ES2623452T3 - Método y dispositivo para la determinación nefelométrica de un analito - Google Patents

Método y dispositivo para la determinación nefelométrica de un analito Download PDF

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Abstract

Método para la determinación nefelométrica de un analito en una muestra, donde la muestra se encuentra en una célula de medición, donde el método comprende los pasos: a. colocación de la célula de medición en un sistema nefelométrico con al menos una unidad óptica, donde la unidad óptica comprende al menos una fuente de luz para emitir un haz luminoso, un diafragma para bloquear la parte no dispersada del haz luminoso después de atravesar la célula de medición y un fotodetector para recibir partes dispersadas del haz luminoso después de atravesar la célula de medición; b. desplazamiento de la célula de medición y/o desplazamiento de la unidad óptica, de manera que el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa un trayecto; c. registro de las señales de intensidad de la luz recibidas por el fotodetector sobre el trayecto, en donde el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa la célula de medición; d. determinación de la ubicación de un intervalo I de las señales de intensidad de la luz registradas, el cual contiene exclusivamente señales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso después de atravesar la célula de medición, donde la dimensión del intervalo I resulta de una cantidad definida de señales de intensidad de la luz y es un parámetro predeterminado para el sistema nefelométrico utilizado; y e. determinación de un analito mediante una señal de intensidad de la señal o a través de un valor medio de varias señales de intensidad de la luz provenientes del intervalo I de las señales de intensidad de la luz registradas; caracterizado porque, la ubicación del intervalo I de las señales de intensidad de la luz registradas se determina evaluando las señales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto, del siguiente modo: - formación de la primera y de la segunda derivada f'(x) y f"(x) de las señales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto; - determinación de una primera posición Ff en el trayecto con las condiciones f'(x) < 0 y f''(x) >= 0; - determinación de una segunda posición Fs en el trayecto con las condiciones f'(x) > 0 y f"(x) >= 0; y - determinación de una tercera posición M en el trayecto a través de la fórmula M >= Ff + (Fs - Ff)/2; y - posicionamiento del intervalo I, de manera que la posición M forma el centro del intervalo I.

Description

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DESCRIPCION
Metodo y dispositivo para la determinacion nefelometrica de un analito
La presente invencion hace referencia a un metodo para la determinacion nefelometrica de un analito, as! como a un sistema nefelometrico para un dispositivo de analisis automatico.
Numerosos procedimientos de comprobacion y de analisis para determinar parametros fisiologicos en muestras de fluidos corporales o en otras muestras biologicas actualmente se realizan mayormente en dispositivos de analisis automaticos, tambien en los as! llamados sistemas de diagnostico in vitro.
Los dispositivos de analisis actuales poseen las condiciones como para realizar una pluralidad de reacciones de comprobacion y analisis con una muestra. Para poder realizar automaticamente una pluralidad de analisis se requieren diversos dispositivos para transferir espacialmente celulas de medicion, recipientes de reaccion y recipientes para reactivos, como por ejemplo brazos de transferencia con funcion de sujecion, cintas transportadoras o ruedas transportadoras giratorias, as! como dispositivos para la transferencia de llquidos, como por ejemplo dispositivos de pipeteado. Los dispositivos comprenden una unidad de control que, mediante un software correspondiente, pueden planificar y realizar los pasos de trabajo para los analisis deseados, mayormente de forma automatica.
Muchos de los procedimientos de analisis que utilizan dispositivos de analisis que operan de forma automatica se basan en metodos opticos. La determinacion de parametros cllnicamente relevantes, como por ejemplo la concentracion o la actividad de un analito, tiene lugar de forma multiple, donde una parte de una muestra es mezclada con uno o con varios reactivos de prueba en un recipiente de reaccion, el cual puede ser tambien la celula de medicion, debido a lo cual se inicia una reaccion bioqulmica o una reaccion de fijacion especlfica, la cual provoca una modificacion mensurable de una propiedad optica o de otra propiedad flsica de la carga de prueba.
Junto con la espectrofotometrla, la nefelometrla es un metodo de analisis ampliamente difundido. Mediante la nefelometrla, por ejemplo la concentracion de partlculas coloidales, finamente dispersas, puede determinarse cuantitativamente en llquidos o en gases. Si una suspension de partlculas pequenas es llevada a un haz luminoso, entonces una parte de la luz incidente es absorbida, otra parte, denominada tambien haz primario, abandona la suspension de forma no dispersada y nuevamente otra parte es dispersada lateralmente hacia el haz incidente. En la nefelometrla se mide esa luz dispersa que sale de forma lateral.
La nefelometrla se utiliza principalmente para la comprobacion cuantitativa o cualitativa de analitos, por ejemplo de protelnas, los cuales pueden ser probados mediante una reaccion de fijacion especlfica entre elementos de fijacion especlficos, por ejemplo mediante una fijacion antlgeno - anticuerpo.
Un sistema nefelometrico comprende al menos una fuente de luz, al menos un fotodetector, as! como al menos una posicion de alojamiento para una celula de medicion. Generalmente, la disposicion de fuente de luz y detector de luz se selecciona de manera que la luz dispersa puede ser medida, la cual se dispersa desde macromoleculas que deben ser probadas en la muestra, por ejemplo agregados de partlculas que se producen debido a una reaccion dependiente del analito en una carga de reaccion.
En el mercado existen diferentes formas de construccion que se diferencian en la disposicion de la fuente de luz y en la posicion de alojamiento para la celula de medicion y el fotodetector. Por ejemplo, en una forma de construccion el fotodetector puede estar dispuesto lateralmente con respecto al haz luminoso emitido por la fuente de luz, para registrar la luz dispersada en un rango angular de 90° con respecto a la direccion del haz luminoso emitido por la fuente de luz. Lo mencionado ofrece la ventaja de que la intensidad de la luz dispersa puede ser relativamente reducida y la influencia de la medicion, a traves de la parte no dispersada del haz luminoso, emitida por la fuente de luz, denominada como haz primario, se vuelve relativamente reducida.
En otra forma de construccion, la fuente de luz, la posicion de alojamiento y el fotodetector pueden estar dispuestos de manera que el fotodetector registre la luz dispersada en rangos angulares alrededor de la direccion de propagacion del haz luminoso emitido por la fuente de luz, en los cuales la intensidad de la luz dispersa es relativamente elevada. En esa geometrla, sin embargo, no solo la luz dispersa alcanza el fotodetector, sino tambien el haz primario. No obstante, puesto que solo la parte dispersada de la luz puede contribuir al resultado de medicion, para optimizar el resultado de medicion se requiere un bloqueo completo del haz primario.
Para bloquear el haz primario se utilizan generalmente diafragmas opticos. Dichos diafragmas son mantenidos en el recorrido optico mediante fijaciones mas delgadas, como por ejemplo alambres y, en cuanto a su tamano y su forma, se encuentran adaptados de manera que de manera preferente bloquean por completo el haz primario, de manera que exclusivamente la luz dispersa incide en el detector. Preferentemente, la relacion de la proporcion de luz dispersa con respecto a la proporcion del haz primario es inferior a 0,001.
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Cada vez mas se utilizan dispositivos de analisis en los cuales la unidad optica puede desplazarse de forma relativa con respecto a las celulas de medicion o en los cuales las celulas de medicion pueden desplazarse relativamente con respecto a la unidad optica. Lo mencionado ofrece la ventaja de que con una unidad optica puede analizarse una pluralidad de muestras en cierto modo al mismo tiempo, lo cual aumenta de forma significativa el flujo de las muestras.
En la solicitud EP-A1-2309251 se describe un dispositivo para el analisis fotometrico de muestras, donde las celulas de medicion estan realizadas de forma fija y dispuestas en forma de un arco de clrculo, mientras que la unidad optica se desplaza en forma de un arco de clrculo a lo largo de la disposicion de celulas de medicion.
En la solicitud EP-A2-0997726 se describe un metodo para la determinacion nefelometrica de un analito en una muestra segun el preambulo de la reivindicacion 1, as! como un sistema nefelometrico segun el preambulo de la reivindicacion 4.
En los sistemas opticos de esa clase, en donde la unidad optica se desplaza de forma relativa con respecto a la celula de medicion (o de forma inversa), el haz luminoso se desplaza a lo largo de un trayecto, preferentemente de forma transversal, a traves de la celula de medicion, y se registran varios valores de medicion, donde debido al desplazamiento cada valor de medicion individual proviene de otra posicion de la celula de medicion. Debido a ello, en las mediciones nefelometricas se produce una curva tlpica, en forma de una cuba (vease la figura 1), con un primer flanco descendente, una base de la curva y un segundo flanco ascendente. En la entrada (flanco descendente) y en la salida (flanco ascendente) de la celula de medicion, as! como hacia o desde el haz primario, la luz del haz primario incide en las paredes de la celula de medicion, es reflectada o refractada, y es conducida delante del diafragma, el cual debe bloquear el haz primario, hacia el fotodetector. El area esencial para la determinacion del analito se encuentra en el area de la base de la curva, donde es maximo el bloqueo del haz primario. Ademas, debido a tolerancias mecanicas de los componentes desplazados con respecto a la ubicacion del volumen disperso en la celula de medicion, se produce una modificacion entre mediciones temporalmente consecutivas de la misma muestra, lo cual es importante por ejemplo cuando debe registrarse una cinetica de la reaccion.
Por lo tanto, para una determinacion de analitos precisa, de la totalidad de las senales medidas de intensidad de la luz es necesario seleccionar para la evaluacion posterior aquellas senales de intensidad de la luz que resulten de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, y que en lo posible no presenten ninguna parte de luz primaria.
Por lo tanto, el objeto de la presente invention consiste en mejorar la calidad de medicion de un sistema nefelometrico, en donde la fuente de luz, el diafragma y el fotodetector, por una parte, y la posicion de alojamiento, por otra parte, puedan desplazarse de forma relativa unos con respecto a otros.
Dicho objeto se alcanzara gracias a que a partir que la totalidad de las senales de intensidad de la luz que son registradas durante el pasaje del haz luminoso a lo largo de un trayecto a traves de la celula de medicion se determina automaticamente la ubicacion de un intervalo I que contiene exclusivamente senales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion y que no presentan una parte de luz primaria o que solo presentan una parte Infima de dicha luz.
Con ello, es objeto de la presente invencion un metodo para la determinacion nefelometrica de un analito en una muestra, donde la muestra se encuentra en una celula de medicion. El metodo comprende los pasos:
a. colocation de la celula de medicion en un sistema nefelometrico con al menos una unidad optica, donde la unidad optica comprende al menos una fuente de luz para emitir un haz luminoso, un diafragma para bloquear la parte no dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion y un fotodetector para recibir partes dispersadas del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion;
b. desplazamiento de la celula de medicion y/o desplazamiento de la unidad optica, de manera que el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa un trayecto;
c. registro de las senales de intensidad de la luz recibidas por el fotodetector sobre el trayecto, en donde el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa la celula de medicion;
d. determinacion de la ubicacion de un intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas, el cual contiene exclusivamente senales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, donde la dimension del intervalo I resulta de una cantidad definida de senales de intensidad de la luz y es un parametro predeterminado para el sistema nefelometrico utilizado; y
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e. determinacion de un analito mediante una senal de intensidad de la senal o a traves de un valor medio de varias senales de intensidad de la luz provenientes del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas.
La ubicacion del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas se determina evaluando las senales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto, del siguiente modo:
- formacion de la primera y de la segunda derivada de las senales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto;
- determinacion de una primera posicion Ff en el trayecto con las condiciones f'(x) < 0 y f" (x) = 0;
- determinacion de una segunda posicion Fs en el trayecto con las condiciones f'(x) > 0 y f" (x) = 0; y
- determinacion de una tercera posicion M en el trayecto a traves de la formula M = Ff + (Fs - Ff)/2; y
- posicionamiento del intervalo I, de manera que la posicion M forma el centro del intervalo I.
La dimension del intervalo I resulta de una cantidad definida de senales de intensidad de la luz y es un parametro predeterminado para el sistema nefelometrico utilizado. El parametro depende del tamano, de la geometrla y del material de la celula de medicion, de la velocidad con la cual el haz primario se desplaza transversalmente a traves de la celula de medicion, del tamano, de la geometrla y de la disposicion del diafragma para bloquear el haz luminoso de la parte no dispersada, de la cantidad de senales de intensidad de la luz que son registradas durante un pasaje, etc. Para un sistema nefelometrico dado, por tanto, debe determinarse emplricamente cuantas senales de intensidad de la luz sucesivas se obtienen generalmente en el caso de una medicion de una muestra tlpica en una celula de medicion tlpica, las cuales resultan exclusivamente desde la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la muestra/celula de medicion, en donde, por lo tanto, el bloqueo del haz primario es maximo. Durante la determinacion de la dimension del intervalo I, especlfica del sistema nefelometrico utilizado, por una parte, se pretende una cantidad lo mayor posible de senales de intensidad de la luz, porque eso provoca una distancia mas grande senal/interferencia; por otra parte, la dimension del intervalo I debe seleccionarse tan reducida como para asegurar que ni el valor inicial ni el valor final del intervalo alguna vez queden en el area del flanco descendente o ascendente de la curva de la senal.
En un sistema nefelometrico a modo de ejemplo, con una unidad optica que rota alrededor de celulas de medicion dispuestas en forma de arco de clrculo y de forma fija (velocidad de rotacion 2 Hz) y con celulas de medicion plasticas con una seccion transversal circular y un diametro de aproximadamente 7 mm y una cantidad aproximada de 1.000 senales de intensidad de la luz, las cuales se registran durante un pasaje del haz luminoso a traves de una celula de medicion, en ensayos previos se determino por ejemplo un intervalo I de una dimension de 300 senales de intensidad de la luz, y se establecio para el sistema nefelometrico.
La primera posicion Ff, determinada como se indico anteriormente, corresponde al punto de inflexion del flanco descendente de la curva de la senal en forma de cuba.
La segunda posicion Fs, determinada como se indico anteriormente, corresponde al punto de inflexion del flanco ascendente de la curva de la senal en forma de cuba.
En una forma de ejecucion del metodo, los pasos del metodo b)-d) se repiten al menos n-veces, y la determinacion del analito en el paso e) tiene lugar a traves del valor medio respectivamente de una senal de intensidad de la luz proveniente de n+1 intervalos I o a traves de un valor medio proveniente de n+1 valores medios de varias senales de intensidad de la luz provenientes de los n+1 intervalos de las senales de intensidad de la luz registradas. n es por ejemplo un numero del 1 al 50, preferentemente un numero de 10-20. La medicion repetida de la misma muestra aumenta la precision de la determinacion cuantitativa del analito.
En otra forma de ejecucion del metodo, los pasos del metodo b)-d) se repiten al menos n- veces, y la determinacion del analito en el paso e) tiene lugar mediante la modificacion de respectivamente una senal de intensidad de la luz proveniente de los n+1 intervalos I a lo largo del tiempo o mediante la modificacion de un valor medio de varias senales de intensidad de la luz proveniente de los n+1 intervalos I de las senales de intensidad de la luz registradas a lo largo del tiempo. n es por ejemplo un numero de 1 a 1000. Esto posibilita el registro de una cinetica de la reaccion, cuyos parametros, como por ejemplo inclinacion maxima, superficie debajo de la curva, etc., pueden emplearse para la determinacion cuantitativa del analito.
Como una "muestra" se entiende una composicion que supuestamente contiene los analitos que deben ser determinados. Las muestras usuales del diagnostico in vitro se componen o contienen al menos sangre, plasma, suero, orina, saliva, llquido cefalorraquldeo, secrecion del oldo, secrecion nasal u otros fluidos corporales o muestras de tejido corporal o celulas alojadas en un llquido. El termino "muestra" comprende en particular tambien
cargas de reaccion, es decir, mezclas de la muestra propiamente dicha con uno o con varios reactivos, por ejemplo partlcuias de latex recubiertas con anticuerpos, en donde la cantidad o la actividad del analito pueden determinarse mediante una modificacion de una propiedad optica.
Otro objeto de la presente invencion consiste en un sistema nefelometrico con al menos una unidad optica, al menos 5 una fuente de luz para emitir un haz luminoso, al menos una posicion de alojamiento para una celula de medicion, un diafragma para bloquear la parte no dispersada del haz luminoso despues de atravesar una celula de medicion dispuesta en la posicion de alojamiento y un fotodetector para recibir partes dispersadas del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, y donde la fuente de luz, el diafragma y el fotodetector, por una parte, y la posicion de alojamiento, por otra parte, pueden desplazarse relativamente unos con respecto a otros. Ademas, un 10 sistema nefelometrico de acuerdo con la invencion presenta un controlador que controla un metodo con los siguientes pasos del metodo:
i. desplazamiento de la celula de medicion y/o desplazamiento de la unidad optica, de manera que el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa un trayecto;
ii. registro de las senales de intensidad de la luz recibidas por el fotodetector sobre el trayecto, en donde el haz 15 luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa la celula de medicion;
iii. determinacion de la ubicacion de un intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas, el cual contiene exclusivamente senales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, donde la dimension del intervalo I resulta de una cantidad definida de senales de intensidad de la luz y es un parametro predeterminado para el sistema nefelometrico utilizado; y
20 iv. determinacion de un analito mediante una senal de intensidad de la senal o a traves de un valor medio de varias senales de intensidad de la luz provenientes del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas, donde la ubicacion del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas se determina evaluando las senales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto, del siguiente modo:
- formacion de la primera y de la segunda derivada de las senales de intensidad de la luz registradas sobre el 25 trayecto;
- determinacion de una primera posicion Ff en el trayecto con las condiciones f'(x) < 0 y f" (x) = 0;
- determinacion de una segunda posicion Fs en el trayecto con las condiciones f'(x) > 0 y f"(x) = 0; y
- determinacion de una tercera posicion M en el trayecto a traves de la formula M = Ff + (Fs - Ff)/2; y
- posicionamiento del intervalo I, de manera que la posicion M forma el centro del intervalo I.
30 Una fuente de luz preferente presenta un diodo laser. Del mismo modo, puede preverse que la fuente de luz sea un diodo emisor de luz (LED), una bombilla, una lampara de descarga de gas o una lampara de arco electrico. De manera ventajosa, la fuente de luz emite luz en rangos de longitud de onda entre 200 nm y 1400 nm, preferentemente entre 300 y 1100 nm.
El detector de luz consiste preferentemente en un fotodiodo que transforma luz visible, en algunas ejecuciones 35 tambien luz infrarroja o luz ultravioleta, a traves del fotoefecto interno, en una corriente o una tension electrica. Es proceso se denomina tambien como percepcion de la senal, y la corriente o la tension electrica se denominan tambien como senal de intensidad de la luz. De manera alternativa, el detector de luz consiste en un sensor CCD. Los sensores CCD se componen de una matriz o de una llnea con fotodiodos sensibles a la luz. Igualmente puede preverse que el detector de luz se trate de una fotocelula, de un fotodetector de silicio, de un fotodetector de 40 avalancha o de un fotomultiplicador.
El diafragma para bloquear el haz primario, es decir, la parte no dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, esta dispuesto de manera que absorbe el haz primario y/o la reflecta.
En principio, la unidad optica del sistema nefelometrico de acuerdo con la invencion puede presentar ademas filtros, lentes, espejos u otros elementos opticos.
45 Preferentemente, un sistema nefelometrico de acuerdo con la invencion presenta al menos dos, preferentemente al menos 16, de forma especialmente preferente al menos 32 posiciones de alojamiento para respectivamente una celula de medicion.
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Ademas, de manera preferente, al menos dos posiciones de alojamiento para respectivamente una celula de medicion estan dispuestas en una ruta circular, y la fuente de luz, el diafragma y el fotoreceptor pueden desplazarse en una ruta circular, relativamente con respecto a las posiciones de alojamiento para respectivamente una celula de medicion, o las posiciones de alojamiento para las celulas de medicion pueden desplazarse en una ruta circular relativamente con respecto a la fuente de luz, al diafragma y al fotodetector.
Preferentemente, al menos una posicion de alojamiento es adecuada para alojar una celula de medicion con seccion transversal oval o circular.
Otro objeto de la presente invencion consiste en un dispositivo de analisis automatico que contiene un sistema nefelometrico de acuerdo con la invencion.
Un dispositivo de analisis automatico preferente comprende ademas un recipiente para alojar una pluralidad de celulas de medicion como material a granel, un dispositivo para separar las celulas de medicion y un dispositivo para posicionar una celula de medicion individual en al menos una posicion de alojamiento de la unidad optica del sistema nefelometrico. Con la ayuda de un dispositivo de analisis de esa clase es posible una ejecucion completamente automatica de determinaciones nefelometricas de analitos, en una pluralidad de muestras.
Description de las figuras
La figura 1 muestra esquematicamente el desarrollo tlpico de una curva de la senal de la intensidad de la luz que fue registrada en un sistema nefelometrico, donde varias posiciones de alojamiento para respectivamente una celula de medicion con diametro circular se encuentran dispuestas de forma fija en un arco de clrculo y donde la unidad optica, es decir, la fuente de luz, el diafragma, y el fotodetector, se desplaza sobre una ruta circular a lo largo de las posiciones de alojamiento. La curva muestra la intensidad medida de la luz (eje X) en funcion del recorrido (eje Y), en donde el haz luminoso atraviesa una celula de medicion. La curva se compone de 1.000 puntos de medicion o senales de intensidad de la luz, las cuales fueron registradas en un unico pasaje del haz luminoso de una de las celulas de medicion con una muestra, a lo largo del trayecto. En el sistema descrito aqul a modo de ejemplo, la distancia entre dos puntos de medicion asciende a 1,33 pm, as! como a 1,06 ps. En la realidad, las curvas as! obtenidas parecen poco ideales debido a interferencias, ruidos y asimetrlas de la unidad mecanica, pero los datos brutos obtenidos pueden estar sujetos a una filtracion comun con respecto al suavizado de la curva. Puede observarse que la curva presenta un primer flanco descendente, una base de la curva y un segundo flanco ascendente. El area esencial para la determination del analito se encuentra en el area de la base de la curva, donde es maximo el bloqueo del haz primario. Mediante el metodo de acuerdo con la invencion se determinan el punto de inflexion Ff del flanco descendente y el punto de inflexion Fs del flanco ascendente. Despues se busca el punto M que se ubica precisamente en el centro de los puntos Ff y Fs, y el intervalo I predeterminado para el sistema nefelometrico aqul utilizado (en este caso de una dimension de 300 senales de intensidad de la luz/puntos de medicion), el cual contiene exclusivamente senales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, se posiciona de manera que el punto M forma el centro de intervalo I. La evaluation de las senales de intensidad de la luz contenidas en el intervalo I posibilita una determinacion precisa del analito.

Claims (10)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Metodo para la determinacion nefelometrica de un analito en una muestra, donde la muestra se encuentra en una celula de medicion, donde el metodo comprende los pasos:
    a. colocacion de la celula de medicion en un sistema nefelometrico con al menos una unidad optica, donde la unidad 5 optica comprende al menos una fuente de luz para emitir un haz luminoso, un diafragma para bloquear la parte no
    dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion y un fotodetector para recibir partes dispersadas del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion;
    b. desplazamiento de la celula de medicion y/o desplazamiento de la unidad optica, de manera que el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa un trayecto;
    10 c. registro de las senales de intensidad de la luz recibidas por el fotodetector sobre el trayecto, en donde el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa la celula de medicion;
    d. determinacion de la ubicacion de un intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas, el cual contiene exclusivamente senales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, donde la dimension del intervalo I resulta de una cantidad definida de senales de
    15 intensidad de la luz y es un parametro predeterminado para el sistema nefelometrico utilizado; y
    e. determinacion de un analito mediante una senal de intensidad de la senal o a traves de un valor medio de varias senales de intensidad de la luz provenientes del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas;
    caracterizado porque, la ubicacion del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas se determina evaluando las senales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto, del siguiente modo:
    20 - formacion de la primera y de la segunda derivada f'(x) y f"(x) de las senales de intensidad de la luz registradas
    sobre el trayecto;
    - determinacion de una primera posicion Ff en el trayecto con las condiciones f'(x) < 0 y f''(x) = 0;
    - determinacion de una segunda posicion Fs en el trayecto con las condiciones f'(x) > 0 y f"(x) = 0; y
    - determinacion de una tercera posicion M en el trayecto a traves de la formula M = Ff + (Fs - Ff)/2; y
    25 - posicionamiento del intervalo I, de manera que la posicion M forma el centro del intervalo I.
  2. 2. Metodo segun la reivindicacion 1, donde los pasos del metodo b)-d) se repiten n-veces y donde la determinacion del analito en el paso e) tiene lugar mediante el valor medio respectivamente de una senal de intensidad de la luz proveniente de los n+1 intervalos I o mediante un valor medio proveniente de los n+1 valores medios de varias senales de intensidad de la luz provenientes de los n+1 intervalos I de las senales de intensidad de la luz
    30 registradas.
  3. 3. Metodo segun la reivindicacion 1, donde los pasos del metodo b)-d) se repiten n-veces y donde la determinacion del analito en el paso e) tiene lugar mediante la modificacion respectivamente de una senal de intensidad de la luz proveniente de los n+1 intervalos I o mediante la modificacion de un valor de varias senales de intensidad de la luz provenientes de los n+1 intervalos I de las senales de intensidad de la luz registradas a lo largo del tiempo.
    35 4. Sistema nefelometrico con al menos una unidad optica, donde la unidad optica comprende al menos una fuente
    de luz para emitir un haz luminoso, al menos una posicion de alojamiento para una celula de medicion, un diafragma para bloquear la parte no dispersada del haz luminoso despues de atravesar una celula de medicion dispuesta en la posicion de alojamiento y un fotodetector para recibir partes dispersadas del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, donde la fuente de luz, el diafragma y el fotodetector, por una parte, y la posicion de alojamiento, 40 por otra parte, pueden desplazarse relativamente unos con respecto a otros, caracterizado porque el sistema nefelometrico presenta ademas un controlador que controla un metodo con los siguientes pasos del metodo:
    i. desplazamiento de la celula de medicion y/o desplazamiento de la unidad optica, de manera que el haz luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa un trayecto;
    ii. registro de las senales de intensidad de la luz recibidas por el fotodetector sobre el trayecto, en donde el haz 45 luminoso emitido por la fuente de luz atraviesa la celula de medicion;
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    iii. determinacion de la ubicacion de un intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas, el cual contiene exclusivamente senales de intensidad de la luz que resultan de la parte dispersada del haz luminoso despues de atravesar la celula de medicion, donde la dimension del intervalo I resulta de una cantidad definida de senales de intensidad de la luz y es un parametro predeterminado para el sistema nefelometrico utilizado; y
    iv. determinacion de un analito mediante una senal de intensidad de la senal o a traves de un valor medio de varias senales de intensidad de la luz provenientes del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas, donde la ubicacion del intervalo I de las senales de intensidad de la luz registradas se determina evaluando las senales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto, del siguiente modo:
    - formacion de la primera y de la segunda derivada f'(x) y f'(x) de las senales de intensidad de la luz registradas sobre el trayecto;
    - determinacion de una primera posicion Ff en el trayecto con las condiciones f'(x) < 0 y f''(x) = 0;
    - determinacion de una segunda posicion Fs en el trayecto con las condiciones f'(x) > 0 y f''(x) = 0; y
    - determinacion de una tercera posicion M en el trayecto a traves de la formula M = Ff + (Fs - Ff)/2; y
    - posicionamiento del intervalo I, de manera que la posicion M forma el centro del intervalo I.
  4. 5. Sistema nefelometrico segun la reivindicacion 4, con al menos dos, preferentemente con al menos 16, de forma especialmente preferente con al menos 32 posiciones de alojamiento para respectivamente una celula de medicion.
  5. 6. Sistema nefelometrico segun la reivindicacion 5, donde al menos dos posiciones de alojamiento para respectivamente una celula de medicion estan dispuestas en una ruta circular.
  6. 7. Sistema nefelometrico segun una de las reivindicaciones 4 a 6, donde la fuente de luz, el diafragma y el fotodetector pueden desplazarse en una ruta circular de forma relativa con respecto a por lo menos una posicion de alojamiento para una celula de medicion.
  7. 8. Sistema nefelometrico segun una de las reivindicaciones 4 a 6, donde al menos una posicion de alojamiento para una celula de medicion puede desplazarse de forma relativa con respecto a la fuente de luz, al diafragma y al fotodetector.
  8. 9. Sistema nefelometrico segun una de las reivindicaciones 4 a 8, donde al menos una posicion de alojamiento es adecuada para alojar una celula de medicion con seccion transversal oval o circular.
  9. 10. Dispositivo de analisis automatico, el cual contiene un sistema nefelometrico segun una de las reivindicaciones 4 a 9.
  10. 11. Dispositivo de analisis automatico segun la reivindicacion 10, el cual comprende ademas un recipiente para alojar una pluralidad de celulas de medicion como material a granel, un dispositivo para separar las celulas de medicion y un dispositivo para posicionar una celula de medicion individual en al menos una posicion de alojamiento de la unidad optica del sistema nefelometrico.
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