ES2623881T3 - Composiciones de lípidos y péptidos catiónicos - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende al menos un agente activo peptídico catiónico que tiene un punto isoeléctrico por encima de 7,0, al menos un anfífilo formador de estructura neutro, al menos un anfífilo formador de estructura aniónico y opcionalmente al menos un disolvente, en la que los grupos no polares de los anfífilos formadores de estructura se seleccionan de grupos alquilo y alquenilo C6-C32, caracterizada por que dicha composición comprende una estructura de fase no lamelar y/o forma una fase cristalina líquida normal o inversa o la estructura de fase L3 tras exposición a fluidos corporales y en la que dicho anfífilo formador de estructura aniónico comprende al menos un ácido graso, y en la que dicho anfífilo formador de estructura aniónico está presente en una cantidad de 0,5 a 50 % en peso en relación con el peso de anfífilo neutro.

Description

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Como se usa en el presente documento, la expresión “no lamelar” se usa para indicar una fase cristalina líquida normal o inversa (tal como una fase cúbica o hexagonal) o la fase L3 o cualquier combinación de las mismas. Cuando se describe que una partícula tiene una fase o forma no lamelar, esto indica que anfífilos en al menos la región interna de la partícula deberían adoptar esta forma. Las partículas generalmente tendrán dos regiones distintas, una región interna y una región de superficie circundante. La región de superficie, incluso en una partícula “no lamelar” será típicamente lamelar, L3 o cristalina. Por el contrario, una partícula “lamelar”, como se describe en el presente documento, es una partícula que tiene una región núcleo de disolvente, en lugar de no lamelar. Las formas no lamelares preferidas son fases cristalinas líquidas inversas tales como fases cúbicas o hexagonales. Una fase cristalina líquida altamente preferida es la fase hexagonal inversa.

Una composición se considera “no lamelar” si existe una fracción molecular de al menos 30 % del anfífilo formador de estructura como partículas de fase no lamelar. De forma similar, una composición forma partículas de fase no lamelar si al menos 30 % del anfífilo está en forma de dichas fases después de exposición a un fluido acuoso. Esto será en general al menos 50 % en ambos casos y preferentemente al menos 70 % del componente anfífilo debería estar en una forma no lamelar, bien en la composición como se formula o después de exposición a un fluido corporal. Más preferentemente, este es al menos 80 %, más preferentemente 90 % o más.

Las composiciones que forman fases no lamelares tras exposición a fluidos corporales (precursores de composiciones) generalmente contendrán componentes anfifílicos, peptídicos activos y opcionalmente de fragmentación en proporciones relativamente similares a las propias dispersiones no lamelares pero típicamente tendrán una proporción menor del disolvente opcional. Este disolvente es generalmente acuoso o miscible con agua y los precursores de composición pueden formarse secando composiciones no lamelares, por ejemplo por secado por pulverización o liofilización. Los precursores también pueden contener componentes tales como azúcares (por ejemplo lactosa) para ayudar a estabilizar y proteger las composiciones tras el secado y/o para ayudar a la rehidratación. Los disolventes miscibles en agua son típicamente biológicamente aceptables e incluyen alcoholes (especialmente etanol e isopropanol), glicerol, etileno/propilenglicol (especialmente oligo-etileno y/o propilenglicol) y monoglicéridos de cadena corta (por ejemplo hasta C6, especialmente propilo, butilo, pentilo o hexilo de cadena lineal con una o más insaturaciones.

Las dispersiones que contienen principios activos y particularmente las que son para administración intravenosa al cuerpo humano o animal son convenientemente coloidales, es decir deberían ser de un tamaño de partícula no mayor de 10 Φm, especialmente no mayor que 5 Φm y particularmente no mayor de 1 Φm. Si las partículas dentro de la dispersión superan este tamaño entonces la dispersión puede no ser coloidalmente estable y hay un riesgo considerable de provocar embolia cuando las preparaciones se administran por vía intravenosa. Además, es deseable que la distribución de tamaños de partículas sea estrecha para maximizar el control sobre la liberación de cualquier agente activo.

En el presente caso, con frecuencia, las composiciones se administrarán mediante un método que no sea la vía intravenosa (especialmente por vía oral, intramuscular o subcutánea) y por lo tanto no es necesario que el tamaño de la partícula sea coloidal. En dichos casos, los tamaños de partículas típicos varían de aproximadamente 10 Φm a aproximadamente 200 Φm. Sin embargo, sigue siendo ventajoso que las composiciones en partículas proporcionen distribuciones de tamaños de partículas bien caracterizados y reproducibles para controlar la velocidad de descomposición de las partículas y/o liberación de los agentes activos.

En una realización de la invención, mediante la administración de la composición de la invención se forma un “depósito” in vivo. El depósito comprenderá una estructura de fase no lamelar, generalmente formada al menos en parte después de la administración (por ejemplo por disipación de un disolvente miscible en agua y/o absorción de agua). Las descomposiciones de depósito pueden formar partículas de fase no lamelar como se ha considerado anteriormente, pero pueden formar, y preferentemente formarán, una fase no lamelar a granel. Puede considerarse que esta es una estructura que comprende “partículas” continuas o semicontinuas de fase no lamelar de al menos 0,5 mm en su mayor dimensión, preferentemente de al menos 1 mm y más preferentemente de 5 mm o más. Estas fases a granel pueden liberar el agente activo gradualmente, bien directamente en solución (por ejemplo por medio de degradación en los extremos de la fase a granel) o por medio de liberación de partículas más pequeñas de fase no lamelar a medida que degradan y estas partículas actúan después para liberar el volumen del agente activo.

El “anfífilo formador de estructura” como se indica en el presente documento incluye cualquier agente que sea capaz de formar una fase estructurada en presencia de disolvente acuoso, opcionalmente en presencia de otros agentes tales como otros anfífilos y/o agentes de fragmentación. Los anfífilos tendrán al menos un grupo polar, hidrófilo y al menos un grupo no polar, hidrófobo seleccionado de grupos alquilo o alquenilo C6-C32.

Se conocen bien ejemplos de grupos polares (véase, por ejemplo, la solicitud de patente publicada de Estados Unidos número 20020153509) e incluyen grupos aniónicos tales como carboxilatos, fosfonatos, sulfatos y sulfonatos, grupos no iónicos tales como alcoholes, polioles (por ejemplo azúcares, glicerol, etc.) y ésteres, grupos catiónicos tales como compuestos de amonio cuaternario, sales de piridinio y sales de fosfonio cuaternario y grupos zwitteriónicos tales como grupos de cabeza de fosfolípidos (por ejemplo, fosfatidilcolina, etc.), acetatos de amonio, alcanosulfonatos de amonio y ésteres de trialquilaminoalquilfosfato. El componente anfífilo neutro no tendrá carga

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mezcla de compuestos que tiene aproximadamente 60-75 % de grupos acilo C18:2, aproximadamente 12-16 % de C16:0 y otros en equilibrio. De forma similar, la lecitina de huevo comercial tiene típicamente aproximadamente 7075 % de fosfatidilcolina, aproximadamente 10 % de fosfatidil etanolamina y otros lípidos en equilibrio. Estos dos productos son adecuados para su uso en la presente invención. Diferentes preparaciones comerciales también variaran ligeramente pero siguen siendo adecuadas.

Un ejemplo de un agente estructurador preferido para su uso en la presente invención es el gliceril monooleato (GMO) disponible en el comercio. Como se ha indicado anteriormente, este es principalmente un monoglicérido con una cadena de acilo oleilo (C18:1) pero contiene ciertas cantidades de otros compuestos. Estos se incluyen en la expresión “gliceril monooleato” o “GMO” como se usa en el presente documento. Las preparaciones comerciales de GMO incluyen GMOrphic-80 y Myverol 18-99 (disponibles en Eastman Kodak), Rylo MG 19 y Dimodan DGMO (disponibles en Danisco). Puede utilizarse cualquiera de estos anfífilos formadores de estructuras solos o en combinación con uno o más agentes estructuradores anfifílicos distintos.

Un componente clave en la presente invención es el componente lipídico aniónico ya que este proporciona niveles inesperadamente altos de protección para el agente activo peptídico contra la degradación enzimática. Puede utilizarse cualquier anfífilo aniónico o combinaciones de los mismos, incluyendo los indicados anteriormente, pero se prefiere utilizar al menos un ácido graso o un componente de sal de ácido graso. Son ácidos grasos preferidos los correspondientes a las cadenas de ácidos grasos de lípidos de ésteres naturales, incluyendo ácidos caproico, caprílico, caprico, láurico, mirístico, palmítico, fitánico, palmitólico, esteárico, oleico, elaídico, linoleico, linolénico, araquidónico, behénico o lignocérico, sus sales o mezclas de los mismos. Las sales de ácidos grasos serán sales fisiológicamente tolerables. Los anfífilos aniónicos más preferidos son ácidos grasos de origen natural insaturados y sus sales, especialmente ácido oleico o sales del mismo.

Las sales preferidas de cualquiera de los componentes aniónicos indicados en el presente documento, particularmente los anfífilos aniónicos, incluyen sales metálicas alcalinas y alcalinotérreas así como sales de amonio y alquilamonio. Los ejemplos preferidos de estas incluyen sales de sodio, potasio, litio, calcio o magnesio, sales de amonio o sales de trietilamonio. Cuando en el presente documento se indica un componente aniónico o un ácido, esa indicación se refiere también a sales fisiológicamente tolerables del mismo, a no ser que se indique de otro modo específicamente.

El componente aniónico estará presente en una cantidad de 0,5-20 p/p en relación con la cantidad combinada de anfífilos formadores de estructura aniónicos y neutros. No siempre son deseables concentraciones muy altas de anfífilos aniónicos, tales como ácidos grasos, sin embargo, desde el punto de vista de otros criterios de rendimiento importantes incluyendo biocompatibilidad, capacidad de dispersión, morfología y estabilidad coloidal, así como la salud del sujeto. Por lo tanto, en algunas realizaciones, el componente aniónico estará presente en una cantidad no significativamente mayor de lo necesario para proporcionar el nivel deseado de protección enzimática. En general el componente aniónico estará presente en una concentración suficiente para aumentar la semivida del agente activo peptídico (catiónico) en solución de carboxipeptidasa C in vitro en al menos 50 % en relación con la composición equivalente en ausencia del componente aniónico. Más preferentemente, esta semivida aumentará en al menos 75 % o 100 % y más preferentemente, será 2, 5, 3 o 4 veces el valor medido en ausencia de anfífilo aniónico.

La concentración de anfífilo aniónico necesaria se podrá determinar fácilmente por experimentación sencilla, pero la proporción de anfífilo aniónico con respecto a anfífilo neutro estará en el intervalo de concentración de 0,5-20 % p/p y más preferentemente entre 1-10 % p/p. El intervalo más preferido es entre 2 y 8 % p/p.

Preferentemente las dispersiones en partículas indicadas en el presente documento contendrán al menos un agente de fragmentación. El agente de fragmentación sirve para mejorar la capacidad de dispersión de la fase no lamelar, forma una fase de estabilización alrededor de la partícula no lamelar y/o estabiliza la dispersión. Los agentes de fragmentación adecuados serán agentes que ayuden a la dispersión de anfífilo en partículas (especialmente partículas de fase no lamelar) o estabilizarán dichas partículas. Típicamente un agente de fragmentación será un tensioactivo tal como un copolímero en bloque anfifílico.

Los agentes de fragmentación importantes incluyen lípidos naturales, lípidos sintéticos, tensioactivos, copolímeros, proteínas (en particular caseínas y albúmina), hidrótropos, alcoholes y otros aditivos que puedan facilitar la fragmentación espontáneamente o con la ayuda de fuerzas y presiones aplicadas de forma externa y contribuyen a la estabilización. Esto incluye también nanopartículas y combinaciones de polímero y nanopartículas (véase, por ejemplo, el documento WO 99/12640).

Son agentes de fragmentación preferidos los copolímeros y estos pueden tener bloques que comprendan polioxialquilenos, polivinilpirrolidona, polivinilacetato, alcohol polivinílico, poliésteres, poliamidas y/o polialquenos. El copolímero en bloque comprenderá al menos dos bloques de polímero que tienen diferentes grados de hidrofilicidad. Ciertas proteínas (tales como caseína) también son de carácter anfifílico y pueden utilizarse como agentes de fragmentación. Cuando el agente activo peptídico catiónico sea una proteína anfifílica, esta puede actuar tanto como agente activo y como agente de fragmentación, o puede incluirse además de otro agente activo y/o agente de fragmentación.

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Tabla 2 -Agentes activos peptídicos y proteicos

1a HORMONAS y DERIVADOS DE HORMONAS

Aminoácidos PH Isoeléctrico

Somatostatina (y análogos) Acromegalia y tumores carcinoides y de péptidos intestinales vasoactivos

28 9,58

Calcitoninas (salmón) Osteoporosis

32 8,86

Gonadorelina Control de la ovulación Derivados: leuprolida; Goserelina; Triptorelina

10 8,75

Vasopresina Diabetes insípida, varices esofágicas hemorrágicas, etc. Derivados: desmopresina, Felipresina

9 8,06

Folitropina-alfa Infertilidad

116 8,38

Gonadotropina beta coriónica humana Infertilidad

145 8,65

Tirotropina alfa herramienta de diagnóstico adyuvante para tiroglobulina en suero

92 8,38

Secretina (por ejemplo, porcina) evaluación pancreática

27 9,45

Bradiquinina hormona tisular hipotensiva

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1b ANTIVÍRICO, ANTIBACTERIANO Y ANTIFÚNGICO

Aminoácidos PH Isoeléctrico

Interferón beta

166 8,93

Interferón gamma en diferentes formas recombinantes, anti hepatitis C, leucemia, esclerosis

166 9,54

Taquiplesina I Antibacteriano, antivírico

17 - 9,93

Tuftsina inmunomodulador, antimicrobiano, antivírico, antineoplásico

4 11

Magainina I

23 10

Magainina II Inhibe el crecimiento de numerosas bacterias y hongos

23 10

Indolicidina (por ejemplo bovina) Antibacteriano, antifúngico, antineoplásico, antivírico, antiparasitario

13 12,01

Protegrina (por ejemplo, porcina) antibacteriano, antifúngico, antivírico

18 10,66

Polifemusina I

18 10,33

Polifemusina II antibacteriano, antifúngico, antivírico Polimixina B antibacteriano

18 10,1

Gramicidina S antifúngico

10

1c OTROS PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS

Aminoácidos PH Isoeléctrico

Molécula de Adhesión Intercelular 1

23 9,51

Alteplasa Infarto de miocardio agudo e ictus isquémico agudo

527 7,61

Antagonista de receptor de interleucina 1 anti artritis reumatoide

550 8,51

Becaplermina Úlceras de pie diabético

109 9,38

péptidos de tipo conotoxina alfa analgésico (véase documento WO 02/079236)

16

Melitina analgésico, antibacteriano

26 12,02

1d INTERLEUCINAS (IL)

Aminoácidos PH Isoeléctrico

IL-2 Factor de crecimiento de linfocitos T (TCGF) (Aldesleukina).

133 7,05

IL-4 Factor estimulante de linfocitos B

129 9,26

IL-5 Factor de reemplazo de linfocitos T

115 7,02

IL-7

152 8,72

IL-8 Activador de neutrófilos

77 9,24

IL-9 Factor de crecimiento de linfocitos T P40

126

IL-10 Factor inhibidor de síntesis de citocinas

160 7,63

IL-11 Factor inhibidor de adipogénesis

178 11,16

IL-13

112 8,81

IL-17 Antígeno 8 asociado a linfocitos T citotóxicos

132 8,62

IL-19 Proteína de tipo proteína asociada a diferenciación de melanoma

153 7,8

IL-20 Citocina de cuatro hélices alfa ZCYTO10

152 8,77

IL-24 Proteína 7 asociada a diferenciación de melanoma

158 8,6

IL-26

150 9,99

Los ejemplos preferidos, particularmente de esta lista, incluyen somatostatina (y análogos incluyendo octreótido), Calcitonina (salmón), Gonadorelina, Vasopresina, Folitropina alfa, Gonadotropina coriónica humana beta hCG-beta, Insulina y análogos de Insulina, Tirotropina alfa, Secretina, Bradiquinina, Interferón beta, Interferón gamma, 5 Taquiplesina I, Tuftsina, Magainina I, Magainina II, Indolicidina, Protegrina, Polifemusina I, Polifemusina II, Polimixina B, Gramicidina S, Molécula de Adhesión Intercelular 1, Alteplasa, Antagonista del receptor de Interleucina 1, Becaplermina, péptidos de tipo conotoxina Alfa, Melitina, IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-13, IL-19, IL20, IL-24 e IL-26. Los agentes activos peptídicos catiónicos más preferidos son los péptidos inherentemente catiónicos calcitonina (humana o preferentemente de salmón), octreótido y otros análogos de somatostatina (tales

10 como los desvelados e indicados en Janecka et al. In Endocrine Regulations 35 75-79,2001) y desmopresina.

Las composiciones de la presente invención pueden formularse como productos farmacéuticos por métodos bien conocidos en la técnica. Estas formulaciones serán típicamente formulación oral tal como comprimidos, comprimidos recubiertos (tales como comprimidos de liberación controlada), cápsulas, suspensiones, dispersiones, jarabes o

15 polvos, pero pueden ser formulaciones para inhalación (tales como polvos o aerosoles) o para administración parenteral (por ejemplo subcutánea, intramuscular o intravenosa) en forma de, por ejemplo, dispersiones estériles en solución salina, o precursores de los mismos. Una realización particularmente interesante relacionada con la administración de “depósito” parenteral se describe en detalle posteriormente.

20 Las composiciones pueden formularse con vehículos, diluyentes y/o excipientes farmacéuticos convencionales, tales como vehículos acuosos (por ejemplo, agua para inyección), disolventes, aglutinantes, cargas, estabilizadores, agentes de ajuste de la osmolalidad, agentes efervescentes, tampones y modificadores de pH, modificadores de la viscosidad, edulcorantes, lubricantes, emulsionantes, saporíferos, agentes de recubrimiento (por ejemplo, recubrimientos resistentes a jugos gástricos) etc. Las formulaciones que comprenden al menos un vehículo y/o

25 diluyente farmacéuticamente aceptable forman por lo tanto un aspecto preferido adicional de la invención.

La dosificación de las composiciones de la invención para administrar a un sujeto dependerá del agente activo, de la especie, del tamaño, la madurez, la salud y la condición del sujeto y de la formulación elegida. Las composiciones también pueden suministrar una mayor proporción del agente activo al sujeto que las formulaciones tradicionales y

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Ejemplos:

En los siguientes ejemplos se utilizan las siguientes abreviaturas:

E200

Epikuron 200 (lecitina de soja)

F127

Pluronic™F 127 (BASF)

GDO

Glicerol Di OIeato

GMO

Glicerol Mono Oleato

AL

Ácido Linoleico

DL

Difracción por Láser

AO

Ácido Oleico

PC

Fosfatidil colina

Ret Pal

Retinil palmitato

SAXS

Dispersión de rayos X de Ángulo Pequeño

CTs

Calcitonina (Salmón)

MET

Microscopía Electrónica de Transmisión

Tri Gli

Tri-Glicérido

Ejemplo 1 -Partículas de GMO/OA

1.1 -Preparación de una dispersión a alta presión

Se formó una dispersión gruesa de partículas principalmente cúbicas mezclando Rylo MG 19 GMO (Danisco, 4,70 g) y ácido oleico (Apoteket, 0,24 g) y añadiendo la mezcla en gotas a poloxámero 147 (BASF, 0,5 g) en agua desionizada (45,7 g) con agitación vigorosa a temperatura ambiente. Se permitió que la dispersión gruesa resultante se equilibrara durante aproximadamente 30 minutos antes de la homogeneización en un microfuidificador a alta presión (35.000 kPa) durante 10 min (6 ciclos) a 40 ºC.

El tamaño de partícula se midió utilizando difracción por láser (Coulter LS230) antes y después de la homogeneización. La morfología de partículas y comportamiento de fase del homogeneizado se analizó utilizando dispersión de rayos X de ángulo pequeño (SAXS) y mediante criomicroscopía electrónica de transmisión (crio MET).

El homogeneizado fue una dispersión coloidal con tamaños de partícula por debajo de 1 μm que consistía principalmente en vesículas con una proporción de partículas de núcleo de fase cúbica. Las partículas preparadas por este método se expusieron en general a una etapa de tratamiento de calor antes de la carga.

1.2 -Preparación de una dispersión a baja presión

El procedimiento del Ejemplo 1.1 se repitió, excepto que se llevó a cabo la etapa de homogeneización a baja presión

(17.400 kPa) durante un período más corto (5 ciclos).

El método de baja presión produjo una mayor proporción de partículas de núcleo de fase cúbica y algunas vesículas con una distribución de tamaño de partícula bimodal. El homogenizado se expuso opcionalmente a un ciclo de tratamiento con calor antes de la carga.

1.3 -Tratamiento con calor

Se llevó a cabo un ciclo opcional de tratamiento con calor de la dispersión no lamelar preparada en los Ejemplos 1.1 y 1.2 para convertir una mayor proporción de las partículas a fase no lamelar. Las partículas del método del Ejemplo

1.1 se trataron habitualmente con un ciclo de tratamiento con calor.

Se esterilizó con autoclave (121 ºC, 20 min) una muestra de la dispersión generada en el Ejemplo 1.1 o 1,2 (10 ml) y se enfrió a temperatura ambiente. Cuando se examinó por crio MET, prácticamente todas las partículas en la dispersión mostraban un carácter no lamelar. La distribución de tamaño de partículas también se estrecha en cierta medida en comparación con la dispersión antes del tratamiento con calor y el tamaño de partículas promedio aumentó ligeramente. Las partículas tratadas con calor mostraron estabilidad mejorada a almacenamiento.

Ejemplo 2 -Dispersiones no lamelares y carga adicionales

2.1 -Composiciones de dispersiones no lamelares

Pueden prepararse dispersiones no lamelares de diversos componentes en agua por el método del Ejemplo 1.1 y tratarse opcionalmente con el método de tratamiento con calor del Ejemplo 1.2. La dispersión resultante se analiza con respecto al tamaño de partículas y comportamiento de fase.

n.º

Anfífilo(s) neutro(s) % p1 anfífilo aniónico % p1 Agente de fragmentación % p1 % de Agua2 Fase Dominante

1

GMO 94 OA 5 F127 1 91 Cúbica

2

GMO 89 OA 20 F127 1 91 Hex3

3

GMO 49.5 OA 49.5 F127 1 91 Hex3 + + L2 4

4

GMO 94 LA 5 F127 1 90 Cúbica

5

E200: GDO 50:32 OA 5 F127 13 90 Hex3

6

GMO:RetPal 73:12 OA 5 F127 10 90 Hex3

7

GMO: Tri Gli 76:9 OA 5 F127 10 91 Hex3

8

E200: GDO 51:33 LA 4 F127 12 91 Hex3

9

GMO:RetPal 73:12 LA 5 F127 12 91 Hex3

10 Tabla 3

1% en peso de anfífilo y agente de fragmentación2% en peso de agua en la dispersión final3Hex = fase hexagonal

15 4Fase micelar inversa

2.2 -Carga peptídica

A cada una de las dispersiones del Ejemplo 2.1 se añade el péptido catiónico desmopresina a una concentración 20 final de 1 mg/ml. Se permite que la dispersión se equilibre durante 60 minutos a temperatura ambiente.

2.3 Carga de inhibidor de peptidasa y péptido

A cada una de las dispersiones del Ejemplo 2.1 se añade el péptido catiónico calcitonina a una concentración de 25 0,8 mg/ml y uno o más inhibidores de peptidasa seleccionados de aprotinina (Trasylol®), amastatina y/o leupeptina a una concentración total de 0,4 mg/ml. Se permite que la dispersión repose durante 3 horas a temperatura ambiente.

Ejemplo 3 -Degradación de péptidos por proteasa tripsina

30 3.1 Método de ensayo de proteasa y carga de péptidos

Se disolvió calcitonina de salmón (CTs) en dos viales con solución salina 0,9 % y en un vial con la dispersión no lamelar de ensayo en solución salina, a una concentración de 1 mg de CTs/ml. Los viales se colocaron en un baño de agua a 37 ºC con agitación.

35 A un vial con CTs en solución salina se añadió un inhibidor, aprotinina (Trasylol®) (10.000 KIE/ml, 125 μl/ml de solución salina).

Se tomaron muestras cero de los dos viales de solución salina y de la dispersión no lamelar. 40

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seco. Las muestras se conservaron a -80 ºC hasta su análisis.

4.4-Análisis

El contenido de CTs en todas las muestras de plasma se midió con un kit de inmunoensayo ligado a enzima disponible en el comercio.

Se utilizaron datos de concentración de CTs de plasma para calcular el área bajo la curva (ABC) de 0 a 6 horas por el método trapezoidal.

La biodisponibilidad absoluta corregida con respecto a dosis de CTs en las formulaciones no lamelares orales se calculó como:

Disponibilidad (F) = (ABCoral) x DosisIv)/(ABClv x Dosisoral) x 100

4.5-Resultados

Se dosificó a las ratas con una solución de CTs intravenosa, y por vía oral con una dispersión no lamelar de CTs GMO/OA (95 %/5 %) o GMO (100 %), de acuerdo con el método anteriormente descrito. Todas las dispersiones fueron predominantemente fases dispersas cristalinas líquidas cúbicas. Se analizaron los contenidos de CTs en plasma y las concentraciones en plasma de CTs se representaron a lo largo del tiempo (Figura 2). La biodisponibilidad absoluta (F) de la CTs administrada por vía oral en la formulación de GMO/OA fue de aproximadamente 1 %, mientras que la CTs suministrada en la formulación de GMO pura dio como resultado una biodisponibilidad de aproximadamente 0,5 %. Por lo tanto, el GMO/AO (95 %/5 %) tiene un efecto potenciador de aproximadamente el doble de la biodisponibilidad oral de CTs en comparación con la formulación de GMO no lamelar (100 %).

Ejemplo 5

Composición de depósito y estudio de fase in vitro

Se prepararon formulaciones inyectables que contenían fosfatidil colina (“PC” -epicure 200) y glicerol dioleato (GDO) con y sin el lípido aniónico ácido oleico (AO) y con EtOH como disolvente, para ilustrar que puede accederse a composiciones de “depósito" cristalinas líquidas.

Se pesaron cantidades apropiadas de PC y EtOH en viales de vidrio y la mezcla se colocó en un agitador hasta que la PC se disolvió completamente hasta formar una solución líquida transparente. Después se añadió GDO y opcionalmente OA para formar una solución homogénea inyectable.

Las formulaciones se fabricaron con composiciones de acuerdo con la Tabla 4. Se añadió una sustancia activa peptídica catiónica, calcitonina de salmón (CTs), a cada formulación hasta una concentración de 700 μg de CTs/g de formulación. Las formulaciones se diseñaron como suspensiones homogéneas para administración parenteral (se requiere mezclado justo antes del uso ya que el fármaco no se disolvió completamente en el sistema de PC/GDO/EtOH). La formulación G contenía AO. El estudio de fase en este ejemplo se realizó con exceso de suero de rata a 37 ºC para simular una situación in vivo. La Tabla 4 muestra las mismas fases formadas

TABLA 4

Formulación

PC (% p) GDO (% p) AO (% p) EtOH (% p) Fase en de rata suero

F

36 54 - 10 III

G

34 51 5 10 III

III = fase cristalina líquida cúbica inversaAO = Ácido Oleico

Ejemplo 6

Estudio de liberación in vivo de formulaciones de depósito

Las formulaciones F y G en el Ejemplo 5 se utilizaron en un estudio de liberación de fármaco in vivo en rata. Las formulaciones se administraron por vía subcutánea entre las escápulas utilizando una jeringa y la dosis de CTs fue de 500 μg/kg de peso corporal. El perfil de liberación se supervisó durante un período de 13 días. La concentración de CTs en las muestras de plasma de rata se analizó con un kit comercial de DSLabs. El fármaco se amplificó enzimáticamente con inmunoensayo de tipo sándwich utilizando biotina-estreptavidina como sistema de detección.

La Figura 3 muestra los resultados. Se seleccionó un vehículo de triglicéridos puro a base de aceite de sésamo como un sistema de referencia de lípidos.

La formulación que contiene AO presenta una liberación más lenta de CTs y una biodisponibilidad mejorada durante el período de 14 días sobre el que se siguió la concentración en plasma. Esto es coherente con una estabilidad mejorada del fármaco peptídico.

Claims (1)

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