ES2618402T3

ES2618402T3 - Péptidos modificados y su uso para tratar enfermedades autoinmunitarias

Info

Publication number: ES2618402T3
Application number: ES11817532.2T
Authority: ES
Inventors: Sylviane Muller; Jean-Paul Briand; Robert Zimmer
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; ImmuPharma France SA
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; ImmuPharma France SA
Priority date: 2011-12-13
Filing date: 2011-12-13
Publication date: 2017-06-21
Anticipated expiration: 2031-12-13
Also published as: CA2858957A1; AU2011383222A1; JP2015501831A; BR112014014492A2; BR112014014492B1; CN104114180B; DK3202413T3; US20170226167A1; RU2620070C2; AU2011383222C1; KR20170020556A; US20150111835A1; CN104114180A; AU2017200207A1; EP2790715B1; IN2014MN01376A; CN106986927A; JP6060175B2; DK2790715T3; WO2013088194A1

Abstract

Un péptido, o una sal del mismo, que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 IHMVYSKRSGKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 2], que comprende una fosfoserina en la posición 9 y una metionina oxidada en la posición 3.

Description

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DESCRIPCION

Peptidos modificados y su uso para tratar enfermedades autoinmunitarias Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a un peptido modificado y a su uso para tratar enfermedades autoinmunitarias. Antecedentes

Las enfermedades autoinmunitarias se producen por una respuesta inmunitaria hiperactiva del sistema inmunitario contra sustancias y tejidos normalmente presentes en un organismo multicelular, es decir, el sistema inmunitario ataca a sus propios componentes. Esto puede restringirse a ciertos organos o implicar a un tejido particular en diferentes lugares. El tratamiento de enfermedades autoinmunitarias tipicamente se realiza con una medicacion inmunosupresora que reduce la respuesta inmunitaria completa.

El lupus es una enfermedad autoinmunitaria que se estima que afecta a casi 1,4 millones de americanos, principalmente mujeres con edades comprendidas entre los 20 y los 40 anos. En el lupus intervienen anticuerpos que atacan al tejido conectivo. La forma principal de lupus es una forma sistemica (lupus eritematoso sistemico, LES). El LES es una enfermedad autoinmunitaria cronica con fuertes componentes geneticos asi como ambientales (vease, por ejemplo, Hochberg M C, Dubois’ Lupus Erythematosus. 5a ed., Wallace D J, Hahn B H, eds. Baltimore: Williams y Wilkins (l997); Wakeland E K, y col., Immunity 2001; 15(3): 397-408; Nath S K, y col., Curr. Opin. Immunol. 2004; 16(6): 794-800; D’Cruz y col., Lancet (2007), 369: 587-596). Se conocen diversas formas adicionales de lupus incluyendo, pero sin limitacion, el lupus eritematoso cutaneo (LEC), nefropatia lupica (NL), lupus neuropsiquiatrico (LESNP) y lupus neonatal.

El lupus sin tratamiento puede ser mortal, ya que el ataque progresa desde la piel y las articulaciones hasta los organos internos, incluyendo los pulmones, el corazon y los rinones (siendo la enfermedad renal la preocupacion principal), lo cual hace que el diagnostico precoz y preciso y/o la evaluacion del riesgo de desarrollar lupus sean particularmente criticos. El lupus aparece principalmente como una serie de brotes, con periodos intermedios con poca o ninguna manifestacion de la enfermedad. La lesion renal, medida por la cantidad de proteina en la orina (proteinuria) es una de las areas mas precisas de lesiones asociadas con la patogenicidad en el LES, y es responsable de al menos un 50 % de la mortalidad y morbilidad de la enfermedad, sin ningun tratamiento.

Clinicamente, el LES es un trastorno heterogeneo caracterizado por autoanticuerpos de alta afinidad (auto-Ac). Los AutoAbs juegan un papel importante en la patogenesis del LES, y las diversas manifestaciones clinicas de la enfermedad se deben a la deposicion de complejos inmunitarios que contienen anticuerpos en vasos sanguineos que conduce a una inflamacion en el rinon, el cerebro y la piel. Los auto-Ac tambien tienen efectos patogenicos directos que contribuyen a la anemia hemolitica y la trombocitopenia. El LES esta asociado con la produccion de anticuerpos antinucleares, complejos inmunitarios circulantes y defectos del sistema del complemento. El LES tiene una incidencia de aproximadamente 1 de cada 700 mujeres con edades comprendidas entre los 20 y los 60 anos, en la poblacion negra. El LES puede afectar a cualquier sistema de organos y puede producir lesiones graves en los tejidos. En el LES estan presentes numerosos autoAb de diferente especificidad. Los pacientes con LES con frecuencia producen auto-Ac que tienen especificidad anti-ADN, anti-Ro y antiplaquetas y que son capaces de iniciar rasgos clinicos de la enfermedad, tales como glomerulonefritis, artritis, serositis, bloqueo cardiaco completo en recien nacidos y anomalias hematologicas. Estos autoAb tambien estan relacionados posiblemente con alteraciones del sistema nervioso central. Arbuckle y col. describieron el desarrollo de auto-Ac antes del inicio clinico de LES (Arbuckle y col. N. Engl. J. Med. 349 (16): 1526-1533 (2003)).

Los AutoAc que reconocen proteinas de union al ARN (RBP; tambien denominados antigenos nucleares extraibles) se caracterizaron por primera vez en LES hace mas de 40 anos (Holman, Ann NY Acad. Sci. 124 (2): 800-6 (1965)). Dichos RBP comprenden un grupo de proteinas-SSA (Ro52/TRIM21 y Ro60/TROVE2), SSB (La), ribonucleoproteina nuclear pequena (RNP) U1 y proteina de Smith (Sm) con papeles en el procesamiento del ARN y en la bioquimica. Se han encontrado auto-Ac IgG anti-SSA y anti-SSB no solo en el LES, sino tambien en el sindrome de Sjogren y en la artritis reumatoide. Los auto-Ac anti-SSA estan asociados con el lupus eritematoso cutaneo subagudo, y con un bloqueo cardiaco congenito y lupus neonatal en ninos nacidos de mujeres positivas para anti-SSA. Los auto-Ac anti-SSB casi siempre se encuentran junto con auto-Ac anti-SSA, y ambos autoantigenos se asocian con hYRNA citoplasmico (Lerner y col., Science 211 (4480): 400-2 (1981)). Los auto-Ac anti-Sm son muy especificos para el LES y generalmente se encuentran junto con auto-Ac anti-RNP. Tanto las proteinas Sm como las RNP se asocian con especies de ARNsn en el espliceosoma del ARN nuclear (Lerner y col., Proc Natl Acad Sci USA 76(11): 5495-9 (1979)). Tambien se encuentran auto-Ac anti-RNP en pacientes con enfermedad mixta del tejido conectivo. Se ha sugerido que la presencia de auto-Ac anti-RNP puede identificar casos de LES que muestran respuestas menos duraderas despues de una terapia de disminucion de linfocitos B (Cambridge y col., Ann Rheum Dis 67: 1011-16 (2008)).

La tecnica anterior desvela medicinas para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias. Por ejemplo, las dos solicitudes internacionales WO 03/020747 y WO 03/025014 desvelan un fragmento de snRNP de 70 kDa, que esta modificado por fosforilacion y/o por acetilacion, para tratar dichas patologias, es decir, las enfermedades

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autoinmunitarias. Sin embargo, una experimentacion adicional ha indicado que los peptidos desvelados en los documentos WO 03/020747 y WO 03/025014 son relativamente inestables y se eliminan rapidamente cuando se administran a los mamiferos. Ademas, algunos de los peptidos desvelados son inactivos.

Por lo tanto, existe la necesidad de proporcionar un mejor tratamiento para patologias autoinmunitarias.

Sumario

La presente descripcion proporciona composiciones y su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria que se basa en el descubrimiento sorprendente e inesperado de que ciertas formas modificadas del peptido de SEQ ID NO: 2 son mas estables cuando se administran a los mamiferos. De esta manera, en un aspecto, la presente descripcion proporciona composiciones que comprenden estas formas y un vehiculo farmaceuticamente aceptable.

En otro aspecto, la presente descripcion proporciona una composicion farmaceutica, o farmaco, util para mejorar enfermedades autoinmunitarias, ventajosamente para el tratamiento de lupus.

En un aspecto adicional, la presente descripcion proporciona la composicion farmaceutica para uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria que comprende administrar una cantidad eficaz de una composicion terapeutica como se describe en el presente documento.

En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona un peptido aislado (recombinante o sintetizado), o una sal del mismo, que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos:

IHMVYSKRSGKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 2],

en la que la serina (S) en la posicion 9 esta fosforilada, y la metionina (M) en la posicion 3 esta oxidada.

En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona un peptido del compuesto I que tiene la siguiente formula:

imagen1

El compuesto I tambien puede representarse por:

IHM(O)VYSKRS(PO3H2)GKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 5]

En la que “M(O)” representa metionina oxidada, y “S(PO3H2)” representa fosfoserina.

Estos peptidos proceden de la proteina humana U1 snRNP 70 kDa (SEQ ID NO: 3) y corresponden a la region delimitada por el segmento de aminoacidos que se extiende desde el resto 132 al resto 151 de la SEQ ID NO: 3. Formalmente, el resto que esta fosforilado corresponde al aminoacido en la posicion 140 desde la primera metionina de la SEQ ID NO: 3 y el resto que esta oxidado corresponde al aminoacido en la posicion 134 desde la primera metionina de la SEQ ID NO: 3.

En ciertos aspectos, la descripcion proporciona un peptido aislado que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, o sal del mismo, que comprende una fosfoserina en la posicion 10, y un resto de metionina oxidada en la posicion 4. En una realizacion de este aspecto, la descripcion proporciona una composicion que comprende un peptido aislado que tiene o que consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, o sal del mismo, en la que el peptido comprende una fosfoserina en la posicion 10 y un resto de metionina oxidado en la posicion 4. En ciertas realizaciones adicionales, el peptido de SEQ ID NO: 1 tambien comprende un resto de lisina acetilado. En particular, dicho peptido de SEQ ID NO: 1 comprende una fosfoserina en la posicion 10 y un resto de metionina oxidado en la posicion 4, y una acetilacion de una o las dos lisinas en posicion 8 y 12 y, mas particularmente, comprende ademas una fosfoserina en la posicion 7.

En una realizacion de este aspecto, la descripcion proporciona una composicion que comprende un peptido aislado que tiene o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2, o sal del mismo, en la que el peptido comprende una fosfoserina en la posicion 9 y un resto de metionina oxidado en la posicion 3. En ciertas realizaciones adicionales, el peptido de SEQ ID NO: 2 tambien comprende un resto de lisina acetilado.

En ciertos aspectos, la descripcion proporciona una composicion que comprende una cantidad eficaz de uno o mas de los peptidos descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, la composicion comprende ademas un

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vehiculo farmaceuticamente aceptable. En una realizacion adicional, la descripcion proporciona una composicion que comprende una cantidad eficaz de al menos un peptido, o sal del mismo, seleccionado del grupo que consiste en la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 2, que comprende una fosfoserina en la posicion 9, y metionina oxidada en la posicion 3; la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1, que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y una metionina oxidada en la posicion 4; y una combinacion de ambas.

En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona un peptido del compuesto II que tienen la siguiente formula:

imagen2

El compuesto II tambien puede representarse por:

RIHM(O)VYSKRS(PO3H2)GKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 4]

en la que M(O) representa la oxidacion de la metionina y S(PO3H2) representa la fosforilacion de serina.

De esta manera, la descripcion proporciona peptidos, o una sal del mismo, que comprenden o consisten en la secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 4 y la SEQ ID NO: 5.

La invencion se ilustrara mejor mediante las siguientes figuras 1 a 6, la descripcion que se acompana, los ejemplos y las reivindicaciones adjuntas.

Breve descripcion de los dibujos

Una realizacion de la invencion no debe considerarse limitante de la invencion.

La Figura 1 representa la estabilidad a 37 °C del peptido de acuerdo con la invencion (Compuesto II) en comparacion con la estabilidad del peptido que consiste en la SEQ ID NO: 1, en la que la serina en posicion 10 esta fosforilada. El grafico representa el porcentaje de estabilidad a lo largo del tiempo (expresado en dias). Las curvas A-C representan la estabilidad del Compuesto II a una concentracion de 200, 100 y 50 pg/ml, respectivamente. Las curvas D-F representan la estabilidad del peptido que consiste en la SEQ ID NO: 1, en el que la serina en la posicion 10 esta fosforilada a una concentracion de 200, 100 y 50 pg/ml, respectivamente.

La Figura 2 es un grafico de Kaplan-Meier que representa la tasa de supervivencia acumulativa (en porcentaje) a lo largo del tiempo (expresado en semanas) de ratones en los que se ha inyectado NaCl (linea con circulos), consistiendo el peptido en la SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada (linea con cuadrados) y el compuesto II de acuerdo con la invencion (lineas con triangulos).

La Figura 3 representa la puntuacion de proteinuria a lo largo del tiempo (expresado en semanas) de ratones en los que se ha inyectado NaCl (linea con circulos), consistiendo el peptido en la SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada (linea con cuadrados) y el compuesto II de acuerdo con la invencion (lineas con triangulos).

La Figura 4 representa la medida de la hipercelularidad de celulas de ratones MRL/lpr. El eje Y representa el numero de celulas/ml de sangre (x 106), en ratones tratados con NaCl (circulos), consistiendo el peptido en la SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada (cuadrados) y el compuesto II de acuerdo con la invencion (triangulos).

La Figura 5 representa la medida de la afinidad por la proteina HSC70 del peptido que consiste en la SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada. Las curvas corresponden a la respuesta del Biacore a lo largo del tiempo (expresado en segundos) usando el peptido que consiste en la SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada a una concentracion de 25 pM (A), 12,5 pM (B), 6,25 pM (C), 3,12 pM (D) y 1,56 pM (E).

La Figura 6 representa la medida de la afinidad del compuesto II de acuerdo con la invencion para la proteina HSC70. Las curvas corresponden a la respuesta del Biacore a lo largo del tiempo (expresado en segundos) usando el compuesto II a una concentracion de 25 pM (A), 12,5 pM (B), 6,25 pM (C), 3,12 pM (D) y 1,56 pM (E).

Descripcion detallada

A continuacion, se proporciona una descripcion detallada de la invencion para ayudar a los expertos en la materia a poner en practica la presente invencion. Los expertos habituales en la materia pueden realizar modificaciones y

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variaciones en las realizaciones descritas en el presente documento sin apartarse del espiritu o alcance de la presente invencion. Aunque tambien puede usarse cualquier metodo y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento en la puesta en practica o ensayo de la presente invencion, ahora se describen los metodos y materiales preferidos. A menos que se definan de otra manera, todos los terminos tecnicos y cientificos usados en el presente documento tienen el mismo significado que se entiende comunmente por un experto habitual en la materia a la que pertenece la presente invencion. La terminologia usada en la descripcion de la invencion del presente documento sirve unicamente para describir realizaciones particulares y no pretende ser limitante de la invencion.

Como se usan en el presente documento, los siguientes terminos pueden tener los significados que se les atribuye mas adelante, a menos que se especifique otra cosa. Sin embargo, debe entenderse que tambien son posibles otros significados conocidos o entendidos por los expertos habituales en la materia, y estan dentro del alcance de la presente invencion.

Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que dentro de la invencion se incluyen todos los valores intermedios, hasta la decima parte de la unidad del limite inferior a menos que el contexto dicte claramente otra cosa, entre el limite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor indicado o intermedio en ese intervalo senalado. Tambien se incluyen dentro de la invencion los limites superior e inferior de estos intervalos mas pequenos que pueden incluirse de forma independiente en los intervalos mas pequenos, sujeto a cualquier limite excluido especificamente en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o los dos limites, tambien se incluyen en la invencion los intervalos que excluyen ambos de esos limites incluidos.

Debe indicarse que, como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “un”, “una”, “y”, y “el”, “la” incluyen las referencias plurales (es decir, se refieren a uno, mas de uno o al menos uno) del objeto gramatical del articulo. A modo de ejemplo, “un elemento” significa un elemento o mas de un elemento.

El termino “aproximadamente”, como se usa en el presente documento, cuando esta asociado con valores o intervalos numericos, refleja el hecho de que hay un cierto nivel de variacion que se reconoce y tolera en la tecnica debido a limitaciones practicas y/o teoricas. Por ejemplo, se tolera una pequena variacion debida a las varianzas intrinsecas en la manera en la que funcionan ciertos dispositivos y/o en la manera en la que se toman las medidas. De acuerdo con lo anterior, la frase “aproximadamente” normalmente se usa para incluir valores dentro de la desviacion tipica o error tipico.

Como se usan en el presente documento, los “derivados” son composiciones formadas a partir de los compuestos nativos directamente, por modificacion o por sustitucion parcial. Como se usan en el presente documento, los “analogos” son composiciones que tienen una estructura similar, pero no identica, al compuesto nativo.

Las expresiones “cantidad/dosis eficaz”, “cantidad/dosis farmaceuticamente eficaz”, “cantidad/dosis farmaceuticamente eficaz” o “cantidad/dosis terapeuticamente eficaz” puede hacer referencia, pero sin limitarse de ninguna manera, a que esa cantidad/dosis del ingrediente farmaceutico activo es suficiente para prevenir, inhibir la aparicion, mejorar, retrasar o tratar (aliviar un sintoma en alguna medida, preferentemente todos) los sintomas de una afeccion, trastorno o patologia. La cantidad eficaz depende del tipo de enfermedad, la composicion usada, la via de administracion, el tipo de mamifero que se este tratando, las caracteristicas fisicas del mamifero especifico en consideracion, la medicacion concurrente y otros factores que reconoceran los expertos en las tecnicas medicas. En general, se administra una cantidad comprendida entre 0,1 mg/kg y 1000 mg/kg de peso corporal/dia de ingredientes activos dependiendo de la potencia del agente. La toxicidad y eficacia terapeutica de dichos compuestos puede determinarse por procedimientos farmaceuticos convencionales en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la DL50 (la dosis letal para el 50 % de la poblacion) y la DE50 (la dosis terapeuticamente eficaz en el 50 % de la poblacion). La relacion de dosis entre los efectos toxicos y terapeuticos es el indice terapeutico y puede expresarse como la relacion DL50/DE50. Se prefieren compuestos que presentan grandes indices terapeuticos. Aunque pueden usarse compuestos que presentan efectos secundarios toxicos, debe tenerse cuidado de disenar un sistema de liberacion que dirija dichos compuestos al sitio del tejido afectado para minimizar las posibles lesiones en las celulas no infectadas y, de esta manera, reducir los efectos secundarios. Los datos obtenidos a partir de los ensayos del cultivo de celulas y los estudios animales pueden usarse para formular un intervalo de dosificacion para su uso en seres humanos. La dosificacion de dichos compuestos preferentemente esta dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la DE50 con una toxicidad pequena o nula. La dosificacion puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificacion empleada y la via de administracion utilizada. Para cualquier compuesto usado en el metodo de la invencion, la dosis terapeuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Una dosis puede formularse en modelos animales para conseguir un intervalo de concentraciones en plasma circulante que incluye la CI50 (es decir, la concentracion del compuesto de ensayo que consigue una inhibicion semimaxima de los sintomas) como se determina en un cultivo celular. Dicha informacion puede usarse para determinar de forma mas precisa las dosis utiles en seres humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, por cromatografia liquida de alta resolucion.

La expresion “composicion farmaceutica”, “composicion terapeutica”, “formulacion terapeutica” o “formulacion farmaceuticamente aceptable” puede significar, pero de ninguna manera se limita a, una composicion o formulacion

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que permite la distribucion eficaz de un agente proporcionado por la invencion, que esta en una forma adecuada para la administracion en la localizacion fisica mas adecuada para su actividad deseada, por ejemplo, la administracion sistemica.

La expresion “farmaceuticamente aceptable” o “farmacologicamente aceptable” puede significar, pero de ninguna manera esta limitada a, entidades y composiciones que no producen una reaccion adversa, alergica u otra reaccion indeseada cuando se administra a un animal o a un ser humano, segun sea apropiado.

La expresion “vehiculo farmaceuticamente aceptable” o “vehiculo farmacologicamente aceptable” puede significar, pero sin limitacion, todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersion, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifungicos, agentes isotonicos y de retraso de la absorcion, y similares, compatibles con la administracion farmaceutica. Se describen vehiculos adecuados en la edicion mas reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, un texto de referencia convencional en ese campo. Los ejemplos preferidos de dichos vehiculos o diluyentes incluyen, pero sin limitacion, agua, solucion salina, soluciones de finger, solucion de dextrosa y albumina de suero humano al 5 %. Tambien pueden usarse liposomas y vehiculos no acuosos tales como aceites fijos. El uso de dichos medios o agentes para sustancias farmaceuticamente activas es bien conocido en la tecnica. Excepto cuando cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla su uso en las composiciones. Tambien pueden incorporarse en las composiciones compuestos activos complementarios.

La expresion “administracion sistemica” se refiere a una via de administracion que es, por ejemplo, enterica o parenteral, y tiene como resultado la distribucion sistemica de un agente que conduce a la absorcion sistemica o acumulacion de farmacos en el torrente sanguineo, seguido de su distribucion a lo largo de todo el cuerpo. Las formas adecuadas, en parte, dependen del uso o la via de entrada, por ejemplo, la via oral, transdermica o por inyeccion. Dichas formas no deben impedir que la composicion o formulacion alcance una celula diana (es decir, una celula en la que se desea liberar el polimero cargado negativamente). Por ejemplo, las composiciones farmacologicas inyectadas en el torrente sanguineo deben ser solubles. En la tecnica se conocen otros factores e incluyen consideraciones tales como toxicidad y formas que impiden que la composicion o formulacion ejerza su efecto. Las vias de administracion que conducen a la absorcion sistemica incluyen, sin limitaciones: intravenosa, subcutanea, intraperitoneal, inhalacion, oral, intrapulmonar e intramuscular. Se ha demostrado que la velocidad de entrada de un farmaco en la circulacion es una funcion del peso molecular o tamano. El uso de un liposoma u otro vehiculo de farmaco que comprenda los compuestos de la presente invencion puede localizar potencialmente el farmaco, por ejemplo, en ciertos tipos de tejidos, tales como los tejidos del sistema reticuloendotelial (RES). Tambien es util una formulacion de liposomas que puede facilitar la asociacion de un farmaco con la superficie de celulas tales como linfocitos y macrofagos.

La expresion “administracion local” se refiere a una via de administracion en la que el agente se libera en un sitio que es apropiado o esta proximo, por ejemplo, esta a una distancia menor o igual a aproximadamente 10 cm del sitio de la lesion o enfermedad.

El termino “derivados” puede significar, pero de ninguna manera se limita a, composiciones quimicas, por ejemplo, acidos nucleicos, nucleotidos, polipeptidos o aminoacidos, formados a partir de los compuestos nativos directamente, por modificacion o por sustitucion parcial. El termino “analogos” puede hacer referencia, pero de ninguna forma se limita a, composiciones quimicas, por ejemplo, acidos nucleicos, nucleotidos, polipeptidos o aminoacidos que tienen una estructura similar a, pero no identica al compuesto nativo.

La expresion “mutaciones conservativas” se refiere a la sustitucion, delecion o adicion de acidos nucleicos que alteran, anaden o eliminan un solo aminoacido o un pequeno numero de aminoacidos en una secuencia codificante en la que las alteraciones del acido nucleico dan como resultado la sustitucion de un aminoacido quimicamente similar. Los aminoacidos que pueden servir como sustituciones conservativas entre si incluyen los siguientes: Basicos: Arginina (R), Lisina (K), Histidina (H); Acidos: Acido aspartico (D), Acido glutamico (E), Asparagina (N), Glutamina (Q); Hidrofilos: Glicina (G), Alanina (A), Valina (V), Leucina (L), Isoleucina (I); Hidrofobos: Fenilalanina (F), Tirosina (Y), Triptofano (W); Que contienen azufre: Metionina (M), Cisteina (C). Ademas, generalmente son homologas las secuencias que difieren por variaciones conservativas.

Por “homologia” se entiende la secuencia de nucleotidos de dos o mas moleculas de acido nucleico o dos o mas secuencias de acido nucleico o de aminoacidos que son parcial o completamente identicas. En ciertas realizaciones, la secuencia de aminoacidos o de acido nucleico homologa tiene un 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % o 95 % de similitud o identidad de secuencia con un acido nucleico que codifica la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 1, respectivamente.

Los “homologos” pueden ser naturales o pueden crearse por sintesis artificial de uno o mas acidos nucleicos que tienen secuencias relacionadas, o por modificacion de uno o mas acidos nucleicos para producir acidos nucleicos relacionados. Los acidos nucleicos son homologos cuando proceden, de forma natural o artificial, de una secuencia antecesora comun (por ejemplo, ortologos o paralogos). Si no se describe expresamente la homologia entre dos acidos nucleicos, la homologia puede deducirse por una comparacion de acidos nucleicos entre dos o mas secuencias. Si las secuencias demuestran algun grado de similitud de secuencia, por ejemplo, mayor de

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aproximadamente un 30 % a nivel de la estructura de aminoacidos primaria, se concluye que comparten un antecesor comun. Para los fines de la presente invencion, los genes son homologos si las secuencias de acido nucleico son suficientemente similares para permitir la recombinacion y/o hibridacion en condiciones de baja rigurosidad. Ademas, los polipeptidos se consideran homologos si sus secuencias de acido nucleico son suficientemente similares como para permitir la recombinacion o hibridacion en condiciones de baja rigurosidad, y opcionalmente demuestran actividad de reparacion de la membrana, y opcionalmente pueden reconocerse por (es decir presentar una reaccion cruzada con) un anticuerpo especifico para un epitopo contenido dentro de la secuencia de aminoacidos de al menos una de las SEQ ID NO: 1 -6.

El termino “celula” puede hacer referencia a, pero de ninguna manera se limita a, su sentido biologico habitual, y no se refiere a un organismo multicelular entero. La celula, por ejemplo, puede estar in vivo, in vitro o ex vivo, por ejemplo, en cultivo celular, o puede estar presente en un organismo multicelular incluyendo, por ejemplo, aves, plantas y mamiferos tales como seres humanos, vacas, ovejas, simios, monos, cerdos, perros y gatos. La celula puede ser procariotica (por ejemplo, una celula bacteriana) o eucariota (por ejemplo, una celula de mamifero o vegetal).

La expresion “celula hospedadora” puede significar, pero de ninguna manera se limita a, una celula que podria usarse para llevar un acido nucleico heterologo, o expresa un peptido o proteina codificada por un acido nucleico heterologo. Una celula hospedadora puede contener genes que no se encuentran dentro de la forma nativa (no recombinante) de la celula, genes que se encuentran en la forma nativa de la celula donde los genes se han modificado y se han reintroducido en la celula por medios artificiales, o un acido nucleico endogeno para la celula que se ha modificado de forma artificial sin retirar el acido nucleico de la celula. Una celula hospedadora puede ser eucariotica o procariotica. Las condiciones de crecimiento generales necesarias para el cultivo de bacterias pueden encontrarse en textos como BERGEY'S MANUAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY, vol. 1, N. R. Krieg, ed., Williams y Wilkins, Baltimore/London (1984). Una “celula hospedadora” tambien puede ser una en la que los genes endogenos o promotores, o ambos, se han modificado para producir uno o mas de los componentes polipeptidicos del complejo de la invencion.

Como se usa en el presente documento, “P140” se refiere a un peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada.

La expresion “cantidad o dosis terapeuticamente eficaz” incluye una dosis de un farmaco que es capaz de conseguir un efecto terapeutico en un sujeto que lo necesita. Por ejemplo, una cantidad terapeuticamente eficaz de un farmaco puede ser la cantidad que es capaz de prevenir o aliviar uno o mas sintomas asociados con una enfermedad o trastorno, por ejemplo, una lesion de un tejido o una enfermedad o trastorno relacionado con el musculo. La cantidad exacta puede averiguarse por un experto en la materia usando tecnicas conocidas (vease, por ejemplo, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vol. 1-3, 1992), Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20s Edicion, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams y Wilkins).

Un kit es cualquier articulo fabricado (por ejemplo, un envase o recipiente) que comprende al menos un reactivo, por ejemplo, una sonda, para detectar especificamente un marcador de la invencion. El articulo fabricado puede promoverse, distribuirse o venderse como una unidad para poner en practica los metodos de la presente invencion. Los reactivos incluidos en dicho kit comprenden sondas/cebadores y/o anticuerpos para su uso en la deteccion de la expresion de genes de sensibilidad y resistencia. Ademas, los kits de la presente invencion preferentemente pueden contener instrucciones que describen un ensayo de deteccion adecuado. Dichos kits pueden usarse convenientemente, por ejemplo, en situaciones clinicas, para el diagnostico de pacientes que presentan sintomas de cancer, en particular pacientes que presentan la posible presencia de un tumor.

A menos que se definan de otra manera, todos los terminos tecnicos y cientificos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende comunmente un experto habitual en la materia a la que pertenece la presente invencion.

Las siguientes referencias proporcionan a un experto una definicion general de muchos de los terminos usados en la presente invencion: Singleton y col., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2a ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5a Ed., R. Rieger y col. (eds.), Springer Verlag (1991); y Hale y Marham, the Harper Collins Dictionary of Biology (1991).

IHMVYSKRSGKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 2],

en la que la serina (S) en posicion 9 esta fosforilada, y la metionina (M) en posicion 3 esta oxidada.

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IHM(O)VYSKRS(PO3H2)GKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 5] en la que “M(O)” representa metionina oxidada y “S(PO3H2)” representa fosfoserina.

En ciertos aspectos, la descripcion proporciona un peptido aislado que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, o una sal del mismo, que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y un resto de metionina oxidado en la posicion 4. En una realizacion de este aspecto, la descripcion proporciona una composicion que comprende un peptido aislado que tiene o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, o una sal del mismo, donde el peptido comprende una fosfoserina en la posicion 10 y un resto de metionina oxidado en la posicion 4. En ciertas realizaciones adicionales, el peptido de SEQ ID NO: 1 tambien comprende un resto de lisina acetilado.

En aspectos adicionales, la descripcion proporciona un peptido aislado que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2, o sal del mismo, que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y un resto de metionina oxidado en la posicion 3. En una realizacion de este aspecto, la descripcion proporciona una composicion que comprende un peptido aislado que tiene o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2, o sal del mismo, donde el peptido comprende una fosfoserina en la posicion 9 y un resto de metionina oxidado en la posicion 3. En ciertas realizaciones adicionales, el peptido de SEQ ID NO: 2 tambien comprende un resto de lisina acetilado.

En ciertos aspectos, la descripcion proporciona una composicion que comprende una cantidad eficaz de uno o mas de los peptidos descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, la composicion comprende ademas un vehiculo farmaceuticamente aceptable. En una realizacion adicional, la descripcion proporciona una composicion que comprende una cantidad eficaz de al menos un peptido, o sal del mismo, seleccionado del grupo que consiste en la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 2, que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y metionina oxidada en la posicion 3; la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1, que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y una metionina oxidada en la posicion 4; y una combinacion de ambas.

En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona un peptido de compuesto II que tiene la siguiente formula:

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El compuesto II tambien puede representarse por:

RIHM(O)VYSKRS(POsH2)GKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 4] en la que M(O) representa la oxidacion y S(PO3H2) representa la fosforilacion.

La descripcion proporciona peptidos y/o sales de los mismos que comprenden o consisten en la secuencia de aminoacidos seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, y combinaciones de los mismos, asi como composiciones que los comprenden.

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En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona un peptido aislado que tiene la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1, que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y una metionina oxidada en la posicion 4 (por ejemplo, SEQ ID NO: 4) (tambien denominado en el presente documento Compuesto II o P140 (MO)).

De acuerdo con la presente descripcion, los peptidos aislados que tienen la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 4 o 5, respectivamente, estan modificados por al menos dos modificaciones postraduccionales (modificaciones que se producen despues de la sintesis de los peptidos). En ciertas realizaciones, la modificacion postraduccional se selecciona del grupo que consiste en fosforilacion (adicion de un fosfato PO3H2), por ejemplo, fosforilacion de un resto de serina; oxidacion, por ejemplo, oxidacion de un resto de metionina; acetilacion, por ejemplo, acetilacion de un resto de lisina; y combinaciones de los mismos.

En una realizacion preferida, la descripcion proporciona un peptido aislado que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 2, que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3, o una sal de la misma. En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona el peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 2, que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3, o una sal de la misma, y un vehiculo, por ejemplo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable. En ciertas realizaciones adicionales, la descripcion proporciona una composicion, por ejemplo, una composicion terapeutica, que comprende una cantidad eficaz de un peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 2, que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3, o una sal de la misma, y un vehiculo, por ejemplo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable.

En otra realizacion, la descripcion proporciona un peptido aislado que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 4 que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y una metionina oxidada en la posicion 4, o una sal de la misma. En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona el peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 4, que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y una metionina oxidada en la posicion 4, o una sal de la misma, y un vehiculo, por ejemplo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable. En ciertas realizaciones adicionales, la descripcion proporciona una composicion, por ejemplo, una composicion terapeutica, que comprende una cantidad eficaz de un peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 4 que comprende una fosfoserina en la posicion 10, o una sal de la misma, y una metionina oxidada en la posicion 4, y un vehiculo, por ejemplo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable.

En otra realizacion, la descripcion proporciona un peptido aislado que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 5 que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3, o una sal de la misma. En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona el peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 5 que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3, o sal de la misma, y un vehiculo, por ejemplo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable. En ciertas realizaciones adicionales, la descripcion proporciona una composicion, por ejemplo, una composicion terapeutica, que comprende una cantidad eficaz de un peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 5, que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3, o una sal de la misma, y un vehiculo, por ejemplo, un vehiculo farmaceuticamente aceptable.

De forma sorprendente e inesperada, se descubrio que los peptidos descritos en el presente documento son mas estables in vitro en comparacion con sus homologos no oxidados. La estabilidad se mide como se desvela en la seccion de ejemplos. El peptido fosforilado-oxidado se degrada menos espontaneamente en solucion que su homologo no oxidado, aumentando dicha estabilidad sus propiedades biologicas.

Ademas, los inventores han identificado sorprendentemente que la oxidacion de metionina aumenta la estabilidad del peptido sin afectar al efecto biologico de dicho peptido, lo cual es contrario a las ensenanzas de la tecnica anterior. De hecho, se ha notificado abundantemente en la tecnica que las proteinas o peptidos que contienen metionina oxidada tienen rupturas en su estructura tridimensional y/o bioactividad. Los peptidos modificados descritos en el presente documento tienen una afinidad por la proteina HSC70 esencialmente identica al homologo no oxidado como se desvela en la seccion de ejemplos.

En ciertas realizaciones, la oxidacion se produce en la Metionina (M) en la posicion 9 de la SEQ ID NO: 2, o en la posicion 10 de la SEQ ID NO: 1, que son posiciones equivalentes a la posicion 134 de la SEQ ID NO: 3. El atomo de azufre se oxida como se ilustra a continuacion.

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Los peptidos anteriores (SEQ ID NO: 1, 2, 4 y 5) pueden sintetizarse por tecnicas usadas comunmente en este campo, tales como sfntesis biologica o sfntesis qufmica. La smtesis biologica se refiere a la produccion, in vivo, in vitro o ex vivo, del peptido de interes, mediante la transcripcion y traduccion de una molecula de acido nucleico que codifica dichos peptidos.

Por ejemplo, la secuencia de acido nucleico:

MGNATHCAYATGGTNTAYWSNAARMGNWSNGGNAARCCNMGNGG NTAYGCNTTYATHGARTAYTRR [SEQ ID NO: 6]

se transcribe y se traduce en un sistema in vitro o en un organismo hospedador, para producir el peptido de la SEQ ID NO: 1. El peptido producido de esta manera se purifica de acuerdo con tecnicas bien conocidas.

La smtesis qufmica consiste en polimerizar el peptido deseado mediante la adicion de los aminoacidos necesarios. En la seccion de ejemplos se desvela un metodo.

Es posible sintetizar qufmicamente los peptidos de la SEQ ID NO: 1 y 2 por la qufmica clasica de fase solida Fmoc (N-[9-fluorenil]metoxicarbonilo) y purificarlos por cromatograffa lfquida de alta resolucion de fase inversa (HPLC; Neimark y Briand, 1993. Monneaux y col., 2003, Eur. J. Immunol., 33, 287-296, Page y col., 2009, PloS ONE 4, e5273).

Tambien es posible sintetizar directamente los peptidos de SEQ ID NO: 1 y 2, en los cuales los restos respectivos en las posiciones 9 y 10 estan fosforilados. Para este fin, durante la smtesis del peptido se uso un derivado de serina de tipo Fmoc-Ser(PO(Obz)OH)-OH, en la posicion deseada.

Tambien puede anadirse un grupo fosfato (-PO3H2) despues de la smtesis del peptido, de acuerdo con protocolos bien conocidos en la tecnica.

La serina puede fosforilarse por incubacion de los peptidos de SEQ ID NO: 1 o 2 con serinas quinasa especfficas seleccionadas entre Protema Quinasa A o C (PKA o PKC) o casema quinasa II, en presencia de adenosina trifosfato (ATP). De esta manera los peptidos se fosforilan en una serina (en posicion 6 o 9 de la SEQ ID NO: 2, o en posicion 7 o 10 de la SEQ ID NO: 1) o en las dos serinas. El peptido fosforilado deseado se separa de los otros, por ejemplo, por cromatograffa.

Tambien puede anadirse qufmicamente -PO3H2 en la posicion especffica (en la posicion 9 de la SEQ ID NO: 2, o en la posicion 10 de la SEQ ID NO: 1) usando un grupo protector especffico, que el experto puede elegir facilmente de acuerdo con su conocimiento comun.

Puede usarse cualquier otra tecnica conocida en este campo, que permita la fosforilacion especffica de serina.

En ciertas realizaciones, la oxidacion de metionina se realiza de acuerdo con el siguiente proceso: tratamiento con H2O2 20 mM a 37 °C durante 4 horas o

en una solucion de dimetilsulfoxido (DMSO, Me2SO), 0,1 M mas HCl 0,5 M, a 22 °C durante un periodo de 30 a 180 min.

Puede usarse cualquier otra tecnica conocida en este campo, que permita la oxidacion especffica de metionina.

En cualquiera de los aspectos o realizaciones descritos en el presente documento, el peptido o peptidos proporcionados por la descripcion pueden estar presentes en forma de una sal conocida por un experto en la materia, tal como, por ejemplo, sales de sodio, sales de amonio, sales de calcio, sales de magnesio, sales de potasio, sales acetato, sales carbonato, sales citrato, sales cloruro, sales sulfato, sales aminoclorhidrato, sales borhidrato, sales bencenosulfonato, sales fosfato, sales dihidrogenofosfato, sales succinato, sales citrato, sales tartrato, sales lactato, sales mandelato, sales metanosulfonato (mesilato) o sales p-toluenosulfonato (tosilato). Esta lista se proporciona a modo de ejemplo y no pretende ser limitante de la presente invencion. Por ejemplo, el experto en la materia puede determinar facilmente, de acuerdo con su conocimiento, la sal apropiada.

En una realizacion adicional, la descripcion proporciona un peptido que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos:

RIHMVYSKRSGKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 1],

que comprende una fosfoserina en la posicion 10, y una metionina oxidada en la posicion 4, o sal de la misma. En una realizacion ventajosa, la invencion se refiere al peptido definido anteriormente, que consiste en la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 4 o una sal de la misma.

En otro aspecto, la descripcion proporciona una composicion terapeutica que comprende al menos un peptido como se describe en el presente documento, o una sal del mismo, y un farmaco que tiene un efecto inmunosupresor. En ciertas realizaciones, la composicion terapeutica comprende una cantidad eficaz de un peptido como se describe en el presente documento, y una cantidad eficaz de un farmaco que tiene un efecto inmunosupresor. En una

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realizacion, el peptido tiene la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1, que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y un farmaco que tiene un efecto inmunosupresor.

El peptido que consiste en la secuencia de aminoacidos SEQ ID NO: 1, en la que la serina en la posicion 10 esta fosforilada, corresponde al Compuesto III mostrado a continuacion:

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Como se usa en el presente documento, “un farmaco que tiene un efecto inmunosupresor o un efecto inmunomodulador” es un farmaco que inhibe o impide la actividad del sistema inmunitario de un sujeto (por ejemplo, un mamifero tal como un ser humano). Por ejemplo, los farmacos “que tienen un efecto inmunosupresor” incluyen: corticoides tales como metil prednisolona; ciclofosfamidas; azatioprinas; hidroxicloroquinas; antimalaricos; micofenolato mofetil; metotrexato; agentes biologicos, por ejemplo, infliximab, etanercept, golimumab, adalimumab, certolizumab; y combinaciones de los anteriores. No se pretende que esta lista sea limitante de la invencion. Por ejemplo, el experto puede determinar facilmente otros farmacos conocidos que tienen un efecto inmunosupresor o inmunomodulador, sus cantidades eficaces y sus vias de administracion.

En ciertas realizaciones, la descripcion proporciona una composicion terapeutica que comprende una cantidad eficaz de un peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en al menos una de las SEQ ID NO: 4, 5, o una combinacion de las mismas (es decir, que comprende peptidos de SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 4) y una cantidad eficaz de un farmaco que tiene un efecto inmunosupresor o inmunomodulador. En realizaciones adicionales, la composicion puede comprender ademas un peptido que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 1, que comprende una fosfoserina en la posicion 10.

En otro aspecto, la descripcion proporciona una composicion como se describe en el presente documento para su uso en un metodo para tratar una enfermedad autoinmunitaria que comprende la etapa de administrar a un paciente que lo necesita una cantidad eficaz de una composicion farmaceutica como se describe en el presente documento, donde la composicion es suficiente para efectuar dicho tratamiento.

En ciertas realizaciones, la enfermedad autoinmunitaria se elige entre: patologias autoinmunitarias de la familia de enfermedades del tejido conectivo (enfermedades sistemicas no especificas de organo), por ejemplo, lupus eritematoso sistemico (LES), artritis reumatoide, enfermedad mixta del tejido conectivo, sindrome de Sjogren o artritis juvenil cronica; y/o patologias autoinmunitarias especificas de organo, por ejemplo, esclerosis multiple, diabetes dependiente de insulina, enfermedad de Crohn o enfermedades bulosas. En una realizacion preferida, la enfermedad autoinmunitaria es LES.

La descripcion tambien proporciona un farmaco que comprende un peptido como se describe en el presente documento y/o una combinacion como se describe en el presente documento, para su uso como un farmaco, en particular para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.

La descripcion tambien proporciona composiciones farmaceuticas que comprenden al menos un peptido como se describe en el presente documento, o un producto de combinacion como se ha descrito anteriormente, que incluye ademas un vehiculo farmaceuticamente aceptable.

Los peptidos (tambien denominados en el presente documento “compuestos activos”), como se describen en el presente documento, pueden incorporarse en composiciones farmaceuticas adecuadas para la administracion. Dichas composiciones tipicamente comprenden peptido y un vehiculo farmaceuticamente aceptable. Como se usa en el presente documento, la expresion “vehiculo farmaceuticamente aceptable” pretende incluir todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersion, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifungicos, agentes isotonicos y para retrasar la absorcion y similares, compatibles con la administracion farmaceutica. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmaceuticamente activas es bien conocido en la tecnica. Excepto cuando cualquier medio

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o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla su uso en las composiciones. Tambien pueden incorporarse en las composiciones compuestos activos complementarios.

La descripcion proporciona metodos para preparar composiciones farmaceuticas. Dichos metodos comprenden la formulacion de un vehiculo farmaceuticamente aceptable con un peptido como se describe en el presente documento. Dichas composiciones pueden incluir ademas agentes activos adicionales como se ha descrito anteriormente. De esta manera, la invencion incluye ademas metodos para preparar una composicion farmaceutica mediante la formulacion de un vehiculo farmaceuticamente aceptable con un peptido como se describe en el presente documento, y uno o mas compuestos activos adicionales.

Una composicion farmaceutica de la invencion se formula para ser compatible con la via de administracion deseada. Los ejemplos de vias de administracion incluyen la administracion parenteral, por ejemplo, intravenosa, intradermica, subcutanea, oral, nasal (por ejemplo, inhalacion), transdermica (topica), transmucosa y rectal. Las soluciones o suspensiones usadas para aplicacion parenteral, intradermica o subcutanea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente esteril tal como agua para inyeccion, solucion salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sinteticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencilico; antioxidantes tales como acido ascorbico o bisulfato sodico; agentes quelantes tales como acido etilendiaminotetraacetico; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para ajustar la tonicidad tales como cloruro sodico o dextrosa. El pH puede ajustarse con acidos o bases, tales como acido clorhidrico o hidroxido sodico. La preparacion parenteral puede encerrarse en ampollas, jeringuillas desechables o viales de multiples dosis hechos de vidrio o plastico.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones acuosas esteriles (cuando son solubles en agua) o dispersiones y polvos esteriles para la preparacion extemporanea de soluciones o dispersiones inyectables esteriles. Para la administracion intravenosa, los vehiculos adecuados incluyen solucion salina fisiologica, agua bacteriostatica, Cremophor EL (BASF, Parsippany, N. J.) o solucion salina tamponada con fosfato (PBS). En todos los casos, la composicion debe ser esteril y debe ser fluida hasta tal medida que pueda administrarse facilmente a traves de una jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricacion y almacenamiento y debe conservarse contra la accion contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehiculo puede ser un disolvente o medio de dispersion que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol liquido y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de particulas necesario en el caso de la dispersion y mediante el uso de tensioactivos. La prevencion de la accion de microorganismos puede conseguirse por diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, clorobutanol, fenol, acido ascorbico y similares. En muchos casos, sera preferible incluir en la composicion agentes isotonicos, por ejemplo, azucares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro sodico. La absorcion prolongada de las composiciones inyectables puede producirse incluyendo en la composicion un agente que retrase la absorcion, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las soluciones inyectables esteriles pueden prepararse mediante la incorporacion del compuesto activo (por ejemplo, un polipeptido o anticuerpo) en la cantidad necesaria en un disolvente apropiado con uno o una combinacion de ingredientes enumerados anteriormente, segun se requiera, seguido de esterilizacion por filtracion. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehiculo esteril que contiene un medio de dispersion basico, y despues incorporando los otros ingredientes necesarios de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos esteriles para la preparacion de soluciones inyectables esteriles, los metodos de preparacion preferidos son secado al vacio y liofilizacion, que produce un polvo del ingrediente activo mas cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solucion del mismo filtrada de forma esteril previamente.

Las composiciones orales generalmente incluyen un diluyente inerte o un vehiculo comestible. Pueden encerrarse en capsulas de gelatina o comprimirse en comprimidos. Para los fines de administracion terapeutica oral, el compuesto activo puede incorporarse con excipientes y usarse en forma de comprimidos, trociscos o capsulas. Tambien pueden prepararse composiciones orales usando un vehiculo liquido para uso como un enjuague bucal, donde el compuesto en el vehiculo liquido se aplica por via oral y se utiliza para enjuagarse y escupirse o se traga.

Para la administracion por inhalacion, los compuestos se liberan en forma de una pulverizacion de aerosol desde un dispensador o recipiente presurizado que contiene un propulsor adecuado, por ejemplo, un gas tal como dioxido de carbono o un nebulizador.

La administracion sistemica tambien puede realizarse por un medio transmucoso o transdermico. Para la administracion transmucosa o transdermica, en la formulacion se usan penetrantes apropiados para la barrera que se desea infiltrar. Dichos penetrantes se conocen en general en la tecnica e incluyen, por ejemplo, para la administracion transmucosa, detergentes, sales biliares y derivados del acido fusidico. La administracion transmucosa puede realizarse mediante el uso de pulverizaciones nasales o supositorios. Para la administracion transdermica, los compuestos activos se formulan en pomadas, unguentos, geles o cremas como se conoce en general en la tecnica.

Los compuestos tambien pueden prepararse en forma de supositorios (por ejemplo, con bases de supositorio

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convencionales tales como manteca de cacao y otros gliceridos) o enemas de retencion para la administracion rectal.

En una realizacion, los compuestos activos se preparan con vehiculos que protegeran al compuesto frente a la eliminacion rapida del cuerpo, tales como una formulacion de liberacion controlada, incluyendo implantes y sistemas de liberacion microencapsulados. Pueden usarse polimeros biodegradables y biocompatibles tales como etileno- acetato de vinilo, polianhidridos, acido poliglicolico, colageno, poliortoesteres y acido polilactico. Los metodos para la preparacion de dichas formulaciones seran evidentes para los expertos en la materia. Los materiales tambien pueden obtenerse comercialmente en Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Tambien pueden usarse suspensiones de liposomas (incluyendo liposomas que tienen anticuerpos monoclonales incorporados en los mismos o sobre los mismos) como vehiculos farmaceuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo con metodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, como se describe en la Patente de Estados Unidos n.2 4.522.811.

Es especialmente ventajoso formular composiciones orales o parenterales en forma de unidades de dosificacion para facilitar la administracion y conseguir una uniformidad en la dosificacion. La forma de unidad de dosificacion como se usa en el presente documento se refiere a unidades fisicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el vehiculo farmaceutico requerido. La especificacion para las formas de unidad de dosificacion de la invencion viene dictada por y es directamente dependiente de las caracteristicas unicas del compuesto activo y el efecto terapeutico particular que se desea conseguir, y de las limitaciones intrinsecas en la tecnica de la composicion de dicho compuesto activo para el tratamiento de individuos.

En ciertas realizaciones de los metodos proporcionados en el presente documento, el metodo incluye la etapa de administrar una dosificacion de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 5 mg de una composicion terapeutica o farmaceutica como se describe en el presente documento. En ciertas realizaciones, por ejemplo, en seres humanos, la composicion farmaceutica como se describe en el presente documento puede contener manitol como vehiculo, y la composicion se administra de 10 gg a 500 gg, preferentemente 200 gg, en una sola administracion.

En ciertos aspectos adicionales, el regimen de dosificacion puede reproducirse de 1 a 3 veces/semana, desde cada semana hasta una vez cada cuatro semanas, durante un periodo tan largo como sea necesario, con ventanas terapeuticas y, por lo tanto, durante varios anos. En una realizacion preferida, el regimen de dosificacion es de 12 semanas de tratamiento, pero puede repetirse dos veces al ano durante varios anos. Un ejemplo de la administracion es: una inyeccion de 200 gg de peptido, cada 4 semanas, durante 12 semanas (es decir, 3 inyecciones separadas entre si por 4 semanas).

El tratamiento puede prolongarse mediante la administracion cada 6 meses.

Los vehiculos farmaceuticamente aceptables preferidos pueden comprender, por ejemplo, goma xantana, goma de algarrobilla, galactosa, otros sacaridos, oligosacaridos y/o polisacaridos, almidon, fragmentos de almidon, dextrinas, goma britanica y mezclas de los mismos. Ventajosamente, el vehiculo farmaceuticamente aceptable es de origen natural. El vehiculo farmaceuticamente aceptable puede ser, o puede comprender, ademas, un diluyente de sacarido inerte seleccionado entre un monosacarido o disacarido. Un sacarido preferido es manitol.

Ventajosamente, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica como se ha definido anteriormente, que esta en forma de una gragea, comprimido, gelatina, capsula, gota, pildora, liposoma o nanoparticulas, o en forma de una solucion. Una solucion ventajosa es una solucion que comprende de un 5 a un 15 %, en particular aproximadamente un 10 % de manitol. La solucion debe ser isoosmolar.

La invencion tambien se refiere a un farmaco que comprende un producto de combinacion como se ha definido anteriormente, para uso simultaneo, separado o secuencial.

Ejemplos

Estadistica

Se realizaron ensayos estadisticos usando GraphPad Prism version 5.0. Se uso el ensayo ANOVA de dos vias para analizar el significado estadistico de las diferencias de proteinuria entre grupos de ratones de control y tratados con peptido. La supervivencia de ratones MRL/lpr hembra de control y tratados con un analogo de P140 se analizo por el metodo de Kaplan-Meier y el significado de las diferencias se determino por el ensayo log-rank. Para las demas variables, el significado estadistico se evaluo usando el ensayo t de Student. Se consideraron significativos los valores de p menores de 0,05.

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Ejemplo 1: Sintesis quimica de los peptidos.

El peptido P140 y P140(MO) se sintetizaron usando la quimica clasica en fase solida Fmoc (N-[9- fluoreniljmetoxicarbonilo) y se purificaron por cromatografia liquida de alta resolucion de fase inversa (HPLC, Neimark y Briand, 1993, Monneaux y col., 2003, Eur. J. Immunol., 33, 287-296, Page y col., 2009, PloS ONE 4, e5273). Su homogeneidad se comprobo por HPLC analitica y su identidad se evaluo por LC/MS en un sistema Finnigan LCQ Advantage Max (Thermo Fischer Scientific). Despues de finalizar la reaccion, los peptidos se purificaron por HPLC.

Para introducir la fosforilacion en el resto de serina equivalente al resto 140 de la SEQ ID NO: 3, se uso un derivado de serina de tipo Fmoc-Ser(PO(Obz)OH)-OH. El tiempo de acoplamiento se aumenta a 30 minutos y se realiza un segundo acoplamiento sistematicamente. Despues de la escision en medio acido, cada peptido se precipita por eter frio, se solubiliza en una solucion de agua y acetonitrilo y finalmente se liofiliza. Los peptidos despues se purifican por RP-HPLC, y su integridad y su pureza se analizan por HPLC analitica y por espectrometria de masas (Maldi- TOF).

La oxidacion se introduce como se ha mencionado anteriormente.

Ejemplo 2: estabilidad de los peptidos.

La estabilidad del peptido SEQ ID NO: 2 en el que la serina en la posicion 10 esta fosforilada y la metionina en la posicion 4 esta oxidada (P140(MO)) y la estabilidad del peptido SEQ ID NO: 1 en el que la serina en la posicion 10 esta fosforilada (P140) se midieron a 37 °C, en una solucion de manitol al 10 % (v/v). Para cada peptido, se han ensayado 3 concentraciones: 200, 100 y 50 pg/ml.

En el punto de tiempo indicado, se midio la integridad de los peptidos P140 y P140(MO) en solucion salina por cromatografia liquida de alta resolucion desde el area del pico correspondiente al peptido intacto.

Los resultados se muestran en la figura 1.

Las siguientes tablas 1 y 2 resumen los resultados:

Tabla 1

: P140(MO) P140

Estabilidad (%): Dias 200 pg/ml 100 pg/ml 50 pg/ml 200 pg/ml 100 pg/ml 50 pg/ml

0: 100 100 100 100 100 100

20: 100 99,1 100 98,7 97,5 95,5

40: 100 99,5 100 98,5 96,2 93,2

60: - - - 97,9 95,5 91,5

80: - - - 97,6 94,5 90,3

100
100: 99,1 99,4 97,4 93,4 89,6

Tabla 2

: P140(MO) P140

Ecuacion lineal: y =100 y = - 0,0064x + 100,11 y = - 0,0064x + 99,677 y = - 0,0238x + 99,535 y = - 0,0612x + 99,25 y = - 0,099x + 98,299

Coeficiente de correlacion: N/A R2 = 0,8571 R2 = 0,4157 R2 = 0,8854 R2 = 0,9538 R2 = 0,9065

95 % de estabilidad (predicho): 00 2 anos + 2 meses 2 anos 6 meses 2 meses 1 mes

5

10

15

20

25

30

35

40

45

La estabilidad se mide usando la superficie del pico de HPLC.

La estabilidad de P140 M(O) permanece sin cambios (100 %, 99,1 % y 99,4 %) durante 100 dias a 37 °C, para cada una de las concentraciones ensayadas (de 50 a 200 pg/ml).

La estabilidad de P140 se reduce a lo largo del tiempo y se reduce despues de 100 dias a 37 °C (97,4 %, 93,4 % y 89,6 %) para cada una de las concentraciones ensayadas (de 50 a 200 pg/ml).

Estos datos demuestran que la oxidacion de la metionina en el peptido P140 aumenta la estabilidad del peptido. P140(MO) es estable a todas las concentraciones ensayadas durante mas de 100 dias.

Ejemplo 2: efecto terapeutico de los peptidos en ratones MRL/lpr.

La cepa de raton MRL/lpr es una subcepa de raton que esta geneticamente predispuesta al desarrollo de un sindrome parecido al lupus eritematoso sistemico que, segun se ha observado, es clinicamente similar a la enfermedad humana. Se ha determinado que esta cepa de raton lleva una mutacion en el gen fas. Ademas, el MRL/lpr es un modelo util para estudiar deficits conductuales y cognitivos encontrados en enfermedades autoinmunitarias y la eficacia de agentes inmunosupresores [Monneaux y col., 2003, Eur. J. Immunol. 33, 287-296].

2.1- Analisis de supervivencia

Ratones MRL/lpr hembra de cinco semanas de edad recibieron P140 o peptido P140(MO) por via intravenosa como se describe (Monneaux y col., 2003, Eur. J. Immunol., 33, 287-296). Todos los protocolos experimentales se realizaron con la aprobacion del Comite Institucional para el Cuidado y Uso de Animales (CREMEAS) local. Como control, a los ratones se les inyecto NaCl.

Se usaron 20 ratones para cada peptido o NaCl.

Los resultados se muestran en la figura 2.

Se ha aplicado un ensayo Log-rank (Mantel-Cox) y los resultados son los siguientes: NaCl vs P140 p = 0,0686, NaCl vs P140(MO) p = 0,0026, P140 vs P140 M(O) p = 0,2366.

La mediana de supervivencia de los ratones es: NaCl = 25 semanas, P140 = 29 semanas y P140(MO) > 40 semanas. Estos resultados demuestran la eficacia del peptido P140(MO) in vivo en el tratamiento de lupus, en ratones.

2.2- Analisis de proteinuria

Se midio la proteinuria de los ratones anteriores en orina recien recogida usando Albustix (Bayer Diagnostics) y se estimo semicuantitativamente de acuerdo con una escala de 0-4 recomendada por el fabricante (ausencia de proteinuria=0; trazas=1; 1+=2; 2+=3; 3+=4; 4+=5).

Los resultados se muestran en la figura 3.

En esta figura, se observa que la proteinuria es menos importante y aparece tarde en los ratones tratados con P140 M(O) en comparacion con los ratones no tratados.

2.3- Analisis de celularidad

En ratones MRL/lpr se inyectaron 100 pg/100 pl de P140 o P140(MO) y se estudio la celularidad (sangre periferica) 5 dias despues de esta inyeccion unica. El recuento incluye todos los leucocitos. Debido al bajo numero de ratones ensayados, se ha realizado un ensayo estadistico no parametrico Mann-Whitney).

Los resultados se muestran en la figura 4.

De esta manera, en un modelo murino agudo de lupus, el peptido de SEQ ID NO: 4 pudo reducir la hipercelularidad periferica y retrasar los signos biologicos y clinicos de la enfermedad con una eficacia al menos similar a la de P140, o mejor.

Ejemplo 3: afinidad de los peptidos para la protei'na HSC70.

Se uso un sistema BIAcore 3000 (Biacore AB) para evaluar la union de peptidos P140 a la proteina HSC70 (Page y col., 2009 y 2011). La microplaca de deteccion CM5, el tensioactivo P20, el kit de acoplamiento de amina que contenia N-hidroxisuccinimida (NHS) y N-etil-N’-dimetilaminopropilcarbodiimida (EDC), 2-(2-piridinilditio)etanoamina (PDEA) y etanolamina procedian de Biacore AB. Los ensayos en el biosensor se realizaron con tampon HBS-EP como tampon de procesamiento (HEPES 10 mM, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, tensioactivo P20 al 0,005 %, pH 7,4). Los compuestos se diluyeron en el tampon de procesamiento. La superficie de la microplaca del sensor se regenero despues de cada experimento inyectando 10 pl de HCl 10 mM. Se inmovilizo HSC70 recombinante bovino (Stressgen) en celdas de flujo de una microplaca sensora CM5 a traves de sus grupos tiol usando 35 pl de PDEA en

tampon borato 50 mM, pH 8,3 en la matriz activada por NHS/EDC. Despues, se inyectaron 35 pi de HSC70 (100 pg/ml en tampon formiato, pH 4,3) hasta que se inmovilizo una respuesta de 13.000 unidades de respuesta (UR) correspondientes a 13 ng/mm2 de HSC70. Se usaron 20 pi de una solucion de cisteina 50 mM/NaCi 1 M para saturar los sitios no ocupados en la microplaca. La medicion de la union directa de los peptidos P140 a HSC70 se 5 realizo a 25 °C con un caudal constante de 20 pl/min. El peptido P140 y sus analogos se inyectaron en el flujo a diferentes concentraciones durante 3 minutos, seguido de una fase de disociacion de 3 minutos. Los parametros cineticos se calcularon usando el software BIAeval 3.1 en un ordenador personal. El analisis se realizo usando el modelo de union Langmuir 1:1 sencillo. Los perfiles de union especifica se obtuvieron despues de restar la senal de respuesta del canal vacio de control y de la inyeccion con tampon de control. El ajuste a cada modelo se juzgo por el 10 valor x2 y la aleatoriedad de la distribucion de restos en comparacion con el modelo teorico.

Los resultados se muestran en las tablas 3 y 4, y en las figuras 5 y 6.

Estas tablas demuestran que la afinidad por HSC70 no es estadisticamente diferente entre los peptidos P140 y P140 M(O).

De esta manera, estos dos peptidos se unen con la misma eficacia a HSC70.

15

Tabla 3: P140 en HSC70

Chi2: 3,17

kobs(1/s): CO o 1 LU CM 00 co~ CO o 1 LU C\l io sr CO O i LU CO CD LO 8,74E-03 0,0144

Req(RU): 15,3 25,8 39,5 53,6 65,2

KD(M): to 1 LU CD CD CO 1 LU CD CD CO 1 LU CD CO" CO 1 LU CD CD CO 1 LU CD CD

KA(1/M): 1,44E+05 1.44E+05 1.44E+05 1.44E+05 1.44E+05

Cone, de analito: 1,56 u 3,12 u 6,25 u 12,5 u 25 u

Rl (RU): 12,1 CD o' CSI 33,8 62,5 118

Rmax(RU): CO CO 00

kd (1/s): CO o 1 LU CM T— CO~ CO O i LU CM T— co~ CO o 1 LU CM t— CO~ CO o 1 LU CM T— co~ CO o 1 LU CM t— co~

ka (1/Ms): 450

Peptido - concentracion: 3. CO IO 1 o TT £ CM co" i o £ 3. LO CM CD i O £ 3. LO cm" 1 o sj- £ 3. IO CM i O £

Tabla 4: P140(MO) en HSC70

Peptido - concentracion: ka(1/Ms) kd(1/s) Rmax (RU) RI(RU) Cone, de analito KA(1/M) KD(M) Req(RU) kobs (1/s) Chi2

: 1,15E+3 39 1,18

P140(MO)-1,56 pM: 2,20E-3 14 1,56 u 5.24E+5 1,91 E-6 17,6 4,00E-03

P140(MO)-3,12 pM: 2.20E-3 18,7 3,12 u 5.24E+5 1,91E-6 24,2 5,80E-03

P140(MO)-6,25 pM: 2,20E-3 25,9 6,25 u 5,24E+5 1,91E-6 29,9 9,40E-03

P140(MO)-12,5 pM: 2,20E-3 36,9 12,5 u 5.24E+5 1,91E-6 33,9 0,0166

P140(MO)-25 pM: 2,20E-3 53,4 25 u 5.24E+5 1,91E-6 36,3 0,031

5

10

15

20

25

30

35

40

<110> CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE IMMUPHARMA France SA MULLER, Sylviane BRIAND, Jean-Paul ZIMMER, Robert

<120> PEPTIDOS MODIFICADOS Y SU USO PARA TRATAR ENFERMEDADES AUTOINMUNITARIAS <130> IWB 11 CJ CNR P140 <160>6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1 <211>21 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> derivado de U1 snRNP 70 kDa <400> 1

Arg lie His Met Val Tyr Ser Lys Arg Ser Gly Lys Pro Arg Gly Tyr 15 10 15

Ala Phe lie Glu Tyr 20

<210>2 <211> 20 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> derivado de U1 snRNP 70 kDa <400> 2

lie His Met Val Tyr Ser Lys Arg Ser Gly Lys Pro Arg Gly Tyr Ala 15 10 15

Phe lie Glu Tyr 20

<210>3 <211> 437 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 3

Met Thr Gin Phe Leu Pro Pro Asn Leu Leu Ala Leu Phe Ala Pro Arg 15 10 15

Asp Pro lie Pro Tyr Leu Pro Pro Leu Glu Lys Leu Pro His Glu Lys 20 25 30

His His Asn Gin Pro Tyr Cys Gly lie Ala Pro Tyr lie Arg Glu Phe 35 40 45

Glu Asp Pro Arg Asp Ala Pro Pro Pro Thr Arg Ala Glu Thr Arg Glu 50 55 60

Glu Arg Met Glu Arg Lys Arg Arg Glu Lys lie Glu Arg Arg Gin Gin 65 70 75 80

Glu Val Glu Thr Glu Leu Lys Met Trp Asp Pro His Asn Asp Pro Asn 85 90 95

Ala Gin Gly Asp Ala Phe Lys Thr Leu Phe Val Ala Arg Val Asn Tyr 100 105 110

Asp Thr Thr Glu Ser Lys Leu Arg Arg Glu Phe Glu Val Tyr Gly Pro 115 120 125

He Lys Arg lie His Met Val Tyr Ser Lys Arg Ser Gly Lys Pro Arg 130 135 140

Gly Tyr Ala Phe lie Glu Tyr Glu His Glu Arg Asp Met His Ser Ala 145 150 155 160

Tyr Lys His Ala Asp Gly Lys Lys lie Asp Gly Arg Arg Val Leu Val 165 170 175

Asp Val Glu Arg Gly Arg Thr Val Lys Gly Trp Arg Pro Arg Arg Leu 180 185 190

Gly Gly Gly Leu Gly Gly Thr Arg Arg Gly Gly Ala Asp Val Asn lie 195 200 205

Arg His Ser Gly Arg Asp Asp Thr Ser Arg Tyr Asp Glu Arg Pro Gly 210 215 220

Pro Ser Pro Leu Pro His Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg Glu Arg Glu 225 230 235 240

Arg Arg Glu Arg Ser Arg Glu Arg Asp Lys Glu Arg Glu Arg Arg Arg 245 250 255

Ser Arg Ser Arg Asp Arg Arg Arg Arg Ser Arg Ser Arg Asp Lys 260 265 270

Glu

imagen7

<210>4 <211>21

5 <212> PRT

<213> Secuencia artificial

<220>

<223> derivado de U1 snRNP 70 kDa

10

<220>

<221 > MOD_RES <222> (4)..(4)

<223> OXIDACION 15

<220>

<221 > MOD_RES <222> (10)..(10)

<223> FOSFORILZACION

<400> 4

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Arg lie His Met Val Tyr Ser Lys Arg Ser Gly Lys Pro Arg Gly Tyr 15 10 15

Ala Phe lie Glu Tyr

20

<210>5 <211> 20 <212> PRT

<213> Secuencia artificial <220>

<223> derivado de U1 snRNP 70 kDa <220>

<221 > MOD_RES <222> (3)..(3)

<223> OXIDACION

<220>

<221 > MOD_RES <222> (9)..(9)

<223> FOSFORILZACION

<400> 5

lie His Met Val Tyr Ser Lys Arg Ser Gly Lys Pro Arg Gly Tyr Ala 15 10 15

Phe lie Glu Tyr 20

<210>6 <211> 66 <212> ADN

<213> Secuencia artificial <220>

<223> derivado de U1 snRNP 70 kDa <220>

<221 > misc_feature <222> (3)..(3)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (15)..(15)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (21)..(21)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (27)..(27)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (30)..(30)

5

10

15

20

25

30

<223> n es a, c, g o t <220>

<221 > misc_feature <222> (33)..(33)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (39)..(39)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (42)..(42)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (45)..(45)

<223> n es a, c, g o t

<220>

<221 > misc_feature <222> (51 )..(51)

<223> n es a, c, g o t

<400>6

mgnathcaya tggtntayws naarmgnwsn ggnaarccnm gnggntaygc nttyathgar 60

taytrr 66

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un peptido, o una sal del mismo, que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2 IHMVYSKRSGKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 2], que comprende una fosfoserina en la posicion 9 y una metionina oxidada en la posicion 3.

5 2. Un peptido, o sal del mismo, que comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1

RIHMVYSKRSGKPRGYAFIEY [SEQ ID NO: 1], que comprende una fosfoserina en la posicion 10 y una metionina oxidada en la posicion 4.
3. Una composicion que comprende un peptido de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, o ambas, y un farmaco que tiene un efecto inmunosupresor o un efecto inmunomodulador.

10 4. Una composicion farmaceutica que comprende un peptido de acuerdo con las reivindicaciones 1, 2, 3 o una

combinacion del mismo, que comprende ademas un vehiculo farmaceuticamente aceptable.
5. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 4, que esta en la forma de una gragea, comprimido, gelatina, capsula, gota, pildora, liposoma, nanoparticulas o en forma de una solucion.
6. Una composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 4 o 5 para su uso en el tratamiento de una 15 enfermedad autoinmunitaria.
7. La composicion farmaceutica para uso de acuerdo con la reivindicacion 6, en la que dicha enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en patologias autoinmunitarias de la familia de enfermedades del tejido conectivo (enfermedades sistemicas no especificas de organo), preferentemente lupus eritematoso sistemico (LES), artritis reumatoide, enfermedad mixta del tejido conectivo, sindrome de Sjogren, artritis juvenil

20 cronica; y patologias autoinmunitarias especificas de organo, preferentemente esclerosis multiple, diabetes dependiente de insulina, enfermedad de Crohn y enfermedades bulosas.
8. La composicion farmaceutica para su uso de acuerdo con la reivindicacion 6 o 7, en la que dicha enfermedad autoinmunitaria es lupus eritematoso sistemico (LES).