CN101600414B

CN101600414B - 几丁质酶型蛋白质的美容用途

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Publication number: CN101600414B
Application number: CN200780047841.6A
Authority: CN
Inventors: D·伯纳德; M·多诺万
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2006-11-20
Filing date: 2007-11-19
Publication date: 2017-06-16
Anticipated expiration: 2027-11-19
Also published as: ES2589594T3; WO2008068428A2; US20100056424A1; FR2908654A1; FR2908654B1; EP2091509B1; EP2091509A2; WO2008068428A3; US9926587B2; CN101600414A

Abstract

本发明涉及属于几丁质酶型蛋白质家族的YKL‑40蛋白、衍生自该蛋白的多肽或其类似物、编码此类多肽的核酸序列、或者调节此类多肽的活性或表达的试剂的用途，尤其是美容和/或治疗用途，所述用途尤其是用于刺激终末上皮分化。

Description

几丁质酶型蛋白质的美容用途

本发明涉及属于几丁质酶型蛋白质家族的YKL-40蛋白或衍生自该蛋白的多肽或其类似物、编码此类多肽的核酸序列、或者调节此类多肽的活性或表达的试剂的用途，尤其是美容和/或治疗用途，所述用途尤其是用于刺激终末上皮分化(différenciation épithélialeterminale)。

上皮是其细胞彼此拼接和联结并位于基底膜之上的组织。它们形成外部覆盖层，例如在皮肤或表皮的表面上，或者内部覆盖层，例如在粘膜的表面上。它们还可以形成腺体。

表皮是一种上皮组织，常规地分为下列部分：包含尤其是皮肤干细胞并构成表皮生发层的角质形成细胞基底层；由数层排列在基底层上的多角细胞构成的棘层；包含一至三层含有明显细胞质内含物(角质透明蛋白颗粒)的所谓扁平细胞的颗粒层；和最后，称为角化层(或角质层)的全体上层，所述角化层由在其分化的终末阶段被称为角质细胞(cornéocyte)的角质形成细胞构成。

上皮是这样的结构，所述结构的内环境稳定起因于受精细调控的所有细胞内和细胞外信号的作用，所述细胞内和细胞外信号在下列的所有阶段中起作用：细胞增殖、迁移、分化，以及细胞外基质各种组分的合成。

这些信号可以尤其是起因于由角质形成细胞所产生的因子的作用。

上皮的良好生理学功能的维持尤其牵涉终末上皮分化和/或蛋白聚糖的合成。

例如，在表皮的情况下，表皮的分化跟随在成熟过程之后，在所述成熟过程中基底层的角质形成细胞进行分化并迁移从而导致形成完全角质化的死细胞即角质细胞。

所述分化是极好地受协调的现象的结果，其导致维持恒定的厚度并因此确保表皮的内环境稳定。

皮肤的许多病症或病理学状态可以起因于表皮的内环境稳定的功能障碍，尤其是角质形成细胞的终末上皮分化和/或蛋白聚糖的合成的功能障碍。

在表皮的情况下，此类病症可以表现为例如年老的皮肤的各种损害，这或者起因于随着时间流逝而造成的表皮的衰老(时序性衰老(vieillissement chronologique))，或者起因于由于暴露于各种外部现象，例如暴露于阳光(光衰老)而造成的衰老。

它们还可以表现为皮肤针对微生物的屏障功能的紊乱、角化过度、干燥病(或皮肤干燥)、鱼鳞病、银屑病、脱屑病症、某些良性或恶性肿瘤损伤、或者毛囊的病患。

然而，对于内在的生理学机制以及在上皮的内环境稳定、角质形成细胞的终末分化和蛋白聚糖的合成中所牵涉的全体细胞内和细胞外信号的不了解使得制备美容或治疗组合物变得困难，所述组合物可能被有效地用于治疗前述的上皮病症，尤其是皮肤病症。

因此，存在这样的需要，即拥有使得能够特异性地调节角质形成细胞的终末分化的新型化合物。

还存在这样的需要，即拥有使得能够在上皮，尤其是表皮水平上特异性地调节蛋白聚糖的合成的新型化合物。

还存在这样的需要，即拥有新的美容和/或治疗靶标，所述靶标的调节可以允许调控上皮，尤其是表皮的内环境稳定。

还存在这样的需要，即拥有能够被用于增强皮肤防御这样的目的的新型化合物。

还存在这样的需要，即拥有能够用于制备美容和/或治疗组合物这样的目的的新型化合物，所述组合物用于治疗和/或预防前述的皮肤病症。

本发明的目标在于满足这些需要。

更具体地，本发明起因于本发明人首次在表皮的角质层水平上，以及在毛囊水平上鉴定了YKL-40多肽的存在。

YKL-40多肽(YKL是指成熟多肽SEQ ID NO 5的N-末端序列)也称为人软骨糖蛋白39(HC gp-39)，其是一种具有383个氨基酸的多肽(SEQ ID NO 4；P36222，www.ncbi.nlm.nih.gov)，最初分离自人关节软骨细胞的培养物，并且通过去除由前21个氨基酸所形成的信号序列(SEQ ID NO 6)而进行的其成熟导致由序列SEQ ID NO 5所确定的多肽的细胞外释放(Hakala等人，J.Biol.Chem.，1993，268：25803)。

除了其在关节软骨细胞水平上的存在之外，还在其他组织或器官例如滑膜细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、患有类风湿性多关节炎的患者的滑液、肝脏或视网膜中检测到该蛋白质。但是直到目前，还从未在表皮或毛囊中检测到该蛋白质。

根据所使用的测量技术，其是具有38至40kDa的表观分子量的糖蛋白。

该蛋白质(或多肽)的特征为与细菌和/或真菌来源的几丁质酶具有许多序列相似性。然而，它看起来既不具有几丁质分解活性，也不具有糖苷酶活性。

YKL-40蛋白的某些生理学功能尤其在下列文献中进行了讨论：MALINDA等人，Exp.Cell Res.，1999，250：168；DE CEUNINCK等人，Biochem.Biophys.Res.Commun，2001，285：926；RECKLIES等人，Biochem.J.，2002，365：119；REHLI等人，J.Biol.Chem.，2003，278：44058；SHACKELTON等人，J.Biol.Chem.，1995，270：13076。

关于它的一部分，申请WO 03/07545提出了用于局部应用的组合物，其将HC-gp39蛋白与糖胺聚糖或透明质酸相联合，以便改善原始化合物对于受到衰老或创伤(例如，外科手术性质的创伤)影响的皮肤的有益效应。

关于专利US 6,060,590，它描述了几丁质酶型蛋白质用于促进受损伤的组织，尤其是皮肤的瘢痕形成的用途。

出人意料地，此后，本发明人表征了在个体的不同皮肤区域中以及在毛囊水平上角质形成细胞的YKL-40蛋白表达。

因此，根据一个方面，本发明的目标在于，有效量的至少一种衍生自YKL-40蛋白的多肽、至少一种编码此类多肽的核酸序列、或者至少一种调节此类多肽的活性或表达和/或其从上皮的蛋白聚糖基质中释放的试剂，作为可用于刺激终末上皮分化(尤其是表皮类型的)和/或刺激蛋白聚糖的上皮(尤其是表皮)合成的试剂的美容或非治疗用途，所述多肽的氨基酸序列尤其由完全或部分地由选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3的序列，其类似物，或其片段所呈现的核酸序列编码。

根据另一个方面，本发明的目标还在于，有效量的至少一种衍生自YKL-40蛋白的多肽、至少一种编码此类多肽的核酸序列、或者至少一种调节此类多肽的活性或表达和/或其从上皮的蛋白聚糖基质中释放的试剂在制备用于刺激终末上皮(特别是表皮)分化、蛋白聚糖的上皮(尤其是表皮)合成、针对微生物的上皮(尤其是皮肤)防御的治疗组合物中的用途，所述多肽的氨基酸序列尤其由完全或部分地由选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ IDNO 3的序列，其类似物，或其片段所呈现的核酸序列编码。

特别地，根据本发明所考虑的组合物可以用于刺激角质形成细胞的终末分化。

特别地，根据本发明所考虑的组合物没有糖胺聚糖和/或透明质酸。

在本发明的范围内，“有效量”这一表述意指对于观察到所期望的效果，即美容效果或治疗效果而言所必需的最小量，应当理解对于获得美容效果或治疗效果而言所必需的有效量可以，在需要时，是相同的或不同的。在本发明的范围内，“美容用途”意指主要用于获得美学效果的用途。

更具体地，在本发明的范围内，“美容组合物”，根据EuropeanDirective76768EEC，意指这样的组合物，其用于与角蛋白材料例如皮肤、粘膜、指(趾)甲、毛发和头发***相接触，以便清洁它们、修饰它们的外观、和/或保护它们和/或维持它们处于良好的状态。

在本发明的范围内，“治疗组合物”意指用于获得对于上皮(尤其是表皮)病症的预防性或治疗性效果的组合物，所述病症被认为反映了病理学状态。

在本发明的范围内，“预防”意指减少现象例如病理学状态突然出现的风险。

根据本发明的组合物可以特别是用于预防和/或治疗表皮变薄，和/或表皮的紧实度(fermeté)、弹性、密度和/或张力的丧失，和/或皮肤衰老的征候(signe)例如皱纹和细小皱纹。

“衰老的皮肤征候”意指由于衰老(其为时序性的和/或光诱导的)所导致的皮肤外观的所有改变，例如皱纹和细小皱纹，干瘪的皮肤，皮肤弹性和/或张度的缺乏，真皮变薄，和/或胶原纤维降解，其导致松弛和有皱纹的皮肤外表。该术语还意指皮肤的并不***地表现为经改变的外观的所有内部改变，例如皮肤的所有内部降解，特别是由于暴露于紫外线辐射而引起的弹性蛋白纤维或弹性纤维的降解。

根据另一个实施方案，根据本发明的组合物可以尤其是用于预防和/或治疗皮肤干燥征候(signes cutanés de sécheresse)，特别是预防和/或治疗表皮脱水。

根据本发明的组合物可以特别是用于预防和/或治疗表皮或嘴唇或头皮的时序性衰老的效应。

根据另一个方面，本发明还涉及至少一种根据本发明的多肽作为筛选生物学或化学化合物的工具的用途，所述化合物能够调节所述多肽的表达和/或生物学活性，和/或所述多肽从蛋白聚糖基质(尤其是上皮的蛋白聚糖基质)中的释放。

特别地，本发明涉及用于筛选抗衰老的活性物质的方法，其至少包括下列步骤：

a)在适宜于表现出根据本发明的多肽的生物学活性的条件下，使至少一种根据本发明的多肽与至少一种待测试的化学或生物学化合物相接触，和

b)测定所述多肽的生物学活性。

根据本发明的另外一个方面，本发明还涉及至少一种生物学或化学化合物在制备用于促进上皮(尤其是表皮)的瘢痕形成的组合物中的用途，所述化合物能够调节根据本发明的所述多肽的表达和/或生物学活性，和/或所述多肽从上皮(尤其是表皮)的蛋白聚糖基质中的释放。

根据本发明的另外一个方面，本发明还涉及至少一种根据本发明的多肽或者编码所述多肽的核酸序列，作为用于表征上皮(尤其是表皮)状况的工具的用途。

多肽的定义

根据一个实施方案，适合于本发明的多肽可以具有完全或部分地由选自SEQ IDNO 4、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 6的序列，或其类似物，或其片段所呈现的氨基酸序列。

在本发明的范围内，除非另外说明，YKL-40通常意指前蛋白(pro-protéine)的形式(SEQ ID NO 4)和多肽的成熟形式(SEQ IDNO 5)。

“多肽的类似物”意指具有序列同源性(特别是相关于所述多肽的特征序列)以及相同性质的生物学活性的任何多肽。

所述化合物可以是肽模拟试剂(agent peptidomimétique)。

同源性可以为至少85％，例如至少90％，和例如至少95％。同源性可以通过目视比较或者借助于任何本领域中通常使用的信息学工具来确定。

序列的同源性可以由于在根据本发明的肽序列中源自突变或变异的改变而产生，所述突变或变异源自在根据本发明的多肽的特征序列中一个或多个氨基酸的缺失，或一个或多个氨基酸的***，或一个或多个氨基酸的置换。

在本发明的范围内，“多肽的片段”意指根据本发明的多肽的任何部分，其包含所述多肽的至少2个，至少3个，特别是至少4个和更特别地至少8个连续氨基酸，以及差不多相似的生物学活性。

“多肽的特征序列”，尤其是就YKL-40而言，意指由序列SEQ IDNO 4构成的前蛋白序列，由SEQ ID NO 5所确定的成熟蛋白质的序列，和由SEQ ID NO 6所确定的序列，其由在该蛋白质成熟过程中被去除的N-末端前21个氨基酸构成。

根据一个实施方案，由序列SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 5、或其类似物所确定的多肽首选用于实施本发明。

通常，多肽类似物可以包含相对于天然多肽的氨基酸序列而言保守的置换。

可以将几种这些修饰相组合。

作为在本发明中可以考虑的突变的例子，以非穷尽的方式，可以提及用具有相似亲水指数的氨基酸残基替代一个或多个氨基酸残基而不因此明显地影响该多肽的生物学特性，尤其是其生物学活性，例如其刺激角质形成细胞的增殖和/或迁移和/或终末分化的活性，或刺激在上皮(特别是表皮)水平上蛋白聚糖合成的活性，或改善上皮(尤其是表皮)针对微生物的防御的活性。

亲水指数是根据其疏水性和其电荷而赋予氨基酸的指数(Kyte等人，(1982)，J.Mol.Biol.，157：105)。

本发明所涉及的多肽或类似物可以是经历一种或多种翻译后修饰的多肽。

“翻译后修饰”意在包括肽或蛋白质在细胞中合成之后可能经历的所有修饰，例如一次或多次磷酸化、一次或多次糖基化、一次或多次脂质化(例如法呢基化或棕榈酰化)、二硫键形成类型和/或肽序列内部切割类型的结构重排。

此外，所述类似物具有与天然多肽基本上相同的生物学活性。

根据一个实施方案，适合于实施本发明的多肽还可以是：天然或合成的多肽，在需要时所述多肽能够在酶促或化学裂解YKL-40后获得，或通过化学或生物合成而获得，或通过从生物组织例如皮肤中提取而获得，所述生物组织天然地或在转导后表达该多肽以及该多肽的各种翻译后形式；或者其序列全部或部分地(完全或部分地)包含前述氨基酸序列的任何天然或合成的多肽，例如变体和类似物。

采用基于重组DNA的方法，例如在手册《Molecular Cloning-ALaboratoryManual》(第2版)，Sambrook等人，1989，Vol.I-III，Coldspring Harbor Laboratory，Coldspring Harbor Press，NY，(Sambrook)中所描述的那些方法，本领域技术人员可以获得根据本发明的多肽。

根据另一个实施方案，适合于实施本发明的多肽还可以是如前面所定义的多肽，其中残基至少已被具有相似亲水指数的氨基酸残基所替代，如前面所定义的。

根据另一个实施方案，适合于实施本发明的多肽还可以是如前面所定义的多肽，其与另一个多肽，亲水或疏水性靶向试剂，生物转化的前体，发光、放射性或比色标记试剂相融合。

以非限制性的方式，作为能够与根据本发明的多肽相偶联的化合物的例子，可提及荧光蛋白例如绿色荧光蛋白，荧光化学化合物例如罗丹明、荧光素或德克萨斯红，磷光化合物，放射性元素例如³H、³⁵S、¹²¹I或¹²⁵I，或者比色标记试剂例如对于半乳糖苷酶、过氧化物酶、氯霉素乙酰转移酶、萤光素酶或碱性磷酸酶的作用敏感的生色底物。

依照能够与根据本发明的多肽相偶联的化合物的性质，偶联可以通过化学方法，尤其是借助于反应性化学官能团，或者通过本领域技术人员已知的分子生物学方法来进行。

核酸序列的定义

根据一个实施方案，本发明还涉及编码本发明多肽的核酸序列以及其在根据本发明的各种用途和方法中的应用。

因此，本发明还涉及核酸(尤其是脱氧核糖核酸或核糖核酸)序列在制备根据本发明的组合物中的用途，所述核酸序列编码根据本发明的多肽，尤其是至少相应于编码性核酸序列SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO 3，其类似物，或其片段的序列。

在本发明的范围内，“核酸序列的片段”意指编码根据本发明的多肽或其类似物的全部或部分的核酸序列，特别是选自SEQ ID NO：1(其编码前蛋白形式)、SEQ ID NO：2(其编码蛋白形式)、SEQ ID NO3(其编码信号肽)的核酸序列或其类似物。

“核酸序列的类似物”意指任何这样的核酸序列，其任选地由于核酸密码的简并性而产生，并且编码与由所述核酸所编码的多肽序列相同或类似的多肽序列。

核酸序列可以源自任何可能的来源，即动物来源(特别是哺乳动物，和更特别是人)、植物来源、微生物来源(尤其是病毒、噬菌体、细菌)或者真菌来源，但并不预先判断它们是否天然地存在或不存在于所述源生物体中。

在这种情况下，本发明还涉及编码根据本发明所考虑的多肽的经分离和纯化的核酸片段的用途。

根据本发明的核酸序列可以是有义、反义或干扰序列，其相应于编码根据本发明的多肽的序列。

因此，本发明还涉及编码根据本发明的多肽的核酸(尤其是脱氧核糖核酸或核糖核酸)序列的用途。

根据本发明的核酸序列可以尤其用于制备相应的有义或反义核糖核酸序列。

本发明的目标还在于任何多核苷酸，有义或反义的核糖核酸或脱氧核糖核酸序列(尤其是“小干扰RNA”)的用途，所述序列至少相应于编码性核酸序列SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO 3或其类似物。

调节试剂

根据另一个实施方案，本发明涉及调节根据本发明的多肽的表达、活性和/或释放的试剂的用途。特别地，本发明涉及激活本发明多肽的活性的调节试剂的用途。

在本发明的范围内，“调节”，就所给出的效应而言，意指刺激或抑制该效应的作用。

在本发明的范围内，表述“调节试剂或者能够调节生物学活性和/或表达的化学或生物学化合物”意指能够对于至少一种根据本发明的多肽或编码该多肽的核酸序列、或者对于细胞内或细胞外信号传导途径或代谢途径(牵涉所述多肽)的要素、或者对于在调控编码所述多肽的核酸序列的转录和/或翻译中所牵涉的要素直接或间接地起作用的任何化合物。

“生物学活性”，就YKL-40而言，尤其意指前蛋白(SEQ ID NO 4)的生物学活性、YKL-40的成熟形式(SEQ ID NO 5)的生物学活性以及包含21个N-末端氨基酸的信号肽(SEQID NO 6)的生物学活性。

更具体地，调节试剂可以是根据本发明的多肽的活性的激活剂。

在本发明的范围内，“调节试剂”或“能够调节释放的化学或生物学化合物”意指能够对于至少一种根据本发明的多肽或者任何这样的要素直接或间接地起作用的任何化合物，所述要素直接或间接地牵涉根据本发明的多肽在蛋白聚糖基质内的分布和/或根据本发明的多肽与此类基质的稳定结合。

因此，本发明的实施尤其使得能够提供这样的调节试剂，所述调节试剂能够调动在蛋白聚糖基质范围内存在的YKL-40储备。

特别地，本发明所涉及的蛋白聚糖为上皮(尤其是表皮)的基质。

本发明涉及用于筛选能够调节根据本发明的多肽的生物学活性的生物学或化学化合物或者物理化学因素的方法，所述方法至少包括下列步骤：

a)在适宜于表现出根据本发明的多肽的所述生物学活性的条件下，使至少一种根据本发明的多肽与至少一种待测试的化学或生物学化合物相接触，和/或对所述多肽施以所述物理化学因素，和

b)测定所述多肽的所述生物学活性。

在这样的方法中，所述多肽的生物学活性，特别是其上皮分化活性，尤其是表皮终末分化活性(尤其是关于角质形成细胞而言)，可以例如通过本领域技术人员已知的任何方法来测定。

例如并且非限制性地，可提及这样的方法：进行细胞培养；随后对分化标记物例如角蛋白10、聚丝蛋白，或增殖标记物例如KI67和PNCA进行表征。

根据一个实施方案，根据本发明的多肽的生物学活性可以是刺激蛋白聚糖的合成或者上皮(特别是表皮)细胞的蛋白聚糖受体的合成。

根据一个实施方案，可以将所述多肽的生物学活性与参照值进行比较。

可以通过在不存在任何待测试的生物学或化学化合物的情况下测量所述多肽的生物学活性来获得参照值。

假定参照值的该测量在使用待测试的生物学或化学化合物之前进行，那么根据本发明的方法此外还可以，在需要时，允许评价所述化合物的潜在功效。

该生物学活性可以不受所述化合物的存在的影响，或者相反地被抑制或刺激。

假定证实了刺激效应，那么该受试化合物能够用作例如抗衰老的活性物质。

根据本发明的方法可以在细胞样品上进行，所述细胞样品从皮肤活组织检查或者从培养中的细胞获得。

有利地，作为细胞样品，可提及角质形成细胞。

有利地，在根据本发明的方法中使用的多肽可以是YKL-40蛋白。

本发明还涉及用于筛选能够调节根据本发明的多肽的表达的生物学或化学化合物或者物理化学因素(例如光)的方法，所述方法至少包括下列步骤：

a)在适宜于表达编码根据本发明的多肽的核酸序列的条件下，使至少一种编码根据本发明的多肽的核酸序列与至少一种待测试的化学或生物学化合物相接触，和/或对所述序列施以所述物理化学因素，和

b)测定所述序列的表达。

核酸序列的表达可以，例如借助于寡核苷酸探针，通过本领域技术人员已知的任何实验方案来测定。

作为核酸序列的检测方法的例子，可提及聚合酶链式反应(PCR)、反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR或Q-PCR)、Northern印迹、核糖核酸酶保护测定法、使用DNA芯片的方法、使用转录物组学芯片的方法、使用寡核苷酸芯片的方法、原位杂交法。

作为适合于检测核酸序列，特别是mRNA的试剂的例子，可提及可以与所述序列杂交的经标记的核酸探针。

这样的核酸探针可以通过本领域技术人员已知的任何方法容易地获得。

因此，根据本发明的核酸序列可以用于制备有义和/或反义寡核苷酸引物，所述引物可以在高严紧条件下与序列SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：3或其类似物杂交。

可以将根据本发明的核酸序列的表达与参照值进行比较，所述参照值例如通过在不存在待测试的化合物的情况下实施根据本发明的方法而获得。

本发明还涉及用于筛选能够调节根据本发明的多肽从蛋白聚糖基质中的释放的生物学或化学化合物(甚至抗衰老的活性物质)的方法，所述方法至少包括下列步骤：

a)在适宜于根据本发明的多肽与蛋白聚糖基质稳定结合的条件下，使至少一种分布于蛋白聚糖基质中的根据本发明的多肽与至少一种待测试的化学或生物学化合物相接触，

b)测定在所述基质之外所述多肽的含量，和

c)将在步骤b)中测得的所述含量与在不存在待测试的化学或生物学化合物的情况下测得的所述多肽的含量进行比较。

根据一个实施方案，基质的蛋白聚糖可以为硫酸乙酰肝素类型和其衍生物。

在步骤c)中进行的比较可以使得能够推断出关于所述受试化合物调节本发明多肽释放的特性的信息。

根据本发明的多肽的含量的测定可以采用本领域技术人员已知的任何方法来进行。

作为多肽的检测方法，可以提及Western印迹，狭线印迹，斑点印迹，单重或多重类型的ELISA(酶联免疫吸附测定法)方法，蛋白质组学或糖组学方法，用基于银的染色剂、考马斯蓝或SYPRO在聚丙烯酰胺凝胶中对多肽进行染色，免疫荧光，UV吸收，使用常规显微术、电子显微术或共聚焦显微术的免疫组织化学方法，FRET(荧光共振能量转移)，TR-FRET(时间分辨FRET)方法，FLIM(荧光寿命成像显微术)方法，FSPIM(荧光光谱成像显微术)方法，FRAP(荧光漂白恢复)方法，通过报告基因的方法，AFM(原子力显微术)方法，表面等离子共振方法，微量量热法，流式细胞术方法，生物传感器方法，放射免疫测定法(RIA)，等电点聚焦方法，酶测试，使用肽芯片、糖芯片、抗体芯片的方法，质谱法，SELDI-TOF型光谱方法(Ciphergen)。

根据本发明的方法可以在上皮(尤其是表皮)样品上进行，所述样品从皮肤活组织检查获得，或者从上皮(例如表皮)细胞模型获得，或者从角质层的(尤其是使用胶粘剂的)表面取样(剥离)获得。

应当理解，根据本发明所考虑的所有美容或治疗组合物采用生理学上可接受的介质。

根据本发明的组合物包含根据本发明的核酸和/或肽序列作为活性试剂，也就是说，它们是以这样的形式和含量来进行使用，所述形式和含量使得它们能够通过自身发挥出所期望的美容或治疗效果。

在本发明的范围内，“生理学上可接受的介质”意指这样的介质，其适合于将组合物应用在上皮或角蛋白材料(例如，皮肤，头皮，嘴唇，粘膜，以及角蛋白纤维例如头发、指(趾)甲和毛)上，或在需要时通过口服或肠胃外途径。

在本发明的范围内，“治疗的”意指可以在上皮(尤其是表皮)状况的预防性和/或治疗性治疗的范围内，或者在上皮(尤其是表皮)状况的评估方法的范围内使用的组合物。

根据另一个实施方案，根据本发明的美容或治疗组合物另外还可以包含至少一种美容和/或治疗活性试剂。

根据一个实施方案，这样的活性试剂不是透明质酸和/或糖胺聚糖。

作为在本发明范围内可使用的活性试剂的例子，可提及美容用油，例如硅油、甘油三酯类型的植物油、烃油例如parleam油以及脂肪酸和脂肪醇的酯。

还可以使用使得能够改善皮肤状况的活性物质，例如水化活性物质和润湿活性物质，或使得能够改善天然脂质屏障的活性试剂，例如神经酰胺、硫酸胆固醇和/或脂肪酸以及它们的混合物。

还可以使用对皮肤具有活性的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、葡糖苷酶、酰胺酶、脑苷酶和/或mélanases以及它们的混合物。

适用于实施本发明的活性试剂的其他例子包括：止痛活性物质、抗酵母活性物质、抗细菌活性物质、抗寄生虫活性物质、抗真菌活性物质、抗病毒活性物质、类固醇抗炎活性物质、麻醉活性物质、止痒活性物质、角质层分离活性物质、抗自由基活性物质、抗皮脂溢活性物质、去头屑活性物质、抗痤疮活性物质、旨在防止皮肤衰老和/或改善其状况的活性物质、抗皮炎活性物质、抗刺激物活性物质、免疫调节活性物质、用于治疗干燥的皮肤的活性物质、抗出汗活性物质、抗银屑病活性物质、针对UV的保护性活性物质、抗组胺活性物质、瘢痕形成活性物质、自晒黑活性物质、抗氧化剂例如绿茶或其活性级分、甘油、laponite、咖啡因、芳香精油、着色剂、去色素活性物质、脂调节剂、柔软化活性物质、提神活性物质、祛臭活性物质、脱敏活性物质、漂白活性物质、营养活性物质、减少皮肤的分化和/或增殖和/或色素沉着的活性物质以及它们的混合物。

一般地，可以将本发明的任何组合物应用于皮肤(身体的任何皮肤区域)上或者粘膜(颊的、颧的、牙龈的、生殖器的、结膜的...)上。

正如已经知道的，美容组合物还可以含有美容学领域的常规辅助剂，例如亲水或亲脂的凝胶剂、亲水或亲脂的添加剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、香料、填料、过滤剂、气味吸收剂和着色物质。

根据本发明的组合物的各种组分的量为在所考虑的领域中常规使用的量。

在根据本发明的组合物中所包含的化学或生物学化合物或者根据本发明的多肽、核酸序列或调节试剂的量(也称为“有效量”)，当然取决于所述化合物的性质和所寻求的效应，并因此可以在大的范围内变动。

为了给出大概的数量级，组合物所包含的根据本发明的调节剂或多肽的量可以为所述组合物总重量的0.00001％至50％，特别地0.001％至10％，和更特别地0.1％至1％。

更特别地，根据本发明的组合物旨在用于减少和/或治疗可能使上皮(尤其是表皮)状况变坏的疾患。

本发明所涉及的上皮状况可以是与下列相关的状况：终末上皮(特别是表皮的，尤其是角质形成细胞的)分化的功能障碍；和/或蛋白聚糖合成的不足；和/或上皮(尤其是皮肤)针对微生物的防御的改变。

这样的状况可以是时序起因的(即与时间流逝相关的，例如皮肤衰老)，和/或为与例如光衰老相关的皮肤病症的指示。

因此，根据本发明的组合物(尤其是美容组合物)可以特别是用于预防和/或治疗表皮变薄，和/或表皮的紧实度、弹性、密度和/或张力的丧失，和/或皱纹和细小皱纹的形成。

根据另一个实施方案，根据本发明的组合物(特别是美容组合物)可以尤其是用于预防和/或治疗皮肤干燥征候，特别是预防和/或治疗表皮脱水。

根据本发明的组合物(尤其是美容组合物)还可以用于治疗头发或毛的中等程度的生长或脱落这样的目的。

根据另外一个实施方案，根据本发明的组合物(尤其是美容组合物)可以用于激活头发的生长、激活毛发的器官发生和/或增加毛囊的存活。

根据另一个实施方案，根据本发明的组合物(尤其是美容组合物)可以用于预防和/或治疗表皮衰老的征候。

更特别地，根据本发明的组合物(尤其是治疗组合物)可以用于治疗皮肤病症，例如皮肤水化紊乱，例如干燥病，角化不全，角化过度，鱼鳞病，银屑病，特应性皮炎，湿疹，酒渣鼻，苔癣(lichen)，瘙痒症，具有炎性组分或者由于免疫应答的改变而引起的皮肤病理学状态，脱屑，黑素生成或皮脂生成(sébogenèse)的失常，脱发，多毛症，瘢痕形成紊乱，或者牵涉分泌现象和细胞侵入过程的皮肤病症，尤其是在恶性或良性瘤形成的范围内。

根据本发明的组合物(尤其是治疗组合物)还可以用于这样的目的，即改善针对由致病体例如细菌或酵母所引起的感染的皮肤防御，从而防止由细菌感染引起的炎症反应。

根据实施方案的一个变化形式，根据本发明的组合物(尤其是治疗组合物)可以用于预防和/或治疗由于微生物感染而导致的表皮(尤其是真皮/表皮)的屏障功能的紊乱。

根据实施方案的另一个变化形式，根据本发明的组合物(尤其是治疗组合物)可以用于预防和/或治疗表皮病症，例如脱屑、鱼鳞病、角化过度。

根据另一个方面，本发明还涉及至少一种根据本发明的多肽或至少一种编码所述多肽的核酸序列，作为表征上皮(尤其是表皮)状况的工具的用途。

根据一个实施方案，本发明涉及用于表征上皮状况的方法，其至少包括下列步骤：

a)测定上皮样品中根据本发明的多肽或编码所述多肽的核酸序列的含量，和

b)将在步骤a)中测得的所述含量与参照值进行比较。

根据一个实施方案，根据本发明的方法可以在取自个体的上皮(尤其是表皮)样品上进行。

根据本发明的方法还可以在上皮(尤其是表皮)样品上进行，所述样品获取自上皮(尤其是表皮)细胞模型或者重构的分离的皮肤，以便对其状况进行定性。

上皮样品的获取可以通过本领域技术人员已知的任何方法来进行。

根据本发明的方法可以在体外或离体进行。

参照值可以是例如在表皮样品上所测得的多肽或核酸序列的含量，所述表皮样品获取自上皮，尤其是正常皮肤，即在生理学方面符合例如年轻皮肤的形象。

参照值的测量可以与测定多肽或核酸序列的所述含量平行地或顺次地进行。

所测得的含量与参照值的比较可以使得能够评价相对于该值的偏差。

分析该偏差的程度和/或性质(负的或正的)可以提供关于表皮状况的信息。

表皮状况的表征可以为可能的皮肤病症的指示。

根据一个实施方案，根据本发明的方法可以在个体中在推测的上皮(尤其是表皮)病症的体外或离体诊断方法中采用。

例如，待评价的上皮状况可以选自脱屑、鱼鳞病、角化过度、表皮干燥、衰老或光衰老。

有利地，适合于施行根据本发明的方法的多肽可以是YKL-40蛋白。

可以通过本领域技术人员已知的任何实验方案来测定表皮样品中根据本发明的多肽或根据本发明的核酸的含量。

作为多肽检测的方法，可提及前面已列举的那些。

因此，可以设想，借助于抗体，在需要时以经标记的形式，来检测根据本发明的多肽的存在。

能够用作用于评价表皮状况的工具的抗体可以通过本领域技术人员已知的任何方法来获得，例如在“Antibodies：A LaboratoryManual”，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold SpringHarbor，N.Y.(1990)中所描述的方法。

有利地，适合于施行根据本发明的方法的核酸序列可以是编码YKL-40的核酸序列，例如mRNA类型的核酸序列。

作为根据本发明的核酸的检测方法的例子，可以提及前面已列举的方法。

根据实施方案的一个变化形式，本发明涉及用于表征上皮(尤其是表皮)状况的方法，其至少包括下列步骤：

a)测定在所述上皮的样品中根据本发明的多肽的生物学活性的值，和

b)将在步骤a)中测得的所述值与参照值进行比较。

有利地，其值可以被测定的生物学活性可以是如前面所定义的生物学活性。

根据另一个方面，本发明涉及皮肤病症的美容治疗方法，其包括至少一个步骤，所述步骤在于将至少一种根据本发明的美容组合物应用在皮肤、粘膜和/或角蛋白纤维的至少一部分上。

在本发明的范围内，除非另外说明，“un”应当理解为“至少一(种、个)”的意思。

下面给出的实施例是为了举例说明而非限制本发明的目的而呈现的。

实施例1

通过在个体的不同皮肤区域上进行涂料剥离(stripping vernis)而获取的样品的ELISA分析

从在个体的不同皮肤区域上进行的涂料剥离开始来进行所述分析，所述不同皮肤区域为：腿、臂、前额、手掌和手背。

使用3×3cm的尼龙方块。

在potter中，以100μl/mg PA的比例，在PBS+0.1％Triton X-100缓冲液中抽提丙酮制粉(PA)。

离心后，收集上清液。

使用Bio-Rad的Bradford试剂，按照Bradford法来测定蛋白质的含量。从20μl的每种抽提物开始，用Metra YKL40 ELISA试剂盒(Quidel)来进行YKL-40的含量测定。

所述测定重复进行两次。

每个结果与蛋白质比率相联系。

在所分析的所有皮肤区域上可以容易地检测到和定量YKL40的存在。

实施例2

免疫组织化学

毛囊的切片为5μm。

一抗为从Osteomedical获得的兔多克隆抗体[Ref 4815]，并且以1∶25进行使用。

二抗为从Dako获得的在山羊中形成并偶联至生物素的抗兔Ig抗体，并且以1∶500进行使用。

最后，用链霉抗生物素蛋白进行放大，并用3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)进行揭示。

在毛囊的底部观察到高浓度的YKL-40蛋白。

序列表

SEQ ID NO 1

1 atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct

61 gcatacaaac tggtctgcta ctacaccagc tggtcccagt accgggaagg cgatgggagc

121 tgcttcccag atgcccttga ccgcttcctc tgtacccaca tcatctacag ctttgccaat

181 ataagcaacg atcacatcga cacctgggag tggaatgatg tgacgctcta cggcatgctc

241 aacacactca agaacaggaa ccccaacctg aagactctct tgtctgtcgg aggatggaac

301 tttgggtctc aaagattttc caagatagcc tccaacaccc agagtcgccg gactttcatc

361 aagtcagtac cgccattcct gcgcacccat ggctttgatg ggctggacct tgcctggctc

421 taccctggac ggagagacaa acagcatttt accaccctaa tcaaggaaat gaaggccgaa

481 tttataaagg aagcccagcc agggaaaaag cagctcctgc tcagcgcagc actgtctgcg

541 gggaaggtca ccattgacag cagctatgac attgccaaga tatcccaaca cctggatttc

601 attagcatca tgacctacga ttttcatgga gcctggcgtg ggaccacagg ccatcacagt

661 cccctgttcc gaggtcagga ggatgcaagt cctgacagat tcagcaacac tgactatgct

721 gtggggtaca tgttgaggct gggggctcct gccagtaagc tggtgatggg catccccacc

781 ttcgggagga gcttcactct ggcttcttct gagactggtg ttggagcccc aatctcagga

841 ccgggaattc caggccggtt caccaaggag gcagggaccc ttgcctacta tgagatctgt

901 gacttcctcc gcggagccac agtccataga accctcggcc agcaggtccc ctatgccacc

961 aagggcaacc agtgggtagg atacgacgac caggaaagcg tcaaaagcaa ggtgcagtac

1021 ctgaaggata ggcagctggc aggcgccatg gtatgggccc tggacctgga tgacttccag

1081 ggctccttct gcggccagga tctgcgcttc cctctcacca atgccatcaa ggatgcactc

1141 gctgcaacgt ag

SEQ ID NO 2

1 tacaaactgg tctgctacta caccagctgg tcccagtacc gggaaggcga tgggagctgc

61 ttcccagatg cccttgaccg cttcctctgt acccacatca tctacagctt tgccaatata

121 agcaacgatc acatcgacac ctgggagtgg aatgatgtga cgctctacgg catgctcaac

181 acactcaaga acaggaaccc caacctgaag actctcttgt ctgtcggagg atggaacttt

241 gggtctcaaa gattttccaa gatagcctcc aacacccaga gtcgccggac tttcatcaag

301 tcagtaccgc cattcctgcg cacccatggc tttgatgggc tggaccttgc ctggctctac

361 cctggacgga gagacaaaca gcattttacc accctaatca aggaaatgaa ggccgaattt

421 ataaaggaag cccagccagg gaaaaagcag ctcctgctca gcgcagcact gtctgcgggg

481 aaggtcacca ttgacagcag ctatgacatt gccaagatat cccaacacct ggatttcatt

541 agcatcatga cctacgattt tcatggagcc tggcgtggga ccacaggcca tcacagtccc

601 ctgttccgag gtcaggagga tgcaagtcct gacagattca gcaacactga ctatgctgtg

661 gggtacatgt tgaggctggg ggctcctgcc agtaagctgg tgatgggcat ccccaccttc

721 gggaggagct tcactctggc ttcttctgag actggtgttg gagccccaat ctcaggaccg

781 ggaattccag gccggttcac caaggaggca gggacccttg cctactatga gatctgtgac

841 ttcctccgcg gagccacagt ccatagaacc ctcggccagc aggtccccta tgccaccaag

901 ggcaaccagt gggtaggata cgacgaccag gaaagcgtca aaagcaaggt gcagtacctg

961 aaggataggc agctggcagg cgccatggta tgggccctgg acctggatga cttccagggc

1021 tccttctgcg gccaggatct gcgcttccct ctcaccaatg ccatcaagga tgcactcgct

1081 gcaacgtag

SEQ ID NO 3

1 atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct

61 gca

SEQ ID NO 4

1 mgvkasqtgf vvlvllqccs ayklvcyyts wsqyregdgs cfpdaldrfl cthiiysfan

61 isndhidtwe wndvtlygml ntlknrnpnl ktllsvggwn fgsqrfskia sntqsrrtfi

121 ksvppflrth gfdgldlawl ypgrrdkqhf ttlikemkae fikeaqpgkk qlllsaalsa

181 gkvtidssyd iakisqhldf isimtydfhg awrgttghhs plfrgqedas pdrfsntdya

241 vgymlrlgap asklvmgipt fgrsftlass etgvgapisg pgipgrftke agtlayyeic

301 dflrgatvhr tlgqqvpyat kgnqwvgydd qesvkskvqy lkdrqlagam vwaldlddfq

361 gsfcgqdlrf pltnaikdal aat

SEQ ID NO 5

1 yklvcyytsw sqyregdgsc fpdaldrflc thiiysfani sndhidtwew ndvtlygmln

61 tlknrnpnlk tllsvggwnf gsqrfskias ntqsrrtfik svppflrthg fdgldlawly

121 pgrrdkqhft tlikemkaef ikeaqpgkkq lllsaalsag kvtidssydi akisqhldfi

181 simtydfhga wrgttghhsp lfrgqedasp drfsntdyav gymlrlgapa sklvmgiptf

241 grsftlasse tgvgapisgp gipgrftkea gtlayyeicd flrgatvhrt lgqqvpyatk

301 gnqwvgyddq esvkskvqyl kdrqlagamv waldlddfqg sfcgqdlrfp ltnaikdala

361 at

SEQ ID NO 6

1 mgvkasqtgf vvlvllqccs a

<110>L’OREAL

<120>几丁质酶型蛋白质的美容用途

<130>BR79971/CR/HG/klp

<140>0654986

<141>2006-11-20

<160>6

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>1152

<212>DNA

<213>智人

<400>1

atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct 60

gcatacaaac tggtctgcta ctacaccagc tggtcccagt accgggaagg cgatgggagc 120

tgcttcccag atgcccttga ccgcttcctc tgtacccaca tcatctacag ctttgccaat 180

ataagcaacg atcacatcga cacctgggag tggaatgatg tgacgctcta cggcatgctc 240

aacacactca agaacaggaa ccccaacctg aagactctct tgtctgtcgg aggatggaac 300

tttgggtctc aaagattttc caagatagcc tccaacaccc agagtcgccg gactttcatc 360

aagtcagtac cgccattcct gcgcacccat ggctttgatg ggctggacct tgcctggctc 420

taccctggac ggagagacaa acagcatttt accaccctaa tcaaggaaat gaaggccgaa 480

tttataaagg aagcccagcc agggaaaaag cagctcctgc tcagcgcagc actgtctgcg 540

gggaaggtca ccattgacag cagctatgac attgccaaga tatcccaaca cctggatttc 600

attagcatca tgacctacga ttttcatgga gcctggcgtg ggaccacagg ccatcacagt 660

cccctgttcc gaggtcagga ggatgcaagt cctgacagat tcagcaacac tgactatgct 720

gtggggtaca tgttgaggct gggggctcct gccagtaagc tggtgatggg catccccacc 780

ttcgggagga gcttcactct ggcttcttct gagactggtg ttggagcccc aatctcagga 840

ccgggaattc caggccggtt caccaaggag gcagggaccc ttgcctacta tgagatctgt 900

gacttcctcc gcggagccac agtccataga accctcggcc agcaggtccc ctatgccacc 960

aagggcaacc agtgggtagg atacgacgac caggaaagcg tcaaaagcaa ggtgcagtac 1020

ctgaaggata ggcagctggc aggcgccatg gtatgggccc tggacctgga tgacttccag 1080

ggctccttct gcggccagga tctgcgcttc cctctcacca atgccatcaa ggatgcactc 1140

gctgcaacgt ag 1152

<210>2

<211>1089

<212>DNA

<213>智人

<400>2

tacaaactgg tctgctacta caccagctgg tcccagtacc gggaaggcga tgggagctgc 60

ttcccagatg cccttgaccg cttcctctgt acccacatca tctacagctt tgccaatata 120

agcaacgatc acatcgacac ctgggagtgg aatgatgtga cgctctacgg catgctcaac 180

acactcaaga acaggaaccc caacctgaag actctcttgt ctgtcggagg atggaacttt 240

gggtctcaaa gattttccaa gatagcctcc aacacccaga gtcgccggac tttcatcaag 300

tcagtaccgc cattcctgcg cacccatggc tttgatgggc tggaccttgc ctggctctac 360

cctggacgga gagacaaaca gcattttacc accctaatca aggaaatgaa ggccgaattt 420

ataaaggaag cccagccagg gaaaaagcag ctcctgctca gcgcagcact gtctgcgggg 480

aaggtcacca ttgacagcag ctatgacatt gccaagatat cccaacacct ggatttcatt 540

agcatcatga cctacgattt tcatggagcc tggcgtggga ccacaggcca tcacagtccc 600

ctgttccgag gtcaggagga tgcaagtcct gacagattca gcaacactga ctatgctgtg 660

gggtacatgt tgaggctggg ggctcctgcc agtaagctgg tgatgggcat ccccaccttc 720

gggaggagct tcactctggc ttcttctgag actggtgttg gagccccaat ctcaggaccg 780

ggaattccag gccggttcac caaggaggca gggacccttg cctactatga gatctgtgac 840

ttcctccgcg gagccacagt ccatagaacc ctcggccagc aggtccccta tgccaccaag 900

ggcaaccagt gggtaggata cgacgaccag gaaagcgtca aaagcaaggt gcagtacctg 960

aaggataggc agctggcagg cgccatggta tgggccctgg acctggatga cttccagggc 1020

tccttctgcg gccaggatct gcgcttccct ctcaccaatg ccatcaagga tgcactcgct 1080

gcaacgtag 1089

<210>3

<211>63

<212>DNA

<213>智人

<400>3

atgggtgtga aggcgtctca aacaggcttt gtggtcctgg tgctgctcca gtgctgctct 60

gca 63

<210>4

<211>383

<212>PRT

<213>智人

<400>4

Met Gly Val Lys Ala Ser Gln Thr Gly Phe Val Val Leu Val Leu Leu

1 5 10 15

Gln Cys Cys Ser Ala Tyr Lys Leu Val Cys Tyr Tyr Thr Ser Trp Ser

20 25 30

Gln Tyr Arg Glu Gly Asp Gly Ser Cys Phe Pro Asp Ala Leu Asp Arg

35 40 45

Phe Leu Cys Thr His Ile Ile Tyr Ser Phe Ala Asn Ile Ser Asn Asp

50 55 60

His Ile Asp Thr Trp Glu Trp Asn Asp Val Thr Leu Tyr Gly Met Leu

65 70 75 80

Asn Thr Leu Lys Asn Arg Asn Pro Asn Leu Lys Thr Leu Leu Ser Val

85 90 95

Gly Gly Trp Asn Phe Gly Ser Gln Arg Phe Ser Lys Ile Ala Ser Asn

100 105 110

Thr Gln Ser Arg Arg Thr Phe Ile Lys Ser Val Pro Pro Phe Leu Arg

115 120 125

Thr His Gly Phe Asp Gly Leu Asp Leu Ala Trp Leu Tyr Pro Gly Arg

130 135 140

Arg Asp Lys Gln His Phe Thr Thr Leu Ile Lys Glu Met Lys Ala Glu

145 150 155 160

Phe Ile Lys Glu Ala Gln Pro Gly Lys Lys Gln Leu Leu Leu Ser Ala

165 170 175

Ala Leu Ser Ala Gly Lys Val Thr Ile Asp Ser Ser Tyr Asp Ile Ala

180 185 190

Lys Ile Ser Gln His Leu Asp Phe Ile Ser Ile Met Thr Tyr Asp Phe

195 200 205

His Gly Ala Trp Arg Gly Thr Thr Gly His His Ser Pro Leu Phe Arg

210 215 220

Gly Gln Glu Asp Ala Ser Pro Asp Arg Phe Ser Asn Thr Asp Tyr Ala

225 230 235 240

Val Gly Tyr Met Leu Arg Leu Gly Ala Pro Ala Ser Lys Leu Val Met

245 250 255

Gly Ile Pro Thr Phe Gly Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr

260 265 270

Gly Val Gly Ala Pro Ile Ser Gly Pro Gly Ile Pro Gly Arg Phe Thr

275 280 285

Lys Glu Ala Gly Thr Leu Ala Tyr Tyr Glu Ile Cys Asp Phe Leu Arg

290 295 300

Gly Ala Thr Val His ArG Thr Leu Gly Gln Gln Val Pro Tyr Ala Thr

305 310 315 320

Lys Gly Asn Gln Trp Val Gly Tyr Asp Asp Gln Glu Ser Val Lys Ser

325 330 335

Lys Val Gln Tyr Leu Lys Asp Arg Gln Leu Ala Gly Ala Met Val Trp

340 345 350

Ala Leu Asp Leu Asp Asp Phe Gln Gly Ser Phe Cys Gly Gln Asp Leu

355 360 365

Arg Phe Pro Leu Thr Asn Ala Ile Lys Asp Ala Leu Ala Ala Thr

370 375 380

<210>5

<211>362

<212>PRT

<213>智人

<400>5

Tyr Lys Leu Val Cys Tyr Tyr Thr Ser Trp Ser Gln Tyr Arg Glu Gly

1 5 10 15

Asp Gly Ser Cys Phe Pro Asp Ala Leu Asp Arg Phe Leu Cys Thr His

20 25 30

Ile Ile Tyr Ser Phe Ala Asn Ile Ser Asn Asp His Ile Asp Thr Trp

35 40 45

Glu Trp Asn Asp Val Thr Leu Tyr Gly Met Leu Asn Thr Leu Lys Asn

50 55 60

Arg Asn Pro Asn Leu Lys Thr Leu Leu Ser Val Gly Gly Trp Asn Phe

65 70 75 80

Gly Ser Gln Arg Phe Ser Lys Ile Ala Ser Asn Thr Gln Ser Arg Arg

85 90 95

Thr Phe Ile Lys Ser Val Pro Pro Phe Leu Arg Thr His Gly Phe Asp

100 105 110

Gly Leu Asp Leu Ala Trp Leu Tyr Pro Gly Arg Arg Asp Lys Gln His

115 120 125

Phe Thr Thr Leu Ile Lys Glu Met Lys Ala Glu Phe Ile Lys Glu Ala

130 135 140

Gln Pro Gly Lys Lys Gln Leu Leu Leu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gly

145 150 155 160

Lys Val Thr Ile Asp Ser Ser Tyr Asp Ile Ala Lys Ile Ser Gln His

165 170 175

Leu Asp Phe Ile Ser Ile Met Thr Tyr Asp Phe His Gly Ala Trp Arg

180 185 190

Gly Thr Thr Gly His His Ser Pro Leu Phe Arg Gly Gln Glu Asp Ala

195 200 205

Ser Pro Asp Arg Phe Ser Asn Thr Asp Tyr Ala Val Gly Tyr Met Leu

210 215 220

Arg Leu Gly Ala Pro Ala Ser Lys Leu Val Met Gly Ile Pro Thr Phe

225 230 235 240

Gly Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly Ala Pro

245 250 255

Ile Ser Gly Pro Gly Ile Pro Gly Arg Phe Thr Lys Glu Ala Gly Thr

260 265 270

Leu Ala Tyr Tyr Glu Ile Cys Asp Phe Leu Arg Gly Ala Thr Val His

275 280 285

Arg Thr Leu Gly Gln Gln Val Pro Tyr Ala Thr Lys Gly Asn Gln Trp

290 295 300

Val Gly Tyr Asp Asp Gln Glu Ser Val Lys Ser Lys Val Gln Tyr Leu

305 310 315 320

Lys Asp Arg Gln Leu Ala Gly Ala Met Val Trp Ala Leu Asp Leu Asp

325 330 335

Asp Phe Gln Gly Ser Phe Cys Gly Gln Asp Leu Arg Phe Pro Leu Thr

340 345 350

Asn Ala Ile Lys Asp Ala Leu Ala Ala Thr

355 360

<210>6

<211>21

<212>PRT

<213>智人

<400>6

Met Gly Val Lys Ala Ser Gln Thr Gly Phe Val Val Leu Val Leu Leu

1 5 10 15

Gln Cys Cys Ser Ala

20

Claims

1.至少一种多肽作为筛选生物学或化学化合物的工具在细胞样品中的用途，所述多肽的氨基酸序列由选自SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2的核酸序列编码，并且所述化合物能够调节所述多肽的表达和/或生物学活性，和/或所述多肽从蛋白聚糖基质中的释放而用作抗衰老的活性物质。

2.至少一种多肽或者至少一种编码所述多肽的核酸序列用于制备表征上皮状况的工具的用途，所述多肽的氨基酸序列由选自SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2的核酸序列编码，并且所述上皮状况为衰老。

3.根据权利要求2的用途，其中所述上皮状况为光衰老。

4.用于非诊断目的的用于表征上皮状况的方法，其至少包括下列步骤：

a)测定在所述上皮的样品中多肽或者编码所述多肽的核酸序列的含量，所述多肽的氨基酸序列由选自SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2的核酸序列编码，和

b)将在步骤a)中测得的所述含量与参照值进行比较，

其中所述上皮状况为衰老。

5.用于筛选抗衰老的活性物质的方法，其至少包括下列步骤：

a)在细胞样品中，在适宜于表现出其生物学活性的条件下，使至少一种多肽与至少一种待测试的化学或生物学化合物相接触，所述多肽的氨基酸序列由选自SEQ ID NO 1或SEQID NO 2的核酸序列编码，和

b)测定所述多肽的生物学活性。

6.根据权利要求1或2的用途，其中所述多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO 4或SEQ IDNO 5。

7.根据权利要求4或5的方法，其中所述多肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO 4或SEQ IDNO 5。

8.根据权利要求4的方法，其中所述多肽的含量通过选自下列的方法来测定：Western印迹，斑点印迹，ELISA，免疫荧光，免疫组织化学，电子或共聚焦显微术，FRET，TR-FRET，FLIM，FSPIM，FRAP，报告基因技术，AFM，表面等离子共振，微量量热法，流式细胞术，生物传感器方法，放射免疫测定法，等电点聚焦，SELDI-TOF，和Bradford法。

9.根据权利要求4的方法，其中所述核酸的含量通过选自下列的方法来测定：PCR，RT-PCR或Q-PCR，Northern印迹，核糖核酸酶保护测定法，和原位杂交。

10.根据权利要求4的方法，其进一步包括下列步骤：

c)从在步骤b)中进行的比较中，评价相对于所述参照值的偏差，和

d)分析所述偏差的程度和/或性质以产生关于所述上皮状况的信息。

11.根据权利要求4的方法，其中所述上皮来自毛囊。