ES2589594T3

ES2589594T3 - Uso cosmético de proteínas de tipo quitinasa

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Publication number: ES2589594T3
Application number: ES07870302.2T
Authority: ES
Inventors: Dominique Bernard; Mark Donovan
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2006-11-20
Filing date: 2007-11-19
Publication date: 2016-11-15
Anticipated expiration: 2027-11-19
Also published as: WO2008068428A2; US20100056424A1; FR2908654A1; FR2908654B1; CN101600414B; EP2091509B1; EP2091509A2; WO2008068428A3; US9926587B2; CN101600414A

Abstract

Uso in vitro o ex vivo de por lo menos un polipéptido de secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de ácidos nucleicos elegida de entre SEC ID Nº 1, SEC ID Nº 2, o de por lo menos una secuencia de ácidos nucleicos codificante para dicho polipéptido como herramienta de caracterización de un estado de una epidermis, donde dicho estado por evaluar es elegido de entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

Description

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Uso cosmetico de protefnas de tipo quitinasa

[0001] La presente invencion se refiere a la caracterizacion de un estado de una epidermis elegido entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

[0002] Los epitelios son tejidos cuyas celulas estan unidas y son solidarias las unas de las otras y descansan sobre una membrana basal.

Forman un revestimiento o bien externo, por ejemplo en la superficie de la piel, o la epidermis, o bien interno, en la superficie de una mucosa.

Tambien pueden formar glandulas.

[0003] La epidermis es un epitelio, convencionalmente dividido en una capa basal de queratinocitos que contiene, particularmente, celulas madre cutaneas y que constituyen la capa germinativa de la epidermis, una capa llamada espinosa constituida por varias capas de celulas poliedricas dispuestas sobre la capa basal, una capa llamada granulosa que comprende de una a tres capas de dichas celulas planas que contienen inclusiones citoplasmicas distintas, los granulos de queratohialina, y finalmente, un conjunto de capas superiores, llamado capa cornea (o estrato corneo) constituida por queratinocitos en la fase terminal de su diferenciacion llamados corneocitos.

[0004] Los epitelios son estructuras cuya homeostasis resulta de la puesta en funcionamiento de un conjunto, cuidadosamente regulado, de senales intracelulares y extracelulares que actuan en todas las etapas de la proliferacion, de la migracion, de la diferenciacion celular, asf como de la sfntesis de diferentes componentes de la matriz extracelular.

[0005] Estas senales pueden, particularmente, resultar de la accion de factores producidos por queratinocitos.

[0006] El mantenimiento de las buenas funciones fisiologicas de un epitelio implica particularmente la diferenciacion epitelial terminal y/o la sfntesis de proteoglicanos.

[0007] En el caso de una epidermis, por ejemplo, la diferenciacion epidermica sigue un proceso de maduracion en el cual queratinocitos de la capa basal se diferencian y migran para dar lugar a la formacion de los corneocitos, celulas muertas totalmente queratinizadas.

[0008] Esta diferenciacion es la resultante de fenomenos perfectamente coordinados que llevan al mantenimiento de un grosor constante y aseguran asf la homeostasis de la epidermis.

[0009] Muchos trastornos o patologfas cutaneas pueden resultar de una disfuncion de la homeostasis del epitelio, y particularmente de la diferenciacion epitelial terminal de los queratinocitos y/o de la sfntesis de los proteoglicanos.

[0010] En el caso de una epidermis, estos trastornos pueden traducirse, por ejemplo, en diferentes danos de la piel madura, resultantes o bien de un envejecimiento de la epidermis debido al paso del tiempo (envejecimiento cronologico), o bien de un envejecimiento debido a las exposiciones a diferentes fenomenos exteriores, como una exposicion al sol (fotoenvejecimiento).

[0011] Tambien pueden traducirse en trastornos de la funcion de barrera de la piel contra los microorganismos, hiperqueratosis, xerosis (o sequedad cutanea), ictiosis, psoriasis, trastornos de descamacion, ciertas lesiones tumorales benignas o malignas o de afecciones de los folfculos pilosos.

[0012] Sin embargo, el desconocimiento de los mecanismos fisiologicos fntimos y del conjunto de las senales intracelulares y extracelulares implicados en la homeostasis de los epitelios, la diferenciacion terminal de los queratinocitos y la sfntesis de los proteoglicanos hace diffcil la preparacion de composiciones cosmeticas o terapeuticas que puedan ser utilizadas de forma eficaz en el tratamiento de los trastornos epiteliales, y particularmente cutaneos, citados anteriormente.

[0013] El polipeptido YKL-40 (donde YKL se refiere a la secuencia N-terminal del polipeptido maduro SEC ID N° 5), tambien conocido con el nombre de glucoprotefna del cartflago humano 39 (HC gp-39) es un polipeptido de 383 aminoacidos (SEC ID N° 4; P36222,
www.ncbi.nlm.nih.gov), aislado inicialmente a partir de cultivo de condrocitos articulares humanos, y cuya maduracion, por eliminacion de la secuencia senal formada por los 21 primeros aminoacidos (SEC ID N° 6), conduce a la liberacion extracelular del polipeptido identificado por la secuencia SEC ID N° 5 (Hakala y al., J. Biol. Chem., 1993,268:25803).

[0014] Ademas de su presencia en el nivel de los condrocitos articulares, esta protefna tambien ha sido detectada en otros tejidos u organos tales como los sinoviocitos, los neutrofilos, los macrofagos, el lfquido sinovial de pacientes de poliartritis reumatoide, el hfgado o la retina.

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[0015] Ademas, el documento WO2004/028479 divulga la deteccion de YKL-40 en tejidos danados con psoriasis. WO2004/041170 divulga la deteccion de YKL-40 en tejidos de mamfferos para el diagnostico de enfermedades autoinmunes.

US2002/0086008 divulga kits de diagnostico de una infeccion que comprenden YKL-40 o un anticuerpo anti-YKL-40.

[0016] La YKL-40 es una glucoprotefna que presenta un peso molecular aparente que varfa de 38 a 40 kDa segun la tecnica de medida utilizada.

[0017] Esta protefna (o polipeptido) se caracteriza por la presencia de numerosas similitudes de secuencias con quitinasas de orfgen bacteriano y/o fungico.

Sin embargo, no parece poseer ni actividad quitinolftica, ni actividad glucosidasa.

[0018] Ciertas funciones fisiologicas de la protefna YKL-40 son particularmente discutidas en los documentos siguientes: MALINDA et al., Exp. Cell Res., 1999,250:168; DE CeUnINCK et al., Biochem. Biofis. Res. Commun, 2001,285:926, RECKLIES et al., Biochem. J., 2002,365:119, REHLI et al., J. Biol. Chem., 2003,278:44058; SHACKELTON et al., J. Biol. Chem., 1995,270:13076.

[0019] Por otro lado, la solicitud WO 03/07545 propone composiciones de aplicacion topica que asocian a glucosaminoglucanos o a acido hialuronico la protefna HC-gp39 con el fin de mejorar el efecto beneficioso de los primeros compuestos sobre una piel afectada por el envejecimiento o por traumatismos, por ejemplo de naturaleza quirurgica.

[0020] En cuanto a la patente US 6,060,590, describe el uso de protefnas de tipo quitinasa para favorecer la cicatrizacion de tejido danado, y particularmente de la piel.

[0021] De manera inesperada, los inventores han constatado que la expresion de la protefna YKL-40 por los queratinocitos de diferentes zonas cutaneas de un individuo puede caracterizar el estado de una epidermis elegido entre el envejecimiento y el fotoenvejecimiento de dicha epidermis.

[0022] Segun uno de sus aspectos, la presente invencion se refiere al uso in vitro o ex vivo de al menos un polipeptido de secuencia de aminoacidos codificada por una secuencia de acidos nucleicos elegida entre SEC ID N° 1, SEC ID N° 2, o de por lo menos una secuencia de acidos nucleicos codificante para dicho polipeptido a tftulo de herramienta de caracterizacion de un estado de una epidermis, donde dicho estado por evaluar se elige de entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

[0023] Por signos cutaneos del envejecimiento se entiende cualquier modificacion del aspecto exterior de la piel debido al envejecimiento que sea cronobiologico y/o fotoinducido, como por ejemplo las lfneas de expresion y las arrugas, la piel marchita, la falta de elasticidad y/o de tono de la piel, el adelgazamiento de la dermis y/o el deterioro de las fibras de colageno, lo que comporta un aspecto de piel blanda y arrugada.

Tambien se entiende cualquier modificacion interna de la piel que no se traduzca sistematicamente en un aspecto exterior modificado, como por ejemplo todas las degradaciones internas de la piel, particularmente de las fibras de elastina, o fibras elasticas, consecutivas a una exposicion a los rayos ultravioleta.

[0024] Segun otro de sus aspectos, la presente invencion se refiere a un procedimiento de caracterizacion de un estado de una epidermis que comprende al menos las etapas que consisten en:

a) determinar, en una muestra de dicha epidermis, un contenido de polipeptido de secuencia de aminoacidos codificada por una secuencia de acidos nucleicos elegida de entre SEC ID N° 1, SEC ID N° 2, o una secuencia de acidos nucleicos codificante para dicho polipeptido, y

b) comparar dicho contenido determinado en la etapa a) con un dato de referencia, dicho estado por evaluar siendo elegido entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

Definicion del polipeptido

[0025] Un polipeptido conveniente para la invencion tiene una secuencia de aminoacidos representada totalmente o en parte por una secuencia elegida de entre SEC ID N° 4 o SEC ID N° 5.

[0026] En el sentido de la presente invencion, se pretende designar con YKL-40 de manera general, excepto si se indica lo contratrio, la forma pro-protefna (SEC ID N° 4) y la forma madura del polipeptido (SEC ID N° 5).

[0027] Por « secuencia caracterfstica del polipeptido », se pretende referirse en particular a YKL-40, la secuencia pro-protefna constituida por la secuencia SEC ID N° 4, la secuencia de la protefna madura identificada por SEC ID N° 5.

[0028] Segun una forma de realizacion, los polipeptidos identificados por las secuencias SEC ID N° 4 y SEC ID N° 5 se prefieren para la realizacion de la presente invencion.

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[0029] Un polipeptido conveniente igualmente para la realizacion de la presente invencion puede ser un polipeptido que ha sufrido una o varias modificacion(es) post-traduccional(es).

[0030] Con « modificacion(es) post-traduccional(es) », se pretende englobar el conjunto de las modificaciones que un peptido o una protefna es susceptible de sufrir a la salida de su sfntesis en el interior de una celula, tal como, por ejemplo, una o varias fosforilacion(es), una o varias glicosilacion(es), una o varias lipidacion(es), tal como una farnesilacion o una palmitoilacion, una reordenacion estructural de tipo formacion de puentes disulfuro y/o de tipo division dentro de la secuencia peptfdica.

[0031] Segun una forma de realizacion, un polipeptido conveniente para la realizacion de la invencion tambien puede ser un polipeptido natural o sintetico, en su caso que puede ser obtenido despues de lisis enzimatica o qufmica de YKL-40 o por sfntesis qufmica o biologica o por extraccion de un tejido biologico, como por ejemplo la piel, que exprese de forma natural o despues de la transduccion de este polipeptido, asf como las diferentes formas post- traduccionales de este, o incluso cualquier polipeptido natural o sintetico cuya secuencia comprende totalmente o parcialmente (en todo o parte) una secuencia de aminoacidos anteriormente mencionada, por ejemplo las variantes y los analogos.

[0032] El experto en la tecnica puede obtener un polipeptido conveniente para la invencion mediante procedimientos basados en ADN recombinante, como por ejemplo los descritos en el manual «Molecular Cloning - A Laboratory Manual » (2a edicion), Sambrook et al., 1989, Vol.

I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook).

Definicion de las secuencias acidas nucleicas

[0033] Segun una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a la aplicacion de secuencias de acidos nucleicos codificantes para un polipeptido conveniente para la invencion en los diferentes utilizaciones y procedimientos que convienen a la invencion.

[0034] Una secuencia de acidos nucleicos conveniente para la invencion se puede elegir de entre SEC ID N° 1, SEC ID N° 2, o una secuencia de acidos nucleicos que codifica para un polipeptido conveniente para la invencion.

[0035] Las secuencias de acidos nucleicos pueden proceder de cualquier orfgen posible, ya sea animal, en particular de mamfferos e incluso mas en particular de humanos, ya sea vegetal, de microorganismos (virus, fagos, bacterias entre otros) o incluso de hongos, sin prejuzgar el hecho de que esten presentes de manera natural o no en dicho organismo de orfgen.

[0036] De este modo, la presente invencion se refiere igualmente al uso de secuencias de acidos nucleicos, particularmente de acidos desoxirribonucleicos, o de acidos ribonucleicos codificantes para un polipeptido conveniente para la invencion.

[0037] Las secuencias de acidos nucleicos segun la invencion pueden particularmente ser utilizadas para preparar secuencias de acidos ribonucleicos correspondientes sentido o antisentido.

[0038] Se puede efectuar un procedimiento sobre una muestra celular, obtenida o bien de una biopsia cutanea o bien a partir de celulas en cultivo.

[0039] Ventajosamente, a tftulo de muestra celular, se pueden mencionar los queratinocitos.

[0040] Ventajosamente, un polipeptido utilizado en un procedimiento segun la presente invencion puede ser la protefna YKL-40.

[0041] La expresion de una secuencia de acido nucleico puede ser determinada, por ejemplo, mediante sondas oligonucleotidas, mediante cualquier protocolo conocido por el experto en la tecnica.

[0042] Como ejemplo de metodos de deteccion de secuencia de acidos nucleicos, se puede hacer mencion a la reaccion de polimerizacion en cadena (PCR), la reaccion de polimerizacion en cadena transcriptasa inversa (RT- PCR o Q-PCR), el Northern blot, el metodo del ensayo de proteccion a la ribonucleasa, los metodos con chips de ADN, los metodos con chips transcriptomicos, los metodos con chips de oligonucleotidos, los metodos de hibridacion in situ.

[0043] Como ejemplo de agentes convenientes para la deteccion de una secuencia de acidos nucleicos, y en particular de ARNm, se puede hacer mencion a la sonda de acidos nucleicos marcada que se puede hibridar a dicha secuencia.

[0044] Tal sonda de acido nucleico puede ser facilmente obtenida por cualquier metodo conocido por el experto en la tecnica.

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[0045] Asf, las secuencias de acidos nucleicos conformes a la invencion pueden ser utilizadas para realizar cebadores oligonucleotidos sentido y/o antisentido, que se hibridan en condiciones de fuerte astringencia a la secuencia SEC ID N°: 1, SEC ID N°: 2, o una analoga a esta.

[0046] La expresion de una secuencia de acido nucleico conforme a la invencion se puede comparar a un valor de referencia obtenido, por ejemplo, efectuando un procedimiento conforme a la invencion en ausencia del compuesto por testar.

[0047] La determinacion de un contenido de polipeptido conforme a la invencion se puede efectuar mediante cualquier metodo conocido por el experto en la tecnica.

[0048] En calidad de metodos de deteccion de un polipeptido, se puede hacer mencion al Western blot, el Slot blot, el Dot blot, las tecnicas ELISA (Enzima Linked Immuno-Sorbent Assay o ensayo por inmunoadsorcion ligado a enzimas) de tipo singleplex o multiplex, los metodos de proteomicas o de glucomicas, de coloracion de polipeptidos en un gel de poliacrilamida por un colorante a base de plata, por azul de Coomassie o por SYPRO, la immunofluorescencia, la absorcion UV, los metodos inmunohistoqufmicos en microscopfa tradicional, electronica o confocal, los metodos de FRET (fluorescence resonance energy transfer/ transferencia de energfa por resonancia de fluorescencia), los metodos de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en tiempo resuelto), los metodos de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagen por microscopfa de tiempo de fluorescencia), los metodos de FSPIM (fluorescence espectral imaging microscopy/imagen por microscopfa en espectro de fluorescencia), los metodos de FRAP (fluorescencia recovery after photobleaching/recuperacion de fluorescencia posterior al foto- blanqueamiento), los metodos por gen reportero, los metodos AFM (atomic force microscopy/microscopfa de fuerza atomica), los metodos de resonancia de plasmones de superficie, los metodos de microcalorimetrfa, los metodos de citometrfa en flujo, los metodos de biosensores, los metodos de radioimmunoensayos (RIA), los metodos de isoelectroenfoque, y las pruebas enzimaticas, los metodos que utilizan chips de peptidos, los chips de azucar, los chips de anticuerpos, los metodos de espectrometrfa de masas, los metodos de espectrometrfa de tipo SELDI-TOF (Ciphergen).

[0049] Un procedimiento conforme a la invencion se puede efectuar sobre una muestra de epidermis, obtenida a partir de una biopsia cutanea o de un modelo celular epitelial, por ejemplo epidermico o de una toma de superficie particularmente mediante adhesivo (stripping) de estrato corneo.

[0050] Un estado de una epidermis puede ser un estado ligado a una disfuncion de la diferenciacion epitelial terminal, en particular epidermica, particularmente de los queratinocitos, y/o de un defecto de sfntesis de los proteoglicanos y/o de una alteracion de las defensas epiteliales, y particularmente cutaneas, contra microorganismos.

[0051] Un tal estado puede ser de origen cronologico (es decir, relacionado con el tiempo transcurrido como el envejecimiento cutaneo) y/o indicativo de un trastorno cutaneo, relacionado por ejemplo con el fotoenvejecimiento.

[0052] Segun un aspecto, la presente invencion se refiere al uso in vitro o ex vivo de una secuencia de aminoacidos codificada por una secuencia de acidos nucleicos elegida de entre SEC ID N° 1, SEC ID N° 2, o de al menos una secuencia de acidos nucleicos codificante para dicho polipeptido a tftulo de herramienta de caracterizacion de una epidermis, donde dicho estado por evaluar se elige de entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

[0053] Segun una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un procedimiento de caracterizacion de un estado de una epidermis que comprende al menos las etapas que consisten en:

a) determinar, en una muestra de dicha epidermis, un contenido de polipeptido de secuencia de aminoacidos codificada por una secuencia de acidos nucleicos elegida de entre sEc ID N° 1, SEC ID N° 2, o de una secuencia de acidos nucleicos codificante para dicho peptido, y

b) comparar dicho contenido determinado en la etapa a) con un valor de referencia, donde dicho estado por evaluar se elige de entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

[0054] Un procedimiento segun la invencion se puede realizar sobre una muestra de epidermis, tomada de un modelo celular epitelial, y particularmente epidermico, o de una piel aislada reconstruida con el fin de calificar su estado.

[0055] La toma de una muestra de epidermis puede hacerse mediante cualquier metodo conocido por el experto en la tecnica.

[0056] Un procedimiento segun la invencion se puede efectuar in vitro o ex vivo.

[0057] Un valor de referencia puede ser, por ejemplo, un contenido de polipeptido o de secuencia de acidos nucleicos determinado sobre una muestra de epidermis tomada sobre un epitelio, y particularmente una piel normal, es decir satisfactoria en el plano fisiologico a imagen por ejemplo de una piel joven.

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[0058] La medida de un valor de referenda se puede efectuar paralelamente o secuencialmente a la determinacion de dicho contenido de un polipeptido o de una secuencia de acidos nucleicos.

[0059] Una comparacion de un contenido determinado con un valor de referencia puede permitir evaluar una desviacion con respecto a dicho valor.

[0060] El analisis de la intensidad y/o de la naturaleza de esta desviacion (negativa o positiva) puede ser informativa del estado de la epidermis.

[0061] La caracterizacion de un estado de una epidermis puede ser indicativa de un eventual trastorno cutaneo.

[0062] Segun una forma de realizacion, un procedimiento segun la invencion se puede utilizar en un procedimiento de diagnostico in vitro o ex vivo de un supuesto trastorno de una epidermis en un individuo, elegido de entre el envejecimiento y el fotoenvejecimiento.

[0063] Un polipeptido conveniente para la puesta en practica de un procedimiento segun la invencion puede ser ventajosamente la protefna YKL-40.

[0064] La determinacion de un contenido en polipeptido conforme a la invencion o en acidos nucleicos conforme a la invencion en una muestra de epidermis se puede efectuar mediante cualquier protocolo conocido por el experto en la tecnica.

[0065] En calidad de metodos de deteccion de un polipeptido, se puede hacer mencion a los citados previamente.

[0066] De este modo, se puede considerar la deteccion de la presencia de un polipeptido conforme a la invencion a traves de un anticuerpo, en su caso bajo una forma marcada.

[0067] Un anticuerpo susceptible de ser utilizado como herramienta de evaluacion de un estado de una epidermis puede ser obtenido mediante cualquier procedimiento conocido por el experto en la tecnica, tal y como se describe en « Antibodies: A Laboraory Manual », Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990).

[0068] Una secuencia de acido nucleico conveniente para la puesta en practica de un procedimiento segun la invencion puede ser ventajosamente una secuencia de acidos nucleicos codificante para YKL-40, por ejemplo de tipo ARNm.

[0069] Como ejemplo de metodos de deteccion de acidos nucleicos conforme a la invencion, se puede hacer mencion a los metodos citados previamente.

[0070] En el sentido de la presente invencion, « un » debe entenderse, excepto si se indica lo contrario, en el sentido de « al menos un ».

[0071] Los ejemplos que se enumeran a continuacion se presentan a tftulo ilustrativo y no limitativo de la invencion. Ejemplo I

Analisis por ELISA de muestras tomadas por adhesivo stripping sobre diferentes zonas cutaneas de un individuo

[0072] Los analisis se realizan a partir de adhesivos stripping efectuados sobre diferentes zonas cutaneas de un individuo: pierna, brazo, frente, palma y dorso de la mano.

[0073] Se utilizan cuadrados de 3X3 cm de nylon.

[0074] Los polvos acetonicos (PA) se extraen en el tampon PBS+0,1 % triton X-100 en una proporcion de 100 pl/mg de PA en un potter.

[0075] Despues de la centrifugacion, los sobrenadantes son recogidos.

[0076] Las protefnas se dosifican segun el metodo de Bradford con el reactivo Bradford de Bio-Rad.

La dosificacion del YKL-40 se realiza con el kit Metra YKL40 Elisa kit (Quidel) a partir de 20 pl de cada extracto.

[0077] Las pruebas se realizan por duplicado.

[0078] Cada resultado se relaciona con los indices de protefnas.

[0079] La presencia de YKL40 se detecta y se cuantifica facilmente en todas las zonas cutaneas analizadas.

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Ejemplo II

Inmunohistoqufmica

[0080] La seccion de folfculo piloso es de 5 pm.

[0081] El anticuerpo primario es un anticuerpo policlonal de conejo obtenido de Osteomedical [Ref 4815] y utilizado al 1:25.

[0082] El anticuerpo secundario es un anticuerpo anti-Ig de conejo desarrollado en cabra y acoplado a la biotina, obtenido de Dako y utilizado al 1:500.

[0083] Al final se realizan una amplificacion por estreptavidina y una revelacion por 3-amino-9-etil carbazol (AEC).

[0084] Se observa una fuerte concentracion de protefna YKL-40 en la base del folfculo.

Listas de secuencias

[0085]

SEC ID N° 1

1: atgggtgtga

61: gcatacaaac

121: tgcttcccag

181: ataagcaacg

241: aacacactca

301: tttgggtctc

361: aagtcagtac

421: taccctggac

481: tttataaagg

541: gggaaggtca

601: attagcatca

661: cccctgttcc

721: gtggggtaca

781: ttcgggagga

841: ccgggaattc

901: gacttcctcc

961: ^.agggcaacc

1021: ctgaaggata

1081: ggctccttct

1141: gctgcaacgt

aggcgtctca aacaggettt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct tggtctgcta ctacaccagc tggtcccagt accgggaagg cgatgggagc atgcccttga ccgcttcctc tgtacccaca tcatctacag ctttgccaat atcacaccga cacctgggag tggaacgatg tgacgctcta cggcatgctc agaacaggaa ccccaacctg aagactctct tgtctgtcgg aggatggaac aaagattttc caagatagcc tccaacaccc agagtcgccg gactttcatc cgccattcct gcgcacccat ggctttgatg ggctggacct tgcctggetc ggagagacaa acagcatttt accaccctaa tcaaggaaat gaaggccgaa aagcccagcc agggaaaaag cagctcctgc tcagcgcagc actgtctgcg ccattgacag cagctatgac attgccaaga tatcccaaca cctggatttc tgacctacga ttttcacgga gcctggcgtg ggaccacagg ccatcacagt gaggtcagga ggatgcaagt cctgacagat tcagcaacac tgactatgct tgctgaggct gggggctcct gccagtaagc tggtgatggg catccccacc gcctcactct ggcttcttct gagactggtg ttggagcccc aatctcagga caggccggtt caccaaggag gcagggaccc ttgcctacta tgagatctgt gcggagccac agtccataga accctcggcc agcaggtccc ctatgccacc agtgggtagg atacgacgac caggaaagcg tcaaaagcaa ggtgcagtac ggcagctggc aggcgccatg gtatgggccc tggacctgga tgacttccag gcggccagga tctgcgcctc cctctcacca atgccaccaa ggatgcactc ag

SEC ID N° 2

1

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121

181

241

301

351

421

4S1

541

601

661

721

781

841

901

961

1021

1081

tacaaactgg tctgctacta caccagctgg tcccagtacc gggaaggcga ttcccagatg cccttgaccg cttcctctgt acccacatca tctacagctt agcaacgatc acatcgacac ctgggagtgg aatgatgtga cgctctacgg acactcaaga acaggaaccc caacctgaag actctcttgt ctgtcggagg gggtctcaaa gattttccaa gatagcctcc aacacccaga gtcgccggac tcagtaccgc cattcctgcg cacccatggc tttgatgggc tggaccttgc cctggacgga gagacaaaca gcattttacc accctaatca aggaaatgaa ataaaggaag cccagccagg gaaaaagcag ctcctgctca gcgcagcact aaggtcacca ttgacagcag ctatga.catt gccaagatat cccaacacct agcatcatga cctacgattt tcatggagcc tggcgtggga ccacaggcca ctgttccgag gtcaggagga tgcaagtcct gacagattca gcaacactga gggtacatgt tgaggctggg ggctcctgcc agtaagctgg tgatgggcat gggaggagct tcactctggc ttcttctgag actggtgttg gagccccaat ggaattccag gccggttcac caaggaggca gggacccttg cctactatga ttcctccgcg gagccacagt ccatagaacc ctcggccagc aggtccccta ggcaaccagt gggtaggata cgacga.ccag gaaagcgtca aaagca;aggt aaggataggc agctggcagg cgccatggta tgggccctgg acctggatga tccttctgcg gccaggatct gcgcttccct ctcaccaatg ccatcaagga gcaacgtag

tgggagctgc

tgccaatata

catgctcaac

atggaacttt

tttcatcaag

ctggctctac

ggccgaattt

gtctgcgggg

ggatttcatt

tcacagtccc

ctabgctgtg

ccccacctcc

ctcaggaccg

gatctgtgac

tgccaccaag

gcagtacctg

cttccagggc

fcgcactcgct

SEC ID N° 3

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30

35

1 atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct

61 gca

SEC ID N° 4

1 mgvkasqtgf wlvllqccs

61 isndhidtwe wridvtlygml

121: ksvppflrth gfdgldlawl

181: gkvtidssyd iakisqhldf

241: vgymlrlgap asklvmgipt

301: dflrgatvhr tlgqqvpyat

361: gsfcgqdlrf pltnaikdal

SEC ID N° 5

1: yklvcyytsw sqyregdgsc

61: tlknrnpnlk tllsvggwnf

121: pgrrdkqhft tlikemkaef

181: simtydfliga wrgttghhsp

241: graftlasse tgvgapisgp

301: gnqwvgyddq e6vkskvqyl

361: at

SEC ID N° 6

1 mgvkasqtgf wlvllqccs a LISTADO DE SECUENCIAS

[0086]

<110> L'OREAL

ayklvcyyts wsqyregdgs cfpdaldrfl cthiiysfan ntlknrnpnl ktllsvggwn fgsqrfskia sntqsrrtfi

ypgrrdkgtif ttlikemkae fikeaqpgkk qlllsaalsa isimtydfhg awrgttghhs plfrgqedas pdrfsntdya fgrsftlass etgvgapisg pgipgrftke agtlayyeic kgnqwvgydd qesvkskvqy lkdrqlagam vwaldlddfq

aat

fpdaldrflc csqrfskias ikoaqpgkkq lfrgqedasp gipgrftkea kdrqlagamv

thiiysfani ntqsrrtfik 11lsaalsag drfsncdyav gtlayyeicd waldlddfqg

sndhidtwew svppflrthg kvtidssydi gymlrlgapa flrgacvhrt sfcgqdlrfp

ndvtlygmln fdgldlawly akisqhldfi sklvmgiptf lgqqvpyatk ltnaikdala

<120> uso cosmetico de protefnas de tipo quitinasa <130> BR79971/CR/HG/klp <140> 06 54986 <141> 2006-11-20

<160>6

<170> version de PatentIn 3.1

<210> 1 <211> 1152 <212> DNA <213> Homo Sapiens

<400> 1

atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gcatacaaac tggtctgcta ctacaccagc tgcttcccag atgcccttga ccgcttcctc ataagcaacg atcacatcga cacctgggag aacacactca agaacaggaa ccccaacctg tttgggtctc aaagattttc caagatagcc aagtcagtac cgccattcct gcgcacccat taccctggac ggagagacaa acagcatttt tttataaagg aagcccagcc agggaaaaag gggaaggtca ccattgacag cagctatgac attagcatca tgacctacga ttttcatgga cccctgttcc gaggtcagga ggatgcaagt gtggggtaca tgttgaggct gggggctcct ttcgggagga gcttcactct ggcttcttct

gtggtcctgg: tgctgctcca gtgctgctct 60

tggtcccagt: accgggaagg cgatgggagc 120

tgtacccaca: tcatctacag ctttgccaat 180

tggaatgatg: tgacgctcta cggcatgctc 240

aagactctct: tgtctgtcgg aggatggaac 300

tccaacaccc: agagtcgccg gactttcatc 360

ggctttgatg: ggctggacct tgcctggctc 420

accaccctaa: tcaaggaaat gaaggccgaa 480

cagctcctgc: tcagcgcagc actgtctgcg 540

attgccaaga: tatcccaaca cctggatttc 600

gcctggcgtg: ggaccacagg ccatcacagt 660

cctgacagat: tcagcaacac tgactatgct 720

gccagtaagc: tggtgatggg catccccacc 780

gagactggtg: ttggagcccc aatctcagga 840

ccgggaattc caggccggtt caccaaggag gcagggaccc ttgcctacta tgagatctgt 900 gacttcctcc gcggagccac agtccataga accctcggcc agcaggtccc ctatgccacc 960 aagggcaacc agtgggtagg atacgacgac caggaaagcg tcaaaagcaa ggtgcagtac 1020 ctgaaggata ggcagctggc aggcgccatg gtatgggccc tggacctgga tgacttccag 1080 ggctccttct gcggccagga tctgcgcttc cctctcacca atgccatcaa ggatgcactc 1140 gctgcaacgt ag 1152

<210>2 <211>1089 5 <212> ADN

<213> Homo Sapiens

<400>2

5

10

tacaaactgg tctgctacta caccagctgg tcccagtacc gggaaggcga tgggagctgc 60

ttcccagatg cccttgaccg cttcctctgt acccacatca tctacagctt tgccaatata 120

agcaacgatc acatcgacac ctgggagtgg aatgatgtga cgctctacgg catgctcaac 180

acactcaaga acaggaaccc caacctgaag actctcttgt ctgtcggagg atggaacttt 240

gggtctcaaa gattttccaa gatagcctcc aacacccaga gtcgccggac tttcatcaag 300

tcagtaccgc cattcctgcg cacccatggc tttgatgggc tggaccttgc ctggctctac 360

cctggacgga gagacaaaca gcattttacc accctaatca aggaaatgaa ggccgaattt 420

ataaaggaag cccagccagg gaaaaagcag ctcctgctca gcgcagcact gtctgcgggg 480

aaggtcacca ttgacagcag ctatgacatt gccaagatat cccaacacct ggatttcatt 540

agcatcatga cctacgattt tcatggagcc tggcgtggga ccacaggcca tcacagtccc 600

ctgttccgag gtcaggagga tgcaagtcct gacagattca gcaacactga ctatgctgtg 660

gggtacatgt tgaggctggg ggctcctgcc agtaagctgg tgatgggcat ccccaccttc 720

gggaggagct tcactctggc ttcttctgag actggtgttg gagccccaat ctcaggaccg 780

ggaattccag gccggttcac caaggaggca gggacccttg cctactatga gatctgtgac 840

ttcctccgcg gagccacagt ccatagaacc ctcggccagc aggtccccta tgccaccaag 900

ggcaaccagt gggtaggata cgacgaccag gaaagcgtca aaagcaaggt gcagtacctg 960

aaggataggc agctggcagg cgccatggta tgggccctgg acctggatga cttccagggc 1020

tccttctgcg gccaggatct gcgcttccct ctcaccaatg ccatcaagga tgcactcgct 1080

gcaacgtag 1089

<210>3 <211> 63 <212> ADN <213> Homo Sapiens

<400>3

atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct 60 gca 63

<210>4 <211> 383 <212> PRT <213> Homo Sapiens

<400> 4

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso in vitro o ex vivo de por lo menos un polipeptido de secuencia de aminoacidos codificada por una secuencia de acidos nucleicos elegida de entre SEC ID N° 1, SEC ID N° 2, o de por lo menos una secuencia de acidos

5 nucleicos codificante para dicho polipeptido como herramienta de caracterizacion de un estado de una epidermis, donde dicho estado por evaluar es elegido de entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.
2. Procedimiento in vitro o ex vivo de caracterizacion de un estado de una epidermis que comprende al menos las etapas que consisten en:

10 a) determinar, en una muestra de dicha epidermis, un contenido de polipeptido de secuencia de aminoacidos

codificada por una secuencia de acidos nucleicos elegida de entre SEC ID N° 1, SEC ID N° 2, o una secuencia de acidos nucleicos codificante para dicho polipeptido, y

b) comparar dicho contenido determinado en la etapa a) con un valor de referencia, donde dicho estado por evaluar es elegido de entre el envejecimiento o el fotoenvejecimiento.

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