CN102037127A - 多核苷酸及其编码的多肽和用于在表达所述多核苷酸、多肽的植物中用所述多核苷酸、多肽提高非生物胁迫耐受性和/或生物量和/或产量的方法 - Google Patents

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Abstract

提供提高植物对非生物胁迫的耐受性和/或提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量的方法。所述方法通过在植物内表达编码多肽的外源多核苷酸来实现，其中所述多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。还提供可用于提高植物对非生物胁迫的耐受性和/或提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量的多核苷酸、核酸构建体、多肽及表达所述多核苷酸、多肽的转基因植物。

Description

多核苷酸及其编码的多肽和用于在表达所述多核苷酸、多肽的植物中用所述多核苷酸、多肽提高非生物胁迫耐受性和/或生物量和/或产量的方法
发明领域和背景
本发明在其某些实施方案中涉及分离的多肽和多核苷酸，更特别涉及但并非仅涉及用于用所述多肽和多核苷酸提高植物对非生物胁迫的耐受性、植物生长、生物量、活力和/或产量的方法。
非生物胁迫(ABS；也称为“环境胁迫”)条件例如咸度、干旱、洪涝、亚适温和有毒化学污染，对农作物产生相当大的损害。大部分植物进化出保护自身应对这些条件的策略。然而，如果胁迫条件的严重程度和持续时间太过，则对植物发育、生长和产量的影响是深远的。此外，大部分农作物极易受ABS影响，因此对于商业农作物产量而言，最佳生长条件成为必要。持续暴露在胁迫之中引起植物代谢的严重改变，这种改变最终导致细胞死亡并因此减产。因此，尽管进行了广泛的研究并采取了强烈的保护农作物的措施，由于非生物胁迫条件而引起的损失仍以每年数十亿美元计。
干旱是一种渐进现象，其涉及反常的干旱天气时期，此期持续之长足以产生严重的水失衡，例如农作物损坏及水供应短缺。在严重情况下，干旱可持续多年，对农业和水供应产生毁灭性影响。由于急剧增长的人口和长期缺乏可用淡水，干旱不仅是农业上与气候有关的头等问题，而且一直也列为主要自然灾害之一，其不仅引起经济损失(例如1988年的美国干旱损失超过四百亿美元)，而且还引起人的生命丧失，例如1984-1985非洲之角的干旱引起的饥荒饿死了750,000人。此外，干旱与对各种疾病的易感性增加有关。
对于大部分农作物来说，世界上的陆地都太干旱了。另外，过度使用可用水导致增加丧失农业上可用的陆地(沙漠化)，土壤中盐积聚增长增加了土壤中可用水的丢失。
咸度，即高盐水平，影响五分之一公顷浇灌土地。这种情形预期只能更糟，将进一步降低可耕地的可用性和农作物生产，因为排在前五种的粮食作物(即小麦、玉米、水稻、马铃薯和大豆)没有一种能耐受过量的盐。盐对植物的有害影响起因于导致渗压胁迫(与干旱胁迫相似)的缺水和过量钠离子对关键生化过程的影响二者。和冰冻及干旱的情况一样，高盐也导致水分亏缺；高盐的存在使得植物根难于从其环境中吸取水分。因此，土壤咸度是决定植物能否茁壮成长的更为重要的变量之一。在世界的很多地方，相当大的陆地面积由于天然的土壤高盐而不能耕种。因此，用于农业生产的土壤的盐化在主要依赖农业的地区是显著且越来越严重的问题，这一情况由于过度耕种、施肥过多及通常因气候变化和日益增加的人口需求而引起的缺水而更加恶化。在植物生活周期的早期耐受盐尤其重要，因为土壤表面的蒸发引起水向上移动并在种植种子的上部土壤层积聚盐。另一方面，发芽通常发生在高于全体土壤层中平均盐水平的盐浓度下。
很多农作物的发芽对温度敏感。在热条件下可提高发芽的基因可用于在季节晚期或在热带气候种植的植物。另外，当蒸腾作用不足以应对热胁迫时，暴露于过度热量中的幼苗及成熟植株可能经历热休克，这可在多种器官中出现，包括叶和尤其是果实。热还损伤包括细胞器和细胞骨架在内的细胞结构，并削弱膜的功能。热休克可引起总蛋白质合成降低，其伴随热休克蛋白例如伴侣蛋白(chaperone)的表达，这些蛋白参与热变性蛋白的再折叠。
热胁迫通常伴随低可用水条件。热本身被认为是与水分亏缺条件互相影响的胁迫，并增加水分亏缺条件引起的有害作用。水蒸发需求随日间温度增加表现出接近指数增加，并可导致蒸腾率高及植物水势低。高温对花粉的损伤几乎总是与干旱胁迫一起发生，很少在水条件良好的情况下发生。混合胁迫可以新的方式改变植物代谢；因此，理解不同胁迫间的相互作用对于开发通过遗传操作提高胁迫耐受性的策略很重要。
过分寒冷的条件(例如低温但在冻结温度之上)影响热带来源的农作物，例如大豆、水稻、玉米和棉花。典型的低温冷害包括萎蔫、坏死、黄萎或离子从细胞膜渗漏。寒冷敏感性的基础机制尚未完全理解，但很可能涉及膜饱和水平及其它生理缺陷。例如，光合作用的光抑制(由于高光强导致的光合作用中断)通常在凉寒的夏末/秋天的夜晚之后的清澈空气条件下发生。另外，寒冷可通过延迟玉米成熟而导致产量损失及产物质量低劣。
水分亏缺是很多植物胁迫的常见组成部分。当整个植物的蒸腾率超过水摄入时，在植物细胞中发生水分亏缺。除干旱外，还有其它胁迫(例如咸度和低温)使得细胞脱水。
盐胁迫和干旱胁迫的信号转导由离子及渗透稳态信号传导途径组成。盐胁迫的离子方面经由SOS途径转导信号，在该途径中钙应答性SOS3-SOS2蛋白激酶复合物控制离子转运蛋白例如SOS1的表达及活性。盐胁迫的渗透组分涉及与干旱和/或冷胁迫应答重叠的复杂的植物反应。
干旱、寒冷和盐胁迫应答的常见方面[综述于Xiong和Zhu(2002)Plant Cell Environ.25：131-139]包括：(a)在信号传导事件早期细胞质钙水平瞬时变化[Knight，(2000)Int.Rev.Cytol.195：269-324；Sanders等(1999)Plant Cell 11：691-706]；(b)经由促***原活化的和/或钙依赖性蛋白激酶(CDPK)及蛋白磷酸酶的信号转换[Merlot等(2001)Plant J.25：295-303；Tahtiharju和Palva(2001)Plant J.26：461-470]；(c)因响应胁迫而提高的脱落酸水平触发了一个亚组的应答；(d)作为信号分子的肌醇磷酸(至少对于一个亚组的胁迫应答性转录变化而言[Xiong等(2001)Genes Dev.15：1971-1984]；(e)磷脂酶活化，进而产生一批不同的第二信使分子，其中某些信使分子可能调控胁迫应答性激酶的活性[例如磷脂酶D；Frank等(2000)Plant Cell 12：111-124]；(f)诱导胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA)型基因，所述基因包括CRT/DRE应答性COR/RD基因；(g)抗氧化剂及相容的渗压剂(osmolyte)(例如脯氨酸和可溶性糖)的水平提高[Hasegawa等(2000)Annu.Rev.Plant Mol.Plant Physiol.51：463-499)]；和(h)积聚活性氧物质，例如超氧化物、过氧化氢和羟基自由基。
渗压胁迫以多个步骤调节脱落酸生物合成。ABA依赖性及非ABA依赖性的渗压胁迫信号转导首先都改变组成型表达的转录因子，这导致早期应答转录激活蛋白表达，然后所述激活蛋白激活下游胁迫耐受性效应基因。
提高对寒冷或盐胁迫的耐受性的几种基因还可改进干旱胁迫保护，这些基因包括例如转录因子AtCBF/DREB1、OsCDPK7(Saijo等2000，Plant J.23：319-327)或AVP1(液泡焦磷酸酶-质子泵，Gaxiola等2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98：11444-11449)。
开发耐受胁迫的植物是有可能解决或调停至少某些这类问题的策略。然而，用于开发对ABS表现耐受性的植物新品系的传统的植物育种策略效率相对低，因为它们冗长耗时且不能预测结果。此外，用于胁迫耐受性的种质资源有限以及远缘植物种间杂交中的不相容性是在常规育种中遇到的重要的问题。另外，导致ABS耐受性的细胞过程本质上很复杂，涉及多种细胞适应机制和众多代谢途径。
本领域业已阐述目标为赋予转基因作物非生物胁迫耐受性的遗传工程的成就。Apse和Blumwald(Curr Opin Biotechnol.13：146-150，2002)、Quesada等(Plant Physiol.130：951-963，2002)、等(Nature 379：683-684，1996)、Xu等(Plant Physiol 110：249-257，1996)、Pilon-Smits和Ebskamp(Plant Physiol 107：125-130，1995)和Tarczynski等(Science 259：508-510，1993)的研究皆尝试产生胁迫耐受性植物。
另外，一些美国专利和专利申请也阐述与胁迫耐受性有关的多核苷酸及其在产生胁迫耐受植物中的应用。美国专利第5,296,462号和第5,356,816号阐述了用拟南芥(Arabidopsis thaliana)中编码涉及冷适应的蛋白质的多核苷酸转化植物，以提高耐寒性。
美国专利第6,670,528号阐述了用编码结合胁迫应答元件的多肽的多核苷酸转化植物，以提高非生物胁迫耐受性。
美国专利第6,720,477号阐述了用编码能够提高转化植物非生物胁迫耐受性的信号转导胁迫相关蛋白的多核苷酸转化植物。
美国申请顺序号09/938842和10/342224阐述了非生物胁迫相关基因及其用于赋予植物对非生物胁迫的耐受性的应用。
美国申请顺序号10/231035阐述了在植物中过表达钼辅因子硫化酶，以提高非生物胁迫耐受性。
Evogene Ltd.的WO2004/104162教导了多核苷酸序列及应用所述多核苷酸序列提高植物对非生物胁迫的耐受性和/或提高植物的生物量的方法。
Evogene Ltd.的WO2007/020638教导了多核苷酸序列及应用所述多核苷酸序列提高植物对非生物胁迫的耐受性和/或提高植物的生物量、活力和/或产量的方法。
Evogene Ltd.的WO2007/049275教导了用于提高植物对非生物胁迫的耐受性和/或用于提高植物的生物量、活力和/或产量的分离的多肽、编码所述多肽的多核苷酸。
另外的背景技术包括美国专利申请第20060183137A1 A1号和第20030056249A1号。
发明概述
本发明某些实施方案方面提供提高植物对非生物胁迫的耐受性的方法，所述方法包括在植物内表达外源多核苷酸，藉此提高植物对非生物胁迫的耐受性，其中所述外源多核苷酸编码包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供提高植物对非生物胁迫的耐受性的方法，所述方法包括在植物内表达外源多核苷酸，藉此提高植物对非生物胁迫的耐受性，其中所述外源多核苷酸编码包含选自以下氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量的方法，所述方法包括在植物内表达外源多核苷酸，藉此提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量，其中所述外源多核苷酸编码包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量的方法，所述方法包括在植物内表达外源多核苷酸，藉此提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量，其中所述外源多核苷酸编码包含选自以下的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含与选自以下的核酸序列至少有90％同一性的核酸序列：SEQ IDNO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
本发明某些实施方案方面提供分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含选自以下的核酸序列：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
本发明某些实施方案方面提供核酸构建体，所述核酸构建体包含所述分离的多核苷酸和用于指导所述核酸序列转录的启动子。
本发明某些实施方案方面提供分离的多肽，所述多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供分离的多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供植物细胞，所述植物细胞包含外源多肽，所述外源多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供植物细胞，所述植物细胞包含外源多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本发明某些实施方案方面提供植物细胞，所述植物细胞包含外源多核苷酸，所述外源多核苷酸包含与选自以下的核酸序列至少90％同源的核酸序列：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
本发明某些实施方案方面提供植物细胞，所述植物细胞包含外源多核苷酸，所述多核苷酸包含选自以下的核酸序列：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
根据本发明某些实施方案，所述核酸序列选自：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
根据本发明某些实施方案，所述多核苷酸选自：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
根据本发明某些实施方案，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
根据本发明某些实施方案，所述多肽选自SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
根据本发明某些实施方案，所述植物细胞形成植物的部分。
根据本发明某些实施方案，所述非生物胁迫选自咸度、干旱、脱水、低温、高温、重金属毒性、缺氧(anaerobiosis)、营养缺乏、营养过剩、大气污染和UV辐射。
根据本发明某些实施方案，所述方法进一步包括培养在非生物胁迫下表达外源多核苷酸的植物。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和/或科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的一样的含义。尽管在实施或试验本发明实施方案中可使用与本文所述相似或等同的方法及材料，但下面阐述例示性方法和/或材料。在有冲突的情况下，将以本专利说明书(包括定义)为准。另外，所述材料、方法和实施例仅为阐明性的，并非必定为限制性的。
附图简述
本文通过举例并参考附图阐述了本发明的某些实施方案。现在特别详细地提及附图，要强调的是所示细节仅作为实例，用于说明性地论述本发明的实施方案。在该方面，说明书并结合附图使得本领域技术人员明白本发明实施方案可如何实施。
在附图中：
图1示意性阐明用于表达本发明分离的多核苷酸序列的pGI二元质粒。RB-T-DNA的右边界；LB-T-DNA的左边界；H-HindIII限制酶；X-XbaI限制酶；B-BamHI限制酶；S-SalI限制酶；Sm-SmaI限制酶；R-I-EcoRI限制酶；Sc-SacI/SstI/Ecl136II；(数字)-碱基对长度；NOS pro＝胭脂氨酸合酶启动子；NPT-II＝新霉素(neomycin)磷酸转移酶基因；NOS ter＝胭脂氨酸合酶终止子；Poly-A信号(聚腺苷酸化信号)；GUSintron-GUS报告基因(编码序列和内含子)。将本发明分离的多核苷酸序列克隆到载体，同时取代GUSintron报告基因。
图2a-b为描述显现在透明的琼脂板中生长的植物根发育的图像。不同的转基因在透明琼脂板中生长17天，在第7天开始每2天给琼脂板照相。图2a-在琼脂板上12天后所摄的植物照片图像。图2b-根分析图象，其中所测量的根长由红色箭头表示。
发明详述
本发明在其某些实施方案中涉及分离的多肽和编码所述多肽的多核苷酸，更特别涉及但并非仅涉及用所述多肽和多核苷酸提高对非生物胁迫的耐受性、植物的生长率、产量、生物量和/或活力的方法。
在详细阐明至少一个本发明实施方案之前，应该理解，本发明在其应用方面不一定限制在以下说明所提出的或通过实施例所例证的详细资料。本发明可以是其它实施方案，或可以通过多种方式来实行或实施。
在实施本发明时，本发明人业已鉴定了新的多肽及多核苷酸，它们可用于提高对非生物胁迫的耐受性并改进植物的生长率、生物量、产量和/或活力。
因此，如以下实施例部分所示，本发明人采用生物信息学方法并鉴定了可提高对非生物胁迫的耐受性及改进生长、生物量、产量和活力的多核苷酸及多肽(对于多核苷酸为SEQ ID NO：1-200及1653；对于多肽为SEQ ID NO：201-391及1655；实施例1表1)，所述生物信息学方法联合来自拟南芥、水稻和其它公开获得的植物基因组数据库、表达序列标签(EST)、蛋白质和途径数据库及具有数字表达谱(digitalexpression profile)(“电子RNA印迹”)的QTL信息的序列聚类(clustering)及拼接(assembly)。通过比对直向同源物序列和数字表达谱，鉴定了来自单子叶物种的推定的ABST直向同源物(对多核苷酸为SEQ IDNO：392-960、1656-1659；对多肽为SEQ ID NO：961-1529、1660-1663；实施例1表2)。如以下实施例部分中表3及表4进一步阐述，克隆了代表性的多核苷酸(多核苷酸SEQ ID NO：1530、1538、1532、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1561、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543和1668)。制备了具有优化核酸序列的另外的多核苷酸(多核苷酸SEQ ID NO：1531、1539、1533、1550、1558、1562、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551和1545)。如以下实施例部分中的进一步阐述，产生了外源表达所述已克隆的和/或优化的本发明多核苷酸的转基因植物。如表5-76所述，当这些植物在渗压胁迫(在25％PEG存在下)、氮缺乏(在0.75mM氮存在下)或常规条件下生长时，表现出幼苗重量、根覆盖、根长和相对生长率的增加。另外，如表77-188所示，当外源性表达本发明多核苷酸的植物在咸度胁迫或正常条件下生长时，表现出叶丛面积(rosette area)、叶丛直径(rosette diameter)、叶平均面积、以上所述的相对生长率、植物生物量、植物种子产量、种子千粒重和收获指数的增加。总之，这些结果提示本发明新的多核苷酸及多肽用于提高非生物胁迫的耐受性及增加植物的生长率、生物量、活力和/或产量的用途。
因此，本发明一方面提供提高非生物胁迫耐受性、植物的生长率、生物量、产量和/或活力的方法。所述方法通过在植物内表达外源多核苷酸来实现，所述外源多核苷酸编码包含与选自以下的氨基酸序列至少60％同源的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
本文所用短语“非生物胁迫”指对植物代谢、生长、繁殖和/或生存力的任何不利作用。因此，非生物胁迫可由亚适环境生长条件诱导，所述条件例如咸度、脱水、水分亏缺、干旱、漫灌、冷冻、低温或高温(例如寒冷或过热)、有毒化学污染、重金属毒性、缺氧、营养缺乏、营养过剩、大气污染或UV辐射。非生物胁迫的含义论述于背景章节中。
本文所用短语“非生物胁迫耐受性”指植物耐受非生物胁迫而在代谢、生长、生产力和/或生存力方面不经受实质改变的能力。
本文所用短语“植物生物量”指植物在生长季节产生的组织的量(以风干或干燥组织的克数来测量)，它还能决定或影响植物产量或单位生长面积产量。
本文所用短语“植物产量”指每一植物或每一生长季节产生或收获的组织的量(以重量、体积或尺寸来测量)或数量(数字)。因此，增加产量能影响人们可从在某一生长面积和/或生长时间的植物获得的经济利益。
本文所用短语“植物活力”指在特定时间植物产生的组织的量(以重量来测量)。因此，增加活力可决定或影响植物产量或每个生长时间或生长面积的产量。
本文所用术语“增加”指与天然植物[即未用本发明生物分子(多核苷酸或多肽)改良的植物，例如在同样生长条件下生长的同样物种的非转化植物]比较，在植物非生物胁迫耐受性、生长、生物量、产量和/或活力方面增加至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或更多。
本文所用短语“外源多核苷酸”指自然状态下不可在所述植物中表达或者需要在所述植物中过表达的异源核酸序列。可以以稳定或瞬时方式将外源多核苷酸引入到植物中，以便产生核糖核酸(RNA)分子和/或多肽分子。应该注意，外源多核苷酸可包含与所述植物的内源核酸序列相同或部分同源的核酸序列。
如所述，本发明外源多核苷酸编码多肽，所述多肽具有与选自SEQID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663的氨基酸序列具有以下同源性的氨基酸序列：至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或更多例如100％。
可用任何同源性比较软件来测定同源性(例如同源性百分比)，所述软件包括例如：当从多肽序列开始时例如通过用缺省参数的美国生物技术信息中心(NCBI)的BlastP或TBLASTN软件；或例如通过用缺省参数的tBLASTX算法(可由NCBI获得)，其在蛋白质序列数据库中比较核苷酸查询序列(两条链)的六种读框概念翻译产物。
同源序列包括直向同源序列和旁系同源序列两种序列。术语“旁系同源”涉及在物种的基因组内的基因复制，产生平行进化同源基因。术语“直向同源”涉及在不同生物体内因祖先亲缘关系产生的同源基因。
在单子叶植物种中鉴定直向同源物的一个选择是实施交互blast搜索(reciprocal blast search)。这可通过涉及在任何序列数据库(例如公开获得的NCBI数据库，可在此处找到：http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov)中搜索(blasting)目的序列的第一次blast来进行。如果搜索水稻的直向同源物，则在例如可从NCBI得到的来自水稻日本晴(Oryza sativaNipponbare)的28,469全长cDNA克隆中搜索目的序列。可筛选blast结果。然后在目的序列所来源的生物体序列中搜索(第二次blast)经筛选的结果或未经筛选的结果的全长序列。然后比较第一次blast和第二blast的结果。当在第一次blast中产生最高分值(最佳击中(best hit))的序列在第二次blast中鉴定出作为最佳击中的所述查询序列(初始目的序列)时，则鉴定出直向同源物。用同样推理来发现旁系同源物(与同一生物体中的基因同源)。在大序列家族情况下，可使用ClustalW程序(http://WWW.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html)，接着用帮助显现聚类的邻接进化树(neighbor-joining tree)(http://en.wikipedia.org/wiki/Neighbor-joining)。
根据本发明某些实施方案，外源多核苷酸编码由SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529、1660-1662或1663所示的氨基酸序列组成的多肽。
根据本发明某些实施方案，外源多核苷酸包含与选自以下的核酸序列有至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、例如100％同一性的核酸序列：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
可用任何同源性比较软件测定同一性(例如同源性百分比)，所述软件包括例如通过用缺省参数的美国生物技术信息中心(NCBI)的BlastN软件。
根据本发明某些实施方案，外源多核苷酸为与选自以下的多核苷酸有至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、例如100％同一性的多核苷酸：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
根据本发明某些实施方案，外源多核苷酸由SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1658或1659所示。
本文所用术语“多核苷酸”指单链或双链核酸序列，其以RNA序列、互补多核苷酸序列(cDNA)、基因组多核苷酸序列和/或复合多核苷酸序列(例如以上多核苷酸序列的组合)的形式分离及提供。
本文所用短语“互补多核苷酸序列”指用逆转录酶或任何其它依赖RNA的DNA聚合酶从信使RNA逆转录而产生的序列。所述序列可随后在体内或在体外用依赖DNA的DNA聚合酶扩增。
本文所用短语“基因组多核苷酸序列”指源自染色体(从染色体鉴定或分离)的序列，因此其代表染色体的一个连续部分。
本文所用短语“复合多核苷酸序列”指至少部分为互补序列及至少部分为基因组序列的序列。复合序列可包括编码本发明多肽所需的某些外显子序列以及***其间的某些内含子序列。内含子序列可为任何来源，包括其它基因，通常包括保守剪切信号序列。所述内含子序列可进一步包括顺式作用表达调控元件。
可优化编码本发明多肽的核酸序列以用于表达。在SEQ ID NO：1531中提供优化核酸序列的非限制性实例，其编码包含SEQ ID NO：201所示氨基酸序列的多肽。这种序列修饰的实例包括但不限于：改变G/C含量，以便更接近通常在目的植物物种中发现的含量；除去在所述植物物种中发现的非典型的密码子，通常称为密码子优化。
短语“密码子优化”指选择在接近目的植物内的密码子用法的结构基因或其片段内使用的合适的DNA核苷酸。因此，优化的基因或核酸序列指其中天然或天然存在的基因的核苷酸序列已被修饰以便在所述植物内使用统计上优选或统计上偏爱的密码子的基因。通常在DNA水平检查核苷酸序列，并用任何合适的程序确定经优化用于在该植物物种中表达的编码区，所述合适程序例如如在Sardana等(1996，PlantCell Reports 15：677-681)中所述。在该方法中，可通过首先发现天然基因的每一密码子相对于高表达植物基因的密码子的用法的平方比例偏差(squared proportional deviation)，接着计算平均方差来计算密码子用法标准偏差(密码子使用偏爱的量度)。所用公式为：1SDCU＝n＝1N[(Xn-Yn)/Yn]2/N，其中Xn指高表达植物基因中密码子n的使用频率，其中Yn为目的基因中密码子n的使用频率，N指目的基因中密码子的总数。用Murray等的数据(1989，Nuc Acids Res.17：477-498)汇编了来自双子叶植物的高表达基因的密码子用法表。
根据特定植物细胞类型的优选密码子用法优化核酸序列的一种方法基于直接使用密码子优化表，而不实施任何额外的统计计算，密码子优化表例如通过日本的NIAS(National Institute of AgrobiologicaSiences)DNA库在密码子用法数据库中在线提供的那些密码子优化表(http://WWW.kazusa.or.jp/codon/)。密码子用法数据库含有用于多种不同物种的密码子用法表，每一密码子用法表基于Genbank中所存在的数据经统计学上确定。
可通过使用上述表来确定特定物种(例如水稻)中对每种氨基酸最优选或最偏爱的密码子，对编码目的蛋白的天然核苷酸序列针于该特定植物物种进行密码子优化。这可通过用相应的密码子(对于氨基酸在统计学上更偏爱)取代在特定物种基因组中可具有低统计学发生概率的密码子来实现。然而，可挑选一个或更多个较低偏爱的密码子来删除现有的限制位点，以在潜在有用的接点制造新的限制位点(用以加入信号肽或终止盒的5′和3′端，或可用于切割及将区段剪接在一起以形成正确的全长序列的内部位点)，或以消除可能负面影响mRNA稳定性或表达的核苷酸序列。
在任何修饰之前，天然存在的编码核苷酸序列可以已经含有多个对应于特定植物物种中的统计学偏爱密码子的密码子。因此，天然核苷酸序列的密码子优化可包括：确定在天然核苷酸序列内对于特定植物哪些密码子不是统计学偏爱的密码子，并根据特定植物的密码子用法表修改这些密码子以产生密码子优化的衍生物。经修饰的核苷酸序列可全部或部分地根据植物密码子用法进行优化，前提为经修饰的核苷酸序列所编码的蛋白质以比由相应的天然存在的或天然的基因所编码的蛋白质更高的水平产生。通过改变密码子用法构建合成基因阐述于例如PCT专利申请93/07278中。
因此，本发明包括上文所述核酸序列、其片段、可与其杂交的序列、与其同源的序列、具有不同密码子用法的编码相似多肽的序列、特征为突变的改变的序列，所述突变例如缺失、***或置换一个或更多个核苷酸，可为天然存在的或人工诱导的突变，可为随机或定向方式突变。
本发明提供分离的多肽，所述多肽具有与选自SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663的氨基酸序列有以下同源性的氨基酸序列：至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或更高，例如为100％。
根据本发明某些实施方案，所述多肽由SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1662或1663所示。
本发明还包括上述多肽的片段及具有突变的多肽，所述突变例如缺失、***或置换一个或更多个氨基酸，为天然存在的或人工诱导的突变，为随机或定向方式的突变。
本文所用术语“植物”包括整株植物、所述植物的祖先及后代和植物部分，包括种子、苗(shoot)、茎、根(包括块茎)和植物细胞、组织和器官。植物可呈任何形式，包括悬浮培养物、胚、分生组织区、愈伤组织、叶、配子体、孢子体、花粉和小孢子。在本发明方法中尤其有用的植物包括属于绿色植物(Viridiplantae)超科(superfamily)的所有植物，尤其是单子叶植物和双子叶植物，包括选自包含以下植物名单的豆科牧草(fodder or forage legume)、观赏植物、粮食作物、乔木或灌木：金合欢属(Acacia spp.)、槭属(Acer spp.)、猕猴桃属(Actinidia spp.)、七叶树属(Aesculus spp.)、澳大利亚贝壳杉(Agathis australis)、合欢(Albizia amara)、兰屿笔筒树(Alsophila tricolor)、须芒草属(Andropogonspp.)、落花生属(Arachis spp)、槟榔(Areca catechu)、Astelia fragrans、鹰嘴紫云英(Astragalus cicer)、多小叶红苏木(Baikiaea plurijuga)、桦木属(Betula spp.)、芸苔属(Brassica spp.)、木榄(Bruguiera gymnorrhiza)、伯克苏木(Burkea africana)、紫铆(Butea frondosa)、Cadaba farinosa、朱缨花属(Calliandra spp)、大叶茶(Camellia sinensis)、美人蕉(Cannaindica)、辣椒属(Capsicum spp.)、决明属(Cassia spp.)、距瓣豆(Centroemapubescens)、Chacoomeles spp.、肉桂(Cinnamomum cassia)、小果咖啡(Coffea arabica)、可乐豆木(Colophospermum mopane)、变异小冠花(Coronillia varia)、Cotoneaster serotina、山楂属(Crataegus spp.)、黄瓜属(Cucumis spp.)、柏木属(Cupressus spp.)、白粉桫椤蕨类(Cyatheadealbata)、榅桲(Cydonia oblonga)、日本柳杉(Cryptomeria japonica)、香茅属(Cymbopogon spp.)、白粉桫椤蛛(Cynthea dealbata)、榅桲(Cydoniaoblonga)、Dalbergia monetaria、大叶骨碎补(Davallia divaricata)、山马蝗属(Desmodium spp.)、粗糙蚌壳蕨(Dicksonia squarosa)、Dibeteropogonamplectens、油麻藤属(Dioclea spp.)、镰扁豆属(Dolichos spp.)、Dorycnium rectum、金字塔稗(Echinochloa pyramidalis)、Ehraffia spp.、龙爪稷(Eleusine coracana)、画眉草属(Eragrestis spp.)、刺桐属(Erythrinaspp.)、桉属(Eucalypfus spp.)、Euclea schimperi、Eulalia vi/losa、荞麦属(Pagopyrum spp.)、费约果(Feijoa sellowlana)、草莓属(Fragaria spp.)、千斤拔属(Flemingia spp.)、Freycinetia banksli、老鹳草(Geraniumthunbergii)、银杏(GinAgo biloba)、野黄豆(Glycine javanica)、Gliricidiaspp.、陆地棉(Gossypium hirsutum)、银桦属(Grevillea spp.)、非洲红木(Guibourtia coleosperma)、岩黄芪属(Hedysarum spp.)、Hemaffhiaaltissima、Heteropogon contoffus、大麦(Hordeum vulgare)、红苞茅(Hyparrhenia rujfa)、小连翘(Hypericum erectum)、Hypeffhelia dissolute、Indigo incamata、鸢尾属(Iris spp.)、Leptarrhena pyrolifolia、胡枝子属(Lespediza spp.)、莴苣属(Lettuca spp.)、银合欢(Leucaena leucocephala)、Loudetia simplex、Lotonus bainesli、百脉根属(Lotus spp.)、大结豆(Macrotyloma axillare)、苹果属(Malus spp.)、木薯(Manihot esculenta)、紫花苜蓿(Medicago saliva)、水杉(Metasequoia glyptostroboides)、大蕉(Musa sapientum)、烟草属(Nicotianum spp.)、驴食豆属(Onobrychisspp.)、鸟足豆属(Ornithopus spp.)、稻属(Oryza spp.)、非洲双翼豆(Peltophorum africanum)、狼尾草属(Pennisetum spp.)、鳄梨(Perseagratissima)、碧冬茄属(Petunia spp.)、菜豆属(Phaseolus spp.)、针葵(Phoenix canariensis)、新西兰剑麻(Phormium cookianum)、石楠属(Photinia spp.)、白云杉(Picea glauca)、松属(Pinus spp.)、豌豆(Pisumsativam)，新西兰罗汉松(Podocarpus totara)、Pogonarthria fleckii、Pogonaffhria squarrosa、杨属(Populus spp.)、牧豆树(Prosopis cineraria)、花旗松(Pseudotsuga menziesii)、Pterolobium stellatum、西洋梨(Pyruscommunis)、栎属(Quercus spp.)、厚叶石斑木(Rhaphiolepsis umbellata)、美味棒花棕(Rhopalostylis sapida)、纳塔尔盐肤木(Rhus natalensis)、欧洲醋栗(Ribes grossularia)、醋栗属(Ribes spp.)、洋槐(Robiniapseudoacacia)、蔷薇属(Rosa spp.)、悬钩子属(Rubus spp.)、柳属(Salixspp.)、红裂稃草(Schyzachyrium sanguineum)、金松(Sciadopitysvefficillata)、北美红杉(Sequoia sempervirens)、北美巨杉(Sequoiadendrongiganteum)、两色蜀黍(Sorghum bicolor)、菠菜属(Spinacia spp.)、Sporobolus fimbriatus、Stiburus alopecuroides、矮笔花豆(Stylosanthoshumilis)、葫芦茶属(Tadehagi spp.)、落羽松(Taxodium distichum)、***黄背草(Themeda triandra)、车轴草属(Trifolium spp.)、小麦属(Triticumspp.)、异叶铁杉(Tsuga heterophylla)、越桔属(Vaccinium spp.)、野豌豆属(Vicia spp.)、葡萄(Vitis vinifera)、锥穗沃森花(Watsonia pyramidata)、马蹄莲(Zantedeschia aethiopica)、玉米(Zea mays)、苋属植物、洋蓟(Artichoke)、芦笋、青花椰菜、孢子甘蓝(Brussels sprouts)、卷心菜、油菜、胡萝卜、花椰菜、芹菜、羽衣甘蓝(collard greens)、亚麻、球茎甘蓝、小扁豆、芸苔、黄秋葵、洋葱、马铃薯、水稻、大豆、稻秆(straw)、甜菜、甘蔗、向日葵、番茄、squash tea、玉米、小麦、大麦、黑麦、燕麦、花生、豌豆、小扁豆和紫花苜蓿、棉花、油菜籽、油菜、胡椒、向日葵、烟草、茄子、桉树、树、观赏植物、多年生草和饲草作物。或者，藻类及其它非绿色植物可用于本发明方法。
根据本发明某些实施方案，本发明方法所用的植物为农作物，例如水稻、玉米、小麦、大麦、花生、马铃薯、芝麻、橄榄树、棕榈油、香蕉、大豆、向日葵、油菜(canola)、甘蔗、紫花苜蓿、黍、豆科(leguminosae)(菜豆、豌豆)、亚麻、羽扇豆、油菜籽、烟草、白杨(popular)和棉花。
通过用外源多核苷酸转化一种或更多种植物细胞，接着从转化细胞产生成熟植株，并在适于在该成熟植株内表达该外源多核苷酸的条件下栽培该成熟植株，来实现在植物内表达本发明外源多核苷酸。
根据本发明某些实施方案，通过将核酸构建体导入植物细胞中来实现转化，所述核酸构建体包括本发明某些实施方案的外源多核苷酸和至少一个能够指导外源多核苷酸在植物细胞内转录的启动子。下文提供合适转化方法的更详细资料。
本文所用术语“启动子”指位于基因转录启动位点上游的DNA区，RNA聚合酶结合该区以启动RNA转录。启动子控制基因表达的位置(例如在植物的哪一部分)和/或时间(例如在生物体的哪一阶段或何种条件)。
本发明核酸构建体可使用任何合适的启动子序列。根据本发明某些实施方案，启动子为组成型启动子、组织特异性或非生物胁迫诱导型启动子。
合适的组成型启动子包括例如：CaMV 35S启动子(SEQ IDNO：1546；Odell等，Nature 313：810-812，1985)；拟南芥At6669启动子(SEQ ID NO：1652；参见PCT公开号WO04081173A2)；玉米Ubi 1(Christensen等，Plant Sol.Biol.18：675-689，1992)；水稻肌动蛋白(McElroy等，Plant Cell 2：163-171，1990)；pEMU(Last等，Theor.Appl.Genet.81：581-588、1991)；CaMV 19S(Nilsson等，Physiol.Plant100：456-462，1997)；GOS2(de Pater等，Plant J Nov；2(6)：837-44，1992)；遍在蛋白(Christensen等，Plant Mol.Biol.18：675-689，1992)；水稻亲环蛋白(Bucholz等，Plant Mol.Biol.25(5)：837-43，1994)；玉米H3组蛋白(Lepetit等，Mol.Gen.Genet.231：276-285，1992)；肌动蛋白2(An等，Plant J.10(1)；107-121，1996)；组成型根尖CT2启动子(SEQ IDNO：1535；也参见PCT申请号IL/2005/000627)和合成Super MAS(Ni等，The Plant Journal 7：661-76，1995)。其它组成型启动子包括在如下专利中所述的组成型启动子：美国专利第5,659,026号；第5,608,149号；第5.608,144号；第5,604,121号；第5.569,597号；第5.466,785号；第5,399,680号；第5,268,463号和第5,608,142号。
合适的组织特异性启动子包括但不限于：叶特异性启动子[例如如下所述：Yamamoto等，Plant J.12：255-265，1997；Kwon等，Plant Physiol.105：357-67，1994；Yamamoto等，Plant Cell Physiol.35：773-778，1994；Gotor等，Plant J.3：509-18，1993；Orozco等，Plant Mol.Biol.23：1129-1138，1993；和Matsuoka等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：9586-9590，1993]、种子优先启动子[例如来自种子特异性基因(Simon，等，Plant Mol.Biol.5.191，1985；Scofield，等，J.Biol.Chem.262：12202，1987；Baszczynski，等，Plant Mol.Biol.14：633，1990)、巴西坚果白蛋白(Pearson等，Plant Mol.Biol.18：235-245，1992)、豆球蛋白(Ellis等，Plant Mol.Biol.10：203-214，1988)、谷蛋白(水稻)(Takaiwa等，Mol.Gen.Genet.208：15-22，1986；Takaiwa等，FEBS Letts.221：43-47，1987)、玉米醇溶蛋白(Matzke等，Plant Mol.Biol，143).323-32 1990)、napA(Stalberg等，Planta 199：515-519，1996)、小麦SPA(Albani等，PlantCell，9：171-184，1997)、向日葵油质蛋白(Cummins等，Plant Mol.Biol.19：873-876，1992)]、胚乳特异性启动子[例如小麦LMW和HMW、麦谷蛋白-1(Mol Gen Genet 216：81-90，1989；NAR 17：461-2)、小麦a、b和g麦醇溶蛋白(EMBO3：1409-15、1984)、大麦ltrl启动子、大麦B1、C、D大麦醇溶蛋白(Theor Appl Gen 98：1253-62，1999；Plant J 4：343-55，1993；Mol Gen Genet 250：750-60，1996)、大麦DOF(Mena等，The PlantJournal，116(1)：53-62，1998)、Biz2(EP99106056.7)、合成启动子(Vicente-Carbajosa等，Plant J.13：629-640，1998)、水稻谷醇溶蛋白NRP33、水稻球蛋白Glb-1(Wu等，Plant Cell Physiology 39(8)885-889，1998)、水稻α球蛋白REB/OHP-1(Nakase等，Plant Mol.Biol.33：513-S22，1997)、水稻ADP葡萄糖PP(Trans Res 6：157-68，1997)、玉米ESR基因家族(Plant J 12：235-46，1997)、高粱γ-醇溶蛋白(PMB32：1029-35，1996)]、胚特异性启动子[例如水稻OSH1(Sato等，Proc.Nati.Acad.Sci.USA，93：8117-8122)、KNOX(Postma-Haarsma等，PlantMol.Biol.39：257-71，1999)、水稻油质蛋白(Wu等，J.Biochem.，123：386，1998)]和花特异性启动子[例如AtPRP4、chalene合酶(chsA)(Van derMeer等，Plant Mol.Biol.15，95-109，1990)、LAT52(Twell等，Mol.GenGenet.217：240-245；1989)、apetala-3]。
合适的非生物胁迫诱导型启动子包括但不限于：盐诱导型启动子，例如RD29A(Yamaguchi-Shinozalei等，Mol.Gen.Genet.236：331-340，1993)；干旱诱导型启动子，例如玉米rab17基因启动子(Pla等，Plant Mol.Biol.21：259-266，1993)、玉米rab28基因启动子(Busk等，Plant J.11：1285-1295，1997)和玉米Ivr2基因启动子(Pelleschi等，Plant Mol.Biol.39：373-380，1999)；热诱导型启动子，例如来自番茄的热番茄hsp80-启动子(美国专利第5,187,267)。
本发明某些实施方案的核酸构建体可进一步包括合适的选择标记和/或复制起点。根据本发明某些实施方案，所用核酸构建体为穿梭载体，该载体既可在大肠杆菌(E.coli)(其中构建体包含合适的选择标记和复制起点)内繁殖又可在细胞中与繁殖兼容。本发明构建体可例如为质粒、杆粒、噬菌粒、粘粒、噬菌体、病毒或人工染色体。
可利用本发明某些实施方案的核酸构建体稳定或瞬时转化植物细胞。在稳定转化中，外源多核苷酸被整合到植物基因组，由此其代表稳定并能遗传的性状。在瞬时转化中，外源多核苷酸由转化的细胞表达，但其未整合到基因组中，因此其代表瞬时性状。
有多种将外源基因导入到单子叶和双子叶植物两类植物的方法(Potrykus，I.，Annu.Rev.Plant.Physiol.，Plant.Mol.Biol.(1991)42：205-225；Shimamoto等，Nature(1989)338：274-276)。
使外源DNA稳定整合到植物基因组DNA的主要方法包括两个主要途径：
(i)农杆菌介导基因转移：Klee等(1987)Annu.Rev.Plant Physiol.38：467-486；Klee和Rogers，Cell Culture and Somatic Cell Genetics ofPlants，第6卷，Molecular Biology of Plant Nuclear Genes(植物细胞核基因的分子生物学)，Schell，J.和Vasil，L.K.编辑，Academic Publishers，San Diego，Calif.(1989)，第2-25页；Gatenby，载于Plant Biotechnology中，Kung，S.和Arntzen，C.J.编辑，Butterworth Publishers，Boston，Mass.(1989)，第93-112页。
(ii)直接DNA吸收：Paszkowski等，Cell Culture and Somatic CellGenetics of Plants，第6卷，Molecular Biology of Plant Nuclear Genes(植物细胞核基因的分子生物学)，Schell，J.和Vasil，L.K.编辑，AcademicPublishers，San Diego，Calif.(1989)，第52-68页；包括用于直接将DNA吸收到原生质体的方法，Toriyama，K.等(1988)Bio/Technology6：1072-1074。由短暂电击植物细胞诱导的DNA吸收：Zhang等，PlantCell Rep.(1988)7：379-384；Fromm等，Nature(1986)319：791-793。通过微粒轰击将DNA注入植物细胞或组织：Klein等Bio/Technology(1988)6：559-563；McCabe等Bio/Technology(1988)6：923-926；Sanford，Physiol.Plant.(1990)79：206-209；通过使用微吸管***：Neuhaus等，Theor.Appl.Genet.(1987)75：30-36；Neuhaus和Spangenberg，Physiol.Plant.(1990)79：213-217；玻璃纤维或碳化硅晶须转化细胞培养物、胚或愈伤组织，美国专利第5,464,765号；或通过让DNA与萌发中的花粉一起直接孵育：DeWet等，载于Experimental Manipulation of OvuleTissue，Chapman，G.P.和Mantell，S.H.和Daniels，W.Longman编辑，London，(1985)，第197-209页；和Ohta，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1986)83：715-719。
农杆菌***包括使用含有限定DNA区段的质粒载体，将DNA区段整合到植物基因组DNA中。植物组织的接种方法视植物物种及农杆菌递送***而变化。广泛使用的方法是叶盘法(leaf disc procedure)，可用提供启动全株分化的优良来源的任何组织外植体来实施该方法。参见例如Horsch等，Plant Molecular Biology Manual A5，Kluwer AcademicPublishers，Dordrecht(1988)，第1-9页。补充方法采用与真空渗透组合的农杆菌递送***。农杆菌***在制备转基因双子叶植物中尤其可行。
有多种直接将DNA转移到植物细胞中的方法。在电穿孔中，原生质体短暂暴露在强电场中。在微注射中，用极细的微吸管直接将DNA机械注射到细胞中。在微粒轰击中，让DNA吸附到微弹(microprojectile)(例如硫酸镁晶体或钨粒)上，让微弹物理上加速进入细胞或植物组织中。
在稳定转化后，使植物繁殖。使植物繁殖最常用的方法是播种。然而，由于在农作物中缺乏一致性的杂合性，种子繁殖再生具有缺陷，因为种子是由植物根据孟德尔定律支配的遗传变异产生的。基本上每粒种子在遗传上都不同，每一粒种子都以其特有的性状生长。因此，优选产生转化植物，使得再生的植物具有同一的性状及亲本转基因植物的特性。为此，优选通过微繁殖再生转化的植物，微繁殖为转化植株提供快速一致的繁殖。
微繁殖是使从所挑选的亲本植株或栽培变种切离的单块组织生长为新一代植株的方法。该方法使得可大量繁殖具有表达融合蛋白的优选组织的植株。产生的这种新生代植株在遗传上同一并具有初始植株的所有特性。微繁殖使得可在短期内大量生产品质植物原料，并在保存初始转基因或转化植株的特性的情况下为所选栽培品种提供快速繁殖。克隆植物的优点是繁殖植物的速度以及所产生植物的品质和均一性。
微繁殖是多阶段的过程，在不同阶段之间需要改变培养基或生长条件。因此，微繁殖过程涉及四个基本阶段：第一阶段，培养初始组织；第二阶段，扩增组织培养物；第三阶段，分化并形成植株；和第四阶段，温室培养及壮苗。在第一阶段即培养初始组织期间，建立组织培养物并保证无污染。在第二阶段期间，扩增组织培养物直到产生足以满足生产目标的组织样品数量。在第三阶段期间，将在第二阶段培养的组织样品分开并培养为单独的小植株。在第四阶段，将转化的小植株转移到温室以进行壮苗，在此处植物逐渐增加对光的耐受性以便能在自然环境中生长。
根据本发明某些实施方案，通过瞬时转化叶细胞、分生组织细胞或全植株来产生转基因植物。
可通过上述任何直接DNA转移方法或通过使用改良的植物病毒的病毒感染来实现瞬时转化。
业已显示可用于转化植物宿主的病毒包括CaMV、烟草花叶病毒(TMV)、雀麦草花叶病毒(BMV)和菜豆普通花叶病毒(BV或BCMV)。用植物病毒转化植物阐述于如下：美国专利第4,855,237号(菜豆金色花叶病毒；BGV)、EP-A 67,553(TMV)、日本公开申请第63-14693号(TMV)、EPA 194,809(BV)、EPA 278,667(BV)；和Gluzman，Y.等，Communications in Molecular Biology：Viral Vectors，Cold Spring HarborLaboratory，New York，第172-189页(1988)。用于在很多宿主(包括植物)中表达外源DNA的假病毒粒子阐述于WO 87/06261中。
根据本发明某些实施方案，用于瞬时转化的病毒无毒性，因此不会导致诸如以下的严重症状：降低生长率、形成花叶、环斑、卷叶、黄化、条斑、痘等、肿瘤形成及凹斑(pitting)。合适的无毒力病毒可为天然存在的无毒力病毒或人工减毒病毒。可用在本领域众所周知的方法实现病毒减毒，这些方法包括但不限于亚致死加热、化学处理、或通过定向诱变技术实现病毒减毒，这些技术例如由以下文献阐述：例如Kurihara和Watanabe(Molecular Plant Pathology 4：259-269，2003)、Gal-on等(1992)、Atreya等(1992)和Huet等(1994)。
合适的病毒毒株可从诸如美国典型培养物保藏中心(ATCC)等可用来源获得，或通过从感染的植物分离得到。可通过本领域众所周知的技术从感染的植物组织分离病毒，所述技术例如由Foster和Tatlor编辑的“Plant Virology Protocols：From Virus Isolation totransgenicResistance(Methods in Molecular Biology(Humana Pr)，第81卷)”，Humana Press，1998阐述的技术。简言之，将被认为含有高浓度合适的病毒的感染植物的组织(优选嫩叶和花瓣)在缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)中碾磨，以得到可用于随后接种的病毒感染的树液。
用于在植物中导入并表达非病毒外源多核苷酸序列的植物RNA病毒的构建在以上参考文献以及以下参考文献中得到论证：Dawson，W.O.等，Virology(1989)172：285-292；Takamatsu等，EMBO J.(1987)6：307-311；French等，Science(1986)231：1294-1297；Takamatsu等，FEBS Letters(1990)269：73-76；和美国专利第5,316,931号。
当病毒为DNA病毒时，可对病毒本身进行适当的修饰。或者，可首先将病毒克隆到细菌质粒以便于构建所期需的含外源DNA的病毒载体。然后可将病毒从该质粒切离。若病毒为DNA病毒，则可将细菌的复制起点连接到病毒DNA上，然后通过细菌来复制。该DNA的转录和翻译将产生给病毒DNA包上衣壳的衣壳蛋白。若病毒为RNA病毒，则病毒通常作为cDNA来克隆并被***到质粒。然后使用该质粒来进行所有的构建。然后通过转录质粒的病毒序列并翻译病毒基因以产生给病毒RNA包上衣壳的衣壳蛋白来生产RNA病毒。
在一个实施方案中提供植物病毒多核苷酸，其中从病毒多核苷酸除去天然衣壳蛋白编码序列，***了非天然植物病毒衣壳蛋白编码序列和非天然启动子，优选非天然衣壳蛋白编码序列的亚基因组启动子，其能够在植物宿主中表达，对重组植物病毒多核苷酸进行包装并确保重组植物病毒多核苷酸能***性感染宿主。或者，可通过在其内***非天然多核苷酸序列来使衣壳蛋白基因失活，以便产生蛋白质。重组植物病毒多核苷酸可含有一个或更多个另外的非天然亚基因组启动子。每一非天然亚基因组启动子皆能够在植物宿主中转录或表达邻近基因或多核苷酸序列，且不能彼此重组及不能与天然亚基因组启动子重组。如果包括不止一个多核苷酸序列，则可将非天然(外源)多核苷酸序列***到天然植物病毒亚基因组启动子或天然和非天然植物病毒亚基因组启动子的邻近。非天然多核苷酸序列在亚基因组启动子控制下在宿主植物中转录或表达，产生所期需的产物。
在第二实施方案中，除了将天然衣壳蛋白编码序列置于所述非天然衣壳蛋白亚基因组启动子之一的邻近而不用非天然衣壳蛋白编码序列外，如第一实施方案一样提供重组植物病毒多核苷酸。
在第三实施方案中，提供重组植物病毒多核苷酸，其中天然衣壳蛋白基因邻近其亚基因组启动子，且将一个或更多个非天然亚基因组启动子***到该病毒多核苷酸中。所***的非天然亚基因组启动子能够在植物宿主中转录或表达邻近基因，并且不会彼此重组及不会与天然亚基因组启动子重组。可将非天然多核苷酸序列***非天然亚基因组植物病毒启动子的邻近，以便所述序列在亚基因组启动子调控下在宿主植物中转录或表达，以产生所期需产物。
在第四实施方案中，除了用非天然衣壳蛋白编码序列取代所述天然衣壳蛋白编码序列外，如第三实施方案一样提供重组植物病毒多核苷酸。
用重组植物病毒多核苷酸编码的衣壳蛋白给病毒载体包衣壳，以产生重组植物病毒。用重组植物病毒多核苷酸或重组植物病毒感染适当的宿主植物。重组植物病毒多核苷酸能够在宿主中复制，在宿主中进行***传播并在宿主中转录或表达所述外源基因(外源多核苷酸)，产生所期需蛋白质。
在以下文献中可找到用于将病毒接种给植物的技术：Foster和Tatlor编辑的“Plant Virology Protocols：From Virus Isolation totransgenic Resistance(Methods in Molecular Biology(Humana Pr)，第81卷)”，Humana Press，1998；Maramorosh和Koprowski编辑的“Methodsin Virology”7卷，Academic Press，New York 1967-1984；Hill，S.A.“Methods in Plant Virology”，Blackwell，Oxford，1984；Walkey，D.G.A.“Applied Plant Virology”，Wiley，New York，1985；和Kado和Agrawa编辑的“Principles and Techniques in Plant Virology”，VanNostrand-Reinhold，New York。
除上述外，还可将本发明多核苷酸导入到叶绿体基因组中，藉此能够进行叶绿体表达。
用于将外源多核苷酸序列导入到叶绿体基因组的技术已知。该技术涉及以下程序。首先，化学处理植物细胞以便将每个细胞的叶绿体数目减少到约1个。然后，经由微粒轰击将外源多核苷酸导入细胞，目的是将至少一个外源多核苷酸分子导入到叶绿体。选择外源多核苷酸以便其能经由同源重组整合到叶绿体基因组，这易于由叶绿体固有的酶来实现。为此，外源多核苷酸除目的基因外还包括至少一个源自叶绿体基因组的多核苷酸序列段。另外，外源多核苷酸包括选择标记，该标记通过后续选择程序起作用，以确定在所述选择后叶绿体基因组的全部或基本上全部拷贝都包括外源多核苷酸。关于该技术的进一步详细资料在美国专利第4,945,050号和第5,693,507号中找到，它们在此引作参考。由此，可由叶绿体的蛋白质表达***产生多肽，并将多肽整合到叶绿体内膜中。
由于在植物中非生物胁迫耐受性、生长、生物量、产量和/或活力可涉及以加性或协同方式作用的多个基因(参见例如Quesda等，PlantPhysiol.130：951-063，2002)，因而本发明还设想在单个宿主植物中表达多种外源多核苷酸，藉此达到对非生物胁迫耐受性、生长、生物量、产量和/或活力的良好作用效果。
可通过将多个核酸构建体共同导入到单个植物细胞而实现在单个宿主植物中表达多种外源多核苷酸，其中每一构建体包括不同的外源多核苷酸。然后可以用上文所述方法让转化的细胞再生为成熟植株。
或者，可通过将包括多种不同外源多核苷酸的单个核酸构建体共同导入到单个植物细胞，来实现在单个宿主植物中表达多种外源多核苷酸。所述构建体可设计为具有能转录多顺反子信使RNA(包括所有不同的外源多核苷酸序列)的单个启动子序列。为了使得能共同翻译由多顺反子信使RNA编码的不同多肽，可经由内部核糖体进入位点(IRES)序列使所述多核苷酸序列相互连接，IRES促进位于IRES序列下游的多核苷酸序列的翻译。在这种情况下，上述编码不同多肽的已转录多顺反子RNA分子，将从加帽5′端和多顺反子RNA分子的两个内部IRES序列开始翻译，藉此在细胞内产生所有不同的多肽。或者，所述构建体可包括若干各自连接不同外源多核苷酸序列的启动子序列。
用包括多种不同外源多核苷酸的构建体转化的植物细胞可用上文所述方法再生为成熟植株。
或者，可通过将不同的核酸构建体(包括不同的外源多核苷酸)导入到多个植株来实现表达多种外源多核苷酸。然后让再生的转化植株杂交，用常规植物育种技术在得到的后代中选择优越的非生物胁迫耐受性、生长、生物量、产量和/或活力性状。
根据本发明某些实施方案，表达一种或更多种外源多核苷酸的植物在正常条件下生长。
根据本发明某些实施方案，所述方法进一步包括让表达一种或更多种外源多核苷酸的植物在非生物胁迫下生长。
因此，本发明包括外源性表达(如上述)本发明一种或更多种多核苷酸和/或一种或更多种多肽的植物。一旦在植物细胞或整个植物中表达，就可通过本领域众所周知的方法测定所述外源多核苷酸所编码的多肽的水平，这些方法例如活性测定、用能够特异性结合所述多肽的抗体的蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光等。
在植物中测定从外源多核苷酸转录的RNA的水平的方法在本领域众所周知，包括例如RNA印迹分析、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析(包括定量、半定量或实时RT-PCR)和RNA-原位杂交。
上述多核苷酸和多肽可以以安全及有成本效益的方式用于各种各样的经济植物。
可用已知方法测定转基因(编码所述多肽的外源多核苷酸)对非生物胁迫耐受性、生长、生物量、产量和/或活力的作用。
非生物胁迫耐受性-让转化的(即表达所述转基因)和非转化的(野生型)植株暴露在非生物胁迫条件下，例如脱水、亚适温(低温、高温)、营养缺乏、营养过剩、盐胁迫条件、渗压胁迫、重金属毒性、缺氧、大气污染和UV辐射。
耐盐性测定-预期对高盐浓度耐受的转基因植物在高盐中表现出更好的发芽、幼苗活力或生长。用多种方法可实现盐胁迫，例如通过用高渗溶液浇灌植物，通过在高渗生长溶液(例如加盐的Hoagland溶液)中水培植物，或通过在高渗生长培养基[例如加盐的50％Murashige-Skoog培养基(MS培养基)]中培养植物。因为不同植物的耐盐性变化相当大，所以灌溉用水、生长溶液或生长培养基中的盐浓度可根据具体的植物栽培变种或品种的特定特性来调整，以便对植物的生理和/或形态造成轻度或中度影响(对于适当浓度的指导方针参见Bernstein和Kafkafi的Root Growth Under Salinity Stress(在咸度胁迫下的根生长)，载于：Plant Roots，The Hidden Half，第3版，Waisel Y，EshelA和Kafkafi U.(编者)Marcel Dekker Inc.，New York，2002及其中的参考文献)。
例如，可如下进行耐盐性试验：用渐增氯化钠浓度(例如50mM、100mM、200mM、400mM NaCl)在不同的发育阶段从底部和上方浇灌植物，以确保盐均匀分散。在暴露于胁迫条件后，频繁监测植物直到在野生型植株中出现实质的(substantial)生理和/或形态影响。因此，在对照植株和转基因植株之间比较外部表型外貌、萎蔫程度及达到成熟和产生后代的综合效果。所测量的耐受性定量参数包括但不限于：平均湿重和干重、生长率、叶大小、叶覆盖面(总叶面积)、所产生的种子重量、平均种子大小和每株植株产生的种子数。将未表现出实质的生理和/或形态影响或表现出比野生型植株更高生物量的转化植株鉴定为非生物胁迫耐受植株。
渗透耐受性试验-进行渗压胁迫测定(包括氯化钠和PEG测定)，以确定渗压胁迫表型是否为氯化钠特异性的，或者是否为一般性渗压胁迫相关表型。耐受渗压胁迫的植物可能对对干旱和/或冷冻更耐受。对于盐胁迫和渗压胁迫实验，培养基补充有例如50mM、100mM、200mM NaCl或15％、20％或25％PEG。也参见以下实施例部分的实施例6和7。
耐旱性测定/渗压剂测定-进行耐旱性测定以鉴定赋予植物在急性脱水后更好存活力的基因。为了分析转基因植物是否更耐旱，可通过在培养基中的非离子渗压剂山梨醇产生渗压胁迫。在将对照植株和转基因植株转移到含有500mM山梨醇的植物琼脂板后，于该板中发芽并生长4天。该处理引起生长延迟，然后通过测量植物重量(湿重及干重)、产量并通过以开花时间来测量的生长率来比较对照植株和转基因植株二者。
相反地，用过表达上面详述的多核苷酸的植物进行基于土壤的干旱筛选。让来自对照拟南芥植物或过表达本发明多肽的其它转基因植物的种子发芽，并转移到盆中。终止浇灌并将盆置于吸水纸上以增加土壤干燥速率后，获得干旱胁迫。当大部分对照植物开始出现严重萎蔫时，将转基因植物和对照植物彼此比较。在达到相当大部分对照植物表现出严重萎蔫后，重新给植物浇水。用以下两个标准中的每一个与对照进行比较对植物分级：对干旱条件的耐受性和重浇水后的恢复(存活)。
冷胁迫耐受性-分析冷胁迫的一种方法如下。将成熟(25日龄)的植株转移到4℃室内1或2周，给予必要的光照(constitutive light)。随后将植株移回到温室。2周后，通过测量植物重量(湿重及干重)并通过以开花时间、植株大小、产量等测量的生长率，在对照和转基因植物之间比较导致生长延迟及其它表现的寒冷期损伤。
热胁迫耐受性-测量热胁迫耐受性的一种方法是使植株暴露在高于34℃的温度一段时间。在将植株转移回到22℃恢复后检查植物耐受性，5天后相对于内部对照(非转基因植株)或未暴露于冷胁迫或热胁迫的植株进行评估。
发芽试验-发芽试验比较来自转基因植株的能够完成发芽过程的种子百分率与来自对照植株的以同样方式处理的种子的百分率。正常条件被认为是例如在每日22小时光照2小时黑暗周期下于22℃孵育。在种植后4天及14天之间评估发芽和幼苗活力。基础培养基为50％MS培养基(Murashige和Skoog，1962 Plant Physiology 15，473-497)。
也在并不适宜的条件下检查发芽，所述不适宜的条件例如寒冷(在低于10℃而不是22℃的温度孵育)、或用含有高浓度渗压剂例如山梨醇(以50mM、100mM、200mM、300mM、500mM及至多1000mM的浓度)的种子抑制溶液、或应用渐增浓度的盐(50mM、100mM、200mM、300mM、500mM NaCl)。
转基因对植物的生长、生物量、产量和/或活力的作用-可通过生长参数的增加来计算植物活力，生长参数例如单位时间内的叶面积、纤维长度、叶丛直径、植物鲜重等等。
可用生长中植株的数字分析来测量生长率。例如，可每3天捕获在试验区温室中生长的植株的图像，可通过数字分析计算叶丛面积。可用取样天数之间的叶丛面积之差除以取样天数之差来计算叶丛面积生长。
可通过将8-16株植物的全部种子收集在一起，用分析天平为其称重，并用总重量除以植株数，来测量种子产量。可用同样方式计算单位生长面积的种子，同时考虑给予单个植株的生长面积。可通过提高每株植物的种子产量和/或通过提高给定面积内能够生长的植株数，来实现增加单位生长面积的种子产量。
可通过测量8-16株植物所产生及收获的干种子的量(重量或大小)或数量，并除以植株数，来评估每株植物的种子产量。
可通过测量单位时间所产生的植物生物量、叶丛面积、叶大小或根长来评估生长率(可以以每天叶面积cm2来度量)。
可用纤维照相测量纤维长度。用纤维照相***按照“上半部平均”长度计算长度。上半部平均长度(UHM)是纤维长度分布中较长的一半的平均长度。纤维照相以特定百分数的跨度距离测量长度(http://WWW.cottoninc.com/Classificationofcotton/？Pg＝4#Length)。
因此，本发明具有很高的农业价值，用于促进商业上所需农作物的产量(例如生长器官的生物量，例如杨木；或繁殖器官，例如种子数量或种子生物量)。
本文所用术语“约”指±10％。
术语“包含”、“含有”、“包括”、“具有”及其动名词变化意指“包括但不限于”。
术语“由......组成”意指“包括但限于”。
术语“基本上由......组成”意指所述组合物、方法或结构可包括另外的成分、步骤和/或部分，只要所述另外的成分、步骤和/或部分不显著改变所要求保护的组合物、方法或结构的基本的及新的特性。
除非上下文另有明确规定，否则本文所用单数形式“一个”、“一种”和“该”或“所述”包括复数形式。例如，术语“一种化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括其混合物。
本发明各种实施方案在本申请中可以以范围方式提出。应该理解，范围方式的说明仅为了方便和简洁，不应该理解为对本发明范围的硬性限制。因此，应该认为范围说明具体揭示了所有可能的亚范围以及在该范围内的单个数值。例如，应该认为诸如1-6的范围说明具体揭示了诸如1-3、1-4、1-5、2-4、2-6、3-6等亚范围以及诸如1、2、3、4、5和6的在该范围内的单个数值。不管范围有多宽都适用这种解释。
无论本文何时指定数字范围，其都意指包括在指定范围内任何引用的数(分数或整数)。短语“介于(指定的第一个数和指定的第二个数)之间的范围”与“从(指定的第一个数)到(指定的第二个数)的范围”在本文中可互换使用，意指包括第一个和第二个指定的数及其间的所有分数和整数。
本文所用术语“方法”指用于完成给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于化学、药理学、生物学、生物化学及医药学领域从业人员已知的方式、手段、技术和程序，或易于由这些方式、手段、技术和程序中开发的方式、手段、技术和程序。
应该理解，为了清楚起见而在分开的实施方案上下文中阐述的本发明的某些特征，也可在单一实施方案中组合提供。相反地，为了简洁而在单一实施方案上下文中阐述的本发明的各种特征，也可分开提供，或以任何合适的亚组合或在本发明所述任何其它实施方案中合适地提供。除非实施方案没有这些元件就不能操作，否则不能认为在各个实施方案上下文中所述的某些特征为那些实施方案的必不可少的特征。
上文所述的本发明各种实施方案及方面和在以下权利要求章节中要求保护的内容在以下实施例中找到实验支持。
实施例
现在提及以下实施例，它们与上述说明一起以非限制性方式说明本发明某些实施方案。
通常本文所用术语和本发明中利用的实验室程序包括分子技术、生化技术、微生物学技术和重组DNA技术。所述技术在文献中有全面的解释。参见例如：“Molecular Cloning：A laboratory Manual”Sambrook等，(1989)；“Current Protocols in Molecular Biology”，第I-III卷，Ausubel，R.M.编辑(1994)；Ausubel等，“Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley和Sons，Baltimore，Maryland(1989)；Perbal，“A PracticalGuide to Molecular Cloning”，John Wiley & Sons，New York(1988)；Watson等，“Recombinant DNA”，Scientific American Books，New York；Birren等(编辑)“Genome Analysis：A Laboratory Manual Series”，第1-4卷，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(1998)；在美国专利第4,666,828号、第4,683,202号、第4,801,531号、第5,192,659号和第5,272,057号中提出的方法；“Cell Biology：A Laboratory Handbook”，第I-III卷，Cellis，J.E.编辑(1994)；“Current Protocols in Immunology”第I-III卷，Coligan J.E.编辑(1994)；Stites等(编辑)，“Basic and ClinicalImmunology”(第8版)，Appleton & Lange，Norwalk，CT(1994)；Mishell和Shiigi(编辑)，“Selected Methods in Cellular Immunology”，W.H.Freeman和Co.，New York(1980)；在专利和科学文献中广泛阐述的可用的免疫测定，参见例如美国专利第3,791,932号、第3,839,153号、第3,850,752号、第3,850,578号、第3,853,987号、第3,867,517号、第3,879,262号、第3,901,654号、第3,935,074号、第3,984,533号、第3,996,345号、第4,034,074号、第4,098,876号、第4,879,219号、第5,011,771号和第5,281,521号；“Oligonucleotide Synthesis”Gait，M.J.编辑(1984)；“Nucleic Acid Hybridization”Hames，B.D.和Higgins S.J.，编辑(1985)；“Transcription and Translation”Hames，B.D.和Higgins S.J.，编辑(1984)；“Animal Cell Culture”Freshney，R.I.编辑(1986)；“Immobilized Cells and Enzymes”IRL Press，(1986)；“A Practical Guideto Molecular Cloning”Perbal，B.，(1984)和“Methods in Enzymology”，第1-317卷，Academic Press；“PCR Protocols：A Guide To Methods AndApplications”，Academic Press，San Diego，CA(1990)；Marshak等，“Strategies for Protein Purification and Characterization-A LaboratoryCourse Manual”CSHL Press(1996)；它们所有的都如同在本文中全文提出一样在此用作参考。其它一般的参考文献在本文中到处提供。相信其中的程序在本领域众所周知，为了读者方便才提供。其中含有的所有信息在此引作参考。
实施例1
鉴定推定的非生物胁迫耐受性和或产量/生物量增加基因
本发明人如下鉴定了提高非生物胁迫耐受性(ABST)和/或生长率/产量/生物量/活力的基因。如在转让给本受让人的先前在WO2004/104162中所述的方法在体内验证了所述基因。本文所用的所有核苷酸序列数据集皆来源于可公开获得的数据库。将来自50种不同物种(主要是植物物种)的序列数据引入到单一的综合数据库中。也加入了关于基因表达、蛋白质注释、酶和途径的其它信息。所用的主要数据库包括：
●基因组
○拟南芥基因组[TAIR基因组第6版(http://WWW.arabidopsis.org/)]
○水稻基因组[IRGSP build 4.0(http://rgp.dna.affrc.go.jp/IRGSP/)]
○白杨[来自JGI的毛果杨(Populus trichocarpa)版本1.1(assemblyrelease v1.0)(http://WWW.genome.jgi-psf.org/)]
○短柄草属(Brachypodium)[JGI 4x assemblyhttp://WWW.brachpodium.org)]
○大豆[DOE-JGI SCP，Glyma0版本(http://WWW.phytozome.net/)]
○葡萄[NCBI WGS assembly ftp://ftp.ncbi.nih.gov/genbank/wgs/)]
○蓖麻(Castobean)[TIGR/J Craig Venter Institute 4x assembyhttp://msc.jcvi.org/rcommunis
○高粱[DOE-JGI SCP，Sbi版本1 http://WWW.phytozome.net/)]
●从以下取得表达的EST和mRNA序列
○GeneBank版本154、157、160、161、164和165(http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov/dbEST/)
○RefSeq(http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov/RefSeq/)
○TAIR(http://WWW.arabidopsis.org/)
●蛋白质和途径数据库
○Uniprot(http://WWW.expasy.uniprot.org/)
○AraCyc(http://WWW.arabidopsis.org/biocyc/index.jsp)
○酶(http://expasy.org/enzyme/)
●从以下下载微阵列数据集
○GEO(http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)
○TAIR(http://WWW.arabidopsis.org/)
○Evogene专有的棉花纤维微阵列数据
●QTL信息
○Gramene(http://WWW.gramene.org/qtl/)
进行数据库拼接(Database Assembly)以建立广泛、丰富、可靠地注释并易于分析的数据库，该数据库包含可公开获得的基因组mRNA、EST DNA序列、来自各种农作物的数据以及基因表达、蛋白质注释和途径数据QTL及其它相关信息。
数据库拼接由基因精制、构造、注释及分析工具的工具盒组成，其使得能够构建用于每一基因发现计划的定制数据库。基因精制和构建工具使得能够可靠地检测剪接变体及反义转录物，产生对单一基因各种潜在的表型结果的了解。并承认用于分析人类基因组的CompugenLTD的“LEADS”平台的能力已被确证，并被科学委员会承认(“Widespread Antisense Transcription(普遍的反义转录)”，Yelin，等(2003)Nature Biotechnology 21，379-85；“Splicing of Alu Sequences(Alu序列的剪接)”，Lev-Maor，等(2003)Science 300(5623)，1288-91)，也已证明在植物基因组学中最为有效。
EST聚类(clustering)和基因拼接-为了拟南芥和水稻基因的聚类和拼接，采用“基因组LEADS”版本。该工具使得可以最准确将基因组上的EST及mRNA序列聚类，并预测基因结构以及可变剪接事件和反义转录。
对于不能获得全基因组序列数据的生物体，应用“表达的LEADS”以及TIGR(http://WWW.tigr.org/)聚类软件。比较这两个聚类工具的结果，在由这两个工具预测的簇显著不同的情况下，提出并考虑两个版本。
基因注释-如下注释预测的基因及蛋白质：
●在所有的植物UniProt(http://WWW.expasy.uniprot.org/)序列中实施Blast搜索(http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov.library.vu.edu.au/BLAST/)。
●将具有缺省统计的Frame-Finder(http://WWW.ebi.ac.uk/～guy/estate/)计算用于预测每一转录物的蛋白质序列。
●由InterPro(http://WWW.ebi.ac.uk/interpro/)分析预测的蛋白质。
●使用从AraCyc和酶(ENZYME)数据库Blast搜索蛋白质来对AraCyc途径的预测转录物作图。
●在所有其它生物体数据库中用tblastx算法(http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov.library.vu.edu.au/BLAST/)比较每一转录物，以验证预测的蛋白质序列的准确性并用于有效检测直向同源物。
基因表达谱-开发了少数数据来源用于基因表达谱分析，即微阵列数据和数字表达谱(参见以下)。根据基因表达谱，进行了相关性分析以鉴定在不同发育阶段和环境条件下共同调控的基因。
从TAIR和NCBI GEO站点下载可公开获得的微阵列数据集，对其重新标准化并整合到数据库中。对于鉴定对ABST重要的基因，表达谱分析是最重要的资源数据之一。此外，当来自不同农作物的同源物基因响应ABST时，将该等基因标记为“对改进ABST具有高度预测性”。
根据包括在包含所述簇(cluster)的序列记录中的所有关键词，汇集了每一簇的数字基因表达谱概述。数字基因表达也称为电子RNA印迹，是展示基于形成簇的EST序列的虚拟表达谱的工具。该工具可提供在植物解剖学(基因在什么组织/器官中表达)、发育阶段(可找到基因的发育阶段)和处理概述(提供在其中基因表达的生理条件，例如干旱、寒冷、病原体感染等)方面的簇的表达谱。既然EST在不同簇中随机分布，那么数字基因表达提供阐述具有总共N个EST的簇含有来自某一文库集的X个EST的可能性的概率值。对该概率的计算要考虑：a)簇中的EST数，b)所牵涉的相关文库中的EST数，c)代表该物种的可用的总EST数。因此，具有低概率值的簇高度富集了来自表明特化(specialized)表达的目的文库组的EST。
最近已将直向同源性和旁系同源性的概念应用到全基因组比较规模的功能表征和分类。直向同源物和旁系同源物构成两种主要的同源物类型：前者通过特化从共同祖先进化而来，而后者通过复制事件互有关联。假定起因于远古复制事件的旁系同源物很可能在功能上趋异，而真正的直向同源物更有可能随进化时间一直保留同样的功能。
为了进一步研究和鉴定来自单子叶物种的推定的ABST直向同源物基因，整合了两种计算方法：
(i)用于直向同源物序列比对的方法-基于跨越多个真核生物分类群构建的直向同源物群，用Markov簇算法的改良法对推定的直向同源物和旁系同源物进行分群。在***发生图(Phylogram，假定为估计的基因***发生的分支图(树))中进一步组编这些推定的直向同源物。
(ii)用于产生基因表达谱的方法“数字表达(Digital Expression)”-本发明人在注释序列方面也已进行了大量工作。分析了表达数据，并用习惯术语固定词汇(例如实验处理)对EST文库分类。通过对EST在簇中的频率及EST在数据库中的丰度进行比较，在统计学上分析了来自聚类到基因中的所有EST的注释，使得可构建该基因的数字式及图表式的表达谱，这被称作“数字表达”。
使用这两个互补方法的基本原理基于真正的直向同源物很可能随进化时间一直保留同样的功能这种假设。对于两个同源基因之间的功能相似性、序列水平的相似性(在蛋白质结构域中相同的氨基酸)和表达谱的相似性，这两种方法(序列和表达模式)提供了两套不同的说明。
总之，鉴定了在植物中过表达时对ABST有重大影响的110种基因。将所鉴定的ABST基因、其经过组织的(curated)多核苷酸和多肽序列以及其按照Genebank数据库更新的序列(updated sequence)概述于下表1中。
表1
已鉴别的ABST基因
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
1 MAB1   MAB1.0.rice|gb154|BM421111_T1  水稻(rice) 201
2 MAB1.1.rice|gb157.2|BM421111_T1 水稻 202   针对gb157.2生产更新的(updated toproductiongb157.2) 针对gb157.2生产更新的
3 MAB2   MAB2.0.rice|gb154|AU225547_T1 水稻   未预测蛋白质
4   MAB2.1.rice|gb157.2|AU225547_T1 水稻   针对gb157.2生产更新的
5 MAB3   MAB3.0.rice|gb154|BE039995_T1 水稻 203
6   MAB3.1.rice|gb157.2|BE039995_T1 水稻 204   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
7 MAB4   MAB4.0.rice|gb154|BI812277_T1 水稻 205
8   MAB4.7.rice|gb157.2|BI812277_CT1 水稻 经过审核
9 MAB5   MAB5.0.rice|gb154|CB624106_T1 水稻 206
10 MAB6   MAB6.0.arabidopsis|gb154|Z47404_T1  拟南芥(arabidopsis) 207
11 MAB7   MAB7.0.arabidopsis|6|AT5G47560.1 拟南芥 208
12   MAB7.1.arabidopsis|gb165|AT5G47560_T1 拟南芥 209   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
13 MAB8   MAB8.0.rice|gb154|BU672931_T1 水稻 210
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
14 MAB8.7.rice|gb154|BU672931_T1 水稻   生物信息学和经过组织的DNA
15 MAB9   MAB9.0.arabidopsis|gb154|BE844934_T1 拟南芥 211
16 MAB10   MAB10.0.arabidopsis|gb154|Z27056_T1 拟南芥 212
17 MAB11   MAB11.0.arabidopsis|gb154|Z34014_T1 拟南芥 213
18   MAB11.1.arabidopsis|gb165|AT5G52300_T1 拟南芥 214   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
19 MAB12   MAB12.0.arabidopsis|gb154|ATLTIL40_T1 拟南芥 215
20   MAB12.1.arabidopsis|gb165|AT5G52310_T1 拟南芥 216   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
21 MAB13   MAB13.0.arabidopsis|6|AT2G38760.1 拟南芥 217
22   MAB13.1.arabidopsis|gb165|AT2G38760_T1 拟南芥 218   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
23 MAB14   MAB14.0.rice|gb154|AB042259_T1 水稻 219
24   MAB14.1.rice|gb157.2|AB042259_T1 水稻 220   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
25 MAB15   MAB15.0.sorghum|gb154|AI724695_T1   高粱(sorghum) 221
26 MAB16   MAB16.0.rice|gb154|BI795172_T1 水稻 222
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
27   MAB16.1.rice|gb157.2|BI795172_T1 水稻 223   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
28 MAB17   MAB17.0.soybean|gb154|BE821839_T1  大豆(soybean) 224
29 MAB18   MAB18.0.barley|gb154|BF625971_T1  大麦(barley) 225
226   蛋白质生物信息学和经过组织的蛋白质
30 MAB19   MAB19.0.sorghum|gb154|AW563861_T1 高粱 227
31   MAB19.1.sorghum|gb161.xeno|AW563861_T1 高粱 228   针对gb161.xeno生产更新的   针对gb161.xeno生产更新的
32 MAB20   MAB20.0.arabidopsis|gb154|T04691_T1 拟南芥 229
33   MAB20.1.arabidopsis|gb165|AT1G61890_T1 拟南芥 230   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
34 MAB21   MAB21.0.rice|gb154|BE230053_T1 水稻 231
35   MAB21.1.rice|gb157.2|BE230053_T1 水稻 232   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
36 MAB22   MAB22.0.tomato|gb154|BG791299_T1  番茄(tomato) 233
  234   经过审核
37 MAB23   MAB23.0.rice|gb154|BI305810_T1 水稻 235
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
38 MAB24   MAB24.0.rice|gb154|BI808273_T1 水稻 236
39   MAB24.7.rice|gb157.2|BI808273_CT1 水稻 经过审核
40 MAB25   MAB25.0.arabidopsis|6|AT1G27760.1 拟南芥 237
41   MAB25.1.arabidopsis|gb165|AT1G27760_T1 拟南芥 238   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
42 MAB26   MAB26.0.rice|gb154|AW155625_T1 水稻 239
43   MAB26.7.rice|gb157.2|BI305400_CT1 水稻 经过审核
44 MAB27   MAB27.0.arabidopsis|gb154|AY045660_T1 拟南芥 240
45   MAB27.7.arabidopsis|gb165|AT5G24120_CT1 拟南芥 经过审核
46 MAB28   MAB28.0.rice|gb154|BI795108_T1 水稻 241
47   MAB28.7.rice|gb157.2|BI795108_CT1 水稻 经过审核
48 MAB29   MAB29.0.arabidopsis|gb154|AU239137_T2 拟南芥 242
49   MAB29.1.arabidopsis|gb165|AT2G25600_T1 拟南芥 243   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
50 MAB30   MAB30.0.arabidopsis|gb154|AY062542_T1 拟南芥 244
51   MAB30.7.arabidopsis|gb165|AT1G70300_CT1 拟南芥 经过审核
52 MAB31   MAB31.0.soybean|gb154|BI968709_T1 大豆 245
53   MAB31.7.soybean|gb162|BI968709_CT1 大豆 246 经过审核 经过审核
54 MAB32   MAB32.0.rice|gb154|AF039532_T1 水稻 247
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
55 MAB33   MAB33.0.MAIZE|gb154|AI615215_T1   玉米(maize) 248
56   MAB33.1.MAIZE|gb164|AI615215_T1 玉米 249   针对gb164生产更新的
57 MAB34   MAB34.0.barley|gb154|TG_BF625450_T1 大麦 250
58   MAB34.1.barley|gb157.2|BF625450_T1 大麦 251   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
59 MAB35   MAB35.0.arabidopsis|gb154|AA651513_T1 拟南芥 252
60   MAB35.1.arabidopsis|gb165|AT2G16890_T1 拟南芥 253   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
61 MAB36   MAB36.0.arabidopsis|gb154|AU239340_T1 拟南芥 254
62   MAB36.1.arabidopsis|gb165|AT4G27570_T1 拟南芥 255   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
63 MAB37   MAB37.0.tomato|gb154|BG125939_T1 番茄 256
64   MAB37.7.tomato|gb164|BG125939_CT1 番茄 经过审核
65 MAB38   MAB38.0.wheat|gb154|BE492836_T1   小麦(wheat) 257
66   MAB38.7.wheat|gb164|BE492836_CT1 小麦 258 经过审核 经过审核
67 MAB39   MAB39.0.barley|gb154|AL500200_T1 大麦 259
68   MAB39.1.barley|gb157.2|AL500200_T1 大麦 260   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
69 MAB40   MAB40.0.rice|gb154|AA754628_T1 水稻 261
70   MAB40.7.rice|gb157.2|AA754628_CT1 水稻 经过审核
71 MAB41   MAB41.0.tomato|gb154|AI489494_T1 番茄 262
72   MAB41.7.tomato|gb164|AI489494_CT1 番茄 经过审核
73 MAB42   MAB42.0.sorghum|gb154|BE595950_T1 高粱 263
74   MAB42.7.sorghum|gb161.xeno|AI881418_CT1 高粱 264 经过审核 经过审核
75 MAB43   MAB43.0.arabidopsis|gb154|BE662945_T1 拟南芥 265
76   MAB43.1.arabidopsis|gb165|AT5G26920_T1 拟南芥 266   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
77 MAB44   MAB44.0.arabidopsis|gb154|H36025_T1 拟南芥 267
78   MAB44.1.arabidopsis|gb165|AT1G67360_T1 拟南芥 268   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
79 MAB45   MAB45.0.wheat|gb154|TG_BQ172359_T1 小麦 269
80   MAB45.1.wheat|gb164|BQ172359_T1 小麦 270   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
81 MAB46   MAB46.0.arabidopsis|gb154|AA389812_T1 拟南芥 271
82 MAB47   MAB47.0.sorghum|gb154|AW672286_T1 高粱 272
83   MAB47.7.sorghum|gb161.xeno|AI948276_CT1 高粱 273 经过审核 经过审核
84 MAB48   MAB48.0.rice|gb154|BI802161_T1 水稻 274
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
85   MAB48.7.rice|gb157.2|AU092454_CT1 水稻 275 经过审核 经过审核
86 MAB49   MAB49.0.MAIZE|gb154|TG_AI621810_T1 玉米 276
87   MAB49.7.MAIZE|gb164|AI621810C_T1 玉米 经过审核
88 MAB50   MAB50.0.arabidopsis|gb154|W43146_T1 拟南芥 277
89   MAB50.1.arabidopsis|gb165|AT5G48570_T1 拟南芥 278   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
90 MAB91   MAB91.0.arabidopsis|gb154|AU236480_T1 拟南芥 279
  280   经过审核
91 MAB96   MAB96.0.arabidopsis|gb154|Z27256_T1 拟南芥 281
92   MAB96.7.arabidopsis|gb165|AT5G03800_CT1 拟南芥 282 经过审核 经过审核
93 MAB99   MAB99.0.tomato|gb154|BG735056_T1 番茄 283
94 MAB100   MAB100.0.arabidopsis|gb154|Z37259_T1 拟南芥 284
95   MAB100.1.arabidopsis|gb165|AT1G01470_T1 拟南芥 285   针对gb165生产更新的   针对gb165生产更新的
96 MAB104   MAB104.0.rice|gb154|BE039215_T1 水稻 286
97   MAB104.1.rice|gb157.2|BE039215_T1 水稻 287   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
98 MAB121   MAB121.0.sugarcane|gb157|CA079500_T1  甘蔗(sugarcane) 288
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
99   MAB121.1.sugarcane|gb157.2|CA079500_T1 甘蔗 289   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
100 MAB122   MAB122.0.MAIZE|gb154|AI901344_T9 玉米 290
101 MAB123   MAB123.0.barley|gb157|BF626638_T1 大麦 291
102   MAB123.1.barley|gb157.2|BF626638_T1 大麦 292   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
103 MAB124   MAB124.0.sugarcane|gb157|CA284042_T1 甘蔗 293
104   MAB124.1.sugarcane|gb157.2|CA284042_T1 甘蔗 294   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
105 MAB125   MAB125.0.rice|gb157|CF957213_T1 水稻 295
106   MAB125.1.rice|gb157.2|CF957213_T1 水稻 296   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
107 MAB126   MAB126.0.grape|gb157|BQ797309_T1   葡萄(grape) 297
108   MAB126.1.grape|gb160|BQ797309_T1 葡萄 298   更新后产生gb160   更新后产生gb160
109 MAB127   MAB127.0.grape|gb157|CB971532_T1 葡萄 299
110   MAB127.1.grape|gb160|CB971532_T1 葡萄 300   更新后产生gb160   更新后产生gb160
111 MAB128   MAB128.0.sugarcane|gb157|CA142162_T1 甘蔗 301
112   MAB128.1.sugarcane|gb157.2|CA142162_T1 甘蔗 302   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
113 MAB129   MAB129.0.tomato|gb157|AI486106_T1 番茄 303
114   MAB129.1.tomato|gb164|AI486106_T1 番茄 304   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
115 MAB130   MAB130.0.canola|gb157|CD829694_T1  油菜(canola) 305
116 MAB131   MAB131.0.tomato|gb157|AW928843_T1 番茄 306
117   MAB131.1.tomato|gb164|AW928843_T1 番茄 307   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
118 MAB132   MAB132.0.barley|gb157|BF621624_T1 大麦 308
119 MAB133   MAB133.0.barley|gb157|BE411546_T1 大麦 309
120   MAB133.1.barley|gb157.2|BE411546_T1 大麦 310   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
121 MAB134   MAB134.0.barley|gb157|BE437407_T1 大麦 311
312   蛋白质生物信息学和经过组织的蛋白质
122 MAB135   MAB135.0.lotus|gb157|AI967693_T1 莲(lotus) 313
123   MAB135.1.lotus|gb157.2|AI967693_T1 莲 314   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
124 MAB136   MAB136.0.rice|gb157|AK058573_T1 水稻 315
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
125   MAB136.1.rice|gb157.2|AK058573_T1 水稻 316   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
126 MAB137   MAB137.0.barley|gb157|AL508624_T1 大麦 317   来自临时专利
127   MAB137.1.barley|gb157.2|AL508624_T1 大麦 318   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
128 MAB138   MAB138.0.potato|gb157|BI177281_T1   马铃薯(potato) 319   来自临时专利
129   MAB138.1.potato|gb157.2|BI177281_T1 马铃薯 320   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
130 MAB139   MAB139.0.cotton|gb157.2|AI727826_T1   棉花(cotton) 321   来自临时专利
131   MAB139.1.cotton|gb164|AI727826_T1 棉花 322   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
132 MAB140   MAB140.0.barley|gb157|BI778498_T1 大麦 323   来自临时专利
133   MAB140.1.barley|gb157.2|BI778498_T1 大麦 324   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
134 MAB141   MAB141.0.barley|gb157|BE421008_T1 大麦 325   来自临时专利
135 MAB142   MAB142.0.cotton|gb157.2|AI055631_T2 棉花 326   来自临时专利
136   MAB142.0.cotton|gb157.2|AI055631_T1 棉花 327   来自临时专利
137   MAB142.1.cotton|gb164|AW187041_T1 棉花 328   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
138 MAB143   MAB143.0.tomato|gb157|AI487157_T1 番茄 329   来自临时专利
139   MAB143.1.tomato|gb164|AI487157_T1 番茄 330   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
140 MAB144   MAB144.0.grape|gb157|CA814960_T1 葡萄 331   来自临时专利
141   MAB144.1.grape|gb160|CA814960_T1 葡萄 332   更新后产生gb160   更新后产生gb160
142 MAB145   MAB145.0.barley|gb157|BE413365_T1 大麦 333   来自临时专利
143 MAB146   MAB146.0.tomato|gb157|AI773927_T1 番茄 334   来自临时专利
144   MAB146.1.tomato|gb164|AI773927_T1 番茄 335   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
145 MAB147   MAB147.0.tobacco|gb157|EB446189_T1  烟草(tabacco) 336
146   MAB147.1.tobacco|gb162|EB446189_T1 烟草 337   针对gb162生产更新的   针对gb162生产更新的
147 MAB148   MAB148.0.medicago|gb157|AW256654_T1  苜蓿(medicago) 338
148   MAB148.1.medicago|gb157.2|AW256654_T1 苜蓿 339   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
149 MAB150   MAB150.0.canola|gb157|CD818831_T1 油菜 340
150   MAB150.1.canola|gb161|CD818831_T1 油菜 341   更新后产生gb161   更新后产生gb161
151 MAB151   MAB151.0.potato|gb157|BQ513540_T1 马铃薯 342
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
152   MAB151.1.potato|gb157.2|BQ513540_T1 马铃薯 343   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
153 MAB152   MAB152.0.grape|gb157|BQ798655_T1 葡萄 344
154   MAB152.1.grape|gb160|BQ798655_T1 葡萄 345   更新后产生gb160   更新后产生gb160
155 MAB153   MAB153.0.sugarcane|gb157|BQ533857_T1 甘蔗 346
156   MAB153.1.sugarcane|gb157.2|BQ533857_T1 甘蔗 347   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
157 MAB154   MAB154.0.sugarcane|gb157|BQ537570_T3 甘蔗 348
158   MAB154.0.sugarcane|gb157|BQ537570_T2 甘蔗 349
159   MAB154.0.sugarcane|gb157|BQ537570_T1 甘蔗 350
160   MAB154.1.sugarcane|gb157.2|BQ537570_T1 甘蔗 351   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
161 MAB155   MAB155.0.sorghum|gb157|AW676730_T1 高粱 352
162   MAB155.1.sorghum|gb161.xeno|AW676730_T1 高粱 353   针对gb161.xeno生产更新的   针对gb161.xeno生产更新的
163 MAB156   MAB156.0.tobacco|gb157|AB117525_T1 烟草 354
164   MAB156.1.tobacco|gb162|AB117525_T1 烟草 355   针对gb162生产更新的   针对gb162生产更新的
165 MAB157   MAB157.0.sugarcane|gb157|BQ533820_T2 甘蔗 356
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
166   MAB157.0.sugarcane|gb157|BQ533820_T1 甘蔗 357
167   MAB157.1.sugarcane|gb157.2|BQ533820_T1 甘蔗 358   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
168 MAB158   MAB158.0.cotton|gb157.2|AI054450_T1 棉花 359
169 MAB159   MAB159.0.canola|gb157|CD818468_T1 油菜 360
170 MAB160   MAB160.0.barley|gb157|BF622450_T1 大麦 361
171 MAB161   MAB161.0.poplar|gb157|BU896597_T1   白杨(poplar) 362
172   MAB161.1.poplar|gb157.2|BU896597_T1 白杨 363   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
173 MAB162   MAB162.0.sugarcane|gb157|BU102611_T1 甘蔗 364
174   MAB162.1.sugarcane|gb157.2|BU102611_T1 甘蔗 365   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
175 MAB163   MAB163.0.barley|gb157|AL501813_T1 大麦 366
176   MAB163.1.barley|gb157.2|AL501813_T1 大麦 367   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
177 MAB164   MAB164.0.barley|gb157|BF253543_T1 大麦 368
178   MAB164.1.barley|gb157.2|BF253543_T1 大麦 369   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
179 MAB165   MAB165.0.grape|gb157|BQ793123_T1 葡萄 370
180 MAB166   MAB166.0.poplar|gb157|CV228694_T1 白杨 371
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
181   MAB166.1.poplar|gb157.2|CV228694_T1 白杨 372   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
182 MAB167   MAB167.0.canola|gb157|CX278043_T1 油菜 373
183   MAB167.1.canola|gb161|CX278043_T1 油菜 374   更新后产生gb161   更新后产生gb161
184 MAB168   MAB168.0.grape|gb157|BG273815_T1 葡萄 375
185   MAB168.1.grape|gb160|BG273815_T1 葡萄 376   更新后产生gb160   更新后产生gb160
186 MAB169   MAB169.0.cotton|gb157.2|COTLEA14B_T1 棉花 377
187   MAB169.1.cotton|gb164|COTLEA14B_T1 棉花 378   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
188 MAB170   MAB170.0.barley|gb157|BE412505_T1 大麦 379
189   MAB170.1.barley|gb157.2|BE412505_T1 大麦 380   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
190 MAB171   MAB171.0.sugarcane|gb157|CA123631_T1 甘蔗 381
191   MAB171.1.sugarcane|gb157.2|CA123631_T1 甘蔗 382   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
192 MAB172   MAB172.0.sugarcane|gb157|BQ478980_T1 甘蔗 383
193   MAB172.0.sugarcane|gb157|BQ478980_T2 甘蔗 384
194 MAB173   MAB173.0.barley|gb157|BY836652_T1 大麦 385
  SEQIDNO：多核苷酸 基因名称 簇名称 生物体 SEQIDNO：多肽 多核苷酸说明 多肽说明
195   MAB173.1.barley|gb157.2|BY836652_T1 大麦 386   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
196 MAB174   MAB174.0.barley|gb157|BG342904_T1 大麦 387
197   MAB174.1.barley|gb157.2|BG342904_T1 大麦 388   针对gb157.2生产更新的   针对gb157.2生产更新的
198 MAB175   MAB175.0.tomato|gb157|BG126606_T1 番茄 389
199   MAB175.0.tomato|gb157|BG126606_T2 番茄 390
200   MAB175.1.tomato|gb164|BG126606_T1 番茄 391   针对gb164生产更新的   针对gb164生产更新的
1653 MAB66   MAB66.0.tomato|gb164|BG124832_CT1 番茄 1651
表1.
业已用BLAST软件使用BlastX算法，从数据库中鉴定了与所鉴定的ABST基因具有显著同源性的多核苷酸和多肽。查询核苷酸序列为SEQ ID NO：1、3、5、7、9、10、11、13、15、16、17、19、21、23、25、26、28、29、30、32、34、36、37、38、40、42、44、46、48、50、52、54、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、82、84、86、88、90、91、93、94、96、98、100、101、103、105、107、109、111、113、115、116、118、119、121、122、124、126、128、130、132、134、135、138、140、142、143、145、147、149、151、153、155、157、161、163、165、168、169、170、171、173、175、177、179、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198和1653，所鉴定的ABST同源物提供在下表2中。
表2
ABST基因同源物
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
392 apple|gb157.3|CN444532_T1 苹果(apple) 961   Seq357.MAB157.15.sugarcane 85
393 apple|gb157.3|CN445371_T1   苹果 962 Seq376.MAB168.15.grape 87
394 apple|gb157.3|CN878026_T1   苹果 963   Seq350.MAB154.15.sugarcane 80
  395   apple|gb157.3|CK900582_T1   苹果 964 Seq321.MAB139.15.cotton 85
  396   apple|gb157.3|CN888579_T2   苹果 965 Seq256.MAB37.15.tomato 86
  397   apple|gb157.3|CN888579_T3   苹果 966 Seq256.MAB37.15.tomato 81
  398   apple|gb157.3|CO066535_T1   苹果 967 Seq370.MAB165.15.grape 84
  399   apple|gb157.3|CN888579_T1   苹果 968 Seq256.MAB37.15.tomato 86
  400   apple|gb157.3|CN496860_T1   苹果 969 Seq321.MAB139.15.cotton 81
  401   apricot|gb157.2|BQQ134642_T1   杏(apricot)   970   Seq329.MAB143.15.tomato   82
  402   apricot|gb157.2|CB822088_T1   杏 971 Seq256.MAB37.15.tomato 88
403   aquilegia|gb157.3|DR915383_T1   耧斗菜(aquilegia) 972 Seq321.MAB139.15.cotton 83
404   aquilegia|gb157.3|DR913600_T1   耧斗菜 973 Seq344.MAB152.15.grape 83
405   aquilegia|gb157.3|DR920101_T1   耧斗菜 974 Seq370.MAB165.15.grape 87
406   aquilegia|gb157.3|DT727583_T1   耧斗菜 975 Seq311.MAB134.15.barley 80
407   aquilegia|gb157.3|DR918523_T1   耧斗菜 976 Seq376.MAB168.15.grape 82
408   arabidopsis|gb165|AT1G67890_T2   拟南芥 977 Seq263.MAB42.15.sorghum 80
409   arabidopsis|gb165|AT1G78070_T2   拟南芥 978   Seq207.MAB6.15.arabidopsis 97
410   arabidopsis|gb165|AT1G52890_T3   拟南芥 979   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 85
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
411   arabidopsis|gb165|AT3G06620_T1  拟南芥 980   Seq357.MAB157.15.sugarcane 80
412   arabidopsis|gb165|AT1G67890_T1  拟南芥 981 Seq263.MAB42.15.sorghum 80
413   arabidopsis|gb165|AT5G14860_T1  拟南芥 982 Seq341.MAB150.15.canola 80
414   arabidopsis|gb165|AT5G49470_T2  拟南芥 983 Seq263.MAB42.15.sorghum 81
415   arabidopsis|gb165|AT5G49470_T1  拟南芥 984 Seq263.MAB42.15.sorghum 81
416   arabidopsis|gb165|AT3G24170_T1  拟南芥 985 Seq376.MAB168.15.grape 80
417   arabidopsis|gb165|AT1G11670_T1  拟南芥 986   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 84
418   arabidopsis|gb165|AT3G25230_T1  拟南芥 987 Seq370.MAB165.15.grape 80
419   arabidopsis|gb165|AT4G32500_T2  拟南芥 988   Seq242.MAB29.15.arabidopsis 81
420   arabidopsis|gb165|AT5G06760_T1  拟南芥 989 Seq373.MAB167.15.canola 84
421   arabidopsis|gb165|AT4G27410_T3  拟南芥 990   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 94
422   arabidopsis|gb165|AT4G27560_T1  拟南芥 991   Seq254.MAB36.15.arabidopsis 94
423   artemisia|gb164|EY047508_T1  蒿(artemisia)   992   Seq321.MAB139.15.cotton   80
424   artemisia|gb164|EY060376_T1  蒿 993 Seq376.MAB168.15.grape 85
425   artemisia|gb164|EY089381_T1  蒿 994 Seq256.MAB37.15.tomato 86
426   artemisia|gb164|EY042537_T1  篙 995   Seq349.MAB154.15.sugarcane 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
427   b_juncea|gb164|EVGN00102008310737_T1   芥菜(b_juncea) 996 Seq360.MAB159.15.canola 97
428   b_juncea|gb164|EVGN08486004170336_T1   芥菜 997 Seq373.MAB167.15.canola 94
429   b_juncea|gb164|EVGN00429914360666_T1   芥菜 998 Seq370.MAB165.15.grape 83
430   b_juncea|gb164|EVGN00258430752139P1_T1   芥菜 999 Seq376.MAB168.15.grape 80
431   b_juncea|gb164|EVGN01568909822952_T1   芥菜 1000 Seq373.MAB167.15.canola 98
432   b_oleracea|gb161|DY029719_T1   甘蓝(b_oleracea) 1001 Seq370.MAB165.15.grape 82
433   b_oleracea|gb161|AM385106_T1   甘蓝 1002 Seq360.MAB159.15.canola 96
434   b_oleracea|gb161|AM387179_T1   甘蓝 1003 Seq360.MAB159.15.canola 91
435   b_oleracea|gb161|AM061306_T1   甘蓝 1004   Seq284.MAB100.15.arabidopsis 86
436   b_oleracea|gb 161|AB125639_T1   甘蓝 1005 Seq376.MAB168.15.grape 80
437 b_rapa|gb162|EE523634_T1   芜菁(b_rapa)   1006   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 92
438 b_rapa|gb162|EX024909_T1   芜菁 1007   Seq217.MAB13.15.arabidopsis 83
439 b_rapa|gb162|EX070158_T2   芜菁 1008   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 95
440 b_rapa|gb162|CA992067_T1   芜菁 1009 Seq360.MAB159.15.canola 94
441 b_rapa|gb162|EE520623_T1   芜菁 1010   Seq280.MAB91.10.arabidopsis 89
442 b_rapa|gb162|CV545896_T1   芜菁 1011   Seq208.MAB7.15.arabidopsis 88
443 b_rapa|gb162|CO749564_T1   芜菁 1012 Seq370.MAB165.15.grape 82
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
444 b_rapa|gb162|CV434105_T1   芜菁 1013   Seq217.MAB13.15.arabidopsis 83
445 b_rapa|gb162|AF008441_T1   芜菁 1014 Seq376.MAB168.15.grape 80
446 b_rapa|gb162|EX070158_T1   芜菁 1015   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 86
447 b_rapa|gb162|EX088727_T1   芜菁 1016   Seq271.MAB46.15.arabidopsis 93
448 b_rapa|gb162|BG544469_T1   芜菁 1017 Seq360.MAB159.15.canola 82
449 b_rapa|gb162|DN962625_T1   芜菁 1018   Seq237.MAB25.15.arabidopsis 85
450 b_rapa|gb162|CV544672_T1   芜菁 1019   Seq284.MAB100.15.arabidopsis 88
451 barley|gb157.2|BI947678_T1   大麦 1020 Seq368.MAB164.15.barley 92
452 barley|gb157.2|AV835424_T1   大麦 1021 Seq257.MAB38.15.wheat 97
  453   barley|gb157.2|BE455969_T1   大麦 1022 Seq290.MAB122.15.maize 84
  454   barley|gb157.2|BE519575_T2   大麦 1023 Seq263.MAB42.15.sorghum 81
455 barley|gb157.2|BF625959_T1   大麦 1024 Seq221.MAB15.15.sorghum 83
456 barley|gb157.2|BQ461470_T1   大麦 1025   Seq356.MAB157.15.sugarcane 82
457   basilicum|gb157.3|DY333033_T1   小冠薰(basilicum) 1026 Seq256.MAB37.15.tomato 87
  458   bean|gb164|CB542809_T1   菜豆(bean)   1027   Seq376.MAB168.15.grape   80
459 bean|gb164|CV529652_T1   菜豆 1028 Seq370.MAB165.15.grape 83
460 bean|gb164|CB543453_T1   菜豆 1029 Seq368.MAB164.15.barley 80
  461   bean|gb164|CV535253_T1   菜豆 1030 Seq256.MAB37.15.tomato 88
462 beet|gb162|BQ592516_T1   甜菜(beet)   1031   Seq256.MAB37.15.tomato   86
463 beet|gb162|BQ488223_T1   甜菜 1032   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 88
464 beet|gb162|BQ583768_T1   甜菜 1033 Seq385.MAB173.15.barley 85
465 beet|gb162|BQ591963_T1   甜菜 1034 Seq368.MAB164.15.barley 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
466 brachypodium|gb161.xeno|BE519575_T1   短柄草(brachypodium) 1035 Seq356.MAB157.15.sugarcane 85
467   brachypodium|gb161.xeno|BG368321_T1   短柄草 1036 Seq247.MAB32.15.rice 81
468   brachypodium|gb161.xeno|BE400652_T1   短柄草 1037 Seq368.MAB164.15.barley 95
469   brachypodium|gb161.xeno|AL502884_T1   短柄草 1038 Seq210.MAB8.15.rice 82
470   brachypodium|gb161.xeno|BY836652_T1   短柄草 1039 Seq385.MAB173.15.barley 90
471   brachypodium|gb161.xeno|BE414917_T1   短柄草 1040 Seq309.MAB133.15.barley 93
472   brachypodium|gb161.xeno|BF202085_T1   短柄草 1041 Seq291.MAB123.15.barley 83
473   brachypodium|gb161.xeno|BE406378_T1   短柄草 1042 Seq219.MAB14.15.rice 80
474   brachypodium|gb161.xeno|BE517562_T1   短柄草 1043 Seq366.MAB163.15.barley 85
475   brachypodium|gb161.xeno|BE420294_T1   短柄草 1044 Seq290.MAB122.15.maize 85
476   brachypodium|gb161.xeno|BG369416_T1   短柄草 1045 Seq270.MAB45.15.wheat 89
477   brachypodium|gb161.xeno|BE406039_T2   短柄草 1046 Seq241.MAB28.15.rice 93
478   brachypodium|gb161.xeno|BE418087_T1   短柄草 1047 Seq325.MAB141.15.barley 86
479   brachypodium|gb161.xeno|BE470780_T1   短柄草 1048 Seq221.MAB15.15.sorghum 81
480   brachypodium|gb161.xeno|AV835424_T1   短柄草 1049 Seq257.MAB38.15.wheat 93
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
481   brachypodium|gb161.xeno|BE398656_T1   短柄草 1050 Seq308.MAB132.15.barley 93
482   brachypodium|gb161.xeno|BE437407_T1   短柄草 1051 Seq311.MAB134.15.barley 98
483   brachypodium|gb161.xeno|BE406039_T3   短柄草 1052 Seq333.MAB145.15.barley 81
484   brachypodium|gb161.xeno|BE490408_T1   短柄草 1053 Seq264.MAB42.10.sorghum 80
485   brachypodium|gb161.xeno|BE403745_T1   短柄草 1054 Seq379.MAB170.15.barley 92
486   brachypodium|gb161.xeno|BE490591_T1   短柄草 1055 Seq366.MAB163.15.barley 87
487   brachypodium|gb161.xeno|BQ461470_T2   短柄草 1056   Seq356.MAB157.15.sugarcane 85
488   brachypodium|gb161.xeno|BE517562_T2   短柄草 1057 Seq366.MAB163.15.barley 83
489   brachypodium|gb161.xeno|BE413341_T1   短柄草 1058 Seq336.MAB147.15.tobacco 80
490   brachypodium|gb161.xeno|BE515529_T1   短柄草 1059 Seq259.MAB39.15.barley 96
491   brachypodium|gb161.xeno|DV471778_T1   短柄草 1060   Seq348.MAB154.15.sugarcane 83
492 canola|gb161|EL587045_T1   油菜 1061   Seq277.MAB50.15.arabidopsis 87
493 canola|gb161|CX279297_T1   油菜 1062   Seq280.MAB91.10.arabidopsis 85
494 canola|gb161|CD815143_T1   油菜 1063 Seq222.MAB16.15.rice 80
495 canola|gb161|CD831036_T1   油菜 1064   Seq284.MAB100.15.arabidopsis 86
496 canola|gb161|EE466962_T1   油菜 1065 Seq360.MAB159.15.canola 83
  497   canola|gb161|CN726580_T1   油菜 1066 Seq305.MAB130.15.canola 89
498 canola|gb161|CD829644_T1   油菜 1067 Seq373.MAB167.15.canola 86
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
499 canola|gb161|AY245887_T1   油菜 1068   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 87
500 canola|gb161|EE411591_T1   油菜 1069   Seq207.MAB6.15.arabidopsis 88
501 canola|gb161|DY020345_T1   油菜 1070   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 92
  502   canola|gb161|CD820718_T1   油菜 1071 Seq360.MAB159.15.canola 95
  503   canola|gb161|CX189134_T1   油菜 1072 Seq221.MAB15.15.sorghum 81
504 canola|gb161|EG021120_T1   油菜 1073 Seq360.MAB159.15.canola 83
505 canola|gb161|ES906182_T1   油菜 1074   Seq244.MAB30.15.arabidopsis 92
506 canola|gb161|ES911977_T1   油菜 1075   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 88
507 canola|gb161|CD814410_T1   油菜 1076   Seq217.MAB13.15.arabidopsis 81
508 canola|gb161|ES904177_T1   油菜 1077   Seq208.MAB7.15.arabidopsis 87
509 canola|gb161|CD813775_T1   油菜 1078 Seq370.MAB165.15.grape 82
510 canola|gb161|CD824419_T1   油菜 1079   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 94
511 canola|gb161|CD825454_T1   油菜 1080   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 90
512 canola|gb161|CD834184_T1   油菜 1081   Seq284.MAB100.15.arabidopsis 88
  513   canola|gb161|EE469078_T1   油菜 1082 Seq370.MAB165.15.grape 83
514   canola|gb161|GFXAJ535111X1_T1   油菜 1083 Seq305.MAB130.15.canola 99
515 canola|gb161|EE448267_T1   油菜 1084 Seq222.MAB16.15.rice 80
516 canola|gb161|CX193415_T1   油菜 1085   Seq237.MAB25.15.arabidopsis 85
517 canola|gb161|CD813278_T1   油菜 1086 Seq375.MAB168.15.grape 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
518   castorbean|gb160|MDL28401M000077_T1   蓖麻(castorbean) 1087 Seq370.MAB165.15.grape 86
519   castorbean|gb160|EE258294_T1   蓖麻 1088 Seq256.MAB37.15.tomato 87
520   castorbean|gb160|MDL28066M000021_T1   蓖麻 1089 Seq370.MAB165.15.grape 85
521   castorbean|gb160|AM267339_T1   蓖麻 1090 Seq222.MAB16.15.rice 80
522   castorbean|gb160|EG659656_T1   蓖麻 1091 Seq376.MAB168.15.grape 83
523   castorbean|gb160|EG656754_T1   蓖麻 1092 Seq263.MAB42.15.sorghum 82
524   castorbean|gb160|EE259826_T1   蓖麻 1093 Seq362.MAB161.15.poplar 83
525   castorbean|gb160|EG659299_T1   蓖麻 1094 Seq300.MAB 127.15.grape 81
526   castorbean|gb160|EE259565_T1   蓖麻 1095 Seq276.MAB49.15.maize 80
527   castorbean|gb160|EE255133_T1   蓖麻 1096 Seq321.MAB139.15.cotton 84
528   castorbean|gb160|MDL29822M003364_T1   蓖麻 1097 Seq336.MAB147.15.tobacco 82
529 castorbean|gb160|EG661241_T1 蓖麻 1098 Seq371.MAB166.15.poplar 85
530   centaurea|gb161|EH713943_T1   矢车菊(centaurea) 1099 Seq321.MAB139.15.cotton 82
531   centaurea|gb161|EH724589_T1   矢车菊 1100 Seq256.MAB37.15.tomato 84
532   centaurea|gb161|EH717520_T1   矢车菊 1101 Seq329.MAB143.15.tomato 80
533   centaurea|gb161|EH711566_T1   矢车菊 1102 Seq370.MAB165.15.grape 81
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
534   centaurea|gb161|EH713337_T1   矢车菊 1103 Seq259.MAB39.15.barley 81
535   centaurea|gb161|EH713628_T1   矢车菊 1104 Seq376.MAB168.15.grape 83
536   centaurea|gb161|EH738263_T1   矢车菊 1105 Seq385.MAB173.15.barley 80
537   centaurea|gb161|EH727723_T1   矢车菊 1106 Seq256.MAB37.15.tomato 84
538   cichorium|gb161|DT212291_T1   菊苣(cichorium) 1107 Seq370.MAB165.15.grape 80
539   cichorium|gb161|DT211081_T1   菊苣 1108 Seq376.MAB168.15.grape 83
540   cichorium|gb161|EH692437_T1   菊苣 1109 Seq256.MAB37.15.tomato 86
541   cichorium|gb161|DT212218_T1   菊苣 1110 Seq256.MAB37.15.tomato 89
  542   citrus|gb157.2|CB290836_T1   柑橘(citrus)   1111   Seq376.MAB168.15.grape   85
543 citrus|gb157.2|BQ624861_T1   柑橘 1112 Seq276.MAB49.15.maize 82
544 citrus|gb157.2|BQ624727_T1   柑橘 1113 Seq370.MAB165.15.grape 85
545 citrus|gb157.2|CB290836_T2   柑橘 1114 Seq376.MAB168.15.grape 86
546 citrus|gb157.2|CX672218_T2   柑橘 1115   Seq357.MAB157.15.sugarcane 83
547 citrus|gb157.2|CF504250_T1   柑橘 1116 Seq222.MAB16.15.rice 82
548 citrus|gb157.2|CK933948_T1   柑橘 1117 Seq256.MAB37.15.tomato 86
549 clover|gb162|BB926896_T1   三叶草(clover) 1118 Seq256.MAB37.15.tomato 82
  550   clover|gb162|BB904696_T1   三叶草 1119 Seq263.MAB42.15.sorghum 84
  551   coffea|gb157.2|DV676382_T1   咖啡(coffea)   1120   Seq256.MAB37.15.tomato   91
552 coffea|gb157.2|DV688680_T1   咖啡 1121 Seq332.MAB144.15.grape 83
553 coffea|gb157.2|DQ124044_T1   咖啡 1122 Seq303.MAB129.15.tomato 80
  554   cotton|gb164|BF268276_T1   棉花 1123 Seq370.MAB165.15.grape   84
555 cotton|gb164|CO113031_T1   棉花 1124 Seq319.MAB138.15.potato 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
  556   cotton|gb164|AI730186_T1   棉花 1125 Seq256.MAB37.15.tomato 81
  557   cotton|gb_164|CO103100_T1   棉花 1126 Seq256.MAB37.15.tomato 86
  558   cotton|gb164|BE051970_T1   棉花 1127 Seq370.MAB165.15.grape 84
  559   cotton|gb164|AI725698_T1   棉花 1128 Seq376.MAB168.15.grape 85
  560   cotton|gb164|AI728290_T1   棉花 1129 Seq370.MAB165.15.grape 82
  561   cotton|gb164|AI055482_T1   棉花 1130 Seq370.MAB165.15.grape 85
  562   cotton|gb164|ES794517_T1   棉花 1131 Seq327.MAB142.15.cotton 81
  563   cotton|gb164|BF268276_T2   棉花 1132 Seq370.MAB165.15.grape 84
  564   cotton|gb164|CO109448_T1   棉花 1133 Seq376.MAB168.15.grape 83
  565   cotton|gb164|DT459182_T1   棉花 1134 Seq375.MAB168.15.grape 84
566 cotton|gb164|BG441162_T1   棉花 1135 Seq256.MAB37.15.tomato 85
567 cowpea|gb165|FF390508_T1   豇豆(cowpea) 1136 Seq256.MAB37.15.tomato 84
568 cowpea|gb165|FF390203_T1   豇豆 1137 Seq259.MAB39.15.barley 86
569 cowpea|gb165|DQ267475_T1   豇豆 1138 Seq376.MAB168.15.grape 83
570 cowpea|gb165|FF382851_T1   豇豆 1139 Seq224.MAB17.15.soybean 89
571 cowpea|gb165|FF394009_T1   豇豆 1140 Seq370.MAB165.15.grape 85
572   dandelion|gb161|DQ160099_T1   蒲公英(dandelion) 1141 Seq376.MAB168.15.grape 82
573   dandelion|gb161|DY823013_T1   蒲公英 1142 Seq256.MAB37.15.tomato 82
574   dandelion|gb161|DY820394_T2   蒲公英 1143 Seq256.MAB37.15.tomato 88
575   dandelion|gb161|DY813450_T2   蒲公英 1144 Seq256.MAB37.15.tomato 85
576   dandelion|gb161|DY820394_T1   蒲公英 1145 Seq256.MAB37.15.tomato 87
577 fescue|gb161|DT687914_T1   牛毛草(fescue) 1146 Seq290.MAB122.15.maize 93
  578   fescue|gb161|DT702477_T1   牛毛草 1147 Seq291.MAB123.15.barley 87
  579   fescue|gb161|DT705881_T1   牛毛草 1148 Seq311.MAB134.15.barley   96
580 fescue|gb161|DT682501_T1   牛毛草 1149 Seq321.MAB139.15.cotton 82
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
  581   fescue|gb161|DT699000_T1  牛毛草 1150 Seq309.MAB133.15.barley 90
  582   fescue|gb161|DT706685_T1  牛毛草 1151 Seq259.MAB39.15.barley 96
  583   fescue|gb161|DT698326_T1  牛毛草 1152 Seq368.MAB164.15.barley 95
  584   fescue|gb161|DT677453_T1  牛毛草 1153 Seq379.MAB170.15.barley 95
  585   fescue|gb161|DT674734_T1  牛毛草 1154 Seq333.MAB145.15.barley 88
  586   ginger|gb164|DY377113_T1  姜(ginger)   1155   Seq223.MAB16.15.rice   81
  587   grape|gb160|BQ792651_T1  葡萄 1156 Seq222.MAB16.15.rice 84
588 grape|gb160|BQ793581_T1  葡萄 1157 Seq371.MAB166.15.poplar 80
589 iceplant|gb164|BM658279_T1  冰叶日中花(iceplant) 1158 Seq376.MAB168.15.grape 83
  590   iceplant|gb164|BE034140_T1  冰叶日中花 1159 Seq303.MAB129.15.tomato 81
591   ipomoea|gb157.2|AU224303_T1  番薯(ipomoea) 1160 Seq256.MAB37.15.tomato 91
592   ipomoea|gb157.2|AU224807_T1  番薯 1161 Seq385.MAB173.15.barley 80
593   ipomoea|gb157.2|CJ758382_T1  番薯 1162 Seq371.MAB166.15.poplar 83
594   lettuce|gb157.2|DW048067_T1  莴苣(lettuce)   1163   Seq256.MAB37.15.tomato   87
595   lettuce|gb157.2|DW046482_T1  莴苣 1164 Seq256.MAB37.15.tomato 85
596   lettuce|gb157.2|DW062524_T1  莴苣 1165 Seq259.MAB39.15.barley 81
597   lettuce|gb157.2|DW048641_T1  莴苣 1166 Seq370.MAB165.15.grape 80
598   lettuce|gb157.2|DW055618_T1  莴苣 1167 Seq371.MAB166.15.poplar 80
599 lettuce|gb157.2|DY961700_T2  莴苣 1168   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 83
600   lettuce|gb157.2|DW075962_T1  莴苣 1169 Seq256.MAB37.15.tomato 87
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
601   lettuce|gb157.2|DW047202_T1   莴苣 1170 Seq376.MAB168.15.grape 83
602 lotus|gb157.2|BF177835_T1   莲 1171 Seq256.MAB37.15.tomato 90
603 lotus|gb157.2|BW601503_T1   莲 1172   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 84
604 maize|gb164|T15319_T2   玉米 1173 Seq276.MAB49.15.maize 96
605 maize|gb164|AI649734_T1   玉米 1174 Seq264.MAB42.10.sorghum 90
606 maize|gb164|BE638692_T1   玉米 1175 Seq228.MAB19.15.sorghum 88
607 maize|gb164|AW498283_T1   玉米 1176 Seq210.MAB8.15.rice 80
608 maize|gb164|AI622375_T1   玉米 1177 Seq309.MAB133.15.barley 90
609 maize|gb164|BQ034409_T1   玉米 1178 Seq290.MAB122.15.maize 100
610 maize|gb164|EC895235_T1   玉米 1179 Seq210.MAB8.15.rice 86
611 maize|gb164|AI947795_T2   玉米 1180 Seq325.MAB141.15.barley 80
612 maize|gb164|AI947974_T1   玉米 1181 Seq227.MAB19.15.sorghum 93
613 maize|gb164|AI619086_T1   玉米 1182   Seq346.MAB153.15.sugarcane 95
614 maize|gb164|AA143925_T1   玉米 1183 Seq221.MAB15.15.sorghum 94
615 maize|gb164|AW179463_T1   玉米 1184 Seq321.MAB139.15.cotton 82
616 maize|gb164|BE051802_T1   玉米 1185 Seq231.MAB21.15.rice 89
617 maize|gb164|AI942091_T1   玉米 1186 Seq309.MAB133.15.barley 89
618 maize|gb164|AI944064_T1   玉米 1187   Seq383.MAB172.15.sugarcane 96
619 maize|gb164|T15319_T1   玉米 1188 Seq276.MAB49.15.maize 96
620 maize|gb164|AI782993_T1   玉米 1189 Seq241.MAB28.15.rice 82
621 maize|gb164|T26945_T1   玉米 1190 Seq370.MAB165.15.grape 80
622 maize|gb164|AI941749_T1   玉米 1191 Seq269.MAB45.15.wheat 91
623 maize|gb164|AI891255_T1   玉米 1192 Seq311.MAB134.15.barley 95
624 maize|gb164|CD975046_T1   玉米 1193 Seq203.MAB3.15.rice 88
625 maize|gb164|AW360563_T1   玉米 1194 Seq241.MAB28.15.rice 81
626 maize|gb164|AI901860_T1   玉米 1195 Seq259.MAB39.15.barley 85
627 maize|gb164|AI948098_T1   玉米 1196   Seq381.MAB171.15.sugarcane 95
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
628 maize|gb164|AI444730_T1   玉米 1197 Seq241.MAB28.15.rice 83
629 maize|gb164|AW216308_T1   玉米 1198   Seq288.MAB121.15.sugarcane 89
630 maize|gb164|BM268089_T1   玉米 1199   Seq381.MAB171.15.sugarcane 92
631 maize|gb164|A1438597_T1   玉米 1200   Seq352.MAB155.15.sorghum 91
632 maize|gb164|AW927739_T1   玉米 1201   Seq350.MAB154.15.sugarcane 97
633 maize|gb164|AI891255_T2   玉米 1202 Seq311.MAB134.15.barley 95
634 maize|gb164|AI920760_T1   玉米 1203 Seq286.MAB104.15.rice 89
635   medicago|gb157.2|AI974487_T1   苜蓿 1204 Seq370.MAB165.15.grape 87
636   medicago|gb157.2|BE325770_T1   苜蓿 1205 Seq256.MAB37.15.tomato 88
637   medicago|gb157.2|AW685603_T1   苜蓿 1206 Seq376.MAB168.15.grape 82
638   medicago|gb157.2|AL368329_T1   苜蓿 1207 Seq311.MAB134.15.barley 80
639   medicago|gb157.2|AW688497_T1   苜蓿 1208 Seq370.MAB165.15.grape 80
640   medicago|gb157.2|AL377093_T1   苜蓿 1209 Seq224.MAB17.15.soybean 80
641   medicago|gb157.2|AI974241_T1   苜蓿 1210 Seq334.MAB146.15.tomato 83
642   medicago|gb157.2|BF632135_T1   苜蓿 1211 Seq344.MAB152.15.grape 85
  643   melon|gb165|DV633691_T1   瓜(melon)   1212   Seq376.MAB168.15.grape   80
644 melon|gb165|DV632564_T1   瓜 1213 Seq368.MAB164.15.barley 80
645 melon|gb165|DV633584_T1   瓜 1214 Seq344.MAB152.15.grape 86
646 melon|gb165|AM714958_T1   瓜 1215 Seq259.MAB39.15.barley 81
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
647   nicotiana_benthamiana|gb162|EH364164_T1   nicotiana_benthamiana 1216 Seq256.MAB37.15.tomato 95
  648   oat|gb164|CN816769_T1   燕麦(oat)   1217   Seq368.MAB164.15.barley   94
  649   oat|gb164|BE439108_T1   燕麦 1218 Seq312.MAB134.10.barley 85
  650   onion|gb162|CF437899_T1   洋葱(onion)   1219   Seq256.MAB37.15.tomato   81
  651   onion|gb162|CF437716_T1   洋葱 1220 Seq276.MAB49.15.maize 82
652 onion|gb162|CF439314_T1   洋葱 1221 Seq370.MAB165.15.grape 80
653 papaya|gb165|EX245596_T1   番木瓜(papaya) 1222 Seq370.MAB165.15.grape 88
  654   papaya|gb165|EX299345_T1   番木瓜 1223 Seq263.MAB42.15.sorghum 82
  655   papaya|gb165|EX248971_T1   番木瓜 1224 Seq362.MAB161.15.poplar 86
  656   papaya|gb165|EX227965_T1   番木瓜 1225 Seq332.MAB144.15.grape 83
  657   papaya|gb165|EX264060_T1   番木瓜 1226 Seq376.MAB168.15.grape 89
  658   papaya|gb165|EX291966_T1   番木瓜 1227 Seq370.MAB165.15.grape 82
  659   peach|gb157.2|BU039922_T1   桃(peach)   1228   Seq300.MAB127.15.grape   82
660 peach|gb157.2|BU039373_T1   桃 1229 Seq370.MAB165.15.grape 83
661 peach|gb157.2|AJ631618_T1   桃 1230 Seq276.MAB49.15.maize 80
662 peach|gb157.2|BU040470_T1   桃 1231 Seq376.MAB168.15.grape 89
663 peach|gb157.2|BU039381_T1   桃 1232 Seq256.MAB37.15.tomato 88
664 peanut|gb161|ES754023_T1   花生 1233 Seq332.MAB144.15.grape 80
  665   peanut|gb161|EH043199_T1   花生 1234 Seq256.MAB37.15.tomato 88
666   pepper|gb157.2|BM063531_T1   胡椒(pepper)   1235   Seq256.MAB37.15.tomato   96
667   pepper|gb157.2|BM062846_T1   胡椒 1236 Seq221.MAB15.15.sorghum 82
668   pepper|gb157.2|BM061776_T1   胡椒 1237 Seq329.MAB143.15.tomato 90
669   pepper|gb157.2|BM064151_T1   胡椒 1238 Seq306.MAB131.15.tomato 88
670   pepper|gb157.2|BM061313_T1   胡椒 1239   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 86
671 pepper|gb157.2|BI480604_T1   胡椒 1240 Seq276.MAB49.15.maize 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
672   periwinkle|gb164|EG559012_T1   玉黍螺(periwinkle) 1241 Seq259.MAB39.15.barley 80
673   petunia|gb157.2|CV292753_T1   矮牵牛(petunia) 1242 Seq263.MAB42.15.sorghum 80
674   petunia|gb157.2|CV298220_T1   矮牵牛 1243 Seq283.MAB99.15.tomato 81
675 pine|gb157.2|DR088714_T1   松树(pine)   1244   Seq357.MAB157.15.sugarcane 80
676 pine|gb157.2|AW290504_T1   松树 1245 Seq344.MAB152.15.grape 82
677   pineapple|gb157.2|CO731309_T1   菠萝(pineapple) 1246 Seq222.MAB16.15.rice 83
678   pineapple|gb157.2|DT336648_T1   菠萝 1247 Seq376.MAB168.15.grape 81
679   pineapple|gb157.2|CO731994_T1   菠萝 1248 Seq219.MAB14.15.rice 80
680 poplar|gb157.2|AI162293_T1   白杨 1249 Seq298.MAB126.15.grape 82
681 poplar|gb157.2|AI165439_T1   白杨 1250 Seq298.MAB126.15.grape 80
682 poplar|gb157.2|AI162293_T3   白杨 1251 Seq298.MAB126.15.grape 80
683 poplar|gb157.2|BI120274_T3   白杨 1252 Seq256.MAB37.15.tomato 81
684 poplar|gb157.2|BI120274_T2   白杨 1253 Seq344.MAB152.15.grape 89
685 poplar|gb157.2|BF299457_T1   白杨 1254 Seq370.MAB165.15.grape 85
686 poplar|gb157.2|BI120274_T1   白杨 1255 Seq344.MAB152.15.grape 86
687 poplar|gb157.2|BI122516_T1   白杨 1256 Seq362.MAB161.15.poplar 90
  688   poplar|gb157.2|BU821689_T1   白杨 1257 Seq321.MAB139.15.cotton 81
  689   poplar|gb157.2|AI166955_T1   白杨 1258 Seq344.MAB152.15.grape 87
690 poplar|gb157.2|BI069450_T1   白杨 1259 Seq376.MAB168.15.grape 85
  691   potato|gb157.2|BG594910_T1   马铃薯 1260 Seq370.MAB165.15.grape 82
  692   potato|gb157.2|AJ487418_T1   马铃薯 1261 Seq321.MAB139.15.cotton 82
693 potato|gb157.2|BQ516076_T2   马铃薯 1262 Seq389.MAB175.15.tomato 97
694 potato|gb157.2|BE921143_T1   马铃薯 1263   Seq349.MAB154.15.sugarcane 80
695 potato|gb157.2|BG592541_T1   马铃薯 1264 Seq256.MAB37.15.tomato 90
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
  696   potato|gb157.2|BF052848_T1   马铃薯 1265 Seq321.MAB139.15.cotton 81
  697   potato|gb157.2|BF460150_T1   马铃薯 1266 Seq370.MAB165.15.grape 84
  698   potato|gb157.2|BG097985_T1   马铃薯 1267 Seq303.MAB129.15.tomato 91
  699   potato|gb157.2|BE923564_T1   马铃薯 1268 Seq342.MAB151.15.potato 90
  700   potato|gb157.2|X86021_T1   马铃薯 1269 Seq334.MAB146.15.tomato 97
  701   potato|gb157.2|BG594768_T1   马铃薯 1270 Seq329.MAB143.15.tomato 97
702 potato|gb157.2|BF154203_T1   马铃薯 1271 Seq256.MAB37.15.tomato 98
703 potato|gb157.2|BE344306_T1   马铃薯 1272   Seq357.MAB157.15.sugarcane 82
  704   potato|gb157.2|BF460309_T1   马铃薯 1273 Seq329.MAB143.15.tomato 98
  705   potato|gb157.2|BQ516076_T1   马铃薯 1274 Seq390.MAB175.15.tomato 96
  706   potato|gb157.2|BI176616_T1   马铃薯 1275 Seq256.MAB37.15.tomato 88
  707   potato|gb157.2|BQ117692_T1   马铃薯 1276 Seq354.MAB156.15.tobacco 86
708 potato|gb157.2|AJ487418_T2   马铃薯 1277 Seq321.MAB139.15.cotton 81
709 potato|gb157.2|BG351229_T1   马铃薯 1278   Seq357.MAB157.15.sugarcane 81
  710   potato|gb157.2|AJ487418_T3   马铃薯 1279 Seq321.MAB139.15.cotton 84
  711   potato|gb157.2|BF154154_T1   马铃薯 1280 Seq256.MAB37.15.tomato 99
712 radish|gb164|EY895633_T1   萝卜(radish)   1281   Seq373.MAB167.15.canola   93
713 radish|gb164|EX772944_T1   萝卜 1282   Seq356.MAB157.15.sugarcane 83
714 radish|gb164|EW725846_T1   萝卜 1283   Seq237.MAB25.15.arabidopsis 84
715 radish|gb164|EV527306_T1   萝卜 1284   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 94
716 radish|gb164|EV565850_T1   萝卜 1285   Seq277.MAB50.15.arabidopsis 90
  717   radish|gb164|EX772722_T1   萝卜 1286 Seq360.MAB159.15.canola 88
  718   radish|gb164|EX775718_T1   萝卜 1287 Seq376.MAB168.15.grape   81
719 radish|gb164|EV535278_T1   萝卜 1288 Seq360.MAB159.15.canola 81
720 radish|gb164|EV565334_T1   萝卜 1289   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 91
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
721 radish|gb164|EV528083_T1   萝卜 1290   Seq252.MAB35.15.arabidopsis 80
722 radish|gb164|T25168_T1   萝卜 1291 Seq376.MAB 168.15.grape 80
723 radish|gb164|EV544010_T1   萝卜 1292   Seq229.MAB20.15.arabidopsis 91
724 radish|gb164|EW713752_T1   萝卜 1293 Seq373.MAB167.15.canola 86
725 radish|gb164|EV568565_T1   萝卜 1294   Seq284.MAB100.15.arabidopsis 88
726 radish|gb164|EV543867_T1   萝卜 1295 Seq373.MAB167.15.canola 88
727 radish|gb164|EX770974_T1   萝卜 1296   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 85
728 radish|gb164|EV566819_T1   萝卜 1297   Seq217.MAB13.15.arabidopsis 81
729   rice|gb157.2|NM001059403_T1   水稻 1298 Seq261.MAB40.15.rice 84
730 rice|gb157.2|C28755_T1   水稻 1299 Seq321.MAB139.15.cotton 80
731 rice|gb157.2|AA750806_T1   水稻 1300 Seq290.MAB122.15.maize 83
732 rice|gb157.2|AA751345_T1   水稻 1301 Seq321.MAB139.15.cotton 80
733 rice|gb157.2|BE040195_T6   水稻 1302   Seq346.MAB153.15.sugarcane 95
734 rice|gb157.2|BI118752_T1   水稻 1303 Seq276.MAB49.15.maize 94
735 rice|gb157.2|AW070148_T1   水稻 1304   Seq350.MAB154.15.sugarcane 87
736 rice|gb157.2|AW069929_T1   水稻 1305 Seq309.MAB133.15.barley 93
737 rice|gb157.2|AW070094_T1   水稻 1306 Seq274.MAB48.15.rice 83
738 rice|gb157.2|AA753115_T4   水稻 1307 Seq259.MAB39.15.barley 90
739 rice|gb157.2|BI795037_T4   水稻 1308 Seq385.MAB173.15.barley 100
740 rice|gb157.2|AU092454_T1   水稻 1309 Seq274.MAB48.15.rice 100
741 rice|gb157.2|AA753115_T3   水稻 1310 Seq259.MAB39.15.barley 91
742 rice|gb157.2|BE040195_T1   水稻 1311   Seq346.MAB153.15.sugarcane 91
743 rice|gb157.2|CB624284_T1   水稻 1312 Seq264.MAB42.10.sorghum 82
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
744 rice|gb157.2|AU030125_T3   水稻 1313   Seq357.MAB157.15.sugarcane 88
745 rice|gb157.2|AU164313_T1   水稻 1314 Seq270.MAB45.15.wheat 84
746 rice|gb157.2|BI799463_T1   水稻 1315 Seq221.MAB15.15.soraghum 85
747 rice|gb157.2|AW070094_T3   水稻 1316 Seq274.MAB48.15.rice 80
748 rice|gb157.2|AA753115_T1   水稻 1317 Seq259.MAB39.15.barley 91
749 rice|gb157.2|AU093322_T2   水稻 1318 Seq228.MAB19.15.sorghum 85
750 rice|gb157.2|AU030125_T1   水稻 1319 Seq263.MAB42.15.sorghum 80
751 rice|gb157.2|AA752703_T1   水稻 1320 Seq295.MAB125.15.rice 88
752   rice|gb157.2|NM001067464_T1   水稻 1321 Seq205.MAB4.15.rice 93
753   rice|gb157.2|NM001052309_T1   水稻 1322 Seq295.MAB125.15.rice 91
754 rice|gb157.2|CA763128_T2   水稻 1323 Seq219.MAB14.15.rice 80
755 rice|gb157.2|AW070148_T2   水稻 1324   Seq348.MAB154.15.sugarcane 87
756 rice|gb157.2|AU093322_T1   水稻 1325 Seq228.MAB19.15.sorghum 86
757 rice|gb157.2|AA753115_T5   水稻 1326 Seq259.MAB39.15.barley 94
758 rice|gb157.2|AU030125_T4   水稻 1327 Seq263.MAB42.15.sorghum 80
  759   rye|gb164|BF429408_T1   黑麦(rye)   1328   Seq309.MAB133.15.barley   97
  760   rye|gb164|BE494847_T1   黑麦 1329 Seq368.MAB164.15.barley 97
761   safflower|gb162|EL373402_T1   红花(safflower) 1330 Seq376.MAB168.15.grape 81
762   safflower|gb162|EL374175_T1   红花 1331 Seq259.MAB39.15.barley 83
763   safflower|gb162|EL377332_T1   红花 1332 Seq385.MAB173.15.barley 81
764   safflower|gb162|EL373487_T1   红花 1333 Seq263.MAB42.15.sorghum 80
765   safflower|gb162|EL374095_T1   红花 1334 Seq256.MAB37.15.tomato 86
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
766   safflower|gb162|EL382051_T1   红花 1335 Seq256.MAB37.15.tomato 86
767   safflower|gb162|EL409148_T1   红花 1336 Seq385.MAB173.15.barley 80
768   sorghum|gb161.xeno|AW224927_T1   高粱 1337   Seq288.MAB121.15.sugarcane 94
769   sorghum|gb161.xeno|T26945_T2   高粱 1338 Seq370.MAB165.15.grape 81
770   sorghum|gb161.xeno|AI932179_T3   高粱 1339 Seq286.MAB104.15.rice 91
771   sorghum|gb161.xeno|T15319_T1   高粱 1340 Seq276.MAB49.15.maize 97
772   sorghum|gb161.xeno|A1615215_T1   高粱 1341 Seq248.MAB33.15.maize 92
773   sorghum|gb161.xeno|BG102066_T2   高粱 1342 Seq290.MAB122.15.maize 90
774   sorghum|gb161.xeno|AW672419_T2   高粱 1343 Seq276.MAB49.15.maize 97
775   sorghum|gb161.xeno|AW672419_T3   高粱 1344 Seq276.MAB49.15.maize 95
776   sorghum|gb161.xeno|AI901860_T1   高粱 1345 Seq259.MAB39.15.barley 84
777   sorghum|gb161.xeno|AI621995_T3   高粱 1346   Seq384.MAB172.15.sugarcane 97
778   sorghum|gb161.xeno|AI881418_T2   高粱 1347 Seq264.MAB42.10.sorghum 100
779   sorghum|gb161.xeno|AI891255_T1   高粱 1348 Seq311.MAB134.15.barley 95
780   sorghum|gb161.xeno|AI782993_T1   高粱 1349 Seq241.MAB28.15.rice 84
781   sorghum|gb161.xeno|AI724629_T1   高粱 1350   Seq350.MAB154.15.sugarcane 99
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
782   sorghum|gb161.xeno|AA143925_T1   高粱 1351 Seq221.MAB15.15.sorghum 100
783   sorghum|gb161.xeno|AI621995_T2   高粱 1352   Seq383.MAB172.15.sugarcane 99
784   sorghum|gb161.xeno|T26945_T1   高粱 1353 Seq370.MAB165.15.grape 81
785   sorghum|gb161.xeno|AW179463_T1   高粱 1354 Seq321.MAB139.15.cotton 80
786   sorghum|gb161.xeno|ZMU90944_T2   高粱 1355 Seq367.MAB163.15.barley 80
787   sorghum|gb161.xeno|T15319_T2   高粱 1356 Seq276.MAB49.15.maize 95
788   sorghum|gb161.xeno|AI621995_T1   高粱 1357   Seq383.MAB172.15.sugarcane 99
789   sorghum|gb161.xeno|AI932179_T1   高粱 1358 Seq286.MAB104.15.rice 90
790   sorghum|gb161.xeno|AI621995_T4   高粱 1359   Seq383.MAB172.15.sugarcane 99
791   sorghum|gb161.xeno|ZMU90944_T3   高粱 1360 Seq367.MAB163.15.barley 80
792   sorghum|gb161.xeno|AI665229_T2   高粱 1361   Seq346.MAB153.15.sugarcane 96
793   sorghum|gb161.xeno|AI939836_T1   高粱 1362 Seq309.MAB133.15.barley 92
794   sorghum|gb161.xeno|BI099068_T1   高粱 1363 Seq270.MAB45.15.wheat 83
795   sorghum|gb161.xeno|AI665229_T1   高粱 1364   Seq346.MAB153.15.sugarcane 96
796   sorghum|gb161.xeno|AW672419_T1   高粱 1365 Seq276.MAB49.15.maize 97
797   sorghum|gb161.xeno|AW498283_T1   高粱 1366 Seq210.MAB8.15.rice 83
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
798   sorghum|gb161.xeno|AW923775_T1   高粱 1367 Seq231.MAB21.15.rice 88
799   sorghum|gb161.xeno|T15319_T3   高粱 1368 Seq276.MAB49.15.maize 85
800 soybean|gb162|BG839539_T1   大豆 1369 Seq368.MAB164.15.barley 80
801 soybean|gb162|CA783290_T1   大豆 1370 Seq259.MAB39.15.barley 81
802 soybean|gb162|BU551043_T1   大豆 1371 Seq256.MAB37.15.tomato 88
803 soybean|gb162|EV282184_T1   大豆 1372 Seq371.MAB166.15.poplar 82
804 soybean|gb162|BI967468_T1   大豆 1373 Seq368.MAB164.15.barley 80
805 soybean|gb162|BI321879_T1   大豆 1374 Seq259.MAB39.15.barley 81
806 soybean|gb162|AW132704_T1   大豆 1375 Seq256.MAB37.15.tomato 90
807 soybean|gb162|BU764498_T1   大豆 1376 Seq256.MAB37.15.tomato 86
808 soybean|gb162|CA953156_T1   大豆 1377 Seq298.MAB126.15.grape 80
809 soybean|gb162|CF922618_T1   大豆 1378 Seq259.MAB39.15.barley 84
810 soybean|gb162|BU544425_T1   大豆 1379   Seq357.MAB157.15.sugarcane 81
811 soybean|gb162|BU765332_T1   大豆 1380 Seq233.MAB22.15.tomato 80
812 soybean|gb162|CA936077_T1   大豆 1381 Seq376.MAB168.15.grape 83
813 soybean|gb162|BE823013_T1   大豆 1382 Seq376.MAB168.15.grape 83
814 soybean|gb162|CD417415_T1   大豆 1383 Seq370.MAB165.15.grape 85
815 soybean|gb162|BE660691_T1   大豆 1384 Seq362.MAB161.15.poplar 81
816 soybean|gb162|CD395628_T1   大豆 1385 Seq370.MAB165.15.grape 82
817 soybean|gb162|BU549206_T2   大豆 1386 Seq259.MAB39.15.barley 80
818 soybean|gb162|AW351120_T1   大豆 1387 Seq298.MAB126.15.grape 82
819 soybean|gb162|AW132704_T2   大豆 1388 Seq256.MAB37.15.tomato 90
820 soybean|gb162|BE584244_T1   大豆 1389 Seq256.MAB37.15.tomato 91
  821   spruce|gb162|CO234968_T1   云杉(spruce)   1390   Seq344.MAB152.15.grape   83
822 spurge|gb161|DV146052_T1 大戟(spurge) 1391   Seq357.MAB157.15.sugarcane 81
  823   spurge|gb161|DV127024_T1   大戟 1392 Seq344.MAB152.15.grape 83
824 spurge|gb161|DV124157_T1   大戟 1393 Seq376.MAB168.15.grape 85
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体   多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
825   strawberry|gb164|EX683450_T1   草莓(strawberry) 1394   Seq348.MAB154.15.sugarcane 81
826   strawberry|gb164|EX683265_T1   草莓   1395   Seq370.MAB165.15.grape   81
827   strawberry|gb164|DY675409_T1   草莓 1396 Seq256.MAB37.15.tomato 81
828   sugarcane|gb157.2|CA115287_T1   甘蔗 1397   Seq357.MAB157.15.sugarcane 88
829   sugarcane|gb157.2|CA216001_T1   甘蔗 1398 Seq259.MAB39.15.barley 85
830   sugarcane|gb157.2|CA072819_T1   甘蔗 1399 Seq241.MAB28.15.rice 83
831   sugarcane|gb157.2|CA125036_T1   甘蔗 1400 Seq291.MAB123.15.barley 82
832   sugarcane|gb157.2|CA071646_T1   甘蔗 1401 Seq286.MAB104.15.rice 90
833   sugarcane|gb157.2|CA117936_T2   甘蔗 1402 Seq228.MAB19.15.sorghum 93
834   sugarcane|gb157.2|BQ537163_T1   甘蔗 1403 Seq276.MAB49.15.maize 96
835   sugarcane|gb157.2|CA074253_T1   甘蔗 1404 Seq241.MAB28.15.rice 83
836   sugarcane|gb157.2|CA102030_T1   甘蔗 1405 Seq385.MAB173.15.barley 85
837   sugarcane|gb157.2|CA068084_T1   甘蔗 1406 Seq366.MAB163.15.barley 80
838   sugarcane|gb157.2|CA233048_T1   甘蔗 1407 Seq290.MAB122.15.maize 80
839   sugarcane|gb157.2|CA090429_T1   甘蔗 1408   Seq288.MAB121.15.sugarcane 95
840   sugarcane|gb157.2|CA095299_T1   甘蔗 1409 Seq370.MAB165.15.grape 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
841   sugarcane|gb157.2|BQ533298_T1   甘蔗 1410 Seq311.MAB134.15.barley 95
842   sugarcane|gb157.2|CA107649_T1   甘蔗 1411 Seq248.MAB33.15.maize 90
843   sugarcane|gb157.2|BQ536274_T1   甘蔗 1412 Seq231.MAB21.15.rice 88
844   sugarcane|gb157.2|CA117936_T1   甘蔗 1413 Seq228.MAB19.15.sorghum 94
845   sugarcane|gb157.2|BQ533234_T1   甘蔗 1414 Seq221.MAB15.15.sorghum 99
846   sugarcane|gb157.2|CA072307_T1   甘蔗 1415 Seq309.MAB133.15.barley 93
847   sugarcane|gb157.2|CA073476_T1   甘蔗 1416 Seq290.MAB122.15.maize 91
848   sugarcane|gb157.2|CA065809_T1   甘蔗 1417 Seq366.MAB163.15.barley 80
849   sugarcane|gb157.2|CA072307_T2   甘蔗 1418 Seq309.MAB133.15.barley 93
850   sunflower|gb162|DY909111_T1   向日葵 1419 Seq336.MAB147.15.tobacco 83
851   sunflower|gb162|DY941035_T1   向日葵 1420 Seq376.MAB168.15.grape 82
852   sunflower|gb162|CD857487_T1   向日葵 1421 Seq370.MAB165.15.grape 81
853   sunflower|gb162|DY942252_T1   向日葵 1422 Seq311.MAB134.15.barley 80
854   sunflower|gb162|CD850784_T1   向日葵 1423 Seq256.MAB37.15.tomato 83
855   sunflower|gb162|BQ968872_T1   向日葵 1424   Seq357.MAB157.15.sugarcane 83
856   sunflower|gb162|EE616266_T1   向日葵 1425 Seq256.MAB37.15.tomato 84
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
857   sunflower|gb162|EE641694_T1   向日葵 1426 Seq256.MAB37.15.tomato 84
858   sunflower|gb162|DY924220_T1   向日葵 1427 Seq259.MAB39.15.barley 81
859   sunflower|gb162|DY910907_T1   向日葵 1428 Seq370.MAB165.15.grape 80
860   sunflower|gb162|AY029172_T1   向日葵 1429 Seq321.MAB139.15.cotton 81
861   sunflower|gb162|DY909077_T1   向日葵 1430 Seq321.MAB139.15.cotton 80
862   sunflower|gb162|DY921635_T1   向日葵 1431 Seq376.MAB168.15.grape 83
863   sunflower|gb162|DY913894_T1   向日葵 1432 Seq256.MAB37.15.tomato 82
864   switchgrass|gb165|FE608718_T1   柳枝稷(switchgrass) 1433 Seq370.MAB165.15.grape 81
865   switchgrass|gb165|FE624581_T1   柳枝稷 1434 Seq333.MAB145.15.barley 87
866   switchgrass|gb165|FE604798_T1   柳枝稷 1435 Seq269.MAB45.15.wheat 90
867   switchgrass|gb165|DN151012_T1   柳枝稷 1436 Seq309.MAB133.15.barley 90
868   switchgrass|gb165|FE619903_T1   柳枝稷 1437   Seq383.MAB172.15.sugarcane 95
869   switchgrass|gb165|DN144676_T1   柳枝稷 1438 Seq385.MAB173.15.barley 87
870   switchgrass|gb165|FE609872_T1   柳枝稷 1439 Seq228.MAB19.15.sorghum 89
871   switchgrass|gb165|FE617860_T1   柳枝稷 1440   Seq381.MAB171.15.sugarcane 88
872   switchgrass|gb165|DN145750_T1   柳枝稷 1441 Seq221.MAB15.15.sorghum 95
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
873   switchgrass|gb165|FE597811__T1   柳枝稷 1442 Seq248.MAB33.15.maize 83
874   switchgrass|gb165|FE647199__T1   柳枝稷 1443   Seq381.MAB171.15.sugarcane 90
875   switchgrass|gb165|DN145034_T1   柳枝稷 1444 Seq276.MAB49.15.maize 95
876   switchgrass|gb165|FE617335_T1   柳枝稷 1445 Seq286.MAB104.15.rice 91
877   switchgrass|gb165|FE597809_T1   柳枝稷 1446   Seq350.MAB154.15.sugarcane 95
878   switchgrass|gb165|FE597811_T2   柳枝稷 1447 Seq248.MAB33.15.maize 85
879   switchgrass|gb165|FE635691_T1   柳枝稷 1448 Seq311.MAB134.15.barley 95
880   switchgrass|gb165|FE653022_T1   柳枝稷 1449 Seq385.MAB173.15.barley 83
881   switchgrass|gb165|DN144793_T1   柳枝稷 1450 Seq259.MAB39.15.barley 90
882   switchgrass|gb165|FE641674_T1   柳枝稷 1451 Seq309.MAB133.15.barley 89
883 thellungiella|gb157.2|DN775606_T1   盐芥(thellungiella) 1452 Seq212.MAB10.15.arabidopsis 82
884   thellungiella|gb157.2|DN773228_T1   盐芥 1453   Seq211.MAB9.15.arabidopsis 98
885   thellungiella|gb157.2|DN772771_T1   盐芥 1454   Seq208.MAB7.15.arabidopsis 89
886   thellungiella|gb157.2|DN774422_T1   盐芥 1455 Seq360.MAB159.15.canola 83
887   thellungiella|gb157.2|DN774140_T1   盐芥 1456   Seq284.MAB100.15.arabidopsis 86
888 tobacco|gb162|DW003503_T1   烟草 1457 Seq329.MAB143.15.tomato 93
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
889 tobacco|gb162|BP532373_T1  烟草 1458   Seq357.MAB157.15.sugarcane 82
  890   tobacco|gb162|CN949739_T1  烟草 1459 Seq370.MAB165.15.grape 84
  891   tobacco|gb162|BQ843111_T1  烟草 1460 Seq319.MAB138.15.potato 90
  892   tobacco|gb162|EB683054_T1  烟草 1461 Seq307.MAB131.15.tomato 89
  893   tobacco|gb162|EB428197_T1  烟草 1462 Seq222.MAB16.15.rice 80
  894   tobacco|gb162|EB445060_T1  烟草 1463 Seq283.MAB99.15.tomato 90
  895   tobacco|gb162|EB447202_T1  烟草 1464 Seq390.MAB175.15.tomato 88
  896   tobacco|gb162|DW001113_T1  烟草 1465 Seq256.MAB37.15.tomato 88
  897   tobacco|gb162|EH623692_T1  烟草 1466 Seq303.MAB129.15.tomato 85
  898   tomato|gb164|BG127210_T1  番茄 1467 Seq342.MAB151.15.potato 82
  899   tomato|gb164|BG128089_T2  番茄 1468 Seq222.MAB16.15.rice 80
  900   tomato|gb164|AW219181_T1  番茄 1469 Seq256.MAB37.15.tomato 90
  901   tomato|gb164|BG127288_T1  番茄 1470 Seq370.MAB165.15.grape 83
  902   tomato|gb164|BG133509_T1  番茄 1471 Seq256.MAB37.15.tomato 88
903 tomato|gb164|BG131241_T1  番茄 1472 Seq309.MAB133.15.barley   80
904 tomato|gb164|BG129621_T1  番茄 1473   Seq350.MAB154.15.sugarcane 80
  905   tomato|gb164|AI779004_T1  番茄 1474 Seq309.MAB133.15.barley 81
  906   tomato|gb164|BG129572_T1  番茄 1475 Seq321.MAB139.15.cotton 80
  907   tomato|gb164|BG135408_T1  番茄 1476 Seq319.MAB138.15.potato 98
908   triphysaria|gb164|DR173028_T1  直果草(triphysaria) 1477 Seq329.MAB143.15.tomato 81
909   triphysaria|gb164|BM357524_T2  直果草 1478 Seq283.MAB99.15.tomato 85
910   triphysaria|gb164|EY133838_T1  直果草 1479 Seq311.MAB134.15.barley 80
911   triphysaria|gb164|BM357406_T1  直果草 1480 Seq329.MAB143.15.tomato 83
912   triphysaria|gb164|BM357011_T1  直果草 1481 Seq259.MAB39.15.barley 80
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
913   triphysaria|gb164|BM357524_T1   直果草 1482 Seq376.MAB168.15.grape 85
914   triphysaria|gb164|EY137290_T1   直果草 1483 Seq256.MAB37.15.tomato 88
  915   wheat|gb164|CA484259_T1   小麦 1484 Seq241.MAB28.15.rice 84
  916   wheat|gb164|BE606422_T1   小麦 1485 Seq379.MAB170.15.barley 96
  917   wheat|gb164|BE406378_T1   小麦 1486 Seq219.MAB14.15.rice 80
  918   wheat|gb164|BE470780_T1   小麦 1487 Seq221.MAB15.15.sorghum 84
  919   wheat|gb164|BE418087_T1   小麦 1488 Seq325.MAB141.15.barley 95
  920   wheat|gb164|BQ294643_T1   小麦 1489 Seq269.MAB45.15.wheat 94
  921   wheat|gb164|BE415314_T1   小麦   1490   Seq250.MAB34.15.barley   82
  922   wheat|gb164|AL822647_T1   小麦 1491 Seq259.MAB39.15.barley 98
  923   wheat|gb164|BE406667_T1   小麦 1492 Seq250.MAB34.15.barley 89
  924   wheat|gb164|BF475039_T1   小麦 1493 Seq221.MAB15.15.sorghum   83
  925   wheat|gb164|CK196180_T1   小麦 1494 Seq323.MAB140.15.barley 80
  926   wheat|gb164|BE403745_T1   小麦 1495 Seq379.MAB170.15.barley   97
  927   wheat|gb164|BQ620260_T1   小麦 1496 Seq311.MAB134.15.barley   100
  928   wheat|gb164|BM138204_T1   小麦 1497 Seq333.MAB145.15.barley   91
  929   wheat|gb164|BE401114_T1   小麦 1498 Seq291.MAB123.15.barley   94
  930   wheat|gb164|BE498161_T1   小麦 1499 Seq388.MAB174.15.barley   93
  931   wheat|gb164|BQ744502_T1   小麦 1500 Seq250.MAB34.15.barley   85
  932   wheat|gb164|BE415172_T1   小麦 1501 Seq366.MAB163.15.barley 94
  933   wheat|gb164|CD490875_T1   小麦 1502 Seq276.MAB49.15.maize 97
  934   wheat|gb164|CA625741_T1   小麦 1503 Seq309.MAB133.15.barley 87
  935   wheat|gb164|BE443720_T1   小麦 1504 Seq318.MAB137.15.barley 94
  936   wheat|gb164|BE420294_T1   小麦 1505 Seq290.MAB122.15.maize 84
  937   wheat|gb164|BE516581_T1   小麦 1506 Seq387.MAB174.15.barley 95
  938   wheat|gb164|BE406039_T1   小麦 1507 Seq333.MAB145.15.barley 90
  939   wheat|gb164|BM136483_T1   小麦 1508 Seq333.MAB145.15.barley 92
  940   wheat|gb164|BE425976_T1   小麦 1509 Seq250.MAB34.15.barley 81
941 wheat|gb164|CN011148_T1   小麦 1510 Seq270.MAB45.15.wheat 84
  多核苷酸SEQIDNO： 簇名称 生物体 多肽SEQIDNO： 由多核苷酸SEQ ID NO.编码的多肽的同源物 ％总同一性
  942   wheat|gb164|BE419039_T1   小麦 1511 Seq250.MAB34.15.barley 80
  943   wheat|gb164|CA603413_T1   小麦 1512 Seq323.MAB140.15.barley 85
  944   wheat|gb164|CA743309_T1   小麦 1513 Seq321.MAB139.15.cotton 80
  945   wheat|gb164|BG262336_T1   小麦 1514 Seq366.MAB163.15.barley 94
  946   wheat|gb164|CD881765_T1   小麦 1515 Seq219.MAB14.15.rice   80
  947   wheat|gb164|BE352629_T1   小麦 1516 Seq291.MAB123.15.barley 96
  948   wheat|gb164|BE398656_T1   小麦 1517 Seq308.MAB132.15.barley   97
  949   wheat|gb164|BE403195_T1   小麦 1518 Seq291.MAB123.15.barley 94
  950   wheat|gb164|BE488904_T1   小麦 1519 Seq367.MAB163.15.barley   91
  951   wheat|gb164|BE492528_T1   小麦 1520 Seq311.MAB134.15.barley   100
  952   wheat|gb164|BE427383_T1   小麦 1521 Seq219.MAB14.15.rice   80
  953   wheat|gb164|CA646957_T1   小麦 1522 Seq250.MAB34.15.barley   89
  954   wheat|gb164|BE443720_T2   小麦 1523 Seq318.MAB137.15.barley   92
  955   wheat|gb164|BE490408_T1   小麦 1524 Seq264.MAB42.10.sorghum   81
  956   wheat|gb164|BE420295_T1   小麦 1525   Seq379.MAB170.15.barley   96
  957   wheat|gb164|AL825998_T1   小麦 1526 Seq308.MAB132.15.barley   97
  958   wheat|gb164|CA693465_T1   小麦 1527   Seq308.MAB132.15.barley   97
959 wheat|gb164|BE585772_T1   小麦 1528 Seq366.MAB163.15.barley   95
960 wheat|gb164|CA613914_T1   小麦 1529   Seq356.MAB157.15.sugarcane 84
1656   ＞tomato|gb164|BG129621_T1 番茄 1660 Seq1649.MAB66.tomato 82
1657   potato|gb157.2|BE921143_T1   马铃薯 1661 Seq1649.MAB66.tomato 82
1658   pepper|gb157.2|BM061807_T1 胡椒 1662 Seq1649.MAB66.tomato 80
1659   ＞triphysaria|gb164|BM357011_T1 直果草 1663 Seq1649.MAB66.tomato 80
表2：*-同源性以比对序列的％同一性来计算。查询序列为多核苷酸序列SEQ ID NO：1、3、5、7、9、10、11、13、15、16、17、19、21、23、25、26、28、29、30、32、34、36、37、38、40、42、44、46、48、50、52、54、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、82、84、86、88、90、91、93、94、96、98、100、101、103、105、107、109、111、113、115、116、118、119、121、122、124、126、128、130、132、134、135、138、140、142、143、145、147、149、151、153、155、157、161、163、165、168、169、170、171、173、175、177、179、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198和1649，主题序列(subject sequence)为基于与查询核苷酸序列的预测的翻译序列的同一性高于80％的数据库中鉴定的蛋白质序列。所示为同源多肽及编码所述多肽的多核苷酸。
实施例2
产生推定的ABST基因
通过GeneArt(http://WWW.geneart.com/)合成ABST基因的若干DNA序列。经由电脑模拟设计合成的DNA，其基于ABST基因的编码的氨基酸序列，并使用从植物转录组(transcriptome)计算的密码子用法表(所述用法表实例可以在可在线获得的密码子用法数据库中找到http://WWW.kazusa.or.jp/codon/)。以不向编码的氨基酸序列中引入入变化同时使用优选用于在双子叶植物(主要是番茄和拟南芥)和单子叶植物(例如玉米)中表达的密码子的方式设计优化的编码序列。当在靶标作物中过表达基因时，与原始序列比较在序列中每20个核苷酸碱基对导入至少一个沉默突变，以避免可能的沉默。为了优化序列，加入以下限制酶位点-5′端的SalI、XbaI、BamHI、SmaI和3′端的SacI。将由厂商(GeneArt，Gmbh)合成的序列克隆到pCR-Script质粒中。
实施例3
基因克隆和产生用于植物表达的二元载体
为了验证所选基因在改进ABST和产量中的作用，在植物中如下过表达所述基因。
克隆策略
将从实施例1所提供的基因中挑选的基因克隆入用于产生转基因植物的二元载体。为了克隆，鉴定了全长可读框(ORF)。通过比较来自其它植物物种的已知蛋白的若干翻译算法结果，分析了EST簇和某些情况下的mRNA序列，以鉴定整个可读框。
为了克隆全长cDNA，对从在正常条件下或营养缺乏条件下生长的叶、根或其它植物组织提取的总RNA进行逆转录(RT)，接着是聚合酶链式反应(PCR；RT-PCR)。用为本领域技术人员所熟知的在别处阐述的标准方案(Sambrook J.，E.F.Fritsch和T.Maniatis.1989.MolecularCloning.A Laboratory Manual.(分子克隆：实验室手册)，第2版，ColdSpring Harbor Laboratory Press，New York.)进行总RNA提取、cDNA生产和PCR扩增。用PCR纯化试剂盒(Qiagen)纯化PCR产物。
通常制备2套引物用于经由巢式PCR扩增每一基因(意指第一次用外部引物扩增基因，然后用所产生的PCR产物作为模板用于第二次PCR反应，此时使用内部引物对)。或者，在第一次和第二次PCR反应中都使用内部引物中的一个或2个来扩增基因(意指对于一个基因仅设计2-3个引物)。为了便于进一步克隆cDNA，将8-12个bp延伸加入到每一内部引物的5′端。引物延伸包括核酸内切酶限制位点。用两个参数来选择限制位点：(a)限制位点不存在于cDNA序列中；和(b)将限制位点设计在正向和反向引物中，以便经消化的cDNA以有义方向***到转化用的二元载体中。在下表3中提供了用于克隆ABST基因的引物。
表3
来自cDNA文库或基因组DNA的已克隆的ABST基因及用于克隆的引物
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB1 1530 201 EcoRV   MAB1 EF EcoRVAAGATATCAGACCAGAGGAGAAGACTCGATC(SEQ ID NO：1567)MAB1 NF EcoRVAAGATATCAGACTCCGTTCGGAGAAAAGG(SEQ ID NO：1568)MAB1 ER EcoRV ATGATATCTGAAGAACATCGCC TTGTCATC(SEQ ID NO：1569)MAB1 NR EcoRVAAGATATCACCTTGTCATCGGATCATCTCC(SEQ ID NO：1570)
 MAB1_GA(经优化用于在玉米及大豆(G.Max)中表达) 1531 合成的产物(来自pGA14_MAB1_GA)
MAB14 1538 219 EcoRV   MAB14 EF EcoRVATGATATCCAACGAATGAAGACTAGTAGCTG(SEQ ID NO：1571)MAB14 NF EcoRVATGATATCCCAGATGGAATCCTGCCCT(SEQ ID NO：1572)MAB14 ER EcoRVATGATATCGTGTCAATGAAGGGAACGTGC(SEQ ID NO：1573)MAB14 NR EcoRVATGATATCGCAAATGGATTCAGATATTCTG(SEQ ID NO：1574)
 MAB14_GA(经优化用于在玉米中表达) 1539 合成的产物(来自pGA14_MAB14_GA)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB10 1532 212 SalI、XbaI   MAB 10F Sal-GCAGTCGACAACTCACAGTTCCAAACACACA(SEQ ID NO：1575)MAB 10 Ext R Xba -GGTCTAGAATGTAAATGTCTTCGTATTAGGC(SEQ ID NO：1576)MAB 10 NR Xba-CCTCTAGAATCACCCGAAATAACTAGTGTC(SEQ ID NO：1577)
 MAB10_GA(经优化用于在玉米中表达) 1533 合成的产物(来自pGA18_MAB10_GA)
MAB25 1549 237 PstI、SmaI   MAB25 EF PstI-AACTGCAGCCATCGTCGTAATCCTTCTAGC(SEQ ID NO：1578)MAB25 NF PstI-AACTGCAGTAATCATGGGGAGGAAATCTC(SEQ ID NO：1579)MAB25 ER SmaI-GGGTGACAATTCCGAGTCTCAGC(SEQ ID NO：1580)MAB25 NR SmaI-TCCCGGGCAATTGGTCAATGGCACTC(SEQ ID NO：1581)
 MAB25_GA(经优化用于在玉米中表达) 1550 合成的产物(来自pGA14_MAB25_GA)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB134 1665 311 SalI、XbaI   MAB134 EF SalI-AATGTCGACTCTCGTCTTGCTCCCAGAG(SEQ ID NO：1582)MAB134 NF SalI-AATGTCGACCGACACCCTTCTCCTCCTC(SEQ ID NO：1583)MAB134 ER XbaI-TTTCTAGAATCATATTCCAACATCCACTTC(SEQ ID NO：1584)MAB134 NR XbaI-TTTCTAGACTGCTATGTTCCACTGACTACAC(SEQ ID NO：1585)
MAB99 1566 283 SalI、SacI   MAB99 NF SalI-AAAGTCGACCAGTTAATTCTCCGTTGTCTACTC(SEQ IDNO：1586)MAB99 NR SacI-TGAGCTCCTGCTTGAAACTTGCTGCTAG(SEQ ID NO：1587)
MAB36 1554 254 SalI、XbaI   MAB 36 F Sal-GGAGTCGACACAGAAATGGGTGGTTTGAAG(SEQ ID NO：1588)MAB 36 Ext R Xba-CCTCTAGAAATGATCACTCACTGCAACTTAG(SEQ ID NO：1589)MAB 36 NR Xba-CCTCTAGACACTCACTGCAACTTAGAAACATC(SEQ ID NO：1590)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB7 1563 208 SalI、XbaI   MAB 7 Ex F Sal-AACGTCGACGCTCATTTCTCTTCTTCTTTGG(SEQ ID NO：1591)MAB 7 NF Sal-GACGTCGACTCTTCTTTGGTTCTTACATTTCTC(SEQ IDNO：1592)MAB 7 Ex R Xba-TCTCTAGAGCAAGACGTTATAAACCATGC(SEQ ID NO：1593)MAB 7 NR Xba-TCTCTAGAAGAAGACACGCTGGACAATG(SEQ ID NO：1594)
MAB44 1557 267 SalI、SacI   MAB 44 NF salAAGGTCGACCATAAAGAACAGTGACAGGCG(SEQ ID NO：1595)MAB 44 NR ScAGAGCTCCACGTAGTACATTTTCACAGCAC(SEQ ID NO：1596)
 MAB44_GA(经优化用于在玉米中表达) 1558 合成的产物(来自pCR4Blunt-topO_MAB44_GA)
MAB6 1561 207 SalI、XbaI   MAB 6- Ex F Sal-ACCGTCGACCCTTCTCCAATTTCGTAAGC(SEQ ID NO：1597)MAB 6 NF Sal-ACCGTCGACTTCGTAAGCTCAAAGATTTCG(SEQ ID NO：1598)MAB 6 - Ext R XbaI-CCTCTAGAACGACTTTTAATCCCTCCAAC(SEQ ID NO：1599)MAB 6- NR XbaI-CCTCTAGACTCCAACAGCCACTACAACC(SEQ ID NO：1600)
 MAB6_GA(经优化用于在玉米中表达) 1562 合成的产物(来自pGA15_MAB6_GA)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB9 1564 211 EcoRV   MAB9_F_EcoRVAAGATATCGGTTGCTGAGGAA TCGAAGTAG(SEQ ID NO：1601)MAB9_ER_EcoRVTTGATATCGAGCCAAGTCACAA GGAGTTTAC(SEQ ID NO：1602)MAB9_NR_EcoRVTTGATATCCTCCGAGTGTCGCA GTAAGC(SEQ ID NO：1603)
 MAB9_GA(经优化用于在玉米和黄淮夏大豆中表达) 1565 合成的产物(来自pGA15_MAB9_GA)
MAB100 1534 284 SalI、XbaI   MAB100 EF SalI-AATGTCGACCCAAGTTAAACTTCATATCATACAC(SEQ IDNO：1604)MAB100 NF SalI-AATGTCGACGAAGAGTTATTATGGCGAGCT(SEQ ID NO：1605)MAB100 ER XbaI-AATGTCGACCCAAGTTAAACTTCATATCATACAC(SEQ IDNO：1606)MAB100 NR XbaI-AATCTAGACAAACCCAACTTATTACATTACG(SEQ ID NO：1607)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB13 1536 217 SacI、SalI   MAB13 F SalI新AATGTCGACCTCGAAAATGGCCACCATTAG(SEQ ID NO：1608)MAB 13 ExR ScCGAGCTCCAAAAATGCAAGAATCAAGAG(SEQ ID NO：1609)MAB 13 F SalAAGGTCGACTTCTCTCCAAAATGGCCAC(SEQ ID NO：1610)MAB 13 NR ScTGAGCTCTGCAAGAATCAAGAGAAATTTG(SEQ ID NO：1611)
MAB32 1552 247 EcoRV   MAB32 F EcoRV-AAGATATCCTCCACTTGTTGTTCAATTCCC(SEQ ID NO：1612)MAB32 ER EcoRV-ATGATATCGATCTGAACAGCAGTAAGTAAGCC(SEQ IDNO：1613)MAB32 NR EcoRV-ATGATATCTAAGAAGAACAAGACATGGATCG(SEQ ID NO：1614)
MAB35 1553 252 SmaI   MAB35 F-CGTGAGAACTAAGAAACACCC(SEQ ID NO：1615)MAB35 ER SmaI-TCCCGGGACATCTTTTCAACTAAACCAAGAC(SEQ ID NO：1616)MAB35 NR SmaI-TCCCGGGCTAAACCAAGACTTACACAAGACG(SEQ ID NO：1617)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB146 1666 334 SalI、XbaI   MAB146 F Sal-ATTGTCGACAGAGTTATGGGAGATAATAGAGGA(SEQ IDNO：1618)MAB146 ER Xba-ATTCTAGACTCATTCTGAGCTTTACATGTTC(SEQ ID NO：1619)MAB146 NR Xba-TTTCTAGATTGGTTTACACCTCAACTCACTAC(SEQ ID NO：1620)
MAB2 1547 非编码 SalI、XbaI   MAB2 F SalIAATGTCGACAACAAATGATCCTTCAGGCAGTTAAAG(SEQ IDNO：1621)MAB2 R XbaTTTCTAGATATTAAAACTTAGATTCGGGATCAG(SEQ IDNO：1622)
MAB20 1548 229 PstI、SmaI   MAB20 EF pstI-AACTGCAGGATCATCACTTCTCAGATTTCG(SEQ ID NO：1623)MAB20 NF PstI-AACTGCAGAAAAATGAATTCAGAATCGCTAG(SEQ ID NO：1624)MAB20 ER SmaI-AACTGCAGGATCATCACTTCTCAGATTTCG(SEQ ID NO：1625)MAB20 NR SmaI-TCCCGGGCAATCTGACCTCAAAACTCCC(SEQ ID NO：1626)
MAB43 1556 265 PstI、SmaI   MAB43 NF PstIAACTGCAGGATCAATGAAGATTCGGAACAG(SEQ ID NO：1627)MAB43 ER SmaITCCCGGGTACAACAAGAAACCTCTGATTC(SEQ ID NO：1628)MAB43 NR SmaITCCCGGGCCTGTGCCACAGCTATACTTAC(SEQ ID NO：1629)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB46 1559 271 SalI、SacI   MAB 46 ExF Sal-GAAGTCGACATCCGTAGTTTCAGTTTCGTCC(SEQ ID NO：1630)MAB 46 NF Sal-GAAGTCGACCTTGTCTGTTCCAGATGAAATTG(SEQ ID NO：1631)MAB46 ExR Sc-TGAGCTCCTCTATCGACGTCCGGATTC(SEQ ID NO：1632)MAB 46 NR Sc-TGAGCTCCGTCCGGATTCATAAACAAC(SEQ ID NO：1633)
MAB50 1560 277 SmaI   MAB 50 ExF SalGGAGTCGACCATCGGGACACATCTTTAGG(SEQ ID NO：1634)MAB50 NFCATCTTTAGGCTCAAGGATTC(SEQ ID NO：1635)MAB50 ExR SacTGAGCTCGATCCTCGTTTATTACAAGTCTG(SEQ ID NO：1636)MAB50 NR SmaTCCCGGGCACACCAAGATTGATTACAAAGAG(SEQ ID NO：1637)
MAB66 1654 1655 SalI、XbaI   MAB66 F Sal-AATGTCGACGATTGGAGATAGGCAGGCA(SEQ ID NO：1638)MAB66 ER Xba-TTTCTAGAGGTAGCCAAAGCTGACACTC(SEQ ID NO：1639)MAB66 NR Xba-AATCTAGAGAGGCATATGCACTTCTTATCG(SEQ ID NO：1640)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
MAB4 1555 205 EcoRV   MAB4 EF EcoRV-AAGATATCCAGGACGGGTTCTCGATCAG(SEQ ID NO：1641)MAB4 NF EcoRV-AAGATATCCAGCGAACACGTCTACGATG(SEQ ID NO：1642)MAB4 ER EcoRV-ATGATATCGCACGAGTTCAACTCAGCTG(SEQ ID NO：1643)MAB4 NR EcoRV-ATGATATCGAACTGCTTGAGATGTAACAGCT(SEQ ID NO：1644)
  MAB15_GA(经优化用于在拟南芥和玉米中表达) 1541 221 XbaI、SacI 合成的产物(来自pGA4_MAB15)
  MAB15a_GA(经优化用于在玉米中表达) 1667 合成的产物(来自pGA18_MAB15a_GA)
  MAB15_GA_original(未经优化的原始序列) 1540   合成的产物(来自pGA14_MAB15_(EVO220)-original)
  MAB17_GA(经优化用于在拟南芥和玉米中表达) 1542 224 XbaI、SacI 合成的产物(来自pGA4_MAB17)
  MAB17a_GA(经优化用于在玉米中表达) 1544 合成的产物(来自pCR4Blunt-topO_MAB17a_GA)
  MAB17_GA_original(未经优化的原始序列) 1543   合成的产物(pGA14_MAB17_(EVO222)-original)
基因Id   多核苷酸已克隆的基因的SEQ ID NO.   多肽所编码多肽的SEQ IDNO. 用于克隆的限制酶 用于扩增的引物(SEQ ID NO：)
  MAB137_GA(经优化用于在玉米拟南芥和番茄中表达) 1537 317 XbaI、SacI 合成的产物(来自pGA15_MAB137)
  MAB3_GA(经优化用于在玉米拟南芥和番茄中表达) 1551 203 XbaI、SacI 合成的产物(来自pCR4Blunt-Topo_MAB3)
  MAB3_GA_original(未经优化的原始序列) 1668 合成的产物(来自pGA14_MAB3_(EVO235)-original)
  MAB18_GA(经优化用于在拟南芥和玉米中表达) 1545 225 XbaI、SacI 合成的产物(来自pGA4_MAB18)
  对照基因：GUI 1664
表3.通过基因Id编号和多核苷酸SEQ ID NO.呈提了已克隆的ABST基因及对照基因，还呈提了用于克隆所述ABST基因的引物和限制酶。
根据引物中的位点设计(表3)用限制性核酸内切酶(Roche，Switzerland)消化PCR产物。将每一种经消化的PCR产物***到源自pBlue-script KS质粒载体(pBlue-script KS质粒载体，http://WWW.stratagene.com/manuals/212205.pdf)的高拷贝载体中。在源自pBlue-script KS质粒载体的高拷贝载体(pGN)情况下，将PCR产物***到该高拷贝质粒的源自pBI 101.3二元载体的NOS终止子(GenBank登录号U12640，4417-4693位核苷酸)(SEQ ID NO：1651)的上游，见下表4。在其它情况下(pKSJ_6669a)，At6669启动子(SEQ IDNO：1652)已经被克隆到pBlue-script KS中，因此将所述基因导入该启动子的下游(下表4)。
用ABI 377测序仪(Applied Biosystems)对所***的基因进行了序列测定。在某些情况下，在证实了所克隆基因的序列后，通过用合适的限制性核酸内切酶消化将伴随有NOS终止子的克隆的cDNA导入到含有At6669启动子的二元载体pGI。在其它情况下，将伴随有At6669启动子的克隆的cDNA导入到pGI载体(其已经不含At6669启动子)。在任何情况下，在***片段之后接上单拷贝的NOS终止子(SEQ IDNO：1651)。用T4DNA连接酶(Roche，Switzerland)连接经消化的产物和线性化的质粒载体。
表4
在高拷贝质粒中从cDNA文库或基因组DNA克隆的基因
  基因名称   高拷贝质粒  扩增来源
  MAB1   pKSJ_6669  RNA
  MAB1  Gene Art
  MAB10  Gene Art
  MAB10   pGN  RNA
  MAB14   pKSJ_6669  RNA
  MAB14  Gene Art
  MAB15   pGN  Gene Art(3种质粒)
  MAB17   pGN  Gene Art(3种质粒)
  MAB 137   pGN  Gene Art
  MAB25   pKSJ_6669  RNA
  MAB25  Gene Art
  MAB3   pGN  Gene Art(2种质粒)
  MAB44   pGN  RNA
  MAB44  Gene Art
  MAB6   pGN  RNA
  MAB6  Gene Art
  MAB9   pKSJ_6669  RNA
  MAB9  Gene Art
  MAB100   pGN  RNA
  MAB13   pGN  RNA
  MAB134   pGN  RNA
  MAB18   pGN  Gene Art
  MAB2   pGN  RNA
  MAB20   pKSJ_6669  RNA
  基因名称   高拷贝质粒   扩增来源
  MAB146   pGN   RNA
  MAB32   pKSJ_6669   RNA
  MAB35   pKSJ_6669   RNA
  MAB36   pGN   RNA
  MAB43   pKSJ_6669   RNA
  MAB46   pGN   RNA
  MAB50   pKSJ_6669   RNA
  MAB7   pGN   RNA
  MAB99   pGN   RNA
  MAB66   pGN   RNA
  MAB4   pKSJ_6669   RNA
表4
通过将源自pGL3基础质粒载体的合成聚-(A)信号序列(Promega，GenBank登录号U47295；4658-4811位核苷酸)***到二元载体pBI101.3(Clontech，GenBank登录号U12640)的HindIII限制位点来构建pPI质粒载体。pGI(图1)与pPI相似，但在主骨架中的初始基因是GUS-Intron而不是GUS。
通过用限制酶HindIII和SalI或BamHI(Roche)，接着是DNA连接，将At6669拟南芥启动子序列(由SEQ ID NO：1652所示)***到pPI二元载体中的已克隆基因的上游，二元质粒如上所述从阳性大肠杆菌菌落提取。
通过PCR用引物鉴定阳性菌落，其中所述引物设计为跨越二元载体中导入的启动子(At6669)及克隆的基因。在所有情况下，正向PCR引物为SEQ ID NO：1650(来自At6669启动子)所示的引物，反向引物(源自特定的已克隆基因)如下：对于MAB1，反向引物为SEQ IDNO：1570；对于MAB14，反向引物为SEQ ID NO：1574；对于MAB10，反向引物为SEQ ID NO：1577；对于MAB25，反向引物为SEQ IDNO：1581；对于MAB134，反向引物为SEQ ID NO：1585；对于MAB99，反向引物为SEQ ID NO：1587；对于MAB36，反向引物为SEQ IDNO：1590；对于MAB7，反向引物为SEQ ID NO：1594；对于MAB44，反向引物为SEQ ID NO：1596；对于MAB4，反向引物为SEQ IDNO：1600；对于MAB9，反向引物为SEQ ID NO：1603(MAB9)；对于MAB100，反向引物为SEQ ID NO：1606；对于MAB13，反向引物为SEQ ID NO：1611；对于MAB32，反向引物为SEQ ID NO：1614；对于MAB35，反向引物为SEQ ID NO：1617；对于MAB146，反向引物为SEQ ID NO：1620；对于MAB2，反向引物为SEQ ID NO：1622；对于MAB20，反向引物为SEQ ID NO：1626；对于MAB43，反向引物为SEQID NO：1629；对于MAB46，反向引物为SEQ ID NO：1633；对于MAB50，反向引物为SEQ ID NO：1637；对于MAB66，反向引物为SEQ IDNO：1640；对于MAB4，反向引物为SEQ ID NO：1644；对于MAB15合成基因，反向引物为SEQ ID NO：1645；对于MAB17合成基因，反向引物为SEQ ID NO：1646；对于MAB18合成基因，反向引物为SEQID NO：1647；对于MAB137合成基因，反向引物为SEQ ID NO：1648；而对于MAB3合成基因，反向引物为SEQ ID NO：1649，它们都设计为跨越二元载体中所导入的启动子和基因。
从商业供应商(Gene Art，GmbH)定制某些克隆的多核苷酸的合成序列(例如MAB14，核苷酸SEQ ID NO：23，其编码蛋白SEQ IDNO：219)。为了优化编码序列，使用从植物转录组计算的密码子用法表(所述表的实例可以在可在线获得的密码子用法数据库中找到，http://WWW.kazusa.for.jp/codon/)。以在所编码的氨基酸序列中不导入变化同时使用优选用于在双子叶植物(主要是番茄和拟南芥)和单子叶植物(例如玉米)中表达的密码子的方式设计优化的编码序列。所述优化的序列支持更好的翻译速率，因此提高蛋白质表达水平。部分序列作为原始序列定制。在优化/非优化的序列侧翼加入另外的独特限制酶位点，以使在二元载体中更容易克隆基因。
所用启动子：拟南芥At6669启动子(SEQ ID NO：1652；其为Evogene Ltd.的WO04081173中的SEQ ID NO：61)。
所克隆的cDNA序列在SEQ ID NO：1530-1534、1536-1545、1547-1566、1654、1665、1666、1667和1668中提供。扩增的cDNA序列的蛋白质翻译准确匹配初始生物信息预测的蛋白质序列。克隆的多核苷酸的预测多肽序列在SEQ ID NO：201、212、284、213、217、317、219、221、224、225、226、227、229、237、203、247、252、205、265、267、271、277、207、208、211、283、1655、311、334和254中提供。
实施例4
用荷有推定的ABST基因的二元载体转化根癌农杆菌细胞
将以上实施例3所述的每一种二元载体用于转化农杆菌细胞。用具有代替ABST基因的GUS/荧光素酶报告基因(位于At6669启动子下游)的另外两种二元构建体作为阴性对照。
通过电穿孔将所述二元载体导入到根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)GV301或LB4404感受态细胞(约109个细胞/mL)中。用MicroPulser电穿孔仪(Biorad)、0.2cm的电穿孔池(Biorad)和EC-2电穿孔程序(Biorad)进行电穿孔。将经处理的细胞于28℃在LB液体培养基培养3小时，然后于28℃铺板于补充有庆大霉素(gentamycin)(50mg/L；对于农杆菌菌株GV301)或链霉素(streptomycin)(300mg/L；对于农杆菌菌株LB4404)和卡那霉素(kanamycin)(50mg/L)的LB琼脂上48小时。用上述(实施例3)关于鉴定阳性二元载体克隆的引物，通过PCR对在选择培养基上生长的农杆菌菌落进行分析。分离所得到的PCR产物，如上面实施例3所述进行测序，以验证正确的ABST序列被正确地导入到农杆菌细胞中。
实施例5
用推定的ABST基因转化拟南芥植株
用微作改良的由Clough和Bent(10)及由Desfeux等(11)所述的花浸(Floral Dip)法转化拟南芥哥伦比亚植株(T0代植株)。简言之，将T0代植株播种在填充基于湿泥炭的生长混合物的250ml的盆中。用铝箔和塑料圆顶覆盖盆，在4℃保持3-4天，然后去掉覆盖物，在16/8小时光照/黑暗周期下于18-24℃在生长室中孵育。在开花期前6天准备T0代植株用于转化。
如以上实施例4所述产生携带二元构建体的农杆菌单菌落。让所述菌落在补充有卡那霉素(50mg/L)和庆大霉素(50mg/L)的LB培养基中培养。让培养物在剧烈震荡下于28℃孵育48小时，然后以4000rpm离心5分钟。将包含农杆菌细胞的沉淀重新悬浮在含有以下物质的转化培养基中：半强度(2.15g/L)Murashige-Skoog(Duchefa)；0.044μM苄氨基嘌呤(Sigma)；112μg/L B5 Gambourg维生素(Sigma)；5％蔗糖；和0.2ml/L Silwet L-77(OSI Specialists，CT)，双蒸水，pH 5.7。
通过让各植株反转置于农杆菌悬浮液中以使地上植物组织浸没3-5秒来实施T0代植株的转化。将各个已接种的T0代植株立即置于塑料盘中，然后用透明的塑料圆顶覆盖以保持湿度，于室温在黑暗中保持18小时，以促进感染和转化。然后去掉转化的(转基因)植株的覆盖物，并将植株转移到温室用于恢复和成熟。让转基因的T0代植株在温室中生长3-5周，直到长角果(silique)成为棕色并变干。从植株收获种子并保持在室温中直到播种。
为了产生荷有所述基因的T1和T2代转基因植物，如下对收集自转基因T0代植株的种子进行表面消毒：沉浸在70％乙醇1分钟，接着沉浸在5％次氯酸钠和0.05％triton中5分钟。在无菌蒸馏水中彻底洗涤经表面消毒的种子，然后置于含有半强度Murashige-Skoog(Duchefa)、2％蔗糖、0.8％植物琼脂、50mM卡那霉素和200mM羧苄青霉素(carbenicylin)(Duchefa)的培养板中。让培养板在4℃孵育48小时，然后转移到25℃生长室中再孵育1周。将有活力的T1代拟南芥植株转移到新鲜培养板中再孵育1周。孵育后将T1代植株从培养板中移出，栽种到含有生长混合混合物的250ml盆中。使该转基因植株在温室中生长至成熟。在与用于培养和生长T1代植株的同样的条件下，让从T1代植株收获的种子培养并生长至成熟，作为T2代植株。
实施例6
在组织培养测定中的改进的ABST
测定1：在组织培养条件下在渗压胁迫(PEG)下的植物生长-渗压胁迫(PEG)-条件与在干旱期间发现的高渗透性相似(例如25％PEG8000)。干旱的一个结果是在根周围区域诱导渗压胁迫；因此，在很多科学研究中，PEG用来模拟干旱。
将经表面消毒的种子播种在卡那霉素存在下的(仅用于选择转基因植物)基础培养基[50％Murashige-Skoog培养基(MS)，补充0.8％植物琼脂作为固化剂]中。播种后将板转移到4℃2-3天进行层积催芽，然后在每日12小时光照12小时黑暗的周期中于25℃生长7-10天。在该时间点将随机选择的幼苗谨慎转移到含25％PEG的0.5MS培养基或正常条件(0.5MS培养基)的板中。每块板含有同一事件的5株幼苗，每一事件有3-4块不同的板(重复)。对于本发明的每一种多核苷酸，分析来自每一构建体的至少四个独立的转化事件。将表达本发明多核苷酸的植株与在相同的启动子调控下表达uidA报告基因(GUSIntron-GUI)的作为对照的模拟转基因植物的平均测量比较。
数码成像-使用实验室图像采集***捕获在方形琼脂平板中播种的小植株的图像，该图像采集***由附有55mm焦距的镜头(CanonEF-S系列)的反射式数码相机(Canon EOS 300D)组成，相机安放在再现设备(Kaiser RS)上，再现设备包括4个光单元(4x150瓦的灯泡)，并位于暗室中。
在第0天开始直到第14天，每7天重复图像捕获过程。使用附有24mm焦距镜头(Canon EF系列)、置于定制的铁座上的同样的相机捕获图像。
使用图像分析***，该***由个人台式电脑(Intel P43.0GHz处理器)和公共领域程序-ImageJ 1.37(基于Java的图像处理程序，其在美国国立卫生研究院开发，可在互联网上于http://rsbweb.nih.gov/处免费获得)组成。以6百万像素(3072x2048像素)的分辨率捕获图像，并以低压缩的JPEG(联合图像专家组标准)格式存储。接下来，将被分析的数据保存为文本文档并用JMP统计分析软件(SAS institute)处理。
幼苗分析-用数字分析来计算幼苗数据，包括叶面积、根覆盖和根长。
按照以下公式I计算相对生长率(RGR)。
公式I：
相对生长面积率＝(Δ面积/Δt)*(1/面积t0)
Δt为当前分析图像的日子减去初始日期(t-t0)。因此，相对生长面积率以1/天为单位，长度生长率以1/天为单位。
在实验结束时，从培养基中移出小植株并称重测定植株的鲜重。通过比较每一对连续相片之间的叶面积、根长和根覆盖来测定相对生长率，并将结果用于确定被导入的基因在渗压胁迫下以及在最佳条件下对植物活力的影响。同样地，通过与对照植株(GUI)比较植株鲜重来测定被导入的基因在渗压胁迫下以及在最佳条件下对生物量积聚的影响。
统计学分析-为了鉴定更好的基因及构建体，在独立转化事件的结果中评估基因的总的影响(基因作用)和每一测试事件(最佳事件(bestevent))。应用学生t检验，用p＜0.05或p＜0.1的显著性。使用JMP统计软件包(5.2.1版本，SAS Institute Inc.，Cary，NC，USA)。
实验结果
针对多种所期需的性状，对本发明多核苷酸序列进行了分析。
表5-6描述了在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同，且A表明P＜0.05水平的显著性差异，A*表明P＜0.1水平的显著性差异。
表5：显示在25％PEG下改进叶面积的基因
Figure GPA00001075310301021
表5：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表6：显示在25％PEG下改进叶面积的基因
Figure GPA00001075310301022
表6：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表7-9描述在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表7
Figure GPA00001075310301023
表7：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表8
表8：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表9
Figure GPA00001075310301032
表9：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表10-11描述在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根长分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表10
Figure GPA00001075310301033
表10：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表11
Figure GPA00001075310301041
表11：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表12-13描述在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶面积RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表12
Figure GPA00001075310301042
表12：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表13
Figure GPA00001075310301043
表13：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表14-18描述在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表14
表14：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表15
表15：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性差异为P＜0.05，A*意指显著性差异为P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表16
表16：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表17
表17：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表18
Figure GPA00001075310301062
表18：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表19-21描述在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根长RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表19
Figure GPA00001075310301063
表19：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表20
Figure GPA00001075310301071
表20：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表21
表21：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表22-23描述在25％PEG条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的植物鲜重分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表22
表22：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表23
Figure GPA00001075310301081
表23：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表24-27描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表24
Figure GPA00001075310301082
表24：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指显著性不同为P＜0.05。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表25
Figure GPA00001075310301083
表25：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表26
表26：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表27
Figure GPA00001075310301092
表27：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表28-31描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表28
Figure GPA00001075310301093
表28：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表29
表29：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表30
Figure GPA00001075310301102
表30：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表31
表31：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表32-33描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根长分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表32
Figure GPA00001075310301111
表32：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表33
表33：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表34-36描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶面积RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表34
Figure GPA00001075310301113
表34：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表35
Figure GPA00001075310301121
表35：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表36
Figure GPA00001075310301122
表36：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表37-41描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表37
Figure GPA00001075310301123
表37：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表38
Figure GPA00001075310301131
表38：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表39
Figure GPA00001075310301132
表39：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表40
表40：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表41
Figure GPA00001075310301141
表41：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表42-46描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根长RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表42
Figure GPA00001075310301142
表42：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表43
Figure GPA00001075310301143
表43：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表44
表44：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表45
Figure GPA00001075310301152
表45：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表46
Figure GPA00001075310301153
表46：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表47-48描述在正常条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的植物鲜重分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表47
Figure GPA00001075310301161
表47：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表48
表48：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
测定2：在组织培养条件下在氮缺乏时的植物生长-本发明人业已发现NUE(氮利用效率)测定适宜用于评估ABST候选基因，因为NUE缺乏使得根延长，增加根覆盖，使得可以检测植物在干旱条件下产生更好根系的潜力。另外，文献(Wesley等，2002 Journal of ExperimentBotany，第53卷，第366期，第13-25页)中指出NUE和耐旱性的生物学机制有关联。
将经表面消毒的种子播种到在卡那霉素存在下(仅用于选择转基因植物)的基础培养基[补充0.8％植物琼脂作为固化剂的50％Murashige-Skoog培养基(MS)]中。播种后将板转移到4℃2-3天进行层积催芽，然后于25℃在每日12小时光照12小时黑暗的周期中生长7-10天。在该时间点，将随机挑选的幼苗小心转移到具有以下氮限制条件的板中：0.5MS培养基，其中联合的氮浓度(NH4NO3和KNO3)为0.75mM(氮缺乏条件)，或转移到具有以下正常氮条件的板中：0.5MS培养基，其中联合的氮浓度(NH4NO3和KNO3)为3mM(正常氮浓度)。同时进行所有组织培养实验(NUE、PEG及正常)。在正常条件下生长的NUE结果与PEG的结果是一样的，其在测定1中提供。每块板含有同一事件的5株幼苗，每一事件有3-4块不同的板(重复)。对于每一种本发明多核苷酸，至少分析来自每一构建体的四个独立转化事件。将表达本发明多核苷酸的植株与在同一实验中所用的对照植株(GUI-在同一启动子调控下荷有GUS基因)的平均测量值比较。
数码成像和统计学分析-如以上测定1所述测量并分析参数。
实验结果-针对多种所期需的性状，对本发明多核苷酸序列进行了分析。
表49-53描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表49
Figure GPA00001075310301171
表49：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表50
Figure GPA00001075310301181
表50：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表51
Figure GPA00001075310301182
表51：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表52
Figure GPA00001075310301183
表52：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表53
Figure GPA00001075310301191
表53：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表54-57描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表54
Figure GPA00001075310301192
表54：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表55
Figure GPA00001075310301193
表55：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表56
Figure GPA00001075310301201
表56：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表57
Figure GPA00001075310301202
表57：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表58-61描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根长分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表58
Figure GPA00001075310301203
表58：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEO ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表59
Figure GPA00001075310301211
表59：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表60
表60：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表61
Figure GPA00001075310301213
表61：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表62-64描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶面积RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表62
Figure GPA00001075310301221
表62：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表63
Figure GPA00001075310301222
表63：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表64
Figure GPA00001075310301223
表64：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表65-69描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖RGR分析。各表代表独立的实验，每一基显著不同。
表62
Figure GPA00001075310301231
表62：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表63
Figure GPA00001075310301232
表63：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表64
Figure GPA00001075310301233
表64：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表65-69描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根覆盖RGR分析。各表代表独立的实验，每一基
表68
Figure GPA00001075310301241
表68：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表69
Figure GPA00001075310301242
表69：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表70-74描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的根长RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表70
Figure GPA00001075310301243
表70：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表71
Figure GPA00001075310301251
表71：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表72
Figure GPA00001075310301252
表72：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表73
Figure GPA00001075310301253
表73：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表74
Figure GPA00001075310301261
表74：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(CUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表75-76描述在氮缺乏条件下在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的植物鲜重分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表75
Figure GPA00001075310301262
表75：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表76
Figure GPA00001075310301263
表76：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
实施例7
在温室测定中改进的ABST
ABS耐受性：在温室条件下于高盐浓度时的产量和植物生长率-本测定跟踪在温室中生长的植物的叶丛面积生长以及在高咸度灌溉时的种子产量。种子在育苗条件下播种在仅补充选择剂(卡那霉素)及Hoagland溶液的琼脂培养基中。然后将T2代转基因幼苗移植到用泥炭及珍珠岩填充的1.7盘中。用自来水浇灌(从盘底部提供)这些蔓生的植物(trail)。用盐溶液(40-80mM NaCl和5mM CaCl2)浇灌一半植株以诱导咸度胁迫(胁迫条件)。另一半植株继续用自来水浇灌(正常条件)。所有植株都在温室中生长直到植株到达成熟种子阶段，然后收获(地上部分的组织)并称重(立即或在50℃烘箱中干燥24小时后)。通过用含有40-80mM NaCl的溶液浇灌达到高咸度条件(“ABS”生长条件)，并与常规生长条件比较。
分析植株的总体大小、生长率、种子产量和种子千粒重、干物质和收获指数(HI-种子产量/干物质)。比较在同样条件下并行生长的转基因植株与对照植株。将在同样启动子调控下表达uidA报告基因(GUSIntron-GUI)的模拟转基因植株用作对照。
以随机网巢样地分布设计实验。通过用含有40-80mM NaCl的溶液浇灌达到高咸度条件(“ABS”生长条件)。
数码成像-使用实验室图像采集***捕获小植株图像，该图像采集***由附有55mm焦距的镜头(Canon EF-S系列)的反射式数码相机(Canon EOS 300D)组成，相机安放在再现设备(Kaiser RS)上，再现设备包括4个光单元(4x150瓦的灯泡)。
在播种后第1天开始直到第10天每2-3天重复图像捕获过程。附有24mm焦距镜头(Canon EF系列)、置于定制的铁座上的同样的相机用于捕获播种在环境受控的温室中的白盆内播种的较大的植株的图像(如图2a-b所见)。所述盆为方形，包括1.7升的盘。在该捕获过程中，将盘放置在铁座下面，同时避免直接日光和投下的阴影。每2-3天重复该过程，至多10天。
使用图像分析***，该***由个人台式电脑(Intel P43.0GHz处理器)和公共领域程序-ImageJ 1.37(基于Java的图像处理程序，其在美国国立卫生研究院开发，可在互联网上于http://rsbweb.nih.gov/处免费获得)组成。以6百万像素(3072x2048像素)的分辨率捕获图像，并以低压缩的JPEG(联合图像专家组标准)格式存储。接下来，将被分析的数据保存为文本文档并用JMP统计分析软件(SAS institute)处理。
营养生长参数分析-用数字分析对叶数据进行计算，包括叶平均面积、叶丛直径和叶丛面积。按照实施例6所述的公式I计算叶丛参数的相对生长率(RGR)。植物在播种的第80天收获，在干燥室中于30℃干燥。将每个小区(plot)的生物量和种子重量分开，测量，并除以植株的数目。干重＝在干燥室中于30℃干燥后地上营养性部分(排除根)的总重量；每株植物的种子产量＝每株植物的种子总重量(gr)。
如下测定种子千粒重：将种子分散在玻璃盘中并照相。称量每一样品，然后用数字分析，计算每一样品中的种子数量。用公式II计算种子千粒重：
公式II
种子千粒重＝样品中的种子数量/样品的重量X1000
收获指数-用公式III计算收获指数。
公式III：
收获指数＝平均每株植物的种子产量/平均干重
在其T2代中验证各个构建体。将在同样启动子调控下表达uidA报告基因(GUI)的转基因植株用作对照。
统计学分析-为了鉴定赋予对非生物胁迫耐受性显著改进或扩大根系构造的基因，将从转基因植株获得的结果与从对照植株获得的结果进行比较。为了鉴定更好的基因及构建体，单独地分析来自所测试的独立转化事件的结果。另外，还考虑从测试特定构建体的所有独立转化事件中获得的结果来分析基因和构建体。为了与对照比较分析基因，应用学生t检验，用p＜0.05或p＜0.1的显著性。使用JMP统计软件包(5.2.1版本，SAS Institute Inc.，Cary，NC，USA)。
实验结果
针对多种所期需的性状，对本发明的多核苷酸序列进行。
表77-86描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表77
Figure GPA00001075310301291
表77：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表78
Figure GPA00001075310301292
表78：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表79
Figure GPA00001075310301293
表79：LSM ＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表80
Figure GPA00001075310301301
表80：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表81
Figure GPA00001075310301302
表78：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表82
Figure GPA00001075310301303
表82：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表83
Figure GPA00001075310301304
表83：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
中提供。
表80
Figure GPA00001075310301311
表80：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表81
Figure GPA00001075310301312
表78：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表82
Figure GPA00001075310301313
表82：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表83
Figure GPA00001075310301314
表83：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表87
Figure GPA00001075310301321
表87：LSM＝最小二乘万均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表88
Figure GPA00001075310301322
表88：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表89
Figure GPA00001075310301323
表89：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表90
Figure GPA00001075310301324
表90：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表91
表91：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表92
Figure GPA00001075310301332
表92：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表93
Figure GPA00001075310301333
表93：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表94
Figure GPA00001075310301334
表94：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表95
Figure GPA00001075310301341
表95：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表96
Figure GPA00001075310301342
表96：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表97-105描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶平均面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表97
Figure GPA00001075310301343
表97：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表98
表98：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表99
Figure GPA00001075310301352
表99：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表100
Figure GPA00001075310301353
表100：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表101
Figure GPA00001075310301354
表101：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表102
Figure GPA00001075310301361
表102：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表103
Figure GPA00001075310301362
表103：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表104
Figure GPA00001075310301363
表104：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表105
Figure GPA00001075310301364
表105：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表106-111描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛面积[cm2]RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表106
Figure GPA00001075310301371
表106：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表107
Figure GPA00001075310301372
表107：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表108
Figure GPA00001075310301381
表108：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表109
Figure GPA00001075310301382
表109：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表110
表110：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表111
Figure GPA00001075310301391
A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表112-118描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛直径RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表112
Figure GPA00001075310301392
表112：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表113
Figure GPA00001075310301393
表113：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表114
Figure GPA00001075310301401
表114：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表115
Figure GPA00001075310301402
表115：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表116
Figure GPA00001075310301403
表116：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表117
表117：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表118
表118：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表119-121描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶平均面积[cm2]RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表119
表119：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表120
Figure GPA00001075310301421
表120：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表121
Figure GPA00001075310301422
表121：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表122描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶平均面积[cm2]RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表122
表122：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表123描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的小区(plot)干重(DW)分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表123
Figure GPA00001075310301431
表123：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表124-126描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的种子千粒重分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表124
表124：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表125
表125：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表126
表126：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表127-129描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的每株植物的种子产量分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表127
Figure GPA00001075310301442
表127：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表128
Figure GPA00001075310301451
表128：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表129
Figure GPA00001075310301452
表129：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表130描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的收获指数分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表130
Figure GPA00001075310301453
表130：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表131-140描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表131
Figure GPA00001075310301461
表131：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表132
Figure GPA00001075310301462
表132：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表133
Figure GPA00001075310301463
表133：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表134
Figure GPA00001075310301464
表134：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表135
Figure GPA00001075310301471
表135：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表136
Figure GPA00001075310301472
表136：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表137
Figure GPA00001075310301473
表137：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表138
Figure GPA00001075310301481
表138：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表139
Figure GPA00001075310301482
表139：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表140
表140：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表141-148描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛直径分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表141
Figure GPA00001075310301491
表141：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ IDNO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表142
表142：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表143
Figure GPA00001075310301493
表143：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表144
Figure GPA00001075310301494
表144：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表145
Figure GPA00001075310301501
表145：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表146
Figure GPA00001075310301502
表146：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表147
Figure GPA00001075310301503
表147：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表148
Figure GPA00001075310301504
表148：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表149-157描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶平均面积分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表149
Figure GPA00001075310301511
表149：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表150
Figure GPA00001075310301512
表150：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表151
Figure GPA00001075310301513
表151：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表152
Figure GPA00001075310301521
表152：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表153
Figure GPA00001075310301522
表153：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表154
Figure GPA00001075310301523
表154：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表155
Figure GPA00001075310301524
表155：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表156
表156：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表157
表157：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表158-166描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛面积[cm2]RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表158
Figure GPA00001075310301533
表158：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表159
Figure GPA00001075310301541
表159：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表160
Figure GPA00001075310301542
表160：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表161
表161：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表162
Figure GPA00001075310301551
表162：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表163
Figure GPA00001075310301552
表163：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表164
Figure GPA00001075310301553
表164：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表165
Figure GPA00001075310301561
表165：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表166
Figure GPA00001075310301562
表166：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表167-175描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶丛直径RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表167
表167：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表168
Figure GPA00001075310301571
表168：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表169
表169：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表170
Figure GPA00001075310301573
表170：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表171
Figure GPA00001075310301581
表171：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表172
Figure GPA00001075310301582
表172：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表173
Figure GPA00001075310301583
表173：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表174
Figure GPA00001075310301591
表174：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表175
表175：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表176-178描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶平均面积[cm2]RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表176
表176：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较.在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表177
Figure GPA00001075310301601
表177：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较.在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表178
Figure GPA00001075310301602
表178：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较.在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表179-180描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的叶平均面积[cm2]RGR分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表179
表179：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表180
表180：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表181-182描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的小区干重(DW)分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表181
Figure GPA00001075310301612
表181：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表182
Figure GPA00001075310301613
表182：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表183-185描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的种子千粒重分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表183
Figure GPA00001075310301621
表183：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表184
表184：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表185
Figure GPA00001075310301623
表185：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表186-187描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的每株植物的种子产量分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表186
表186：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表187
Figure GPA00001075310301632
表187：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
表188描述在6669启动子调控下过表达本发明多核苷酸的植株中的收获指数分析。各表代表独立的实验，每一基因用4个独立的事件。与所述对照的字母(A、B)不相同的基因与对照显著不同。
表188
Figure GPA00001075310301641
表188：LSM＝最小二乘方均值；％改进＝与对照(GUI)比较；A意指有显著差异，P＜0.05；A*意指有显著性差异，P＜0.1。在植物中外源表达的克隆的基因的SEQ ID NO.(根据基因Id)在上表3中提供。
实施例8
用推定的ABST基因转化番茄M82植株
为了转化番茄，先用次氯酸钠3％+2-3滴Tween 20(聚山梨醇酯20)对番茄M82种子消毒。用无菌蒸馏水洗涤种子3次。然后让种子在25℃黑暗生长室中在全强度Nitsch培养基中萌发8天。然后将小植株切割为2-4cm的茎，将其***到填充了30-40ml的MS液体培养基的10-cm的培养皿中。然后切下子叶用作外植体，随后转移到10-cm培养皿中含100μM乙酰丁香酮的KCMS固化培养基。用根癌农杆菌(A.tumefascience)接种外植体30-50分钟。让外植体共同培养24小时，转移到包括卡那霉素作为选择培养基的再生培养基中。然后将抗性再生小植株转移到生根培养基中10-14天，直到出现根。
实施例9
M82番茄转化植株的生长和表型表征
实验程序
产生转基因番茄植物-如以上实施例8所述转化植物。转化后让T1M82番茄植株生长直到植物座果。让T2代种子参加实验以评估非生物胁迫耐受性。
实验结果
测定1-在常规和缺水方案下的番茄田间试验-将番茄田间试验设计为与标准农场相似的单一水源滴灌(OSDI，one source drippingirrigation)***。因为以相对均一的方式施加缺水条件，所以使得可测量干旱对小型植物群体的影响。OSDI法是基于并排水源喷灌***(linesource sprinklers irrigation system)(Hanks等1976 Soil Sci.Soc Am.J.40，第426-429页)进行某些明显改进发展而来。采用滴灌代替喷洒浇灌。为了形成均一的深层湿层(至少60cm深)，并且不是通常由滴灌形成的洋葱头形，使用低压补偿滴灌***(low pressure compensatingdripping irrigation system)。该***使得可在相对长的时间范围内供应少量的水。在以色列雷霍沃特(Rehovot)附近的敞地(网房(net-house))的轻质土中进行干旱胁迫田间试验。每一基因评估4-5个事件，将无效分离群(null segregating population)用作阴性对照。在开始3周期间，所有植株都在正常浇灌条件下在育苗场中生长。在该时期后，根据商业性栽培方案移植植株，在植株之间保持30cm的距离，达到整体密度为每1000平方米2,600株植物(商业性栽培中的推荐密度)。将每一植株移植到水滴头(water dripper)附近，并进一步接受两种不同的处理：
最佳(100％)：最佳浇灌条件(100％)。每2天进行浇灌作为推荐的标准水供应。推荐的标准水供应是由当地商业性栽培者按照标准方案施用的量。
严重胁迫(50％)：每天一次施用50％的最佳水浇灌量(在与施用常规浇灌相同的时间)。
按照当地标准方案施用所有肥料。对于所有通过浇灌***的处理而言，按照推荐的同样地施用氮肥。每行193cm宽，含有两条滴灌线，形成每平方米6个滴头的覆盖面。对每种处理实施单独的浇灌对照。实验的构成为四个随机的区组设计(block design)，每个小区8株植物。当植物花期开始时，对于3个移植启动不同的水方案仅4周。用张力计(用于测定土壤水势Ψm，允许评估胁迫严重程度)记录土壤中水的可用性。
测定2-番茄盐浴实验-将转基因番茄种子播种在含有生长除氮培养基(growth denitrified media)的盘中。幼苗在育苗条件下发芽。所用实验模型为3个随机分布的区组，在每个区组中播种每一事件的10株植物。在第一片真叶阶段，将盘转移到含有300mM NaCl的生长溶液的不同的“池”中。对于正常处理，施用全Hoagland溶液。每一基因评估5个事件，同时将无效分离群用作阴性对照。实验进行8周，其中测量诸如叶绿素含量(以SPAD单位测量)、植物生物量(FW和DW)等参数。
尽管结合本发明的具体实施方案阐述了本发明，但很显然，很多备选、修改及改变对本领域技术人员显而易见。因此，意欲包括落入所附权利要求书精神和宽范围的所有的这种备选、修改及改变。
在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请在此以其整体引作本说明书的参考，其引用程度如同每一单个出版物、专利或专利申请被明确并个别地指出在此引作参考一样。另外，在本申请中任何参考文献的引用或证明不应该理解为承认所述参考文献可用作本发明的现有技术。对于所用部分的标题的范围，不应该理解为必要的限制。
引用的参考文献
(另外的参考文献在上文中引用)
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Claims (20)

1.提高植物对非生物胁迫的耐受性的方法，所述方法包括在所述植物内表达编码多肽的外源多核苷酸，藉此提高所述植物对非生物胁迫的耐受性，其中所述多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
2.提高植物对非生物胁迫的耐受性的方法，所述方法包括在所述植物内表达编码多肽的外源多核苷酸，藉此提高所述植物对非生物胁迫的耐受性，其中所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：SEQ IDNO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663，藉此提高植物对非生物胁迫的耐受性。
3.提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量的方法，所述方法包括在所述植物内表达编码多肽的外源多核苷酸，藉此提高所述植物的生物量、生长率、活力和/或产量，其中所述多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
4.提高植物的生物量、生长率、活力和/或产量的方法，所述方法包括在所述植物内表达编码多肽的外源多核苷酸，藉此提高所述植物的生物量、生长率、活力和/或产量，其中所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
5.分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含与选自以下的核酸序列有至少90％同一性的核酸序列：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
6.分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含选自以下的核酸序列：SEQID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
7.核酸构建体，所述核酸构建体包含权利要求5或6的分离的多核苷酸和用于指导所述核酸序列转录的启动子。
8.分离的多肽，所述多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
9.分离的多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：SEQ IDNO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
10.植物细胞，所述植物细胞包含外源多肽，所述多肽包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
11.植物细胞，所述植物细胞包含外源多肽，所述外源多肽包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
12.植物细胞，所述植物细胞包含外源多核苷酸，所述外源多核苷酸包含与选自以下的核酸序列至少90％同源的核酸序列：SEQ IDNO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
13.植物细胞，所述植物细胞包含外源多核苷酸，所述外源多核苷酸包含选自以下的核酸序列：SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
14.权利要求1、2、3或4的方法、权利要求5的分离的多核苷酸、权利要求7的核酸构建体或权利要求12的植物细胞12，其中所述核酸序列选自SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
15.权利要求1、2、3或4的方法、权利要求5或6的分离的多核苷酸、权利要求7的核酸构建体或权利要求12或13的植物细胞，其中所述多核苷酸选自SEQ ID NO：1530、1561、1532、1531、1562、1533、1538、1549、1665、1566、1554、1563、1557、1564、1534、1536、1552、1553、1666、1547、1548、1556、1559、1560、1654、1555、1540、1543、1668、1539、1550、1558、1565、1541、1667、1542、1544、1537、1551、1545、1-200、1653、392-960和1656-1659。
16.权利要求1或3的方法、权利要求8的分离的多肽或权利要求10的植物细胞，其中所述氨基酸序列选自SEQ ID NO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
17.权利要求1、2、3或4的方法、权利要求8或9的分离的多肽或权利要求10或11的植物细胞，其中所述多肽选自SEQ IDNO：201、207、212、202-206、208-211、213-391、1655、961-1529和1660-1663。
18.权利要求10、11、12或13的植物细胞，其中所述植物细胞形成植物的部分。
19.权利要求1或2的方法，其中所述非生物胁迫选自成度、干旱、脱水、低温、高温、重金属毒性、缺氧、营养缺乏、营养过剩、大气污染和UV辐射。
20.权利要求1或2的方法，所述方法进一步包括让表达所述外源多核苷酸的植物在所述非生物胁迫下生长。
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