ES2579768T3

ES2579768T3 - Anticuerpos anti-KIR, formulaciones y usos de los mismos

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Publication number: ES2579768T3
Application number: ES08707869.7T
Authority: ES
Inventors: Peter Andreas Nicolai Reumert Wagtmann; Ivan Svendsen; Rozana Svensson; Lene Hjorth Alifrangis; Rune Viig Overgaard
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2007-01-11
Filing date: 2008-01-11
Publication date: 2016-08-16
Anticipated expiration: 2028-01-11
Also published as: EP2109460B1; EP2604278B1; US9879082B2; WO2008084106A1; AU2008204433B2; US20150197569A1; CA2675291C; CN105037549B; US20100189723A1; JP5478261B2; US10815299B2; JP2016104728A; CN105037549A; ES2627923T3; WO2008084106A9; JP6223771B2; AU2008204433A1; CN101578113B; EP2604278A1; CN101578113A

Abstract

Una composicion farmaceutica que comprende un anticuerpo que se une al menos a un Receptor de tipo Ig de celulas Killer (KIR) inhibidor humano para uso en el tratamiento de un cancer y/o una enfermedad virica en un paciente que lo necesita, en la que el anticuerpo comprende una region variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 3 y una region variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 2, en donde la composicion es para administrar el anticuerpo a una dosis de 1 a 3 mg/kg y a un regimen de dosificacion de una vez al mes a una vez cada 2 meses, y en donde el anticuerpo a dicha dosis y regimen de dosificacion consigue una ocupacion de KIR de al menos un 95 % en las celulas NK del plasma durante al menos tres meses.

Description

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de aproximadamente 75 mM a aproximadamente 175 mM (por ejemplo, aproximadamente 90-160 mM, aproximadamente 100-150 mM). En un aspecto, dicha formulación comprende cloruro sódico en una concentración de aproximadamente 100 mM.

En otra realización alternativa, la composición usada de acuerdo con la presente invención es una formulación en la que se ha incorporado un tampón Tris (base), normalmente en lugar de fosfato sódico. Puede usarse cualquier concentración adecuada de Tris (base). Es típica una concentración de aproximadamente 10-100 mM, tal como de aproximadamente 15-80 mM, 20-75 mM, o 10-60 mM, o más particularmente tal como aproximadamente 25 mM.

Una formulación a usar de acuerdo con la invención puede tener cualquier concentración adecuada del anticuerpo. Normalmente, la concentración es de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml (por ejemplo, de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 5 mg/ml). En un aspecto ejemplar, la formulación se proporciona como una formulación de anticuerpo relativamente concentrada, que puede ser, por ejemplo, una formulación que se va a diluir antes de la administración (normalmente mediante administración intravenosa o inyección parenteral directa) que tiene una concentración de aproximadamente 10 mg/ml. En otro aspecto ejemplar, la formulación se proporciona como una formulación relativamente diluida, tal como una formulación que está lista para la infusión/inyección, donde la concentración del anticuerpo y la formulación es de aproximadamente 0,05 mg/ml o aproximadamente 0,1 mg/ml. En otro aspecto, la formulación tiene una concentración de anticuerpo de aproximadamente 1 mg/ml.

Un recipiente monodosis de una formulación a usar de acuerdo con la invención puede proporcionarse en cualquier volumen adecuado. Normalmente, una formulación se proporciona en un volumen de aproximadamente 1 ml a aproximadamente 20 ml, tal como un volumen de aproximadamente 3 ml a aproximadamente 15 ml. Habitualmente, la formulación está en un volumen de aproximadamente 5 ml a aproximadamente 10 ml (y a menudo en 5 ml o 10 ml). El recipiente puede ser cualquier tipo adecuado de recipiente. El recipiente puede tener un volumen sobrante (por ejemplo, el recipiente puede ser un vial de 6 ml que contiene 5 ml de la formulación). Es posible no usar todo el volumen de un recipiente monodosis en un régimen terapéutico particular. El volumen normalmente se selecciona para proporcionar una cantidad que incluya un intervalo típico de dosificaciones proporcionadas a los pacientes sin malgastar innecesariamente el fármaco.

Un nivel aceptablemente bajo de precipitación de moléculas de anticuerpo en el contexto de la presente invención significa que se detecta (preferentemente hay considerablemente, si no significativamente) menos precipitación en la formulación que la que se obtendría con una formulación por lo demás básicamente idéntica que comprende otros excipientes farmacéuticos comunes, tales como NaCl; un tensioactivo poloxamer, EDTA, HSA, HP-betaCD, polisorbato 80 y/o una combinación de polisorbato 80 y NaCl. En la técnica se conocen métodos para evaluar los precipitados y pueden incluir, por ejemplo, inspección visual usando técnicas convencionales (ejemplificadas en el presente documento). Se ha determinado que una formulación de dicho anticuerpo IgG4 y sacarosa aproximadamente 180-500 mM (por ejemplo, aproximadamente 180-280 mM) puede proporcionar un nivel extraordinariamente bajo de precipitados en asociación con un anticuerpo anti-KIR, tal como 1-7F9 o 1-7F9v, en comparación con otros excipientes típicos, particularmente a un pH de aproximadamente 7 o de aproximadamente 7,0 (en comparación con un pH de 6,0 o menos y, en una menor medida, un pH de 7,4). Además, la sacarosa puede proporcionar una tonicidad ventajosa a dicha formulación.

Un nivel aceptable de estabilidad de la molécula de anticuerpo (en términos del mantenimiento de la estructura monomérica y elementos estructurales secundarios) en el contexto de la presente invención significa que el pH de la composición se mantiene suficientemente cercano a 7 como para mantener la estructura monomérica y los elementos estructurales secundarios de la molécula de anticuerpo, en comparación con la estabilidad de la molécula a un pH de, por ejemplo, 3 u 8,5.

Un nivel aceptablemente bajo de agregación/formación de precipitados significa que la formulación contiene un nivel de agregación/precipitación obtenido por las cantidades/concentraciones indicadas de polisorbato 80 y fosfato sódico (además de sacarosa). Se ha determinado que dichas formulaciones están asociadas con una excelente estabilidad y bajos niveles de agregación, como puede determinarse, por ejemplo, por análisis IEF, GP HPLC y SDS PAGE de la composición, durante períodos prolongados (por ejemplo, hasta aproximadamente 1 mes, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 3 meses o más) a diversas temperaturas (por ejemplo, a una temperatura de aproximadamente -20 ºC a aproximadamente 40 ºC, tal como de aproximadamente 5 ºC (por ejemplo, 2-8 ºC) a aproximadamente 20 ºC), presentando también menos precipitados que las formulaciones de histidina y tris.

Como se ha indicado anteriormente, una formulación a usar de acuerdo con cualquiera de los aspectos de la invención deseablemente comprende al menos una, si no dos, o las tres características mencionadas.

Por lo anterior puede verse que el pH de la formulación es un factor importante. Puede ser aceptable una cantidad limitada de variación en un intervalo de pH particular (dependiendo de las características de estabilidad deseadas y del tiempo de almacenamiento planeado y de las variables para la formulación). En general, se usa un pH de al menos aproximadamente 6 y menor de aproximadamente 8 (y más generalmente menor de aproximadamente 7,7,

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La inmovilización de KIR2DL3 recombinante se realizó en un chip sensor CM5 (Biacore AB), usando acoplamiento de amina convencional como describe el fabricante (Biacore AB).

Se usó tampón HBS-EP (HEPES 10 mM, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, Polisorbato 20 al 0,005 % (v/v)) como tampón 5 de procesamiento y para todas las diluciones. La regeneración del chip sensor se realizó mediante un pulso corto (15 ul, Flujo 30 ul/min) de glicina-HCl 10 mM pH 1,8.

El experimento se realizó a un caudal de 10 ul/min, a 25 ºC. Los datos se analizaron usando el software Biaevaluation 4.1.

10 Se ensayaron seis lotes diferentes de anti-KIR 1-7F9 S241P expresado en células CHO, y un lote de anti-KIR 1-7F9 de tipo silvestre expresado en hibridomas. Todas las muestras se diluyeron a 100 nM en HBS-EP. Las muestras individuales se pasaron sobre el KIR2DL3 inmovilizado durante 3 minutos, seguido de una fase de disociación de 10 minutos.

15 Todas las muestras demostraron unión al KIR2DL3 inmovilizado. Las tasas de disociación de las muestras individuales se determinaron usando un modelo de Langmuir de unión 1:1. Todas las muestras demostraron tasas de disociación casi idénticas (Tabla 7).

20 Tabla 7- Tasas de disociación para 17F9 S241P

Muestra: Tasa de disociación

Anti-KIR 1-7F9 S241P CHO#1: 2,07E-05

Anti-KIR 1-7F9 S241P CHO#2: 2,24E-05

Anti-KIR 1-7F9 S241P CHO#3: 3,23E-05

Anti-KIR 1-7F9 S241P CHO#4: 2,87E-05

Anti-KIR 1-7F9 S241P CHO#5: 2,72E-05

Anti-KIR 1-7F9 S241P CHO#6: 2,32E-05

KIR 1-7F9 de tipo silvestre en hibridoma: 2,83E-05

Basándose en el patrón de unión idéntico y en las tasas de disociación, estos datos indican que no había diferencias entre el anti-KIR 1-7F9 de tipo silvestre y el anti-KIR 1-7F9 S241P con respecto a la unión a KIR2DL3.

25 Ejemplo 5 Formación de semianticuerpo reducido en 17F9 S241P

Para evaluar si la formación de semianticuerpo se reduce mediante la introducción de la mutación S241P en la secuencia de cadena pesada de 1-7F9, se realizó el siguiente experimento.

30 Se purificó la variante de IgG4 1-7F9 S241 expresada de forma recombinante en columnas de Proteína A MabSetect™ SuRe. Después de la carga, las columnas con medio se lavaron con 10 volúmenes de columna de tampón PBS y se eluyeron con glicina 100 mM, tampón NaCl 100 mM pH 3,0 seguido de intercambio del tampón en tampón PBS usando una columna de Desalado HighTrap™. Todas las operaciones se controlaron por un sistema Äktaxpress de GE Healtcare Amersham Biosciences AB.

35 La estimación de la heterogeneidad del anticuerpo y el contenido de semianticuerpos se analizaron mediante el bioanalizador Agilent 2100 usando métodos descritos en Forrer, Analytical. Biochemistry 334.1 (2004): 81 y Vasilyeva, Electrophoresis 25.21-22 (2004): 3890. Las muestras se prepararon en condiciones no reductoras con la adición de N-etilmaleimida para estabilizar los enlaces disulfuro.

40 El mutante anti-KIR 1-7F9 S241P expresado se purificó usando Proteína A y se desaló en tampón PBS (Figura 4). En la Figura 4, el material eluido de la Proteína A se anota como inicio del pico (retención (“R.”) vol -14 ml) y final del pico (R. vol -12 ml) y se almacenó en un bucle antes de la inyección en la columna de desalado. Después del desalado, se recogieron fracciones y las fracciones anotadas como A2 y A3 se reunieron y se usaron para un

45 análisis adicional.

Después de la purificación, las cantidades de semianticuerpos presentes en la composición se analizaron usando el método descrito previamente por Forrer y Vasilyeva, supra. El análisis de los semianticuerpos demuestra que la formación de semianticuerpos se suprime por la mutación S241P (véanse la Figura 5 y la Tabla 8 (mostradas más 50 adelante)). La Figura 5 presenta electroferogramas y tablas de integración procedentes de los análisis de anti-KIR(17F9) expresado en células de hibridoma (panel de la izquierda) y anti-KIR(1-7F9) expresado en células CHO K1, en el panel de la derecha. La Tabla 8 refleja las cantidades de formación de semianticuerpo detectadas tanto para el 1

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Tabla 11 Comparación de parámetros PK para antiKIR(17F9) usando el análisis NCA y métodos PK de la población. V1 = volumen central, V2 = volumen de distribución periférico, Vd = volumen de distribución basado en NCA, CL = aclaramiento, Q = aclaramiento intercompartimental.

Método: V1 (ml/kg) V2 (ml/kg) CL (ml/h/kg) Q (ml/h/kg)

NCA (valores medios): Vd=276 0,65 -

PK población compartimental: 62 181 0,64 3,8

Como se muestra en la Tabla 11, los modelos de NAC y PK de la población muestran de forma constante que el aclaramiento de anti-KIR(1-7F9) es algo superior (2-3 veces) en comparación con el aclaramiento notificado para otros anticuerpos humanos en monos. Sin embargo, como el volumen de distribución también es 2-3 veces mayor, la semivida terminal (T1/2) era de 8-11 días, lo cual está de acuerdo con las expectativas para un anticuerpo humano administrado a monos (Halpern et al., Toxicol Sci 2006; 91(2): 586-599; Gobburu et al., J Pharmacol Exp Ther 1998; 286(2): 925-930). Se observó que la exposición era proporcional a la dosis y no se observó ninguna indicación de mecanismos de saturación importantes para el aclaramiento.

Aunque algunos ejemplos muestran que los parámetros PK de mono pueden transferirse directamente a seres humanos, esto debería hacerse con precaución, ya que las diferencias entre las especies, por ejemplo, en la afinidad por FcRn, pueden provocar diferencias de especie en el aclaramiento (Lobo et al., J Pharm Sci 2004; 93: 2645-68).

Escala alométrica. Los cuatro parámetros PK estructurales obtenidos a partir de modelos PK en la población (véase anteriormente) en dos especies, es decir ratón y mono (pesos corporales de 0,025 y 2,5 kg), se usaron para establecer la escala alométrica para los seres humanos (70 kg). El parámetro PK en cuestión se representó frente al peso corporal (PC). La línea recta obtenida determina A y B en la siguiente ecuación (Lobo et al., J Pharm Sci 2004;

93: 2645-68; Tabrizi et al., "Pharmacokinetics and immunogenicity profiles for fully human monoclonal antibodies against soluble and membrane bound antigens in patients with psoriasis and melanoma," Póster en ASCPT 2004):

Aclaramiento = A* (Peso Corporal)B

Los cuatro parámetros (CL, V1, V2 y Q) se calcularon de una forma similar. Para establecer la escala del volumen de distribución, solo se consideraron V1 y V2 del modelo de ratón. El tercer compartimiento saturable asociado, por ejemplo, con la unión no específica se omitió ya que está poco documentado para la PK humana de mAc, que se cree que es lineal, incluso para concentraciones muy pequeñas

Tabla 12 Parámetros PK humanos de antiKIR(17F9) predichos a partir de la escala alométrica

Coeficientes de la escala alométrica

Parámetro PK: Humano predicho A B

Aclaramiento (CL): 0,46 ml/h/kg -0,15 0,90

V1 (volumen central): 58 ml/kg 1,8 0,98

V2 (volumen periférico): 409 ml/kg 2,15 1,25

Q (aclaramiento intercompartimental): 3,0 ml/h/kg 0,61 0,93

Solo existen unos pocos ejemplos de extrapolación entre especies de la PK de mAc usando la escala alométrica (Tabrizi et al., supra; Richter et al., Drug Metab Dispos 1999; 27: 21-5, Lin et al., J Pharmacol Exp Ther 1999; 288(1): 371-378). En general, la predicción de la PK humana usando este enfoque parece funcionar bien, aunque parece predecirse un exceso de aclaramiento (Tabrizi et al., supra; Lin et al., supra). Como ocurría en el caso de ABX-IL8, solo se usaron dos especies para la obtención de la escala alométrica para anti-KIR(1-7F9) y, formalmente, la base estadística para una línea recta que conecta dos puntos no es buena. Sin embargo, si se incluyeran más especies no necesariamente mejoraría la predicción ya que un posible valor atípico de la relación puede no reflejar la variabilidad en el parámetro sino más bien diferencias entre especies en los mecanismos de eliminación, particularmente la afinidad por el receptor FcRn. Se desconoce la afinidad de anti-KIR(1-7F9) por FcRn de ratón y mono cynomolgus y, por lo tanto, la escala alométrica debe usarse con precaución (Lobo et al., J Pharm Sci 2004;

93: 2645-68).

En conclusión, tras la predicción de la PK humana, como anti-KIR(1-7F9) es una IgG completamente humana, es de esperar que el anticuerpo presente propiedades farmacocinéticas similares a la IgG endógena en seres humanos. Basándose en la escala alométrica y el aclaramiento en mono, se estimó que el aclaramiento en seres humanos era

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comparable in vivo para seres humanos y ratones transgénicos para KIR. De esta manera, aunque el transcurso en el tiempo de las concentraciones en plasma en seres humanos será diferente de la observada en ratones, el modelo PK/PD puede usarse para predecir la saturación para una concentración en plasma dada en seres humanos en un punto de tiempo dado después de la dosificación.

5 Se han realizado comparaciones similares de afinidades in vitro-in vivo de forma satisfactoria comparando el mAc antiCD11a hu1124 en chimpancés y en seres humanos (Bauer et al., J Pharmacokinet Biopharm 1999; 27: 397-420).

Aplicación del modelo final, predicción de la saturación máxima y duración de la saturación. El modelo PK/PD

10 predicho final para anti-KIR(1-7F9) en seres humanos se usó para realizar simulaciones de porcentaje de ocupación de receptores frente al tiempo para diferentes dosis de anti-KIR(1-7F9) en seres humanos y deducir la ocupación máxima de KIR y la duración de la ocupación (Tabla 14). Para no infraestimar la activación potencial, se eligieron estimaciones del modelo para predecir la máxima activación potencial, es decir, el modelo se basa en: 1) la máxima exposición potencial predicha a partir de modelos PK, 2) una alta relación de afinidad entre la PK y la saturación

15 (baja Kd) y 3) el porcentaje de ocupación de KIR como medida de la activación máxima potencial de células NK.

Se identificó que una dosis que, según se había predicho, causaba concentraciones en plasma detectables de antiKIR(1-7F9) en seres humanos, así como una saturación medible pero no completa, era una dosis de 0,0003 mg/kg y se sugirió como dosis de partida en el ensayo FHD.

20 Tabla 14 Saturación de KIR predicha en células NK, duración de la misma y concentración en plasma predicha en seres humanos a diferentes dosis IV de antiKIR(17F9)

Dosis % de receptores n.º de días Concentración en plasma (mg/kg) KIR saturados* saturación >95 % de antiKIR(17F9) µg/ml

Unido Máx. Después Cmáx Después de 4 semanas de 4 semanas

0,0003: 61 <20 0 0,007 0,001

0,001: 85 <20 0 0,025 0,004

0,01: 98 37 <1 0,25 0,04

0,1: 100 85 9 2,5 0,4

0,3: 100 95 25 7,4 1,3

1,0: 100 98 56 25 4

1,5: 100 99 63 37 6

3,0: 100 99 84 74 12

* se estima que el límite de cuantificación inferior es de aproximadamente un 20 % en el ensayo de ocupación

Por lo tanto, se ha desarrollado un modelo de simulación para predecir la relación entre la dosis de anti-KIR(1-7F9),

25 el perfil de concentración en plasma resultante y la ocupación del receptor KIR en seres humanos. Este modelo se construyó combinando un modelo PK típico para IgG en seres humanos con un modelo para la relación entre concentración en plasma y ocupación del receptor KIR. El último modelo se desarrolló usando datos de un estudio en ratones KIR-tgII.

30 Durante el desarrollo del modelo se usaron principios prudentes, con la intención de predecir la máxima ocupación potencial. Basándose en este modelo, se predijo que una dosis de 0,0003 mg/kg probablemente produce una saturación detectable (>20 %), pero no completa (<95 %) en seres humanos. Es de esperar que esta dosis dé como resultado una ocupación de aproximadamente un 60 % de KIR a Cmáx.

35 Ejemplo 7 Estudio clínico de LMA

Se realizó un ensayo de aumento de una sola dosis en pacientes ancianos (>60 años) con LMA, que estaban en la primera remisión completa después de la quimioterapia de inducción y consolidación, y no eran elegibles para un trasplante de médula ósea. Se aplicó un diseño estándar 3+3, y se planeaba explorar un total de 7 niveles de

40 dosificación: las dosis variaban de 0,0003 mg/kg a 3 mg/kg. Después de la dosificación, en los pacientes se supervisó la seguridad, PK y ocupación de KIR hasta que ya no se detectó ocupación de KIR.

También se realizó un ensayo de extensión. Los pacientes con LMA que finalizaron el ensayo de aumento de la dosis y que aún tenían una remisión completa pudieron participar en el ensayo de extensión, en el que los pacientes

45 pudieron recibir la dosis hasta 6 meses en una base mensual. Los pacientes se dosificaron con la misma dosis que recibieron en el ensayo previo.

Pacientes, materiales y métodos

50 En los dos ensayos, para los estudios se eligieron pacientes ancianos (>60 años de edad) con LMA en su primera remisión completa (CR) y que no podían elegirse para someterse a un trasplante. En la selección en ensayo de

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C 40°C: Mes

0: 1 3

Formulación 1: 7,03 7,07 7,06

Formulación 2: 7,04 7,04 7,04

Formulación 3: 7,05 7,02 7,03

Formulación 4: 7,05 7,02 7,02

Formulación 5: 7,05 7,01 7,05

Tabla 23 Aspecto. Puntuación: siendo 0 la peor; indicando 1 una formulación con propiedades posiblemente adecuadas para un producto farmacéutico; e indicando 2 una formulación de alta calidad, adecuada para un producto farmacéutico.

A – 5 ºC: Mes

0: 3 6

Formulación 1: 2 2 2

Formulación 2: 2 2 2

Formulación 3: 2 2 2

Formulación 4: 2 2 2

Formulación 5: 2 2 2

B – 25 ºC: Mes

0: 3 6

Formulación 1: 2 2 2

Formulación 2: 2 2 2

Formulación 3: 2 2 2

Formulación 4: 2 2 2

Formulación 5: 2 2 2

C – 40 ºC: Mes

0: 1 2 3

Formulación 1: 2 2 2 2

Formulación 2: 2 2 2 2

Formulación 3: 2 2 2 2

Formulación 4: 2 2 2 2

Formulación 5: 2 2 2 2

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Tabla 24 Pureza por GPHPLC, determinada como porcentaje de monómero.

A – 5 ºC: Mes

0: 3 6

Formulación 1: 94 94 95

Formulación 2: 94 95 94

Formulación 3: 94 95 95

Formulación 4: 94 95 93

Formulación 5: 94 94 94

B – 25 ºC: Mes

0: 1 3 6

Formulación 1: 94 93 94 91

Formulación 2: 94 94 94 91

Formulación 3: 94 93 94 91

Formulación 4: 94 93 94 91

Formulación 5: 94 94 94 89

C – 40 ºC: Mes

0: 1 2 3

Formulación 1: 94 89 82 74

Formulación 2: 94 89 82 76

Formulación 3: 94 88 83 76

Formulación 4: 94 86 79 74

Formulación 5: 94 91 80 74

Tabla 25 Bioactividad (unidades arbitrarias)

A – 5 ºC: Mes

0: 3 6

Form. 1: 8,78 8,19 8,70

Form. 2: 8,88 9,99 10,10

Form. 3: 9,48 9,38 9,30

Form. 4: 9,57 9,45 8,00

Form. 5: 9,91 9,50 8,60

B – 25 ºC: Mes

0: 1 3 6

Form. 1: 8,78 8,90 8,60 7,50

Form. 2: 8,88 9,46 7,99 7,00

Form. 3: 9,48 9,32 8,56 7,30

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Claims

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