ES2559779T3 - Compuestos de pirimidotiofeno - Google Patents

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Martin James Drysdale
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Allan Jordan
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Abstract

El uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal, N-óxido, hidrato o solvato del mismo en la preparación de una composición para usar en la inhibición de actividad HSP90 in vitro o in vivo:**Fórmula** en donde R2 es un grupo de fórmula (IA): -(Ar1)m-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA) en donde Ar1 es un radical fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, Alk1 y Alk2 son radicales alquileno C1-C3 o alquenileno C2-C3 divalentes opcionalmente sustituidos, m, p, r y s son independientemente 0 o 1, Z es -O-, -S-,-(C>=O)-, -(C>=S)-, -SO2-, -C(>=O)O-, -C(>=O)NRA-, -C(>=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC(>=O)-, -NRASO2- o - NRA- en donde -RA es hidrógeno o alquilo C1-C6, y Q es hidrógeno o un radical fenilo o cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido o un radical heterocíclico; R3 es hidrógeno, un sustituyente opcional, o un radical alquilo (C1-C6), fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y R4 es (i) un grupo éster carboxílico de fórmula -COORC en donde RC es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, o un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo aril(alquil C1-C6)- o heteroaril(alquil C1-C6)- opcionalmente sustituido o un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o (ii) grupo carboxamida de fórmula - CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de fórmula -SO2NRB(Alk)nRA en donde Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente opcionalmente sustituido, n es 0 o 1, RB es hidrógeno o un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, RA es hidrógeno, hidroxi o carbocíclico o heterocíclico opcionalmente sustituido, o RA y RB tomados juntos con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo morfolino, piperidinilo o piperazinilo que puede estar sustituido opcionalmente en uno o más átomos de C o N del anillo; y en donde el término "opcionalmente sustituido" significa sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de alquilo (C1-C6), alcoxi (C1-C6), hidroxi, hidroxialquilo (C1-C6), mercapto, mercaptoalquilo (C1-C6), alquil (C1-C6) tio, halo (que incluye fluoro y cloro), trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, fenilo, -COOH, -COORA, - CORA, -SO2RA, -CONH2, -SO2NH2,-CONHRA, -SO2NHRA, -CONRARB, -SO2NRARB, -NH2, -NHRA, -NRARB, -OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHSO2ORA, -NRBSO2ORA, -NHCONH2, - NRACONH2, -NHCONHRB, -NRACONHRB, -NHCONRARB o -NRACONRARB en donde RA y RB son independientemente un grupo alquilo (C1-C6); y en donde el término "sustituyente opcional" significa un sustituyente especificado anteriormente en la definición de "opcionalmente sustituido"; y en donde el término "heteroarilo" significa tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, benzimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, benzisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, benzisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo o indazolilo; y en donde el término heterocíclico significa heteroarilo o piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo o piperazinilo.

Description

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DESCRIPCION
Compuestos de pirimidotiofeno
Esta invencion se refiere a compuestos de tieno[2,3-d]pirimidina bidclicos sustituidos (en adelante denominados como “pirimidotiofeno”) que tienen actividad inhibidora HSP90, a estos compuestos para el uso en medicina, en relacion con enfermedades que son responsables de la inhibicion de la actividad HSP90 tales como canceres, y a composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos.
Fundamento de la invencion
Las chaperonas moleculares mantienen el plegado y conformacion apropiada de protemas y son cruciales en la regulacion del equilibrio entre smtesis y degradacion de protemas. Se ha mostrado que son importantes en la regulacion de muchas funciones celulares importantes, tales como proliferacion y apoptosis celular (Jolly y Morimoto, 2000; Smith et al., 1998; Smith, 2001).
Protemas de choque termico (PCT)
La exposicion de las celulas a un numero de estreses ambientales, que incluyen choque termico, alcoholes, metales pesados y estres oxidativo, da por resultado la acumulacion celular de un numero de chaperonas, normalmente conocidas como protemas de choque termico (PCT). La induccion de PCT protege la celula frente a un ataque de estres inicial, mejora la recuperacion y lleva al mantenimiento de un estado tolerante al estres. Tambien se ha visto claro, sin embargo, que ciertas PCT pueden jugar tambien un papel de chaperona molecular principal bajo condiciones libres de estres, normales, regulando el plegado, degradacion, localizacion y funcion correctos, de una lista creciente de protemas celulares importantes.
Un numero de familias multigen de PCT existen, con productos genicos individuales que vanan en la expresion celular, la funcion y la localizacion. Se clasifican segun el peso molecular, por ejemplo, HSP70, HSP90 y HSP27. Varias enfermedades en seres humanos pueden adquirirse como un resultado del mal plegado de protemas (revisado por Tytell et al., 2001; Smith et al., 1998). Por tanto el desarrollo de terapias que interrumpan la maquinaria de chaperona molecular puede probar que son beneficiosos. En algunos procesos (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, enfermedades de priones y enfermedad de Huntington), las protemas mal plegadas pueden provocar la agregacion de protemas dando por resultado trastornos neurodegenerativos. Ademas, las protemas mal plegadas pueden dar por resultado la perdida de la funcion de protema tipo salvaje, llevando a desregulado de las funciones moleculares y fisiologicas en la celula.
Las PCT han estado implicadas tambien en el cancer. Por ejemplo, hay evidencia de expresion diferencial de PCT que pueden relacionarse con la etapa de la progresion tumoral (Martin et al., 2000; Conroy et al., 1996; Kawanishi et al., 1999; Jameel et al; 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al., 1991). Como resultado de la implicacion de HSP90 en varias rutas oncogenicas cnticas y el descubrimiento de que ciertos productos naturales con actividad anti- cancengena estan orientados a esta chaperona molecular, se ha desarrollado el fascinante nuevo concepto de que la inhibicion de la funcion PCT puede ser util en el tratamiento del cancer. El primer inhibidor de chaperona molecular se somete habitualmente a ensayos clmicos.
HSP90
El HSP90 constituye aproximadamente 1-2% de la protema celular total, y esta presente normalmente en la celula como un dfmero en asociacion con uno de un numero de otras protemas (vease, por ejemplo, Pratt, 1997). Es esencial para la viabilidad celular y muestra funciones duales de chaperona (Young et al., 2001). Juega un papel principal en la respuesta al estres celular interactuando con muchas protemas despues de que su conformacion nativa se haya alterado mediante diversos estreses ambientales, tales como choque termico, asegurando el plegado adecuado de la protema y evitando la agregacion no espedfica (Smith et al., 1998). Ademas, recientes resultados sugieren que HSP90 puede jugar tambien un papel en el tamponado frente a los efectos de la mutacion, presumiblemente corrigiendo el plegado inapropiado de protemas mutantes (Rutherford y Lindquist, 1998). Sin embargo, HSP90 tambien tiene un importante papel regulador. Bajo condiciones fisiologicas normales, junto con su homologo de retmulo endoplasmico GRP94, SHP90 juega un papel de mantenimiento en la celula, manteniendo la estabilidad conformacional y la maduracion de varias protemas cliente claves. Estas pueden subdividirse en tres grupos: (a) receptores de hormona esteroidea, (b) Ser/Thr o tirosina quinasas (por ejemplo, ERBB2, RAF-1, CDK4 y LCK), y (c) un conjunto de protemas aparentemente no relacionadas, por ejemplo, p53 mutante y la subunidad catalftica de telomerasa hTERT. Todas estas protemas juegan papeles reguladores clave en muchos procesos fisiologicos y bioqmmicos en la celula. Nuevas protemas cliente de HSP90 se estan identificando continuamente.
La familia HSP90 altamente conservada en seres humanos consiste en cuatro genes, espedficamente las isoformas citosolicas HSP90a y HSP90p (Hickey et al., 1989), GRP94 en el retmulo endoplasmatico (Argon et al., 1999) y HSP75/TRAP1 en la matriz mitocondrial (Felts et al, 2000). Se cree que todos los miembros de la familia tienen un modo de accion similar, pero enlazan con diferentes protemas cliente dependiendo de su localizacion en la celula. Por ejemplo, ERBB2 se conoce por ser una protema cliente espedfica de GRP94 (Argon et al., 1999) y el receptor
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del factor de necrosis tumoral tipo 1 (TNFR1) y RB se ha mostrado que ambos son clientes de TRAP1 (Song et al., 1995; Chen et al., 1996).
HSP90 participa en una serie de interacciones complejas con un intervalo de protemas cliente y reguladoras (Smith, 2001). Aunque los detalles moleculares precisos permanecen pendientes de elucidar, los estudios bioqmmicos y cristalograficos de rayos X (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997) llevados a cabo durante los ultimos anos han proporcionado conocimientos cada vez mas detallados en la funcion chaperona de HSP90.
Despues de la anterior controversia en este tema, esta ahora claro que HSP90 es una chaperona molecular dependiente de ATP (Prodromou et al, 1997), con la dimerizacion de los dominios de union de nucleotidos siendo esencial para la hidrolisis de ATP, que es a su vez esencial para la funcion chaperona (Prodromou et al, 2000a). La union de ATP da por resultado la formacion de una estructura dimerica toroidal en que los dominios N terminales se ponen en contacto mtimo con cada uno de los otros dando por resultado un cambio conformacional conocido como el “mecanismo de sujecion” (Prodromou y Pearl, 2000b).
Inhibidores de HSP90 conocidos
La primera clase de inhibidores de HSP90 que se descubrio fue la clase benzoquinona ansamicina, que incluye los compuestos herbimicina A y geldanamicina. Se mostro que invertfan el fenotipo maligno de los fibroblastos transformados por el oncogen v-Src (Uehara et al., 1985) y posteriormente mostraban potente actividad antitumoral en modelos animales tanto in vitro (Schulte et al., 1998) como in vivo (Supko et al., 1995).
Los estudios de inmunoprecipitacion y matriz de afinidad han mostrado que el mecanismo principal de accion de la geldanamicina implica unirse a HSP90 (Whitesell et al., 1994; Schulte y Neckers, 1998). Ademas, los estudios cristalograficos de rayos X han mostrado que la geldanamicina compite en el sitio de union de ATP e inhibe la actividad ATPasa intrmseca de HSP90 (Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998). Esto a su vez evita la formacion de complejos de HSP90 multimericos maduros capaces de chaperonizar protemas cliente. Como resultado, las protemas cliente estan orientadas a la degradacion por medio de la ruta de ubiquitina proteosoma. 17- Alilamio, 17-desmetoxigeldanamicina (17AAG) retiene la propiedad de la inhibicion de HSP90 dando por resultado la disminucion de protema cliente y la actividad antitumoral en los modelos de cultivo celular y xenoinjerto (Schulte et al, 1998; Kelland et al, 1999), aunque tiene significativamente menos hepatotoxicidad que la geldanamicina (Page et al, 1997). 17AAG esta siendo evaluada actualmente en ensayos clmicos en Fase I.
El radicicol es un antibiotico macrodclico mostrado para invertir el fenotipo maligno de fibroblastos transformados por v-Src y v-Ha-Ras (Kwon et al, 1992; Zhao et al, 1995). Se mostro que degradaba un numero de protemas de senalizacion como una consecuencia de la inhibicion de HSP90 (Schulte et al., 1998). Los datos cristalograficos de rayos X confirmaron que el radicicol tambien enlaza con el dominio N terminal de HSP90 e inhibe la actividad ATPasa intrmseca (Roe et al., 1998). El radicicol carece de actividad antitumoral in vivo debido a la naturaleza qrnmica inestable del compuesto.
Los antibioticos de cumarina se conocen por inhibir la ADN girasa bacteriana en un sitio de union a ATP homologo al del HSP90. La cumarina, novobiocina, se mostro que enlazaba al extremo carboxi de HSP90, es decir, en un sitio diferente al ocupado por las benzoquinona ansamicinas y radicicol que enlazan al extremo N (Marcu et al., 2000b). Sin embargo, esto aun dio por resultado la inhibicion de la funcion HSP90 y la degradacion de un numero de protemas de senalizacion chaperonadas con HSP90 (Marcu et al., 2000a). La geldanamicina no puede unirse a HSP90 tras la novobiocina; esto sugiere que alguna interaccion entre los dominios N y C terminales debe existir y es coherente con la vista de que ambos sitios son importantes para las propiedades de chaperona HSP90.
Un inhibidor HSP90 con base de purina, PU3, se ha mostrado que da por resultado la degradacion de moleculas de senalizacion, incluyendo ERBB2, y que provoca la detencion del ciclo celular y la diferenciacion en las celulas de cancer de mama (Chiosis et al., 2001).
Las publicaciones de patente WO 2004/050087 y WO 2004/056782 se refieren a clases conocidas de derivados de pirazol que son inhibidores de HSP90.
HSP90 como una diana terapeutica
Debido a su implicacion en la regulacion de un numero de rutas de senalizacion que son crucialmente importantes en la conduccion del fenotipo de un tumor, y el descubrimiento de que ciertos productos naturales bioactivos ejercen sus efectos por medio de actividad HSP90, la chaperona molecular HSP90 se esta evaluando actualmente como una nueva diana para el desarrollo de farmaco anticancengeno (Neckers et al., 1999).
El mecanismo predominante de accion de la geldanamicina, 17AAG, y el radicicol implica la union a HSP90 al sitio de union de aTp situado en el dominio N terminal de la protema, que lleva a la inhibicion de la actividad ATPasa intrmseca de HSP90 (vease, por ejemplo, Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997; Panaretou et al., 1998).
La inhibicion de la actividad ATPasa de HSP90 evita el reclutamiento de co-chaperonas y estimula la formacion de un tipo de heterocomplejo de HSP90 a partir del cual estas protemas cliente se dirigen para la degradacion por medio de la ruta de ubiquitina proteosoma (vease, por ejemplo, Neckers et al., 1999; Kelland et al., 1999).
El tratamiento con inhibidores de HSP90 lleva a la degradacion selectiva de protemas importantes implicadas en la 5 proliferacion celular, regulacion del ciclo celular y apoptosis, procesos que son fundamentalmente importantes en el cancer.
La inhibicion de la funcion de HSP90 se ha mostrado que provoca la degradacion selectiva de importantes protemas de senalizacion implicadas en la proliferacion celular, la regulacion del ciclo celular y la apoptosis, procesos que son fundamentalmente importantes y que se desregulan normalmente en el cancer (vease, por ejemplo, Hostein et al., 10 2001). Una razon atractiva para el desarrollo de farmacos frente a esta diana para el uso en la clmica es que
disminuyendo simultaneamente protemas asociadas con el fenotipo transformado, se puede obtener un efecto antitumoral fuerte y alcanzar una ventaja terapeutica contra el cancer frente a celulas normales. Estos sucesos corriente abajo de inhibicion de HSP90 se cree que son responsables de la actividad antitumoral de inhibidores de HSP90 en modelos de cultivo celular y animal (vease, por ejemplo, Schulte et al., 1998; Kelland et al., 1999).
15 Breve descripcion de la invencion
La presente invencion se refiere a una clase de compuestos de tieno[2,3-d]pirimidina sustituidos (denominados en esta memoria como pirimidotiofenos) para el uso como inhibidores de HSp90, por ejemplo para la inhibicion de proliferacion de celulas cancengenas. Un nucleo de anillo de pirimidotiofeno con sustitucion aromatica en un atomo de carbono anular son caractensticas que caracterizan el principio de los compuestos con los que tiene que ver la 20 invencion.
Descripcion detallada de la invencion
En un amplio aspecto la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de formula (I), o una sal, N-oxido, hidrato o solvato del mismo en la preparacion de una composicion para la inhibicion de la actividad de HSP90 in vitro o in vivo:
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en donde
R2 es un grupo de formula (IA):
-(Ar1)m-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA)
R2 es un grupo de formula (IA):
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-(Ar1)m-(Alk1)p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA)
en donde
Ar1 es un radical fenilo o heteroarilo sustituido,
Alk1 y Alk2 son radicales alquileno C1-C3 o alquenileno C2-C3 divalentes opcionalmente sustituidos, m, p, r y s son independientemente 0 o 1,
35 Z es -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -SO2-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC(=O)-, -NRASO2- o - NRa- en donde RA es hidrogeno o alquilo C1-C6, y
Q es hidrogeno o un radical fenilo o cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido o un radical heterodclico;
R3 es hidrogeno, un sustituyente opcional, o un radical alquilo (C1-C6), fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y
R4 es (i) un grupo ester carboxflico de formula -COORC en donde RC es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, o 40 un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo aril(alquil C1-C6)- o heteroaril(alquil C1-C6)- opcionalmente sustituido o un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o (ii) grupo carboxamida de formula - CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de formula -SO2NRB(Alk)nRA en donde
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Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente opcionalmente sustituido, n es 0 o 1,
Rb es hidrogeno o un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6,
Ra es hidrogeno, hidroxi o carbodclico o heterodclico opcionalmente sustituido,
o RA y Rb tomados juntos con el nitrogeno al que estan unidos forman un anillo morfolino, piperidinilo o piperazinilo que puede estar sustituido opcionalmente en uno o mas atomos de C o N del anillo;
y en donde el termino “opcionalmente sustituido” significa sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de alquilo (Ci-Ca), alcoxi (Ci-Ca), hidroxi, hidroxialquilo (Ci-Ce), mercapto, mercaptoalquilo (Ci-Ce), alquil (Ci-Ce) tio, halo (que incluye fluoro y cloro), trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, fenilo, -COOH, -COORA, - CORA, -SO2RA, -CONH2, -SO2NH2, -CONHRA, -SO2NHRA, -CONRaRb, -SO2NRARB, -NH2, -NHRa, -NRaRb, -
OCONH2, -OCONHRa, -OCONRaRb, -NHCORa, -NHCOORa, -NRbCOORa, -NHSO2ORA, -NRBSO2ORA, -NHCONH2, -NRaCONH2, -NHCONHRb, -NRaCONHRb, -NHCONRaRb o -NRaCONRaRb en donde RA y RB son independientemente un grupo alquilo (Ci-Ca);
y en donde el termino “sustituyente opcional” significa un sustituyente especificado anteriormente en la definicion de “opcionalmente sustituido”;
y en donde el termino “heteroarilo” significa tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, benzimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, benzisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, benzisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo o indazolilo;
y en donde el termino heterodclico significa heteroarilo o piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo o piperazinilo.
En otro amplio aspecto, la invencion proporciona compuestos para el uso en el tratamiento de enfermedades que son responsables de la inhibicion de la actividad de HSP90 en mairnferos, que comprende administrar al mairnfero una cantidad de un compuesto como se define en la reivindicacion i efectiva para inhibir dicha actividad de HSP90.
Los compuestos para el uso de la invencion es aplicable al tratamiento de las enfermedades en que esta implicada la actividad de HSP90, que incluye el uso para la inmunosupresion o el tratamiento de enfermedad viral, enfermedades inflamatorias tales como artritis reumatoides, asma, esclerosis multiple, diabetes tipo I, lupus, psoriasis y enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedad relacionada con angiogenesis por fibrosis qrnstica tal como retinopatfa diabetica, hemangiomas y endometriosis; o para la proteccion de celulas normales frente a la toxicidad inducida por quimioterapia; o enfermedades donde el fallo para experimentar apoptosis es un factor subyacente; o la proteccion de lesion isquemica por hipoxia debido a la elevacion de Hsp70 en el corazon y el cerebro; tembladera/CJD, enfermedad de Huntington o Alzheimer. Los compuestos de la presente invencion para el uso en el tratamiento de cancer estan especialmente indicados.
Las publicaciones WO 0i/62233, Transition Metal Chemistry Vol. i9, i994, paginas 335-339, Journal of Heterocyclic Chemistry Vol. 30, i993, paginas i065-i072, y Synthesis num. 5, i983, paginas 402-404, describen compuestos espedficos que caen en la formula (I) anterior, o se refieren a clases de compuestos que abarcan algunos compuestos de formula (I). Sin embargo, la mayona de los compuestos de formula (I) con los que los amplios aspectos anteriores de la invencion tienen que ver se creen nuevos por su propio derecho. La invencion incluye dichos nuevos compuestos, y en particular compuestos de formula (I), y sales, N-oxidos, hidratos o solvatos de los mismos:
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en donde
R2 es un grupo de formula (IA):
-(Ari )m-(Alki )p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA)
en donde
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Ar1 es un radical fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido,
Alk1 y Alk2 son radicales alquileno C1-C3 o alquenileno C2-C3 divalentes opcionalmente sustituidos, m, p, r y s son independientemente 0 o 1,
Z es -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -SO2-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, NRAC(=O)-, -NRASO2- o - NRa- en donde RA es hidrogeno o alquilo C1-C6, y
Q es hidrogeno o un radical fenilo o cicloalquilo C3-C8 o radical heterodclico opcionalmente sustituidos;
R3 es hidrogeno, un sustituyente opcional, o un radical alquilo (C1-C6), arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y
R4 es (i) un grupo ester carboxflico de formula -COORC en donde RC es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, o un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo aril(alquil C1-C6)- o heteroaril(alquil C1-C6) opcionalmente sustituido o un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o (ii) grupo carboxamida de formula - CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de formula -SO2NRB(Alk)nRA en donde
Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente opcionalmente sustituido,
n es 0 o 1,
Rb es hidrogeno o un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6,
Ra es hidrogeno, hidroxi o carbodclico o heterodclico opcionalmente sustituido,
o RA y Rb tomados juntos con el nitrogeno al que estan unidos forman un anillo morfolino, piperidinilo o piperazinilo que puede estar opcionalmente sustituido en uno o mas atomos de C o N del anillo;
con tal que (i) R3 no sea -NH2 y (ii) cuando R4 es -COOCH3 y R3 es hidrogeno entonces R2 no es -NH2, etilamino, dietilamino, fenilamino, -N(Ph)(C2H5) en donde Ph es fenilo, pirrolidin-1-ilo o morfolin-4-ilo y (iii) cuando R4 es - CONH2 y R3 es hidrogeno entonces R2 no es -NH2;
y en donde los terminos “opcionalmente sustituido”, “sustituyente opcional”, “heteroarilo” y “heterodclico” se definen anteriormente.
Como se usa en esta memoria:
El termino “grupo carboxilo” se refiere a un grupo de formula -COOH;
El termino “grupo ester carboxilo” se refiere a un grupo de formula -COOR, en donde R es un radical real o teoricamente derivado del compuesto hidroxilo ROH; y
El termino “grupo carboxamida” se refiere a un grupo de formula -CONRaRb, en donde -NRaRb es un grupo amino (que incluye amino dclico) real o teoricamente derivado de amoniaco o la amina HNRaRb,
El termino “grupo sulfonamida” se refiere a un grupo de formula -SO2NRaRb, en donde -NRaRb es un grupo amino (que incluye amino dclico) real o teoricamente derivado de amoniaco o la amina HNRaRb.
Como se usa en esta memoria, el termino “alquilo (Ca-Cb)” en donde a y b son numeros enteros se refiere a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b atomos de carbono. De este modo cuando a es 1 y b es 6, por ejemplo, el termino incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo y n-hexilo.
Como se usa en esta memoria, el termino “radical alquileno (Ca-Cb) divalente” en donde a y b son numeros enteros se refiere a una cadena hidrocarbonada saturada que tiene de a a b atomos de carbono y dos valencias insatisfechas.
Como se usa en esta memoria el termino “alquenilo (Ca-Cb)” en donde a y b son numeros enteros se refiere a un resto alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene de a a b atomos de carbono que tiene al menos un doble enlace de estequiometria E o Z donde sea aplicable. El termino incluye, por ejemplo, vinilo, alilo, 1- y 2-butenilo y 2- metil-2-propenilo.
Como se usa en esta memoria el termino “radical alquenileno (Ca-Cb) divalente” se refiere a una cadena de hidrocarburo que tiene de a a b atomos de carbono, al menos un doble enlace, y dos valencias insatisfechas.
Como se usa en esta memoria el termino “cicloalquilo” se refiere a un radical carbodclico saturado que tiene de 3-8 atomos de carbono e incluye, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
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Como se usa en esta memoria el termino “cidoalquenilo” se refiere a un radical carbodclico que tiene de 3-8 atomos de carbono que contiene al menos un doble enlace, e incluye, por ejemplo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y ciclooctenilo.
Como se usa en esta memoria, el termino “arilo” se refiere a un radical aromatico mono, bi o tridclico. Son ilustrativos de dichos radicales fenilo, bifenilo y naftilo.
Como se usa en esta memoria el termino “carbodclico” se refiere a un radical dclico cuyos atomos del anillo son todos carbonos, e incluye radicales arilo monodclico, cicloalquilo y cicloalquenilo.
Como se usa en esta memoria el termino “heteroarilo” se refiere a un radical aromatico mono, bi o tridclico que contiene uno o mas heteroatomos seleccionados de S, N y O. Son ilustrativos de dichos radicales tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, benzimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, benzisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, benzisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo e indazolilo.
Como se usa en esta memoria el termino no cualificado “heterociclilo” o “heterodclico” incluye “heteroarilo” como se define anteriormente, y en particular se refiere a un radical no aromatico mono, bi o tridclico que contiene uno o mas heteroatomos seleccionados de S, N y O, y a grupos que consisten en un radical no aromatico monodclico que contiene uno o mas heteroatomos que esta unido de forma covalente a otro radical tal o a un radical carbodclico monodclico. Son ilustrativos de dichos radicales los grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, morfolinilo, piperazinilo, indolilo, morfolinilo, benzofuranilo, piranilo, isoxazolilo, benzimidazolilo, metilenodioxifenilo, etilenodioxifenilo, maleimido y succinimido.
A menos que se especifique otra cosa en el contexto en que se da, el termino “sustituido” como se aplica a cualquier resto en esta memoria significa sustituido con al menos un sustituyente, por ejemplo seleccionado de alquilo (Ci-Ca), alcoxi (Ci-Ca), hidroxi, hidroxialquilo (Ci-Ca), mercapto, mercaptoalquilo (Ci-Ca), alquil (Ci-Ca) tio, halo (que incluye fluoro y cloro), trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, fenilo, -CoOh, -COORa, -CORa, -SO2RA, - CONH2, -SO2NH2, -CONHRa, -SO2NHRA, -CONRaRb, -SO2NRARB, -NH2, -NHRa, -NRARB, -OCONH2, -OCONHRa, -
OCONRaRb,
-NHCOR
A
NHCONHRB, -NRaCONHRb,
-NHCOOR
A
-NHCONRaRb o
-nrbcoora,
-NHSO2OR"
-NRBSO2ORA,
-NHCONH2, -NRaCONH2;
A A B A B
-NR CONR R en donde R y R son independientemente un grupo
alquilo (Ci-Ca). Un “sustituyente opcional” puede ser uno de los grupos sustituyentes precedentes.
Como se usa en esta memoria el termino “sal” incluye sales de adicion de base, de adicion de acido y cuaternarias. Los compuestos de la invencion que son acidos pueden formar sales, que incluyen sales farmaceuticamente o veterinariamente aceptables, con bases tales como hidroxidos de metal alcalino, por ejemplo, hidroxidos de sodio y potasio; hidroxidos de metal alcalinoterreo, por ejemplo, hidroxidos de calcio, bario y magnesio; con bases organicas por ejemplo, N-etilpiperidina, dibencilamina y similares. Los compuestos (I) que son basicos pueden formar sales, que incluyen sales farmaceuticamente o veterinariamente aceptables con acidos inorganicos, por ejemplo, con acidos hidrohalicos tales como acidos clorhndrico o bromhndrico, acido sulfurico, acido mtrico o acido fosforico y similares, y con acidos organicos por ejemplo, con acidos acetico, tartarico, sucdnico, fumarico, maleico, malico salidlico, dtrico, metanosulfonico y p-toluensulfonico y similares.
Para una revision en sales adecuadas, vease Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use por Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).
El termino “solvato” se usa en esta memoria para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invencion y una cantidad estequiometrica de una o mas moleculas de disolvente farmaceuticamente aceptable, por ejemplo, etanol. El termino “hidrato” se emplea cuando dicho disolvente es agua.
Los compuestos con los que tiene que ver la invencion que pueden existir en una o mas formas estereoisomericas, por la presencia de atomos asimetricos o restricciones rotacionales, pueden existir como un numero de estereoisomeros con estereoqmmica R o S en cada centro quiral o como atropisomeros con estereoqmmica R o S en cada eje quiral. La invencion incluye todos los enantiomeros y diastereoisomeros dichos y mezclas de los mismos.
Los asf llamados “pro-farmacos” de los compuestos de formula (I) que pueden tener poca o ninguna actividad farmacologica por si mismos pueden, cuando se administran en o sobre el cuerpo, convertirse en compuestos de formula (I) que tienen la actividad deseada, por ejemplo, por escision hidrolttica. Informacion adicional en el uso de profarmacos puede encontrarse en Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. i4, ACS Symposium Series (T. Higuchi y W. Stella) y Bioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, i987 (ed. E.B. Roche, American Pharmaceutical Association).
Los profarmacos pueden, por ejemplo, producirse sustituyendo funcionalidades apropiadas presentes en los compuestos de formula (I) con ciertos restos conocidos por los expertos en la tecnica como “pro-restos” como se describe, por ejemplo, en Design of Prodrugs de H. Bundgaard (Elsevier, i985).
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Los metabolitos de compuestos de formula (I), es dedr, compuestos formados in vivo por la administracion del farmaco, incluyen
(i) donde el compuesto de formula (I) contiene un grupo metilo, un derivado hidroximetilo del mismo (-CH3 -> - CH2OH):
(ii) donde el compuesto de formula (I) contiene un grupo alcoxi, un derivado hidroxi del mismo (-OR -> -OH);
(iii) donde el compuesto de formula (I) contiene un grupo amino terciario, un derivado amino secundario del mismo (- NR1R2-> -NHR1 o -NHR2);
(iv) donde el compuesto de formula (I) contiene un grupo amino secundario, un derivado primario del mismo (-NHR1 - > -NH2);
(v) donde el compuesto de formula (I) contiene un resto fenilo, un derivado fenol del mismo (-Ph -> -PhOH); y
(vi) donde el compuesto de formula (I) contiene un grupo amida, un derivado de acido carboxflico del mismo (- CONH2 -> -COOH).
El radical R2
Como se expone, R2 es un grupo de formula (IA):
-(Ar1 )m-(Alk1 )p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA)
como se define en la reivindicacion 1.
Cuando esta presente en el radical R2,
Ar1 puede ser, por ejemplo, un anillo fenilo o piridilo. Actualmente se prefiere que Ar1, cuando esta presente, por un anillo fenilo;
Alk1 y Alk2 pueden ser, por ejemplo, radicales divalentes sustituidos opcionalmente seleccionados de -CH2, CH2CH2- o -CH=CH-. Sustituyentes opcionales en Alk1 y Alk2 incluyen, por ejemplo mono o di(alquil C1-C3)amino y alcoxi C1-
C3; y
Z puede ser, por ejemplo, -O- o -NH-; y Q es hidrogeno.
En una subclase sencilla de compuestos con los que tiene que ver la invencion, m es 1 y cada uno de p, r y s es 0, y Q es hidrogeno, de manera que R2 es fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido. En dichos casos, R2 puede ser, por ejemplo, fenilo, 2- o 3-tienilo, 2- o 3-furanilo, 2-, 3- o 4-piridinilo, morfolinilo o piperidinilo, opcionalmente sustituido. Se prefieren actualmente compuestos en donde R2 es fenilo opcionalmente sustituido, por ejemplo donde los sustituyentes opcionales se seleccionan de metilo, etilo, n- o isopropilo, vinilo, alilo, metoxi, etoxi, n-propiloxi, benciloxi, aliloxi, cianometoxi cloro, bromo, ciano, formilo, metil-, etil- o n-propil-carboniloxi, metil- o etilaminocarbonilo. Mas grupos sustituyentes complejos que pueden estar presentes en el anillo R2 incluyen aquellos (i) de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6; o (ii) de formula -(Alk3)mZ1 en donde Alk3 es un alquileno (C1-C3) divalente de cadena lineal o ramificada, m es 0 o 1, y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6. Las posiciones de sustitucion preferidas en el anillo fenilo son las posiciones 2, 4 y 5.
En otras estructuras sencillas, m es 1, p, r y s son de nuevo cada una 0, y Q es como se define en la reivindicacion 1, por ejemplo, anillo fenilo, ciclohexilo, piridilo, morfolino, piperidinilo o piperazinilo. En dichos casos, Q es un sustituyente directo en el anillo Ar1 opcionalmente sustituido.
En estructuras mas complejas con que tiene que ver la invencion, uno o mas de m, p, r y s pueden ser 1, y Q es como se define en la reivindicacion 1. Por ejemplo, p y/o s puede ser 1 y r puede ser 0, de manera que Q esta unido a Ar1 por un radical alquileno o alquenileno, por ejemplo un radical alquileno C1-C3, que esta opcionalmente sustituido. En otros casos cada uno de p, r y s puede ser 1, en cuyo caso, Q esta unido a Ar1 por un radical alquileno o alquenileno que esta interrumpido por el radical Z que contiene heteroatomo. En aun otros casos, p y s puede ser 0 y r puede ser 1, en cuyo caso Q esta unido a Ar1 por medio del radical Z que contiene heteroatomo.
Ejemplos espedficos de grupos R2 utiles en compuestos de la invencion incluyen los presentes en los compuestos de los Ejemplos en esta memoria.
El sustituyente opcional R3
R3 es hidrogeno o un sustituyente opcional, como se define anteriormente. Actualmente se prefiere que R3 sea hidrogeno.
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El grupo R4
R4 se define en la reivindicacion 1.
Actualmente se prefiere que R4 sea un grupo carboxamida.
Cuando R4 es un grupo ester carboxflico, los ejemplos incluyen los de formula -COORC en donde RC es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, por ejemplo metilo, etilo, n- o iso-propilo o alilo; o un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, por ejemplo fenilo, piridilo o tiazolilo, opcionalmente sustituido; o un grupo aril(alquil Ci- Ca)- o heteroaril(alquil C1-C6)- opcionalmente sustituido tal como bencilo o piridilmetilo; o un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido tal como ciclopentilo o ciclohexilo.
Los ejemplos espedficos de grupos R4 utiles en compuestos de la invencion incluyen los presentes en los compuestos de los Ejemplos en esta memoria.
Una subclase preferida de los compuestos con los que tiene que ver la invencion tiene formula (II)
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en donde
A es un grupo amino secundario
R10 es H, Cl, Br o CH3;
R11 es hidrogeno, Cl, Br, CN, metilo, etilo, n- o iso-propilo, vinilo o alilo;
R12 es (i) un radical de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es un grupo primario, secundario, terciario o cfclico, o un grupo alcoxi C1-Ca; o (ii) un radical de formula -(Alk3)mZ1 en donde Alk3 es un alquileno (C1-C3) divalente de cadena lineal o ramificada, m es 0 o 1, y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o cfclico, o un grupo alcoxi C1-Ca. En esta subclase de compuestos (II) se prefiere que A sea un grupo alquil C1-Ca amino secundario, por ejemplo en donde el sustituyente alquilo C1-Ca se selecciona de metilo, etilo y n- e iso-propilo, y R12 es (i) un radical de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es di(alquil C1-C3)amino o alcoxi C1-C3, por ejemplo en donde el(los) componente(s) de alquilo C1-C3 se selecciona(n) de metilo, etilo y n- e iso-propilo.
Los compuestos espedficos con los que tiene que ver la invencion incluyen los de los Ejemplos, particularmente los compuestos ejemplificados que tienen la estructura (II) anterior.
Hay multiples estrategias sinteticas para la smtesis de los compuestos (I) con los que tiene que ver la invencion, pero todos dependen de la qrnmica conocida, conocida por el qrnmico organico sintetico. Por consiguiente, los compuestos segun la formula (I) pueden sintetizarse segun los procedimientos descritos en la bibliograffa estandar y se conocen bien por un experto en la tecnica. Son fuentes bibliograficas tfpicas “Advanced organic chemistry’, 4a edicion (Wiley), J March, “Comprehensive Organic Transformation", 2a edicion (Wiley), R.C. Larock, “Handbook of Heterocyclic Chemistry’, 2a edicion (Pergamon), A.R. Katritzky), artfculos de revision tales como los encontrados en “Synthesis", “Acc. Chem. Res.’’, “Chem. Rev.’’, o fuentes bibliograficas primarias identificadas mediante busquedas bibliograficas estandar en lmea o a partir de fuentes secundarias tales como “Chemical Abstracts" o “Beilstein". Dichos metodos bibliograficos incluyen los de los Ejemplos preparativos en esta memoria y metodos analogos a ellos.
Por ejemplo puede emplearse el siguiente esquema de reaccion general:
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El material de partida esta o bien disponible comercialmente o puede hacerse segun metodos bibliograficos. Las reacciones posteriores pueden llevarse a cabo en R2, R3 o R4 para preparar compuestos adicionales de formula (I).
Los compuestos de la invencion son inhibidores de HSP90 y son utiles en el tratamiento de enfermedades que son responsables de la inhibicion de actividad de HSP90 tal como canceres; enfermedades virales tal como Hepatitis C (HCV) (Waxman, 2002); inmunosupresion tal como en trasplantes (Bijlmakers, 2000 y Yorgin, 2000); enfermedades anti-inflamatorias (Bucci, 2000) tal como artritis reumatoide, asma, MS, diabetes tipo I, lupus, psoriasis y enfermedad inflamatoria del intestino; fibrosis qmstica (Fuller, 2000); enfermedades relacionadas con angiogenesis (Hur, 2002 y Kurebayashi, 2001): retinopatfa diabetica, hemangiomas, psoriasis, endometriosis y angiogenesis tumoral. Tambien un inhibidor de Hsp90 de la invencion puede proteger a las celulas normales frente a la toxicidad inducida por quimioterapia y ser util en enfermedades donde el fallo para experimentar apoptosis es un factor subyacente. Dicho inhibidor de Hsp90 puede ser tambien util en enfermedades donde la induccion de una respuesta de protema al estres celular o choque termico podna ser beneficiosa, por ejemplo, proteccion de lesion isquemica por hipoxia debido a la elevacion de Hsp70 en el corazon (Hutter, 1996 y Trost, 1998) y cerebro (Plumier, 1997 y Rajder, 2000). Un aumento inducido por inhibidor de Hsp90 en los niveles de Hsp70 podna ser tambien util en enfermedades donde el mal plegado o agregacion de protema es un factor causal principal, por ejemplo, trastornos neurodegenerativos tales como tembladera/CJD, enfermedad de Huntington y Alzheimer (Sittler, 2001; Trazelt, 1995 y Winklhofer, 2001)”.
Por consiguiente, la invencion tambien incluye:
(i) Una composicion farmaceutica o veterinaria que comprende un compuesto de formula (I) anterior, junto con un veldculo farmaceutica o veterinariamente aceptable.
(ii) El uso de un compuesto de formula (I) anterior en la preparacion de una composicion para la inhibicion de actividad HSP90 in vitro o in vivo.
Se entendera que el nivel de dosis espedfica para cualquier paciente particular dependera de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto espedfico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administracion, ruta de administracion, velocidad de excrecion, combinacion de farmacos y el mecanismo causante y gravedad de la enfermedad particular que se somete a terapia. En general, una dosis adecuada para formulaciones administrables oralmente estara normalmente en el intervalo de 0,1 a 3000 mg, una vez, dos veces o tres veces al dfa, o la cantidad diaria equivalente administrada por infusion u otras rutas. Sin embargo, los niveles de dosis optimos y frecuencia de dosificacion se determinaran por ensayos clmicos como es lo convencional en la tecnica.
Los compuestos con los que la invencion tiene que ver pueden prepararse para administracion por cualquier ruta consecuente con sus propiedades farmacocineticas. Las composiciones administrables de forma oral pueden estar en forma de comprimidos, capsulas, polvos, granulos, pastillas para chupar, preparados lfquidos o en gel, tales como disoluciones o suspensiones orales, topicas o parenterales esteriles. Los comprimidos y capsulas para la administracion oral pueden estar en forma de presentacion de dosis unitaria, y pueden contener excipientes convencionales tales como agentes de union, por ejemplo, jarabe, goma arabiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; cargas por ejemplo lactosa, azucar, almidon de mafz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricante para la formacion de comprimidos, por ejemplo estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sflice; disgregantes por ejemplo almidon de patata, o agentes humectantes aceptables tal como laurilsulfato sodico. Los comprimidos pueden estar recubiertos segun metodos bien conocidos en la practica farmaceutica normal. Los preparados lfquidos orales pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensiones, disoluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos u oleosos, o pueden presentarse como un producto seco para la reconstitucion con agua u otro vehroulo adecuado antes del uso. Dichos preparados lfquidos pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspension, por ejemplo sorbitol, jarabe, metilcelulosa, jarabe de glucosa, grasas comestibles hidrogenadas de gelatina; agentes emulsionantes, por ejemplo lecitina, monooleato de sorbitano o goma arabiga; vehfculos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, esteres oleosos tales como glicerina, propilenglicol o alcohol etflico; conservantes, por ejemplo p- hidroxibenzoato de metilo o propilo o acido sorbico, y si se desea agentes aromatizantes o colorantes convencionales.
Para la aplicacion topica a la piel, el farmaco puede prepararse en una crema, locion o pomada. Las formulaciones en crema o pomada que pueden usarse para el farmaco son formulaciones convencionales bien conocidas en la tecnica, por ejemplo como se describe en libros de texto estandar de compuestos farmaceuticos tal como la Farmacopea Britanica.
El ingrediente activo puede administrarse tambien de forma parenteral en un medio esteril. Dependiendo del vehroulo y la concentracion usada, el farmaco puede o bien suspenderse o disolverse en el vehroulo. De forma ventajosa, los adyuvantes tal como un anestesico local, conservante o agentes de tamponado pueden disolverse en el vehroulo.
Los siguientes ejemplos ilustran la preparacion y actividades de compuestos espedficos de la invencion.
Ejemplo 1
Etilester de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
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Etapa 1
5 Etilester de acido 2-amino-4-doro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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A una mezcla agitada de 2-amino-4,6-dicloro-5-formil-pirimidina (1 eq.) y carbonato de potasio (1 eq.) en acetonitrilo a temperatura ambiente se anadio etil-2-mercaptoacetato (0,95 eq.) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante tres horas, seguido por calentamiento a 80°C durante una hora. Despues de enfriar, la mezcla se concentro 10 hasta sequedad al vaco. La cromatograffa en columna en silice, eluyendo con acetato de etilo y hexanos, dio el ejemplo 1 como un polvo amarillo.
Tiempo de retencion de LC-MS: 2,371 minutos, [M+H]+ 258,0 Etapa 2 (Reaccion de Suzuki):
Etilester de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
15
imagen7
Una disolucion del ejemplo 1 etapa 1 (1 eq.), acido fenilboronico (1,2 eq) y carbonato sodico (1,2 eq) en 1,4-dioxano y agua (3,5:1) se desgasifico burbujeando a su traves gas nitrogeno durante 5 mins. Se anadio Pd(PPh3)4 (0,05 eq.) y la mezcla se calento en un microondas Personal Chemistry Synthesiser a 150°C durante 10 minutos. Despues de enfriamiento y concentracion al vaco, el HPLC preparativo dio el ejemplo 2 como un polvo blanco.
20 Tiempo de retencion de LC-MS: 2,545 minutos, [M+H]+ 300,10.
Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplo 2:
Etilester de acido 2-amino-4-(4-trifluorometil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
5
10
15
20
25
imagen8
preparado como para el Ejemplo 1.
Tiempo de retencion de LC-MS: 2,768 minutos, [M+H]+ 368,1.
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO): 6 = 1,07 (3H, t, J = 7,1 Hz), 4,09 (2H, q, J = 7,1 Hz), 7,25 (2H, br s), 7,68 (1H, s), 7,76 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,85 (2H, d, J = 8,0 Hz).
Este compuesto tiene actividad “B” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos en la Tabla 1 se sintetizaron y probaron en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion. Las reacciones de Suzuki se llevaron a cabo en el Ejemplo 1 Etapa 2. Las reacciones de aminacion reductora se llevaron a cabo como para el Ejemplo 33, como sigue:
Etilester de acido 2-amino-4-(4-piperidin-1-ilmetil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (Ejemplo 33 en la Tabla 1)
imagen9
Se anadio pirrolidina (5 equiv) a una suspension de etilester de acido 2-amino-4-(4-formil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina- 6-carboxflico (1 equiv) en metanol. La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 3,5 horas despues se enfrio a temperatura ambiente. Se anadio borohidruro sodico (3 equiv) y se agito durante 10 mins. La mezcla se concentro al vach despues se repartio entre acetato de etilo y agua. Las fases se separaron y la fase organica se lavo con salmuera, se seco y se evaporo a un aceite amarillo. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativo.
Tiempo de retencion de LC-MS: 1,803 minutos, [M+H]+ 383.
Las reacciones de desplazamiento de cloruro se llevaron a cabo como para el Ejemplo 22 como sigue:
Metilester de acido 2-amino-4-bencilamino-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (Ejemplo 22 en la Tabla 1)
imagen10
El metilester de acido 2-amino-4-cloro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (100 mg, 0,39 mmoles), bencilamina (100 |jl) en 4 mL de THF se presentaron a irradiacion de MO a 110°C durante 35 mins. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se elaboro (acida) y se purifico usando condiciones estandar para un compuesto neutro.
LC-MS: TR = 2,391 mins; MS m/z = 329 (M+1).
Nota: la intensidad y el tiempo de reaccion depende de la reactividad de la amina. Por ejemplo, para aminas menos reactivas (tal como N-metilanilina), las condiciones de reaccion adecuadas son MO a 160°C durante 30 mins y 0,5 mL de amina.
La cuarta columna de la Tabla 1 expone la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 1
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de la smtesis
3
T1 ° V 348 A Suzuki
4
nh2 F 436 A Suzuki
5
T2 Ijl^N i ijws o N— 358 B Suzuki
6
JGCVf h2n"f;^~s 328 A Suzuki
7
^ H \ cro 1jCVv 383 B Aminacion reductora en 4- aldehndo (hecha mediante reaccion de Suzuki)
8
NH, r N"^N 0 X— 344 A Suzuki
9
NH, a n'S'j jr-O 334 A Suzuki
10
NH, 1 2 r° 318 B Suzuki
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de la smtesis
11
n'VvJ5 J 1H 0 314 A Suzuki
12
/ 0 n'Vw3 330 B Suzuki
13
NH, 0 340 B Suzuki
14
a^o P n i M H.N^N^S ^0 334 B Suzuki
15
ji IH H!N'>v'N->'s O 314 A Suzuki
16
NH; )-o o '— 325 A Suzuki
17
NHa N^N u ° 325 B Suzuki
18
NH, 1 N^M 306 B Suzuki
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de la smtesis
19
JO , 316 B Desplazamiento de cloruro
20
xT^ H/r"N^s 0^ 342 B Desplazamiento de cloruro
21
JO p~ n i y-i 0 301 B Desplazamiento de cloruro
22
9 HN rxyr 315 B Desplazamiento de cloruro
23
9 p ji JL >H H2N"^I'J^s 0 329 B Desplazamiento de cloruro
24
"Jl j XXVT HJ^ n S 0 321 B Desplazamiento de cloruro
25
(IT / ^ rAr-vj3-7 ji J 405 B Desplazamiento de cloruro
26
o ;Cv .VrV^H 343 B Desplazamiento de cloruro
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de la smtesis
27
X? H- 301 B Desplazamiento de cloruro
28
7X) xxy^° 315 B Desplazamiento de cloruro
29
x JL v-i 357 B Desplazamiento de cloruro
30
6° N'i"^ vf0"^ HjtrTr'8 0 383 B Aminacion reductora en 4- aldehndo (hecha mediante reaccion de Suzuki)
31
Q- J -X5’ o 364 B Desplazamiento de cloruro
32
NHL, )=0 339 A Suzuki
33
rO vW'y 397 B Aminacion reductora en 4- aldehfdo (hecha mediante reaccion de Suzuki)
34
ijH N^N \— 328 A Suzuki
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de la smtesis
35
p-OH H,N N S 0 330 A Reduccion de 4-aldehndo (hecha mediante reaccion de Suzuki)
36
HY y IXH° H,N^N^S 0 363 B Desplazamiento de cloruro
37
N-fl 7 HM iVh° HjN'Nt'S 'o 361 B Desplazamiento de cloruro
38
X^N A" *7 J IxW* 355 B Desplazamiento de cloruro
39
m xbcw 355 B Desplazamiento de cloruro
40
O iTWv n.N''S>r s 343 B Suzuki
41
n0 fN^j 9 rxv^ 399 B Aminacion reductora en 4- aldehfdo (hecha mediante reaccion de Suzuki)
Ejemplo 42:
Amida de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
5
10
15
20
25
imagen11
El compuesto del ejemplo 1 se suspendio en hidroxido de amonio concentrado y se calento en un microondas Personal Chemistry Synthesiser a 140°C durante 20 minutos. La concentracion al vach dio el ejemplo 42 como un solido blanco.
Tiempo de retencion de LC-MS: 1,824 minutos, [M+H]+ 271,10.
Ejemplo 43
Etilamida de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen12
Etapa 1
Acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen13
Se anadio hidroxido sodico (0,66 g; 16,5 mmoles) a una suspension de etilester de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3- d]pirimidina-6-carbox^lico (Ejemplo 1) (1,00 g; 3,34 mmoles) en etanol (20 ml) y agua (2 ml). La mezcla se calento a reflujo durante 1 hora (proporcionando una disolucion amarilla clara homogenea) y se dejo enfriar a temperatura ambiente. Se eliminaron los disolventes al vacfo y el residuo solido se disolvio en agua (30 mL) y se enfrio con bano de hielo-agua. La mezcla se agito y se ajusto a pH 1-2 por adicion en gotas de acido clorhndrico concentrado. El precipitado resultante se filtro, se lavo con agua, despues etanol y finalmente dietileter. El producto de color crudo se seco al vacfo para dar acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico como un solido incoloro (0,784 g; 87%).
TR de LC/MS = 1,845 min; m/z = 272 (M+H)+
Etapa 2
Etilamida de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen14
Se anadio hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,380 g, 1,0 mmol) a acido 2- amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (0,187 g, 0,69 mmoles). Esta mezcla se suspendio en
dimetilformamida (DMF) (5,0 ml) y se anadio diisopropiletilamina (0,696 ml; 4,0 mmoles) para dar una disolucion amarilla. Se anadio hidrocloruro de dietilamina (0,122 g; 5,0 mmoles) y la mezcla de reaccion se calento durante diez minutos a 100°C en un vial sellado en un sintetizador de microondas. Se elimino la DMF al vado y el residuo se repartio entre acetato de etilo (30 ml) y agua (30 ml). Las fases se separaron y la fase organica se lavo con 5 disolucion saturada de cloruro sodico y se seco sobre sulfato sodico. La mezcla se filtro y los disolventes del filtrado se eliminaron al vado para dejar un solido amarillo que se adsorbio en gel de sflice y se purifico por cromatograffa rapida en gel de silice (20 g), eluyendo con un gradiente de disolvente de 15 a 50% de acetato de etilo en hexano. Esto proporciona etilamida de acido 2-amino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico como un solido amarillo claro (0,051 g; 25%).
10 TR de LC/MS = 2,08 min, m/z = 299 (M+H)+ 1H RMN (400 MHz, d6 DMSO) 6 1,11 (t, 3H), 3,26 (m, 2H), 7,12 (s, 2H), 7,61 (m, 3H), 7,86 (m, 2H), 8,03 (s, 1H), 8,71 (t, 1H).
El compuesto del Ejemplo 43 tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos (Tabla 2) se hicieron por el metodo del Ejemplo 43 a partir del correspondiente ester 15 (Tabla 1) y la amina apropiada.
La columna final de la Tabla 2 expone la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 2
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50
44
HjN^NT'S o 342 A
45
!TiV^n/'vN>‘ H/XnT s o 356 B
46
0 o X H ) ✓N—'' A X W 384 B
47
¥ lfvA/\ ty/V*"** \ 313 A
48
H.lXl'T'S o 327 B
49
X H . 375 B
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50
50
389 B
51
376 B
52
XVJL>' X JL W h,n n S o 327 B
53
O ^OH HiN'\r''S \) 329 A
54
Xv"^ 357 A
55
XytL^-0 ►yf"Sr'* 0 381 B
56
313 A
57
N iTV/ N H,N^N S H H 365 A
58
Q r XyjLsJ^ HINJ'Sr s □ 384 B
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50
59
HjN^N^S l ' 327 B
60
fCyJ^O 347 B
61
NH, 1 HN^ 341 A
62
XvlO 339 A
63
JO J&-C 300 B
64
mX)B 300 B
65
9 T H ixW'- 314 B
66
. 0 0 9 T h / HiN''S'T s 0 398 B
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50
67
9 rx>< ^''Sr'3 0 328 B
68
H2N^'N^'s O 299 A
69
0 0 A X<hi HjN N ® 6 361
70
0 Xxvf HjN'^'KT'S 0 341 B
71
fX o I A- nVwnh s 0 328 A
72
STvf^ 315 A
73
Xv/ tyr'V*'® m 327 A
Ejemplo 74
imagen15
Etilester de acido 2,5-diamino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen16
Etapa 1
2-Amino-6-oxo-4-fenil-1,6-dihidro-pirimidina-5-carbonitrilo
imagen17
5 Se anadieron benzaldetndo (15 g, 141,3 mmoles, 1 eq), carbonato de guanidina (25,47 g, 141,3 mmoles, 1 eq), cianoacetato de etilo (15,99 g, 141,3 mmoles, 1 eq) y acetato sodico anhidro (11,59 g, 141,3 mmoles, 1 eq) a 300 ml de piridina anhidra y se puso a reflujo durante 4 horas. La reaccion se enfrio entonces a temperatura ambiente y el disolvente se elimino a presion reducida. El residuo marron se trituro con 400 ml de acido acetico acuoso (30%) y se filtro. El solido amarillo se trituro entonces con 300 ml de dietileter y se filtro para dar 2-amino-6-oxo-4-fenil-1,6- 10 dihidro-pirimidina-5-carbonitrilo como un solido de color crudo.
Rendimiento: 14,46 g (48%)
Tiempo de retencion de LCMS = 1,34 min, m/z calculado para C11H9N4O 213,22 (M+H), encontrado 213,1.
Etapa 2
2-Amino-4-fenil-6-tioxo-1,6-dihidro-pirimidina-5-carbonitrilo
15
Se disolvieron 2-amino-6-oxo-4-feml-1,6-dimdro-pinmidina-5-carbomtrilo (0,200 g, 0,942 mmoles, 1 eq) y pentasulfuro de fosforo (0,838 g, 3,770 mmoles, 4 eq) en 5 ml de piridina. La reaccion se calento a reflujo durante 2 horas, se enfrio a temperatura ambiente y se vertio en 100 ml de agua. La mezcla se hirvio durante 1 hora, se enfrio a temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano. Los extractos organicos combinados se lavaron con 20 salmuera saturada y se secaron sobre sulfato sodico anhidro. El disolvente se elimino al vach y el residuo naranja se trituro con dietileter para dar 2-amino-4-fenil-6-tioxo-1,6-dihidro-pirimidina-5-carbonitrilo como un solido amarillo.
Rendimiento: 0,118 g (55%)
Tiempo de retencion de LCMS = 1,94 min, m/z calculado para C11H9N4S 229,29 (M+H), encontrado 229,1.
Etapa 3
25 Etilester de acido 2,5-diamino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen18
imagen19
Se disolvio sodio (0,010 g, 0,438 mmoles, 1 eq) en 4 ml de etanol anhidro en nitrogeno. Se anadio 2-amino-4-fenil-6- tioxo-1,6-dihidro-pirimidina-5-carbonitrMo (0,100 g, 0,438 mmoles, 1 eq) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. Se anadio 2-bromoetilacetato (0,073 g, 0,438 mmoles, 1 eq). La reaccion se agito durante 5 30 minutos mas a temperatura ambiente. Despues se anadio sodio (0,010 g, 0,438 mmoles, 1 eq) disuelto en 1 ml
de etanol anhidro. La reaccion se puso entonces a reflujo durante 5 horas. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se apago con agua. El precipitado se filtro y se trituro con dietileter para dar etilester de acido 2,5- diamino-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico como un solido amarillo.
Rendimiento: 0,059 g (43%)
10 Tiempo de retencion de LCMS = 2,42 min, m/z calculado para C15H15N4O2S 315,38 (M+H), encontrado 315,1.
1H RMN (DMSO-de, 2,50) 6 1,19 (t, 3H, J = 7,1), 4,13 (q, 2H, J = 7,1), 5,79 (bs, 2H), 7,29 (bs, 2H), 7,50-7,56 (m, 5H) Este compuesto tema actividad B en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplo 75
Amida de acido 2-amino-5-metil-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
15
imagen20
Etapa 1
Etilester de acido 5-amino-4-benzoil-3-metil-tiofeno-2-carboxflico
imagen21
Preparado mediante el metodo bibliografico de Bryan P. McKibben, Craig H. Cartwright, Arlindo L. Castelhano 20 Tetrahedron Lett. 1999, 44, 5471.
Etapa 2
Amida de acido 2-amino-5-metil-4-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen22
Se anadio carbonato de guanidina a una disolucion de etilester de acido 5-amino-4-benzoil-3-metiltiofeno-2- carboxflico y la suspension se calento, 175°C, durante ~3 hrs bajo una atmosfera de nitrogeno. La suspension se dejo enfriar y se anadio agua. La mezcla se extrajo con acetato de etilo, los extractos se lavaron y se secaron. La disolucion se concentro y el residuo se purifico por cromatograffa eluyendo con mezclas de acetato de etilo y 5 hexano.
Tiempo de retencion de LC 2,17 minutos [M+H]+ 285,1 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Este compuesto tema actividad B en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplos adicionales preparados por metodos similares a los descritos anteriormente se enumeran en la Tabla 3. La cuarta columna de la Tabla 3 expone la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia 10 descrito a continuacion.
Tabla 3
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
76
ijcvr 328 B Suzuki
77
xxvX Hjhl'TT'S 0 342 A Suzuki
78
J 0 0 378 A Suzuki
79
NH, 0 '— 348 A Suzuki
80
327 A Suzuki despues amida
81
H / Hjl'T'fT s o 341 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
82
1j3h h^-V^s o 343 A Suzuki despues amida
83
1 .^Z X2T,*0 w —^ mm s 5. I 384 A Suzuki despues amida
84
NHj t 2 H o '—■ 338 A Suzuki despues amida
85
n „ ph 357 A Suzuki despues amida
86
^ . 393 A Suzuki despues amida
87
XXV-t7 328 A Suzuki
88
ZX><° 328 A Suzuki
89
Cl x^oJ 367 A Suzuki
90
m, 1 ? 420 B Suzuki
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
91
375 A Suzuki despues amida
92
A JAW H,N N ^ o 389 A Suzuki despues amida
93
fjCH^ HaN''Nr s 0 355 B Suzuki despues amida
94
fh o> 301 B Suzuki
95
jS - A JL/~4 HJ'I'A'1' 5 □ 356 A Suzuki despues amida
96
A O jo>t H-.N N s 0 369 B Suzuki despues amida
97
NH, ^Br >-o o 379 A Suzuki
98
NH, jTa 0AAciVh o x— 367 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
99
Sr Au H/TV^S 0“\ 379 B Diazotizacion y bromacion del Ejemplo 75
100
rcvf h2m^^s °-\ 351 B Suzuki
101
Cl ITVy^0H H2N''At s q 397 A Suzuki despues amida
102
Cl rrvJU;N- H2N''>T S 424 A Suzuki despues amida
103
CJ Cl X ° f!V\vNv^NH! h2n-Ajn'A-s l 396 A Suzuki despues amida
104
NH, 1 2 l^N A=f )r° o \— 301 B Suzuki
105
nh2 n'An °; 407 A Suzuki
106
NH, x N^N ci-s^jA^Xg ^Cl °) 368 B Suzuki
Ejemplo
Estructura MH + Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
107
Cl 415 A Suzuki despues amida
108
a jo nW o h2nA^s [j-Q-^o 494 A Suzuki despues amida
109
Cl n^yi5 ,ci 449 A Suzuki despues amida
110
Cl nt\j° a 458 A Suzuki despues amida
111
Ci Xy /P h2n"'N#L'S 449 A Suzuki despues amida
112
C! P 0 h2nan- s trO"^s 495 A Suzuki despues amida
113
Cl nvf r, h2n"%>'’S 445 A Suzuki despues amida
114
N VU° i a y \ H2N'"%^S P 315 A Suzuki
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
115
XTm H.N'^'N^S O 315 A Suzuki
116
V 0 0 JL v *V N-'S-A 1 JL HjN'^N^'S 0 508 A Suzuki despues amida
117
X 9.0 «9 hJ^ xbx 507 A Suzuki despues amida
118
Cl trS ,o-~ -Y »0 Cn-r H2N N s 0 459 A Suzuki despues amida
119
Cl C1'X H 0-° nV^N^ HjN'^'N''’ s 0 473 A Suzuki despues amida
120
C! X JW 447 A Suzuki despues amida
121
Cl jXj 0, A JL M. H2N>^N''^8 0 463 A Suzuki despues amida
122
Cl Cl^ hJC^/f fVx f H.N'^N^S 0 497 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
123
Cl C,AC a 0 . HINT'S o 432 A Suzuki despues amida
124
Cl ckO „ 0 -tVvr^ H/Xn'" s ° 435 A Suzuki despues amida
125
Cl O'V H 0 jO>< H2N N S O 419 A Suzuki despues amida
126
Cl rS f C1 1 X xW H2N^N^S 0 411 A Suzuki despues amida
127
Cl JO OH jL JL HjN^N^S 0 413 A Suzuki despues amida
128
Cl Xj no Cl JL HJ~^ n^Vy7|J oh HsN^Sj''» O 413 A Suzuki despues amida
129
Cl XjCVT h2n^n s 0 450 A Suzuki despues amida
130
Cl CI'^T ^ P JL H_/v's-nh2 XjCh; ° H2N N S 0 446 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
131
Cl cr X H_nrNH= N ir^v^N 0 H^Xr S O 410 A Suzuki despues amida
132
Cl Cl^jf H A JL'A / 9 HjN^N^S 0 (J) 423 A Suzuki despues amida
133
Cl'j^ H / XXv-o HjN N s 0 381 A Suzuki despues amida
134
Cl xb f f Cl I hXF i‘33an 421 A Suzuki despues amida
135
Cl 433 A Suzuki despues amida
136
Cl “X HJ-™ XjrvX h2n-^n^s 0 383 A Suzuki despues amida
137
Cl X ry H2N'A'fT~'S 0 436 A Suzuki despues amida
138
? Quiral XyyX^O HlN''\r~S 0 443 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
139
ri | Quiral HJN^I'T'S 0 443 A Suzuki despues amida
140
Cl c,'j y IXvT O 457 A Suzuki despues amida
141
Cl n- H:r'l>r's' o ^ 430 A Suzuki despues amida
142
Cl A - . i i yy y H2N^N^~S 0 422 A Suzuki despues amida
143
CI ■A «-r> jW 0 405 A Suzuki despues amida
144
Cl fl OH nyy o=g=0 jj J H H/l'l'T'8 0 461 A Suzuki despues amida
145
Cl H^^lsT's'c) 450 A Suzuki despues amida
146
Cl (Vv™-V' h/n^o vw 447 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
147
-JX XjOk° H2N N S 0—^ 364 B Suzuki
148
nh2 »jCC^_o O N— 359 A Suzuki
149
NH, 1 2 N^N a,XX'=^!J 0 N--- 406 A Suzuki despues amida
150
T2 N"^N o v— 341 A Suzuki despues amida
151
T2 N^N o x— 347 A Suzuki despues amida
152
NH, 1 2 N^N 0 v— 347 A Suzuki despues amida
153
Cl x JCV^'O 407 A Suzuki despues amida
154
Cl J> o H )=N rrw 430 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
155
Cl C‘ 1 « H2N'^N'"^s o 379 A Suzuki despues amida
156
CJ rVyi^D H3N' TC ‘3 0 444 A Suzuki despues amida
157
HaN''T'T'>° ° 450 A Suzuki despues amida
158
ny-t® HEN''^r~s 0 448 A Suzuki despues amida
159
Cl C|J^ rV Xth;n 408 A Suzuki despues amida
160
9 Quiral cixL rVvT« ji I o O 410 A Suzuki despues amida
161
9' Quiral 01 j? Xr>T» h2n-^'n'"^s 0 452 A Suzuki despues amida
162
Cl Quiral “'T -Cr* frvT o H2N^N^s ° 426 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
163
Cl HOv__ Quiral j6 k c,i x,^ H.N'^N^'S 0 502 A Suzuki despues amida
164
Cl Quiral A o C’A YfVvTA A 0 s O 476 A Suzuki despues amida
165
Cl Quiral Cli X/h XXATA 477 A Suzuki despues amida
166
91 Quiral “VVvtV 472 A Suzuki despues amida
167
P^y/ I li VY HjlAV^S o 342 A Suzuki
168
O ^— 340 A Suzuki
169
334 A Suzuki
170
0 f^ry_A/ 341 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH + Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
171
NHS I 2 o' \--- 339 A Suzuki despues amida
172
NH, ij n-'Hi H N-^ t\f O '--- 358 A Suzuki despues amida
173
Cl H2N^I'T'S 333 A Suzuki despues amida
174
xX>^oJ H2N^N^"S 0 356 A Suzuki
175
xjy^ 0—^ 362 A Suzuki
176
xSthC HjN^'n^'s n—^ 353 A Suzuki despues amida
177
xjy~^ H2N"'^fr~s N \ 361 A Suzuki despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
178
JX 348 A Suzuki
179
.Ah'7 372 A Suzuki
180
rrV jtjyX 384 A Suzuki despues amida
181
jyX xxy-i" o 399 A Suzuki
182
0 hyr'Sr'-s o 460 B Suzuki despues amida
183
0 JU H rryh h2n^n^s O 410 A Suzuki despues amida
Ejemplo 184
Etilester de acido 2-amino-4-(4-hidroxi-2-metil-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen23
Etapa 1
Etilester de acido 2-amino-4-(4-benciloxi-2-metil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen24
Se anadio acido 2-metil-4-benciloxifenilboronico (225 mg, 0,93 mmoles) a etilester de acido 2-amino-4-cloro- 5 tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (ejemplo 1; etapa 1) (200 mg; 0,776 mmoles) en DMF (10 mL). Se anadio NaHCO3 (disolucion acuosa 1,0 M; 2,33 mL) y la mezcla se desgasifico con N2. Se anadio Pd(PPh3)2Cl2 y la mezcla de reaccion se calento a 80 grados C durante 5 horas. La mezcla de reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente y se elimino la DMF al vaco. El residuo se repartio entre acetato de etilo (50 mL) y NaCl saturado (ac) (50 mL). La fase organica se seco sobre Na2SO4 y se filtro, los disolventes de filtrado se eliminaron al vaco para proporcionar un 10 aceite amarillo que se purifico por cromatograffa de intercambio ionico (columna 1ST SCX-2) para proporcionar el producto como un solido marron-amarillo (230 mg; 71%).
Tiempo de retencion de LC-MS: 2,852 minutos, [M+H]+ 420 (Tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 2
Etilester de acido 2-amino-4-(4-hidroxi-2-metil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
15
imagen25
A una disolucion enfriada en bano de hielo de etilester de acido 2-amino-4-(4-benciloxi-2-metil-fenil-tieno[2,3- d]pirimidina-6-carboxflico (211 mg; 0,5 mmoles) en diclorometano (8 mL), se anadio BCh (disolucion 1,0 M en DCM; 1,51 mL; 1,5 mmoles). La mezcla de reaccion se agito durante 30 mins y despues se anadio amoniaco acuoso (20 mL) y la mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 mL). La fase organica se seco sobre Na2SO4 y se 20 filtro, los disolventes de filtrado se eliminaron al vach para proporcionar un solido amarillo que se purifico por cromatograffa rapida en gel de sflice (10 g de 1ST Flash, eluyendo de 10 a 40% de acetato de etilo en hexano) para proporcionar el producto como un solido incoloro (102 mg, 62%).
Tiempo de retencion de LC-MS: 2,852 minutos, [M+H]+ 420 (Tiempo de marcha 3,75 mins).
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
25 Ejemplo 185
Etilester de acido 2-amino-4-(2-metil-4-propoxi-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen26
Se anadio 1-bromopropano (15 uL; 0,17 mmoles) a una disolucion de etilester de acido 2-amino-4-(4-hidroxi-2-metil- fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (50 mg; 0,152 mmoles) y carbonato de potasio (25 mg; 0,18 mmoles) en 30 DMF (15 mL). La mezcla de reaccion se calento a 50 grados C durante 18 horas. La mezcla de reaccion se dejo
enfriar y el disolvente se elimino al vado. El residuo se repartio entre disolucion acuosa saturada de bicarbonato sodico (10 mL) y acetato de etilo (20 mL). La fase organica se seco sobre Na2SO4 y se filtro, los disolventes del filtrado se eliminaron al vado para proporcionar un solido amarillo purificado por cromatograffa rapida en gel de s^lice (eluyendo acetato de etilo en hexano) para proporcionar producto como solido amarillo (45 mg; 80%).
5 Tiempo de retencion de LC-MS: 2,821 minutos, [M+H]+ 372 (Tiempo de marcha 3,75 mins).
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos (Tabla 4) se hicieron por el metodo del Ejemplo 185, sustituyendo el agente de alquilacion apropiado por bromopropano. La cuarta columna de la Tabla 4 expone la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
10 Tabla 4
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
186
r fVH0 386 B Suzuki despues alquilacion
187
/ ^rvf 370 A Suzuki despues alquilacion
188
N J 369 A Suzuki despues alquilacion
189
rr HLN-'ST^S O { 386 B Suzuki despues alquilacion
190
h2n^n^s 0 { 429 B Suzuki despues alquilacion
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
191
nFT I if ° 0 > 387 A Suzuki despues alquilacion
192
ll 1 Y>^ciX?Q 0 ? 444 B Suzuki despues alquilacion
193
T1 N^N 0 0 ) 388 B Suzuki despues alquilacion
194
NH, 1 2 N^N o' V— 388 A Suzuki despues alquilacion
195
MH, X Ijp'N h ff XT T P VYoU )-o 415 A Suzuki despues alquilacion
Ejemplo 196
imagen27
imagen28
Etapa 1
3-Bromo-4-metil-benzaldel'ndo
imagen29
5 Preparado como se describe por Eizenber y Ammons, Org Prep and Reactions Int., 6(5), 251-253 (1974) a partir de p-tolualdehndo (12,00 g).
Rendimiento: 10,97 g (55%)
Tiempo de retencion de LCMS = 2,57 min; sin ionizacion.
1H RMN (400 MHz; CDCla) 8 2,50 (s, 3H), 7,43 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,75 (dd, 1H, J = 7,8 y 1,6 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 10 1,6 Hz), 9,94 (s, 1H).
Etapa 2
4-Metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldel'ndo
imagen30
Una mezcla de 3-bromo-4-metil-benzaldehido (3,105 g; 15,6 mmoles), bis (pinacolato) diboro (4,29 g; 16,86 mmoles) 15 y acetato de potasio (4,59 g; 46,8 mmoles) en dimetilformamida (60 mL) se desgasifico mediante evacuacion - purga de nitrogeno (3 ciclos), seguido por burbujeo de gas nitrogeno a traves de la mezcla de reaccion agitada durante 5 minutos. Se anadio acetato de paladio (0,120 g; 0,536 mmoles) y la mezcla de reaccion se calento a 85 grados C (temperatura del bano de aceite) durante 2,5 horas. La mezcla de reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente y la DMF se elimino al vach. El residuo se repartio entre acetato de etilo (150 mL) y agua (150 mL) y la 20 mezcla se filtro a traves de un tapon de celite para eliminar solidos de Pd negro. La torta de filtrado se lavo con acetato de etilo (2 x 50 mL) y las fases de filtrado combinadas se separaron y la fase organica se lavo con agua (2 x 150 mL) despues disolucion saturada de cloruro sodico (150 mL). La fase organica se seco sobre Na2SO4 y se filtro, los disolventes de filtrado se eliminaron al vach para proporcionar un aceite amarillo que se purifico por cromatograffa rapida en gel de sflice (50 g de 1ST Flash; eluyendo de 0 a 10% de acetato de etilo en hexano) para 25 proporcionar el producto como un solido incoloro.
Rendimiento: 4,58 g; 85%
Tiempo de retencion de LC-MS = 2,799 min; [M+H]+ 247
1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 1,36 (s, 12H), 2,62 (s, 3H), 7,31 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,83 (dd, 1H, J = 7,88 y 1,9 Hz), 8,25 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 9,98 (s, 1H).
30 Etapa 3
Etilester de acido 2-amino-4-(5-formil-2-metil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen31
Se anadio etilester de acido 2-amino-4-cloro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico (7,62 g, 29,57 mmoles) a 4-metil-3- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldelmdo (7,28 g, 29,57 mmoles) seguido por carbonato de hidrogeno y sodio (7,45 g, 88,71 mmoles). Se anadio DMF (110 mL) seguido por agua (22 mL) y la suspension se desgasifico 5 por evacuacion - purga de nitrogeno (3 ciclos), seguido por burbujeo de gas nitrogeno a traves de la mezcla de reaccion agitada durante 5 minutos. Se anadio cloruro de 6/s(trifenilfosfina)paladio (II) (500 mg, 0,739 mmoles) y la mezcla de reaccion se calento a 85 grados C (temperatura de bano de aceite) durante 18 horas. La mezcla de reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente y la DMF se elimino al vaco. El residuo se repartio entre acetato de etilo (500 mL) y agua (400 mL) y la mezcla se agito vigorosamente durante 15 min antes de filtrarse a traves de un 10 tapon de celite para eliminar los solidos de Pd. La torta de filtrado se lavo con acetato de etilo (2 x 50 mL) y las fases de filtrado combinadas se separaron y la fase organica se lavo con agua (1 x 300 mL) despues disolucion saturada de cloruro sodico (250 mL). La fase organica se seco sobre Na2SO4 y se filtro, y los disolventes de filtrado se eliminaron al vaco para proporcionar un solido oleoso marron que se trituro con acetato de etilo para proporcionar el producto como un solido marron (5,42 g, 56%).
15 Tiempo de retencion de LC-MS = 2,436 min; [M+H]+ 342
1H RMN (400 MHz, da-DMSO) 1,30 (t, 3H), 2,38 (s, 3H), 4,32 (q, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,71 (d, 2H), 7,91 (s, 1H), 7,97 (d, 1H), 10,11 (s, 1H).
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplo 197
20 Etilamida de acido 2-amino-4-(2-metil-5-propilaminometil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen32
Se anadio metanol (5 mL) a etilester de acido 2-amino-4-(5-formil-2-metil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (100 mg, 0,29 mmoles) y se anadio propilamina (0,586 mmoles) entonces a la suspension resultante. La mezcla de reaccion se calento a reflujo (proporcionando disolucion marron homogenea) durante 4 horas despues se dejo 25 enfriar a temperatura ambiente. Se anadio borohidruro sodico (23 mg; 0,58 mmoles) y la mezcla de reaccion se agito durante 30 mins. Se elimino metanol al vach y el residuo se repartio entre agua (20 mL) y acetato de etilo (20 mL). Las fases se separaron y la fase organica se seco sobre Na2SO4 y se filtro y los disolventes de filtrado se eliminaron al vaco para proporcionar solido marron que se suspendio en etilamina 2,0m en disolucion de metanol (5,0 mL, 10 mmoles) y se calento en un tubo sellado a 85 grados C toda la noche. La mezcla de reaccion se dejo enfriar y los 30 disolventes se eliminaron al vaco para proporcionar un solido marron que se trituro en acetato de etilo caliente, se filtro y se seco para proporcionar el producto del tttulo como solido marron claro (50 mg, 45%).
Tiempo de retencion de LC-MS = 2,436 min; [M+H]+ 342
1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 6 0,79 (t, 3H, J = 7,4 Hz), 1,01 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1,35 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 2,39 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,25 (s, 2H), 3,65 (s, 2H), 7,02 (s, 2H), 7,2-7,38 (m, 3H), 7,48 (s, 1H), 8,52 (t, 3H, J = 5,4 Hz).
35 Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos (Tabla 5) se hicieron mediante el metodo del Ejemplo 197, sustituyendo la amina apropiada por propilamina. La cuarta columna de la Tabla 5 expresa la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 5
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
198
JuCW0^ 456 A Aminacion reductora
199
Xj “ rrv/^ h2n'V s 410 A Aminacion reductora despues amida
200
JT1no lynn \ 432 A Aminacion reductora despues amida
201
rpro i iTYv^ H2N-^N'^L's 438 A Aminacion reductora despues amida
202
XX'® ° xXXi^ h*n N s ft 414 A Aminacion reductora despues amida
203
,A JX» H_/ H2N N = 382 A Aminacion reductora despues amida
204
X fyvJL/ h/^n^ J 436 A Aminacion reductora despues amida
205
nX\ n-V H;N N * o 386 A Aminacion reductora despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
206
Jy H I_. H_ XjCh^ 370 A Aminacion reductora despues amida
207
tT C^^s-nh2 JTryb 511 A Aminacion reductora despues amida
208
0 Vnh, xX>^J HjN^^N^ s 0 413 A Aminacion reductora despues amida
209
^N-^N^S 0 382 A Aminacion reductora despues amida
210
JCDhS H2N n ® 0 422 A Aminacion reductora despues amida
211
rpro- xXyty h2n'>i^'s o 436 A Aminacion reductora despues amida
212
rnrt3 jCxh?'/ H/T^N^S 0 426 A Aminacion reductora despues amida
213
H / JD3-< 398 A Aminacion reductora despues amida
214
jf Vry/^ 452 A Aminacion reductora despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
215
X / jrrv-r 446 A Aminacion reductora despues amida
216
rf ’''T N X \ XX H XXv/^ 433 A Aminacion reductora despues amida
217
XpXJ x6cv/^ 433 A Aminacion reductora despues amida
218
XTX X>x H2N'Xi''^S 0 398 A Aminacion reductora despues amida
219
jcnnr i H / H/rV^a o 399 A Aminacion reductora despues amida
220
X tL/ „Xh 382 A Aminacion reductora despues amida
221
xpoa 1 H jO>^ 422 A Aminacion reductora despues amida
222
fpnr^ X a_/ XjO-C 436 A Aminacion reductora despues amida
223
jporo aXh.^ 426 A Aminacion reductora despues amida
Ejemplo
Estructura MH + Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
224
jfVY^ jOoO Hjlvrisr^® 0 398 A Aminacion reductora despues amida
225
*0 452 A Aminacion reductora despues amida
226
fl jSo^ 446 A Aminacion reductora despues amida
227
xr*^Q 20^ 433 A Aminacion reductora despues amida
228
433 A Aminacion reductora despues amida
229
jy^y 3-y^ HiN^W^S 0 398 A Aminacion reductora despues amida
230
JO H I fVy^ h,nAA 0 399 A Aminacion reductora despues amida
231
jVy^ jrYVf HjN" >r s [j—\ 398 A Aminacion reductora despues amida
232
xxv? HJN N s 446 A Aminacion reductora despues amida
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
233
XXM h2n N s 452 A Aminacion reductora despues amida
234
At-n^ AJ H xxyA h2n^'n^'s 400 A Aminacion reductora despues amida
Ejemplo 235
imagen33
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-didoro-5-(2-dietilamino-etoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen34
5
10
15
20
25
1-Benciloxi-2,4-dicloro-5-nitro-benceno
imagen35
Se anadio carbonato de potasio (12 g, 87 mmoles) a una disolucion de 2,4-dicloro-5-nitrofenol (15,6 g, 75 mmoles) en acetona. Se anadio bromuro de bencilo (9 ml, 76 mmoles) y la suspension se calento, temperatura del bano de aceite 75°C, durante ~3 hrs. La suspension resultante se dejo enfriar y se anadio agua (500 ml), la mezcla se extrajo con diclorometano (2x200 ml). Los extractos combinados se lavaron con hidroxido sodico acuoso (150 ml, 2M), agua (2x200 ml) y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico (150 ml). La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido amarillo claro (21,5 g, 96%).
Rf 0,73 CH2Cl2 (SiO2)
Etapa 2
5-Benciloxi-2,4-dicloro-fenilamina
imagen36
Se anadio polvo de hierro (21 g, 376 mmoles) a una suspension del nitrobenceno (21,5 g, 72 mmoles) en acido acetico (300 ml)/agua (150 ml) y la mezcla se calento, temperatura de bano de aceite 85°C, durante ~90 mins. La suspension resultante se filtro. El filtrado se dejo enfriar, se anadio agua (750 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (3x150 ml). Los extractos combinados se lavaron con hidroxido sodico acuoso (300 ml, 2M), agua (2x500 ml) y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico (200 ml). La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido marron claro (18,6 g, 96%).
Rf 0,57 CH2Cl2 (SiO2)
Etapa 3
1-Benciloxi-2,4-dicloro-5-yodo-benceno
imagen37
Se anadio acido clorhndrico (60 ml, 6M) a una disolucion de la anilina (16,2 g, 60 mmoles) en acido acetico (240 ml) y la suspension resultante se enfrio (hielo/agua/sal). Se anadio nitrito sodico acuoso (4,8 g, 69,5 mmoles en 40 ml) lentamente (manteniendo la temperatura <5°C). En completa adicion la disolucion resultante se agito durante ~30 mins. La disolucion resultante se vertio en una disolucion de yoduro de potasio (20 g, 120 mmoles) y yodo (4 g, 16 mmoles) en agua (200 ml), y la mezcla se agito durante ~90 mins. Se anadio agua (800 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (3x250 ml). Los extractos combinados se lavaron con disolucion acuosa de tiosulfato sodico (2x150 ml, 10%), hidroxido sodico acuoso (250 ml, 2M), agua (2x250 ml) y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico (200 ml). La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un aceite marron claro, solidificado dejandolo estar. (20,6 g, 90%).
Rf 0,82 CH2Cl2 (SiO2)
Etapa 4
Etilester de acido 2-amino-4-(5-benciloxi-2,4-dicloro-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
5
10
15
20
25
30
imagen38
Se anadio acetato de potasio (16 g, 163 mmoles) a una disolucion del yodobenceno (20,6 g, 54 mmoles) y 6/s(pinacolato)diboro (14,5 g, 57 mmoles) en DMF (50 ml), bajo una atmosfera de nitrogeno. Se anadio acetato de paladio (450 mg, cat.) y la mezcla se calento, temperatura del bano de aceite 90°C, durante ~18 hrs. La disolucion resultante se concentro, y el residuo se absorbio en acetato de etilo (200 ml), la disolucion se lavo con agua (3x200 ml) y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico (150 ml). La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a una goma marron clara. El residuo se absorbio en 1,4-dioxano (160 ml) y se anadio etilester de acido 2- amino-4-cloro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (12,85 g, 50 mmoles) y fosfato de potasio acuoso (40 ml, 2M), bajo una atmosfera de nitrogeno. Se anadio dicloro bis(trifenilfosfina) paladio (II) (cat.) y la mezcla se calento, temperatura del bano de aceite 100°C, durante ~3 hrs. La mezcla se dejo enfriar y se anadio acetato de etilo (400 ml). La mezcla se lavo con disolucion acuosa saturada de cloruro sodico (100 ml). La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido amarillo claro. Los solidos se lavaron con dietileter/hexano (1:1), para dar un solido de color crudo. Se seco al vaco (40°C). 10,7 g (45%).
Rf 0,13 EtOAc/Hex (1:3) (SO2)
Tiempo de retencion de LC 2,891 min [M+H]+ 474,1/476,1 (tiempo de marcha 3,75 min)
Etapa 5
Etilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-hidroxi-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen39
Una suspension de etilester de acido 2-amino-4-(5-benciloxi-2,4-diclorofenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico en etilamina metanolica (~2M) se calento, a ~75°C, durante ~18 hrs. La disolucion resultante se concentro y el residuo se trituro con dietileter/hexano para dar un polvo marron claro.
Tiempo de retencion de LC 2,654 minutos [M+H]+ 475,1/473,1 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Se anadio disolucion de tricloruro de boro (1M en diclorometano) a una suspension de etilamida de acido 2-amino-4- (5-benciloxi-2,4-diclorofenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico en diclorometano, a -78°C bajo una atmosfera de nitrogeno. La suspension se agito durante ~3 hrs a temperatura ambiente. La suspension se enfrio en hielo y se anadio metanol, la mezcla resultante se agito durante ~1 hr y se concentro a un solido verde amarillo. Los solidos se suspendieron en acetato sodico acuoso (10%) y se extrajeron con acetato de etilo. Los extractos se lavaron con agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido marron claro, se lavo con hexano seco al vacfo.
Tiempo de retencion de LC 2,180 minutos [M+H]+ 385/383 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 6
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-dicloro-5-(2-dietilamino-etoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
5
10
15
20
25
imagen40
Se anadio carbonato de cesio a una disolucion de etilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-hidroxifenil)-tieno[2,3- d]pirimidina-6-carboxflico en DMF, se anadio hidrobromuro de 2-bromo-N,N-dietiletilamina y la suspension se calento, a ~140°C, durante ~2 hrs. La suspension resultante se dejo enfriar y se anadio diclorometano. La mezcla se lavo con agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a una goma marron oscura. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en sflice eluyendo con mezclas de diclorometano y metanol.
1H RMN (400 MHz, da-DMSO) 6 0,96 (t, 6H, J = 7,1 Hz), 1,07 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 2,55 (q, 4H, J = 7,1 Hz), 2,81 (t, 2H, J = 5,8 Hz), 3,22 (m, 2H), 4,12 (t, 2H, J = 5,8 Hz), 7,23 (s, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,54 (t, 1H, J = 5,5 Hz).
Tiempo de retencion de LC 1,774 minutos [M+H]+ 484/482 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplo 236
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-dicloro-5-(2-morfolin-4-iletoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen41
Etapa 1
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-dicloro-5-(2,2-dietoxi-etoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen42
Se anadio terc-butoxido de potasio a una suspension de etilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-hidroxifenil)- tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico en acetonitrilo, se anadio bromoacetaldehndo dietilacetal y la suspension se calento a reflujo durante ~8 hrs. La suspension resultante se dejo enfriar y se anadio agua, la mezcla se extrajo con acetato de etilo y los extractos se lavaron con agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a una goma roja/marron. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en sflice eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano.
Tiempo de retencion de LC 2,614 minutos [M+H]+ 501/499 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 2
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-didoro-5-(2-morfolm-4-il-etoxi)-feml]-tieno[2,3-d]pinmidina-6-carboxflico
Se anadio acido clorlddrico a una disolucion de etilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-(2,2-dietoxietoxi)-fenil)- tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico en THF y la disolucion se agito durante ~18 hrs. Se anadio morfolina y la disolucion se agito, se anadio triacetoxiborohidruro sodico y la suspension resultante se agito durante ~18 hrs. Se 5 anadio diclorometano y la mezcla se lavo con amoniaco acuoso (0,880), agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido amarillo claro. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en sflice eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano.
Tiempo de retencion de LC 1,795 minutos [M+H]+ 498/496 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
10 Ejemplo 237
Isopropilamida de acido 2-amino-4-[2,4-dicloro-5-(2-dietilamino-etoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen43
Etapa 1
Acido 2-amino-4-(5-bendloxi-2,4-dicloro-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
15
Se anadio hidroxido sodico (0,190 g; 4,75 mmoles) a etilester de acido 2-amino-4-(5-benciloxi-2,4-didoro-fenil)- tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (etapa 4 ejemplo 235). Se anadio etanol (25 ml) seguido por agua (2,5 ml) y la mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 1 hora. La mezcla de reaccion se dejo enfriar y se eliminaron disolventes al vaco. El residuo resultante se disolvio en agua y se agito en bano de hielo-agua y se neutralizo 20 mediante la adicion en gotas de disolucion de acido clorhidrico al 37% (ac). La mezcla de reaccion se seco por congelacion para proporcionar producto como un polvo amarillo (que contiene 2 equivalentes de NaCl) 1,33 g; 100%.
imagen44
Tiempo de retencion de LC 2,579 minutos [M+H]+ 448/446 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 2
25 Isopropilamida de acido 2-amino-4-(5-bendloxi-2,4-dicloro-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen45
10
15
20
25
Se anadio hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (1,176 g; 3,07 mmoles) a acido 2-amino-4-(5-benciloxi-2,4-dicloro-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico.2NaCl (1,33 g; 2,38 mmoles) despues DMF (25 ml) para proporcionar una disolucion marron turbia. Se anadio isopropilamina (1,01 ml; 11,9 mmoles) y la mezcla de reaccion se calento a 60°C (temperatura de bano de aceite) durante 18 horas. La mezcla de reaccion se dejo enfriar a temperatura ambiente y la DMF se elimino al vaco. El residuo se repartio entre acetato de etilo (200 ml) y agua (200 ml). Las fases se separaron y la fase organica se lavo con disolucion acuosa saturada de cloruro sodico (200 ml) se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y los disolventes filtrados se eliminaron al vaco para proporcionar un solido amarillo. El producto en bruto se purifico por cromatograffa rapida en gel de sflice (cartucho 1ST Flash Si de 50 g) eluyendo con un gradiente de disolvente de 20 a 50% de acetato de etilo en hexano. Esto proporciona producto como un solido incoloro (0,612 g; 53%).
Tiempo de retencion de LC 2,756 minutos [M+H]+ 489/487 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 3
Isopropilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-hidroxi-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen46
Preparado como para la etapa 5 ejemplo 235 a partir de isopropilamida de acido 2-amino-4-(5-benciloxi-2,4-dicloro- fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (0,594 g). Se purifico el producto por cromatograffa rapida en gel de silice (cartucho 1ST Flash Si de 20 g) eluyendo con un gradiente de disolvente de 20 a 100% de acetato de etilo en hexano. Esto proporciona el producto como un solido incoloro (0,350 g; 72%).
Tiempo de retencion de LC 2,353 minutos [M+H]+ 399/397 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Isopropilamida de acido 2-amino-4-[2,4-dicloro-5-(2-dietilamino-etoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen47
Preparado como para la etapa 6 del ejemplo 235 a partir de isopropilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-hidroxi- fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (0,100 g). El producto se purifico por HPLC preparativo.
Tiempo de retencion de LC 1,965 minutos [M+H]+ 498/496 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los compuestos siguientes (Tabla 6) se hicieron utilizando los metodos de los ejemplos 235, 236 y 237.
La cuarta columna de la Tabla 6 expresa la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 6
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
238
fryjv 494 A Aminacion reductora
239
XjTWv ►y^N^s ft 474 A Suzuki
240
<? xrH cr rryj^ H1N'">r~S ft 383 A Amida despues desbencilacion
241
,uP H/l'TT'® £ 473 A Suzuki despues amida
242
a ^jh~y „w 487 A Suzuki despues amida
243
~03 fYyJ-y H,nA^S ^ 405 A Suzuki despues amida
244
^■y0H rryA' h2n-^n^s ^ 315 A Amida despues desbencilacion
245
AJ H cr y rvyjk/ 508 A Aminacion reductora
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
246
ct cr-J-y N- 509 A Aminacion reductora
247
H 1 rYyJ^ 484 A Aminacion reductora
248
A* cr y JucvvY 397 A Amida despues desbencilacion
249
Cl jx^x 512 A Aminacion reductora
250
aAyc^ fVVA/ 530 A Aminacion reductora
251
jx^c f iTV.n h2n'"Hi"'L'-s' l V 494 A Alquilacion despues amida
252
Cl jQO-Y1- h2n^n^"s V 536 A Alquilacion despues amida
253
a jv>a 480 A Amida despues alquilacion
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
254
Cl jcrnr 454 A Amida despues alquilacion
255
Ct-V XjOy"— Hir'ifs ft 468 A Amida despues alquilacion
256
J1 I i -s l 482 A Amida despues alquilacion
257
Cl x^v JGCwV HjN^N^S ft 1 494 A Amida despues alquilacion
258
a jy~0 498 A Alquilacion despues amida
259
Cl d¥^C jncWV iy.rVs w. \ 496 A Amida despues alquilacion
260
cr^C i \ 414 A Amida despues alquilacion
261
1 fl xfov- HjN'^N'^'S W 474 A Amida despues alquilacion
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
262
a H2N N s 'o 467 A Amida despues alquilacion
263
Cl JJ ^ fTW8-' H^N^S " 477 A Amida despues alquilacion
264
Cl ar-^r ^ _. H 440 A Alquilacion despues amida
265
Cl fVyAr H2N^S'T'S/^) n' 510 A Alquilacion despues amida
266
Cl aJj°^C N’lr'V JL^-s I. II >-/ y^oh H.N'^N^S l L u OH 528 A Alquilacion despues amida
267
a'Jy* xxy/^ H.N^V^S V 440 A Amida despues alquilacion
268
o ? ii r A/'^v^o JLJ H 507 A Amida despues alquilacion
269
A J o \ xxw^ h2n'''viY~'S n 571 A Amida despues alquilacion
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
270
Cl HjhTV^s \ 422 A Amida despues alquilacion
271
riWk" u HjN NT s q 510 A Amida despues alquilacion
Ejemplo 272
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-didoro-5-(2-hidroxi-etoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen48
5 Se anadio acido clorlddrico a una disolucion de etilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-(2,2-dietoxietoxi)-fenil)- tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico en THF y la disolucion se agito durante ~18 hrs. Se anadio diclorometano y la mezcla se agito, se anadio borohidruro sodico y la suspension resultante se agito durante ~5 hrs. Se anadio diclorometano y la mezcla se lavo con disolucion saturada de cloruro de amonio. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido amarillo claro. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativo, para 10 dar el producto como un solido de color crudo.
Tiempo de retencion de LC 2,124 minutos [M+H]+ 428,9/426 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Ejemplo 273
Etilamida de acido 2-amino-4-[2,4-dicloro-5-(1-metil-piperidin-2-ilmetoxi)-fenil]-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen49
15 A una mezcla de etilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dicloro-5-hidroxi-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (30 mg, 0,08 mmoles) y (1-metil-piperidin-2-il)-metanol (12 mg, 0,09 mmoles) en tetrahidrofurano seco (10 ml) se anadio trifenilfosfina (33 mg, 0,13 mmoles).
Se anadio dietilazodicarboxilato (0,021 ml, 0,13 mmoles) en tetrahidrofurano seco (1 ml) en gotas durante el espacio de 30 segundos a temperatura ambiente. La mezcla se agito entonces a temperatura ambiente durante 30 minutos 20 en cuyo momento se anadio acetato de etilo (30 ml) y la disolucion resultante se lavo con disolucion de bicarbonato sodico 1 M (30 ml), seguido por salmuera saturada (30 ml). Los compuestos organicos resultantes se secaron con
5
sulfato sodico y se concentraron para dar un aceite amarillo que se purifico por LCMS preparativo, dando un solido blanco (20,4 mg, 53%).
Tiempo de retencion de LC 1,84 minutos, [M+H]+ 494.
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito anteriormente.
Ejemplo 274
imagen50
Ciclopropilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dimetil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-sulfonico
imagen51
Etapa 1
10 2-Amino-4-cloro-6-(2,4-dimetil-fenil)-pirimidina-5-carbaldel'ndo
imagen52
Se anadio fosfato de potasio acuoso a una suspension de acido 2,4-dimetilbencenoboronico y 2-amino-4,6-dicloro-5- pirimidinacarbaldehndo (3 eq) en 1,4-dioxano, bajo una atmosfera de nitrogeno. Se anadio dicloro bis(trifenilfosfina)paladio (ll) (cat.) y la mezcla se calento, ~100°C, durante ~90 mins. La mezcla resultante se dejo 15 enfriar y se anadio diclorometano, la mezcla se lavo con agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido amarillo claro. El solido en bruto se purifico por cromatograffa de columna en sflice eluyendo con mezclas de dietileter y hexano.
Tiempo de retencion de LC 2,354 minutos [M+H]+ 262,0 (tiempo de marcha 3,75 mins)
5
10
15
20
25
2-Amino-4-(2,4-dimetil-fenil)-6-mercapto-pirimidina-5-carbaldel'ndo
imagen53
Se anadio 2-amino-4-cloro-6-(2,4-dimetilfenil)-pirimidina-5-carbaldel'ndo a una suspension de sulfuro sodico (5 eq.) en DMF y la mezcla se agito durante ~60 mins, para dar una suspension amarilla. La suspension se vertio en agua, y la disolucion se filtro. El filtrado se acidulo con acido acetico, para dar un precipitado amarillo. Los solidos se eliminaron por filtracion y se lavaron con agua y hexano, se secaron al vado, para dar un polvo amarillo.
Tiempo de retencion de LC 2,048 minutos [M+H]+ 260,0 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 3
C-[2-amino-6-(2,4-dimetil-fenil)-5-formil-pirimidin-4-ilsulfanil]-N-ciclopropil-metanosulfonamida
imagen54
Se anadio carbonato de hidrogeno y sodio a una disolucion de 2-amino-4-(2,4-dimetilfenil)-6-mercapto-pirimidina-5- carbaldehfdo en DMF y la suspension se agito. Se anadio C-bromo-N-ciclopropil-metano-sulfonamida, y la mezcla se calento, ~85°C, durante ~3 hrs. La suspension resultante se dejo enfriar y se anadio acetato de etilo, la mezcla se lavo con agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido amarillo claro. El solido en bruto se purifico por cromatograffa de columna en sflice eluyendo con mezclas de acetato de etilo y hexano.
Tiempo de retencion de LC 2,413 minutos [M+H]+ 393,0 (tiempo de marcha 3,75 mins)
Etapa 4
Ciclopropilamida de acido 2-amino-4-(2,4-dimetil-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-sulfonico
imagen55
Se anadio piridina a una suspension de C-[2-amino-6-(2,4-dimetilfenil)-5-formil-pirimidin-4-ilsulfanil]-N-ciclopropil- metano-sulfonamida en diclorometano y la mezcla se enfrio, hielo/agua. Se anadio anhfdrido trifluoroacetico y la mezcla se agito durante ~2 hrs y se calento a reflujo durante ~24 hrs. La disolucion roja oscura resultante se dejo enfriar y se anadio amoniaco acuoso (0,880) y la mezcla se agito durante ~30 mins. Se anadio diclorometano y la mezcla se lavo con acido clorlddrico diluido, agua y disolucion acuosa saturada de cloruro sodico. La disolucion se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a un solido rojo/naranja. El solido en bruto se purifico por HPLC preparativo.
5
1H RMN (400 MHz, da-DMSO) 6 0,40-0,45 (m, 2H), 0,50-0,55 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,27 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 7,17 (bd, 1H, J = 7,6 Hz), 7,18 (s, 1H), 7,21 (bs, 1H), 7,28 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,34 (s, 2H), 8,16 (bs, 1H).
Tiempo de retencion de LC 2,478 minutos [M+H]+ 375,0 (tiempo de marcha 3,75 mins).
Este compuesto tema actividad A en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplo 275
Etilester de acido 2-amino-4-fenetil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
imagen56
Etapa 1
Etilester de acido 2-amino-4-estiril-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
10
imagen57
A una disolucion de etilester de acido 2-amino-4-cloro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (0,193 g, 0,75 mmoles) y acido alfa-fenilvinilboronico (0,17 g, 1,5 equiv.) en DMF a temperatura ambiente se anadio disolucion de carbonato de hidrogeno y sodio 1M (1,88 ml, 2,5 equiv) seguido por cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (26 mg, 0,05 equiv.). Se burbujeo nitrogeno a traves de la mezcla durante 5 minutos antes de calentar a 85°C y agitar durante 10 15 horas. La disolucion refrigerada se repartio entre acetato de etilo y agua, las fases organicas combinadas se lavaron con agua y salmuera antes de cargarse directamente en una columna de intercambio ionico Isolute SCX II. En la elucion con amoniaco 1M en metanol y evaporacion al vado, se recupero producto puro como un polvo naranja (0,169 g, 70%). 1
1H RMN (CDCla) 6 = 8,03 (1H, s); 8,03 (1H, d, J = 15 Hz); 7,59 (2H, m); 7,41-7,30 (4H, m); 5,19 (2H, s ancho); 4,31 20 (2H, q, J = 7,1 Hz) y 1,35 (3H, t, J = 7,1 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 7,47 mins, [M+H]+ = 326,12 (tiempo de marcha 15 minutos)
Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Etapa 2
Etilester de acido 2-amino-4-fenetil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen58
A una disolucion de etilester de acido 2-amino-4-estiril-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico (78 mg, 0,18 mmoles) en etanol se anadio paladio al 5% en carbon activo (51 mg) que se agito toda la noche bajo una atmosfera de hidrogeno. La suspension se filtro a traves de celite, los compuestos volatiles se eliminaron al vado y el residuo se purifico usando HPLC semi-preparativo para dar el compuesto puro como un polvo naranja.
5 1H RMN (CDCla) 8 = 7,82 (1H, s); 7,35-7,11 (5H, m); 5,33 (2H, s ancho); 4,40 (2H, q, J = 7,1 Hz); 3,26 (2H, m); 3,22
(2H, m) y 1,43 (3H, t, J = 7,1 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 7,11 mins, [M+H]+ = 327,92 (tiempo de marcha 15 minutos)
Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos (Tabla 7) se hicieron por los metodos del Ejemplo 275 sustituyendo el acido boronico o 10 ester de boronato apropiado. Las amidas correspondientes se sintetizaron directamente a partir del ester (ejemplo 235, etapa 5) o por hidrolisis (ejemplo 43, etapa 1) seguido por acoplamiento de amina (ejemplo 43, etapa 2) y se purificaron por HPLC semi-preparativo. La cuarta columna de la Tabla 7 expresa la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 7
Ejemplo
Estructura MH + Hsp90 PF CI50 Comentario de srntesis
276
326,1 A Suzuki
277
344,0 A Suzuki
278
xxw7 326,1 A Suzuki
279
rV 1 IH HjN N' "S 0 356,1 A Suzuki
280
360,0 A Suzuki
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
281
Cl iXH°v H2N" 'M S 0 360,1 A Suzuki
282
F iV H2N"'^N S 0 344,2 A Suzuki
283
jXV 325,1 A Suzuki, hidrolizado despues amidacion
284
o^F XXH HzN'7f'^S 0 393,8 A Suzuki
285
iW H2NN" s o 328,09 A Suzuki despues hidrogenacion
286
xxy^ H2N N s o 325,0 A Suzuki despues amidacion
287
fYyT-7 o 327,1 A Suzuki, hidrogenacion despues amidacion
Ejemplo
Estructura
MH+
Comentario de smtesis
288
289
290
291
292
293
imagen59
imagen60
imagen61
imagen62
394,1
306,2
355,8
264,1
292,1
351,1
A
B
B
B
B
A
Suzuki
Suzuki
Suzuki
Suzuki
Suzuki
Suzuki
Ejemplo 294
Etilester de acido 2-amino-4-(1H-indol-3-il)-tieno[2,3-d]pinmidina-6-carboxflico
imagen63
5
10
15
20
25
Etapa 1
Etilester de acido 2-amino-4-(1-bencenosulfoml-1H-indol-3-il)-tieno[2,3-d]pinmidina-6-carboxflico
imagen64
Usando acido 1 -(fenilsulfonil)-3-indol-bor6nico y el metodo del Ejemplo 275 etapa 1, el producto deseado se sintetizo como un solido naranja (105 g, 29%).
Tiempo de retencion de LCMS 7,72 min, [M+H]+ = 478. (Tiempo de marcha 15 mins)
Etapa 2
Acido 2-amino-4-(1H-indol-3-il)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
imagen65
Una disolucion de etilester de acido 2-amino-4-(1-bencenosulfonil-1H-indol-3-il)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (80 mg, 0,17 mmoles) en etanol (6 ml) se calento a 65°C, se anadio hidroxido de potasio 2M (0,25 ml, 3 equiv.) y se agito toda la noche. Se anadio agua y los compuestos volatiles se eliminaron al vaco. La disolucion se neutralizo entonces y se seco por congelacion.
Tiempo de retencion de LCMS 5,72 min [M+H]+ = 311,07 (tiempo de marcha 15 minutos)
Etapa 3
Etilester de acido 2-amino-4-(1H-indol-3-il)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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El acido 2-amino-4-(1H-indol-3-il)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico en bruto se disolvio en etanol (2 ml) y se anadio acido sulfurico concentrado (5 gotas). La disolucion se puso a reflujo toda la noche antes de anadirse agua y los compuestos volatiles se eliminaron al vado. La disolucion acuosa se repartio con disolucion de carbonato de hidrogeno y sodio 1M y acetato de etilo. Los compuestos organicos se combinaron, se secaron sobre sulfato sodico y se evaporo hasta sequedad. Los compuestos puros se obtuvieron despues de TLC preparativo como un polvo coloreado de color crudo. 1
1H RMN (da-DMSO) 8 = 11,93 (1H, s ancho); 8,62 (1H, d, J = 7,5 Hz); 8,43 (1H, s); 8,27 (1H, s); 7,53 (1H, d, J = 7,5 Hz); 7,27-7,15 (1H + 1H + 2H, m); 4,34 (2H, q, J = 7,1 Hz) y 1,34 (3H, t, J = 7,1 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 6,70 min, [M+H]+ = 339,08 (tiempo de marcha de 15 minutes)
Este compuesto tema actividad “B” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion. Ejemplo 294
Etilamida de acido 2-amino-4-benciloxi-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
5
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Etapa 1
Acido 2-amino-4-benciloxi-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carbox^lico
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A un matraz lleno con nitrogeno que contema hidruro sodico (0,5 mmoles, 60% en aceite mineral) en THF anhidro (5 10 ml) se anadio alcohol bendlico (0,5 mmoles). La suspension se agito vigorosamente durante 10 minutos hasta que no se desprendio mas gas antes de transferirse a un tubo de reaccion de microondas que contema etilester de acido 2-amino-4-cloro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (0,129 g, 0,5 mmoles). El tubo sellado se calento a 90°C durante 5 mins usando 300 W en un aparato de microondas CEM (CUIDADO!). La mezcla de reaccion se repartio entre DCM y agua, la fase de agua se neutralizo y se evaporo hasta sequedad al vaco para dejar el producto puro.
15 Tiempo de retencion de LCMS 6,35 min, [M+H]+ =301,93 (tiempo de marcha 15 minutos)
Etapa 2
Etilamida de acido 2-amino-4-benciloxi-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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La amida se sintetizo usando las condiciones de acoplamiento HATU dadas en el ejemplo 43, etapa 2 y se purifico 20 por cromatograffa de columna. 1
1H RMN (CDCla) 8 = 7,49 (1H, s); 7,39-7,25 (5H, m); 6,03 (1H, t ancho, J = 5 Hz); 5,39 (2H, s); 5,15 (2H, s ancho); 3,38 (2H, dq, J = 5,7 Hz y J = 7,2 Hz); 1,14 (3H, t, J = 7,2 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 6,34 min, [M+H]+ = 329,05 (tiempo de marcha 15 minutos)
Este compuesto tema actividad “B” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Etilester de acido 2-amino-4-(4-cloro-benzoil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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A una disolucion de etilester de acido 2-amino-4-doro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (1 mol eq.), p5 clorobenzaldehndo (1 mol eq.) y bromuro de 3-etil-1-metil-3H-imidazol-1-io (0,3 moles eq.) en DMF a temperatura
ambiente, se anadio hidruro sodico (1,1 moles eq., 60% en aceite mineral). La disolucion se volvio oscura inmediatamente y se agito durante 3 horas durante las cuales se volvio a una disolucion naranja. Esta se filtro a traves de un embudo de vidrio sinterizado, se anadio salmuera y el precipitado resultante se filtro y se seco. Los solidos amarillos resultantes se purificaron o bien por TLC preparativo o HPLC preparativo.
10 1H RMN (da-acetona) 8 = 8,11 (2H, d, J = 8,8 Hz); 8,03 (1H, s); 7,57 (2H, d, J = 8,8 Hz); 6,86 (2H, s); 4,33 (2H, q, J =
7,0 Hz) y 1,34 (3H, t, J = 7,0 Hz). Tiempo de retencion de lCmS 7,49 min, [M+H]+ = 362,06 (tiempo de marcha 15 minutos).
Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos (Tabla 8) se hicieron mediante el metodo del Ejemplo 295 sustituyendo el benzaldehfdo 15 apropiado. La cuarta columna de la Tabla 8 expone la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 8
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
296
HSN N $ O 328,0 A Aroilacion
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h2N" -f.r o 358,1 A Aroilacion
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<n Ayr7 372,0 A Aroilacion
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i^XHT7 356,1 A Aroilacion
Ejemplo
Estructura
MH+
Comentario de smtesis
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362,1
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A
A
A
A
A
A
Aroilacion
Aroilacion
Aroilacion
Aroilacion
Aroilacion
Aroilacion
306
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356,1
A
Aroilacion
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90 PF CI50 Comentario de smtesis
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H2N'^Nv"^S o 356,1 A Aroilacion
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H2N N'-^S o 370,1 A Aroilacion
309
C! JyCI -AJ* m7 H2N N-'^S 0 396,0 A Aroilacion
310
Pj* kA^° HZN N S 0 388,1 A Aroilacion
311
H2N N'''^ 0 342,1 A Aroilacion
312
AA>T7 HZN N s o 386,1 A Aroilacion
313
°r?V xxyc HaN'^r® o 380,0 A Aroilacion
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<vOCf Sy<° 376,1 A Aroilacion
Etilester de acido 2-amino-4-(1-benzo[1,3]dioxol-5-iM-hidroxi-etil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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5 Se disolvio etilester de acido 2-amino-4-(benzo[1,3]dioxol-5-carboml)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (ejemplo 312) (100 mg) en THF anhidro bajo una atmosfera de nitrogeno antes de que se anadiera bromuro de metilmagnesio (disolucion 3,0M en dietileter, 5 equiv.). La disolucion se agito a 40°C toda la noche antes de repartirse entre disolucion acuosa de cloruro de amonio al 10% y acetato de etilo. La fase organica se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato de magnesio y se evaporo para dar un producto en bruto que se purifico por TLC preparativo para dar 10 el compuesto deseado como un polvo amarillo.
1H RMN (da-acetona) 8 = 8,04 (1H, s); 6,94 (1H, d, J = 7,7 Hz); 6,91 (1H, s); 6,64 (1H, d, J = 7,7 Hz); 6,50 (2H, s ancho); 5,81 (2H, s); 5,46 (1H, s); 4,17 (2H, q, J = 7,1 Hz); 1,81 (3H, s) y 1,19 (3H, t, J = 7,1 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 6,37 min, (eliminacion de H2O en LCMS) [M+H]+ = 370,07 (tiempo de marcha de 15 minutos).
15 Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Ejemplo 316
Etilester de acido 2-amino-4-(benzo[1,3]dioxol-5-il-ciano-metil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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A una disolucion de etilester de acido 2-amino-4-cloro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (1 equiv.) y 20 benzo[1,3]dioxol-5-il-acetonitrilo (1 mol eq.) en DMF a temperatura ambiente, se anadio hidruro sodico (1,1 mol eq., 60% en aceite mineral). La mezcla se agito a esta temperatura toda la noche bajo argon. Despues de esto, se diluyo con salmuera y se extrajo con acetato de etilo. Las partes organicas combinadas se lavaron con salmuera y agua y se secaron con sulfato sodico. Despues de la filtracion y evaporacion del disolvente, se obtuvieron solidos marrones que se purificaron o bien por TLC preparativo o HPLC preparativo.
25 1H RMN (d6-acetona) 8 = 7,76 (1H, s); 6,84 (1H, d, J = 8,0 Hz); 6,56 (1H+1H+1H, m); 6,10 (1H, d, J = 1,0 Hz); 6,05
(1H, d, J = 1,0 Hz); 4,30 (2H, q, J = 7,0 Hz) y 1,30 (3H, t, J = 7,0 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 7,04 min, [M+H]+ = 383,06 (tiempo de marcha 15 minutos).
Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Los siguientes compuestos (Tabla 9) se hicieron por el metodo del Ejemplo 316 sustituyendo el acetonitrilo 30 apropiado. La cuarta columna de la Tabla 9 expresa la actividad del compuesto en el ensayo de polarizacion de fluorescencia descrito a continuacion.
Tabla 9
Ejemplo
Estructura MH+ Hsp90PF CI50 Comentario de smtesis
317
"CCK^ h2n n s 0 339,1 A Desplazamiento de cloruro
318
jjy-r' HaN N S O 369,1 B Desplazamiento de cloruro
Ejemplo 319
Etilester de acido 2-amino-4-ciano-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico
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5 Se mezclaron etilester de acido 2-amino-4-doro-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxflico (1 equiv.), Zn(CN)2 (0,6 equiv.), polvo de Zn (0,12 equiv.), Pd2(dba)3 (0,02 moles eq.) y 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (0,04 equiv.) en DMA y la mezcla se agito en argon a 120°C durante 24 horas. La suspension resultante se filtro a traves de una columna corta de Celite, el filtrado se diluyo con salmuera y se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se lavo entonces con salmuera, agua y se seco sobre sulfato sodico. Despues de la evaporacion del disolvente, se purifico el aceite en 10 bruto por TLC preparativo.
1H RMN (da-acetona) 8 = 7,92 (1H, s); 7,08 (1H, s); 4,42 (2H, q, J = 7,0 Hz) y 1,40 (3H, t, J = 7,0 Hz).
Tiempo de retencion de LCMS 6,10 min [M+H]+ = 249,04 (tiempo de marcha 15 minutos).
Este compuesto tema actividad “A” en el ensayo de polarizacion por fluorescencia descrito a continuacion.
Ensayo de polarizacion de fluorescencia
15 La polarizacion de fluorescencia {tambien conocida como anisotropfa fluorescente} mide la rotacion de una especie fluorescente en disolucion, donde cuanto mayor es la molecula mas polarizada es la emision de fluorescencia. Cuando el fluoroforo se excita con luz polarizada, la luz emitida tambien esta polarizada. El tamano molecular es proporcional a la polarizacion de la emision de fluorescencia.
La sonda marcada con fluorescema - RBT0045864-FAM-
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enlaza con HSP90 { HSP90 humana de longitud total, de levadura de longitud total o dominio N-terminal} y se mide la anisotropfa {rotacion del complejo sonda:protema}.
El compuesto de ensayo se anade a la placa de ensayo, se deja equilibrar y la anisotropfa se mide de nuevo. Cualquier cambio en la anisotropfa es debido a la union competitiva del compuesto a HSP90, liberando asf la sonda.
Materiales
Los compuestos qmmicos son de la mayor pureza disponible comercialmente y todas las disoluciones acuosas se fabrican en agua Ar.
1) Placa de ensayo negra de 96 pocillos Costar num. 3915.
2) Tampon de ensayo de (a) Tris 100 mM de pH 7,4; (b) KCl 20 mM; (c) MgCh 6 mM. Almacenados a temperatura ambiente.
3) BSA (albumina de suero bovino) 10 mg/ml (New England Biolabs num. B9001S).
4) Sonda 20 mM en concentracion madre en DMSO al 100%. Almacenada en la oscuridad a TA. La concentracion de trabajo es 200 nM diluida en agua AR y almacenada a 4°C. Concentracion final en el ensayo 80 nM.
5) Protema HSP90 de longitud completa humana expresada en E. coli, purificada a >95% (vease, por ejemplo, Panaretou et al., 1998) y almacenada en alfcuotas de 50 |jL a -80°C.
Protocolo
1) Anadir 100 jl de tampon 1x a los pocillos 11A y 12A (=PF BLNK)
2) Preparar la mezcla de ensayo - todos los reactivos se mantienen en sonda es sensible a la luz.
• Tampon 1x Hsp90 PF
• BSA 10 mg/ml (NEB)
• Sonda 200 jM
• Hsp90 de longitud completa humano
3) Alfcuota de 100 jl de mezcla de ensayo a todos los demas pocillos
4) Sellar la placa y dejar en la oscuridad a temperatura ambiente durante 20 minutos para equilibrar.
Placa de dilucion del compuesto - series de dilucion 1 x 3
1) Anadir en una placa de fondo en v de 96 pocillos clara - {num. VWR 007/008/257} 10 jl de DMSO al 100% a los pocillos B1 a H11.
2) Anadir a los pocillos A1 a A11 17,5 jl de DMSO al 100%
3) Anadir 2,5 jl de compuesto a A1. Esto da compuesto madre 2,5 mM {50x} - asumiendo compuestos 20 mM.
4) Repetir para pocillos A2 a A10. Control en columnas 11 y 12.
5) Transferir 5 jl de la fila A a la fila B - no la columna 12. Mezclar bien.
6) Transferir 5 jl de la fila B a la fila C. Mezclar bien.
7) Repetir a la fila G.
8) No anadir ningun compuesto a la fila H - esta es la fila 0.
9) Esto produce una serie de dilucion 1x3 de 50 jM a 0,07 jM.
10) En el pocillo B12 preparar 20 jl de compuesto estandar 100 jM.
hielo con un tapon en la cubeta ya que la
i. Conc finaln 10 ml 1x
5.0 jl 5 jg/ml
4.0 jl 80 nM
6,25 jl 200 nM
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11) Despues de la primera incubacion la placa de ensayo se lee en un lector de placas Fusion™ a-FP (Packard BioScience, Pangbourne, Berkshire, RU).
12) Despues de la primera lectura, se anaden 2 jl de compuesto diluido a cada pocillo para las columnas 1 a 10. En la columna 11 {proporciona la curva estandar} solo anadir compuesto en B11 - H11. Anadir 2 jl de compuesto estandar 100 mM a los pocillos B12 - H12 {es control positivo}.
13) El factor Z' se calcula a partir de controles cero y pocillos positivos. Da tfpicamente un valor de 0,7-0,9.
Los compuestos probados en el ensayo anterior se asignaron a uno de dos intervalos de actividad, a saber A = <10 jM; B = >10 jM, y esas asignaciones se presentan anteriormente.
Un ensayo de inhibicion de crecimiento se empleo tambien para la evaluacion de inhibidores de HSP90 candidatos: Evaluacion de citotoxicidad por ensayo de sulforodamina B (SRB): calculo de concentracion inhibidora al 50% (CI50). Dfa 1
1) Determinar el numero de celulas mediante hemocitometro.
2) Usando una multipipeta de 8 canales, anadir 160 jl de la suspension celular (3600 celulas/pocillo o 2 x 104 celulas/ml) a cada pocillo de una placa de microtitulacion de 96 pocillos.
3) Incubar toda la noche a 37°C en una incubadora de CO2.
Dfa 2
4) Se preparan disoluciones madre de farmacos, y se realizan diluciones en serie de cada farmaco en medio para dar concentraciones finales en los pocillos.
5) Usando una multipipeta, se anaden 40 jl de farmaco (a concentracion final 5x) a pocillos por cuadruplicado.
6) Los pocillos de control estan en ambos lados de las placas de 96 pocillos, donde se anaden 40 jl de medio.
7) Incubar placas en una incubadora de CO2 durante 4 dfas (48 horas).
Dfa 6
8) Vaciar el medio en la pila y sumergir la placa lentamente en acido tricloroacetico (TCA) enfriado en hielo al 10%. Dejar durante aproximadamente 30 mins en hielo.
9) Lavar las placas tres veces en agua del grifo sumergiendo las placas en banos de agua del grifo y vaciandolos.
10) Secar en la incubadora.
11) Anadir 100 jl de SRB al 0,4% en acido acetico al 1% a cada pocillo (excepto la ultima fila (mano derecha) de la placa de 96 pocillos, que es el control al 0%, es decir, sin farmaco, sin tinte. La primera fila sera el control al 100% sin farmaco, pero con tinte). Dejar durante 15 mins.
12) Enjuagar el tinte de SRB no unido con cuatro lavados de acido acetico al 1%.
13) Secar las placas en la incubadora.
14) Solubilizar la SRB usando 100 jl de base Tris 10 mM y poner las placas en un agitador de placas durante 5 mins.
15) Determinar la absorbancia a 540 nm usando un lector de placas. Calcular la absorbancia media para pocillos cuadruplicados y expresarla como un porcentaje de valor para pocillos no tratados, de control.
16) Representar los valores de % de absorbancia frente a log de concentracion de farmaco y determinar el CI50.
Por medio de ilustracion, el compuesto del Ejemplo 2 dio un CI50 en el intervalo “A” (<50 uM) para el ensayo de freno de crecimiento de SRB.
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Referencias
Un numero de publicaciones se citan anteriormente para describir mas completamente y divulgar la invencion y el estado de la tecnica a la que pertenece la invencion. Las citas completas para estas referencias se proporcionan a continuacion. Cada una de estas referencias se incorpora en esta memoria por referencia en su totalidad en la presente descripcion.
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Claims (35)

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    15
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    25
    30
    35
    1. El uso de un compuesto de formula (I), o una sal, N-oxido, hidrato o solvato del mismo en la preparacion de una composicion para usar en la inhibicion de actividad HSP90 in vitro o in vivo:
    imagen1
    en donde
    R2 es un grupo de formula (IA):
    -(Ar1 )m-(Alk1 )p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA)
    en donde
    Ar1 es un radical fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido,
    Alk1 y Alk2 son radicales alquileno C1-C3 o alquenileno C2-C3 divalentes opcionalmente sustituidos, m, p, r y s son independientemente 0 o 1,
    Z es -O-, -S-,-(C=O)-, -(C=S)-, -SO2-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC(=O)-, -NRASO2- o - NRa- en donde -RA es hidrogeno o alquilo C1-C6, y
    Q es hidrogeno o un radical fenilo o cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido o un radical heterodclico;
    R3 es hidrogeno, un sustituyente opcional, o un radical alquilo (C1-C6), fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y
    R4 es (i) un grupo ester carboxflico de formula -COORC en donde RC es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, o un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo aril(alquil C1-C6)- o heteroaril(alquil C1-C6)- opcionalmente sustituido o un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o (ii) grupo carboxamida de formula - CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de formula -SO2NRB(Alk)nRA en donde
    Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente opcionalmente sustituido,
    n es 0 o 1,
    Rb es hidrogeno o un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6,
    Ra es hidrogeno, hidroxi o carbodclico o heterodclico opcionalmente sustituido,
    o RA y Rb tomados juntos con el nitrogeno al que estan unidos forman un anillo morfolino, piperidinilo o piperazinilo que puede estar sustituido opcionalmente en uno o mas atomos de C o N del anillo;
    y en donde el termino “opcionalmente sustituido” significa sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de alquilo (C1-C6), alcoxi (C1-C6), hidroxi, hidroxialquilo (C1-C6), mercapto, mercaptoalquilo (C1-C6), alquil (C1-C6) tio, halo (que incluye fluoro y cloro), trifluorometilo, trifluorometoxi, mtro, nitrilo (-CN), oxo, fenilo, -COOH, -COORa, -
    CORA, -SO2RA, -CONH2, -SO2NH2,-CONHRA, -SO2NHRA
    CONRARB,
    SO2NRARB,
    NH2, -NHR
    NRARB, -OCONH2,
    -OCONHRa, -OCONRaRb, NRACONH2, -NHCONHRB
    -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHSO2ORA, -NRACONHRB, -NHCONRARB o -NRACONRARB
    independientemente un grupo alquilo (C1-C6);
    -NRBSO2ORA, -NHCONH2, - en donde RA y RB son
    y en donde el termino “sustituyente opcional” significa un sustituyente especificado anteriormente en la definicion de “opcionalmente sustituido”;
    y en donde el termino “heteroarilo” significa tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, benzimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, benzisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, benzisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo o indazolilo;
    y en donde el termino heterodclico significa heteroarilo o piperidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo o piperazinilo.
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  2. 2. El uso segun la reivindicacion 1 para usar en inmunosupresion o el tratamiento de enfermedad vmca, enfermedades inflamatorias tales como artritis reumatoide, asma, esclerosis multiple, diabetes tipo I, lupus, psoriasis y enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedad relacionada con angiogenesis de fibrosis qmstica tal como retinopatfa diabetica, hemangiomas y endometriosis; o para proteccion de celulas normales frente a la toxicidad inducida por quimioterapia; o enfermedades donde el fallo para experimentar apoptosis es un factor subyacente; o la proteccion de lesion isquemica por hipoxia debido a la elevacion de Hsp70 en el corazon y el cerebro; tembladera/CJD, enfermedad de Huntington o Alzheimer.
  3. 3. El uso segun la reivindicacion 1 para usar en el tratamiento de cancer.
  4. 4. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde, en el compuesto (I), m es 1, cada uno de p, r y s es 0, y Q es hidrogeno.
  5. 5. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde, en el compuesto (I), R2 es fenilo, 2- o 3- tienilo, 2- o 3-furanilo, 2-, 3- o 4-piridinilo, morfolinilo o piperidinilo, opcionalmente sustituido.
  6. 6. El uso segun la reivindicacion 5 en donde, en el compuesto (I), R2 es fenilo, opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes seleccionados de metilo, etilo, n- o isopropilo, vinilo, alilo, metoxi, etoxi, n-propiloxi, benciloxi, aliloxi, cianometoxi cloro, bromo, ciano, formilo, metil-, etil- o n-propil-carboniloxi, metil- o etilaminocarbonilo, y sustituyentes de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6; o de formula -(Alk3)mZ1 en donde Alk3 es un alquileno (C1-C3) divalente de cadena lineal o ramificada, m es 0 o 1, y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1- C8.
  7. 7. El uso segun la reivindicacion 6 en donde los sustituyentes opcionales estan en la posicion 2 y/o 4 y/o 5 del anillo fenilo.
  8. 8. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde, en el compuesto (I), m es 1, y p, r y s son 0, y Q es un anillo carbodclico o heterodclico opcionalmente sustituido.
  9. 9. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde, en el compuesto (I), Ar1 es un anillo fenilo o piridilo.
  10. 10. El uso o metodo segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde, en el compuesto (I), en donde R3 es hidrogeno.
  11. 11. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde, en el compuesto (I), R4 es un grupo carboxamida de formula -CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de formula -SO2NRB(Alk)nRA en donde
    Alk es-CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH=CH- o -CH2CCCH2- opcionalmente sustituido,
    RB es hidrogeno o metilo, etilo, n- o isopropilo o alilo,
    Ra es hidrogeno, hidroxi o fenilo opcionalmente sustituido, 3,4-metilendioxifenilo, piridilo, furilo, tienilo, N-piperazinilo o N-morfolinilo,
    o RA y Rb tomados juntos con el nitrogeno al que estan unidos forman un anillo N-heterodclico que puede contener opcionalmente uno o mas heteroatomos adicionales seleccionados de O, S y N, y que pueden estar opcionalmente sustituidos en uno o mas atomos de C o N del anillo.
  12. 12. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde, en el compuesto (I), R4 es un grupo ester carboxflico de formula -COORC en donde RC es metilo, etilo, n- o isopropilo, alilo, fenilo, piridilo, tiazolilo, bencilo, piridilmetilo, ciclopentilo o ciclohexilo, opcionalmente sustituido.
  13. 13. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el compuesto (I) tiene la formula (II):
    imagen2
    en donde
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    R10 es H, Cl, Br o CH3;
    R11 es hidrogeno, Cl, Br, CN, metilo, etilo, n- o iso-propilo, vinilo o alilo;
    R12 es (i) un radical de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6; o (ii) un radical de formula -(Alk3)mZ1 en donde Alk3 es un alquileno (C1- C3) divalente de cadena lineal o ramificada, m es 0 o 1, y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6.
  14. 14. El uso segun la reivindicacion 13, en donde, en el compuesto (II), A es un grupo alquil C1-C6 amino secundario.
  15. 15. El uso segun la reivindicacion 13 o la reivindicacion 14 en donde, en el compuesto (II), R12 es (i) un radical de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es di(alquil C1-C3)amino o alcoxi C1-C3.
  16. 16. Un compuesto de formula (I), o una sal, N-oxido, hidrato o solvato del mismo:
    imagen3
    en donde
    R2 es un grupo de formula (IA):
    -(Ar1 )m-(Alk1 )p-(Z)r-(Alk2)s-Q (IA)
    en donde
    Ar1 es un radical fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido,
    Alk1 y Alk2 son radicales alquileno C1-C3 o alquenileno C2-C3 divalentes opcionalmente sustituidos, m, p, r y s son independientemente 0 o 1,
    Z es -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -SO2-, -C(=O)O-, -C(=O)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRA-, -NRAC(=O)-, -NRASO2- o - NRa- en donde RA es hidrogeno o alquilo C1-C6, y
    Q es hidrogeno o un radical fenilo o cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido o radical heterodclico;
    R3 es hidrogeno, un sustituyente opcional, o un radical alquilo (C1-C6), arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; y
    R4 es (i) un grupo ester carboxflico de formula -COORC en donde RC es un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6, o un grupo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo aril(alquil C1-C6)- o heteroaril(alquil C1-C6)- opcionalmente sustituido o un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o (ii) grupo carboxamida de formula - CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de formula -SO2NRB(Alk)nRA en donde
    Alk es un radical alquileno, alquenileno o alquinileno divalente opcionalmente sustituido,
    N es 0 o 1,
    RB es hidrogeno o un grupo alquilo C1-C6 o alquenilo C2-C6,
    Ra es hidrogeno, hidroxi o carbodclico o heterodclico opcionalmente sustituido,
    o RA y Rb tomados juntos con el nitrogeno al que estan unidos forman un anillo morfolino, piperidinilo o piperazinilo que puede estar opcionalmente sustituido en uno o mas atomos de C o N del anillo;
    con tal que (i) R3 no sea -NH2 y (ii) cuando R4 es -COOCH3 y R3 es hidrogeno entonces R2 no es -NH2, etilamino, dietilamino, fenilamino, -N(Ph)(C2Hs) en donde Ph es fenilo, pirrolidin-1-ilo o morfolin-4-ilo y (iii) cuando R4 es - CONH2 y R3 es hidrogeno entonces R2 no es -NH2;
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    y en donde los terminos “opcionalmente sustituido”, “sustituyente opcional”, “heteroarilo” y “heterodclico” se definen segun la reivindicacion 1.
  17. 17. Un compuesto segun la reivindicacion 16 en donde R3 es hidrogeno.
  18. 18. Un compuesto segun la reivindicacion 16 o la reivindicacion 17 en donde m es 1, cada uno de p, r y s es 0, y Q es hidrogeno.
  19. 19. Un compuesto segun la reivindicacion 18 en donde R2 es fenilo, 2- o 3-tienilo, 2- o 3-furanilo, 2-, 3- o 4-piridinilo, morfolinilo o piperidinilo, opcionalmente sustituido.
  20. 20. Un compuesto segun la reivindicacion 18 en donde R2 es fenilo, opcionalmente sustituido por metilo, etilo, n- o isopropilo, vinilo, alilo, metoxi, etoxi, n-propiloxi, benciloxi, aliloxi, cianometoxi cloro, bromo, ciano, formilo, metil-, etil- o n-propil-carboniloxi, metil- o etilaminocarbonilo.
  21. 21. Un compuesto segun la reivindicacion 20 en donde los sustituyentes opcionales estan en la posicion 2 y/o 4 y/o 5 del anillo fenilo.
  22. 22. Un compuesto segun la reivindicacion 16 o la reivindicacion 17 en donde m es 1, y p, r y s son 0, y Q es un anillo carbodclico o heterodclico opcionalmente sustituido.
  23. 23. Un compuesto segun la reivindicacion 16 o la reivindicacion 17 en donde m es 1 y al menos uno de p, r y s es 1.
  24. 24. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 23 en donde Ar1 es un anillo fenilo opcionalmente sustituido.
  25. 25. Un compuesto segun la reivindicacion 16 o la reivindicacion 17 en donde m es 0.
  26. 26. Un compuesto segun la reivindicacion 23 o la reivindicacion 24 en donde Alk1 cuando esta presente es -CH2, CH2CH2- o -CH=CH- opcionalmente sustituido; Alk2 cuando esta presente es -CH2, CH2CH2- o -CH=CH- opcionalmente sustituido; Z cuando esta presente es -O- o -NH-; y Q es hidrogeno.
  27. 27. Un compuesto segun la reivindicacion 26 en donde Z y Alk2 estan presentes, y Alk2 esta sustituido por di(alquil C-i-C3)amino o alcoxi C1-C3.
  28. 28. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 27 en donde R4 es un grupo carboxamida de formula -CONRB(Alk)nRA o un grupo sulfonamida de formula -SO2NRB(Alk)nRA en donde
    Alk es -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH=CH- o -CH2CCCH2-, opcionalmente sustituido,
    Rb es hidrogeno o metilo, etilo, n- o iso-propilo o alilo,
    Ra es hidrogeno, hidroxi o fenilo, 3,4-metilenodioxifenilo, piridilo, furilo, tienilo, N-piperazinilo o N-morfolinilo, opcionalmente sustituido,
    o RA y Rb tomados juntos con el nitrogeno al que estan unidos forman un anillo N-heterodclico que puede contener opcionalmente uno o mas heteroatomos adicionales seleccionados de O, S y N, y que pueden estar opcionalmente sustituidos en uno o mas atomos de C o N del anillo.
  29. 29. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 28 en donde R4 es un grupo carboxamida.
  30. 30. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 16 a 27 en donde R4 es un grupo ester carboxflico de formula -COORC en donde RC es metilo, etilo, n- o iso-propilo, alilo, fenilo, piridilo, tiazolilo, bencilo, piridilmetilo, ciclopentilo o ciclohexilo opcionalmente sustituido.
  31. 31. Un compuesto segun la reivindicacion 16 que tiene la formula (II):
    imagen4
    en donde
    R10 es H, Cl, Br o CH3;
    R11 es hidrogeno, Cl, Br, CN, metilo, etilo, n- o iso-propilo, vinilo o alilo;
    R12 es (i) un radical de formula -O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es un grupo amino primario, secundario, 5 terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6; o (ii) un radical de formula -(Alk3)mZ1 en donde Alk3 es un alquileno (Ci- C3) divalente de cadena lineal o ramificada, m es 0 o 1, y Z1 es un grupo amino primario, secundario, terciario o dclico, o un grupo alcoxi C1-C6.
  32. 32. Un compuesto segun la reivindicacion 31 en donde A es un grupo alquil C1-C6 amino secundario.
  33. 33. Un compuesto segun la reivindicacion 31 o la reivindicacion 32 en donde R12 es (i) un radical de formula -
    10 O(CH2)nZ1 en donde n es 1, 2 o 3 y Z1 es di(alquil C1-C3)amino o alcoxi C1-C3.
  34. 34. Un compuesto segun la reivindicacion 32 que tiene la formula
    imagen5
  35. 35. Una composicion farmaceutica o veterinaria que comprende un compuesto segun las reivindicaciones 16 a 34, junto con uno o mas vehfculos y/o excipientes farmaceutica o veterinariamente aceptables.
    15
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