ES2428697T3 - Use of EDG receptor binding agents in cancer - Google Patents

Abstract

Un agonista del receptor S1 P, que es un compuesto de fórmula IX en donde R1f es un halógeno, trihalometilo, hidroxi, alquilo inferior que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, fenilo, aralquilo,alcoxi inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, trifluorometiloxi, fenoxi, ciclohexilmetiloxi, aralquiloxi sustituido ono sustituido, piridilmetiloxi, cinnamiloxi, naftilmetiloxi, fenoximetil, hidroximetilo, hidroxietilo, alquiltio inferior quetiene de 1 a 4 átomos de carbono, alquilsulfinilo inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, alquilsulfonilo inferiorque tiene de 1 a 4 átomos de carbono, benziltio, acetilo, nitro o ciano; R2f es un hidrógeno, halógeno, trihalometilo, alcoxi inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, alquilo inferior quetiene de 1 a 7 átomos de carbono, fenetilo, o benziloxi; R3f es un hidrógeno, halógeno, trifluorometilo, alcoxi inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxi, benziloxi,alquilo inferior que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, fenilo o alcoximetilo inferior que tiene de 1 a 4 átomos decarbono; Xf es O o S; y nf es un número entero de 1 a 4, o una sal de este farmacéuticamente aceptable, para utilizar en un método para prevenir o tratar enfermedades mediadas por un proceso de neo-angiogénesis oasociado con la angiogénesis desregulada, donde dichas enfermedades se seleccionan del grupo que consiste decáncer, angiogénesis miocardíaca, cicatrización de heridas y disfunción vascular en la diabetes o vasculopatía.An S1 P receptor agonist, which is a compound of formula IX where R1f is a halogen, trihalomethyl, hydroxy, lower alkyl having 1 to 7 carbon atoms, phenyl, aralkyl, lower alkoxy having 1 to 4 atoms carbon, trifluoromethyloxy, phenoxy, cyclohexylmethyloxy, substituted or unsubstituted aralkyloxy, pyridylmethyloxy, cinnamyloxy, naphthylmethyloxy, phenoxymethyl, hydroxymethyl, hydroxyethyl, lower alkylthio having 1 to 4 carbon atoms, lower alkylsulfinyl carbon atoms having 1 to 4 carbon atoms, lower having 1 to 4 carbon atoms, benzylthio, acetyl, nitro or cyano; R2f is hydrogen, halogen, trihalomethyl, lower alkoxy having 1 to 4 carbon atoms, lower alkyl having 1 to 7 carbon atoms, phenethyl, or benzyloxy; R3f is a hydrogen, halogen, trifluoromethyl, lower alkoxy having 1 to 4 carbon atoms, hydroxy, benzyloxy, lower alkyl having 1 to 7 carbon atoms, phenyl or lower alkoxymethyl having 1 to 4 carbon atoms; Xf is O or S; and nf is an integer from 1 to 4, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in a method to prevent or treat diseases mediated by a neo-angiogenesis process or associated with deregulated angiogenesis, where said diseases are selected from the group consisting of cancer, myocardial angiogenesis, wound healing, and vascular dysfunction in diabetes or vascular disease.

Description

Uso de agentes de enlace del receptor EDG en el cáncer. Use of EDG receptor binding agents in cancer.

La presente invención se refiere al uso de un agonista del receptor esfingosina-1-fosfato (S1P), particularmente en el tratamiento del cáncer. The present invention relates to the use of a sphingosine-1-phosphate (S1P) receptor agonist, particularly in the treatment of cancer.

5 Los agonistas del receptor S1P son agentes acelerantes de recirculación de linfocitos (LH) que provocan una linfopenia que resultan de una redistribución, preferiblemente reversible, de linfocitos de la circulación al tejido linfático secundario, sin provocar una inmunosupresión generalizada. Las células naïve son secuestradas; las células T CD8 y CD4 y las células B de la sangre se estimulan para migrar a los nódulos linfáticos (NL) y parches de Peyer (PP), y de este modo por ejemplo, se inhibe la infiltración de células en órganos trasplantados. 5 S1P receptor agonists are lymphocyte (LH) accelerating agents that cause lymphopenia resulting from a redistribution, preferably reversible, of lymphocytes from the circulation to the secondary lymphatic tissue, without causing widespread immunosuppression. Naïve cells are sequestered; CD8 and CD4 T cells and blood B cells are stimulated to migrate to lymph nodes (NL) and Peyer patches (PP), and thus for example, infiltration of cells in transplanted organs is inhibited.

10 Los agonistas del receptor S1P, por lo general son análogos de la esfingosina, tales como los derivados 2aminopropano-1,3-diol 2-sustituido o 2-aminopropanol, por ejemplo un compuesto que comprende un grupo de fórmula X The S1P receptor agonists are generally analogs of sphingosine, such as 2-substituted 2-substituted aminopropane-1,3-diol or 2-aminopropanol derivatives, for example a compound comprising a group of formula X

en donde where

15 Z es H; alquilo C1-6; alquenilo C2-6; alquinilo C2-6; fenilo; fenilo sustituido por un OH; alquilo C1-6 sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de halógeno, cicloalquilo C3-8, fenilo y fenilo sustituido por OH; o CH2-R4z en donde R4z es OH, aciloxi o un residuo de fórmula (a) 15 Z is H; C1-6 alkyl; C2-6 alkenyl; C2-6 alkynyl; phenyl; phenyl substituted by an OH; C1-6 alkyl substituted by 1 to 3 substituents selected from the group consisting of halogen, C3-8 cycloalkyl, phenyl and phenyl substituted by OH; or CH2-R4z wherein R4z is OH, acyloxy or a residue of formula (a)

en donde Z1 es un enlace directo u O, preferiblemente O; cada uno de R5z y R6z, independientemente, es H, o alquilo 20 C1-4 opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 átomos de halógeno; wherein Z1 is a direct link or O, preferably O; each of R5z and R6z, independently, is H, or C1-4alkyl optionally substituted by 1, 2 or 3 halogen atoms;

R1z es OH, aciloxi o un residuo de fórmula (a); y cada uno de R2z y R3z, independientemente, es H, alquilo C1-4 o acilo. El grupo de fórmula X es un grupo funcional unido como un grupo terminal a una fracción que puede ser hidrofílica o lipofílica y comprende uno o más residuos alifáticos, alicíclicos, aromáticos y/o heterocíclicos, en la medida que la molécula resultante en donde al menos uno de Z y R1z es o comprende un residuo de fórmula (a), las R1z is OH, acyloxy or a residue of formula (a); and each of R2z and R3z, independently, is H, C1-4 alkyl or acyl. The group of formula X is a functional group attached as a terminal group to a fraction that can be hydrophilic or lipophilic and comprises one or more aliphatic, alicyclic, aromatic and / or heterocyclic residues, to the extent that the resulting molecule where at least one of Z and R1z is or comprises a residue of formula (a), the

25 señales como un agonista en una más del receptor esfingosina-1-fosfato. 25 signals as an agonist in one more of the sphingosine-1-phosphate receptor.

Los agonistas del receptor S1P son compuestos cuya señal como agonistas en uno o más receptores de la esfingosina-1 fosfato, por ejemplo S1P1 a S1P8. El agonista que se une a un receptor S1P por ejemplo, puede resultar en la disociación de las proteínas G heterotriméricas intracelulares en Ga-GTP y G1y-GTP, y/o aumentar la fosforilación del receptor ocupado por el agonista y la activación de quinasas/rutas de señalización en dirección 3’. S1P receptor agonists are compounds whose signal as agonists in one or more sphingosine-1 phosphate receptors, for example S1P1 to S1P8. The agonist that binds to an S1P receptor, for example, can result in the dissociation of intracellular heterotrimeric G proteins in Ga-GTP and G1y-GTP, and / or increase phosphorylation of the receptor occupied by the agonist and activation of kinases / signaling routes in 3 'direction.

30 La afinidad de enlace de los agonistas del receptor S1P se puede medir como se describe en el párrafo I, a continuación. 30 The binding affinity of the S1P receptor agonists can be measured as described in paragraph I, below.

Ejemplos de agonistas del receptor S1P apropiados son, por ejemplo los siguientes (siendo solo los compuestos de fórmula IX parte de la invención): Examples of suitable S1P receptor agonists are, for example, the following (only compounds of formula IX being part of the invention):

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Los compuestos como se revelan en EP627406A1, por ejemplo un compuesto de fórmula I en donde R1 es una cadena de carbono (C12-22) lineal o ramificado Compounds as disclosed in EP627406A1, for example a compound of formula I wherein R1 is a linear or branched (C12-22) carbon chain

-que puede tener en la cadena un enlace o un heteroátomo seleccionado de un enlace doble, un enlace triple, O, S, NR6, en donde R6 es H, alquilo, aralquilo, acilo o alcoxicarbonilo, y carbonilo, y/o -que puede tener como un sustituyente alcoxi, alqueniloxi, alquiniloxi, aralquiloxi, acilo, alquilamino, alquiltio, -that can have in the chain a bond or a heteroatom selected from a double bond, a triple bond, O, S, NR6, wherein R6 is H, alkyl, aralkyl, acyl or alkoxycarbonyl, and carbonyl, and / or - which may have as a substituent alkoxy, alkenyloxy, alkynyloxy, aralkyloxy, acyl, alkylamino, alkylthio,

acilamino, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, aciloxi, alquilcarbamoilo, nitro, halógeno, amino, hidroxiimino, hidroxi o carboxi; o R1 es acylamino, alkoxycarbonyl, alkoxycarbonylamino, acyloxy, alkylcarbamoyl, nitro, halogen, amino, hydroxyimino, hydroxy or carboxy; or R1 is

-un fenilalquilo en donde el alquilo es una cadena de carbono (C6-20) lineal o ramificada; o -un fenilalquilo en donde el alquilo es una cadena de carbono (C1-30) lineal o ramificada, en donde dicho fenilalquilo es sustituido por -a phenylalkyl wherein the alkyl is a linear or branched (C6-20) carbon chain; or -a phenylalkyl wherein the alkyl is a linear or branched (C1-30) carbon chain, wherein said phenylalkyl is replaced by

-una cadena de carbono (C6-20) lineal o ramificada opcionalmente sustituida por un halógeno, -una cadena alcoxi (C6-20) lineal o ramificada opcionalmente sustituida por un halógeno, -un alqueniloxi (C6-20) lineal o ramificado, -fenilalcoxi, halofenilalcoxi, fenilalcoxialquilo, fenoxialcoxi o fenoxialquilo, -cicloalquilalquilo sustituido por un alquilo C6-20, -heteroarilalquilo sustituido por un alquilo C6-20, -alquilo C6-20 hetericíclico o -alquilo hetericíclico sustituido por un alquilo C2-20, y en donde la fracción alquilo puede tener -a linear or branched carbon chain (C6-20) optionally substituted by a halogen, - a linear or branched (C6-20) alkoxy chain optionally substituted by a halogen, -a linear or branched (C6-20) alkenyloxy, -phenylalkoxy, halophenylalkoxy, phenylalkoxyalkyl, phenoxyalkoxy or phenoxyalkyl, -cycloalkylalkyl substituted by a C6-20 alkyl, -heteroarylalkyl substituted by a C6-20 alkyl, -C6-20 hetericyclic alkyl or -hetericyclic alkyl substituted by a C2-20 alkyl, and where the alkyl fraction may have

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en la cadena carbono, un enlace o un heteroátomo seleccionado de un enlace doble, un enlace triple, O, S, sulfinilo, sulfonilo, o NR6, en donde R6 es como se define anteriormente, y in the carbon chain, a bond or a heteroatom selected from a double bond, a triple bond, O, S, sulfinyl, sulfonyl, or NR6, wherein R6 is as defined above, and

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como un sustituyente alcoxi, alqueniloxi, alquiniloxi, aralquiloxi, acilo, alquilamino, alquiltio, acilamino, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, aciloxi, alquilcarbamoilo, nitro, halógeno, amino, hidroxi o carboxi, y cada uno de R2, R3, R4 y R5, independientemente, es H, alquilo C1-4 o acilo o una sal de este farmacéuticamente aceptable; as an alkoxy, alkenyloxy, alkynyloxy, aralkyloxy, acyl, alkylamino, alkylthio, acylamino, alkoxycarbonyl, alkoxycarbonylamino, acyloxy, alkylcarbamoyl, nitro, halogen, amino, hydroxy or carboxy substituent, and each of R2, R3, R4 and R5, independently , is H, C1-4 alkyl or acyl or a pharmaceutically acceptable salt thereof;

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Los compuestos como se revelan en EP 1002792A1, por ejemplo un compuesto de fórmula II en donde m es 1 a 9 y cada uno de R’2, R’3, R’4 y R’5, independientemente, es H, alquilo o acilo, o una sal de este farmacéuticamente aceptable; The compounds as disclosed in EP 1002792A1, for example a compound of formula II wherein m is 1 to 9 and each of R'2, R'3, R'4 and R'5, independently, is H, alkyl or acyl, or a pharmaceutically acceptable salt thereof;

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Los compuestos como se revelan en EP0778263 A1, por ejemplo un compuesto de fórmula III Compounds as disclosed in EP0778263 A1, for example a compound of formula III

5 en donde W es H; alquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6; fenilo no sustituido o sustituido por un OH; R"4O(CH2)n; 5 where W is H; C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl or C2-6 alkynyl; phenyl unsubstituted or substituted by an OH; R "4O (CH2) n;

o alquilo C1-6 sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de halógeno, cicloalquilo C3-8, fenilo y fenilo sustituido por un OH; or C1-6 alkyl substituted by 1 to 3 substituents selected from the group consisting of halogen, C3-8 cycloalkyl, phenyl and phenyl substituted by an OH;

X es H o alquilo de cadena lineal sustituido o no sustituido que tiene un número p de átomos de carbono o alcoxi de cadena lineal no sustituido o sustituido que tiene un número (p-1) de átomos de carbono, por ejemplo sustituido por 10 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo C1-6, OH, alcoxi C1-6, aciloxi, amino, alquilamino C1-6, acilamino, oxo, haloalquilo C1-6, halógeno, fenilo no sustituido y fenilo sustituido por 1 a 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo C1-6, OH, alcoxi C1-6, acilo, aciloxi, amino, alquilamino C1-6, acilamino, haloalquilo C1-6 y halógeno; Y es H, alquilo C1-6, OH, alcoxi C1-6, acilo, aciloxi, amino, alquilamino C1-6, acilamino, haloalquilo C1-6 o halógeno, Z2 es un enlace sencillo o un alquileno de cadena lineal que tiene un número X is H or substituted or unsubstituted linear chain alkyl having a p-number of carbon atoms or unsubstituted or substituted linear chain alkoxy having a number (p-1) of carbon atoms, for example substituted by 10 1 to 3 substituents selected from the group consisting of C1-6 alkyl, OH, C1-6 alkoxy, acyloxy, amino, C1-6 alkylamino, acylamino, oxo, C1-6 haloalkyl, halogen, unsubstituted phenyl and phenyl substituted by 1 to 3 substituents selected from the group consisting of C1-6 alkyl, OH, C1-6 alkoxy, acyl, acyloxy, amino, C1-6 alkylamino, acylamino, C1-6 haloalkyl and halogen; Y is H, C1-6 alkyl, OH, C1-6 alkoxy, acyl, acyloxy, amino, C1-6 alkylamino, acylamino, C1-6 haloalkyl or halogen, Z2 is a single bond or a straight chain alkylene having a number

15 o átomos de carbono de q, 15 or carbon atoms of q,

cada uno de p y q, independientemente, es un número entero de 1 a 20, con la condición de 6 � p + q � 23, m’ es 1, 2 o 3, n es 2 o 3, cada uno de R"1, R"2, R"3 y R"4, independientemente, es H, alquilo C1-4 o acilo, o una sal de este farmacéuticamente aceptable, each of p and q, independently, is an integer from 1 to 20, with the condition of 6 � p + q � 23, m 'is 1, 2 or 3, n is 2 or 3, each of R "1, R "2, R" 3 and R "4, independently, is H, C1-4 alkyl or acyl, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

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Los compuestos como se revela en WO02/18395, por ejemplo un compuesto de fórmula IVa o IVb Compounds as disclosed in WO02 / 18395, for example a compound of formula IVa or IVb

en donde Xa es O, S, NR1s o un grupo -(CH2)na-, grupo que es no sustituido o sustituido por 1 a 4 halógenos; na es 1 wherein Xa is O, S, NR1s or a group - (CH2) na-, a group that is unsubstituted or substituted by 1 to 4 halogens; na is 1

o 2, R1s es H o alquilo (C1-4), alquilo que es no sustituido o sustituido por un halógeno; R1a es H, OH, alquilo (C1-4) u O-alquilo (C1-4) en donde el alquilo es no sustituido o sustituido por 1 a 3 halógenos; R1b es H, OH o alquilo (C1-4), en donde el alquilo es no sustituido o sustituido por un halógeno; cada R2a independientemente se selecciona de H o or 2, R1s is H or (C1-4) alkyl, alkyl that is unsubstituted or substituted by a halogen; R1a is H, OH, (C1-4) alkyl or O (C1-4) alkyl wherein the alkyl is unsubstituted or substituted by 1 to 3 halogens; R1b is H, OH or (C1-4) alkyl, wherein the alkyl is unsubstituted or substituted by a halogen; each R2a independently is selected from H or

25 alquilo (C1-4), alquilo que es no sustituido o sustituido por un halógeno; R3a es H, OH, halógeno u Oalquilo (C1-4) en donde alquilo es no sustituido o sustituido por un halógeno; y R3b es H, OH, halógeno, alquilo (C1-4) en donde alquilo es no sustituido o sustituido por un hidroxi, u Oalquilo (C1-4) en donde alquilo es no sustituido o sustituido por un halógeno; Ya es -CH2-, -C(O)-, -CH(OH)-, -C(=NOH)-, O o S, y R4a es alquilo (C4-14) o alquenilo (C4-14); (C1-4) alkyl, alkyl which is unsubstituted or substituted by a halogen; R3a is H, OH, halogen or (C1-4) alkyl where alkyl is unsubstituted or substituted by a halogen; and R3b is H, OH, halogen, (C1-4) alkyl wherein alkyl is unsubstituted or substituted by a hydroxy, or (C1-4) alkyl where alkyl is unsubstituted or substituted by a halogen; It is already -CH2-, -C (O) -, -CH (OH) -, -C (= NOH) -, O or S, and R4a is (C4-14) alkyl or (C4-14) alkenyl;

o una sal o hidrato de este farmacéuticamente aceptable; or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof;

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Los compuestos como se revela en WO 02/076995, por ejemplo un compuesto de fórmula V Compounds as disclosed in WO 02/076995, for example a compound of formula V

en donde mc es 1, 2 o 3; Xc es O o un enlace directo; R1c es H; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido por un OH, acilo, halógeno, cicloalquilo C3-10, fenilo o hidroxi-fenileno; where mc is 1, 2 or 3; Xc is O or a direct link; R1c is H; C1-6 alkyl optionally substituted by an OH, acyl, halogen, C3-10 cycloalkyl, phenyl or hydroxy-phenylene;

alquenilo C2-6; alquinilo C2-6; o fenilo opcionalmente sustituido por un OH; R2c es C2-6 alkenyl; C2-6 alkynyl; or phenyl optionally substituted by an OH; R2c is

10 en donde R5c es H o alquilo C1-4 opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 átomos de halógeno, y R6c es H o alquilo C1-4 opcionalmente sustituido por un halógeno; Wherein R5c is H or C1-4 alkyl optionally substituted by 1, 2 or 3 halogen atoms, and R6c is H or C1-4 alkyl optionally substituted by a halogen;

cada uno de R3c y R4c, independientemente, es H, alquilo C1-4 opcionalmente sustituido por un halógeno, o acilo, y each of R3c and R4c, independently, is H, C1-4 alkyl optionally substituted by a halogen, or acyl, and

Rc es alquilo C13-20 que opcionalmente puede tener en la cadena un átomo de oxígeno y que opcionalmente puede ser sustituido por un nitro, halógeno, amino, hidroxi o carboxi; o un residuo de fórmula (a) Rc is C13-20 alkyl which may optionally have an oxygen atom in the chain and which may optionally be substituted by a nitro, halogen, amino, hydroxy or carboxy; or a residue of formula (a)

en donde R7c es H, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4, y R8c es alcanoil C1-20 sustituido, fenilalquilo C1-14 en donde el alquilo C114 es opcionalmente sustituido por un halógeno u OH, cicloalquilalcoxi C1-14 o fenilalcoxi C1-14 en donde el anillo cicloalquilo o fenilo es opcionalmente sustituido por un halógeno, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4, fenilalcoxi C1-14-alquilo C1-14, fenoxialcoxi C1-14 o fenoxialquilo C1-14, wherein R7c is H, C1-4 alkyl or C1-4 alkoxy, and R8c is substituted C1-20 alkanoyl, C1-14 phenylalkyl wherein C114 alkyl is optionally substituted by a halogen or OH, C1-14 cycloalkylalkoxy or C1 phenylalkoxy -14 wherein the cycloalkyl or phenyl ring is optionally substituted by a halogen, C1-4 alkyl and / or C1-4 alkoxy, C1-14 phenylalkoxy-C1-14 alkyl, phenoxyalkoxy C1-14 or phenoxyalkyl C1-14,

20 Siendo también Rc un residuo de fórmula (a) en donde R8c es alcoxi C1-14 cuando R1c es alquilo C1-4, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6, Rc also being a residue of formula (a) wherein R8c is C1-14 alkoxy when R1c is C1-4 alkyl, C2-6 alkenyl or C2-6 alkynyl,

o un compuesto de fórmula VI en donde nx es 2, 3 o 4 R1x es H; alquilo C1-6 opcionalmente sustituido por un OH, acilo, halógeno, cicloalquilo, fenilo o hidroxi-fenileno; or a compound of formula VI wherein nx is 2, 3 or 4 R1x is H; C1-6 alkyl optionally substituted by an OH, acyl, halogen, cycloalkyl, phenyl or hydroxy-phenylene;

alquenilo C2-6; alquinilo C2-6; o fenilo opcionalmente sustituido por un OH; C2-6 alkenyl; C2-6 alkynyl; or phenyl optionally substituted by an OH;

5 R2x es H, alquilo C1-4 o acilo cada uno de R3x y R4x, independientemente es H, alquilo C1-4 opcionalmente sustituido por un halógeno o acilo, R5x es H, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4, y R6x es alcanoil C1-20 sustituido por un cicloalquilo; cicloalquilalcoxi C1-14 en donde el anillo cicloalquilo es R2x is H, C1-4 alkyl or acyl each of R3x and R4x, independently is H, C1-4 alkyl optionally substituted by a halogen or acyl, R5x is H, C1-4 alkyl or C1-4 alkoxy, and R6x it is C1-20 alkanoyl substituted by a cycloalkyl; C1-14 cycloalkylalkoxy where the cycloalkyl ring is

opcionalmente sustituido por un halógeno, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4; fenilalcoxi C1-14 en donde el anillo fenilo es optionally substituted by a halogen, C1-4 alkyl and / or C1-4 alkoxy; C1-14 phenylalkoxy wherein the phenyl ring is

10 opcionalmente sustituido por un halógeno, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4, Siendo también R6x alcoxi C4-14 cuando R1x es alquilo C2-4 sustituido por un OH, o pentiloxi o hexiloxi cuando R1x es alquilo C1-4, a condición de que R6x sea diferente de fenilo-butilenoxi cuando cualquiera R5x sea H o R1x sea metilo, 10 optionally substituted by a halogen, C1-4 alkyl and / or C1-4 alkoxy, R6x being also C4-14 alkoxy when R1x is C2-4 alkyl substituted by an OH, or pentyloxy or hexyloxy when R1x is C1-4 alkyl, provided that R6x is different from phenyl-butyloxy when any R5x is H or R1x is methyl,

o una sal de este farmacéuticamente aceptable; -Los compuestos como se revela en WO02/06268A1, por ejemplo un compuesto de fórmula VII or a pharmaceutically acceptable salt thereof; -Compounds as disclosed in WO02 / 06268A1, for example a compound of formula VII

en donde cada uno de R1d y R2d, independientemente, es H o un grupo protector amino; wherein each of R1d and R2d, independently, is H or an amino protecting group;

R3d es hidrógeno o un grupo protector hidroxi; R3d is hydrogen or a hydroxy protecting group;

R4d es alquilo inferior; R4d is lower alkyl;

nd es un número entero de 1 a 6; nd is an integer from 1 to 6;

20 Xd es etileno, vinileno, etinileno, un grupo que tiene una fórmula - D-CH2- (en donde D es carbonilo, - CH(OH)-, O, S Xd is ethylene, vinyl, ethynylene, a group having a formula - D-CH2- (where D is carbonyl, - CH (OH) -, O, S

o N), arilo o arilo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados del grupo a, como se define de ahora en adelante; or N), aryl or aryl substituted by up to three substituents selected from group a, as defined hereafter;

Yd es un enlace sencillo, alquileno C1-10, alquileno C1-10 que es sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b, alquileno C1-10 que tiene O o S en el medio o al final de la cadena carbono, o alquileno C1-10 que Yd is a single bond, C1-10 alkylene, C1-10 alkylene which is substituted by up to three substituents selected from groups a and b, C1-10 alkylene having O or S in the middle or at the end of the carbon chain, or alkylene C1-10 that

25 tiene O o S en el medio o en el final de la cadena carbono, que es sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b; 25 has O or S in the middle or at the end of the carbon chain, which is substituted by up to three substituents selected from groups a and b;

R5d es hidrógeno, cicloalquilo, arilo, heterociclo, cicloalquilo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b, arilo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b, o heterociclo sustituido por hasta tres sustituyentes seleccionados de los grupos a y b; y R5d is hydrogen, cycloalkyl, aryl, heterocycle, cycloalkyl substituted by up to three substituents selected from groups a and b, aryl substituted by up to three substituents selected from groups a and b, or heterocycle substituted by up to three substituents selected from groups a and b; Y

30 cada uno de R6d y R7d, independientemente, es H o un sustituyente seleccionado del grupo a; Each of R6d and R7d, independently, is H or a substituent selected from group a;

<grupo a > es halógeno, alquilo inferior, halógeno alquilo inferior, alcoxi inferior, alquiltio inferior, carboxilo, alcoxicarbonilo inferior, hidroxi, acilo alifático inferior, amino, alquilamino mono-inferior, alquilamino di-inferior, acilamino alifático inferior, ciano o nitro; <group a> is halogen, lower alkyl, halogen lower alkyl, lower alkoxy, lower alkylthio, carboxyl, lower alkoxycarbonyl, hydroxy, lower aliphatic acyl, amino, mono-lower alkylamino, di-lower alkylamino, lower aliphatic acylamino, cyano or nitro ;

<grupo b > es cicloalquilo, arilo, heterociclo, siendo cada uno opcionalmente sustituido por hasta tres sustituyentes 35 seleccionados del grupo a; <group b> is cycloalkyl, aryl, heterocycle, each being optionally substituted by up to three substituents selected from group a;

con la condición de que cuando R5d sea hidrógeno, Yd es un alquileno C1-10 ya sea de enlace sencillo o lineal, o una sal o éster de este farmacéuticamente aceptable. with the proviso that when R5d is hydrogen, Yd is a C1-10 alkylene either single or linear bond, or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof.

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Los compuestos como se revela en JP-14316985 (JP2002316985), por ejemplo un compuesto de fórmula VIII: Compounds as disclosed in JP-14316985 (JP2002316985), for example a compound of formula VIII:

en donde R1e, R2e, R3e, R4e, R5e, R6e, R7e, ne, Xe e Ye son como se revela en JP-14316985; o una sal o éster de este farmacéuticamente aceptable. wherein R1e, R2e, R3e, R4e, R5e, R6e, R7e, ne, Xe and Ye are as disclosed in JP-14316985; or a pharmaceutically acceptable salt or ester of this.

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Los compuestos como se revela en WO 03/29184 y WO 03/29205, por ejemplo los compuestos de fórmula IX, que son parte de la presente invención: The compounds as disclosed in WO 03/29184 and WO 03/29205, for example the compounds of formula IX, which are part of the present invention:

10 en donde Xf es O o S, y R1f, R2f, R3f y nf son como se revela en WO 03/29184 y O3/29205, por ejemplo 2-amino-2-[4(3-benziloxifenoxi)-2-clorofenil]propil-1,3-propano-diol o 2-amino-2-[4-(benziloxifeniltio)-2- clorofenil]propil- 1,3propano-diol. Wherein Xf is O or S, and R1f, R2f, R3f and nf are as disclosed in WO 03/29184 and O3 / 29205, for example 2-amino-2- [4 (3-benzyloxyphenoxy) -2-chlorophenyl ] propyl-1,3-propane-diol or 2-amino-2- [4- (benzyloxyphenylthio) -2-chlorophenyl] propyl-1,3-propane-diol.

El acilo puede ser un residuo Ry-CO-, en donde Ry es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, fenilo o fenil-alquilo C1-4. A menos que se indique de otra manera, el alquilo, alcoxi, alquenilo o alquinilo puede ser lineal o ramificado. The acyl can be a Ry-CO- residue, wherein Ry is C1-6 alkyl, C3-6 cycloalkyl, phenyl or phenyl-C1-4 alkyl. Unless otherwise indicated, the alkyl, alkoxy, alkenyl or alkynyl may be linear or branched.

15 Cuando en los compuestos de fórmula I, la cadena carbono como R1 es sustituida, puede ser sustituida por un halógeno, nitro, amino, hidroxi o carboxi. Cuando la cadena carbono se interrumpe por un fenileno opcionalmente sustituido, la cadena carbono puede ser no sustituida. Cuando la fracción fenileno es sustituida, puede ser sustituida por un halógeno, nitro, amino, metoxi, hidroxi o carboxi. When in the compounds of formula I, the carbon chain as R1 is substituted, it can be substituted by a halogen, nitro, amino, hydroxy or carboxy. When the carbon chain is interrupted by an optionally substituted phenylene, the carbon chain may be unsubstituted. When the phenylene fraction is substituted, it can be substituted by a halogen, nitro, amino, methoxy, hydroxy or carboxy.

Los compuestos de fórmula I, son aquellos en donde R1 es un alquilo C13-20, opcionalmente sustituido por un nitro, The compounds of formula I are those wherein R 1 is a C 13-20 alkyl, optionally substituted by a nitro,

20 halógeno, amino, hidroxi o carboxi, y, más preferiblemente aquellos en donde R1 es fenilalquilo sustituido por una cadena alquilo C6-14 opcionalmente sustituida por un halógeno y la fracción alquilo es un alquilo C1-6 opcionalmente sustituido por un hidroxi. R1 puede ser fenil-alquilo C1-6 sustituido en el fenilo por una cadena alquilo C6-14 lineal o ramificada, preferiblemente lineal. La cadena alquilo C6-14 puede estar en orto, meta o para, preferiblemente en para. 20 halogen, amino, hydroxy or carboxy, and, more preferably those in which R 1 is phenylalkyl substituted by a C 6-14 alkyl chain optionally substituted by a halogen and the alkyl fraction is a C 1-6 alkyl optionally substituted by a hydroxy. R1 can be phenylC 1-6 alkyl substituted on the phenyl by a linear or branched C6-14 alkyl chain, preferably linear. The C6-14 alkyl chain may be in ortho, meta or para, preferably para.

Cada uno de R2 a R5 puede ser H. Each of R2 to R5 can be H.

25 Un compuesto de fórmula I es el 2-amino-2-tetradecil-1,3-propanodiol. Un agonista del receptor S1P de fórmula I particularmente preferido es FTY720, i.e. 2-amino-2-[2-(4-octilfenil) etil]propano-1,3-diol en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable (denominado en lo sucesivo como Compuesto A), por ejemplo el clorhidrato, como se muestra: A compound of formula I is 2-amino-2-tetradecyl-1,3-propanediol. A particularly preferred S1P receptor agonist of formula I is FTY720, i.e. 2-amino-2- [2- (4-octylphenyl) ethyl] propane-1,3-diol in free form or in a pharmaceutically acceptable salt form (hereinafter referred to as Compound A), for example hydrochloride, as it shows:

Un compuesto de fórmula II, es uno en donde cada uno de R’2 a R’5 es H y m es 4, i.e. 2-amino-2-{2-[4-(1-oxo-5fenilpentil)fenil]etil}propano-1,3-diol, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable (denominado en lo sucesivo como Compuesto B), por ejemplo el clorhidrato. A compound of formula II is one where each of R’2 to R’5 is H and m is 4, i.e. 2-amino-2- {2- [4- (1-oxo-5phenylpentyl) phenyl] ethyl} propane-1,3-diol, in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt (hereinafter referred to as Compound B) , for example hydrochloride.

Un compuesto de fórmula III, es uno en donde W es CH3, cada uno de R"1 a R"3 es H, Z2 es etileno, X es heptiloxi y Y es H, i.e. 2-amino-4-(4-heptiloxifenil)-2-metil-butanol, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable (denominado en lo sucesivo como Compuesto C), por ejemplo el clorhidrato. Se prefiere particularmente el enantiómero R. A compound of formula III is one where W is CH3, each of R "1 to R" 3 is H, Z2 is ethylene, X is heptyloxy and Y is H, i.e. 2-amino-4- (4-heptyloxyphenyl) -2-methyl-butanol, in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt (hereinafter referred to as Compound C), for example the hydrochloride. The enantiomer R. is particularly preferred.

Un compuesto de fórmula IVa, es el FTY720-fosfato (R2a es H, R3a es OH, Xa es O, R1a y R1b son OH). Un compuesto de fórmula IVb es el Compuesto C-fosfato (R2a es H, R3b es OH, Xa es O, R1a y R1b son OH, Ya es O y R4a es heptilo). Un compuesto de fórmula V es el Compuesto B-fosfato. A compound of formula IVa is FTY720-phosphate (R2a is H, R3a is OH, Xa is O, R1a and R1b are OH). A compound of formula IVb is Compound C-phosphate (R2a is H, R3b is OH, Xa is O, R1a and R1b are OH, Ya is O and R4a is heptyl). A compound of formula V is Compound B-phosphate.

Un compuesto de fórmula V, es el ácido fosfórico mono-[(R)-2-amino-2-metil-4-(4-pentiloxi-fenil)-butil]éster. A compound of formula V is phosphoric acid mono - [(R) -2-amino-2-methyl-4- (4-pentyloxy-phenyl) -butyl] ester.

Un compuesto de fórmula VIII es el (2R)-2-amino-4-[3-(4-ciclohexilxibutil)benzo[b]tien-6-il]-2-metilbutan-1-ol. A compound of formula VIII is (2R) -2-amino-4- [3- (4-cyclohexylbutyl) benzo [b] thien-6-yl] -2-methylbutan-1-ol.

Cuando los compuestos de fórmula IX tienen uno o más centros asimétricos en la molécula, se debe entender que la presente invención abarca los diferentes isómeros ópticos, así como se abarcan los racematos, los diastereoisómeros y las mezclas de estos. Los compuestos revelados de fórmula III o IVb, cuando el átomo de carbono que lleva el grupo amino es asimétrico, pueden tener la configuración R en este átomo de carbono. When the compounds of formula IX have one or more asymmetric centers in the molecule, it should be understood that the present invention encompasses the different optical isomers, as well as racemates, diastereoisomers and mixtures thereof. The disclosed compounds of formula III or IVb, when the carbon atom carrying the amino group is asymmetric, can have the R configuration in this carbon atom.

Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las fórmulas I a IX incluyen las sales con ácidos inorgánicos, tales como clorhidrato, bromhidrato y sulfato, las sales con ácidos orgánicos, tales como sales acetato, fumarato, maleato, benzoato, citrato, malato, metanosulfonato y bencenosulfonato, o, cuando sea apropiado, sales con metales tales como sodio, potasio, calcio y aluminio, sales con aminas, tales como trietilamina y sales con aminoácidos dibásicos, tales como lisina. Los compuestos y las sales de los métodos de la presente invención abarcan las formas hidrato y solvato. Examples of pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formulas I to IX include salts with inorganic acids, such as hydrochloride, hydrobromide and sulfate, salts with organic acids, such as acetate, fumarate, maleate, benzoate, citrate, malate salts, methanesulfonate and benzenesulfonate, or, when appropriate, salts with metals such as sodium, potassium, calcium and aluminum, salts with amines, such as triethylamine and salts with dibasic amino acids, such as lysine. The compounds and salts of the methods of the present invention encompass the hydrate and solvate forms.

Se ha encontrado que los agonistas del receptor S1P, basándose en la actividad observada, por ejemplo recirculación de linfocitos, por ejemplo como se describe en EP627406A1 o USP 6,004,565 son útiles por ejemplo como inmunosupresores, por ejemplo en el tratamiento de rechazo agudo de aloinjertos. Se ha encontrado que, los agonistas del receptor S1P tienen propiedades interesantes que los hacen útiles para la quimioterapia del cáncer, particularmente de tumores sólidos, especialmente de tumores sólidos avanzados. Todavía existe la necesidad de ampliar las tecnologías sanitarias de tratamiento del cáncer de tumores sólidos, especialmente en los casos donde el tratamiento con compuestos anticáncer no se asocia con regresión o estabilización de la enfermedad. It has been found that S1P receptor agonists, based on the observed activity, for example lymphocyte recirculation, for example as described in EP627406A1 or USP 6,004,565 are useful for example as immunosuppressants, for example in the treatment of acute allograft rejection. It has been found that, S1P receptor agonists have interesting properties that make them useful for cancer chemotherapy, particularly solid tumors, especially advanced solid tumors. There is still a need to expand health technologies for the treatment of solid tumor cancer, especially in cases where treatment with anticancer compounds is not associated with regression or stabilization of the disease.

En la presente invención, se provee: In the present invention, it is provided:

Un uso para inhibir o controlar la angiogénesis desregulada, por ejemplo la angiogénesis mediada por la esfingosina-1-fosfato (S1P), en un sujeto con necesidad de este, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor S1P que comprende un grupo de fórmula IX, o una sal de este farmacéuticamente aceptable. Y un uso para prevenir o tratar enfermedades mediadas mediante un proceso de neo-angiogénesis o asociado con angiogénesis desregulada en un sujeto con necesidad de este, de acuerdo con las reivindicaciones que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor S1P que comprende un grupo de fórmula IX, o una sal de este farmacéuticamente aceptable. A use for inhibiting or controlling deregulated angiogenesis, for example sphingosine-1-phosphate-mediated angiogenesis (S1P), in a subject in need thereof, which comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of an agonist of the S1P receptor comprising a group of formula IX, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. And a use for preventing or treating diseases mediated by a process of neo-angiogenesis or associated with deregulated angiogenesis in a subject in need thereof, in accordance with the claims comprising the administration to said subject of a therapeutically effective amount of an agonist of the S1P receptor comprising a group of formula IX, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Por "tumores sólidos" se entiende tumores y/o metástasis (donde se encuentre) diferentes de cáncer linfático, por ejemplo cerebro y otros tumores del sistema nervioso central (por ejemplo tumores de las meninges, cerebro, médula espinal, nervios craneales y otras partes de sistema nervioso central, por ejemplo glioblastomas o blastomas de médula); cáncer de cabeza y/o cuello; tumores de mama; tumores del sistema circulatorio (por ejemplo corazón, mediastino y pleura, y otros órganos intratoráxicos, tumores vasculares y tejido vascular asociado con el tumor); tumores del sistema excretor (por ejemplo riñón, pelvis renal, uréter, vejiga, otros y órganos urinarios no especificados); tumores del tracto gastrointestinal (por ejemplo esófago, estómago, intestino delgado, colon, colorectal, unión rectosigmoidea, recto, ano y canal anal), tumores que afectan el hígado y los conductos biliares intrahepáticos, vesícula biliar, otros y partes sin especificar del tracto biliar, páncreas, otros y órganos digestivos); cavidad oral (labios, lengua, encías, piso de la boca, paladar, y otras partes de la boca, glándula parótida, y otras partes de las glándulas salivales, amígdalas, bucofaringe, nasofaringe, senos piriformes, hipofaringe, y otros sitios en los labios, cavidad oral y faringe); tumores del sistema reproductor (por ejemplo vulva, vagina, cuello uterino, Cuerpo del útero, útero, ovario, y otros sitios asociados con órganos genitales femeninos, placenta, pene, próstata, testículos, y otros sitios asociados con órganos genitales masculinos); tumores del tracto respiratorio (por ejemplo cavidad nasal y oído medio, senos accesorios, laringe, tráquea, bronquios y pulmón, por ejemplo cáncer de pulmón de célula pequeña o cáncer de pulmón de célula no-pequeña); tumores del sistema esquelético (por ejemplo hueso y cartílago articular de extremidades, cartílago articular óseo y otros sitios); tumores de la piel (por ejemplo melanoma maligno de la piel, cáncer de piel no-melanoma, carcinoma de célula basal en la piel, carcinoma de células escamosas de piel, mesotelioma, sarcoma de Kaposi); y tumores que involucran otros tejidos incluyendo nervios periféricos y sistema nervioso autonómico, tejido blando y conjuntivo, retroperitoneo y peritoneo, ojos y sus anexos, tiroides, glándulas adrenales y otras glándulas endocrinas y estructuras relacionadas, neoplasma maligno secundario y no específico de ganglios linfáticos, neoplasma maligno secundario de sistemas digestivo y respiratorio y neoplasma maligno secundario de otros sitios. By "solid tumors" is meant tumors and / or metastases (where found) other than lymphatic cancer, for example brain and other tumors of the central nervous system (for example tumors of the meninges, brain, spinal cord, cranial nerves and other parts of central nervous system, for example glioblastomas or bone marrow blastomas); head and / or neck cancer; breast tumors; circulatory system tumors (for example heart, mediastinum and pleura, and other intrathoracic organs, vascular tumors and vascular tissue associated with the tumor); tumors of the excretory system (for example kidney, renal pelvis, ureter, bladder, other and unspecified urinary organs); tumors of the gastrointestinal tract (for example esophagus, stomach, small intestine, colon, colorectal, rectosigmoid junction, rectum, anus and anal canal), tumors affecting the liver and intrahepatic bile ducts, gallbladder, other and unspecified parts of the tract biliary, pancreas, other and digestive organs); oral cavity (lips, tongue, gums, floor of the mouth, palate, and other parts of the mouth, parotid gland, and other parts of the salivary glands, tonsils, oropharynx, nasopharynx, piriformis, hypopharynx, and other sites in the lips, oral cavity and pharynx); tumors of the reproductive system (eg vulva, vagina, cervix, body of the uterus, uterus, ovary, and other sites associated with female genital organs, placenta, penis, prostate, testicles, and other sites associated with male genital organs); respiratory tract tumors (for example nasal cavity and middle ear, accessory breasts, larynx, trachea, bronchi and lung, for example small cell lung cancer or non-small cell lung cancer); tumors of the skeletal system (for example bone and articular cartilage of limbs, bone articular cartilage and other sites); skin tumors (for example malignant melanoma of the skin, non-melanoma skin cancer, basal cell carcinoma of the skin, squamous cell carcinoma of the skin, mesothelioma, Kaposi's sarcoma); and tumors that involve other tissues including peripheral nerves and autonomic nervous system, soft and connective tissue, retroperitoneum and peritoneum, eyes and their annexes, thyroid, adrenal glands and other endocrine glands and related structures, secondary and non-specific malignant neoplasm of lymph nodes, secondary malignant neoplasm of digestive and respiratory systems and secondary malignant neoplasm of other sites.

Cuando se menciona antes y posteriormente un tumor, una enfermedad tumoral, un carcinoma o un cáncer, también la metástasis en el tejido u órgano original y/o en cualquier otro lugar se implican alternativamente o además, cualquiera que sea la localización del tumor y/o la metástasis. When a tumor, a tumor disease, a carcinoma or a cancer is mentioned before and afterwards, also the metastasis in the original tissue or organ and / or in any other place is involved alternatively or in addition, whatever the location of the tumor and / or or metastasis.

En una serie de otras modalidades alternativas o específicas, la presente invención también provee In a series of other alternative or specific embodiments, the present invention also provides

Un uso para potenciar la actividad de un agente quimioterapéutico o para superar la resistencia a un agente quimioterapéutico en un sujeto con necesidad de este, que comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista del receptor S1P, por ejemplo un agonista del receptor S1P que comprende un grupo de fórmula IX, o una sal de este farmacéuticamente aceptable, ya sea de forma concomitante o secuencial con dicho agente quimioterapéutico. A use to enhance the activity of a chemotherapeutic agent or to overcome resistance to a chemotherapeutic agent in a subject in need thereof, which comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of an S1P receptor agonist, for example an agonist. of the S1P receptor comprising a group of formula IX, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, either concomitantly or sequentially with said chemotherapeutic agent.

Un uso de acuerdo con el punto anterior, en donde el agente quimioterapéutico es un inhibidor de las rutas de transducción de señales dirigido ya sea contra las células huésped o los procesos involucrados en la formación del tumor y/o la formación de metástasis o utilizado por las células tumorales para la proliferación, supervivencia, diferenciación o desarrollo de resistencia al fármaco. A use according to the previous point, wherein the chemotherapeutic agent is an inhibitor of signal transduction pathways directed either against host cells or the processes involved in tumor formation and / or metastasis formation or used by tumor cells for proliferation, survival, differentiation or development of drug resistance.

1.10 Un uso como se indica anteriormente, en donde el agonista del receptor S1P se administra de manera intermitente. 1.10 A use as indicated above, wherein the S1P receptor agonist is administered intermittently.

Por "cáncer linfático" se entiende por ejemplo, tumores de sistema linfático y sanguíneo (por ejemplo enfermedad de Hodgkin, linfoma no-Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfomas relacionados con el SIDA, enfermedades inmunoproliferativas malignas, mieloma múltiple y neoplasias malignas de células plasmáticas, leucemia linfoide, leucemia mieloide aguda o crónica, leucemia linfocítica aguda o crónica, leucemia monocítica, otras leucemias de células de tipo especificado, leucemia de células de tipo noespecificado, otras y neoplasias malignas noespecificadas de tejidos linfoides, hematopoyéticos y relacionados, por ejemplo linfoma difuso de células grandes, linfoma de célula T o linfoma de célula T cutáneo). El cáncer mieloide incluye por ejemplo leucemia mieloide aguda o crónica. "Lymphatic cancer" means, for example, tumors of the lymphatic and blood system (for example, Hodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphoma, Burkitt's lymphoma, AIDS-related lymphomas, malignant immunoproliferative diseases, multiple myeloma, and malignant plasma cell neoplasms , lymphoid leukemia, acute or chronic myeloid leukemia, acute or chronic lymphocytic leukemia, monocytic leukemia, other cell leukemia of the specified type, non-specific cell leukemia, other and non-specific malignant neoplasms of lymphoid, hematopoietic and related tissues, for example lymphoma diffuse large cell, T-cell lymphoma or cutaneous T-cell lymphoma). Myeloid cancer includes for example acute or chronic myeloid leukemia.

Por el término "agente quimioterapéutico" se entiende cualquier agente quimioterapéutico diferente del agonista del receptor S1P de acuerdo con esta lista: The term "chemotherapeutic agent" means any chemotherapeutic agent other than the S1P receptor agonist according to this list:

i. un inhibidor de aromatasa, i. an aromatase inhibitor,

ii. un antiestrógeno, un anti-andrógeno (especialmente en el caso de cáncer de próstata) o un agonista de la gonadorelina, ii. an antiestrogen, an anti-androgen (especially in the case of prostate cancer) or a gonadorelin agonist,

iii. un inhibidor de la topoisomerasa I o un inhibidor de la topoisomerasa II, iii. a topoisomerase I inhibitor or a topoisomerase II inhibitor,

iv.iv.

un agente activo del microtúbulo, un agente alquilante, un antimetabolito antineoplásico o un compuesto de platino,  an active microtubule agent, an alkylating agent, an antineoplastic antimetabolite or a platinum compound,

v.v.

un compuesto de direccionamiento/disminución de la actividad de la proteína o lípido quinasa o la actividad de la proteína o lípido fosfatasa, otro compuesto anti-angiogénico o un compuesto que induce los procesos de diferenciación celular,  a targeting / decreasing compound of the protein or lipid kinase activity or the activity of the protein or lipid phosphatase, another anti-angiogenic compound or a compound that induces cell differentiation processes,

vi. un receptor de la bradiquinina 1 o un antagonista de la angiotensina II, saw. a bradykinin 1 receptor or an angiotensin II antagonist,

vii. un inhibidor de la ciclooxigenasa, un bisfosfonato, un inhibidor de la histona desacetilasa, un inhibidor de la heparanasa (evita la degradación de heparan sulfato), por ejemplo Pl-88, un modificador de la respuesta biológica, preferiblemente una linfoquina o interferones, por ejemplo interferón y, un inhibidor de la ubiquitinación, o un inhibidor que bloquea las rutas anti-apoptóticas, vii. a cyclooxygenase inhibitor, a bisphosphonate, a histone deacetylase inhibitor, a heparanase inhibitor (prevents degradation of heparan sulfate), for example Pl-88, a biological response modifier, preferably a lymphokine or interferons, by example interferon and, a ubiquitination inhibitor, or an inhibitor that blocks anti-apoptotic pathways,

viii. un inhibidor de las isoformas oncogénicas Ras, por ejemplo H-Ras, K-Ras o N-Ras, o un inhibidor de la farnesil transferasa, por ejemplo L-744,832 o DK8G557, viii an inhibitor of Ras oncogenic isoforms, for example H-Ras, K-Ras or N-Ras, or a farnesyl transferase inhibitor, for example L-744,832 or DK8G557,

ix.ix.

un inhibidor de la telomerasa, por ejemplo telomestatin,  a telomerase inhibitor, for example telomestatin,

x. x.

un inhibidor de la proteasa, un inhibidor de la metaloproteinasa de la matriz, un inhibidor de la metionina aminopeptidasa, por ejemplo bengamida o un derivado de este, o un inhibidor del proteosoma, por ejemplo PS-341, y/o a protease inhibitor, a matrix metalloproteinase inhibitor, a methionine aminopeptidase inhibitor, for example bengamide or a derivative thereof, or a proteosome inhibitor, for example PS-341, and / or

xi) un inhibidor de mTOR. xi) an mTOR inhibitor.

El término "inhibidor de aromatasa" como se utiliza en este documento se refiere a un compuesto que inhibe la producción del estrógeno, i.e. la conversión de los sustratos androstenediona y testosterona a estrona y estradiol, respectivamente. El término incluye, pero no se limita a esteroides, especialmente atamestano, exemestano y formestano y, en particular, no-esteroides, especialmente aminoglutetimida, rogletimida, piridoglutetimida, trilostano, testolactona, ketokonazol, vorozol, fadrozol, anastrozol y letrozol. El exemestano se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial AROMASIN™. El formestano se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial LENTARON™. El fadrozol se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial AFEMA™. El anastrozol se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ARIMIDEX™. El letrozol se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial FEMARA™ o FEMAR™. La aminoglutetimida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ORIMETEN™. Una combinación de la invención que comprende un agente quimioterapéutico que es un inhibidor de aromatasa es particularmente útil para el tratamiento de tumores receptores positivos de hormonas, por ejemplo tumores de mama. The term "aromatase inhibitor" as used herein refers to a compound that inhibits estrogen production, i.e. the conversion of androstenedione and testosterone substrates to estrone and estradiol, respectively. The term includes, but is not limited to steroids, especially atamestane, exemestane and formestane and, in particular, non-steroids, especially aminoglutethimide, rogletimide, pyridoglutethimide, trilostane, testolactone, ketokonazole, vorozol, fadrozol, anastrozole and letrozole. Exemestane can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark AROMASIN ™. Formestane can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark LENTARON ™. Fadrozole can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark AFEMA ™. Anastrozole can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark ARIMIDEX ™. Letrozole can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark FEMARA ™ or FEMAR ™. Aminoglutethimide can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark ORIMETEN ™. A combination of the invention comprising a chemotherapeutic agent that is an aromatase inhibitor is particularly useful for the treatment of hormone receptor-positive tumors, for example breast tumors.

El término "antiestrógeno" como se utiliza en este documento se refiere a un compuesto que antagoniza el efecto de estrógenos en el nivel receptor del estrógeno. El término incluye tamoxifeno, fulvestrant, raloxifeno y raloxifeno clorhidrato. El tamoxifeno se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial NOLVADEX™. El raloxifeno clorhidrato se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial EVISTA™. El fulvestrant se puede formular como se revela en US 4,659,516 o se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial FASLODEX™. Una combinación de la invención que comprende un agente quimioterapéutico que es un antiestrógeno es particularmente útil para el tratamiento de tumores positivos al receptor de estrógeno, por ejemplo tumores de mama. The term "antiestrogen" as used herein refers to a compound that antagonizes the effect of estrogen at the estrogen receptor level. The term includes tamoxifen, fulvestrant, raloxifene and raloxifene hydrochloride. Tamoxifen can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark NOLVADEX ™. Raloxifene hydrochloride can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark EVISTA ™. The fulvestrant can be formulated as disclosed in US 4,659,516 or it can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark FASLODEX ™. A combination of the invention comprising a chemotherapeutic agent that is an antiestrogen is particularly useful for the treatment of estrogen receptor positive tumors, for example breast tumors.

El término "anti-andrógeno" como se utiliza en este documento se refiere a cualquier sustancia que es capaz de inhibir los efectos biológicos de hormonas androgénicas e incluye bicalutamida (CASODEX™), la cual se puede formular, por ejemplo como se revela en US 4,636,505. The term "anti-androgen" as used herein refers to any substance that is capable of inhibiting the biological effects of androgenic hormones and includes bicalutamide (CASODEX ™), which can be formulated, for example, as disclosed in US. 4,636,505.

El término "agonista de la gonadorelina" como se utiliza en este documento incluye abarelix, goserelina y goserelina acetato. La goserelina se revela en US 4,100,274 y se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ZOLADEX™. El abarelix se puede formular, por ejemplo como se revela en US 5,843,901. The term "gonadorelin agonist" as used herein includes abarelix, goserelin and goserelin acetate. Goserelin is disclosed in US 4,100,274 and can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark ZOLADEX ™. Abarelix can be formulated, for example as disclosed in US 5,843,901.

El término "inhibidor de la topoisomerasa I" como se utiliza en este documento incluye, topotecan, irinotecan, 9nitrocamptotecina y el conjugado de la camptotecina macromolecular PNU-166148 (compuesto A1 en WO99/17804). El irinotecan se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial CAMPTOSAR™. El topotecan se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial HYCAMTIN™. The term "topoisomerase I inhibitor" as used herein includes, topotecan, irinotecan, 9 nitrocamptothecin and the conjugate of the macromolecular camptothecin PNU-166148 (compound A1 in WO99 / 17804). Irinotecan can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark CAMPTOSAR ™. Topotecan can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark HYCAMTIN ™.

El término "inhibidor de la topoisomerasa II" como se utiliza en este documento incluye, las antraciclinas tales como doxorubicina (incluyendo formulación liposomal, por ejemplo CAELYX™), daunorubicina, epirubicina, idarubicina y nemorubicina, las antraquinonas mitoxantrona y losoxantrona, y las podofilotoxinas etopósido y tenipósido. El etopósido se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ETOPOPHOS™. El tenipósido se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial VM 26-BRISTOL™. La doxorubicina se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ADRIBLASTIN™. La epirubicina se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial FARMORUBICIN™. La idarubicina se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ZAVEDOS™. La mitoxantrona se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial NOVANTRON™. The term "topoisomerase II inhibitor" as used herein includes anthracyclines such as doxorubicin (including liposomal formulation, for example CAELYX ™), daunorubicin, epirubicin, idarubicin and nemorubicin, anthraquinones mitoxantrone and losoxantronex, and podofantronex etoposide and teniposide. The etoposide can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark ETOPOPHOS ™. Teniposide can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark VM 26-BRISTOL ™. Doxorubicin can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark ADRIBLASTIN ™. Epirubicin can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark FARMORUBICIN ™. Iridubicin can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark ZAVEDOS ™. Mitoxantrone can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark NOVANTRON ™.

El término "agente activo del microtúbulo" se refiere a agentes estabilizantes del microtúbulo y desestabilizantes microtúbulo incluyendo, taxanos, por ejemplo paclitaxel y docetaxel, alcaloides de la vinca, por ejemplo, vinblastina, especialmente sulfato de vinblastina, vincristina especialmente sulfato de vincristina, y vinorelbina, discodermolides y epotilonas y derivados de esta, por ejemplo epotilona B o un derivado de esta. El paclitaxel se puede administrar por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo TAXOL™. El docetaxel se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial TAXOTERE™. El sulfato de vinblastina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial VINBLASTIN R.P.™. El sulfato de vincristina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial FARMISTIN™. La discodermolida se puede obtener, por ejemplo, como se revela en US 5,010,099. The term "active microtubule agent" refers to microtubule stabilizing agents and microtubule destabilizers including, taxanes, for example paclitaxel and docetaxel, vinca alkaloids, for example, vinblastine, especially vinblastine sulfate, especially vincristine, especially vincristine sulfate, and vinorelbine, discodermolides and epothilones and derivatives thereof, for example epothilone B or a derivative thereof. Paclitaxel can be administered for example in the form as it is marketed, for example TAXOL ™. Docetaxel can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark TAXOTERE ™. Vinblastine sulfate can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark VINBLASTIN R.P. ™. Vincristine sulfate can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark FARMISTIN ™. Discodermolide can be obtained, for example, as disclosed in US 5,010,099.

El término "agente alquilante" como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a busulfan, clorambucil, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalán o nitrosourea (BCNU o Gliadel™). La ciclofosfamida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial CYCLOSTIN™. La ifosfamida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial HOLOXAN™. The term "alkylating agent" as used herein includes, but is not limited to busulfan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan or nitrosourea (BCNU or Gliadel ™). Cyclophosphamide can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark CYCLOSTIN ™. Ifosfamide can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark HOLOXAN ™.

El término "antimetabolito antineoplásico" incluye, pero no se limita a 5-fluorouracil, capecitabina, gemcitabina, citarabina, fludarabina, tioguanina, metotrexato e idatrexato. La capecitabina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial XELODA™. La gemcitabina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial GEMZAR™. The term "antineoplastic antimetabolite" includes, but is not limited to 5-fluorouracil, capecitabine, gemcitabine, cytarabine, fludarabine, thioguanine, methotrexate and idatrexate. Capecitabine can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark XELODA ™. Gemcitabine can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark GEMZAR ™.

El término "compuesto de platino" como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a carboplatino, cisplatino y oxaliplatino. El carboplatino se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial CARBOPLAT™. El oxaliplatino se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ELOXATIN™. The term "platinum compound" as used herein includes, but is not limited to carboplatin, cisplatin and oxaliplatin. Carboplatin can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark CARBOPLAT ™. Oxaliplatin can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark ELOXATIN ™.

El término "compuestos que dirigen/disminuyen la actividad de la proteína o lípido quinasa o otros compuestos antiangiogénicos" como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a los inhibidores de la proteína tirosina quinasa y/o serina y/o los inhibidores de la treonina quinasa o lípido quinasa, por ejemplo compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de la familia del factor de crecimiento epidérmico de los receptores de la tirosina quinasa (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 como homo- o heterodímeros), la familia del factor de crecimiento endotelial vascular de receptor tirosina quinasas (VEGFR), los receptores del factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGFR), los receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR), el receptor del factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF-1R), la familia del receptor de la tirosina quinasa Trk, la familia del receptor tirosina quinasa Axl, el receptor tirosina quinasa Ret, el receptor tirosina quinasa Kit/SCFR, miembros de la familia c-Abl y sus productos de fusión génica (por ejemplo BCR-Abl), miembros de la familia de proteína quinasa C (PKC) y de serina/treonina quinasas Raf, miembros de la familia quinasa MEK, SRC, JAK, FAK, PDK o PI(3), o de la familia quinasa relacionada con la quinasa PI(3), y/o miembros de la familia quinasa dependiente de la ciclina (CDK) y los compuestos anti-angiogénicos que tienen otro mecanismo para su actividad, por ejemplo no relacionado con la inhibición de la proteína o lípido quinasa. The term "compounds that direct / decrease the activity of the protein or lipid kinase or other antiangiogenic compounds" as used herein includes, but is not limited to protein tyrosine kinase and / or serine inhibitors and / or inhibitors. of threonine kinase or lipid kinase, for example compounds that direct, decrease or inhibit the activity of the epidermal growth factor family of tyrosine kinase receptors (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 as homo- or heterodimers), the vascular tyrosine kinase receptor endothelial growth factor family (VEGFR), platelet-derived growth factor receptors (PDGFR), fibroblast growth factor receptors (FGFR), the growth factor receptor similar to insulin 1 (IGF-1R), the Trk tyrosine kinase receptor family, the Axl tyrosine kinase receptor family, the Ret tyrosine kinase receptor, the tyrosine receptor q Kit / SCFR kinase, members of the c-Abl family and their gene fusion products (for example BCR-Abl), members of the protein kinase C (PKC) family and Raf serine / threonine kinases, members of the kinase family MEK, SRC, JAK, FAK, PDK or PI (3), or of the kinase family related to kinase PI (3), and / or members of the cyclin dependent kinase family (CDK) and anti-angiogenic compounds which have another mechanism for their activity, for example not related to the inhibition of the protein or lipid kinase.

Los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de VEGFR son especialmente los compuestos, proteínas o anticuerpos que inhiben el receptor tirosina quinasa VEGF, que inhiben un receptor de VEGF o se unen a VEGF, y son en particular aquellos compuestos, proteínas o anticuerpos monoclonales genéricos y específicamente revelados en WO 98/35958, por ejemplo 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazina o una sal de este farmacéuticamente aceptable, por ejemplo el succinato, en WO 00/27820, por ejemplo un derivado de la amida del ácido N-arilo(tio) antranílico por ejemplo 2-[(4-piridil)metil]amino-N-[3-metoxi-5-(trifluorometil) fenil]benzamida o 2[(1-oxido-4-piridil)metil]amino-N-[3-trifluorometilfenil]benzamida, o en WO 00/09495, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 y EP 0 769 947; aquellos como se describen en M. Prewett et al en Cancer Research 59 (1999) 52095218, por F. Yuan et al en Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996, by Z. Zhu et al en Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214, y por J. Mordenti et al en Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999; en WO 00/37502 y WO 94/10202; Angiostatin™, descrita por M. S. O’Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328; Endostatin™, descrita por M. S. O’Reilly et al, Cell 88, 1997, 277-285; amidas del ácido antranílico; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; o anticuerpos anti-VEGF o anticuerpos anti-receptor de VEGF, por ejemplo RhuMab. The compounds that direct, decrease or inhibit VEGFR activity are especially the compounds, proteins or antibodies that inhibit the VEGF tyrosine kinase receptor, that inhibit a VEGF receptor or bind to VEGF, and are in particular those compounds, proteins or antibodies generic monoclonal and specifically disclosed in WO 98/35958, for example 1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for example succinate, in WO 00/27820, for example a derivative of the amide of N-aryl (thio) anthranilic acid, for example 2 - [(4-pyridyl) methyl] amino-N- [3-methoxy-5- (trifluoromethyl) phenyl] benzamide or 2 [(1-oxido -4-pyridyl) methyl] amino-N- [3-trifluoromethylphenyl] benzamide, or in WO 00/09495, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 and EP 0 769 947; those as described in M. Prewett et al in Cancer Research 59 (1999) 52095218, by F. Yuan et al in Proc. Natl Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996, by Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214, and by J. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999; in WO 00/37502 and WO 94/10202; Angiostatin ™, described by M. S. O'Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328; Endostatin ™, described by M. S. O'Reilly et al, Cell 88, 1997, 277-285; anthranilic acid amides; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; or anti-VEGF antibodies or anti-VEGF receptor antibodies, for example RhuMab.

Por anticuerpo se entiende anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos formados de al menos 2 anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos siempre y cuando muestren la actividad biológica deseada. By "antibody" is meant intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies formed of at least 2 intact antibodies, and antibody fragments as long as they show the desired biological activity.

Los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de la familia del receptor del factor de crecimiento epidérmico son especialmente los compuestos, proteínas o anticuerpos que inhiben los miembros de la familia del receptor tirosina quinasa EGF, por ejemplo receptor EGF, ErbB2, ErbB3 y ErbB4 o se unen a EGF o ligandos relacionados con EGF, o que tienen un efecto inhibidor doble sobre el receptor de ErbB y VEGF quinasa y son en particular aquellos compuestos, proteínas o anticuerpos monoclonales genéricos y específicamente revelados en WO 97/02266, por ejemplo el compuesto del ej. 39, o en EP 0 564 409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 722, EP 0 837 063, US 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 y, especialmente, WO 96/30347 (por ejemplo, el compuesto conocido como CP 358774), WO 96/33980 (por ejemplo, el compuesto ZD 1839) y WO 95/03283 (por ejemplo, el compuesto ZM105180) o PCT/EP02/08780; por ejemplo trastuzumab (HerpetinR), cetuximab, Iressa, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 o E7.6.3. The compounds that direct, decrease or inhibit the activity of the epidermal growth factor receptor family are especially the compounds, proteins or antibodies that inhibit the members of the EGF tyrosine kinase receptor family, for example EGF receptor, ErbB2, ErbB3 and ErbB4 or bind to EGF or EGF-related ligands, or which have a double inhibitory effect on the ErbB and VEGF kinase receptor and are in particular those generic monoclonal compounds, proteins or antibodies and specifically disclosed in WO 97/02266, for example the compound of ex. 39, or in EP 0 564 409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 722, EP 0 837 063, US 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 and, especially, WO 96/30347 (for example, the compound known as CP 358774), WO 96/33980 (for example, compound ZD 1839) and WO 95/03283 (for example, compound ZM105180) or PCT / EP02 / 08780; for example trastuzumab (Herpetin®), cetuximab, Iressa, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11 , E6.3 or E7.6.3.

Los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de PDGFR son especialmente los compuestos que inhiben el receptor de PDGF, por ejemplo un derivado N-fenil-2-pirimidina-amina, por ejemplo imatinib. The compounds that direct, decrease or inhibit the activity of PDGFR are especially the compounds that inhibit the PDGF receptor, for example an N-phenyl-2-pyrimidine-amine derivative, for example imatinib.

Los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de miembros de la familia c-Abl y sus productos de fusión génica, por ejemplo un derivado N-fenil-2-pirimidina-amina, por ejemplo imatinib; PD180970; AG957; o NSC 680410. Compounds that direct, decrease or inhibit the activity of members of the c-Abl family and their gene fusion products, for example an N-phenyl-2-pyrimidine-amine derivative, for example imatinib; PD180970; AG957; or NSC 680410.

Los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de los miembros de la familia de proteína quinasa C, Raf, MEK, SRC, JAK, FAK y PDK, o PI(3) quinasa o miembros de la familia relacionados con PI(3) quinasa, y/o miembros de la familia quinasa dependiente de la ciclina (CDK) son especialmente los derivados de la estaurosporina revelados en EP 0 296 110, por ejemplo midostaurina; ejemplos de otros compuestos incluyen por ejemplo UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Bryostatin 1, Perifosine; UO126; Ilmofosine; RO 318220 y RO 320432; GO 6976; Isis 3521; o LY333531/LY379196. Compounds that direct, decrease or inhibit the activity of members of the protein kinase C, Raf, MEK, SRC, JAK, FAK and PDK family, or PI (3) kinase or family members related to PI (3) kinase, and / or members of the cyclin-dependent kinase family (CDK) are especially the staurosporin derivatives disclosed in EP 0 296 110, for example midostaurin; Examples of other compounds include for example UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Bryostatin 1, Perifosine; UO126; Ilmofosine; RO 318220 and RO 320432; GO 6976; Isis 3521; or LY333531 / LY379196.

Otros compuestos anti-angiogénicos son por ejemplo la talidomida (THALOMID) y TNP-470. Other anti-angiogenic compounds are for example thalidomide (THALOMID) and TNP-470.

Los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de una proteína o lípido fosfatasa son por ejemplo los inhibidores de fosfatasa 1, fosfatasa 2A, PTEN o CDC25, por ejemplo ácido okadaico o un derivado de este. The compounds that direct, decrease or inhibit the activity of a protein or lipid phosphatase are for example phosphatase 1, phosphatase 2A, PTEN or CDC25 inhibitors, for example okadaic acid or a derivative thereof.

Los compuestos que inducen los procesos de diferenciación celular son por ejemplo el ácido retinoico, a-, y- o 8tocoferol o a-, y- o 8-tocotrienol. The compounds that induce the processes of cellular differentiation are for example retinoic acid, a-, and- or 8tocopherol or a-, and- or 8-tocotrienol.

El término inhibidor de la ciclooxigenasa como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a, por ejemplo celecoxib (CelebrexR), rofecoxib (VioxxR), etoricoxib, valdecoxib o un ácido 5-alquil-2-arilaminofenilacetico, por ejemplo ácido 5-metil-2-(2’-cloro-6’-fluoroanilino) fenil acético. The term "cyclooxygenase inhibitor" as used herein includes, but is not limited to, for example celecoxib (Celebrex®), rofecoxib (VioxxR), etoricoxib, valdecoxib or a 5-alkyl-2-arylaminophenylacetic acid, for example 5 -methyl-2- (2'-chloro-6'-fluoroanilino) phenyl acetic acid.

El término "inhibidor de la histona desacetilasa" como se utiliza en este documento incluye, MS-27-275, SAHA, piroxamida, FR-901228 o ácido valproico. The term "histone deacetylase inhibitor" as used herein includes, MS-27-275, SAHA, pyroxamide, FR-901228 or valproic acid.

El término "bisfosfonatos" como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a, ácido etridónico, clodrónico, tiludrónico, pamidrónico, alendrónico, ibandrónico, risedrónico y zoledrónico. El "ácido etridónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial DIDRONEL™. El "ácido clodrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial BONEFOS™. El "ácido tiludrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial SKELID™. El "ácido pamidrónico " se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial AREDIA™. El "ácido alendrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial FOSAMAX™. El "ácido lbandrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial BONDRANAT™. El "ácido risedrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ACTONEL™. El "ácido zoledrónico" se puede administrar, por ejemplo en la forma como se comercializa, por ejemplo bajo la marca comercial ZOMETA™ The term "bisphosphonates" as used herein includes, but is not limited to, etridonic acid, clodronic, tiludronic, pamidronic, alendronic, ibandronic, risedronic and zoledronic. "Etridonic acid" can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark DIDRONEL ™. "Clodronic acid" can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark BONEFOS ™. "Tiludronic acid" can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark SKELID ™. "Pamidronic acid" can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark AREDIA ™. "Alendronic acid" can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark FOSAMAX ™. "Lbandronic acid" can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark BONDRANAT ™. The "risedronic acid" can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark ACTONEL ™. "Zoledronic acid" can be administered, for example in the form as it is marketed, for example under the trademark ZOMETA ™

El término "inhibidor de la metaloproteinasa de la matriz" como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a inhibidores peptidomiméticos y no peptidomiméticos del colágeno, derivados de la tetraciclina, por ejemplo inhibidor peptidomimético hidroxamato batimastat y su análogo biodisponible por vía oral marimastat, prinomastat, BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211 o AAJ996. The term "matrix metalloproteinase inhibitor" as used herein includes, but is not limited to peptidomimetic and non-peptidomimetic collagen inhibitors, tetracycline derivatives, for example hydroxymatous peptidomimetic inhibitor batimastat and its bioavailable analog by mouth. marimastat, prinomastat, BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211 or AAJ996.

El término "inhibidor de mTOR" como se utiliza en este documento incluye, pero no se limita a rapamicina (sirolimus) The term "mTOR inhibitor" as used herein includes, but is not limited to rapamycin (sirolimus).

o un derivado de esta. La rapamicina es un conocido antibiótico macrólido producido por Streptomyces hygroscopicus. Los derivados de la rapamicina apropiados incluyen por ejemplo, los compuestos de fórmula A or a derivative of this. Rapamycin is a known macrolide antibiotic produced by Streptomyces hygroscopicus. Appropriate rapamycin derivatives include, for example, the compounds of formula A

en donde where

R1aa es CH3 o alquinilo C3-6, R1aa is CH3 or C3-6 alkynyl,

R2aa es H o -CH2-CH2-OH, 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metil-propanoil o tetrazolil, y R2aa is H or -CH2-CH2-OH, 3-hydroxy-2- (hydroxymethyl) -2-methyl-propanoyl or tetrazolyl, and

Xaa es =O, (H,H) o (H,OH) Xaa is = O, (H, H) or (H, OH)

a condición de que R2aa sea diferente de H, cuando Xaa es =O y R1aa es CH3. provided that R2aa is different from H, when Xaa is = O and R1aa is CH3.

o un profármaco de este cuando R2aa es -CH2-CH2-OH, por ejemplo un éter de este fisiológicamente hidrolizable. or a prodrug thereof when R2aa is -CH2-CH2-OH, for example an ether of this physiologically hydrolysable.

Los compuestos de fórmula A, se revelan por ejemplo en WO 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, USP 5,362,718 o WO 99/15530. Se pueden preparar como se revela o por analogía a los procedimientos descritos en estas referencias. The compounds of formula A are disclosed for example in WO 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, USP 5,362,718 or WO 99/15530. They can be prepared as disclosed or by analogy to the procedures described in these references.

Los derivados de la rapamicina preferidos son 32-deoxorapamicina, 16-pent-2-iniloxi-32-deoxorapamicina, 16-pent2-iniloxi-32(S)-dihidro-rapamicina, 16-pent-2-iniloxi-32(S)-dihidro-40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina y, más preferiblemente, 40-0-(2-hidroxietil)-rapamicina. Otros ejemplos de derivados de la rapamicina incluyen por ejemplo CC1779 o 40- [3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoato]-rapamicina o una sal de este farmacéuticamente aceptable, como se revela en USP 5,362,718, ABT578 o 40-(tetrazolil)-rapamicina, particularmente 40-epi(tetrazolil)-rapamicina, por ejemplo como se revela en WO 99/15530, o los análogos no inmunosupresores como se revela por ejemplo en WO 98/02441 y WO01/14387, por ejemplo AP23573. Preferred rapamycin derivatives are 32-deoxorapamycin, 16-pent-2-inyloxy-32-deoxorapamycin, 16-pent2-inyloxy-32 (S) -dihydro-rapamycin, 16-pent-2-inyloxy-32 (S) -dihydro-40-O- (2-hydroxyethyl) -rapamycin and, more preferably, 40-0- (2-hydroxyethyl) -rapamycin. Other examples of rapamycin derivatives include for example CC1779 or 40- [3-hydroxy-2- (hydroxymethyl) -2-methylpropanoate] -rapamycin or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as disclosed in USP 5,362,718, ABT578 or 40- (tetrazolyl) -papamycin, particularly 40-epi (tetrazolyl) -rapamycin, for example as disclosed in WO 99/15530, or non-immunosuppressive analogs as disclosed for example in WO 98/02441 and WO01 / 14387, for example AP23573 .

En cada caso, dónde se proveen las citaciones de solicitudes de patente o publicaciones científicas, el asunto en relación con los compuestos se incorpora aquí en la presente aplicación por referencia. Del mismo modo, se comprenden las sales farmacéuticamente aceptables de este, los correspondientes racematos, diastereoisómeros, enantiómeros, tautómeros así como las correspondientes modificaciones de cristal de los compuestos revelados anteriormente cuando están presentes, por ejemplo solvatos, hidratos y polimorfos, que se revelan en este documento. Los compuestos utilizados como ingredientes activos en las combinaciones de la invención se pueden preparar y administrar como se describe en los documentos citados, respectivamente. También dentro del alcance de esta invención está la combinación de más de dos ingredientes activos separados como se ha expuesto anteriormente, i.e. una combinación farmacéutica dentro del alcance de esta invención podría incluir tres ingredientes activos o más. Además tanto el primer agente como el co-agente no son el ingrediente idéntico. In each case, where the citations of patent applications or scientific publications are provided, the matter in relation to the compounds is incorporated herein by reference. Similarly, the pharmaceutically acceptable salts thereof, the corresponding racemates, diastereoisomers, enantiomers, tautomers as well as the corresponding crystal modifications of the compounds disclosed above when present are present, for example, solvates, hydrates and polymorphs, which are disclosed in this document. The compounds used as active ingredients in the combinations of the invention can be prepared and administered as described in the cited documents, respectively. Also within the scope of this invention is the combination of more than two separate active ingredients as set forth above, i.e. A pharmaceutical combination within the scope of this invention could include three active ingredients or more. In addition, both the first agent and the co-agent are not the identical ingredient.

La utilidad de los agonistas de S1P, por ejemplo los agonistas de S1P que comprenden un grupo de fórmula X de acuerdo con las reivindicaciones, en el tratamiento de tumores sólidos como se especifica anteriormente, se puede demostrar en métodos de ensayo de animales así como en clínicos, por ejemplo de acuerdo con los métodos descritos a continuación. The utility of S1P agonists, for example S1P agonists comprising a group of formula X according to the claims, in the treatment of solid tumors as specified above, can be demonstrated in animal testing methods as well as in clinical, for example according to the methods described below.

Todos los ejemplos son ejemplos referencia. All examples are reference examples.

A. In Vitro A. In Vitro

A.1 Actividad Antitumoral A.1 Antitumor Activity

Se utiliza una línea celular de cáncer de mama de ratón aislado originalmente de carcinomas mamarios, por ejemplo JygMC(A). El número de células se ajusta a 5x105 para la siembra en placas en medio fresco antes del procedimiento. Las células se incuban con medio fresco que contiene 2.5mM de timidina sin FCS, durante 12 h y luego se lava dos veces con PBS, seguido por la adición de medio fresco con 10% de FCS y adicionalmente se 5 incuba durante otras 12h. Posteriormente las células se incuban con medio fresco que contiene 2.5mM de timidina sin FCS, durante 12h. Para liberar las células del bloque, las células se lavan dos veces con PBS y se vuelven a sembrar en placas en medio fresco con 10% de FCS. Después de la sincronización, las células se incuban con o sin diferentes concentraciones de un compuesto de fórmula I, durante 3, 6, 9, 12, 18 o 24 h. Las células se recogen después del tratamiento con 0.2% de EDTA, se fijan con solución congelada de etanol al 70%, se hidrolizan con 250 A mouse breast cancer cell line originally isolated from breast carcinomas is used, for example JygMC (A). The number of cells is adjusted to 5x105 for plating in fresh media before the procedure. The cells are incubated with fresh medium containing 2.5mM of thymidine without FCS, for 12 h and then washed twice with PBS, followed by the addition of fresh medium with 10% FCS and additionally incubated for another 12h. Subsequently, the cells are incubated with fresh medium containing 2.5mM of thymidine without FCS, for 12h. To release the cells from the block, the cells are washed twice with PBS and plated again in fresh medium with 10% FCS. After synchronization, the cells are incubated with or without different concentrations of a compound of formula I, for 3, 6, 9, 12, 18 or 24 h. The cells are collected after treatment with 0.2% EDTA, fixed with 70% frozen ethanol solution, hydrolyzed with 250

10 !g/ml de RNasaA (tipo 1-A: Sigma Chem. Co.) a 37°C, durante 30 min y se tiñen con yoduro de propidio a 10 mg/ml durante 20 min. Después del periodo de incubación, el número de células se determina tanto por el recuento de células en un contador Coulter como por el ensayo colorimétrico SRB. Bajo estas condiciones un agonista de S1P, por ejemplo el Compuesto B en la forma de sal clorhidrato, inhibe la proliferación de las células tumorales a concentraciones que oscilan de 10-12 a 10-6 M. 10 µg / ml of RNaseA (type 1-A: Sigma Chem. Co.) at 37 ° C for 30 min and stained with propidium iodide at 10 mg / ml for 20 min. After the incubation period, the number of cells is determined both by the cell count in a Coulter counter and by the SRB colorimetric assay. Under these conditions an S1P agonist, for example Compound B in the form of hydrochloride salt, inhibits the proliferation of tumor cells at concentrations ranging from 10-12 to 10-6 M.

15 A.2 Ensayo de Formación de Tubo HUVEC S1 P-Mediado 15 A.2 HUVEC S1 P-Medium Tube Formation Test

Para el ensayo de formación de tubos, se utilizan HUVEC del pasaje 2-8 y nunca son mayores del 70% de confluencia antes de la recogida. Las células se preparan para el ensayo mediante el lavado con Solución Salina Balanceada con Herpes (HBSS de Clonetics) y luego la tripsinización con Tripsina/EDTA (0.25 mg/ml, de Clonetics). Después de que aproximadamente el 90 % de las células se han levantado de la placa, se adiciona un volumen 20 igual de Solución Neutralizante de Tripsina (TNS de Clonetics) y las células se recolectan en un tubo cónico que contiene al menos 10 ml de EBM-2 (Clonetics) + 0.1 % de medio BSA (Sigma). Las células se centrifugan a 1000 rpm durante 5 minutos y el sobrenadante se retira y reemplaza con 5 ml de EBM-2 fresco + 0.1 % de BSA. Las células se cuentan utilizando un hemacitómetro y el volumen de la suspensión celular se ajusta para lograr una concentración de 500,000 células/ml. Los tubos cónicos se preparan con los compuestos de prueba a 100 nM, y la 25 toxina pertussis (PTx) a 10 ng/ml en cada uno, luego 1 ml de la suspensión celular se adiciona a cada tubo. Los tubos luego se incuban, durante ½ hora a 37 °C, 5% de CO2. El ensayo de migración se realiza utilizando Placas Inserto Fluoro-Blok 24-Multiwell cubiertas con fibronectina (tamaño de poro 8 !m, Falcon #351147) en lugar de los insertos individuales en una placa de 24 pozos. Las células y los compuestos de prueba se preparan y pre-incuban como se describe anteriormente, luego se adicionan 100 !l a cada pozo apropiado en la Placa Inserto. Se adicionan For the tube formation test, HUVEC from passage 2-8 are used and are never greater than 70% confluence before collection. The cells are prepared for the assay by washing with Herpes Balanced Saline (HBSS from Clonetics) and then trypsinization with Trypsin / EDTA (0.25 mg / ml, from Clonetics). After approximately 90% of the cells have been lifted from the plate, an equal volume of Trypsin Neutralizing Solution (Clonetics TNS) is added and the cells are collected in a conical tube containing at least 10 ml of EBM -2 (Clonetics) + 0.1% of BSA medium (Sigma). The cells are centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes and the supernatant is removed and replaced with 5 ml of fresh EBM-2 + 0.1% BSA. The cells are counted using a hemacytometer and the volume of the cell suspension is adjusted to achieve a concentration of 500,000 cells / ml. The conical tubes are prepared with the test compounds at 100 nM, and the pertussis toxin (PTx) at 10 ng / ml in each, then 1 ml of the cell suspension is added to each tube. The tubes are then incubated, for ½ hour at 37 ° C, 5% CO2. The migration test is performed using Fluoro-Blok 24-Multiwell Insert Plates covered with fibronectin (pore size 8 µm, Falcon # 351147) instead of the individual inserts in a 24-well plate. Cells and test compounds are prepared and pre-incubated as described above, then 100 µl are added to each appropriate well in the Insert Plate. Are added

30 300 !l del medio EBM-2 + 2 % de carbón vegetal - tratado sin S1P en el fondo de los pozos marcados para no estimulación (-), y se adicionan 300 !l del medio que contiene S1P (500 nM) en el fondo de los pozos marcados para estimulación (+). La placa luego se incuba, durante 4 horas a 37 °C, 5 % de CO2. 30 300 µl of the EBM-2 medium + 2% charcoal - treated without S1P at the bottom of the wells marked for non-stimulation (-), and 300 µl of the medium containing S1P (500 nM) is added in the bottom of wells marked for stimulation (+). The plate is then incubated, for 4 hours at 37 ° C, 5% CO2.

Calceína AM, 50 !g/vial, (Molecular Probes #C3100) se prepara mediante la adición de 20 !l de DMSO al vial. Luego 12.5 ml de HBSS (por placa) se calientan a 37 °C y 150 !l se adicionan al vial. Los contenidos del vial luego Calcein AM, 50 µg / vial, (Molecular Probes # C3100) is prepared by adding 20 µl of DMSO to the vial. Then 12.5 ml of HBSS (per plate) are heated to 37 ° C and 150 µl are added to the vial. The contents of the vial then

35 se transfieren de nuevo al HBSS remanente para hacer la concentración final 4 !g/ml de Calceina AM. 35 are transferred back to the remaining HBSS to make the final concentration 4 µg / ml Calcein AM.

La placa Fluoro-Blok se retira del incubador y la placa inserto superior se separa y se aplica un “golpecito” para retirar el exceso de medio aferrado a los insertos. A continuación, la placa inserto se transfiere a una placa de 24 pozos fresca que contiene 500 !l/pozo de la Calceína AM a 4 !g/ml. La placa luego se incuba, durante 1½ horas a 37 °C, 5 % de CO2. The Fluoro-Blok plate is removed from the incubator and the upper insert plate is separated and a "tap" is applied to remove excess media attached to the inserts. The insert plate is then transferred to a fresh 24-well plate containing 500 µl / well of Calcein AM at 4 µg / ml. The plate is then incubated, for 1½ hours at 37 ° C, 5% CO2.

40 Después de la incubación, la placa se lee en un Cytofluor II, con una excitación de 485 nm y una emisión de 530 nm. El recubrimiento del Fluoro-Blok en los insertos permite que solo sean contadas las células que han migrado al fondo. Los datos se transfieren a Excel para los cálculos, las gráficas se crean utilizando SigmaPlot, y para las pruebas de significancia (t-test) se utiliza el SigmaStat. (Figura 7). 40 After incubation, the plate is read on a Cytofluor II, with an excitation of 485 nm and an emission of 530 nm. The Fluoro-Blok coating on the inserts allows only cells that have migrated to the bottom to be counted. The data is transferred to Excel for the calculations, the graphs are created using SigmaPlot, and for the significance tests (t-test) the SigmaStat is used. (Figure 7).

La formación de tubos se cuantifica mediante el recuento del número de puntos de ramificación (dos cables de Tube formation is quantified by counting the number of branching points (two wires of

45 conexión independientes) en 3 campos independientes a una ampliación 4x. Los resultados se reportan de la siguiente manera: 45 independent connections) in 3 independent fields at 4x magnification. The results are reported as follows:

Tratamiento Puntos de Ramificación Branch Points Treatment

PBS 8 ± 5 S1P 42 ± 13 FTY720-Fosfato 48 ± 15 FTY720-Fosfato + S1P 14 ± 7 Compuesto C-Fosfato 44 ± 16 Compuesto C-Fosfato + S1P 18 ± 6 PBS 8 ± 5 S1P 42 ± 13 FTY720-Phosphate 48 ± 15 FTY720-Phosphate + S1P 14 ± 7 Compound C-Phosphate 44 ± 16 Compound C-Phosphate + S1P 18 ± 6

Estos resultados demuestran la capacidad única del FTY720-Fosfato o Compuesto C-Fosfato para actuar como un agonista de la angiogénesis por sí solo, pero luego sorprendentemente, como un antagonista de la angiogénesis mediada por S1P. El Compuesto C-Fosfato preferiblemente es el racemato o el enantiómero R. PTx se utiliza como These results demonstrate the unique ability of FTY720-Phosphate or C-Phosphate Compound to act as an angiogenesis agonist alone, but then surprisingly, as an S1P-mediated angiogenesis antagonist. Compound C-Phosphate is preferably the racemate or the enantiomer R. PTx is used as

5 un control para inhibir la actividad mediada por Gia (EDG-1). 5 a control to inhibit Gia-mediated activity (EDG-1).

B. In Vivo B. In Vivo

B.1 Actividad Antitumoral B.1 Antitumor Activity

La actividad antitumoral se expresa como % T/C (aumento promedio en los volúmenes del tumor de animales tratados dividido por el aumento promedio de volúmenes del tumor de animales control multiplicado por 100). The antitumor activity is expressed as% T / C (average increase in tumor volumes of treated animals divided by the average increase in tumor volumes of control animals multiplied by 100).

Alícuotas de células cancerosas (1x107), por ejemplo células humanas de melanoma A375, se trasplantan a ratones BALB/c-nu/nu. Cuando los tumores han alcanzado un tamaño de aprox. 10x10 mm, los animales se asignan aleatoriamente a cuatro subgrupos y se inicia el tratamiento con un compuesto de fórmula I. Los animales se sacrifican después de 2 semanas de tratamiento, tiempo en el cual los tumores y tejidos se recogieron y prepararon para el análisis morfológico y molecular. El tamaño de los tumores se determina con un calibrador. En este ensayo, Aliquots of cancer cells (1x107), for example human melanoma A375 cells, are transplanted into BALB / c-nu / nu mice. When the tumors have reached a size of approx. 10x10 mm, the animals are randomly assigned to four subgroups and treatment is started with a compound of formula I. The animals are sacrificed after 2 weeks of treatment, at which time the tumors and tissues were collected and prepared for morphological analysis. and molecular. The size of the tumors is determined with a caliper. In this essay,

15 un agonista de S1 P, por ejemplo el Compuesto B o C (en la forma de sal clorhidrato), ralentiza el crecimiento del tumor cuando se administra a una dosis de 0.5 a 5 mg/kg vs control de solución salina: por ejemplo, el Compuesto C-HCl cuando se administra a una dosis de 2.5mg/kg 5x/semanas da lugar a un valor final de T/C del 30%. A S1 P agonist, for example Compound B or C (in the form of hydrochloride salt), slows tumor growth when administered at a dose of 0.5 to 5 mg / kg vs saline control: for example, Compound C-HCl when administered at a dose of 2.5mg / kg 5x / weeks results in a final T / C value of 30%.

B.2 Combinación con un inhibidor de la proteína tirosina quinasa VEGF-R B.2 Combination with a VEGF-R protein tyrosine kinase inhibitor

Ratones inmunológicamente deficientes trasplantados con tumores de mama MDA-MB-435 humanos se tratan durante 2 semanas con un inhibidor de la proteína tirosina quinasa VEGF-R, por ejemplo 1-(4-cloroanilino)-4-(4piridilmetil)ftalazina succinato, a una dosis de 100 mg/kg p.o. 5x/semana, un agonista del receptor S1P, por ejemplo el Compuesto C (sal clorhidrato), a una dosis de 2.5 mg/kg i.v. 5x/semana, o una combinación de ambos. Como se indica anteriormente la actividad antitumoral se expresa como % T/C. Una combinación del Compuesto C-HCI con 1(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazina succinato produce un efecto antitumoral mayor (% T/C 27) en comparación Immunologically deficient mice transplanted with human MDA-MB-435 breast tumors are treated for 2 weeks with a VEGF-R tyrosine kinase protein inhibitor, for example 1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine succinate, a a dose of 100 mg / kg po 5x / week, an S1P receptor agonist, for example Compound C (hydrochloride salt), at a dose of 2.5 mg / kg i.v. 5x / week, or a combination of both. As indicated above the antitumor activity is expressed as% T / C. A combination of Compound C-HCI with 1 (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine succinate produces a greater antitumor effect (% T / C 27) compared

25 con ya sea el agente solo (Compuesto C-HCl, T/C 66%; 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazina succinato, % T/C 91). También se obtienen buenas respuestas antitumorales cuando los ratones inmunológicamente deficientes se trasplantan con células humanas de melanoma A375 y se tratan de manera similar con la misma combinación: el tratamiento combinado resulta en un % T/C 15 mientras que el tratamiento con cada agente solo resulta en un % T/C 35 y 44, respectivamente. 25 with either the agent alone (Compound C-HCl, T / C 66%; 1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine succinate,% T / C 91). Good antitumor responses are also obtained when immunologically deficient mice are transplanted with human melanoma A375 cells and treated similarly with the same combination: the combined treatment results in a% T / C 15 while the treatment with each agent only results in a% T / C 35 and 44, respectively.

B.3 Actividad Antiangiogénica B.3 Antiangiogenic Activity

Cámaras porosas que contienen (i) esfingosina-1-fosfato (5 !M/cámara) o (ii) VEGF humano (1 !g/cámara) en 0.5 ml de 0.8% peso/v de agar (que contiene heparina, 20 U/ml) se implantan por vía subcutánea en el flanco de los ratones. S1 P o VEGF induce el crecimiento de tejido vascularizado alrededor de la cámara. Esta respuesta es dependiente de la dosis y se puede cuantificar midiendo el peso y el contenido sanguíneo del tejido. Los ratones se Porous chambers containing (i) sphingosine-1-phosphate (5 µM / chamber) or (ii) human VEGF (1 µg / chamber) in 0.5 ml of 0.8% w / v agar (containing heparin, 20 U / ml) are implanted subcutaneously in the flank of the mice. S1 P or VEGF induces the growth of vascularized tissue around the chamber. This response is dose dependent and can be quantified by measuring the weight and blood content of the tissue. Mice are

35 tratan una vez al día (i) por vía oral con el Compuesto A (0.3, 3, 30 o 50 mg/kg) o (ii) por vía intravenosa con el enantiómero R del Compuesto C (2.5 mg/kg) o (iii) por vía intravenosa con el enantiómero S del Compuesto C (2.5 mg/kg) o (iv) por vía oral o por vía intravenosa con vehículo (5% de glucosa, 10 ml/kg), iniciando 4-6 horas antes de la implantación de las cámaras y continuando durante 4 días. Los animales se sacrifican para la medición de los tejidos vascularizados 24 h después de la última dosis. Se determinan el peso y el contenido sanguíneo de los tejidos vascularizados alrededor de la cámara. 35 treat once a day (i) orally with Compound A (0.3, 3, 30 or 50 mg / kg) or (ii) intravenously with the R enantiomer of Compound C (2.5 mg / kg) or ( iii) intravenously with the S enantiomer of Compound C (2.5 mg / kg) or (iv) orally or intravenously with vehicle (5% glucose, 10 ml / kg), starting 4-6 hours before the implantation of the cameras and continuing for 4 days. Animals are sacrificed for the measurement of vascularized tissues 24 h after the last dose. The weight and blood content of vascularized tissues around the chamber are determined.

Los animales tratados con el Compuesto A o con el enantiómero S o R del Compuesto C muestran un reducido contenido sanguíneo y/o peso de los tejidos vascularizados en comparación con los animales tratados con el vehículo solo. Animals treated with Compound A or with the S or R enantiomer of Compound C show a reduced blood content and / or weight of vascularized tissues compared to animals treated with the vehicle alone.

C. Ensayo Clínico C. Clinical Trial

45 C.1 Investigación del beneficio clínico de un agonista del receptor S1 P, por ejemplo un compuesto de fórmula I, II o III, por ejemplo el Compuesto A, B o C C.1 Investigation of the clinical benefit of an S1 P receptor agonist, for example a compound of formula I, II or III, for example Compound A, B or C

20 pacientes con tumores sólidos en progresión, en estado avanzado, resistentes o reacios a terapias estándar, para recibir dicho compuesto a una dosificación como se determina por un estudio de incremento de dosis. El estado clínico general del paciente se investiga semanalmente mediante el examen físico y de laboratorio. Los cambios en peso del tumor y la metástasis se evalúan cada 2 meses mediante examen radiológico. Inicialmente los pacientes recibieron el tratamiento durante 2 meses. Posteriormente, permanecen en tratamiento durante el tiempo que su enfermedad no progrese y el fármaco se tolere satisfactoriamente. Las variables principales para la evaluación: Seguridad (eventos adversos), bioquímica sérica estándar y hematología, dimensiones del tumor mediante tomografía computarizada (TC) o Imágenes por Resonancia Magnética (IRM). 20 patients with solid tumors in progression, in advanced state, resistant or reluctant to standard therapies, to receive said compound at a dosage as determined by a dose increase study. The patient's general clinical status is investigated weekly by physical and laboratory examination. Changes in tumor weight and metastasis are evaluated every 2 months by radiological examination. Initially the patients received the treatment for 2 months. Subsequently, they remain in treatment for as long as their disease does not progress and the drug is satisfactorily tolerated. The main variables for evaluation: Safety (adverse events), standard serum biochemistry and hematology, tumor dimensions using computed tomography (CT) or Magnetic Resonance Imaging (MRI).

C.2 Tratamiento Combinado C.2 Combined Treatment

Los estudios clínicos apropiados son, por ejemplo, estudios no aleatorizados abiertos, de incremento de dosis en pacientes con tumores sólidos avanzados. Tales estudios prueban en particular el sinergismo de los ingredientes activos de la combinación de la invención. Los efectos beneficiosos de las enfermedades proliferativas se pueden determinar directamente a través de los resultados de estos estudios o por cambios en el diseño del estudio que son conocidos como tales por un experto en la técnica. Tales estudios, en particular, son apropiados para comparar los efectos de una monoterapia utilizando los ingredientes activos y una combinación de la invención. Preferiblemente, la dosis de agente (a) se escala hasta que la se alcance la Máxima Dosificación Tolerada, y el co-agente (b) se administra con dosis fijas. Alternativamente, el agente (a) se administra con una dosis fija y la dosis de co-agente (b) se escala. Cada paciente recibe una dosis del agente (a) ya sea diariamente o intermitente. La eficacia del tratamiento se puede determinar en dichos estudios, por ejemplo, después de 12, 18 o 24 semanas mediante la evaluación radiológica de los tumores cada 6 semanas. Appropriate clinical studies are, for example, open non-randomized, dose-increasing studies in patients with advanced solid tumors. Such studies prove in particular the synergism of the active ingredients of the combination of the invention. The beneficial effects of proliferative diseases can be determined directly through the results of these studies or by changes in the study design that are known as such by one skilled in the art. Such studies, in particular, are appropriate for comparing the effects of a monotherapy using the active ingredients and a combination of the invention. Preferably, the agent dose (a) is scaled until the Maximum Tolerated Dosage is reached, and the co-agent (b) is administered with fixed doses. Alternatively, agent (a) is administered with a fixed dose and the dose of co-agent (b) is scaled. Each patient receives a dose of the agent (a) either daily or intermittently. The efficacy of the treatment can be determined in such studies, for example, after 12, 18 or 24 weeks by radiological evaluation of the tumors every 6 weeks.

Alternativamente, se puede utilizar un estudio doble ciego, controlado con placebo con el fin de probar los beneficios de la combinación de la invención mencionados en este documento. Alternatively, a double-blind, placebo-controlled study can be used to test the benefits of the combination of the invention mentioned herein.

Las dosificaciones diarias requeridas en la práctica del método de la presente invención, cuando se utiliza un agonista del receptor S1P solo variarán dependiendo de, por ejemplo, el compuesto utilizado, el huésped, el modo de administración y la severidad de la condición que se trata. Un rango de dosificación diaria preferido es aproximadamente de 0.1 a 100 mg como una dosis única o en dosis divididas. Las dosificaciones diarias apropiadas para pacientes están en el orden de por ejemplo 0.1 a 50 mg p.o. El agonista del receptor S1P se puede administrar por cualquier ruta convencional, en particular por vía enteral, por ejemplo por vía oral, por ejemplo en la forma de comprimidos, cápsulas, soluciones de bebida, por vía nasal, pulmonar (por inhalación) o por vía parenteral, por ejemplo en la forma de suspensiones o soluciones inyectables. Las formas de dosificación unitarias apropiadas para una administración oral comprenden de aprox. 0.1 a 30 mg, por lo general 0.25 a 30 mg de agonista del receptor S1 P, junto con uno o más diluentes o portadores farmacéuticamente aceptables para estos. Con el fin de inhibir la angiogénesis es importante seleccionar una dosis suficientemente alta del agonista del receptor S1 P, como bajas concentraciones de los agonistas del receptor de S1 P promueven la angiogénesis. Una dosis apropiada para proveer un efecto anti-angiogénico cuando un agonista de S1 P se administra a un paciente se puede seleccionar mediante estudios de incrementos de dosis y de concentración como se describe anteriormente en A, B, y C. The daily dosages required in the practice of the method of the present invention, when using an S1P receptor agonist will only vary depending on, for example, the compound used, the host, the mode of administration and the severity of the condition being treated. . A preferred daily dosage range is approximately 0.1 to 100 mg as a single dose or in divided doses. The appropriate daily dosages for patients are in the order of for example 0.1 to 50 mg p.o. The S1P receptor agonist can be administered by any conventional route, in particular enterally, for example orally, for example in the form of tablets, capsules, drinking solutions, nasal, pulmonary (by inhalation) or by parenteral route, for example in the form of suspensions or injectable solutions. Unit dosage forms suitable for oral administration comprise of approx. 0.1 to 30 mg, usually 0.25 to 30 mg of S1 P receptor agonist, together with one or more pharmaceutically acceptable diluents or carriers for these. In order to inhibit angiogenesis it is important to select a sufficiently high dose of the S1 P receptor agonist, as low concentrations of the S1 P receptor agonists promote angiogenesis. An appropriate dose to provide an anti-angiogenic effect when an S1 P agonist is administered to a patient can be selected by studies of dose and concentration increases as described above in A, B, and C.

La combinación de la invención también se puede aplicar en combinación con una intervención quirúrgica, hipertemia de todo el cuerpo prolongada suave y/o terapia de irradiación. The combination of the invention can also be applied in combination with a surgical intervention, prolonged mild whole body hypertemia and / or irradiation therapy.

La administración de una combinación farmacéutica de la invención resulta en un efecto beneficioso, por ejemplo un efecto terapéutico sinergista, por ejemplo con respecto a ralentizar, detener o revertir la formación de neoplasia, crecimiento o propagación de la metástasis o una mayor duración de la respuesta del tumor o inhibición de la angiogénesis; también puede resultar en otros efectos beneficiosos, por ejemplo menos efectos secundarios, una calidad mejorada de vida o una disminución de la mortalidad y la morbilidad, en comparación con una monoterapia que aplica solo uno de los ingredientes activos farmacéuticamente utilizado en la combinación de la invención, en particular en el tratamiento de un tumor que es reacio a otros quimioterapéuticos conocidos como agentes anticáncer. The administration of a pharmaceutical combination of the invention results in a beneficial effect, for example a synergistic therapeutic effect, for example with respect to slowing, stopping or reversing the formation of neoplasia, growth or spread of metastasis or a longer duration of response. of the tumor or inhibition of angiogenesis; it can also result in other beneficial effects, for example less side effects, an improved quality of life or a decrease in mortality and morbidity, compared to a monotherapy that applies only one of the pharmaceutically active ingredients used in the combination of the invention. , in particular in the treatment of a tumor that is reluctant to other chemotherapeutic agents known as anticancer agents.

Un beneficio adicional es que se pueden utilizar dosis inferiores de los ingredientes activos de la combinación de la invención, por ejemplo, que las dosificaciones necesitan no solo por lo general ser más pequeñas sino también ser aplicadas menos frecuentemente, o se puede utilizar con el fin de disminuir la incidencia de los efectos secundarios, mientras que controla el crecimiento de formación de neoplasia. Esto está de acuerdo con los deseos y requerimientos de los pacientes a ser tratados. An additional benefit is that lower doses of the active ingredients of the combination of the invention can be used, for example, that the dosages need not only generally be smaller but also be applied less frequently, or can be used for the purpose. of decreasing the incidence of side effects, while controlling the growth of neoplasia formation. This is in accordance with the wishes and requirements of the patients to be treated.

De acuerdo con una modalidad de la invención, una combinación farmacéutica preferida comprende According to an embodiment of the invention, a preferred pharmaceutical combination comprises

a) un compuesto de fórmula I, II, III, IVa, IVb, V o VI, por ejemplo el Compuesto A, B o C, y a) a compound of formula I, II, III, IVa, IVb, V or VI, for example Compound A, B or C, and

b) como un co-agente, uno o más compuestos como se indica en los párrafos (ii), (iii), (iv), (v), (vii) o (xi) anteriormente, por ejemplo carboplatino, cisplatino, paclitaxel, docetaxel, gemcitabina, doxorubicina, un compuesto que dirige, disminuye o inhibe la actividad de la familia del factor de crecimiento endotelial vascular del receptor tirosina quinasas (VEGFR) o los receptores del factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGFR), un bisfosfonato o un inhibidor de mTOR. b) as a co-agent, one or more compounds as indicated in paragraphs (ii), (iii), (iv), (v), (vii) or (xi) above, for example carboplatin, cisplatin, paclitaxel , docetaxel, gemcitabine, doxorubicin, a compound that directs, decreases or inhibits the activity of the family of vascular endothelial growth factor of the tyrosine kinase receptor (VEGFR) or platelet-derived growth factor receptors (PDGFR), a bisphosphonate or an mTOR inhibitor.

Otra modalidad de la invención se refiere al uso de un agonista del receptor S1 P (a) en combinación con un agente quimioterapéutico (b) en el tratamiento de un cáncer linfático o mieloide, por ejemplo como se revela anteriormente. La combinación puede comprender como otro co-agente b) por ejemplo busulfan, citarabina, 6-tioguanina, fludarabina, hidroxiurea, procarbazina, bleomicina o metotrexato. Los inhibidores de la topoisomerasa II, por ejemplo daunorubicina o, particularmente, los compuestos que dirigen, disminuyen o inhiben la actividad de PDGFR o de miembros de la familia c-Abl y sus productos de fusión génica, por ejemplo imatinib, se prefieren como co-agente (b), por ejemplo para su uso en el tratamiento de un cáncer linfático. Another embodiment of the invention relates to the use of an S1 P receptor agonist (a) in combination with a chemotherapeutic agent (b) in the treatment of a lymphoid or myeloid cancer, for example as disclosed above. The combination may comprise as another co-agent b) for example busulfan, cytarabine, 6-thioguanine, fludarabine, hydroxyurea, procarbazine, bleomycin or methotrexate. Topoisomerase II inhibitors, for example daunorubicin or, in particular, the compounds that direct, decrease or inhibit the activity of PDGFR or members of the c-Abl family and their gene fusion products, for example imatinib, are preferred as co -agent (b), for example for use in the treatment of lymphatic cancer.

Los términos "co-administración" o "administración combinada" o similares como se utiliza en este documento se entiende que abarcan la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un paciente individual, y tienen la intención de incluir regímenes de tratamiento en los cuales los agentes no se administran necesariamente por la misma ruta de administración o al mismo tiempo. The terms "co-administration" or "combined administration" or the like as used herein are understood to encompass the administration of selected therapeutic agents to an individual patient, and are intended to include treatment regimens in which the agents They are not necessarily administered by the same route of administration or at the same time.

Es un objetivo de esta invención proveer una composición farmacéutica que comprende una cantidad, que es en conjunto efectiva terapéuticamente contra una enfermedad maligna proliferativa que comprende una combinación de la invención. En esta composición, el primer agente a) y el co-agente (b) se pueden administrar juntos, uno después del otro o por separado en una forma de dosificación unitaria combinada o en dos formas de dosificación unitarias separadas. La forma de dosificación unitaria también puede ser una combinación fija. It is an objective of this invention to provide a pharmaceutical composition comprising an amount, which is altogether therapeutically effective against a proliferative malignant disease comprising a combination of the invention. In this composition, the first agent a) and the co-agent (b) can be administered together, one after the other or separately in a combined unit dosage form or in two separate unit dosage forms. The unit dosage form can also be a fixed combination.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden preparar de una manera conocida per se y son aquellas apropiadas para la administración por vía enteral, tal como por vía oral o rectal, y parenteral a mamíferos (animales de sangre caliente), incluyendo humanos, que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un socio de la combinación activa farmacológicamente solo, por ejemplo como se indica anteriormente, o en combinación con uno o más portadores o diluentes farmacéuticamente aceptables, especialmente apropiados para la aplicación enteral o parenteral. The pharmaceutical compositions according to the invention can be prepared in a manner known per se and are those appropriate for enteral administration, such as orally or rectally, and parenteral to mammals (warm-blooded animals), including humans, which comprise a therapeutically effective amount of at least one pharmacologically active combination partner alone, for example as indicated above, or in combination with one or more pharmaceutically acceptable carriers or diluents, especially suitable for enteral or parenteral application.

Las composiciones farmacéuticas apropiadas contienen, por ejemplo, de aproximadamente 0.1 % a cerca de 99.9%, preferiblemente de aproximadamente 1 % a cerca de 60 %, de el o los ingredientes activos. Las preparaciones farmacéuticas para la terapia de combinación para administración enteral o parenteral son, por ejemplo, aquellas en formas de dosificación unitarias, tales como comprimidos recubiertos de azúcar, comprimidos, cápsulas o supositorios, o ampollas. Si no se indica de otra manera, estas se preparan de una manera conocida per se, por ejemplo por medio de procesos convencionales de mezcla, granulación, recubrimiento con azúcar, disolución o liofilización. Será apreciado que el contenido de la unidad de un socio de combinación contenido en una dosis individual de cada forma de dosificación no necesita por si mismo constituir una cantidad efectiva dado que la cantidad efectiva necesaria se puede alcanzar mediante la administración de una pluralidad de unidades de dosificación. Appropriate pharmaceutical compositions contain, for example, from about 0.1% to about 99.9%, preferably from about 1% to about 60%, of the active ingredient (s). Pharmaceutical preparations for combination therapy for enteral or parenteral administration are, for example, those in unit dosage forms, such as sugar-coated tablets, tablets, capsules or suppositories, or ampoules. If not indicated otherwise, they are prepared in a manner known per se, for example by means of conventional processes of mixing, granulation, sugar coating, dissolution or lyophilization. It will be appreciated that the unit content of a combination partner contained in an individual dose of each dosage form does not in itself need to constitute an effective amount since the necessary effective amount can be achieved by administering a plurality of units of dosage.

En particular, una cantidad terapéuticamente efectiva de cada uno de los socios de combinación de la combinación de la invención se puede administrar de forma simultánea o secuencialmente y en cualquier orden, y los componentes se pueden administrar por separado o como una combinación fija. Por ejemplo, el método de retraso de la progresión o tratamiento de una enfermedad maligna proliferativa de acuerdo con la invención puede comprender (i) administración del primer agente a) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable y (ii) administración de un co-agente b) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable, de forma simultánea o secuencialmente en cualquier orden, en conjunto cantidades terapéuticamente efectivas, preferiblemente en cantidades sinérgicamente efectivas, por ejemplo en dosificaciones diarias o intermitentes correspondientes a las cantidades descritas en este documento. Los socios de combinación individuales de la combinación de la invención se pueden administrar por separado en diferentes momentos durante el curso de la terapia o concurrentemente en formas de combinación únicas o divididas. Adicionalmente, el término administración también abarca el uso de un pro-fármaco de un socio de combinación que convierte in vivo al socio de combinación como tal. Por lo tanto, se debe entender que la presente invención abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alternante y el término "administración" se debe interpretar en consecuencia. In particular, a therapeutically effective amount of each of the combination partners of the combination of the invention can be administered simultaneously or sequentially and in any order, and the components can be administered separately or as a fixed combination. For example, the method of delaying the progression or treatment of a proliferative malignant disease according to the invention may comprise (i) administration of the first agent a) in free form or pharmaceutically acceptable salt and (ii) administration of a co- agent b) in free form or pharmaceutically acceptable salt, simultaneously or sequentially in any order, together therapeutically effective amounts, preferably in synergistically effective amounts, for example in daily or intermittent dosages corresponding to the amounts described herein. The individual combination partners of the combination of the invention can be administered separately at different times during the course of therapy or concurrently in single or divided combination forms. Additionally, the term administration also encompasses the use of a pro-drug of a combination partner that converts the combination partner in vivo as such. Therefore, it should be understood that the present invention encompasses all of these simultaneous or alternating treatment regimens and the term "administration" should be interpreted accordingly.

La dosificación efectiva de cada uno de los socios de combinación empleados en la combinación de la invención puede variar dependiendo del compuesto particular o la composición farmacéutica empleada, el modo de administración, la condición que se trata, la severidad de la condición que se trata. De esta manera, el régimen de dosificación de la combinación de la invención se selecciona de acuerdo con una variedad de factores incluyendo la ruta de administración y la función hepática y renal del paciente. Un médico, clínico o veterinario de experiencia normal puede determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva de los ingredientes activos únicos necesarios para prevenir, contrarrestar o detener el progreso de la condición. La precisión óptima en el logro de la concentración de los ingredientes activos dentro del rango que produce eficacia sin toxicidad requiere un régimen basado en las cinéticas de la disponibilidad de los ingredientes activos en los sitios diana. The effective dosage of each of the combination partners employed in the combination of the invention may vary depending on the particular compound or pharmaceutical composition employed, the mode of administration, the condition being treated, the severity of the condition being treated. Thus, the dosage regimen of the combination of the invention is selected according to a variety of factors including the route of administration and the liver and kidney function of the patient. A doctor, clinician or veterinarian of normal experience can easily determine and prescribe the effective amount of the unique active ingredients necessary to prevent, counteract or stop the progress of the condition. Optimum precision in achieving the concentration of active ingredients within the range that produces efficacy without toxicity requires a regime based on the kinetics of the availability of active ingredients at the target sites.

Las dosificaciones diarias para el primer agente o componente (a) por supuesto, variarán dependiendo de una variedad de factores, por ejemplo el compuesto elegido, la condición particular que se trata y el efecto deseado. En general, sin embargo, se logran resultados satisfactorios en la administración de un agonista del receptor S1 P, por ejemplo el Compuesto A, B o C, a tasas de dosificación diaria del orden de aprox. 0.1 a 100 mg como una dosis única o en dosis divididas. El agonista del receptor S1 P se puede administrar por cualquier ruta convencional, en particular por vía enteral, por ejemplo por vía oral, por ejemplo en la forma de comprimidos, cápsulas, soluciones de bebida o por vía parenteral, por ejemplo en la forma de suspensiones o soluciones inyectables. Las formas de dosificación unitarias apropiadas para una administración oral comprenden de aprox. 0.1 a 30 mg del componente (a), por ejemplo 0.1 a 25 mg, junto con uno o más diluentes o portadores farmacéuticamente aceptable para este. The daily dosages for the first agent or component (a) will, of course, vary depending on a variety of factors, for example the chosen compound, the particular condition being treated and the desired effect. In general, however, satisfactory results are achieved in the administration of an S1 P receptor agonist, for example Compound A, B or C, at daily dosage rates of the order of approx. 0.1 to 100 mg as a single dose or in divided doses. The S1 P receptor agonist can be administered by any conventional route, in particular enterally, for example orally, for example in the form of tablets, capsules, beverage solutions or parenterally, for example in the form of suspensions or injectable solutions. Unit dosage forms suitable for oral administration comprise of approx. 0.1 to 30 mg of component (a), for example 0.1 to 25 mg, together with one or more pharmaceutically acceptable diluents or carriers for this.

El fadrozol se puede administrar por vía oral a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 0.5 a cerca de 10 mg/día, preferiblemente de aproximadamente 1 a cerca de 2.5 mg/día. El exemestano se puede administrar por vía oral a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 5 a cerca de 200 mg/día, preferiblemente de aproximadamente 10 a cerca de 25 mg/día, o por vía parenteral de aproximadamente 50 a 500 mg/día, preferiblemente de aproximadamente 100 a cerca de 250 mg/día. Si el fármaco se administra en una composición farmacéutica separada, se puede administrar en la forma revelada en GB 2,177,700. El formestano se puede administrar por vía parenteral a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 100 a 500 mg/día, preferiblemente de aproximadamente 250 a cerca de 300 mg/día. El anastrozol se puede administrar por vía oral a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 0.25 a 20 mg/día, preferiblemente de aproximadamente 0.5 a cerca de 2.5 mg/día. La aminoglutemida se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 200 a 500 mg/día. Fadrozole can be administered orally to a human in a dosage range that ranges from about 0.5 to about 10 mg / day, preferably from about 1 to about 2.5 mg / day. Exemestane can be administered orally to a human in a dosage range ranging from about 5 to about 200 mg / day, preferably from about 10 to about 25 mg / day, or parenterally from about 50 to 500 mg / day, preferably from about 100 to about 250 mg / day. If the drug is administered in a separate pharmaceutical composition, it can be administered as disclosed in GB 2,177,700. Formestane can be administered parenterally to a human in a dosage range ranging from about 100 to 500 mg / day, preferably from about 250 to about 300 mg / day. Anastrozole can be administered orally to a human in a dosage range ranging from about 0.25 to 20 mg / day, preferably from about 0.5 to about 2.5 mg / day. Aminoglutemide can be administered to a human in a dosage range that ranges from about 200 to 500 mg / day.

El tamoxifeno citrato se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 10 a 40 mg/día. Tamoxifen citrate can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 10 to 40 mg / day.

La vinblastina se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 1.5 a 10 mg/m2día. El sulfato de vincristina se puede administrar por vía parenteral a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 0.025 a 0.05 mg/kg de peso corporal * semanas. La vinorelbina se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 10 a 50 mg/m2día. El fosfato de etopósido se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 25 a 115 mg/m2día, por ejemplo 56.8 o 113.6 mg/m2día. Vinblastine can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 1.5 to 10 mg / m2day. Vincristine sulfate can be administered parenterally to a human in a dosage range that ranges from approximately 0.025 to 0.05 mg / kg body weight * weeks. Vinorelbine can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 10 to 50 mg / m2day. Etoposide phosphate can be administered to a human in a dosage range that ranges from about 25 to 115 mg / m2day, for example 56.8 or 113.6 mg / m2day.

El tenipósido se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 75 a 150 mg aproximadamente cada dos semanas. La doxorubicina se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 10 a 100 mg/m2día, por ejemplo 25 o 50 mg/m2día. La epirubicina se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 10 a 200 mg/m2día. La idarubicina se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 0.5 a 50 mg/m2día. La mitoxantrona se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 2.5 a 25 mg/m2día. Teniposide can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 75 to 150 mg approximately every two weeks. Doxorubicin can be administered to a human in a dosage range that ranges from about 10 to 100 mg / m2day, for example 25 or 50 mg / m2day. Epirubicin can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 10 to 200 mg / m2day. Idarubicin can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 0.5 to 50 mg / m2day. Mitoxantrone can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 2.5 to 25 mg / m2day.

El paclitaxel se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 50 a 300 mg/m2día. El docetaxel se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 25 a 100 mg/m2día. Paclitaxel can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 50 to 300 mg / m2day. Docetaxel can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 25 to 100 mg / m2day.

La ciclofosfamida se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 50 a 1500 mg/m2día. El Melphalan se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 0.5 a 10 mg/m2día. Cyclophosphamide can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 50 to 1500 mg / m2day. Melphalan can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 0.5 to 10 mg / m2day.

El 5-fluorouracilo se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 50 a 1000 mg/m2día, por ejemplo 500 mg/m2día. La capecitabina se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 10 a 1000 mg/m2día. La gemcitabina clorhidrato se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 1000 mg/m2/semanas. El metotrexato se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 5 a 500 mg/m2día. 5-fluorouracil can be administered to a human in a dosage range that ranges from about 50 to 1000 mg / m2day, for example 500 mg / m2day. Capecitabine can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 10 to 1000 mg / m2day. Gemcitabine hydrochloride can be administered to a human in a dosage range that varies from approximately 1000 mg / m2 / week. Methotrexate can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 5 to 500 mg / m2day.

El topotecan se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 1 a 5 mg/m2día. El irinotecan se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 50 a 350 mg/m2día. Topotecan can be administered to a human in a dosage range that varies from approximately 1 to 5 mg / m2day. Irinotecan can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 50 to 350 mg / m2day.

El carboplatino se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 200 a 400 mg/m2 aproximadamente cada cuatro semanas. El cisplatino se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 25 a 75 mg/m2 aproximadamente cada tres semanas. El oxaliplatino se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 50 a 85 mg/m2 cada dos semanas. Carboplatin can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 200 to 400 mg / m2 approximately every four weeks. Cisplatin can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 25 to 75 mg / m2 approximately every three weeks. Oxaliplatin can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 50 to 85 mg / m2 every two weeks.

El imatinib se puede administrar a un humano en una dosificación en el rango de aproximadamente 2.5 a 850 mg/día, más preferiblemente 5 a 600 mg/día y más preferiblemente 20 a 300 mg/día. Imatinib can be administered to a human in a dosage in the range of about 2.5 to 850 mg / day, more preferably 5 to 600 mg / day and more preferably 20 to 300 mg / day.

El ácido alendrónico se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 5 a 10 mg/día. El ácido clodrónico se puede administrar a un humano por ejemplo en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 750 a 1500 mg/día. El ácido etidrónico se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 200 a 400 mg/día. El ácido ibandrónico se puede administrar a un Alendronic acid can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 5 to 10 mg / day. Clodronic acid can be administered to a human for example in a dosage range ranging from about 750 to 1500 mg / day. Etidronic acid can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 200 to 400 mg / day. Ibandronic acid can be administered to a

5 humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 1 a 4 mg cada tres a cuatro semanas. El ácido risedrónico se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 20 a 30 mg/día. El ácido pamidrónico se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 15 a 90 mg cada tres a cuatro semanas. El ácido tiludrónico se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 200 a 400 mg/día. 5 human in a dosage range that varies from about 1 to 4 mg every three to four weeks. Risedronic acid can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 20 to 30 mg / day. Pamidronic acid can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 15 to 90 mg every three to four weeks. Tiludronic acid can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 200 to 400 mg / day.

10 El trastuzumab se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 1 a 4 mg/m2/semanas. 10 Trastuzumab can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 1 to 4 mg / m2 / week.

La bicalutamida se puede administrar a un humano en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 25 a 50 mg/m2día. Bicalutamide can be administered to a human in a dosage range that ranges from approximately 25 to 50 mg / m2day.

1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazina o la sal de esta, por ejemplo succinato, se puede administrar a un humano 1- (4-Chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine or the salt thereof, for example succinate, can be administered to a human

15 en un rango de dosificación de aproximadamente 50 a 1500, más preferiblemente aproximadamente 100 a 750, y más preferiblemente 250 a 500, mg/día. 15 in a dosage range of about 50 to 1500, more preferably about 100 to 750, and more preferably 250 to 500, mg / day.

La rapamicina o un derivado de esta, por ejemplo 40-O-(2-hidroxietilo)-rapamicina, se puede administrar en un rango de dosificación que varía de aproximadamente 0.1 a 25 mg. Rapamycin or a derivative thereof, for example 40-O- (2-hydroxyethyl) -rapamycin, can be administered in a dosage range ranging from about 0.1 to 25 mg.

Ejemplo de Formulación: cápsulas blandas Formulation example: soft capsules

Compuesto de fórmula I, Compound of formula I,

por ejemplo Compuesto A, HCl 30 mg for example Compound A, HCl 30 mg

Polietilenglicol 300 300 mg Polyethylene glycol 300 300 mg

Polisorbato 80 20 mg Polysorbate 80 20 mg

Total 350 mg Total 350 mg

Los agonistas del receptor S1 P, por ejemplo un agonista del receptor S1 P que comprende un grupo de fórmula X, son bien tolerados a las dosificaciones requeridas para su uso de acuerdo con la presente invención. Por ejemplo, la LD50 aguda para el Compuesto A es > 10 mg/kg p.o. en ratas y monos. S1 P receptor agonists, for example an S1 P receptor agonist comprising a group of formula X, are well tolerated at the dosages required for use in accordance with the present invention. For example, the acute LD50 for Compound A is> 10 mg / kg p.o. in rats and monkeys.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de agonistas de S1 P como fármacos pro-angiogénicos. La In another aspect, the present invention relates to the use of S1 P agonists as pro-angiogenic drugs. The

25 inducción de neo-angiogénesis últimamente ha sido reconocida como un excelente objetivo en un número de condiciones (por ejemplo, angiogénesis miocardíaca, cicatrización de heridas o disfunción vascular en la diabetes/vasculopatía). Induction of neo-angiogenesis has lately been recognized as an excellent target in a number of conditions (for example, myocardial angiogenesis, wound healing or vascular dysfunction in diabetes / vasculopathy).

Como se describe anteriormente, concentraciones altas de agonistas del receptor S1 P (2 !M o más, por ejemplo 25 !M o cerca de 5 !M) muestran efectos anti-angiogénicos, y los agonistas del receptor S1 P pueden inhibir la As described above, high concentrations of S1 P receptor agonists (2 µM or more, for example 25 µM or about 5 µM) show anti-angiogenic effects, and S1 P receptor agonists can inhibit the

30 angiogénesis inducida por VEGF. Por el contrario, concentraciones bajas (0.1 -1 !M, por ejemplo 0.1 - 0.5 !M o 0.5 -1 !M) de agonistas de S1 P tienen un efecto potenciador de la angiogénesis y son capaces de potenciar la angiogénesis mediada por VEGF. De esta manera, los agonistas de S1P pueden tener efectos bifásicos en la angiogénesis. 30 VEGF-induced angiogenesis. In contrast, low concentrations (0.1 -1 µM, for example 0.1-0.5 µM or 0.5-1 µM) of S1 P agonists have an angiogenesis enhancing effect and are capable of potentiating VEGF-mediated angiogenesis. In this way, S1P agonists can have biphasic effects on angiogenesis.

En consecuencia, la presente invención además provee: Accordingly, the present invention further provides:

35 8. Uso de un agonista de S1 P, por ejemplo un agonista de S1 P que comprende un grupo de fórmula X, por ejemplo el Compuesto A o el Compuesto A-fosfato, en la inducción del proceso de neo-angiogénesis, por ejemplo como un agente pro-angiogénico, por ejemplo en indicaciones dónde se indica una promoción de la angiogénesis; Use of an S1 P agonist, for example an S1 P agonist comprising a group of formula X, for example Compound A or Compound A-phosphate, in the induction of the neo-angiogenesis process, for example as a pro-angiogenic agent, for example in indications where a promotion of angiogenesis is indicated;

9. Un proceso para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de enfermedades mediadas por la inhibición del proceso de neo-angiogénesis, por ejemplo mediadas por factores anti-angiogénicos, por ejemplo 9. A process for the preparation of a medicament for the treatment or prevention of diseases mediated by the inhibition of the neo-angiogenesis process, for example mediated by anti-angiogenic factors, for example

40 en indicaciones dónde se indica una promoción de la angiogénesis, por ejemplo en cicatrización de heridas o en el tratamiento de infarto del miocardio o disfunción vascular en la diabetes/vasculopatía, que comprende el uso de un agonista del receptor S1 P, por ejemplo un agonista de S1 P que comprende un grupo de fórmula X, por ejemplo el Compuesto A o el Compuesto A-fosfato, como un ingrediente activo; 40 in indications where a promotion of angiogenesis is indicated, for example in wound healing or in the treatment of myocardial infarction or vascular dysfunction in diabetes / vasculopathy, which includes the use of an S1 P receptor agonist, for example a S1 P agonist comprising a group of formula X, for example Compound A or Compound A-phosphate, as an active ingredient;

10. Un método para tratar o prevenir enfermedades mediadas por la inhibición del proceso de neo-angiogénesis, por ejemplo mediadas por factores anti-angiogénicos, por ejemplo en indicaciones dónde se indica una promoción de la angiogénesis, tales como por ejemplo en la cicatrización de heridas o en el tratamiento de infarto del miocardio o disfunción vascular en la diabetes/vasculopatía, que comprende la administración de una cantidad efectiva de un agonista del receptor S1 P, por ejemplo un agonista de S1 P que comprende un grupo de fórmula X, por ejemplo el Compuesto A o el Compuesto A-fosfato, a un sujeto con necesidad de dicho tratamiento. 10. A method for treating or preventing diseases mediated by the inhibition of the neo-angiogenesis process, for example mediated by anti-angiogenic factors, for example in indications where a promotion of angiogenesis is indicated, such as for example in the healing of wounds or in the treatment of myocardial infarction or vascular dysfunction in diabetes / vasculopathy, which comprises the administration of an effective amount of an S1 P receptor agonist, for example an S1 P agonist comprising a group of formula X, by example Compound A or Compound A-phosphate, to a subject in need of such treatment.

Los agonistas de S1P apropiados para promover la angiogénesis incluyen aquellos definidos anteriormente en relación con el tratamiento del cáncer, por ejemplo agonistas de S1 P que comprenden un grupo de fórmula X o los compuestos de acuerdo con las fórmulas I a IX, o las sales o ésteres de estos farmacéuticamente aceptables. Preferiblemente el agonista de S1 P es el Compuesto A-fosfato. El agonista de S1 P puede ser utilizado solo, o en combinación con uno o más agentes que promueven la angiogénesis, por ejemplo VEGF. Appropriate S1P agonists to promote angiogenesis include those defined above in relation to cancer treatment, for example S1 P agonists comprising a group of formula X or the compounds according to formulas I to IX, or salts or esters of these pharmaceutically acceptable. Preferably the S1 P agonist is Compound A-phosphate. The S1 P agonist can be used alone, or in combination with one or more agents that promote angiogenesis, for example VEGF.

Con el fin de promover la angiogénesis es importante seleccionar una dosis suficientemente baja del agonista del receptor S1 P, como concentraciones altas de agonistas del receptor S1 P inhiben la angiogénesis. Una dosis apropiada para proveer un efecto pro-angiogénico cuando un agonista de S1 P se administra a un paciente se puede seleccionar por estudios de incrementos de dosis y de concentración como se describe anteriormente en A, B, y C. In order to promote angiogenesis it is important to select a sufficiently low dose of the S1 P receptor agonist, as high concentrations of S1 P receptor agonists inhibit angiogenesis. An appropriate dose to provide a pro-angiogenic effect when an S1 P agonist is administered to a patient can be selected by studies of dose and concentration increases as described above in A, B, and C.

Descripción de las Figuras Description of the Figures

Figura 1 Figure 1

Muestra que el Compuesto A-fosfato promueve fuertemente la formación de una red similar a capilar de una manera dependiente de la dosis forma de campana, que muestra una actividad máxima alrededor de 0.5 !M. It shows that Compound A-phosphate strongly promotes the formation of a capillary-like network in a dose-dependent manner bell-shaped, which shows a maximum activity around 0.5 µM.

Figura 2 Figure 2

Muestra que tanto el Compuesto A-fosfato como el Compuesto A a 0.5 - 1 !M no atenúan la remodelación mediada por VEGF, sino más bien cooperan con el polipéptido factor de crecimiento. It shows that both Compound A-phosphate and Compound A at 0.5-1 µM do not attenuate VEGF-mediated remodeling, but rather cooperate with the growth factor polypeptide.

Figura 3 Figure 3

Muestra que el Compuesto A-fosfato así como la formación de tubos estimulada por S1P, prácticamente se inhibe completamente por la toxina pertussis (PTX, 50 ng/ml), un inhibidor de proteínas heterotrimericas G de tipo ai/o. Esto puede ser interpretado como una posible intervención de eventos de señalización mediada por el receptor EDG-1 (S1P1) en biorespuestas estimuladas con el Compuesto A-fosfato. It shows that Compound A-phosphate, as well as S1P-stimulated tube formation, is practically completely inhibited by pertussis toxin (PTX, 50 ng / ml), an inhibitor of G-type heterotrimeric proteins. This can be interpreted as a possible intervention of signaling events mediated by the EDG-1 (S1P1) receptor in bioresposts stimulated with Compound A-phosphate.

Figura 4 Figure 4

Muestra, que la esfingosina a 1 mM, que a su vez parece ser menos potente que S1 P, atenúa la capacidad de ambos S1 P y el Compuesto A-fosfato para inducir estructuras similares a capilares, sin que tenga un efecto inhibidor en la formación de tubos inducidos por VEGF. A este respecto, la esfingosina se comporta diferente del Compuesto A. Los datos indican que el balance entre esfingosina y S1 P parece ser críticamente importante para angiogénesis/activación de célula endotelial más probablemente a través de la familia del receptor de EDG. Es importante destacar, que las concentraciones altas de esfingosina y Compuesto A (2 - 5 !M) inhiben la formación de tubos provocada por VEGF. It shows that sphingosine at 1 mM, which in turn appears to be less potent than S1 P, attenuates the ability of both S1 P and Compound A-phosphate to induce capillary-like structures, without having an inhibitory effect on formation of tubes induced by VEGF. In this regard, sphingosine behaves differently from Compound A. The data indicates that the balance between sphingosine and S1 P appears to be critically important for angiogenesis / endothelial cell activation most likely through the EDG receptor family. Importantly, high concentrations of sphingosine and Compound A (2-5 µM) inhibit tube formation caused by VEGF.

Figura 5 Figure 5

Muestra que el tratamiento de HUVEC con el Compuesto A-fosfato a 0.5 mM puede resultar en la activación transitoria de ERK1/2 con un pico de fosforilación/activación a 10 minutos y regreso a la línea base en 20 minutos It shows that treatment of HUVEC with Compound A-phosphate at 0.5 mM can result in transient activation of ERK1 / 2 with a phosphorylation / activation peak at 10 minutes and return to baseline in 20 minutes

Figura 6 Figure 6

Se probó si el Compuesto A, el Compuesto A-fosfato, la esfingosina o S1P también no inducir el factor de tejido en HUVEC. Los datos encontrados demuestran que ninguno de estos compuestos solo o en combinaciones puede elevar la actividad del factor de tejido como se muestra en la Figura 6. El Compuesto A y el Compuesto A-fosfato pueden potenciar ligeramente el VEGF pero no el factor de tejido inducido por TNF-a. It was tested if Compound A, Compound A-phosphate, sphingosine or S1P also did not induce tissue factor in HUVEC. The data found demonstrates that none of these compounds alone or in combinations can increase the activity of the tissue factor as shown in Figure 6. Compound A and Compound A-phosphate may slightly enhance VEGF but not the tissue factor induced by TNF-a.

Figura 7 Figure 7

Muestra el efecto del Compuesto C en un ensayo de formación de tubos HUVEC mediado por S1 P. It shows the effect of Compound C in an S1 P-mediated HUVEC tube formation assay.

Se utilizan las siguientes abreviaturas: The following abbreviations are used:

BSA: albúmina de suero de bovino BSA: bovine serum albumin

ECGS: grupo de factor de crecimiento de célula endotelial ECL: quimioluminiscencia aumentada ECGS: ECL endothelial cell growth factor group: enhanced chemiluminescence

S: esfingosina PBS: solución salina regulada con fosfato S: PBS sphingosine: phosphate regulated saline solution

JNK1/2: c-jun-N-terminal quinasa 1/2 RT: temperatura ambiente JNK1 / 2: c-jun-N-terminal kinase 1/2 RT: room temperature

equivalentes TF: equivalentes factor de tejido TF equivalents: tissue factor equivalents

EGR-1/NFAT: proteína de respuesta de crecimiento temprano 1/factor nuclear de células T activadas F1 P: Compuesto A-fosfato (FTY720-fosfato) EGR-1 / NFAT: early growth response protein 1 / activated F1 P nuclear cell factor: A-phosphate compound (FTY720-phosphate)

La utilidad de los agonistas del receptor S1P, por ejemplo los agonistas de S1P que comprenden un grupo de 5 fórmula X, en la promoción de angiogénesis se puede demostrar por ejemplo de acuerdo con los métodos descritos de ahora en adelante. The utility of S1P receptor agonists, for example S1P agonists comprising a group of formula X, in the promotion of angiogenesis can be demonstrated, for example, in accordance with the methods described hereafter.

D. Cultivo celular y Materiales D. Cell Culture and Materials

Las células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) se cultivan a 37°C y 5% de CO2 en medio M199 suplementado con 20% de SCS (HyClone, Logan, UT), 1U/ml de heparina, 50 !g/ml de ECGS, glutamina 2 mM, 10010 U/ml de penicillina y 0.1 mg/ml de estreptomicina. Las células se utilizan para los experimentos hasta el pasaje número 5. HUVEC de escasa alimentación se obtienen mediante la privación con M199 que contiene 1% de SCS, durante 5 h. VEGF165 recombinante humana se obtiene de PromoCell (Heidelberg, Germany). Los anticuerpos policlonales ERK1/2 fosfo-específicos, quinasa p38, los anticuerpos ERK1/2 no-fosfo y el reactivo quimioluminiscente LumiGLO son de New England BioLabs (Beverly, MA), los anticuerpos policlonales IKB de Santa 15 Cruz Biotechnology (Santa Cruz, Calif.). La inmunoglobulina G (IgG) de anti-conejo de burro conjugado con peroxidasa y la IgG anti-ratón de oveja se adquirieron de Amersham LIFE SCIENCE (Amersham Place, England). Las membranas de transferencia Immobilon-P son productos de Millipore (Bedford, MA). S se obtiene de Sigma Chemical Co.; S1 P es de Biomol. La solución stock del Compuesto A-fosfato se prepara mediante el siguiente protocolo. El Compuesto A-fosfato se disuelve en metanol trazado con HCl concentrado (0.5 mg del Compuesto AHuman umbilical vein endothelial cells (HUVEC) are cultured at 37 ° C and 5% CO2 in M199 medium supplemented with 20% SCS (HyClone, Logan, UT), 1U / ml heparin, 50 µg / ml ECGS, 2 mM glutamine, 10010 U / ml penicillin and 0.1 mg / ml streptomycin. The cells are used for experiments up to passage number 5. HUVEC of poor feeding are obtained by deprivation with M199 containing 1% SCS, for 5 h. Human recombinant VEGF165 is obtained from PromoCell (Heidelberg, Germany). The phospho-specific ERK1 / 2 polyclonal antibodies, p38 kinase, non-phospho ERK1 / 2 antibodies and the LumiGLO chemiluminescent reagent are from New England BioLabs (Beverly, MA), the IKB polyclonal antibodies from Santa 15 Cruz Biotechnology (Santa Cruz, Calif.) Donkey anti-rabbit immunoglobulin G (IgG) conjugated with peroxidase and sheep anti-mouse IgG were purchased from Amersham LIFE SCIENCE (Amersham Place, England). Immobilon-P transfer membranes are products of Millipore (Bedford, MA). S is obtained from Sigma Chemical Co .; S1 P is from Biomol. The stock solution of Compound A-phosphate is prepared by the following protocol. Compound A-phosphate is dissolved in methanol traced with concentrated HCl (0.5 mg of Compound A

20 fosfato en 500 ml de metanol más 2 ml de HCl). El solvente de la solución resultante se evapora con vacío y el residuo obtenido se vuelve a disolver (variante 1) en 0.1 % de solución de BSA desgrasada en agua desionizada estéril (500 !l) o (variante 2) en 0.5 % de Triton X-1 00 en agua desionizada. Las soluciones stock resultantes (2.5 mM) se sometieron a sonicación y almacenaron a 4°C. 20 phosphate in 500 ml of methanol plus 2 ml of HCl). The solvent of the resulting solution is evaporated in vacuo and the residue obtained is re-dissolved (variant 1) in 0.1% BSA solution degreased in sterile deionized water (500 µl) or (variant 2) in 0.5% Triton X -1 00 in deionized water. The resulting stock solutions (2.5 mM) were sonicated and stored at 4 ° C.

Ensayo de Coagulación Coagulation Assay

25 Las células se siembran en placas de 6 pozos a una confluencia del 80-90% y se cultivan durante la noche. Las células se raspan de las placas y se analizan para actividad del factor de tejido de acuerdo con el método como se describe en Clauss, M., J. Biol. Chem. 271,17629-17634 (1996), Mechtcheriakova, D., Blood 93,3811-3823 (1999). En resumen, después de la inducción durante 4 horas con VEGF (1.5 nM), TNF- a (100 U/ml), S (0.5-2 !M), S1P (0.5-2 !M), el Compuesto A (0.5-2 !M), y el Compuesto A-fosfato (0.5-2 !M), las células se lavan dos veces y luego 25 Cells are plated in 6-well plates at a confluence of 80-90% and grown overnight. The cells are scraped off the plates and analyzed for tissue factor activity according to the method as described in Clauss, M., J. Biol. Chem. 271,17629-17634 (1996), Mechtcheriakova, D., Blood 93.3811-3823 (1999). In summary, after induction for 4 hours with VEGF (1.5 nM), TNF- a (100 U / ml), S (0.5-2 µM), S1P (0.5-2 µM), Compound A (0.5 -2! M), and Compound A-phosphate (0.5-2! M), the cells are washed twice and then

30 se raspan en 1ml de solución reguladora de coagulación (acetato de sodio 12 mM, dietilbarbitato 7 mM y cloruro de sodio 130 mM; pH 7.4). 50 !l de las células resuspendidas se mezclan con 50 !l de plasma tratado con citrato, y los tiempos de coagulación se determinan después de la recalcificación con 50 !l de solución de CaCl2 20 mM a 37°C. Los equivalentes-TF se determinan utilizando una curva estándar obtenida de tromboplastina de cerebro de conejo. 30 are scraped in 1ml of coagulation regulating solution (12 mM sodium acetate, 7 mM diethylbarbonate and 130 mM sodium chloride; pH 7.4). 50 µl of the resuspended cells are mixed with 50 µl of citrate treated plasma, and coagulation times are determined after recalcification with 50 µl of 20 mM CaCl 2 solution at 37 ° C. TF equivalents are determined using a standard curve obtained from rabbit brain thromboplastin.

E. Análisis de Western Blot E. Western Blot Analysis

35 Después de varios tratamientos, las células se lavan dos veces con PBS frío, se lisan en 100 !l de solución reguladora Laemmli, se raspan y calientan durante 5 min a 95°C. Los lisados celulares totales se separan mediante SDS-PAGE y se transfieren a membrana Immobilon-P. La membrana se bloquea, durante 30 minutos con PBS que contiene 0.1% de Tween-20 y 3% de leche desnatada y se incuba durante 1 hora a RT con un anticuerpo primario diluido en solución reguladora de bloqueo. La membrana obtenida se lava tres veces, durante 5 minutos con PBS After several treatments, the cells are washed twice with cold PBS, lysed in 100 µl of Laemmli regulatory solution, scraped and heated for 5 min at 95 ° C. Total cell lysates are separated by SDS-PAGE and transferred to Immobilon-P membrane. The membrane is blocked, for 30 minutes with PBS containing 0.1% Tween-20 and 3% skim milk and incubated for 1 hour at RT with a primary antibody diluted in blocking regulatory solution. The membrane obtained is washed three times, for 5 minutes with PBS

40 que contiene 0.1% de Tween-20 y se incuba con anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa durante 1 hora a RT. Después de una etapa de lavado, la membrana se incuba durante 1 minuto con reactivo ECL y se expone a una película, según sea necesario. Para volver a analizar con otro anticuerpo, la membrana se lava dos veces en PBS, se trata durante 30 min a 55°C con solución reguladora de tratamiento (Tris-HCL 62.5 mM, pH 6.8, 2% de SDS, 2mercaptoetanol 100 mM) y se lava tres veces durante 5 minutos con PBS a RT. La membrana se almacena húmeda envuelta en SaranWrap a 4°C después de cada inmunodetección. 40 containing 0.1% Tween-20 and incubated with peroxidase-conjugated secondary antibody for 1 hour at RT. After a washing step, the membrane is incubated for 1 minute with ECL reagent and exposed to a film, as necessary. To re-analyze with another antibody, the membrane is washed twice in PBS, treated for 30 min at 55 ° C with treatment regulatory solution (62.5 mM Tris-HCL, pH 6.8, 2% SDS, 100 mM 2-mercaptoethanol) and wash three times for 5 minutes with PBS at RT. The membrane is stored wet wrapped in SaranWrap at 4 ° C after each immunodetection.

Ensayo de angiogénesis in vitro en Matrigel In vitro angiogenesis test in Matrigel

La morfogénesis de células endoteliales en estructuras similares a capilares en Matriz Matrigel Reducida del Factor de Crecimiento (BD Bioscience) se realiza de acuerdo con el procedimiento de fabricación. En resumen, las HUVEC se tripsinizan, se vuelven a suspender en medio M199 libre de suero que contiene inhibidor de la tripsina de soja (1mg/ml, Sigma). Después de la centrifugación, las células se vuelven a suspender en medio libre de suero a una densidad de 0.5 x 105 células/ml, y la suspensión celular se siembra en placas de cultivo celular de 96 pozos (Costar, Corning Incorporated) precubiertas con 50 !l de Matrigel en la ausencia o presencia de varios estímulos: VEGF a 1.5 nM, S1P a 0.1-2 !M, S a 0.5-2 !M, Compuesto A a 0.5-2 !M, y Compuesto A-fosfato a 0.1-2 !M. Ocho horas después, las células en Matrigel se fijan con 3 % de formaldehido en PBS y se conservan a 4°C. Los resultados se cuantifican de las imágenes hechas con un microscopio Nikon Diaphot equipado con una cámara CCD enfriada (Kappa GmbH, Gleichen, Germany) mediante el recuento directo de puntos de ramificación en dos campos microscópicos de cada pozo hechos por duplicados. Morphogenesis of endothelial cells in capillary-like structures in Matrix Matrix Reduced Growth Factor (BD Bioscience) is performed according to the manufacturing procedure. In summary, HUVECs are trypsinized, resuspended in serum-free M199 medium containing soy trypsin inhibitor (1mg / ml, Sigma). After centrifugation, the cells are resuspended in serum-free medium at a density of 0.5 x 105 cells / ml, and the cell suspension is seeded in 96-well cell culture plates (Costar, Corning Incorporated) precoated with 50 l Matrigel in the absence or presence of several stimuli: VEGF at 1.5 nM, S1P at 0.1-2 µM, S at 0.5-2 µM, Compound A at 0.5-2 µM, and Compound A-phosphate at 0.1 -2! M. Eight hours later, the cells in Matrigel are fixed with 3% formaldehyde in PBS and stored at 4 ° C. The results are quantified from images made with a Nikon Diaphot microscope equipped with a cooled CCD camera (Kappa GmbH, Gleichen, Germany) by direct counting of branching points in two microscopic fields of each well made in duplicates.

F. El Compuesto A-fosfato-induce la morfogénesis de células endoteliales en el ensayo de formación de tubos in vitro en Matrigel y una posible implicación de ruta(s) de señalización mediada por Gi F. Compound A-phosphate-induces endothelial cell morphogenesis in the Matrigel in vitro tube formation assay and a possible implication of Gi-mediated signaling pathway (s)

El efecto del Compuesto A y el Compuesto A-fosfato en diferenciación morfogénica de células endoteliales se determina utilizando un ensayo de angiogénesis in vitro en Matrigel. La morfogénesis de célula endotelial es un proceso complejo que necesita interacciones de matriz extracelular-célula, seguido por remodelación de la matriz, migración estimulada, interacciones célula-célula, y proteólisis perivascular. Como se muestra en la Figura 1, el Compuesto A-fosfato puede promover fuertemente la formación de la red similar a capilar de una manera de forma de campana dependiente de la dosis que muestra actividad máxima alrededor de 0.5 !M. El número de puntos de ramificación por campo microscópico, que refleja la potencia de inducción del estímulo, es comparable para el Compuesto A-fosfato y S1P, y puede exceder significantemente los efectos provocados por VEGF. El Compuesto A por sí mismo a 0.5 - 1 !M tiene un efecto potenciador débil, pero consistente, en comparación con el Compuesto Afosfato. Ambos el Compuesto A-fosfato y el Compuesto A a 0.5 - 1 !M no atenúan la remodelación mediada por VEGF sino más bien cooperan con el factor de crecimiento de polipéptido (ver por ejemplo, la Figura 2). Adicionalmente, el Compuesto A-fosfato- así como la formación de tubos estimulada por S1P se inhibe completamente por la toxina pertussis (PTX, 50 ng/ml), un inhibidor de proteínas G heterotrimericas de tipo ai/o. Esto se puede interpretar como una posible intervención de los eventos de señalización mediados por el receptor EDG-1 (S1P1) en biorespuestas estimuladas con el Compuesto A-fosfato (ver por ejemplo, la Figura 3). S a 1 !M, que a su vez parece ser menos potente que S1 P, atenúa la capacidad de ambos S1P y el Compuesto A-fosfato para inducir estructuras similares a capilares, sin que tenga un efecto inhibidor en la formación de tubos inducidos por VEGF (ver por ejemplo, la Figura 4). A este respecto, S se comporta de manera diferente al Compuesto A. Los datos indican que el balance entre S y S1 P parece ser críticamente importante para la angiogénesis/activación de célula endotelial más probablemente vía la familia del receptor de EDG. Es importante destacar que, las concentraciones altas de S y el Compuesto A (2 - 5 !M) inhibieron la formación de tubos provocada por VEGF. Esos datos sugieren efectos bifásicos dependientes de la dosis del Compuesto A y el Compuesto A-fosfato en la angiogénesis in vitro. The effect of Compound A and Compound A-phosphate on morphogenic differentiation of endothelial cells is determined using an in vitro angiogenesis assay in Matrigel. Endothelial cell morphogenesis is a complex process that needs extracellular-cell matrix interactions, followed by matrix remodeling, stimulated migration, cell-cell interactions, and perivascular proteolysis. As shown in Figure 1, Compound A-phosphate can strongly promote the formation of the capillary-like network in a dose-dependent manner of bell form showing maximum activity around 0.5 µM. The number of branching points per microscopic field, which reflects the induction power of the stimulus, is comparable for Compound A-phosphate and S1P, and can significantly exceed the effects caused by VEGF. Compound A by itself at 0.5-1 µM has a weak, but consistent, potentiating effect compared to the Aphosphate Compound. Both Compound A-phosphate and Compound A at 0.5-1 µM do not attenuate VEGF-mediated remodeling but rather cooperate with the polypeptide growth factor (see, for example, Figure 2). Additionally, Compound A-phosphate- as well as tube formation stimulated by S1P is completely inhibited by pertussis toxin (PTX, 50 ng / ml), an inhibitor of heterotrimeric G proteins of type ai / o. This can be interpreted as a possible intervention of signaling events mediated by the EDG-1 (S1P1) receptor in bioresposts stimulated with Compound A-phosphate (see, for example, Figure 3). S at 1 µM, which in turn seems to be less potent than S1 P, attenuates the ability of both S1P and the A-phosphate Compound to induce capillary-like structures, without having an inhibitory effect on the formation of tubes induced by VEGF (see for example, Figure 4). In this regard, S behaves differently than Compound A. The data indicates that the balance between S and S1 P seems to be critically important for endothelial cell angiogenesis / activation most likely via the EDG receptor family. Importantly, high concentrations of S and Compound A (2-5 µM) inhibited the formation of tubes caused by VEGF. These data suggest dose-dependent biphasic effects of Compound A and Compound A-phosphate in in vitro angiogenesis.

G. Activación de ERK1/2 MAP quinasas mediante el Compuesto A-fosfato G. Activation of ERK1 / 2 MAP kinases by Compound A-phosphate

La transducción de la señal vía MAP quinasas juega un papel clave en una variedad de funciones de célula endotelial. El tratamiento de HUVEC con el Compuesto A-fosfato a 0.5 !M puede resultar en activación transitoria de ERK1/2 con un pico de fosforilación/activación a 10 minutos y regreso a la línea base en 20 minutos (ver por ejemplo, la Figura 5). No es detectable ninguna activación de p38 quinasa y JNK1/2 por el Compuesto A-fosfato en HUVEC. Adicionalmente, el Compuesto A-fosfato puede provocar la activación de ERK1/2 de una manera dependiente de la dosis, que muestra actividad más fuerte a 2 !M. Esto está en contraste con los resultados del ensayo de formación de tubos, cuando el Compuesto A-fosfato a 2 !M puede ser menos potente que a 0.5 !M. Ni el Compuesto A ni S son capaces de inducir la activación de MAP quinasa en células endoteliales en una cinética que oscila de 5 minutos a 60 minutos de tratamiento. Para estimar el posible papel del programa inflamatorio/ dependiente de NFKB en biorespuestas estimuladas con el Compuesto A-fosfato de células endoteliales, las membranas se vuelven a analizar con anticuerpos anti-IxB. Los niveles IKB no se afectan por el tratamiento del Compuesto A-fosfato. Además el tratamiento de células endoteliales con el Compuesto A-fosfato puede fallar para inducir la expresión de E-Selectina como un gen de respuesta secundaria dependiente de NFKB. De esta manera, los datos indican firmemente que la señalización del Compuesto A-fosfato no involucra la activación de NFKB, la principal cascada en la respuesta inflamatoria aguda en células endoteliales. Signal transduction via MAP kinases plays a key role in a variety of endothelial cell functions. Treatment of HUVEC with Compound A-phosphate at 0.5 µM can result in transient activation of ERK1 / 2 with a phosphorylation / activation peak at 10 minutes and return to baseline in 20 minutes (see for example, Figure 5 ). No activation of p38 kinase and JNK1 / 2 by Compound A-phosphate in HUVEC is detectable. Additionally, Compound A-phosphate can cause the activation of ERK1 / 2 in a dose-dependent manner, showing stronger activity at 2 µM. This is in contrast to the results of the tube formation test, when Compound A-phosphate at 2 µM may be less potent than at 0.5 µM. Neither Compound A nor S are capable of inducing the activation of MAP kinase in endothelial cells in a kinetics ranging from 5 minutes to 60 minutes of treatment. To estimate the possible role of the inflammatory / NFKB-dependent program in bioresposts stimulated with Endothelial Cell Compound A-phosphate, the membranes are re-analyzed with anti-IxB antibodies. IKB levels are not affected by the treatment of Compound A-phosphate. In addition, treatment of endothelial cells with Compound A-phosphate may fail to induce E-Selectin expression as a secondary response gene dependent on NFKB. Thus, the data strongly indicates that the signaling of Compound A-phosphate does not involve the activation of NFKB, the main cascade in the acute inflammatory response in endothelial cells.

H. El Compuesto A y Compuesto A-fosfato no inducen la expresión del factor de tejido en células endoteliales H. Compound A and Compound A-phosphate do not induce tissue factor expression in endothelial cells

Un rasgo característico importante de tanto el estímulo inflamatorio clásico TNF-a como el principal factor de crecimiento angiogénico VEGF en células endoteliales es su potencia para favorecer la expresión del factor de tejido. Se probó también si el Compuesto A, el Compuesto A-fosfato, S o S1P no inducen el factor de tejido en HUVEC. Los datos encontrados demuestran que ninguno de estos compuestos solos o en combinaciones pueden elevar la actividad del factor de tejido (ver por ejemplo, la Figura 6). El Compuesto A y el Compuesto A-fosfato pueden potenciar ligeramente el VEGF- pero no el factor de tejido inducido por TNF-a. Los datos obtenidos en conjunto indican que el Compuesto A, el Compuesto A-fosfato, S y S1P trabajan de forma mecánica claramente para VEGF angiogénico y TNF-a inflamatorio. An important characteristic feature of both the classic inflammatory stimulus TNF-a and the main angiogenic growth factor VEGF in endothelial cells is its potency to promote tissue factor expression. It was also tested if Compound A, Compound A-phosphate, S or S1P do not induce the tissue factor in HUVEC. The data found show that none of these compounds alone or in combinations can increase the activity of the tissue factor (see, for example, Figure 6). Compound A and Compound A-phosphate may slightly enhance VEGF- but not the tissue factor induced by TNF-a. The data obtained together indicate that Compound A, Compound A-phosphate, S and S1P work mechanically clearly for angiogenic VEGF and inflammatory TNF-a.

I. La afinidad de enlace de los agonistas del receptor S1P con los receptores S1P humanos individuales se puede determinar en los siguientes ensayos: I. The binding affinity of S1P receptor agonists with individual human S1P receptors can be determined in the following assays:

La transfección transitoria de receptores S1 P humanos en células HEK293 Transient transfection of human S1 P receptors in HEK293 cells

Los receptores EDG y las proteínas Gi se clonan, y cantidades iguales de 4 cADNs para el receptor EDG, Gi-a, Gi-1 y Gi-y se mezclan y utilizan para transfectar monocapas de células HEK293 utilizando el método de precipitación de fosfato de calcio (M. Wigler et al., Cell. 1977;11;223 y DS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000;57;753). En resumen, se adiciona una mezcla de ADN que contiene 25 !g de ADN y CaCl 0.25 M al HEPES-estandarizado Na2HPO4 2 mM. Las monocapas subconfluentes de células HEK293 se envenenan con cloroquina 25 mM, y el precipitado de ADN luego se aplica a las células. Después de 4 h, las monocapas se lavan con solución salina regulada con fosfato y medio realimentado (90% 1:1 medio esencial modificado de Dulbecco (DMEM):F-12 + 10% de suero fetal bovino). Las células se recogen 48-72 h después de la adición del ADN mediante el raspado en solución reguladora HME (en mM: 20 HEPES, 5 MgCl2, 1 EDTA, pH 7.4) que contiene 10% de sacarosa en hielo, y se rompen utilizando un homogeneizador Dounce. Después de la centrifugación a 8003 g, el sobrenadante se diluye con HME sin sacarosa y se centrifuga a 100,0003 g, durante 1h. El pellet resultante se vuelve homogeneizar y centrifugar una segunda hora a 100,0003 g. Este pellet de membrana cruda se vuelve a suspender en HME con sacarosa, se divide en alícuotas, y se congela por inmersión en nitrógeno líquido. Las membranas se almacenan a 70°C. La concentración de proteína se determina espectroscópicamente mediante el ensayo de proteína Bradford. EDG receptors and Gi proteins are cloned, and equal amounts of 4 cDNAs for the EDG receptor, Gi-a, Gi-1 and Gi-y are mixed and used to transfect HEK293 cell monolayers using the phosphate precipitation method of calcium (M. Wigler et al., Cell. 1977; 11; 223 and DS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000; 57; 753). In summary, a mixture of DNA containing 25 µg of DNA and 0.25 M CaCl is added to the 2 mM Na2HPO4-standardized HEPES. Subconfluent monolayers of HEK293 cells are poisoned with 25 mM chloroquine, and the DNA precipitate is then applied to the cells. After 4 h, the monolayers are washed with phosphate-regulated saline solution and feedback medium (90% 1: 1 modified Dulbecco essential medium (DMEM): F-12 + 10% fetal bovine serum). Cells are collected 48-72 h after DNA addition by scraping in HME regulatory solution (in mM: 20 HEPES, 5 MgCl2, 1 EDTA, pH 7.4) containing 10% sucrose in ice, and breaking using a Dounce homogenizer. After centrifugation at 8003 g, the supernatant is diluted with HME without sucrose and centrifuged at 100,0003 g, for 1 h. The resulting pellet becomes homogenized and centrifuged a second hour at 100,0003 g. This crude membrane pellet is resuspended in HME with sucrose, divided into aliquots, and frozen by immersion in liquid nitrogen. The membranes are stored at 70 ° C. The protein concentration is determined spectroscopically by the Bradford protein assay.

Ensayo de enlace GTPyS utilizando las preparaciones de membrana S1P/HEK293 del receptor GTPyS binding assay using the S1P / HEK293 membrane preparations of the receptor

Los experimentos de enlace GTPyS se llevan a cabo como se describe por DS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000; GTPyS link experiments are carried out as described by DS. Im et al., Mol. Pharmacol 2000;

57:753. El enlace GTPyS mediado del ligando con proteínas G se mide en solución reguladora de enlace GTP (en mM: 50 HEPES, 100 NaCl, 10 MgCl2, pH 7.5) utilizando 25 !g de una preparación de la membrana de células HEK293 transfectadas transitoriamente. El ligando se adiciona a las membranas en la presencia de GDP 10 !M y 57: 753. The ligand mediated GTPyS binding with G proteins is measured in GTP binding regulatory solution (in mM: 50 HEPES, 100 NaCl, 10 MgCl2, pH 7.5) using 25 µg of a membrane preparation of transiently transfected HEK293 cells. The ligand is added to the membranes in the presence of 10 µM GDP and

0.1 nM [35S]GTPyS (1200 Ci/mmol) y se incuba a 30°C, durante 30 min. GTPyS unido se separa del no unido utilizando el cosechador Brandel (Gaithersburg, MD) y se hace el recuento con un contador de centelleo líquido. 0.1 nM [35 S] GTPyS (1200 Ci / mmol) and incubate at 30 ° C for 30 min. Bound GTPyS is separated from unbound using the Brandel harvester (Gaithersburg, MD) and counted with a liquid scintillation counter.

Claims (10)

REIVINDICACIONES 1. Un agonista del receptor S1 P, que es un compuesto de fórmula IX 1. An S1 P receptor agonist, which is a compound of formula IX en donde where 5 R1f es un halógeno, trihalometilo, hidroxi, alquilo inferior que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, fenilo, aralquilo, alcoxi inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, trifluorometiloxi, fenoxi, ciclohexilmetiloxi, aralquiloxi sustituido o no sustituido, piridilmetiloxi, cinnamiloxi, naftilmetiloxi, fenoximetil, hidroximetilo, hidroxietilo, alquiltio inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, alquilsulfinilo inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, alquilsulfonilo inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, benziltio, acetilo, nitro o ciano; R1f is a halogen, trihalomethyl, hydroxy, lower alkyl having 1 to 7 carbon atoms, phenyl, aralkyl, lower alkoxy having 1 to 4 carbon atoms, trifluoromethyloxy, phenoxy, cyclohexylmethyloxy, substituted or unsubstituted aralkyloxy, pyridylmethyloxy, cinnamyloxy, naphthylmethyloxy, phenoxymethyl, hydroxymethyl, hydroxyethyl, lower alkylthio having 1 to 4 carbon atoms, lower alkylsulfinyl having 1 to 4 carbon atoms, lower alkylsulfonyl having 1 to 4 carbon atoms, benzylthio, acetyl, nitro or cyano; 10 R2f es un hidrógeno, halógeno, trihalometilo, alcoxi inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, alquilo inferior que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, fenetilo, o benziloxi; R 2f is a hydrogen, halogen, trihalomethyl, lower alkoxy having 1 to 4 carbon atoms, lower alkyl having 1 to 7 carbon atoms, phenethyl, or benzyloxy; R3f es un hidrógeno, halógeno, trifluorometilo, alcoxi inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxi, benziloxi, alquilo inferior que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, fenilo o alcoximetilo inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono; R3f is a hydrogen, halogen, trifluoromethyl, lower alkoxy having 1 to 4 carbon atoms, hydroxy, benzyloxy, lower alkyl having 1 to 7 carbon atoms, phenyl or lower alkoxymethyl having 1 to 4 carbon atoms ; 15 Xf es O o S; y 15 Xf is O or S; Y nf es un número entero de 1 a 4, nf is an integer from 1 to 4, o una sal de este farmacéuticamente aceptable, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, para utilizar en un método para prevenir o tratar enfermedades mediadas por un proceso de neo-angiogénesis o asociado con la angiogénesis desregulada, donde dichas enfermedades se seleccionan del grupo que consiste de to use in a method to prevent or treat diseases mediated by a process of neo-angiogenesis or associated with deregulated angiogenesis, where said diseases are selected from the group consisting of 20 cáncer, angiogénesis miocardíaca, cicatrización de heridas y disfunción vascular en la diabetes o vasculopatía. 20 cancer, myocardial angiogenesis, wound healing and vascular dysfunction in diabetes or vasculopathy.

2. 2.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con la reivindicación 1, para prevenir o tratar tumores sólidos. An S1P receptor agonist for use according to claim 1, to prevent or treat solid tumors.

3. 3.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con la reivindicación 1, para inhibir el crecimiento de tumores sólidos o tratar la invasividad de los tumores sólidos o síntomas asociados con dicho crecimiento del tumor. An S1P receptor agonist for use according to claim 1, to inhibit the growth of solid tumors or treat the invasiveness of solid tumors or symptoms associated with said tumor growth.

25 4. Un agonista del receptor S1P de la fórmula IX, como se define en la reivindicación 1, o una sal de este farmacéuticamente aceptable, para utilizar en un método para prevenir o tratar enfermedades mediadas mediante un proceso de neo-angiogénesis o asociado con la angiogénesis desregulada, donde dichas enfermedades se seleccionan del grupo que consiste de cáncer, angiogénesis miocardíaca, cicatrización de heridas, disfunción vascular en la diabetes o vasculopatía, trastornos linfoproliferativo y mieloproliferativo, en donde el agonista del An S1P receptor agonist of formula IX, as defined in claim 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in a method for preventing or treating diseases mediated by a neo-angiogenesis process or associated with deregulated angiogenesis, where these diseases are selected from the group consisting of cancer, myocardial angiogenesis, wound healing, vascular dysfunction in diabetes or vasculopathy, lymphoproliferative and myeloproliferative disorders, where the agonist of the 30 receptor S1 P se administra concomitantemente o en secuencia con un agente quimioterapéutico. The S1 P receptor is administered concomitantly or in sequence with a chemotherapeutic agent. 5. Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el agente quimioterapéutico se selecciona de 5. An S1P receptor agonist for use according to claim 4, wherein the chemotherapeutic agent is selected from i. un inhibidor de aromatasa, i. an aromatase inhibitor, ii. un antiestrógeno, un anti-andrógeno o un agonista de la gonadorelina, ii. an antiestrogen, an anti-androgen or a gonadorelin agonist, 35 iii. un inhibidor de la topoisomerasa I o un inhibidor de la topoisomerasa II, 35 iii. a topoisomerase I inhibitor or a topoisomerase II inhibitor,

iv.iv.

un agente activo del microtúbulo, un agente alquilante, un antimetabolito antineoplásico o un compuesto de platino,  an active microtubule agent, an alkylating agent, an antineoplastic antimetabolite or a platinum compound,

v.v.

un compuesto de direccionamiento/disminución de la actividad de la proteína o lípido quinasa o una actividad de proteína o lípido fosfatasa, otro compuesto anti-angiogénico o un compuesto que induce los procesos de diferenciación celular,  a targeting / decreasing compound of protein or lipid kinase activity or a protein or lipid phosphatase activity, another anti-angiogenic compound or a compound that induces cell differentiation processes,

vi. un receptor de la bradiquinina 1 o un antagonista de la angiotensina II, saw. a bradykinin 1 receptor or an angiotensin II antagonist, vii. un inhibidor de la ciclooxigenasa, un bisfosfonato, un inhibidor de la histona desacetilasa, un inhibidor de la heparanasa, un modificador de la respuesta biológica, un inhibidor de la ubiquitinación, o un inhibidor que bloquea las rutas anti-apoptóticas, vii. a cyclooxygenase inhibitor, a bisphosphonate, a histone deacetylase inhibitor, a heparanase inhibitor, a biological response modifier, a ubiquitination inhibitor, or an inhibitor that blocks anti-apoptotic pathways, viii. un inhibidor de isoformas oncogénicas de Ras, viii an inhibitor of Ras oncogenic isoforms,

ix.ix.

un inhibidor de la telomerasa,  a telomerase inhibitor,

x. x.

un inhibidor de la proteasa, un inhibidor de la metaloproteinasa de la matriz, un inhibidor de la metionina aminopeptidasa, o un inhibidor del proteosoma, y/o a protease inhibitor, a matrix metalloproteinase inhibitor, a methionine aminopeptidase inhibitor, or a proteosome inhibitor, and / or

xi) un inhibidor de mTOR. xi) an mTOR inhibitor.

6. 6.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, para prevenir o tratar tumores de sistema linfático o sanguíneo o cáncer mieloide. An S1P receptor agonist for use according to claim 4 or claim 5, to prevent or treat tumors of the lymphatic or blood system or myeloid cancer.

7. 7.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con la reivindicación 4, en combinación con un agente quimioterapéutico para tratar un cáncer linfático o mieloide, en donde el agente quimioterapéutico se selecciona de busulfan, citarabina, 6-tioguanina, fludarabina, hidroxiurea, procarbazina, bleomicina y metotrexato. An S1P receptor agonist for use according to claim 4, in combination with a chemotherapeutic agent for treating lymphatic or myeloid cancer, wherein the chemotherapeutic agent is selected from busulfan, cytarabine, 6-thioguanine, fludarabine, hydroxyurea, procarbazine, Bleomycin and methotrexate.

8. 8.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con la reivindicación 4, en combinación con un agente quimioterapéutico para tratar un cáncer linfático, en donde el agente quimioterapéutico se selecciona de daunorubicina e imatinib. An S1P receptor agonist for use according to claim 4, in combination with a chemotherapeutic agent for treating lymphatic cancer, wherein the chemotherapeutic agent is selected from daunorubicin and imatinib.

9. 9.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el agonista del receptor S1P se administra de manera intermitente. An S1P receptor agonist for use according to any of the preceding claims, wherein the S1P receptor agonist is administered intermittently.

10. 10.

Un agonista del receptor S1P como se define en la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades mediadas por la inhibición del proceso de neo-angiogénesis, donde dichas enfermedades se seleccionan del grupo que consiste de cáncer, angiogénesis miocardíaca, cicatrización de heridas y disfunción vascular en la diabetes o vasculopatía. An S1P receptor agonist as defined in claim 1, for use in the treatment or prevention of diseases mediated by the inhibition of the neo-angiogenesis process, wherein said diseases are selected from the group consisting of cancer, myocardial angiogenesis, scarring of wounds and vascular dysfunction in diabetes or vasculopathy.

11. eleven.

Un agonista del receptor S1P para utilizar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el agonista del receptor S1P es el 2-amino-2-[4-(benziloxifeniltio)-2- clorofenil]propil-1,3-propano-diol o el 2amino-2-[4-(3-benziloxifenoxi)- 2-clorofenil]propil-1,3-propano-diol, en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable. An S1P receptor agonist for use according to any of the preceding claims, wherein the S1P receptor agonist is 2-amino-2- [4- (benzyloxyphenylthio) -2-chlorophenyl] propyl-1,3-propane- diol or 2-amino-2- [4- (3-benzyloxyphenoxy) -2-chlorophenyl] propyl-1,3-propane diol, in free form or in a pharmaceutically acceptable salt form.