de manera que el anticuerpo contenga una o más de las secuencias de tripéptidos descritas anteriormente (para un sitio de glucosilación unido a N). La alteración también puede realizarse mediante la adición de, o sustitución por, uno o más restos de serina o treonina en la secuencia del anticuerpo original (para un sitio de glucosilación unido a O).
El patrón de glucosilación del anticuerpo también puede alterarse sin alterar la secuencia de nucleótidos fundamental. La glucosilación depende en gran medida de las células hospedadoras utilizadas para expresar el anticuerpo. Dado que el tipo de células utilizadas para la expresión de una glucoproteína recombinante, por ejemplo, un anticuerpo, rara vez son células naturales debido a un posible método de tratamiento, se pueden predecir los diversos patrones de glucosilación del anticuerpo (véase, por ejemplo, Hse et al., 1997, J. Biol. Chem. 272: 9062-9070).
Además de la selección de las células hospedadoras, los factores que influyen en la glucosilación durante la producción recombinante del anticuerpo incluyen el modo de crecimiento, la formulación media, la densidad del cultivo, la oxigenación, el pH, los esquemas de purificación, etc. Se han propuesto varios métodos para alterar el patrón de glucosilación logrado en organismos hospedadores particulares e implican la introducción o sobreexpresión de enzimas particulares implicadas en la producción de oligosacáridos (Patentes de Estados Unidos n.° 5.047.335, 5.510.261 y 5.278.299). La glucosilación o un tipo particular de glucosilación se puede eliminar de la glucoproteína utilizando una enzima, por ejemplo, la endoglucosidasa H (EndoH). Las células hospedadoras recombinantes se pueden alterar genéticamente para que sean defectuosas en el procesamiento de un tipo particular de polisacárido. Estas técnicas y técnicas similares son bien conocidas en la materia.
Otros métodos para la modificación incluyen el uso de una técnica de acoplamiento conocida en la materia. Ejemplos de dicha técnica incluyen, aunque sin limitación, enfoques enzimáticos, sustitución oxidativa y quelación. Por ejemplo, se puede añadir un marcador para inmunoensayo al anticuerpo utilizando la modificación. El anticuerpo modificado se prepara utilizando procedimientos establecidos en la materia y se puede seleccionar utilizando un ensayo estándar conocido en la materia. Algunos métodos para los mismos se describen a continuación y en los ejemplos.
Otros anticuerpos modificados incluyen anticuerpos modificados como se describe en la publicación internacional n.° WO99/58572 publicada el 18 de noviembre de 1999. Estos anticuerpos comprenden un dominio de unión dirigido a la molécula diana así como un dominio efector que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente homóloga a la totalidad o una parte de los dominios constantes de cadena pesada de inmunoglobulinas humanas. Estos anticuerpos tienen la capacidad de unirse a la molécula diana sin causar una marcada lisis dependiente del complemento o destrucción de la diana mediada por células. En una determinada realización, el dominio efector puede unirse específicamente a FcRn y/o FcyRIlb. Estos se basan normalmente en dominios quiméricos procedentes de dos o más dominios CH2 de cadena pesada de inmunoglobulinas humanas. Por lo tanto, los anticuerpos modificados son particularmente adecuados para su uso en terapia crónica con anticuerpos y evitan reacciones inflamatorias y otras reacciones dañinas a la terapia convencional con anticuerpos.
El anticuerpo incluye una forma madurada por afinidad. El anticuerpo madurado por afinidad se puede producir mediante, por ejemplo, un método conocido en la materia (Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10: 779-783; Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91: 3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169: 147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155: 1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154 (7): 3310-9; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896; y la publicación internacional n.° WO2004/058184). Se puede cribar o seleccionar un candidato de anticuerpo madurado por afinidad en función de la afinidad de unión mejorada y/o alterada mediante cualquier método conocido en la materia, incluyendo cualquier método de selección conocido en la materia que incluye un método de cribado utilizando análisis de resonancia de plasmón superficial BIAcore, presentación en fagos, visualización en levaduras y visualización en ribosomas.
El anticuerpo monoclonal se puede preparar mediante un método de hibridoma como se describe en Kohler y Milstein, 1975, Nature 256: 495. En el método del hibridoma, ratones, hámsteres u otros animales hospedadores adecuados se inmunizan habitualmente con un inmunizador para inducir de ese modo que los linfocitos produzcan o sean capaces de producir anticuerpos que se unan específicamente al inmunizador. Como alternativa, los linfocitos pueden inmunizarse in vitro.
El anticuerpo monoclonal (y otros anticuerpos) también se pueden preparar mediante un método de ADN recombinante como se describe en la patente de Estados Unidos n.° 4.816.567. El ADN que codifica el anticuerpo monoclonal se aísla y secuencia mediante métodos convencionales tales como el uso de una sonda oligonucleotídica que puede unirse específicamente a un gen que codifica la cadena pesada o la cadena ligera del anticuerpo monoclonal. El ADN así aislado se inserta en un vector de expresión, con el que las células hospedadoras tales como células de E. coli, células COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO, del inglés 'chinese hamster ovary') o células de mieloma que no producen proteínas de inmunoglobulina sin la transferencia del vector de expresión, se transfectan después para lograr de ese modo la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células hospedadoras recombinantes.
En una determinada realización, el anticuerpo se expresa en cualquier organismo, incluyendo, pero sin limitación, bacterias, levaduras, plantas, insectos y mamíferos, o células procedentes de cualquier organismo. El tipo particular de células incluye, pero sin limitación, células de Drosophila melanogaster, células de Saccharomyces cerevisiae y otras levaduras, células de E. coli, células de Bacillus subtilis, células SF9, células HEK-293, células de Neurospora, células BHK, células CHO, células COS, células Hela, fibroblastos, líneas celulares de schwannoma, líneas celulares mieloides y linfoides de mamíferos inmortalizadas, células Jurkat, mastocitos y otras células endocrinas y exocrinas, y células neuronales.
Los expertos en la materia conocen varios sistemas de expresión de proteínas, vectores y medios celulares útiles en la producción de anticuerpos. Véanse, por ejemplo, las publicaciones internacionales n.° WO03/054172, WO04/009823 y WO03/064630. En una determinada realización, se utiliza un sistema de expresión de glutamina sintetasa (GS) en la expresión del anticuerpo.
Preferentemente, el anticuerpo así expresado se purifica o aísla de acuerdo con un método conocido por los expertos en la materia. Ejemplos del método de purificación incluyen enfoques electroforéticos, de biología molecular, inmunológicos y cromatográficos. Ejemplos de dichos enfoques incluyen intercambio iónico, afinidad hidrófoba, cromatografía HPLC de fase inversa y enfoque isoeléctrico. El grado de purificación necesario puede variar dependiendo del propósito del anticuerpo. Dependiendo de las realizaciones, la purificación no es necesaria.
El ADN puede modificarse, por ejemplo, mediante la unión covalente de la totalidad o una parte de la secuencia codificante de un anticuerpo que no es inmunoglobulina a la secuencia codificante de una inmunoglobulina. De esta manera, se prepara un anticuerpo "quimérico" o "híbrido" que tiene la especificidad de unión del anticuerpo monoclonal divulgado en el presente documento. Normalmente, dicho anticuerpo que no es inmunoglobulina se sustituye por los dominios constantes del anticuerpo de la presente invención o se sustituye por los dominios variables de un sitio de unión a antígeno del anticuerpo de la presente invención para crear así un anticuerpo bivalente quimérico que comprende un sitio de unión a antígeno que tiene especificidad por un epítopo de superficie en CD26 y otro sitio de unión a antígeno que tiene especificidad por un antígeno o epítopo de CD26 diferente.
El anticuerpo también abarca un anticuerpo humanizado. Los anticuerpos terapéuticos a menudo inducen reacciones adversas, en parte debido a que induce una respuesta inmunitaria a los anticuerpos administrados. Esto puede dar como resultado una reducción de la eficacia del fármaco, disminución del número de células que tienen el antígeno diana y reacción inflamatoria no deseada. Para evitar estos problemas, se puede preparar un anticuerpo recombinante anti-CD26 humanizado. Los principios generales de la humanización de anticuerpos implican mantener la secuencia básica de la fracción de unión a antígeno del anticuerpo, mientras se intercambia al menos una parte del resto no humano del anticuerpo con una secuencia de anticuerpo humano. Las cuatro etapas convencionales generales para la humanización de anticuerpos monoclonales incluyen, aunque sin limitación: (1) determinar las secuencias de nucleótidos que codifican los dominios variables de cadena ligera y cadena pesada de un anticuerpo de partida, y sus supuestas secuencias de aminoácidos, (2) diseñar un anticuerpo humanizado, es decir, determinar las regiones o restos marco y/o los restos de CDR del anticuerpo que se utilizarán en el proceso de humanización, (3) una metodología/técnica de humanización real y (4) transfección y expresión del anticuerpo humanizado. Las regiones constantes del anticuerpo para su uso en ensayos clínicos y tratamiento en seres humanos también se pueden hacer más análogas a las regiones constantes humanas mediante una técnica de recombinación para evitar la respuesta inmunitaria. Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 5.997.867 y 5.866.692.
Una fracción Fcy en un anticuerpo humanizado recombinante se puede modificar para evitar de ese modo la acción mutua con un receptor de Fcy y el sistema inmunitario del complemento. Dicha técnica de preparación de anticuerpos se describe en la publicación internacional n.° WO99/58572.
Se han informado muchas moléculas de anticuerpos "humanizados" que comprenden un sitio de unión a antígeno procedente de inmunoglobulinas no humanas. Los ejemplos de las mismas incluyen regiones V de roedor y sus regiones determinantes de la complementariedad (CDR) asociadas fusionadas con dominios constantes humanos. Véase, por ejemplo, Winter et al., Nature 349: 293-299 (1991); Lobuglio et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220­ 4224 (1989); Shaw et al., J Immunol. 138: 4534-4538 (1987); y Brown et al., Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987). Otras referencias describen CDR de roedores injertadas en regiones marco (FR) de soporte humanas antes de la fusión con dominios constantes de anticuerpos humanos adecuados. Véase, por ejemplo, Riechmann et al., Nature 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-1536 (1988); y Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986). Otra referencia describe CDR de roedor soportadas por regiones marco de roedor revestidas de forma recombinante. Véase, por ejemplo, la publicación de patente europea n.° 519.596. Estos tipos de moléculas "humanizadas" están diseñadas para minimizar la respuesta inmunitaria innecesaria a las moléculas de anticuerpos antihumanos de roedores, lo que limita el período de aplicación terapéutica y la eficacia de las fracciones en receptores humanos. Otros métodos de humanización de anticuerpos que pueden utilizarse se divulgan en Daugherty et al., Nucl. Acids Res., 19: 2471-2476 (1991) y las patentes de Estados Unidos n.° 6.180.377, 6.054.297, 5.997.867, 5.866.692, 6.210.671 y 6.350.861, y la publicación internacional n.° WO01/27160.
En la publicación internacional n.° WO02/084277 y la publicación de patente estadounidense n.° 2004/0.133.357 se describen métodos ilustrativos adicionales para la humanización de anticuerpos.
Aún como alternativa, se puede obtener un anticuerpo completamente humano utilizando ratones disponibles comercialmente genomanipulados para expresar proteínas de inmunoglobulinas humanas específicas. Los animales transgénicos diseñados para producir una respuesta inmunitaria más deseable (por ejemplo, un anticuerpo completamente humano) o más robusta también pueden utilizarse en la preparación de anticuerpos humanizados o humanos. Ejemplos de dicha técnica incluyen Xenomouse™ de Abgenix Inc. (Fremont, California) y HuMAb-Mouse® y TC Mouse™ de Medarex, Inc. (Princeton, N.J.).
Como alternativa, el anticuerpo se puede preparar de forma recombinante mediante una técnica de presentación en fagos. Véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 5.565.332, 5.580.717, 5.733.743 y 6.265.150; y Winter et al., Annu. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994). Como alternativa, la técnica de presentación en fagos (McCafferty et al., Nature 348: 552-553 (1990)) se puede utilizar para producir anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpos humanos in vitro a partir de repertorios de genes de dominio variable (V) de inmunoglobulina de donantes no inmunizados. De acuerdo con esta técnica, los genes del dominio V del anticuerpo se clonan en el marco en genes de proteínas de recubrimiento mayores o menores de bacteriófagos filamentosos, tales como M13 o fd, y se expresan como fragmentos de anticuerpos funcionales en la superficie de las partículas de fagos. Debido a que las partículas filamentosas contienen una copia de ADN monocatenario del genoma del fago, la selección de anticuerpos basada en propiedades funcionales también conduce a la selección de genes que codifican anticuerpos que presentan estas propiedades. Por lo tanto, el fago imita algunas de las propiedades de los linfocitos B. La presentación en fagos se puede realizar en varios formatos. Para una revisión, véase, por ejemplo, Johnson, Kevin S. y Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3, 564-571 (1993). Se puede utilizar una pluralidad de fuentes de segmentos del gen V en la presentación en fagos.
Clackson et al. (Nature 352: 624-628 (1991)) aislaron una serie de diversos anticuerpos dirigidos contra oxazolona a partir de una biblioteca combinatoria aleatoria pequeña de genes V procedentes de los bazos de ratones inmunizados. Se pueden construir repertorios de genes V de donantes humanos no inmunizados, y se pueden aislar anticuerpos contra diversas matrices de antígenos (incluyendo los autoantígenos) siguiendo esencialmente una técnica descrita por Mark et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1991) o Griffith et al., EMBO J. 12: 725-734 (1993). En una respuesta inmunitaria natural, los genes de anticuerpos acumulan mutaciones a un ritmo elevado (hipermutación somática). Algunos de los cambios introducidos conferirán elevada afinidad, y los linfocitos B que muestran una inmunoglobulina de superficie de elevada afinidad se replican y diferencian preferentemente durante la exposición posterior al antígeno. Este proceso natural se puede imitar mediante una técnica conocida como "reordenamiento de cadenas" (Marks, et al., Bio/Technol. 10: 779-783 (1992)). En este método, la afinidad de los anticuerpos humanos "primarios" obtenidos mediante presentación en fagos puede mejorarse mediante el reemplazo secuencial de los genes de la región V de cadena pesada y ligera con repertorios de variantes naturales (repertorios) de genes de dominio V obtenidos de donantes no inmunizados. Esta técnica permite la producción de anticuerpos y fragmentos de anticuerpos que tienen una afinidad en el intervalo de pM a nM. Se describe una estrategia para preparar repertorios de anticuerpos en fagos muy grandes (también conocidos como "la madre de todas las bibliotecas") en Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21: 2265-2266 (1993).
Un anticuerpo humano que tenga una afinidad y una especificidad equivalentes a las de un anticuerpo de partida de roedor puede inducirse a partir del anticuerpo de roedor mediante reordenamiento de genes. De acuerdo con este método, también conocido como "sellado de epítopos", los genes del dominio V de cadena pesada o cadena ligera de anticuerpos de roedor obtenidos mediante la técnica de presentación en fagos se reemplazan con repertorios de genes del dominio V humano para crear quimeras de roedor y ser humano. La selección basada en un antígeno provoca el aislamiento de regiones variables humanas que pueden reconstruir un sitio de unión a antígeno funcional. De manera específica, el epítopo guía (sella) la selección de la pareja. Cuando el método se repite para reemplazar los dominios V de roedor residuales, se obtiene el anticuerpo humano (véase la publicación internacional n.° WO9306213 publicada el 1 de abril de 1993). A diferencia de la humanización convencional de anticuerpos de roedores mediante injerto de CDR, esta técnica proporciona anticuerpos completamente humanos sin restos de CDR o marco de roedores. Aunque la discusión descrita anteriormente se refiere a anticuerpos humanizados, es evidente que los principios generales discutidos son aplicables a, por ejemplo, personalización de anticuerpos para su uso en perros, gatos, primates, caballos y ganado.
El anticuerpo quimérico o híbrido también se puede preparar in vitro mediante un método conocido de química de proteínas sintéticas, que incluye un método que utiliza un agente de reticulación. Por ejemplo, se pueden construir inmunotoxinas utilizando una reacción de intercambio de disulfuro o formando un enlace tioéter. Los ejemplos de reactivos adecuados para este fin incluyen iminotiolato y metil-4-mercaptobutirimidato.
El fragmento Fv monocatenario también se puede producir como se describe en Iliades et al., 1997, FEBS Letters, 409: 437-441. El acoplamiento de dichos fragmentos monocatenarios utilizando diversos enlazadores se describe en Kortt et al., 1997, Protein Engineering, 10: 423-433. Se conocen bien en la materia diversas técnicas con respecto a la producción recombinante y la manipulación recombinante de anticuerpos.
El anticuerpo puede conjugarse con una fracción polimérica soluble en agua. El anticuerpo puede conjugarse con polietilenglicol (PEG), monometoxi-PEG, un copolímero de etilenglicol/propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivinílico o similares. El anticuerpo puede modificarse en posiciones aleatorias en la molécula o en posiciones predeterminadas en la molécula y puede contener una, dos, tres o más fracciones unidas. El polímero puede tener cualquier peso molecular y puede estar ramificado o no ramificado. En una determinada realización, la fracción se une al polipéptido mediante un enlazador. En una determinada realización, la fracción unida aumenta la semivida en circulación del anticuerpo in vivo en animales. Los métodos para unir polímeros tales como PEG a anticuerpos son bien conocidos en la materia. En una determinada realización, el anticuerpo es un anticuerpo PEGilado tal como un anticuerpo PEGilado. El conjugado se puede conjugar adicionalmente con un fármaco diferente adicional, tal como un quimioterápico, un radionúclido, un inmunoterápico, una citocina, una quimiocina, un medio de contraste, una toxina, un agente biológico, un inhibidor de enzimas o un anticuerpo.
2. Conjugados de anticuerpo y fármaco
En una determinada realización, la presente invención se refiere a un conjugado que comprende el anticuerpo y triptolida conjugados entre sí. La triptolida es (3bS,4aS,5aS,6R,6aR,7aS,7bS,8aS,8bS)-6-hidroxi-6a-isopropil-8bmetil-3b,4,4a,6,6a,7a,7b,8b,9,10-decahidrotrisoxireno[6,7:8a,9:4b,5]fenantro[1,2-c]furan-1(3H)-ona bajo el nombre IUPAC y tiene una estructura representada por la siguiente fórmula:
Figure imgf000023_0001
Por consiguiente, el conjugado de anticuerpo y triptolida de la presente invención se puede representar mediante la siguiente fórmula:
Figure imgf000023_0002
donde Ac representa el anticuerpo, L representa un enlazador y n es un número natural que representa el número de triptolida unida al anticuerpo.
El anticuerpo y la triptolida se unen covalentemente a través del enlazador L. Para unir el anticuerpo y la triptolida, se puede utilizar un enlazador multivalente (por ejemplo, un enlazador divalente) como enlazador L. Los enlazadores que pueden unir fármacos a un anticuerpo son bien conocidos en la materia. El enlazador puede ser degradable o puede no ser degradable. El enlazador puede contener o no un átomo de azufre. Por ejemplo, el enlazador puede ser degradable con ácido, fotodegradable, degradable con peptidasa, degradable con esterasa, reductor de enlaces disulfuro o hidrófobo. El enlazador puede tener, por ejemplo, un grupo maleimida o un grupo haloacetilo como esqueleto básico.
Los ejemplos del enlazador incluyen 3-(2-piridilditio)-propionato de N-succinimidilo (SPDP), éster de N-[ymaleimidobutiriloxi]succinimida (GMBS), -4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC), N-(4-maleimidobutiriloxi)sulfosuccinimida, sal de sodio (Sulfo-GMBS), N-[(4-maleimidometil)ciclohexilcarboniloxi]sulfosuccinimida, sal de sodio (Sulfo-SMCC), N-succinimidil-4-(maleimidometil)ciclohexano-1-carboxi-(6-amidocaproato) (LC-SMCC), éster N-succinimidílico del ácido kmaleimidoundecónico (KMUA), éster N-succinimidílico del ácido £-maleimidocaproico (EMCS), éster de mmaleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida (MBS), éster de N-(a-maleimidoacetoxi)-succinimida (AMSA), succinimidil-6-(p-maleimidopropionamido)hexanoato (SMPH), -4-(p-maleimidofenil)-butirato de N-succinimidilo (SMPB), N-(pmaleimidofenil)isocianato (PMIP), agentes de reticulación a base de maleimida que contienen PEG, yodoacetato de N-succinimidilo (SIA), (4-yodoacetil)aminobenzoato de N-succinimidilo (SIAB), bromoacetato de N-succinimidilo (SBA) y 3-(bromoacetamido)propionato de N-succinimidilo (SBAP).
El material de partida para triptolida puede ser un dímero que tenga la siguiente estructura con el fin de mejorar la estabilidad de conservación, y este dímero en sí se puede utilizar con reducción.
Figure imgf000024_0001
En este caso, el dímero se reduce para dar la siguiente sustancia que contiene un grupo de ácido 4-oxo-4-[(2-tioletil)amino] butanoico unido a cada triptolida.
Figure imgf000024_0002
El grupo de ácido 4-oxo-4-[(2-tioletil)amino] butanoico unido a la triptolida puede utilizarse como enlazador L. Alternativamente, el grupo de ácido 4-oxo-4-[(2-tioletil)amino] butanoico puede eliminarse, y el enlazador mencionado anteriormente puede unirse directamente a la triptolida como el enlazador L. Alternativamente, el enlazador L puede ser un grupo en el que el enlazador divalente mencionado anteriormente está unido a un grupo de ácido 4-oxo-4-[(2-tioletil)amino]butanoico. Por ejemplo, cuando se utilizan ácido 4-oxo-4-[(2-tioletil)amino]butanoico y SMCC como enlazador L, el conjugado de anticuerpo y triptolida de la presente invención se puede representar mediante la siguiente fórmula:
Figure imgf000024_0003
El número de triptolidas (representado por n en la fórmula descrita anteriormente) unidas a una molécula de anticuerpo puede ser al menos 1 y puede ser, por ejemplo, 2 o más, 2,5 o más, 3 o más, 3,5 o más, 4 o más, 4,5 o más, 5 o más, 5,5 o más, 6 o más, 6,489 o más, 6,5 o más, 7 o más, 7,5 o más, 8 o más, 8,5 o más, 9 o más, 9,5 o más, o 10 o más.
Además, el número de triptolidas (representado por n en la fórmula descrita anteriormente) unidas a una molécula de anticuerpo puede ser 3 o menos, 3,5 o menos, 4 o menos, 4,5 o menos, 5 o menos, 5,5 o menos, 6 o menos, 6,5 o menos, 7 o menos, 7,5 o menos, 8 o menos, 8,5 o menos, 9 o menos, 9,5 o menos, o 10 o menos. Como alternativa, el número de triptolidas unidas a una molécula de anticuerpo puede ser de 1 a 10, de 1 a 9, de 1 a 8, de 1 a 7, de 1 a 6, de 1 a 5, de 1 a 4, de 1 a 3, de 1 a 2, de 2 a 10, de 2 a 9, de 2 a 8, de 2 a 7, de 2 a 6, de 2 a 5, de 2 a 4, de 2 a 3, de 3 a 10, de 3 a 9, de 3 a 8, de 3 a 7, de 3 a 6, de 3 a 5, de 3 a 4, de 4 a 10, de 4 a 9, de 4 a 8, de 4 a 7, de 4 a 6, de 4 a 5, de 5 a 10, de 5 a 9, de 5 a 8, de 5 a 7, de 5 a 6, de 6 a 10, de 6 a 9, de 6 a 8, de 6 a 7, de 7 a 10, de 7 a 9, de 7 a 8, de 8 a 10, de 8 a 9, de 9 a 10, o 1, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 6,489, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 o 10.
La unión del enlazador al anticuerpo se logra habitualmente mediante la acilación de un resto de lisina del anticuerpo. La posición de unión de la triptolida al anticuerpo no está particularmente limitada siempre que la posición no influya en la especificidad del anticuerpo. Preferentemente, la triptolida está unida a una región constante del anticuerpo.
El conjugado de anticuerpo y fármaco de la presente invención se puede fabricar mediante un método bien conocido por los expertos en la materia. Por ejemplo, el anticuerpo y el enlazador pueden reaccionar primero para unirse entre sí y, después, el enlazador puede unirse al fármaco (triptolida). De manera específica, el anticuerpo reacciona con el enlazador de 10 a 50 veces la cantidad molar del anticuerpo disuelto en DMSO a temperatura ambiente durante 30 minutos en PBS-EDTA (pH 7,5), y los enlazadores que no han reaccionado se eliminan para obtener el anticuerpo unido al enlazador. Se disuelve un dímero de un derivado de triptolida en etanol al 100 % y se reduce durante 2 horas. El anticuerpo modificado con enlazador y la triptolida pueden reaccionar durante la noche en una proporción de 1:5,68 a temperatura ambiente en PBS-EDTA pH 7,5 para obtener un producto de unión anticuerpo-conector-triptolida.
3. Fármaco simultáneo
Los ejemplos de agentes antitumorales divulgados en el presente documento para su uso simultáneo incluyen: fármacos alquilantes que incluyen mostazas nitrogenadas tales como ciclofosfamida, ifosfamida, melfalán, busulfán y tiotepa, y nitroureas tales como nimustina, ranimustina, dacarbazina, procarbazina, temozolomida, carmustina, estreptozocina y bendamustina; compuestos de platino tales como cisplatino, carboplatino, oxaliplatino y nedaplatino; fármacos antimetabolitos tales como enocitabina, capecitabina, carmofur, cladribina, gemcitabina, citarabina, ocfosfato de citarabina, tegafur, tegafur uracilo, tegafur/gimeracilo/oteracil de potasio, doxifluridina, nelarabina, hidroxicarbamida, 5-fluorouracilo (5-FU), fludarabina, pemetrexed, pentostatina, mercaptopurina y metotrexato; alcaloides vegetales o fármacos inhibidores de microtúbulos tales como irinotecán, etopósido, eribulina, sobuzoxano, docetaxel, nogitecano, paclitaxel, vinorelbina, vincristina, vindesina y vinblastina; antibióticos contra el cáncer tales como actinomicina D, aclarrubicina, amrubicina, idarrubicina, epirrubicina, estimalámero de zinostatina, daunorrubicina, doxorrubicina, pirarrubicina, bleomicina, peplomicina, mitomicina C, mitoxantrona y doxorrubicina liposomal; vacunas contra el cáncer tales como sipuleucel-T; fármacos dirigidos a moléculas tales como ibritumomab tiuxetan, imatinib, everolimus, erlotinib, gefitinib, gemtuzumab ozogamicina, sunitinib, cetuximab, sorafenib, dasatinib, tamibaroteno, trastuzumab, tretinoína, panitumumab, bevacizumab, bortezomib, lapatinib y rituximab; agentes hormonales tales como anastrozol, exemestano, estramustina, etinil estradiol, clormadinona, goserelina, tamoxifeno, dexametasona, toremifeno, bicalutamida, flutamida, prednisolona, fosfestrol, mitotano, metiltestosterona, medroxiprogesterona, mepitiostano, leuprorelina y letrozol; y modificadores de la respuesta biológica, tales como interferón a, interferón p, interferón y, interleucina, ubenimex, BCG seco y lentinan. La presente invención se refiere a un fármaco simultáneo de anticuerpo y gemcitabina.
El fármaco simultáneo (composición farmacéutica que contiene dos o más fármacos) de la presente invención puede contener todo o una parte de dos o más tipos de fármacos que se utilizarán de manera simultánea en una preparación, o se puede proporcionar como preparaciones separadas que contienen cada fármaco solo para su uso simultáneo. Como alternativa, el fármaco simultáneo de la presente invención se puede proporcionar como un kit para su uso simultáneo que incluye preparaciones separadas que contienen cada fármaco de todo o una parte de dos o más tipos de fármacos para su uso simultáneo.
4. Aplicación
El conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención es útil en varias aplicaciones que incluyen, aunque sin limitación, un método de tratamiento o un método para lisar células malignas. La presente invención incluye, por ejemplo, una composición farmacéutica, un fármaco terapéutico para el mesotelioma maligno, un inhibidor del crecimiento de células de mesotelioma maligno y un agente de lisis de células de mesotelioma maligno, que contienen el conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención como principio activo. La presente invención también puede proporcionar el conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención para su uso en una composición farmacéutica, un fármaco terapéutico para el mesotelioma maligno, un inhibidor del crecimiento de células de mesotelioma maligno o un agente de lisis de células de mesotelioma maligno. Como alternativa, la presente invención puede proporcionar un uso del conjugado de la presente invención o un uso de un anticuerpo anti-CD26 y un agente antitumoral en la fabricación de una composición farmacéutica, un fármaco terapéutico para el mesotelioma maligno, un inhibidor del crecimiento de células de mesotelioma maligno o un agente de lisis de células de mesotelioma maligno. En un aspecto, la presente invención incluye el conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención para su uso en un método para tratar el mesotelioma maligno, un método para inhibir el crecimiento de células de mesotelioma maligno y un método para lisar células de mesotelioma maligno, que comprende administrar una cantidad eficaz del conjugado o del fármaco simultáneo de la presente invención a un paciente que lo necesite. Por consiguiente, la presente invención también proporciona el conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención para su uso en un método para inhibir el crecimiento de células que expresan CD26. La inhibición del crecimiento de células que expresan CD26 incluye cualquier inhibición observable, incluyendo inhibición parcial del crecimiento e inhibición completa del crecimiento. En una determinada realización, el crecimiento celular se inhibe en al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 25 %, al menos aproximadamente un 50 %, al menos aproximadamente un 75 %, al menos aproximadamente un 90 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 98 % o aproximadamente el 100 %. El método puede realizarse in vitro o in vivo. En una determinada realización, el método comprende la etapa de poner en contacto las células con el conjugado o el fármaco simultáneo descrito en el presente documento. En general, las células se ponen en contacto con una cantidad suficiente del conjugado o del fármaco simultáneo para inhibir el crecimiento celular.
En una determinada realización, las células que expresan CD26 son células de mamífero y preferentemente son células humanas. En una determinada realización, las células que expresan CD26 son células cancerosas. En una determinada realización, las células que expresan CD26 son células de mesotelioma maligno, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de hígado u otros tumores malignos que implican la expresión de CD26. En una determinada realización, las células tumorales son malignas o benignas.
Se conocen en la materia métodos para evaluar la inhibición del crecimiento celular. Ejemplos de los mismos incluyen el ensayo MTT (véase, por ejemplo, Aytac et al., (2003) British Journal of Cancer 88: 455-462; Ho et al., (2001) Clinical Cancer Research 7: 2031-2040; Hansen et al., (1989) J. Immunol. Methods, 119: 203-210; y Aytac et al., (2001) Cancer Res 61: 7204-7210).
La presente invención proporciona además el conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención para su uso en un método para tratar una afección asociada con la expresión de CD26 en un sujeto. El método para tratar una afección asociada con la expresión de CD26 en un sujeto comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición que comprende el conjugado o el fármaco simultáneo descrito en el presente documento. La afección asociada con la expresión de CD26 puede estar asociada con la expresión anormal de CD26. La afección asociada con la expresión de CD26 puede ser una afección asociada con un cambio o anomalía en la expresión de CD26 (en una determinada realización, aumento o disminución del nivel de expresión de CD26 (en comparación con una muestra normal) y/o expresión inapropiada, por ejemplo, expresión en tejidos y/o células que normalmente no expresan CD26, o deficiencia en la expresión de c D26 en tejidos o células que normalmente expresan CD26). La afección asociada con la expresión de CD26 puede ser una afección asociada con la sobreexpresión de CD26. La afección asociada con la expresión de CD26 puede estar mediada al menos parcialmente por CD26, puede ser una afección asociada con las células que expresan CD26 o puede ser una afección con el crecimiento anormal de las células que expresan CD26. Las células que expresan CD26 pueden ser linfocitos T o células tumorales. Las células tumorales pueden ser malignas o benignas.
La afección asociada con la expresión de CD26 en el sujeto incluye una enfermedad proliferativa, particularmente, un cáncer. El cáncer es mesotelioma maligno, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de hígado o cualquier otro tumor maligno que implique la expresión de CD26.
El método (incluyendo el método de tratamiento) descrito en el presente documento puede realizarse mediante una única inyección directa de una vez o varias veces en uno o varios sitios. La administración también se puede realizar en una pluralidad de sitios casi al mismo tiempo. La frecuencia de administración se determina y ajusta en el transcurso del tratamiento y se basa en los resultados deseados a alcanzar. En algunos casos, una preparación de liberación sostenida del conjugado, el fármaco simultáneo o la composición farmacéutica de la presente invención pueden ser adecuados. Se conocen bien en la materia diversas preparaciones y aparatos para lograr una liberación sostenida.
El sujeto para tratamiento o prevención incluye mamíferos tales como seres humanos, ganado, caballos, perros, gatos, cerdos y ovejas y es preferentemente un ser humano.
El conjugado o el fármaco simultáneo se administra a un mamífero preferentemente como si estuviera contenido en un vehículo (preferentemente un vehículo farmacéuticamente aceptable). Los vehículos apropiados y sus preparaciones se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a edición, A. Gennaro ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990 y Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20.a edición, Mack Publishing, 2000. Normalmente, se utiliza una cantidad adecuada de una sal farmacéuticamente aceptable en una preparación de modo que la preparación tenga isotonicidad. Los ejemplos del vehículo incluyen solución salina fisiológica, disoluciones de Ringer y soluciones de dextrosa. El pH de estas soluciones es preferentemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 8, más preferentemente de aproximadamente 7 a aproximadamente 7,5. Otros ejemplos del vehículo incluyen preparaciones de liberación sostenida tales como matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el anticuerpo. Las matrices están en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas, liposomas o micropartículas. Será evidente para los expertos en la materia que un determinado vehículo puede ser más preferido dependiendo de, por ejemplo, la vía de administración y la concentración del anticuerpo a administrar.
El conjugado o el fármaco simultáneo se puede administrar a un mamífero mediante inyección (por ejemplo, inyección sistémica, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular o intraportal), o se puede administrar al mismo mediante otros métodos (por ejemplo, infusión) que aseguren la administración en una forma eficaz al torrente sanguíneo. El conjugado o el fármaco simultáneo se puede administrar mediante un método de perfusión aislado, tal como perfusión de tejido aislado, para ejercer un efecto terapéutico local. Se prefiere la inyección intravenosa.
Las dosis y programas eficaces para administrar el conjugado o el fármaco simultáneo de la presente invención se determinan de manera empírica. Los métodos para dicha determinación se incluyen dentro del sentido común técnico en la materia. Los expertos en la materia entenderán que la dosis del conjugado o del fármaco simultáneo a administrar varía dependiendo de, por ejemplo, el mamífero que recibirá el conjugado o el fármaco simultáneo, la vía de administración, el tipo específico de anticuerpo utilizado y otros fármacos que se van a administrar al mamífero. La cantidad diaria normal del conjugado (utilizado solo) o del fármaco simultáneo administrado puede variar entre aproximadamente 1 pg/kg de peso corporal y 100 mg/kg de peso corporal o más al día, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. En general, puede utilizarse cualquiera de las siguientes cantidades administradas: al menos aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 750 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 500 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 250 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 100 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 50 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 10 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 1 pg/kg de peso corporal o más.
El conjugado o el fármaco simultáneo se puede administrar al mamífero mediante el uso simultáneo adicional con cantidades eficaces de uno o más de otros fármacos terapéuticos. El conjugado o el fármaco simultáneo se puede administrar de manera secuencial o al mismo tiempo que uno o más de los otros agentes terapéuticos. Las cantidades del conjugado o del fármaco simultáneo y el fármaco terapéutico dependen de, por ejemplo, los tipos de fármacos utilizados, la afección patológica a tratar, el programa de administración y la vía de administración y generalmente puede ser menor que las cantidades del conjugado o el fármaco simultáneo y el fármaco terapéutico utilizados de manera individual.
El estado fisiológico del mamífero al que se le administra así el conjugado o el fármaco simultáneo puede controlarse mediante varios métodos bien conocidos por los expertos en la materia.
5. Método para la selección del compuesto que presenta un efecto sinérgico mediante el uso simultáneo con el anticuerpo anti-CD26.
También se divulga en el presente documento un método para seleccionar un compuesto que presente un efecto sinérgico mediante el uso simultáneo con un anticuerpo anti-CD26. El método de selección divulgado en el presente documento se basa en que CD26 actúa y contrarresta mutuamente con CD9 (Okamoto et al., PLOS One (2014) 9 (1): e86671). Cuando un candidato quimioterápico actúa mutuamente con CD26, su efecto se atenúa CD9. Por tanto, un candidato que difiere en el efecto inhibidor del crecimiento entre una línea celular que expresa de manera conjunta CD26 y CD9 y una línea celular que expresa CD26 pero que no expresa CD9 puede determinarse como un medicamento que presenta un efecto sinérgico mediante el uso simultáneo con un anticuerpo anti-CD26. De manera específica, el método de selección divulgado en el presente documento es un método para seleccionar un compuesto que presenta un efecto antitumoral sinérgico mediante el uso simultáneo con un anticuerpo anti-CD26, que comprende las siguientes etapas:
(a) cultivar una línea celular tumoral que expresa de manera conjunta CD26 y CD9, y una línea celular que expresa CD26 pero que no expresa CD9 en presencia de un compuesto de prueba;
(b) medir el número respectivo de células de las líneas de células tumorales así cultivadas;
(c) calcular un efecto inhibidor del crecimiento del compuesto de prueba en la línea celular tumoral que expresa de manera conjunta CD26 y CD9, y un efecto inhibidor del crecimiento del compuesto de prueba en la línea celular que expresa CD26 pero que no expresa CD9; y
(d) comparar el efecto inhibidor del crecimiento del compuesto de prueba en la línea celular tumoral que expresa de manera conjunta CD26 y CD9, y el efecto inhibidor del crecimiento del compuesto de prueba en la línea celular que expresa c D26 pero que no expresa CD9, y seleccionar el compuesto de prueba como susceptible de presentar un efecto antitumoral sinérgico mediante el uso simultáneo con un anticuerpo anti-CD26 cuando el efecto inhibidor del crecimiento en la línea celular que expresa CD26 pero que no expresa CD9 es mejor.
En este método, se puede utilizar una línea celular de mesotelioma MESO1 o H2452 como línea celular tumoral que expresa de manera conjunta CD26 y CD9. Se puede utilizar JMN o H226 como línea celular que expresa CD26 pero que no expresa CD9.
La etapa de medir el número respectivo de células de las líneas celulares tumorales puede adoptar todos los métodos conocidos siempre que el método proporcione valores de medición que reflejen el número de células. Por ejemplo, otros valores numéricos que sirven como índice para el número de células, tales como la turbidez o un valor de medición del ensayo MTT pueden utilizarse en lugar del número de células.
El efecto inhibidor del crecimiento en cada línea celular tumoral puede calcularse como el número de células con el de un control definido como 100, o se puede calcular un valor numérico que sirve como índice de eficacia del fármaco, tal como CI50. El grado del efecto inhibidor del crecimiento puede confirmarse como un efecto inhibidor del crecimiento excelente cuando el número de células cuyo crecimiento ha sido suprimido es grande.
En lo sucesivo en el presente documento, la presente invención se describirá con más detalle con referencia a los ejemplos. Sin embargo, la presente invención no está limitada por estos ejemplos.
(Ejemplo 1) Conjugación de anticuerpo y fármaco
(1) Material de partida
Se diseñó un anticuerpo anti-CD26 humanizado YS110 basado en un anticuerpo anti-CD26 de ratón 14D10 y se expresó de acuerdo con el enfoque ya informado (véase la publicación internacional n.° WO2007/014169); e Inamoto T. et al., Clin Cancer Res (2007) 13: 4191-200). La triptolida que tiene la siguiente estructura (fórmula molecular: C20H24O6; PM = 360,4) se adquirió de Shaanxi Taiji Technology (Shanxi Sheng, China).
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(2) Protocolo de conjugación
Se introdujo un grupo SH en la triptolida por ChemGenesis Inc. (Tokio, Japón). El derivado de la triptolida obtenido se denominó TR1. TR1 se proporcionó como un dímero de dichos derivados de la triptolida unidos mediante un enlace S-S para mejorar la estabilidad científica y tenía la siguiente estructura.
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Un enlazador heterodivalente SPDP (3-(2-piridilditio)-propionato de N-succinimidilo) (número de catálogo 21857, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA), GMBS (éster de N-[Y-maleimidobutiriloxi]succinimida) (número de catálogo 22309, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA) o SMCC (4-[N-maleimidometil] ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo) (número de catálogo 22360, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, Ma ) se disolvió en DMSO inmediatamente antes de su uso. YS110 se modificó mediante la reacción con el enlazador heterodivalente SPDP (15 veces la cantidad molar del anticuerpo), GMBS (30 veces la cantidad molar del anticuerpo) o SMCC (20 veces la cantidad molar del anticuerpo) a temperatura ambiente durante 30 minutos en PBS-EDTA (pH 7,5). Los enlazadores que no reaccionaron se eliminaron utilizando la columna de desalinización HiTrap (número de catálogo 21857, GE Healthcare Inc., Buckinghamshire, Reino Unido). El dímero del derivado de la triptolida TR1 S-S se disolvió en etanol al 100 % y se redujo con gel reductor de TCEP inmovilizado (número de catálogo 77712, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA) durante 2 horas. La concentración del grupo SH del TR1-SH reducido se midió mediante el ensayo DTNB ((ácido 5,5-ditio-bis-(2-nitrobenzoico)). El YS110 modificado con enlazador y el TR1-SH reaccionaron durante la noche en una proporción de 1:5,68 a temperatura ambiente en PBS-EDTA pH 7,5. El TR1-SH que no reaccionó se eliminó utilizando la columna PD-10 (número de catálogo 17085101, GE Healthcare Inc., Buckinghamshire, Reino Unido). Esta reacción se resume a continuación.
Formula 8
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El producto obtenido se esterilizó por filtración a través de la unidad de filtrado Millex-GV de 0,22 |jm (número de catálogo SLGV 013SL, EMD Millipore, Billerica, MA). La concentración final se midió utilizando el kit de reactivos de ensayo de proteínas BCA (número de catálogo 23225, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA). El TR1-SH no conjugado residual en el producto se midió mediante el ensayo DTNB.
(3) Resultados
YS110 y TR1 se conjugaron utilizando un enlazador heterodivalente (SPDP, GMBS o SMCC) de acuerdo con el método descrito anteriormente. La concentración de producto final medida con el kit de reactivos de ensayo de proteínas BCA (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA) fue de aproximadamente 1 mg/ml. El TR1-SH no conjugado residual en el producto se midió mediante el ensayo DTNB, pero fue apenas detectable (datos no mostrados).
(Ejemplo 2) Cultivo celular
Una línea celular MSTO-211H (MSTO) de mesotelioma maligno negativo para CD26 (American Type Cell Culture Collection, Manassas, VA) se transfectó con el gen CD26, que se denominó clon 12 de MSTO (Aoe K. et al., Clin Cancer Res. (2012) 18: 1447-56). Una línea de células Jurkat de leucemia de linfocitos T negativas para CD26 (American Type Cell Culture Collection, Manassas, VA) se transfectó con el gen CD26, que se denominó Jurkat CD26(+) (Tanaka T. et al., Proc Natl Acad Sci USA (1993) 90: 4586-90). El profesor Chikao Morimoto, del Instituto de Ciencias Médicas de la Universidad de Tokio, amablemente proporcionó una línea celular JMN positiva para CD26 establecida a partir de un mesotelioma maligno. Todas las líneas celulares se cultivaron en medio RPMI (número de catálogo 11875-093, Life Technologies Corp., Carlsbad, CA) que contiene suero bovino fetal al 10 % inactivado por calor (FBS, Life Technologies Corp., Carlsbad, CA), ABPC (100 pg/ml) y estreptomicina (100 pg/ml) a 37° C en entorno con CO2 al 5 %.
(Ejemplo 3) Espectrometría de masas
La relación fármaco/anticuerpo de Y-TR1 se analizó mediante espectrometría de masas de ionización/desorción láser asistida por matriz (MALDI-TOFmass) utilizando Autoflex III (Bruker Corporation, Billerica, MA) después de la ultrafiltración.
Las masas inalteradas de YS110 no conjugada e Y-TR1 (SMCC) analizadas mediante MALDI-TOFmass fueron 147012,7 y 151815,6, respectivamente (Figura 1). La cantidad molecular estimada de TR1 conjugado con anticuerpo con el grupo SMCC fue 739,6. Basado en esta cantidad molecular, el número medio de grupos TR1-SMCC unidos a una molécula de YS110 se puede calcular de acuerdo con la expresión {(151815,6 - 147012,7)/739,6} y, en consecuencia, fue de 6,489. Esto significa que 6,489 moléculas de tR-1 se unieron a una molécula de YS110 en promedio.
(Ejemplo 4) Ensayo de unión
Para examinar la unión de Y-TR1 a células de mesotelioma maligno positivas para CD26, se recuperaron células cultivadas MSTO-ts (negativas para CD26) y células del clon 12 de MSTO (positivas para CD26). Se cultivaron 1 * 106 células de cada línea celular con 1 pg/ml, 10 pg/ml o 100 pg/ml de Y-TR1 a 4° C durante 30 minutos. Las células se lavaron tres veces y se cultivaron con IgG antihumana de conejo conjugada con FITC (número de catálogo 6140-02, Biotecnología del Sur, Birmingham, AL) en una proporción de dilución de 1:100 a 4° C durante 30 minutos. Las células se lavaron tres veces, seguido del análisis FACS con Epics XL-MCL (Beckman Coulter, Inc., Brea, CA).
La unión inalterada de Y-TR1 a la línea celular de mesotelioma maligno positivo para CD26, clon 12 de MSTO, se confirmó mediante análisis de citometría de flujo (Figura 2).
(Ejemplo 5) Ensayo de citotoxicidad
La citotoxicidad de la triptolida, YS110 e Y-TR1 a líneas celulares de mesotelioma maligno y leucemia de linfocitos T se midió utilizando el kit de proliferación de células colorimétricas WST-1 (número de catálogo 11644807001, Roche Applied Science, Rotkreuz, Suiza) basado en la detección colorimétrica de un colorante de formazán. En resumen, se cultivaron 5 * 103 células de MSTO-ts, clon 12 de MSTO, JMN, Jurkat CD26(-) o Jurkat CD26(+) con triptolida (0 a 100 nM), TR1 (0 a 100 nM), YS110 (0 a 100 pg/ml) o Y-TR1 (0 a 100 |jg/ml) en medio RPMI que contiene suero bovino fetal inactivado por calor al 10 %, ABPC (100 pg/ml) y estreptomicina (100 pg/ml) en una placa de 96 pocillos a 37° C durante 48 horas en un entorno con CO2 al 5 %. El ensayo WST-1 se realizó de acuerdo con el manual proporcionado por el fabricante. La absorbencia de fondo de cada muestra a 630 nm se restó del valor de medición de la misma a 450 nm. El experimento se realizó por triplicado y se muestran los resultados normales.
Como se muestra en la figura 3, la triptolida presentó un efecto tóxico dependiente de la dosis en las líneas celulares de mesotelioma maligno MSTO-ts, clon 12 de MSTO y JMN, y las líneas celulares de leucemia de linfocitos T Jurkat y Jurkat CD26(+) después del tratamiento durante 48 horas. El valor de CI50 de la triptolida para estas líneas celulares se muestra en la tabla 4.
El derivado de la triptolida TR1 que se diseñó para la unión al enlazador se probó para determinar su citotoxicidad y valor de CI50 de la misma forma que anteriormente. Los resultados se muestran en la figura 4 y la tabla 4. TR1 se redujo a partir del dímero SS utilizando gel reductor TR-1 TCEP inmovilizado (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA) antes del ensayo.
Y-TR1 presentó citotoxicidad dependiente de la dosis para las líneas celulares de leucemia y mesotelioma maligno positivas para CD26 (Figura 5). Se comparó la citotoxicidad de Y-TR1 para la línea celular de mesotelioma maligno positivo para CD26, clon 12 de MSTO, entre 3 tipos de enlazadores (SPDP, GMBS y SMCC) (Figura 5A). Como resultado de esta comparación entre 3 tipos de enlazadores heterodivalentes, el valor de CI50 de Y-TR1 para el clon 12 de MSTO fue de 38 pg/ml, 18 pg/ml y 15 pg/ml para el uso de SPDP, GMBS y SMCC, respectivamente (Tabla 5). En este experimento, el conjugado Y-TR1 a través de SMCC presentó la mejor citotoxicidad. Por tanto, se utilizó Y-TR1 (SMCC) en experimentos posteriores. La citotoxicidad de Y-TR1 para las líneas celulares de leucemia y mesotelioma maligno positivas para CD26 o negativas para CD26 se comparó con la de YS110 no conjugada (Figuras 5A y 5B). El valor CI50 de Y-TR1 (SMCC) para varias líneas celulares se muestra en la tabla 4. Y-TR1, en comparación con YS110, presentó una citotoxicidad notablemente más elevada para las células positivas para CD26 (clon 12 de MSTO, JMN y Jurkat CD26(+)). Las líneas celulares positivas para CD26 (clon 12 de MSTO y Jurkat cD26(+)), en comparación con las células negativas para CD26 correspondientes (MSTO ts y Jurkat CD26(-)), fueron más sensibles a la citotoxicidad de Y-TR1 (Figuras 5C y 5D). Se calculó el TR-1 libre (correspondiente a Y-TR1) para la línea celular del clon 12 de MSTO a partir de los valores de CI50 de Y-TR1 (aproximadamente 15 pg/ml = 99 nM) y TR-1 no conjugado (250 nM). Como resultado, una molécula de Y-TR1 correspondió a 2,5 moléculas de TR1 (Figura 6). A partir de esto, se confirmó que la acción citotóxica sobre una línea celular de mesotelioma por molécula de triptolida fue notablemente mejorada por su conjugación con el anticuerpo anti-CD26 YS110. Estos resultados indicaron que el mesotelioma maligno se puede tratar con una cantidad menor administrada.
T l 41
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continuación
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T l 1
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(Ejemplo 6) Ensayo in vivo de efecto y estudio de toxicidad
Ratones NOD/SCID (NOD/LtSz-scid) se mantuvieron en una jaula de microaislamiento dentro de una instalación libre de patógenos específicos (SPF, del inglés 'specific pathogen-free') y se les permitió tomar libremente dieta esterilizada y agua esterilizada. El protocolo de experimentación con animales se llevó a cabo con la aprobación del Animal Care and Use Committee.
Se administraron por vía subcutánea 1 * 107 células JMN cultivadas a ratones NOD/SCID hembra de 6 a 8 semanas de edad. Un total de 30 animales se dividieron aleatoriamente en 3 tipos de grupos de tratamiento: un grupo de control, un grupo de administración de YS110 y un grupo de administración de Y-TR1. Se administraron por vía intraperitoneal 4 mg/kg/dosis de YS110 o Y-TR1 a los grupos YS110 e Y-TR1 tres veces por semana (un total de 9 veces) desde el día de la inoculación del tumor. Se administró la misma cantidad de PBS al grupo de control. Cuando un tumor se hizo evidentemente visible, se extirpó el tumor y se midió su tamaño con un calibrador Vernier. El volumen tumoral estimado se determinó mediante el cálculo de acuerdo con la expresión: n/6 * largo * ancho * ancho (Tomayko M. M. et al., Cancer Chemother Pharmacol. (1989) 24: 148-54). La diferencia estadística entre los volúmenes tumorales medios de estos grupos se determinó mediante la prueba de comparación múltiple de diferencias de mínimos cuadrados protegidos (PLSD, del inglés 'protected least-square differences') de Fisher. El análisis estadístico se realizó con el programa informático SPSS (|Bm, Armonk, Nueva York).
La figura 7 muestra los resultados sobre la eficacia in vivo de Y-TR1 en comparación con YS110 no conjugado en los modelos de xenoinjerto de ratón NOD/SCID preparados utilizando la línea celular JMN de mesotelioma maligno positiva para CD26. El volumen tumoral promedio del día 55 estimado de acuerdo con la fórmula de volumen elipsoide (n/6 * largo * ancho * alto) (Tomayko M. M. et al., Cancer Chemother Pharmacol. (1989) 24: 148-54) se comparó entre 3 grupos (control, YS110 e Y-TR1) mediante la prueba de comparación múltiple de diferencias de mínimos cuadrados protegidos (PLSD) de Fisher. El volumen tumoral promedio del grupo de administración de Y-TR1 (administrado por vía intraperitoneal 36 mg/kg en total de Y-TR1) fue notablemente menor en comparación con el grupo de control y el grupo de administración de YS110 (p <0,05). La supresión completa del crecimiento tumoral se confirmó de manera megascópica en dos de los nueve ratones del grupo de administración de Y-TR1 al finalizar el experimento (día 55). La figura 7 muestra un ejemplo normal de resultados de experimentos similares obtenidos dos veces. El peso corporal promedio de los ratones al finalizar el experimento no difirió notablemente entre los grupos.
(Ejemplo 7) Confirmación de la expresión de CD26 en la línea celular de mesotelioma
La expresión de CD26 en una línea celular de mesotelioma se confirmó mediante la medición de FACS. Las líneas celulares de mesotelioma positivas para CD26, ACC-MESO1 y JMN se utilizaron como líneas celulares de mesotelioma sarcomatoide, y NCI-H2452 y NCI-H226 se utilizaron como líneas celulares de mesotelioma epitelioide. Las células ACC-MESO1, JmN, NCI-H2452 y NCI-H226 se tiñeron con anticuerpo monoclonal anti-CD26-FITC, seguido de análisis por FACS.
Los resultados se muestran en la figura 8. Se confirmó que todas las líneas celulares probadas expresaban CD26.
(Ejemplo 8) Potenciación del efecto inhibidor del crecimiento celular de cisplatino y pemetrexed mediante el uso simultáneo con YS110 en células de mesotelioma (ejemplo comparativo)
(1) Curvas de respuesta a la dosis de cisplatino y pemetrexed
Se inocularon células MESO1 o H2452 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió cisplatino o pemetrexed a 10‘9, 10‘8, 10‘7, 10‘6, 10‘5 o 10‘4 M (n = 6). El día 2, se realizó el ensayo MTT.
Los resultados se muestran en la figura 9. El cisplatino y el pemetrexed suprimieron el crecimiento de MESO1 y H2452 de una manera dependiente de la dosis.
(2) Potenciación de los efectos inhibidores del crecimiento celular de MESO1 de cisplatino y pemetrexed por YS110 Se inocularon células MESO1 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocilios. Una hora más tarde, se añadió la combinación de cisplatino 0,3, 3 o 10 pM e YS1100,1,3 o 10 pg/ml, o la combinación de pemetrexed 0,03, 0,3 o 1 pM e YS1100,1, 3 o 10 pg/ml. El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 10. YS110 potenció los efectos inhibidores del crecimiento celular de cisplatino y pemetrexed.
Pemetrexed
(3) Potenciación de los efectos inhibidores del crecimiento celular de H2452 de cisplatino y pemetrexed por YS110
Se inocularon células H2452 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió la combinación de cisplatino 0,03, 0,3 o 1 pM e YS110 0,1, 3 o 10 pg/ml, o la combinación de pemetrexed 0,01, 0,1 o 0,3 pM e YS110 0,1, 3 o 10 pg/ml (n = 6). El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 11. YS110 potenció los efectos inhibidores del crecimiento celular de cisplatino y pemetrexed.
(4) Potenciación del efecto inhibidor del crecimiento celular de MESO1 del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed porYS110
Se inocularon células MESO1 (2 * 103 células/pocillo) o células H2452 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió una combinación de cisplatino 0,3 pM y pemetrexed 0,1 pM, o YS110 (10 pg/ml) más la combinación de cisplatino 0,3 pM y pemetrexed 0,1 pM (n = 6). El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 12. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento celular de cisplatino y pemetrexed.
(5) Potenciación de los efectos inhibidores del crecimiento de células JMN in vivo de cisplatino y pemetrexed por YS110
Se trasplantaron por vía subcutánea células JMN (3 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró por vía intraperitoneal YS110 (10 mg/kg) solo, cisplatino (0,5 mg/kg) solo, pemetrexed (50 mg/kg) solo, cisplatino (0,5 mg/kg) e YS110 (10 mg/kg) utilizados simultáneamente, o pemetrexed (50 mg/kg) e YS110 (10 mg/kg) utilizados simultáneamente a los ratones dos veces (días 1 y 4). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 13. YS110 potenció los efectos inhibidores del crecimiento tumoral in vivo de cisplatino y pemetrexed.
(6) Potenciación del efecto inhibidor del crecimiento de células JMN in vivo del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed por YS110
Se trasplantaron por vía subcutánea células JMN (5 * 103 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró por vía intraperitoneal cisplatino (0,5 mg/kg) y pemetrexed (50 mg/kg) utilizados simultáneamente, YS110 (10 mg/kg) solo o YS110 (10 mg/kg) utilizado simultáneamente con el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed a los ratones dos veces (días 1 y 4). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 14. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento tumoral in vivo de cisplatino y pemetrexed.
(7) Potenciación del efecto inhibidor del crecimiento celular de MESO1 in vivo del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed por YS110
Se trasplantaron por vía subcutánea células MESO1 (3 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró por vía intraperitoneal YS110 (10 mg/kg) solo, cisplatino (0,5 mg/kg) y pemetrexed (50 mg/kg) utilizados de manera simultánea o YS110 (10 mg/kg) utilizado de manera simultánea con el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed a los ratones dos veces (días 1 y 4). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 15. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento tumoral in vivo de cisplatino y pemetrexed en células MESO1.
(8) Potenciación del efecto inhibidor del crecimiento celular de H2452 in vivo del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed por YS110
Se trasplantaron por vía subcutánea células H2452 (3 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró por vía intraperitoneal YS110 (10 mg/kg) solo, cisplatino (0,5 mg/kg) y pemetrexed (50 mg/kg) utilizados de manera simultánea o YS110 (10 mg/kg) utilizado de manera simultánea con el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed a los ratones dos veces (días 1 y 4). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 16. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento tumoral in vivo de cisplatino y pemetrexed en células H2452.
(Ejemplo 9) Potenciación del efecto inhibidor de la invasión celular de cisplatino y pemetrexed por uso simultáneo con YS110 en células de mesotelioma (ejemplo comparativo)
(1) Acción del cisplatino y el pemetrexed sobre la invasión celular
Se inocularon células MESO1 o células H2452 (2,5 * 104 células/pocillo) en una cámara de Boyden. Una hora más tarde, se añadió cisplatino (5, 10 o 30 pM) o pemetrexed (1, 10 o 30 pM) (n = 5), seguido de un ensayo de invasión en cámara de Boyden. 24 horas después de la inoculación celular, las células invasoras se tiñeron con el kit de tinción Diff-Quik. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 17. El cisplatino suprimió la invasión a 10 y 30 pM. Por otro lado, el pemetrexed no presentó acción inhibidora sobre la invasión incluso a 30 mM.
(2) Efecto inhibidor de la invasión celular del uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed
Se inocularon células MESO1 o células H2452 (2,5 * 104 células/pocillo) en una cámara de Boyden. Una hora más tarde, se añadió la combinación de cisplatino (0, 3 o 10 pM) y pemetrexed (0, 10 o 30 pM) (n = 5), seguido del ensayo de invasión en cámara de Boyden. 24 horas después de la inoculación celular, las células invasoras se tiñeron con el kit de tinción Diff-Quik. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 18. El cisplatino suprimió la invasión celular a 10 pM, mientras que pemetrexed no potenció el efecto inhibidor de la invasión celular del cisplatino incluso a 30 pM. Estos resultados indicaron que la combinación de pemetrexed con cisplatino no potencia el efecto inhibidor sobre la invasión celular, y cisplatino y cisplatino y pemetrexed fueron equivalentes en términos de invasión celular.
(3) YS110 potencia el efecto inhibidor de la invasión celular del cisplatino en la célula MESO1
Se inocularon células MESO1 (2,5 * 104 células/pocillo) en una cámara de Boyden. Una hora más tarde, se añadió la combinación de cisplatino (0, 3 o 10 pM) e YS110 (0, 10 o 20 pg/ml) (n = 5), seguido del ensayo de invasión en cámara de Boyden. 24 horas después de la inoculación celular, las células invasoras se tiñeron con el kit de tinción Diff-Quik. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). A continuación, se estudió la interacción de YS110 con el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed. La interacción se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 19. YS110 potenció la acción inhibidora de la invasión celular de cisplatino y pemetrexed (Figura 19A). Las combinaciones de YS110 (10 pg/ml) cisplatino (10 pM) e YS110 (20 pg/ml) cisplatino (10 pM) tuvieron interacción (Figura 19B).
(4) YS110 potencia el efecto inhibidor de la invasión celular del cisplatino en la célula H2452
Se inocularon células H2452 (2,5 * 104 células/pocillo) en una cámara de Boyden. Una hora más tarde, se añadió la combinación de cisplatino (0, 3 o 10 pM) e YS110 (0, 10 o 20 pg/ml) (n = 5), seguido del ensayo de invasión en cámara de Boyden. 24 horas después de la inoculación celular, las células invasoras se tiñeron con el kit de tinción Diff-Quik. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). A continuación, se estudió la interacción de YS110 con el uso simultáneo de cisplatino y pemetrexed. La interacción se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 20. YS110 potenció de manera sinérgica la acción inhibidora de la invasión celular de cisplatino y pemetrexed (Figura 20A). Las combinaciones de YS110 (10 |jg/ml) cisplatino (10 jM ) e YS110 (20 jg/m l) cisplatino (10 jM ) tuvieron interacción (Figura 20B).
(Ejemplo 10) Uso simultáneo de gemcitabina e YS110 en células de mesotelioma
(1) Curva de respuesta a la dosis de gemcitabina en la línea celular de mesotelioma
Se estudió la gemcitabina por su efecto en el crecimiento de una línea celular de mesotelioma. Se inoculó una línea celular de mesotelioma MESO1, JMN, H2452 o H226 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió gemcitabina (10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 o 10-4 M) (N = 6). 2 días después, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 21. La gemcitabina suprimió claramente el crecimiento de JMN y H226.
(2) Efecto de YS110 y gemcitabina utilizados de manera simultánea en el crecimiento de células del mesotelioma sarcomatoide MESO1
Se inocularon células MESO1 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió en combinación gemcitabina (0, 10-8, 3 * 10-8 o 10-7 M) e YS110 (0, 1,3 o 10 jg/ml). El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). A continuación, se estudió la interacción en el uso simultáneo de medicamentos (n = 6). La interacción entre YS110 y gemcitabina utilizada de manera simultánea se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 22. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento de la gemcitabina (Figura 22A). Se observó interacción en la combinación de gemcitabina (10-8 M) e YS110 (3 jg/m l) (Figura 22B).
(3) Efecto de YS110 y gemcitabina utilizados de manera simultánea en el crecimiento de células JMN del mesotelioma sarcomatoide
Se inocularon células JMN (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió en combinación gemcitabina (0, 3 * 10-10, 10-9 o 3 * 10-8 M) e YS110 (0, 1, 3 o 10 jg/ml). El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). A continuación, se estudió la interacción en el uso simultáneo de medicamentos (n = 6). La interacción entre YS110 y gemcitabina utilizada de manera simultánea se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 23. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento de la gemcitabina (Figura 23A). Se observó interacción en la combinación de gemcitabina (3 * 10-8 M) e YS110 (3 jg/m l) y la combinación de gemcitabina (3 * 10-8 M) e YS110 (10 jg/m l) (Figura 23B).
(4) Efecto de YS110 y gemcitabina utilizados de manera simultánea en el crecimiento de células del mesotelioma epitelioide H2452
Se inocularon células H2452 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió en combinación gemcitabina (0, 10-8, 3 * 10-8 o 10-7 M) e YS110 (0, 1, 3 o 10 jg/ml). El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). A continuación, se estudió la interacción en el uso simultáneo de medicamentos (n = 6). La interacción entre YS110 y gemcitabina utilizada de manera simultánea se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 24. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento de la gemcitabina (Figura 24A). Se observó interacción en la combinación de gemcitabina (10-7 M) e YS110 (3 jg/m l) (Figura 24B).
(5) Efecto de YS110 y gemcitabina utilizados de manera simultánea en el crecimiento de células del mesotelioma epitelioide H226
Se inocularon células H226 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos. Una hora más tarde, se añadió en combinación gemcitabina (0, 10-8, 3 * 10-8 o 10-7 M) e YS110 (0, 1, 3 o 10 jg/ml). El día 2, se realizó el ensayo MTT. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). A continuación, se estudió la interacción en el uso simultáneo de medicamentos (n = 6). La interacción entre YS110 y gemcitabina utilizada de manera simultánea se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 25. YS110 potenció el efecto inhibidor del crecimiento de la gemcitabina (Figura 25A). Se observó interacción en la combinación de gemcitabina (10-8 M) e YS110 (3 jg/ml), la combinación de gemcitabina (3 * 10-8 M) e YS110 (3 jg/m l) y la combinación de gemcitabina (3 * 10-8 M) e YS110 (10 jg/m l) (Figura 25B).
(6) Uso simultáneo de gemcitabina con terapia estándar con cisplatino y pemetrexed
Se inocularon células MESO1, JMN, H2452 o H226 (2 * 103 células/pocillo) en una placa de 96 pocilios. Una hora más tarde, se añadió gemcitabina 3 * 10-8 M o 10-7 M mediante uso simultáneo con la combinación de cisplatino (0, 0,1, 0,3 o 1 pM) y pemetrexed (0, 0,03, 0,1 o 0,3 pM) (n = 6). El día 2, se realizó el ensayo MTT.
Los resultados se muestran en la figura 26. El uso simultáneo de gemcitabina con la combinación cisplatino y pemetrexed no potenció la acción inhibidora del crecimiento de cisplatino y pemetrexed.
(7) Uso simultáneo de YS110 y gemcitabina contra el crecimiento in vivo de células de mesotelioma epitelioide H226
Se trasplantó por vía subcutánea H226 (3,8 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró por vía intraperitoneal YS110 (10 mg/kg), gemcitabina (20 mg/kg) o YS110 (10 mg/kg) gemcitabina (20 mg/kg) a los ratones dos veces (días 2 y 4) (n = 6). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). La interacción entre YS110 y gemcitabina utilizada de manera simultánea se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 27. El YS110 solo, la gemcitabina sola y los grupos de YS110 gemcitabina presentaron un efecto inhibidor del 34 %, 29 % y 88 %, respectivamente, y cada uno presentó un efecto inhibidor significativo. Se observó interacción en el uso simultáneo de YS110 y gemcitabina.
(8) Uso simultáneo de YS110 y gemcitabina contra el crecimiento in vivo de células de mesotelioma sarcomatoide JMN
Se trasplantaron por vía subcutánea células H226 (3 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró por vía intraperitoneal YS110 (10 mg/kg), gemcitabina (10 mg/kg) o YS110 (10 mg/kg) gemcitabina (10 mg/kg) a los ratones dos veces (días 2 y 4) (n = 6). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont). La interacción entre YS110 y gemcitabina utilizada de manera simultánea se analizó mediante ANOVA bidireccional.
Los resultados se muestran en la figura 28. El YS110 solo, la gemcitabina sola y los grupos de YS110 gemcitabina presentaron un efecto inhibidor del 34 %, 29 % y 88 %, respectivamente, y cada uno presentó un efecto inhibidor significativo. Se observó interacción en el uso simultáneo de YS110 y gemcitabina.
(Ejemplo 11) Uso simultáneo con YS110 contra el crecimiento in vivo de la línea celular de cáncer de pulmón positiva para CD26 (ejemplo comparativo)
(1) Uso simultáneo de YS110 y cisplatino y pemetrexed contra el crecimiento in vivo de la línea celular HCC827 de cáncer de pulmón positiva para CD26
Se trasplantaron por vía subcutánea células HCC827 (1,8 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. El día 1, Se administró por vía intraperitoneal YS110 (10 mg/kg) solo, cisplatino (0,5 mg/kg) pemetrexed (50 mg/kg) o YS110 (10 mg/kg) cisplatino (0,5 mg/kg) pemetrexed (50 mg/kg) a los ratones. El día 4, se administró la misma cantidad del mismo fármaco por el mismo método que en el día 1 (n = 6). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 29. YS110 potenció el efecto de cisplatino y pemetrexed.
(2) Uso simultáneo de YS110 y gefitinib contra el crecimiento in vivo de células HCC4006 de la línea celular de cáncer de pulmón positivas para CD26
Se trasplantaron por vía subcutánea células HCC827 ( 0,5 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró YS110 (10 mg/kg, administración intraperitoneal), gefitinib (100 mg/kg, administración oral) o YS110 (10 mg/kg, administración intraperitoneal) gefitinib (100 mg/kg, administración oral) a los ratones dos veces (días 1 y 4). El día 7, se extirparon sus tumores y se midieron los pesos de los tumores. Se probó una diferencia significativa mediante la prueba t de dos colas (frente a Cont).
Los resultados se muestran en la figura 30. YS110 potenció el efecto de gefitinib.
(3) Uso simultáneo de YS110 y gefitinib contra el crecimiento in vivo de la línea celular HCC827 de cáncer de pulmón positiva para CD26
Se trasplantaron por vía subcutánea células HCC827 ( 0,9 * 105 células/animal) a la espalda de ratones SCID hembra. El día del trasplante se definió como el día 0. Se administró YS110 (10 mg/kg, administración intraperitoneal), gefitinib

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado que comprende un anticuerpo anti-CD26 o un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo, que está unido a triptolida.
2. El conjugado de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-CD26 o el fragmento del mismo está humanizado.
3. El conjugado de la reivindicación 2, en donde el anticuerpo o el fragmento humanizado comprende:
(i) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7; o (ii) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 7, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 80 % o más de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 8 a 14.
4. El conjugado de la reivindicación 2, en donde el anticuerpo o el fragmento humanizado comprende:
(i) al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 90 % o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene el 90 % o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; o
(ii) al menos una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos desde la posición 20 a la posición 465 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, y al menos una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos desde la posición 21 a la posición 234 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18.
5. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde el anticuerpo o el fragmento humanizado se une a uno o más péptidos seleccionados del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 19 a 28.
6. El conjugado de la reivindicación 2, en donde el anticuerpo humanizado se produce mediante una cepa denominada s604069.YST-pABMC148 (x411) con el número de depósito PTA-7695 de la American Type Culture Collection (ATCC).
7. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el fragmento se selecciona del grupo que consiste en Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv y F(ab')2.
8. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-CD26, o un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo, y gemcitabina.
9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, en donde el anticuerpo anti-CD26 o el fragmento está humanizado.
10. La composición farmacéutica de la reivindicación 9, en donde el anticuerpo o el fragmento humanizado es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7.
11. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, para su uso en el tratamiento del mesotelioma maligno.
12. El conjugado o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, que inhibe el crecimiento de una célula de mesotelioma maligno.
13. El conjugado o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, que lisa una célula de mesotelioma maligno.
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201809746D0 (en) * 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
CN112996805A (zh) 2018-08-30 2021-06-18 Hcw生物科技公司 多链嵌合多肽和其用途
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WO2020047473A1 (en) 2018-08-30 2020-03-05 HCW Biologics, Inc. Single-chain and multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
CN109709337B (zh) * 2018-12-28 2021-09-14 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 人cd26的免疫组化检测试剂盒及其临床应用
US11738052B2 (en) 2019-06-21 2023-08-29 HCW Biologics, Inc. Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
US20210023238A1 (en) * 2019-07-23 2021-01-28 City Of Hope Triptolide antibody conjugates
CN115836087A (zh) * 2020-04-29 2023-03-21 Hcw生物科技公司 抗cd26蛋白及其用途
CN112725286B (zh) * 2021-03-30 2021-06-29 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种分泌雷公藤甲素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
AU2022271679A1 (en) 2021-05-13 2023-12-07 Adienne S.A. Methods of treating graft versus host disease
EP4337692A2 (en) 2021-05-13 2024-03-20 Adienne S.A. Methods of treating dermatomyositis
JP2022184105A (ja) 2021-05-31 2022-12-13 ワイズ・エー・シー株式会社 抗ｃｄ２６抗体と免疫チェックポイント阻害剤との併用療法
CN117159740B (zh) * 2023-08-28 2024-02-23 中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所) 一种雷公藤甲素抗体药物偶联物及其制备方法和应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6294546B1 (en) * 1999-08-30 2001-09-25 The Broad Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Uses of diterpenoid triepoxides as an anti-proliferative agent
US20050089924A1 (en) 2000-08-14 2005-04-28 Chih-Ming Ho Biosensors and methods for their use
AU2002308637B2 (en) * 2001-05-11 2007-05-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cd26 monoclonal antibodies as therapy for diseases associated with cells expressing cd26
RU2486204C2 (ru) * 2005-07-22 2013-06-27 Уай'З Терапьютикс Ко., Лтд. Антитела против сd26 и способы их применения
WO2008114876A1 (en) 2007-03-14 2008-09-25 The University Of Tokyo A method of treating malignant mesothelioma
WO2010129918A1 (en) * 2009-05-07 2010-11-11 Regents Of The University Of Minnesota Triptolide prodrugs
EP2968140A4 (en) * 2013-03-15 2016-11-16 Pharmagenesis Inc INTRAVENOUS EMULSIONS OF TRIPTOLIDE AS IMMUNOMODULATORS AND ANTICROBIAL I

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