ES2685631T3 - Polinucleótidos, polipéptidos codificados por los mismos, y métodos de uso de los mismos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan - Google Patents

Polinucleótidos, polipéptidos codificados por los mismos, y métodos de uso de los mismos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan Download PDF

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Abstract

Un método de aumento de biomasa, tasa de crecimiento, rendimiento de semillas y/o tolerancia al estrés por salinidad de una planta en comparación con una planta no transformada de la misma especie que se cultiva en las mismas condiciones de cultivo, comprendiendo el método expresar en exceso dentro de la planta un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 80% homóloga a la secuencia de aminoácidos expuesta por SEQ ID NO: 219, aumentando así la biomasa, tasa de crecimiento, rendimiento de semillas y/o tolerancia al estrés por salinidad de la planta en comparación con la planta no transformada de la misma especie que se cultiva en las mismas condiciones de crecimiento.

Description

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DESCRIPCION
Polinucleótidos, polipéptidos codificados por los mismos, y métodos de uso de los mismos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan
Campo y antecedentes de la invención
La presente invención, en algunas realizaciones de la misma, se refiere a polipéptidos y polinucleótidos aislados, y más particularmente a un método de uso de los mismos para aumentar la tolerancia de una planta a estrés abiótico, crecimiento, biomasa, vigor y/o rendimiento de una planta.
Las condiciones de estrés abiótico (EAB; también denominado "estrés medioambiental"), tales como salinidad, sequía, inundación, temperatura inferior a la óptima y contaminación química tóxica, causan daño sustancial a las plantas agrícolas. La mayoría de las plantas han desarrollado estrategias para protegerse ellas mismas contra estas condiciones. Sin embargo, si la gravedad y la duración de las condiciones de estrés son demasiado grandes, son profundos los efectos sobre el desarrollo, crecimiento y rendimiento de la planta. Además, la mayoría de las plantas de cultivo son altamente susceptibles al EAB y así necesitan condiciones de crecimiento óptimas para rendimientos de cultivo comercial. La exposición continua al estrés causa alteraciones importantes en el metabolismo de las plantas que, por último lugar, conduce a muerte celular y, por consiguiente, a pérdida de rendimiento. Así, a pesar de la amplia investigación y amplias medidas fitoprotectoras, las pérdidas debido a las condiciones de estrés abiótico siguen en los billones de dólares anualmente.
La sequía es un fenómeno gradual, que implica periodos de tiempo anormalmente secos que perduran lo suficientemente como para producir graves desequilibrios hidrológicos tales como daño de cultivos y escasez de suministros de agua. En casos graves, la sequía puede durar muchos años y dar como resultado efectos devastadores sobre la agricultura y los suministros de agua. Con la población en crecimiento y la falta crónica de agua dulce disponible, la sequía es no solo el problema número uno relacionado con el tiempo en la agricultura, sino que también se clasifica como uno de los principales desastres naturales de todos los tiempos, que causa no solo daño económico (por ejemplo, las pérdidas por sequía en EE.UU de 1988 superaron los 40 billones de dólares), sino también la pérdida de vidas humanas, ya que en 1984-1985 la sequía en el cuerno de África condujo a una hambruna que mató a 750.000 personas. Además, la sequía está asociada con aumento de la susceptibilidad a diversas enfermedades.
Para la mayoría de las plantas de cultivo, las regiones terrestres del mundo son demasiado áridas. Además, la sobreutilización del agua disponible da como resultado una elevada pérdida de tierra agrícolamente utilizable (desertificación), y el aumento de la acumulación de sal en los suelos se añade a la pérdida de agua disponible en los suelos.
La salinidad, altos niveles de sales, afecta a una de cada cinco hectáreas de tierra regada. Se espera que esta condición solo empeore, reduciendo además la disponibilidad de tierra arable y la producción de los cultivos, puesto que ninguno de los cinco cultivos alimenticios principales, es decir, trigo, maíz, arroz, patatas y soja, puede tolerar excesiva sal. Los efectos perjudiciales de la sal sobre las plantas resultan de tanto un déficit de agua que conduce a estrés osmótico (similar al estrés por sequía), como al efecto de exceso de iones de sodio en los procesos bioquímicos críticos. Al igual que con la congelación y la sequía, alto contenido de sal causa déficit de agua; y la presencia de alto contenido de sal dificulta que las raíces de las plantas extraigan el agua de su entorno. La salinidad de los suelos es así una de las variables más importantes que determinan si se puede desarrollar o no una planta. En muchas partes del mundo, considerables áreas de tierra no son cultivables debido a la salinidad naturalmente alta de los suelos. Así, la salinización de los suelos que se usan para la producción agrícola es un problema significativo y en crecimiento en regiones que se basan principalmente en la agricultura, y se agrava por la sobreutilización, sobrefertilización y escasez de agua, normalmente causado por el cambio climático y las exigencias de la población en aumento. La tolerancia a la sal es de particular importancia pronto en el ciclo vital de una planta, puesto que la evaporación de la superficie del suelo causa un movimiento ascendente del agua, y la sal se acumula en la capa superior del suelo donde se ponen las semillas. Por otra parte, la germinación tiene lugar normalmente a una concentración de sales que es superior al nivel medio de sales en el perfil completo del suelo.
La germinación de muchos cultivos es sensible a la temperatura. Un gen que potenciaría la germinación en condiciones cálidas sería útil para cultivos que se plantan al final de la estación o en climas cálidos. Además, las plantas de semillero y las plantas maduras que se exponen al exceso de calor pueden experimentar choque térmico, que puede surgir en diversos órganos, que incluyen hojas y particularmente el fruto, cuando la transpiración es insuficiente para vencer el estrés por calor. El calor también daña las estructuras celulares, que incluyen orgánulos y citoesqueleto, y altera la función de la membrana. El choque térmico puede producir una disminución en la síntesis global de proteínas, acompañado por expresión de proteínas de choque térmico, por ejemplo, chaperonas, que participan en el replegamiento de proteínas desnaturalizadas por el calor.
El estrés por calor frecuentemente acompaña a condiciones de baja disponibilidad de agua. El propio calor se considera un estrés interactuante y se añade a los efectos perjudiciales causados por las condiciones de déficit de agua. La demanda de agua evaporativa presenta aumentos casi exponenciales con aumentos a las temperaturas diurnas y puede dar como resultado altas tasas de transpiración y bajos potenciales hídricos de las plantas. El daño
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por alta temperatura al polen casi siempre ocurre conjuntamente con el estrés por sequía, y raramente ocurre en condiciones de buen riego. El estrés combinado puede alterar el metabolismo de las plantas de formas novedosas; por tanto, el entendimiento de la interacción entre los diferentes estreses puede ser importante para el desarrollo de estrategias para potenciar la tolerancia al estrés por manipulación genética.
Las condiciones de frío excesivo, por ejemplo, temperaturas bajas, pero por encima de la congelación, afectan los cultivos de orígenes tropicales, tales como soja, arroz, maíz y algodón. Los daños por frío típicos incluyen marchitamiento, necrosis, clorosis o fuga de iones de las membranas celulares. Los mecanismos subyacentes de la sensibilidad al frío no se entienden todavía completamente, pero probablemente implican el nivel de saturación de las membranas y otras deficiencias fisiológicas. Por ejemplo, la fotoinhibición de la fotosíntesis (interrupción de la fotosíntesis debido a la alta intensidad de la luz) ocurre frecuentemente en condiciones atmosféricas claras posteriores a frías noches de finales del verano/otoño. Además, el frío puede conducir de pérdidas de rendimiento y menor calidad de los productos hasta maduración retardada del maíz.
El déficit de agua es un componente común de muchos estreses de las plantas. El déficit de agua ocurre en células vegetales cuando la tasa de transpiración de la planta entera supera la captación de agua. Además de la sequía, otros estreses, tales como salinidad y baja temperatura, producen deshidratación celular.
La traducción de señales de estrés salino y por sequía consiste en vías de señalización de homeostasis iónica y osmótica. El aspecto iónico del estrés salino se señaliza mediante la vía SOS donde un complejo de proteína cinasa SOS3-SOS2 sensible al calcio controla la expresión y actividad de los transportadores de iones tales como SOS1. Los componentes osmóticos del estrés salino implican reacciones complejas de las plantas que se solapan con las respuestas al estrés por sequía y/o por frío.
Aspectos comunes de la respuesta al estrés por sequía, frío y salino [revisado en Xiong y Zhu (2002) Plant Cell Environ. 25: 131-139] incluyen: (a) cambios transitorios en los niveles de calcio citoplásmico al principio del evento de señalización [Knight, (2000) Int. Rev. Cytol. 195: 269-324; Sanders et al. (1999) Cell Plant Cell 11: 691-706]; (b) transducción de señales mediante proteínas cinasas activadas por mitógeno y/o dependientes de calcio (CDPK) y proteínas fosfatasas [Merlot et al. (2001) Plant J. 25: 295-303; Tahtiharju y Palva (2001) Plant J. 26: 461-470]; (c) aumento en los niveles de ácido abscísico en respuesta a estrés que desencadena un subconjunto de respuestas; (d) fosfatos de inositol como moléculas señal (al menos para un subconjunto de los cambios transcripcionales sensibles al estrés [Xiong et al. (2001) Genes Dev. 15: 1971-1984]; (e) activación de fosfolipasas que a su vez genera una matriz diversa de segundas moléculas de mensajero, algunas de las cuales podrían regular la actividad de las cinasas sensibles al estrés [por ejemplo, fosfolipasa D; Frank et al. (2000) Plant Cell 12: 111-124]; (f) inducción de genes de tipo abundantes en la embriogénesis tardía (LEA) que incluyen los genes COR/RD sensibles a CRT/DRE; (g) elevados niveles de antioxidantes y osmolitos compatibles tales como prolina y azúcares solubles [Hasegawa et al. (2000) Annu. Rev. Plant Mol. Plant Physiol. 51: 463-499)]; y (h) acumulación de especies reactivas de oxígeno tales como superóxido, peróxido de hidrógeno y radicales hidroxilo.
La biosíntesis de ácido abscísico se regula por el estrés osmótico en múltiples etapas. Tanto la señalización del estrés osmótico dependiente como independiente de ABA modifica primero los factores de transcripción constitutivamente expresados, que conduce a la expresión de activadores tempranos de la respuesta transcripcional, que entonces activan aguas abajo genes efectores de la tolerancia al estrés.
Varios genes que aumentan tolerancia al estrés por frío o salino también pueden mejorar la protección del estrés por sequía, éstos incluyen, por ejemplo, el factor de transcripción AtCBF/DREB1, OsCDPK7 (Saijo et al. 2000, Plant J. 23: 319-327) o AVP1 (una bomba de protones de pirofosfatasa vacuolar, Gaxiola et al. 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 11444-11449).
El desarrollo de plantas tolerantes al estrés es una estrategia que tiene el potencial de resolver o mediar en al menos algunos de estos problemas. Sin embargo, las estrategias tradicionales de cultivos de plantas usadas para desarrollar nuevas líneas de plantas que presentan tolerancia a EAB son relativamente ineficientes puesto que son engorrosas, requieren tiempo y son de resultado impredecible. Además, los limitados recursos de germoplasma para la tolerancia al estrés e incompatibilidad en cruces entre especies de plantas remotamente relacionadas representan problemas significativos encontrados en el cultivo convencional. Además, los procesos celulares que conducen a tolerancia a EAB son de naturaleza compleja e implican múltiples mecanismos de adaptación celular y numerosas vías metabólicas.
Se han descrito en la técnica los esfuerzos de la ingeniería genética, que pretende conferir tolerancia al estrés abiótico a cultivos transgénicos. Estudios por Apse y Blumwald (Curr Opin Biotechnol. 13:146-150, 2002), Quesada et al. (Plant Physiol. 130:951-963, 2002), Holmstrom et al. (Nature 379: 683-684, 1996), Xu et al. (Plant Physiol 110: 249-257, 1996), Pilon-Smits y Ebskamp (Plant Physiol 107: 125-130, 1995) y Tarczynski et al. (Science 259:508-510,1993) han intentado todos generar plantas tolerantes al estrés.
Además, varias patentes de EE.UU. y solicitudes de patente también describen polinucleótidos asociados a tolerancia al estrés y su uso en generar plantas tolerantes al estrés. Las patentes de EE.uU. N° 5.296.462 y 5.356.816 describen
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plantas transformantes con polinucleótidos que codifican proteínas implicadas en la adaptación al frío en Arabidopsis thaliana para promover la tolerancia al frío.
La patente de EE.UU. N° 6.670.528 describe transformar plantas con polinucleótidos que codifican polipéptidos que se unen a elementos sensibles al estrés para promover la tolerancia al estrés abiótico.
La patente de EE.UU. N° 6.720.477 describe transformar plantas con un polinucleótido que codifica una proteína relacionada con el estrés a la transducción de señales, capaz de aumentar la tolerancia de las plantas transformadas al estrés abiótico.
Las solicitudes de EE.UU. N° de serie 09/938842 y 10/342224 describen genes relacionados con el estrés abiótico y su uso para conferir a las plantas tolerancia al estrés abiótico.
La solicitud de EE.UU. N° de serie 10/231035 describe expresar en exceso una sulfurasa de cofactor de molibdeno en plantas para aumentar la tolerancia al estrés abiótico.
El documento WO2004/104162 a Evogene Ltd. enseña secuencias de polinucleótidos y métodos de su utilización para aumentar la tolerancia de una planta a estreses abióticos y/o aumentar la biomasa de una planta.
El documento WO2007/020638 a Evogene Ltd. enseña secuencias de polinucleótidos y métodos de su utilización para aumentar la tolerancia de una planta a estreses abióticos y/o aumentar la biomasa, vigor y/o rendimiento de una planta.
El documento WO2007/049275 a Evogene Ltd. enseña polipéptidos aislados, polinucleótidos que los codifican para aumentar la tolerancia de una planta al estrés abiótico, y/o para aumentar la biomasa, vigor y/o rendimiento de una planta.
La técnica anterior adicional incluye las solicitudes de patente de EE.UU. N° 20060183137A1 A1 y 20030056249A1.
Las patentes de EE.UU. 2004/0123343 y 2006/0123505 desvelan vectores y plantas que comprenden secuencias y proteínas.
Compendio de la invención
Según un aspecto de la presente invención, se proporciona un método de aumento de la biomasa, tasa de crecimiento, rendimiento de semillas y/o tolerancia al estrés por salinidad de una planta según la reivindicación 1. Realizaciones adicionales son el objeto de las reivindicaciones dependientes.
Según un aspecto de la invención, la célula de planta forma una parte de una planta.
Según un aspecto de la invención, el estrés abiótico se selecciona del grupo que consiste en salinidad, sequía, privación de agua, baja temperatura, alta temperatura, toxicidad a metales pesados, anaerobiosis, deficiencia de nutrientes, exceso de nutrientes, contaminación atmosférica e irradiación UV.
Según un aspecto de la invención, el método comprende además cultivar la planta que expresa el polinucleótido exógeno bajo el estrés abiótico.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y/o científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente se entiende por un experto habitual en la técnica a la que se refiere la invención. Aunque se puede usar en la práctica o prueba de las realizaciones de la invención métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, a continuación se describen métodos y/o materiales a modo de ejemplo. En caso de conflicto, se antepondrá la memoria descriptiva de patente, que incluye definiciones. Además, los materiales, métodos, y ejemplos son ilustrativos solo y no se pretende que sean necesariamente limitantes.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona una construcción de ácidos nucleicos que comprende el polinucleótido aislado y un promotor para dirigir la transcripción de la secuencia de ácidos nucleicos.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona un polipéptido aislado, que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 90% homóloga a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201,207, 212, 202-206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona un polipéptido aislado, que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona una célula de planta que comprende un polipéptido exógeno que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 90% homóloga a la
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secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201,207, 212, 202-206, 208-211, 213391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona una célula de planta que comprende un polipéptido exógeno que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201,207, 212, 202-206, 208-211, 213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona una célula de planta que comprende un polinucleótido exógeno que comprende una secuencia de ácidos nucleicos al menos 90% homóloga a la secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533, 1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534, 1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543, 1668, 1539, 1550, 1558, 1565, 1541, 1667, 1542, 1544, 1537, 1551, 1545, 1-200, 1653, 392960 y 1656-1659.
Según un aspecto de algunas realizaciones de la presente invención, se proporciona una célula de planta que comprende un polinucleótido exógeno que comprende una secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533, 1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534,
1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543, 1668, 1539, 1550, 1558, 1565, 1541,
1667, 1542, 1544, 1537, 1551, 1545, 1-200, 1653, 392-960 y 1656-1659.
Según algunas realizaciones de la invención, la secuencia de ácidos nucleicos se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533, 1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534, 1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543, 1668, 1539, 1550, 1558, 1565, 1541, 1667, 1542, 1544, 1537, 1551, 1545, 1-200, 1653, 392-960 y 1656-1659.
Según algunas realizaciones de la invención, el polinucleótido se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533, 1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534, 1536, 1552, 1553, 1666,
1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543, 1668, 1539, 1550, 1558, 1565, 1541, 1667, 1542, 1544, 1537,
1551, 1545, 1-200, 1653, 392-960 y 1656-1659.
Según algunas realizaciones de la invención, la secuencia de aminoácidos se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201,207, 212, 202-206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
Según algunas realizaciones de la invención, el polipéptido se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202-206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
Según algunas realizaciones de la invención, la célula de planta forma una parte de una planta.
Según algunas realizaciones de la invención, el estrés abiótico se selecciona del grupo que consiste en salinidad, sequía, privación de agua, baja temperatura, alta temperatura, toxicidad a metales pesados, anaerobiosis, deficiencia de nutrientes, exceso de nutrientes, contaminación atmosférica e irradiación UV.
Según algunas realizaciones de la invención, el método comprende además cultivar la planta que expresa el polinucleótido exógeno bajo el estrés abiótico.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y/o científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente se entiende por un experto habitual en la técnica a la que se refiere la invención. Aunque se puede usar en la práctica o prueba de las realizaciones de la invención métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento, a continuación se describen métodos y/o materiales a modo de ejemplo. En caso de conflicto, se antepondrá la memoria descriptiva de patente, que incluye definiciones. Además, los materiales, métodos, y ejemplos son ilustrativos solo y no se pretende que sean necesariamente limitantes.
Breve descripción de los dibujos
Algunas realizaciones de la invención se describen en el presente documento, a modo de ejemplo solo, con referencia a los dibujos adjuntos. Con referencia específica ahora a los dibujos con detalle, se enfatiza que los datos mostrados son a modo de ejemplo y para fines de discusión ilustrativa de las realizaciones de la invención. A este respecto, la descripción tomada con los dibujos muestra a aquellos expertos en la materia cómo se pueden poner en práctica las realizaciones de la invención.
En los dibujos:
La FIG. 1 es una ilustración esquemática del plásmido binario pGI usado para expresar las secuencias de polinucleótidos aisladas de la invención. RB - límite derecho de T-ADN; LB - límite izquierdo de T-ADN; H - enzima de restricción HindIII; X - enzima de restricción XbaI; B - enzima de restricción BamHI; S - enzima de restricción SalI; Sm - enzima de restricción SmaI; R-I - enzima de restricción EcoRI; Sc - SacI/SstI/Ecl136II; (números) - longitud en pares de bases; pro NOS = promotor de nopalina sintasa; NPT-II = gen de neomicina fosfotransferasa; ter NOS = terminador de nopalina sintasa; señal poli-A (señal de poliadenilación); GUS-intrón - el gen indicador GUS (secuencia codificante
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de intron) Las secuencias de polinucleótidos aisladas de la invención se clonaron en el vector mientras que se sustituía el gen indicador GUS-intrón.
Las FIGs. 2a-b son imágenes que representan la visualización del desarrollo de raíces de plantas cultivadas en placas de agar transparentes. Se cultivaron los diferentes transgenes en placas de agar transparentes durante 17 días y las placas se fotografiaron cada 2 días a partir del día 7. Figura 2a - Una imagen de una fotografía de plantas tomada tras 12 días en placas de agar. Figura 2b - Una imagen del análisis de raíces en el que la longitud de la raíz medida se representa por una flecha roja.
Descripción de realizaciones específicas de la invención
La presente invención, en algunas realizaciones de la misma, se refiere a polipéptidos aislados y polinucleótidos que los codifican, y más particularmente, pero no exclusivamente, a métodos de uso de los mismos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico, tasa de crecimiento, rendimiento, biomasa y/o vigor de una planta.
Antes de explicar al menos una realización de la invención con detalle, se debe entender que la invención no se limita necesariamente en su aplicación a los detalles expuestos en la siguiente descripción ni se ejemplifica por los ejemplos. La invención es capaz de otras realizaciones o de ser puesta en práctica o llevada a cabo de diversas formas.
Aunque la invención se reduce a la práctica, los presentes inventores han identificado novedosos polipéptidos y polinucleótidos que se pueden usar para aumentar la tolerancia al estrés abiótico, y mejorar la tasa de crecimiento, biomasa, rendimiento y/o vigor de una planta.
Así, como se muestra en la sección de ejemplos que sigue, los presentes inventores han empleado un enfoque bioinformático que combina la agrupación y el ensamblaje de secuencias de bases de datos de los genomas de Arabidopsis, arroz y otros genomas de plantas disponible al público, marcas de secuencia expresada (abreviadamente en lo sucesivo EST por la expresión inglesa Expressed Sequence Tags), bases de datos de proteínas y vías e información de QTL (locus de carácter cuantitativo por la expresión inglesa Quantitative Trait Locus) con un perfil de expresión digital ("transferencia Northern electrónica") y polinucleótidos y polipéptidos identificados que pueden aumentar la tolerancia al estrés abiótico, y mejorar el crecimiento, biomasa, rendimiento y vigor (SEQ ID NO: 1-200 y 1653 para polinucleótidos; SEQ ID NO: 201-391 y 1655 para polipéptidos; Tabla 1, Ejemplo 1). Se identificaron supuestos ortólogos de TEAB de especies monocotiledóneas por alineamientos de secuencias de ortólogos y perfiles de expresión digitales (SEQ ID NO: 392-960, 1656-1659 para polinucleótidos; SEQ ID NO: 961-1529, 1660-1663 para polipéptidos; Tabla 2, Ejemplo 1). Como se describe además en las Tablas 3 y 4 de la sección de ejemplos que sigue, se clonaron polinucleótidos representativos (polinucleótido SEQ ID NO: 1530, 1538, 1532, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1561, 1564, 1534, 1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543 y 1668). Se prepararon polinucleótidos adicionales que tienen secuencias de ácidos nucleicos optimizadas (polinucleótido SEQ ID NO: 1531, 1539, 1533, 1550, 1558, 1562, 1565, 1541, 1667, 1542, 1544, 1537, 1551 y 1545). Como se describe además en la sección de ejemplos que sigue, se generaron plantas transgénicas que expresan exógenamente los polinucleótidos clonados y/o optimizados de la invención. Como se muestra en las Tablas 5-76, estas plantas presentan elevado peso de plantas de semillero, cobertura radicular, longitud radicular y tasa de crecimiento relativa cuando se cultivan en condiciones de estrés osmótico (en presencia de PEG al 25%), deficiencia de nitrógeno (en presencia de nitrógeno 0,75 mM) o normales. Además, como se muestra en las Tablas 77-188, las plantas que expresan exógenamente los polinucleótidos de la invención presentan elevada área de roseta, diámetro de roseta, área promedio foliar, tasa relativa de crecimiento de la anterior, biomasa vegetal, rendimiento de semillas de planta, peso de 1000 semillas e índice de cosecha cuando se cultivan en condiciones de estrés por salinidad o normales. En conjunto, estos resultados sugieren el uso de los novedosos polinucleótidos y polipéptidos de la invención para aumentar la tolerancia al estrés abiótico, y mejorar la tasa de crecimiento, biomasa, vigor y/o rendimiento de una planta.
Así, según un aspecto de la invención, se proporciona un método de aumento de la tolerancia al estrés abiótico, tasa de crecimiento, biomasa, rendimiento y/o vigor de una planta. El método se efectúa expresando dentro de la planta un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 60% homóloga a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
La expresión "estrés abiótico", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier efecto adverso sobre el metabolismo, crecimiento, reproducción y/o viabilidad de una planta. Por consiguiente, el estrés abiótico se puede inducir por condiciones medioambientales de crecimiento inferiores a las óptimas tales como, por ejemplo, salinidad, privación de agua, déficit de agua, sequía, inundación, congelación, baja o alta temperatura (por ejemplo, frío o excesivo calor), contaminación química tóxica, toxicidad a metales pesados, anaerobiosis, deficiencia de nutrientes, exceso de nutrientes, contaminación atmosférica o irradiación UV. Las implicaciones del estrés abiótico se tratan en la sección Antecedentes.
La expresión "tolerancia al estrés abiótico", como se usa en el presente documento, se refiere a la capacidad de una planta para sobrevivir a un estrés abiótico sin sufrir una alteración sustancial en el metabolismo, crecimiento, productividad y/o viabilidad.
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Como se usa en el presente documento, la expresión "biomasa vegetal" se refiere a la cantidad (medida en gramos de tejido secado al aire o seco) de un tejido producido a partir de la planta en una temporada de cultivo, que también podría determinar o afectar el rendimiento de la planta o el rendimiento por área de cultivo.
Como se usa en el presente documento, la expresión "rendimiento de la planta" se refiere a la cantidad (como se determina en peso, volumen o tamaño) o cantidad (números) de tejido producido o recogido por planta o por temporada de cultivo. Por tanto, un elevado rendimiento podría afectar el beneficio económico que se puede obtener de la planta en una cierta área de cultivo y/o tiempo de cultivo.
Como se usa en el presente documento, la expresión "vigor de la planta" se refiere a la cantidad (medida en peso) de tejido producida por la planta en un tiempo dado. Por tanto, el aumentar el vigor podría determinar o afectar el rendimiento de la planta o el rendimiento por tiempo de cultivo o área de cultivo.
Como se usa en el presente documento, el término "aumentar" se refiere a al menos aproximadamente 2%, al menos aproximadamente 3%, al menos aproximadamente 4%, al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80% o mayor aumento en la tolerancia de la planta al estrés abiótico, crecimiento, biomasa, rendimiento y/o vigor en comparación con una planta nativa [es decir, una planta no modificada con las biomoléculas (polinucleótido o polipéptidos) de la invención, por ejemplo, una planta no transformada de la misma especie que se cultiva en las mismas condiciones de crecimiento).
Como se usa en el presente documento, la expresión "polinucleótido exógeno" se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos heteróloga que puede no ser naturalmente expresada dentro de la planta o cuya expresión en exceso en la planta se desea. El polinucleótido exógeno se puede introducir en la planta en un modo estable o transitorio, para producir una molécula de ácido ribonucleico (ARN) y/o una molécula de polipéptido. Se debe observar que el polinucleótido exógeno puede comprender una secuencia de ácidos nucleicos que es idéntica o parcialmente homóloga a una secuencia de ácidos nucleicos endógena de la planta.
Como se mencionó, el polinucleótido exógeno de la invención codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 81%, al menos
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82%, al menos aproximadamente 83%, al menos aproximadamente 84%, al menos
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aproximadamente
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aproximadamente
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aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98%, al menos aproximadamente 99%, o más, digamos 100% homóloga a la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
La homología (por ejemplo, porcentaje de homología) se puede determinar usando cualquier software de comparación de homología, que incluye, por ejemplo, el software BlastP o TBLASTN del Centro Nacional de Información Biotecnológica (abreviadamente en lo sucesivo NCBI por la expresión inglesa National Center of Biotechnology Information) tal como usando parámetros por defecto, cuando se empieza a partir de una secuencia de polipéptidos; o el algoritmo tBLASTX (disponible en NCBI) tal como usando parámetros por defecto, que compara los productos de traducción conceptual de seis marcos de una secuencia de búsqueda de nucleótidos (ambas hebras) con una base de datos de secuencias de proteínas.
Las secuencias homólogas incluyen tanto secuencias ortólogas como parálogas. El término "parálogo" se refiere a duplicaciones de genes dentro del genoma de una especie que conduce a genes parálogos. El término "ortólogo" se refiere a genes homólogos en diferentes organismos debido a la relación ancestral.
Una opción para identificar ortólogos en especies de plantas monocotiledóneas es realizar una búsqueda recíproca con blast. Esto se puede hacer por un primera búsqueda con blast que implica aplicar el programa blast a la secuencia de interés contra cualquier base de datos de secuencias, tales como la base de datos disponible al público NCBI que se puede encontrar en: Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ncbi (.) nlm (.) nih (.) gov. Si se buscaron ortólogos en arroz, a la secuencia de interés se le podría aplicar el programa blast, por ejemplo, contra los 28.469 clones ADNc de longitud completa de Oryza sativa Nipponbare, disponible en NCBI. Se pueden filtrar los resultados de blast. Las secuencias de longitud completa de cualquiera de los resultados filtrados o los resultados no filtrados se analizan de nuevo con el programa blast (segundo blast) contra las secuencias del organismo de las que derivó la secuencia de interés. Entonces se comparan los resultados del primer y segundo blast. Se identifica un ortólogo cuando la secuencia que da como resultado la puntuación más alta (mejor acierto) en el primer blast identifica en el segundo blast la secuencia de búsqueda (la secuencia de interés original) como el mejor acierto. Usando la misma lógica se encuentra un parálogo (homólogo a un gen en el mismo organismo). En caso de grandes familias de secuencias, se puede usar el programa ClustalW [Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ebi
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(.) ac (.) uk/Tools/clustalw2/index (.) html], seguido por un árbol de unión del vecino más próximo (Protocolo de transferencia de hipertexto://en (.) wikipedia (.) org/wiki/Neighbor-joining) que ayuda a visualizar la agrupación.
Según algunas realizaciones de la invención, el polinucleótido exógeno codifica un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos expuesta por SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202-206, 208-211, 213-391, 1655, 961-1529, 1660-1662 o 1663.
Según algunas realizaciones de la invención, el polinucleótido exógeno comprende una secuencia de ácidos nucleicos que es al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 81%, al menos
aproximadamente 82%, al menos aproximadamente 83%, al menos aproximadamente 84%, al menos
aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 86%, al menos aproximadamente 87%, al menos
aproximadamente 88%, al menos aproximadamente 89%, al menos aproximadamente 90%, al menos
aproximadamente 91%, al menos aproximadamente 92%, al menos aproximadamente 93%, al menos
aproximadamente 93%, al menos aproximadamente 94%, al menos aproximadamente 95%, al menos
aproximadamente 96%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98%, al menos
aproximadamente 99%, por ejemplo, 100% idéntica a la secuencia de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533, 1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534,
1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543, 1668, 1539, 1550, 1558, 1565, 1541,
1667, 1542, 1544, 1537, 1551, 1545, 1-200, 1653, 392-960 y 1656-1659.
La identidad (por ejemplo, porcentaje de homología) se puede determinar usando cualquier software de comparación de homología, que incluye, por ejemplo, el software BlastN del Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI) tal como usando parámetros por defecto.
Según algunas realizaciones de la invención, el polinucleótido exógeno es al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos
aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 81%, al menos aproximadamente 82%, al menos
aproximadamente 83%, al menos aproximadamente 84%, al menos aproximadamente 85%, al menos
aproximadamente 86%, al menos aproximadamente 87%, al menos aproximadamente 88%, al menos
aproximadamente 89%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 91%, al menos
aproximadamente 92%, al menos aproximadamente 93%, al menos aproximadamente 93%, al menos
aproximadamente 94%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 96%, al menos
aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98%, al menos aproximadamente 99%, por ejemplo, 100% idéntico al polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en SEQ iD NO: 1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533,
1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534, 1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654,
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Según algunas realizaciones de la invención, el polinucleótido exógeno se expone por SEQ ID NO:1530, 1561, 1532, 1531, 1562, 1533, 1538, 1549, 1665, 1566, 1554, 1563, 1557, 1564, 1534, 1536, 1552, 1553, 1666, 1547, 1548, 1556, 1559, 1560, 1654, 1555, 1540, 1543, 1668, 1539, 1550, 1558, 1565, 1541, 1667, 1542, 1544, 1537, 1551, 1545, 1200, 1653, 392-960 y 1656-1658 o 1659.
Como se usa en el presente documento, el término "polinucleótido" se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos mono o bicatenaria que se aísla y se proporciona en forma de una secuencia de ARN, una secuencia complementaria de polinucleótidos (ADNc), una secuencia genómica de polinucleótidos y/o secuencias de polinucleótidos compuestas (por ejemplo, una combinación de las anteriores).
Como se usa en el presente documento, la expresión "secuencia de polinucleótidos complementaria" se refiere a una secuencia, que resulta de la transcripción inversa de ARN mensajero usando una transcriptasa inversa o cualquier otra ADN polimerasa dependiente de ARN. Dicha secuencia se puede amplificar posteriormente in vivo o in vitro usando una ADN polimerasa dependiente de ADN.
Como se usa en el presente documento, la expresión " secuencia genómica de polinucleótidos" se refiere a una secuencia derivada (identificada o aislada) de un cromosoma y así representa una porción contigua de un cromosoma.
Como se usa en el presente documento, la expresión "secuencia de polinucleótidos compuesta" se refiere a una secuencia, que es al menos parcialmente complementaria y al menos parcialmente genómica. Una secuencia compuesta puede incluir algunas secuencias exonales requeridas para codificar el polipéptido de la presente invención, así como algunas secuencias intrónicas que se interponen entremedias. Las secuencias intrónicas pueden ser de cualquier fuente, que incluye de otros genes, y normalmente incluirá secuencias señal de corte y empalme conservadas. Dichas secuencias intrónicas pueden incluir además elementos reguladores de la expresión que actúan en cis.
Se pueden optimizar para la expresión las secuencias de ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos de la presente invención. Un ejemplo no limitante de una secuencia de ácidos nucleicos optimizada se proporciona en SEQ ID NO: 1531, que codifica el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta por SEQ ID NO: 201. Ejemplos
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de dichas modificaciones de secuencia incluyen, pero no se limitan a, un contenido alterado de G/C para un enfoque más estrecho que normalmente se encuentra en las especies de plantas de interés, y la retirada de codones que anormalmente se encuentran en las especies de plantas comúnmente denominada optimización de codón.
La expresión "optimización de codón" se refiere a la selección de nucleótidos de ADN apropiados para su uso dentro de un gen estructural o su fragmento que aproxima el uso de codones dentro de la planta de interés. Por tanto, un gen o secuencia de ácidos nucleicos optimizado se refiere a un gen en el que se ha modificado la secuencia de nucleótidos de un gen nativo o que existe de forma natural con el fin de utilizar codones estadísticamente preferidos o estadísticamente favorecidos dentro de la planta. La secuencia de nucleótidos normalmente se examina al nivel de ADN y la región codificante optimizada para la expresión en la especie de planta se determina usando cualquier procedimiento adecuado, por ejemplo como se describe en Sardana et al. (1996, Plant Cell Reports 15:677-681). En este método, la desviación estándar de uso de codones, una medida del sesgo del uso de codones, se puede calcular hallando primero la desviación cuadrática proporcional de uso de cada codón del gen nativo con respecto a la de genes de planta altamente expresados, seguido por un cálculo de la desviación cuadrática promedio. La fórmula usada es: 1 SDCU = n = 1N[(Xn-Yn)/Yn]2/N, donde Xn se refiere a la frecuencia de uso de codón n en genes de planta altamente expresados, donde Yn a la frecuencia de uso de codón n en el gen de interés y N se refiere al número total de codones en el gen de interés. Una tabla de uso de codones de genes altamente expresados de plantas dicotiledóneas se recopila usando los datos de Murray et al. (1989, Nuc Acids Res, 17:477-498).
Un método de optimización de la secuencia de ácidos nucleicos según el uso de codones preferido para un tipo de célula de planta particular se basa en el uso directo, sin realizar cálculos estadísticos adicionales, de tablas de optimización de codón tales como el proporcionado en línea en la base de datos de uso de codones a través del banco de ADN del NIAS (Instituto Nacional de Ciencias Agrobiológicas, por la expresión inglesa National Institute of Agrobiological Sciences) en Japón (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) kazusa (.) o (.) jp/codon/). La base de datos de uso de codones contiene tablas de uso de codones para varias especies diferentes, habiéndose determinado estadísticamente cada tabla de uso de codones basándose en los datos presentes en Genbank.
Usando las tablas anteriores para determinar los codones más preferidos o más favorecidos para cada aminoácido en una especie particular (por ejemplo, arroz), se puede optimizar por codones para esa especie de planta particular una secuencia de nucleótidos que existe de forma natural que codifica una proteína de interés. Esto se efectúa reemplazando codones que pueden tener una baja incidencia estadística en el genoma de la especie particular con codones correspondientes, con respecto a un aminoácido, que están estadísticamente más favorecidos. Sin embargo, se pueden seleccionar uno o más codones menos favorecidos para delecionar sitios de restricción existentes, para crear nuevos en uniones posiblemente útiles (extremo 5' y 3' para añadir péptido señal o casetes de terminación, sitios internos que se podrían usar para cortar y empalmar juntos segmentos para producir una secuencia de longitud completa correcta), o para eliminar secuencias de nucleótidos que pueden afectar negativamente la estabilidad o expresión de ARNm.
La secuencia de nucleótidos codificante que existe de forma natural ya puede, antes de cualquier modificación, contener varios codones que corresponden a un codón estadísticamente favorecido en una especie de planta particular. Por tanto, la optimización de codón de la secuencia de nucleótidos nativa puede comprender determinar qué codones, dentro de la secuencia de nucleótidos nativa, no están estadísticamente favorecidos con respecto a una planta particular, y modificar estos codones según una tabla de uso de codones de la planta particular para producir un derivado optimizado por codones. Una secuencia de nucleótidos modificada puede ser completa o parcialmente optimizada para el uso de codones de la planta a condición de que la proteína codificada por la secuencia de nucleótidos modificada se produzca a un nivel superior a la proteína codificada por el gen que existe de forma natural o nativo correspondiente. La construcción de genes sintéticos alterando el uso de codones se describe en, por ejemplo, la solicitud de patente PCT 93/07278.
Así, la invención engloba secuencias de ácidos nucleicos descritas anteriormente en este documento; sus fragmentos, secuencias hibridables con ellas, secuencias homólogas a ellas, secuencias que codifican polipéptidos similares con diferente uso de codones, secuencias alteradas caracterizadas por mutaciones, tales como deleción, inserción o sustitución de uno o más nucleótidos, ya sea que existen de forma natural o inducidas por el hombre, ya sea aleatoriamente o de una forma dirigida.
La invención proporciona un polipéptido aislado que tiene una secuencia de aminoácidos al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 81%, al menos aproximadamente 82%, al menos
aproximadamente 83%, al menos aproximadamente 84%, al menos aproximadamente 85%, al menos
aproximadamente 86%, al menos aproximadamente 87%, al menos aproximadamente 88%, al menos
aproximadamente 89%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 91%, al menos
aproximadamente 92%, al menos aproximadamente 93%, al menos aproximadamente 93%, al menos
aproximadamente 94%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 96%, al menos
aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98%, al menos aproximadamente 99%, o más, digamos 100% homóloga a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202206, 208-211,213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1663.
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Según algunas realizaciones de la invención, el polipéptido se expone por SEQ ID NO: 201, 207, 212, 202-206, 208211, 213-391, 1655, 961-1529 y 1660-1662, o 1663.
La invención también engloba fragmentos de los polipéptidos anteriormente descritos y polipéptidos que tienen mutaciones, tales como deleciones, inserciones o sustituciones de uno o más aminoácidos, ya sea que existen de forma natural o inducidas por el hombre, ya sea aleatoriamente o de una forma dirigida.
El término "planta", como se usa en el presente documento, engloba plantas enteras, ancestros y progenie de las plantas y partes de planta, que incluyen semillas, brotes, tallos, raíces (incluyendo tubérculos) y células vegetales, tejidos y órganos. La planta puede estar en cualquier forma que incluye cultivos en suspensión, embriones, regiones meristemáticas, tejido de callo, hojas, gametofitos, esporofitos, polen y microesporas. Las plantas que son particularmente útiles en los métodos de la invención incluyen todas las plantas que pertenecen a la superfamilia Viridiplantae, en particular plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas que incluyen leguminosa de pasto o forraje, planta ornamental, cultivo alimenticio, árbol, o arbusto seleccionado de la lista que comprende Acacia spp., Acer spp., Actinidia spp., Aesculus spp., Agathis australis, Albizia amara, Alsophila tricolor, Andropogon spp., Arachis spp, Areca catechu, Astelia fragrans, Astragalus cicer, Baikiaea plurijuga, Betula spp., Brassica spp., Bruguiera gymnorrhiza, Burkea africana, Butea frondosa, Cadaba farinosa, Calandra spp, Camela sinensis, Canna indica, Capsicum spp., Cassia spp., Centroema pubescens, Chacoomeles spp., Cinnamomum cassia, Coffea arabica, Colophospermum mopane, Coronillia varia, Cotoneaster serotina, Crataegus spp., Cucumis spp., Cupressus spp., Cyathea dealbata, Cydonia oblonga, Cryptomeria japonica, Cymbopogon spp., Cynthea dealbata, Cydonia oblonga, Dalbergia monetaria, Davala divaricata, Desmodium spp., Dicksonia squarosa, Dibeteropogon amplectens, Dioclea spp, Dolichos spp., Dorycnium rectum, Echinochloa pyramidalis, Ehraffia spp., Eleusine coracana, Eragrestis spp., Erythrina spp., Eucalyptus spp., Euclea schimperi, Eulalia villosa, Pagopyrum spp., Feijoa sellowlana, Fragaria spp., Flemingia spp, Freycinetia banksli, Geranium thunbergii, GinAgo biloba, Glycine javanica, Gliricidia spp, Gossypium hirsutum, Grevillea spp., Guibourtia coleosperma, Hedysarum spp., Hemaffhia altissima, Heteropogon contoffus, Hordeum vulgare, Hyparrhenia rufa, Hypericum erectum, Hypeffhelia dissolute, Indigo incamata, Iris spp., Leptarrhena pyrolifolia, Lespediza spp., Lettuca spp., Leucaena leucocephala, Loudetia simplex, Lotonus bainesli, Lotus spp., Macrotyloma axillare, Malus spp., Manihot esculenta, Medicago saliva, Metasequoia glyptostroboides, Musa sapientum, Nicotianum spp., Onobrychis spp., Ornithopus spp., Oryza spp., Peltophorum africanum, Pennisetum spp., Persea gratissima, Petunia spp., Phaseolus spp., Phoenix canariensis, Phormium cookianum, Photinia spp., Picea glauca, Pinus spp., Pisum sativam, Podocarpus totara, Pogonarthria fleckii, Pogonaffhria squarrosa, Populus spp., Prosopis cineraria, Pseudotsuga menziesii, Pterolobium stellatum, Pyrus communis, Quercus spp., Rhaphiolepsis umbellata, Rhopalostylis sapida, Rhus natalensis, Ribes grossularia, Ribes spp., Robinia pseudoacacia, Rosa spp., Rubus spp., Salix spp., Schyzachyrium sanguineum, Sciadopitys vefficillata, Sequoia sempervirens, Sequoiadendron giganteum, Sorghum bicolor, Spinacia spp., Sporobolus fimbriatus, Stiburus alopecuroides, Stylosanthos humilis, Tadehagi spp, Taxodium distichum, Themeda triandra, Trifolium spp., Triticum spp., Tsuga heterophylla, Vaccinium spp., Vicia spp., Vitis vinifera, Watsonia pyramidata, Zantedeschia aethiopica, Zea mays, amaranto, alcachofa, espárrago, brócoli, coles de Bruselas, repollo, canola, zanahoria, coliflor, apio, berza, lino, col rizada, lenteja, colza oleaginosa, ocra, cebolla, patata, arroz, soja, paja, remolacha azucarera, caña de azúcar, girasol, tomate, calabaza, maíz, trigo, cebada, centeno, avena, cacahuete, guisante, lenteja y alfalfa, algodón, soja, canola, pimiento, girasol, tabaco, berenjena, eucalipto, un árbol, una planta ornamental, una herbácea perenne y un cultivo forrajero. Alternativamente, para los métodos de la presente invención se puede usar algas y otras plantas no Viridiplantae.
Según algunas realizaciones de la invención, la planta usada por el método de la invención es una planta de cultivo tal como arroz, maíz, trigo, cebada, cacahuete, patata, sésamo, olivo, aceite de palma, banana, soja, girasol, canola, caña de azúcar, alfalfa, mijo, leguminosas (judía, guisante), lino, altramuz, colza, tabaco, álamo y algodón.
La expresión del polinucleótido exógeno de la invención dentro de la planta se puede efectuar transformando una o más células de la planta con el polinucleótido exógeno, seguido por generar una planta madura de las células transformadas y cultivar la planta madura en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido exógeno dentro de la planta madura.
Según algunas realizaciones de la invención, la transformación se efectúa introduciendo en la célula de planta una construcción de ácidos nucleicos que incluye el polinucleótido exógeno de algunas realizaciones de la invención y al menos un promotor capaz de dirigir la transcripción del polinucleótido exógeno en la célula de planta. Más detalles de enfoques adecuados de transformación se proporcionan en el presente documento más adelante.
Como se usa en el presente documento, el término "promotor" se refiere a una región de ADN que se encuentra en la dirección 5' del sitio de iniciación transcripcional de un gen al que se une ARN polimerasa para iniciar la transcripción de ARN. El promotor controla dónde (por ejemplo, qué porción de una planta) y/o cuándo (por ejemplo, en qué estadio o condición en la vida de un organismo) se expresa el gen.
Se puede usar por la construcción de ácidos nucleicos de la presente invención cualquier secuencia promotora adecuada. Según algunas realizaciones de la invención, el promotor es un promotor constitutivo, un promotor específico de tejido, o uno inducible por estrés abiótico.
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Promotores constitutivos adecuados incluyen, por ejemplo, promotor 35S del CaMV (SEQ ID NO: 1546; Odell et al., Nature 313:810-812, 1985); el promotor At6669 de Arabidopsis (SEQ ID NO: 1652; véase la publicación PCT N° WO04081173A2); Ubi 1 de maíz (Christensen et al., Plant Sol. Biol. 18: 675-689, 1992); actina de arroz (McElroy et al., Plant Cell 2: 163-171, 1990); pEMU (Last et al., Theor. Appl. Genet. 81: 581-588, 1991); 19S del CaMV (Nilsson et al., Physiol. Plant 100: 456-462, 1997); GOS2 (de Pater et al., Plant J Nov; 2(6): 837-44, 1992); ubiquitina (Christensen et al., Plant Mol. Biol. 18: 675-689, 1992); ciclofilina de arroz (Bucholz et al., Plant Mol Biol. 25(5):837- 43, 1994); histona H3 de maíz (Lepetit et al., Mol. Gen. Genet. 231: 276-285, 1992); actina 2 (An et al., Plant J. 10(1);107-121, 1996), el promotor constitutivo CT2 de la punta de las raíces (SEQ iD NO: 1535; véase también la solicitud PCT N° IL/2005/000627) y Super MAS sintético (Ni et al., The Plant Journal 7: 661-76, 1995). Otros promotores constitutivos incluyen aquellos en las patentes de EE.UU. N° 5.659.026, 5.608.149; 5.608.144; 5.604.121; 5.569.597; 5.466.785; 5.399.680; 5.268.463; y 5.608.142.
Los promotores específicos de tejido adecuados incluyen, pero no se limitan a, los promotores específicos de hoja [tales como se describen, por ejemplo, por Yamamoto et al., Plant J. 12:255-265, 1997; Kwon et al., Plant Physiol. 105:357-67, 1994; Yamamoto et al., Plant Cell Physiol. 35:773-778, 1994; Gotor et al., Plant J. 3:509-18, 1993; Orozco et al., Plant Mol. Biol. 23:1129-1138, 1993; y Matsuoka et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:9586-9590, 1993], promotores preferidos de semilla [por ejemplo, de genes específicos de semilla (Simon, et al., Plant Mol. Biol. 5. 191, 1985; Scofield, et al., J. Biol. Chem. 262: 12202, 1987; Baszczynski, et al., Plant Mol. Biol. 14: 633, 1990), albúmina de nuez de Brasil (Pearson et al., Plant Mol. Biol. 18: 235- 245, 1992), legumina (Ellis, et al. Plant Mol. Biol. 10: 203214, 1988), glutelina (arroz) (Takaiwa, et al., Mol. Gen. Genet. 208: 15-22, 1986; Takaiwa, et al., FEBS Letts. 221: 4347, 1987), zeína (Matzke et al., Plant Mol Biol, 143),323-32 1990), napA (Stalberg, et al., Plant 199: 515-519, 1996), SPA de trigo (Albanietal, Plant Cell, 9: 171- 184, 1997), oleosina de girasol (Cummins, et al., Plant Mol. Biol. 19: 873876, 1992)], promotores específicos de endospermo [por ejemplo, LMWy HMW de trigo, glutenina-1 (Mol Gen Genet 216:81-90, 1989; NAR 17:461-2), gliadinas a, b y g de trigo (EMBO3:1409-15, 1984), promotor ltrl de cebada, hordeína B1, C, D de cebada (Theor Appl Gen 98:1253-62, 1999; Plant J 4:343-55, 1993; Mol Gen Genet 250:750-60, 1996), DOF de cebada (Mena et al., The Plant Journal, 116(1): 53-62, 1998), Biz2 (documento EP99106056.7), promotor sintético (Vicente-Carbajosa et al., Plant J. 13: 629-640, 1998), prolamina de arroz NRP33, globulina de arroz -Glb-1 (Wu et al., Plant Cell Physiology 39(8) 885- 889, 1998), alfa-globulina de arroz REB/OHP-1 (Nakase et al. Plant Mol. Biol. 33: 513-S22, 1997), ADP-glucosa PP de arroz (Trans Res 6:157-68, 1997), familia del gen ESR de maíz (Plant J 12:235-46, 1997), gamma-kafirina de sorgo (PMB 32:1029-35, 1996)], promotores específicos de embrión [por ejemplo, OSH1 de arroz (Sato et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 8117-8122), KNOX (Postma-Haarsma et al., Plant Mol. Biol. 39:257-71, 1999), oleosina de arroz (Wu et at, J. Biochem., 123:386, 1998)] y promotores específicos de flor [por ejemplo, AtPRP4, caleno sintasa (chsA) (Van der Meer, et al., Plant Mol. Biol, 15, 95-109,1990), LAT52 (Twell et al., Mol. Gen Genet, 217:240-245; 1989), apetala-3].
Los promotores inducibles por estrés abiótico adecuados incluyen, pero no se limitan a, promotores inducibles por sal, tales como RD29A (Yamaguchi-Shinozalei et al., Mol. Gen. Genet. 236: 331-340, 1993); promotores inducibles por sequía, tales como el promotor del gen rab17 de maíz (Pia et al., Plant Mol. Biol. 21: 259-266, 1993), el promotor del gen rab28 de maíz (Busk et al., Plant J. 11: 1285-1295, 1997) y el promotor del gen lvr2 de maíz (Pelleschi et al., Plant Mol. Biol. 39: 373-380, 1999); promotores inducibles por calor tales como el promotor hsp80 inducible por calor del tomate (patente de EE.UU. N° 5.187.267).
La construcción de ácidos nucleicos de algunas realizaciones de la invención puede incluir además un marcador de selección y/o un origen de replicación apropiados. Según algunas realizaciones de la invención, la construcción de los ácidos nucleicos utilizados es un vector lanzadera, que se puede propagar tanto en E. coli (en la que la construcción comprende un marcador de selección y origen de replicación apropiados) como ser compatible con la propagación en células. La construcción según la presente invención puede ser, por ejemplo, un plásmido, un bácmido, un fagémido, un cósmido, un fago, un virus o un cromosoma artificial.
La construcción de ácidos nucleicos de algunas realizaciones de la invención se puede utilizar para transformar estable o transitoriamente células de plantas. En la transformación estable, el polinucleótido exógeno se integra en el genoma de la planta y como tal representa un rasgo estable y heredado. En la transformación transitoria, el polinucleótido exógeno se expresa por la célula transformada, pero no se integra en el genoma y como tal representa un rasgo transitorio.
Existen diversos métodos de introducción de genes extraños en tanto plantas monocotiledóneas como dicotiledóneas (Potrykus, I., Annu. Rev. Plant. Physiol., Plant. Mol. Biol. (1991) 42:205-225; Shimamoto et al., Nature (1989) 338:274- 276).
Los métodos principales de causar integración estable de ADN exógeno en ADN genómico de planta incluyen dos enfoques principales:
(i) transferencia de genes mediada por Agrobacterium: Klee et al. (1987) Annu. Rev. Plant Physiol. 38:467-486; Klee y Rogers en Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol. 6, Molecular Biology of Plant Nuclear Genes, eds. Schell, J., y Vasil, L. K., Academic Publishers, San Diego, Calif. (1989) p. 2-25; Gatenby, en Plant Biotechnology, eds Kung, S. y Arntzen, C. J., Butterworth Publishers, Boston, Mass. (1989) p. 93-112.
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(ii) captación directa de ADN: Paszkowski et al., en Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol. 6, Molecular Biology of Plant Nuclear Genes eds. Schell, J., y Vasil, L. K., Academic Publishers, San Diego, Calif. (1989) p. 52-68; incluyendo métodos de captación directa de ADN en protoplastos, Toriyama, K. et al. (1988) Bio/Technology 6:1072- 1074. Captación de ADN inducida por electrochoque breve de células de planta: Zhang et al. Plant Cell Rep. (1988) 7:379-384. Fromm et al. Nature (1986) 319: 791-793. Inyección de ADN en células o tejidos de plantas mediante bombardeo con partículas, Klein et al. Bio/Technology (1988) 6:559-563; McCabe et al. Bio/Technology (1988) 6:923- 926; Sanford, Physiol. Plant. (1990) 79: 206-209; usando sistemas de micropipeta: Neuhaus et al., Theor. Appl. Genet. (1987) 75:30-36; Neuhaus y Spangenberg, Physiol. Plant. (1990) 79: 213-217; fibras de vidrio o transformación con fibras cortas monocristalinas de carburo de silicio de cultivos celulares, tejidos de embriones o de callos, patente de EE.UU. N° 5.464.765 o por incubación directa de ADN con polen en germinación, DeWet et al. en Experimental Manipulation of Ovule Tissue, eds. Chapman, G. P. y Mantell, S. H. y Daniels, W. Longman, Londres, (1985) p. 197209; y Ohta, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986) 83: 715-719.
El sistema de Agrobacterium incluye el uso de vectores plasmídicos que contienen segmentos de ADN definidos que se integran en el ADN genómico de la planta. Los métodos de inoculación del tejido de la planta varían dependiendo de la especie de la planta y del sistema de suministro de Agrobacterium. Un enfoque ampliamente usado es el procedimiento con disco foliar que se puede realizar con cualquier explante tisular que proporcione una buena fuente para iniciar la diferenciación de toda la planta. Véase, por ejemplo, Horsch et al. en Plant Molecular Biology Manual A5, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht (1988) p. 1-9. Un enfoque complementario emplea el sistema de suministro de Agrobacterium en combinación con infiltración a vacío. El sistema de Agrobacterium es especialmente viable en la creación de planta dicotiledóneas transgénicas.
Existen diversos métodos de transferencia directa de ADN en células de planta. En la electroporación, los protoplastos se exponen brevemente a un fuerte campo eléctrico. En la microinyección, el ADN se inyecta mecánicamente directamente en las células usando micropipetas muy pequeñas. En el bombardeo con micropartículas, el ADN se adsorbe en microproyectiles, tales como cristales de sulfato de magnesio o partículas de tungsteno, y los microproyectiles se aceleran físicamente en las células o tejidos de la planta.
Tras la transformación estable se realiza la propagación de la planta. El método más común de propagación de plantas es por semillas. Sin embargo, la regeneración por propagación por semillas tiene la deficiencia de que, debido a la heterocigosidad, hay una ausencia de uniformidad en el cultivo, puesto que las semillas se producen por plantas según las variaciones genéticas regidas por las leyes de Mendel. Básicamente, cada semilla es genéticamente diferente y cada una crecerá con sus propios rasgos específicos. Por tanto, se prefiere que la planta transformada se produzca de tal manera que la planta regenerada tenga los mismos rasgos y características que los de la planta transgénica parental. Por esta razón se prefiere que la planta transformada se regenere por micropropagación, que proporciona una reproducción uniforme y rápida de las plantas transformadas.
La micropropagación es un proceso de cultivo de plantas de nueva generación a partir de un único trozo de tejido que se ha cortado de una planta o variedad de cultivo parental seleccionada. Este proceso permite la reproducción masiva de plantas que tienen el tejido preferido que expresa la proteína de fusión. Las plantas de nueva generación que se producen son genéticamente idénticas a, y tienen todas las características de, la planta original. La micropropagación permite la producción masiva de material vegetal de calidad en un corto periodo de tiempo y ofrece una rápida multiplicación de las variedades de cultivo seleccionadas en la conservación de las características de la planta transformada o transgénica original. Las ventajas de la clonación de plantas son la velocidad de la multiplicación de la planta y la calidad y uniformidad de las plantas producidas.
La micropropagación es un procedimiento multi-etapa que requiere la alteración del medio de cultivo o de las condiciones de cultivo entre las etapas. Por tanto, el proceso de micropropagación implica cuatro fases básicas: fase uno, cultivo tisular inicial; fase dos, multiplicación del cultivo tisular; fase tres, diferenciación y formación de la planta; y fase cuatro, cultivo y fortalecimiento en invernadero. Durante la fase, cultivo tisular inicial, se establece el cultivo tisular y se certifica que está libre de contaminantes. Durante la fase dos, el cultivo tisular inicial se multiplica hasta que se produzca un número suficiente de muestras tisulares para cumplir los objetivos de producción. Durante la fase tres, las muestras tisulares cultivadas en la fase dos se dividen y se desarrollan en plántulas individuales. En la fase cuatro, las plántulas transformadas se transfieren a un invernadero para el fortalecimiento, donde la tolerancia de las plantas a la luz se aumenta gradualmente de tal manera que puedan crecer en el entorno natural.
Según algunas realizaciones de la invención, las plantas transgénicas se generan por transformación transitoria de células de hoja, células meristemáticas o de toda la planta.
La transformación transitoria se puede efectuar por cualquiera de los métodos de transferencia directa de ADN descritos anteriormente o por infección viral usando virus de plantas modificados.
Los virus que se ha demostrado que son útiles para la transformación de hospedadores de planta incluyen CaMV, virus del mosaico del tabaco (TMV), virus del mosaico del bromo (BMV) y virus del mosaico común de la judía (BV o BCMV). La transformación de plantas usando virus de plantas se describe en la patente de EE.UU. N° 4.855.237 (virus del mosaico amarillo de la judía; BGV), documento Ep-A 67.553 (TMV), solicitud japonesa publicada N° 63-14693 (TMV), documento EPA 194.809 (BV), documento EPA 278.667 (BV); y Gluzman, Y. et al., Communications in
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Molecular Biology: Viral Vectors, Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, pp. 172-189 (1988). En el documento WO 87/06261 se describen partículas de pseudovirus para su uso en la expresión de ADN exógeno en muchos hospedadores, incluyendo plantas.
Según algunas realizaciones de la invención, el virus usado para las transformaciones transitorias es un avirulento y, por tanto, incapaz de causar graves síntomas tales como tasa de crecimiento reducida, mosaico, manchas anulares, enrollamiento foliar, amarilleamiento, formación de vetas, formación de pústulas, formación de tumores y picaduras. Un virus avirulento adecuado puede ser un virus avirulento de origen natural o un virus artificialmente atenuado. La atenuación de virus se puede efectuar usando métodos bien conocidos en la técnica que incluyen, pero no se limitan a, calentamiento subletal, tratamiento químico o por técnicas de mutagénesis dirigida, tales como las descritas, por ejemplo, por Kurihara y Watanabe (Molecular Plant Pathology 4: 259-269, 2003), Galon et al. (1992), Atreya et al. (1992) y Huet et al. (1994).
Se pueden obtener cepas de virus adecuadas de fuentes disponibles tales como, por ejemplo, la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) o por aislamiento de plantas infectadas. El aislamiento de virus de tejidos de plantas infectadas se puede efectuar por técnicas bien conocidas en la técnica, tales como las descritas, por ejemplo, por Foster y Tatlor, Eds. "Plant Virology Protocols: From Virus lsolation to Transgenic Resistance (Methods in Molecular Biology (Humana Pr), Vol 81)", Humana Press, 1998. Brevemente, los tejidos de una planta infectada, que se piensa que contienen una alta concentración de un virus adecuado, preferentemente hojas y pétalos de flores jóvenes, se cultivan en una disolución tampón (por ejemplo, disolución de tampón fosfato) para producir una savia infectada con virus que se puede usar en inoculaciones posteriores.
La construcción de virus de ARN de planta para la introducción y expresión de secuencias de polinucleótidos exógenos no virales en plantas se demuestra en las referencias anteriores, así como en Dawson, W. O. et al., Virology (1989) 172: 285-292; Takamatsu et al. EMBO J. (1987) 6:307-311; French et al. Science (1986) 231:1294-1297; Takamatsu et al. FEBS Letters (1990) 269:73-76; y en la patente de EE.UU. N° 5.316.931.
Cuando el virus es un virus de ADN, se pueden hacer modificaciones adecuadas en el propio virus. Alternativamente, el virus se puede clonar primero en un plásmido bacteriano para facilitar la construcción del vector viral deseado con el ADN exógeno. El virus puede luego extraerse del plásmido. Si el virus es un virus de ADN, se puede unirse al ADN viral un origen de replicación bacteriano, que después se replica por la bacteria. La transcripción y traducción de este ADN producirá la proteína de la cubierta que encapsidará el ADN viral. Si el virus es un virus de aRn, el virus se clona generalmente como un ADNc y se inserta en un plásmido. El plásmido se usa luego para fabricar todas las construcciones. El virus de ARN se produce después transcribiendo la secuencia viral del plásmido y traduciendo los genes virales para producir la(s) proteína(s) de la cubierta que encapsidan el ARN viral.
En una realización, se proporciona un polinucleótido viral de planta en el que se ha delecionado de un polinucleótido viral la secuencia codificante de la proteína de la cubierta nativa, una secuencia codificante de la proteína de la cubierta viral de una planta no nativa y un promotor no nativo, preferentemente se ha insertado el promotor subgenómico de la secuencia codificante de la proteína de la cubierta no nativa, capaz de expresar en la planta hospedadora, encapsidar el polinucleótido viral de la planta recombinante y de garantizar una infección sistémica del hospedador por el polinucleótido viral de la planta recombinante. Alternativamente, el gen de la proteína de la cubierta se puede inactivar por inserción de la secuencia de polinucleótidos no nativa en su interior, de tal manera que se produce una proteína. El polinucleótido viral de la planta recombinante puede contener uno o más promotores subgenómicos no nativos adicionales. Cada promotor subgenómico no nativo puede transcribir o expresar genes adyacentes o secuencias de polinucleótidos en la planta hospedadora y no puede recombinarse entre sí ni con promotores subgenómicos nativos. Las secuencias de polinucleótidos (exógenas) no nativas se pueden insertar adyacentes al promotor subgenómico viral de la planta nativa o a los promotores subgenómicos virales de la planta nativa y no nativa si se incluye más de una secuencia de polinucleótidos. Las secuencias de polinucleótidos no nativas se transcriben o se expresan en la planta hospedadora bajo el control del promotor subgenómico para producir los productos deseados.
En una segunda realización, al igual que en la primera realización, se proporciona un polinucleótido viral de planta recombinante, excepto que la secuencia codificante de la proteína de la cubierta nativa se coloca adyacente a uno de los promotores sugbenómicos de la proteína de la cubierta no nativa en lugar de a una secuencia codificante de la proteína de la cubierta no nativa.
En una tercera realización, se proporciona un polinucleótido viral de planta recombinante en el que el gen de la proteína de la cubierta nativa es adyacente a su promotor subgenómico y uno o más promotores subgenómicos no nativos se han insertado en el polinucleótido viral. Los promotores subgenómicos no nativos insertados pueden transcribir o expresar genes adyacentes en una planta hospedadora y no pueden recombinarse entre sí ni con promotores subgenómicos nativos. Las secuencias de polinucleótidos no nativas se pueden insertar adyacentes a los promotores virales de plantas subgenómicos no nativos de tal manera que las secuencias se transcriban o expresen en la planta hospedadora bajo el control de los promotores subgenómicos para producir el producto deseado.
En una cuarta realización, al igual que en la tercera realización, se proporciona un polinucleótido viral de planta recombinante, excepto que la secuencia codificante de la proteína de la cubierta nativa se reemplaza por una secuencia codificante de la proteína de la cubierta no nativa.
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Los vectores virales se encapsidan por las proteínas de la cubierta codificadas por el polinucleótido viral de planta recombinante para producir un virus de planta recombinante. El polinucleótido viral de planta recombinante o virus de planta recombinante se usa para infectar plantas hospedadoras apropiadas. El polinucleótido viral de planta recombinante se puede replicar en el hospedador, propagar sistémicamente en el hospedador y transcribir o expresar gen(es) extraño(s) (polinucleótido exógeno) en el hospedador para producir la proteína deseada.
En Foster y Taylor, eds. "Plant Virology Protocols: From Virus lsolation to Transgenic Resistance (Methods in Molecular Biology (Humana Pr), Vol 81)", Humana Press, 1998; Maramorosh y Koprowski, eds. "Methods in Virology" 7 vols, Academic Press, Nueva York 1967-1984; Hill, S.A. "Methods in Plant Virology", Blackwell, Oxford, 1984; Walkey, D.G.A. "Applied Plant Virology", Wiley, Nueva York, 1985; y Kado y Agrawa, eds. "Principies and Techniques in Plant Virology", Van Nostrand-Reinhold, Nueva York, se pueden encontrar técnicas para la inoculación de virus en plantas.
Además de lo anterior, el polinucleótido de la presente invención también se puede introducir en un genoma de cloroplasto, mediante lo cual se facilita la expresión del cloroplasto.
Se conoce una técnica para introducir secuencias de polinucleótidos exógenos en el genoma de los cloroplastos. Esta técnica implica los siguientes procedimientos. En primer lugar, se tratan químicamente las células de la planta para reducir el número de cloroplastos por célula a aproximadamente uno. Después, se introduce el polinucleótido exógeno mediante bombardeo de partículas en las células con el objetivo de introducir al menos una molécula de polinucleótido exógeno en el cloroplasto. El polinucleótido exógeno se selecciona de tal manera que sea integrable en el genoma del cloroplasto mediante recombinación homóloga que se efectúa fácilmente por enzimas inherentes al cloroplasto. Para esta finalidad, el polinucleótido exógeno incluye, además de un gen de interés, al menos un tramo polinucleotídico que deriva del genoma del cloroplasto. Además, el polinucleótido exógeno incluye un marcador de selección, que desempeña procedimientos de selección secuenciales para confirmar que todas, o sustancialmente todas, las copias de los genomas del cloroplasto, después de dicha selección, incluirán el polinucleótido exógeno. Detalles adicionales referentes a esta técnica se encuentran en las patentes de EE.UU. N° 4.945.050; y 5.693.507. Un polipéptido se puede así producir por el sistema de expresión de proteínas del cloroplasto y llegar a integrarse en la membrana interna del cloroplasto.
Puesto que la tolerancia al estrés abiótico, crecimiento, biomasa, rendimiento y/o vigor en las plantas puede implicar la acción de genes múltiples de manera aditiva o en sinergia (véase, por ejemplo, Quesda et al., Plant Physiol. 130:951- 063, 2002), la presente divulgación también contempla expresar una pluralidad de polinucleótidos exógenos en una sola planta hospedadora para así obtener un efecto superior sobre la tolerancia al estrés abiótico, el crecimiento, la biomasa, el rendimiento y/o el vigor.
La expresión de una pluralidad de polinucleótidos exógenos en una sola planta hospedadora se puede efectuar cointroduciendo construcciones de ácido nucleico múltiples, incluyendo cada una de ellas un polinucleótido exógeno diferente, en una sola célula de planta. La célula transformada puede después regenerarse en una planta madura usando los métodos descritos anteriormente en el presente documento.
Alternativamente, la expresión de una pluralidad de polinucleótidos exógenos en una sola planta hospedadora se puede efectuar co-introduciendo en una sola célula de planta una sola construcción de ácido nucleico que incluye una pluralidad de polinucleótidos exógenos diferentes. Dicha construcción se puede diseñar con una sola secuencia promotora que puede transcribir un ARN mensajero policistrónico que incluye todas las diferentes secuencias de polinucleótidos exógenos diferentes. Para permitir la co-traducción de los diferentes polipéptidos codificados por el ARN mensajero policistrónico, las secuencias de polinucleótidos se pueden interconexionar mediante una secuencia de sitio interno de entrada al ribosoma (abreviadamente en lo sucesivo IRES por la expresión inglesa Internal Ribosome Entry Site) que facilita la traducción de las secuencias de polinucleótidos ubicadas aguas abajo de la secuencia IRES. En este caso, una molécula de ARN policistrónico transcrito que codifica los diferentes polipéptidos descritos anteriormente se traducirá desde tanto el extremo 5' protegido como las dos secuencias IRES internas de la molécula de ARN policistrónico para producir de este modo en la célula todos los polipéptidos diferentes. Alternativamente, la construcción puede incluir diversas secuencias promotoras, cada una de ellas unida a una secuencia de polinucleótidos diferente.
La célula de la planta transformada con la construcción que incluye una pluralidad de polinucleótidos exógenos diferentes se puede regenerar en una planta madura, usando los métodos descritos anteriormente en el presente documento.
Alternativamente, la expresión de una pluralidad de polinucleótidos exógenos se puede efectuar introduciendo diferentes construcciones de ácido nucleico, que incluyen polinucleótidos exógenos diferentes, en una pluralidad de plantas. Después, se pueden cruzar las plantas transformadas regeneradas y la progenie resultante se puede seleccionar para tolerancia al estrés abiótico superior, crecimiento, biomasa, rendimiento y/o vigor, usando técnicas convencionales de cultivo de plantas.
Según algunas realizaciones de la invención, la planta que expresa el (los) polinucleótido(s) exógeno(s) se cultiva en condiciones normales.
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Según algunas realizaciones de la divulgación, el método comprende además cultivar la planta que expresa el (los) polinucleótido(s) exógeno(s) con el estrés abiótico.
Así, la invención engloba plantas que expresan exógenamente (como se ha descrito anteriormente), el (los) polinucleótido(s) y/o polipéptido(s) de la invención. Una vez expresado en la célula de la planta o en toda la planta, el nivel del polipéptido codificado por el polinucleótido exógeno se puede determinar por métodos bien conocidos en la técnica tales como ensayos de actividad, transferencias Western usando anticuerpos capaces de unirse específicamente al polipéptido, enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA), radioinmunoensayo (RIA), inmunohistoquímica, inmunocitoquímica, inmunofluorescencia y similares.
Los métodos de determinación en la planta del nivel de ARN transcrito del polinucleótido exógeno son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, análisis de transferencia Northern, análisis de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) (incluyendo RT-PCR cuantitativa, semi-cuantitativa o en tiempo real) e hibridación de ARN in situ.
Los polinucleótidos y polipéptidos descritos anteriormente en el presente documento se pueden usar en una amplia serie de plantas económicas, de manera inocua y rentable.
En efecto del transgén (el polinucleótido exógeno que codifica el polipéptido) sobre la tolerancia al estrés abiótico, crecimiento, biomasa, rendimiento y/o vigor se puede determinar usando métodos conocidos.
Tolerancia al estrés abiótico - Se exponen a una condición de estrés abiótico plantas transformadas (es decir, que expresan el transgén) y no transformadas (no mutadas), tal como privación de agua, temperatura inferior a la óptima (baja temperatura, alta temperatura), deficiencia de nutrientes, exceso de nutrientes, una condición de estrés salino, estrés osmótico, toxicidad a metales pesados, anaerobiosis, contaminación atmosférica y radiación UV.
Ensayo de tolerancia a la salinidad - Se espera que las plantas transgénicas con tolerancia a altas concentraciones de sal presenten mejor germinación, vigor o crecimiento de las plantas de semillero en alto contenido en sal. El estrés salino se puede efectuar de muchas maneras, tales como, por ejemplo, regando las plantas con una disolución hiperosmótica, cultivando las plantas hidropónicamente en una disolución de cultivo hiperosmótica (por ejemplo, disolución de Hoagland con sal añadida) o cultivando las plantas en un medio de cultivo hiperosmótico [por ejemplo, medio Murashige-Skoog (medio MS) al 50% con sal añadida]. Puesto que las diferentes plantas varían considerablemente en su tolerancia a la salinidad, se puede ajustar la concentración de sales en el agua de riego, disolución de cultivo o medio de cultivo, según las características específicas de la variedad de cultivo o variedad específica de una planta, para infringir un efecto leve o moderado sobre la fisiología y/o morfología de las plantas (para una orientación en cuanto a concentración apropiada véase, Bernstein y Kafkafi, Root Growth Under Salinity Stress In: Plant Roots, The Hidden Half 38 ed. Waisel Y, Eshel A y Kafkafi U. (editores) Marcel Dekker lnc., Nueva York, 2002, y referencias en su interior).
Por ejemplo, puede realizarse un ensayo de tolerancia a la salinidad regando plantas en diferentes estadios de desarrollo con concentraciones crecientes de cloruro sódico (por ejemplo NaCI 50 mM, 100 mM, 200 mM, 400 mM) aplicadas desde abajo y desde arriba para garantizar la dispersión homogénea de la sal. Después de la exposición a la condición de estrés, las plantas se monitorizan frecuentemente hasta que aparecen efectos fisiológicos y/o morfológicos sustanciales en las plantas no mutantes. Por tanto, se comparan entre las plantas de control y las transgénicas el aspecto fenotípico externo, el grado de marchitamiento y el éxito global para alcanzar la madurez y producir progenie. Los parámetros cuantitativos de tolerancia medidos incluyen, pero no se limitan a, humedad promedio y peso seco, tasa de crecimiento, tamaño foliar, cobertura foliar (área foliar total), el peso de las semillas producidas, el tamaño promedio de la semilla y el número de semillas producidas por planta. Las plantas transformadas que no presentan efectos fisiológicos y/o morfológicos sustanciales, o que presentan mayor biomasa que las plantas no mutadas, se identifican como plantas tolerantes al estrés abiótico.
Ensayo de tolerancia osmótica - Se realizan ensayos de estrés osmótico (que incluyen ensayos con cloruro sódico y PEG) para determinar si un fenotipo de estrés osmótico es específico de cloruro sódico o si es un fenotipo general relacionado con el estrés osmótico. Las plantas que son tolerantes al estrés osmótico pueden tener más tolerancia a la sequía y/o a la congelación. Para experimentos de estrés salino y osmótico, el medio se complementa, por ejemplo, con NaCI 50 mM, 100 mM, 200 mM o PEG al 15%, 20% o 25%. Véanse también los Ejemplos 6 y 7 de la sección de Ejemplos más adelante.
Ensayo de tolerancia a la sequía/ensayo osmótico - Se realiza la tolerancia a la sequía para identificar los genes que confieren una mejor supervivencia a las plantas después de la privación intensa de agua. Para analizar si las plantas transgénicas son o no más tolerantes a la sequía, se puede realizar un estrés osmótico producido por el osmolito no iónico sorbitol en el medio. Germinan las plantas de control y transgénicas y se cultivan en placas de agar vegetal durante 4 días, después de los cuales se transfieren a placas que contienen sorbitol 500 mM. El tratamiento causa retraso del crecimiento, después se comparan las plantas tanto transgénicas como de control, midiendo el peso de la planta (húmedo y seco), el rendimiento y por tasas de crecimiento medidas como tiempo hasta la floración.
Por otro lado, se realizan exploraciones de sequía basadas en suelo con plantas que expresan en exceso los polinucleótidos detallados anteriormente. Germinan las semillas de plantas de control de Arabidopsis, u otras plantas
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transgénicas que expresan en exceso el polipéptido de la invención, y se transfieren a macetas. El estrés por sequía se obtiene después de parar de regar, acompañado por la colocación de las macetas sobre papel absorbente para potenciar la tasa de secado del suelo. Las plantas transgénicas y de control se comparan entre sí cuando la mayoría de las plantas de control desarrollan marchitamiento grave. Las plantas vuelven a regarse después de obtener una fracción significativa de las plantas de control que presentan un marchitamiento grave. Las plantas se clasifican comparando los controles para cada uno de dos criterios: tolerancia a las condiciones de sequía y recuperación después de volver a regar (supervivencia).
Tolerancia al estrés por frío - Una manera de analizar el estrés por frío es la siguiente. Se transfirieren plantas maduras (25 días de vida) a cámaras a 4 °C durante 1 o 2 meses, con luz constitutiva. Después las plantas se vuelven a llevar al invernadero. Dos semanas después, se comparan los daños del periodo de enfriamiento, resultantes del retraso del crecimiento y otros fenotipos, entre las plantas de control y las transgénicas, midiendo el peso de la planta (húmedo y seco), y comparando las tasas de crecimiento medidas como tiempo hasta la floración, tamaño de la planta, rendimiento y similares.
Tolerancia al estrés por calor - Una manera de medir la tolerancia al estrés por calor es exponer las plantas a temperaturas por encima de 34 °C durante un cierto periodo. La tolerancia de la planta se examina después de transferir las plantas de nuevo a 22 °C para su recuperación y evaluación después de 5 días con respecto a controles internos (plantas no transgénicas) o plantas no expuestas ni a estrés por frío ni a estrés por calor.
Ensayos de germinación - Los ensayos de germinación comparan el porcentaje de semillas de plantas transgénicas que podrían completar el proceso de germinación con el porcentaje de semillas de plantas de control que se tratan de la misma manera. Se consideran condiciones normales, por ejemplo, incubaciones a 22 °C con ciclos diarios de 22 horas de luz y de 2 horas de oscuridad. La evaluación de la germinación y el vigor de las plantas de semillero se realiza entre 4 y 14 días después de plantar. El medio basal es medio MS (Murashige y Skoog, 1962 Plant Physiology 15, 473-497) al 50%.
La germinación se comprueba también en condiciones desfavorables tales como frío (incubando a temperaturas inferiores a 10 °C en lugar de a 22 °C) o usando disoluciones de inhibición de semilla que contienen altas concentraciones de un osmolito tal como sorbitol (a concentraciones de 50 mM, 100 mM, 200 mM, 300 mM, 500 mM y hasta 1000 mM) o aplicando concentraciones crecientes de sal (de NaCI 50 mM, 100 mM, 200 mM, 300 mM, 500 mM).
Efecto del transgén sobre el crecimiento, la biomasa, el rendimiento y/o el vigor de la planta - Se puede calcular el vigor de la planta por el aumento de los parámetros de crecimiento tales como el área foliar, la longitud de la fibra, el diámetro de la roseta, el peso fresco de la planta y similares por intervalo de tiempo.
Se puede medir la tasa de crecimiento usando análisis digital del crecimiento de las plantas. Por ejemplo, se pueden capturar cada tres días imágenes de plantas que crecen en invernaderos en parcelas y se puede calcular el área de la roseta por análisis digital. El crecimiento del área de la roseta se calcula usando la diferencia del área de la roseta entre los días de muestreo dividido entre la diferencia en días entre las muestras.
Se pueden realizar mediciones del rendimiento de las semillas recogiendo las semillas totales de 8-16 plantas juntas, pesándolas usando una balanza analítica y dividiendo el peso total entre el número de plantas. Se puede calcular área de crecimiento por semilla de la misma manera aunque teniendo en cuenta el área de crecimiento dada a una sola planta. Podría obtenerse el aumento del rendimiento de la semilla por área de crecimiento aumentando el rendimiento de la semilla por planta y/o aumentando el número de plantas capaces de crecer en un área determinada.
La evaluación del rendimiento de la semilla por planta se puede hacer midiendo la cantidad (peso o tamaño) o cifra (es decir, número) de las semillas secas producidas y cosechadas de 8-16 plantas y dividido entre el número de plantas.
La evaluación de la tasa de crecimiento se puede hacer midiendo la biomasa de la planta producida, el área de la roseta, el tamaño foliar o la longitud radicular por tiempo (puede medirse en cm2 por día de área foliar).
La longitud de la fibra se puede medir usando un fibrógrafo. Se usó el sistema con fibrógrafo para contar la longitud en términos de longitud "media de la mitad superior''. La longitud media de la mitad superior (MMS) es la longitud promedio de la mitad más larga de la distribución de la fibra. El fibrógrafo mide la longitud en longitudes por tramos a un punto de porcentaje dado (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) cottoninc (.) com/ClassificationofCotton/? Pg=4#Length).
Por tanto, la presente invención es de alto valor agrícola para promover el rendimiento de cultivos comercialmente deseados (por ejemplo, biomasa de órganos vegetativos tales como madera de álamo, u órganos reproductores tales como diversas semillas o biomasa de semillas).
Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente" se refiere a ±10%.
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Los términos "comprende", "que comprende", "incluye", "que incluye" y "que tiene" y sus conjugados significan "que incluye, pero no se limita a ".
La expresión "que consiste en" significa "que incluye y se limita a".
La expresión "que consiste esencialmente en" significa que la composición, el método o la estructura pueden incluir ingredientes, etapas y/o partes adicionales, pero solo si los ingredientes, las etapas y/o las partes adicionales no alteran materialmente las características básicas y novedosas de la composición, método o estructura que se reivindica.
Como se usa en el presente documento, la forma singular "uno", "una", "el" y "la" incluyen referencias en plural a menos que el contexto dicte claramente otra cosa. Por ejemplo, la expresión "un compuesto" o "al menos un compuesto" puede incluir una pluralidad de compuestos, incluyendo sus mezclas.
A lo largo de esta solicitud, diversas realizaciones de la presente invención se pueden presentar en un formato de intervalos. Se debe entender que la descripción en formato de intervalos es exclusivamente por conveniencia y brevedad y no se debe considerar como una limitación inflexible del alcance de la invención. Por consiguiente, se debe considerar que la descripción de un intervalo ha desvelado específicamente todos los subintervalos posibles, así como los valores numéricos individuales dentro de ese intervalo. Por ejemplo, la descripción de un intervalo tal como de 1 a 6 se debe considerar que ha desvelado específicamente subintervalos tales como desde 1 hasta 3, desde 1 hasta 4, desde 1 hasta 5, desde 2 hasta 4, desde 2 hasta 6, desde 3 hasta 6, etc., así como números individuales dentro de ese intervalo, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5 y 6. Esto se aplica con independencia de la amplitud del intervalo.
Siempre que en el presente documento se indique un intervalo numérico, significa que incluye cualquier número (fraccionario o entero) citado dentro del intervalo indicado. Las expresiones "que varía/varía entre" un primer número indicado y un segundo número indicado y "que varía/varía desde" un primer número indicado "hasta" un segundo número indicado se usan en el presente documento indistintamente y significan que incluyen el primer y segundo números indicados y todos los números fraccionarios o enteros entre los mismos.
Como se usa en el presente documento, el término "método" se refiere a maneras, medios, técnicas y procedimientos para realizar una tarea determinada que incluye, pero sin limitación, las maneras, medios, técnicas y procedimientos bien conocidos, o fácilmente desarrollados a partir de maneras, medios, técnicas y procedimientos conocidos, por los profesionales de las técnicas química, farmacológica, biológica, bioquímica y médica.
Se aprecia que determinadas características de la invención, que por claridad se describen en el contexto de realizaciones separadas, también se pueden proporcionar en combinación en una sola realización. A la inversa, diversas características de la invención que, por brevedad se describen en el contexto de una sola realización, también se pueden proporcionar por separado o en cualquier subcombinación adecuada o, según sea adecuado, en cualquier otra realización descrita de la invención. Determinadas características descritas en el contexto de las diversas realizaciones no han de considerarse características esenciales de aquellas realizaciones, a menos que la realización sea inoperativa sin aquellos elementos.
Diversas realizaciones y aspectos de la presente invención como se han definido anteriormente en el presente documento y como se reivindican más adelante en la sección de reivindicaciones encuentran respaldo experimental en los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Ahora, se hace referencia a los siguientes ejemplos, que junto con la descripción anterior ilustran algunas realizaciones de la invención de modo no limitante.
Generalmente, la nomenclatura usada en el presente documento y los procedimientos de laboratorio utilizados en la presente invención incluyen técnicas moleculares, bioquímicas, microbiológicas y de ADN recombinante. Dichas técnicas se explican detalladamente en la bibliografía. Véase, por ejemplo, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" volúmenes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley y Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, Nueva York (1988); Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, Nueva York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York (1998); metodologías como las expuestas en las patentes de EE.UU. N° 4.666.828; 4.683.202; 4.801.531; 5.192.659 y 5.272.057; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volúmenes I-III Cellis, J. E., ed. (1994); "Current Protocols in lmmunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994); Stites et al. (eds), "Basic and Clinical lmmunology" (8a Edición), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell y Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular lmmunology", W. H. Freeman y Co., Nueva York (1980); inmunoensayos disponibles se describen extensamente en la bibliografía de patente y científica, véanse, por ejemplo, las patentes de Ee.UU. N° 3.791.932; 3.839.153; 3.850.752; 3.850.578; 3.853.987; 3.867.517; 3.879.262; 3.901.654; 3.935.074; 3.984.533; 3.996.345; 4.034.074; 4.098.876; 4.879.219; 5.011.771 y 5.281.521; "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M. J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., y Higgins S. J., eds. (1985); "Transcription and Translation" Hames, B. D., y Higgins S. J., Eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986); "lmmobilized Cells and Enzymes" IRL Press,
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(1986); "A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984) y "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996); todos los cuales se incorporan como referencia como si se hubieran expuesto completamente en el presente documento. A lo largo de este documento se proporcionan otras referencias generales. Se piensa que los procedimientos del presente documento son muy conocidos en la técnica y se proporcionan por comodidad para el lector.
Ejemplo 1
Identificación de supuestos genes que aumentan la tolerancia al estrés abiótico y o el rendimiento/biomasa
Los presentes inventores han identificado genes que aumentan la tolerancia al estrés abiótico (TEAB) y/o la tasa de crecimiento/rendimiento/biomasa/vigor, de la siguiente manera. Los genes se validaron in vivo como se describió previamente en el documento WO2004/104162 concedido al presente cesionario. Todos los conjuntos de datos de secuencias de nucleótidos usados aquí se originaron de bases de datos disponibles al público. Los datos de secuencias de 50 especies diferentes (principalmente especies de plantas) se introdujeron en una sola base de datos integral. También se incorpora otra información sobre la expresión de genes, anotación de proteínas, enzimas y vías. Las bases de datos principales usadas incluyen:
• Genomas
° Genoma de Arabidopsis [genoma TAIR versión 6 (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) Arabidopsis (.) org/)]
° Genoma de arroz [construcción IRGSP 4.0 (Protocolo de transferencia de hipertexto://rgp (.) dna (.) affrc (.) go (.) jp/IRGSP/)].
° Álamo [Populus trichocarpa versión 1.1 de JGI (ensamblaje versión v1.0) (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) genome (.) jgi-psf (.) org/)]
° Brachypodium [JGI 4x ensamblaje Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) brachpodium (.) org)]
° Soja [DOE-JGI SCP, versión Glyma0 (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) phytozome (.) neU)]
° Uva [NCBI WGS ensamblaje
ftp://ftp (.) ncbi (.) nih (.) gov/ genbank/wgs/)]
° Ricino [TIGR/J Craig Venter lnstitute 4x ensamblaje ° Protocolo de transferencia de hipertexto://msc (.) jcvi (.) org/r_communis
° Sorgo [DOE-JGI SCP, versión Sbi1 Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) phytozome (.) netl)].
• Las secuencias de EST expresadas y de ARNm se extrajeron de
° GeneBank versiones 154, 157, 160, 161, 164 y 165 (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ncbi (.) nlm (.) nih (.) gov/dbEST/)
° RefSeq (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ncbi (.) nlm (.) nih (.) gov/RefSeq/).
° TAIR (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) arabidopsis (.) org/).
• Bases de datos de proteínas y rutas
° Uniprot (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web.expasy.uniprot.org/).
° AraCyc (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) arabidopsis (.) org/biocyc/index (.) jsp).
° ENZYME (Protocolo de transferencia de hipertexto://expasy.org/enzyme/).
• Los conjuntos de datos de micromatrices se descargaron de
° GEO (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)
° TAIR (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web.arabidopsis.org/).
° Datos de micromatrices de la fibra de algodón de la patente de Evogene
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• Información QTL
° Gramene (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) gramene (.) org/qtl/).
Se realizó un ensamblaje de bases de datos para construir una base de datos amplia, rica, fiable, anotada y fácil de analizar que comprendía secuencias de ARNm genómico, EST y ADN disponibles al público, datos de diversos cultivos, así como datos de expresión de genes, anotación de proteínas y de vías, QTL, y otra información relevante.
El ensamblaje de las bases de datos comprende una aplicación de herramientas de refinamiento de genes, estructuración, anotación y análisis que permitía construir una base de datos a medida para cada proyecto de descubrimiento génico. Las herramientas del refinamiento de genes y estructuración permiten detectar de manera fiable variantes de corte y empalme y transcritos antisentido, generando el entendimiento de los posibles diversos resultados fenotípicos de un solo gen. La capacidad de la plataforma "LEADS" de Compugen LTD para analizar el genoma humano se ha confirmado y aceptado por el comité científico ("Widespread Antisense Transcription", Yelin, et al. (2003) Nature Biotechnology 21, 379-85; "Splicing of Alu Sequences", Lev-Maor, et al. (2003) Science 300 (5623), 1288-91), y también ha demostrado ser la más eficaz en genómica de plantas.
Agrupamiento de EST y ensamblaje de genes - Para agrupar y ensamblar genes de arabidopsis y de arroz se empleó la versión "genomic LEADS". Esta herramienta permite agrupar de un modo más exacto secuencias de EST y de ARNm en el genoma y predice la estructura génica, así como eventos de corte y empalme alternativo y transcripción antisentido.
Para organismos con datos de secuencias de genoma completo no disponibles, se aplicó "LEADS expresado", así como el software de agrupamiento TIGR (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) tigr (.) org/). Los resultados de las dos herramientas de agrupamiento se compararon y en los casos en los que los grupos previstos por las dos herramientas eran significativamente diferentes, se presentaron y se consideraron las dos versiones.
Anotación de genes - Los genes y las proteínas previstos se anotaron de la siguiente manera:
• Se realizó búsqueda con Blast (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ncbi (.) nlm (.) nih (.) gov (.) library (.) vu (.) edu (.) au/BLAST/) contra todas las secuencias UniProt de plantas (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) expasy (.) uniprot (.) org/).
• Se usaron cálculos con Frame-Finder (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ebi (.) ac (.) uk/~guy/estate/) con valores estadísticos por defecto para predecir secuencias de proteínas para cada transcrito.
• Las proteínas previstas se analizaron con lnterPro (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ebi (.) ac (.) uk/interpro/).
• Se usaron proteínas contra Blast de las bases de datos de AraCyc y ENZYME para mapear los transcritos previstos para las rutas AraCyc.
• Cada transcrito se comparó usando el algoritmo tblastx (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) ncbi (.) nlm (.) nih (.) gov (.) library (.) vu (.) edu (.) au/BLAST/) contra el resto de las bases de datos de otros organismos para validar la exactitud de la secuencia de proteínas prevista y para una detección eficaz de ortólogos.
Perfil de expresión de genes - Se aprovecharon algunas fuentes de datos para realizar el perfil de expresión de genes, concretamente datos de micromatriz y perfil de expresión digital (véase más adelante). Según el perfil de expresión de genes, se realizó un análisis de correlación para identificar genes que estaban co-regulados en diferentes fases de desarrollo y condiciones ambientales.
Se descargaron conjuntos de datos de micromatrices disponibles al público de los sitios TAIR y NCBI GEO, se renormalizaron y se integraron en la base de datos. El perfil de expresión fue uno de los datos de recursos más importantes para identificar genes importantes para la TEAB. Además, cuando genes homólogos de diferentes cultivos eran sensibles a la TEAB, los genes se marcaban como "altamente predictivos para mejorar la TEAB".
Se recopiló un resumen de perfil de expresión digital para cada grupo según todas las palabras clave incluidas en los registros de secuencias que comprendían el grupo. La expresión digital, también conocida como transferencia Northern electrónica, es una herramienta que muestra un perfil de expresión virtual basado en las secuencias EST que forman el grupo génico. La herramienta puede proporcionar el perfil de expresión de un grupo en términos de la anatomía de la planta (en qué tejidos/órganos se expresa el gen), fase de desarrollo (las fases de desarrollo a las que se puede encontrar un gen) y perfil de tratamiento (proporciona las condiciones fisiológicas en las que se expresa un gen, tal como sequía, frío, infección por patógenos, etc.). Dada una distribución al azar de las EST en los diferentes grupos, la expresión digital proporciona un valor de probabilidad que describe la probabilidad de un grupo que tiene un total de N EST para contener X EST de una determinada colección de bibliotecas. Para los cálculos de probabilidad se tiene en cuenta: a) el número de EST en el grupo, b) el número de EST de las bibliotecas implicadas y relacionadas, e) el número total de EST disponibles que representan las especies. Por lo tanto los grupos con valores de baja
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probabilidad están enormemente enriquecidos con EST del grupo de bibliotecas de interés que indican una expresión especializada.
Los conceptos de ortología y paralogía se han aplicado recientemente a caracterizaciones y clasificaciones funcionales en la escala de comparaciones de genoma completo. Los ortólogos y parálogos constituyen dos tipos de homólogos principales: los primeros evolucionaron de un ancestro común por especialización y los segundos están relacionados por eventos de duplicación. Se supone que es probable que los parálogos que surgen de eventos de duplicación antiguos tengan función que ha divergido, mientras que es más probable que los ortólogos verdaderos conserven la misma función a lo largo de la evolución.
Para investigar e identificar adicionalmente supuestos genes ortólogos de especies monocotiledóneas con TEAB, se integraron dos métodos informáticos:
(i) Método para alineaciones de secuencias ortólogas - basado en la construcción de grupos ortólogos a través de múltiples taxones eucariotas, usando modificaciones en el algoritmo de grupos de Markov para agrupar supuestos ortólogos y parálogos. Estos supuestos ortólogos se organizaron adicionalmente en un filograma - un diagrama con ramificaciones (árbol) que se supone que es una estimación de una filogenia de los genes.
(ii) Método de generación de perfiles de expresión de genes "Expresión Digital" -
Los presentes inventores han realizado un considerable esfuerzo dirigido a secuencias de anotación. Se analizaron los datos de expresión y se clasificaron las bibliotecas de EST usando un vocabulario fijo de términos habituales tales como tratamientos experimentales. Se analizaron estadísticamente las anotaciones de todas las EST agrupadas para un gen comparando su frecuencia en el grupo frente a su abundancia en la base de datos, lo que permitió construir un perfil de expresión numérico y gráfico de ese gen, que se denomina "expresión digital".
El fundamento de uso de estos dos métodos complementarios se basa en la suposición de que es probable que los ortólogos verdaderos conserven la misma función a lo largo del tiempo evolutivo. Estos dos métodos (patrón de secuencias y de expresión) proporcionan dos conjuntos de indicaciones diferentes en función de las similitudes entre dos genes homólogos, similitudes en el nivel de secuencia - mismos aminoácidos en los dominios de las proteínas y similitudes en los perfiles de expresión.
En total, se identificaron 110 genes que tenían un impacto importante sobre la TEAB cuando se expresaban en exceso en plantas. Los genes de TEAB identificados, sus secuencias curadas de polinucleótidos y polipéptidos, así como sus secuencias actualizadas según la base de datos del GenBank, se resumen en la Tabla 1, en el presente documento a continuación.
Tabla 1
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
1
MAB1 MAB1.0.arroz|gb154|BM421111_T1 arroz 201
2
MAB1.1.arroz|gb157.2|BM421111_T1 arroz 202 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
3
MAB2 MAB2.0.arroz|gb154|AU225547_T1 arroz Proteína no prevista
4
MAB2.1.arroz|gb157.2|AU225547_T1 arroz actualizado para producción gb157.2
5
MAB3 MAB3.0.arroz|gb154|BE039995_T1 arroz 203
6
MAB3.1.arroz|gb157.2|BE039995_T1 arroz 204 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
7
MAB4 MAB4.0.arroz|gb154|B1812277_T1 arroz 205
8
MAB4.7.arroz|gb157.2|BI812277_CT1 arroz curado
9
MAB5 MAB5.0.arroz|gb154|CB624106_T1 arroz 206
10
MAB6 MAB6.0.arabidopsis|gb154|Z47404_T1 arabidopsis 207
11
MAB7 MAB7.0.arabidopsis|6|AT5G47560.1 arabidopsis 208
12
MAB7.1.arabidopsis|gb165|AT5G47560_T1 arabidopsis 209 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
13
MAB8 MAB8.0.arroz|gb154|BU672931_T1 arroz 210
14
MAB8.7.arroz|gb154|BU672931_T1 arroz Bioinformática y curado ADN
15
MAB9 MAB9.0.arabidopsis|gb154|BE844934_T1 arabidopsis 211
16
MAB10 MAB10.0.arabidopsis|gb154|Z27056_T1 arabidopsis 212
17
MAB11 MAB11.0.arabidopsis|gb154|Z34014_T1 arabidopsis 213
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
18
MAB11.1.arabidopsis|gb165|AT5G52300_T1 arabidopsis 214 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
19
MAB12 MAB12.0.arabidopsis|gb154|ATLTIL40_T1 arabidopsis 215
20
MAB12.1.arabidopsis|gb165|AT5G52310_T1 arabidopsis 216 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
21
MAB13 MAB13.0.arabidopsis|6|AT2G38760.1 arabidopsis 217
22
MAB13.1.arabidopsis|gb165|AT2G38760_T1 arabidopsis 218 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
23
MAB14 MAB14.0.arroz|gb154|AB042259_T1 arroz 219
24
MAB14.1.arroz|gb157.2|AB042259_T1 arroz 220 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
25
MAB15 MAB15.0.sorgo|gb154|A1724695_T1 sorgo 221
26
MAB16 MAB16.0.arroz|gb154|BI795172_T1 arroz 222
27
MAB16.1.arroz|gb157.2|BI795172_T1 arroz 223 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
28
MAB17 MAB17.0.soja|gb154|BE821839_T1 soja 224
29
MAB18 MAB18.0.cebada|gb154|BF625971_T1 cebada 225
226 Bioinformática de proteínas y curado de proteínas
30
MAB19 MAB19.0.sorgo|gb154|A W563861_T1 sorgo 227
31
MAB19.1 .sorgo|gb161.xeno|AW563861_T1 sorgo 228 actualizado para producción gb161.xeno actualizado para producción gb161.xeno
32
MAB20 MAB20.0.arabidopsis|gb154|T04691_T1 arabidopsis 229
33
MAB20.1.arabidopsis|gb165|AT1G61890_T1 arabidopsis 230 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
34
MAB21 MAB21.0.arroz|gb154|BE230053_T1 arroz 231
35
MAB21.1.arroz|gb157.2|BB230053_T1 arroz 232 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
36
MAB22 MAB22.0.tomate|gb154|BG791299_T1 tomate 233
234 Curado
37
MAB23 MAB23.0.arroz|gb154|BI305810_T1 arroz 235
38
MAB24 MAB24.0.arroz|gb154|BI808273_T1 arroz 236
39
MAB24.7.arroz|gb157.2|BI808273_CT1 arroz curado
40
MAB25 MAB25.0.arabidopsis|6|AT1G27760.1 arabidopsis 237
41
MAB25.1.arabidopsis|gb165|AT1G27760_T1 arabidopsis 238 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
42
MAB26 MAB26.0.arroz|gb154|AW155625_T1 arroz 239
43
MAB26.7.arroz|gb157.2|BI305400_CT1 arroz curado
44
MAB27 MAB27.0.arabidopsis|gb154|AY045660_T1 arabidopsis 240
45
MAB27.7.arabidopsis|gb165|AT5G24120_CT1 arabidopsis curado
46
MAB28 MAB28.0.arroz|gb154|BI795108_T1 arroz 241
47
MAB28.7.arroz|gb157.2|BI795108_CT1 arroz curado
48
MAB29 MAB29.0.arabidopsis|gb154|AU239137_T2 arabidopsis 242
49
MAB29.1.arabidopsis|gb165|AT2G25600_T1 arabidopsis 243 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
50
MAB30 MAB30.0.arabidopsis|gb154|AY062542_T1 arabidopsis 244
51
MAB30.7.arabidopsis|gb165|AT1G70300_CT1 arabidopsis Curado
52
MAB31 MAB31.0.soja|gb154|BI968709_T1 soja 245
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
53
MAB31.7.soja|gb162|BI968709_CT1 soja 246 Curado curado
54
MAB32 MAB32.0.arroz|gb154|AF039532_T1 arroz 247
55
MAB33 MAB33.0.maíz|gb154|AI615215_T1 maíz 248
56
MAB33.1.maíz|gb164|AI615215_T1 maíz 249 actualizado para producción gb164
57
MAB34 MAB34.0.cebada|gb154|TG_BF625450_T1 cebada 250
58
MAB34.1 .cebada|gb 157.2|BF625450_T1 cebada 251 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
59
MAB35 MAB35.0.arabidopsis|gb154|AA651513_T1 arabidopsis 252
60
MAB35.1.arabidopsis|gb165|AT2G16890_T1 arabidopsis 253 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
61
MAB36 MAB36.0.arabidopsis|gb154|AU239340_T1 arabidopsis 254
62
MAB36.1.arabidopsis|gb165|AT4G27570_T1 arabidopsis 255 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
63
MAB37 MAB37.0.tomate|gb154|BG125939_T1 tomate 256
64
MAB37.7.tomate|gb164|BG125939_CT1 tomate curado
65
MAB38 MAB3 8.0.trigo|gb154|BE492836_T1 trigo 257
66
MAB38.7.trigo|gb164|BE492836_CT1 trigo 258 curado curado
67
MAB39 MAB39.0.cebada|gb154|AL500200_T1 cebada 259
68
MAB39.1 .cebada|gb157.2|AL500200_T1 cebada 260 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
69
MAB40 MAB40.0.arroz|gb154|AA754628_T1 arroz 261
70
MAB40.7.arroz|gb157.2|AA754628_CT1 arroz curado
71
MAB41 MAB41.0.tomate|gb154|AI489494_T1 tomate 262
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
72
MAB41.7.tomate|gb164|AI489494_CT1 tomate curado
73
MAB42 MAB42.0.sorgo|gb154|BE595950_T1 sorgo 263
74
MAB42.7.sorgo|gb161.xeno|AI881418_CT1 sorgo 264 curado curado
75
MAB43 MAB43.0.arabidopsis|gb154|BE662945_T1 arabidopsis 265
76
MAB43.1.arabidopsis|gb165|AT5G26920_T1 arabidopsis 266 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
77
MAB44 MAB44.0.arabidopsis|gb154|H36025_T1 arabidopsis 267
78
MAB44.1.arabidopsis|gb165|ATIG67360_T1 arabidopsis 268 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
79
MAB45 MAB45.0.trigo|gb154|TG_BQ172359_T1 trigo 269
80
MAB45.1 .trigo|gb164|BQ172359_T1 trigo 270 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
81
MAB46 MAB46.0.arabidopsis|gb154|AA389812_T1 arabidopsis 271
82
MAB47 MAB47.0.sorgo|gb154|AW672286_T1 sorgo 272
83
MAB47.7.sorgo|gb161.xeno|AI948276_CT1 sorgo 273 Curado Curado
84
MAB48 MAB48.0.arroz|gb154|BI802161_T1 arroz 274
85
MAB48.7.arroz|gb157.2-AU092454_CT1 arroz 275 curado curado
86
MAB49 MAB49.0.maíz|gb154|TG_AI621810_T1 maíz 276
87
MAB49.7.maíz|gb164|AI621810_CT1 maíz Curado
88
MAB50 MAB50.0.arabidopsis|gb154|W43146_T1 arabidopsis 277
89
MAB50.1.arabidopsis|gb165|AT5G48570_T1 arabidopsis 278 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
90
MAB91 MAB91.0.arabidopsis|gb154|AU236480_T1 arabidopsis 279
280 curado
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
91
MAB96 MAB96.0.arabidopsis|gb154|Z27256_T1 arabidopsis 281
92
MAB96.7.arabidopsis|gb165|AT5G03800_CT1 arabidopsis 282 curado curado
93
MAB99 MAB99.0.tomate|gb154|BG735056_T1 tomate 283
94
MAB100 MAB100.0.arabidopsis|gb154|Z37259_T1 arabidopsis 284
95
MAB100.1.arabidopsis|gb165|AT1G01470_T1 arabidopsis 285 actualizado para producción gb165 actualizado para producción gb165
96
MAB104 MAB104.0.arroz|gb154|BE039215_T1 arroz 286
97
MAB104.1.arroz|gb157.2|BE039215_T1 arroz 287 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
98
MAB121 MAB121.0.caña de azúcar|gb157|CA079500_T1 caña de azúcar 288
99
MAB121.1.caña de azúcar|gb157.2|CA079500_T1 caña de azúcar 289 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
100
MAB122 MAB122.0.maíz|gb154|AI901344_T9 maíz 290
101
MAB123 MAB123.0.cebada|gb157|BF626638_T1 cebada 291
102
MAB123.1.cebada|gb157.2|BF626638_T1 cebada 292 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
103
MAB124 MAB124.0.caña de azúcar|gb157|CA284042_T1 caña de azúcar 293
104
MAB124.1caña de azúcar|gb157.2|CA284042_T1 caña de azúcar 294 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
105
MAB125 MAB125.0.arroz|gb157|CF957213_T1 arroz 295
106
MAB125.1.arroz|gb157.2|CF957213_T1 arroz 296 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
107
MAB126 MAB126.0 uva|gb157|BQ797309_T1 uva 297
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
108
MAB126.1.uva|gb166|BQ797309_T1 uva 298 actualizado para producción gb160 actualizado para producción gb160
109
MAB127 MAB127.0.uva|gb157|CB971532_T1 uva 299
110
MAB127.1.uva|gb160|CB971532_T1 uva 300 actualizado para producción gb160 actualizado para producción gb160
111
MAB128 MAB128.0.caña de azúcar|gb157|CA142162_T1 caña de azúcar 301
112
MAB128.1.caña de azúcar|gb157.2|CA142162_T1 caña de azúcar 302 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
113
MAB129 MAB129.0.tomate|gb157|AI486106_T1 tomate 303
114
MAB129.1 .tomate|gb164|AI486106_T1 tomate 304 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
115
MAB130 MAB130.0.canola|gb157|CD829694_T1 canola 305
116
MAB131 MAB131.0.tomate|gb157|AW928843_T1 tomate 306
117
MAB131.1 .tomate|gb164|AW928843_T1 tomate 307 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
118
MAB132 MAB132.0.cebada|gb157|BF621624_T1 cebada 308
119
MAB133 MAB133.0.cebada|gb157|BE411546_T1 cebada 309
120
MAB133.Lcebada|gb157.2|BE411546_T1 cebada 310 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
121
MAB134 MAB134.0.cebada|gb157|BE437407_T1 cebada 311
312 bioinformática de proteínas y curado de proteínas
122
MAB135 MAB135.0. loto|gb157|AI967693_T1 loto 313
123
MAB135.1 .loto|gb157.2|AI967693_T1 loto 314 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
124
MAB136 MAB136.0.arroz|gb157|AK058573_T1 arroz 315
125
MAB136.1.arroz|gb157.2|AK058573_T1 arroz 316 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
126
MAB137 MAB137.0.cebada|gb157|AL508624_T1 cebada 317 de patente provisional
127
MAB137.1.cebada|gb157.2|AL508624_T1 cebada 318 actualizado para producción gb157.2 actualizado para gb157.2
128
MAB138 MAB138.0.patata|gb157|BI177281_T1 patata 319 de patente provisional
129
MAB138.1.patata|gb157.2|BI177281_T1 patata 320 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
130
MAB139 MAB139.0.algodón|gb157.2|AI727826_T1 algodón 321 de patente provisional
131
MAB139.1.algodón|gb164|AI727826_T1 algodón 322 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
132
MAB140 MAB140.0.cebada|gb157|BI778498_T1 cebada 323 de patente provisional
133
MAB140.1cebada|gb157.2|BI778498_T1 cebada 324 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
134
MAB141 MAB141.0.cebada|gb157|BE421008_T1 cebada 325 de patente provisional
135
MAB142 MAB142.0.algodón|gb157.2|AI055631_T2 algodón 326 de patente provisional
136
MAB142.0.algodón|gb157.2|AI055631_T1 algodón 327 de patente provisional
137
MAB142.1.algodón|gb164|AW187041_T1 algodón 328 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
138
MAB143 MAB143.0.tomate|gb157|AI487157_T1 tomate 329 de patente provisional
139
MAB143.1 .tomate|gb164|AI487157_T1 tomate 330 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
140
MAB144 MAB144.0.uva|gb157|CA814960_T1 uva 331 de patente provisional
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
141
MAB144.1.uva|gb160|CA814960_T1 uva 332 actualizado para producción gb160 actualizado para producción gb160
142
MAB145 MAB145.0.cebada|gb157|BE413365_T1 cebada 333 de patente provisional
143
MAB146 MAB146.0.tomate|gb157|AI773927_T1 tomate 334 de patente provisional
144
MAB146.1 .tomate|gb164|AI773927_T1 tomate 335 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
145
MAB147 MAB147.0.tabaco|gb157|EB446189_T1 tabaco 336
146
MAB147.1.tabaco|gb162|EB446189_T1 tabaco 337 actualizado para producción gb162 actualizado para producción gb162
147
MAB148 MAB148.0.medicago|gb157|AW256654_T1 medicago 338
148
MAB148.1.medicago|gb157.2|AW256654_T1 medicago 339 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
149
MAB150 MAB150.0.canola|gb157|CD818831_T1 canola 340
150
MAB150.1.canola|gb161|CD818831_T1 canola 341 actualizado para producción gb161 actualizado para producción gb161
151
MAB151 MAB151.0. patata|gb157|BQ513540_T1 patata 342
152
MAB151.1. patata|gb157.2|BQ513340_T1 patata 343 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
153
MAB152 MAB152.0.uva|gb157|BQ798b55_T1 uva 344
154
MAB152.1. uva|gb160|BQ798655_T1 uva 345 actualizado para producción gb160 actualizado para producción gb160
155
MAB153 MAB153.0.caña de azúcar|gb157|BQ533857_T1 caña de azúcar 346
156
MAB153.1.caña de azúcar|gb157.2|BQ533857_T1 caña de azúcar 347 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
157
MAB154 MAB154.0.caña de azúcar|gb157|BQ537570_T3 caña de azúcar 348
158
MAB154.0.caña de azúcar|gb157|BQ537570_T2 caña de azúcar 349
159
MAB154.0.caña de azúcar|gb157|BQ537570_T1 caña de azúcar 350
160
MAB154.1.caña de azúcar|gb157.2|BQ537570_T1 caña de azúcar 351 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
161
MAB155 MAB155.0.sorgo|gb157|AW676730_T1 sorgo 352
162
MAB155.1.sorgo|gb161.xeno|AW676730_T1 sorgo 353 actualizado para producción gb161.xeno actualizado para producción gb161.xeno
163
MAB156 MAB156.0.tabaco|gb157|AB117525_T1 tabaco 354
164
MAB156.1 .tabaco|gb162|AB117525_T1 tabaco 355 actualizado para producción gb162 actualizado para producción gb162
165
MAB157 MAB157.0.caña de azúcar|gb157|BQ533820_T2 caña de azúcar 356
166
MAB157.0.caña de azúcar|gb157|BQ533820_T1 caña de azúcar 357
167
MAB157.1.caña de azúcar|gb157.2|BQ533820_T1 caña de azúcar 358 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
168
MAB158 MAB158.0.algodón|gb157.2|AI054450_T1 algodón 359
169
MAB159 MAB159.0.canola|gb157|CD819468_T1 canola 360
170
MAB160 MAB160.0.cebada|gb157|BF622450_T1 cebada 361
171
MAB161 MAB161.0.álamo|gb 157|BU896597_T1 álamo 362
172
MAB161.1.álamo|gb157.2|BU896597_T1 álamo 363 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
173
MAB162 MAB162.0.caña de azúcar|gb157|BU102611_T1 caña de azúcar 364
174
MAB162.1.caña de azúcar|gb157.2|BU102611_T1 caña de azúcar 365 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
175
MAB163 MAB163.0.cebada|gb157|AL501813_T1 cebada 366
176
MAB163.1.cebada|gb157.2|AL501813_T1 cebada 367 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
177
MAB164 MAB164.0.cebada|gb157|BF253543_T1 cebada 368
178
MAB164.1.cebada|gb157.2|BF253543_T1 cebada 369 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
179
MAB165 MAB165.0.uva|gb157|BQ793123_T1 uva 370
180
MAB166 MAB166.0.álamo|gb157|CV228694_T1 álamo 371
181
MAB166.1.álamo|gb157.2|CV228694_T1 álamo 372 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
182
MAB167 MAB167.0.canola|gb157|CX278043_T1 canola 373
183
MAB167.1.canola|gb161|CX278043_T1 canola 374 actualizado para producción gb161 actualizado para producción gb161
184
MAB168 MAB168.0.uva|gb157|BG273815_T1 uva 375
185
MAB168.1.uva|gb160|BG273815_T1 uva 376 actualizado para producción gb160 actualizado para producción gb160
186
MAB169 MAB169.0.algodón|gb157.2|COTLEA14B_T1 algodón 377
187
MAB169.1.algodón|gb164|COTLEA14B_T1 algodón 378 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
188
MAB170 MAB170.0.cebada|gb157|BE412505_T1 cebada 379
189
N4AB170.1.cebada|gb157.2|BE412505_T1 cebada 380 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
Genes de TEAB identificados
SEQ ID NO: Polinucleótido
Nombre del gen Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO: Polipéptido Descripción del polinucleótido Descripción del polipéptido
190
MAB171 MAB171.0.caña de azúcar|gb157|CA123631_T1 caña de azúcar 381
191
MAB171.1.caña de azúcar|gb157.2|CA123631_T1 caña de azúcar 382 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
192
MAB172 MAB172.0.caña de azúcar|gb157|BQ478980_T1 caña de azúcar 383
193
MAB172.0.caña de azúcar|gb157|BQ478980_T2 caña de azúcar 384
194
MAB173 MAB173.0.cebada|gb157|BY836652_T1 cebada 385
195
NMB173.1.cebada|gb17.2|BY836652_T1 cebada 386 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
196
MAB174 MAB174.0.cebada|gb157|BG342904_T1 cebada 387
197
MAB174.1.cebada|gb157.2|BG342904_T1 cebada 388 actualizado para producción gb157.2 actualizado para producción gb157.2
198
MAB175 MAB175.0.tomate|gb157|BG126606_T1 tomate 389
199
MAB175.0.tomate|gb157|BG126606_T2 tomate 390
200
MAB175.1.tomate|gb164|BG126606_T1 tomate 391 actualizado para producción gb164 actualizado para producción gb164
1653
MAB66 MAB66.0.tomate|gb164|BG124832_CT1 tomate 1651
Tabla 1.
Se han identificado polinucleótidos y polipéptidos con homología significativa a los genes de TEAB identificados de las bases de datos usando el software BLAST usando el algoritmo BlastX. Las secuencias de búsqueda de nucleótidos fueron SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 10, 11, 13, 15, 16, 17, 19, 21,23, 25, 26, 28, 29, 30, 32, 34, 36, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71 ,73 ,75 ,77, 79, 81, 82, 84, 86, 88, 90, 91, 93, 94, 96, 98, 100, 101, 5 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 116, 118, 119, 121, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 138, 140, 142, 143,
145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 161, 163, 165, 168, 169, 170, 171, 173, 175, 177, 179, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198 y 1653, y los homólogos de TEAB identificados se proporcionan en la Tabla 2, a continuación.
Tabla 2
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
392
manzana|gb157.3|CN444532_T1 manzana 961 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 85
393
manzana|gb157.3|CN445371_T1 manzana 962 Seq376.MAB168.15. uva 87
394
manzana|gb157.3|CN878026_T1 manzana 963 Seq350.MAB154.15.caña de azúcar 80
395
manzana|gb137.3|CK900582_T1 manzana 964 Seq321.MAB139.15.algodón 85
396
manzana|gb157.3|CN888579_T2 manzana 965 Seq256.MAB37.15.tomate 86
397
manzana|gb157.3|CN888579_T3 manzana 966 Seq256.MAB37.15.tomate 81
398
manzana|gb157.3|CO066535_T1 manzana 967 Seq370.MAB165.15.uva 84
399
manzana|gb157.3|CN888579_T1 manzana 968 Seq256.MAB37.15.tomate 86
400
manzana|gb157.3|CN496860_T1 manzana 969 Seq321.MAB139.15.algodón 81
401
albaricoque|gb157.2|BQ134642_T1 albaricoque 970 Seq329.MAB143.15.tomate 82
402
albaricoque|gb157.2|CB822088_T1 albaricoque 971 Seq256.MAB37.15.tomate 88
403
aquilegia|gb157.3|DR915383_T1 aquilegia 972 Seq321.MAB139.15.algodón 83
404
aquilegia|gb157.3|DR913600_T1 aquilegia 973 Seq344.MAB152.15. uva 83
405
aquilegia|gb157.3|DR920101_T1 aquilegia 974 Seq370.MAB165.15.uva 87
406
aquilegia|gb157.3|DT727583_T1 aquilegia 975 Seq311.MAB134.15.cebada 80
407
aquilegia|gb157.3|DR918523_T1 aquilegia 976 Seq376.MAB168.15.uva 82
408
arabidopsis|gb165|AT1G67890_T2 arabidopsis 977 Seq263.MAB42.15.sorgo 80
409
arabidopsis|gb165|AT1G78070_T2 arabidopsis 978 Seq207.MAB6.15.arabidopsis 97
410
arabidopsis|gb165|AT1G52890_T3 arabidopsis 979 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 85
411
arabidopsis|gb165|AT3 g06620_T1 arabidopsis 980 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 80
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
412
arabidopsis|gb165|AT1G67890_T1 arabidopsis 981 Seq263.MAB42.15.sorgo 80
413
arabidopsis|gb165|AT5G14860_T1 arabidopsis 982 Seq341.MAB150.15.canola 80
414
arabidopsis|gb165|AT5G49470_T2 arabidopsis 983 Seq263.MAB42.15.sorgo 81
415
arabidopsis|gb165|AT5G49470_T1 arabidopsis 984 Seq263.MAB42.15.sorgo 81
416
arabidopsis|gb165|AT3 g24170_T1 arabidopsis 985 Seq376.MAB168.15.uva 80
417
arabidopsis|gb165|AT1G11670_T1 arabidopsis 986 Seq229.MAB20.15.arabidopsis 84
418
arabidopsis|gb165|AT3 g25230_T1 arabidopsis 987 Seq370.MAB165.15.uva 80
419
arabidopsis|gb165|AT4G32500_T2 arabidopsis 988 Seq242.MAB29.15.arabidopsis 81
420
arabidopsis|gb165|AT5G06760_T1 arabidopsis 989 Seq373.MAB167.15.canola 84
421
arabidopsis|gb165|AT4G27410_T3 arabidopsis 990 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 94
422
arabidopsis|gb165|AT4G27560_T1 arabidopsis 991 Seq254.MAB36.15.arabidopsis 94
423
artemisia|gb164|EY047508_T1 artemisia 992 Seq321.MAB139.15.algodón 80
424
artemisia|gb164|EY060376_T1 artemisia 993 Seq376.MAB168.15.uva 85
425
artemisia|gb164|EY089381_T1 artemisia 994 Seq256.MAB37.15.tomate 86
426
artemisia|gb164|EY042537_T1 artemisia 995 Seq349.MAB154.15.caña de azúcar 80
427
b_juncea|gb164|EVGN00102008310737_T1 b_juncea 996 Seq360.MAB159.15.canola 97
428
b_juncea|gb164|EVGN08486004170336_T1 b_juncea 997 Seq373.MAB167.15.canola 94
429
b_juncea|gb164|EVGN00429914360666_T1 b_juncea 998 Seq370.MAB165.15.uva 83
430
b_juncea|gb164|EVGN00258430752139P1_T1 b_juncea 999 Seq376.MAB168.15.uva 80
431
b_juncea|gb164|EVGN01568909822952_T1 b_juncea 1000 Seq373.MAB167.15.canola 98
432
b_oleracea|gb161|DY029719_T1 b_oleracea 1001 Seq370.MAB165.15.uva 82
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
433
b_oleracea|gb161|AM385106_T1 b_oleracea 1002 Seq360.MAB159.15.canola 96
434
b_oleracea|gb161|AM387179_T1 b_oleracea 1003 Seq360.MAB159.15.canola 91
435
b_oleracea|gb161|AM061306_T1 b_oleracea 1004 Seq284.MAB100.15.arabido 86
436
b_oleracea|gb161|AB125639_T1 b_oleracea 1005 Seq376.MAB168.15.uva 80
437
b_rapa|gb162|EE523634_T1 b_rapa 1006 Seq229.MAB20.15.arabidopsis 92
438
b_rapa|gb162|EX024909_T1 b_rapa 1007 Seq217.MAB13.15.arabidopsis 83
439
b_rapa|gb162|EX070158_T2 b_rapa 1008 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 95
440
b_rapa|gb162|CA992067_T1 b_rapa 1009 Seq360.MAB159.15.canola 94
441
b_rapa|gb162|EE520623_T1 b_rapa 1010 Seq280.MAB91.10.arabidopsis 89
442
b_rapa|gb162|CV545896_T1 b_rapa 1011 Seq208.MAB7.15.arabidopsis 88
443
b_rapa|gb162|CO749564_T1 b_rapa 1012 Seq370.MAB165.15.uva 82
444
b_rapa|gb162|CV434105_T1 b_rapa 1013 Seq217.MAB13.15.arabidopsis 83
445
b_rapa|gb162|AF008441_T1 b_rapa 1014 Seq376.MAB168.15.uva 80
446
b_rapa|gb162|EX070158_T1 b_rapa 1015 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 86
447
b_rapa|gb162|EX088727_T1 b_rapa 1016 Seq271.MAB46.15.arabidopsis 93
448
b_rapa|gb162|BG544469_T1 b_rapa 1017 Seq360.MAB159.15.canola 82
449
b_rapa|gb162|DN962625_T1 b_rapa 1018 Seq237.MAB25.15.arabidopsis 85
450
b_rapa|gb162|CV544672_T1 b_rapa 1019 Seq284.MAB100.15.arabidopsis 88
451
cebada|gb157.2|BI947678_T1 cebada 1020 Seq368.MAB164.15.cebada 92
452
cebada|gb157.2|AV835424_T1 cebada 1021 Seq257.MAB38.15.trigo 97
453
cebada|gb157.2|BE455969_T1 cebada 1022 Seq290.MAB122.15.maíz 84
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
454
cebada|gb157.2|BE519575_T2 cebada 1023 Seq263.MAB42.15.sorgo 81
455
cebada|gb157.2|BF625959_T1 cebada 1024 Seq221.MAB15.15.sorgo 83
456
cebada|gb157.2|BQ461470_T1 cebada 1025 Seq356.MAB157.15.caña de azúcar 82
457
basilicum|gb157.3|DY333033_T1 basilicum 1026 Seq256.MAB37.15.tomate 87
458
judía|gb164|CB542809_T1 judía 1027 Seq376.MAB168.15.uva 80
459
judía|gb164|CV529652_T1 judía 1028 Seq370.MAB165.15.uva 83
460
judía|gb164|CB543453_T1 judía 1029 Seq368.MAB164.15.cebada 80
461
judía|gb164|CV535253_T1 judía 1030 Seq256.MAB37.15.tomate 88
462
remolacha|gb162|BQ592516_T1 remolacha 1031 Seq256.MAB37.15.tomate 86
463
remolacha|gb162|BQ488223_T1 remolacha 1032 Seq211.MAB9.15.arabidopsi 88
464
remolacha|gb162|BQ583768_T1 remolacha 1033 Seq385.MAB173.15.cebada 85
465
remolacha|gb162|BQ591963_T1 remolacha 1034 Seq368.MAB164.15.cebada 80
466
brachipodium|gb161.xeno|BE519575_T1 brachipodium 1035 Seq356.MAB157.15.caña de azúcar 85
467
brachipodium|gb161.xeno|BG368321_T1 brachipodium 1036 Seq247.MAB32.15.arroz 81
468
brachipodium|gb161.xeno|BE400652_T1 brachipodium 1037 Seq368.MAB164.15.cebada 95
469
brachipodium|gb161.xeno|AL502884 T1 brachipodium 1038 Seq210.MAB8.15.arroz 82
470
brachipodium|gb161.xeno|BY836652_T1 brachipodium 1039 Seq385.MAB173.15.cebada 90
471
brachipodium|gb161.xeno|BE44917_T1 brachipodium 1040 Seq309.MAB133.15.cebada 93
472
brachipodium|gb161.xeno|BF202082_T1 brachipodium 1041 Seq291.MAB123.15.cebada 83
473
brachipodium|gb161.xeno|BE406378_T1 brachipodium 1042 Seq219.MAB14.15.arroz 80
474
brachipodium|gb161.xeno|BE517562_T1 brachipodium 1043 Seq366.MAB163.15.cebada 85
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
475
brachipodium|gb161.xeno|BE420294_T1 brachipodium 1044 Seq290.MAB122.15.maíz 85
476
brachipodium|gb161.xeno|BG369416_T1 brachipodium 1045 Seq270.MAB45.15.trigo 89
477
brachipodium|gb161.xeno|BE406039_T2 brachipodium 1046 Seq241.MAB28.15.arroz 93
478
brachipodium|gb161.xeno|BE418087_T1 brachipodium 1047 Seq325.MAB141.15.cebada 86
479
brachipodium|gb161.xeno|BE470780_T1 brachipodium 1048 Seq221.MAB15.15.sorgo 81
480
brachipodium|gb161.xeno|AV835424_T1 brachipodium 1049 Seq257.MAB38.15.trigo 93
481
brachipodium|gb161.xeno|BE398656_T1 brachipodium 1050 Seq308.MAB132.15.cebada 93
482
brachipodium|gb161.xeno|BE437407_T1 brachipodium 1051 Seq311.MAB134.15.cebada 98
483
brachipodium|gb161.xeno|BE406039_T3 brachipodium 1052 Seq333.MAB145.15.cebada 81
484
brachipodium|gb161.xeno|BE490408_T1 brachipodium 1053 Seq264.MAB42.10.sorgo 80
485
brachipodium|gb161.xeno|BE403745_T1 brachipodium 1054 Seq379.MAB170.15.cebada 92
486
brachipodium|gb161.xeno|BE490591_T1 brachipodium 1055 Seq366.MAB163.15.cebada 87
487
brachipodium|gb161.xeno|BQ461470_T2 brachipodium 1056 Seq356.MAB157.15.caña de azúcar 85
488
brachipodium|gb161.xeno|BE517562_T2 brachipodium 1057 Seq366.MAB163.15.cebada 83
489
brachipodium|gb161.xeno|BE413341_T1 brachipodium 1058 Seq336.MAB147.15.tabaco 80
490
brachipodium|gb161.xeno|BE515529_T1 brachipodium 1059 Seq259.MAB39.15.cebada 96
491
brachipodium|gb161.xeno|DV471778_T1 brachipodium 1060 Seq348.MAB154.15.caña de azúcar 83
492
canola|gb161|EL587045_T1 canola 1061 Seq277.MAB50.15.arabidopsis 87
493
canola|gb161|CX279297_T1 canola 1062 Seq280.MAB91.10.arabidopsis 85
494
canola|gb161|CD815143_T1 canola 1063 Seq222.MAB16.15.arroz 80
495
canola|gb161|CD831036_T1 canola 1064 Seq284.MAB100.15.arabidopsis 86
98
sisdopiqeje g i, g^aVIAl Ze^bas 9801- B|OUBO H_91-^86 UXOl U9 pqB|e|OUBO 919
08
zojjb g [,'9uaviAI ¿Z^bes t^80U B|oueo H-Z9Z8t^33l ^qb|e|0UB3 919
66
b|oubo g i, 081-aVIAI SOebes 8801- e|oueo l l-989rVXdOl U9Uq6|e|OUBO H9
88
BAn g i, ggpaviAi ozebss 280 U e|oueo H_8Z069t?33l U9 pqB|e|OUBO 81-9
88
sjsdopiqBJB g i, 001-aVIAI >8Zb0S 1-801- e|oueo n>8i-t7e8aoli-9i-q6|B|ouBo Z19
06
sjsdopiqBJB g i, ozaVIAl'6ZZb0S 0801- e|oueo H_t79t7928C]Oll-9Pq6|e|OUB3 U9
V6
sjsdopiqBJB g i, ozaVIAl'6ZZb0S 6Z0 U e|oueo H_6l-^8aoll-9l-q6|B|3UB3 019
ZQ
BAn g i ggpaviAi ozebss 8Z0 U e|oueo n_9zzei-8aoli-9i-q6|B|3UB3 609
Z8
sjsdopiqBJB g i,/aVIAl'8OZb0S ZZOU e|oueo H_ZZI-K)6S3l U9 pqB|B|OUBO 809
1-8
sjsdopiqBJB g i, e 1-aVIAI Z I-Zb0s 9Z0 U e|oueo n-o m8aol ^qb|B|3UB3 Z09
88
sjsdopiqBJB g i, ozaVIAl'6ZZb0S 9Z0U e|oueo H_ZZ61U6S3I |-9Pq6|e|OUB3 909
Z6
sjsdopiqBJB g i, oeaVIAl >^b0s t^ZOU e|oueo H_Z8l-906S3l U9 pqB|B|OUBO 909
88
b|oubo g i, 691-aVIAI 098b9S CZOU e|oueo H_0ZH-Z0O3ll-9l-q6|B|3UB3 W)9
1-8
oBjos g p g paVIAl U22b©s 2Z0U e|oueo H_t^C L-68 uxol U9Uq6|B|OUBO 809
S6
B|OUBO g 1, 691-aVIAI 098b9S L-Z0U e|oueo H_8l-Z0Z8aoll-9l-q6|B|3UB3 209
Z6
sjsdopiqBJB g i, eaVIAl' 1-l-Zbes ozou e|oueo H_9t780Z0Aall-9l-q6|B|3UB3 1-09
88
sisdopiqsjB g i, gaviAI ZO^bes 6901- e|oueo H—L-69U Ut^33l P9pq6|B|OUBO 009
Z8
sisdopiqsjB g i, eaVIAl' 1-l-Zbes 8901- e|oueo H_Z889^AVll-9l-q6|B|3UB3 66t?
98
B|0UB0-gi,z9i,avi/\iezeb9S Z90 U e|oueo H_^96Z8aoll-9l-q6|B|3UB3 86t?
68
B|OUBO-g p "08 laVIAl 908b9S 9901- e|oueo H_08992ZNOll-9Pq6|B|OUB3 Z6t?
88
B|OUBogi,'681-aVIAI'09esS 9901- e|oueo H_Z9699t733l U9 pqB|B|OUBO 96t?
ieqo/6 pepyuapi ep %
opiigaionuijod ap ON OI 03S eun -¡od opsoijipoo opfídadijod un e oBo/gujopi .oppdaduod sp ON OI 03S ou/siubBjq odmB iap ajqujON .opiigaionuijod sp ON OI 03S
3V31 aP sauaB ap soBo/giuopi
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
517
canola|gb161|CD813278_T1 canola 1086 Seq375.MAB168.15.uva 80
518
colza|gb160|MDL28401M000077_T1 colza 1087 Seq370.MAB165.15.uva 86
519
colza|gb160|EE258294_T1 colza 1088 Seq256.MAB37.15.tomate 87
520
colza|gb160|MDL28066M000021_T1 colza 1089 Seq370.MAB165.15.uva 85
521
colza|gb160|AM267339_T1 colza 1090 Seq222.MAB16.15.arroz 80
522
colza|gb160|EG659656_T1 colza 1091 Seq376.MAB168.15.uva 83
523
colza|gb160|EG656754_T1 colza 1092 Seq263.MAB42.15.sorgo 82
524
colza|gb160|EE259826_T1 colza 1093 Seq362.MAB161.15.álamo 83
525
colza|gb160|EG659299_T1 colza 1094 Seq300.MAB127.15. uva 81
526
colza|gb160|EE259565_T1 colza 1095 Seq276.MAB49.15.maíz 80
527
colza|gb160|EE255133_T1 colza 1096 Seq321.MAB139.15.algodón 84
528
colza|gb160|MDL29822M003364_T1 colza 1097 Seq336.MAB147.15.tabaco 82
529
colza|gb160|EG661241_T1 colza 1098 Seq371.MAB166.15.álamo 85
530
centaurea|gb161|EH713943_T1 centaurea 1099 Seq321.MAB139.15.algodón 82
531
centaurea|gb161|EH724589_T1 centaurea 1100 Seq256.MAB37.15.tomate 84
532
centaurea|gb161|EH717520_T1 centaurea 1101 Seq329.MAB143.15.tomate 80
533
centaurea|gb161|EH711566_T1 centaurea 1102 Seq370.MAB165.15.uva 81
534
centaurea|gb161|EH713337_T1 centaurea 1103 Seq259.MAB39.15.cebada 81
535
centaurea|gb161|EH713628_T1 centaurea 1104 Seq376.MAB168.15.uva 83
536
centaurea|gb161|EH738263-T1 centaurea 1105 Seq385.MAB173.15.cebada 80
537
centaurea|gb161|EH727723_T1 centaurea 1106 Seq256.MAB37.15.tomate 84
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
538
cichorium|gb161|DT212291_T1 cichorium 1107 Seq370.MAB165.15.uva 80
539
cichorium|gb161|DT211081_T1 cichorium 1108 Seq376.MAB168.15.uva 83
540
cichorium|gb161|EH692437_T1 cichorium 1109 Seq256.MAB37.15.tomate 86
541
cichorio|gb161|DT212218_T1 cichorium 1110 Seq256.MAB37.15.tomate 89
542
cítrico|gb157.2|CB290836T1 cítrico 1111 Seq376.MAB168.15.uva 85
543
cítrico|gb157.2|BQ624861_T1 cítrico 1112 Seq276.MAB49.15.maíz 82
544
ccítrico|gb157.2|BQ624727_T1 cítrico 1113 Seq370.MAB165.15.uva 85
545
cítrico|gb157.2|CB290836_T2 cítrico 1114 Seq376.MAB168.15.uva 86
546
cítrico|gb157.2|CX672218_T2 cítrico 1115 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 83
547
cítrico|gb157.2|CF504250_T1 cítrico 1116 Seq222.MAB16.15.arroz 82
548
cítrico|gb157.2|CK933948_T1 cítrico 1117 Seq256.MAB37.15.tomate 86
549
trébol|gb162|BB926896_T1 trébol 1118 Seq256.MAB37.15.tomate 82
550
trébol|gb162|BB904696_T1 trébol 1119 Seq263.MAB42.15.sorgo 84
551
coffea|gb157.2|DV676382_T1 coffea 1120 Seq256.MAB37.15.tomate 91
552
coffea|gb157.2|DV688680_T1 coffea 1121 Seq332.MAB144.15. uva 83
553
coffea|gb157.2|DQ124044_T1 coffea 1122 Seq303.MAB129.15.tomate 80
554
algodón|gb164|BF268276_T1 algodón 1123 Seq370.MAB165.15.uva 84
555
algodón|gb164|CO113031_T1 algodón 1124 Seq319.MAB138.15. patata 80
556
algodón|gb164|AI730186_T1 algodón 1125 Seq256.MAB37.15.tomate 81
557
algodón|gb164|CO103100_T1 algodón 1126 Seq256.MAB37.15.tomate 86
558
algodón|gb164|BE051970_T1 algodón 1127 Seq370.MAB165.15.uva 84
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
559
algodón|gb164|AI725698_T1 algodón 1128 Seq376.MAB168.15.uva 85
560
algodón|gb164|AI728290_T1 algodón 1129 Seq370.MAB165.15.uva 82
561
algodón|gb164|AI055482_T1 algodón 1130 Seq370.MAB165.15.uva 85
562
algodón|gb164|ES794517_T1 algodón 1131 Seq327.MAB142.15.algodón 81
563
algodón|gb164|BF268276_T2 algodón 1132 Seq370.MAB165.15.uva 84
564
algodón|gb164|CO109448_T1 algodón 1133 Seq376.MAB168.15.uva 83
565
algodón|gb164|DT459182_T1 algodón 1134 Seq375.MAB168.15.uva 84
566
algodón|gb164|BG441162_T1 algodón 1135 Seq256.MAB37.15.tomate 85
567
guisante pinto|gb165|FF390508_T1 guisante pinto 1136 Seq256.MAB37.15.tomate 84
568
guisante pinto|gb165|FF390203_T1 guisante pinto 1137 Seq259.MAB39.15.cebada 86
569
guisante pinto|gb165|DQ267475_T1 guisante pinto 1138 Seq376.MAB168.15.uva 83
570
guisante pinto|gb165|FF382851_T1 guisante pinto 1139 Seq224.MAB17.15.soja 89
571
guisante pinto|gb165|FF394009_T1 guisante pinto 1140 Seq370.MAB165.15.uva 85
572
diente de león|gb161|DQ160099_T1 diente de león 1141 Seq376.MAB168.15.uva 82
573
diente de león|gb161|DY823013_T1 diente de león 1142 Seq256.MAB37.15.tomate 82
574
diente de león|gb161|DY820394_T2 diente de león 1143 Seq256.MAB37.15.tomate 88
575
diente de león|gb161|DY813450_T2 diente de león 1144 Seq256.MAB37.15.tomate 85
576
diente de león|gb161|DY820394_T1 diente de león 1145 Seq256.MAB37.15.tomate 87
577
festuca|gb161|DT687914_T1 festuca 1146 Seq290.MAB122.15.maíz 93
578
festuca|gb161|DT702477_T1 festuca 1147 Seq291.MAB123.15.cebada 87
579
festuca|gb161|DT705881_T1 festuca 1148 Seq311.MAB134.15.cebada 96
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
580
festuca|gb161|DT687914_T1 festuca 1149 Seq321.MAB139.15.algodón 82
581
festuca|gb161|DT699000_T1 festuca 1150 Seq309.MAB133.15.cebada 90
582
festuca|gb161|DT706685_T1 festuca 1151 Seq259.MAB39.15.cebada 96
583
festuca|gb161|DT698326_T1 festuca 1152 Seq368.MAB164.15.cebada 95
584
festuca|gb161|DT677453_T1 festuca 1153 Seq379.MAB170.15.cebada 95
585
festuca|gb161|DT674734_T1 festuca 1154 Seq333.MAB145.15.cebada 88
586
gengibre|gb164|DY377113_T1 gengibre 1155 Seq223.MAB16.15.arroz 81
587
uva|gb160|BQ792651_T1 uva 1156 Seq222.MAB16.15.arroz 84
588
uva|gb160|BQ793581_T1 uva 1157 Seq371.MAB166.15.álamo 80
589
maravilla|gb164|BM658279_T1 maravilla 1158 Seq376.MAB168.15.uva 83
590
maravilla|gb164|BE034140_T1 maravilla 1159 Seq303.MAB129.15.tomate 81
591
ipomoea|gb157.2|AU224303_T1 ipomoea 1160 Seq256.MAB37.15.tomate 91
592
ipomoea|gb157.2|AU224807_T1 ipomoea 1161 Seq385.MAB173.15.cebada 80
593
ipomoea|gb157.2|CJ758382_T1 ipomoea 1162 Seq371.MAB166.15.álamo 83
594
lechuga|gb157.2|DW048067_T1 lechuga 1163 Seq256.MAB37.15.tomate 87
595
lechuga|gb157.2|DW046482_T1 lechuga 1164 Seq256.MAB37.15.tomate 85
596
lechuga|gb157.2|DW062524_T1 lechuga 1165 Seq259.MAB39.15.cebada 81
597
lechuga|gb157.2|DW048641_T1 lechuga 1166 seq370.MAB165.15.uva 80
598
lechuga|gb157.2|DW055618_T1 lechuga 1167 Seq371.MAB166.15.álamo 80
599
lechuga|gb157.2|DY961700_T2 lechuga 1168 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 83
600
lechuga|gb157.2|DW075962_T1 lechuga 1169 Seq256.MAB37.15.tomate 87
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
601
lechuga|gb157.2|DW047202_T1 lechuga 1170 Seq376.MAB168.15.uva 83
602
loto|gb157.2|BF177835_T1 loto 1171 Seq256.MAB37.15.tomate 90
603
loto|gb157.2|BW601503_T1 loto 1172 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 84
604
maíz|gb164|T15319_T2 maíz 1173 Seq276.MAB49.15.maíz 96
605
maíz|gb164|AI649734_T1 maíz 1174 Seq264.MAB42.10.sorgo 90
606
maíz|gb164|BE638692_T1 maíz 1175 Seq228.MAB19.15.sorgo 88
607
maíz|gb164|AW498283_T1 maíz 1176 Seq210.MAB8.15.arroz 80
608
maíz|gb164|AI622375_T1 maíz 1177 Seq309.MAB133.15.cebada 90
609
maíz|gb164|BQ034409_T1 maíz 1178 Seq290.MAB122.15.maíz 100
610
maíz|gb164|EC895235_T1 maíz 1179 Seq210.MAB8.15.arroz 86
611
maíz|gb164|AI947795_T2 maíz 1180 Seq325.MAB141.15.cebada 80
612
maíz|gb164|AI947974_T1 maíz 1181 Seq227.MAB19.15.sorgo 93
613
maíz|gb164|AI619086_T1 maíz 1182 Seq346.MAB153.15.caña de azúcar 95
614
maíz|gb164|AA143925_T1 maíz 1183 Seq221.MAB15.15.sorgo 94
615
maíz|gb164|AW179463_T1 maíz 1184 Seq321.MAB139.15.algodón 82
616
maíz|gb164|BE051802_T1 maíz 1185 Seq231.MAB21.15.arroz 89
617
maíz|gb164|AI942091_T1 maíz 1186 Seq309.MAB133.15.cebada 89
618
maíz|gb164|AI944064_T1 maíz 1187 Seq383.MAB172.15.caña de azúcar 96
619
maíz|gb164|T15319_T1 maíz 1188 Seq276.MAB49.15.maíz 96
620
maíz|gb164|AI782993_T1 maíz 1189 Seq241.MAB28.15.arroz 82
621
maíz|gb164|T26945_T1 maíz 1190 Seq370.MAB165.15.uva 80
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
622
maíz|gb164|AI941749_T1 maíz 1191 Seq269.MAB45.15.trigo 91
623
maíz|gb164|AI891255_T1 maíz 1192 Seq311.MAB134.15.cebada 95
624
maíz|gb164|CD975046_T1 maíz 1193 Seq203.MAB3.15.arroz 88
625
maíz|gb164|AW360563_T1 maíz 1194 Seq241.MAB28.15.arroz 81
626
maíz|gb164|AI901860_T1 maíz 1195 Seq259.MAB39.15.cebada 85
627
maíz|gb164|AI948098_T1 maíz 1196 Seq381.MAB171.15.caña de azúcar 95
628
maíz|gb164|AI444730_T1 maíz 1197 Seq241.MAB28.15.arroz 83
629
maíz|gb164|AW216308_T1 maíz 1198 Seq288.MAB121.15.caña de azúcar 89
630
maíz|gb164|BM268089_T1 maíz 1199 Seq381.MAB171.15.caña de azúcar 92
631
maíz|gb164|AI438597_T1 maíz 1200 Seq352.MAB155.15.sorgo 91
632
maíz|gb164|AW927739_T1 maíz 1201 Seq350.MAB154.15.caña de azúcar 97
633
maíz|gb164|AI891255_T2 maíz 1202 Seq311.MAB134.15.cebada 95
634
maíz|gb164|AI920760_T1 maíz 1203 Seq286.MAB104.15.arroz 89
635
medicago|gb157.2|AI974487_T1 medicago 1204 Seq370.MAB165.15.uva 87
636
medicago|gb157.2|BE325770_T1 medicago 1205 Seq256.MAB37.15.tomate 88
637
medicago|gb157.2|AW685603_T1 medicago 1206 Seq376.MAB168.15.uva 82
638
medicago|gb157.2|AL368329_T1 medicago 1207 Seq311.MAB134.15.cebada 80
639
medicago|gb157.2|AW688497_T1 medicago 1208 Seq370.MAB165.15.uva 80
640
medicago|gb157.2|AL377093_T1 medicago 1209 Seq224.MAB17.15.soja 80
641
medicago|gb157.2|AI974241_T1 medicago 1210 Seq334.MAB146.15.tomate 83
642
medicago|gb157.2|BF632135_T1 medicago 1211 Seq344.MAB152.15. uva 85
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
643
melón|gb165|DV633691_T1 melón 1212 Seq376.MAB168.15.uva 80
644
melón|gb165|DV632564_T1 melón 1213 Seq368.MAB164.15.cebada 80
645
melón|gb165|DV633584_T1 melón 1214 Seq344.MAB152.15. uva 86
646
melón|gb165|AM714958_T1 melón 1215 Seq259.MAB39.15.cebada 81
647
nicotiana_benthamiana|gb162|EH364164_T1 nicotiana_bentha miana 1216 Seq256.MAB37.15.tomate 95
648
avena|gb164|CN816769_T1 avena 1217 Seq368.MAB164.15.cebada 94
649
avena|gb164|BE439108_T1 avena 1218 Seq312.MAB134.10. cebada 85
650
cebolla|gb162|CF437899_T1 cebolla 1219 Seq256.MAB37.15.tomate 81
651
cebolla|gb162|CF437716_T1 cebolla 1220 Seq276.MAB49.15.maíz 82
652
cebolla|gb162|CF439314_T1 cebolla 1221 Seq370.MAB165.15.uva 80
653
papaya|gb165|EX245596_T1 papaya 1222 Seq370.MAB165.15.uva 88
654
papaya|gb165|EX299345_T1 papaya 1223 Sea263.MAB42.15.sorgo 82
655
papaya|gb165|EX248971_T1 papaya 1224 Seq362.MAB161.15.álamo 86
656
papaya|gb165|EX227965_T1 papaya 1225 Seq332.MAB144.15. uva 83
657
papaya|gb165|EX264060_T1 papaya 1226 Seq376.MAB168.15.uva 89
658
papaya|gb165|EX291966_T1 papaya 1227 Seq370.MAB165.15.uva 82
659
melocotón|gb157.2|BU039922_T1 melocotón 1228 Seq300.MAB127.15. uva 82
660
melocotón|gb157.2|BU039373_T1 melocotón 1229 Seq370.MAB165.15.uva 83
661
melocotón|gb157.2|AJ631618_T1 melocotón 1230 Seq276.MAB49.15.maíz 80
662
melocotón|gb157.2|BU040470_T1 melocotón 1231 Seq376.MAB168.15.uva 89
663
melocotón|gb157.2|BU039381_T1 melocotón 1232 Seq256.MAB37.15.tomate 88
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
664
cacahuete|gb161|ES754023_T1 cacahuete 1233 Seq332.MAB144.15. uva 80
665
cacahuete|gb161|EH043199_T1 cacahuete 1234 Seq256.MAB37.15.tomate 88
666
pimiento|gb157.2|BM063531_T1 pimiento 1235 Seq256.MAB37.15.tomate 96
667
pimiento|gb157.2|BM062846_T1 pimiento 1236 Seq221.MAB15.15.sorgo 82
668
pimiento|gb157.2|BM061776_T1 pimiento 1237 Seq329.MAB143.15.tomate 90
669
pimiento|gb157.2|BM064151_T1 pimiento 1238 Seq306.MAB131.15.tomate 88
670
pimiento|gb157.2|BM061313_T1 pimiento 1239 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 86
671
pimiento|gb157.2|BI480604_T1 pimiento 1240 Seq276.MAB49.15.maíz 80
672
violeta|gb164|EG559012_T1 violeta 1241 Seq259.MAB39.15.cebada 80
673
petunia|gb157.2|CV292753_T1 petunia 1242 Seq263.MAB42.15.sorgo 80
674
petunia|gb157.2|CV298220_T1 petunia 1243 Seq283.MAB99.15.tomate 81
675
pino|gb157.2|DR088714_T1 pino 1244 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 80
676
pino|gb157.2|AW290504_T1 pino 1245 Seq344.MAB152.15. uva 82
677
piña|gb157.2|CO731309_T1 piña 1246 Seq222.MAB16.15.arroz 83
678
piña|gb157.2|DT336648_T1 piña 1247 Seq376.MAB168.15.uva 81
679
piña|gb157.2|CO731994_T1 piña 1248 Seq219.MAB14.15.arroz 80
680
álamo|gb157.2|AI162293_T1 álamo 1249 Seq298.MAB126.15. uva 82
681
álamo|gb157.2|AI165439_T1 álamo 1250 Seq298.MAB126.15. uva 80
682
álamo|gb157.2|AI162293_T3 álamo 1251 Seq298.MAB126.15. uva 80
683
álamo|gb157.2|BI120274_T3 álamo 1252 Seq256.MAB37.15.tomate 81
684
álamo|gb157.2|BI120274_T2 álamo 1253 Seq344.MAB152.15. uva 89
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
685
álamo|gb157.2|BF299457_T1 álamo 1254 Seq370.MAB165.15.uva 85
686
álamo|gb157.2|BI120274_T1 álamo 1255 Seq344.MAB152.15. uva 86
687
álamo|gb157.2|BI122516_T1 álamo 1256 seq162.MAB161.15.álamo 90
688
álamo|gb157.2|BU821689_T1 álamo 1257 Seq321.MAB139.15.algodón 81
689
álamo|gb157.2|AI166955_T1 álamo 1258 Seq344.MAB152.15. uva 87
690
álamo|gb157.2|BI069450_T1 álamo 1259 Seq376.MAB168.15.uva 85
691
patata|gb157.2|BG594910_T1 patata 1260 Seq370.MAB165.15.uva 82
692
patata|gb157.2|AJ487418_T1 patata 1261 Seq321.MAB139.15.algodón 82
693
patata|gb157.2|BQ516076_T2 patata 1262 Seq389.MAB175.15.tomate 97
694
patata|gb157.2|BE921143_T1 patata 1263 Seq349.MAB154.15.caña de azúcar 80
695
patata|gb157.2|BG592541_T1 patata 1264 Seq256.MAB37.15.tomate 90
696
patata|gb157.2|BF052848_T1 patata 1265 Seq321.MAB139.15.algodón 81
697
patata|gb157.2|BF460150_T1 patata 1266 Seq370.MAB165.15.uva 84
698
patata|gb157.2|BG097985_T1 patata 1267 Seq303.MAB129.15.tomate 91
699
patata|gb157.2|BE923564_T1 patata 1268 Seq342.MAB151.15. patata 90
700
patata|gb157.2|X86021_T1 patata 1269 Seq334.MAB146.15.tomate 97
701
patata|gb157.2|BG594768_T1 patata 1270 Seq329.MAB143.15.tomate 97
702
patata|gb157.2|BF154203_T1 patata 1271 Seq256.MAB37.15.tomate 98
703
patata|gb157.2|BE344306_T1 patata 1272 seq357.MAB157.15.caña de azúcar 82
704
patata|gb157.2|BF460309_T1 patata 1273 Seq329.MAB143.15.tomate 98
705
patata|gb157.2|BQ516076_T1 patata 1274 Seq390.MAB175.15.tomate 96
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
706
patata|gb157.2|BI176616_T1 patata 1275 Seq256.MAB37.15.tomate 88
707
patata|gb157.2|BQ117692_T1 patata 1276 Se354.MAB156.15.tabaco 86
708
patata|gb157.2|AJ487418_T2 patata 1277 Seq321.MAB139.15.algodón 81
709
patata|gb157.2|BG351229_T1 patata 1278 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 81
710
patata|gb157.2|AJ487418_T3 patata 1279 Seq321.MAB139.15.algodón 84
711
patata|gb157.2|BF154154_T1 patata 1280 Seq256.MAB37.15.tomate 99
712
rábano|gb164|EY895633_T1 rábano 1281 Seq373.MAB167.15.canola 93
713
rábano|gb164|EX772944_T1 rábano 1282 seq356.MAB157.15.caña de azúcar 83
714
rábano|gb164|EW725846_T1 rábano 1283 Seq237.MAB25.15.arabidopsis 84
715
rábano|gb164|EV527306_T1 rábano 1284 Seq229.MAB20.15.arabidopsis 94
716
rábano|gb164|EV565850_T1 rábano 1285 Seq277.MAB50.15.arabidopsis 90
717
rábano|gb164|EX772722_T1 rábano 1286 Seq360.MAB159.15.canola 88
718
rábano|gb164|EX775718_T1 rábano 1287 Seq376.MAB168.15.uva 81
719
rábano|gb164|EV535278_T1 rábano 1288 Seq360.MAB159.15.canola 81
720
rábano|gb164|EV565334_T1 rábano 1289 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 91
721
rábano|gb164|EV528083_T1 rábano 1290 Seq252.MAB35.15.arabidopsis 80
722
rábano|gb164|T25168_T1 rábano 1291 Seq376.MAB168.15.uva 80
723
rábano|gb164|EV544010_T1 rábano 1292 Seq229.MAB20.15.arabidopsis 91
724
rábano|gb164|EW713752_T1 rábano 1293 Seq373.MAB167.15.canola 86
725
rábano|gb164|EV568565_T1 rábano 1294 Seq284.MAB100.15.arabidopsis 88
726
rábano|gb164|EV543867_T1 rábano 1295 Seq373.MAB167.15.canola 88
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
727
rábano|gb164|EX770974_T1 rábano 1296 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 85
728
rábano|gb164|EV566819_T1 rábano 1297 Seq217.MAB13.15.arabidop 81
729
arroz|gb157.2|NM001059403_T1 arroz 1298 Seq261.MAB40.15.arroz 84
730
arroz|gb157.2|C28755_T1 arroz 1299 Seq321.MAB139.15.algodón 80
731
arroz|gb157.2|AA750806_T1 arroz 1300 Seq290.MAB122.15.maíz 83
732
arroz|gb157.2|AA751345_T1 arroz 1301 Seq321.MAB139.15.algodón 80
733
arroz|gb157.2|BE040195_T6 arroz 1302 Seq346.MAB153.15.caña de azúcar 95
734
arroz|gb157.2|BI118752_T1 arroz 1303 Seq276.MAB49.15.maíz 94
735
arroz|gb157.2|AW070148_T1 arroz 1304 Seq350.MAB154.15.caña de azúcar 87
736
arroz|gb157.2|AW069929_T1 arroz 1305 Seq309.MAB133.15.cebada 93
737
arroz|gb157.2|AW070094_T1 arroz 1306 Seq274.MAB48.15.arroz 83
738
arroz|gb157.2|AA753115_T4 arroz 1307 Seq259.MAB39.15.cebada 90
739
arroz|gb157.2|BI795037_T4 arroz 1308 Seq385.MAB173.15.cebada 100
740
arroz|gb157.2|AU092454_T1 arroz 1309 Seq274.MAB48.15.arroz 100
741
arroz|gb157.2|AA753115_T3 arroz 1310 Seq259.MAB39.15.cebada 91
742
arroz|gb157.2|BE040195_T1 arroz 1311 Seq346.MAB153.15.caña de azúcar 91
743
arroz|gb157.2|CB624284_T1 arroz 1312 Seq264.MAB42.10.sorgo 82
744
arroz|gb157.2|AU030125_T3 arroz 1313 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 88
745
arroz|gb157.2|AU164313_T1 arroz 1314 Seq270.MAB45.15.trigo 84
746
arroz|gb157.2|BI799463_T1 arroz 1315 Seq221.MAB15.15.sorgo 85
747
arroz|gb157.2|AW070094_T3 arroz 1316 Seq274.MAB48.15.arroz 80
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
748
arroz|gb157.2|AA753115_T1 arroz 1317 Seq259.MAB39.15.cebada 91
749
arroz|gb157.2|AU093322_T2 arroz 1318 Seq228.MAB19.15.sorgo 85
750
arroz|gb157.2|AU030125_T1 arroz 1319 Seq263.MAB42.15.sorgo 80
751
arroz|gb157.2|AA752703_T1 arroz 1320 Seq295.MAB125.15.arroz 88
752
arroz|gb157.2|NM001067464_T1 arroz 1321 Seq205.MAB4.15.arroz 93
753
arroz|gb157.2|NM001052309_T1 arroz 1322 Seq295.MAB125.15.arroz 91
754
arroz|gb157.2|CA763128_T2 arroz 1323 Seq219.MAB14.15.arroz 80
755
arroz|gb157.2|AW070148_T2 arroz 1324 Seq348.MAB154.15.caña de azúcar 87
756
arroz|gb157.2|AU093322_T1 arroz 1325 Seq228.MAB19.15.sorgo 86
757
arroz|gb157.2|AA753115_T5 arroz 1326 Seq259.MAB39.15.cebada 94
758
arroz|gb157.2|AU030125_T4 arroz 1327 Seq263.MAB42.15.sorgo 80
759
centeno|gb164|BF429408_T1 centeno 1328 Seq309.MAB133.15.cebada 97
760
centeno|gb164|BE494847_T1 centeno 1329 Seq368.MAB164.15.cebada 97
761
alazor|gb162|EL373402_T1 alazor 1330 Seq376.MAB168.15.uva 81
762
alazor|gb162|EL374175_T1 alazor 1331 Seq259.MAB39.15.cebada 83
763
alazor|gb162|EL377332_T1 alazor 1332 Seq385.MAB173.15.cebada 81
764
alazor|gb162|EL373487-T1 alazor 1333 Seq263.MAB42.15.sorgo 80
765
alazor|gb162|EL3174095_T1 alazor 1334 Seq256.MAB37.15.tomate 86
766
alazor|gb162|EL382051_T1 alazor 1335 Seq256.MAB37.15.tomate 86
767
alazor|gb162|EL409148_T1 alazor 1336 Seq385.MAB173.15.cebada 80
768
sorgo|gb161.xeno|AW224927_T1 sorgo 1337 Seq288.MAB121.15.caña de azúcar 94
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
769
sorgo|gb161.xeno|T26945_T2 sorgo 1338 Seq370.MAB165.15.uva 81
770
sorgo|gb161.xeno|AI932179_T3 sorgo 1339 Seq286.MAB104.15.arroz 91
771
sorgo|gb161.xeno|T15319_T1 sorgo 1340 Seq276.MAB49.15.maíz 97
772
sorgo|gb161.xeno|AI615215_T1 sorgo 1341 Seq248.MAB33.15.maíz 92
773
sorgo|gb161.xeno|BG102066_T2 sorgo 1342 Seq290.MAB122.15.maíz 90
774
sorgo|gb161.xeno|AW672419_T2 sorgo 1343 Seq276.MAB49.15.maíz 97
775
sorgo|pb161.xeno|AW672419_T3 sorgo 1344 Seq276.MAB49.15.maíz 95
776
sorgo|gb161.xeno|AI901860_T1 sorgo 1345 Seq259.MAB39.15.cebada 84
777
sorgo|gb161.xeno|AI621995_T3 sorgo 1346 Seq384.MAB172.15.caña de azúcar 97
778
sorgo|gb161.xeno|AI881418_T2 sorgo 1347 Seq264.MAB42.10.sorgo 100
779
sorgo|gb161.xeno|AI89125_T1 sorgo 1348 Seq311.MAB134.15.cebada 95
780
sorgo|gb161.xeno|AI782993_T1 sorgo 1349 Seq241.MAB28.15.arroz 84
781
sorgo|gb161.xeno|AI724629_T1 sorgo 1350 Seq350.MAB154.15.caña de azúcar 99
782
sorgo|gb161.xeno|AA143925_T1 sorgo 1351 Seq221.MAB15.15.sorgo 100
783
sorgo|gb161.xeno|AI621995_T2 sorgo 1352 Seq383.MAB172.15.caña de azúcar 99
784
sorgo|gb161.xeno|T26945_T1 sorgo 1353 Seq370.MAB165.15.uva 81
785
sorgo|gb161.xeno|AW179463_T1 sorgo 1354 Seq321.MAB139.15.algodón 80
786
sorgo|gb161.xeno|ZMU90944_T2 sorgo 1355 Seq367.MAB163.15.cebada 80
787
sorgo|gb161.xeno|T15319_T2 sorgo 1356 Seq276.MAB49.15.maíz 95
788
sorgo|gb161.xeno|AI621995_T1 sorgo 1357 Seq383.MAB172.15.caña de azúcar 99
789
sorgo|gb161.xeno|AI932179_T1 sorgo 1358 Seq286.MAB104.15.arroz 90
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
790
sorgo|gb161.xeno|AI621995_T4 sorgo 1359 Seq383.MAB172.15.caña de azúcar 99
791
sorgo|gb161.xeno|ZMU90944_T3 sorgo 1360 Seq367.MAB163.15.cebada 80
792
sorgo|gb161.xeno|AI665229_T2 sorgo 1361 Seq346.MAB153.15.caña de azúcar 96
793
sorgo|gb161.xeno|AI939836_T1 sorgo 1362 Seq309.MAB133.15.cebada 92
794
sorgo|gb161.xeno|BI099068_T1 sorgo 1363 Seq270.MAB45.15.trigo 83
795
sorgo|gb161.xeno|AI665229_T1 sorgo 1364 Seq346.MAB153.15.caña de azúcar 96
796
sorgo|gb161.xeno|AW67249_T1 sorgo 1365 Seq276.MAB49.15.maíz 97
797
sorgo|gb161.xeno|AW4983_T1 sorgo 1366 Seq210.MAB8.15.arroz 83
798
sorgo|gb161.xeno|AW923775_T1 sorgo 1367 Seq231.MAB21.15.arroz 88
799
sorgo|gb161.xeno|T15319_T3 sorgo 1368 Seq276.MAB49.15.maíz 85
800
soja|gb162|BG839539_T1 soja 1369 Seq368.MAB164.15.cebada 80
801
soja|gb162|CA783290_T1 soja 1370 Seq259.MAB39.15.cebada 81
802
soja|gb162|BU551043_T1 soja 1371 Seq256.MAB37.15.tomate 88
803
soja|gb162|EV282184_T1 soja 1372 Seq371.MAB166.15.álamo 82
804
soja|gb162|BI967468_T1 soja 1373 Seq368.MAB164.15.cebada 80
805
soja|gb162|BI321879_T1 soja 1374 Seq259.MAB39.15.cebada 81
806
soja|gb162|AW132704_T1 soja 1375 Seq256.MAB37.15.tomate 90
807
soja|gb162|BU764498_T1 soja 1376 Seq256.MAB37.15.tomate 86
808
soja|gb162|CA953156_T1 soja 1377 Seq298.MAB126.15. uva 80
809
soja|gb162|CF922618_T1 soja 1378 Seq259.MAB39.15.cebada 84
810
soja|gb162||BU544425_T1 soja 1379 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 81
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
811
soja|gb162|BU765332_T1 soja 1380 Seq233.MAB22.15.tomate 80
812
soja|gb162|CA936077_T1 soja 1381 Seq376.MAB168.15.uva 83
813
soja|gb162|BE823013_T1 soja 1382 Seq376.MAB168.15.uva 83
814
soja|gb162|CD417415_T1 soja 1383 Seq370.MAB165.15.uva 85
815
soja|gb162|BE660691_T1 soja 1384 Seq362.MAB161.15.álamo 81
816
soja|gb162|CD395628_T1 soja 1385 Seq370.MAB165.15.uva 82
817
soja|gb162|BU549206_T2 soja 1386 Seq259.MAB39.15.cebada 80
818
soja|gb162|AW351120_T1 soja 1387 Seq298.MAB126.15. uva 82
819
soja|gb162|AW132704_T2 soja 1388 Seq256.MAB37.15.tomate 90
820
soja|gb162|BE584244_T1 soja 1389 Seq256.MAB37.15.tomate 91
821
pícea|gb162|CO234968_T1 pícea 1390 Seq344.MAB152.15. uva 83
822
euforbio|gb161|DV146052_T1 euforbio 1391 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 81
823
euforbio|gb161|DV127024_T1 euforbio 1392 Seq344.MAB152.15. uva 83
824
euforbio|gb161|DV124157_T1 euforbio 1393 Seq376.MAB168.15.uva 85
825
fresa|gb164|EX683450_T1 fresa 1394 Seq348.MAB154.15.caña de azúcar 81
826
fresa|gb164|EX683265_T1 fresa 1395 Seq370.MAB165.15.uva 81
827
fresa|gb164|DY675409_T1 fresa 1396 Seq256.MAB37.15.tomate 81
828
caña de azúcar|gb157.2|CA115287_T1 caña de azúcar 1397 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 88
829
caña de azúcar|gb157.2|CA21600I_T1 caña de azúcar 1398 Seq259.MAB39.15.cebada 85
830
caña de azúcar|gb157.2|CA072819_T1 caña de azúcar 1399 Seq241.MAB28.15.arroz 83
831
caña de azúcar|gb157.2|CA125036_T1 caña de azúcar 1400 Seq291.MAB123.15.cebada 82
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
832
caña de azúcar|gb157.2|CA071646_T1 caña de azúcar 1401 Seq286.MAB104.15.arroz 90
833
caña de azúcar|gb157.2|CA117936_T2 caña de azúcar 1402 Seq228.MAB19.15.sorgo 93
834
caña de azúcar|gb157.2|BQ537163_T1 caña de azúcar 1403 Seq276.MAB49.15.maíz 96
835
caña de azúcar|gb157.2|CA074253_T1 caña de azúcar 1404 Seq241.MAB28.15.arroz 83
836
caña de azúcar|gb157.2|CA102030_T1 caña de azúcar 1405 Seq385.MAB173.15.cebada 85
837
caña de azúcar|gb157.2|CA068084_T1 caña de azúcar 1406 Seq366.MAB163.15.cebada 80
838
caña de azúcar|gb157.2|CA233048_T1 caña de azúcar 1407 Seq290.MAB122.15.maíz 80
839
caña de azúcar|gb157.2|CA090429_T1 caña de azúcar 1408 Seq289.MAB121.15.caña de azúcar 95
840
caña de azúcar|gb157.2|CA095299_T1 caña de azúcar 1409 Seq370.MAB165.15.uva 80
841
caña de azúcar|gb157.2|BQ533298_T1 caña de azúcar 1410 Seq311.MAB134.15.cebada 95
842
caña de azúcar|gb157.2|CA107649_T1 caña de azúcar 1411 Seq248.MAB33.15.maíz 90
843
caña de azúcar|gb157.2|BQ536274_T1 caña de azúcar 1412 Seq231.MAB21.15.arroz 88
844
caña de azúcar|gb157.2|CA117936_T1 caña de azúcar 1413 Seq228.MAB19.15.sorgo 94
845
caña de azúcar|gb157.2|BQ533234_T1 caña de azúcar 1414 Seq221.MAB15.15.sorgo 99
846
caña de azúcar|gb157.2|CA072307_T1 caña de azúcar 1415 Seq309.MAB133.15.cebada 93
847
caña de azúcar|gb157.2|CA073476_T1 caña de azúcar 1416 Seq290.MAB122.15.maíz 91
848
caña de azúcar|gb157.2|CA065809_T1 caña de azúcar 1417 Seq366.MAB163.15.cebada 80
849
caña de azúcar|gb157.2|CA072307_T2 caña de azúcar 1418 Seq309.MAB133.15.cebada 93
850
girasol|gb162|DY909111_T1 girasol 1419 Seq336.MAB147.15.tabaco 83
851
girasol|gb162|DY941035_T1 girasol 1420 Seq376.MAB168.15.uva 82
852
girasol|gb162|CD857487_T1 girasol 1421 Seq370.MAB165.15.uva 81
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
853
girasol|gb162|DY942252_T1 girasol 1422 Seq311.MAB134.15.cebada 80
854
girasol|gb162|CD850784_T1 girasol 1423 Seq256.MAB37.15.tomate 83
855
girasol|gb162|BQ968872_T1 girasol 1424 Seq357.MAB137.15.caña de azúcar 83
856
girasol|gb162|EE616266_T1 girasol 1425 Seq256.MAB37.15.tomate 84
857
girasol|gb162|EE641694_T1 girasol 1426 Seq256.MAB37.15.tomate 84
858
girasol|gb162|DY924220_T1 girasol 1427 Seq259.MAB39.15.cebada 81
859
girasol|gb162|DY910907_T1 girasol 1428 Seq370.MAB165.15.uva 80
860
girasol|gb162|AY029172_T girasol 1429 Seq321.MAB139.15.algodón 81
861
girasol|gb162|DY909077_T1 girasol 1430 Seq321.MAB139.15.algodón 80
862
girasol|gb162|DY921635_T1 girasol 1431 Seq376.MAB168.15.uva 83
863
girasol|gb162|DY913894_T1 girasol 1432 Seq256.MAB37.15.tomate 82
864
pasto varilla|gb165|FE608718-T1 pasto varilla 1433 Seq370.MAB165.15.uva 81
865
pasto varilla|gb165|FE624581_T1 pasto varilla 1434 Seq333.MAB145.15.cebada 87
866
pasto varilla|gb165|FE604798_T1 pasto varilla 1435 Seq269.MAB45.15.trigo 90
867
pasto varilla|gb165|DN-151012_T1 pasto varilla 1436 Seq309.MAB133.15.cebada 90
868
pasto varilla|gb165|FE619903_T1 pasto varilla 1437 Seq383.MAB172.15.caña de azúcar 95
869
pasto varilla|gb165|DN144676_T1 pasto varilla 1438 Seq385.MAB173.15.cebada 87
870
pasto varilla|gb165|FE609872_T1 pasto varilla 1439 Seq228.MAB19.15.sorgo 89
871
pasto varilla|gb165|FE617860_T1 pasto varilla 1440 Seq381.MAB171.15.caña de azúcar 88
872
pasto varilla|gb165|DN145750_T1 pasto varilla 1441 Seq221.MAB15.15.sorgo 95
873
pasto varilla|gb165|FE597811_T1 pasto varilla 1442 Seq248.MAB33.15.maíz 83
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
874
pasto varilla|gb165|FE647199_T1 pasto varilla 1443 Seq381.MAB171.15.caña de azúcar 90
875
pasto varilla|gb165|DN145034_T1 pasto varilla 1444 Seq276.MAB49.15.maíz 95
876
pasto varilla|gb165|FE617335_T1 pasto varilla 1445 Seq286.MAB104.15.arroz 91
877
pasto varilla|gb165|FE597809_T1 pasto varilla 1446 Seq350.MAB154.15.caña de azúcar 95
878
pasto varilla|gb165|FE597811_T2 pasto varilla 1447 Seq248.MAB33.15.maíz 85
879
pasto varilla|gb165|FE635691_T1 pasto varilla 1448 Seq311.MAB134.15.cebada 95
880
pasto varilla|gb165|FE653022_T1 pasto varilla 1449 Seq385.MAB173.15.cebada 83
881
pasto varilla|gb165|DN144793_T1 pasto varilla 1450 Seq259.MAB39.15.cebada 90
882
pasto varilla|gb165|FE641674_T1 pasto varilla 1451 Seq309.MAB133.15.cebada 89
883
theNungieNa|gb157.2|DN775606_T1 thellungiella 1452 Seq212.MAB10.15.arabidopsis 82
884
theNungieNa|gb157.2|DN773228_T1 thellungiella 1453 Seq211.MAB9.15.arabidopsis 98
885
theNungieNa|gb157.2|DN772771_T1 thellungiella 1454 Seq208.MAB7.15.arabidopsis 89
886
theNungieNa|gb157.2|DN774422_T1 thellungiella 1455 Seq360.MAB159.15.canola 83
887
theNungieNa|gb157.2|DN774140_T1 thellungiella 1456 Seq284.MAB100.15.arabidopsis 86
888
tabaco|gb162|DW003503_T1 tabaco 1457 Seq329.MAB143.15.tomate 93
889
tabaco|gb162|BP532373_T1 tabaco 1458 Seq357.MAB157.15.caña de azúcar 82
890
tabaco|gb162|CN949739_T1 tabaco 1459 Seq370.MAB165.15.uva 84
891
tabaco|gb162|BQ843111_T1 tabaco 1460 Seq319.MAB138.15. patata 90
892
tabaco|gb162|EB683054_T1 tabaco 1461 Seq307.MAB131.15.tomate 89
893
tabaco|gb162|EB428197_T1 tabaco 1462 Seq222.MAB16.15.arroz 80
894
tabaco|gb162|EB445060_T1 tabaco 1463 Seq283.MAB99.15.tomate 90
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
895
tabaco|gb162|EB447202_T1 tabaco 1464 Seq390.MAB175.15.tomate 88
896
tabaco|gb162|DW001113_T1 tabaco 1465 Seq256.MAB37.15.tomate 88
897
tabaco|gb162|EH623692_T1 tabaco 1466 Seq303.MAB129.15.tomate 85
898
tomate|gb164|BG127210_T1 tomate 1467 Seq342.MAB151.15. patata 82
899
tomate|gb164|BG128089_T2 tomate 1468 Seq222.MAB16.15.arroz 80
900
tomate|gb164|AW219181_T1 tomate 1469 Seq256.MAB37.15.tomate 90
901
tomate|gb164|BG127288_T1 tomate 1470 Seq370.MAB165.15.uva 83
902
tomate|gb164|BG133509_T1 tomate 1471 Seq256.MAB37.15.tomate 88
903
tomate|gb164|BG131241_T1 tomate 1472 Seq309.MAB133.15.cebada 80
904
tomate|gb164|BG129621_T1 tomate 1473 Seq350.MAB154.15.caña de azúcar 80
905
tomate|gb164|AI779004_T1 tomate 1474 Seq309.MAB133.15.cebada 81
906
tomate|gb164|BG129572_T1 tomate 1475 Seq321.MAB139.15.algodón 80
907
tomate|gb164|BG135408_T1 tomate 1476 Seq319.MAB138.15. patata 98
908
triphysaria|gb164|DR173028_T1 triphysaria 1477 Seq329.MAB143.15.tomate 81
909
triphysaria|gb164|BM357524_T2 triphysaria 1478 Seq283.MAB99.15.tomate 85
910
triphysaria|gb164|EY133838_T1 triphysaria 1479 Seq311.MAB134.15.cebada 80
911
triphysaria|gb164|BM357406_T1 triphysaria 1480 Seq329.MAB143.15.tomate 83
912
triphysaria|gb164|BM357011_T1 triphysaria 1481 Seq259.MAB39.15.cebada 80
913
triphysaria|gb164|BM357524_T1 triphysaria 1482 Seq376.MAB168.15.uva 85
914
triphysaria|gb164|EY137290_T1 triphysaria 1483 Seq256.MAB37.15.tomate 88
915
trigo|gb164|CA484259_T1 trigo 1484 Seq241.MAB28.15.arroz 84
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
916
trigo|gb164|BE606422_T1 trigo 1485 Seq379.MAB170.15.cebada 96
917
trigo|gb164|BE406378_T1 trigo 1486 Seq219.MAB14.15.arroz 80
918
trigo|gb164|BE470780_T1 trigo 1487 Seq221.MAB15.15.sorgo 84
919
trigo|gb164|BE418087_T1 trigo 1488 Seq325.MAB141.15.cebada 95
920
trigo|gb164|BQ294643_T1 trigo 1489 Seq269.MAB45.15.trigo 94
921
trigo|gb164|BE415314_T1 trigo 1490 Seq250.MAB34.15.cebada 82
922
trigo|gb164|AL822647_T1 trigo 1491 Seq259.MAB39.15.cebada 98
923
trigo|gb164|BE406667_T1 trigo 1492 Seq250.MAB34.15.cebada 89
924
trigo|gb164|BF475039_T1 trigo 1493 Seq221.MAB15.15.sorgo 83
925
trigo|gb164|CK196180_T1 trigo 1494 Seq323.MAB140.15.cebada 80
926
trigo|gb164|BE403745_T1 trigo 1495 Seq379.MAB170.15.cebada 97
927
trigo|gb164|BQ620260_T1 trigo 1496 Seq311.MAB134.15.cebada 100
928
trigo|gb164|BM138204_T1 trigo 1497 Seq333.MAB 145.15.barley 91
929
trigo|gb164|BE401114_T1 trigo 1498 Seq291.MAB123.15.barley 94
930
trigo|gb164|BE498161_T1 trigo 1499 Seq388.MAB174.15.barley 93
931
trigo|gb164|BQ744502_T1 trigo 1500 Seq250.MAB34.15.barley 85
932
trigo|gb164|BE415172_T1 trigo 1501 Seq366.MAB163.15.barley 94
933
trigo|gb164|CD490875_T1 trigo 1502 Seq276.MAB49.15.maize 97
934
trigo|gb164|CA625741_T1 trigo 1503 Seq309.MAB133.15.barley 87
935
trigo|gb164|BE443720_T1 trigo 1504 Seq318.MAB137.15.barley 94
936
trigo|gb164|BE420294_T1 trigo 1505 Seq290.MAB122.15.maize 84
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
937
trigo|gb164|BE516581_T1 trigo 1506 Seq387.MAB174.15.barley 95
938
trigo|gb164|BE406039_T1 trigo 1507 Seq333.MAB145.15.cebada 90
939
trigo|gb164|BM136483_T1 trigo 1508 Seq333.MAB145.15.cebada 92
940
trigo|gb164|BE425976_T1 trigo 1509 Seq250.MAB34.15.cebada 81
941
trigo|gb164|CN011148_T1 trigo 1510 Seq270.MAB45.15.trigo 84
942
trigo|gb164|BE419039_T1 trigo 1511 Seq250.MAB34.15.cebada 80
943
trigo|gb164|CA603413_T1 trigo 1512 Seq323.MAB140.15.cebada 85
944
trigo|gb164|CA743309_T1 trigo 1513 Seq321.MAB139.15.algodón 80
945
trigo|gb164|BG262336_T1 trigo 1514 Seq366.MAB163.15.cebada 94
946
trigo|gb164|CD881765_T1 trigo 1515 Seq219.MAB14.15.arroz 80
947
trigo|gb164|BE352629_T1 trigo 1516 Seq291.MAB123.15.cebada 96
948
trigo|gb164|BE398656_T1 trigo 1517 Seq308.MAB132.15.cebada 97
949
trigo|gb164|BE403195_T1 trigo 1518 Seq291.MAB123.15.cebada 94
950
trigo|gb164|BE488904_T1 trigo 1519 Seq367.MAB163.15.cebada 91
951
trigo|gb164|BE492528_T1 trigo 1520 Seq311.MAB134.15.cebada 100
952
trigo|gb164|BE427383_T1 trigo 1521 Seq219.MAB14.15.arroz 80
953
trigo|gb164|CA646957_T1 trigo 1522 Seq250.MAB34.15.cebada 89
954
trigo|gb164|BE443720_T2 trigo 1523 Seq318.MAB137.15.cebada 92
955
trigo|gb164|BE490408_T1 trigo 1524 Seq264.MAB42.10.sorgo 81
956
trigo|gb164|BE420295_T1 trigo 1525 Seq379.MAB170.15.cebada 96
957
trigo|gb164|AL825998_T1 trigo 1526 Seq308.MAB132.15.cebada 97
Homólogos de genes de TEAB
SEQ ID NO de polinucleótido:
Nombre del grupo Organismo SEQ ID NO de polipéptido: Homólogo a un polipéptido codificado por una SEQ ID NO de polinucleótido % de identidad global
958
trigo|gb164|CA693465_T1 trigo 1527 Seq308.MAB132.15.cebada 97
959
trigo|gb164|BE585772_T1 trigo 1528 Seq366.MAB163.15.cebada 95
960
trigo|gb164|CA613914_T1 trigo 1529 Seq356.MAB157.15.caña de azúcar 84
1656
>tomate|gb164|BG129621_T1 tomate 1660 Seq1649.MAB66.tomate 82
1657
patata|gb157.2|BE921143_T1 patata 1661 Seq1649.MAB66.tomate 82
1658
pimiento|gb157.2|BM061807_T1 pimiento 1662 Seq1649.MAB66.tomate 80
1659
>triphysaria|gb164|BM357011_T1 triphysaria 1663 Seq1649.MAB66.tomate 80
Tabla 2: *- La homología se calculó como% de identidad con respecto a las secuencias alineadas. Las secuencias de búsqueda fueron secuencias de polinucleótidos SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 10, 11, 13, 15, 16, 17, 19, 21, 23, 25, 26, 28, 29, 30, 32, 34, 36, 37, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71 ,73 ,75 ,77, 79, 81, 82, 84, 86, 88, 90, 91, 93, 94, 96, 98, 100, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 116, 118, 119, 121, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 135, 138, 140, 142, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 161, 163, 165, 168, 169, 170, 171, 173, 175, 177, 179, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198 y 1649, y las secuencias objeto son secuencias de proteínas identificadas en la base de datos basándose en más de 80% de identidad con las secuencias traducidas previstas de las secuencias de búsqueda de nucleótidos. Se muestran los polipéptidos homólogos y los polinucleótidos que los codifican.
5
10
15
20
25
30
35
40
Ejemplo 2
Generación de los supuestos genes de TEAB
Se sintetizan varias secuencias de ADN de los genes de TEAB por GeneArt (Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) geneart (.) com/). Se diseña ADN sintético in silico, basándose en las secuencias de aminoácidos codificadas de los genes de TEAB y usando tablas de uso de codones calculadas a partir de transcriptomas de planta (ejemplo de tales tablas se pueden encontrar en la base de datos de uso de codones disponible en línea en el Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) kazusa (.) o (.) jp/codon/). Las secuencias codificantes optimizadas se diseñan de tal forma que no se introduzcan cambios en la secuencia de aminoácidos codificada aunque se usen codones preferidos para la expresión en plantas dicotiledóneas (principalmente tomate y Arabidopsis) y plantas monocotiledóneas tales como maíz. Al menos una mutación silenciosa por cada 20 pares de bases de nucleótido se introduce en la secuencia en comparación con las secuencias originales para evitar el posible silenciamiento cuando se expresa en exceso el gen en el cultivo diana. A las secuencias optimizadas se añaden los siguientes sitios de enzimas de restricción - SalI, XbaI, BamHI, SmaI en el extremo 5' y SacI en el extremo 3'. Las secuencias sintetizadas por el proveedor (GeneArt, GmbH) se clonan en el plásmido pCR- Script.
Ejemplo 3
Clonación y generación de genes de vectores binarios para la expresión en plantas
Para validar su función en mejorar la TEAB y el rendimiento, se expresaron en exceso en plantas genes seleccionados, del siguiente modo.
Estrategia de clonación
Se clonaron en vectores binarios para la generación de plantas transgénicas genes seleccionados de los presentados en el Ejemplo 1. Para la clonación, se identificaron los marcos de lectura abiertos (abreviadamente en lo sucesivo ORF por la expresión inglesa Open Reading Frame) de longitud completa. Se analizaron grupos de EST y en algunos casos secuencias de ARNm para identificar el marco de lectura abierto entero comparando los resultados de varios algoritmos de traducción con proteínas conocidas de otras especies de planta.
Con el fin de de clonar los ADNc de longitud completa, se realizó transcripción inversa (abreviadamente en lo sucesivo RT por la expresión inglesa Reverse Transcription) seguido por reacción en cadena de la polimerasa (PCR; RT-PCR) en ARN total extraído de hojas, raíces u otros tejidos de planta, cultivando en condiciones tanto normales como deficientes en nutrientes. La extracción de ARN total, producción de ADNc y amplificación por PCR se realizó usando protocolos convencionales descritos en otros documentos (Sambrook J., E.F. Fritsch, y T. Maniatis. 1989. Molecular Cloning. A Laboratory Manual., 2a Ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York) que conocen bien los expertos en la materia. Los productos de PCR se purificaron usando el kit de purificación por PCR (Qiagen)
Normalmente, se prepararon 2 conjuntos de cebadores para la amplificación de cada gen, mediante PCR anidada (que significa amplificar en primer lugar el gen usando cebadores externos y luego usar el producto de PCR producido como molde para una segunda reacción de PCR, donde se usa el conjunto interno de cebadores). Alternativamente, se usaron uno o dos de los cebadores internos para la amplificación génica, tanto en la primera como en la segunda reacciones de PCR (que significa que se diseñaron solo 2-3 cebadores para un gen). Para facilitar adicionalmente la clonación de los ADNc, se añade una extensión de 8-12 pb a 5' de cada cebador interno. La extensión de cebador incluye un sitio de restricción de endonucleasa. Los sitios de restricción se seleccionan usando dos parámetros: (a) el sitio de restricción no existe en la secuencia de ADNc; y (b) los sitios de restricción en los cebadores directos e inversos se diseñan de forma que el ADNc digerido se inserte en la dirección sentido en el vector binario utilizado para la transformación. En la Tabla 3 a continuación se proporcionan los cebadores usados para la clonación de genes de TEAB.
Tabla 3
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB1
1530 201 EcoRV MAB1_EF_EcoRV AAGATATCAGACCAGAGGAGA AGACTCGATC (SEQ ID NO: 1567) MAB1_NF_EcoRV AAGATATCAGACTCCGTTCGGA GAAAAGG (SEQ ID NO: 1568) MAB1_ER_EcoRV ATGATATCTGAAGAACATCGCC TTGTCATC ÍSEO ID NO: 1569) MAB1_NR_EcoRV AAGATATCACCTTGTCATCGGA TCATCTCC (SEQ ID NO: 1570)
MAB1_GA (optimizada para la expresión en maíz y G. max)
1531 Producto Sintético (de pGA14_MAB1_GA)
MAB14
1538 219 EcoRV MAB14_EF_EcoRV ATGAIATCCAACGAATGAAGA CTAGTAGCTG (SEQ ID NO:1571) MAB14_NF_EcoRV ATGATATCCCAGATGGAATCCT GCCCT (SEQ ID NO: 1572) MAB14_ER_EcoRV ATGATATCGTGTCAATGAAGG GAACGTGC (SEQ ID NO: 1573) MAB14_NR_EcoRV ATGATAICGCAAATGGATTCAG ATATTCTG (SEQ ID NO; 1574)
MAB14_GA (optimizada para la expresión en maíz)
1539 Producto sintético (de pGA14_MAB14_GA)
MAB10
1532 212 SalI, XbaI MAB10FSal- GCAGTCGACAACTCACAGTTCC AAACACACA (SEQ ID NO: 1575) MABIOExtRXba- GGTCTAGAATGTAAATGTCTTC GTATTAGGC (SEQ ID NO: 1576) MABIONRXba- CCTCTAGAATCACCCGAAATAA CTAGTGTC (SEQ ID NO: 1577)
MAB10_GA (optimizada para la expresión en maíz)
1533 Producto sintético (de pGA18_MAB10_GA)
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB25
1549 237 PstI, SmaI MAB25_EF_PstI- A ACTGCAGCCATCGTCGTAATC CTTCTAGC (SEQ ID NO: 1578) MAB25_NF_Pstl- AACTGCAGTAATCATGGGGAG GAAATCTC (SEQ ID NO: 1579) MAB25_ER_Smal- GGGTGACAATTCCGAGTCTCAG C (SEQ ID NO: 1580) MAB25_NR_Smal- TCCCGGGCAATTGGTCAATGGC ACTC (SEQ IDNO:1581)
MAB25_GA (optimizada para la expresión en maíz)
1550 Producto sintético (de pGA14_MAB25_GA)
MAB134
1665 311 SalI, XbaI MAB134_EF_SalI- AATÜTCGACTCTCGTCTTGCTC CCAGAG (SEQ ID NO: 1582) MAB134_NF_Sall- AATOTCGACCGACACCCTTCTC CTCCTC (SEQ ÍD NO: 1583) MAB134_ER_Xbal- HTCTAGAATCATATTCCAACA TCCACTTC (SEQ ID NO:1584) MAB134_NR_Xbal- TTTCTAGACTGCTATGTTCCAC TGACTACAC (SEQ ID NO: Í58S)
MAB99
1566 283 Sail, SacI MAB99_NF_SalI- AAAGTCGACCAGTTAATTCTCC GTTGTCTACTC (SEQ ID NO: 1586) MAB99_NR_Sacl- TGAGCTCCTGCTTGAAACTTGC TGCTAG (SEQ ID NO: 1587)
MAB36
1554 254 SalI, XbaI MAB36FSal- GGAGTCGACACAGAAAT GGGT GG'rrTGAAG (SEQ ID NO: 1588) MAB36ExtRXba- CCTCTAGAAATGATCACTCACT GCAACTTAG (SEQ ID NO: 15 89) MAB36NRXba- CCTCTAGACACTCACTGCAACT TAGAAACATC (SEQ ID NO: 1590'»
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB7
1563 208 SalI, XbaI MAB7ExFSal- AACGTCGACGCTCATTTCTCTT CTTCTTTGG (SEQ ID NO: 1591) MAB7NFSal- GACGTCGACTCTTCTTTGGTTC TTACATTTCTC (SEQ ID NO: 1592) MAB7ExRXba- TCTCTAGAGCAAGACGTTATAA ACCATGC (SEQ ID NO:1593) MAB7NRXba- TCTCTAGAAGAAGACACGCTG GACAATG (SEQ ID NO: 1594)
MAB44
1557 267 SalI, SacI MAB44NFsal AAGGTCGACCATAAAGAACAG TGACAGGCG (SEQ ID NO: 1595) MAB44NRSC AGAGCTCCACGTAGT'ACATITJT CACAGCAC (SEQ ID NO: 1596)
MAB44_GA (optimizada para la expresión en maíz)
1558 Producto sintético (de pCR4Blunt- TOPO_MAB44_GA)
MAB6
1561 207 SalI, XbaI MAB6-ExFSal- ACCGTCGACCCTTCTCCAATTr CGTAAGC (SEQ ID NO: 1597) MAB6NFSal- ACCGTCGACTTCGTAAGCTCAA AGATJTCG (SEQ ID NO: 1598) MAB6-ExtRXbal- CCTCTAGAACGACTTTTAATCC CTCCAAC (SEQ ID NO: 1599) MAB6-NRXbal- CCTCTAGACTCCAACAGCCACT ACAACC (SEQ ID NO: 1600)
MAB6_GA (optimizada para la expresión en maíz)
1562 Producto sintético (de pGA15_MAB6_GA)
MAB9
1564 211 EcoRV MAB9_F_EcoRV A AG AT ATCGGTTGCTGAGGAA TCGAAGTAG (SEO ID NO:160li MAB9_ER_EcoRV TTGATATCGAGCCAAGTCACAA GGAGTTTAC (SEO ID NO: 16021 MAB9_NR_EcoRV TTGATATCCTCCGAGTGTCGCA GTAAGC (SEO ID NO: 1603)
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB9_GA (optimizada para la expresión en maíz y G. max)
1565 Producto sintético (de pGA15_MAB9_GA)
MAB100
1534 284 SalI,XbaI MAB100_EF_SalI- aatgtcgacccaagttaaactt CATAT CATACAC(SEQ ID NO: 1604) MAB100_NF_Sall- AATGTCGACGAAGAGTTATTAT GGCGAGCT (SEQ ID NO:1605) MAB100_ER_Xbal- AATGTCGACCCAAGTTAAACTT CATATCATACA C (SEQ ID NO: 1606) MAB100_NR_Xbal- AATCTAGACAAACCCAACTTAT TACATTACG (SEQ ID NO: 1607)
MAB13
1536 217 SacI, SalI MAB13_F_SalI_new AATGTCGACCTCGAAAATGGC CACCATTAG (SEQ ID NO: 1608) MAB13ExRSc CGAGCTCCAAAAATGCAAGAA TCAAGAG (SEQ ID NO: 1609) MAB13FSal AAGGTCGACTTCTCTCCAAAAT GGCCAC (SEQ ÍD NO: 1610) MAB13NRSC TGAGCTCTGCAAGAATCAAGA GAAATTTG (SEQ ID NO:16l í)
MAB32
1552 247 EcoRV MAB32_F_EcoRV- AAGATATCCTCCACTTGTTGTT CAATTCCC (SEQ ID NO:1612) MAB32_ER_EcoRV- ATGATATCGATCTGAACAGCA GTAAGTAAGCC (SEQ ID NO:1613) MAB32_NR_EcoRV- ATGATATCTAAGAAGAACAAG AC.ATGGATCG (SEQ ID NO: 1614)
MAB35
1553 252 SmaI MAB35_F- CGTGAGAACTAAGAAACACCC(S EQ ID NO: 1615)MAB35_ER_SmaI- TCCCGGGACATCTTTTCAACTA AACCAAGAC (SEQ ID NO: 1616) MAB35_NR_Smal- TCCCGGGCTAAACCAAGACTTA CACAAGACG (SEQ ID NO:1617)
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB146
1666 334 SalI, Xbal MAB146_F_Sal- ATTGTCGACAGAGTTATGGGA GATAATAGAGGA (SEQ ÍD NO: 1618) MAB146_ER_Xba- A1TCTAGACTCATTCTGAGCTT TACATGTTC (SEQ ID NO: 1619) MAB146_NR_Xba- TITCTAGATTGGTTTACACCTC AACTCACTAC (SEQ ID NO: 1620)
MAB2
1547 No codificante SalI, XbaI MAB2_F_SalI AATGTCGACAACAAATGATCCT TCAGGCAGTTAAAG (SEQ ID NO:1621) MAB2_R_Xba TITCIAG ATATTA A AA CTTAG A TTCGGGATCAG (SEQ ID NO: 1622)
MAB20
1548 229 PstI, SmaI MAB20_EF_Pstl- AACTGCAGGATCATCACTTCTC AGATTTCG (SEQ ID NO: 1623) MAB20_NF_Pstl- AACTGCAGAAAAATGAATTCA GAATCGCTAG (SEQ ID NO; 1624) MAB20_ER_Smal- AACTGCAGÜATCATCACTTCTC AGATTTCG (SEQ ID NO: 1625) MAB20_NR_Smal- TCCCGGGCAATCTGACCTCAAA ÁCTCCC (SEQ ID NO: 1626)
MAB43
1556 265 PstI, SmaI MAB43_NF_Pstl A ACTGCAGGATCAATGAAGAT TCGGAACAG (SEQ ID NO; 1627) MAB43_ER_Smal TCCCGGGTACAACAAGAAACC TCTGATTC (SEQ ID NO: 1628) MAB43_NR_Smal TCCCGGGCCTGTGCCACAGCTA TACTTAC (SEQ ID NO: 1629)
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB46
1559 271 SalI, SacI MAB46ExFSal- GAAGTCGACATCCGTAGTTTCA GTTTCGTCC (SEQ ID NO: 1630) MAB46NFSal- GA AGTCG ACCTTGTCTGTTCC A GATGAAATTG (SEQ ID NO: 1631) MAB46ExRSc- TGAGCTCCTCTATCGACGTCCG GATTC (SEQ ID NO: 1632) MAB46NRSC- TGAGCTCCGTCCGGATTCATAA ACAAC (SEQ ID NO: 1633) TCCCGGGCACACCAAGATTGAT TACAAAGAG (SEQ ID NO;1637)
MAB50
1560 277 Smal MAB50ExFSal GGAGTCGACCATCGGGACACA TCTTTAGG (SEq ID NO: 1634) MAB50_NF CATCTTTAGGCTCAAGGATTC (SEQ ID NO:1635) MAB50_ExR_Sac TGAGCTCGATCCTCGTTTATTA CAAGTCTG (SEQ ID NO: 1636 ) MAB50_NR_Sma
MAB66
1654 1655 SalI, Xbal MAB66_F_Sal- AATGTCGACGATTGGAGATAG GCAGGCA (SEQ ID NO: ¡ 638) MAB66_ER_Xba- TTTCTAGAGGTAGCCAAAGCTG ACACTC (SEQ ID NO: 1639) MAB66_NR_Xba- AATCTAGAGAGGCATATGCAC TTCTTATCG {SEQ ID NO: 1640)
MAB4
1555 205 EcoRV MAB4_EF_EcoRV- AAGATATCCAGGACGGGTTCT'C GATCAG (SEQ IDNO:1641) MAB4_NF_EcoRV- AAG AT ATCCAGCGAACACGTC TACGATG (SEQ ID NO: 1642) MAB4_ER_EcoRV- ATGATATCGCACGAGTTCAACT CAGCTG (SEQ ID NO: 1643) MAB4_NR_EcoRV- ATGATATCGAACTGCTTGAGAT GTAACAGCT (SEQ ID NO: 1644)
Genes de TEAB clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico y los cebadores usados para la clonación
ID de gen
SEQ ID NO. de polinucleótido del gen clonado SEQ ID NO. de polipéptido del polipéptido codificado Enzimas de restricción usadas para la clonación Cebadores usados para la amplificación (SEQ ID NO:)
MAB15_GA (optimizada para la expresión en Arabidopsis y maíz)
1541 221 XbaI, SacI Producto sintético (de pGA4_MAB15)
MAB15a_G A (optimizada para la expresión en maíz)
1667 Producto sintético (de pGA 18_MAB15a_GA)
MAB15_GA original (secuencia original, no optimizada)
1540 Producto sintético (de pGA14_MAB15_(EVO220)-original)
MAB17_GA (optimizada para la expresión en Arabidopsis y maíz)
1542 224 XbaI, SacI Producto sintético (de pGA4_MAB17)
MAB17a_G A (optimizada para la expresión en maíz)
1544 Producto sintético (de pCR4Blunt- TOPO_MAB17a_GA)
MAB17_GA _original (secuencia original, no optimizada)
1543 Producto sintético (pGA14_MAB17_(EVO222)- original)
MAB137_G A (optimizada para la expresión en maíz, Arabidopsis y tomate)
1537 317 XbaI, SacI Producto sintético (de pGA15_MAB137)
MAB3_GA (optimizada para la expresión en maíz, Arabidopsis y tomate)
1551 203 XbaI, SacI Producto sintético (de pCR4Blunt- Topo_MAB3)
MAB3_GA_original (secuencia original, no optimizada)
1668 Producto sintético (de pGA14_MAB3_(EVO235)-original)
MAB18_GA (optimizada para la expresión en Arabidopsis y maíz)
1545 225 XbaI, SacI Producto sintético (de pGA4_MAB18)
Gen de control: GUI
1664
Tabla 3. Se presentan los genes de TEAB y gen(es) de control por el número ID de gen y SEQ ID NO. de polinucleótido. También se presentan los cebadores y las enzimas de restricción usadas para clonar los genes de TEAB.
Se digirieron los productos de PCR con endonucleasas de restricción (Roche, Suiza) según el diseño de sitios en los cebadores (Tabla 3). Cada producto de PCR digerido se insertó en un vector con alto número de copias originado a partir del vector plasmídico pBlue-script KS (vector plasmídico pBlue-script KS, Protocolo de transferencia de hipertexto://World Wide Web (.) stratagene (.) com/manuals/212205 (.) pdf). En caso del vector con alto número de 5 copias originado a partir del vector plasmídico pBlue-script KS (pGN), se insertó el producto de PCR en el plásmido con alto número de copias en la dirección 5' al terminador NOS (SEQ ID NO: 1651) originado partir del vector binario pBI 101.3 (N° de acceso de GenBank U12640, nucleótidos 4417 a 4693), Tabla 4 a continuación. En otros casos (pKSJ_6669a), el promotor At6669 (SEQ ID NO: 1652) ya está clonado en pBlue-script KS, de manera que el gen se introduce en la dirección 3' del promotor (Tabla 4 a continuación).
Se realizó la secuenciación de los genes insertados, usando el secuenciador ABI 377 (Applied Biosystems). En algunos casos, después de confirmar las secuencias de los genes clonados, el ADNc clonado acompañado con el terminador NOS se introdujo en los vectores binarios pGI que contenían el promotor At6669 mediante digestión con endonucleasas de restricción apropiadas. En otros casos, el ADNc clonado acompañado con el promotor At6669 se 5 introdujo en el vector pGI (que ya no tenía contenido el promotor At6669). En cualquier caso, la inserción fue seguida por una sola copia del terminador NOS (SEQ ID NO: 1651). Se ligaron los productos digeridos y el vector plasmídico linealizado usando la enzima ADN ligasa T4 (Roche, Suiza).
Tabla 4
Genes clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico en un plásmido con alto número de copias
Nombre del gen
Plásmido con alto número de copias Amplificado de
MAB1
pKSJ_6669 ARN
MAB1
GeneArt
MAB10
GeneArt
MAB10
pGN ARN
MAB14
pKSJ_6669 ARN
MAB14
GeneArt
MAB15
pGN GeneArt (3 plásmidos)
MAB17
pGN GeneArt (3 plásmidos)
MAB137
pGN GeneArt
MAB25
pKSJ_6669 ARN
MAB25
GeneArt
MAB3
pGN GeneArt (2 plásmidos)
MAB44
pGN ARN
MAB44
GeneArt
MAB6
pGN ARN
MAB6
GeneArt
MAB9
pKSJ_6669 ARN
MAB9
GeneArt
MAB100
pGN ARN
MAB13
pGN ARN
MAB134
pGN ARN
MAB18
pGN GeneArt
MAB2
pGN ARN
MAB20
pKSJ_6669 ARN
MAB146
pGN ARN
MAB32
pKSJ_6669 ARN
MAB35
pKSJ_6669 ARN
MAB36
pGN ARN
MAB43
pKSJ_6669 ARN
MAB46
pGN ARN
MAB50
pKSJ_6669 ARN
MAB7
pGN ARN
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Genes clonados de bibliotecas de ADNc o ADN genómico en un plásmido con alto número de copias
Nombre del gen
Plásmido con alto número de copias Amplificado de
MAB99
pGN ARN
MAB66
pGN ARN
MAB4
pKSJ_6669 ARN
Tabla 4
Se construyó el vector plasmídico pPI insertando una secuencia de señal sintética poli-(A), originada del vector plasmídico básico pGL3 (Promega, N° de Acceso GenBank U47295; nucleótidos 4658-4811) en el sitio de restricción Hindlll del vector binario pBI101.3 (Clontech, N° de Acceso GenBank U12640). pGI (Figura 1) es similar a pPI, pero el gen original en la cadena principal es GUS-intrón en lugar de GUS.
Se inserta At6669, la secuencia promotora de Arabidopsis thaliana (expuesta en la SEQ ID NO: 1652) en el vector binario pPI, en la dirección 5' con respecto a los genes clonados usando las enzimas de restricción HindlII y SalI o BamHI (Roche), seguido por ligamiento de ADN y extracción de plásmido binario de colonias positivas de E. coli, como se ha descrito anteriormente.
Las colonias positivas se identificaron por PCR usando cebadores que se diseñaron para abarcar el promotor introducido (At6669) y el gen clonado en el vector binario. En todos los casos el cebador directo de la pCr fue el conjunto de cebadores expuesto en la SEQ ID NO: 1650 (del promotor At6669) y los cebadores inversos (derivados del gen clonado específico) fueron los siguientes: Para MAB1, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1570; para MAB14, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1574; para MAB10, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1577; para MAB25, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1581; para MAB134, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1585; para MAB99, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1587; para MAB36, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1590; para MAB7, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1594; para MAB44, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1596; para MAB4, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1600; para MAB9, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1603 (MAB9); para MAB100, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1606; para MAB13, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1611; para MAB32, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1614; para MAB35, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1617; para MAB146, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1620; para MAB2, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1622; para MAB20, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1626; para mAb43, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1629; para MAB46, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1633; para MAB50, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1637; para MaB66, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1640; para MAB4, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1644; para mAb15 sintético gene, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1645; para el gen sintético MAB17, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1646; para el gen sintético MAB18, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1647; para el gen sintético MAB137, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1648; y para el gen sintético MAB3, el cebador inverso fue SEQ ID NO: 1649, que se diseñaron para abarcar el promotor introducido y el gen, en el vector binario.
Las secuencias sintéticas (tales como de MAB14, nucleótido SEQ ID NO: 23, que codifica la proteína SEQ ID NO: 219) de algunos de los polinucleótidos clonados se solicitaron a un proveedor comercial (GeneArt, GmbH). Para optimizar la secuencia codificante, se usaron tablas de uso de codones calculados de transcriptomas de plantas [se pueden encontrar ejemplos de dichas tablas en la base de datos de uso de codones disponible en línea en el Protocolo de Transferencia de Hipertexto://World Wide Web (.) kazusa (.) o (.) jp/codon/]. Las secuencias codificantes optimizadas se diseñaron de tal forma que no se introdujeron cambios en la secuencia de aminoácidos codificada, aunque usando codones preferidos para la expresión en plantas dicotiledóneas, principalmente tomate y Arabidopsis; y en plantas monocotiledóneas tales como maíz. Dichas secuencias optimizadas promueven una mejor tasa de traducción y, por tanto, niveles de expresión de proteína más altos. Se solicitaron partes de las secuencias como las secuencias originales. Para las secuencias optimizadas/no optimizadas se añadieron sitios de enzimas de restricción exclusivos adicionales flanqueantes para facilitar los genes de clonación en vectores binarios.
Promotores usados: promotor At6669 de Arabidopsis (SEQ ID NO: 1652; que es la SEQ ID NO: 61 del documento WO04081173 de Evogene Ltd.).
Las secuencias de los ADNc clonados se proporcionan en las SEQ ID NO: 1530-1534, 1536-1545, 1547-1566, 1654, 1665, 1666, 1667 y 1668. La traducción de proteínas de la secuencia de ADNc amplificada coincidió exactamente con la de la predicción bioinformática inicial de las secuencias de proteínas. Las secuencias polipeptídicas previstas de los polinucleótidos clonados se proporcionan en SEQ ID NO: 201, 212, 284, 213, 217, 317, 219, 221,224, 225, 226, 227, 229, 237, 203, 247, 252, 205, 265, 267, 271, 277, 207, 208, 211, 283, 1655, 311, 334 y 254.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Ejemplo 4
Transformación de células de Agrobacterium tumefaciens con vectores binarios que llevan supuestos genes de TEAB
Se usa cada uno de los vectores binarios descritos en el Ejemplo 3 anterior para la transformación de células de Agrobacterium. Se usan dos construcciones binarias adicionales, que tienen un gen indicador GUS/luciferasa que reemplaza el gen de TEAB (ubicado en la dirección 3' del promotor At6669) como controles negativos.
Se introducen los vectores binarios en células competentes de Agrobacterium tumefaciens GV301 o LB4404 (aproximadamente 109 células/ml) por electroporación. La electroporación se realiza usando un electroporador MicroPulser (Biorad), cubetas de 0,2 cm (Biorad) y el programa de electroporación EC-2 (Biorad). Las células tratadas se cultivan en medio líquido LB a 28 °C durante 3 horas, después se siembran sobre agar LB complementado con gentamicina (50 mg/L; para cepas de Agrobacterium GV301) o estreptomicina (300 mg/L; para la cepa de Agrobacterium LB4404) y kanamicina (50 mg/L) a 29 °C durante 48 horas. Se analizan por PCR las colonias de Agrobacterium que se desarrollan sobre los medios selectivos usando los cebadores descritos anteriormente (Ejemplo 3) con respecto a la identificación de colonias positivas de vectores binarios. Se aíslan los productos resultantes de la PCR y se secuencian como se describe en el Ejemplo 3 anterior, para verificar que las secuencias correctas de TEAB se introducen apropiadamente en las células de Agrobacterium.
Ejemplo 5
Transformación de plantas de Arabidopsis thaliana con supuestos genes de TEAB
Se transforman plantas de Arabidopsis thaliana Columbia (plantas T0) usando el procedimiento de inmersión floral descrito por Clough y Bent (10) y por Desfeux et al. (11), con pequeñas modificaciones. Brevemente, se siembran plantas T0 en macetas de 250 mL cargadas con una mezcla de crecimiento basada en turba húmeda. Las macetas se cubren con papel de aluminio y con un domo de plástico, se mantienen a 4 °C durante 3-4 días, después se destapan y se incuban en una cámara de cultivo a 18-24 °C con ciclos de luz/oscuridad de 16/8 horas. Las plantas T0 están listas para la transformación seis días antes de la antesis.
Se generan colonias sencillas de Agrobacterium que llevan las construcciones binarias, como se describe en el Ejemplo 4 anterior. Las colonias se cultivan en medio LB complementado con kanamicina (50 mg/L) y gentamicina (50 mg/L). Los cultivos se incuban a 28 °C durante 48 horas con agitación intensa y después se centrifugan a 4000 rpm durante 5 minutos. Se resuspenden los sedimentos que comprenden las células de Agrobacterium en un medio de transformación que contiene Murashige-Skoog (2, 15 g/L) diluido al 50% (Duchefa); bencilamino purina 0,044 pM (Sigma); vitaminas Gambourg B5 112 pg/L (Sigma); sacarosa al 5%; y 0,2 ml/L de Silwet L-77 (OSI Specialists, CT) en agua doblemente destilada, a pH de 5,7.
La transformación de plantas T0 se realiza invirtiendo cada planta en una suspensión de Agrobacterium, de tal manera que el tejido de la planta por encima del suelo se sumerge durante 3-5 segundos. Cada planta T0 inoculada se coloca inmediatamente en una bandeja de plástico, después se cubre con un domo de plástico transparente para mantener la humedad y se mantiene en la oscuridad a temperatura ambiente durante 18 horas, para facilitar la infección y la transformación. Entonces se destapan las plantas transformadas (transgénicas) y se transfieren a un invernadero para su recuperación y maduración. Se cultivan las plantas transgénicas T0 en el invernadero durante 3-5 semanas hasta que las silicuas se vuelven de color marrón y se secan. Se recogen las semillas de las plantas y se mantienen a temperatura ambiente hasta la siembra.
Para generar plantas transgénicas T1 y T2 que portan los genes, se esteriliza la superficie de las semillas recogidas de las plantas transgénicas T0 sumergiéndolas en etanol al 70% durante 1 minuto, seguido de inmersión en hipocloruro de sodio al 5% y Triton al 0,05% durante 5 minutos. Las semillas con la superficie esterilizada se lavan minuciosamente en agua destilada estéril, luego se colocan en placas de cultivo que contienen Murashige-Skoog diluido al 50% (Duchefa); sacarosa al 2%; agar vegetal al 0,8%; kanamicina 50 mM; y carbenicilina 200 mM (Duchefa). Las placas de cultivo se incuban a 4 °C durante 48 horas, luego se transfirieren a una sala de cultivo a 25 °C durante una semana de incubación más. Las plantas de Arabidopsis T1 vitales se transfirieren a placas de cultivo recientes durante otra semana de incubación. Tras la incubación, las plantas T1 se retiran de las placas de cultivo y se plantan en macetas de 250 mL que contienen mezcla de crecimiento. Se deja que las plantas transgénicas se desarrollen en un invernadero hasta su madurez. Las semillas recogidas de las plantas T1 se cultivan y crecen hasta la madurez como plantas T2 en las mismas condiciones a las usadas para el cultivo y crecimiento de las plantas T1.
Ejemplo 6
TEAB mejorada en ensayo de cultivo de tejido
Ensayo 1: crecimiento de plantas con estrés osmótico (PEG) en condiciones de cultivo de tejido - Las condiciones de estrés osmótico (PEG) se parecen a las de alta osmolaridad encontradas durante la sequía (por ejemplo, PEG8000 al 25%). Una de las consecuencias de la sequía es la inducción de estrés osmótico en la zona que rodea las raíces; por tanto, en muchos estudios científicos, el PEG sirve para simular sequía.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Se siembran semillas con la superficie esterilizada en medio basal (medio Murasige-Skoog (MS) al 50% complementado con agar vegetal al 0,8% como agente solidificante] en presencia de kanamicina (para seleccionar solo plantas transgénicas). Después de sembrar, las placas se transfieren durante 2-3 días a 4 °C para la estratificación y después se cultivan a 25 °C con ciclos diarios de 12 horas de luz, 12 horas de oscuridad, durante 7 a 10 días. En este momento, las plantas de semillero elegidas al azar se transfieren cuidadosamente a placas que contienen PEG al 25% en medio MS 0,5 o en condiciones normales (medio MS 0,5). Cada placa contiene 5 plantas de semillero del mismo evento, y 3-4 placas diferentes (copias) para cada evento. Para cada polinucleótido de la invención se analizan al menos cuatro eventos de transformación independientes de cada construcción. Las plantas que expresan los polinucleótidos de la invención se comparan con la medición promedio de las plantas de control. Como control se usan plantas transgénicas simuladas que expresan el gen indicador uidA (GUS-intrón - GUI) bajo el mismo promotor.
Obtención de imágenes digitales - Se usó un sistema de adquisición de imágenes de laboratorio, que consistía en una cámara réflex digital (Canon EOS 300D) conectada a una lente de longitud focal de 55 mm (serie Canon EF-S), montada sobre un dispositivo reproductor (Kaiser RS), que incluía 4 unidades de luz (4x bombillas de luz de 150 vatios) y localizado en una sala oscura, para capturar imágenes de plántulas cultivadas en placas cuadradas con agar.
El proceso de captura de imágenes se repitió cada 7 días comenzando el día 0 hasta el día 14. Se usó para capturar imágenes la misma cámara conectada a una lente de longitud focal de 24 mm (serie Canon EF), colocada en un montaje de hierro hecho a medida .
Se usó un sistema de análisis de imágenes, que consistía en un ordenador de escritorio personal (procesador lntel P4 3.0 GHz) y en un programa de dominio público - lmageJ 1.37 (programa de procesamiento de imágenes basado en Java que se desarrolló en el U.S. National lnstitutes of Health y gratuito en internet en el Protocolo de transferencia de hipertexto://rsbweb (.) nih (.) gov/). Las imágenes se capturaron en resolución de 6 megapíxeles (3072 x 2048 píxeles) y se almacenaron en un formato de la norma de JPEG (grupo conjunto de expertos en fotografía, de la expresión inglesa Joint Photographic Experts Group) de baja compresión. A continuación, los datos analizados se guardaron en archivos de texto y se procesaron usando el softWare de análisis estadístico JMP (SAS Institute).
Análisis de plantas de semillero - Usando el análisis digital se calcularon los datos de las plantas de semillero, incluyendo el área foliar, la cobertura radicular y la longitud radicular.
Se calculó la tasa de crecimiento relativo (TCR) se calculó según siguiente fórmula l.
Fórmula 1:
Tasa del área de crecimiento relativo= (A Área / At) * (1/ Área t0)
At es el día en curso de la imagen analizada restado del día inicial (t-t0). Así, la tasa del área de crecimiento relativo es en unidades de 1/día y la tasa de crecimiento longitudinal es en unidades de 1/día.
Al final del experimento, las plántulas se retiraron de los medios y se pesaron para la determinación del peso fresco de la planta. La tasa de crecimiento relativo se determina comparando el área foliar, la longitud radicular y la cobertura radicular entre cada pareja de fotografías secuenciales, y los resultados se usan para resolver el efecto del gen introducido sobre el vigor de la planta, en condiciones de estrés osmótico, así como en condiciones óptimas. Similarmente, se determina el efecto del gen introducido sobre la acumulación de la biomasa, en condiciones de estrés, así como en condiciones óptimas, comparando el peso fresco de las plantas con las plantas de control (GUI).
Análisis estadísticos - Para identificar los genes y las construcciones superiores, se evalúan los resultados de los eventos de transformación independientes para la influencia global en el gen (efecto del gen) y para cada uno de los eventos ensayados (mejor evento). Se aplicaron la prueba de la t de Student, usando significancia de p < 0,05 o p < 0,1. Se usa el paquete de software estadístico JMP (Versión 5.2.1, SAS Institute lnc., Cary, NC, EE.UU.).
Resultados experimentales
Se ensayaron las secuencias de polinucleótidos de la invención para diversos rasgos deseados.
Las Tablas 5-6 representan el análisis del área foliar en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones de PEG al 25%. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control, indicando A una diferencia a un nivel de significancia de P < 0,05 y A* una diferencia a un nivel de significancia de a P < 0,1.
Área foliar [cmA2], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,38 B 0,38 B 0,68 B 0,68 B
MAB1
0,49 A 0,63 A 67 0,72 B 6 0,80 18
MAB25
0,33 C 0,49 A 28 0,61 B 0,88 A 30
Tabla 5: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,23 B 0,23 B 0,44 B 0,44 B
MAB15
0,25 B 0,32 A 43 0,36 B 0,48 B 9
MAB17
0,27 A 0,36 A 57 0,46 B 0,65 A 48
MAB18
0,30 A 0,36 A 57 0,39 B 0,51 B 15
MAB35
0,21 B 0,26 B 14 0,38 B 0,60 A 36
Tabla 6: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 7-9 representan el análisis de cobertura radicular en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones de PEG al 25%. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Cobertura radicular [cmA2], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
4,37 B 4,37 B 6,69 B 6,69 B
MAB1
7,17 A 10,32 A 136 9,25 A 9,73 A 45
Tabla 7: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
4,04 B 4,04 B 11,09 B 11,09 B
MAB15
4,53 B 5,60 A 39 10,10 B 11,74 B 6
MAB18
5,23 A 6,79 A 68 9,92 B 10,29 B -7
MAB146
5,10 B 7,01 A 73 8,67 B 10,04 B -9
Tabla 8: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
2,11 B 2,11 B 5,67 B 5,67 B
MAB18
2,05 B 2,75 B 30 5,40 B 8,76 A 55
MAB32
1,98 B 5,06 A 140 4,31 B 10,55 A 86
MAB35
2,62 B 3,82 A 81 7,19 A* 10,04 A 77
MAB4
3,03 A 5,64 A 168 7,38 A* 11,38 A 101
MAB146
1,84 B 3,65 A 73 5,05 B 9,21 A 63
Tabla 9: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 10-11 representan el análisis de la longitud radicular en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en PEG al 25%. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Longitud radicular [cm], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
4,71 A 4,71 A 5,71 B 5,71 B
MAB1
5,37 A 5,91 A 25 6,09 B 6,40 B 12
Tabla 10: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular [cm], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
2,88 B 2,88 B 5,11 B 5,11 B
MAB18
3,22 B 4,29 A 49 4,86 B 6,33 B 24
MAB32
2,74 B 5,78 A 101 3,75 B 7,17 A 40
MAB35
3,35 A* 4,79 A 66 5,30 B 6,76 A 32
MAB4
3,25 B 4,80 A 67 5,24 B 7,32 A 43
MAB146
2,43 B 4,00 A 39 4,04 B 6,39 A 25
Tabla 11: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 12-13 representan el análisis del área foliar RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en 25% PEG. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Área foliar RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,46 B 0,46 B 0,12 B 0,12 B
MAB1
0,68 A 1,47 A 222 0,20 A 0,30 A 151
MAB17
0,43 B 0,50 B 8 0,17 B 0,29 A 145
MAB35
0,65 A 0,71 A 54 0,19 A 0,23 A 93
MAB146
0,55 B 0,80 A 75 0,16 B 0,20 B 66
Tabla 12: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,49 B 0,49 B 0,24 B 0,24 B
MAB6
0,89 A 1,60 A 226 0,27 B 0,33 B 39
Tabla 13: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 14-18 representan el análisis de la cobertura radicular RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en PEG al 25%. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Cobertura radicular RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
5,74 B 5,74 B 0,11 B 0,11 B
MAB25
4,03 B 5,44 B -5 0,16 B 0,21 A 96
MAB44
5,32 B 7,79 B 36 0,17 B 0,28 A 155
Tabla 14: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,43 B 0,43 B 0,30 B 0,30 B
MAB1
2,16 A 3,09 A 621 0,36 B 0,43 A 44
MAB15
1,55 A 2,81 A 555 0,30 B 0,33 B 9
MAB17
1,99 A 4,08 A 852 0,35 B 0,53 A 78
MAB18
1,44 A 1,90 A 343 0,29 B 0,36 B 19
MAB35
1,10 B 1,71 B 298 0,37 B 0,48 A 59
MAB146
2,16 A 4,03 A 841 0,30 B 0,41 A 38
Tabla 15: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,27 B 1,27 B 0,08 B 0,08 B
MAB100
1,26 B 1,52 B 19 0,12 B 0,19 A 131
MAB134
1,64 A* 2,20 A 73 0,08 B 0,12 B 48
MAB13
1,57 B 2,16 A 70 0,19 A 0,32 A 294
MAB15
1,61 A* 2,71 A 113 0,10 B 0,13 B 56
MAB17
2,15 A 2,24 A 76 0,13 B 0,15 B 88
MAB3_GA
1,52 B 2,02 A 58 0,09 B 0,12 B 45
Tabla 16: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,95 B 0,95 B 0,30 B 0,30 B
MAB18
0,75 B 2,04 A 116 0,29 B 0,47 A 60
MAB35
1,44 A* 4,53 A 379 0,32 B 0,48 A 63
MAB4
1,28 B 2,17 A 129 0,29 B 0,44 A 49
MAB146
0,47 B 0,86 B -9 0,35 B 0,45 A 52
Tabla 17: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cmA2/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,66 B 1,66 B 0,21 B 0,21 B
MAB43
1,43 B 2,24 B 35 0,29 A 0,39 A 86
Tabla 18: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 19-21 representan el análisis de la longitud radicular RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en PEG al 25%. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Longitud radicular RGR [cm/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,23 B 0,23 B 0,09 B 0,09 B
MAB1
0,46 A 0,58 A 148 0,12 A 0,14 A 58
MAB15
0,43 A 0,58 A 148 0,08 B 0,10 B 16
MAB17
0,45 A 0,57 A 147 0,11 A 0,16 A 87
MAB18
0,41 A 0,44 A 89 0,10 B 0,13 A 45
MAB35
0,31 B 0,37 A 59 0,10 B 0,13 A 51
MAB146
0,49 A 0,65 A 178 0,09 B 0,10 B 17
Tabla 19: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,20 B 0,20 B 0,07 B 0,07 B
MAB134
0,28 A 0,33 A 68 0,07 B 0,08 B 16
MAB13
0,34 A 0,46 A 133 0,11 A 0,15 A 113
MAB1465
0,30 A 0,47 A 139 0,06 B 0,07 B 1
MAB1467
0,39 A 0,44 A 121 0,09 B 0,10 B 39
MAB3_GA
0,28 A 0,34 A 72 0,05 B 0,08 B 8
Tabla 20; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], PEG al 25%
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,29 B 0,29 B 0,11 B 0,11 B
MAB14637
0,27 B 0,39 A 32 0,11 B 0,12 B 11
MAB43
0,33 B 0,49 A 66 0,14 A 0,17 A 60
MAB50
0,37 A 0,53 A 82 0,13 B 0,15 A 45
MAB6
0,33 B 0,43 A 47 0,12 B 0,15 B 38
Tabla 21; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 22-23 representan el análisis del peso fresco de plantas en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en PEG al 25%. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
5 Tabla 22
ID de gen
Peso fresco de plantas [g], PEG al 25%
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,20 B 0,20 B
MAB15
0,25 B 0,30 A 51
MAB18
0,21 B 0,26 A 33
Tabla 22; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 23
ID de gen
Peso fresco de plantas [g], PEG al 25%
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,18 B 0,18 B
MAB17
0,22 B 0,29 A 66
MAB3_GA
0,18 B 0,27 A 53
Tabla 23; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 24-27 representan el análisis del área foliar en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 10 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Área foliar [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,49 B 0,49 B 0,82 B 0,82 B
MAB1
0,65 A 0,73 A 47 1,00 A 1,13 A 38
Tabla 24; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,24 B 0,24 B 0,56 B 0,56 B
MAB17
0,31 A 0,34 A 40 0,73 A 0,90 A 61
MAB18
0,29 A 0,37 A 52 0,69 A 0,79 A 42
Tabla 25: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,39 B 0,39 B 0,98 B 0,98 B
MAB15
0,46 A* 0,61 A 57 1,22 A 1,38 A 41
MAB17
0,46 A* 0,57 A 47 1,13 A* 1,32 A 34
MAB3_GA
0,38 B 0,56 A 45 0,97 B 1,38 A 40
Tabla 26: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI);); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], Normal condiciones
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,34 B 0,34 B 0,67 B 0,67 B
MAB6
0,32 B 0,41 A 19 0,60 B 0,74 B 0,60
Tabla 27: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 28-31 representan el análisis de la cobertura radicular en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Cobertura radicular [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
3,34 B 3,34 B 11,61 B 11,61 B
MAB18
3,31 B 4,78 A 43 10,66 B 13,30 B 14
Tabla 28; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
5,40 B 5,40 B
MAB100
5,05 B 7,06 A 31
Tabla 29: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
3,53 B 3,53 B 8,52 B 8,52 B
MAB18
4,17 A* 5,30 A 50 9,81 A* 12,89 A 51
MAB32
2,55 B 4,71 A 33 6,40 B 12,37 A 45
MAB35
3,73 B 4,59 A 30 8,55 B 11,12 A 30
MAB46
2,46 B 3,42 B -3 6,55 B 10,98 A 29
MAB146
2,33 B 3,95 B 12 7,05 B 10,86 A 28
Tabla 30: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
3,73 B 3,73 B 7,11 B 7,11 B
MAB6
3,63 B 4,94 A 33 6,30 B 8,00 B 13
Tabla 31: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 32-33 representan el análisis de la longitud radicular en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Longitud radicular [cm], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
5,89 5,89 B 6,82 B 6,82 B
MAB146
6,73 7,39 A 26 7,02 B 7,63 B 12
MAB10
5,45 8,07 A 37 5,83 B 8,18 B 20
Tabla 32: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular [cm], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
3,96 B 3,96 B 6,51 B 6,51 B
MAB18
5,07 A 5,70 A 44 7,08 A 8,03 A 23
MAB32
3,68 B 6,12 A 55 5,82 B 8,22 A 26
MAB35
4,58 A 5,76 A 46 6,77 B 7,75 A 19
MAB46
3,39 B 4,31 B 9 5,55 B 7,42 A 14
MAB146
3,14 B 4,82 A 22 5,47 B 7,48 A 15
Tabla 33: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 34-36 representan el análisis del área foliar RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Área foliar RGR [cm/día , condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,43 B 0,43 B 0,20 B 0,20 B
MAB15
0,79 A 1,25 A 189 0,21 B 0,27 B 36
MAB146
0,62 B 0,97 A 124 0,15 C 0,18 B -13
Tabla 34: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,73 B 0,73 B 0,21 B 0,21 B
MAB100
0,72 B 1,00 A 37 0,27 B 0,32 A 48
MABB134
0,85 B 0,92 B 27 0,31 A 0,37 A 75
MAB15
0,88 A* 1,24 A 70 0,28 B 0,33 A 56
MAB17
0,91 A 1,18 A 62 0,26 B 0,33 A 55
MAB3_GA
0,88 B 1,16 A 59 0,27 B 0,31 B 46
Tabla 35: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,92 B 0,29 B 0,29 B
MAB32
0,95 B 1,31 A 43 0,28 B 0,31 B 5
Tabla 36: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 37-41 representan el análisis de la cobertura radicular RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Cobertura radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
5,62 B 5,62 B 0,18 B 0,18 B
MAB10
7,69 B 15,10 A 168 0,08 B 0,14 B -20
MAB44
5,28 B 11,69 A 108 0,13 B 0,17 B -5
Tabla 37: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,23 B 0,23 B 0,40 B 0,40 B
MAB1
0,90 A 1,23 A 444 0,33 B 0,42 B 7
MAB15
1,06 A 1,65 A 628 0,34 B 0,42 B 6
MAB18
0,94 A 1,76 A 677 0,37 B 0,52 B 32
MAB35
0,56 B 1,00 A 342 0,38 B 0,41 B 3
MAB146
0,80 A 1,09 A 381 0,35 B 0,50 B 26
Tabla 38; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,64 B 1,64 B 0,12 B 0,12 B
MAB134
3,09 A 4,38 A 167 0,14 B 0,17 B 35
MAB13
2,47 A 2,82 A 72 0,11 B 0,13 B 6
MAB15
1,96 B 2,75 A 68 0,15 B 0,16 B 33
MAB17
2,09 B 3,09 A 89 0,15 B 0,20 A 60
Tabla 39: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
2,53 B 2,53 B 0,24 B 0,24 B
MAB35
1,66 B 4,14 A 63 0,29 B 0,54 A 123
MAB4
1,46 B 2,64 B 4 0,32 B 0,42 A 73
MAB146
0,62 B 0,95 B -63 0,41 A 0,75 A 207
Tabla 40: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,08 B 1,08 B 0,31 B 0,31 B
MAB137
1,36 B 2,03 A 88 0,26 B 0,31 B 1
MAB43
1,39 B 2,35 A 118 0,23 B 0,27 B -12
MAB50
1,57 A 1,98 A 83 0,27 B 0,30 B -3
MAB6
1,16 B 1,94 A 80 0,25 B 0,29 B -6
MAB99
1,48 A 2,63 A 144 0,21 B 0,27 B -13
Tabla 41: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 42-46 representan el análisis de la longitud radicular RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
5 Tabla 42
Longitud radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,07 B 1,07 B
MAB10
1,29 B 2,01 A 88
Tabla 42: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 43
Longitud radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,17 B 0,17 B
MAB1
0,26 A 0,34 A 93
MAB15
0,32 A 0,45 A 156
MAB17
0,24 A 0,28 A 61
MAB18
0,30 A 0,41 A 136
MAB146
0,26 A 0,34 A 93
Tabla 43: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,29 B 0,29 B 0,08 B 0,08 B
MAB100
0,36 B 0,39 B 31 0,08 B 0,13 A 67
MAB134
0,51 A 0,63 A 115 0,08 B 0,09 B 23
MAB13
0,50 A 0,61 A 107 0,08 B 0,09 B 19
MAB15
0,40 A 0,53 A 79 0,08 B 0,09 B 19
MAB17
0,38 A* 0,44 A 49 0,10 A 0,13 A 70
Tabla 44: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,11 B 0,11 B
MAB32
0,11 B 0,15 A 35
MAB35
0,11 B 0,20 A 76
MAB4
0,11 B 0,17 A 50
MAB146
0,15 A 0,19 A 71
Tabla 45: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); ); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], condiciones normales
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,31 B 0,31 B 0,12 B 0,12 B
MAB137
0,33 B 0,40 A 31 0,11 B 0,12 B -1
MAB43
0,33 B 0,44 A 41 0,11 B 0,12 B -2
MAB50
0,39 A 0,42 A 35 0,13 B 0,17 A 34
MAB6
0,30 B 0,41 A 33 0,12 B 0,18 A 41
Tabla 46: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
5
10
15
20
25
Las Tablas 47-48 representan el análisis del peso fresco de plantas en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones normales. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 47
Peso fresco de plantas [g], condiciones normales
ID de gen
Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,15 B 0,15 B
MAB15
0,24 A 0,28 A 93
MAB17
0,21 A 0,25 A 73
MAB18
0,22 A 0,29 A 101
Tabla 47: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 48
Peso fresco de plantas [g], condiciones normales
ID de gen
Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,20 B 0,20 B
MAB100
0,28 A* 0,33 A 62
MAB134
0,23 B 0,34 A 64
MAB13
0,31 A 0,35 A 73
MAB15
0,38 A 0,42 A 106
MAB17
0,37 A 0,53 A 159
MAB3_GA
0,28 A* 0,40 A 94
Tabla 48: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Ensayo 2: crecimiento de las plantas con deficiencia de nitrógeno, en condiciones de cultivo tisular - Los presentes inventores han encontrado que el ensayo EUN (eficiencia de la utilización de nitrógeno) es relevante para la evaluación de los genes de TEAB candidatos, puesto que una deficiencia de EUN promueve el alargamiento radicular, aumenta la cobertura radicular y permite detectar el potencial de la planta para generar un mejor sistema radicular en condiciones de sequía. Además, en la bibliografía (Wesley et al., 2002 Journal of Experiment Botany Vol. 53, N° 366, pp. 13-25) existen indicios de que están relacionados los mecanismos biológicos de la EUN y de la tolerancia a la sequía.
Se siembra semillas esterilizadas en la superficie en medio basal [medio Murashige-Skoog (MS) al 50% complementado con agar vegetal al 0,8% como agente solidificante] en presencia de kanamicina (para seleccionar solo plantas transgénicas). Después de sembrar, las placas se transfirieron durante 2-3 días a 4 °C para la estratificación y después crecieron a 25 °C con ciclos diarios de 12 horas de luz, 12 horas de oscuridad, durante 7 a 10 días. En este momento, las plantas de semillero elegidas al azar se transfieren cuidadosamente a placas que contienen condiciones limitantes de nitrógeno: medio MS 0,5 en el que la concentración de nitrógeno combinado (NH4NO3 y KNO3) es 0,75 mM (condiciones con déficit de nitrógeno) o a placas que contienen condiciones de nitrógeno normales: medio 0,5 MS en el que la concentración de nitrógeno combinado (NH4NO3 y KNO3) es 3 mM (concentración normal de nitrógeno). Todos los experimentos de cultivo tisular se cultivaron al mismo tiempo (EUN, PEG y normal). Los resultados del crecimiento en condiciones normales para EUN son los mismos que para PEG y se presentan en el ensayo 1. Cada placa contiene 5 plantas de semillero del mismo evento, y 3-4 placas diferentes (copias) para cada evento. Para cada polinucleótido de la invención se analizan al menos cuatro eventos de transformación
independientes de cada construcción. Las plantas que expresan los polinucleótidos de la invención se comparan con la medición promedio de las placas de control (GUI - que lleva el gen GUS bajo el mismo promotor) usadas en el mismo experimento.
Obtención de imágenes digitales y análisis estadístico - Se midieron y se analizaron los parámetros como se describe 5 en el Ensayo 1 anterior.
Resultados experimentales - Las secuencias de polinucleótidos de la invención se ensayaron para diversos rasgos deseados.
Las Tablas 49-53 representan análisis del área foliar en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un 10 experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados con la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Área foliar [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,45 B 0,45 B 0,41 B 0,41 B
MAB1
0,49 B 0,65 A 44 0,50 A 0,55 A 35
MAB10
0,46 B 0,62 A 38 0,51 A 0,69 A 68
MAB6
0,42 B 0,53 B 17 0,49 B 0,61 A 49
Tabla 49: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,23 B 0,23 B 0,41 B 0,41 B
MAB1
0,22 B 0,24 B 5 0,50 A 0,55 A 35
MAB15
0,25 B 0,32 A 43 0,51 A 0,69 A 68
MAB17
0,27 A 0,36 A 57 0,55 A 0,70 A 72
MAB18
0,30 A 0,36 A 57 0,59 A 0,73 A 80
MAB35
0,21 B 0,26 B 14 0,49 B 0,61 A 49
MAB146
0,26 B 0,28 B 23 0,55 A 0,60 A 48
Tabla 50: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,34 B 0,34 B
MAB17
0,32 B 0,44 A 31
MAB3_GA
0,32 B 0,44 A 31
Tabla 51: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,21 B 0,21 B 0,63 B 0,63 B
MAB18
0,23 B 0,31 A 50 0,58 B 0,77 A 22
MAB4
0,20 B 0,31 A 48 0,54 B 0,82 A 30
MAB146
0,21 B 0,29 A 41 0,48 C 0,59 B -6
Tabla 52: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,27 B 0,27 B 0,51 B 0,51 B
MAB43
0,25 B 0,35 A 29 0,47 B 0,60 B 18
MAB50
0,28 B 0,32 B 19 0,54 B 0,66 A 31
MAB6
0,28 B 0,35 A 28 0,54 B 0,69 A 35
MAB66
0,28 B 0,34 A 25 0,51 B 0,59 B 17
MAB99
0,27 B 0,35 A 28 0,51 B 0,59 B 16
Tabla 53: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 54-57 representan el análisis de la cobertura radicular en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Cobertura radicular [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
6,18 B 6,18 B 14,36 B 14,36 B
MAB1
7,33 B 8,56 A 39 13,18 B 16,22 B 13
MAB10
7,93 A 10,38 A 68 13,32 B 14,67 B 2
MAB25
5,83 B 6,93 B 12 11,12 A 13,90 B -3
MAB44
5,37 B 9,93 A 61 11,14 A 17,59 B 22
MAB6
6,88 B 9,31 A 51 12,79 B 15,66 B 9
Tabla 54: LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
4,04 B 4,04 B 12,24 B 12,24 B
MAB15
4,53 B 5,60 A 39 13,70 B 16,40 A 34
MAB17
4,15 B 4,85 B 20 13,16 B 15,06 A 23
MAB18
5,23 A 6,79 A 68 14,4 A 15,52 A 27
MAB35
4,03 B 4,90 B 21 13,95 B 15,62 A 28
MAB146
5,10 B 7,01 A 73 14,65 A 15,70 A 28
Tabla 55; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular [cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
3,14 B 3,14 B 10,88 B 10,88 B
MAB18
5,39 A 7,64 A 144 12,76 B 16,64 A 53
MAB32
3,58 B 7,13 A 127 9,79 B 16,22 A 49
MAB35
5,00 A 6,49 A 107 13,31 A 15,36 A 41
MAB4
4,16 B 7,34 A 134 12,00 B 16,52 A 52
MAB46
3,01 B 3,78 B 21 8,35 C 12,09 B 11
MAB146
4,22 B 7,34 A 134 11,48 B 14,98 A 38
Tabla 56; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular cmA2], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
465 B 4,56 B 9,81 B 9.81 B
MAB6
5,66 A 7,98 A 75 10,61 B 14.87 A 52
MAB66
5,83 A 6,58 A 44 10,31 B 11.49 B 17
Tabla 57; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 58-61 representan el análisis de la longitud radicular en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
5 Tabla 58
Longitud radicular [cm], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
6,31 B 6,31 B
MAB44
5,34 B 7,07 A 12
Tabla 58; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular [cm], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
4,55 B 4,55 B 7,23 B 7,23 B
MAB15
4,48 B 5,40 A 19 6,93 B 7,49 B 4
MAB18
4,61 B 5,48 A 20 7,59 B 7,86 B 9
MAB146
4,70 B 5,20 B 14 7,66 B 7,95 A 10
Tabla 59; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular [cm], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
3,61 B 3,61 B 6,15 B 6,15 B
MAB18
4,93 A 6,44 A 79 7,30 A 8,11 A 32
MAB32
4,02 B 6,48 A 80 6,53 B 8,51 A 38
MAB35
4,70 A 5,47 A 52 7,20 A 7,46 A 21
MAB4
4,06 A* 5,54 A 54 6,60 B 8,02 A 30
MAB146
3,77 B 5,54 A 54 6,09 B 7,19 A 17
Tabla 60; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular [cm], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
4,87 B 4,87 B
MAB66
5,27 B 5,74 A 18
Tabla 61; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 62-64 representan el análisis del área foliar RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma 5 letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Área foliar RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,46 B 0,46 B 0,12 B 0,12 B
MAB1
0,68 A 1,47 A 222 0,20 A 0,30 A 151
MAB17
0,43 B 0,50 B 8 0,17 B 0,29 A 145
MAB35
0,65 A 0,71 A 54 0,19 A 0,23 A 93
MAB146
0,55 B 0,80 A 75 0,16 B 0,20 B 66
Tabla 62; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,80 B 0,80 B
MAB18
0,87 B 1,24 A 56
MAB32
0,94 B 1,53 A 91
MAB35
0,96 B 1,21 A 51
MAB4
0,71 B 0,81 B 1
MAB46
0,64 B 0,75 B -7
MAB146
0,82 B 1,04 B 30
Tabla 63; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Área foliar RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,22 B 1,22 B 0,28 B 0,28 B
MAB137
2,12 B 5,12 A 319 0,29 B 0,35 B 25
MAB43
1,94 B 5,18 A 323 0,29 B 0,35 B 28
MAB50
1,15 B 1,76 B 44 0,32 B 0,41 A 50
Tabla 64; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 65-69 representan el análisis de la cobertura radicular RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gene. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B, C) son significativamente diferentes de los del control.
Cobertura radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
5,35 B 5,35 B 0,28 B 0,28 B
MAB25
7,38 B 11,62 A 117 0,19 C 0,26 B -6
MAB44
7,19 B 11,52 A 115 0,26 B 0,35 B 23
Tabla 65; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,43 B 0,43 B 0,30 B 0,30 B
MAB1
2,16 A 3,09 A 621 0,36 B 0,43 A 44
MAB15
1,55 A 2,81 A 555 0,30 B 0,33 B 9
MAB17
1,99 A 4,08 A 852 0,35 B 0,53 A 78
MAB18
1,44 A 1,90 A 343 0,29 B 0,36 B 19
MAB35
1,10 B 1,71 B 298 0,37 B 0,48 A 59
MAB146
2,16 A 4,03 A 841 0,30 B 0,41 A 38
Tabla 66; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
2,30 B 2,30 B
MAB100
2,85 B 4,02 A 74
MAB134
4,27 A 5,99 A 160
MAB13
3,95 A 4,84 A 110
MAB15
3,05 A* 3,97 A 73
MAB17
2,96 B 3,76 A 63
Tabla 67; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
2,28 B 2,28 B 0,44 B 0,44 B
MAB35
2,02 B 4,82 A 111 0,33 B 0,53 B 20
MAB4
1,80 B 2,90 B 27 0,40 B 0,63 A 42
Tabla 68; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Cobertura radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
1,60 B 1,60 B
MAB137
2,19 A 2,55 B 60
MAB43
2,00 B 2,75 A 72
MAB50
2,26 A 3,28 A 105
MAB6
2,45 A 2,96 A 85
MAB66
1,81 B 2,87 A 80
MAB99
2,25 A 3,73 A 133
Tabla 69; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 70-74 representan el análisis de la longitud radicular RGR en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados 5 por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Longitud radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,99 B 0.99 B 0,04 B 0,04 B
MAB44
1,10 B 1.64 A 65 0,06 B 0,09 A 108
Tabla 70; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,23 B 0,23 B 0,09 B 0,09 B
MAB1
0,46 A 0,58 A 148 0,12 A 0,14 A 58
MAB
0,43 A 0,58 A 148 0,08 B 0,10 B 16
MAB17
0,45 A 0,57 A 147 0,11 A 0,16 A 87
MAB18
0,41 A 0,44 A 89 0,10 B 0,13 A 45
MAB
0,31 B 0,37 A 59 0,10 B 0,13 A 51
Tabla 71; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,35 B 0,35 B 0,06 B 0,06 B
MAB100
0,46 A 0,61 A 73 0,08 B 0,11 A 80
MAB134
0,62 A 0,73 A 107 0,09 A 0,10 A 60
MAB13
0,69 A 0,84 A 140 0,08 B 0,11 A 66
MAB15
0,52 A 0,58 A 66 0,07 B 0,09 B 44
MAB17
0,52 A 0,64 A 81 0,08 B 0,09 A 44
MAB3_GA
0,44 B 0,51 A 46 0,07 B 0,09 B 38
Tabla 72; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,61 B 0,61 B 0,12 B 0,12 B
MAB35
0,52 B 0,91 A 48 0,10 B 0,16 B 29
MAB
0,53 B 0,65 B 6 0,12 B 0,19 A 52
MAB146
0,37 C 0,42 B -31 0,12 B 0,17 A 39
Tabla 73; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Longitud radicular RGR [cm/día], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 7 desde la plantación Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,36 B 0,36 B 0,11 B 0,11 B
MAB137
0,46 A 0,55 A 52 0,13 B 0,18 A 72
MAB43
0,41 B 0,53 A 47 0,12 B 0,14 B 30
MAB5
0,4 A 0,57 A 59 0,12 B 0,16 A 46
MAB6
0,53 A 0,64 A 79 0,10 B 0,12 B 9
MAB66
0,41 B 0,55 A 54 0,10 B 0,12 B 9
MAB99
0,47 A 0,62 A 74 0,10 B 0,13 B 19
Tabla 74; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
5
10
15
20
25
Las Tablas 75-76 representan el análisis del peso fresco de plantas en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669 en condiciones con déficit de nitrógeno. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 75
Peso fresco de plantas [g], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 14 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,15 B
MAB1
0,25 A 0,46 A 208
MAB6
0,20 B 0,29 A 95
Tabla 75; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 76
Peso fresco de plantas [g], EUN 0,75 mM
ID de gen
Día 10 desde la plantación
LSM Significancia* Mejor evento LSM Significancia* % de mejora del mejor evento
GUI
0,15 B
MAB137
0,18 A 0,19 A 31
MAB50
0,16 B 0,22 A 49
MAB6
0,16 B 0,22 A 52
MAB66
0,15 B 0,19 A 32
Tabla 76; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Ejemplo 7
TEAB mejorada en ensayos de invernadero
Tolerancia a EAB: Tasa de rendimiento y de crecimiento de las plantas a concentración de alta salinidad en condiciones de invernadero - Este ensayo obedece al crecimiento del área de la roseta de plantas que crecen en invernadero, así como al rendimiento de las semillas con riego de alta salinidad. Las semillas se sembraron en medio con agar complementado solo con un agente de selección (kanamicina) y disolución de Hoagland en condiciones de vivero. Las plantas de semillero transgénicas T2 se trasplantaron después en bandejas de 1,7 cargadas con turba y perlita. Las bandejas se regaron con agua corriente (proporcionada desde la base de las macetas). La mitad de las plantas se regó con una solución salina (NaCI 40-80 mM y CaCl2 5 mM) para inducir estrés por salinidad (condiciones de estrés). La otra mitad de las plantas continuó regándose con agua corriente (condiciones normales). Todas las plantas crecieron en el invernadero hasta que las plantas alcanzaron el estadio de semillas maduras, después se recogieron (el tejido por encima del suelo) y se pesaron (inmediatamente o después de secar en un horno a 50 °C durante 24 horas). Las condiciones de alta salinidad se logran regando con una disolución que contiene NaCI 40-80 mM (condiciones de crecimiento con "EAB") y se comparan con condiciones de crecimiento regulares.
Se analizó el tamaño, la tasa de crecimiento, el rendimiento de las semillas y el peso de 1.000 semillas, la materia seca y el índice de cosecha (IC - rendimiento de semilla/materia seca) global de las plantas. Se comparó el rendimiento de las plantas transgénicas con el de las plantas de control que crecían en paralelo en las mismas condiciones. Como control se usaron plantas transgénicas simuladas que expresaban el gen indicador uidA (GUS-intrón - GUI) bajo el mismo promotor.
El experimento se planifica en una distribución en parcelas aleatorizada anidada. Las condiciones de alta salinidad se logran regando con una disolución que contenía NaCI 40-80 mM (condiciones de crecimiento con "EAB").
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Obtención de imágenes digitales - Se usó un sistema de adquisición de imágenes de laboratorio, que consistía en una cámara réflex digital (Canon EOS 300D) acoplada a una lente de longitud focal de 55 mm (serie Canon EF-S), montada en un dispositivo reproductor (Kaiser RS), que incluía 4 unidades de luz (4x bombillas de luz de 150 vatios) para capturar imágenes de las plántulas.
El proceso de captura de imágenes se repitió cada 2-3 días comenzando el día 1 después de sembrar hasta el día 10. La misma cámara acoplada con una lente de longitud focal de 24 mm (serie Canon EF), colocada en un montaje de hierro fabricado a medida, se usó para capturar imágenes de plantas más grandes sembradas en macetones blancos en un invernadero con ambiente controlado (como se observa en las Figuras 2a-b). Los macetones, que eran cuadrados, incluían bandejas de 1,7 litros. Durante el proceso de captura, las bandejas se colocaron debajo del montaje de hierro, evitando la luz solar directa y la proyección de sombras. Este proceso se repitió cada 2-3 días durante hasta 10 días.
Se usó un sistema de análisis de imágenes, que consistía en un ordenador de escritorio personal (procesador lntel P4 3.0 GHz) y en un programa de dominio público - lmageJ 1.37 (programa de procesamiento de imágenes basado en Java que se desarrolló en el U.S. National lnstitutes of Health y gratuito en internet en el Protocolo de transferencia de hipertexto://rsbweb (.) nih (.) gov/). Las imágenes se capturaron en resolución de 6 megapíxeles (3072 x 2048 píxeles) y se almacenaron en un formato JPEG (grupo conjunto de expertos en fotografía) de baja compresión. A continuación, los datos analizados se guardaron en archivos de texto y se procesaron usando el software de análisis estadístico JMP (SAS Institute).
Análisis de los parámetros vegetativos - Usando los análisis digitales se calcularon los datos de las hojas, incluyendo el área foliar promedio, el diámetro de la roseta y el área de la roseta. La tasa de crecimiento relativo (TCR) de los parámetros de la roseta se calculó según la Fórmula I, como se describe en el Ejemplo 6. El día 80 desde la siembra, las plantas se recogieron y se dejaron secar a 30 °C en una cámara de secado. Se separó la biomasa y el peso de las semillas de cada parcela, se midió y se dividió entre el número de plantas. El peso seco es = peso total de la parte vegetativa por encima del suelo (excluyendo las raíces) después del secado a 30 °C en una cámara de secado; rendimiento de semilla por planta = peso de semilla total por planta (g).
Se determinó el peso de 1000 semillas de la siguiente manera: las semillas se diseminaron en una bandeja de vidrio y se hizo una foto. Se pesó cada muestra y después, usando el análisis digital, se calculó el número de semillas de cada muestra. Se calculó el peso de 1000 semillas usando la Fórmula II:
Fórmula II
Peso de 1000 semillas = número de semillas en la muestra / peso de la muestra X 1000 Índice de cosecha - El índice de cosecha se calculó usando la Fórmula III Fórmula MI;
Índice de cosecha = Rendimiento de semilla promedio por planta / peso seco promedio
Cada construcción se valida en su generación T2. Como control se usan plantas transgénicas que expresaban el gen indicador uidA (GUI) bajo el mismo promotor.
Análisis estadísticos - Para identificar genes que confieren tolerancia significativamente mejorada al estrés abiótico o una arquitectura radicular alargada, se comparan los resultados obtenidos de las plantas transgénicas con los obtenidos de las plantas de control. Para identificar los genes y las construcciones con comportamiento superior, se analizan por separado los resultados de los eventos de transformación independientes ensayados Además, también se analizan los genes y las construcciones teniendo en cuenta los resultados obtenidos de todos los eventos de transformación independientes ensayados en la construcción específica. Para los análisis de los genes frente a los controles, se aplicó la prueba de la t de Student, usando una significancia de P < 0,05 o de P < 0,1. Se usa el paquete de software estadístico JMP (Versión 5.2.1, SAS lnstitute lnc., Cary, NC, EE.UU.).
Resultados experimentales
Se ensayaron las secuencias de polinucleótidos de la invención para diversos rasgos deseados.
Las Tablas 77-86 representan el análisis del área de roseta en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,58 B 0,58 B
MAB20
0,59 B 0,84 A 43
MAB50
0,57 B 0,88 A 51
Tabla 77; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 78
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,27 B 1,27 B
MAB20
1,20 B 1,73 a 36
MAB50
1,21 B 2,04 a 61
Tabla 78; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 79
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
3,62 B 3,62 B
MAB20
3,97 B 5,18 A 43
MAB50
3,88 B 6,11 A 69
Tabla 79; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 80
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
7,22 B 7,22 B
MAB50
6,75 B 10,18 A 41
Tabla 80; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,63 B 1,63 B
MAB1
2,03 A 2,29 A 40
MAB6
1,34 B 2,40 A 47
Tabla 78; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 82
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,88 B 2,88 B
MAB1
3,41 A* 3,76 A 31
Tabla 82; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 83
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,73 B 0,73 B
MAB1
0,77 B 0,91 A 25
Tabla 83; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 84
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,41 B 1,41 B
MAB1
1,62 A* 2,02 A 44
MAB17
1,14 B 1,80 A 28
Tabla 84; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,37 B 2,37 B
MAB1
2,59 B 3,56 A 50
MAB13
2,45 B 3,44 A 45
MAB17
1,96 C 3,10 A 31
Tabla 85; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 86
ID de gen
Área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
4,67 B 4,67 B
MAB1
5,37 A* 7,93 A 70
MAB15
4,78 B 6,08 A 30
MAB17
4,02 B 6,19 A 32
MAB3_GA
4,39 B 6,07 A 30
Tabla 86; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 87-96 representan el análisis del diámetro de roseta en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 5 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 87
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,50 B 1,50 B
MAB50
1,35 B 1,80 A 20
Tabla 87; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,05 B 2,05 B
MAB50
1,82 C 2,44 A 19
Tabla 88; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 89
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
3,23 B 3,23 B
MAB50
3,16 B 4,12 A 27
Tabla 89; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 90
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
4,47 B 4,47 B
MAB50
4,20 B 5,31 A 19
Tabla 90; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 91
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,25 B 2,25 B
MAB1
2,60 A 2,78 A 23
Tabla 91; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,87 B 2,87 B
MAB1
3,27 A* 9,25 A 223
MAB20
2,63 B 9,69 A 238
MAB6
2,51 B 10,00 A 249
Tabla 92; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 93
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
4,90 B 4,90 B
MAB6
4,35 B 6,26 A 28
Tabla 93; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 94
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,05 B 2,05 B
MAB1
2,22 B 2,55 A 25
Tabla 94; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 95
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,56 B 2,56 B
MAB1
2,78 B 3,29 A 29
MAB3_GA
2,56 B 3,04 A 19
Tabla 95; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] NaCl 80 mM Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
3,52 B 3,52 B
MAB1
3,79 B 4,76 A 35
MAB17
3,24 B 4,14 A 17
MAB3_GA
3,44 B 4,12 A 17
Tabla 96; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 97-105 representan el análisis del área promedio foliar en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 5 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 97
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,10 B 0,10 B
MAB25
0,10 B 0,13 A 30
Tabla 97; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 98
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,16 B 0,16 B
MAB50
0,15 B 0,23 A 45
Tabla 98; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,45 B 0,45 B
MAB50
0,41 B 0,61 A 34
Tabla 99; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 100
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,74 B 0,74 B
MAB50
0,66 B 0,92 A 25
Tabla 100; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 101
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,20 B 0,20 B
MAB1
0,25 A 0,28 A 43
MAB6
0,18 B 0,30 A 51
MAB7
0,23 B 0,27 A 36
Tabla 101; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 102
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,69 B 0,69 B
MAB1
0,80 A* 0,86 A* 24
MAB20
0,62 B 0,87 A 25
MAB6
0,59 B 0,99 A 44
Tabla 102; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,20 B 0,20 B
MAB1
0,22 B 0,27 A 30
MAB17
- - 0,25 A 21
Tabla 103; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 104
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,28 B 0.28 B
MAB1
0,30 B 0.37 A 33
MAB17
0,24 B 0.34 A 22
Tabla 104; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 105
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,49 B 0,49 B
MAB1
0,55 B 0,76 A 53
MAB15
0,52 B 0,63 A 26
MAB17
0,45 B 0,64 A 28
Tabla 105; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 106-111 representan el análisis de la TCR del área de roseta [cmA2] de plantas que expresan en exceso 5 los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,73 B 0,73 B
MAB10
1,21 B 1,86 A 156
MAB14
1,31 B 1,80 A 149
MAB2
1,59 A 2,24 A 208
MAB20
1,87 A 2,33 A 221
MAB25
1,44 A 1,63 A* 125
MAB36
1,49 A 1,89 A 161
MAB43
1,73 A 3,85 A 430
MAB44
1,76 A 2,51 A 246
MAB50
1,37 A* 1,57 A* 117
MAB9
1,47 A 1,75 A 141
Tabla 106; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 107
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,61 B 0,61 B
MAB10
0,75 A* 0,91 A 50
MAB14
0,79 A 0,86 B 42
MAB19
0,78 A 0,85 A 41
MAB2
0,80 A 0,93 A 54
MAB20
0,79 A 0,98 A 61
MAB36
0,83 A 0,95 A 56
MAB44
0,75 A* 0,84 A 38
MAB50
0,76 A* 0,83 B 38
MAB6
0,82 A 0,99 A 64
MAB7
0,78 A 0,87 A 44
MAB9
0,77 A 0,84 A 38
Tabla 107; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,38 B 0,38 B
MAB6
0,37 B 0,51 A 33
Tabla 108; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 109
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,88 B 0,88 B
MAB18
0,99 A* 1,24 A 41
Tabla ; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 110
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,47 B 0,47 B
MAB1
0,55 A 0,64 A 38
MAB13
0,52 A 0,54 A* 16
MAB17
0,52 A 0,54 A* 17
MAB18
0,53 A 0,58 A 24
MAB3_GA
0,53 A 0,62 A 33
MAB32
0,52 A* 0,54 A* 17
MAB35
0,54 A 0,57 A 22
MAB4
0,51 A* 0,51 A* 10
MAB46
0,52 A* 0,55 A 19
MAB146
0,54 A 0,55 A 19
MAB99
0,53 A 0,57 A 23
Tabla 110; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,49 B 0,49 B
MAB1
0,53 B 0,62 A 27
MAB35
0,57 A* 0,59 A* 22
MAB46
0,55 B 0,63 A 30
Tabla; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 112-118 representan el análisis de la TCR del diámetro de roseta en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 5 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 112
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,28 B
MAB2
0,41 B 0,80 A 184
MAB43
0,46 B 0,83 A 195
MAB44
0,40 B 0,73 A 160
Tabla 112; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 113
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,19 B 0,19 B
MAB1
0,22 B 0,24 B 25
MAB10
0,25 A 0,29 A 49
MAB14
0,23 A 0,25 A 31
MAB19
0,24 A 0,26 A 37
MAB2
0,24 A 0,26 A 34
MAB20
0,25 A 0,29 A 52
MAB25
0,24 A 0,27 A 42
MAB36
0,25 A 0,28 A 45
MAB43
0,22 B 0,25 B 28
MAB50
0,25 A 0,28 A 46
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB6
0,24 A 0,27 A 41
MAB7
0,22 B 0,27 A 38
MAB9
0,23 A 0,26 A 34
Tabla 113; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 114
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,14 B 0,14 B
MAB10
0,14 B 0,31 A 122
MAB20
0,13 B 0,21 A 49
MAB25
0,15 B 0,33 A 138
MAB9
0,15 B 0,20 A 45
Tabla 114; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 115
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,21 B 0,21 B
MAB20
0,23 B 0,34 A 67
MAB9
0,22 B 0,44 A 114
Tabla 115; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 116
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,34 B 0,34 B
MAB18
0,37 B 0,46 A 35
MAB3_GA
0,34 B 0,43 A 26
MAB35
0,43 A 0,55 A 62
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB46
0,39 B 0,49 A 42
MAB99
0,34 B 0,43 A 26
Tabla 116; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 117
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,16 B 0,16 B
MAB1
0,22 A 0,26 A 66
MAB18
0,20 A* 0,23 A* 44
MAB46
0,25 A 0,45 A 185
MAB146
0,20 A* 0,22 A* 42
Tabla 117; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 118
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) NaCl 80 mM, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,08 B 0,08 B
MAB35
0,10 B 0,13 A 57
MAB46
0,10 B 0,14 A 64
MAB146
0,10 B 0,14 A 66
MAB99
0,10 B 0,13 A 56
Tabla 118; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 119-121 representan el análisis de la TCR del área promedio foliar [cmA2] en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento 5 independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 119
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,35 B 0,35 B
MAB14
0,34 B 0,63 A 82
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB25
0,44 B 0,83 A 137
MAB36
0,43 B 0,77 A 120
MAB6
0,24 B 0,70 A 102
Tabla 119; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 120
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,32 B 0,32 B
MAB10
0,32 B 0,56 A 74
Tabla 120; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 121
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,39 B 0,39 B
MAB13
0,41 B 0,57 A 49
MAB15
0,46 A* 0,54 A 40
MAB17
0,46 A* 0,50 A* 30
Tabla 121; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
La Tabla 122 representa análisis de la TCR del área promedio foliar [cmA2] en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento 5 independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 122
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] NaCl 80 mM, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,28 B 0,28 B
MAB2
0,41 B 0,80 A 184
MAB43
0,46 B 0,83 A 195
MAB44
0,40 B 0,73 A 160
Tabla 122; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
10
La Tabla 123 representa análisis del peso seco (PS) por parcela en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 123
ID de gen
Peso seco [g NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
4,00 B 4,00 B
MAB1
4,92 A 6,40 A 60
MAB134
4,35 B 5,35 A 34
MAB15
4,42 B 5,57 A 39
MAB18
4,52 B 5,35 A 34
MAB3_GA
4,53 B 5,47 A 37
Tabla 123; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 124-126 representan el análisis del peso de 1000 semillas en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 124
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,02 B 0,02 B
MAB14
0,02 B 0,03 A 32
MAB19
0,02 B 0,03 A 27
MAB2
0,02 B 0,03 A 24
MAB6
0,03 A 0,03 A 53
Tabla 124; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 125
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,02 B 0,02 B
MAB20
0,02 A* 0,02 A 17
MAB25
0,02 B 0,02 A 20
MAB6
0,02 A* 0,02 A 21
MAB7
0,02 B 0,02 A 21
MAB9
0,02 B 0,02 A 19
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
Tabla 125; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 126
Peso de 1000 semillas [g] NaCl 80 mM
LSM % de mejora del mejor evento Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,02 B 0,02 B
MAB100
0,02 B 0,02 A 28
MAB134
0,02 B 0,02 A 26
MAB17
0,02 B 0,02 A 23
MAB18
0,02 B 0,02 A 17
MAB32
0,02 B 0,02 A 13
MAB4
0,02 B 0,02 A 19
MAB46
0,02 B 0,02 A 18
MAB99
0,02 B 0,02 A 15
Tabla 126; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 127-129 representan el análisis del rendimiento de semillas por planta en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 5 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 127
ID de gen
Rendimiento de semillas por planta [g] NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,07 B 0,07 B
MAB44
0,11 B 0,22 A 210
MAB50
0,11 B 0,19 A 170
Tabla 127; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Rendimiento de semillas por Planta [g] NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,09 B 0,09 B
MAB6
0,11 A* 0,21 A 142
MAB9
0,09 B 0,14 A 59
Tabla 128; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 129
ID de gen
Rendimiento de semillas por Planta [g] NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,14 B 0,14 B
MAB1
0,19 A 0,33 A 139
MAB100
0,17 B 0,24 A 79
Tabla 129; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
La Tabla 130 representa análisis del índice de cosecha en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 5 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 130
ID de gen
Índice de cosecha NaCl 80 mM
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,11 B 0,11 B
MAB25
0,16 B 0,26 A 139
MAB44
0,20 A* 0,30 A 174
MAB7
0,12 B 0,29 A 172
Tabla 130; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 131-140 representan el análisis del área de roseta en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 10 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,37 B 1,37 B
MAB1
1,43 B 1,80 A 31
MAB9
1,32 B 1,74 A 27
Tabla 131; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 132
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
4,73 B 4,73 B
MAB1
4,95 B 6,45 A 36
Tabla 132; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 133
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
8,45 B 8,45 B
MAB1
8,87 B 11,11 A 31
Tabla 133; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 134
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,65 B 1,65 B
MAB1
2,09 A 2,27 A 37
MAB36
1,65 B 2,58 A 56
MAB7
1,83 B 2,81 A 70
Tabla 134; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,93 B 2,93 B
MAB1
3,60 A* 3,78 A* 29
MAB36
2,91 B 4,55 A 55
MAB7
3,14 B 4,69 A 60
Tabla 135; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 136
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
7,73 B 7,73 B
MAB1
9,77 A 10,58 A 37
MAB36
8,05 B 12,12 A 57
MAB7
8,69 B 12,82 A 66
Tabla 136; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 137
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,55 B 0,55 B
MAB1
0,58 B 0,81 A 47
MAB100
0,60 B 0,74 A 34
MAB15
0,65 A* 0,90 A 64
MAB17
0,55 B 0,85 A 55
Tabla 137; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,03 B 1,03 B
MAB1
1,17 B 1,54 A 49
MAB100
1,18 B 1,46 A 42
MAB15
1,23 A 1,67 A 62
MAB17
1,01 B 1,59 A 54
Tabla 138; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 139
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,09 B 2,09 B
MAB1
2,46 B 3,43 A 64
MAB100
2,29 B 2,81 A 34
MAB15
2,60 A 3,63 A 73
MAB17
2,06 B 3,35 A 60
Tabla 139; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 140
ID de gen
Área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
4,81 B 4,81 B
MAB1
5,57 A* 8,29 A 72
MAB15
5,72 A 8,05 A 67
MAB17
4,78 B 7,50 A 56
Tabla 140; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 141-148 representan el análisis del diámetro de roseta en plantas que expresan en exceso los 5 polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
3,52 B 3,52 B
MAB1
3,58 B 4,17 A 18
Tabla 141; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 142
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,28 B 2,28 B
MAB36
2,23 B 2,91 A 28
MAB7
2,47 B 3,11 A 36
Tabla 142; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 143
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,99 B 2,99 B
MAB7
3,24 B 4,08 A 36
Tabla 143; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 144
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
5,00 B 5,00 B
MAB1
5,65 A* 5,87 A* 17
MAB7
5,06 B 6,32 A 26
Tabla 144; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LS M Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,30 B 1,30 B
MAB15
1,48 A 1,69 A 30
MAB17
1,33 B 1,60 A 23
Tabla 145; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 146
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,87 B 1,87 B
MAB1
1,86 B 2,21 A 18
MAB15
1,96 B 2,29 A 22
MAB17
1,78 B 2,26 A 21
Tabla 146; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 147
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
2,49 B
MAB1
2,60 B 3,14 A 26
MAB15
2,64 B 3,17 A 27
MAB17
2,39 B 3,09 A 24
Tabla 147; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 148
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
3,49 B 3,49 B
MAB1
3,88 A* 4,81 A 38
MAB15
3,78 B 4,52 A 29
ID de gen
Diámetro de roseta [cm] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB17
3,53 B 4,45 A 27
Tabla 148; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 149-157 representan el análisis del área promedio foliar en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
5 Tabla 149
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,17 B 0,17 B
MAB1
0,17 B 0,21 A 27
Tabla 149; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 150
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,51 B 0,51 B
MAB1
0,52 B 0,69 A 35
Tabla 150; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 151
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,19 B 0,19 B
MAB1
0,25 A 0,27 A 38
MAB36
0,20 B 0,31 A 58
MAB7
0,23 A* 0,33 A 67
Tabla 151; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,32 B 0,32 B
MAB1
0,38 B 0,43 A 34
MAB36
0,32 B 0,46 A 43
MAB7
0,33 B 0,47 A 45
Tabla 152; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 153
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,69 B 0,69
MAB36
0,69 B 0,93 A 36
MAB7
0,79 B 1,17 A 71
Tabla 153; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 154
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,11 0,11 B
MAB1
0,12 B 0,15 A 28
MAB15
0,13 B 0,17 A 53
MAB17
0,11 B 0,15 A 34
Tabla 154; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 155
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,16 B 0,16 B
MAB1
0,17 B 0,21 A 26
MAB100
0,18 B 0,21 A 30
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB15
0,18 A* 0,23 A 39
MAB17
0,16 B 0,22 A 35
Tabla 155; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 156
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,24 B 0,24 B
MAB1
0,28 A* 0,37 A 50
MAB15
0,29 A* 0,37 A 53
MAB17
0,25 B 0,34 A 40
Tabla (GUI); LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 157
ID de gen
Área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,54 B 0,54 B
MAB1
0,57 B 0,80 A 49
MAB15
0,59 B 0,78 A 45
MAB17
0,51 B 0,74 A 37
Tabla 157; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 158-166 representan el análisis de la TCR del área de roseta [cmA2] de plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento 5 independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 158
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
1,73 B 1,73 B
MAB20
2,18 B 3,62 A 109
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB43
2,04 B 3,80 A 119
MAB50
2,25 B 3,81 A 120
Tabla 158; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 159
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,48 B 0,48 B
MAB2
0,58 A* 0,70 A 45
MAB43
0,62 A 0,75 A 56
MAB6
0,52 B 0,72 A 50
Tabla 159; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 160
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,84 B 0,84 B
MAB50
0,87 B 0,99 A 18
MAB6
0,87 B 1,06 A 26
Tabla 160; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 161
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,39 B 0,39 B
MAB10
0,44 B 0,54 A 37
MAB36
0,45 B 0,51 A 30
MAB50
0,45 A* 0,53 A 35
MAB6
0,44 B 0,60 A 51
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB7
0,43 B 0,50 A 27
Tabla 161; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 162
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,39 B 0,39 B
MAB20
0,38 B 0,50 A 28
MAB25
0,39 B 0,53 A 38
Tabla 162; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 163
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,55 B 0,55 B
MAB10
0,64 A* 0,71 A* 30
MAB2
0,63 A* 0,70 A 28
MAB20
0,63 A* 0,67 A* 21
MAB25
0,64 A 0,73 A 32
MAB44
0,65 A 0,77 A 41
MAB50
0,70 A 0,83 A 51
MAB6
0,63 A* 0,81 A 48
MAB7
0,61 B 0,73 A 34
MAB9
0,60 B 0,69 A 26
Tabla 163; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,45 B 0,45 B
MAB13
0,63 A 0,68 A* 49
MAB32
0,50 B 0,74 A 64
MAB46
0,52 B 0,75 A 65
MAB146
0,64 A 0,88 A 94
MAB99
0,52 B 0,73 A 61
Tabla 164; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 165
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,34 B 0,34 B
MAB1
0,36 B 0,45 A 31
MAB99
0,33 B 0,43 A 28
Tabla 165; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 166
ID de gen
TCR del área de roseta [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,66 B 0,66 B
MAB13
0,73 B 0,81 A 23
MAB3_GA
0,70 B 0,85 A 29
MAB32
0,70 B 0,86 A 31
MAB99
0,68 B 0,82 A 25
Tabla 166; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tablas 167-175 representan el análisis de la TCR del diámetro de roseta en plantas que expresan en exceso los 5 polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,43 B 0,43 B
MAB50
0,70 A* 1,50 A 251
MAB6
0,45 B 1,21 A 183
Tabla 167; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 168
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,16 B 0,16 B
MAB10
0,19 A* 0,21 A* 28
MAB19
0,20 A 0,23 A 45
MAB36
0,18 B 0,21 A 32
MAB50
0,17 B 0,23 A 42
MAB6
0,18 B 0,25 A 57
MAB7
0,18 B 0,24 A 52
Tabla 168; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 169
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,25 B 0,25 B
MAB10
0,28 A 0,30 A 19
MAB14
0,27 B 0,31 A 23
MAB19
0,28 A 0,32 A 29
MAB2
0,27 B 0,30 A 21
MAB20
0,27 B 0,29 A 18
MAB36
0,27 A* 0,32 A 28
MAB43
0,25 B 0,26 B 5
MAB44
0,26 B 0,30 A 21
MAB50
0,27 B 0,30 A 21
MAB7
0,28 A* 0,29 A 17
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB9
0,27 A* 0,30 A 20
Tabla 169; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 170
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,17 B 0,17 B
MAB19
0,19 A* 0,23 A 31
MAB2
0,20 A 0,23 A 32
MAB20
0,19 A 0,23 A 33
MAB43
0,19 B 0,21 A 24
MAB44
0,18 B 0,22 A 25
MAB50
0,20 A 0,23 A 32
MAB6
0,19 A* 0,24 A 42
MAB9
0,18 B 0,21 A 25
Tabla 170; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 171
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,16 B 0,16 B
MAB50
0,19 B 0,22 A 42
MAB6
0,15 B 0,24 A 49
Tabla 171; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 172
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,22 B 0,22 B
MAB2
0,26 A* 0,28 A 27
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB20
0,26 B 0,30 A 33
MAB25
0,26 A* 0,29 A* 31
MAB43
0,24 B 0,29 A 29
MAB44
0,25 B 0,29 A 31
Tabla 172; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 173
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 3 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,29 B 0,29 B
MAB100
0,37 A* 0,51 a 74
MAB13
0,38 A 0,58 A 95
MAB15
0,36 A 0,45 A 54
MAB18
0,36 A* 0,38 A* 28
MAB3_GA
0,43 A 0,60 A 105
MAB35
0,39 A 0,44 A 50
MAB46
0,31 B 0,49 A 65
MAB146
0,35 A 0,44 A 50
Tabla 173; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 174
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,11 B 0,11 B
MAB1
0,13 A* 0,16 A 49
MAB13
0,13 A* 0,16 A 41
MAB18
0,14 A 0,16 A 45
MAB32
0,13 B 0,15 A 39
MAB146
0,16 A 0,19 A 72
MAB99
0,12 B 0,15 A 40
Tabla 174; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
ID de gen
TCR del diámetro de roseta [cm]) Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,20 B 0,20 B
MAB1
0,25 A 0,27 A 30
MAB17
0,24 A 0,26 A* 25
MAB18
0,25 A 0,31 A 51
MAB35
0,25 A 0,28 A 36
MAB146
0,25 A 0,28 A 36
MAB99
0,24 A 0,29 A 44
Tabla 175; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 176-178 representan el análisis de la TCR del área promedio foliar [cmA2] en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 5 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 176
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,34 B 0,34 B
MAB10
0,35 B 0,52 A 56
MAB36
0,40 B 0,52 A 55
MAB7
0,37 B 0,50 A 49
Tabla 176; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI). Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 177
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,38 B 0,38 B
MAB10
0,47 A 0,51 A* 35
MAB2
0,41 B 0,49 A 29
MAB25
0,43 B 0,55 A 44
MAB50
0,47 A 0,53 A 41
MAB7
0,45 A* 0,50 A* 31
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 10 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB9
0,43 B 0,54 A 41
Tabla 177; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI). Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 178
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,23 B 0,23 B
MAB13
0,34 A* 0,39 A* 70
MAB146
0,35 A* 0,50 A 117
MAB99
0,26 B 0,44 A 89
Tabla 178; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI). Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 179-180 representan el análisis de la TCR del área promedio foliar [cmA2] en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 5 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 179
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 5 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,31 B 0,31 B
MAB19
0,35 B 0,48 A 56
MAB43
0,39 B 0,52 A 70
MAB6
0,28 B 0,50 A 62
Tabla 179; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 180
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,69 B 0,69 B
MAB14
0,72 B 0,92 A 32
ID de gen
TCR de la media (área promedio foliar [cmA2] Condiciones normales, Día 8 desde la plantación
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB6
0,69 B 0,96 A 38
Tabla 180; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 181-182 representan el análisis del peso seco (PS) por parcela en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
5 Tabla 181
ID de gen
Peso seco [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
7,75 B 7,75 B
MAB36
10,37 A* 13,21 A 71
Tabla 181; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 182
ID de gen
Peso seco [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
5,23 B 5,23 B
MAB1
6,81 A 8,09 A 55
MAB13
6,08 B 7,61 A 45
MAB18
6,10 B 8,18 A 56
MAB99
6,51 A* 8,42 A 61
Tabla 182; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 183-185 representan el análisis del peso de 1000 semillas en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del 10 control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 183
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,02 B 0,02 B
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
MAB19
0,02 B 0,03 A 23
MAB2
0,02 B 0,03 A 44
MAB20
0,02 A 0,04 A 71
MAB36
0,02 B 0,03 A 24
MAB50
0,02 B 0,03 A 32
MAB6
0,02 B 0,03 A 22
MAB9
0,02 A 0,02 A 19
Tabla 183; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 184
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,02 B 0,02 B
MAB20
0,02 A* 0,02 A 17
MAB6
0,02 A* 0,02 A 21
Tabla 184; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 185
ID de gen
Peso de 1000 semillas [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,02 B 0,02 B
MAB100
0,02 B 0,02 A 23
MAB17
0,02 A 0,03 A 33
MAB18
0,02 B 0,02 A 18
MAB35
0,02 B 0,02 A 28
MAB46
0,02 A 0,02 A 21
MAB99
0,02 A 0,03 A 37
Tabla 185; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Las Tablas 186-187 representan el análisis del rendimiento de semillas por planta en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento 5 independiente, usando 4 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
ID de gen
Rendimiento de semillas por planta [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,38 B 0,38 B
MAB1
0,50 B 0,61 A 61
MAB10
0,46 B 0,59 A 53
MAB14
0,50 A* 0,60 A 57
MAB36
0,52 A 0,68 A 77
MAB50
0,46 B 0,60 A 56
Tabla 186; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Tabla 187
ID de gen
Rendimiento de semillas por Planta [g] Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,32 B 0,32 B
MAB1
0,41 A* 0,49 A 53
MAB13
0,43 A 0,55 A 69
MAB18
0,39 B 0,49 A 53
MAB32
0,41 B 0,50 A 56
MAB35
0,41 A* 0,50 A 57
MAB99
0,41 A* 0,51 A 57
Tabla 187; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporciona en la Tabla 3 anterior.
La Tabla 188 representa análisis de la Índice de cosecha en plantas que expresan en exceso los polinucleótidos de la invención bajo la regulación del promotor 6669. Cada tabla representa un experimento independiente, usando 4 5 eventos independientes por gen. Los genes no relacionados por la misma letra que la del control (A, B) son significativamente diferentes de los del control.
Tabla 188
ID de gen
Índice de cosecha Condiciones normales
LSM Significancia Mejor evento LSM Significancia % de mejora del mejor evento
GUI
0,48 B 0,48 B
MAB17
0,46 B 0,62 A 28
Tabla 188; LSM = Media de mínimos cuadrados; % de mejora = en comparación con el control (GUI); A significa diferencia significativa a P < 0,05, A* significa diferencia significativa a P < 0,1. Las SEQ ID NO de los genes clonados (según el ID de gen) que se expresan exógenamente en las plantas se proporcionan en la Tabla 3 anterior.
Ejemplo 8
Transformación de plantas de tomate mb2 con supuestos genes de teab
Para la transformación del tomate, semillas M82 de tomate se esterilizaron previamente con hipocloruro de sodio al 3% + 2-3 gotas de Tween 20 (Polisorbato 20). Las semillas se lavaron 3 veces con agua destilada estéril. Entonces, 5 las semillas germinaron en medio de Nitsch al 100% y germinaron durante 8 días en una sala de cultivo a 25 °C en la oscuridad. Entonces, las plántulas se cortaron con un tallo de 2-4 cm y se insertaron en placas de Petri de 10 cm que se cargaron con 30-40 mL de medio líquido MS. Entonces, los cotiledones se cortaron y se usaron como explantes y posteriormente se transfirieron a medio solidificado KCMS con acetosiringona 100 pM en una placa de Petri de 10 cm. Los explantes se inocularon con A. tumefaciens durante 30-50 minutos. Los explantes se co-cultivaron durante 24 10 horas y se transfirieron a medio de regeneración que incluía kanamicina como medio de selección. Las plántulas resistentes regeneradas se transfirieron entonces a un medio de enraizamiento durante 10-14 días hasta la aparición de las raíces.
Ejemplo 9
Crecimiento de plantas de tomate mb2 transformadas y caracterizaciones fenotípicas 15 Procedimientos experimentales
Producción de plantas de tomate transgénicas - Las plantas se transformaron como se ha descrito en el Ejemplo 8, anterior. Tras la transformación, las plantas de tomate T1 M82 se cultivaron hasta el establecimiento del fruto. Las semillas T2 se han introducido en experimentos para evaluar la resistencia al estrés abiótico.
Resultados experimentales
20 Ensayo 1 - Ensayo de campo en tomate con regímenes de déficit hídrico y regular - Se planeó un ensayo de campo en tomate como un sistema de riego por goteo de una fuente (RGUF) similar al de un campo agrícola convencional. Puesto que la deficiencia de agua se aplica de una manera relativamente uniforme, permite medir el efecto de la sequía en poblaciones de plantas de pequeño tamaño. El método RGUF se desarrolló basándose en a un sistema de riego por aspersión de fuente en línea (Hanks et al. 1976 Soil Sci. Soc Am. J. 40 p. 426-429) con algunas 25 modificaciones significativas. En lugar de riego por aspersión, se usó riego por goteo. Con el fin de crear una capa húmeda uniforme y profunda (al menos 60 cm de profundidad), y no la capa en forma de cebolla que se crea normalmente mediante riego por goteo, se usó un sistema de riego por goteo con compensación de baja presión. Este sistema permite suministrar pequeñas cantidades de agua en un intervalo de tiempo relativamente largo. El ensayo de campo de estrés por sequía se realizó en un suelo iluminado, en un campo abierto (casa de malla) cerca de 30 Rehovot, Israel. Se evaluaron entre 4 y 5 eventos por cada gen y se usaron poblaciones de segregación nula como controles negativos. Durante las tres primeras semanas, todas las plantas se cultivaron en un vivero en condiciones de riego normales. Después de este periodo, las plantas se trasplantaron según un protocolo de cultivo comercial, que mantenía una distancia de 30 cm entre las plantas alcanzando una densidad total de 2.600 plantas por 1000 m2 (la densidad recomendada en el crecimiento comercial). Cada planta se trasplantó cerca de un gotero de riego de agua 35 y se sometió adicionalmente a dos tratamientos diferentes:
Óptimo (100%): condiciones de riego óptimas (100%). El riego se aplicó cada 2 días como un suministro de agua estándar recomendado. El suministro de agua estándar recomendado es la cantidad aplicada por los agricultores comerciales locales según protocolos estándar.
Estrés grave (50%): Una vez al día se aplicó el 50% de la cantidad de riego de agua óptima (al mismo tiempo que se 40 aplicaba el riego regular).
Todos los fertilizantes se aplicaron según los protocolos estándar locales. El nitrógeno se aplicó del mismo modo, según se recomienda, a todos los tratamientos a través del sistema de riego. Cada hilera, de 193 cm de anchura, contenía dos líneas de riego por goteo creando una cobertura de seis goteros por 1 m2. El control del riego se realizó individualmente para cada tratamiento. El experimento se estructuró en un diseño de cuatro bloques distribuidos al 45 azar, ocho plantas por parcela. Los diferentes regímenes hídricos comenzaron al cabo de tan solo cuatro semanas del trasplante de los árboles, cuando las plantas comenzaban la fase de floración. La disponibilidad hídrica en el suelo se registró usando tensiómetros (usados para determinar el potencial hídrico matricial ^m que permite evaluar la gravedad del estrés).
Ensayo 2 - Experimento de baño salino en el tomate - Se siembran semillas de tomate transgénicas en bandejas que 50 contienen medio de cultivo desnitrificado. Las plantas de semillero germinan en condiciones de vivero. El modelo experimental usado fue 3 bloques distribuidos al azar, donde en cada bloque se siembra 10 plantas por evento. En la fase de primera hoja verdadera, las bandejas se transfieren a diferentes "tanques" que contienen disolución de cultivo de NaCI 300 mM. Para el tratamiento normal, se aplica una disolución completa de Hoagland. Se evalúan 5 eventos para cada gen, mientras que como controles negativos se usan poblaciones segregantes anuladas. El experimento se 55 realiza durante un periodo de 8 semanas, donde se miden parámetros tales como el contenido de clorofila (medido como unidades de SPAD) y la biomasa vegetal (PF y PS).
5
10
15
20
25
Referencias citadas
(Se han citado anteriormente en este documento referencias adicionales)
1. World Wide Web (.) fao (.) org/ag/agl/agll/spush/degrad (.) htm.
2. World Wide Web (.) fao (.) org/ag/agl/aglw/watermanagement/introduc (.) stm.
3. McCue KF, Hanson AD (1990). Drought and salt tolerance: towards understanding and application. TrendsBiotechnol8:358-362.
4. Flowers TJ, Yeo Ar (1995). Breeding for salinity resistance in crop plants: where next? Aust J Plant Physiol 22:875- 884.
5. Nguyen BD, Brar DS, Bui BC, Nguyen TV, Pham LN, Nguyen HT (2003). Identification and mapping of the QTL for aluminum tolerance introgressed from the new source, ORYZA RUFIPOGON Griff., into indica rice (Oryza sativa L.). TheorAppl Genet. 106:583-93.
6. Sanchez AC, Subudhi PK, Rosenow DT, Nguyen HT (2002). Mapping QTLs associated with drought resistance in sorghum (Sorghum bicolor L. Moench). Plant Mol Biol.48:713-26.
7. Quesada V, Garcia-Martinez S, Piqueras P, Ponce MR, Micol JL (2002). Genetic architecture of NaCl tolerance in Arabidopsis. Plant Physiol.130:951-963.
8. Apse MP, Blumwald E (2002). Engineering salt tolerance in plants. CurrOpinBiotechnol.13:146-150.
9. Rontein D, Basset G, Hanson AD (2002). Metabolic engineering of osmoprotectant accumulation in plants. MetabEng4:49-56
10. Clough SJ, Bent AF (1998). Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. PlantJ16:735-43.
11. Desfeux C, Clough SJ, Bent AF (2000). Female reproductive tissues are the primary target of Agrobacterium- mediated transformation by the Arabidopsis floral-dip method. Plant Physiol123:895-904.
Contenido en CD-ROM
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Claims (8)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    REIVINDICACIONES
    1. Un método de aumento de biomasa, tasa de crecimiento, rendimiento de semillas y/o tolerancia al estrés por salinidad de una planta en comparación con una planta no transformada de la misma especie que se cultiva en las mismas condiciones de cultivo, comprendiendo el método expresar en exceso dentro de la planta un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 80% homóloga a la secuencia de aminoácidos expuesta por SEQ ID NO: 219,
    aumentando así la biomasa, tasa de crecimiento, rendimiento de semillas y/o tolerancia al estrés por salinidad de la planta en comparación con la planta no transformada de la misma especie que se cultiva en las mismas condiciones de crecimiento.
  2. 2. El método de la reivindicación 1, que comprende además seleccionar la progenie de la micropropagación de dicha planta que expresa dicho polinucleótido exógeno para tolerancia al estrés por salinidad, crecimiento, biomasa y/o rendimiento de semillas superiores en comparación con la planta no transformada de la misma especie que se cultiva en las mismas condiciones de crecimiento.
  3. 3. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicha secuencia de aminoácidos es al menos 87% homóloga al aminoácido expuesto por SEQ ID NO: 219.
  4. 4. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicha secuencia de aminoácidos es al menos 92% homóloga al aminoácido expuesto por SEQ ID NO: 219.
  5. 5. El método de la reivindicación 1 o 2, en donde dicha secuencia de aminoácidos es al menos 96% homóloga al aminoácido expuesto por SEQ ID NO: 219.
  6. 6. El método de la reivindicación 1, en donde dicho polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos expuesta por SEQ ID NO: 219.
  7. 7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde dicha secuencia de ácidos nucleicos se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1538, 23, 24 y 1539.
  8. 8. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que comprende además cultivar la planta que expresa dicho polinucleótido exógeno bajo estrés por salinidad.
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