ES2703382T3 - Factor H para trasplante - Google Patents

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ES2703382T3 ES14721085T ES14721085T ES2703382T3 ES 2703382 T3 ES2703382 T3 ES 2703382T3 ES 14721085 T ES14721085 T ES 14721085T ES 14721085 T ES14721085 T ES 14721085T ES 2703382 T3 ES2703382 T3 ES 2703382T3
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Abstract

Composición que comprende factor H (FH) para su uso en un método para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto por un receptor de dicho aloinjerto, en la que dicho receptor se trata adicionalmente con una primera composición de inmunosupresor que comprende un miembro seleccionado de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.

Description

DESCRIPCIÓN
Factor H para trasplante
Antecedentes de la invención
El sistema del complemento está diseñado de manera única para reconocer, destruir y facilitar la retirada de patógenos que están constantemente intentando invadir los organismos. El sistema está compuesto por aproximadamente 30 proteínas de plasma y de superficie celular que incorporan mecanismos efectores tanto humorales como celulares para proporcionar una protección redundante y altamente eficaz frente a infección.
De manera análoga a la cascada de coagulación, el sistema del complemento se activa mediante asociación de proteínas específicas para formar complejos activos, generalmente con actividad serina proteasa. Estos complejos de proteasa activan proteínas precursoras que contribuyen a una activación adicional (amplificando la respuesta) o generan mediadores inflamatorios y elementos citotóxicos. Se generan tres efectores principales durante la activación del complemento: C3b, C5a y C5b-9 (también denominado complejo de ataque de membrana o MAC). El rechazo celular de órganos trasplantados puede tratarse con una matriz de fármacos inmunosupresores celulares que seleccionan específicamente como diana la respuesta inmunitaria celular. Sin embargo, una población significativa de posibles candidatos a trasplante presenta anticuerpos específicos de donante (DSA), lo cual es con frecuencia una contraindicación para proceder con el trasplante. Además, parece que se produce formación de anticuerpos anti-donante de novo en el 10-20 % de pacientes sometidos a trasplante que no presentaban una alta reactividad de panel antes del trasplante. Estos anticuerpos se unen al órgano de donante e inician una respuesta inflamatoria por parte del huésped que da como resultado una función comprometida y en última instancia pérdida del injerto. El rechazo mediado por anticuerpos (AMR) no se controla mediante fármacos inmunosupresores convencionales y se reconoce cada vez más como causa principal de rechazo de órganos. Los DSA son capaces de activar el sistema del complemento, inicialmente a través de mecanismos de la ruta clásica, aumentado por componentes de la ruta alternativa que dañan el órgano de donante. Además, se ha sugerido que la activación del complemento en el entorno del trasplante se produce durante la intervención quirúrgica de trasplante (mediante mecanismos de isquemia-reperfusión). También se ha demostrado que productos de la activación del complemento inician y acentúan mecanismos de rechazo celular. Por tanto, el complemento puede contribuir a la pérdida de un órgano trasplantado de una variedad de maneras. El factor H, que controla la conversión de C3 en C3a así como la posterior generación de C5a, puede ser eficaz para limitar el rechazo de órganos.
Las evidencias de un papel de la activación del complemento en la patología de RA son bastante amplias. Estudios indican que la activación del complemento contribuye a la patología de RA. Marcadores de activación elevados en pacientes con RA y el fenotipo de protección significativa frente a enfermedad que se observa en diversos modelos de roedor en los que diferentes proteínas del complemento están ausentes también sugieren un papel importante del complemento en la etiología de RA. Sin embargo, el trabajo de varios grupos ha demostrado que parece ser necesario seleccionar como diana el inhibidor del complemento para mostrar eficacia, y que la administración sistémica del inhibidor no dirigido, incluyendo FH, no era eficaz. Además, la falta de cualquier asociación genética de polimorfismo de FH con el desarrollo de RA parece debilitar adicionalmente la relación con esta enfermedad. Sorprendentemente, tal como se demuestra en el presente documento, FH administrado de manera sistémica sí que limita la patología de RA en un modelo de ratón.
Por tanto, el factor H, como componente proteico de la ruta alternativa del complemento codificado por el gen del factor G del complemento, puede ser un posible compuesto terapéutico para su uso en la prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto y para tratar la artritis reumatoide.
Breve sumario de la invención
La presente invención proporciona una composición que comprende factor H (FH) para su uso en un método para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto por un receptor de dicho aloinjerto, en el que dicho receptor se trata adicionalmente con una primera composición de inmunosupresor que comprende un miembro seleccionado de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
En una realización adicional y según lo anterior, el receptor se trata adicionalmente con una primera composición de inmunosupresor que incluye, sin limitación, uno cualquiera de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
En una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el receptor se trata adicionalmente con una segunda composición de inmunosupresor que es diferente de la primera composición de inmunosupresor, en la que ese segundo inmunosupresor se selecciona independientemente de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
En todavía una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el receptor se trata con una composición que comprende FH, una composición que comprende FK y una composición que comprende rapamicina.
En aún una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el rechazo de aloinjerto es un rechazo mediado por anticuerpos o una combinación de rechazo mediado por anticuerpos y por células.
En una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto incluye prolongar la supervivencia y/o función del aloinjerto durante un número predeterminado de días.
En todavía una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, la prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto incluye prevenir o inhibir un aumento de los niveles de marcadores de rechazo de aloinjerto.
En todavía una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el rechazo de aloinjerto que está previniéndose o inhibiéndose es rechazo mediado por anticuerpos agudo. En una realización de este tipo, el receptor se trata con FH tras recibir dicho aloinjerto hasta que dicho aloinjerto funciona normalmente. En una realización a modo de ejemplo, la función normal del aloinjerto se determina mediante el nivel de creatinina de receptor y/o pruebas de biopsia para C4d negativas.
En todavía una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el rechazo de aloinjerto se produce 3-6 meses tras recibir dicho aloinjerto.
En todavía una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el aloinjerto comprende un órgano. En una realización adicional, el órgano es un órgano completo. En todavía una realización adicional, el órgano completo es un miembro seleccionado de riñón, corazón, hígado, intestino, páncreas y pulmón.
En todavía una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el aloinjerto comprende tejido. En una realización adicional, el aloinjerto se selecciona de un injerto de piel, un injerto de hueso, una válvula y médula ósea. En un aspecto, la presente descripción proporciona un método para tratar artritis reumatoide en un sujeto, incluyendo el método la etapa de administrar una composición que comprende factor H (FH) al sujeto. En realizaciones a modo de ejemplo, el FH es FH derivado de plasma o FH recombinante.
En una realización adicional y según cualquiera de lo anterior, el FH se administra al sujeto por vía intravenosa. En todavía un caso adicional y según cualquiera de lo anterior, administrar FH da como resultado una reducción de inflamación de las articulaciones en el sujeto.
En aún un caso adicional y según cualquiera de lo anterior, administrar FH inhibe una respuesta inflamatoria inicial. En un caso adicional y según cualquiera de lo anterior, administrar FH fomenta adicionalmente la resolución de una respuesta inflamatoria.
En todavía un caso adicional y según cualquiera de lo anterior, administrar FH da como resultado una reducción de exostosis en el sujeto.
En aún un caso adicional y según cualquiera de lo anterior, administrar FH da como resultado una reducción de daño al cartílago en el sujeto en comparación con un sujeto que no ha recibido FH.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 ilustra la cascada del complemento. Las proteínas inhibidoras están en recuadros. fH = factor H; fI = factor I; C4BP = proteína de unión a C4; DAF = factor de aceleración del deterioro; MCP = proteína de cofactor de membrana.
La figura 2 ilustra niveles de creatinina en POD7 en modelo de aloinjerto de ratón previamente sensibilizado tratado con CFH, FK506 o CFH+FK506.
La figura 3 ilustra una curva de supervivencia de Kaplan-Meier de trasplantes de riñón en los receptores previamente sensibilizados. p <0,05, FK+RApA frente a CFH+fK+RAPA. Cohorte FK+CFH, se detuvo todo el tratamiento el día 10.
La figura 4 ilustra la función renal en las diferentes cohortes a lo largo del tiempo. En ratones B6 normales, Cr = 0,2 ± 0,05 (mg/dl), BUN = 34 ± 8,81 (mg/dl), Hct-44 ± 1,73 (% de PCV).
La figura 5 ilustra imágenes histológicas representativas de aloinjertos de riñón. A) A la izquierda se muestra un riñón normal; a la derecha se muestra un trasplante sin tratar (POD7). B) Las imágenes superiores son aloinjertos de ratones tratados con RAPA+FK506 (n.° 136, n.° 137); las imágenes inferiores son aloinjertos de ratones tratados con RAPA+FK506+CFH (n.° 148, n.° 150).
La figura 6 ilustra A) análisis de la función renal (n = 4 a 6 por grupo); y B) imágenes histológicas representativas de aloinjertos de riñón en POD3 y POD5.
La figura 7 ilustra A) niveles de DSA (IgG) en plasma antes y después del trasplante; y B) falta de correlación entre los niveles de IgG y los niveles de Cr.
La figura 8 ilustra cambio de peso corporal medio de grupo en porcentaje desde el día 1 en PK-e363. Bx-12=FH. La figura 9 ilustra el efecto de agentes de prueba sobre el hinchamiento de pata trasera total en CAIA de ratón en PK-e363. Bx-12=FH.
La figura 10 ilustra la puntuación clínica total para CAIA en PK-e363. Bx-12=FH.
La figura 11 ilustra el efecto de agentes de prueba sobre cambios histológicos en CAIA de ratón en PK-e363. Bx-12=FH.
La figura 12 proporciona una secuencia de una variante de factor H de utilidad en la presente invención.
Descripción detallada de la invención
Resumen
La presente invención proporciona una composición que comprende factor H (FH) para su uso en un método para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto por un receptor de dicho aloinjerto, en la que dicho receptor se trata adicionalmente con una primera composición de inmunosupresor que comprende un miembro seleccionado de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
El FH usado en el tratamiento de un sujeto puede ser factor H derivado de plasma o recombinante. El FH derivado de plasma comprende muchas variantes, tal como se ha descrito en la bibliografía, y puede usarse una o una combinación de estas variantes en los métodos descritos en el presente documento. En la bibliografía también se describe un gran número de variantes recombinantes, y también puede usarse una cualquiera o una combinación de tales variantes de FH recombinante para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto o para tratar artritis reumatoide según los métodos descritos en más detalle en el presente documento. Tal como se apreciará, el tratamiento con una combinación de FH tanto derivado de plasma como recombinante también queda abarcado por la presente invención. El tratamiento con FH puede realizarse mediante administración subcutánea, administración intravenosa o cualquier otro método de administración conocido en la técnica.
En un aspecto, la presente divulgación proporciona métodos para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto por un receptor de ese aloinjerto tratando a ese receptor con una composición que comprende FH. Tal como se comentó anteriormente, el tratamiento con FH puede incluir tratamiento con una o más variantes de FH que se derivan de plasma o son recombinantes. La cantidad de FH proporcionada puede variar, pero en general está en un intervalo eficaz para inhibir la activación del complemento. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, la cantidad de FH usada es una cantidad eficaz para lograr una concentración en plasma de aproximadamente 1-2 mg/ml. En realizaciones todavía adicionales, la cantidad de FH usada para el tratamiento está en un intervalo de 86 mg/kg. El FH puede administrarse al receptor del aloinjerto una o más veces tras el trasplante del aloinjerto a una gama de intervalos durante un periodo de días, semanas o meses, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
En realizaciones adicionales, el receptor del aloinjerto también se trata con uno o más inmunosupresores además de FH con el fin de prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto. Los uno o más inmunosupresores pueden incluir, sin limitación, sirólimus (rapamicina), FK506, ciclosporina y tacrólimus. También pueden administrarse terapias inmunosupresoras convencionales adicionales al receptor en algunas realizaciones, incluyendo, sin limitación, micofenilato de mofitilo, y esteroides. En realizaciones específicas, el receptor se trata con FH, FK506 y con rapamicina para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto. El tratamiento con fH y los uno o más inmunosupresores puede lograrse al mismo tiempo o en puntos de tiempo diferentes tras la recepción del aloinjerto. En realizaciones adicionales, el tratamiento con FH y/o los uno o más inmunosupresores se repite tras recibir el aloinjerto, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
En un aspecto adicional, el tratamiento con FH con o sin uno o más inmunosupresores se proporciona justo después del trasplante para prevenir o inhibir rechazo agudo, particularmente rechazo mediado por anticuerpos agudo. En un método de este tipo, el tratamiento se inicia en el momento del trasplante del aloinjerto y se continúa hasta que el aloinjerto está funcionando. Por ejemplo, en realizaciones en las que el aloinjerto es un riñón, el tratamiento se continuará hasta que el receptor muestre valores de creatinina normales y las pruebas de biopsia sean negativas para C4d.
En todavía un aspecto adicional, el tratamiento con FH con o sin uno o más inmunosupresores se proporciona para prevenir rechazo que se produce semanas o meses tras el trasplante. En tales situaciones, el aloinjerto funciona de manera normal inmediatamente tras el trasplante, pero después se deteriora debido a la producción de anticuerpos de novo. En este aspecto, el tratamiento se iniciaría cuando se manifiesten los primeros signos de rechazo y continuaría hasta que el aloinjerto esté funcionando de nuevo normalmente.
En realizaciones a modo de ejemplo, el tratamiento con FH con uno o más inmunosupresores según la presente invención puede usarse para prevenir o inhibir rechazos de aloinjerto que incluyen, sin limitación, un órgano, una parte de un órgano o un tejido. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, el aloinjerto puede ser, sin limitación, riñón, corazón, hígado, pulmón, páncreas, intestino, un injerto de piel, un injerto de hueso, una válvula y médula ósea.
En un aspecto adicional, la presente descripción proporciona métodos para tratar artritis reumatoide en un sujeto mediante administración de una composición que comprende FH a ese sujeto. Tal como se comentó anteriormente, el FH usado para tratar al sujeto puede comprender una o más variantes de FH, y puede derivarse de plasma o ser recombinante.
En casos específicos el FH administrado al sujeto reduce la inflamación de las articulaciones en el sujeto. En casos adicionales el FH administrado inhibe una respuesta inflamatoria inicial y/o fomenta la resolución de respuesta inflamatoria. En casos todavía adicionales el FH da como resultado una reducción de exostosis en el sujeto o una reducción de daño al cartílago en comparación con un sujeto que no ha recibido FH.
En casos adicionales la cantidad de FH administrada al sujeto es una cantidad eficaz para reducir la inflamación, exostosis o daño al cartílago tal como se describió anteriormente. En casos todavía adicionales y tal como se comentó anteriormente para la prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto, la cantidad de FH administrada a un sujeto con artritis reumatoide puede variar, pero en general está en un intervalo eficaz para inhibir la activación del complemento. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, la cantidad de FH usada es una cantidad eficaz para lograr una concentración en plasma de aproximadamente 1-2 mg/ml. En realizaciones adicionales, la cantidad de FH usada para el tratamiento está en un intervalo de 86 mg/kg. El FH puede administrarse al sujeto una o más veces a una gama de intervalos durante un periodo de días, semanas o meses, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
Definiciones
A menos que se especifique lo contrario, el término “factor H” o “FH” tal como se usa en el presente documento se refiere a factor H tanto derivado de plasma como recombinante y abarca adicionalmente una o más variantes.
El término “recombinante” cuando se usa con referencia, por ejemplo, a una célula, o ácido nucleico, proteína o vector, indica que la célula, ácido nucleico, proteína o vector, se ha modificado mediante la introducción de un ácido nucleico o proteína heterólogo o la alteración de un ácido nucleico o proteína nativo, o que la célula se deriva de una célula modificada de este modo. Por tanto, por ejemplo, las células recombinantes expresan genes que no se encuentran en la forma nativa (no recombinante) de la célula o expresan genes nativos que de lo contrario se expresan de manera anómala, se expresan de manera insuficiente o no se expresan en absoluto.
Los términos “aislado”, “purificado”, o “biológicamente puro” se refieren a material que está sustancial o esencialmente libre de componentes que normalmente lo acompañan tal como se encuentra en su estado nativo. La pureza y homogeneidad se determinan normalmente usando técnicas de química analítica tales como electroforesis en gel de poliacrilamida o cromatografía de líquidos de alta resolución. El término “purificado” en algunas realizaciones indica que un ácido nucleico o proteína da lugar esencialmente a una banda en un gel electroforético. En otras realizaciones, significa que el ácido nucleico o proteína es puro en al menos el 50 %, más preferiblemente puro en al menos el 60 %, el 65 %, el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % o más. “Purificar” o “purificación” en otras realizaciones significa eliminar al menos un contaminante de la composición que va a purificarse. En este sentido, la purificación no requiere que el compuesto purificado sea homogéneo, por ejemplo, puro al 100 %.
Tal como se usa en el presente documento, “administrar” (y todos los equivalentes gramaticales) incluye administración intravenosa, administración intramuscular, administración subcutánea, administración oral, administración como supositorio, administración por contacto tópico, intraperitoneal, intralesional o intranasal, o la implantación de un dispositivo de liberación lenta, por ejemplo, una minibomba osmótica, a un sujeto. La administración se realiza mediante cualquier vía incluyendo parenteral y transmucosa (por ejemplo, oral, nasal, vaginal, rectal o transdérmica). La administración parenteral incluye, por ejemplo, intravenosa, intramuscular, intraarteriola, intradérmica, subcutánea, intraperitoneal, intraventricular e intracraneal. Otros modos de administración incluyen el, pero no se limitan al, uso de formulaciones de liposomas, infusión intravenosa, parches transdérmicos, etc.
Los términos “cantidad o dosis terapéuticamente eficaz” o “cantidad o dosis terapéuticamente suficiente” o “cantidad o dosis eficaz o suficiente” o “cantidad o dosis farmacéuticamente eficaz” se refieren a una dosis que produce efectos terapéuticos para los que se administra. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco útil para tratar hemofilia puede ser la cantidad que es capaz de prevenir o aliviar uno o más síntomas asociados con la hemofilia. La dosis exacta dependerá del propósito del tratamiento, y podrá determinarla un experto en la técnica usando técnicas conocidas (véase, por ejemplo, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20.a edición, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins, cada uno de los cuales se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad para todos los propósitos y en particular para todas las enseñanzas relacionadas con desarrollar dosis y pautas posológicas). “Farmacéuticamente aceptable” significa aquello que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que es generalmente segura, no tóxica y no indeseable desde el punto de vista biológico u otro e incluye aquello que es aceptable para su uso veterinario así como uso farmacéutico para humanos.
Por “sujeto” quiere decirse cualquier miembro del subfilo Chordata, incluyendo, sin limitación, humanos y otros primates, incluyendo primates no humanos tales como chimpancés y otros simios y especies de monos; animales de granja tales como ganado, ovejas, cerdos, cabras y caballos; mamíferos domésticos tales como perros y gatos; animales de laboratorio incluyendo roedores tales como ratones, ratas y cobayas; aves, incluyendo aves domésticas, salvajes y de caza tales como pollos, pavos y otras aves gallináceas, patos, gansos y similares. El término no indica una edad particular. Por tanto, tanto individuos adultos como recién nacidos son de interés.
El término “paciente” se usa en su sentido convencional para hacer referencia a un organismo vivo que padece o es propenso a un estado que puede prevenirse o tratarse mediante administración de una composición de la invención, e incluye tanto humanos como especies no humanas. Los términos “paciente” y “sujeto” se usan de manera intercambiable a lo largo de la solicitud, y, tal como se comentó anteriormente, estos términos incluyen sujetos tanto humanos como veterinarios.
Tal como se usa en el presente documento, el término “aproximadamente” indica un intervalo aproximado de más o menos el 10 % con respecto a un valor especificado. Por ejemplo, la expresión “aproximadamente el 20 %” abarca un intervalo del 18-22 %.
Tal como se usa en el presente documento, el término “semivida” se refiere al periodo de tiempo que tarda la cantidad de una sustancia que experimenta descomposición (o aclaramiento a partir de una muestra o a partir de un paciente) en disminuir a la mitad.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “identidad de secuencia” o “identidad en %”, en el contexto de dos o más secuencias de ácido nucleico o proteína, se refieren a dos o más secuencias o subsecuencias que son iguales o tienen un porcentaje especificado de residuos de aminoácido o nucleótidos que son iguales, cuando se comparan y se alinean para obtener una correspondencia máxima, según se mide usando uno de los siguientes algoritmos de comparación de secuencias o mediante inspección visual. Para comparación de secuencias, normalmente una secuencia actúa como secuencia de referencia con la que se comparan secuencias de prueba. La alineación óptima de secuencias para su comparación puede realizarse, por ejemplo, mediante el algoritmo de homología local de Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2: 482 (1981); mediante el algoritmo de alineación de homología de Needleman & Wunsch, J Mol. Biol. 48: 443 (1970); mediante el método de búsqueda de similitud de Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85: 2444 (1988); mediante implementaciones informáticas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA, y TFASTA en el paquete de software de Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.); o mediante inspección visual (véase generalmente, Ausubel, F. M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, pub. por Greene Publishing Assoc. y Wiley-Interscience (1987)). Un ejemplo de un algoritmo que es adecuado para determinar la identidad de secuencia en porcentaje es el algoritmo usado en la herramienta de búsqueda de alineación local básica (a continuación en el presente documento “BLAST”), véase, por ejemplo Altschul et al., J Mol. Biol. 215: 403-410 (1990) y Altschul et al., Nucleic Acids Res., 15: 3389-3402 (1997), que está disponible al público a través del Centro nacional para la información biotecnológica (a continuación en el presente documento “NCBI”).
Tal como se usa en el presente documento, el término “aloinjerto” se usa en su sentido convencional para hacer referencia a un tejido u órgano trasplantado a partir de un donante a un receptor de la misma especie pero composición genética diferente.
Composiciones para su uso en la invención
Los métodos de la presente divulgación incluyen el uso de composiciones que comprenden factor H. A menos que se especifique lo contrario, el término “factor H” o “FH” tal como se usa en el presente documento se refiere a factor H tanto derivado de plasma como recombinante. El factor H es un componente proteico de la ruta alternativa del complemento codificado por el gen de factor G del complemento (por ejemplo, CFH; NM000186; GeneID:3075; UniProt ID P08603; Ripoche et al., Biochem. J. 249:593-602(1988)). El factor H se traduce como un polipéptido precursor de 1213 aminoácidos que se procesa mediante eliminación de un péptido señal de 18 aminoácidos, dando como resultado la proteína factor H madura (aminoácidos 19-1231). Tal como se usa en la presente invención, el factor H abarca cualquier variante natural, secuencia alternativa, isoforma o proteína mutante que puede encontrarse en una muestra de plasma, por ejemplo una muestra de plasma humano. Los ejemplos de mutaciones de factor H encontradas en la población humana incluyen, sin limitación, Y402H; V62I; R78G; R127L; A224; Q400K; C431S; T493R; C536R; I551T; R567G; C630W; C673S; C673Y; E850K; S890I; H893R; C915S; E936D; Q950H; Y951H; T956M; C959Y; W978C; N997T; V1007I; V1007L; A1010T; T1017I; Y1021F; C1043R; N1050Y; I1059T; Q1076R; R1078S; D1119G; V1134G; Y1142D; Q1143E; W1157R; C1163W; W1183L; W1183R; T1184R; L1189R; S1191L; G1194D; V1197A; E1198A; F1199S; R1210C; R1215G; R1215Q; YPTCAKR1225:1231FQS; y P1226S. Se ha encontrado que muchas de estas mutaciones están asociadas con una variedad de enfermedades y trastornos, incluyendo síndrome urémico hemolítico atípico (aHUS), degeneración macular relacionada con la edad (AMD), glomerulonefritis membranoproliferativa tipo II (MPGNII), carencia de CFH y drusas laminares basales. El factor H también incluye proteínas que contienen modificaciones tras la traducción. Por ejemplo, se cree que el factor H se modifica mediante N-acetilglucosamina (GlcNAc) en los residuos 529, 718, 802, 822, 882, 911, 1029 y 1095.
Tal como se apreciará, el factor H usado en las composiciones descritas en el presente documento puede derivarse de plasma o ser recombinante y puede comprender además una o más variantes diferentes (incluyendo formas de longitud completa y truncadas).
En la técnica se conocen variantes de factor H derivado de plasma y métodos para producir factor H derivado de plasma y se describen, por ejemplo, en los documentos Wo 2007/149567; WO2007/066017; WO2008/113589; WO2011/011753; US 7.745.389.
En la técnica se conoce una amplia variedad de polimorfismos de factor H y se describen, por ejemplo, en los documentos WO2000/52479; WO/2006/062716; US7.351.524; US7.745.389, que también describen formas recombinantes de estos polipéptidos de factor H y métodos para producir las mismas. Muchas de estas formas variantes de factor H se conocen como variantes “protectoras” que muestran una mayor actividad en la limitación de la activación del complemento que factor H derivado de plasma. En realizaciones no limitativas, las variantes protectoras de factor H de utilidad en la presente invención comprenden una secuencia según cualquiera de las secuencias descritas en el documento US 7.745.389, incluyendo SEQ ID NO: 5 del documento US 7.745.389, que se proporciona en el presente documento como SEQ ID NO: 1 en la figura 12. En realizaciones adicionales, se usa un factor H recombinante en métodos y composiciones de la invención en los que el factor H recombinante tiene una identidad de secuencia de al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % y el 100 % con respecto a cualquiera de las secuencias descritas en el documento US 7.745.389. En realizaciones todavía adicionales, el factor H recombinante de utilidad en la presente invención tiene una identidad de secuencia de al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % y el 100 % con respecto a SEQ ID NO: 5 del documento US 7.745.389, que se proporciona en el presente documento como SEQ ID NO: 1 en la figura 12. En realizaciones aún adicionales, el factor H recombinante de utilidad en la presente invención comprende SEQ ID NO: 1 representada en la figura 12 con aproximadamente 1-100, 3-95, 5-90, 7-85, 9-80, 11-75, 13-70, 15-65, 17-60, 19­ 55, 21-50, 23-45, 25-40, 27-35 sustituciones de aminoácido.
Además de composiciones que comprenden factor H, los métodos de la invención usan composiciones que comprenden inmunosupresores. Estos inmunosupresores pueden incluirse en la misma composición que el factor H, o los inmunosupresores pueden proporcionarse en composiciones independientes del factor H. Tales inmunosupresores incluyen, sin limitación, sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
En determinadas realizaciones, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En otras realizaciones, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En aún otras realizaciones, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml. En otra realización, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En otra realización, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En aún otras realizaciones, el factor H puede estar presente a aproximadamente 0,01 mg/ml, o a aproximadamente 0,02 mg/ml, 0,03 mg/ml, 0,04 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,06 mg/ml, 0,07 mg/ml, 0,08 mg/ml, 0,09 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml, 0,8 mg/ml, 0,9 mg/ml, 1,0 mg/ml, 1,1 mg/ml, 1,2 mg/ml, 1,3 mg/ml, 1,4 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1,6 mg/ml, 1,7 mg/ml, 1,8 mg/ml, 1,9 mg/ml, 2,0 mg/ml, 2,5 mg/ml, 3,0 mg/ml, 3,5 mg/ml, 4,0 mg/ml, 4,5 mg/ml, 5,0 mg/ml, 5,5 mg/ml, 6,0 mg/ml, 6,5 mg/ml, 7,0 mg/ml, 7,5 mg/ml, 8,0 mg/ml, 8,5 mg/ml, 9,0 mg/ml, 9,5 mg/ml, 10,0 mg/ml o una concentración superior. En realizaciones adicionales, el factor H está presente a una concentración en un intervalo de aproximadamente 0,1-15, 0,3-14,5, 0,5-14, 0,7-13,5, 0,9-13, 1,1-12,5, 1,3-12, 1,5-11,5, 1,7-11, 1,9-10,5, 2,1-10, 2,3-9,5, 2,5-9, 2,7-8,5, 2,9-8, 3,1-7,5, 3,3-7, 3,5-6,5, 3,7-6, 3,9-5,5, 4,1-5, 4,3-4,5 mg/ml.
En una realización, la concentración de una formulación de factor H relativamente puro puede determinarse mediante espectroscopía (es decir, proteína total medida a A280) u otra determinación a granel (por ejemplo, ensayo de Bradford, tinción con plata, peso de un polvo liofilizado, etc.). En otras realizaciones, la concentración de factor H puede determinarse mediante un ensayo ELISA de factor H (por ejemplo, mg/ml de antígeno).
En realizaciones todavía adicionales, la presente divulgación proporciona composiciones acuosas de factor H que comprenden una concentración de proteína de o aproximadamente entre 10 g/l y 250 g/l. En determinadas realizaciones, la concentración de proteína de la composición de factor H es de o aproximadamente entre 50 g/l y
200 g/l, o de o aproximadamente entre 70 g/l y 150 g/l, o de o aproximadamente entre 90 g/l y 120 g/l, o de o aproximadamente entre 30 g/l y 70 g/l, o de o aproximadamente entre 40 g/l y 60 g/l o cualquier concentración adecuada dentro de estos intervalos, por ejemplo de o aproximadamente 10 g/l, o de o aproximadamente 15 g/l,
20 g/l, 25 g/l, 30 g/l, 35 g/l, 40 g/l, 45 g/l, 50 g/l, 55 g/l, 60 g/l, 65 g/l, 70 g/l, 75 g/l, 80 g/l, 85 g/l, 90 g/l, 95 g/l, 100 g/l,
105 g/l, 110 g/l, 115 g/l, 120 g/l, 125 g/l, 130 g/l, 135 g/l, 140 g/l, 145 g/l, 150 g/l, 155 g/l, 160 g/l, 165 g/ 175 g/l, 180 g/l, 185 g/l, 190 g/l, 195 g/l, 200 g/l, 205 g/l, 210 g/l, 215 g/l, 220 g/l, 225 g/l, 230 g/l, 235 g/ 245 g/l, 250 g/l o superior. En una realización preferida, las composiciones de factor H que tienen altas concentraciones de proteína también tendrán altos niveles de pureza. En una realización, al menos el 90 % de la proteína en la composición será factor H. En una realización preferida, al menos el 95 % de la proteína en la composición será factor H.
En realizaciones adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado
una concentración de nivel en plasma en el receptor de aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml.
En otras realizaciones, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml.
En aún otras realizaciones, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado
una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente
5 mg/ml. En otra realización, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado
una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente
2 mg/ml. En otra realización, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado
una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente
2 mg/ml. En aún otras realizaciones, el factor H da como resultado una concentración en plasma de aproximadamente 0,01 mg/ml, o aproximadamente 0,02 mg/ml, 0,03 mg/ml, 0,04 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,06 mg/ml,
0,07 mg/ml, 0,08 mg/ml, 0,09 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml,
0,8 mg/ml, 0,9 mg/ml, 1,0 mg/ml, 1,1 mg/ml, 1,2 mg/ml, 1,3 mg/ml, 1,4 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1,6 mg/ml, 1,7 mg/ml,
1,8 mg/ml, 1,9 mg/ml, 2,0 mg/ml, 2,5 mg/ml, 3,0 mg/ml, 3,5 mg/ml, 4,0 mg/ml, 4,5 mg/ml, 5,0 mg/ml, 5,5 mg/ml,
6,0 mg/ml, 6,5 mg/ml, 7,0 mg/ml, 7,5 mg/ml, 8,0 mg/ml, 8,5 mg/ml, 9,0 mg/ml, 9,5 mg/ml, 10,0 mg/ml, o una concentración superior. En realizaciones adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz
que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor en un intervalo de aproximadamente
0,1-15, 0,3-14,5, 0,5-14, 0,7-13,5, 0,9-13, 1,1-12,5, 1,3-12, 1,5-11,5, 1,7-11, 1,9-10,5, 2,1-10, 2,3-9,5, 2,5-9, 2,7-8,5,
2,9-8, 3,1-7,5, 3,3-7, 3,5-6,5, 3,7-6, 3,9-5,5, 4,1-5, 4,3-4,5 mg/ml. La concentración de nivel en plasma puede determinarse usando ensayos convencionales conocidos en la técnica.
En realizaciones adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 50­
150 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 52-145, 54-140, 56-135, 58-130, 60-125, 62-120, 64-115, 66-110, 68-105, 70-100, 72-95, 74-90,
76-87, 78-86, 80-85 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 70, 70,5, 71, 71,5, 72, 72,5, 73, 73,5, 74, 74,5, 75, 75,5, 76, 76,5, 77,
77.5, 78, 78,5, 79, 79,5, 80, 80,5, 81, 81,5, 82, 82,5, 83, 83,5, 84, 84,5, 85, 85,5, 86, 86,5, 87, 87,5, 88, 88,5, 89,
89.5, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170 mg/kg.
En realizaciones adicionales, se proporcionan uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus) en una concentración de aproximadamente 0,1-10 |iM. En realizaciones adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2­
9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4-3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 |iM.
En realizaciones todavía adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente
0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1,
5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3,
10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 |iM.
En realizaciones todavía adicionales, se proporcionan uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus) en una concentración de aproximadamente 0,1­
10 mg/kg. En realizaciones adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4­
3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1,2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5,
3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7,
8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 mg/kg.
En realizaciones adicionales, composiciones de utilidad en los métodos descritos en el presente documento comprenden FK506. En realizaciones todavía adicionales, composiciones de utilidad en los métodos descritos en el presente documento comprenden FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1-10 |iM. En realizaciones adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4-3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 |iM. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12.5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 |iM. En todavía adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1-10 mg/kg. En realizaciones adicionales, el FK506 se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4­ 3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, el FK506 se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4.3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9.5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 1-30, 3,5-29,5, 4-29, 4,5-28,5, 5-28, 5.5- 27,5, 6-27, 6,5-26,5, 7-26, 7,5-25,5, 8-25, 8,5-24,5, 9-24, 9,5-23,5, 10-23, 10,5-22,5, 11-22, 11,5-21,5, 12-21, 12.5- 20,5, 13-20, 13,5-19,5, 14-19, 14,5-18,5, 15-18, 15,5-, 7,5, 16-17, 2-4, 2,5-3,5, 3-3,5 mg/kg. En realizaciones aún adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 1, 1,2, 1,4, 1,6, 1,8, 2, 2,2, 2,4, 2.6, 2,8, 3, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5, 5,2, 5,4, 5,6, 5,8, 6, 6,2, 6,4, 6,6, 6,8, 7, 7,2, 7,4, 7,6, 7,8, 8, 8,2, 8.4, 8,6, 8,8, 9, 9,2, 9,4, 9,6, 9,8, 10, 10,2, 10,4, 10,6, 10,8, 11, 11,2, 11,4, 11,6, 11,8, 12 mg/kg.
En realizaciones adicionales, composiciones de utilidad en los métodos descritos en el presente documento comprenden rapamicina. En realizaciones todavía adicionales, composiciones de utilidad en los métodos descritos en el presente documento comprenden rapamicina a concentración de aproximadamente 0,1-10 |iM. En realizaciones adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4-3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 |iM. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5.7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10.7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 |iM. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1-10 mg/kg. En realizaciones aún adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4-3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2, 0,1-0,9, 0,2-0,8, 0,3-0,7, 0,4-0,6 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5.7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10.7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15mg/kg.
Las composiciones de factor H e inmunosupresor en realizaciones adicionales tienen niveles de pureza muy altos. En una realización, al menos el 90 % de la proteína total en una composición proporcionada en el presente documento será factor H o el inmunosupresor. En una realización preferida, al menos el 95 % de la proteína total en una composición proporcionada en el presente documento será factor H o el inmunosupresor. En otras realizaciones, al menos el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 %, el 99,5 %, o más de la proteína total de la composición será factor H o el inmunosupresor. En una realización preferida, al menos el 96 % de la proteína total de la composición será factor H o el inmunosupresor. En una realización preferida, al menos el 97 % de la proteína total de la composición será factor H o el inmunosupresor. En otra realización preferida, al menos el 98 % de la proteína total de la composición será factor H o el inmunosupresor. En otra realización preferida, al menos el 99 % de la proteína total de la composición será factor H o el inmunosupresor.
En algunas realizaciones, las composiciones descritas en el presente documento tendrán osmolaridades que son comparables a la osmolaridad fisiológica, de aproximadamente 285 a 295 mOsmol/kg (Lacy et al., Drug Information Handbook - Lexi-Comp 1999:1254). En determinadas realizaciones, la osmolaridad de la formulación será de o aproximadamente entre 200 y 350 mOsmol/kg, preferiblemente de o aproximadamente entre 240 y 300 mOsmol/kg. En realizaciones particulares, la osmolaridad de la formulación será de o aproximadamente 200 mOsmol/kg, o 210 mOsmol/kg, 220 mOsmol/kg, 230 mOsmol/kg, 240 mOsmol/kg, 245 mOsmol/kg, 250 mOsmol/kg, 255 mOsmol/kg, 260 mOsmol/kg, 265 mOsmol/kg, 270 mOsmol/kg, 275 mOsmol/kg, 280 mOsmol/kg, 285 mOsmol/kg, 290 mOsmol/kg, 295 mOsmol/kg, 300 mOsmol/kg, 310 mOsmol/kg, 320 mOsmol/kg, 330 mOsmol/kg, 340 mOsmol/kg, 340 mOsmol/kg o 350 mOsmol/kg. En aún otras realizaciones, la osmolaridad de la formulación será superior, por ejemplo de o aproximadamente entre 200 y 1000 mOsmol/kg, o de o aproximadamente 400 mOsmol/kg, 450 mOsmol/kg, 500 mOsmol/kg, 550 mOsmol/kg, 600 mOsmol/kg, 650 mOsmol/kg, 700 mOsmol/kg, 750 mOsmol/kg, 800 mOsmol/kg, 850 mOsmol/kg, 900 mOsmol/kg, 950 mOsmol/kg, 1000 mOsmol/kg o superior.
Las composiciones comentadas en el presente documento son generalmente estables en forma líquida durante un periodo de tiempo prolongado. En determinadas realizaciones, las formulaciones son estables durante al menos o aproximadamente 3 meses a temperatura ambiente, o al menos o aproximadamente 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 meses o más a temperatura ambiente. La composición también será generalmente estable durante al menos o aproximadamente 18 meses en condiciones refrigeradas (normalmente entre aproximadamente 2 °C y aproximadamente 8 °C), o durante al menos o aproximadamente 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 meses o más en condiciones refrigeradas.
En otras realizaciones, las composiciones comentadas en el presente documento son generalmente estables en forma liofilizada durante un periodo de tiempo prolongado. En determinadas realizaciones, las formulaciones son estables durante al menos o aproximadamente 3 meses a temperatura ambiente, o al menos o aproximadamente 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 o 48 meses a temperatura ambiente. La formulación también será generalmente estable durante al menos o aproximadamente 18 meses en condiciones refrigeradas (normalmente entre aproximadamente 2 °C y aproximadamente 8 °C), o durante al menos o aproximadamente 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57 o 60 meses en condiciones refrigeradas.
Métodos de prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto
En un aspecto, la presente divulgación proporciona métodos para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto por un receptor de ese aloinjerto tratando a ese receptor con una composición que comprende FH. Tal como se comentó anteriormente, el tratamiento con FH puede incluir tratamiento con una o más variantes de FH que se derivan de plasma o son recombinantes.
La prevención de rechazo de aloinjerto es de particular importancia, ya que el rechazo de un aloinjerto puede tener consecuencias graves para el receptor. Por tanto, el tratamiento para prevenir el rechazo o inhibir la progresión del rechazo es una preocupación principal en el campo del trasplante de órganos.
Los métodos de la presente divulgación pueden usarse para prevenir o inhibir el rechazo de cualquier aloinjerto, incluyendo cualquier totalidad o parte de un órgano o tejido. En realizaciones a modo de ejemplo y no limitativas, los métodos descritos en el presente documento para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto pueden usarse para aloinjertos tales como riñón, corazón, hígado, intestino, páncreas, pulmón, injerto de piel, injerto de hueso, válvula y médula ósea.
El receptor del aloinjerto también se trata con uno o más inmunosupresores además de FH con el fin de prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto. Los uno o más inmunosupresores se seleccionan de sirólimus (rapamicina), FK506, ciclosporina y tacrólimus. En realizaciones específicas, el receptor se trata con FH, FK506 y con rapamicina para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto. El tratamiento con FH y los uno o más inmunosupresores puede lograrse al mismo tiempo o en puntos de tiempo diferentes tras recibir el aloinjerto. En realizaciones adicionales, el tratamiento con FH y/o los uno o más inmunosupresores se repite periódicamente durante un periodo de tiempo tras recibir el aloinjerto, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
En realizaciones adicionales, el tratamiento con FH con uno o más inmunosupresores según la presente invención puede usarse para prevenir o inhibir rechazos de aloinjerto que incluyen, sin limitación, un órgano, una parte de un órgano o un tejido. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, el aloinjerto puede ser, sin limitación, riñón, corazón, hígado, pulmón, páncreas, intestino, un injerto de piel, un injerto de hueso, una válvula y médula ósea. En algunos aspectos, las composiciones de factor H y/o inmunosupresor de la invención pueden administrarse al receptor por medios intravenosos, intraoculares, subcutáneos y/o intramusculares. En aspectos adicionales, las composiciones de factor H y/o inmunosupresor en el presente documento pueden administrarse de manera o bien sistémica o bien local. La administración sistémica incluye, sin limitación, oral, transdérmica, subdérmica, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, transnasal, sublingual o rectal. La administración local puede incluir, sin limitación, administración directamente al aloinjerto antes y/o después del trasplante mediante perfusión, inyección u otra puesta en contacto con el aloinjerto, o mediante administración en el sitio de trasplante (antes y/o después del trasplante), o administración mediante un dispositivo de administración sostenida implantado en o cerca del sitio de trasplante.
En determinadas realizaciones, los métodos de la presente invención previenen o inhiben rechazo mediado por anticuerpos (AMR). En realizaciones adicionales, los métodos de la presente invención previenen o inhiben rechazo mediado por células (CMR). En realizaciones todavía adicionales, métodos de la presente invención previenen o inhiben una combinación de rechazo mediado por anticuerpos y por células.
En un aspecto adicional, el tratamiento con FH con o sin uno o más inmunosupresores se proporciona justo después del trasplante para prevenir o inhibir rechazo agudo, particularmente rechazo mediado por anticuerpos agudo. En un método de este tipo, el tratamiento se inicia en el momento del trasplante del aloinjerto y se continúa hasta que el aloinjerto está funcionando normalmente. Los métodos para determinar si el aloinjerto está funcionando normalmente dependerán del órgano o tejido que está trasplantándose y tales ensayos de la función normal se conocen bien en la técnica para órganos particulares. Por ejemplo, en realizaciones en las que el aloinjerto es un riñón, el tratamiento se continuará hasta que el receptor muestre valores de creatinina normales y las pruebas de biopsia sean negativas para C4d.
En todavía un aspecto adicional, el tratamiento con FH con o sin uno o más inmunosupresores se proporciona para prevenir o inhibir un rechazo retardado que se produce semanas o meses tras el trasplante. En tales situaciones, el aloinjerto funciona de manera normal inmediatamente tras el trasplante, pero después se deteriora debido a la producción de anticuerpos de novo. En este aspecto el tratamiento se iniciará cuando se manifiesten los primeros signos de rechazo y se continuará hasta que el aloinjerto esté funcionando de nuevo normalmente. De nuevo, los métodos para determinar si el aloinjerto está funcionando dependerán del órgano o tejido que está trasplantándose y se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, en realizaciones en las que el aloinjerto es un riñón, el tratamiento se continuará hasta que el receptor muestre valores de creatinina normales y las pruebas de biopsia sean negativas para C4d.
Para cualquiera de los métodos para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto comentados en el presente documento, el factor H comentado puede derivarse de plasma o ser recombinante y puede comprender además una o más variantes diferentes (incluyendo formas de longitud completa y truncadas). En realizaciones a modo de ejemplo, el factor H usado en métodos para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto incluye variantes protectoras recombinantes de factor H que comprenden una secuencia según cualquiera de las secuencias descritas en el documento US 7.745.389, incluyendo SEQ ID NO: 5 del documento US 7.745.389, que se proporciona en el presente documento como SEQ ID NO: 1 en la figura 12. En realizaciones adicionales, se usa un factor H recombinante en métodos y composiciones de la invención en las que el factor H recombinante tiene una identidad de secuencia de al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99% y el 100% con respecto a cualquiera de las secuencias descritas en el documento US 7.745.389. En realizaciones todavía adicionales, el factor H recombinante de utilidad en la presente invención tiene una identidad de secuencia de al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % y el 100 % con respecto a SEQ ID NO: 5 del documento US 7.745.389, que se proporciona en el presente documento como SEQ ID NO: 1 en la figura 12. En realizaciones aún adicionales, el factor H recombinante de utilidad en la presente invención comprende SEQ ID NO: 1 representada en la figura 12 con aproximadamente 1-100, 3-95, 5-90, 7-85, 9-80, 11-75, 13-70, 15-65, 17-60, 19-55, 21-50, 23-45, 25-40, 27-35 sustituciones de aminoácido. La siguiente discusión de métodos de tratamiento usando factor H abarca factor H derivado de plasma o recombinante, incluyendo variantes del mismo, tales como una o más de las variantes protectoras comentadas en el presente documento.
La cantidad de FH proporcionada al receptor puede variar, pero en general está en un intervalo eficaz para inhibir la activación del complemento. La inhibición del complemento puede evaluarse basándose en cualquier método conocido en la técnica, incluyendo, por ejemplo, ensayos de zimosano in vitro, ensayos para determinar la lisis de eritrocitos, ensayos de activación del complejo inmunitario y ensayos de activación de manano. En algunas realizaciones, el CR2-FH tiene una o más de las siguientes propiedades de FH: (1) unión a proteína C reactiva (CRP), (2) unión a C3b, (3) unión a heparina, (4) unión a ácido siálico, (5) unión a superficies de células endoteliales, (6) unión a receptor de integrina celular, (7) unión a patógenos, (8) actividad de cofactor C3b, (9) actividad de aceleración del deterioro de C3b, y (10) inhibición de la ruta del complemento alternativa.
En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, la cantidad de FH usada está en una cantidad eficaz para lograr una concentración en plasma de aproximadamente 1-2 mg/ml. En realizaciones todavía adicionales, la cantidad de FH usada para el tratamiento está en un intervalo de 86 mg/kg. El FH puede administrarse al receptor del aloinjerto una o más veces tras el trasplante del aloinjerto a una gama de intervalos durante un periodo de días, semanas o meses, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
En realizaciones en las que se proporcionan uno o más inmunosupresores al receptor, la cantidad de los uno o más inmunosupresores también puede variar, pero en general está en un intervalo eficaz para inhibir rechazo de aloinjerto. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, la cantidad de inmunosupresores usada está en una cantidad de aproximadamente 0,1-10 mg/kg. Los uno o más inmunosupresores pueden administrarse al receptor del aloinjerto una o más veces tras el trasplante del aloinjerto a una gama de intervalos durante un periodo de días, semanas o meses, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
Según cualquiera de lo anterior, el FH proporcionado al receptor para prevenir rechazo de aloinjerto se proporciona en una dosis terapéuticamente eficaz de entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En otras realizaciones, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En aún otras realizaciones, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml. En otra realización, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En otra realización, el factor H está presente a una concentración de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En aún otras realizaciones, el factor H puede estar presente a aproximadamente 0,01 mg/ml, o a aproximadamente 0,02 mg/ml, 0,03 mg/ml, 0,04 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,06 mg/ml, 0,07 mg/ml, 0,08 mg/ml, 0,09 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml, 0,8 mg/ml, 0,9 mg/ml, 1,0 mg/ml, 1,1 mg/ml, 1,2 mg/ml, 1,3 mg/ml, 1,4 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1,6 mg/ml, 1,7 mg/ml, 1,8 mg/ml, 1,9 mg/ml, 2,0 mg/ml, 2,5 mg/ml, 3,0 mg/ml, 3.5 mg/ml, 4,0 mg/ml, 4,5 mg/ml, 5,0 mg/ml, 5,5 mg/ml, 6,0 mg/ml, 6,5 mg/ml, 7,0 mg/ml, 7,5 mg/ml, 8,0 mg/ml, 8.5 mg/ml, 9,0 mg/ml, 9,5 mg/ml, 10,0 mg/ml, o una concentración superior. En realizaciones adicionales, el factor H está presente a una concentración en un intervalo de aproximadamente 0,1-15, 0,3-14,5, 0,5-14, 0,7-13,5, 0,9-13, 1,1-12,5, 1,3-12, 1,5-11,5, 1,7-11, 1,9-10,5, 2,1-10, 2,3-9,5, 2,5-9, 2,7-8,5, 2,9-8, 3,1-7,5, 3,3-7, 3,5-6,5, 3,7-6, 3,9­ 5,5, 4,1-5, 4,3-4,5 mg/ml.
En una realización, la concentración de una formulación de factor H relativamente puro puede determinarse mediante espectroscopía (es decir, proteína total medida a A280) u otra determinación a granel (por ejemplo, ensayo de Bradford, tinción con plata, peso de un polvo liofilizado, etc.). En otras realizaciones, la concentración de factor H puede determinarse mediante un ensayo ELISA de factor H (por ejemplo, mg/ml de antígeno).
En realizaciones todavía adicionales, la presente divulgación proporciona composiciones acuosas de factor H que comprenden una concentración de proteína de o aproximadamente entre 10 g/l y 250 g/l. En determinadas realizaciones, la concentración de proteína de la composición de factor H es de o aproximadamente entre 50 g/l y 200 g/l, o de o aproximadamente entre 70 g/l y 150 g/l, o de o aproximadamente entre 90 g/l y 120 g/l, o de o aproximadamente entre 30 g/l y 70 g/l, o de o aproximadamente entre 40 g/l y 60 g/l o cualquier concentración adecuada dentro de estos intervalos, por ejemplo de o aproximadamente 10 g/l, o de o aproximadamente 15 g/l, 20 g/l, 25 g/l, 30 g/l, 35 g/l, 40 g/l, 45 g/l, 50 g/l, 55 g/l, 60 g/l, 65 g/l, 70 g/l, 75 g/l, 80 g/l, 85 g/l, 90 g/l, 95 g/l, 100 g/l, 105 g/l, 110 g/l, 115 g/l, 120 g/l, 125 g/l, 130 g/l, 135 g/l, 140 g/l, 145 g/l, 150 g/l, 155 g/l, 160 g/l, 165 g/l, 170 g/l, 175 g/l, 180 g/l, 185 g/l, 190 g/l, 195 g/l, 200 g/l, 205 g/l, 210 g/l, 215 g/l, 220 g/l, 225 g/l, 230 g/l, 235 g/l, 240 g/l, 245 g/l, 250 g/l, o superior. En una realización preferida, las composiciones de factor H que tienen altas concentraciones de proteína también tendrán altos niveles de pureza. En una realización, al menos el 90 % de la proteína en la composición será factor H. En una realización preferida, al menos el 95 % de la proteína en la composición será factor H.
En realizaciones adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En otras realizaciones, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En aún otras realizaciones, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml. En otra realización, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En otra realización, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En aún otras realizaciones, el factor H da como resultado una concentración en plasma de aproximadamente 0,01 mg/ml, o aproximadamente 0,02 mg/ml, 0,03 mg/ml, 0,04 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,06 mg/ml, 0,07 mg/ml, 0,08 mg/ml, 0,09 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml, 0,8 mg/ml, 0,9 mg/ml, 1,0 mg/ml, 1,1 mg/ml, 1,2 mg/ml, 1,3 mg/ml, 1,4 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1,6 mg/ml, 1,7 mg/ml, 1,8 mg/ml, 1,9 mg/ml, 2,0 mg/ml, 2,5 mg/ml, 3,0 mg/ml, 3,5 mg/ml, 4,0 mg/ml, 4,5 mg/ml, 5,0 mg/ml, 5,5 mg/ml, 6,0 mg/ml, 6,5 mg/ml, 7,0 mg/ml, 7,5 mg/ml, 8,0 mg/ml, 8,5 mg/ml, 9,0 mg/ml, 9,5 mg/ml, 10,0 mg/ml, o una concentración superior. En realizaciones adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor en un intervalo de aproximadamente 0,1-15, 0,3-14,5, 0,5-14, 0,7-13,5, 0,9-13, 1,1-12,5, 1,3-12, 1,5-11,5, 1,7-11, 1,9-10,5, 2,1-10, 2,3-9,5, 2,5-9, 2,7-8,5, 2,9-8, 3,1-7,5, 3,3-7, 3,5-6,5, 3,7-6, 3,9-5,5, 4,1-5, 4,3-4,5 mg/ml. La concentración de nivel en plasma puede determinarse usando ensayos convencionales conocidos en la técnica.
En realizaciones adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 50­ 150 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 52-145, 54-140, 56-135, 58-130, 60-125, 62-120, 64-115, 66-110, 68-105, 70-100, 72-95, 74-90, 76-87, 78-86, 80-85 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 70, 70,5, 71, 71,5, 72, 72,5, 73, 73,5, 74, 74,5, 75, 75,5, 76, 76,5, 77, 77.5, 78, 78,5, 79, 79,5, 80, 80,5, 81, 81,5, 82, 82,5, 83, 83,5, 84, 84,5, 85, 85,5, 86, 86,5, 87, 87,5, 88, 88,5, 89, 89.5, 90 mg/kg.
En realizaciones adicionales, la presente divulgación proporciona métodos de prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto administrando tanto factor H como uno o más inmunosupresores al receptor. El FH y los uno o más inmunosupresores pueden administrarse al receptor al mismo tiempo o en puntos de tiempo diferentes antes y/o tras el trasplante. El FH y los uno o más inmunosupresores pueden administrarse además en la misma composición o como composiciones diferentes. Tal como se apreciará, cualquiera de las cantidades e intervalos de concentración y dosis comentados anteriormente para FH pueden proporcionarse al receptor en cualquier combinación con cualquiera de las cantidades e intervalos de concentración y dosis descritos en el presente documento para los uno o más inmunosupresores.
En realizaciones adicionales y según cualquiera de lo anterior, los uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus) se proporcionan en una concentración de aproximadamente 0,1-10 |iM. En realizaciones adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1.4- 3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 |iM. En realizaciones todavía adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1,2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3.7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8.9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 |iM.
En realizaciones todavía adicionales, se proporcionan uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus) al receptor en una concentración de aproximadamente 0,1-10 mg/kg. En realizaciones adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4­ 3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, el inmunosupresor se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1,2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3.7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8.9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 mg/kg.
En realizaciones aún adicionales, se administra FK506 al receptor además de FH para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto. En realizaciones todavía adicionales, se administra FK506 al receptor en una concentración de aproximadamente 0,1-10 |iM. En realizaciones adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4­ 3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 |iM. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1,2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4.5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9.7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 |iM. En todavía adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 0,1-10 mg/kg. En realizaciones adicionales, el FK506 se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8­ 6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4-3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, el FK506 se proporciona en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2.3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7.5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 1-30, 3,5-29,5, 4-29, 4,5-28,5, 5-28, 5,5-27,5, 6-27, 6,5-26,5, 7-26, 7,5-25,5, 8-25, 8,5-24,5, 9-24, 9.5- 23,5, 10-23, 10,5-22,5, 11-22, 11,5-21,5, 12-21, 12,5-20,5, 13-20, 13,5-19,5, 14-19, 14,5-18,5, 15-18, 15,5-, 7,5, 16-17, 2-4, 2,5-3,5, 3-3,5 mg/kg. En realizaciones aún adicionales, se proporciona FK506 en una concentración de aproximadamente 1, 1,2, 1,4, 1,6, 1,8, 2, 2,2, 2,4, 2,6, 2,8, 3, 3,2, 3,4, 3,6, 3,8, 4, 4,2, 4,4, 4,6, 4,8, 5, 5,2, 5,4, 5,6, 5.8, 6, 6,2, 6,4, 6,6, 6,8, 7, 7,2, 7,4, 7,6, 7,8, 8, 8,2, 8,4, 8,6, 8,8, 9, 9,2, 9,4, 9,6, 9,8, 10, 10,2, 10,4, 10,6, 10,8, 11, 11,2, 11,4, 11,6, 11,8, 12 mg/kg.
En realizaciones aún adicionales se administra rapamicina al receptor además de FH para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto. En realizaciones todavía adicionales, se administra rapamicina al receptor en una concentración de aproximadamente 0,1-10 |iM. En realizaciones adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4-8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4­ 3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2 |iM. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4.3, 4,5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9.5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 |iM. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1-10 mg/kg. En realizaciones aún adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1-10, 0,2-9,5, 0,3-9, 0,4­ 8,5, 0,5-8, 0,6-7,5, 0,7-7, 0,8-6,5, 0,9-6, 1-5,5, 1,1-5, 1,2-4,5, 1,3-4, 1,4-3,5, 1,5-3, 1,6-2,5, 1,7-2, 0,1-0,9, 0,2-0,8, 0,3-0,7, 0,4-0,6 mg/kg. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona rapamicina en una concentración de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 0,9, 1,1, 1,3, 1,5, 1,7, 1,9, 2,1, 2,3, 2,5, 2,7, 2,9, 3,1, 3,3, 3,5, 3,7, 3,9, 4,1, 4,3, 4.5, 4,7, 4,9, 5,1, 5,3, 5,5, 5,7, 5,9, 6,1, 6,3, 6,5, 6,7, 6,9, 7,1, 7,3, 7,5, 7,7, 7,9, 8,1, 8,3, 8,5, 8,7, 8,9, 9,1, 9,3, 9,5, 9,7, 9,9, 10,1, 10,3, 10,5, 10,7, 10,9, 11,1, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5 y 15 mg/kg.
En realizaciones adicionales y según cualquiera de lo anterior, la presente divulgación proporciona métodos de prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto tratando al receptor con factor H, FK506 y rapamicina. En realizaciones adicionales, se proporciona esta terapia de combinación en la que las concentraciones de factor H, FK506 y rapamicina están en cualquier combinación de las combinaciones anteriormente descritas. En realizaciones a modo de ejemplo, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml y se proporcionan FK506 y rapamicina en dosis tal como se indican como variantes 1-20 en la tabla A. Tal como se apreciará, el factor H, FK506 y rapamicina pueden proporcionarse en la misma composición o en composiciones independientes al receptor y también pueden administrarse al receptor al mismo tiempo o en puntos de tiempo diferentes antes y/o tras el trasplante.
En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de intervalos de 0,1 -10, 1-9, 2-8, 3-7, 4-6, 1-2 mg/ml, y se proporcionan FK506 y rapamicina en dosis tal como se indican como variaciones 1-20 en la tabla A. Tal como se comentó anteriormente, factor H, FK506 y rapamicina pueden proporcionarse en la misma composición o en composiciones independientes al receptor y también pueden administrarse al receptor al mismo tiempo o en puntos de tiempo diferentes antes y/o tras el trasplante.
En realizaciones aún adicionales, se proporciona factor H en un intervalo de aproximadamente 50-150 mg/kg y se proporcionan FK506 y rapamicina en dosis tal como se indican como variaciones 1-20 en la tabla A. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H a una dosis de aproximadamente 70, 70,5, 71, 71,5, 72, 72,5, 73, 73,5, 74, 74,5, 75, 75,5, 76, 76,5, 77, 77,5, 78, 78,5, 79, 79,5, 80, 80,5, 81, 81,5, 82, 82,5, 83, 83,5, 84, 84,5, 85, 85,5, 86, 86,5, 87, 87,5, 88, 88,5, 89, 89,5, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170 mg/kg y se proporcionan FK506 y rapamicina en dosis tal como se indican como variaciones 1-20 en la tabla A. Tal como se comentó anteriormente, factor H, FK506 y rapamicina pueden proporcionarse en la misma composición o en composiciones independientes al receptor y también pueden administrarse al receptor al mismo tiempo o en puntos de tiempo diferentes antes y/o tras el trasplante.
Tabla A: Realizaciones a modo de ejemplo de concentraciones de FK506 y rapamicina para su uso en métodos de la divulgación
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*Var. = Variación
Tal como se comentó anteriormente, uno cualquiera de factor H, FK506 y rapamicina puede administrarse de manera sistémica o local. En realizaciones adicionales, factor H, FK506 y rapamicina pueden administrarse mediante un método seleccionado independientemente de medios intravenosos, subcutáneos, intramusculares y orales. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales en las que se proporcionan las tres terapias al receptor, el factor H puede administrarse por vía intravenosa o por vía intraperitoneal, FK506 puede administrarse por vía subcutánea, y rapamicina puede administrarse por vía intravenosa o por vía intraperitoneal. Tal como se apreciará, cualquiera de estas administraciones puede abarcar cualquiera de las dosis y concentraciones comentadas en el presente documento.
Los métodos de prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto proporcionados en el presente documento incluyen además administrar factor H con o sin uno o más inmunosupresores adicionales en una única administración o a intervalos repetidos tras el trasplante. En realizaciones adicionales, el factor H y/o los uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, FK506 y/o rapamicina) se administran al receptor cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 días. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, el factor H y/o los uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, FK506 y/o rapamicina) se administran al receptor cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 semanas. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, el factor H y/o los uno o más inmunosupresores (incluyendo, sin limitación, FK506 y/o rapamicina) se administran al receptor cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 meses. Tal como se apreciará, en realizaciones en las que se proporciona una combinación de terapias al receptor, las diferentes terapias pueden proporcionarse al receptor a intervalos de tiempo diferentes tras el trasplante del aloinjerto. Por ejemplo, en realizaciones a modo de ejemplo, se proporciona factor H al receptor cada día y se proporcionan FK506 y rapamicina al receptor en cualquiera de las administraciones de dosis representadas por las variaciones 21-56 en la tabla 6. En realizaciones a modo de ejemplo adicionales, se proporciona factor H al receptor cada dos días y se proporcionan FK506 y rapamicina al receptor en cualquiera de las administraciones de dosis representadas por las variaciones 21-56 en la tabla 6. En realizaciones a modo de ejemplo todavía adicionales, se proporciona factor H al receptor en una concentración y a un intervalo para mantener un nivel en plasma de factor H de aproximadamente 1-2 mg/ml, y se proporcionan FK506 y rapamicina al receptor en cualquiera de las administraciones de dosis representadas por las variaciones 21-56 en la tabla 6.
Tabla B: Realizaciones a modo de ejemplo de administraciones de dosis de FK506 y rapamicina
Figure imgf000015_0001
*Var. = Variación
En realizaciones todavía adicionales y según cualquiera de lo anterior, la administración de factor H con o sin administración adicional de uno o más inmunosupresores se proporciona a intervalos diferentes dependiendo del periodo de tiempo durante el que el receptor ha tenido el aloinjerto. Por ejemplo, en algunas realizaciones a modo de ejemplo, se proporciona factor H cada dos días hasta el día tras la cirugía (POD) 14 y después dos veces por semana hasta al menos POD 60. En realizaciones adicionales, se proporciona factor H cada dos días hasta POD 14 y después dos veces por semana hasta al menos POD 60 y se proporciona FK506 diariamente hasta POD10 y después cada dos días hasta al menos POD60. En realizaciones todavía adicionales, se proporciona factor H cada dos días hasta POD 14 y después dos veces por semana hasta al menos POD 60 y se proporciona FK506 diariamente hasta POD10 y después cada dos días hasta al menos POD60 y se proporciona rapamicina cada día hasta POD10.
En la tabla C se proporcionan realizaciones a modo de ejemplo adicionales de regímenes de tratamiento, uno cualquiera de factor H o uno o más inmunosupresores pueden proporcionarse en cualquier combinación de intervalos y periodos de tiempo tal como se representa por las variaciones 57-84 en la tabla C.
Tabla C: Realizaciones a modo de ejemplo de regímenes de tratamiento
Figure imgf000015_0002
*Var. = Variación
En realizaciones adicionales y según cualquiera de lo anterior, el factor H y/o uno o más de los inmunosupresores comentados en el presente documento, además de administrarse al receptor tras el trasplante del aloinjerto, también pueden administrarse a cualquiera del receptor o el aloinjerto o tanto al receptor como al aloinjerto antes del trasplante.
Métodos de tratamiento de artritis reumatoide
En un aspecto, la presente descripción proporciona métodos para tratar artritis reumatoide en un sujeto administrando una composición que comprende FH a ese sujeto. Tal como se comentó anteriormente, el FH usado para tratar al sujeto puede comprender una o más variantes de FH, y puede derivarse de plasma o ser recombinante.
En casos específicos, administrar FH a un sujeto según los métodos descritos en el presente documento reduce la inflamación de las articulaciones en el sujeto. En casos adicionales, la cantidad de FH administrada al sujeto y/o el periodo de tiempo durante el que se administra FH es una cantidad eficaz para reducir la inflamación de las articulaciones en el sujeto. En la técnica se conocen métodos de evaluación y medición de la inflamación de las articulaciones e incluyen, en ejemplos no limitativos, métodos de obtención de imágenes y medición de marcadores de inflamación en sangre. Los métodos de obtención de imágenes incluyen, sin limitación, rayos X, exploraciones de PET, micro-TAC, IRM y similares. Los marcadores de inflamación en sangre incluyen, sin limitación, velocidad de sedimentación globular, proteína C reactiva (CRP), albúmina, colesterol y viscosidad de plasma.
En casos adicionales, administrar FH a un sujeto según los métodos descritos en el presente documento inhibe una respuesta inflamatoria inicial. En casos adicionales, administrar FH a un sujeto según los métodos descritos en el presente documento fomenta la resolución de una respuesta inflamatoria que ya está en curso. En casos todavía adicionales, la cantidad de FH administrada al sujeto y/o el periodo de tiempo durante el que se administra FH es una cantidad eficaz para inhibir una respuesta inflamatoria inicial y/o fomenta la resolución de una respuesta inflamatoria en el sujeto.
En casos todavía adicionales, administrar FH a un sujeto según los métodos descritos en el presente documento da como resultado una reducción de exostosis (una excrecencia de tejido cartilaginoso sobre hueso) en el sujeto. En casos todavía adicionales, la cantidad de FH administrada al sujeto y/o el periodo de tiempo durante el que se administra FH es una cantidad eficaz para reducir exostosis en el sujeto.
En casos adicionales, administrar FH a un sujeto según los métodos descritos en el presente documento da como resultado una reducción del daño al cartílago en comparación con un sujeto que no ha recibido FH. En casos todavía adicionales la cantidad de FH administrada al sujeto y/o el periodo de tiempo durante el que se administra FH es una cantidad eficaz para reducir el daño al cartílago en el sujeto en comparación con un sujeto que no ha recibido FH.
Para cualquiera de los métodos para prevenir o tratar artritis reumatoide comentados en el presente documento, el factor H comentado puede derivarse de plasma o ser recombinante y puede comprender además una o más variantes diferentes (incluyendo formas de longitud completa y truncadas). En casos a modo de ejemplo, el factor H usado para tratar artritis reumatoide incluye una o más variantes protectoras recombinantes de factor H que comprenden una secuencia según cualquiera de las secuencias descritas en el documento US 7.745.389, incluyendo SEQ ID NO: 5 del documento US 7.745.389, que se proporciona en el presente documento como SEQ ID NO: 1 en la figura 12. En casos adicionales, se usa un factor H recombinante para tratar artritis reumatoide en un sujeto en el que ese factor H recombinante tiene una identidad de secuencia de al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % y el 100 % con respecto a cualquiera de las secuencias descritas en el documento US 7.745.389. En casos todavía adicionales, el factor H recombinante de utilidad en la presente descripción tiene una identidad de secuencia de al menos el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % y el 100 % con respecto a SEQ ID NO: 5 del documento US 7.745.389, que se proporciona en el presente documento como SEQ ID NO: 1 en la figura 12. En casos aún adicionales, el factor H recombinante usado para tratar artritis reumatoide según métodos de la presente descripción comprende SEQ ID NO: 1 representada en la figura 12 con aproximadamente 1-100, 3-95, 5-90, 7-85, 9-80, 11-75, 13-70, 15-65, 17-60, 19-55, 21-50, 23-45, 25-40, 27-35 sustituciones de aminoácido. La siguiente discusión de métodos de tratamiento usando factor H abarca factor H derivado de plasma o recombinante, incluyendo variantes del mismo, tales como una o más de las variantes protectoras comentadas en el presente documento.
En casos adicionales, la cantidad de FH administrada al sujeto es una cantidad eficaz para reducir la inflamación, exostosis o daño al cartílago tal como se describió anteriormente. En casos todavía adicionales y tal como se comentó anteriormente para la prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto, la cantidad de FH administrada a un sujeto con artritis reumatoide puede variar, pero en general está en un intervalo eficaz para inhibir la activación del complemento. La inhibición del complemento puede evaluarse basándose en cualquier método conocido en la técnica, incluyendo, por ejemplo, ensayos de zimosano in vitro, ensayos para determinar la lisis de eritrocitos, ensayos de activación del complejo inmunitario y ensayos de activación de manano. En algunos casos, el CR2-FH tiene una o más de las siguientes propiedades de FH: (1) unión a proteína C reactiva (CRP), (2) unión a C3b, (3) unión a heparina, (4) unión a ácido siálico, (5) unión a superficies de células endoteliales, (6) unión a receptor de integrina celular, (7) unión a patógenos, (8) actividad de cofactor C3b, (9) actividad de aceleración del deterioro de C3b y (10) inhibición de la ruta del complemento alternativa.
En casos a modo de ejemplo adicionales, la cantidad de FH usada está en una cantidad eficaz para lograr una concentración en plasma de aproximadamente 1-2 mg/ml. En casos adicionales, la cantidad de fH usada para el tratamiento es de aproximadamente 86 mg/kg. El FH puede administrarse al sujeto una o más veces a una gama de intervalos durante un periodo de días, semanas o meses, tal como se describe en más detalle en el presente documento.
En algunos aspectos de la descripción, puede administrarse factor H al receptor por medios intravenosos, intraoculares, subcutáneos y/o intramusculares. En aspectos adicionales, las composiciones de factor H y/o inmunosupresor en el presente documento pueden administrarse de manera o bien sistémica o bien local para tratar artritis reumatoide. La administración sistémica incluye, sin limitación, oral, transdérmica, subdérmica, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, transnasal, sublingual o rectal. La administración local puede incluir, sin limitación, administración directamente a una o más articulaciones mediante perfusión, inyección (incluyendo inyección intraarticular) u otra puesta en contacto con las una o más articulaciones, o mediante un dispositivo de administración sostenida implantado en o cerca de una o más articulaciones afectadas por la artritis reumatoide. La administración local a articulaciones puede incluir administración a cualquier articulación afectada particularmente por artritis reumatoide, incluyendo, sin limitación, articulaciones de las manos, pies, columna cervical, hombro y rodilla.
Según cualquiera de lo anterior, el FH proporcionado al receptor para tratar artritis reumatoide está en una dosis terapéuticamente eficaz de entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10mg/ml. En otros casos, se administra factor H a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En aún otros casos, se administra factor H a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml. En otro caso, se administra factor H a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En otro caso, se administra factor H a una concentración de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En aún otros casos, se administra factor H a aproximadamente 0,01 mg/ml, o a aproximadamente 0,02 mg/ml, 0,03 mg/ml, 0,04 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,06 mg/ml, 0,07 mg/ml, 0,08 mg/ml, 0,09 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml, 0,8 mg/ml, 0,9 mg/ml, 1.0 mg/ml, 1,1 mg/ml, 1,2 mg/ml, 1,3 mg/ml, 1,4 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1,6 mg/ml, 1,7 mg/ml, 1,8 mg/ml, 1,9 mg/ml, 2.0 mg/ml, 2,5 mg/ml, 3,0 mg/ml, 3,5 mg/ml, 4,0 mg/ml, 4,5 mg/ml, 5,0 mg/ml, 5,5 mg/ml, 6,0 mg/ml, 6,5 mg/ml, 7.0 mg/ml, 7,5 mg/ml, 8,0 mg/ml, 8,5 mg/ml, 9,0 mg/ml, 9,5 mg/ml, 10,0 mg/ml, o una concentración superior. En casos adicionales, se administra factor H a una concentración en un intervalo de aproximadamente 0,1-15, 0,3-14,5, 0,5-14, 0,7-13,5, 0,9-13, 1,1-12,5, 1,3-12, 1,5-11,5, 1,7-11, 1,9-10,5, 2,1-10, 2,3-9,5, 2,5-9, 2,7-8,5, 2,9-8, 3,1-7,5, 3,3-7, 3,5-6,5, 3,7-6, 3,9-5,5, 4,1-5, 4,3-4,5 mg/ml.
En casos todavía adicionales, se administran composiciones acuosas de factor H que comprenden una concentración de proteína de o aproximadamente entre 10 g/l y 250 g/l a un sujeto para el tratamiento de artritis reumatoide. En determinados casos, la concentración de proteína de la composición de factor H es de o aproximadamente entre 50 g/l y 200 g/l, o de o aproximadamente entre 70 g/l y 150 g/l, o de o aproximadamente entre 90 g/l y 120 g/l, o de o aproximadamente entre 30 g/l y 70 g/l, o de o aproximadamente entre 40 g/l y 60 g/l o cualquier concentración adecuada dentro de estos intervalos, por ejemplo de o aproximadamente 10 g/l, o de o aproximadamente 15 g/l, 20 g/l, 25 g/l, 30 g/l, 35 g/l, 40 g/l, 45 g/l, 50 g/l, 55 g/l, 60 g/l, 65 g/l, 70 g/l, 75 g/l, 80 g/l, 85 g/l, 90 g/l, 95 g/l, 100 g/l, 105 g/l, 110 g/l, 115 g/l, 120 g/l, 125 g/l, 130 g/l, 135 g/l, 140 g/l, 145 g/l, 150 g/l, 155 g/l, 160 g/l, 165 g/l, 170 g/l, 175 g/l, 180 g/l, 185 g/l, 190 g/l, 195 g/l, 200 g/l, 205 g/l, 210 g/l, 215 g/l, 220 g/l, 225 g/l, 230 g/l, 235 g/l, 240 g/l, 245 g/l, 250 g/l, o superior. En un caso preferido, las composiciones de factor H que tienen altas concentraciones de proteína también tendrán altos niveles de pureza. En un caso, al menos el 90 % de la proteína en la composición será factor H. En un caso preferido, al menos el 95 % de la proteína en la composición será factor H.
En casos adicionales, se proporciona factor H para el tratamiento de artritis reumatoide en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En otros casos, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml. En aún otros casos, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml. En otro caso, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En otro caso, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 2 mg/ml. En aún otros casos, el factor H da como resultado una concentración en plasma de aproximadamente 0,01 mg/ml, o de aproximadamente 0,02 mg/ml, 0,03 mg/ml, 0,04 mg/ml, 0,05 mg/ml, 0,06 mg/ml, 0,07 mg/ml, 0,08 mg/ml, 0,09 mg/ml, 0,1 mg/ml, 0,2 mg/ml, 0,3 mg/ml, 0,4 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml, 0,8 mg/ml, 0,9 mg/ml, 1,0 mg/ml, 1,1 mg/ml, 1,2 mg/ml, 1,3 mg/ml, 1,4 mg/ml, 1,5 mg/ml, 1,6 mg/ml, 1,7 mg/ml, 1,8 mg/ml, 1,9 mg/ml, 2,0 mg/ml, 2,5 mg/ml, 3,0 mg/ml, 3,5 mg/ml, 4.0 mg/ml, 4,5 mg/ml, 5,0 mg/ml, 5,5 mg/ml, 6,0 mg/ml, 6,5 mg/ml, 7,0 mg/ml, 7,5 mg/ml, 8,0 mg/ml, 8,5 mg/ml, 9.0 mg/ml, 9,5 mg/ml, 10,0 mg/ml, o una concentración superior. En casos adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz que da como resultado una concentración de nivel en plasma en el receptor en un intervalo de aproximadamente 0,1-15, 0,3-14,5, 0,5-14, 0,7-13,5, 0,9-13, 1,1-12,5, 1,3-12, 1,5-11,5, 1,7-11, 1,9-10,5, 2,1-10, 2,3-9,5, 2,5-9, 2,7-8,5, 2,9-8, 3,1-7,5, 3,3-7, 3,5-6,5, 3,7-6, 3,9-5,5, 4,1-5, 4,3-4,5 mg/ml. La concentración de nivel en plasma puede determinarse usando ensayos convencionales conocidos en la técnica.
En casos adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 50­ 150 mg/kg para el tratamiento de artritis reumatoide. En casos todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 52-145, 54-140, 56-135, 58-130, 60-125, 62-120, 64-115, 66­ 110, 68-105, 70-100, 72-95, 74-90, 76-87, 78-86, 80-85 mg/kg. En casos todavía adicionales, se proporciona factor H en una dosis terapéuticamente eficaz de aproximadamente 70, 70,5, 71, 71,5, 72, 72,5, 73, 73,5, 74, 74,5, 75, 75.5, 76, 76,5, 77, 77,5, 78, 78,5, 79, 79,5, 80, 80,5, 81, 81,5, 82, 82,5, 83, 83,5, 84, 84,5, 85, 85,5, 86, 86,5, 87, 87.5, 88, 88,5, 89, 89,5, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170 mg/kg.
Los métodos de tratamiento de artritis reumatoide proporcionados en el presente documento incluyen además administrar factor H en una única administración o a intervalos repetidos. En casos adicionales, se administra factor H al receptor cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 días. En casos a modo de ejemplo adicionales, el factor H se administra al receptor una vez cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 semanas. En casos a modo de ejemplo adicionales, se administra factor H al receptor cada 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 meses.
En casos todavía adicionales y según cualquiera de lo anterior, se proporciona factor H a intervalos diferentes. Por ejemplo, y tal como se comentó anteriormente, puede administrarse factor H durante un periodo de tiempo suficiente para reducir la inflamación de las articulaciones. En algunos casos a modo de ejemplo, puede administrarse factor H cada dos días hasta que se reduce la inflamación. En casos a modo de ejemplo adicionales, puede proporcionarse factor H en un bolo inicial para dar como resultado un nivel en plasma superior a 1-5 mg/ml y después pueden proporcionarse administraciones adicionales de factor H cada 12, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días hasta que se reduce la inflamación.
Ejemplos
Ejemplo 1: Uso de factor H para tratar rechazo de trasplante.
Se usaron ratones macho C3H (H-2k) y C57BL/6 (B6, H-2b) (25-30 g) para determinar la eficacia de factor H del complemento (CFH) durante el rechazo de trasplante. Los ratones C3H sirvieron como donantes de injerto de piel y riñón para sensibilización previa y trasplante de riñón. Se usaron ratones macho C57BL/c (B6) como receptores. Se sensibilizaron previamente los receptores B6 mediante trasplante de los injertos de piel de donante, y posteriormente se sometieron a trasplante de aloinjertos de riñón entre 15 y 20 días tras el trasplante de piel. Se trataron los ratones B6 con vehículo (controles), CFH (día -1, día 0, después cada dos días hasta el día 10; 8 mg/ratón, i.p.), FK506 (diariamente desde el día -1 hasta el día 10; 1 mg/kg s.c.) o la combinación de CFH+FK506 usando la misma pauta posológica que los tratamientos individuales. Se monitorizaron los ratones diariamente para detectar signos de rechazo. Se monitorizó la función renal midiendo los niveles de creatinina en suero.
Los riñones C3H sin tratar injertados en receptores previamente sensibilizados se rechazaron rápidamente, tal como se indica mediante un nivel de creatinina (Cr) aumentado medido en POD7 (figura 2). Los injertos sin tratar perdieron función de injerto (Cr >2 mg/dl) con una mediana de la supervivencia de 7,5 días debido a deterioro de la función de injerto. El tratamiento con CFH solo redujo los niveles de Cr en plasma (1,4 ± 0,2 mg/dl, frente a 1,9 ±0,1 en controles), mejorando por tanto la función de aloinjerto renal. CFH en combinación con FK506 mejoró adicionalmente la función de injerto, lo que sugiere que CFH puede limitar la IRI en el entorno de trasplante agudo (figura 2).
Ejemplo 2. Uso de rapamicina en combinación con factor H para tratar rechazo de trasplante.
Se usaron ratones macho C3H (H-2k) y C57BL/6 (B6, H-2b) (25-30 g) para determinar la eficacia de rapamicina (RAPA) en combinación con factor H (FH) durante el rechazo de trasplante. Los ratones C3H sirvieron como donantes de injerto de piel y riñón para sensibilización previa y trasplante de riñón. Se usaron ratones macho C57BL/c (B6) como receptores. Se sensibilizaron previamente los receptores B6 mediante trasplante de los injertos de piel de donante, y posteriormente se sometieron a trasplante con aloinjertos de riñón entre 15 y 20 días tras el trasplante de piel. Se trataron los ratones B6 sometidos a trasplante con rapamicina (RAPA) sola (diariamente desde el día -1 hasta el día 10; 0,3 mg/kg, i.p.), RAPA+CFH (tratamiento con CFH = día -1, día 0, después cada dos días hasta el día 14, después 2 veces por semana hasta el punto final; 8 mg/ratón, i.p., los receptores con CFH i.p. también recibieron una infusión i.v. de una única dosis de infusión de adrenomedulina mezclada con CFH durante cirugía de trasplante, 100 mg/kg; tratamiento con RAPA = diariamente desde el día -1 hasta el día 10; 0,3 mg/kg, i.p.), RAPA+FK506 (FK = diariamente desde el día -1 hasta el día 10, después cada dos días hasta el punto final; 3 mg/kg s.c.; RAPA = diariamente desde el día -1 hasta el día 10; 0,3 mg/kg, i.p.) o la combinación de RAPA+CFH+FK506 usando la misma pauta posológica que anteriormente. Los grupos de experimentación fueron a) txs de C3H a B6 sensibilización previa RAPA; b) txs de C3H a B6 sensibilización previa CFH RAPA; c) txs de C3H a B6 sensibilización previa FK RAPA; y d) txs de C3H a B6 sensibilización previa CFH FK RAPA. (“txs” = “trasplante/injerto de piel”)
Se monitorizaron los ratones diariamente para detectar signos de rechazo y se sacrificaron en el punto final del experimento, que se definió como cuando los trasplantes desarrollaron un deterioro funcional debido a rechazo grave o en POD60 y POD100. Se monitorizó la función de injerto renal mediante niveles de creatinina en plasma (Cr), nitrógeno ureico (BUN) y hematocrito (Hct) mediante un analizador portátil I-Stat (Abaxis). Se determinaron los anticuerpos específicos de donante (DSA) circulantes antes del trasplante de riñón y en el punto final del estudio mediante citometría de flujo.
CFH en combinación con RAPA y FK (CFH+ RAPA+FK) protegió el rechazo de aloinjerto de riñón frente a AMR y CMR agudos, y prolongó la supervivencia de aloinjerto de riñón en los receptores previamente sensibilizados. Tal como se muestra en la tabla 1 y la figura 3, la monoterapia con RAPA a corto plazo o RAPA en combinación con CFH (CFH+RAPA) demostraron un efecto protector. Con una mejora de la función de injerto inicial a POD7 (figura 4), el tratamiento con RAPA sola o RAPA+FH prolongó la supervivencia de aloinjerto desde 8 días (tiempo de supervivencia medio, “MST”) en los aloinjertos sin tratar (controles) hasta 14 y 16 días (MST), respectivamente. El tratamiento con combinación de RAPA y Fk (RAPA+FK) prolongó adicionalmente la supervivencia de aloinjerto renal hasta 44 días (MST). La terapia triple con CFH+RAPA+FK impidió eficazmente el rechazo de injerto y logró la supervivencia de aloinjerto de riñón a largo plazo. Como resultado, el 87,5 % (7/8) de los aloinjertos renales con la terapia triple lograron supervivencia a largo plazo (>60 días) (p <0,05 frente a RAPA+FK).
Tabla 1. Supervivencia de injerto individual en modelo de trasplante de riñón previamente sensibilizado.
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El tratamiento con CFH+RAPA+FK conservó la función de aloinjerto renal a largo plazo en los receptores previamente sensibilizados. Para evaluar la influencia de CFH sobre la función renal, se extrajeron muestras de plasma de los aloinjertos de riñón. Se midieron Cr, BUN (nitrógeno ureico) y hematocrito (Hct) en POD7, POD21 y POD60, o rechazo terminal. Las concentraciones en plasma de las sustancias de desecho, tales como Cr y BUN, se usan habitualmente en la práctica clínica para determinar la función renal. La elevación de Cr y BUN más allá del intervalo normal (en ratones B6 normales, Cr = 0,2 ± 0,05 mg/dl, BUN=34 ± 8,81 mg/dl) indica una pérdida de función renal. El hematocrito es el porcentaje de volumen (%) de glóbulos rojos en la sangre. Una disminución de Hct (Hct normal - 44 ± 1,73% de PCV) está asociada con lesiones renales debido a una disminución de la producción de la hormona eritropoyetina.
Los resultados en la figura 4 muestran que los niveles de Cr y BUN aumentaron en los controles en POD7. Mientras que todas las inmunoterapias con RApA o RAPA+CFH o RAPA+FK demostraron protección de la función renal inicial (POD7) con reducción de Cr y BUN y aumento de Hct en comparación con controles, la terapia triple logró una mejora a largo plazo de la función renal tal como se indica mediante disminución de niveles de Cr y BUN, y aumento de Hct (figura 4) en POD21 y en el punto final (rechazo o POD60) en comparación con el tratamiento con solo FK y RAPA.
Para determinar si el tratamiento continuado con FK y CFH podía prolongar adicionalmente la supervivencia de injerto, se realizó un seguimiento de los dos aloinjertos de riñón restantes con RAPA FK y tres con CFH+RAPA+FK hasta POD100. Tal como se muestra en la tabla 2, los resultados indicaron que todos los trasplantes con la terapia triple sobrevivieron hasta 100 días y mantuvieron una función renal normal.
Tabla 2. Supervivencia a largo plazo de injertos en modelo de trasplante de riñón previamente sensibilizado.
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El examen histológico reveló cambios heterogéneos. Los injertos que se rechazaron dentro del plazo de 4 semanas mostraron AMR y CMR graves (datos no mostrados), con características de rechazo histológico similares a las observadas en receptores previamente sensibilizados sin tratar (figura 5A), independientemente de si se trataron con RAPA sola, RAPA+CFH o RAPA+FK. En cambio, los trasplantes con terapia triple con CFH+RAPA+FK mostraron menos inflamación y daño tubular con reducción de la infiltración de monocitos, reducción de la atrofia tubular y glomeruloesclerosis segmentaria, y reducción de cambios fibróticos en comparación con injertos tratados con FK/RAPA cuando se examinaron a las 8 semanas (figura 5B). Además, la terapia triple con CFH+RAPA+FK redujo la gravedad de lesiones de AMR (capilaritis peritubular, glomerulitis, y trombos glomerulares y mesangiolisis).
Ejemplo ilustrativo 3. El efecto de CFH en combinación con adrenomedulina para tratar rechazo de trasplante.
El efecto de CFH con o sin adrenomedulina (AM) sobre la función de injerto de riñón, respuesta de anticuerpos e histología se determinó tras la fase inicial de trasplante (POD3 y POD5). Los trasplantes de riñón previamente sensibilizados se trataron con CFH (8 mg, i.p.) en el día -1, día 0 y después cada dos días. Para someter a prueba si AM proporciona beneficios adicionales a la función de injerto renal, se trató un grupo adicional de trasplantes con una única dosis de infusión (200 |il, i.v.) de AM (~100 ug/kg) mezclada con CFH (~1 mg/kg) inmediatamente tras la cirugía de trasplante (POD0), además de la inyección i.p. de CFH (día -1, 0, y cada dos días).
CFH es una proteína de unión sérica para AM. Se ha mostrado que AM influye en la función reguladora del complemento del factor H potenciando la escisión de C3b mediante factor I. Se preparó la preparación de disolución de AM+CFH de la siguiente manera: a) disolver el contenido de un vial de AM (100 |ig) en 4,166 ml de solución salina estéril (para preparar una disolución madre de trabajo 24 |ig/ml); b) diluir 14,4 |il de disolución madre de FH 15,6 mg/ml en 985,6 |il de solución salina estéril (para preparar una disolución madre de trabajo de FH 225 |ig/ml); c) mezclar volúmenes iguales (950 |il cada uno) de la disolución madre de trabajo de AM 24 |ig/ml con la disolución madre de trabajo de FH 225 |ig/ml para preparar la disolución de infusión final (la concentración de AM será de 12 |ig/ml; la concentración de FH será de 112,5 |ig/ml). Transferir alícuotas de 220 |il a tubos estériles y congelar a -70 hasta que estén listas para su uso.
Se sacrificaron todos los ratones en POD3 y 5, respectivamente (~5/cada uno). Se usaron trasplantes sin tratar sacrificados en los mismos puntos finales como controles. Se recogieron tejidos de injerto para determinar la histología e inmunohistoquímica (IHC). Los grupos de experimentación fueron los siguientes: 1) txs de C3H a B6 sensibilización previa control; 2) txs de C3H a B6 sensibilización previa CFH (i.p.); y 3) txs de C3H a B6 sensibilización previa CFH (i.p.) infusión de AM/CFH (en el momento del trasplante).
Tal como se muestra en la figura 6A, los niveles de Cr aumentaron en POD5 en trasplantes sin tratar (p <0,01, frente a B6 normal). CFH solo y CFH con AM+CFH como tratamiento de una única infusión mostraron una tendencia a función renal mejorada dado que el nivel de Cr medio en estos grupos fue menor en comparación con los controles. La adición de una única dosis de infusión de AM/CFH fue beneficiosa para reducir adicionalmente el nivel de Cr en POD5.
Exámenes histológicos mediante tinción con hematoxilina y eosina (HE) (figura 6B) revelaron que aloinjertos de riñón de control en los receptores previamente sensibilizados tenían signos tempranos de rechazo celular y humoral agudo mixto en POD5 (infiltración de células mononucleares, activación de endotelio, edema, necrosis tubular renal aguda). Los injertos de riñón tratados con CFH mostraron una morfología mejorada con menos necrosis tubular en POD5.
Para determinar los niveles de DSA en plasma, se extrajeron muestras de plasma de receptores de trasplante de riñón un día antes del trasplante de riñón (2 semanas tras la sensibilización previa con injerto de piel de donante) y en el punto final del estudio. Se midieron los niveles de DSA mediante citometría de flujo. La figura 7 muestra que un aumento significativo de los niveles de DSA (IgG) y de IgG tal como se expresa mediante intensidad de fluorescencia de canal media (MFI) fue comparable entre los grupos. No hubo ninguna correlación entre los niveles de IgG y los niveles de Cr (figura 7B).
Ejemplo ilustrativo 4. Uso de factor H para tratar artritis reumatoide.
Se usaron ratones Balb C (n = 10 por cohorte) para determinar la eficacia de factor H (FH) durante el rechazo de trasplante. Se trataron los ratones con cóctel de anticuerpos ArthritoMAb (anticolágeno) (2 mg, i.v.) el día 1, seguido 7 días después por una inyección de LPS (50 |ig, i.p.). El día 8, se midieron los volúmenes de la pezuña trasera para cada animal y se distribuyeron en diversos grupos de tratamiento.
Se formuló factor H en citrato 20 mM, NaCl 150 mM, pH = 6. Se formuló dexametasona en hidroxipropilmetilcelulosa al 0,5 %/Tween 80 al 0,2 %. Se formuló etanercept como Enbrel™ en solución salina. Se formuló vehículo en citrato 20 mM, NaCl 150 mM, pH = 6. El volumen de dosificación para dexametasona y etanercept fue de 10ml/kg (0,200 ml/20 g de ratón) y se ajustó en consecuencia para el peso corporal. El volumen de dosificación para factor H y BX12 fue de 25 ml/kg (0,500 ml/20 g de ratón) y se ajustó en consecuencia para el peso corporal.
La dosificación con los diferentes agentes se inició el día 8 tal como se describe en la tabla 3.
Tabla 3. Fármaco y calendario de tratamiento.
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_____ _____
Se midieron los volúmenes de las pezuñas traseras en el día 8, 11, 12, 13, 15, 19 y 22 (punto final). La edad en la fecha de inicio fue de 7 a 9 semanas. Se midieron los pesos corporales bisemanalmente hasta el punto final (tabla 4). En el punto final, se procesaron muestras de tejido para determinar la histología y se enviaron a un patólogo para un análisis independiente. La toma de muestras 1 se realizó en el punto final. Se conservaron las patas traseras en formalina al 10%. La toma de muestras 2 se realizó en el punto final para los animales del grupo 4. Se extrajo sangre mediante punción cardiaca terminal. Se procesó la sangre para obtener un efecto anticoagulante. Se conservaron adicionalmente los riñones en formalina y seguido por EtOH al 70 %. Se puntuaron las muestras para determinar la inflamación, paño (granulación tejido), daño al cartílago, resorción ósea y exostosis (tabla 5).
Tabla 4: Medidas de peso corporal
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Inflamación: 0 = norma; 1 = infiltración mínima de células infamatorias en tejido periarticular; 2 = infiltración leve; 3 = infiltración moderada con edema moderado; 4 = infiltración marcada con edema marcado; 5 = infiltración intensa con edema intenso. Paño: 0 = normal; 1 = infiltración mínima de paño en cartílago y hueso subcondral; 2 = infiltración leve; 3 = infiltración moderada; 4 = infiltración marcada; 5 = infiltración intensa. Daño al cartílago: 0 = normal; 1 = pérdida de mínima a leve de densidad de tinción sin pérdida de condrocitos o alteración de colágeno obvias; 2 = pérdida leve de densidad de tinción con pérdida condrocitos y/o alteración de colágeno leve focal (superficial); 3 = pérdida moderada de densidad de tinción con pérdida condrocitos y/o alteración de colágeno moderada multifocal (profundidad hasta zona media); 4 = pérdida marcada de densidad de tinción con pérdida condrocitos y/o alteración de colágeno marcada multifocal (profundidad hasta zona profunda); 5 = pérdida difusa intensa de densidad de tinción con pérdida condrocitos y/o alteración de colágeno intensa multifocal (profundidad hasta marca de agua). Resorción ósea: 0 = normal; 1 = mínima; 2 = leve; 3 = moderada; 4 = marcada; 5 = intensa. Cambio perióstico/crecimiento exostótico: 0 = normal; 1 = mínimo; 2 = leve; 3 = moderado; 4 = marcado; 5 = intenso.
FH se toleró bien, ya que no hubo ninguna muerte relacionada con el tratamiento y los pesos corporales fueron comparables a controles de vehículo (figura 8). Los animales tratados con FH presentaron una respuesta clínica mejorada en comparación con animales de control de vehículo (tablas 6 y 7).
Tabla 6. Respuesta artrítica total en el punto final.
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1. A de volumen medio máxima, diferencia (en ml) entre los volúmenes de almohadilla plantar combinados medios registrados en el día 8 y en la mediana del día de máximo hinchamiento; 2. Carga de enfermedad media, determinada midiendo un volumen de almohadilla plantar combinado inicial para cada animal (para establecer un nivel inicial), después integrando el AUC para el volumen de almohadilla plantar combinado a lo largo del tiempo (días 8 a 22) para cada animal y después calculando la media del grupo; % de supresión de enfermedad, disminución del porcentaje de la carga de enfermedad total con respecto al vehículo; 3. Puntuación clínica máxima media, puntuada desde 0 hasta 60 (15/extremidad), calculada como la suma de 4 extremidades (5 puntos/pezuña para dedos enrojecidos o hinchados, 5 puntos para cada almohadilla plantar hinchada y 5 puntos para cada tobillo hinchado); 4. Peso corporal medio en el nadir, peso corporal medio de grupo más bajo como cambio en % desde el día 1. *= p <0,05, **= p <0,01, ***= p <0,001.
Tabla 7: Puntuación clínica
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.
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Los ratones tratados con FH presentaron un cambio medio inferior del hinchamiento de almohadilla plantar en el día de máximo hinchamiento en comparación con el vehículo (tabla 9). Además, FH funcionó bien en comparación con etanercept (figura 9; Bx-12=FH). Fh mejora más con respecto a etanercept en puntos de tiempo posteriores (días 15 a 22), lo que sugiere que FH fomenta una resolución rápida de la respuesta inflamatoria además de inhibir la respuesta inflamatoria inicial (figura 10). En la tabla 8 se muestra el resumen de histopatología para la artritis inducida por anticuerpos frente a colágeno y en la tabla 10 se muestra el análisis estadístico.
Tabla 8. Resumen de histopatología.
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Inflamación, 1= infiltración mínima de células inflamatorias (de manera periarticular), 2= infiltración leve, 3= infiltración moderada edema, 4= infiltración marcada y edema, 5=infiltración intensa y edema; Paño, 1= infiltración mínima de paño en cartílago, 2= infiltración leve, 3= infiltración moderada, 4= infiltración marcada, 5= infiltración intensa; resorción de cartílago, clasificada 1-5 (de mínima a intensa) basándose en la densidad de tinción, pérdida de condrocitos y alteración de colágeno; resorción ósea, clasificada 1-5 basándose en zonas de resorción, y densidad de osteoclastos; exostosis, clasificada de 1 a 5 basándose en la aparición de una superficie perióstica áspera y la presencia de células inflamatorias, células periósticas u osteoblastos. ns = no significativo, *= p <0,05, **= p <0,01, ***= p <0,001.
El control de dexametasona produjo sistemáticamente un resultado de histopatología mejorado. FH inhibe la exostosis (la formación inapropiada de nuevo hueso sobre la superficie de hueso) en comparación tanto con control de vehículo como con etanercept. Hubo adicionalmente una tendencia hacia una mejora de la inflamación y la resorción ósea para ratones tratados con FH, dando como resultado una puntuación clínica inferior en comparación tanto con vehículo como con etanercept (figura 11). Este estudio de modelo de animal de RA sugiere que el factor H es un producto terapéutico eficaz en la limitación de la respuesta inflamatoria mediada por el complemento en este entorno de enfermedad.
Tabla 9. Grosor de almohadilla plantar
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Tabla 10. Análisis estadístico.
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La práctica de la presente invención puede emplear, a menos que se indique lo contrario, técnicas y descripciones convencionales de química orgánica, tecnología de polímeros, biología molecular (incluyendo técnicas recombinantes), biología celular, bioquímica e inmunología, que están dentro de las habilidades de la técnica. Tales técnicas convencionales incluyen síntesis en matriz de polímero, hibridación, ligación y detección de hibridación usando una etiqueta. Pueden obtenerse ilustraciones específicas de técnicas adecuadas haciendo referencia al ejemplo a continuación en el presente documento. Sin embargo, evidentemente también pueden usarse otros procedimientos convencionales equivalentes. Tales técnicas y descripciones convencionales pueden encontrarse en manuales de laboratorio convencionales tales como Genome Analysis: A Laboratory Manual Series (vol. I-IV), Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cells: A Laboratory Manual, PCR Primer: A Laboratory Manual y Molecular Cloning: A Laboratory Manual (todos de Cold Spring Harbor Laboratory Press), Stryer, L. (1995) Biochemistry (4.a ed.) Freeman, Highly stabilized York, Gait, “Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach" 1984, IRL Press, Londres, Nelson y Cox (2000), Lehninger, Principles of Biochemistry 3.a ed., W. H. Freeman Pub., Highly stabilized York, N.Y. y Berg et al. (2002) Biochemistry, 5.a ed., W. H. Freeman Pub., Highly stabilized York, N.Y.
Obsérvese que tal como se usan en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular “un”, “una” y “el/la” incluyen referentes en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por tanto, por ejemplo, la referencia a “una polimerasa” se refiere a un agente o a mezclas de tales agentes, y la referencia al “método” incluye referencia a etapas y métodos equivalentes conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente.
A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el entendido habitualmente por un experto habitual en la técnica a la que pertenece esta invención.
Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta la décima de la unidad del límite inferior a menos que el contexto indique claramente lo contrario, entre el límite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor mencionado o intermedio en ese intervalo mencionado, queda abarcado dentro de la invención. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse independientemente en los intervalos más pequeños que también quedan abarcados dentro de la invención, sujeto a cualquier límite específicamente excluido en el intervalo mencionado. Cuando el intervalo mencionado incluye uno o ambos de los límites, los intervalos que excluyen ambos de esos límites incluidos también quedan incluidos en la invención.
En la descripción anterior, se exponen numerosos detalles específicos para proporcionar una comprensión más exhaustiva de la presente invención. Sin embargo, resultará evidente para un experto en la técnica que la presente invención puede ponerse en práctica sin uno o más de estos detalles específicos. En otros casos, características y procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica no se han descrito con el fin de evitar dificultar la comprensión de la invención.
Aunque la presente invención se describe principalmente con referencia a realizaciones específicas, también se prevé que otras realizaciones resultarán evidentes para los expertos en la técnica tras leer la presente divulgación, y se pretende que tales realizaciones estén contenidas dentro de los métodos de la presente invención.
Se observa que las reivindicaciones pueden redactarse para excluir cualquier elemento opcional. Como tal, se pretende que esta declaración sirva como base de antecedentes para el uso de términos excluyentes tales como “solamente”, “únicamente” y similares en relación con la mención según los elementos de reivindicación, o el uso de una limitación “negativa”. Tal como resultará evidente para los expertos en la técnica tras leer esta divulgación, cada una de las realizaciones individuales descritas e ilustradas en el presente documento tiene componentes y características diferenciados que pueden separarse fácilmente de, o combinarse con, las características de cualquiera de las otras diversas realizaciones sin alejarse del alcance de la invención. Cualquier método mencionado puede llevarse a cabo en el orden de acontecimientos mencionados o en cualquier otro orden que sea lógicamente posible. Aunque en la práctica o pruebas de la invención también puede usarse cualquier método y material similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, ahora se describen métodos y materiales ilustrativos representativos.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES
    i . Composición que comprende factor H (FH) para su uso en un método para prevenir o inhibir rechazo de aloinjerto por un receptor de dicho aloinjerto, en la que dicho receptor se trata adicionalmente con una primera composición de inmunosupresor que comprende un miembro seleccionado de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
  2. 2. Composición según la reivindicación 1, para su uso según la reivindicación 1, en la que dicho FH es FH derivado de plasma o FH recombinante.
  3. 3. Composición según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, para su uso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que dicho receptor se trata adicionalmente con un segundo inmunosupresor diferente que comprende un miembro seleccionado independientemente de sirólimus (rapamicina), FK506 (FK), ciclosporina y tacrólimus.
  4. 4. Composición según las reivindicaciones 1-3, para su uso según las reivindicaciones 1-3, en la que dicho método comprende tratar a dicho receptor con una composición que comprende FH, una composición que comprende FK y una composición que comprende rapamicina.
  5. 5. Composición según las reivindicaciones 1-4, para su uso según las reivindicaciones 1-4, en la que dicho rechazo de aloinjerto es un rechazo mediado por anticuerpos o una combinación de rechazo mediado por anticuerpos y por células.
  6. 6. Composición según las reivindicaciones 1-5, para su uso según las reivindicaciones 1-5, en la que dicha prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto comprende prolongar la supervivencia y/o función de aloinjerto durante un número predeterminado de días.
  7. 7. Composición según las reivindicaciones 1-6, para su uso según las reivindicaciones 1-6, en la que dicha prevención o inhibición de rechazo de aloinjerto comprende prevenir o inhibir un aumento de los niveles de marcadores de rechazo de aloinjerto.
  8. 8. Composición según las reivindicaciones 1-7, para su uso según las reivindicaciones 1-7, en la que dicho rechazo de aloinjerto es rechazo mediado por anticuerpos agudo.
  9. 9. Composición según la reivindicación 7, para su uso según la reivindicación 7, en la que dicho receptor se trata con FH tras recibir dicho aloinjerto hasta que dicho aloinjerto funciona normalmente.
  10. 10. Composición según la reivindicación 9, para su uso según la reivindicación 9, en la que la función normal de dicho aloinjerto se determina mediante nivel de creatinina de receptor y/o pruebas de biopsia para C4d negativas.
  11. 11. Composición según las reivindicaciones 1-7, para su uso según las reivindicaciones 1-7, en la que dicho rechazo de aloinjerto se produce 3-6 meses tras recibir dicho aloinjerto.
  12. 12. Composición según las reivindicaciones 1-11, para su uso según las reivindicaciones 1-11, en la que dicho aloinjerto comprende un órgano o tejido.
  13. 13. Composición según la reivindicación 12, para su uso según la reivindicación 12, en la que dicho órgano es un órgano completo.
  14. 14. Composición según la reivindicación 13, para su uso según la reivindicación 13, en la que dicho órgano completo es un miembro seleccionado de riñón, corazón, hígado, intestino, páncreas y pulmón.
  15. 15. Composición según las reivindicaciones 1-11, para su uso según las reivindicaciones 1-11, en la que dicho aloinjerto es un miembro seleccionado de un injerto de piel, un injerto de hueso, una válvula y médula ósea.
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