ES2667342T3 - Glutaril histamina para el tratamiento y profilaxis de la enfermedad causada por virus que contienen ARN (+) - Google Patents

Glutaril histamina para el tratamiento y profilaxis de la enfermedad causada por virus que contienen ARN (+) Download PDF

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Abstract

Glutaril histamina o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para su uso en la prevención o el tratamiento de enfermedades causadas por virus que contienen ARN (+) que pertenecen al género Enterovirus o al género Flavivirus.

Description

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Se administró glutaril histamina por vía oral una vez al día durante 3 días, comenzando a las 12 horas después de la infección de los ratones con HRV. A los ratones del grupo control se les administró solución salina normal en las mismas condiciones.
5 Se administró glutaril histamina en dosis de 15 y 30 mg/kg.
Los títulos de infección de HRV en suspensiones de tráquea y pulmones de ratón 48 y 72 horas después de la infección se determinaron mediante análisis individual de una suspensión al 10 % derivada de cada ratón en una serie de diluciones de 10 veces en cultivo celular Hela. Los resultados se evaluaron mediante PCR a las 2 horas
10 después de la incubación a 33 °C.
Cada dilución de una sonda de prueba se evaluó en cuatro pocillos de una placa, y los valores obtenidos se usaron para calcular un valor medio. La dilución máxima del sobrenadante de cultivo infectado en el que se detectó el ARN viral mediante PCR se aceptó como título del virus. El título se expresó como el valor recíproco de la dilución del
15 virus en el que se determinó el ARN de HRV (lg/ml se representa como un valor medio: lg ± m).
El análisis estadístico de los resultados se realizó usando el software Microsoft Excel.
La eficacia de la glutaril histamina se evaluó mediante la supresión de la reproducción del virus en los pulmones a 20 las 48 y 72 horas después de la infección por HRV.
Los criterios de la efectividad de la glutaril histamina in vivo fueron una reducción en la acumulación de virus en los pulmones, determinada en base al título infeccioso en el cultivo de células Hela y directamente en suspensiones de pulmones de ratón mediante un método de PCR.
25 Los resultados de la determinación de la actividad infecciosa de HVR en suspensiones de pulmones de ratón en el cultivo de células Hela se dan en la Tabla 1.
La titulación de las suspensiones pulmonares de los ratones infectados con HVR mostró una proliferación del virus
30 en los pulmones, que alcanzó el valor máximo de 4,1 g en 48 horas, y 3,2 g en 72 horas en el grupo de control. El uso de glutaril histamina dio lugar a una reducción bastante pronunciada en la actividad infecciosa de HRV, en particular por 2,6 y 2,2 lg, respectivamente, en una dosis usada de glutaril histamina de 30 mg/kg.
Se obtuvieron los mismos resultados en el estudio de la efectividad de la glutaril histamina contra la infección por
35 HVR en ratones mediante la supresión y la actividad del virus directamente en los pulmones mediante un método de PCR. La PCR en tiempo real demostró una reducción significativa en la cantidad de copias de ARN viral a las 48 y 72 horas después de la infección, concretamente de 10 a 100 veces, en el grupo de ratones a los que se administró glutaril histamina, en comparación con los grupos de control.
40 De este modo, este ejemplo muestra una posibilidad de usar glutaril histamina como un agente antiviral eficaz que disminuye específicamente la reproducción del rinovirus humano.
Tabla 1
Título infeccioso del virus HVR en los pulmones del ratón en 48 y 72 horas
Fármaco
Cantidad total de animales en cada grupo (n) Título de virus infeccioso en pulmones, lg, TCID50 Supresión de la reproducción del virus (Δ lg) PAG
Glutaril histamina, 15 mg/ml (48 h)
10 2,8 ± 0,4 1,3 0,01
Glutaril histamina, 30 mg/ml (48 h)
10 1,5 ± 0,3 2,6 0,001
Solución salina normal (48 horas)
4,1 ± 0,4
Glutaril histamina, 15 mg/ml (72 h)
10 2,1 ± 0,3 1,1
Glutaril histamina, 30 mg/ml (72 h)
10 1,0 ± 0,3 2,2 0,01
Solución salina normal (72 h)
10 3,2 ± 0,4
7
imagen6
Tabla 4
Resultados de la efectividad de la glutaril histamina en la forma experimental de la fiebre del Nilo occidental en ratones blancos
Fármaco
Dosis farmacológica, mg/kg Esquema de administración de fármacos Protección contra la muerte, % Promedio de vida de los animales en un grupo, días Extensión del tiempo de vida promedio de los animales en un grupo, Δ, días
Glutaril histamina
30/15 +24 h, +48 h, +72 h, +96 h, +120 h 50,0 11,5 4,5
Ribavirina
20 10,0 7,2 0,2
Control de una dosis del virus (sin fármaco)
- 7,0 -
Control de una manada
21,0
Ejemplo 3
5 Estudio de efectividad de la glutaril histamina en un modelo experimental de un virus de encefalitis transmitida por garrapatas (TBE)
La eficacia de la glutaril histamina se estudió en el modelo experimental de TBE en ratones blancos con un peso de 9 a 10 g que se infectaron por vía subcutánea con la cepa Sof'in del virus TBE en una dosis de 30DL50. La glutaril 10 histamina se administró por vía oral en una dosis de 5 mg/kg por el esquema de prevención (5 días antes de la infección, una vez al día); por el esquema de prevención/tratamiento (a los 5 días antes de la infección y durante 7 días después de la infección, una vez al día); por el esquema de tratamiento (a las 24 horas después de la infección y después durante 7 días, una vez al día); así como en una dosis de 30 mg/ml, por el esquema de prevención (una vez a la semana); por el esquema de tratamiento (una vez al día a las 24 y 48 horas después de la infección, y
15 después en una dosis única de 15 mg/kg en 72, 96 y 120 horas).
Se usó ribavirina como medicamento de referencia mediante el esquema de prevención de emergencia en una dosis de 20 mg/kg.
20 Los resultados de los estudios dados en la Tabla 5 demuestran que se observó la eficacia antiviral máxima de la glutaril histamina cuando se administró glutaril histamina mediante los esquemas de prevención y prevención/tratamiento. Se demostró que la protección contra la muerte fue del 40 % y un aumento en el tiempo de vida promedio fue de 4,2 días. En la administración por los esquemas de prevención y prevención/tratamiento, la efectividad protectora de la glutaril histamina fue del 35 %.
25 Tabla 5
Resultados del estudio de efectividad de la glutaril histamina en el modelo experimental de TBE en ratones blancos
Fármaco
Esquema de administración de fármacos Tiempo de vida promedio, días Extensión de la vida promedio, Δ, días Relación de protección, %
Glutaril histamina
-96 h, -72 h, -48 h, -24 h, -1 h 15,1 3,9 35,0
-20 h, -24 h, +1 h, +24 h, +48 h, +72 h, +96 h, +120 h, +144 h
15,4 4,2 40,0
+1 h, +24 h, +48 h, +72 h, +96 h, +120 h, +144 h
13,6 2,4 35,0
Ribavirina
+1 h, +24 h, +48 h, +72 h, +96 h, +120 h, +144 h 15,0 3,8 35,0
Control de una dosis de virus (sin fármaco)
11,2
Control de una manada
21,0 - -
"-" -la administración de un medicamento antes de la infección; "+" -la administración de un medicamento después de la infección.
En el segundo esquema de prevención (Tabla 6), la eficacia protectora de la glutaril histamina en una dosis de 30 mg/kg en el modelo experimental de encefalitis transmitida por garrapatas en ratones blancos en una sola administración a las 144 horas antes de la infección fue del 30,0 % y el aumento en el tiempo de vida promedio de
30 los animales fue de 3,1 días.
9
imagen7
Resultados del estudio de la efectividad de la inhibición de la proliferación del virus de la fiebre del dengue en la sangre de ratones blancos infectados por vía intracerebral con una dosis de 5 mg/kg, obtenida en la forma experimental de la fiebre del dengue
Fármaco
Esquema Nivel de acumulación de virus en la sangre, lg PFU/ml Reducción en el nivel de acumulación de virus, lg Grado de inhibición de la acumulación de virus, %
Control de una dosis de virus (sin fármaco)
6,6
Los resultados de la evaluación de eficacia dados en la Tabla 9 demuestran que la glutaril histamina inhibe eficazmente la proliferación del virus de la fiebre hemorrágica del dengue en la sangre de ratones blancos cuando se administra por el esquema de tratamiento (30 mg/kg una vez al día durante 2 días, y después 15 mg/kg una vez al
5 día durante 3 días). El nivel de inhibición de la acumulación de virus fue del 99,6 %. Debe observarse que en el esquema de tratamiento, el nivel de inhibición de la acumulación de virus en la sangre de los animales tratados con ribavirina fue solo del 83,4 %.
Por lo tanto, en caso de fiebre hemorrágica por dengue, la glutaril histamina inhibe eficazmente la replicación del 10 virus en animales infectados.
Tabla 9
Resultados del estudio de la efectividad de la inhibición de la proliferación del virus de la fiebre hemorrágica del dengue en la sangre de ratones blancos infectados por vía intracerebral con una dosis de 30/15 mg/kg, que se obtienen en la forma experimental de la fiebre hemorrágica del dengue
Fármaco
Esquema Nivel de acumulación de virus en la sangre, lg PFU/ml Reducción en el nivel de acumulación de virus, lg Grado de inhibición de la acumulación de virus, %
Glutaril histamina
+24 h, +48 h, +72 h, +96 h, +120 h 4,8 2,6 99,6
Ribavirina
6,4 1,0 83,4
Control de una dosis de virus (sin fármaco)
7,4
Ejemplo 5 15 Efecto antiviral de la glutaril histamina contra un virus de Coxsackie
En el estudio, se usó una cepa HCXV dependiente de tripsina que se adaptó previamente y causó la muerte de ratones infectados con el virus de Coxsackie. 20 El experimento se llevó a cabo en ratones blancos con un peso de 6 a 7 g.
Los animales se infectaron por vía intramuscular en una dosis de 0,1 ml/ratón. La dosis utilizada en el experimento fue 10DL50 que causó el 70-80 % de letalidad en ratones.
25 La capacidad terapéutica de la glutaril histamina se evaluó mediante una tasa de mortalidad en los ratones infectados con el virus de HCXV en el grupo de prueba en comparación con el grupo de ratones no tratados.
Los fármacos de prueba y el placebo se administraron por vía oral mediante el esquema de tratamiento. Se 30 administró solución salina normal a los ratones como placebo. Se usaron 14 animales intactos que se mantuvieron en una habitación separada en las mismas condiciones que los animales de experimentación como control negativo.
El experimento se realizó en 4 grupos por 14 animales. A los animales del primer, segundo y tercer grupo se les administró glutaril histamina en una dosis de 30 mg/kg, 3 mg/kg y 0,3 mg/kg de peso corporal, respectivamente, y los
35 animales del cuarto grupo de control recibieron una solución salina normal. Los medicamentos se administraron por vía oral una vez al día durante 5 días (primera administración, a las 24 horas después de la infección). Los animales se controlaron durante 20 días, durante los cuales los animales se pesaron todos los días y se registró la tasa de mortalidad.
40 Durante el estudio de la eficacia de la glutaril histamina en animales infectados con el virus de HCXV, ninguno de los casos fatales inespecíficos se registró en el grupo control de animales intactos.
11
imagen8
imagen9

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
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