ES2881220T3 - Métodos de tratamiento del cáncer usando 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona - Google Patents

Abstract

Un compuesto para su uso en un método de tratamiento o gestión del cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento o gestión, en donde el compuesto es 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6- diona, que tiene la siguiente estructura: **(Ver fórmula)** o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde el cáncer es mieloma o linfoma.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos de tratamiento del cáncer usando 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona

1. Campo

En la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en un método de tratamiento del cáncer, en donde el cáncer es mieloma o linfoma.

2. Antecedentes

2.1 Patobiología del cáncer

El cáncer se caracteriza principalmente por un aumento en el número de células anormales derivadas de un tejido normal dado, invasión de tejidos adyacentes por estas células anormales o propagación linfática o por transmisión sanguínea de células malignas a ganglios linfáticos regionales y a sitios distantes (metástasis). Los datos clínicos y los estudios de biología molecular indican que el cáncer es un proceso con múltiples etapas que comienza con cambios preneoplásicos de poca importancia, que pueden progresar, bajo ciertas condiciones, a neoplasia. La lesión neoplásica puede evolucionar clonalmente y desarrollar una capacidad creciente de invasión, crecimiento, metástasis y heterogeneidad, especialmente bajo condiciones en las que las células neoplásicas escapan de la vigilancia inmune del huésped. Roitt, I., Brostoff, J y Kale, D., Immunology, 17.1-17.12 (3a ed., Mosby, St. Louis, Mo, 1993).

Existe una enorme variedad de cánceres que se describen con detalle en la bibliografía médica. Los ejemplos incluyen cáncer de pulmón, colon, recto, próstata, mama, cerebro e intestino. La incidencia del cáncer sigue aumentando con el envejecimiento de la población en general, a medida que se desarrollan nuevos cánceres, y a medida que crecen las poblaciones susceptibles (p. ej., personas infectadas con SIDA o excesivamente expuestas a la luz solar). Por lo tanto, existe una tremenda demanda de nuevos métodos y composiciones que puedan usarse para tratar a pacientes con cáncer.

Muchos tipos de cánceres están asociados con la formación de nuevos vasos sanguíneos, un proceso conocido como angiogénesis. Se han elucidado varios de los mecanismos implicados en la angiogénesis inducida por tumores. El más directo de estos mecanismos es la secreción por las células tumorales de citoquinas con propiedades angiogénicas. Los ejemplos de estas citoquinas incluyen el factor de crecimiento de fibroblastos ácido y básico (a, b-FGF), angiogenina, factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), y TNF-a. Alternativamente, las células tumorales pueden liberar péptidos angiogénicos a través de la producción de proteasas y la posterior degradación de la matriz extracelular en donde se almacenan algunas citoquinas (p. ej., b-FGF). La angiogénesis también puede ser inducida indirectamente a través del reclutamiento de células inflamatorias (particularmente macrófagos) y su posterior liberación de citoquinas angiogénicas (p. ej., TNF-a, b-FGF).

Linfoma se refiere a cánceres que se originan en el sistema linfático. El linfoma se caracteriza por neoplasmas malignos de linfocitos -linfocitos B y linfocitos T-(es decir, las células B y células T). El linfoma generalmente comienza en los ganglios linfáticos o colecciones de tejido linfático en los órganos, incluyendo, pero no limitado a, estómago o intestinos. El linfoma puede implicar la médula ósea y la sangre en algunos casos. El linfoma puede diseminarse de un sitio a otras partes del cuerpo.

El tratamiento de varias formas de linfomas se describe, por ejemplo, en la patente de EE. UU. no. 7.468.363. Dichos linfomas incluyen, pero no están limitados a, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de células B cutáneo, linfoma de células B activadas, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células del manto (MCL), linfoma de centro folicular, linfoma transformado, linfoma linfocítico de diferenciación intermedia, linfoma linfocítico intermedio (ILL), linfoma linfocítico poco diferenciado difuso (PDL), linfoma centrocítico, linfoma de células escindidas pequeñas difuso (DSCCL), linfomas de células T periféricas (PTCL), linfoma de células T cutáneo y linfoma de zona del manto y linfoma folicular de grado bajo.

El linfoma no de Hodgkin (NHL) es el quinto cáncer más común en hombres y mujeres en los Estados Unidos, con una estimación de 63.190 nuevos casos y 18.660 muertes en 2007. Jemal A, et al., CA Cáncer J Clin 2007; 57(1): 43­ 66. La probabilidad de desarrollar NHL aumenta con la edad y la incidencia de NHL en las personas mayores ha aumentado constantemente en la última década, causando preocupación por la tendencia al envejecimiento de la población de los EE. UU. Id. Clarke CA, et al., Cáncer 2002.; 94(7):2015-2023.

El linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) representa aproximadamente un tercio de los linfomas no de Hodgkin. Mientras que algunos pacientes con DLBCL se curan con la quimioterapia tradicional, el resto muere de la enfermedad. Los fármacos anticancerosos causan un agotamiento rápido y persistente de los linfocitos, posiblemente mediante la inducción de apoptosis directa en las células T y B maduras. Véase K. Stahnke. et al., Blood 2001,98:3066-3073. Se ha mostrado que el recuento de linfocitos absoluto (ALC) es un factor de pronóstico en el linfoma no de Hodgkin folicular y los resultados recientes han sugerido que el ALC en el momento del diagnóstico es un factor de pronóstico importante en el linfoma difuso de células B grandes. Véase D. Kim et al., Journal o f Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Parte I. Vol 25, No. 18S (Suplemento del 20 de junio), 2007:8082.

Leucemia se refiere a neoplasmas malignos de los tejidos que forman la sangre. Varias formas de leucemia se describen, por ejemplo, en la patente de EE. UU. no. 7.393.862 y en la solicitud de patente provisional de EE. UU. No.

60/380.842, presentada el 17 de mayo de 2002. Aunque se ha reportado que los virus causan varias formas de leucemia en animales, las causas de la leucemia en los seres humanos son, en gran medida, desconocidas. The Merck Manual, 944-952 (17a ed., 1999). La transformación a la malignidad se produce normalmente en una sola célula a través de dos o más etapas, con la proliferación y expansión clonal posteriores. En algunas leucemias, se han identificado translocaciones cromosómicas específicas con la morfología celular leucémica consistente y características clínicas especiales (p. ej., translocaciones de 9 y 22 en la leucemia mieloide crónica, y de 15 y 17 en la leucemia promielocítica aguda). Las leucemias agudas son predominantemente poblaciones de células no diferenciadas y las leucemias crónicas, formas de células más maduras.

Las leucemias agudas se dividen en los tipos linfoblástico (ALL) y no linfoblástico (ANLL). The Merck Manual, 946-949 (17a ed., 1999). Se pueden subdividir además por su aspecto morfológico y citoquímico de acuerdo con la clasificación francesa-americana-británica (FAB) o de acuerdo a su tipo y grado de diferenciación. El uso de células B y células T específicas y anticuerpos monoclonales de antígenos mieloides son los más útiles para la clasificación. La ALL es predominantemente una enfermedad de la infancia que se establece por los hallazgos de laboratorio y examen de médula ósea. La ANLL, también conocida como leucemia mielógena aguda o leucemia mieloblástica aguda (AML), ocurre en todas las edades y es la leucemia aguda más común entre los adultos; es la forma normalmente asociada con la irradiación como un agente causal.

Las leucemias crónicas se describen como linfocíticas (CLL) o mielocíticas (CML). The Merck Manual, 949-952 (17a ed., 1999). La CLL se caracteriza por la aparición de linfocitos maduros en la sangre, médula ósea y órganos linfoides. El sello distintivo de la CLL es linfocitosis absoluta sostenida (> 5.000/pL) y un aumento de linfocitos en la médula ósea. La mayoría de los pacientes con CLL también tienen la expansión clonal de linfocitos con características de células B. La CLL es una enfermedad de la mediana edad o de edad avanzada. En la CML, el rasgo característico es la predominancia de células granulocíticas de todos los estadios de diferenciación en la sangre, médula ósea, hígado, bazo y otros órganos. En el paciente sintomático en el momento del diagnóstico, el recuento de glóbulos blancos totales (WBC) suele ser de aproximadamente 200.000/pL, pero puede alcanzar 1.000.000/pL. La CML es relativamente fácil de diagnosticar debido a la presencia del cromosoma Filadelfia.

Además de la categorización aguda y crónica, los neoplasmas también se clasifican en base a las células que dan lugar a dicho trastorno en precursor o periférico. Véase, p. ej., la publicación de patente de EE. UU. no. 2008/0051379. Los neoplasmas precursores incluyen ALL y linfomas linfoblásticos y ocurren en los linfocitos antes de que se hayan diferenciado en cualquiera de células T o B. Los neoplasmas periféricos son los que ocurren en los linfocitos que se han diferenciado en cualquiera de las células B o T. Dichos neoplasmas periféricos incluyen, pero no están limitados a, CLL de células B, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma de células B de la zona marginal extranodal de tejido linfoide asociado a la mucosa, linfoma de la zona marginal nodal, linfoma esplénico de la zona marginal, leucemia de células pilosas, plasmocitoma, linfoma difuso de células B grandes y linfoma de Burkitt. En más del 95 por ciento de los casos de CLL, la expansión clonal es de un linaje de células B. Véase Cancer: Principles & Practice of Oncology (3a. Edición) (1989) (p. 1843-1847). En menos del 5 por ciento de los casos de CLL, las células tumorales tienen un fenotipo de células T. A pesar de estas clasificaciones, sin embargo, el deterioro patológico de la hematopoyesis normal es el sello distintivo de todas las leucemias.

El mieloma múltiple (MM) es un cáncer de células plasmáticas en la médula ósea. Normalmente, las células plasmáticas producen anticuerpos y juegan un papel clave en la función inmune. Sin embargo, el crecimiento incontrolado de estas células conduce a dolor y fracturas de huesos, anemia, infecciones y otras complicaciones. El mieloma múltiple es la segunda malignidad hematológica más común, aunque las causas exactas del mieloma múltiple siguen siendo desconocidas. El mieloma múltiple causa altos niveles de proteínas en la sangre, orina y órganos, incluyendo, pero no limitado a, proteína M y otras inmunoglobulinas (anticuerpos), albúmina y beta-2-microglobulina. La proteína M, abreviatura de la proteína monoclonal, también conocida como paraproteína, es una proteína particularmente anormal producida por las células plasmáticas de mieloma y se puede encontrar en la sangre o en la orina de casi todos los pacientes con mieloma múltiple.

Los síntomas esqueléticos, incluyendo dolor de los huesos, están entre los síntomas clínicamente más significativos del mieloma múltiple. Las células plasmáticas malignas liberan factores estimulantes de osteoclastos (incluyendo IL-1, IL-6 y TNF) que hacen que el calcio se lixivie de los huesos causando lesiones líticas; la hipercalcemia es otro síntoma. Los factores estimulantes de osteoclastos, también conocidos como citoquinas, pueden prevenir la apoptosis, o muerte de las células de mieloma. El cincuenta por ciento de los pacientes tienen lesiones esqueléticas relacionadas con el mieloma radiológicamente detectables en el momento del diagnóstico. Otros síntomas clínicos comunes para el mieloma múltiple incluyen polineuropatía, anemia, hiperviscosidad, infecciones e insuficiencia renal.

Los tumores sólidos son masas anormales de tejido que pueden contener, pero por lo general no contienen, quistes o áreas líquidas. Los tumores sólidos pueden ser benignos (no cancerosos) o malignos (cancerosos). Los diferentes tipos de tumores sólidos se denominan así por el tipo de células que los forman. Los ejemplos de tipos de tumores sólidos incluyen, pero no están limitados a, melanoma maligno, carcinoma suprarrenal, carcinoma de mama, cáncer de células renales, carcinoma del páncreas, carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) y carcinoma de origen primario desconocido. Los fármacos comúnmente administrados a pacientes con diversos tipos o estadios de tumores sólidos incluyen, pero no están limitados a, celebrex, etopósido, ciclofosfamida, docetaxel, apecitabine, IFN, tamoxifeno, IL-2, GM-CSF, o una combinación de los mismos.

Aunque los pacientes que logran una remisión completa después de la terapia inicial tienen una buena posibilidad de cura, menos del 10 % de aquellos que no responden o que tienen recidiva logran una cura o una respuesta que dura más de 3 años. Véase Cerny T, et al., Ann Oncol., 2002; 13 Supl 4: 211 -216.

Se sabe que el rituximab agota las células B normales del huésped. Véase M. Aklilu et al., Annals of Oncology. 15: 1109-1114, 2004. Los efectos inmunológicos a largo plazo del agotamiento de las células B con rituximab y las características del conjunto de células B reconstituyentes en pacientes con linfoma no están bien definidos, a pesar del amplio uso de esta terapia. Véase Jennifer H. Anolik et al., Clinical Immunology, vol. 122, número 2, febrero de 2007, páginas 139-145.

El enfoque para los pacientes con enfermedad recidivante o refractaria se basa en gran medida en los tratamientos experimentales, seguido de trasplante de células madre, que pueden no ser apropiados para pacientes con un estado funcional deficiente o edad avanzada. Por lo tanto, existe una tremenda demanda de nuevos métodos que puedan usarse para tratar a pacientes con NHL.

El vínculo entre el cáncer y un metabolismo celular alterado ha sido bien establecido. Véase Cairns, R.A., et al. Nature Rev, 2011, 11:85-95. La comprensión del metabolismo de las células tumorales y los cambios genéticos asociados de las mismas puede conducir a la identificación de mejores métodos de tratamiento del cáncer. Id. Por ejemplo, la supervivencia y la proliferación de las células tumorales a través de un aumento del metabolismo de la glucosa se ha vinculado a la vía de PIK3, a través de la cual las mutaciones en genes supresores de tumores tales como PTEN activan el metabolismo de las células tumorales. Id. AKT1 (también conocido como PKB) estimula el metabolismo de la glucosa asociado con el crecimiento de las células tumorales por diversas interacciones con PFKFB3, ENTPD5, mTOR y TSC2 (también conocido como, tuberina). Id.

Los factores de transcripción HIF1 y HIF2 son en gran parte responsables de la respuesta celular a las condiciones de bajo nivel de oxígeno a menudo asociadas con tumores. Id. Una vez activado, HIF1 promueve la capacidad de las células tumorales para llevar a cabo la glucólisis. Id. Por lo tanto, la inhibición de HIF1 puede ralentizar o revertir el metabolismo de las células tumorales. La activación de HIF1 se ha relacionado con PI3K, proteínas supresoras de tumores, tales como VHL, succinato deshidrogenasa (SDH) y fumarato hidratasa. Id. El factor de transcripción oncogénico MYC también se ha vinculado con el metabolismo de las células tumorales, específicamente la glicólisis. Id. MYC también promueve la proliferación celular por las vías metabólicas de la glutamina. Id.

La proteína quinasa activada por AMP (AMPK) funciona como un punto de control metabólico que las células tumorales deben superar con el fin de proliferar. Id. Se han identificado varias mutaciones que suprimen la señalización de AMPK en las células tumorales. Véase Shackelford, D.B. y Shaw, R.J., Nature Rev. Cancer, 2009, 9:563-575. STK11 ha sido identificado como un gen supresor de tumor relacionado con el papel de la AMPK. Véase Cairns, R.A., et al. Nature Rev. 2011, 11:85-95.

El factor de transcripción p53, un supresor tumoral, también tiene un papel importante en la regulación del metabolismo celular. Id. La pérdida de p53 en las células tumorales puede ser un contribuyente importante de cambios en el metabolismo de las células tumorales a la vía glicolítica. Id. El factor de transcripción OCT1, otra diana potencial para agentes quimioterapéuticos, puede cooperar con p53 en la regulación del metabolismo de las células tumorales. Id.

La piruvato quinasa M2 (PKM2) promueve cambios en el metabolismo celular que confieren ventajas metabólicas a las células cancerosas al soportar la proliferación celular. Id. Por ejemplo, se han encontrado que las células de cáncer de pulmón que expresan PKM2 sobre PKM1 tienen dicha ventaja. Id. En la clínica, PKM2 ha sido identificado como sobreexpresado en un número de tipos de cáncer. Id. Por lo tanto, PKM2 puede ser un biomarcador útil para la detección temprana de tumores.

Las mutaciones en las isocitrato deshidrogenasas IDH1 e IDH2 se han vinculado con tumorogénesis, específicamente, en glioblastoma y leucemia mieloide aguda. Véase Mardis, E.R. et al., N. Engl. J. Med, 2009, 361:1058-1066; Parsons, D.W. et a l, Science, 2008, 321:1807-1812.

La incidencia del cáncer sigue aumentando al envejecer la población en general, a medida que se desarrollan nuevos cánceres, y a medida que crecen las poblaciones susceptibles (p. ej., las personas infectadas con SIDA, las personas mayores o excesivamente expuestas a la luz solar). Por lo tanto, existe una tremenda demanda de nuevos métodos, tratamientos y composiciones que puedan usarse para tratar a pacientes con cáncer, incluyendo, pero no limitado a, aquellos con linfoma, NHL, mieloma múltiple, AML, leucemias y tumores sólidos.

Por consiguiente, los compuestos que puedan controlar y/o inhibir la angiogénesis no deseada o inhibir la producción de ciertas citoquinas, incluyendo TNF-a, pueden ser útiles en el tratamiento y prevención de diversas formas de cáncer.

2.2 Métodos de tratamiento del cáncer

La terapia del cáncer actual puede implicar cirugía, quimioterapia, terapia hormonal y/o tratamiento de radiación para erradicar las células neoplásicas en un paciente (véase, por ejemplo, Stockdale, 1998, Medicine, vol. 3, Rubenstein y Federman, eds., Capítulo 12, Sección IV). Recientemente, la terapia del cáncer también podría implicar terapia biológica o inmunoterapia. Todos estos enfoques pueden plantear inconvenientes significativos para el paciente. La cirugía, por ejemplo, puede estar contraindicada debido a la salud de un paciente o puede ser inaceptable para el paciente. Además, la cirugía no puede eliminar por completo el tejido neoplásico. La terapia con radiación es eficaz sólo cuando el tejido neoplásico exhibe una mayor sensibilidad a la radiación que el tejido normal. La terapia con radiación también puede a menudo provocar efectos secundarios graves. La terapia hormonal rara vez se da como un solo agente. Aunque la terapia hormonal puede ser eficaz, a menudo se usa para prevenir o retrasar la recurrencia del cáncer después de que otros tratamientos han eliminado la mayoría de las células cancerosas. Ciertas terapias biológicas y otras están limitadas en número y pueden producir efectos secundarios tales como erupciones o hinchazones, síntomas parecidos a la gripe, incluyendo fiebre, escalofríos y fatiga, problemas en el tracto digestivo o reacciones alérgicas.

Con respecto a la quimioterapia, hay una diversidad de agentes quimioterapéuticos disponibles para el tratamiento del cáncer. Un número de agentes quimioterapéuticos del cáncer actúan mediante la inhibición de la síntesis de ADN, ya sea directamente o indirectamente mediante la inhibición de la biosíntesis de los precursores de trifosfato de desoxirribonucleótidos, para evitar la replicación del ADN y la división celular concomitante. Gilman et al., Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis o f Therapeutics, Décima Ed. (McGraw Hill, Nueva York).

A pesar de la disponibilidad de una variedad de agentes quimioterapéuticos, la quimioterapia tiene muchos inconvenientes. Stockdale, Medicine, vol. 3, Rubenstein y Federman, eds., cap. 12, secc. 10, 1998. Casi todos los agentes quimioterapéuticos son tóxicos, y la quimioterapia provoca efectos secundarios significativos y a menudo peligrosos, incluyendo náuseas graves, depresión de la médula ósea, e inmunosupresión. Además, incluso con la administración de combinaciones de agentes quimioterapéuticos, muchas células tumorales son resistentes o desarrollan resistencia a los agentes quimioterapéuticos. De hecho, las células resistentes a los agentes quimioterapéuticos particulares usados en el protocolo de tratamiento a menudo demuestran ser resistentes a otros fármacos, incluso si esos agentes actúan por mecanismos diferentes de aquellos fármacos usados en el tratamiento específico. Este fenómeno se conoce como resistencia a múltiples fármacos. Debido a la resistencia a los fármacos, muchos cánceres demuestran ser refractarios a los protocolos de tratamiento de quimioterapia estándar.

Existe una necesidad significativa de métodos seguros y eficaces de tratamiento, prevención y manejo del cáncer, particularmente para cánceres que son refractarios a tratamientos estándar, tales como cirugía, terapia con radación, quimioterapia y terapia hormonal, mientras se reducen o evitan las toxicidades y/o efectos secundarios asociados con las terapias convencionales.

2.3 Cereblon

La proteína Cereblon (CRBN) es una proteína de 442 aminoácidos conservada de plantas a seres humanos. En los seres humanos, el gen de CRBN ha sido identificado como un gen candidato de un retraso mental no sindrómico autosómico recesivo (ARNSMR). Véase Higgins, J.J. et al., Neurology, 2004, 63: 1927-1931. CRBN se caracterizó inicialmente como una nueva proteína que contenía RGS que interaccionaba con una proteína de los canales de potasio activada por calcio (SLO1) en el cerebro de rata, y más tarde se mostró que interaccionaba con un canal de cloruro regulado por voltaje (CIC-2) en la retina con AMPK7 y DDB1. Véase Jo, S. et al., J. Neurochem, 2005, 94:1212-1224; Hohberger B. et al., FEBS Lett, 2009, 583:633-637; Angers S. et al., Nature, 2006, 443:590-593. DDB1 se identificó originalmente como una proteína de reparación por escisión de nucleótidos que se asocia con la proteína 2 de unión a ADN dañado (DDB2). Su actividad defectuosa causa el defecto de reparación en los pacientes con grupo de complementación E de xeroderma pigmentoso (XPE). DDB1 también parece funcionar como un componente de numerosos complejos distintos de ubiquitina-proteína ligasa E3 DCX (DDB1-CUL4-caja-X) que median la ubiquitinación y la degradación proteosomal subsiguiente de proteínas diana. CRBN también ha sido identificada como una diana para el desarrollo de agentes terapéuticos para enfermedades de la corteza cerebral. Véase WO 2010/137547 A1.

Cereblon ha sido identificado recientemente como una diana molecular clave que se une a la talidomida para causar defectos de nacimiento. Véase Ito, T. et al., Science, 2010, 327:1345-1350. Se encontró que DDB1 interaccionaba con CRBN y, por tanto, se asoció indirectamente con talidomida. Además, la talidomida fue capaz de inhibir la autoubiquitinación de CRBN in vitro , lo que sugiere que la talidomida es un inhibidor de la ubiquitina ligasa E3. Es importante destacar que esta actividad fue inhibida por la talidomida en las células de tipo salvaje, pero no en células con sitios de unión a CRBN mutados que impiden la unión de la talidomida. El sitio de unión de la talidomida fue mapeado a una región C-terminal de 104 aminoácidos altamente conservada en CRBN. Los mutantes puntuales individuales en CRBN, Y384A y W386A eran ambos defectuosos para la unión de la talidomida, con el mutante de doble punto teniendo la actividad de unión de la talidomida más baja. Se confirmó un vínculo entre CRBN y el efecto teratogénico de la talidomida en modelos animales de pez cebra y embriones de pollo.

La comprensión de la talidomida y otras dianas de fármacos permitirá la definición de los mecanismos moleculares de eficacia y/o toxicidad y puede conducir a fármacos con mejores perfiles de eficacia y toxicidad.

Las células plasmáticas humanas (PC) y sus precursores juegan un papel esencial en la respuesta inmune humoral, pero igualmente dan lugar a una variedad de trastornos malignos de células B, incluyendo el mieloma múltiple. La diferenciación de las células B en células plasmáticas secretoras de anticuerpos es un componente crucial de la respuesta inmune. Véase Jacob et al., Autoimmunity 2010, 43 (1), 84-97. Se ha identificado un pequeño número de factores de transcripción que guían el programa de desarrollo que conduce a la diferenciación de las células plasmáticas. PAX5 y BCL6 se expresan en células B activadas y actúan predominantemente reprimiendo la diferenciación. PAX5 reprime los genes asociados con un número de genes, incluyendo PRDM1 (el gen que codifica la proteína BLIMP-1), XBP1, e IgJ (cadena J). BCL6 suprime el desarrollo de las células plasmáticas en parte reprimiendo PRDM1. Véase Jourdan et al., Blood 2009, 114 (10), 5173-5181; Kallies et al., Immunity 2007, 26 (5), 555-566; Lenz et al., N. Engl. J. Med. 2010, 362, 1417-1429. La diferenciación y la alta secreción de inmunoglobulinas (Ig) también requiere IRF-4, XBP-1, y BLIMP-1. La expresión de IRF-4 aumenta notablemente con la diferenciación, que es esencial para la formación de las células plasmáticas y la secreción de Ig. XBP-1 controla directamente los aspectos de la vía secretora y es fuertemente inducida en células plasmáticas por una combinación de pérdida de represión de genes mediada por PAX5 y el control postranscripcional. BLIMP-1 se expresa en las células plasmáticas, pero está ausente en los estadios más tempranos de la ontogenia de las células B. Véase Jourdan et al., Blood 2009, 114 (10) 5173-5181; Kallies et al., Immunity 2007, 26(5), 555-566; Lenz et a l, N. Engl. J. Med. 2010, 362, 1417-1429. La lenalidomida, un compuesto inmunomodulador, ha demostrado ser eficaz en el tratamiento del mieloma múltiple y linfomas ABC. Las actividades potenciales de compuestos inmunomoduladores sobre las células B normales incluyen la activación o inhibición de células B CD19+ sin estimular (dependiendo del estímulo). En las células tumorales B, los compuestos inmunomoduladores inhiben la proliferación de mieloma múltiple y linfoma, la inducción del gen supresor de tumores (inhibidores de quinasas dependientes de ciclina p21, p27, etc.), la polimerización de F-actina y la agrupación de CD20 en MCL y CLL, también inhiben la expresión de C/EBPp, Ir F4, BLIMP-1 y XBP-1 en m M, e inhiben la activación de NF-kB en células de linfoma ABC.

CD44 (Pgp-1, H-CAM; Hermes; ECMR III; HUTCH-1) se expresa en leucocitos, eritrocitos y células epiteliales. Es el receptor para hialuronano, un componente principal de las matrices extracelulares y media la adhesión de los leucocitos, y participa en una amplia variedad de funciones celulares, incluyendo la activación de linfocitos (también considerado un marcador de células B activadas), recirculación y anidamiento, hematopoyesis y metástasis tumoral. Véase Cichy et al., Journal of Cell Biology 2003, 161 (5), 839-843. CD83 (BL11; HB15; proteína de activación de células B) se expresa en las células B y las células T después de la activación celular, células dendríticas, células de Langerhans y linfocitos. También se expresa por las células B tras la activación y contribuye a la regulación de la función de las células B, y se expresa por las células B inmaduras y regula negativamente su posterior maduración y supervivencia en la periferia. Véase Breloer et al., Trends in Immunology 2008, 29 (4), 186-194. El gen de la cadena IgJ (cadena de unión de inmunoglobulina) se expresa solo después de la diferenciación terminal de las células B en células plasmáticas por una estimulación por Ag y/o de citoquinas. La cadena IgJ expresada se incorpora en un pentámero de IgM o un dímero de IgA, y es necesaria tanto para la secreción celular como mucosal de los Ab. La alta expresión de la cadena J en pacientes con artritis reumatoide (RA) predice la falta de respuesta a rituximab. Los niveles elevados de ARNm en la línea base de IgJ (un marcador para plasmablastos secretores de anticuerpos) mostraron una reducción de las tasas de respuesta clínica a rituximab. Véase Owczarczyk et a l, Science Translational Medicine 2011,3(101), 92.

También existe una necesidad de compuestos potentes que interaccionen con cereblon y posteriormente inhiban la diferenciación de las células B al linaje de plasmablasto/células plasmáticas. Dicho compuesto puede inhibir el desarrollo y/o supervivencia de plasmablastos y células plasmáticas, y reducir la producción de autoanticuerpos patógenos, dando lugar a una disminución de la sintomatología de las enfermedades en donde la sobreproducción de autoanticuerpos es inherente a la fisiopatología.

3. Resumen

En la presente memoria se describen métodos de tratamiento y prevención del cáncer, incluyendo el cáncer primario y metastásico, así como el cáncer que es refractario o resistente a la quimioterapia convencional, que comprenden administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento o prevención una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la estructura de la Fórmula I:

o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma como agente único o como una parte de una terapia de combinación. En la presente memoria se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar o gestionar el cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento o gestión, en donde el compuesto es 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona con la siguiente estructura:

o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde el cáncer es mieloma o linfoma.

En una realización, el compuesto es (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la estructura de la Fórmula I-S:

En una realización, el compuesto es (fí)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la estructura de la Fórmula I-R:

En la presente memoria también se describen métodos para gestionar el cáncer (p. ej., prevención de su recurrencia, o alargamiento del tiempo de remisión), que comprenden administrar a un paciente que necesita dicha gestión una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

Además, en la presente memoria se describen métodos de tratamiento, prevención o gestión del cáncer, que comprenden administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento, prevención o gestión una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil) bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; en combinación con una terapia usada convencionalmente para tratar, prevenir o gestionar el cáncer. Los ejemplos de dichas terapias convencionales incluyen, pero no están limitadas a, cirugía, quimioterapia, terapia con radiación, terapia hormonal, terapia biológica e inmunoterapia.

En la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para tratar o gestionar mieloma o linfoma, el método comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento, prevención, o gestión 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2.6- diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en una cantidad que es suficiente para proporcionar una concentración plasmática del compuesto en estado estacionario, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 gM. En otra realización, la cantidad es suficiente para proporcionar una concentración plasmática máxima del compuesto en estado estacionario, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 gM. En otra realización, la cantidad es suficiente para proporcionar una concentración plasmática mínima del compuesto en estado estacionario, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 gM. En otra realización, la cantidad es suficiente para proporcionar un área bajo la curva (AUC) del compuesto, que varía desde aproximadamente 100 a aproximadamente 100.000 ng*hr/mL.

En la presente memoria también se describen métodos para el tratamiento o gestión de leucemia y tumores sólidos.

En algunas realizaciones, el linfoma se selecciona del grupo que consiste en linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfomas relacionados con SIDA, linfoma anaplásico de células grandes, linfoma angioinmunoblástico, linfoma blástico de células NK, linfoma de Burkitt, linfoma tipo Burkitt (linfoma pequeño de células no escindidas, linfoma linfocítico pequeño, linfoma cutáneo de células T, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células T de tipo enteropatía, linfoma linfoblástico, linfoma de células del manto, linfoma de la zona marginal, linfoma de células T nasal, linfoma pediátrico, linfomas de células T periféricas, linfoma primario del sistema nervioso central, linfomas transformados, linfomas de células T relacionados con el tratamiento y macroglobulinemia de Waldenstrom.

Por ejemplo, la leucemia se selecciona del grupo que consiste en leucemia mieloide aguda (AML), leucemia de células T, leucemia mieloide crónica (CML), leucemia linfocítica crónica (CLL) y leucemia linfoblástica aguda (ALL).

Por ejemplo, el tumor sólido se selecciona del grupo que consiste en melanoma, tumores de cabeza y cuello, carcinoma de mama, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, carcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, carcinoma colorrectal y carcinoma hepatocelular.

En algunas realizaciones, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para el tratamiento o gestión de linfomas no de Hodgkin, incluyendo, pero no limitado a, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), usando factores de pronóstico.

En la presente memoria también se describen métodos para el uso de biomarcadores de genes y proteínas como un predictor de la sensibilidad clínica para linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML, y/o tumores sólidos y la respuesta del paciente al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2.6- diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptables de la misma.

Los métodos descritos en la presente memoria abarcan métodos para cribar o identificar pacientes con cáncer, p. ej., pacientes con linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML, y tumores sólidos, para el tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En particular, en la presente memoria se describen métodos para la selección de pacientes que tienen una mayor tasa de respuesta a la terapia con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

En la presente memoria también se describe un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o tumor sólido, comprendiendo el método obtener tejido tumoral del paciente, purificar la proteína o ARN del tumor, y medir la presencia o ausencia de un biomarcador, p. ej., por análisis de la expresión proteica o génica. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas.

Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas de DLBCL. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1. Por ejemplo, el biomarcador es NF-kB.

Por ejemplo, el ARNm o proteína se purifica a partir del tumor y la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por el análisis de la expresión génica o proteica. Por ejemplo, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR), micromatriz, citometría de flujo o inmunofluorescencia. Por ejemplo, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por metodologías basadas en ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzima (ELISA) u otros métodos similares conocidos en la técnica.

En la presente memoria también se describe un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no de Hodgkin, comprendiendo el método obtener células tumorales del paciente, cultivar las células en presencia o ausencia de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, purificar la proteína o ARN a partir de las células cultivadas, y medir la presencia o ausencia de un biomarcador mediante, p. ej., el análisis de la expresión proteica o génica. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteína.

En la presente memoria también se describe un método para monitorizar la respuesta del tumor al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en un paciente con linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o un tumor sólido. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, medir la expresión de un biomarcador en la muestra biológica, administrar 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma al paciente, obtener posteriormente una segunda muestra biológica del paciente, medir la expresión de biomarcadores en la segunda muestra biológica, y comparar los niveles de expresión, en donde un aumento del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de una respuesta del tumor eficaz. Por ejemplo, una disminución del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de respuesta del tumor eficaz. La expresión del biomarcador monitorizado puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más.

Por ejemplo, se proporciona un método para monitorizar el cumplimiento por parte del paciente de un protocolo de tratamiento de fármacos. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, medir el nivel de expresión de por lo menos un biomarcador en la muestra, y determinar si el nivel de expresión está aumentado o disminuido en la muestra del paciente en comparación con el nivel de expresión en una muestra de control no tratada, en donde una expresión aumentada o disminuida indica el cumplimiento por parte del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos. Por ejemplo, aumenta la expresión de uno o más biomarcadores. La expresión del biomarcador monitorizado puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más.

En la presente memoria también se describe un método para predecir la sensibilidad al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en un paciente con linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o tumor sólido. Por ejemplo, el paciente es un paciente con linfoma no de Hodgkin, específicamente, un paciente con DLBCL. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, opcionalmente aislar o purificar el ARNm a partir de la muestra biológica, amplificar los transcritos de ARNm mediante, p. ej., RT-PCR, en donde un nivel de línea base más alto de un biomarcador específico indica una mayor probabilidad de que el cáncer sea sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

En la presente memoria también se describen métodos para el tratamiento o gestión del cáncer con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, usando CRBN como un factor predictivo o de pronóstico. En la presente memoria también se describen métodos cribar o identificar pacientes con cáncer para el tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, usando los niveles de CRBN como un factor predictivo o de pronóstico. En la presente memoria también se describen métodos para la selección de pacientes que tienen una mayor tasa de respuesta a la terapia con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2.6- diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, usando los niveles de CRBN como un factor predictivo o de pronóstico.

En la presente memoria también se describe un método para predecir la respuesta del paciente al tratamiento del cáncer con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprendiendo el método obtener material biológico del paciente, y medir la presencia o ausencia de CRBN. Por ejemplo, el método comprende obtener células cancerosas del paciente, cultivar las células en presencia o ausencia de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, purificar proteína o ARN a partir de las células cultivadas, y medir la presencia o ausencia de un biomarcador mediante, p. ej., el análisis de la expresión proteica o génica. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. Por ejemplo, el cáncer es linfoma, leucemia, mieloma múltiple, tumor sólido, linfoma no de Hodgkin o melanoma.

En la presente memoria también se describe un método para monitorizar la respuesta del tumor al tratamiento de fármacos en un paciente con cáncer. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, medir la expresión de un biomarcador en la muestra biológica, administrar uno o más fármacos al paciente, obtener posteriormente una segunda muestra biológica del paciente, medir la expresión del biomarcador en la segunda muestra biológica, y comparar los niveles de expresión, en donde un aumento del nivel de expresión del biomarcador después del tratamiento indica la probabilidad de una respuesta del tumor eficaz. Por ejemplo, el paciente con cáncer es un paciente con linfoma, leucemia, mieloma múltiple, tumor sólido, linfoma no de Hodgkin o melanoma.

Por ejemplo, una disminución del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de una respuesta del tumor eficaz. La expresión de biomarcadores monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más. Por ejemplo, el tumor es un linfoma, leucemia, mieloma múltiple, tumor sólido, linfoma no de Hodgkin o melanoma.

En la presente memoria también se describe un método para predecir la sensibilidad al tratamiento con fármaco en un paciente con cáncer, específicamente, un paciente con mieloma múltiple o linfoma no de Hodgkin. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, opcionalmente aislar o purificar el ARNm a partir de la muestra biológica, amplificar los transcritos de ARNm mediante, p. ej., RT-PCR, en donde un nivel de línea base más alto de un biomarcador específico indica una mayor probabilidad de que el cáncer sea sensible al tratamiento con un fármaco. Por ejemplo, el biomarcador es un gen o proteína asociada con mieloma múltiple o linfoma no de Hodgkin. Por ejemplo, los genes son aquellos asociados con CRBN y se seleccionan del grupo que consiste en DDB1, DDB2, GSK3B, CUL4A, CUL4B, XBP-1, FAS1, RANBP6, DUS3L, PHGDH, AMPK, IRF4 y NFkB. Por ejemplo, los genes se seleccionan del grupo que consiste en DDB1, DDB2, IRF4 y NFkB.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma, leucemia, mieloma múltiple, un tumor sólido, linfoma no de Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes o melanoma sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una de sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; la identificación de un gen o proteína asociada con CRBN en donde la presencia del gen o proteína asociada con CRBN es indicativa de linfoma, leucemia, mieloma múltiple, un tumor sólido, linfoma no de Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes o melanoma sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2.6- diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. Por ejemplo, el gen o proteína asociada con CRBN se selecciona del grupo que consiste en DDB1, DDB2, IRF4 y NFkB.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma, leucemia, mieloma múltiple, un tumor sólido, linfoma no de Hodgkin o melanoma sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprende medir el nivel de la actividad de CRBN en el paciente. Por ejemplo, la medición del nivel de la actividad de CRBN en el paciente comprende medir DDB1, DDB2, IRF4 y/o NFkB en las células obtenidas del paciente.

En una realización, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para el tratamiento o gestión de linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) identificar a un paciente que tiene linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o un tumor sólido sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

En una realización, el paciente tiene un linfoma no de Hodgkin. En una realización, el linfoma no de Hodgkin es linfoma difuso de células B grandes. En otra realización, el linfoma no de Hodgkin es del fenotipo de células B activadas.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma no de Hodgkin sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprende la identificación de un gen asociado con el fenotipo de células B activadas. Por ejemplo, el gen asociado con el fenotipo de células B activadas se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma no de Hodgkin sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprende medir el nivel de la actividad de NF-kB en el paciente. Por ejemplo, la medición del nivel de la actividad de NF-kB en el paciente comprende medir el nivel de actividad de NF-kB en la línea base en células tumorales obtenidas del paciente.

En la presente memoria también se describen kits útiles para predecir la probabilidad de un tratamiento eficaz de linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o tumor sólido o para monitorizar la eficacia de un tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. El kit comprende un soporte sólido, y un medio para detectar la expresión de la proteína de por lo menos un biomarcador en una muestra biológica. Dicho kit puede utilizar, por ejemplo, una tira reactiva, una membrana, un chip, un disco, una tira de ensayo, un filtro, una microesfera, un portaobjetos, una placa de múltiples pocillos o una fibra óptica. El soporte sólido del kit puede ser, por ejemplo, un plástico, silicio, un metal, una resina, vidrio, una membrana, una partícula, un precipitado, un gel, un polímero, una lámina, una esfera, un polisacárido, un capilar, una película, una placa o un portaobjetos. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, un cultivo celular, una línea celular, un tejido, un tejido oral, tejido gastrointestinal, un órgano, un orgánulo, un fluido biológico, una muestra de sangre, una muestra de orina, o una muestra de piel. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, una biopsia de ganglio linfático, una biopsia de médula ósea, o una muestra de las células tumorales de sangre periférica.

En la presente memoria también se describe un kit útil para predecir la probabilidad de un tratamiento eficaz o para monitorizar la eficacia de un tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. El kit comprende un soporte sólido, ácidos nucleicos en contacto con el soporte, en donde los ácidos nucleicos son complementarios a por lo menos 20, 50, 100, 200, 350, o más bases de ARNm, y un medio para detectar la expresión del ARNm en una muestra biológica.

En la presente memoria también se describe un kit útil para predecir la probabilidad de un tratamiento eficaz o para monitorizar la eficacia de un tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. El kit comprende un soporte sólido, por lo menos un ácido nucleico en contacto con el soporte, en donde el ácido nucleico es complementario a por lo menos 20, 50, 100, 200, 350, 500, o más bases de ARNm, y un medio para detectar la expresión del ARNm en una muestra biológica.

Por ejemplo, los kits descritos en la presente memoria utilizan medios para detectar la expresión de un biomarcador por PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR), micromatriz, citometría de flujo o inmunofluorescencia. Por ejemplo, la expresión del biomarcador se mide por metodologías basadas en ELISA u otros métodos similares conocidos en la técnica.

En la presente memoria también se describen composiciones farmacéuticas que comprenden aproximadamente 1 a 1.000 mg de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

En la presente memoria se describen además composiciones farmacéuticas que comprenden aproximadamente 1 a 1.000 mg de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; y uno o más ingredientes activos adicionales. Por ejemplo, el uno o más ingredientes activos adicionales se seleccionan de oblimersen, melfalán, G-CSF, GM-CSF, GC-CSF, BCG, EPO, interleuquinas, anticuerpos monoclonales, anticuerpos contra el cáncer, un inhibidor de cox-2, topotecán, pentoxifilina, ciprofloxacina, taxotere, iritotecán, dexametasona, doxorrubicina, vincristina, IL 2, IFN, dacarbazina, Ara-C, vinorelbina, isotretinoína, un inhibidor del proteosoma, un inhibidor de HDAC, taxanos, rituxán y prednisona.

En la presente memoria también se describen kits útiles para predecir la probabilidad de un tratamiento eficaz de linfoma, leucemia, mieloma múltiple, un tumor sólido, linfoma no de Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes o melanoma o para monitorizar la eficacia de un tratamiento con uno o más fármacos, p. ej., 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. El kit comprende un soporte sólido, y un medio para detectar la expresión de la proteína de por lo menos un biomarcador en una muestra biológica. Dicho kit puede utilizar, por ejemplo, una tira reactiva, una membrana, un chip, un disco, una tira de ensayo, un filtro, una microesfera, un portaobjetos, una placa de múltiples pocillos, o una fibra óptica. El soporte sólido del kit puede ser, por ejemplo, un plástico, silicio, un metal, una resina, vidrio, una membrana, una partícula, un precipitado, un gel, un polímero, una lámina, una esfera, un polisacárido, una capilar, una película, una placa o un portaobjetos. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, un cultivo celular, una línea celular, un tejido, un tejido oral, tejido gastrointestinal, un órgano, un orgánulo, un fluido biológico, una muestra de sangre, una muestra de orina, o una muestra de piel. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, una biopsia de ganglio linfático, una biopsia de médula ósea, o una muestra de las células tumorales de sangre periférica.

Por ejemplo, el kit comprende un soporte sólido, ácidos nucleicos en contacto con el soporte, en donde los ácidos nucleicos son complementarios a por lo menos 20, 50, 100, 200, 350, o más bases de ARNm, y un medio para la detección de la expresión del ARNm en una muestra biológica.

Por ejemplo, los kits descritos en la presente memoria utilizan medios para detectar la expresión de un biomarcador por PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR), micromatriz, citometría de flujo o inmunofluorescencia. Por ejemplo, la expresión del biomarcador se mide por metodologías basadas en ELISA u otros métodos similares conocidos en la técnica.

En la presente memoria también se describe un kit que comprende (i) una composición farmacéutica que comprende 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; y (ii) una composición farmacéutica que comprende un factor de crecimiento hematopoyético, citoquina, agente anticanceroso, antibiótico, un inhibidor de cox-2, agente inmunomodulador, agente inmunosupresor, corticosteroide, o un mutante o derivado farmacológicamente activo de los mismos, o una combinación de los mismos.

En la presente memoria también se describe un kit que comprende (i) una composición farmacéutica que comprende 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; y (ii) una composición farmacéutica que comprende oblimersen, melfalán, G-CSF, GM-CSF, EPO, un inhibidor de cox-2, topotecán, pentoxifilina, taxotere, iritotecán, ciprofloxacina, dexametasona, doxorrubicina, vincristina, IL 2, IFN, dacarbazina, Ara-C, vinorelbina, o isotretinoína.

En la presente memoria también se describe un kit que comprende (i) una composición farmacéutica que comprende 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6 diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; y (ii) sangre del cordón umbilical, sangre de la placenta, célula madre de sangre periférica, preparación de células madre hematopoyéticas o médula ósea.

4. Breve descripción de las figuras

La FIG. 1 representa el efecto del compuesto I sobre la producción de citoquinas y quimiocinas en células T humanas estimuladas por anti-CD3 - cantidad absoluta producida.

La FIG. 2 representa el efecto del compuesto I sobre la producción de citocinas y quimiocinas en células T humanas estimuladas por anti-CD3 - porcentaje del control.

La FIG. 3 representa el efecto del compuesto I-R sobre la producción de citocinas y quimiocinas en células T humanas estimuladas por anti-CD3 - cantidad absoluta producida.

La FIG. 4 representa el efecto del compuesto I-R sobre la producción de citocinas y quimiocinas en células T humanas estimuladas por anti-CD3 - porcentaje del control.

La FIG. 5 representa el efecto del compuesto I-S sobre la producción de citocinas y quimiocinas en células T humanas estimuladas por anti-CD3 - cantidad absoluta producida.

La FIG. 6 representa el efecto del compuesto I-S sobre la producción de citocinas y quimiocinas en células T humanas estimuladas por anti-CD3 - porcentaje del control.

La FIG. 7 representa el efecto de los compuestos proporcionados en la presente memoria sobre la producción de IFN-Gamma en células NK en respuesta a IgG e IL-2 inmovilizadas - cantidad absoluta producida.

La FIG. 8 representa el efecto de los compuestos proporcionados en la presente memoria sobre la producción de IFN-Gamma en células NK en respuesta a IgG e IL-2 inmovilizadas - porcentaje de cantidad de IFN-gamma producida en presencia de pomalidomida uno micromolar.

La FIG. 9 representa el efecto de los compuestos proporcionados en la presente memoria sobre ADCC mediada por células NK contra células de linfoma recubiertas con Rituximab.

La FIG. 10 representa el efecto de los compuestos proporcionados en la presente memoria sobre la proliferación de células endoteliales vasculares umbilicales humanas inducidas por factor de crecimiento.

La FIG. 11 representa el efecto de los compuestos proporcionados en la presente memoria sobre la formación del tubo celular endotelial vascular umbilical humano inducida por factor de crecimiento.

La FIG. 12 representa el efecto de los compuestos proporcionados en la presente memoria sobre la invasión de células endoteliales vasculares umbilicales humanas inducida por factor de crecimiento.

La FIG. 13 representa los resultados de los ensayos de proliferación del compuesto I-S en combinación con Rituxan.

La FIG. 14 representa el efecto antiproliferativo de loa compuestos proporcionados en la presente memoria sobre varias células DLBCL.

La FIG. 15 representa los resultados del compuesto I en el modelo de angiogénesis de Matrigel en ratón. La FIG. 16 representa los resultados del compuesto I en el modelo de xenoinjerto de DLBCL WSU-DLCL2. La FIG. 17 representa los resultados del compuesto I-S en el modelo de xenoinjerto de DoHH2 - monoterapia.

La FIG. 18 representa los resultados del compuesto I-S en el modelo de xenoinjerto de DoHH2 - terapia de combinación.

La FIG. 19 representa CD31 IHC del compuesto I-S en tumores de xenoinjerto de DoHH2.

La FIG. 20 representa los resultados del compuesto I en el modelo de xenoinjerto de MCL Rec-1.

La FIG. 21 representa los resultados de los compuestos proporcionados en la presente memoria en el modelo de xenoinjerto de MM NCI-H929.

La FIG. 22 representa los resultados de los compuestos proporcionados en la presente memoria en el modelo de xenoinjerto de glioblastoma U87.

La FIG. 23 representa los resultados de los compuestos proporcionados en la presente memoria en el modelo de xenoinjerto colorrectal HCT116.

La FIG. 24 representa los resultados de los compuestos proporcionados en la presente memoria en el modelo de xenoinjerto hepatocelular Hep3b.

La FIG. 25 representa los resultados del compuesto I-S en el ensayo de competición de perlas de afinidad de talidomida.

5. Descripción detallada

En la presente memoria se describen métodos para tratar, gestionar o prevenir el cáncer, que comprenden administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento, gestión o prevención, una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, como un agente único o como parte de una terapia de combinación.En particular, en la presente memoria se proporciona un compuesto para su uso en un método para tratar o gestionar el cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento o gestión, en donde el compuesto es 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2 il)piperidin-2,6-diona con la siguiente estructura:

o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde el cáncer es mieloma o linfoma.En algunas realizaciones, el compuesto es (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona. En algunas realizaciones, el compuesto es (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.

En ciertas realizaciones, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación con uno o más fármacos (o “segundos agentes activos”) adicionales para su uso en el tratamiento, gestión o prevención del cáncer. Los segundos agentes activos incluyen moléculas pequeñas y moléculas grandes (p. ej., proteínas y anticuerpos), algunos ejemplos de los cuales se proporcionan en la presente memoria, así como células madre. Los métodos o terapias, que pueden usarse en combinación con la administración del compuesto proporcionado en la presente memoria incluyen, pero no están limitados a, cirugía, transfusiones de sangre, inmunoterapia, terapia biológica, terapia de radiación, y otras terapias no basadas en fármacos que se usan actualmente para tratar, prevenir o gestionar el cáncer. En ciertas realizaciones, el compuesto proporcionado en la presente memoria puede usarse como un adyuvante de vacuna.

En algunas realizaciones, los métodos proporcionados en la presente memoria se basan, en parte, en el descubrimiento de que la expresión de ciertos genes o proteínas asociadas con ciertas células cancerosas se puede utilizar como biomarcadores para indicar la eficacia o el progreso del tratamiento de una enfermedad. Dichos cánceres incluyen, pero no están limitados a, linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, leucemia mieloide aguda (AML), y tumores sólidos. En ciertas realizaciones, el cáncer es del fenotipo de células B activadas en el linfoma no de Hodgkin. En particular, estos biomarcadores se pueden usar para predecir, evaluar y realizar un seguimiento de la eficacia del tratamiento del paciente con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6 diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

En algunas realizaciones, los métodos proporcionados en la presente memoria se basan, en parte, en el descubrimiento de que cereblon (CRBN) está asociado con las actividades antiproliferativas de ciertos fármacos, tales como 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, polimorfo farmacéuticamente aceptable o de la misma. Por ejemplo, CRBN se puede utilizar como un biomarcador para indicar la eficacia o el progreso del tratamiento de una enfermedad con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. Sin estar ligado a una teoría particular, la unión a CRBN puede contribuir a, o incluso ser necesario para, las actividades antiproliferativas u otras de ciertos compuestos, tales como 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

Sin estar limitado a una teoría particular, 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, puede mediar la inhibición del crecimiento, la apoptosis y la inhibición de los factores angiogénicos en ciertos tipos de cáncer tales como linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML, y tumores sólidos. Al examinar la expresión de varios genes relacionados con el cáncer en varios tipos de células antes y después del tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6 diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, se descubrió que los niveles de expresión de varios genes o proteínas relacionados con el cáncer pueden usarse como biomarcadores para predecir y monitorizar los tratamientos del cáncer.

También se descubrió que el nivel de la actividad de NF-kB se eleva en las células del fenotipo de células B activadas en el linfoma no de Hodgkin en relación con otros tipos de células de linfoma, y que dichas células pueden ser sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. Esto sugiere que la actividad en la línea base de la actividad de NF-kB en células de linfoma puede ser un biomarcador predictivo para el tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en pacientes con linfoma no de Hodgkin.

Por lo tanto, en la presente memoria también se describen métodos para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no de Hodgkin. En la presente memoria también se describe un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no de Hodgkin, comprendiendo el método obtener tejido tumoral del paciente, purificar la proteína o ARN del tumor, y medir la presencia o ausencia de un biomarcador, p. ej., por análisis de la expresión proteica o génica. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteína. Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas de DLBCL. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1. Por ejemplo, el biomarcador es NF-kB.

Por ejemplo, el método comprende obtener células tumorales del paciente, cultivar las células en presencia o ausencia de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, purificar el ARN o proteína de las células cultivadas, y medir la presencia o ausencia de un biomarcador mediante, p. ej., el análisis de la expresión génica o proteica.

Por ejemplo, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR), micromatriz, citometría de flujo o inmunofluorescencia. Por ejemplo, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por las metodologías basadas en ELISA u otros métodos similares conocidos en la técnica.

En la presente memoria también se describen métodos para cribar o identificar a pacientes con cáncer, p. ej., pacientes con linfoma no de Hodgkin, para el tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En particular, en la presente memoria se describen métodos para la selección de pacientes que tienen, o que son propensos a tener, una mayor tasa de respuesta a una terapia con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

Por ejemplo, el método comprende identificar a pacientes susceptibles de responder a la terapia mediante la obtención de células tumorales del paciente, cultivar las células en presencia o ausencia de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, purificar el ARN o proteína a partir de las células cultivadas, y medir la presencia o ausencia de un biomarcador específico. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más. Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1. Por ejemplo, el biomarcador es NF-kB.

En la presente memoria también se describe un método para monitorizar la respuesta del tumor al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en un paciente con linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o un tumor sólido. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, medir la expresión de uno o más biomarcadores en la muestra biológica, administrar 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, al paciente, obtener posteriormente una segunda muestra biológica del paciente, medir la expresión de biomarcadores en la segunda muestra biológica, y comparar los niveles de expresión del biomarcador, en donde un aumento del nivel de expresión del biomarcador después del tratamiento indica la probabilidad de una respuesta del tumor eficaz. Por ejemplo, una disminución del nivel de expresión del biomarcador después del tratamiento indica la probabilidad de respuesta del tumor eficaz. Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas de linfoma no de Hodgkin. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1. Por ejemplo, el biomarcador es NF-kB.

Por ejemplo, el método comprende medir la expresión de uno o más genes biomarcadores asociados con un fenotipo de células B activadas. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más.

En la presente memoria también se describe un método para monitorizar el cumplimiento por parte del paciente con un protocolo de tratamiento de fármacos. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, medir el nivel de expresión de por lo menos un biomarcador en la muestra, y determinar si el nivel de expresión está aumentado o disminuido en la muestra del paciente en comparación con el nivel de expresión en una muestra de control no tratada, en donde una expresión aumentada o disminuida indica el cumplimiento por parte del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos. Por ejemplo, se aumenta la expresión de uno o más biomarcadores. La expresión monitorizada puede ser, por ejemplo, la expresión de ARNm o la expresión de proteínas. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más. Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas. Los genes se seleccionan del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1. Por ejemplo, el biomarcador es NF-kB.

Por ejemplo, se proporciona un método para predecir la sensibilidad al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en un paciente con linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o un tumor sólido. Por ejemplo, el paciente es un paciente con linfoma no de Hodgkin, específicamente, un paciente con DLBCL. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, opcionalmente aislar o purificar el ARNm a partir de la muestra biológica, amplificar los transcritos de ARNm mediante, p. ej., RT-PCR, donde un nivel más alto en la línea base de uno o más biomarcadores específicos indica una mayor probabilidad de que el cáncer sea sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activadas seleccionado del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

Por ejemplo, el método para predecir la sensibilidad al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o una enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en un paciente con NHL, p. ej., DLBCL, comprende obtener una muestra de tumor del paciente, embeber la muestra de tumor en un bloque fijado en formalina, embebido en parafina y teñir la muestra con anticuerpos para CD20, CD10, bcl-6, IRF4/MUM1, bcl-2, ciclina D2, y/o FOXP1, como se describe en Hans et al., Blood, 2004, 103:275-282. Por ejemplo, la tinción de CD10, bcl-6, e IRF4/MUM-1 se puede usar para dividir DLBCL en los subgrupos GCB y no GCB para predecir un resultado.

En la presente memoria también se describe un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) obtener una muestra biológica del paciente;

(ii) medir la actividad de la vía de NF-kB en la muestra biológica; y

(iii) comparar el nivel de la actividad de NF-kB en la muestra biológica con la de una muestra biológica de un subtipo de linfoma de células B no activadas;

en donde un nivel aumentado de actividad de NF-kB en relación con las células de linfoma del subtipo de células B no activadas indica una probabilidad de una respuesta del tumor del paciente eficaz al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

Por ejemplo, la medición de la actividad de la vía de NF-kB en la muestra biológica comprende medir el nivel de NF-kB en la muestra biológica.

En la presente memoria también se describe un método para monitorizar la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) obtener una muestra biológica del paciente;

(ii) medir el nivel de la actividad de NF-kB en la muestra biológica;

(iii) administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, al paciente;

(iv) obtener una segunda muestra biológica del paciente;

(v) medir el nivel de la actividad de NF-kB en la segunda muestra biológica; y

(vi) comparar el nivel de la actividad de NF-kB en la primera muestra biológica con el de la segunda muestra biológica;

en donde una disminución del nivel de la actividad de NF-kB en la segunda muestra biológica en relación con la primera muestra biológica indica una probabilidad de una respuesta eficaz del tumor del paciente.

En la presente memoria también se describe un método para monitorizar el cumplimiento por parte del paciente con un protocolo de tratamiento de fármacos en un paciente con linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) obtener una muestra biológica del paciente;

(ii) medir el nivel de la actividad de NF-kB en la muestra biológica; y

(iii) comparar el nivel de la actividad de NF-kB en la muestra biológica con una muestra de control no tratada; en donde una disminución del nivel de la actividad de NF-kB en la muestra biológica en relación con el control indica el cumplimiento por parte del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos.

Por ejemplo, el linfoma no de Hodgkin es linfoma difuso de células B grandes.

Por ejemplo, el nivel de la actividad de NF-kB se mide mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. En la presente memoria también se describe un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) obtener una muestra biológica del paciente;

(ii) cultivar células de la muestra biológica;

(iii) purificar el ARN de las células cultivadas; y

(iv) identificar el aumento de la expresión de un gen asociado con el fenotipo de células B activadas de linfoma no de Hodgkin en relación con el fenotipo de células B no activadas control de linfoma no de Hodgkin; en donde un aumento de la expresión de un gen asociado con el fenotipo de células B activadas de linfoma no de Hodgkin indica una probabilidad de una respuesta del tumor del paciente eficaz al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

Por ejemplo, el aumento de la expresión es un aumento de aproximadamente 1,5X, 2,0X, 3X, 5X, o más.

Por ejemplo, el gen asociado con el fenotipo de células B activadas se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

Por ejemplo, la identificación de la expresión de un gen asociado con el fenotipo de células B activadas de linfoma no de Hodgkin se lleva a cabo mediante PCR cuantitativa en tiempo real.

En la presente memoria también se proporciona un método para tratar o gestionar el linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) identificar a un paciente que tiene linfoma no de Hodgkin sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o una enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; y

(ii) administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

En una realización, el linfoma no de Hodgkin es linfoma difuso de células B grandes.

En otra realización, el linfoma no de Hodgkin es del fenotipo de células B activadas.

En otra realización, el linfoma difuso de células B grandes se caracteriza por la expresión de uno o más biomarcadores sobreexpresados en las líneas celulares RIVA, U2932, TMD8, OCI-Ly3 u OCI-Ly10.

En otra realización, el linfoma difuso de células B grandes se caracteriza por la expresión de uno o más biomarcadores sobreexpresados en las líneas celulares RIVA, U2932, TMD8 u OCI-Ly10.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprende la caracterización del fenotipo del linfoma del paciente.

En una realización, el fenotipo del linfoma se caracteriza como un subtipo de células B activadas.

En una realización, el fenotipo del linfoma se caracteriza como un subtipo de células B activadas de linfoma difuso de células B grandes.

Por ejemplo, la identificación del fenotipo del linfoma comprende obtener una muestra biológica de un paciente que tiene linfoma. Por ejemplo, la muestra biológica es una muestra de cultivo de células o tejido. Por ejemplo, la muestra biológica es una muestra de células tumorales. Por ejemplo, la muestra biológica es una biopsia de los ganglios linfáticos, una biopsia de médula ósea, o una muestra de células tumorales de sangre periférica. Por ejemplo, la muestra biológica es una muestra de sangre.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma no de Hodgkin sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprende la identificación de un gen asociado con un fenotipo de células B activadas. Por ejemplo, el gen asociado con el fenotipo de células B activadas se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

Por ejemplo, la identificación de un paciente que tiene linfoma no de Hodgkin sensible al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, comprende medir el nivel de la actividad de NF-kB en el paciente. Por ejemplo, la medición del nivel de la actividad de NF-kB en un paciente comprende medir el nivel de la actividad de NF-kB en la línea base en las células tumorales obtenidas del paciente.

En otra realización, el linfoma difuso de células B grandes se caracteriza por uno o más de los siguientes:

(i) sobreexpresión de SPIB, un factor de transcripción de la familia Ets específico hematopoyético necesario para la supervivencia de las células del subtipo de células B activadas;

(ii) expresión de IRF4/MUM1 constitutiva mayor que las células del subtipo GCB;

(iii) expresión de FOXP1 constitutiva mayor regulada al alza por la trisomía 3;

(iv) expresión de Blimp 1 constitutiva mayor, es decir, PRDM1; y

(v) expresión del gen de CARD11 constitutiva mayor; y

(vi) un nivel aumentado de la actividad de NF-kB en relación con las células de DLBCL del subtipo de células B no activadas.

Los factores de pronóstico adicionales que se pueden usar al mismo tiempo que los proporcionados en la presente memoria son los factores de pronóstico de carga de la enfermedad (tumor), recuento absoluto de linfocitos (ALC), tiempo transcurrido desde la última terapia con rituximab para linfomas, o todo lo anterior. En la presente memoria también se describe un método para seleccionar a un grupo de pacientes con cáncer basado en el nivel de expresión de CRBN, o los niveles de expresión de DDB1, DDB2, IRF4 o NFkB en el cáncer, para los efectos de predecir la respuesta clínica, monitorizar la respuesta clínica, o monitorizar el cumplimiento por parte del paciente con la dosificación de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; en donde los pacientes con cáncer se seleccionan de pacientes con mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes, melanoma y tumores sólidos.

Por ejemplo, los pacientes con cáncer son pacientes con mieloma múltiple.

Por ejemplo, los pacientes de cáncer son pacientes con linfoma no de Hodgkin.

Por ejemplo, el método para seleccionar un grupo de pacientes con cáncer se basa en el nivel de expresión DDB1 en el cáncer.

Por ejemplo, el método para seleccionar un grupo de pacientes con cáncer se basa en el nivel de expresión de DDB2 en el cáncer.

Por ejemplo, el método para seleccionar un grupo de pacientes con cáncer se basa en el nivel de expresión de IRF4 en el cáncer.

Por ejemplo, el método para seleccionar un grupo de pacientes con cáncer se basa en el nivel de expresión de NFkB en el cáncer.

Por ejemplo, el método comprende seleccionar un grupo de pacientes con cáncer que responde al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una de sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; basado en el nivel de expresión de CRBN, o los niveles de expresión de DDB1, DDB2, IRF4 o NFkB en las células T, células B o células plasmáticas del paciente, para los efectos de predecir la respuesta clínica, monitorizar la respuesta clínica, o monitorizar el cumplimiento por parte del paciente con la dosificación de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

Por ejemplo, los pacientes con cáncer se seleccionan de pacientes con mieloma múltiple, linfoma no de Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes, melanoma y tumor sólido. Es 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para uso en

En la presente memoria también se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para tratar linfoma, linfoma no de Hodgkin y mieloma múltiple, que dan como resultado una mejora en la supervivencia global del paciente. En algunas realizaciones, la mejora en la supervivencia global del paciente se observa en una población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En algunas realizaciones, la población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, se caracteriza por uno o más biomarcadores proporcionados en la presente memoria.

En otras realizaciones, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para tratar linfoma, linfoma no de Hodgkin y mieloma múltiple, que dan como resultado la supervivencia libre de enfermedad del paciente. En algunas realizaciones, la supervivencia libre de enfermedad del paciente se observa en una población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En algunas realizaciones, la población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, se caracteriza por uno o más biomarcadores proporcionados en la presente memoria.

En otras realizaciones, en la presente memoria se proporciona para su uso en métodos para tratar linfoma, linfoma no de Hodgkin y mieloma múltiple, que dan como resultado una mejora en la tasa de respuesta objetiva en la población de pacientes. En algunas realizaciones, la población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En algunas realizaciones, la población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, se caracteriza por uno o más biomarcadores proporcionados en la presente memoria.

En otras realizaciones, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para tratar linfoma, linfoma no de Hodgkin y mieloma múltiple, que dan como resultado un tiempo mejorado para la progresión o la supervivencia libre de progresión del paciente. En algunas realizaciones, el tiempo mejorado para la progresión o la supervivencia libre de progresión del paciente se observa en una población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En algunas realizaciones, la población de pacientes sensibles al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, se caracteriza por uno o más biomarcadores proporcionados en la presente memoria.

En la presente memoria también se describen kits útiles para predecir la probabilidad de un tratamiento eficaz de linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o tumor sólido o para monitorizar la eficacia de un tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. El kit comprende un soporte sólido, y un medio para detectar la expresión de un biomarcador en una muestra biológica. Dicho kit puede utilizar, por ejemplo, una tira reactiva, una membrana, un chip, un disco, una tira de ensayo, un filtro, una microesfera, un portaobjetos, una placa de múltiples pocillos, o una fibra óptica. El soporte sólido del kit puede ser, por ejemplo, un plástico, silicio, un metal, una resina, vidrio, una membrana, una partícula, un precipitado, un gel, un polímero, una lámina, una esfera, un polisacárido, un capilar, una película, una placa o un portaobjetos. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, un cultivo celular, una línea celular, un tejido, un tejido oral, tejido gastrointestinal, un órgano, un orgánulo, un fluido biológico, una muestra de sangre, una muestra de orina, o una muestra de piel. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, una biopsia de ganglio linfático, una biopsia de médula ósea, o una muestra de las células tumorales de sangre periférica.

Por ejemplo, el kit comprende un soporte sólido, ácidos nucleicos en contacto con el soporte, en donde los ácidos nucleicos son complementarios a por lo menos 20, 50, 100, 200, 350, o más bases de ARNm de un gen asociado con un fenotipo de células B activadas en un NHL, y un medio para detectar la expresión del ARNm en una muestra biológica. Por ejemplo, el gen asociado con el fenotipo de células B activadas se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

Por ejemplo, se describe un kit útil para predecir la probabilidad de un tratamiento eficaz de linfoma, linfoma no de Hodgkin, mieloma múltiple, leucemia, AML o tumor sólido, o para monitorizar la eficacia de un tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. El kit comprende un soporte sólido, y un medio para detectar la expresión de NF-kB en una muestra biológica. Por ejemplo, la muestra biológica es una muestra de cultivo de células o tejido. Por ejemplo, la muestra biológica es una muestra de células tumorales. Por ejemplo, la muestra biológica es una biopsia de ganglios linfáticos, una biopsia de médula ósea, o una muestra de células tumorales de sangre periférica. Por ejemplo, la muestra biológica es una muestra de sangre. Por ejemplo, la NHL es DLBCL.

Por ejemplo, los kits descritos en la presente memoria utilizan medios para detectar la expresión de un biomarcador por PCR cuantitativa en tiempo real (QT-PCR), micromatriz, citometría de flujo o inmunofluorescencia. Por ejemplo, la expresión del biomarcador se mide por metodologías basadas en ELISA u otros métodos similares conocidos en la técnica.

Pueden usarse técnicas adicionales de expresión de ARNm y proteína en conexión con los métodos proporcionados en la presente memoria, p. ej., hibridación de ADNc y métodos citométricos de matrices de perlas.

En la presente memoria también se describe un kit para predecir la respuesta del tumor al tratamiento con 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en un paciente con linfoma no de Hodgkin, que comprende:

(i) un soporte sólido; y

(ii) un medio para detectar la expresión de un biomarcador de un fenotipo de células B activadas de linfoma no de Hodgkin en una muestra biológica.

Por ejemplo, el biomarcador es NF-kB.

Por ejemplo, el biomarcador es un gen asociado con el fenotipo de células B activadas y se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDRM1.

En algunas realizaciones, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación con una terapia usada convencionalmente para tratar, prevenir o gestionar el cáncer. Los ejemplos de dichas terapias convencionales incluyen, pero no están limitadas a, cirugía, quimioterapia, terapia con radiación, terapia hormonal, terapia biológica e inmunoterapia.

En la presente memoria también se describen composiciones farmacéuticas, formas de dosificación unitarias individuales, regímenes de dosificación y kits que comprenden 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, y un segundo agente activo o adicional. Los segundos agentes activos incluyen combinaciones específicas, o “cócteles” de fármacos.

En algunas realizaciones, el tratamiento o la gestión de linfomas proporcionados en la presente memoria pueden usarse en pacientes que no han respondido al tratamiento estándar. En una realización, el linfoma es recidivante, refractario o resistente a la terapia convencional.

En otras realizaciones, el tratamiento o la gestión de linfomas proporcionados en la presente memoria pueden usarse en el tratamiento de pacientes no tratados, es decir, los pacientes que aún no han recibido tratamiento.

En ciertas realizaciones, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación o alternancia con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes activos adicionales. Los segundos agentes activos incluyen moléculas pequeñas y moléculas grandes (p. ej., proteínas y anticuerpos), ejemplos de las cuales se proporcionan en la presente memoria, así como células madre. Los métodos o terapias que pueden usarse en combinación con la administración del compuesto proporcionado en la presente memoria incluyen, pero no están limitados a, cirugía, transfusiones de sangre, inmunoterapia, terapia biológica, terapia de radiación, y otras terapias no basadas en fármacos que se usan actualmente para tratar, prevenir o gestionar la enfermedad y las condiciones asociadas con o caracterizadas por angiogénesis no deseada.

En una realización, el agente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en un agente alquilante, un análogo de adenosina, un glucocorticoide, un inhibidor de quinasa, un inhibidor de SYK, un inhibidor de PDE3, un inhibidor de PDE7, doxorrubicina, clorambucilo, vincristina, bendamustina, forskolina, rituximab, o una combinación de los mismos.

En una realización, el agente activo adicional es rituximab. En otra realización, el agente activo adicional es prednisona.

En una realización, el glucocorticoide es hidrocortisona o dexametasona.

En una realización, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una de sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 mg por día, 0,1 a aproximadamente 20 mg por día, 0,1 a aproximadamente 15 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg por día, 0,1 a aproximadamente 7,5 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5 mg por día, 0,1 a aproximadamente 4 mg por día, 0,1 a aproximadamente 3 mg por día, 0,1 a aproximadamente 2,5 mg por día, 0,1 a aproximadamente 2 mg por día, 0,1 a aproximadamente 1 mg por día, 0,1 a aproximadamente 0,5 mg por día, o 0,1 a aproximadamente 0,2 mg por día.

En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 mg por día, 0,1 a aproximadamente 20 mg por día, 0,1 a aproximadamente 15 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg por día, 0,1 a aproximadamente 7,5 mg por día, aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5 mg por día, 0,1 a aproximadamente 4 mg por día, 0,1 a aproximadamente 3 mg por día, 0,1 a aproximadamente 2,5 mg por día, 0,1 a aproximadamente 2 mg por día, 0,1 a aproximadamente 1 mg por día, 0,1 a aproximadamente 0,5 mg por día, o 0,1 a aproximadamente 0,2 mg por día.

En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por día.

En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 mg por día.

En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5 mg por día.

En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2, 2,5, 3, 4, 5, 7,5, 10, 15, 20, 25, 50, o 100 mg por día. En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,1 mg por día. En otra realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 0,2 mg por día. En otra realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 1,0 mg por día. En otra realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona en una cantidad de aproximadamente 5,0 mg por día.

En una realización, se administra (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona dos veces por día.

En la presente memoria se describen composiciones farmacéuticas (p. ej., formas de dosificación unitarias individuales) que se pueden usar en los métodos descritos en la presente memoria. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas comprenden 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, y un segundo agente activo.

En una realización, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, por vía oral.

En una realización, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en una cápsula o comprimido.

En una realización, se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, durante 21 días seguidos de siete días de descanso en un ciclo de 28 días.

5.1 Definiciones

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “sujeto” o “paciente” se refiere a un animal, incluyendo, pero sin limitarse a, un mamífero, incluyendo un primate (p. ej., un ser humano), vaca, oveja, cabra, caballo, perro, gato, conejo, rata o ratón. Los términos “sujeto” y “paciente” se usan indistintamente en la presente memoria en referencia, por ejemplo, a un sujeto mamífero, tal como un sujeto humano.

Tal y como se usan en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, los términos “tratar”, “tratando” y “tratamiento” se refieren a la erradicación o mejora de una enfermedad o trastorno, o de uno o más síntomas asociados con la enfermedad o trastorno. En ciertas realizaciones, los términos se refieren a minimizar la diseminación o el empeoramiento de la enfermedad o trastorno que se produce al administrar uno o más agentes profilácticos o terapéuticos a un paciente con dicha enfermedad o trastorno. En algunas realizaciones, los términos se refieren a la administración de un compuesto proporcionado en la presente memoria, con o sin otro agente activo adicional, después de la aparición de los síntomas de la enfermedad particular.

Tal y como se usan en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, los términos “prevenir”, “previniendo” y “prevención” se refieren a la prevención de la aparición, recurrencia o diseminación de una enfermedad o trastorno, o de uno o más de sus síntomas. En ciertas realizaciones, los términos se refieren al tratamiento con o a la administración de un compuesto proporcionado en la presente memoria, con o sin otro compuesto activo adicional, antes de la aparición de los síntomas, en particular a pacientes con riesgo de enfermedades o trastornos proporcionados en la presente memoria. Los términos abarcan la inhibición o la reducción de un síntoma de la enfermedad particular. Los pacientes con un historial familiar de una enfermedad en particular, son candidatos para los regímenes preventivos en ciertas realizaciones. Además, los pacientes que tienen un historial de síntomas recurrentes también son candidatos potenciales para la prevención. En este sentido, el término “prevención” puede ser usado indistintamente con el término “tratamiento profiláctico”.

Tal y como se usan en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, los términos “gestionar”, “gestionando” y “gestión” se refieren a prevenir o ralentizar la progresión, diseminación o empeoramiento de una enfermedad o trastorno, o de uno o más de sus síntomas. A menudo, los efectos beneficiosos que un paciente obtiene de un agente profiláctico y/o terapéutico no dan como resultado una cura de la enfermedad o trastorno. En este sentido, el término “gestionar” abarca el tratamiento de un paciente que había sufrido la enfermedad particular en un intento de prevenir o minimizar la recurrencia de la enfermedad, o alargar el tiempo durante el cual permanece en remisión.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, una “cantidad terapéuticamente eficaz” de un compuesto es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico en el tratamiento o gestión de una enfermedad o trastorno, o para retrasar o minimizar uno o más síntomas asociados con la enfermedad o trastorno. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto significa una cantidad de agente terapéutico, solo o en combinación con otras terapias, que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o gestión de la enfermedad o trastorno. El término “cantidad terapéuticamente eficaz” puede abarcar una cantidad que mejora la terapia global, reduce o evita síntomas o causas de la enfermedad o trastorno, o aumenta la eficacia terapéutica de otro agente terapéutico.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, una “cantidad profilácticamente eficaz” de un compuesto es una cantidad suficiente para prevenir una enfermedad o trastorno, o prevenir su recurrencia. Una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto significa una cantidad de agente terapéutico, solo o en combinación con otros agentes, que proporciona un beneficio profiláctico en la prevención de la enfermedad. El término “cantidad profilácticamente eficaz” puede abarcar una cantidad que mejora la profilaxis global o aumenta la eficacia profiláctica de otro agente profiláctico.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “vehículo farmacéuticamente aceptable”, “excipiente farmacéuticamente aceptable”, “vehículo fisiológicamente aceptable”, o “excipiente fisiológicamente aceptable” se refiere a un material, composición, o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un relleno líquido o sólido, diluyente, excipiente, disolvente o material de encapsulación. En una realización, cada componente es “farmacéuticamente aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de una formulación farmacéutica, y adecuado para usarse en contacto con el tejido u órgano de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, inmunogenicidad, u otros problemas o complicaciones, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable. Véase Remington: The Science and Practice o f Pharmacy, 21a. Edición; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook o f Pharmaceutical Excipients, 5a. Edición; Rowe et al., Eds., The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2005; y Handbook of Pharmaceutical Additives, 3a. Edición; Ash and Ash Eds., Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, Gibson Ed., CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2004).

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “tumor” se refiere a todo crecimiento y proliferación de células neoplásicas, ya sea maligno o benigno, y a todas las células y tejidos precancerosos y cancerosos. “Neoplásicas”, tal y como se usa en la presente memoria, se refiere a cualquier forma de crecimiento celular desregulado o no regulado, ya sea maligno o benigno, que da lugar a un crecimiento anormal de tejido. Por lo tanto, “células neoplásicas” incluyen células malignas y benignas que tienen un crecimiento celular desregulado o no regulado.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “recidivante” se refiere a una situación en la que un sujeto o un mamífero, que ha tenido una remisión del cáncer después de la terapia, tiene un retorno de las células cancerosas.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, una “respuesta eficaz del tumor del paciente” se refiere a cualquier aumento en el beneficio terapéutico para el paciente. Una “respuesta eficaz del tumor del paciente” puede ser, por ejemplo, un 5 %, 10 %, 25 %, 50 %, o 100 % de disminución en la tasa de progreso del tumor. Una “respuesta eficaz del tumor del paciente” puede ser, por ejemplo, un 5 %, 10 %, 25 %, 50 %, o 100 % de disminución en los síntomas físicos de un cáncer. Una “respuesta eficaz del tumor del paciente” también puede ser, por ejemplo, un 5 %, 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 200 %, o más de aumento en la respuesta del paciente, medida por cualesquiera medios adecuados, tales como la expresión génica, recuentos de células, resultados de ensayos, etc.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “probabilidad” se refiere generalmente a un aumento en la probabilidad de un evento. El término “probabilidad” cuando se usa en referencia a la eficacia de una respuesta del tumor del paciente generalmente contempla un aumento de la probabilidad de que la tasa de progreso del tumor o crecimiento de células tumorales disminuya. El término “probabilidad” cuando se usa en referencia a la eficacia de una respuesta del tumor del paciente también puede significar el aumento de indicadores, tales como la expresión de ARNm o proteína, que pueden evidenciar un aumento en el progreso en el tratamiento del tumor.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “predecir” generalmente significa determinar o decir de antemano. Cuando se usa para “predecir” la eficacia de un tratamiento del cáncer, por ejemplo, el término “predecir” puede significar que la probabilidad del resultado del tratamiento del cáncer se pueda determinar, en primer lugar, antes de que haya comenzado el tratamiento, o antes de que el período de tratamiento haya progresado sustancialmente.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “monitorizar”, tal y como se usa en la presente memoria, se refiere generalmente al examen, supervisión, regulación, observación, seguimiento o vigilancia de una actividad. Por ejemplo, el término “monitorizar la eficacia de un compuesto” se refiere al seguimiento de la eficacia en el tratamiento de un cáncer en un paciente o en un cultivo de células tumorales. Del mismo modo, “monitorizar”, cuando se usa en relación con el cumplimiento por parte del paciente, ya sea individualmente, o en un ensayo clínico, se refiere al seguimiento o confirmación de que el paciente está realmente tomando el compuesto inmunomodulador que se está ensayado como se prescribe. La monitorización se puede realizar, por ejemplo, siguiendo la expresión de biomarcadores de ARNm o proteínas.

Una mejora en el cáncer o enfermedad relacionada con el cáncer puede estar caracterizada como una respuesta completa o parcial. “Respuesta completa” se refiere a la ausencia de enfermedad clínicamente detectable con la normalización de cualesquiera estudios radiográficos previamente anormales, mediciones de médula ósea y líquido cefalorraquídeo (CSF) o mediciones de proteínas monoclonales anormales. “Respuesta parcial” se refiere a por lo menos aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % de disminución en toda la carga tumoral mensurable (es decir, el número de células malignas presentes en el sujeto, o la medida más grande de masas tumorales o la cantidad de proteína monoclonal anormal) en ausencia de nuevas lesiones. El término “tratamiento” contempla tanto una respuesta completa como una respuesta parcial.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “refractario o resistente” se refiere a una circunstancia en la que un sujeto o un mamífero, incluso después de tratamiento intensivo, tiene células cancerosas residuales en su cuerpo.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “resistencia a fármacos” se refiere a la condición cuando una enfermedad no responde al tratamiento de un fármaco o fármacos. La resistencia a fármacos puede ser intrínseca, lo que significa que la enfermedad nunca ha respondido al fármaco o fármacos, o puede ser adquirida, lo que significa que la enfermedad deja de responder a un fármaco o fármacos a los que la enfermedad había respondido previamente. En ciertas realizaciones, la resistencia a fármacos es intrínseca. En ciertas realizaciones, la resistencia a fármacos es adquirida.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “sensibilidad” y “sensible”, cuando se hace en referencia a tratamiento con el compuesto, es un término relativo que se refiere al grado de eficacia del compuesto para reducir o disminuir el progreso de un tumor o la enfermedad que se está tratando. Por ejemplo, el término “aumento de la sensibilidad”, cuando se usa en referencia al tratamiento de una célula o tumor en relación con un compuesto, se refiere a un aumento de por lo menos un 5 %, o más, en la eficacia del tratamiento del tumor.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “expresado” o “expresión”, tal y como se usa en la presente memoria, se refiere a la transcripción de un gen para dar una molécula de ácido nucleico de ARN complementaria por lo menos en parte a una región de una de las dos cadenas de ácido nucleico del gen. El término “expresado” o “expresión”, tal y como se usa en la presente memoria también se refiere a la traducción de la molécula de ARN para dar una proteína, un polipéptido o una porción del mismo.

Un ARNm que está “regulado al alza” en general se incrementa después de un tratamiento o condición dada. Un ARNm que está “regulado a la baja” generalmente se refiere a una disminución en el nivel de expresión del ARNm en respuesta a un tratamiento o condición dada. En algunas situaciones, el nivel de ARNm puede permanecer sin cambios después de un tratamiento o condición dada.

Un ARNm de una muestra del paciente puede estar “regulado al alza”, cuando se trata con un compuesto inmunomodulador, en comparación con un control no tratado. Esta regulación al alza puede ser, por ejemplo, un aumento de aproximadamente un 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 500 %, 1.000 %, 5.000 % o más del nivel de ARNm de control comparativo.

Alternativamente, un ARNm puede estar “regulado a la baja”, o expresado en un nivel menor, en respuesta a la administración de ciertos compuestos inmunomoduladores u otros agentes. Un ARNm regulado a la baja puede estar, por ejemplo, presente a un nivel de aproximadamente un 99 %, 95 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 1 % o menos del nivel de ARNm de control comparativo.

De manera similar, el nivel de un biomarcador polipeptídico o proteico de una muestra del paciente puede aumentar cuando se trata con un compuesto inmunomodulador, en comparación con un control no tratado. Este aumento puede ser de aproximadamente un 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 500 %, 1.000 %, 5.000 % o más del nivel de proteína de control comparativo.

Alternativamente, el nivel de un biomarcador proteico puede disminuir en respuesta a la administración de ciertos compuestos inmunomoduladores u otros agentes. Esta disminución puede estar, por ejemplo, presente a un nivel de aproximadamente un 99 %, 95 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 1 % o menos del nivel de proteína de control comparativo.

Tal y como se usan en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, los términos “determinación”, “medición”, “evaluación”, “valoración” y “ensayo”, tal y como se usan en la presente memoria, se refieren en general a cualquier forma de medición, e incluyen la determinación de si un elemento está presente o no. Estos términos incluyen determinaciones tanto cuantitativas y/o cualitativas. La valoración puede ser relativa o absoluta. La “valoración de la presencia de” puede incluir la determinación de la cantidad de algo que está presente, así como la determinación de si está presente o ausente.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “sal farmacéuticamente aceptable” abarca las sales de adición a ácido y base no tóxicas del compuesto al cual se refiere el término. Las sales de adición a ácido no tóxicas aceptables incluyen aquellas derivadas de ácidos o bases orgánicos e inorgánicos conocidos en la técnica, que incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido maleico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido ftálico, ácido embólico, ácido enántico y similares.

Los compuestos que son de naturaleza ácida son capaces de formar sales con diversas bases farmacéuticamente aceptables. Las bases que se pueden usar para preparar sales de adición a base farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos ácidos son aquellas que forman sales de adición a base no tóxicas, es decir, sales que contienen cationes farmacológicamente aceptables tales como, pero sin limitarse a, sales de metales alcalinos o alcalinotérreos y en particular las sales de calcio, magnesio, sodio o potasio. Las bases orgánicas adecuadas incluyen, pero no están limitadas a, N,N-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina), lisina y procaína.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se indique lo contrario, el término “solvato” significa un compuesto proporcionado en la presente memoria o una sal del mismo, que incluye además una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de disolvente unido por fuerzas intermoleculares no covalentes. Cuando el disolvente es agua, el solvato es un hidrato.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se indique lo contrario, el término “profármaco” significa un derivado de un compuesto que se puede hidrolizar, oxidar, o reaccionar de otra forma en condiciones biológicas (in vitro o in vivo) para proporcionar el compuesto. Los ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, derivados del compuesto de la Fórmula I proporcionado en la presente memoria que comprenden porciones biohidrolizables tales como amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos biohidrolizables, ureidos biohidrolizables, y análogos de fosfato biohidrolizables. Otros ejemplos de profármacos incluyen derivados del compuesto de la Fórmula I proporcionado en la presente memoria que comprenden restos -NO, -NO2, -ONO, o -ONO2. Los profármacos se pueden preparar usando métodos tales como los descritos en Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5a. ed. 1995), y Design o f Prodrugs (H. Bundgaard ed., Elselvier, Nueva York 1985).

Tal y como se usan en la presente memoria, y a menos que se indique lo contrario, los términos “amida biohidrolizable”, “éster biohidrolizable”, “carbamato biohidrolizable”, “carbonato biohidrolizable”, “ureido biohidrolizable”, y “fosfato biohidrolizable” significan una amida, éster, carbamato , carbonato, ureido o fosfato, respectivamente, de un compuesto que, bien: 1) no interfiere con la actividad biológica del compuesto pero puede conferir a ese compuesto propiedades ventajosas in vivo, tales como captación, duración de la acción, o aparición de la acción; o 2) es biológicamente inactivo pero se convierte in vivo en el compuesto biológicamente activo. Los ejemplos de ésteres biohidrolizables incluyen, pero no se limitan a, ésteres de alquilo inferior, ésteres de aciloxialquilo inferior (tales como ésteres de acetoxilmetilo, acetoxietilo, aminocarboniloximetilo, pivaloiloximetilo, y pivaloiloxietilo), ésteres de lactonilo (tales como ésteres de ftalidilo y tioftalidilo), ésteres de alcoxiaciloxialquilo inferior (tales como ésteres de metoxicarbonil-oximetilo, etoxicarboniloxietilo e isopropoxicarboniloxietilo), ésteres de alcoxialquilo, ésteres de colina, y ésteres de acilaminoalquilo (tales como ésteres de acetamidometilo). Los ejemplos de amidas biohidrolizables incluyen, pero no se limitan a, amidas de alquilo inferior, amidas de a-aminoácidos, amidas de alcoxiacilo, y amidas de alquilaminoalquilcarbonilo. Los ejemplos de carbamatos biohidrolizables incluyen, pero no se limitan a, alquilaminas inferiores, etilendiaminas sustituidas, aminoácidos, hidroxialquilaminas, aminas heterocíclicas y heteroaromáticas, y aminas de poliéter.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se indique lo contrario, el término “estereoméricamente puro” significa una composición que comprende un estereoisómero de un compuesto y está sustancialmente libre de otros estereoisómeros de ese compuesto. Por ejemplo, una composición estereoméricamente pura de un compuesto que tiene un centro quiral estará sustancialmente libre del enantiómero opuesto del compuesto. Una composición estereoméricamente pura de un compuesto que tiene dos centros quirales estará sustancialmente libre de otros diastereómeros del compuesto. En ciertas realizaciones, un compuesto estereoméricamente puro comprende más de aproximadamente el 80 % en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 20 % en peso de otros estereoisómeros del compuesto, más de aproximadamente el 90 % en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 10 % en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, más de aproximadamente el 95 % en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 5 % en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, o más de aproximadamente el 97 % en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 3 % en peso de los otros estereoisómeros del compuesto. Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se indique lo contrario, el término “estereoméricamente enriquecido” significa una composición que comprende más de aproximadamente el 60 % en peso de un estereoisómero de un compuesto, más de aproximadamente el 70 % en peso, o más de aproximadamente el 80 % en peso de un estereoisómero de un compuesto. Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se indique lo contrario, el término “enantioméricamente puro” significa una composición estereoméricamente pura de un compuesto que tiene un centro quiral. Del mismo modo, el término “estereoméricamente enriquecido” significa una composición estereoméricamente enriquecida de un compuesto que tiene un centro quiral.

Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique lo contrario, el término “aproximadamente” o “alrededor de” significa un error aceptable para un valor particular como es determinado por un experto en la técnica, que depende en parte de cómo se mide o determina el valor. En ciertas realizaciones, el término “aproximadamente” o “alrededor de” significa dentro de 1, 2, 3 o 4 desviaciones estándar. En ciertas realizaciones, el término “aproximadamente” o “alrededor de” significa dentro del 50 %, 20 %, 15 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 %, o 0,05 % de un valor o rango dado.

5.2 Puntos finales de ensayos clínicos para la aprobación del cáncer

La "supervivencia global” se define como el tiempo desde la aleatorización hasta la muerte por cualquier causa, y se mide en la población por intención de tratar. La supervivencia global debe ser evaluada en estudios controlados aleatorizados. La demostración de una mejora estadísticamente significativa en la supervivencia global puede ser considerada como clínicamente significativa si el perfil de toxicidad es aceptable, y a menudo ha soportado la aprobación de nuevos fármacos.

Diversos puntos finales se basan en evaluaciones de tumores. Estos puntos finales incluyen la supervivencia libre de enfermedad (DFS), la tasa de respuesta objetiva (ORR), el tiempo hasta la progresión (TTP), la supervivencia libre de progresión (PFS), y el tiempo hasta el fracaso del tratamiento (TTF). La recopilación y análisis de los datos sobre estos puntos finales dependientes del tiempo se basan en evaluaciones indirectas, cálculos y estimaciones (p. ej., mediciones de tumores).

En general, “supervivencia libre de enfermedad” (DFS) se define como el tiempo desde la aleatorización hasta la recurrencia del tumor o muerte por cualquier causa. Aunque la supervivencia global es un punto final convencional para la mayoría de los ajustes de adyuvantes, la DFS puede ser un punto final importante en situaciones en las que la supervivencia puede ser prolongada, haciendo poco práctico un punto final de supervivencia. La DFS puede ser un sustituto para el beneficio clínico o puede proporcionar evidencia directa de beneficio clínico. Esta determinación se basa en la magnitud del efecto, su relación riesgo-beneficio, y el ajuste de la enfermedad. La definición de DFS puede ser complicada, especialmente cuando se observan muertes sin documentación previa de la progresión del tumor. Estos eventos pueden ser anotados ya sea como recurrencias de la enfermedad o como eventos censurados. Aunque todos los métodos para el análisis estadístico de las muertes tienen algunas limitaciones, teniendo en cuenta todas las muertes (muertes por todas las causas) como recurrencias se puede minimizar el sesgo. La DFS se puede sobreestimar usando esta definición, especialmente en pacientes que mueren después de un largo período sin observación. El sesgo puede introducirse si la frecuencia de las visitas de seguimiento a largo plazo es diferente entre los brazos del estudio o si los abandonos no son aleatorios debido a la toxicidad.

La “tasa de respuesta objetiva” (ORR) se define como la proporción de pacientes con reducción del tamaño del tumor de una cantidad predefinida y durante un período de tiempo mínimo. La duración de la respuesta generalmente se mide desde el momento de la respuesta inicial hasta la progresión documentada del tumor. Generalmente, la FDA ha definido la ORR como la suma de las respuestas parciales más las respuestas completas. Cuando se define de esta manera, la ORR es una medida directa de la actividad antitumoral de fármacos, que puede ser evaluada en un estudio de un solo brazo. Si están disponibles, los criterios estandarizados deberían ser utilizados para determinar la respuesta. Una variedad de criterios de respuesta se ha considerado apropiada (p. ej., los criterios de RECIST) (Therasse et al., (2000) J. Natl Cáncer Inst., 92:205-16). La significancia de la ORR se evalúa por su magnitud y duración, y el porcentaje de respuestas completas (sin evidencia detectable de tumor).

El “tiempo hasta la progresión” (TTP) y “supervivencia libre de progresión” (PFS) han servido como puntos finales primarios para la aprobación de fármacos. El TTP se define como el tiempo desde la aleatorización hasta la progresión objetiva del tumor; el TTP no incluye muertes. La PFS se define como el tiempo desde la aleatorización hasta la progresión objetiva del tumor o la muerte. En comparación con el TTP, la PFS es el punto final de regulación preferido. La PFS incluye muertes y por lo tanto puede ser una mejor correlación con la supervivencia global. La PFS asume muertes de pacientes que están relacionadas aleatoriamente con la progresión del tumor. Sin embargo, en situaciones en las que la mayoría de las muertes no están relacionadas con el cáncer, el TTP puede ser un punto final aceptable.

Como un punto final para apoyar la aprobación de fármacos, la PFS puede reflejar el crecimiento del tumor y ser evaluada antes de la determinación de un beneficio en la supervivencia. Su determinación no debe ser confundida con la terapia posterior. Para un tamaño de muestra dado, la magnitud del efecto sobre la PFS puede ser mayor que el efecto sobre la supervivencia global. Sin embargo, puede ser difícil la validación formal de la PFS como un sustituto para la supervivencia de las muchas malignidades diferentes que existen. Los datos son a veces insuficientes para permitir una evaluación sólida de la correlación entre los efectos sobre la supervivencia y la PFS. Los ensayos de cáncer son a menudo pequeños, y los beneficios sobre la supervivencia demostrados de los fármacos existentes son generalmente modestos. El papel de la PFS como un punto final para apoyar la aprobación de licencias varía en diferentes contextos de cáncer. Si una mejora en la PFS representa un beneficio clínico directo o un sustituto para el beneficio clínico depende de la magnitud del efecto y el riesgo-beneficio del nuevo tratamiento en comparación con las terapias disponibles.

El “tiempo hasta el fracaso del tratamiento” (TTF) se define como un punto final compuesto que mide el tiempo desde la aleatorización hasta la interrupción del tratamiento por cualquier razón, incluyendo la progresión de la enfermedad, la toxicidad del tratamiento, y la muerte. El TTF no se recomienda como un punto final de regulación para la aprobación de fármacos. El TTF no distingue adecuadamente la eficacia de estas variables adicionales. Un punto final de regulación debería distinguir claramente la eficacia del fármaco de la toxicidad, la retirada por el paciente o el médico, o la intolerancia del paciente.

5.3 El compuesto

El compuesto adecuado para su uso en los métodos proporcionados en la presente memoria es 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la estructura de la Fórmula I:

o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.

En una realización, el compuesto es 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona. En una realización, el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto I. En una realización, el compuesto es hidrocloruro de 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.

En una realización, el compuesto es (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la estructura de la Fórmula I-S:

En una realización, el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto I-S. En una realización, el compuesto es hidrocloruro de (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.

En una realización, el compuesto es (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la estructura de la Fórmula I-R:

En una realización, el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto I-R. En una realización, el compuesto es hidrocloruro de (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.

El compuesto de la Fórmula I puede prepararse de acuerdo con los métodos descritos en los Ejemplos proporcionados en la presente memoria o como se describe en la Publicación de Solicitud de EE. UU. No. US2011-0196150. El compuesto también se puede sintetizar de acuerdo con otros métodos evidentes para los expertos en la técnica sobre la base de la enseñanza de la presente memoria.

Los compuestos proporcionados en la presente memoria inhiben notablemente TNF-a, IL-lp, y otras citocinas inflamatorias en hPBMC estimuladas por LPS y sangre completa humana. El TNF-a es una citocina inflamatoria producida por macrófagos y monocitos durante la inflamación aguda. El TNF-a es responsable de un diverso rango de eventos de señalización en las células. El TNF-a puede jugar un papel patológico en el cáncer. Sin estar limitados por la teoría, uno de los efectos biológicos ejercidos por los compuestos inmunomoduladores proporcionados en la presente memoria es la reducción de la síntesis de TNF-a. Los compuestos inmunomoduladores proporcionados en la presente memoria aumentan la degradación del ARNm de TNF-a. Los compuestos proporcionados en la presente memoria también inhiben potentemente la IL-1 p y estimulan la IL-10 en estas condiciones.

Además, sin estar limitados por ninguna teoría particular, los compuestos proporcionados en la presente memoria son coestimuladores potentes de las células T y aumentan la proliferación celular de una manera dependiente de la dosis en condiciones apropiadas.

En ciertas realizaciones, sin estar limitados por ninguna teoría, los efectos biológicos ejercidos por los compuestos inmunomoduladores proporcionados en la presente memoria incluyen, pero no están limitados a, efectos antiangiogénicos y moduladores de la inmunidad.

El compuesto de la Fórmula I proporcionado en la presente memoria contiene un centro quiral, y puede existir como una mezcla de enantiómeros, p. ej., una mezcla racémica. Esta descripción abarca el uso de formas estereoméricamente puras de dicho compuesto, así como el uso de mezclas de estas formas. Por ejemplo, las mezclas que comprenden cantidades iguales o desiguales de los enantiómeros del compuesto de la Fórmula I proporcionado en la presente memoria pueden usarse en los métodos y composiciones descritos en la presente memoria. Estos isómeros pueden sintetizarse asimétricamente o resolverse usando técnicas estándar tales como columnas quirales o agentes de resolución quiral. Véase, p. ej., Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, Nueva York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbón Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p.

268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).

Debe indicarse que, si hay una discrepancia entre una estructura representada y un nombre dado a esa estructura, debe otorgarse más peso a la estructura representada . Además, si la estereoquímica de una estructura o una porción de una estructura no se indica, por ejemplo, con líneas en negrita o discontinuas, la estructura o porción de la estructura debe interpretarse como que abarca todos los estereoisómeros de la estructura.

5.4 Segundos agentes activos

Un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede combinar con uno o más de otros compuestos farmacológicamente activos (“segundos agentes activos”) en los métodos y composiciones proporcionados en la presente memoria. Se cree que ciertas combinaciones actúan sinérgicamente en el tratamiento de determinados tipos de cáncer y ciertas enfermedades y afecciones asociadas con o caracterizadas por angiogénesis no deseada. Los compuestos proporcionados en la presente memoria también pueden actuar para aliviar los efectos adversos asociados con ciertos segundos agentes activos, y algunos segundos agentes activos pueden usarse para aliviar los efectos adversos asociados con los compuestos proporcionados en la presente memoria.

Pueden usarse uno o más segundos ingredientes o agentes activos en los métodos y composiciones proporcionados en la presente memoria con los compuestos proporcionados en la presente memoria. Los segundos agentes activos pueden ser moléculas grandes (p. ej., proteínas) o moléculas pequeñas (p. ej., moléculas inorgánicas sintéticas, organometálicas u orgánicas).

Los ejemplos de agentes activos que son moléculas grandes incluyen, pero no están limitados a, factores de crecimiento hematopoyéticos, citocinas, y anticuerpos monoclonales y policlonales. En ciertas realizaciones, los agentes activos que son moléculas grandes son moléculas biológicas, tales como proteínas de origen natural o fabricadas artificialmente. Las proteínas que son particularmente útiles en esta descripción incluyen proteínas que estimulan la supervivencia y/o proliferación de células precursoras hematopoyéticas y células poiéticas inmunológicamente activas in vitro o in vivo. Otras estimulan la división y diferenciación de progenitores eritroides comprometidos en células in vitro o in vivo. Las proteínas particulares incluyen, pero no están limitadas a: interleucinas, tales como IL-2 (incluyendo IL-II recombinante (“rIL2”) e IL-2 de viruela de canarios), IL-10, IL-12 e IL-18; interferones, tales como interferón alfa-2a, interferón alfa-2b, interferón alfa-nl, interferón alfa-n3, interferón beta-I a, e interferón gamma-I b; GM-CF y GM-CSF; GC-CSF, BCG, anticuerpos contra el cáncer, y EPO.

Las proteínas particulares que se pueden usar en los métodos y composiciones de la descripción incluyen, pero no están limitadas a: filgrastim, que se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial NEUPOGEN® (Amgen, Thousand Oaks, CA); sargramostim, que se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial LEUKINE® (Immunex, Seattle, WA); y EPO recombinante, que se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial EPGEN® (Amgen, Thousand Oaks, CA).

Los inhibidores de los receptores ActRII o inhibidores de activina-ActRII se pueden usar en los métodos y composiciones proporcionados en la presente memoria. Los inhibidores de los receptores ActRII incluyen inhibidores de ActRIIA e inhibidores de ActRIIB. Los inhibidores de los receptores ActRII pueden ser polipéptidos que comprenden dominios de unión a activina de ActRII. En ciertas realizaciones, los polipéptidos que comprenden dominios de unión a activina están ligados a una porción Fc de un anticuerpo (es decir, se genera un conjugado que comprende un polipéptido que comprende dominios de unión a activina de un receptor ActRII y una porción Fc de un anticuerpo). En ciertas realizaciones, el dominio de unión a activina está unido a una porción Fc de un anticuerpo mediante un enlazador, p. ej., un enlazador peptídico. Los ejemplos de dichas proteínas que no son anticuerpos seleccionadas para la unión a activina o ActRIIA y los métodos para el diseño y selección de las mismas se encuentran en WO/2002/088171, WO/2006/055689, WO/2002/032925, WO/2005/037989, US 2003/0133939 y US 2005/0238646. En una realización, el inhibidor de los receptores ActRII es ACE-11. En otra realización, el inhibidor de los receptores ActRII es ACE-536.

Las formas recombinantes y mutadas de GM-CSF se pueden preparar como se describe en las Patentes de EE. UU. No. 5.391.485; 5.393.870; y 5.229.496. Las formas recombinantes y mutadas de G-CSF se pueden preparar como se describe en las Patentes de EE. UU. No. 4.810.643; 4.999.291; 5.528.823; y 5.580.755.

Esta descripción abarca el uso de proteínas nativas, de origen natural y recombinantes. La descripción abarca además mutantes y derivados (p. ej., formas modificadas) de proteínas de origen natural que presentan, in vivo, por lo menos algo de la actividad farmacológica de las proteínas sobre las cuales se basan. Los ejemplos de mutantes incluyen, pero no están limitados a, proteínas que tienen uno o más residuos de aminoácidos que difieren de los residuos correspondientes en las formas de las proteínas de origen natural. También están abarcadas por el término “mutantes” las proteínas que carecen de restos de carbohidratos normalmente presentes en sus formas de origen natural (p. ej., formas no glicosiladas). Los ejemplos de derivados incluyen, pero no están limitados a, derivados pegilados y proteínas de fusión, tales como proteínas formadas por la fusión de IgG1 o IgG3 a la proteína o porción activa de la proteína de interés. Véase, p. ej., Penichet, M.L. y Morrison, S.L., J. Immunol. Methods 248:91-101 (2001).

Los anticuerpos que se pueden usar en combinación con los compuestos proporcionados en la presente memoria incluyen anticuerpos monoclonales y policlonales. Los ejemplos de anticuerpos incluyen, pero no están limitados a, trastuzumab (HERCEPTIN®), rituximab (RITUXAN®), bevacizumab (AVASTIN™), pertuzumab (OMNITARG™), tositumomab (BEXXAR®), edrecolomab (PANOREX®), panitumumab y G250. Los compuestos proporcionados en la presente memoria también pueden combinarse con o usarse en combinación con anticuerpos anti-TNF-a.

Los agentes activos que son moléculas grandes pueden administrarse en la forma de vacunas anticancerosas. Por ejemplo, pueden usarse las vacunas que secretan, o causan la secreción de, citocinas tales como IL-2, SCF, CXC14 (factor de plaquetas 4), G-CSF y GM-CSF, en los métodos, composiciones farmacéuticas y kits de la descripción. Véase, p. ej., Emens, L.A., et al., Curr. Opinión Mol. Ther. 3(1 ):77-84 (2001).

Los segundos agentes activos que son moléculas pequeñas también se pueden usar para aliviar los efectos adversos asociados con la administración de los compuestos proporcionados en la presente memoria. Sin embargo, como algunas moléculas grandes, se cree que muchos son capaces de proporcionar un efecto sinérgico cuando se administran con (p. ej., antes, después o simultáneamente) los compuestos proporcionados en la presente memoria. Los ejemplos de segundos agentes activos que son moléculas pequeñas incluyen, pero no están limitados a, agentes anticancerosos, antibióticos, agentes inmunosupresores y esteroides.

Loa ejemplos de agentes anticancerosos incluyen, pero no están limitados a: abraxano; ace-11; acivicina; aclarubicina; hidrocloruro de acodazol; acronina; adozelesina; aldesleuquina; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; amrubicina; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginasa; asperlina; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastat; benzodepa; bicalutamida; hidrocloruro de bisantreno; dimesilato de bisnafida; bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sodio; bropirimina; busulfán; cactinomicina; calusterona; caracemide; carbetímero; carboplatino; carmustina; hidrocloruro de carubicina; carzelesina; cedefingol; celecoxib (inhibidor de COX-2); clorambucilo; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; dactinomicina; hidrocloruro de daunorrubicina; decitabina; dexormaplatino; dezaguanina; mesilato de dezaguanina; diazicuona; docetaxel; doxorrubicina; hidrocloruro de doxorrubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; hidrocloruro de eflornitina; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; hidrocloruro de epirrubicina; erbulozol; hidrocloruro de esorrubicina; estramustina; fosfato sódico de estramustina; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; hidrocloruro de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxiridina; fosfato de fludarabina; fluorouracilo; flurocitabina; fosquidona; fostriecina de sodio; gemcitabina; hidrocloruro de gemcitabina; herceptina; hidroxiurea; hidrocloruro de idarrubicina; ifosfamida; ilmofosina; iproplatino; irinotecán; hidrocloruro de irinotecán; acetato de lanreotida; lapatinib; letrozol; acetato de leuprólido; hidrocloruro de liarozol; lometrexol sódico; lomustina; hidrocloruro de losoxantrona; masoprocol; maitansina; hidrocloruro de mecloretamina; acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalán; menogaril; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sódico; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina; mitogilina; mitomalcina; mitomicina; mitosper; mitotano; hidrocloruro de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxisuran; paclitaxel; pegaspargasa; peliomicina; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromano; piposulfán; hidrocloruro de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfímero sódico; porfiromicina; prednimustina; hidrocloruro de procarbazina; puromicina; hidrocloruro de puromicina; pirazofurina; riboprina; romidepsina; safingol; hidrocloruro de safingol; semustina; simtrazeno; esparfosato sódico; esparsomicina; hidrocloruro de espirogermanio; espiromustina; espiroplatino; tratamientos con células madre tales como PDA-001; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; talisomicina; tecogalán sódico; taxotere; tegafur; hidrocloruro de teloxantrona; temoporfina; tenipósido; teroxirona; testolcatona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofurina; tirapazamina; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorelina; hidrocloruro de tubulozol; mostaza de uracilo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; sulfato vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; e hidrocloruro de zorubicina.

Otros fármacos anticancerosos incluyen, pero no están limitados a: 20-epi-1,25 dihidroxivitamina D3; 5-etiniluracilo; abiraterona; aclarubicina; acilfulveno; adecipenol; adozelesina; aldesleuquina; antagonistas de ALL-TK; altretamina; ambamustina; amidox; amifostina; ácido aminolevulínico; amrrubicina; amsacrina; anagrelida; anastrozol; andrografólido; inhibidores de la angiogénesis; antagonista D; antagonista G; antarelix; proteína-1 morfogenética antidorsalizante; antiandrógeno, carcinoma prostático; antiestrógeno; antineoplaston; oligonucleótidos antisentido; glicinato de afidicolina; moduladores de genes de apoptosis; reguladores de la apoptosis; ácido apurínico; ara-CDP-DL-PTBA; arginina desaminasa; asulacrina; atamestano; atrimustina; axinastatina 1; axinastatina 2; axinastatina 3; azasetrón; azatoxina; azatirosina; derivados de la bacatina III; balanol; batimastat; antagonistas de BCR/ABL; benzoclorinas; benzoilestaurosporina; derivados de beta lactama; beta-aletina; betaclamicina B; ácido betulínico; inhibidor de b-FGF; bicalutamida; bisantreno; bisaziridinolespermina; bisnafida; bistrateno A; bizelesina; breflato; bropirimina; budotitanio; butionina sulfoximina; calcipotriol; calfostina C; derivados de camptotecina; capecitabina; carboxamida-amino-triazol; carboxiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inhibidor derivado de cartílago; carzelesina; inhibidores de la caseína quinasa (ICOS); castanoespermina; cecropina B; cetrorelix; clorinas; cloroquinoxalina sulfonamida; cicaprost; cis-porfirina; cladribina; análogos de clomifeno; clotrimazol; colismicina A; colismicina B; combretastatina A4; análogo de combretastatina; conagenina; crambescidina 816; crisnatol; criptoficina 8; derivados de criptoficina A; curacina A; ciclopentantraquinonas; cicloplatama; cipemicina; ocfosfato de citarabina; factor citolítico; citostatina; dacliximab; decitabina; deshidrodidemnina B; deslorelina; dexametasona; dexifosfamida; dexrazoxano; dexverapamil; diazicuona; didemnina B; didox; dietilnorespermina; dihidro-5-azacitidina; dihidrotaxol, 9-; dioxamicina; espiromustina difenilo; docetaxel; docosanol; dolasetrón; doxifluridina; doxorrubicina; droloxifeno; dronabinol; duocarmicina SA; ebselen; ecomustina; edelfosina; edrecolomab; eflornitina; elemeno; emitefur; epirrubicina; epristerida; análogo de estramustina; agonistas de estrógenos; antagonistas de los estrógenos; etanidazol; fosfato de etopósido; exemestano; fadrozol; fazarabina; fenretinida; filgrastim; finasterida; flavopiridol; flezelastina; fluasterona; fludarabina; hidrocloruro de fluorodaunorrunicina; forfenimex; formestano; fostriecina; fotemustina; texafirina de gadolinio; nitrato de galio; galocitabina; ganirelix; inhibidores de gelatinasa; gemcitabina; inhibidores de glutatión; hepsulfam; heregulina; bisacetamida de hexametileno; hipericina; ácido ibandrónico; idarrubicina; idoxifeno; idramantona; ilmofosina; ilomastat; imatinib (p. ej., GLEEVEC®), imiquimod; péptidos inmunoestimulantes; inhibidor del receptor del factor de crecimiento de tipo insulina 1; agonistas de interferones; interferones; interleuquinas; iobenguano; yododoxorrubicina; ipomeanol, 4-; iroplact; irsogladina; isobengazol; isohomohalicondrina B; itasetrón; jasplacinólida; kahalalida F; triacetato de lamelarina-N; lanreótida; leinamicina; lenograstim; sulfato de lentinano; leptolstatina; letrozol; factor inhibidor de leucemia; interferón alfa de leucocitos; leuprólido estrógeno progesterona; leuprorelina; levamisol; liarozol; análogo de poliamina lineal; péptido disacárido lipófilo; compuestos de platino lipófilos; lisoclinamida 7; lobaplatino; lombricina; lometrexol; lonidamina; losoxantrona; loxoribina; lurtotecán; texafirina de lutecio; lisofilina; péptidos líticos; maitansina; manostatina A; marimastat; masoprocol; maspina; inhibidores de matrilisina; inhibidores de metaloproteinasa de matriz; menogaril; merbarona; meterelina; metioninasa; metoclopramida; inhibidor de MIF; mifepristona; miltefosina; mirimostim; mitoguazona; mitolactol; análogos de la mitomicina; mitonafida; mitotoxina factor de crecimiento de fibroblastos-saporina; mitoxantrona; mofaroteno; molgramostim; Erbitux, gonadotropina coriónica humana; monofosforil lípido A sk de pared celular miobacteriana; mopidamol; agente anticanceroso de mostaza; micaperóxido B; extracto de pared celular de micobacterias; miriaporona; N-acetildinalina; benzamidas N-sustituidas; nafarelina; nagrestip; naloxona pentazocina; napavina; nafterpina; nartograstim; nedaplatino; nemorrubicina; ácido neridrónico; nilutamida; nisamicina; moduladores de óxido nítrico; antioxidante de nitróxido; nitrulina; oblimersen (GENASENSE®); O6-bencilguanina; octreotida; okicenona; oligonucleótidos; onapristona; ondansetrón; ondansetrón; oracina; inductor de citocinas oral; ormaplatino; osaterona; oxaliplatino; oxaunomicina; paclitaxel; análogos de paclitaxel; derivados de paclitaxel; palauamina; palmitoilrizoxina; ácido pamidrónico; panaxitriol; panomifeno; parabactina; pazeliptina; pegaspargasa; peldesina; polisulfato sódico de pentosán; pentostatina; pentrozol; perflubrón; perfosfamida; alcohol perílico; fenazinomicina; acetato de fenilo; inhibidores de fosfatasa; picibanilo; hidrocloruro de pilocarpina; pirarrubicina; piritrexim; placetina A; placetina B; inhibidor del activador del plasminógeno; complejo de platino; compuestos de platino; complejo de platino-triamina; porfímero sódico; porfiromicina; prednisona; propil bis-acridona; prostaglandina J2; inhibidores del proteosoma; inmunomodulador a base de proteína A; inhibidor de proteína quinasa C; inhibidores de proteína quinasa C, microalgal; inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa; inhibidores de la purina nucleósido fosforilasa; purpurinas; pirazoloacridina; conjugado de polioxietileno y hemoglobina piridoxilada; antagonistas de raf; raltitrexad; ramosetrón; inhibidores de ras proteína farnesil transferasa; inhibidores de ras; inhibidor de ras-GAP; reteliptina desmetilada; etidronato de renio Re 186; rizoxina; ribozimas; retinamida RII; rohituquina; romurtida; roquinimex; rubiginona B1; ruboxil; safingol; saintopina; SarCNU; sarcofitol A; sargramostim; miméticos de Sdi 1; semustina; inhibidor 1 derivado de la senescencia; oligonucleótidos con sentido; inhibidores de la transducción de señales; sizofirano; sobuzoxano; borocaptato de sodio; fenilacetato de sodio; solverol; proteína de unión a somatomedina; sonermina; ácido esparfósico; espicamicina D; espiromustina; esplenopentina; esponjistatina 1; escualamina; estipiamida; inhibidores de estromelisina; sulfinosina; antagonista de péptido intestinal vasoactivo superactivo; suradista; suramina; swainsonina; talimustina; metayoduro de tamoxifeno; tauromustina; tazaroteno; tecogalán de sodio; tegafur; telurapirilio; inhibidores de telomerasa; temoporfina; tenipósido; tetraclorodecaóxido; tetrazomina; taliblastina; tiocoralina; trombopoyetina; mimético de trombopoyetina; timalfasina; agonista del receptor de timopoyetina; timotrinano; hormona estimulante de la tiroides; etil etiopurpurina de estaño; tirapazamina; bicloruro de titanoceno; topsentina; toremifeno; inhibidores de la traducción; tretinoína; triacetiluridina; triciribina; trimetrexato; triptorelina; tropisetrón; turosterida; inhibidores de tirosina quinasa; tirfostinas; inhibidores de UBC; ubenimex; factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital; antagonistas del receptor de uroquinasa; vapreotida; variolina B; velaresol; veramina; verdins; verteporfina; vinorelbina; vinxaltina; vitaxina; vorozol; zanoterona; zeniplatino; zilascorb; y zinostatina estimalámero.

En una realización, el segundo agente activo es un inhibidor del proteosoma. En una realización, el inhibidor del proteosoma es bortezomib, disulfiram, epigalocatequina-3-galato, salinosporamida A, carfilzomib, ONX 0912, CEP-18770, o MLN9708.

En una realización, el segundo agente activo es un inhibidor de HDAC. En una realización, el inhibidor de HDAC es vorinostat, romidepsina, panobinostat, ácido valproico, belinostat, mocetinostat, abexinostat, entinostat, SB939, resminostat, givinostat, CUDC-101, AR-42, CHR-2845, CHR-3996, 4SC-202, CG200745, ACY-1215, sulforafano, kevetrina o tricostatina A.

En una realización, el segundo agente activo es un inhibidor mitótico. En una realización, el inhibidor mitótico es taxanos, alcaloides de vinca o colchicina. En una realización, el taxano es paclitaxel (Abraxano) o docetaxel. En una realización, el alcaloide de vinca es vinblastina, vincristina, vindesina, o vinorelbina.

Los segundos agentes activos específicos incluyen, pero no están limitados a, oblimersen (GENASENSE®), remicade, docetaxel, celecoxib, melfalán, dexametasona (DECADRON®), esteroides, gemcitabina, cisplatino, temozolomida, etopósido, ciclofosfamida, temodar, carboplatino, procarbazina, gliadel, tamoxifeno, topotecán, metotrexato, ARISA®, taxol, taxotere, fluorouracilo, leucovorina, irinotecán, xeloda, CPT-11, interferón alfa, interferón alfa pegilado (p. ej., PEG INTRON-A), capecitabina, cisplatino, tiotepa, fludarabina, carboplatino, daunorrubicina liposomal, citarabina, doxetaxol, pacilitaxel, vinblastina, IL-2, GM-CSF, dacarbazina, vinorelbina, ácido zoledrónico, palmitronato, biaxina, busulfán, prednisona, bisfosfonato, trióxido de arsénico, vincristina, doxorrubicina (DOXIL®), paclitaxel, ganciclovir, adriamicina, fosfato sódico de estramustina (EMCYT®), sulindac y etopósido.

5.5 Biomarcadores

En la presente memoria se describen métodos relacionados con el uso de los ARNm o proteínas como biomarcadores para determinar la eficacia de la terapia del cáncer. Los niveles de ARNm o proteína se pueden usar para determinar si es probable que un agente particular tenga éxito en el tratamiento de un tipo específico de cáncer, p. ej., linfoma no de Hodgkin.

Un marcador biológico o “biomarcador” es una sustancia cuya detección indica un estado biológico particular, tal como, por ejemplo, la presencia de cáncer. Por ejemplo, los biomarcadores se pueden determinar bien individualmente o varios biomarcadores se pueden medir simultáneamente.

Por ejemplo, un “biomarcador” indica un cambio en el nivel de expresión de ARNm que puede correlacionarse con el riesgo o progresión de una enfermedad, o con la susceptibilidad de la enfermedad a un tratamiento dado. Por ejemplo, el biomarcador es un ácido nucleico, tal como un ARNm o ADNc.

Por ejemplo, un “biomarcador” indica un cambio en el nivel de la expresión de polipéptidos o proteínas que puede correlacionarse con el riesgo, la susceptibilidad al tratamiento, o la progresión de una enfermedad. Por ejemplo, el biomarcador puede ser un polipéptido o proteína, o un fragmento de los mismos. El nivel relativo de las proteínas específicas se puede determinar por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se pueden usar los métodos basados en anticuerpos, tales como una inmunotransferencia, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA), u otros métodos.

Métodos de tratamiento y prevención

En una realización, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para el tratamiento y prevención del cáncer, en donde el cáncer es mieloma o linfoma, que comprende administrar a un paciente un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para uso en

En otra realización, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para la gestión del cáncer, que comprende administrar a un paciente un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. En la presente memoria se proporcionan métodos para el tratamiento o gestión de linfoma, particularmente linfoma no de Hodgkin. En algunas realizaciones, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para el tratamiento o la gestión de linfoma no de Hodgkin (NHL), incluyendo, pero no limitado a, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), usando los factores de pronóstico.

En la presente memoria también se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para el tratamiento de pacientes que han sido tratados previamente para el cáncer, pero que no responden a las terapias estándares, así como aquellos que no han sido tratados previamente. La invención también abarca el tratamiento de pacientes, independientemente de la edad del paciente, aunque algunas enfermedades o trastornos son más comunes en ciertos grupos de edad. La invención abarca además el tratamiento de pacientes que han sido sometidos a una cirugía en un intento de tratar la enfermedad o afección en cuestión, así como los que no lo han hecho. Dado que los pacientes con cáncer tienen manifestaciones clínicas heterogéneas y diferentes resultados clínicos, el tratamiento que se da a un paciente puede variar, dependiendo de su pronóstico. El médico experto será capaz de determinar fácilmente, sin más experimentación que la necesaria, los agentes secundarios específicos, tipos de cirugía y tipos de terapia estándar no basada en fármacos que pueden ser usados eficazmente para tratar a un paciente individual con cáncer.

Tal y como se usa en la presente memoria, el término “cáncer” incluye, pero no está limitado a, tumores sólidos y tumores de transmisión hemática. El término “cáncer” se refiere a enfermedad de los tejidos de la piel, órganos, sangre y vasos, incluyendo, pero sin limitarse a, cánceres de la vejiga, hueso, sangre, cerebro, mama, cuello uterino, pecho, colon, endometrio, esófago, ojo, cabeza, riñón, hígado, ganglios linfáticos, pulmón, boca, cuello, ovarios, páncreas, próstata, recto, estómago, testículos, garganta y útero. Los cánceres específicos incluyen, pero no están limitados a, enfermedad maligna avanzada, amiloidosis, neuroblastoma, meningioma, hemangiopericitoma, metástasis de cerebro múltiple, glioblastoma multiforme, glioblastoma, glioma del tallo cerebral, tumor cerebral maligno de mal pronóstico, glioma maligno, glioma maligno recurrente, astrocitoma anaplásico, oligodendroglioma anaplásico, tumor neuroendocrino, adenocarcinoma de recto, cáncer colorrectal de Dukes C y D, carcinoma colorrectal no extirpable, carcinoma hepatocelular metastásico, sarcoma de Kaposi, leucemia mieloblástica aguda de cariotipo, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma cutáneo de células T, linfoma cutáneo de células B, linfoma difuso de células B grandes, linfoma folicular de grado bajo, melanoma maligno, mesotelioma maligno, síndrome de mesotelioma de derrame pleural maligno, carcinoma peritoneal, carcinoma seroso papilar, sarcoma ginecológico, sarcoma de tejidos blandos, esclerodermia, vasculitis cutánea, histiocitosis de células de Langerhans, leiomiosarcoma, fibrodisplasia osificante progresiva, cáncer de próstata refractario a hormonas, sarcoma de tejidos blandos de alto riesgo extirpado, carcinoma hepatocelular no extirpable, macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma latente, mieloma indolente, cáncer de las trompas de Falopio, cáncer de próstata independiente de andrógeno, cáncer de próstata no metastásico de estadio IV dependiente de andrógenos, cáncer de próstata insensible a hormonas, cáncer de próstata insensible a quimioterapia, carcinoma papilar de la tiroides, carcinoma folicular de la tiroides, carcinoma medular de la tiroides, y leiomioma.

En ciertas realizaciones, el cáncer es un tumor de transmisión hemática. En ciertas realizaciones, el tumor de transmisión hemática es metastásico. En ciertas realizaciones, el tumor de transmisión hemática es resistente a fármacos. El cáncer de transmisión hemática es mieloma o linfoma.

Por ejemplo, el cáncer es un tumor sólido. Por ejemplo, el tumor sólido es metastásico. Por ejemplo, el tumor sólido es resistente a fármacos. Por ejemplo, el tumor sólido es carcinoma hepatocelular, cáncer de próstata, cáncer de ovario o glioblastoma.

En la presente memoria también se describen métodos para tratar, prevenir y/o gestionar de la enfermedad en pacientes con función renal alterada. En la presente memoria también se describen métodos para tratar, prevenir y/o gestionar el cáncer en pacientes con función renal alterada. En la presente memoria también se describen métodos para proporcionar los ajustes necesarios de la dosis para pacientes con función renal alterada debida a, pero sin limitarse a, enfermedad, envejecimiento u otros factores del paciente.

En ciertas realizaciones, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para el tratamiento o gestión del mieloma múltiple recidivante/refractario en pacientes con función renal alterada o un síntoma de la misma, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, tautómero farmacéuticamente aceptable o mezclas racémicas del mismo a un paciente que tiene mieloma múltiple recidivante/refractario con función renal alterada. En una realización, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para el tratamiento, prevención y/o gestión del mieloma múltiple recidivante/refractario en pacientes con función renal alterada o un síntoma de la misma, que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de (S)-3-(4-((4-morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma a un paciente que tiene mieloma múltiple recidivante/refractario con función renal alterada.

En la presente memoria también se describen métodos para prevenir el mieloma múltiple recidivante/refractario en pacientes con función renal alterada o un síntoma de la misma, que comprenden administrar una cantidad eficaz del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, tautómero o mezclas racémicas farmacéuticamente aceptables del mismo a un paciente en riesgo de tener mieloma múltiple recidivante/refractario con función renal alterada. Por ejemplo, en la presente memoria hay métodos para prevenir el mieloma múltiple recidivante/refractario en pacientes con función renal alterada o un síntoma de la misma, que comprenden administrar una cantidad eficaz de (S)-3-(4-((-morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma a un paciente en riesgo de tener mieloma múltiple recidivante/refractario con función renal alterada.

En ciertas realizaciones, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en métodos para tratar, prevenir y/o gestionar el mieloma múltiple recidivante/refractario en pacientes con función renal alterada.

En ciertas realizaciones, una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz del compuesto es de aproximadamente 0,005 a aproximadamente 1.000 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 500 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 250 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 25 mg por día, o de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg por día.

En cierta realización, una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 0,005 a aproximadamente 1.000 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 500 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 250 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg por día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mg por día, de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 25 mg por día, o de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg cada dos días.

En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,2, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 5, aproximadamente 10, aproximadamente 15, aproximadamente 20, aproximadamente 25, aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 45, aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70, aproximadamente 80, aproximadamente 90, aproximadamente 100, o aproximadamente 150 mg por día.

En una realización, el rango de dosis diaria recomendado del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, para las afecciones descritas en la presente memoria, se encuentra dentro del rango de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 50 mg por día, dada preferiblemente como una dosis única una vez al día, o en dosis divididas a lo largo de un día. En algunas realizaciones, la dosis varía de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 50 mg por día. En otras realizaciones, la dosificación varía de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 mg por día. Las dosis específicas por día incluyen 0,1,0,2, 0,5, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 o 50 mg por día.

En una realización específica, la dosis de partida recomendada puede ser 0,5, 1,2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25 o 50 mg por día. En otra realización, la dosis de partida recomendada puede ser 0,5, 1, 2, 3, 4, o 5 mg por día. La dosis puede aumentarse a 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 y 50 mg/día. En una realización específica, el compuesto se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 25 mg/día a pacientes con NHL (p. ej., DLBCL). En una realización particular, el compuesto se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 10 mg/día a pacientes con NHL (p. ej., DLBCL).

En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz es de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 25 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 10 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 9 mg/kg/día, 0,01 a aproximadamente 8 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente

7 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 6 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente

5 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 4 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente

3 mg/kg/día, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 2 mg/kg/día, o de aproximadamente 0,01 a aproximadamente

1 mg/kg/día.

La dosis administrada también puede expresarse en unidades distintas de mg/kg/día. Por ejemplo, las dosis para la administración parenteral pueden expresarse como mg/m2/día. Un experto en la técnica sabría fácilmente cómo convertir dosis de mg/kg/día a mg/m2/día para una altura o peso dados de un sujeto o ambos (véase, www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm). Por ejemplo, una dosis de 1 mg/kg/día para un ser humano de 65 kg es aproximadamente igual a 38 mg/m2/día.

En ciertas realizaciones, la cantidad del compuesto administrado es suficiente para proporcionar una concentración en el plasma del compuesto en el estado estacionario, que varía de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 500 gM, aproximadamente 0,002 a aproximadamente 200 pM, aproximadamente 0,005 a aproximadamente 100 pM, aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 pM, de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 pM, aproximadamente 0,02 a aproximadamente 25 pM, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 20 pM, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 20 pM, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 20 pM, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 pM.

En otras realizaciones, la cantidad del compuesto administrada es suficiente para proporcionar una concentración en el plasma del compuesto en el estado estacionario, que varía de aproximadamente 5 a aproximadamente 100 nM, aproximadamente 5 a aproximadamente 50 nM, aproximadamente 10 a aproximadamente 100 nM, aproximadamente 10 a aproximadamente 50 nM o de aproximadamente 50 a aproximadamente 100 nM.

Tal y como se usa en la presente memoria, el término “concentración en el plasma en estado estacionario” es la concentración alcanzada tras un período de administración de un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. Una vez que se alcanza el estado estacionario, hay picos y valles menores en la curva dependiente del tiempo de la concentración en el plasma del compuesto.

En ciertas realizaciones, la cantidad del compuesto administrada es suficiente para proporcionar una concentración en el plasma máxima (concentración pico) del compuesto, que varía de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 500 pM, aproximadamente 0,002 a aproximadamente 200 pM, aproximadamente 0,005 a aproximadamente 100 pM, aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 pM, de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 pM, aproximadamente 0,02 a aproximadamente 25 pM, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 20 pM, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 20 pM, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 20 pM, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 pM.

En ciertas realizaciones, la cantidad del compuesto administrada es suficiente para proporcionar una concentración en el plasma mínima (concentración valle) del compuesto, que varía de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 500 pM, aproximadamente 0,002 a aproximadamente 200 pM, aproximadamente 0,005 a aproximadamente 100 pM, aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 pM, de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 pM, aproximadamente 0,01 a aproximadamente 25 pM, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 pM, de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 20 pM, de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 20 pM, o de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 pM.

En ciertas realizaciones, la cantidad del compuesto administrada es suficiente para proporcionar un área bajo la curva (AUC) del compuesto, que varía de aproximadamente 100 a aproximadamente 100.000 ng*hr/ml, de aproximadamente 1.000 a aproximadamente 50.000 ng*hr/ml, de aproximadamente 5.000 a aproximadamente 25.000 ng*hr/ml, o de aproximadamente 5.000 a aproximadamente 10.000 ng*hr/mL.

En ciertas realizaciones, el paciente que se va a tratar con uno de los métodos proporcionados en la presente memoria no ha sido tratado con terapia anticancerosa antes de la administración del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. En ciertas realizaciones, el paciente que se va a tratar con uno de los métodos proporcionados en la presente memoria ha sido tratado con la terapia anticancerosa antes de la administración del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. En ciertas realizaciones, el paciente que se va a tratar con uno de los métodos proporcionados en la presente memoria ha desarrollado resistencia a los fármacos para la terapia anticancerosa.

Los métodos proporcionados en la presente memoria abarcan el tratamiento de un paciente, independientemente de la edad del paciente, aunque algunas enfermedades o trastornos son más comunes en ciertos grupos de edad. Además, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para tratar a un paciente que ha sido sometido a cirugía en un intento de tratar la enfermedad o afección en cuestión, así como uno que no lo ha sido. Debido a que los sujetos con cáncer tienen manifestaciones clínicas heterogéneas y diferentes resultados clínicos, el tratamiento proporcionado a un sujeto en particular puede variar, dependiendo de su pronóstico. El médico experto será capaz de determinar fácilmente sin más experimentación que la necesaria, los agentes secundarios específicos, tipos de cirugía y tipos de terapia estándar no basada en fármacos que puede usarse eficazmente para tratar a un sujeto individual con cáncer.

Dependiendo de la enfermedad a tratar y de la condición del sujeto, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede administrar por las vía de administración oral, parenteral (p. ej., intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, CIV, inyección o infusión intracisternal, inyección subcutánea, o implante), inhalación, nasal, vaginal, rectal, sublingual, o tópica (p. ej., transdérmica o local). El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede formular, solo o juntos, en la unidad de dosificación adecuada con excipientes, portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables , apropiados para cada vía de administración.

En una realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía oral. En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía parenteral. En aún otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía intravenosa.

El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede suministrar como una dosis única tal como, p. ej., una sola inyección en bolo, o comprimidos o píldoras orales; o en el tiempo, tal como, p. ej., infusión continua en el tiempo o dosis en bolo divididas en el tiempo. El compuesto se puede administrar repetidamente si es necesario, por ejemplo, hasta que el paciente experimenta una enfermedad estable o regresión, o hasta que el paciente experimenta progresión de la enfermedad o toxicidad inaceptable. Por ejemplo, enfermedad estable para los tumores sólidos en general significa que el diámetro perpendicular de las lesiones mensurables no ha aumentado en un 25 % o más desde la última medición. Response Evaluation Criteria in Solid Tumors (RECIST), Journal of the National Cáncer Institute 92(3): 205-216 (2000). La enfermedad estable o ausencia de la misma se determina por métodos conocidos en la técnica, tales como evaluación de los síntomas del paciente, examen físico, visualización del tumor que ha sido fotografiado usando rayos X, escaneo CAT, PET, o MRI y otras modalidades de evaluación comúnmente aceptadas.

El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se puede administrar una vez al día (QD), o dividido en múltiples dosis diarias, tales como dos veces al día (BID), tres veces al día (TID), y cuatro veces al día (QID). Además, la administración puede ser continua (es decir, diariamente durante días consecutivos o todos los días), intermitente, p. ej., en ciclos (es decir, incluyendo los días, semanas o meses de descanso sin fármaco). Tal y como se usa en la presente memoria, el término “diariamente” significa que un compuesto terapéutico, tal como el compuesto de la Fórmula I, se administra una vez o más de una vez cada día, por ejemplo, durante un período de tiempo. El término “continuo” significa que un compuesto terapéutico, tal como el compuesto de la Fórmula I, se administra diariamente durante un período ininterrumpido de por lo menos 10 días a 52 semanas. El término “intermitente” o “intermitentemente” tal y como se usa en la presente memoria significa la detención e inicio, ya sea a intervalos regulares o irregulares. Por ejemplo, la administración intermitente del compuesto de la Fórmula I es la administración de uno a seis días por semana, la administración en ciclos (p. ej., la administración diaria de dos a ocho semanas consecutivas, a continuación, un período de descanso sin administración durante hasta una semana), o la administración en días alternos. El término “ciclos”, tal y como se usa en la presente memoria, significa que un compuesto terapéutico, tal como el compuesto de la Fórmula I, se administra diariamente o de forma continua, pero con un período de descanso.

En algunas realizaciones, la frecuencia de la administración está en el rango de aproximadamente una dosis diaria a aproximadamente una dosis mensual. En ciertas realizaciones, la administración es una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día, una vez cada dos días, dos veces por semana, una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, o una vez cada cuatro semanas. En una realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez al día. En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra dos veces al día. En aún otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra tres veces al día. En todavía otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra cuatro veces al día.

En ciertas realizaciones, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez al día de un día a seis meses, de una semana a tres meses, entre una semana y cuatro semanas, de una semana hasta tres semanas, o de una semana a dos semanas. En ciertas realizaciones, el compuesto de la Fórmula I, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez al día durante una semana, dos semanas, tres semanas o cuatro semanas. En una realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez por día durante una semana. En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez por día durante dos semanas. En aún otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez al día durante tres semanas. En todavía otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una vez al día durante cuatro semanas.

5.6.1 Terapia de combinación con un segundo agente activo

El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, también puede combinarse o usarse en combinación con otros agentes terapéuticos útiles en el tratamiento y/o prevención del cáncer descritos en la presente memoria.

En una realización, en la presente memoria se proporciona 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para tratar, prevenir o gestionar el cáncer, en donde el cáncer es mieloma o linfoma, que comprende administrar a un paciente (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma; o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; en combinación con uno o más segundos agentes activos, y opcionalmente en combinación con terapia de radiación, transfusiones de sangre, o cirugía. Los ejemplos de segundos agentes activos se describen en la presente memoria (véase, p. ej., la sección 5.4).

Tal y como se usa en la presente memoria, el término “en combinación” incluye el uso de más de una terapia (p. ej., uno o más agentes profilácticos y/o terapéuticos). Sin embargo, el uso del término “en combinación” no restringe el orden en el que las terapias (p. ej., agentes profilácticos y/o terapéuticos) se administran a un paciente con una enfermedad o trastorno. Una primera terapia (p. ej., un agente profiláctico o terapéutico tal como un compuesto proporcionado en la presente memoria, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo) se puede administrar antes de (p. ej., 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, o 12 semanas antes), concomitantemente con, o posteriormente a (p. ej., 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, o 12 semanas después) la administración de una segunda terapia (p. ej., un agente profiláctico o terapéutico) al sujeto. La triple terapia también se contempla en la presente memoria.

La administración del compuesto de la Fórmula I y uno o más segundos agentes activos a un paciente puede ocurrir simultáneamente o secuencialmente por la misma o diferentes vías de administración. La idoneidad de una vía de administración particular utilizada para un agente activo particular dependerá del propio agente activo (p. ej., si puede administrarse por vía oral sin descomponerse antes de entrar en la corriente sanguínea) y del cáncer que se está tratando.

La vía de administración del compuesto de la Fórmula I es independiente de la vía de administración de una segunda terapia. En una realización, el compuesto de la Fórmula I se administra por vía oral. En otra realización, el compuesto de la Fórmula I se administra por vía intravenosa. Así, de conformidad con estas realizaciones, el compuesto de la Fórmula I se administra por vía oral o por vía intravenosa, y la segunda terapia se puede administrar por vía oral, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, liposomas, por inhalación, por vía vaginal, intraocular, a través de la administración local mediante un catéter o stent, subcutánea, intraadiposa, intraarticular, intratecal, o en una forma de dosificación de liberación lenta. En una realización, el compuesto de la Fórmula I y una segunda terapia se administran por el mismo modo de administración, por vía oral o por vía IV. En otra realización, el compuesto de la Fórmula I se administra por un modo de administración, p. ej., por vía IV, mientras que el segundo agente (un agente anticanceroso) se administra por otro modo de administración, p. ej., por vía oral.

En una realización, el segundo agente activo se administra por vía intravenosa o subcutánea y una vez o dos veces al día en una cantidad de aproximadamente 1 a aproximadamente 1.000 mg, de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 350 mg, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg. La cantidad específica del segundo agente activo dependerá del agente específico usado, del tipo de enfermedad que está siendo tratada o gestionada, de la gravedad y estadio de la enfermedad, y de la cantidad del compuesto de la Fórmula I proporcionado en la presente memoria y cualesquiera agentes activos adicionales opcionales administrados concurrentemente al paciente. En ciertas realizaciones, el segundo agente activo es oblimersen (GENASENSE®), GM-CSF, G-CSF, SCF, EPO, taxotere, irinotecán, dacarbazina, ácido transretinoico, topotecán, pentoxifilina, ciprofloxacina, dexametasona, vincristina, doxorrubicina, inhibidor de COX-2, IL2, IL8, IL18, IFN, Ara-C, vinorelbina, o una combinación de los mismos.

En ciertas realizaciones, se administra GM-CSF, G-CSF, SCF o EPO por vía subcutánea durante aproximadamente cinco días en un ciclo de cuatro o seis semanas en una cantidad que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente

750 mg/m2/día, de aproximadamente 25 a aproximadamente 500 mg/m2/día, de aproximadamente 50 a aproximadamente 250 mg/m2/día, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg/m2/día. En ciertas realizaciones, se puede administrar GM-CSF en una cantidad de aproximadamente 60 a aproximadamente 500 mcg/m2 por vía intravenosa durante 2 horas o de aproximadamente 5 a aproximadamente 12 mcg/m2/día por vía subcutánea. En ciertas realizaciones, se puede administrar G-CSF por vía subcutánea en una cantidad de aproximadamente 1 mcg/kg/día inicialmente y se puede ajustar dependiendo del aumento de los recuentos totales de granulocitos. La dosis de mantenimiento de G-CSF puede administrarse en una cantidad de aproximadamente 300 (en pacientes más pequeños) o 480 mcg por vía subcutánea. En ciertas realizaciones, se puede administrar EPO por vía subcutánea en una cantidad de 10.000 Unidades 3 veces por semana.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con melfalán y dexametasona a los pacientes con amiloidosis. Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y esferoides pueden administrarse a pacientes con amiloidosis.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con gemcitabina y cisplatino a pacientes con cáncer de vejiga de células transicionales localmente avanzado o metastásico .

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con un segundo ingrediente activo como sigue: temozolomida a los pacientes pediátricos con tumores cerebrales recidivantes o progresivos o neuroblastoma recurrente; celecoxib, etopósido y ciclofosfamida para el cáncer del SNC recidivante o progresivo; temodar a pacientes con meningioma recurrente o progresivo, meningioma maligno, hemangiopericitoma, múltiples metástasis cerebrales, tumores cerebrales recidivantes o glioblastoma multiforme recién diagnosticado; irinotecán para pacientes con glioblastoma recurrente; carboplatino a pacientes pediátricos con glioma del tallo cerebral; procarbazina a pacientes pediátricos con gliomas malignos progresivos; ciclofosfamida a pacientes con tumores cerebrales malignos de mal pronóstico, glioblastoma multiforme recién diagnosticado o recurrente; Gliadel® para gliomas malignos recurrentes de grado alto; temozolomida y el tamoxifeno para astrocitoma anaplásico; o topotecán para gliomas, glioblastoma, astrocitoma anaplásico u oligodendroglioma anaplásico.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con metotrexato, ciclofosfamida, taxano, abraxano, lapatinib, herceptina, inhibidores de aromatasa, moduladores selectivos de estrógenos, antagonistas del receptor de estrógeno, y/o PLX3397 (Plexxikon) a pacientes con cáncer de mama metastásico.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con temozolomida a pacientes con tumores neuroendocrinos.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con gemcitabina a pacientes con cáncer de cabeza o cuello recurrente o metastásico.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con gemcitabina a pacientes con cáncer de páncreas.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con cáncer de colon en combinación con ARISA®, avastatina, taxol, y/o taxotere.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con capecitabina y/o PLX4032 (Plexxikon) a pacientes con cáncer colorrectal refractario o a pacientes en los que fracasa la terapia de primera línea o tienen bajo rendimiento en adenocarcinoma de colon o recto.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con fluorouracilo, leucovorina, irinotecán a pacientes con cáncer colorrectal de Dukes C y D o a pacientes que han sido tratados previamente para cáncer colorrectal metastásico.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con cáncer colorrectal refractario en combinación con capecitabina, xeloda, y/o CPT-11.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con capecitabina e irinotecán para pacientes con cáncer colorrectal refractario o a pacientes con carcinoma colorrectal no extirpable o metastásico.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra solo o en combinación con interferón alfa o capecitabina a pacientes con carcinoma hepatocelular no extirpable o metastásico; o con cisplatino y tiotepa a pacientes con cáncer de hígado primario o metastásico.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con interferón alfa pegilado a pacientes con sarcoma de Kaposi.

En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con fludarabina, carboplatino, y/o topotecán a pacientes con leucemia mielógena aguda refractaria o recidivante o de alto riesgo.

En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con daunorrubicina liposomal, topotecán y/o citarabina a pacientes con leucemia mieloblástica aguda de cariotipo desfavorable.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con gemcitabina, abraxano, erlotinib, geftinib, y/o irinotecán a pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con carboplatino e irinotecán a pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con doxetaxol a pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas que han sido tratados previamente con carbo/VP 16 y radioterapia.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con carboplatino y/o taxotere, o en combinación con carboplatino, pacilitaxel y/o radioterapia torácica a pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con taxotere a pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas de estadio IIIB o IV.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con oblimersen (Genasense®) a pacientes con cáncer de pulmón de células pequeñas.

En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con ABT-737 (Abbott Laboratories) y/o obatoclax (GX15-070) a pacientes con linfoma.

En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra solo o en combinación con un segundo ingrediente activo tal como vinblastina o fludarabina a pacientes con varios tipos de linfoma, incluyendo, pero sin limitarse a, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma cutáneo de células T, linfoma cutáneo de células B, linfoma difuso de células B grandes o linfoma folicular de grado bajo recidivante o refractario.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con taxotere, IL-2, IFN, GM-CSF, PLX4032 (Plexxikon) y/o dacarbazina a pacientes con diversos tipos o estadios de melanoma.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra solo o en combinación con vinorelbina a pacientes con mesotelioma maligno, o cáncer de pulmón de células no pequeñas de estadio IIIB con implantes pleurales o síndrome de mesotelioma de derrame pleural maligno.

En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con diversos tipos o estadios de mieloma múltiple en combinación con dexametasona, ácido zoledrónico, palmitronato, GM-CSF, biaxina, vinblastina, melfalán, busulfán, ciclofosfamida, IFN, palmidronato, prednisona, bisfosfonato, celecoxib, trióxido arsénico, PEG INTRON-A, vincristina, o una combinación de los mismos.

En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con mieloma múltiple recidivante o refractario en combinación con doxorrubicina (Doxil®), vincristina y/o dexametasona (Decadron®).

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con diversos tipos o estadios de cáncer de ovario, tal como carcinoma peritoneal, carcinoma seroso papilar, cáncer de ovario refractario o cáncer de ovario recurrente, en combinación con taxol, carboplatino, doxorrubicina, gemcitabina, cisplatino, xeloda, paclitaxel, dexametasona, o una combinación de los mismos.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con diversos tipos o estadios de cáncer de próstata, en combinación con xeloda, 5 FU/LV, gemcitabina, irinotecán más gemcitabina, ciclofosfamida, vincristina, dexametasona, GM-CSF, celecoxib, taxotere, ganciclovir, paclitaxel, adriamicina, docetaxel, estramustina, Emcyt, denderón o una combinación de los mismos.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con diversos tipos o estadios de cáncer de células renales, en combinación con capecitabina, IFN, tamoxifeno, IL-2, GM-CSF, Celebrex®, o una combinación de los mismos.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con diversos tipos o estadios de cáncer ginecológico, útero o sarcoma de tejidos blandos en combinación con IFN, un inhibidor de COX-2 tal como Celebrex®, y/o sulindac.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con diversos tipos o estadios de tumores sólidos en combinación con celebrex, etopósido, ciclofosfamida, docetaxel, apecitabina, IFN, tamoxifeno, IL-2, GM-CSF, o una combinación de los mismos.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con esclerodermia o vasculitis cutánea en combinación con celebrex, etopósido, ciclofosfamida, docetaxel, apecitabina, IFN, tamoxifeno, IL-2, GM-CSF, o una combinación de los mismos.

En la presente memoria también se describe un método para incrementar la dosificación de un fármaco o agente anticanceroso que puede administrarse de forma segura y eficaz a un paciente, que comprende administrar al paciente (p. ej., un ser humano) o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. Los pacientes que se pueden beneficiar por este método son aquellos propensos a padecer un efecto adverso asociado con fármacos anticancerosos para tratar un cáncer específico de la piel, tejido subcutáneo, ganglios linfáticos, cerebro, pulmón, hígado, hueso, intestino, colon, corazón, páncreas, suprarrenal, riñón, próstata, mama, colorrectal, o combinaciones de los mismos. La administración de un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, alivia o reduce los efectos adversos que son de tal gravedad que de otro modo limitarían la cantidad del fármaco anticanceroso.

En una realización, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra por vía oral y diariamente en una cantidad que varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 150 mg, de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mg, o de aproximadamente 2 a aproximadamente 25 mg, antes, durante, o después de la aparición del efecto adverso asociado con la administración de un fármaco anticanceroso a un paciente. En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con agentes específicos tales como heparina, aspirina, cumadina, o G-CSF para evitar los efectos adversos que están asociados con fármacos anticancerosos, tales como, pero no limitado a, neutropenia o trombocitopenia.

En una realización, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con enfermedades y trastornos asociados con o caracterizados por, angiogénesis no deseada en combinación con ingredientes activos adicionales, incluyendo, pero no limitados a, fármacos anticancerosos, antiinflamatorios, antihistamínicos, antibióticos y esteroides.

En otra realización, la presente memoria se abarca 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona para su uso en un método para tratar, prevenir y/o gestionar el cáncer, que comprende administrar el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con (p. ej., antes, durante o después de) la terapia convencional, incluyendo, pero sin limitarse a, cirugía, inmunoterapia, terapia biológica, terapia de radiación, u otra terapia no basada en fármacos usada actualmente para tratar, prevenir o gestionar el cáncer. El uso combinado del compuesto proporcionado en la presente memoria y la terapia convencional puede proporcionar un régimen único de tratamiento que es inesperadamente eficaz en ciertos pacientes. Sin estar limitados por la teoría, se cree que el compuesto de la Fórmula I puede proporcionar efectos aditivos o sinérgicos cuando se administra concurrentemente con la terapia convencional.

En la presente memoria también se describe un método para reducir, tratar y/o prevenir los efectos adversos o no deseados asociados con la terapia convencional, incluyendo, pero sin limitarse a, cirugía, quimioterapia, terapia de radiación, terapia hormonal, terapia biológica e inmunoterapia. Un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro ingrediente activo pueden administrarse a un paciente antes de, durante, o después de la aparición del efecto adverso asociado con la terapia convencional.

En una realización, el compuesto de la Fórmula I puede administrarse en una cantidad que varía de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 150 mg, de aproximadamente 1 a aproximadamente 25 mg, o de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 mg por vía oral y diariamente solo, o en combinación con un segundo agente activo descrito en la presente memoria (véase, p. ej., la sección 5.4), antes de, durante, o después del uso de la terapia convencional.

Por ejemplo, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y doxetaxol se administran a pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas que han sido tratados previamente con carbo/VP 16 y radioterapia.

5.6.2 Uso con terapia de trasplante

El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, proporcionado en la presente memoria puede usarse para reducir el riesgo de la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD). Por lo tanto, en la presente memoria se abarca un método para tratar, prevenir y/o gestionar el cáncer, que comprende administrar el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, en conjunción con terapia de trasplante.

Como saben los expertos en la técnica, el tratamiento del cáncer se basa a menudo en los estadios y el mecanismo de la enfermedad. Por ejemplo, al desarrollarse la transformación leucémica inevitable en ciertos estadios del cáncer, puede ser necesario el trasplante de células madre de sangre periférica, preparación de células madre hematopoyéticas o médula ósea. El uso combinado del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, proporcionado en la presente memoria y la terapia de trasplante proporciona un sinergismo único e inesperado. En particular, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, muestra actividad inmunomoduladora que puede proporcionar efectos aditivos o sinérgicos cuando se administra concurrentemente con la terapia de trasplante en pacientes con cáncer.

El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, puede funcionar en combinación con la terapia de trasplante reduciendo las complicaciones asociadas con el procedimiento invasivo de los trasplantes y el riesgo de GVHD. En la presente memoria se abarca un método para tratar, prevenir y/o gestionar el cáncer, que comprende administrar a un paciente (p. ej., un ser humano) el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, antes, durante, o después del trasplante de sangre del cordón umbilical, sangre de la placenta, células madre de sangre periférica, preparación de células madre hematopoyéticas o médula ósea. Algunos ejemplos de células madre adecuadas para usarse en los métodos proporcionados en la presente memoria se describen en la patente de EE. UU. no. 7.498.171.

En una realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con mieloma múltiple antes, durante o después del trasplante de células progenitoras de sangre periférica autólogas.

En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con mieloma múltiple recidivante después del trasplante de células madre.

En otra realización más, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y prednisona se administran como terapia de mantenimiento a pacientes con mieloma múltiple después del trasplante de células madre autólogas.

En otra realización más, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y dexametasona se administran como terapia de rescate para el postrasplante de bajo riesgo a pacientes con mieloma múltiple.

En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y dexametasona se administran como terapia de mantenimiento a pacientes con mieloma múltiple después del trasplante de médula ósea autóloga.

En otra realización más, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra después de la administración de una dosis alta de melfalán y del trasplante de células madre autólogas a pacientes con mieloma múltiple que responde a la quimioterapia.

En otra realización más, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y PEG INTRO-A se administran como terapia de mantenimiento a pacientes con mieloma múltiple después del trasplante de células madre periféricas seleccionadas CD34- autólogas.

En otra realización más, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra con la quimioterapia de consolidación postrasplante a pacientes con mieloma múltiple recién diagnosticado para evaluar la antiangiogénesis.

En otra realización más, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y dexametasona se administran como terapia de mantenimiento después de la consolidación de DCEP, después del tratamiento con dosis altas de melfalán y el trasplante de células madre de sangre periférica a pacientes de 65 años de edad o mayores con mieloma múltiple.

En una realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con NHL (p. ej., DLBCL) antes, durante, o después del trasplante de células progenitoras de sangre periférica autólogas.

En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra a pacientes con NHL (p. ej., DLBCL) después de un trasplante de células madre.

5.6.3 Terapia cíclica

En ciertas realizaciones, los agentes profilácticos o terapéuticos proporcionados en la presente memoria se administran cíclicamente a un paciente. La terapia cíclica implica la administración de un agente activo durante un período de tiempo, seguido de un descanso durante un período de tiempo, y la repetición de esta administración secuencia!. La terapia cíclica puede reducir el desarrollo de resistencia a una o más de las terapias, evitar o reducir los efectos secundarios de una de las terapias, y/o mejorar la eficacia del tratamiento.

Por consiguiente, en ciertas realizaciones, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, proporcionado en la presente memoria se administra diariamente en una sola dosis o en dosis divididas en un ciclo de cuatro a seis semanas con un período de descanso de aproximadamente una semana o dos semanas. El método cíclico permite además incrementar la frecuencia, el número y la duración de los ciclos de dosificación. Por lo tanto, en la presente memoria se abarca en ciertas realizaciones la administración de un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, durante más ciclos que los que son típicos cuando se administra solo. En ciertas realizaciones, un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra durante un número mayor de ciclos que normalmente causarían la toxicidad limitante de la dosis en un paciente a quien tampoco se está administrando un segundo ingrediente activo.

En una realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra diariamente y continuamente durante tres o cuatro semanas a una dosis de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 150 mg/d seguida de un descanso de una o dos semanas.

En otra realización, el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y un segundo ingrediente activo se administran por vía oral, con la administración del compuesto de la Fórmula I ocurriendo de 30 a 60 minutos antes de un segundo ingrediente activo, durante un ciclo de cuatro a seis semanas. En ciertas realizaciones, la combinación del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y un segundo ingrediente activo se administra por infusión intravenosa durante aproximadamente 90 minutos cada ciclo. En ciertas realizaciones, un ciclo comprende la administración de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 150 mg/día del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg/m2/día de un segundo ingrediente activo diariamente durante tres a cuatro semanas y después una o dos semanas de descanso. En ciertas realizaciones, el número de ciclos durante los cuales se administra el tratamiento combinatorio a un paciente varía de aproximadamente uno a aproximadamente 24 ciclos, de aproximadamente dos a aproximadamente 16 ciclos, o de aproximadamente cuatro a aproximadamente tres ciclos.

5.7 Composiciones farmacéuticas y formas de dosificación

En la presente memoria también se describen composiciones farmacéuticas y formas de dosificación, que comprenden el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación comprenden además uno o más excipientes.

Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación proporcionadas en la presente memoria también comprenden uno o más ingredientes activos adicionales. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación descritas en la presente memoria comprenden el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, y un segundo agente activo. Los ejemplos de segundos ingredientes activos opcionales, o adicionales, se describen en la presente memoria (véase, p. ej., la sección 4.3).

Las formas de dosificación unitarias individuales descritas en la presente memoria son adecuadas para administración oral, mucosal (p. ej., nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal), parenteral (p. ej., subcutánea, intravenosa, inyección de bolo, intramuscular, o intraarterial), tópica (p. ej., gotas oculares u otras preparaciones oftálmicas), transdérmica o transcutánea a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a: comprimidos; comprimidos oblongos; cápsulas, tales como cápsulas de gelatina elásticas blandas; sobres; pastillas; comprimidos para chupar; dispersiones; supositorios; polvos; aerosoles (p. ej., pulverizadores o inhaladores nasales); geles; formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración oral o mucosal a un paciente, incluyendo suspensiones (p. ej., suspensiones líquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua, o emulsiones líquidas de agua en aceite), disoluciones y elixires; formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración parenteral a un paciente; gotas oculares u otras preparaciones oftálmicas adecuadas para la administración tópica; y sólidos estériles (p. ej., sólidos cristalinos o amorfos) que pueden reconstituirse para proporcionar formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración parenteral a un paciente.

La composición, forma y tipo de formas de dosificación descritas en la presente memoria pueden variar dependiendo de su uso. Por ejemplo, una forma de dosificación usada en el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener cantidades mayores de uno o más de los ingredientes activos que una forma de dosificación usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. De manera similar, una forma de dosificación parenteral puede contener cantidades más pequeñas de uno o más de los ingredientes activos que una forma de dosificación oral usada para tratar la misma enfermedad. Véase, p. ej., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a. ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

El que un excipiente particular sea adecuado para su incorporación en una composición farmacéutica o forma de dosificación descrita en la presente memoria depende de una variedad de factores, incluyendo, pero sin limitarse a, la vía de administración. Por ejemplo, las formas de dosificación oral tales como comprimidos pueden contener excipientes no adecuados para usarse en formas de dosificación parenteral. La idoneidad de un excipiente particular también puede depender de los ingredientes activos específicos en la forma de dosificación. Por ejemplo, la descomposición de algunos ingredientes activos se puede acelerar por algunos excipientes tales como lactosa, o cuando se exponen al agua. Los ingredientes activos que comprenden aminas primarias o secundarias son particularmente susceptibles a dicha descomposición acelerada. Por consiguiente, en la presente memoria se describen composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que contienen poca, si la hay, lactosa. Tal y como se usa en la presente memoria, el término “libre de lactosa” significa que la cantidad de lactosa presente, si la hay, es insuficiente para aumentar sustancialmente la velocidad de degradación de un ingrediente activo.

Las composiciones libres de lactosa descritas en la presente memoria pueden comprender excipientes que se enumeran, por ejemplo, en la Farmacopea de EE. UU. (USP) 25-NF20 (2002). Por ejemplo, las composiciones libres de lactosa comprenden ingredientes activos, un aglutinante/relleno y un lubricante en cantidades farmacéuticamente compatibles y farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, las formas de dosificación libres de lactosa comprenden ingredientes activos, celulosa microcristalina, almidón pregelatinizado, y estearato de magnesio.

En la presente memoria se describen además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras que comprenden ingredientes activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, se acepta ampliamente en las técnicas farmacéuticas que la adición de agua (p. ej., al 5 %) es un medio de simulación del almacenamiento a largo plazo con el fin de determinar características tales como la vida útil o la estabilidad de las formulaciones con el tiempo. Véase, p. ej., Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principies & Practice, 2a. Ed., Marcel Dekker, NY, NY, 1995, p. 379-80. En efecto, el agua y el calor aceleran la descomposición de algunos compuestos. Por lo tanto, el efecto del agua sobre una formulación puede ser de gran importancia ya que la humectación y/o humedad se encuentran comúnmente durante la fabricación, manipulación, envasado, almacenamiento, envío y uso de las formulaciones.

Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras descritas en la presente memoria se pueden preparar usando ingredientes anhidros o que contienen baja humedad y condiciones de baja humectación y baja humedad. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden lactosa y por lo menos un ingrediente activo que comprende una amina primaria o secundaria son preferiblemente anhidras si se espera un contacto sustancial con la humectación y/o humedad durante la fabricación, envasado, y/o almacenamiento.

Una composición farmacéutica anhidra debe prepararse y almacenarse de tal manera que se mantenga su naturaleza anhidra. Por consiguiente, en la presente memoria se describen composiciones anhidras envasadas usando materiales para prevenir la exposición al agua de tal manera que puedan ser incluidas en los kits de formulación adecuados. Los ejemplos de envase adecuado incluyen, pero no se limitan a, láminas, plásticos, recipientes de dosis unitarias (p. ej., viales), paquetes de blíster y paquetes de tiras sellados herméticamente.

En la presente memoria se describen composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más compuestos que reducen la velocidad a la que un ingrediente activo se descompondrá. Dichos compuestos, que se denominan en la presente memoria “estabilizadores”, incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes tales como ácido ascórbico, tamponadores del pH, o tamponadores de sales.

Al igual que las cantidades y tipos de excipientes, las cantidades y tipos específicos de ingredientes activos en una forma de dosificación pueden diferir dependiendo de factores tales como, pero sin limitarse a, la vía por la que se va a administrar a los pacientes. Por ejemplo, las formas de dosificación descritas en la presente memoria comprenden el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, en una cantidad que varía de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 1.000 mg, de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 200 mg, de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 150 mg, de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 100 mg, o de aproximadamente 0,10 a aproximadamente 50 mg. Por ejemplo, las formas de dosificación proporcionadas en la presente memoria comprenden el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, en una cantidad de aproximadamente 0,1, aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 5, aproximadamente 7,5, aproximadamente 10, aproximadamente 12,5, aproximadamente 15, aproximadamente 17,5, aproximadamente 20, aproximadamente 25, aproximadamente 50, aproximadamente 100, aproximadamente 150, o aproximadamente 200 mg.

5.7.1 Formas de dosificación orales

Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria que son adecuadas para la administración oral se formulan como formas de dosificación discretas, ejemplos de las cuales incluyen, pero no se limitan a, comprimidos (p. ej., comprimidos masticables), comprimidos oblongos, cápsulas y líquidos (p. ej., jarabes saborizados). Dichas formas de dosificación contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos y se pueden preparar por algunos métodos conocidos de farmacia. Véase, en general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a. ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

Por ejemplo, las formas de dosificación orales proporcionadas en la presente memoria se preparan mediante la combinación de los ingredientes activos en una mezcla íntima con por lo menos un excipiente de conformidad con técnicas de composición farmacéutica convencionales. Los excipientes pueden adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Por ejemplo, los excipientes adecuados para usarse en formas de dosificación líquidas o en aerosol orales incluyen, pero no se limitan a, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservantes y agentes colorantes. Los ejemplos de excipientes adecuados para usarse en formas de dosificación orales sólidas (p. ej., polvos, comprimidos, cápsulas y comprimidos oblongos) incluyen, pero no se limitan a, almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y agentes disgregantes.

Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan las formas de dosificación unitarias orales más ventajosas, en cuyo caso se utilizan excipientes sólidos. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse por técnicas acuosas o no acuosas estándar. Dichas formas de dosificación pueden prepararse por algunos métodos conocidos de farmacia. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación se preparan mezclando uniforme e íntimamente los ingredientes activos con vehículos líquidos, vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después conformando el producto en la presentación deseada si es necesario.

Por ejemplo, un comprimido se prepara por compresión o moldeo. Por ejemplo, los comprimidos comprimidos se pueden preparar comprimiendo en una máquina adecuada los ingredientes activos en una forma de flujo libre, p. ej., polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con un excipiente. Por ejemplo, los comprimidos moldeados se fabrican moldeando en una máquina adecuada una mezcla de un compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

Los ejemplos de excipientes que se pueden usar en las formas de dosificación orales descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, rellenos, disgregantes, y lubricantes. Los aglutinantes adecuados para usarse en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, almidón de maíz, almidón de patata, u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como arábiga, alginato de sodio, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (p. ej., etil celulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio), polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa, (p. ej., No. 2208, 2906, 2910), celulosa microcristalina, y mezclas de los mismos.

Las formas adecuadas de celulosa microcristalina incluyen, pero no se limitan a, AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA), y mezclas de las mismas. Un aglutinante específico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio (p. ej., AVICEL RC-581). Los excipientes o aditivos anhidros o de baja humedad adecuados incluyen AVICEL-PH-103™ y Almidón 1500 LM.

Los ejemplos de rellenos adecuados para su uso en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, talco, carbonato de calcio (p. ej., gránulos o polvo), celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pregelatinizado, y mezclas de los mismos. Por ejemplo, el aglutinante o relleno en las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria está presente en de aproximadamente un 50 a aproximadamente un 99 por ciento en peso de la composición farmacéutica o forma de dosificación.

Los disgregantes se usan en las composiciones descritas en la presente memoria para proporcionar a los comprimidos la capacidad de disgregarse cuando se exponen a un ambiente acuoso. Los comprimidos que contienen demasiado disgregante se pueden disgregar en el almacenamiento, mientras que los que contienen demasiado poco pueden no disgregarse a una velocidad deseada o bajo las condiciones deseadas. Por lo tanto, se debe usar una cantidad suficiente de disgregante que no sea ni demasiado alta ni demasiado baja para alterar perjudicialmente la liberación de los ingredientes activos para formar las formas de dosificación orales sólidas proporcionadas en la presente memoria. La cantidad de disgregante usada varía basándose en el tipo de formulación. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria comprenden de aproximadamente un 0,5 a aproximadamente un 15 por ciento en peso o de aproximadamente un 1 a aproximadamente un 5 por ciento en peso de disgregante.

Los disgregantes que son adecuados para su uso en las composiciones y formas de dosificación farmacéutica descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, agar-agar, ácido algínico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, crospovidona, polacrilina de potasio, glicolato sódico de almidón, almidón de patata o tapioca, otros almidones, almidón pregelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas y mezclas de los mismos.

Los lubricantes que son adecuados para su uso en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, ácido esteárico, lauril sulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (p. ej., aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja), estearato de cinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar, y mezclas de los mismos. Los lubricantes adicionales incluyen, pero no se limitan a, un gel de sílice Syloid (AEROSIL200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD), un aerosol coagulado de sílice sintética (Degussa Co. de Piano, TX), CAB-O-SIL (un dióxido de silicio pirógeno, Cabot Co. de Boston, MA), y mezclas de los mismos. Por ejemplo, si se usan, los lubricantes se usan en una cantidad de menos de aproximadamente un 1 por ciento en peso de las composiciones farmacéuticas o formas farmacéuticas en las que se incorporan.

En la presente memoria se describe una forma de dosificación oral sólida, que comprende el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo; y uno o más excipientes seleccionados de lactosa anhidra, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílice anhidra coloidal y gelatina.

En la presente memoria se describe una forma de dosificación oral sólida, que comprende el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato, o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo; y lactosa anhidra, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílice anhidra coloidal, y gelatina.

En la presente memoria se describe una forma de dosificación oral sólida, que comprende una sal hidrocloruro del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o un solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo; y uno o más excipientes seleccionados de lactosa anhidra, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílice anhidra coloidal, y gelatina.

En la presente memoria se describe una forma de dosificación oral sólida, que comprende una sal hidrocloruro del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o un solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo; y lactosa anhidra, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílice anhidra coloidal y gelatina.

5.7.2 Formas de dosificación de liberación retardada

En ciertas realizaciones, los ingredientes activos proporcionados en la presente memoria se administran por medios de liberación controlada o por dispositivos de administración. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos en las Patentes de EE. UU. No.: 3.845.770; 3.916.899; 3.536.809; 3.598.123; 4.008.719, 5.674.533, 5.059.595, 5.591.767, 5.120.548, 5.073.543, 5.639.476, 5.354.556, y 5.733.566. En ciertas realizaciones, dichas formas de dosificación son para su uso para proporcionar la liberación lenta o controlada o de uno o más ingredientes activos usando, por ejemplo, hidropropilmetil celulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos, recubrimientos de múltiples capas, micropartículas, liposomas, microesferas, o una combinación de los mismos para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variables. En la presente memoria se abarcan formas de dosificación unitaria individuales adecuadas para la administración oral, incluyendo, pero sin limitarse a, comprimidos, cápsulas, cápsulas de gel, y comprimidos oblongos que están adaptadas para la liberación controlada.

Todos los productos farmacéuticos de liberación controlada tienen el objetivo común de mejorar la terapia farmacológica con respecto a la alcanzada por sus homólogos no controlados. Idealmente, el uso de una preparación de liberación controlada óptimamente diseñada en el tratamiento médico se caracteriza por un mínimo de sustancia de fármaco que se utiliza para curar o controlar la afección en una cantidad mínima de tiempo. Las ventajas de las formulaciones de liberación controlada incluyen actividad extendida del fármaco, frecuencia de dosificación reducida, y aumento del cumplimiento por parte del paciente. Además, las formulaciones de liberación controlada pueden usarse para afectar al tiempo de inicio de la acción u otras características, tales como los niveles del fármaco en la sangre, y por lo tanto pueden afectar a la aparición de efectos secundarios (p. ej., adversos).

La mayoría de las formulaciones de liberación controlada están diseñadas para liberar inicialmente una cantidad de fármaco (ingrediente activo) que produce rápidamente el efecto terapéutico deseado, y liberar gradual y continuamente otras cantidades de fármaco para mantener este nivel de efecto terapéutico o profiláctico durante un período de tiempo prolongado. Con el fin de mantener este nivel constante de fármaco en el cuerpo, el fármaco debe ser liberado de la forma de dosificación a una velocidad que reemplace la cantidad de fármaco que se metaboliza y excreta del cuerpo. La liberación controlada de un ingrediente activo puede ser estimulada por varias condiciones, incluyendo, pero sin limitarse a, pH, temperatura, enzimas, agua, u otras condiciones fisiológicas o compuestos.

5.7.3 Formas de dosificación parenterales

Las formas de dosificación parenterales se pueden administrar a pacientes por diversas vías incluyendo, pero sin limitarse a, subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección en bolo), intramuscular e intraarterial. Debido a que su administración típicamente supera las defensas naturales de los pacientes contra contaminantes, las formas de dosificación parenterales son preferiblemente estériles o que pueden esterilizarse antes de la administración a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificación parenterales incluyen, pero no se limitan a, disoluciones listas para inyección, productos secos listos para ser disueltos o suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección, suspensiones listas para inyección y emulsiones.

Algunos vehículos adecuados que se pueden usar para proporcionar formas de dosificación parenterales proporcionadas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a: agua para inyección USP; vehículos acuosos tales como, pero sin limitarse a, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de dextrosa y cloruro de sodio, e inyección de Ringer con lactosa; vehículos miscibles con agua tales como, pero sin limitarse a, alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol; y vehículos no acuosos tales como, pero sin limitarse a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo.

Los compuestos que aumentan la solubilidad de uno o más de los ingredientes activos descritos en la presente memoria también se pueden incorporar en las formas de dosificación parenterales proporcionadas en la presente memoria. Por ejemplo, puede usarse ciclodextrina y sus derivados para aumentar la solubilidad de un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. Véase, p. ej., la Patente de EE. UU. No. 5.134.127.

5.7.4 Formas de dosificación tópicas y mucosales

Las formas de dosificación tópicas y mucosales descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, pulverizaciones, aerosoles, disoluciones, emulsiones, suspensiones, gotas oculares u otras preparaciones oftálmicas, u otras formas conocidas por un experto en la técnica. Véase, p. ej., Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a y 18a ed, Mack Publishing, Easton PA (1980 y 1990); e Introduction to PharmaceuticalDosage Forms, 4a. ed., Lea y Febiger, Filadelfia (1985). Las formas de dosificación adecuadas para tratar tejidos mucosales dentro de la cavidad oral pueden formularse como enjuagues bucales o como geles orales.

Los excipientes adecuados (p. ej., vehículos y diluyentes) y otros materiales que se pueden usar para proporcionar formas de dosificación tópicas y mucosales descritas en la presente memoria dependen del tejido particular al que se aplicará una composición farmacéutica o forma de dosificación dada. Con este hecho en mente, los excipientes incluyen, pero no se limitan a, agua, acetona, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1,3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral, y mezclas de los mismos para formar disoluciones, emulsiones o geles, que no son tóxicos y son farmacéuticamente aceptables. También se pueden añadir hidratantes o humectantes a las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación si se desea. Los ejemplos adicionales de dichos ingredientes se pueden encontrar, p. ej., en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a y 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1980 y 1990).

El pH de una composición farmacéutica o forma de dosificación también se puede ajustar para mejorar la administración de uno o más ingredientes activos. De manera similar, la polaridad de un vehículo disolvente, su fuerza iónica o tonicidad se puede ajustar para mejorar la administración. Los compuestos tales como estearatos también se pueden añadir a las composiciones farmacéuticas o formas de dosificación para alterar ventajosamente el carácter hidrófilo o lipófilo de uno o más ingredientes activos para mejorar la administración. A este respecto, los estearatos pueden servir como un vehículo lipídi

potenciador de la administración o agente potenciador de la penetración. Pueden usarse diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos para ajustar adicionalmente las propiedades de la composición resultante.

5.7.5 Kits

Por ejemplo, los ingredientes activos proporcionados en la presente memoria no se administran a un paciente al mismo tiempo o por la misma vía de administración. Por lo tanto, en la presente memoria se describen kits que, cuando se usan por el médico, pueden simplificar la administración de cantidades apropiadas de ingredientes activos a un paciente.

Por ejemplo, un kit descrito en la presente memoria comprende una forma de dosificación de un compuesto proporcionado en la presente memoria, p. ej., el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. Por ejemplo, el kit descrito en la presente memoria comprende además ingredientes activos adicionales, tales como oblimersen (GENASESE®), melfalán, G-CSF, GM-CSF, EPO, topotecán, dacarbazina, irinotecán, taxotere, IFN, inhibidor de COX-2, pentoxifilina, ciprofloxacina, dexametasona, IL2, IL8, IL18, Ara-C, vinorelbina, isotretinoína, ácido 13-cis-retinoico, o un mutante o derivado farmacológicamente activo de los mismos, o una combinación de los mismos. Los ejemplos de ingredientes activos adicionales incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos en la presente memoria (véase, p. ej., la sección 5.4).

Por ejemplo, el kit descrito en la presente memoria comprende además un dispositivo que se usa para administrar los ingredientes activos. Los ejemplos de dichos dispositivos incluyen, pero no se limitan a, jeringas, bolsas de goteo, parches e inhaladores.

Por ejemplo, el kit descrito en la presente memoria comprende además células o sangre para trasplante, así como vehículos farmacéuticamente aceptables que se pueden usar para administrar uno o más ingredientes activos. Por ejemplo, si un ingrediente activo se proporciona en una forma sólida que debe ser reconstituida para la administración parenteral, el kit puede comprender un contenedor sellado de un vehículo adecuado en el que se puede disolver el ingrediente activo para formar una disolución estéril libre de partículas que es adecuada para la administración parenteral. Los ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a: agua para inyección USP; vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, inyección de dextrosa y cloruro de sodio e inyección de Ringer con lactosa; vehículos miscibles con agua tales como, pero sin limitarse a, alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol; y vehículos no acuosos tales como, pero sin limitarse a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo.

6. Ejemplos

Ciertas realizaciones de la invención se ilustran por los siguientes ejemplos no limitantes.

6.1 Preparación de 3-(4-((4-(morfolinometil)-bencil)-oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona

6.1.1 Éster metílico del ácido 3-hidroxi-2-metil-benzoico

Se añadió ácido 3-hidroxi-2-metilbenzoico (105 g, 690 mmoles) a MeOH (800 mL) en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 2 L equipado con condensador, termómetro y barra agitadora, seguido por la adición de MeOH (250 ml). Se añadió H2SO4 (10 mL, 180 mmoles) a la disolución anterior. La mezcla de reacción se agitó a 62 °C durante 17 horas. El disolvente se eliminó bajo vacío. El residuo (200 mL) se añadió a agua (600 mL) lentamente a temperatura ambiente y un se formó sólido blanco. La suspensión se agitó en un baño de hielo durante 30 minutos y se filtró. El sólido se lavó con agua (5 x 250 mL) y se secó para dar éster metílico del ácido 3-hidroxi-2-metil-benzoico como un sólido blanco (100 g, 87 % de rendimiento). El compuesto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional: LCMS MH = 167; 1H RMN (DMSO-ds) 52,28 (s, 3H, CH3), 3,80 (s, 3H, CH3), 6,96-7,03 (m, 1H, Ar), 7,09 (t, J= 7,8 Hz, 1H, Ar), 7,14-7,24 (m, 1H, Ar), 9,71 (s, 1H, OH).

6.1.2 Éster metílico del ácido 3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-2-metil-benzoico

A un matraz de fondo redondo RB de tres bocas de 1 L equipado con barra agitadora y termómetro, se añadieron DMF (300 mL), 3-hidroxi-2-metilbenzoato de metilo (90 g, 542 mmoles) e imidazol (92 g, 1,354 mmoles). Se añadió TBDMS-C1 (90 g, 596 mmoles) a la disolución anterior en porciones para controlar la temperatura interna entre 15-19 °C durante 20 minutos, y después de la adición, la temperatura interna cayó por debajo de 1 °C. El baño de hielo se retiró y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se añadió a agua helada (500 mL), y la disolución resultante se dividió en dos porciones (700 mL x 2). Cada porción se extrajo con EtOAc (700 mL). Cada capa orgánica se lavó con agua fría (350 mL) y salmuera (350 mL). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO4. La capa orgánica combinada se concentró para dar éster metílico del ácido 3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-2-metil-benzoico como un aceite marrón claro (160 g, 100 % de rendimiento en crudo). El compuesto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional: LCMS MH = 281; 1H RMN (DMSO-d6) 5 -0,21 (s, 6H, CH3, CH3), 0,73-0,84 (m, 9H, CH3, CH3, CH3), 2,10 (s, 3H, CH3), 3,60 (s, 3H, CH3), 6,82 (dd, 1H, Ar), 6,97 (t, J = 7,9 Hz, 1H, Ar), 7,13 (dd, J= 1,1,7,7 Hz, 1H, Ar).

6.1.3 Éster metílico del ácido 2-bromometil-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-benzoico

Se añadió NBS (49,8 g, 280 mmoles) a 3-(terc-butil dimetilsililoxi)-2-metilbenzoato de metilo (78,4 g, 280 mmoles) en acetato de metilo (500 mL) a temperatura ambiente para dar una suspensión de color naranja. La mezcla de reacción resultante se calentó en un baño de aceite a 40 °C y brilló con un foco de luz solar de 300 vatios a reflujo durante 4 horas. La mezcla de reacción se enfrió y se lavó con una disolución de Na2SO3 (2 x 600 mL, concentración saturada al 50 %), agua (500 mL) y salmuera (600 mL). La capa orgánica se secó con MgSO4 y se decoloró con carbón vegetal. La capa orgánica se concentró para dar éster metílico del ácido 2-bromometil-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-benzoico como un aceite marrón claro (96 g, 91 % de rendimiento en crudo). El compuesto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional: LCMS M-Br = 279; 1H RMN (DMSO-ds) 50,05-0,11 (m, 6H, CH3, CH3), 0,82 (s, 9H, CH3, CH3, CH3), 3,65 (s, 3H, CH3), 4,74 (s, 2H, CH2), 6,94 (dd, J= 1,3, 8,1 Hz, 1H, Ar), 7,10-7,20 (m, 1H, Ar), 7,21-7,29 (m, 1H, Ar).

6.1.4 Éster metílico del ácido 4-carbamoil-butírico

A una disolución agitada de 2-(bromometil)-3-(terc-butildimetilsililoxi)benzoato de metilo (137,5 g, 325 mmoles) en acetonitrilo (1.100 mL) en un matraz de fondo redondo de 2 L, se añadió hidrocloruro de 4,5-diamino-5-oxopentanoato de metilo (70,4 g, 358 mmoles). A la suspensión se añadió DIPEA (119 ml, 683 mmoles) mediante un embudo de adición durante 10 minutos y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de que la mezcla se calentara en un baño de aceite a 40 °C durante 23 horas. La mezcla de reacción se concentró bajo vacío. El residuo se agitó en éter (600 mL), y precipitó un sólido blanco. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con éter (400 mL). El filtrado se lavó con HCl (1N, 200 mL), NaHCO3 (sat. 200 mL) y salmuera (250 mL). La capa ácida y la capa básica acuosa se mantuvieron separadas. Después, el sólido se lavó adicionalmente con éter (250 mL) y el líquido se lavó con la disolución ácida y la disolución básica anteriores. Las dos capas orgánicas se combinaron y se concentraron bajo vacío para dar éster metílico del ácido 4-[4-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il]-4-carbamoil-butírico como un aceite marrón (152 g, 115 % de rendimiento en crudo, 77 % de pureza por H RMN). El compuesto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional: LCMS MH = 407.

6.1.5 Éster metílico del ácido 4-carbamoil-4-(4-hidroxi-1 -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-butírico

A una disolución fría agitada de 5-amino-4-(4-(terc-butildimetilsililoxi)-1-oxoisoindolin-2-il)-5-oxopentanoato de metilo (152 g, 288 mmoles) en DMF (500 mL) y agua (55 mL), se añadió K2CO3 (19,89 g, 144 mmoles) en porciones durante 5 minutos. La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo. A la mezcla, se añadió HCl (12M, 23,99 ml, 288 mmoles) lentamente. Después de la adición, se añadió acetonitrilo (280 mL) a la mezcla y un sólido precipitó. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos y se filtró. El sólido se lavó con acetonitrilo (50 mL x 4). El filtrado se concentró bajo alto vacío para dar un aceite amarillo (168 g). El aceite se disolvió en acetonitrilo (600 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con acetonitrilo (25 mL x 2). El filtrado se concentró bajo alto vacío para dar un aceite amarillo (169 g), que se añadió a una mezcla de agua (1.200 mL) y éter (1.000 mL). La mezcla se agitó durante 3 minutos y las capas se separaron. La disolución acuosa se concentró bajo alto vacío y el residuo se agitó en acetonitrilo (160 mL) y se formó un sólido blanco después de agitación durante la noche. La mezcla se filtró para dar éster metílico del ácido 4-carbamoil-4-(4-hidroxi-1 -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-butírico como un sólido blanco (46 g, 54 % de rendimiento). El filtrado se concentró y el residuo se cristalizó adicionalmente en acetonitrilo (60 mL) para dar más éster metílico del ácido 4-carbamoil-4-(4-hidroxi-1-oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-butírico como un sólido blanco (11,7 g, 14 % de rendimiento). El filtrado se concentró y el residuo se purificó por cromatografía de ISCO para dar más éster metílico del ácido 4-carbamoil-4-(4-hidroxi-1 -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-butírico como un sólido blanco (13,2 g, 15 % de rendimiento). El producto total obtenido fue de 70,9 g con un 83 % de rendimiento: LCMS MH = 293; 1H RMN (DMSO-ds) 51,95-2,34 (m, 4H, CH2, CH2), 3,51 (s, 3H, CH3), 4,32 (d, J = 17,6 Hz, 1H, CHH), 4,49 (d, J= 17,4 Hz, 1H, CHH), 4,73 (dd, J= 4,7, 10,2 Hz, 1H, CHH), 6,99 (dd, J= 0,8, 7,9 Hz, 1H, Ar), 7,10-7,23 (m, 2H, Ar, NHH), 7,25-7,38 (m, 1H, Ar), 7,58 (s, 1H, NHH), 10,04 (s, 1H, OH).

6.1.6 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona

Etapa Paso 1: A la disolución de 3-(4-hidroxi-1 -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-piperidin-2,6-diona (2,5 g, 8,56 mmoles) en THF (60 mL) se añadió trifenilfosfina (soportada en polímero, 1,6 mmoles/g, 12 g, 18,8 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (3,96 mL, 18,8 mmoles) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos. Se añadió (4-morfolin-4-ilmetil-fenil)-metanol (2,62 g, 12,4 mmoles) a 0 °C, y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró. El aceite resultante se purificó en una columna de gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno y metanol (gradiente, el producto salió al 6 % de metanol) para dar éster metílico del ácido 4-carbamoil-4-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1-oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il]-butírico (2,2 g, 54 % de rendimiento). El producto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Etapa 2: A la disolución en THF (50 mL) de éster metílico del ácido 4-carbamoil-4-[4-(4-morfolin-4-ilmetil-benciloxi)-1 -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il]-butírico (2,2 g, 4,57 mmoles) se añadió terc-butóxido de potasio (0,51 g, 4,57 mmoles) a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 10 minutos y se inactivó con HCl 1N (5 mL, 5 mmoles) seguido por NaHCO3 saturado (25 mL). La mezcla se extrajo con EtOAc (2 X 50 mL). La capa orgánica se lavó con agua (30 mL), salmuera (30 mL), se secó sobre MgSO4 y se concentró. Al sólido resultante se añadió EtOAc (10 mL) seguido por hexano (10 mL) bajo agitación. La suspensión se filtró para dar 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona como sólido blanco (1,5 g, 73 % de rendimiento). HPLC: Waters Symmetry C18, 5 |um, 3,9 x 150 mm, 1 mL/min, 240 nm, gradiente a 95/5 de acetonitrilo/0,1 % de H3PO4 en 5 min,: tR = 4,78 min (97,5 %); pf: 210-212 °C; 1H RMN (DMSO-ds) 5 1,86-2,09 (m, 1H, CHH), 2,29-2,38 (m, 4H, CH2,CH2), 2,44 (dd, J = 4,3, 13,0 Hz, 1H, CHH), 2,53­ 2,64 (m, 1H, CHH), 2,82-2,99 (m, 1H, CHH), 3,46 (s, 2H, CH2), 3,52-3,61 (m, 4H, CH2, CH2), 4,18-4,51 (m, 2H, CH2), 5,11 (dd, J = 5,0, 13,3 Hz, 1H, NCH), 5,22 (s, 2H, CH2), 7,27-7,38 (m, 5H, Ar), 7,40-7,53 (m, 3H, Ar), 10,98 (s, 1H, NH) 13C RMN (DMSO-de) 522,36, 31,21,45,09, 51,58, 53,14, 62,10, 66,17, 69,41,114,97, 115,23, 127,64, 128,99, 129,81, 129,95, 133,31, 135,29, 137,68, 153,50, 168,01, 170,98, 172,83; LCMS: 465; Anal calculado para C25H27N3O5 0,86 H2O: C, 64,58; H, 6,23; N, 9,04; Encontrado: C, 64,77; H, 6,24; N, 8,88.

Se prepararon (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona y (R)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona a partir de 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona a través de separación quiral.

6.2 Ensayos

6.2.1 Producción de citocinas por células T

Las células T se aislaron de la capa leucocitaria por selección negativa usando el cóctel de enriquecimiento de células T RosetteSep®. Por consiguiente, se siguieron los procedimientos del fabricante. Todas las placas de 96 pocillos se recubrieron previamente con 3 mg/ml de anticuerpo anti-CD3 humano en 100 |jl de PBS 1X durante 4 horas a 37 °C. Las placas se lavaron tres veces con medio completo RPMI-1640 antes del ensayo de células T. Las células T se sembraron entonces en placas recubiertas previamente con CD3 a una densidad de 2,5 x 105 células/pocillo en 180 j l de medio completo RPMI-1640. Las células se trataron con 20 j l de compuestos titulados 10X a 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001,0,0001 y 0,00001 |j M. Las concentraciones finales de DMSO fueron del 0,25 %. Las placas se incubaron durante 48 horas a 37 °C, 5 % de CO2. Después de 48 horas, los sobrenadantes se recogieron y se ensayaron por un ensayo de matriz de perlas citométricas multiplex (CBA) para las siguientes citocinas/quimioquinas: IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, IL-15, IL-17a, GM-CSF, G-SCF, If N-y, TNF-a y RANTES. Las placas de CBA se analizaron en el instrumento Luminex IS100. Los datos de cada donante se representaron gráficamente usando el software GraphPad Prism 5.0 y se expresaron como media pg/mL ± EEM y % del control de DMSO ± EEM.

Las concentraciones comparativamente bajas (0,01 nm a 1 nm) del compuesto I aumentaron IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, GM-CSF, IFN-y, TNF-a y RANTES (10 nM) en las células T humanas estimuladas (FIG. 1 y FIG. 2). El aumento de la producción de la mayoría de las citocinas y quimioquinas alcanzó un máximo a 1 a 10 nM de compuesto I y, o bien se mantuvo en ese nivel o disminuyó gradualmente a medida que la concentración aumentó. A 1 nM, el compuesto I aumentó la producción de IL-2, IL-13 y GM-CSF a niveles de 7, 5 y 3 veces los de las células de control, respectivamente. A 10 nM, el compuesto I aumentó la producción de IL-2, IL-13 y GM-CSF a niveles de 22, 6,5, y 6 veces los de las células de control, respectivamente. El compuesto I aumentó la producción de IL-10 aproximadamente 1,5 a 3,5 veces a concentraciones de 0,1 y 1 nM, pero inhibió la producción de IL-10 a > 10 nM. El compuesto I aumentó la producción de IL-5 6 veces sobre la de las células control, pero sólo a una concentración de 1 nM; la producción de IL-5 aumentó < 2 veces a 10 nM. El compuesto I aumentó la producción de RANTES 2 a 3 veces sobre la de las células de control a concentraciones que variaron de 10 nM a 10 j M. El compuesto I aumentó la producción de TNF-a e IFN-y de 2 a 3 veces a concentraciones que variaron de 1 nM a 10 j M.

Las concentraciones bajas del compuesto I-R también aumentaron la producción de citocinas y quimiocinas en las células T humanas estimuladas. Las concentraciones del compuesto I-R tan bajas como 1 nM aumentaron IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, GM-CSF, IFN-y, RANTES, y TNF-a en las células T humanas estimuladas (FIG. 3 y FIG. 4). A una concentración de 10 nM, el compuesto I-R aumentó la producción de IL-2, IL-13 y GM-CSF 15, 7, y 6 veces sobre la de las células de control, respectivamente. Las concentraciones del compuesto I-R de 0,01 a 1 nM aumentaron la producción de IL-10 ~6 veces, pero las concentraciones > 10 nM inhibieron la producción de IL-10. Las concentraciones del compuesto I-R que variaron de 1 a 100 nM aumentaron la producción de IL-5 hasta 2,5 veces la de las células de control, pero el compuesto I-R no demostró el aumento de 6 veces a 1 nM mostrado por el compuesto I-S. Excepto por el patrón de aumento de la producción de IL-5 y, posiblemente, un menor grado de aumento de la producción de IFN-y, el perfil del aumento de citocinas y quimiocinas mostrado por el compuesto I-R se pareció al del compuesto I con respecto a la magnitud del aumento en la producción y el rango de concentración en que se produjo el aumento.

Las concentraciones bajas del compuesto I-S también aumentaron la producción de citocinas y quimiocinas en las células T humanas estimuladas y el perfil de aumento de citocinas y quimiocinas mostrado por el compuesto I-S se pareció al del compuesto I con respecto a la magnitud del aumento en la producción y el rango de concentración en el que se produjo el aumento. Las concentraciones del compuesto I-S tan bajas como 1 nM aumentaron IL-2, IL-3, IL-5, IL-10, IL-13, GM-CSF, IFN-y, RANTES, y TNF-a en las células T humanas estimuladas (FIG. 5 y FIG. 6). A una concentración de 10 nM, el compuesto I-S aumentó la producción de IL-2, IL-13 y GM-CSF 18, 7 y 5 veces la de las células de control, respectivamente. Las concentraciones de 0,1 y 1 nM del compuesto I-S aumentaron la producción de IL-10 ~2 a 3 veces, pero las concentraciones > 10 nM inhibieron la producción de IL-10. Como se observó para el compuesto I, el aumento de la producción de IL-5 por el compuesto I-S alcanzó un máximo a 1 nM. En una realización, el compuesto I-S coestimuló la producción de IL-2 por las células T con una CE50 de aproximadamente 0,29 nM, en comparación con 10 nM para pomalidomida.

6.2.2 Perfiles de citocinas en células mononucleares de sangre periférica humana

Se dividieron en partes alícuotas cincuenta ml de capa leucocitaria humana de 25 ml cada una en dos tubos cónicos de 50 ml y se añadieron 25 ml de HBSS estéril a cada tubo cónico. Los tubos se mezclaron suavemente por inversión. Se dividieron en partes alícuotas quince ml de Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare (ubicación); no. de cat 17-1440-02) a temperatura ambiente en cuatro tubos cónicos de 50 ml. A continuación, se depositaron por capas 25 ml de la mezcla de capa leucocitaria/HBSS suavemente y lentamente sobre la parte superior de Ficoll. Las muestras se centrifugaron a 450 rpm durante 35 minutos. La parte superior de las capas que contenía plasma se retiró por pipeteo y se desechó. La interfaz que contenía células mononucleares se transfirió a dos tubos cónicos de 50 ml. Ambos tubos cónicos se llenaron hasta un volumen total de 50 ml con HBSS y se centrifugaron a 1.200 rpm durante 10 minutos. Las células se lavaron de nuevo en HBSS y se centrifugaron a 1.000 rpm durante 10 minutos. El sedimento de las células se resuspendió con 20 ml de medio completo RPMI (RPMI/5 % de suero humano/1x pen/estrep/glut) y se contó.

Se añadieron cien j l (2x106/ml) de hPBMC a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo plano (recuento de células final = 2x105/pocillo) y se incubaron a 37 °C durante 1 hora. Se añadieron veinte j l (10x) de compuesto a cada pocillo de ensayo y se añadieron veinte j l de medio que contenía 2,5 % de DMSO a cada pocillo de control ([DMSO] final = 0,25 %) y la placa se incubó durante 1 hora a 37 °C. Las células se estimularon entonces con 80 j l de 2,5 ng/ml de LPS ([LPS] final = 1 ng/ml) y se incubaron durante 18 horas a 37 °C. Se transfirieron cincuenta j l de sobrenadante de cada pocillo a 3 nuevas placas de 96 pocillos de fondo redondo y se almacenaron a -20 °C para el análisis de Luminex. Se realizaron pocillos en duplicado para cada muestra.

Las muestras de sobrenadante se analizaron para determinar las citocinas en formato multiplex de acuerdo con las Instrucciones del fabricante (Millipore, Billerica, Ma 01821) usando un instrumento Luminex IS 100. Los análisis de IL-12 y GM-CSF se hicieron en un formato dúplex usando sobrenadantes limpios mientras que todas las demás citocinas se hicieron en un formato multiplex usando sobrenadantes diluidos 1:20. El análisis de los datos se realizó usando el software Upstate Beadview. Las CI50 se calcularon usando regresión no lineal, respuesta a la dosis sigmoidea, restringiendo la parte superior al 100 % y la inferior al 0 %), lo que permitió una pendiente variable. Las CE50 se basaron en la restricción superior de las curvas sigmoideas que equivale al 246,9 %, que representa el aumento promedio de IL-10 producido por polalidomida (control) a 10 pM y la restricción inferior al 100 %. La CI50 se realizó usando GraphPad Prism v5.00. Los valores de los datos representan la media EEM (error estándar de la media) de n (número de experimentos por duplicado).

El compuesto I inhibió la producción de (en orden de potencia) IL-1 p (CI50 = 0,00085 pM) > TNF-a (CI50 = 0,0018) > MDC (CI50 = 0,0026 pM) > GM-CSF (CI50 = 0,0092 pM) > IL-6 (CI50 = 0,01 pM) > MIP-1a (CI50 = 0,19 pM) > IL-8 (CI50 > 10 pM). El compuesto I tuvo poco efecto sobre la producción de MIP 1p con un valor de CI50 > 10 pM (FIG. 7A y Tabla 1). El compuesto I aumentó la producción de IL-10, MCP-1, y RANTES con un porcentaje medio de los valores de control del 372 %, 208 % y 153 %, respectivamente, a la concentración de 0,1 pM (Figura 7b y Tabla 2).

El compuesto I-R inhibió la producción de (en orden de potencia) IL-1 p (CI50 = 0,0062 pM) > TNF-a (CI50 = 0,0095 pM) > MDC (CI50 = 0,012 pM) > GM-CSF (CI50 = 0,039 pM) > IL-6 (CI50 = 0,083 pM) > MIP-1a (CI50 = 0,045 pM) > MIP-1 p (CI50 > 10 pM). El compuesto I-R también mostró un efecto inhibidor moderado sobre la producción de IL-8 con un valor de CI50 > 10 pM (Figura 8A y Tabla 1). El compuesto I-R aumentó la producción de IL-10, MCP-1 y RANTES con porcentaje medio de los valores de control del 442 %, 223 % y 151 %, respectivamente, a la concentración de 0,1 pM (Figura 8B y Tabla 2).

El compuesto I-S inhibió la producción de (en orden de potencia) IL-lp (CI50 = 0,00046 pM) > TNF-a (CI50 = 0,00059 pM) > MDC (CI50 = 0,0021 pM) > GM-CSF (CI50 = 0,0022 pM) > IL-6 (CI50 = 0,0038 pM) > MIP-1a (CI50 = 0,028 pM > MIP-1 p (CI50 > 10 pM). El compuesto I-S también mostró un efecto inhibidor moderado sobre la producción de IL-8 con un valor de CI50 > 10 pM (Figura 9A y Tabla 1). El compuesto I-S aumentó la producción de IL-10, MCP-1 y RANTES con porcentaje medio de los valores de control del 379 %, 233 % y 153 %, respectivamente, a la concentración de 0,1 pM (Figura 9B y Tabla 2).

Tabla 1. Resumen del perfil inhibidor de citocinas de los compuestos de prueba

Tabla 2. Resumen del perfil de citocinas de los compuestos de prueba

6.2.3 Producción de IFN-y de células NK y citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC)

Las células NK de donantes sanos se aislaron de sangre de capa leucocitaria por selección negativa usando el cóctel de enriquecimiento de células NK RosetteSep (Stem Cell Technologies, Vancouver, BC) antes de centrifugación en gradiente de densidad de Ficoll-Hypaque (Fisher Scientific Co LLC, PA), siguiendo las instrucciones de los fabricantes. Las células NK CD56+ se aislaron hasta ~85 % de pureza, según se determina por citometría de flujo (BD Biosciences, CA).

Ensayo de interferón-gamma (IFN-y) inducido por IgG NK: se recubrieron placas de fondo plano de noventa y seis pocillos con 100 pg/mL de IgG humana (Sigma) durante la noche a 4 °C. Al día siguiente, se eliminó por lavado la IgG no unida con PBS frío 1X. Las células NK se sembraron entonces en las placas de 96 pocillos recubiertas con IgG a 2 x 105 células por pocillo en 180 pl de medio RPMI-1640 y se añadieron 10 ng/mL de rhIL-2 (R & D Systems, MN). Los compuestos de prueba se añadieron en un volumen de 20 pL de DMSO. Las concentraciones finales de los compuestos de prueba fueron 0,0001, 0,001, 0,01, 0,1, 1 o 10 pM. Las concentraciones finales de DMSO fueron del 0,25 %. Después de 48 horas, los sobrenadantes se recogieron y se analizaron por ELISA para determinar la producción de IFN-y.

Los datos usados para determinar los compuestos de prueba para aumentar la producción de IFN-y de células NK en respuesta a IgG inmovilizada y la estimulación de rhIL-2 se analizó para cada donante usando el software GraphPad Prism v5.0. Los datos se presentan en dos formas, (1) como la cantidad absoluta si IFN-y producida (pg/mL ± EEM) y (2) como el porcentaje de la cantidad de IFN-y producida en presencia de pomalidomida 1 pM. La CE50 es la concentración de compuesto de prueba que proporciona la producción mitad de la máxima de IFN-y, con una producción máxima definida como la cantidad de IFN-y producida en presencia de pomalidomida 1 pM. Los valores de CE50 se calcularon usando una regresión no lineal, respuesta a la dosis sigmoidea restringiendo la parte superior al 100 % y la inferior al 0 % lo que permite una pendiente variable.

Ensayo de ADCC: las células NK purificadas (5 x 104) se sembraron en placas de fondo en U de 96 pocillos en 100 pL de medio RPMI-1640 sin fenol (Invitrogen) suero humano AB+ al 2 % (Gemini Bio Products, CA) y se trataron con 10 ng/ml de rhIL-2 y rituximab (5 pg/mL) más diferentes concentraciones de compuestos de prueba a 0,01 a 10 pM durante 48 horas. Se trataron diversas líneas celulares de linfoma (GCB-DLBCL: WSU-DLCL2 y Farage; linfoma folicular: DoHH2; ABC-DLBCL: Riva; linfoma de Burkitt [BL]: Raji) con 5 mg/mL de rituximab durante 30 minutos a 37 °C. El rituximab no unido se eliminó por lavado, las células diana (5 x 103/100 pL/pocillo) se añadieron a las células efectoras (células NK) pretratadas en una relación de 10:1, y las dos se coincubaron durante 4 horas a 37 °C. Las condiciones de control consistieron en células NK más células tumorales tratadas con (1) medio solo, (2) sólo rituximab, o (3) IL-2 sola. Usando una parte alícuota de sobrenadante (50 pL), se analizó la citotoxicidad de las células NK contra las células tumorales usando un ensayo estándar de liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) para medir ADCC (ensayo de citotoxicidad no radioactivo CytoTox 96, Promega, WI). La liberación espontánea por las células diana solas fue < 15 % de la liberación máxima, tal como se determina con las células diana lisadas en Triton X-100 al 1 %. La liberación experimental se corrigió por sustracción de la liberación espontánea de las células efectoras a la dilución correspondiente. El porcentaje de lisis específica se calculó de acuerdo con la fórmula: Porcentaje de lisis específica = 100 x (experimental - espontáneo del efector - espontáneo de la diana) / (máximo de la dianaespontáneo de la diana).

La lisis específica mediada por las células NK se calculó con la siguiente fórmula: Porcentaje de lisis específica = [(liberación experimental - liberación espontánea) / (liberación máxima - liberación espontánea)] x 100. Los resultados se analizaron usando el software GraphPad Prism v5.0. Los datos se presentan como el porcentaje de citotoxicidad relativo a las células tratadas con DMSO.

La capacidad de los compuestos I, I-R y I-S para aumentar la inducción mediada por IgG de la producción de IFN-y de células NK se determinó en paralelo. Un total de 7 donantes de células NK se incluyó en este experimento y los resultados se muestran en la FIG. 10 (expresados como pg/ml de IFN-y producido) y la FIG. 11 (expresados como un porcentaje de aumento de IFN-y producido en relación con el IFN-y producido en presencia de pomalidomida a 1 pM). Todos los compuestos aumentan la producción de IFN-y de células NK de una manera dependiente de la dosis en respuesta a IgG inmovilizada y estimulación con IL-2. El compuesto I indujo la producción de IFN-y en un patrón similar al de la pomalidomida. Los compuestos I-S e I-R fueron ligeramente más activos que el compuesto I.

Las actividades inmunomoduladoras de los compuestos I, I-R e I-S en el aumento de la ADCC mediada por rituximab contra varias líneas celulares de linfoma se determinaron en paralelo en cada línea celular. Se incluyó un total de 15 donantes de células NK (tres donantes de células NK por cada línea celular) y los resultados (FIG. 12) mostraron que todos los compuestos indujeron ADCC mediada por células NK dependiente de la dosis en todas las líneas celulares. En las líneas celulares GCB-DLBCL (WSU-DLCL2 y Farage), la actividad mostrada por el compuesto I es comparable con la mostrada por pomalidomida. La actividad máxima del compuesto I fue a 0,1 pM en WSU-DLCL2, pero fue 1 pM en células Farage. El compuesto I-R fue menos activo que el compuesto I-S en las células WSU-DLCL2. En la línea celular de linfoma folicular (DoHH2), el compuesto I fue menos activo que los compuestos I-S e I-R. En la línea celular ABC-DLBCL (Riva), el compuesto I fue menos activo que los compuestos I-S e I-R. El compuesto I-R fue menos activo que el compuesto I-S. En la línea celular BL (Raji), el compuesto I fue más activo que los compuestos I-S e I-R. La actividad máxima del compuesto I fue a 0,1 pM. El compuesto I-R fue más activo que el compuesto I-S en las células Raji. La actividad máxima del compuesto I fue a 0,1 pM en las líneas de células WSU-DLCL2 y Raji, pero a 1 pM en otras líneas celulares. En general, el compuesto I fue más activo que los compuestos I-S e I-R en todas las líneas celulares ensayadas, excepto en las células Riva. El compuesto I-R fue menos activo que el compuesto I-S en las células WSU-DLCL2 y Riva, pero no en otras líneas celulares.

6.2.4 Ensayos de proliferación de células endoteliales vasculares humanas, formación del tubo, migración e invasión

Ensayo de proliferación de células endoteliales vasculares umbilicales humanas: las células endoteliales vasculares umbilicales humanas se descongelaron y se crecieron en medio EGM2 hasta el subcultivo 3 a 6 para todos los ensayos de proliferación. Las células endoteliales vasculares umbilicales humanas se tripsinizaron, se lavaron con medio FBS al 20 %/M199 y se sembraron en placas con el mismo medio a 104 células/100 pL por pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos. Las placas se incubaron durante la noche a 37 °C para permitir que las células se adhirieran. Las células se dejaron sin alimento entonces en medio FBS al 1 %/M199 durante 18 horas después de lavar con el mismo medio 3 veces. Para la optimización de la concentración de los factores de crecimiento en el ensayo de proliferación de HUVEC, se añadieron 100 pL/pocillos de los factores de crecimiento diluidos 2X en serie, empezando a 100 ng/mL, a HUVEC por duplicado durante 72 horas a 37 °C en una incubadora de cultivo celular humidificada con 5 % de CO2. Para el análisis de los compuestos de prueba, se preparó una dilución seriada de los compuestos de prueba en medio DMSO al 0,4 %/FBS al 1 % /M199 por duplicado a partir de la preparación madre 10 mM. Se añadieron cincuenta microlitros por pocillo de los compuestos de prueba diluidos en serie (10, 1,0, 0,1, 0,01, 0,001, 0,0001,0,00001 pM) a las células durante 1 a 2 horas a 37 °C. La concentración final de DMSO en las células es del 0,1 %. Entonces, se añadieron 50 pl de concentración final 4X de factores de crecimiento relativos a cada pocillo por duplicado durante 72 horas a 37 °C en una incubadora de cultivo celular humidificada con 5 % de CO2. La incorporación de timidina se midió mediante la adición de un microcurio de 3H-timidina (Amersham) en 20 pL de medio a cada pocillo y se incubó a 37 °C en una incubadora de cultivo celular humidificada con 5 % de CO2 durante 5 a 6 horas. Después, las células se tripsinizaron y se recogieron sobre placas de filtro UniFilter GF/C (Perkin Elmer) usando el recolector de células (Tomtec). Después de que las placas se secaron al aire, se añadieron 20 pL/pocillo de Microscint 20 (Packard), las placas se analizaron entonces en TopCount NXT (Packard). Cada pocillo se contó durante un minuto. Los experimentos se realizaron por duplicado en cada uno de 3 donantes.

Ensayo de formación de tubo de células endoteliales vasculares umbilicales humanas: los compuestos se ensayaron en el ensayo de formación de tubos de HUVEC inducida por factores de crecimiento. Las placas de formación de tubos se incubaron a 37 °C durante 30 minutos para que el matrigel polimerizara. Las HUVEC se privaron de alimento en medio EBM2 basal con BSA al 0,1 % durante 5 horas después de lavar con el mismo medio 3 veces. Las células se tripsinizaron y se centrifugaron. Después, se añadieron 25 pL de compuestos diluidos en serie 4X (10, 1,0,1, 0,01, 0,001, 0,0001, 0,00001 pM) por duplicado con 50 pL de 2 x 104 células/pocillo a las placas de formación de tubos recubiertas con matrigel. Se añadieron cincuenta pL de VEGF 4X (concentración final = 25 ng/ml) o bFGF (concentración final = 10 ng/ml) a las placas. Las células se incubaron entonces durante la noche (~ 18 horas) a 37 °C en una incubadora humidificada. Las redes tubulares se tiñeron con calceína AM a 4 pg/pL en FBS al 2 %/HBSS durante 30 minutos y se tomaron imágenes por microscopía de fluorescencia. Los túbulos se cuantificaron por el programa de software de formación de tubos MetaMorph para determinar el área de los tubos y la longitud de los tubos.

Ensayo de invasión de células endoteliales vasculares umbilicales humanas: en el ensayo de invasión de HUVEC, la concentración de fibronectina humana se optimiza para proporcionar una estructura de proteína adecuada para que las células adherentes se unan a la membrana y permitir la migración libre en respuesta a un estímulo angiogénico (p. ej., VEGF, bFGF o HGF) en la cámara inferior de la placa de inserción. Las HUVEC se privaron de alimento en medio EBM2 con BSA al 0,1 % durante 6 horas después de lavar con el mismo medio 3 veces. Las células se tripsinizaron entonces y se centrifugaron para eliminar la tripsina remanente. A continuación, se añadieron ~0,5-1 x 106 células en 125 pL/pocillo y 125 pL de compuestos diluidos en serie 8X (10, 1, 0,1, 0,01, 0,001 pM) a la cámara superior de las placas de inserto de 24 pocillos y de 96 pocillos BD Falcon por duplicado y se incubaron durante ~1 a 2 horas. (Las placas contienen un bloqueo de fluorescencia, membrana de PET microporosa [tamaño de poro 3,0 pm] que ha sido recubierta uniformemente con fibronectina humana). Se añadieron entonces setecientos cincuenta microlitros de una preparación madre 1,33 X de VEGF (concentración final de 25 ng/ml), bFGF (concentración final de 10 ng/ml), o HGF (concentración final de 25 ng/ml) a la cámara inferior. Las células se incubaron durante 22 ± 1 horas a 37 °C. Las células migradas se tiñeron con calceína AM a 4 pg/ml en HBSS que contenía FBS al 2 %, usando 500 pL/pocillo en placas de 24 pocillos y 200 pL/pocillo en placas de 96 pocillos. Las placas se incubaron a 37 °C durante 90 minutos y se leyeron en un lector de placas de fluorescencia.

El porcentaje de inhibición de la proliferación celular, formación del tubo, migración e invasión se calculó restando el resultado del control de DMSO no estimulado de los resultados de la muestra de prueba, promediando todas las repeticiones, y normalizando respecto al control de DMSO estimulado por factor de crecimiento (0 % de inhibición). Los valores de CI50 se calcularon usando GraphPad Prism 5.0.

Resultados del ensayo de proliferación de células endoteliales vasculares umbilicales humanas: los resultados del estudio de optimización del factor de crecimiento indicaron que las concentraciones óptimas de VEGF, bFGF y HGF para la inducción de la proliferación eran 25, 10 y 25 ng/mL, respectivamente. Los compuestos de prueba se examinaron con concentraciones de factores de crecimiento optimizadas y los resultados indicaron que los compuestos I, I-R e I-S no inhiben la proliferación de HUVEC inducida por VEGF, bFGF o HGF (FIG. 13). Sin embargo, hubo un aumento significativo de la proliferación observada en las HUVEC tratadas con VEGF y HGF por el compuesto I-S (tratadas con VEGF: 1-10 pM; tratadas con HGF: 0,1-1 pM). También hubo un aumento significativo observado en las HUVEC tratadas con bFGF por el compuesto I (0.01-1 pM), y el compuesto I-R (0,1-1 pM). Los valores de CI50 se resumen en la Tabla 3.

Tabla 3. Resumen de valores de CI50 de los estudios de proliferación de células endoteliales vasculares umbilicales humanas inducida por factores de crecimiento

Resultados del ensayo de formación de tubo de células endoteliales vasculares umbilicales humanas: los compuestos I, I-R e I-S mostraron una tendencia hacia la inhibición de la formación del tubo de HUVEC inducida por VEGF en términos tanto de la longitud del tubo como del área del tubo (FIG. 14). Todos los compuestos demostraron un efecto dependiente de la dosis en la formación de tubos de HUVEC inducida por VEGF. El compuesto I-R mostró una inhibición significativa (p < 0,05 frente al control de DMSO estimulado) del área y longitud del tubo a 10 pM. También hubo una tendencia para los compuestos de inhibir la formación del tubo de HUVEC inducida por bFGF tanto en términos tanto de la longitud del tubo como del área del tubo (FIG. 14), aunque el efecto fue menos pronunciado que los efectos sobre la formación de tubos de HUVEC inducida por VEGF.

Resultados del ensayo de invasión de células endoteliales vasculares umbilicales humanas: los compuestos I, I-R e I-S inhiben significativamente la invasión de HUVEC inducida por VEGF, bFGF y HGF de una manera dependiente de la dosis (FIG. 15). Los compuestos fueron más potentes contra la invasión de HUVEC inducida por VEGF y bFGF que contra la invasión de HUVEC inducida por HGF (Tabla 4). El valor de CI50 fue < 0,3 nM para la inhibición de la invasión de HUVEC inducida por VEGF por los compuestos I, I-R e I-S. La CI50 del compuesto I (0,4 nM) y el compuesto I-S (< 0,1 nM) fueron más de diez veces más potentes que el compuesto I-R (13 nM) (Tabla 4).

Tabla 4. Resumen del efecto de los compuestos de prueba sobre la invasión de células endoteliales vasculares umbilicales humanas inducida por factores de crecimiento

6.2.5 Ensayos de ciclo celular, apoptosis y antiproliferación

Análisis del ciclo celular: las células se trataron con DMSO o una cantidad de un compuesto proporcionado en la presente memoria durante 48 horas. La tinción con yoduro de propidio para el ciclo celular se realizó usando CycleTEST PLUS (Becton Dickinson) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Después de la tinción, las células se analizaron con un citómetro de flujo FACSCalibur usando el software ModFit LT (Becton Dickinson).

Análisis de apoptosis: las células se trataron con DMSO o una cantidad de un compuesto proporcionado en la presente memoria en varios puntos de tiempo, después se lavaron con tampón de pH de lavado con anexina-V (BD Biosciences). Las células se incubaron con proteína de unión a anexina-V y yoduro de propidio (BD Biosciences) durante 10 minutos. Las muestras se analizaron usando citometría de flujo.

El compuesto I indujo la apoptosis y la disminución concomitante en el número de células en la línea celular DoHH2. El compuesto I se combinó en forma aditiva con Rituxan para inducir la apoptosis y reducir el número de células vivas en la línea celular DoHH2.

El compuesto I-S indujo la parada en G1 en las líneas celulares DoHH2 y WSU-DLCL2. El compuesto I-S y Rituxan se ensayaron en el ensayo de incorporación de 3H-timidina de 3 días. El compuesto I-S mostró actividades antiproliferativas fuertes, con una CI50 de 0,027 pM en células Rec-1 MCL, una CI50 de 0,04 pM en células DoHH2 FL, y una CI50 de 0,28 pM en células Farage DLBCL. Los datos indicaron que el compuesto I-S se combinó con Rituxan de forma sinérgica en las células DoHH2 FL según lo calculado por el método de producto fraccionado; el compuesto I-S se combinó con Rituxan de forma aditiva a sinérgica en las células Farage DLBCL según lo calculado por el método de producto fraccionado; y el compuesto I-S se combinó con Rituxan de forma aditiva en las células Rec-1 MCL según lo calculado por el método de producto fraccionado (FIG. 16).

6.2.6 Ensayo de incorporación de timidina en células de DLBCL in vitro

Un panel de líneas celulares de DLBCL de diversas características citogenéticas se ensayó para determinar su sensibilidad a la actividad antiproliferativa de los compuestos I e I-S (FIG. 17). Las células se trataron con el compuesto de prueba durante 5 días a 37 °C; la proliferación de las células se determinó usando el método de incorporación de 3H-timidina. Ambos compuestos, empezando a partir de 0,1-1 pM, inhibieron significativamente la proliferación de varias líneas de células de DLBCL, en particular las células del subtipo ABC tales como las células Riva, U2932, TMD8, OCI-Ly3 y OCI-Ly10. Las células del subtipo ABC parecen ser más sensibles al efecto antiproliferativo que las células de otros subtipos, incluyendo las células GCB-DLBCL y PMBL. Los valores de CI50 del compuesto I-S se resumen en la Tabla 5.

Tabla 5. actividades antiproliferativas del compuesto I-S en ensayos secundarios

6.2.7 Líneas celulares resistentes a Revlimid

Las líneas celulares resistentes a Revlimid se prepararon como sigue: las células NCI-H929 se mantuvieron en cultivo con Revlimid 1 pM durante 2 meses, después se aumentó a Revlimid 10 pM (entradas RL-10, R2-10, R3-10, y R4-10) durante otros 3,5 meses.

Las líneas celulares resistentes o sensibles a Revlimid se trataron con los compuestos de prueba durante 5 días, y después se evaluaron la proliferación y la viabilidad de las células por tinción con 7-aminoactinomicina D (7-AAD). Las actividades del compuesto I-S frente a las líneas celulares resistentes a Revlimid se resumen en la Tabla 6. Los datos indiciaron que el compuesto I-S fue activo frente a las líneas celulares resistentes a Revlimid. En una realización, se observó una disminución del 50 % en el ciclo celular (fase S) después de 24 horas de tratamiento de las células H929 con el compuesto I-S. En otra realización, a las 48 horas, el compuesto I-S disminuyó la expresión de survivina y la proteína retinoblastoma (pRb) y aumentó la expresión del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina p27.

Tabla 6. Actividades del compuesto I-S frente a líneas celulares resistentes a Revlimid

6.2.8 Ensayo de formación de colonias de megacariocitos

El ensayo de formación de colonias se llevó a cabo con médulas óseas humanas normales tratadas en una matriz de colágeno semisólido con compuesto/IL-3/IL-6/Tpo durante 14-16 días, y los resultados se resumen en la Tabla 7. Los datos indicaron que el compuesto I-S inhibió las células progenitoras de megacariocitos.

Tabla 7. Inhibición observada en el ensayo de formación de colonias de megacariocitos

6.2.9 Efecto inhibidor sobre la actividad de NFkB en las células de DLBCL

Las células de DLBCL se trataron con compuesto de prueba o un inhibidor dual de IKK1/2 (usado como un control inhibidor positivo) durante 2 días. La actividad de NFkB se examinó con el ensayo de factor de transcripción de resto activo usando extractos nucleares de células después del tratamiento. El compuesto racémico de la Fórmula I inhibe significativamente la actividad de NFkBp65 y p50 a concentraciones de 1 |jM y 10 |jM. Se encontró que el compuesto racémico de la Fórmula I inhibe la actividad de NFkB en algunas líneas de DLBCL del subtipo ABC, tales como las células TMD8 y OCI-Ly10. Estos resultados sugieren que un efecto sobre la transducción de la señal de NFkB podría estar implicado en la actividad antiproliferativa del compuesto de la Fórmula I contra las células ABC-DLBCL, y que la actividad de NFkB de la línea base puede ser un biomarcador predictivo de la respuesta del tumor de linfoma a la terapia con el compuesto.

6.2.10 Ensayos adicionales de inhibición de la angiogénesis

Los compuestos I, I-R e I-S se ensayaron en varios ensayos de inhibición de la angiogénesis. El compuesto I-S tuvo una CI50 de 52 nM en el ensayo de la arteria umbilical humana, y fue aproximadamente 25 veces más potente que Revlimid y aproximadamente 6 veces más potente que pomalidomida. Los compuestos I, I-R e I-S mostraron una actividad antiangiogénica modesta en el ensayo de aorta de rata.

6.3 Modelo de angiogénesis en Matrigel en ratón

Un modelo de angiogénesis en matrigel en ratón se llevó a cabo de la siguiente manera: se insertaron tapones de Matrigel con rhVEGF, rhbFGF y heparina en ratones C57B/6 durante 10 días con tratamiento con fármacos. Se analizaron los tapones para determinar ms CD31 por IHC. El compuesto I a 3 y 30 mpk inhibe significativamente el crecimiento de los vasos sanguíneos (FIG. 18).

6.4 Modelos de xenoinjerto en ratón in vivo

6.4.1 Modelos de linfoma

El compuesto I se ensayó en el modelo de xenoinjerto de WSU-DLCL2 DLBCL como agente único y en combinación con Rituxan (FIG. 19). El compuesto I, como agente único a 3 y 30 mg/kg, mostró una inhibición del crecimiento del tumor similar a la de Revlimid a 30 mg/kg. Cuando el compuesto I se administró en combinación con Rituxan, se observó una regresión completa (el volumen del tumor < 25 mm3) en todos los grupos de tratamiento de combinación ensayados (FIG. 19 y Tabla 8).

Tabla 8. Eficacia del compuesto I en combinación con Rituxan en el modelo de xenoinjerto de WSU-DLCL2 DLBCL

El compuesto I-S se ensayó en el modelo de xenoinjerto de linfoma folicular DoHH2, y los resultados se resumen en la Tabla 9. Los datos indicaron que el compuesto I-S a 2 y 40 mg/kg inhibe significativamente el crecimiento del tumor en un estudio de monoterapia (FIG. 20). Los datos también indicaron que el compuesto I-S a 3 mg/kg en combinación con Rituxan inhibió significativamente el crecimiento del tumor frente a la monoterapia y fue más eficaz que Revlimid a 30 mg/kg en combinación con Rituxan en la inhibición del crecimiento tumoral (FIG. 21). Los datos de IHC de CD31 se representan en la FIG. 22.

Tabla 9. Actividades del compuesto I-S en el modelo de xenoinjerto de linfoma folicular DoHH2

a91 % de enantiómero S, 9 % de enantiómero R

b84 % de enantiómero S, 16 % de enantiómero R

El compuesto I se ensayó en el modelo de xenoinjerto de linfoma de células del manto Rec-1, y los resultados se representan en la FIG. 23.

6.4.2 Modelos de mieloma múltiple

Los compuestos I, I-R, e I-S se ensayaron en el modelo de xenoinjerto de mieloma múltiple NCI-H929, y los resultados se representan en la FIG. 24. Los datos indicaron que los compuestos I e I-S inhibieron significativamente el crecimiento del tumor H929 de una manera dependiente de la dosis y fueron comparables entre sí. El día 19, el compuesto I-S mostró una inhibición del crecimiento tumoral del 87 % a 30 mg/kg, inhibición del crecimiento tumoral del 67 % a 3 mg/kg, e inhibición del crecimiento tumoral del 34 % a 0.3 mg/kg.

6.4.3 Modelos de glioblastoma

Los compuestos I, I-R, e I-S se ensayaron en el modelo de xenoinjerto de glioblastoma U87, y los resultados se representan en la FIG. 25. Los datos indicaron que los compuestos I e I-S inhibieron significativamente el crecimiento del tumor U87 a 30 mg/kg una vez al día. En un estudio, el compuesto I a 30 mg/kg mostró > 80 % de inhibición del crecimiento tumoral el día 48, y el compuesto I-S a 30 mg/kg mostró aproximadamente un 60 % de inhibición del crecimiento del tumor el día 48. En otro estudio, en el compuesto I-S a 15 mg/kg mostró aproximadamente un 47 % de inhibición del crecimiento del tumor el día 43. No se observó ningún cambio significativo en el peso corporal para ninguno de los compuestos ensayados.

6.4.4 Modelos colorrectales

Los compuestos I, I-R e I-S se ensayaron en el modelo de xenoinjerto colorrecta1HCT116, y los resultados se representan en la FIG. 26.

6.4.5 Modelos hepatocelulares

Los compuestos I, I-R e I-S se ensayaron en el modelo de xenoinjerto hepatocelular Hep3b, y los resultados se representan en la FIG. 27.

6.5 Farmacocinética

La farmacocinética del compuesto I-S en rata y mono se resume en la Tabla 10.

Tabla 10. Farmacocinética del compuesto I-S en rata y mono

*67 % de enantiómero S, 33 % de enantiómero R

**>99,5 % de enantiómero S, <0,5 % de enantiómero R

6.6 Modelos de cereblon

6.6.1 Ensayo de ubiquitinación de CRBN

La ubiquitinación de CRBN se midió en células HEK293T que fueron transfectadas con una construcción de CRBN etiquetada con His-biotina amino-terminal, después se preincubaron con los compuestos de prueba durante una hora, seguido de tratamiento con un inhibidor del proteosoma (para detener la degradación de las proteínas ubiquitinadas). Las células se lisaron y se procesaron para medir la ubiquitinación de CRBN por SDS-PAGE y análisis de inmunotransferencia usando un anticuerpo antiubiquitina.

En una realización, el compuesto I-S se ensayó en el ensayo de ubiquitinación de Cereblon (CRBN) usando procedimientos descritos anteriormente y mostró un valor de CI50 de 0,19 pM, mientras que los valores de CI50 son 12,9 pM para lenalidomida y 21,6 pM para pomalidomida. En otra realización, el compuesto I-S inhibió la autoubiquitinación de la proteína CRBN (CI50 = 0,5 pM), pero no de la proteína mutante CRBN-YW/AA.

6.6.2 Ensayo de competición en perlas de afinidad de talidomida

Se sembraron células de mieloma humano U266 a 0,5 x 106 células/mL, se crecieron hasta la fase logarítmica hasta 1,5 x 106 células/mL, en matraces Erlenmeyer de 2 L con matraces de agitación con tapones de ventilación, las células se recogieron por centrifugación, se contaron y se lavaron en PBS antes de congelar el sedimento de células en nitrógeno líquido. Los sedimentos de células U266 se descongelaron a temperatura ambiente en tampón de lisis NP-40 (NP40 al 0,5 %, Tris HCl 50 mM (pH 8,0), NaCl 150 mM, DTT 0,5 mM, PMSF 0,25 mM, mezcla de inhibidor de proteasas 1x (Roche, Indianapolis, IN) a aproximadamente 1-2 x 108 células por ml (10-20 mg de proteína/ml). Los residuos celulares y los ácidos nucleicos se eliminaron por centrifugación (14.000 rpm, 30 min, 4 °C). El sobrenadante resultante se almacenó en hielo antes de su uso en el ensayo de unión de perlas de afinidad a análogo de talidomida como el extracto U266 que contenía CRBN.

Las perlas acopladas a análogo de talidomida se prepararon usando perlas de afinidad FG, de Tamagawa Seiko Co, Japón, de acuerdo con los métodos descritos en Ito et al., “Identification of a primary target of thalidomide teratogenicity,” Science 327: 1345-1350, 2010, y se almacenaron a 4 °C un máximo de 4 semanas antes de su uso en los ensayos.

En los experimentos de competición, se preincubaron partes alícuotas de 0,5 ml (3-5 mg de proteína) del extracto de lisado de U266 (15 min a temperatura ambiente) con 5 pl de DMSO (control) o 5 pl de compuesto a concentraciones variables en DMSO. Las perlas acopladas a análogo de talidomida (0,3-0,5 mg) se añadieron a extractos de proteína y las muestras se rotaron (2 horas, 4 °C). Las perlas se lavaron tres veces con 0,5 ml de tampón NP40 y las proteínas unidas se eluyeron entonces con tampón de muestra de SDS-PAGE. Las muestras se sometieron a SDS-PAGE y análisis de inmunotransferencia realizado usando anti-CRBN 65-76 (dilución de 1:10.000) y anti-DDB1 (dilución de 1:2.000). En los ensayos de competición de perlas de afinidad de talidomida, se usó un sistema LI-COR Odessey para cuantificar la densidad de la banda de CRBN y las cantidades relativas de CRBN se determinaron promediando por lo menos tres controles de DMSO y expresando CRBN en cada muestra de competición como el porcentaje de la inhibición de proteína CRBN en relación con los controles promediados como 100 % de unión.

Se prepararon preparaciones madre de compuesto sólido (30 mM) en DMSO 1 hora antes de su uso y se prepararon diluciones en serie en DMSO inmediatamente antes de la adición a los extractos. La dilución de la preparación madre inicial 30 mM fue de 1:3 para una disolución 10 mM (o disolución 10 uM en el ensayo final), seguido de las diluciones en serie de 1:10.

Las células U266 se crecieron hasta la fase logarítmica en matraces de agitación, las células se recogieron por centrifugación, se contaron y se lavaron en PBS antes de congelar el sedimento en nitrógeno líquido.

Los datos de dos experimentos independientes con muestras de cada experimento se sometieron a dos inmunotransferencias independientes y el cálculo de densidad de la señal de CRBN en relación con la densidad de control se representó gráficamente usando un análisis de regresión no lineal PrismGraph establecido a logaritmo de inhibidor frente a respuesta con una pendiente variable. El programa PrismGraph calculó la EEM para cada punto de la concentración del compuesto.

El compuesto I-S se ensayó en un ensayo de competición en perlas de afinidad a talidomida usando procedimientos como se describió anteriormente y el resultado se representa en la FIG. 28. Los datos indicaron que el compuesto I-S se une a CRBN endógeno humano. En una realización, el compuesto I-S a una concentración de 0,1 pM dio como resultado aproximadamente un 50 % menos de CRBN unido a las perlas de afinidad, mientras que la pomalidomida a una concentración de 3 pM dio como resultado aproximadamente 50 % menos de CRBN unido a las perlas de afinidad.

6.6.3 Toma como diana de Cereblon para discrasias de células B

Se perfiló el efecto de (S)-3-(4-((4-morflinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona (“Compuesto I-S”) sobre la unión de CRBN, ubiquitinación y proliferación celular. El CRBN es un componente del complejo de ubiquitina ligasa E3 que incluye CUL4A, DDB1 y ROC-1 y se encontró que era la diana de unión molecular de la talidomida, lenalidomida y pomalidomida.

Se llevaron a cabo estudios de unión a CRBN usando perlas conjugadas con el compuesto de prueba en un ensayo de competición. Se midió el CRBN endógeno de células de mieloma múltiple (MM) humano U266 mediante la incubación de extractos de células con concentraciones variables de compuesto I-S o bien pomalidomida como control positivo. Las perlas de afinidad acopladas a un análogo ácido de talidomida se incubaron con los extractos de U266 y, después de un lavado extensivo de las perlas, se eluyeron las proteínas unidas. La unión de CRBN a las perlas de afinidad acopladas a talidomida se determinó mediante la determinación cuantitativa de CRBN inmunotransferencia.

La ubiquitinación de CRBN se midió en células HEK293T, que fueron transfectadas con una construcción de CRBN etiquetada con His-biotina amino-terminal, después se preincubaron con los compuestos durante una hora seguido por tratamiento con el inhibidor del proteosoma MG132 (para detener la degradación de las proteínas ubiquitinadas). Las células se lisaron y se procesaron para medir la ubiquitinación de CRBN por análisis por SDS-PAGE e inmunotransferencia usando un anticuerpo antiubiquitina. Se realizaron estudios de proliferación celular en células de mieloma múltiple refractarias y sensibles a lenalidomida. Las líneas celulares de MM H929 resistentes o sensibles a lenalidomida se trataron con el compuesto I-S durante 5 días, y después se evaluaron la proliferación y la viabilidad celular por tinción con 7-aminoactinomicina D (“7-ADD”). La coestimulación de células T se midió en las células T humanas primarias purificadas estimuladas usando el anticuerpo anti-CD3 inmovilizado en cultivo celular durante 2 días, y la secreción de citocinas se midió por ELISA.

La producción de inmunoglobulina M y G (“IgG e IgM”) se midió a partir de células mononucleares de sangre periférica de donante normal mediante el cultivo en presencia de los factores de diferenciación de células B IL-2 humano recombinante (20 U/mL), IL-10 (50 ng/mL), IL-15 (10 ng/mL), ligando de CD40 etiquetado con His (50 ng/mL), anticuerpo IgG 1 de ratón con poliHistidina (5 pg/mL), y ligando de TLR9 humano ODN 2006 (10 pg/mL) durante 4 días, seguido de IL-2, IL-10, IL-15 e IL-6 (50 ng/mL) durante 3 días adicionales. La IgM e IgG se midieron por ELISA.

En los estudios de unión de CRBN competitivos, la preincubación con pomalidomida a una concentración de 3 uM dio como resultado aproximadamente un 50 % menos de CRBN unido a las perlas de afinidad, mientras que el compuesto I-S a una concentración de 0,1 pM dio como resultado una unión de CRBN similar. Los estudios de ubiquitinación de CRBN en células HEK293T transfectadas dieron como resultado las siguientes potencias: Compuesto I-S CI50 = 0,19 pM; lenalidomida CI50 = 12,9 pM; y pomalidomida CI50 = 21,6 pM. Los valores de CI50 para la inhibición de la proliferación por el compuesto I-S se desplazaron de 0,01 pM en la línea celular H929 parental y 0,04 pM en el subclón tratado con DMSO a 0,51-1,58 pM en los subclones resistentes a lenalidomida.

Fue evidente una disminución del 50 % en el ciclo celular (fase S) después de 24 horas de tratamiento de las células H929 con el compuesto I-S. A las 48 horas, el compuesto I-S disminuyó la expresión de survivina y la proteína de retinoblastoma (“pRB”) y aumentó la expresión del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina p27. El compuesto I-S coestimuló la producción de IL-2 por las células T con una CE50 de aproximadamente 0,29 nM, en comparación con 10 nM para la pomalidomida. El compuesto I-S inhibió la producción de IgM e IgG con una CI50 de 0,35 y 2,1 nM, respectivamente, en comparación con 17 nm y 63 nM para la pomalidomida.

Los resultados indican que el compuesto I-S se une a CRBN con una afinidad aproximadamente 30 veces mayor que la pomalidomida, e inhibe la ubiquitinación de CRBN con una potencia aproximadamente 110 veces mayor que la pomalidomida en este sistema. El compuesto I-S es aproximadamente 34 veces más potente que la pomalidomida para la coestimulación de la producción de IL-2 por las células T, y es 30 a 48 veces más potente que la pomalidomida para inhibir la producción de inmunoglobulinas.

6.7 Protocolo de clínico

Se proporciona un estudio clínico para determinar la seguridad, tolerabilidad, farmacocinética y eficacia del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, cuando se administra por vía oral a sujetos con tumores sólidos avanzados, linfoma no de Hodgkin o mieloma múltiple. Se lleva a cabo la dosis no tolerada (NTD), la dosis máxima tolerada (MTD) y dosis de fase 2 recomendada (RP2D). También se evalúa el efecto del compuesto sobre los biomarcadores de la angiogénesis en biopsias de tumores antes del tratamiento y durante el tratamiento.

Diseño del estudio: el estudio consiste en dos partes: la escalada de la dosis (parte A), y la expansión de la dosis (parte B). En la parte A, los sujetos reciben dosis únicas y múltiples ascendentes del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, para medir la farmacocinética (PK) e identificar la dosis máxima tolerada (MTD) y la dosis de fase 2 recomendada (RP2D). Se usa un diseño de escalada de dosis estándar (3 3) (Simon et al, 1997) para identificar la toxicidad inicial. Se proporciona a cohortes iniciales de tres sujetos el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, (0,5 mg una vez al día) en incrementos de dosis del 100 % hasta que se sospecha que la primera instancia de toxicidad de grado 3 o mayor está relacionada con el fármaco en el primer ciclo, punto en el cual la cohorte particular se expande a un total de seis sujetos. Este programa de escalada estándar se inicia con el fin de establecer la dosis no tolerada (NTD) y MTD. Los incrementos más pequeños y sujetos adicionales dentro de una cohorte de dosis también pueden ser evaluados para seguridad. Aproximadamente 20 a 40 sujetos se tratan y evalúan en la parte A; sin embargo, el número total de sujetos en la parte A depende del número de las cohortes de dosis necesario para establecer la MTD. Una dosis se considera la NTD cuando 2 o más de 6 sujetos evaluables en una cohorte experimentan toxicidad limitante de la dosis (DLT) relacionada con fármacos durante el ciclo 1. Cuando se establece la NTD, la escalada de la dosis se detiene. La MTD se define como el último nivel de dosis por debajo de la NTD con 0 o 1 de 6 sujetos evaluables que experimentan DLT durante el ciclo 1. Puede requerirse una dosis intermedia (es decir, una entre la NTD y el último nivel de dosis antes de la NTD) o sujetos adicionales dentro de cualquier cohorte de dosis para determinar con mayor precisión la MTD y RP2D.

En la parte B, los sujetos pueden comenzar la dosificación en la MTD y/o con un nivel de dosis más bajo sobre la base de los datos de seguridad, PK y/o PD de la parte A. Aproximadamente 100 sujetos (hasta 20 por cohorte), estratificados por tipo de tumor, se tratan y se evalúan para determinar la seguridad y actividad antitumoral después de cada dos ciclos de terapia. Las dosis y programa de dosificación se determinan de manera apropiada. Durante la parte B, los datos de seguridad se revisan con regularidad con respecto a la continuación del estudio, según sea apropiado.

Población del estudio: hombres y mujeres, de 18 años o más, con tumores sólidos avanzados (ST), linfoma no de Hodgkin (NHL), mieloma múltiple (MM), o tumores sólidos avanzados no extirpables, incluyendo sujetos que han progresado con (o no han sido capaces de tolerar) la terapia estándar o para quienes no existe una terapia anticancerosa estándar. Los tipos de tumores seleccionados incluyen el cáncer de mama metastásico (mBC), glioblastoma multiforme (GBM), carcinoma hepatocelular (HCC), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), y mieloma múltiple (MM).

Dosificación y duración del estudio: durante el primer ciclo, solo en la parte A, a cada sujeto se le administra una sola dosis diaria del compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, el día 1 seguido por un período de observación de 48 horas y muestreo de PK, seguido el día 1 por dosificación diaria ininterrumpida durante 28 días (ciclo 1 = 30 días). En los ciclos de la parte A subsiguientes, los sujetos se tratan en ciclos de 28 días con dosificación continua desde el día 1 al 28. El compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra una o dos veces al día a una dosis de 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 7,5, 10, 20, 25, 50 o 100 mg en una dosis inicial. La dosis puede ser de 0,1, 0,5, 1, 2, 4, 5, 7,5, 10 mg administrados una vez al día. La dosis puede ser de 50, 25 o 10 mg administrados dos veces al día. La dosis se puede ajustar hacia arriba o hacia abajo, a partir de la dosis inicial durante el tratamiento. Como se ha descrito anteriormente, si es necesario, el fármaco se puede administrar de una manera cíclica.

En la parte B, los sujetos reciben la dosificación continua durante 28 días desde el comienzo. No hay un período de recogida de PK de 48 horas pos-inicial de dosis única.

La terapia se interrumpe si hay evidencia de progresión de la enfermedad, toxicidad inaceptable o decisión del sujeto/médico de parar. Los sujetos pueden continuar recibiendo el compuesto sin interrupción siempre que obtengan beneficios según el criterio del investigador.

La inclusión se produce durante aproximadamente 24 meses. La compleción del tratamiento activo y el seguimiento del sujeto puede tardar 3-6 meses adicionales.

Tratamiento del estudio: el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra como cápsulas de 0,1 mg, 0,5 mg, 1 mg y 3 mg para la administración oral. El compuesto se envasará en botellas dentro de cajas que contienen el fármaco durante 28 días.

En la parte A (la fase de escalada de la dosis), el nivel de dosis comienza a 0,5 mg una vez al día después de la dosis única de PK. Después de que la primera dosis se administra al último sujeto en cualquier cohorte, los sujetos se observan durante al menos 30 días antes de que pueda comenzar la siguiente cohorte de dosis más alta especificada en el protocolo. La escalada de la dosis intra-sujeto no está permitida a menos que sea aprobada por el Comité de Revisión de Seguridad (SRC), que consiste en el investigador principal y el monitor médico del patrocinador.

En la parte B, los sujetos pueden recibir el compuesto de la Fórmula I, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros del mismo, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, a la MTD y/o un nivel de dosis más bajo, sobre la base de las evaluaciones de seguridad, PK y PD de la parte A. Aproximadamente 100 sujetos (tipos de tumor preseleccionados en grupos de hasta 20) se evalúan para determinar la seguridad y los efectos antitumorales.

Vista general de las evaluaciones de eficacia: los sujetos se evalúan para determinar la eficacia después de cada 2 ciclos. La variable de eficacia primaria es la respuesta. La respuesta del tumor se basa en los Criterios de Evaluación de la Respuesta en Tumores Sólidos (RECIST 1.1), Criterios del Grupo de Trabajo Internacional (IWC) para NHL, Criterios Internacionales de Respuesta Uniforme para Mieloma Múltiple (IURC) (Apéndice A, Sección 18.1), o Evaluación de Respuestas para Grupo de Trabajo de Neuro-Oncología (RANO) para GBM.

Los puntos finales secundarios/exploratorios incluyen mediciones de biomarcadores en sangre y tumor, respuesta histopatológica y correlaciones con hallazgos de farmacogenómica. También se examinan las variables de eficacia complementarias (p. ej., el estado funcional de ECOG, resultados de PET); además, los cambios de hipovascularización se miden por la constante de transferencia de volumen (Ktrans) y AUC inicial (IAUC) usando DCE-MRI.

Vista general de las evaluaciones de seguridad: las variables de seguridad para este estudio son los eventos adversos, variables clínicas de laboratorio, ECG de 12 derivaciones (revisado centralmente), evaluaciones de LVEF, exámenes físicos y signos vitales.

Vista general de las evaluaciones de farmacocinética: los perfiles de PK del compuesto de la Fórmula I y sus metabolitos se determinan a partir de recolecciones de sangre y orina en serie durante el primer ciclo de tratamiento. Estos se correlacionan con los resultados de farmacodinámica (PD) cuando es posible.

Los ejemplos mostrados anteriormente se proporcionan para dar a los expertos en la técnica una exposición y descripción completas de cómo hacer y usar las realizaciones reivindicadas, y no pretenden limitar el alcance de lo que se describe en la presente memoria. Se pretende que las modificaciones que son obvias para los expertos en la técnica estén dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

6.8 Uso en pacientes con insuficiencia renal

La (S)-3-(4-((4-morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona (“Compuesto I-S”) es más potente sobre compuestos inmunomoduladores anteriores tales como la talidomida. Los compuestos inmunomoduladores han mostrado una actividad clínica significativa en pacientes con enfermedad refractaria y/o recidivante y refractaria. La insuficiencia renal es una comorbilidad común para los pacientes con mieloma múltiple, que se produce en más del 40 % de los pacientes. (Eleftherakis-Papapiakovou et al., Leuk Lymphoma 2011; 52(12):2299-2303).

Los pacientes con mieloma múltiple con insuficiencia renal se tratan con el compuesto I-S de acuerdo con los regímenes de tratamiento proporcionados en otro lugar de la presente memoria. Se sabe que ciertos compuestos inmunomoduladores que son metabolizados y eliminados por los riñones se eliminan en niveles bajos como el fármaco parental. Las características de los compuestos inmunomoduladores relacionados, tales como pomalidomida, sugieren que la exposición al fármaco parental no se vería afectada sustancialmente por el grado de la función renal.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto para su uso en un método de tratamiento o gestión del cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento o gestión, en donde el compuesto es 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, que tiene la siguiente estructura:

o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, y

en donde el cáncer es mieloma o linfoma.

2. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde el cáncer es linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma cutáneo de células T, linfoma cutáneo de células B, linfoma difuso de células B grandes, linfoma folicular de grado bajo, macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma latente, o mieloma indolente.

3. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde el cáncer es mieloma múltiple.

4. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el cáncer es recidivante o refractario; opcionalmente en donde el cáncer es resistente a fármacos.

5. El compuesto para su uso de la reivindicación 3, en donde el mieloma múltiple es mieloma múltiple recidivante o refractario con función renal alterada.

6. El compuesto para su uso de la reivindicación 3, en donde el mieloma múltiple es resistente a lenalidomida.

7. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde el método comprende la administración de dicho compuesto a pacientes con mieloma múltiple antes, durante, o después del trasplante de células progenitoras de sangre periférica autólogas; o en donde el método comprende la administración de dicho compuesto a pacientes con mieloma múltiple recidivante después del trasplante de células madre.

8. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el método comprende además la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes activos adicionales, opcionalmente el agente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en un agente alquilante, un análogo de adenosina, un glucocorticoide, un inhibidor de quinasa, un inhibidor de SYK, un inhibidor de PDE3, un inhibidor de PDE7, doxorrubicina, clorambucilo, vincristina, bendamustina, forskolina y rituximab; preferiblemente en donde el agente activo adicional es rituximab.

9. El compuesto para su uso de la reivindicación 8, en donde el agente activo adicional es dexametasona.

10. El compuesto para su uso de la reivindicación 9, en donde el método comprende la administración de dicho compuesto en combinación con dexametasona a pacientes con mieloma múltiple recidivante o refractario.

11. El compuesto para su uso de la reivindicación 9, en donde el método comprende la administración de dicho compuesto en combinación con dexametasona como terapia de rescate para el postrasplante de riesgo bajo a pacientes con mieloma múltiple; o en donde el método comprende la administración de dicho compuesto en combinación con dexametasona como terapia de mantenimiento a pacientes con mieloma múltiple después del trasplante de médula ósea autóloga.

12. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde se administra 3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1 -oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona, o un enantiómero o una mezcla de enantiómeros de la misma, o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg por día, opcionalmente en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 5 mg por día, o en una cantidad de aproximadamente 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2, 2,5, 3, 4, 5, 7,5, 10, 15, 20, 25, 50, o 100 mg por día, o en donde el compuesto se administra por vía oral, o se administra en una cápsula o comprimido, preferiblemente en 10 mg o 25 mg de una cápsula.

13. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde el compuesto se administra durante 21 días seguido por siete días de descanso en un ciclo de 28 días.

14. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde el compuesto es (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.

15. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde el compuesto es hidrocloruro de (S)-3-(4-((4-(morfolinometil)bencil)oxi)-1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-2,6-diona.