RU2426555C2 - Application of medications, binding edg-receptor, in treatment of cancer disease - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: claimed is application of agonist of receptor of sphingosine-1-phosphate 2 amino-2-[2-(4-octylphenyl)ethyl]propane-1,3-diole (FTY720) in free form, in form of pharmaceutically acceptable salt or FTY720-phosphate for preparation of medication for prevention or treatment of lympho-proliferative or myeloproliferative disturbance, where medication is introduced together with chemical therapeutic medication; application of the same substance for obtaining medication for treatment of solid tumour or inhibition of solid tumour growth, on condition that tumour is not breast tumour, prostate tumour, urinary bladder, kidney of lung tumour; application of the same substance for ontaining medication for treatment of invasiveness of solid tumours or symptoms, associated with such tumour growth, prevention of metastatic spreading of tumours or prevention, inhibition of micrometastasis growth on condition that tumour is not breast tumour, prostate tumour, urinary bladder, kidney of lung tumour.

EFFECT: FTY720-hytdrochloride in combination with inhibitor of VEGF-R-proteinkinase twice reduces increase of tumour mass in comparison with treatment with only one of medications, as well as FTY720 and FTY720-phosphate restrain uncontrolled angiogenesis, and ensure treatment of solid tumours and tumour invasiveness.

11 cl, 7 dwg, 1 ex

Description

Изобретение относится к новому применению агониста рецептора сфингозин-1-фосфата (С1Ф), особенно в лечении рака.The invention relates to a new use of sphingosine-1-phosphate (C1P) receptor agonist, especially in the treatment of cancer.

Агонисты С1Ф-рецептора являются средствами, ускоряющими хоминг лимфоцитов (ХЛ), которые вызывают лимфопению, являющуюся результатом перераспределения, предпочтительно обратимого, лимфоцитов из кровообращения во вторичную лимфатическую ткань, не оказывая при этом генерализованного иммунодепрессивного действия. Секвестируются «необученные» клетки; стимулируется миграция Т-клеток CD4 и CD8 и В-клеток из крови в лимфоузлы (ЛУ) и пейеровы бляшки (ПБ), что приводит, например, к ингибированию инфильтрации клеток в трансплантированные органы.C1F receptor agonists are agents that accelerate the homing of lymphocytes (CL), which cause lymphopenia resulting from the redistribution of, preferably reversible, lymphocytes from the blood circulation to the secondary lymphatic tissue, without causing a generalized immunosuppressive effect. "Untrained" cells are sequestered; migration of CD4 and CD8 T cells and B cells from blood to the lymph nodes (LN) and Peyer's plaques (PB) is stimulated, which leads, for example, to inhibition of cell infiltration into transplanted organs.

Агонисты С1Ф-рецептора являются типичными аналогами сфингозина, такими как 2-замещенные производных 2-аминопропан-1,3-диола или 2-аминопропанола, например, соединение, включающее группу формулы X

C1F receptor agonists are typical sphingosine analogs, such as 2-substituted derivatives of 2-aminopropane-1,3-diol or 2-aminopropanol, for example, a compound comprising a group of formula X

где Z означает Н; C₁-С₆алкил; С₂-С₆алкенил; С₂-С₆алкинил; фенил; фенил, замещенный ОН-группой; C₁-С₆алкил с 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С₃-С₈циклоалкила, фенила и ОН-замещенного фенила; или CH₂-R_4Z, где R_4Z означает ОН, ацилоксигруппу или остаток формулы (а)where Z is H; C ₁ -C ₆ alkyl; C ₂ -C ₆ alkenyl; C ₂ -C ₆ alkynyl; phenyl; phenyl substituted with an OH group; C ₁ -C ₆ alkyl with 1-3 substituents selected from the group consisting of halogen, C ₃ -C ₈ cycloalkyl, phenyl and OH-substituted phenyl; or CH ₂ —R _4Z , where R _4Z is OH, an acyloxy group or a residue of formula (a)

где Z₁ означает простую связь или О, предпочтительно О; каждый из R_5z и R_6z, независимо, означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена;where Z ₁ means a single bond or O, preferably O; each of R _5z and R _6z , independently, is H or C ₁ -C ₄ alkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 halogen atoms;

R_1z означает ОН, ацилоксигруппу или остаток формулы (а); и каждый из R_2Z и R_3Z, независимо, означает Н, С₁-С₄алкил или ацил.R _1z means OH, an acyloxy group or a residue of formula (a); and each of R _2Z and R _3Z , independently, means H, C ₁ -C ₄ alkyl or acyl.

Группа формулы X является функциональной группой, присоединенной в качестве концевой группы к части молекулы, которая может быть гидрофильной или липофильной и включать один или несколько алифатических, алициклических, ароматических и/или гетероциклических остатков; при этом молекула, в которой по крайней мере одна из групп Z или R_1z является, или включает в себя остаток формулы (а), действуя как агонист одного или нескольких рецепторов сфингозин-1-фосфата.A group of formula X is a functional group attached as a terminal group to a part of the molecule, which may be hydrophilic or lipophilic and include one or more aliphatic, alicyclic, aromatic and / or heterocyclic residues; wherein the molecule in which at least one of the Z or R _1z groups is, or includes a residue of formula (a), acting as an agonist of one or more sphingosine-1-phosphate receptors.

Агонисты С1Ф-рецептора являются соединениями, которые сигнализируют как агонисты у одного или нескольких рецепторов сфингозин-1-фосфата, например, с С1Ф1 по С1Ф8. Связывание агониста с С1Ф-рецептором, может, например, привести к диссоциации внутриклеточных гетеротримерных G-белков на Gα-GTP и Gβγ-GTP и/или к повышенному фосфорилированию агонист-связанного рецептора и активации нижерасположенных сигнальных метаболических путей/киназ. Способность к связыванию агонистов рецептора С1Ф можно измерить, как описано в представленном ниже параграфе И.S1P receptor agonists are compounds that signal as agonists at one or more sphingosine-1-phosphate receptors, for example, S1P1 to S1P8. The binding of an agonist to a C1P receptor can, for example, lead to the dissociation of intracellular heterotrimeric G-proteins into Gα-GTP and Gβγ-GTP and / or to increased phosphorylation of the agonist-associated receptor and activation of downstream signaling metabolic pathways / kinases. The ability to bind C1F receptor agonists can be measured as described in paragraph I. below.

Подходящими агонистами С1Ф-рецептора являются, например: Suitable C1P receptor agonists are, for example:

- соединения, описанные в ЕР 627406 AI, например, соединение формулы I- compounds described in EP 627406 AI, for example, a compound of formula I

где R₁ означает прямую или разветвленную (С₁₂-С₂₂) углеродную цепь,where R ₁ means a straight or branched (C ₁₂ -C ₂₂ ) carbon chain,

- которая может иметь в цепи связь или гетероатом, выбранные из двойной связи, тройной связи, О, S, NR₆, где R₆ означает Н, алкил, аралкил, ацил или алкоксикарбонил, и карбонил,- which may have in the chain a bond or a heteroatom selected from a double bond, a triple bond, O, S, NR ₆ , where R ₆ is H, alkyl, aralkyl, acyl or alkoxycarbonyl, and carbonyl,

и/илиand / or

- которая может иметь в качестве заместителя алкоксигруппу, алкенилоксигруппу, алкинилоксигруппу, аралкилоксигруппу, ацил, алкиламиногруппу, алкилтиогруппу, ациламиногруппу, алкоксикарбонил, алкоксикарбониламиногруппу, ацилоксигруппу, алкилкарбамоил, нитрогруппу, галоген, аминогруппу, гидроксииминогруппу, гидроксигруппу или карбоксигруппу; или- which may have as a substituent alkoxy, alkenyloxy, alkynyloxy, aralkyloxy, acyl, alkylamino, alkylthio, acylamino, alkoxycarbonyl, alkoxycarbonylamino, acyloxy, alkylcarbamoyl, nitro, halogen, amino, hydroxyimino, hydroxy or carboxy; or

R₁ означаетR ₁ means

- фенилалкил, в котором алкил означает прямую или разветвленную (С₆-С₂₀) углеродную цепь; или- phenylalkyl, in which alkyl means a straight or branched (C ₆ -C ₂₀ ) carbon chain; or

- фенилалкил, в котором алкил означает прямую или разветвленную (С₁-С₃₀) углеродную цепь, где указанный фенилалкил имеет в качестве заместителей- phenylalkyl, in which alkyl means a straight or branched (C ₁ -C ₃₀ ) carbon chain, wherein said phenylalkyl has as substituents

- прямую или разветвленную (С₆-С₂₀) углеродную цепь, необязательно замещенную галогеном,a straight or branched (C ₆ -C ₂₀ ) carbon chain optionally substituted with halogen,

- прямую или разветвленную (С₆-С₂₀) алкокси цепь, необязательно замещенную галогеном,a straight or branched (C ₆ -C ₂₀ ) alkoxy chain optionally substituted with halogen,

- прямую или разветвленную (С₆-С₂₀) алкенилоксигруппу,a straight or branched (C ₆ -C ₂₀ ) alkenyloxy group,

- фенилалкоксигруппу, галофенилалкоксигруппу, фенилалкоксиалкил, феноксиалкоксигруппу или феноксиалкил,a phenylalkoxy group, a halophenylalkoxy group, a phenylalkoxyalkyl, phenoxyalkoxy group or phenoxyalkyl,

- циклоалкилалкил, замещенный С₆-С₂₀алкилом,cycloalkylalkyl substituted with C ₆ -C ₂₀ alkyl,

- гетероарилалкил, замещенный С₆-С₂₀алкилом,- heteroarylalkyl substituted with C ₆ -C ₂₀ alkyl,

- гетероциклический С₆-С₂₀алкил или- heterocyclic C ₆ -C ₂₀ alkyl or

- гетероциклический алкил, замещенный С₆-С₂₀алкилом, и где- heterocyclic alkyl substituted with C ₆ -C ₂₀ alkyl, and where

алкильная часть может иметьthe alkyl moiety may have

- в углеродной цепи связь или гетероатом, выбранные из двойной связи, тройной связи, О, S, сульфинила, сульфонила, или NR₆, где R₆ соответствует указанному выше, и- in the carbon chain, a bond or heteroatom selected from a double bond, triple bond, O, S, sulfinyl, sulfonyl, or NR ₆ , where R _{6 is} as defined above, and

- в качестве заместителя алкоксигруппу, алкенилоксигруппу, алкинилоксигруппу, аралкилоксигруппу, ацил, алкиламиногруппу, алкилтиогруппу, ациламиногруппу, алкоксикарбонил,- as a substituent, an alkoxy group, alkenyloxy group, alkynyloxy group, aralkyloxy group, acyl, alkylamino group, alkylthio group, acylamino group, alkoxycarbonyl,

алкоксикарбониламиногруппу, ацилоксигруппу, алкилкарбамоил, нитрогруппу, галоген, аминогруппу, гидроксигруппу или карбоксигруппу, и alkoxycarbonylamino group, acyloxy group, alkylcarbamoyl, nitro group, halogen, amino group, hydroxy group or carboxy group, and

каждый из R₂, R₃, R₄ и R₅ независимо означает Н, С₁-С₄алкил или ацил; или фармацевтически приемлемая соль этого соединения;each of R ₂ , R ₃ , R ₄ and R ₅ independently means H, C ₁ -C ₄ alkyl or acyl; or a pharmaceutically acceptable salt of this compound;

- соединения, описанные в ЕР 1002792 А1, например, соединение формулы II- the compounds described in EP 1002792 A1, for example, the compound of formula II

где m означает от 1 до 9 и каждый из R'₂, R'₃. R'₄ и R'₅ независимо означает Н, алкил или ацил, или фармацевтически приемлемую соль этих соединений; where m means from 1 to 9 and each of R ' ₂ , R' ₃ . R ′ ₄ and R ′ ₅ independently mean H, alkyl or acyl, or a pharmaceutically acceptable salt of these compounds;

- соединения, описанные в ЕР 0778263 А1, например, соединение формулы III- the compounds described in EP 0778263 A1, for example, the compound of formula III

где W означает Н; С₁-С₆алкил, С₂-С₆алкенил или С₂-С₆алкинил; незамещенный или ОН-замещенный фенил; R"₄O(CH₂)_n; или С₁-С₆алкил, имеющий от 1 до 3-х заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, С₃-С₈циклоалкила, фенила и фенила, замещенного ОН;where W is H; C ₁ -C ₆ alkyl, C ₂ -C ₆ alkenyl or C ₂ -C ₆ alkynyl; unsubstituted or OH-substituted phenyl; R " ₄ O (CH ₂ ) _n ; or C ₁ -C ₆ alkyl having from 1 to 3 substituents selected from the group consisting of halogen, C ₃ -C ₈ cycloalkyl, phenyl and phenyl substituted with OH;

X означает Н или незамещенный или замещенный алкил с прямой цепью, имеющий число атомов углерода р, или незамещенную или замещенную алкоксигруппу с прямой цепью, имеющую число (р-1) атомов углерода, например, с 1-3 заместителями, выбранными из группы, содержащей C₁-C₆алкил, ОН, С₁-С₆алкоксигруппу, ацилоксигруппу, аминогруппу, C₁-C₆алкиламиногруппу, ациламиногруппу, оксогруппу, галоС₁-С₆алкил, галоген, незамещенный фенил и фенил с 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C₁-С₆алкила, ОН,X is H or unsubstituted or substituted straight chain alkyl having the number of carbon atoms p, or an unsubstituted or substituted straight chain alkoxy group having the number of (p-1) carbon atoms, for example, with 1-3 substituents selected from the group consisting of C ₁ -C ₆ alkyl, OH, C ₁ -C ₆ alkoxy group, acyloxy group, amino group, C ₁ -C ₆ alkylamino group, acylamino group, oxo group, haloC ₁ -C ₆ alkyl, halogen, unsubstituted phenyl and phenyl with 1-3 substituents, selected from the group consisting of C ₁ -C ₆ alkyl, OH,

C₁-C₆алкоксигруппы, ацила, ацилоксигруппы, аминогруппы, C₁-C₆алкиламиногруппы, ациламиногруппы, галоС₁-С₆алкила и галогена; Y означает Н, C₁-C₆алкил, ОН,C ₁ -C ₆ alkoxy groups, acyl, acyloxy groups, amino groups, C ₁ -C ₆ alkylamino groups, acylamino groups, haloC ₁ -C ₆ alkyl and halogen; Y is H, C ₁ -C ₆ alkyl, OH,

С₁-С₆алкоксигруппу, ацил, ацилоксигруппу, аминогруппу, С₁-С₆алкиламиногруппу, ациламиногруппу, галоС₁-С₆алкил или галоген; Z₂ означает простую связь или алкилен с прямой цепью, имеющий число атомов углерода q; каждое из р и q независимо означают целое число от 1 до 20, при условии, что 6≤p+q≤23, m' означает 1, 2 или 3, п означает 2 или 3,C ₁ -C ₆ alkoxy group, acyl, acyloxy group, amino group, C ₁ -C ₆ alkylamino group, acylamino group, haloC ₁ -C ₆ alkyl or halogen; Z ₂ means a single bond or straight chain alkylene having the number of carbon atoms q; each of p and q independently means an integer from 1 to 20, provided that 6≤p + q≤23, m 'means 1, 2 or 3, n means 2 or 3,

каждый из R"₁, R"₂, R"₃ и R"₄ независимо означает Н, C₁-C₄алкил или ацил; или фармацевтически приемлемая соль этих соединений; each of R " ₁ , R" ₂ , R " ₃ and R" ₄ independently means H, C ₁ -C ₄ alkyl or acyl; or a pharmaceutically acceptable salt of these compounds;

- соединения, описанные в WO 02/18395, например, соединения формулы IVa или IVб- compounds described in WO 02/18395, for example, compounds of formula IVa or IVb

где Х_а означает О, S, NR_1s или группу -(СН₂)_nа-,которая является незамещенной или имеет в качестве заместителей от 1 до 4 атомов галогена; n_а означает 1 или 2, R_1s означает H или (С₁-С₄)алкил, незамещенный или замещенный галогеном; R_1a означает Н, ОН, (С₁-С₄)алкил или O(С₁-С₄)алкил, где алкил является незамещенным или имеет в качестве заместителей от 1 до 3 атомов галогена; R_1b означает Н, ОН илиwhere X _a means O, S, NR _1s or a group - (CH ₂ ) _na -, which is unsubstituted or has as substituents from 1 to 4 halogen atoms; n _a is 1 or 2, R _1s is H or (C ₁ -C ₄ ) alkyl unsubstituted or substituted with halogen; R _1a means H, OH, (C ₁ -C ₄ ) alkyl or O (C ₁ -C ₄ ) alkyl, where the alkyl is unsubstituted or has 1 to 3 halogen atoms as substituents; R _1b means H, OH or

(С₁-С₄)алкил, который является незамещенным или замещен галогеном; каждый из R_2a, независимо, выбран из Н или (С₁-С₄)алкила, незамещенного или замещенного галогеном; R_3a означает Н, ОН, галоген или O(С₁-С₄)алкил, где алкил является незамещенным или замещенным галогеном; и R_3b означает Н, ОН, галоген,(C ₁ -C ₄ ) alkyl, which is unsubstituted or substituted by halogen; each of R _2a is independently selected from H or (C ₁ -C ₄ ) alkyl unsubstituted or substituted with halogen; R _3a means H, OH, halogen or O (C ₁ -C ₄ ) alkyl, where alkyl is unsubstituted or substituted by halogen; and R _3b means H, OH, halogen,

(С₁-С₄)алкил, где алкил является незамещенным или замещенным гидроксигруппой, или O(С₁-С₄)алкил, где алкил является незамещенным или замещен галогеном; Y_a означает -СН₂-, -С(О)-, -СН(ОН)-, -C(=NOH)-, О или S, и R_4a означает (С₄-С₁₄)алкил или (С₄-С₁₄)алкенил; или фармацевтически приемлемые соли этих соединений;(C ₁ -C ₄ ) alkyl, where alkyl is unsubstituted or substituted with hydroxy, or O (C ₁ -C ₄ ) alkyl, where alkyl is unsubstituted or substituted with halogen; Y _a is —CH ₂ -, —C (O) -, —CH (OH) -, —C (= NOH) -, O or S, and R _4a is (C ₄ -C ₁₄ ) alkyl or (C ₄ -C ₁₄ ) alkenyl; or pharmaceutically acceptable salts of these compounds;

- соединения, описанные в WO 02/076995, например, соединение формулы V- compounds described in WO 02/076995, for example, a compound of formula V

где m_с означает 1, 2 или 3; Х_с означает О или прямую связь; R_1c означает Н; С₁-С₆алкил, необязательно замещенный ОН, ацилом, галогеном, С₃-С₁₀циклоалкилом, фенилом или гидроксифениленом; С₂-С₆алкенил; С₂-С₆алкинил; или фенил, необязательно замещенный ОН; R_2C означаетwhere m _with means 1, 2 or 3; X _c is O or a direct bond; R _1c is H; C ₁ -C ₆ alkyl optionally substituted with OH, acyl, halogen, C ₃ -C ₁₀ cycloalkyl, phenyl or hydroxyphenylene; C ₂ -C ₆ alkenyl; C ₂ -C ₆ alkynyl; or phenyl optionally substituted with OH; R _2C means

где R_5C означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена, и R_6C означает Н или С₁-С₄алкил, необязательно замещенный галогеном;where R _5C is H or C ₁ -C ₄ alkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 halogen atoms, and R _6C is H or C ₁ -C ₄ alkyl optionally substituted with halogen;

каждый из R_3C и R_4C независимо означает Н, С₁-С₄алкил, необязательно замещенный галогеном, или ацил, и R_c означает С₁₃-С₂₀алкил, который может необязательно иметь в цепи атом кислорода и который может необязательно быть замещенным нитрогруппой, галогеном, аминогруппой, гидроксигруппой или карбоксигруппой; или остаток формулы (а)each of R _3C and R _4C independently means H, C ₁ -C ₄ alkyl optionally substituted with halogen, or acyl, and R _c means C ₁₃ -C ₂₀ alkyl, which may optionally have an oxygen atom in the chain and which may optionally be substituted a nitro group, a halogen, an amino group, a hydroxy group or a carboxy group; or the remainder of the formula (a)

где R_7C означает Н, С₁-С₄алкил или С₁-С₄алкоксигруппу, и R_8c означает замещенный С₁-С₂₀алканоил, фенилС₁-С₁₄алкил, где C₁-C₁₄алкил необязательно замещен галогеном или ОН, циклоалкилС₁-С₁₄алкоксигруппу или фенилС_1-14алкоксигруппу, где циклоалкильное или фенильное кольцо необязательно замещено галогеном, С₁-С₄алкилом и/или С₁-С₄алкоксигруппой, фенил-C₁-C₁₄алкоксиС₁-С₁₄алкил, феноксиС₁-С₁₄алкоксигруппу или фенокси С₁-С₄алкил, R_c также означает остаток формулы (а), где R_8c означает С₁-С₁₄алкоксигруппу, когда R_1c означает С₁-С₄алкил, С₂-С₆алкенил или С₂-С₆алкинил;where R _7C is H, C ₁ -C ₄ alkyl or a C ₁ -C ₄ alkoxy group, and R _8c is a substituted C ₁ -C ₂₀ alkanoyl, phenylC ₁ -C ₁₄ alkyl, where C ₁ -C ₁₄ alkyl is optionally substituted with halogen or OH, cycloalkylC ₁ -C ₁₄ alkoxy group or phenylC _1-14 alkoxy group, where the cycloalkyl or phenyl ring is optionally substituted with halogen, C ₁ -C ₄ alkyl and / or C ₁ -C ₄ alkoxy group, phenyl-C ₁ -C ₁₄ alkoxyC ₁ - C ₁₄ alkyl, phenoxyC ₁ -C ₁₄ alkoxy or phenoxy C ₁ -C ₄ alkyl, R _c also means the residue of formula (a), where R _8c means C ₁ -C ₁₄ alkoxy when R _1c means C ₁ -C ₄ alkyl , C ₂ -C ₆ alkenyl or C ₂ -C ₆ alkynyl;

или соединение формулы VIor a compound of formula VI

где n_х означает 2, 3 или 4; R_1x означает Н; С₁-С₆алкил, необязательно замещенный ОН, ацилом, галогеном, циклоалкилом, фенилом или гидроксифениленом; С₂-С₆алкенил; С₂-С₆алкинил; или фенил, необязательно замещенный ОН; R_2X означает Н; С₁-С₄алкил или ацил, каждый из R_3х и R_4X, независимо означает Н, С₁-С₄алкил, необязательно замещенный галогеном или ацилом, R_5X означает Н, С₁-С₄алкил или С₁-С₄алкоксигруппу, и R_6X означает С₁-С₂₀алканоил, замещенный циклоалкилом;where n _x means 2, 3 or 4; R _1x means H; C ₁ -C ₆ alkyl optionally substituted with OH, acyl, halogen, cycloalkyl, phenyl or hydroxyphenylene; C ₂ -C ₆ alkenyl; C ₂ -C ₆ alkynyl; or phenyl optionally substituted with OH; R _2X is H; C ₁ -C ₄ alkyl or acyl, each of R _3x and R _4X , independently means H, C ₁ -C ₄ alkyl optionally substituted with halogen or acyl, R _5X means H, C ₁ -C ₄ alkyl or C ₁ -C ₄ alkoxy, and R _6X is C ₁ -C ₂₀ alkanoyl substituted with cycloalkyl;

циклоалкилС₁-С₁₄алкоксигруппу, где циклоалкильное кольцо необязательно замещено галогеном, С₁-С₄алкилом и/или С₁-С₄алкоксигруппой; фенилС₁-С₁₄алкоксигруппу, где фенильное кольцо необязательно замещено галогеном, С₁-С₄алкилом и/или С₁-С₄алкоксигруппой, R_6Х также означает С₄-С₁₄алкоксигруппу, когда R_1x означает C₂-С₄алкил, замещенный ОН, или пентилоксигруппу или гексилоксигруппу, когда R_1x означает С₁-С₄алкил, при условии, что R_6X не означает фенилбутиленоксигруппу, когда или R_5x означает Н, или R_1x означает метил; или фармацевтически приемлемая соль этих соединений;cycloalkylC ₁ -C ₁₄ alkoxy group, where the cycloalkyl ring is optionally substituted with halogen, C ₁ -C ₄ alkyl and / or C ₁ -C ₄ alkoxy group; phenylC ₁ -C ₁₄ alkoxy group, where the phenyl ring is optionally substituted with halogen, C ₁ -C ₄ alkyl and / or C ₁ -C ₄ alkoxy group, R _6X also means C ₄ -C ₁₄ alkoxy group, when R _1x means C ₂ -C ₄ alkyl substituted with OH, or a pentyloxy group or hexyloxy when R _1x is C ₁ -C ₄ alkyl, provided that R _6X does not mean phenylbutyleneoxy when either R _5x is H or R _1x is methyl; or a pharmaceutically acceptable salt of these compounds;

- соединения, описанные в WO 02/06268 AI, например, соединение формулы VII- the compounds described in WO 02/06268 AI, for example, the compound of formula VII

где каждый из R_1d и R_2d независимо означает Н или амино-защитную группу; R_3d означает водород или гидрокси-защитную группу; R_4d означает низший алкил; n_d означает целое число от 1 до 6; X_d означает этилен, винилен, этинилен, группу, имеющую формулу -D-CH₂- (где D означает карбонил, -СН(ОН)-, О, S или N), арил или арил, содержащий до трех заместителей, выбранных из группы а, указанной ниже; Y_d означает простую связь, С₁-С₁₀алкилен, С₁-С₁₀алкилен, содержащий до трех заместителей, выбранных из групп а и б, С₁-С₁₀алкилен, содержащий атомы О и S в середине или в конце углеродной цепи, или С₁-С₁₀алкилен, содержащий атомы О и S в середине или в конце углеродной цепи, которая содержит до трех заместителей, выбранных из групп а и б; R_5d означает водород, циклоалкил, арил, гетероцикл, циклоалкил, имеющий до трех заместителей, выбранных из групп а и б, арил, содержащий до трех заместителей, выбранных из групп а и б, или гетероцикл, содержащий до трех заместителей, выбранных из групп а и б; и каждый из R_6d и R_7d независимо означает Н или заместитель, выбранный из группы а;where each of R _1d and R _2d independently means H or an amino protective group; R _3d is hydrogen or a hydroxy protecting group; R _4d means lower alkyl; n _d is an integer from 1 to 6; X _d is ethylene, vinylene, ethynylene, a group having the formula —D — CH ₂ - (where D is carbonyl, —CH (OH) -, O, S or N), aryl or aryl containing up to three substituents selected from group a, indicated below; Y _d means a single bond, C ₁ -C ₁₀ alkylene, C ₁ -C ₁₀ alkylene containing up to three substituents selected from groups a and b, C ₁ -C ₁₀ alkylene containing O and S atoms in the middle or end of the carbon chain, or C ₁ -C ₁₀ alkylene containing O and S atoms in the middle or at the end of the carbon chain, which contains up to three substituents selected from groups a and b; R _5d means hydrogen, cycloalkyl, aryl, heterocycle, cycloalkyl having up to three substituents selected from groups a and b, aryl containing up to three substituents selected from groups a and b, or a heterocycle containing up to three substituents selected from groups a and b; and each of R _6d and R _7d independently means H or a substituent selected from group a;

<группа а> означает галоген, низший алкил, галогенсодержащий низший алкил, низшую алкоксигруппу, низшую алкилтиогруппу, карбоксил, низший алкоксикарбонил, гидроксигруппу, низший алифатический ацил, аминогруппу, низшую моноалкиламиногруппу, низшую диалкиламиногруппу, низшую алифатическую ациламиногруппу, цианогруппу или нитрогруппу;<group a> means halogen, lower alkyl, halogen-containing lower alkyl, lower alkoxy group, lower alkylthio group, carboxyl, lower alkoxycarbonyl, hydroxy group, lower aliphatic acyl, amino group, lower monoalkylamino group, lower dialkylamino group, lower dialkylamino group, lower dialkylamino group, lower alkyl group

<группа б> означает циклоалкил, арил, гетероцикл, каждый из которых необязательно имеет до трех заместителей, выбранных из группы а; при условии что, когда R_5d означает водород, Y_d означает либо простую связь, либо линейный С₁-С₁₀алкилен; или фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры этих соединений;<group b> means cycloalkyl, aryl, heterocycle, each of which optionally has up to three substituents selected from group a; with the proviso that when R _5d is hydrogen, Y _d is either a single bond or a linear C ₁ -C ₁₀ alkylene; or pharmaceutically acceptable salts or esters of these compounds;

- соединения, описанные в JP 14316985 (JP 2002316985), например, соединение формулы VIII- the compounds described in JP 14316985 (JP 2002316985), for example, the compound of formula VIII

где R_1e, R_2e, R_3e, R_4e, R_5e, R_6е, R_7е, n_e, Х_е и Y_e описаны в JP 14316985; или фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры этих соединений. Соединения, описанные в WO 03/29184 и WO 03/29205, например, соединения формулы IXwhere R _1e , R _2e , R _3e , R _4e , R _5e , R _6e , R _7e , n _e , X _e and Y _{e are} described in JP 14316985; or pharmaceutically acceptable salts or esters of these compounds. Compounds described in WO 03/29184 and WO 03/29205, for example, compounds of formula IX

где X_f означает О или S; R_1f, R_2f, R_3f и n_f, как описано в WO 03/29184 и 03/29205, например, 2-амино-2-[4-(3-бензилоксифенокси)-2-хлорфенил]пропил-1,3-пропандиол или 2-амино-2-[4-(бензилоксифенилтио)-2-хлорфенил]пропил-1,3-пропандиол.where X _f means O or S; R _1f , R _2f , R _3f and n _f as described in WO 03/29184 and 03/29205, for example, 2-amino-2- [4- (3-benzyloxyphenoxy) -2-chlorophenyl] propyl-1,3 propanediol or 2-amino-2- [4- (benzyloxyphenylthio) -2-chlorophenyl] propyl-1,3-propanediol.

В каждом случае, где приводятся цитаты из заявок на получение патента, они включаются в настоящее изобретение в виде ссылок.In each case, where quotes from patent applications are provided, they are incorporated into the present invention by reference.

Ацил может быть остатком R_y-CO-, где R_y означает С_1-С₆алкил, С₃-С₆циклоалкил, фенил или фенил-С₁-С₄алкил. Если не оговорено иначе, алкил, алкоксигруппа, алкенил или алкинил могут быть прямыми или разветвленными.Acyl may be a residue R _y -CO-, wherein R _y is C _1- C ₆ alkyl, C ₃ -C ₆ cycloalkyl, phenyl or phenyl-C ₁ -C ₄ alkyl. Unless otherwise specified, alkyl, alkoxy, alkenyl or alkynyl may be straight or branched.

Когда в соединениях формулы I углеродная цепь, такая как R₁, замещена, предпочтительными заместителями являются галоген, нитрогруппа, аминогруппа, гидроксигруппа или карбоксигруппа. В случае, когда углеродную цепь прерывает фенилен, у которого необязательно имеются заместители, углеродная цепь, предпочтительно является незамещенной. Когда фениленовая часть является замещенной, она предпочтительно замещена галогеном, нитрогруппой, аминогруппой, метоксигруппой, гидроксигруппой или карбоксигруппой.When a carbon chain, such as R ₁ , is substituted in the compounds of formula I, halogen, a nitro group, an amino group, a hydroxy group or a carboxy group are preferred substituents. In the case where the carbon chain is interrupted by phenylene, which optionally has substituents, the carbon chain is preferably unsubstituted. When the phenylene moiety is substituted, it is preferably substituted with halogen, nitro, amino, methoxy, hydroxy or carboxy.

Предпочтительными соединениями формулы I являются такие соединения, у которых R₁ означает С₁₃-С₂₀ алкил, необязательно замещенный нитрогруппой, галогеном, аминогруппой, гидроксигруппой или карбоксигруппой. Более предпочтительными являются соединения, у которых R₁ означает фенилалкил, замещенный С₆-С₁₄алкильной цепью, необязательно замещенной галогеном, и алкильная часть означает С₁-С₆алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой. Более предпочтительно, когда R₁ означает фенил-С₁-С₆алкил, замещенный по фенилу прямой или разветвленной, предпочтительно прямой, С₆-С₁₄алкильной цепью. С₆-С₁₄алкильная цепь может быть в орто-, мета- или пара-, предпочтительно в пара-положении.Preferred compounds of formula I are those wherein R ₁ is C ₁₃ -C ₂₀ alkyl optionally substituted with a nitro group, halogen, amino group, hydroxy group or carboxy group. More preferred are compounds in which R ₁ is phenylalkyl substituted with a C ₆ -C ₁₄ alkyl chain optionally substituted with halogen, and the alkyl moiety is C ₁ -C ₆ alkyl optionally substituted with a hydroxy group. More preferably, when R ₁ is phenyl-C ₁ -C ₆ alkyl substituted on phenyl with a straight or branched, preferably straight, C ₆ -C ₁₄ alkyl chain. The C ₆ -C ₁₄ alkyl chain may be in ortho, meta or para, preferably in the para position.

Предпочтительно, когда каждый от R₂ до R₅ означает Н.Preferably, when each from R ₂ to R ₅ means N.

Предпочтительным соединением формулы I является 2-амино-2-тетрадецил-1,3-пропандиол. Особенно предпочтительным агонистом С1Ф-рецептора формулы I является соединение FTY720, т.е. 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диол в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли (далее упоминаемое как «соединение А»), например, в форме гидрохлоридаA preferred compound of formula I is 2-amino-2-tetradecyl-1,3-propanediol. A particularly preferred C1F receptor agonist of formula I is FTY720, i.e. 2-amino-2- [2- (4-octylphenyl) ethyl] propane-1,3-diol in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt (hereinafter referred to as “compound A”), for example, in the form of a hydrochloride

Предпочтительным соединением формулы II является такое соединение, где каждый от R'₂ до R'₅ означает Н и m означает 4, т.е. 2-амино-2-{2-[4-(1-оксо-5-фенилпентил)фенил]этил}пропан-1,3-диол, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли (далее упоминаемое как «соединение Б»), например, в форме гидрохлорида.A preferred compound of formula II is a compound wherein each of R ₂ to R ₅ is H and m is 4, i.e. 2-amino-2- {2- [4- (1-oxo-5-phenylpentyl) phenyl] ethyl} propane-1,3-diol, in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt (hereinafter referred to as “compound B” ), for example, in the form of a hydrochloride.

Предпочтительным соединением формулы III является соединение, где W означает СН₃; каждый от R"₁ до R"₃ означает Н; Z₂ означает этилен; X означает гептилоксигруппу и Y означает Н; т.е. 2-амино-4-(4-гептилоксифенил)2-метилбутанол. Данное соединение может быть в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли (далее упоминаемое как «соединение В»), например, в форме гидрохлорида. Особенно предпочтителен R-энантиомер.A preferred compound of formula III is a compound wherein W is CH ₃ ; each from R " ₁ to R" ₃ means H; Z ₂ means ethylene; X is heptyloxy and Y is H; those. 2-amino-4- (4-heptyloxyphenyl) 2-methylbutanol. This compound may be in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt (hereinafter referred to as “compound B”), for example, in the form of a hydrochloride. The R enantiomer is particularly preferred.

Предпочтительным соединением формулы IVa является соединение FТY720-фосфат (R_2a означает Н, R_3a означает ОН, Х_а означает О, R_1a и R_1b означают ОН). Предпочтительным соединением формулы IVб является соединение В-фосфат (R_2a означает Н, R_3a означает ОН, Х_а означает О, R_1a и R_1b означают ОН, Y_a означает О, R_4a означает гептил). Предпочтительным соединением формулы V является соединение Б-фосфат.A preferred compound of formula IVa is FTY720-phosphate (R _2a is H, R _3a is OH, X _a is O, R _1a and R _{1b is} OH). A preferred compound of formula IVb is B-phosphate (R _2a is H, R _3a is OH, X _a is O, R _1a and R _{1b is} OH, Y _a is O, R _4a is heptyl). A preferred compound of formula V is compound B-phosphate.

Предпочтительным соединением формулы V является сложный эфир фосфорной кислоты и моно[(R)-2-амино-2-метил-4-(4-пентилоксифенил)бутила].A preferred compound of formula V is an ester of phosphoric acid and mono [(R) -2-amino-2-methyl-4- (4-pentyloxyphenyl) butyl].

Предпочтительным соединением формулы VIII является (2R)-2-амино-4-[3-(4-циклогексилоксибутил)бензо[b]тиен-6-ил]-2-метилбутан-1-ол.A preferred compound of formula VIII is (2R) -2-amino-4- [3- (4-cyclohexyloxybutyl) benzo [b] thien-6-yl] -2-methylbutan-1-ol.

В тех случаях, когда соединения формул с I по IX имеют в молекуле один или несколько асимметричных центров, предметом настоящего изобретения также являются различные оптические изомеры, рацематы, диастереоизомеры и их смеси. Соединения формул III или IVб в тех случаях, когда углеродный атом, несущий аминогруппу, является асимметричным, предпочтительно имеют R-конфигурацию по этому углеродному атому.In those cases where the compounds of formulas I to IX have one or more asymmetric centers in the molecule, the subject of the present invention are also various optical isomers, racemates, diastereoisomers and mixtures thereof. The compounds of formulas III or IVb in those cases when the carbon atom bearing an amino group is asymmetric, preferably have an R configuration at this carbon atom.

В качестве примеров фармацевтически приемлемых солей соединений формул от I до IX можно привести их соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид и сульфат; соли органических кислот, такие как ацетат, фумарат, малеат, бензоат, цитрат, малат, метансульфонат, бензолсульфонат; или, в ряде случаев, соли, содержащие такие металлы, как, например, натрий, калий, кальций и алюминий; соли аминов, например, триэтиламин; а также соли двухосновных аминокислот, таких как лизин. В способах настоящего изобретения включены гидратные и сольватные формы соединений и солей.Examples of pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formulas I to IX include their inorganic acid salts, such as hydrochloride, hydrobromide and sulfate; organic acid salts such as acetate, fumarate, maleate, benzoate, citrate, malate, methanesulfonate, benzenesulfonate; or, in some cases, salts containing metals such as, for example, sodium, potassium, calcium and aluminum; amine salts, for example triethylamine; and salts of dibasic amino acids such as lysine. In the methods of the present invention, hydrated and solvated forms of the compounds and salts are included.

Установлено, что агонисты С1Ф-рецептора, благодаря обнаруженной активности, например, хоминга лимфоцитов, например, как описано в ЕР 627406 А1 или US 6004565, эффективны, например, в качестве иммунодепрессантов, например, в лечении острого отторжения аллотрансплантата. В настоящее время известно, что агонисты С1Ф-рецептора имеют ценные свойства, благодаря которым они могут использоваться в химиотерапии рака, особенно солидных опухолей, особенно, прогрессирующих солидных опухолей. Тем не менее, все еще существует необходимость расширения арсенала средств лечения солидных форм рака, особенно в тех случаях, когда лечение противораковыми соединениями не приводит к регрессии или стабилизации заболевания.It has been found that C1F receptor agonists, due to the detected activity, for example, homing of lymphocytes, for example, as described in EP 627406 A1 or US 6004565, are effective, for example, as immunosuppressants, for example, in the treatment of acute allograft rejection. At present, it is known that C1P receptor agonists have valuable properties due to which they can be used in chemotherapy of cancer, especially solid tumors, especially progressive solid tumors. However, there is still a need to expand the arsenal of treatments for solid forms of cancer, especially when treatment with anti-cancer compounds does not lead to regression or stabilization of the disease.

На основе полученных результатов в настоящем изобретении представлены:Based on the results obtained, the present invention provides:

1.1. Способ лечения солидных опухолей у субъекта, нуждающегося в таком лечении, который заключается во введении упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, содержащего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.1. A method for treating solid tumors in a subject in need of such treatment, which comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist containing a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1.2. Способ подавления роста солидных опухолей у субъекта, нуждающегося в таком лечении, который включает введение упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, содержащего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.2. A method of inhibiting the growth of solid tumors in a subject in need of such treatment, which comprises administering to the subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist containing a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1.3. Способ индукции регрессии опухоли, например редукции опухолевого образования, у субъекта, нуждающегося в таком способе; способ включает введение упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.3. A method for inducing tumor regression, for example, reducing a tumor formation, in a subject in need of such a method; the method comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1.4. Способ лечения инвазивности солидной опухоли или симптомов, связанных с таким опухолевым ростом, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, который включает введение упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.4. A method for treating invasiveness of a solid tumor or symptoms associated with such tumor growth in a subject in need of such treatment, which comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1.5. Способ предотвращения метастазирования опухолей, или предотвращения, или ингибирования роста микрометастаз применительно к субъекту, нуждающемуся в таком способе; способ заключается во введении упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.5. A method of preventing tumor metastasis, or preventing or inhibiting the growth of micrometastases in relation to a subject in need of such a method; the method comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1.6. Способ ингибирования или регулирования неконтролируемого ангиогенеза, например, ангиогенеза, опосредованного сфингозин-1-фосфатом (С1Ф), применительно к субъекту, нуждающемуся в таком способе; способ заключается во введении упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.6. A method of inhibiting or regulating uncontrolled angiogenesis, for example, angiogenesis mediated by sphingosine-1-phosphate (C1P), as applied to a subject in need of such a method; the method comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

1.7. Способ предупреждения или лечения заболеваний, связанных с процессом неоангиогенеза или с неконтролируемым ангиогенезом, применительно к субъекту, который нуждается в этом; способ заключается во введении упомянутому субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли.1.7. A method for preventing or treating diseases associated with the process of neoangiogenesis or with uncontrolled angiogenesis, in relation to a subject who needs it; the method comprises administering to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Под понятием «солидные опухоли» подразумеваются опухоли и/или метастазы (любой локализации), не относящиеся к лимфатическому раку, например, опухоли мозга и другие опухоли центральной нервной системы (например, опухоли оболочек мозга, спинного мозга, краниальных нервов и других частей центральной нервной системы, например, глиобластома или бластома костного мозга); рак головы и/или шеи; опухоли молочной железы; опухоли кровеносной системы (например, опухоли сердца, средостения и плевры, и других внутригрудных органов, опухоли сосудов и опухоли ткани, ассоциированной с сосудами); опухоли выделительной системы (например, опухоли почки, почечной лоханки, мочеточника, мочевого пузыря, а также опухоли другой и неопределенной локализации органов мочевой системы); опухоли желудочно-кишечного тракта (например, опухоли пищевода, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, сигмовидной кишки, прямой кишки, ануса и анального канала), опухоли, затрагивающие печень и внутрипеченочные желчные протоки, желчный пузырь, опухоли другой и неопределенной локализации отделов желчного тракта, опухоли поджелудочной железы, и другие опухоли пищеварительной системы); опухоли, затрагивающие ротовую полость (губу, язык, десну, дно полости рта, небо и другие части рта, околоушную железу, и другие части слюнных желез, миндалины, ротоглотку, носоглотку, грушевидный карман, гортаноглотку и другие участки губы, ротовой полости и глотки); опухоли репродуктивной системы (например, вульвы, влагалища, шейки матки, тела матки, матки, яичника и других частей, связанных с женскими половыми органами, плаценты, пениса, предстательной железы, яичка и других частей, связанных с мужскими половыми органами); опухоли дыхательного тракта (например, носовой полости и среднего уха, околоносовых пазух, гортани, трахеи, бронха и легкого, например, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого); опухоли костной системы (например, кости и суставного хряща конечностей, костного суставного хряща и других частей); опухоли кожи (например, злокачественная меланома кожи, немеланомный рак кожи, базалиома кожи, плоскоклеточная карцинома кожи, мезотелиома, саркома Капоши); и опухоли, вовлекающие другие ткани, включая периферические нервы и вегетативную нервную систему, соединительную и мягкую ткань, забрюшинное пространство и брюшину, глаз и придатки, щитовидную железу, надпочечник и другие эндокринные железы и родственные структуры, вторичная и неопределенная злокачественная неоплазма лимфатических узлов, вторичная злокачественная неоплазма респираторной и пищеварительной систем и вторичная злокачественная неоплазма другой локализации.The term “solid tumors” means tumors and / or metastases (of any location) that are not related to lymphatic cancer, for example, brain tumors and other tumors of the central nervous system (for example, tumors of the membranes of the brain, spinal cord, cranial nerves and other parts of the central nervous system systems, for example, glioblastoma or bone marrow blastoma); cancer of the head and / or neck; breast tumors; tumors of the circulatory system (for example, tumors of the heart, mediastinum and pleura, and other intrathoracic organs, vascular tumors, and tumors of tissue associated with blood vessels); tumors of the excretory system (for example, tumors of the kidney, renal pelvis, ureter, bladder, as well as tumors of another and undefined localization of the organs of the urinary system); tumors of the gastrointestinal tract (for example, tumors of the esophagus, stomach, small intestine, colon, sigmoid colon, rectum, anus and anal canal), tumors affecting the liver and intrahepatic bile ducts, gall bladder, tumors of other and undefined localization of the bile a tract, pancreatic tumors, and other tumors of the digestive system); tumors affecting the oral cavity (lip, tongue, gum, bottom of the oral cavity, palate and other parts of the mouth, parotid gland, and other parts of the salivary glands, tonsils, oropharynx, nasopharynx, pear-shaped pocket, larynx and other parts of the lip, oral cavity and pharynx ); tumors of the reproductive system (for example, the vulva, vagina, cervix, uterus, uterus, ovary and other parts associated with the female genital organs, placenta, penis, prostate gland, testicle and other parts associated with the male genital organs); tumors of the respiratory tract (for example, nasal cavity and middle ear, paranasal sinuses, larynx, trachea, bronchus and lung, for example small cell lung cancer and non-small cell lung cancer); tumors of the skeletal system (e.g., bone and articular cartilage of limbs, bone articular cartilage and other parts); skin tumors (e.g., malignant melanoma of the skin, non-melanoma skin cancer, basal cell carcinoma, squamous cell carcinoma of the skin, mesothelioma, Kaposi’s sarcoma); and tumors involving other tissues, including peripheral nerves and the autonomic nervous system, connective and soft tissue, retroperitoneal space and peritoneum, eye and appendages, thyroid gland, adrenal gland and other endocrine glands and related structures, secondary and undefined malignant lymph node neoplasm, secondary malignant neoplasm of the respiratory and digestive systems and secondary malignant neoplasm of a different location.

В описании настоящего изобретения при упоминании опухоли, опухолевого заболевания, карциномы или рака также подразумевается, как альтернатива или как дополнение, метастазирование в пораженном органе или ткани независимо от локализации опухоли и/или метастаза.In the description of the present invention, when referring to a tumor, tumor disease, carcinoma or cancer, it is also meant, as an alternative or as an addition, metastasis in the affected organ or tissue regardless of the location of the tumor and / or metastasis.

В том случае, когда агонистом С1Ф-рецептора является соединение формулы I, например, соединение А или соединения формул IVa или IVб, в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения в нем используют способы 1.1, 1.2, 1.3 или 1.4 для лечения солидной опухоли, не являющейся опухолью молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почки и легкого.In the case where the C1P receptor agonist is a compound of formula I, for example, compound A or compounds of formulas IVa or IVb, in one embodiment of the present invention, methods 1.1, 1.2, 1.3 or 1.4 are used to treat a solid tumor other than a tumor in the breast, prostate, bladder, kidney, and lung.

В сериях дальнейших специфических или альтернативных вариантов осуществления настоящего изобретения в нем также представлены:In a series of further specific or alternative embodiments of the present invention, it also provides:

1.8. Способ повышения активности химиотерапевтического средства или преодоления устойчивости к химиотерапевтическому средству, который применяется к субъекту, нуждающемуся в нем, и заключается во введении указанному субъекту терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, например, агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли параллельно или последовательно с упомянутым химиотерапевтическим средством.1.8. A method of increasing the activity of a chemotherapeutic agent or overcoming resistance to a chemotherapeutic agent that is applied to a subject in need thereof is to administer to said subject a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically an acceptable salt in parallel or sequentially with said chemotherapeutic agent.

1.9. Способ по п.1.8, в котором химиотерапевтическое средство является ингибитором метаболических путей сигнальной трансдукции, направленных либо против клеток хозяина, либо против процессов, вовлеченных в формирование опухоли и/или процесс метастазирования, либо используемых опухолевыми клетками для пролиферации, выживания, дифференциации или развития лекарственной устойчивости.1.9. The method of claim 1.8, wherein the chemotherapeutic agent is an inhibitor of metabolic pathways of signal transduction directed either against the host cells, or against processes involved in tumor formation and / or metastasis, or used by tumor cells to proliferate, survive, differentiate or develop a drug sustainability.

1.10. Способ, соответствующий способу, указанному выше, в котором агонист С1Ф-рецептора вводят с интервалами.1.10. A method corresponding to the method described above, wherein the C1P receptor agonist is administered at intervals.

В дальнейших сериях специфических или альтернативных вариантов осуществления настоящего изобретения в нем также представлены:In further series of specific or alternative embodiments of the present invention, it also provides:

2.1. Агонист С1Ф-рецептора, включающий группу формулы X, или его фармацевтически приемлемая соль, для использования в одном из способов, указанных выше под п.п.1.1-1.4, предпочтительно для солидной опухоли, за исключением опухолей молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почки или легкого, когда агонист С1Ф-рецептора является соединением формулы I, например, соединением А, или соединением формулы IVa или IVб.2.1. C1F receptor agonist, including a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in one of the methods described above in 1.1-1.4, preferably for a solid tumor, with the exception of tumors of the breast, prostate, bladder , kidney or lung, when the C1P receptor agonist is a compound of formula I, for example, compound A, or a compound of formula IVa or IVb.

2.2. Агонист С1Ф-рецептора, например, агонист С1Ф-рецептора, включающий группу формулы X, или его фармацевтически приемлемая соль, для применения по одному из способов, указанных выше под п.п.1.5-1.10, или ниже под п.7.2.2. A C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist, including a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in one of the methods described above under items 1.5-1.10, or below under item 7.

3.1. Агонист С1Ф-рецептора, содержащий группу формулы X, или его фармацевтически приемлемая соль для использования в приготовлении фармацевтической композиции для применения в одном из способов, указанных выше под п.п.1.1-1.4; использование композиции предпочтительно предназначено в случае солидной опухоли, но не опухоли молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почки или легкого, когда агонист С1Ф-рецептора является соединением формулы I, например, соединением А, или соединением формулы IVa или IVб.3.1. A C1P receptor agonist containing a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in the preparation of a pharmaceutical composition for use in one of the methods above under 1.1-1.4; the use of the composition is preferably intended in the case of a solid tumor, but not a tumor of the breast, prostate, bladder, kidney or lung, when the C1F receptor agonist is a compound of formula I, for example, compound A, or a compound of formula IVa or IVb.

3.2. Агонист С1Ф-рецептора, например, агонист С1Ф-рецептора, содержащий группу формулы X, или его фармацевтически приемлемая соль, для использования в приготовлении фармацевтической композиции для применения в одном из способов, указанных выше под п.п.1.5 - 1.10, или ниже под п.7.3.2. C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist containing a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in the preparation of a pharmaceutical composition for use in one of the methods above under 1.5 to 1.10 or below under item 7.

4.1. Фармацевтическая композиция для использования в одном из способов, указанных выше под п.п.1.1-1.4, содержащая агонист С1Ф-рецептора, включающий группу формулы X, или его фармацевтически приемлемую соль вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми растворителями или носителями; предпочтительно композиция предназначена для солидной опухоли, но не опухоли молочной железы, предстательной железы, мочевого пузыря, почки или легкого, когда агонист С1Ф-рецептора является соединением формулы I, например, соединением А, или соединением формулы IVa или IVб.4.1. A pharmaceutical composition for use in one of the methods above under 1.1-1.4, comprising a C1F receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, together with one or more pharmaceutically acceptable solvents or carriers; preferably, the composition is intended for a solid tumor, but not a tumor of the breast, prostate, bladder, kidney or lung, when the C1F receptor agonist is a compound of formula I, for example, compound A, or a compound of formula IVa or IVb.

4.2. Фармацевтическая композиция для использования в одном из способов, как указано выше под п.п.1.5-1.10, или ниже под п.7, содержащая агонист С1Ф-рецептора, например, агонист С1Ф-рецептора, содержащий группу формулы X, или его фармацевтически приемлемую соль вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми растворителями или носителями.4.2. A pharmaceutical composition for use in one of the methods, as described above under clauses 1.5-1.10, or below clause 7, comprising a C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist containing a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable thereof a salt together with one or more pharmaceutically acceptable solvents or carriers.

5.1. Фармацевтическая комбинация, включающая а) первое средство, которое является агонистом С1Ф-рецептора, например, агонистом С1Ф-рецептора, включающим группу формулы X, или его фармацевтически приемлемую соль, и б) сопутствующее средство, которое является химиотерапевтическим средством, например, таким как указано ниже.5.1. A pharmaceutical combination comprising a) a first agent that is a C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and b) a concomitant that is a chemotherapeutic agent, for example, as indicated below.

5.2. Фармацевтическая комбинация, включающая а) первое средство, которое является агонистом С1Ф-рецептора, например, агонистом С1Ф-рецептора, включающим группу формулы X, или его фармацевтически приемлемую соль, и б) сопутствующее средство, которое является химиотерапевтическим средством, выбранным из соединений, упомянутых ниже в разделе XI, для создания синергетического терапевтического эффекта.5.2. A pharmaceutical combination comprising a) a first agent that is a C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and b) a concomitant that is a chemotherapeutic agent selected from the compounds mentioned below in section XI, to create a synergistic therapeutic effect.

6. Способ, как указано выше, включающий совместное введение, например, одновременное или последовательное, терапевтически эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, например, агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли, и второй лекарственной субстанции, являющейся химиотерапевтическим средством, например, таким как указано в настоящем патенте.6. The method as described above, comprising co-administering, for example, simultaneously or sequentially, a therapeutically effective amount of a C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a second drug substance, which is chemotherapeutic agent, for example, such as described in this patent.

7. Способ лечения лимфопролиферативного или миелопролиферативного заболевания, например, лечения инвазивности опухоли или симптомов, связанных с таким опухолевым ростом, у субъекта, который в этом нуждается; способ включает совместное введение упомянутому субъекту, например, одновременно или последовательно, агониста С1Ф-рецептора, например, агониста С1Ф-рецептора, включающего группу формулы X, или его фармацевтически приемлемой соли, и второй лекарственной субстанции, являющейся химиотерапевтическим средством, например, таким как указано в настоящем патенте.7. A method of treating a lymphoproliferative or myeloproliferative disease, for example, treating tumor invasiveness or symptoms associated with such tumor growth in a subject who needs it; the method comprises co-administering to said subject, for example, simultaneously or sequentially, a C1P receptor agonist, for example, a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a second drug substance, which is a chemotherapeutic agent, for example, as indicated in the present patent.

Под «лимфатическим раком» подразумеваются, например, опухоли кровеносной и лимфатической систем (например, болезнь Ходжкина, неходжкинская лимфома, лимфома Беркитта, СПИД-ассоциированные лимфомы, злокачественные иммунопролиферативные заболевания, множественная миелома и злокачественные плазмоклеточные неоплазмы, лимфоидный лейкоз, острый или хронический миелоидный лейкоз, острый или хронический лимфолейкоз, моноцитарный лейкоз, другие лейкозы определенного клеточного типа, лейкоз неопределенного клеточного типа, другие и неопределенные злокачественные неоплазмы лимфоидной, кроветворной и родственных тканей, например, диффузная крупноклеточная лимфома, Т-клеточная лимфома или кожная Т-клеточная лимфома. Миелоидный рак включает, например, острый или хронический миелоидный лейкоз.By "lymphatic cancer" are meant, for example, tumors of the circulatory and lymphatic systems (for example, Hodgkin’s disease, non-Hodgkin’s lymphoma, Burkitt’s lymphoma, AIDS-associated lymphomas, malignant immunoproliferative diseases, multiple myeloma and plasma-cell malignant neoplasms, lymphoid leukemia, acute or chronic myeloid leukemia acute or chronic lymphocytic leukemia, monocytic leukemia, other specific cell type leukemia, indefinite cell type leukemia, others and undefined lennye malignant neoplasms of lymphoid, haematopoietic and related tissues, for example diffuse large cell lymphoma, T-cell lymphoma or cutaneous T-cell lymphoma. Myeloid cancer includes, for example, acute or chronic myeloid leukemia.

Под понятием «химиотерапевтическое средство» подразумевается главным образом любое химиотерапевтическое средство, иное, чем агонист С1Ф-рецептора. Понятие включает, но ими не ограничивается:By the term “chemotherapeutic agent” is meant primarily any chemotherapeutic agent other than a C1P receptor agonist. The concept includes, but is not limited to:

i. ингибитор ароматазы,i. aromatase inhibitor

ii. антиэстроген, антиандроген (особенно в случае рака предстательной железы) или агонист гонадорелина,ii. anti-estrogen, anti-androgen (especially in the case of prostate cancer) or a gonadorelin agonist,

iii. ингибитор топоизомеразы I или ингибитор топоизомеразы II,iii. topoisomerase I inhibitor or topoisomerase II inhibitor,

iv. средство, активное в отношении микротрубочек, алкилирующее средство, противоопухолевый антиметаболит или соединение платины,iv. microtubule-active agent, alkylating agent, antitumor antimetabolite or platinum compound,

v. соединение, связывающее/понижающее активность протеин- или липидкиназы или активность протеин- или липидфосфатазы, другое антиангиогенное соединение или соединение, которое индуцирует процессы клеточной дифференциации,v. a compound that binds / decreases the activity of protein or lipid kinase or the activity of protein or lipid phosphatase, another anti-angiogenic compound or compound that induces cell differentiation processes,

vi. рецептор брадикинина 1 или антагонист ангиотензина II,vi. bradykinin 1 receptor or angiotensin II antagonist,

vii. ингибитор циклооксигеназы, дифосфонат, ингибитор гистондезацетилазы, ингибитор гепараназы (предотвращает гепарансульфатную деградацию), например, продукт PI-88, модификатор биологического ответа, предпочтительно лимфокин или интерфероны, например, интерферон γ, ингибитор многих мишеней, или ингибитор, который блокирует метаболические пути антиапоптоза,vii. cyclooxygenase inhibitor, diphosphonate, histone deacetylase inhibitor, heparanase inhibitor (prevents heparan sulfate degradation), for example, product PI-88, a biological response modifier, preferably lymphokine or interferons, for example, interferon γ, a multi-target inhibitor, or an inhibitor that blocks the metabolic pathways of antiapoptosis

viii. ингибитор Ras-онкогенных изоформ, например, H-Ras, K-Ras или N-Ras, или ингибитор фарнезилтрансферазы, например, L-744832 или DK8G557,viii. an Ras-oncogenic isoform inhibitor, for example, H-Ras, K-Ras or N-Ras, or a farnesyl transferase inhibitor, for example, L-744832 or DK8G557,

ix. ингибитор теломеразы, например, теломестатин,ix. telomerase inhibitor, e.g. telomestatin,

x. ингибитор протеазы, ингибитор металлопротеиназы матрикса, ингибитор метионинаминопептидазы, например, бенгамид или его производное, или ингибитор протеосом, например, PS-341, и/илиx. protease inhibitor, matrix metalloproteinase inhibitor, methionine aminopeptidase inhibitor, for example, benghamide or its derivative, or proteosome inhibitor, for example, PS-341, and / or

xi. ингибитор mTOR.xi. mTOR inhibitor.

Понятие «ингибитор ароматазы», как оно используется в настоящем изобретении, относится к соединению, которое ингибирует образование эстрогена, например, превращение субстратов андростендиона и тестостерона в эстрон и эстрадиол, соответственно. Понятие включает, но не ограничивается ими, стероиды, особенно атаместан, экземестан и форместан и, в частности, нестероидные соединения, особенно аминоглутетимид, роглетимид, пиридоглутетимид, трилостан, тестолактон, кетоконазол, ворозол, фадрозол, анастрозол и летрозол. Экземестан можно вводить, например, в форме коммерческого продукта AROMASIN™. Форместан можно вводить, например, в форме коммерческого продукта LENTARON™. Фадрозол можно вводить, например, в форме коммерческого продукта AFEMA™. Анастрозол можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ARIMIDEX™. Летрозол можно вводить, например, в форме коммерческого продукта FEMARA™ или FEMAR™. Аминоглутетимид можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ORIMETEN™. Комбинация настоящего изобретения, включающая химиотерапевтическое средство, которое является ингибитором ароматазы, особенно полезна при лечении опухолей, имеющих рецепторы гормонов, например опухолей молочной железы.The term "aromatase inhibitor", as used in the present invention, refers to a compound that inhibits the formation of estrogen, for example, the conversion of substrates of androstenedione and testosterone to estrone and estradiol, respectively. The term includes, but is not limited to, steroids, especially atamestan, exemestane and formestane, and in particular non-steroid compounds, especially aminoglutethimide, rogletimide, pyridoglutetimide, trilostane, testolactone, ketoconazole, Vorozol, fadrozole, anastrozole and letrozole. Exemestane can be administered, for example, in the form of a commercial AROMASIN ™ product. Formestane may be administered, for example, in the form of a commercial LENTARON ™ product. Fadrozole may be administered, for example, in the form of a commercial AFEMA ™ product. Anastrozole can be administered, for example, in the form of a commercial product ARIMIDEX ™. Letrozole can be administered, for example, in the form of a commercial FEMARA ™ or FEMAR ™ product. Aminoglutethimide can be administered, for example, in the form of a commercial product ORIMETEN ™. The combination of the present invention, including a chemotherapeutic agent that is an aromatase inhibitor, is particularly useful in the treatment of tumors having hormone receptors, such as breast tumors.

Понятие «антиэстроген», как оно используется в настоящем изобретении, относится к соединению, которое противодействует влиянию эстрогенов на уровень рецепторов эстрогенов. Понятие включает тамоксифен, фулвестрант, ралоксифен и гидрохлорид ралоксифена, но не ограничивается этими соединениями. Тамоксифен можно вводить, например, в форме коммерческого продукта NOLVADEX™. Гидрохлорид ралоксифена можно вводить, например, в форме коммерческого продукта EVISTA™. Фулвестрант можно приготовить, как описано в US 4659516, или можно вводить, например, в форме коммерческого продукта FASLODEX ™. Комбинация настоящего изобретения, включающая в качестве химиотерапевтического средства антиэстроген, особенно полезна при лечении, например, опухолей, имеющих рецепторы эстрогенов, например опухолей молочной железы.The term "antiestrogen" as used in the present invention refers to a compound that counteracts the effect of estrogen on the level of estrogen receptors. The term includes, but is not limited to, tamoxifen, fulvestrant, raloxifene, and raloxifene hydrochloride. Tamoxifen can be administered, for example, in the form of a commercial NOLVADEX ™ product. Raloxifene hydrochloride may be administered, for example, in the form of a commercial EVISTA ™ product. Fulvestrant can be prepared as described in US 4,659,516, or it can be administered, for example, in the form of a commercial FASLODEX ™ product. The combination of the present invention, including an antiestrogen as a chemotherapeutic agent, is particularly useful in the treatment of, for example, tumors having estrogen receptors, for example breast tumors.

В настоящем изобретении понятие «антиандроген» относится к соединениям, способным ингибировать биологическое действие андрогенных гормонов; к антиандрогенам относится, но им не ограничивается, бикалутамид (продукт CASODEX™), который можно приготовить, например, как описано в US 4636505.In the present invention, the term "antiandrogen" refers to compounds capable of inhibiting the biological effect of androgen hormones; anti-androgens include, but are not limited to, bicalutamide (CASODEX ™ product), which can be prepared, for example, as described in US 4636505.

Понятие «агонист гонадорелина», как оно используется в настоящем изобретении, включает абареликс, гозерелин и ацетат гозерелина, но не ограничивается этими соединениями. Гозерелин описан в US 4100274, его можно вводить, например, в форме коммерческого продукта под торговой маркой ZOLADEX™. Абареликс можно приготовить, например, как указано в US 5843901.The term “gonadorelin agonist” as used in the present invention includes, but is not limited to, abarelix, goserelin and goserelin acetate. Goserelin is described in US Pat. No. 4,100,274, and may be administered, for example, in the form of a commercial product under the brand name ZOLADEX ™. Abarelix can be prepared, for example, as described in US 5843901.

Понятие «ингибитор топоизомеразы I» в настоящем изобретении включает, но не ограничивается ими, топотекан, иринотекан, 9-нитрокамптотецин и макромолекулярный камптотециновый коньюгат PNU-166148 (соединение А1 в WO 99/17804). Иринотекан можно вводить, например, в форме коммерческого продукта CAMPTOSAR™. Топотекан, можно вводить, например, в форме коммерческого продукта HYCAMTIN™.The term “topoisomerase I inhibitor” in the present invention includes, but is not limited to, topotecan, irinotecan, 9-nitrocamptothecin and macromolecular camptothecin conjugate PNU-166148 (compound A1 in WO 99/17804). Irinotecan can be entered, for example, in the form of a commercial product CAMPTOSAR ™. Topotecan can be administered, for example, in the form of a commercial HYCAMTIN ™ product.

Понятие «ингибитор топоизомеразы II», как оно используется в настоящем изобретении, включает, но не ограничивается ими, антрациклины, такие как доксорубицин (включая липосомную форму, например, продукт CAELYX™), даунорубицин, эпирубицин, идарубицин и неморубицин, антрахиноны митоксантрон и лозоксантрон, подофиллотоксины этопозид и тенипозид. Этопозид можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ETOPOPHOS™. Тенипозид можно вводить, например, в форме коммерческого продукта VM 26-BRISTOL™. Доксорубицин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ADRIBLASTIN™. Эпирубицин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта FARMORUBICIN™. Идарубицин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ZAVEDOS™. Митоксантрон можно вводить, например, в форме коммерческого продукта NOVANTRON™.The term “topoisomerase II inhibitor” as used in the present invention includes, but is not limited to, anthracyclines such as doxorubicin (including the liposome form, for example, CAELYX ™ product), daunorubicin, epirubicin, idarubicin and nemorubicin, anthraquinones mitoxantrone and lose podophyllotoxins etoposide and teniposide. Etoposide can be administered, for example, in the form of a commercial ETOPOPHOS ™ product. Teniposide can be administered, for example, in the form of a commercial product VM 26-BRISTOL ™. Doxorubicin can be administered, for example, in the form of a commercial product ADRIBLASTIN ™. Epirubicin can be administered, for example, in the form of a commercial product FARMORUBICIN ™. Idarubicin can be administered, for example, in the form of a commercial ZAVEDOS ™ product. Mitoxantrone may be administered, for example, in the form of a commercial NOVANTRON ™ product.

Понятие «средство, активное в отношении микротрубочек» относится к средствам, стабилизирующим микротрубочки и дестабилизирующим микротрубочки; понятие включает, но не ограничивается ими, таксаны, например, паклитаксел и доцетаксел, алкалоиды барвинка, например винбластин, особенно сульфат винбластина, винкристин, особенно сульфат винкристина, винорельбин, дискодермолиды и эпотилоны и их производные, например, эпотилон В или его производное. Паклитаксел можно вводить, например, в форме коммерческого продукта TAXOL™. Доцетаксел можно вводить, например, в форме коммерческого продукта TAXOTERE™. Сульфат винбластина можно вводить, например, в форме коммерческого продукта VINBLASTIN R.P.™. Сульфат винкристина можно вводить, например, в форме коммерческого продукта FARMISTIN™. Дискодермолид можно получить, например, как описано в US 5010099.The term “agent active against microtubules” refers to agents that stabilize microtubules and destabilize microtubules; The term includes, but is not limited to, taxanes, for example, paclitaxel and docetaxel, vinca alkaloids, for example vinblastine, especially vinblastine sulfate, vincristine, especially vincristine sulfate, vinorelbine, discodermolides and epothilones and their derivatives, for example, epothilone B or its derivative. Paclitaxel can be administered, for example, in the form of a commercial TAXOL ™ product. Docetaxel can be administered, for example, in the form of a commercial TAXOTERE ™ product. Vinblastine sulfate can be administered, for example, in the form of a commercial product VINBLASTIN R.P. ™. Vincristine sulfate can be administered, for example, in the form of a commercial FARMISTIN ™ product. Discodermolide can be obtained, for example, as described in US 5010099.

Понятие «алкилирующее средство», как оно используется в настоящем изобретении, включает, но не ограничивается ими, бусульфан, хлорамбуцил, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан или нитрозомочевину (BCNU или продукт Gliadel™). Циклофосфамид можно вводить, например, в форме коммерческого продукта CYCLOSTIN™. Ифосфамид можно вводить, например, в форме коммерческого продукта HOLOXAN™.The term “alkylating agent” as used in the present invention includes, but is not limited to, busulfan, chlorambucil, cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan or nitrosourea (BCNU or Gliadel ™ product). Cyclophosphamide can be administered, for example, in the form of the commercial product CYCLOSTIN ™. Ifosfamide can be administered, for example, in the form of a commercial HOLOXAN ™ product.

Понятие «противоопухолевый антиметаболит» включает, но не ограничивается ими, 5-фторурацил, капецитабин, гемцитабин, цитарабин, флударабин, тиогуанин, метотрексат и эдатрексат. Капецитабин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта XELODA™. Гемцитабин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта GEMZAR™.The term “antitumor antimetabolite” includes, but is not limited to, 5-fluorouracil, capecitabine, gemcitabine, cytarabine, fludarabine, thioguanine, methotrexate and edatrexate. Capecitabine can be administered, for example, in the form of a commercial XELODA ™ product. Gemcitabine can be administered, for example, in the form of a commercial GEMZAR ™ product.

Понятие «соединение платины», как оно используется в настоящем изобретении, включает, но не ограничивается ими, карбоплатин, цисплаптин и оксалиплатин. Карбоплатин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта CARBOPLAT™. Оксалиплатин можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ELOXATIN™.The term “platinum compound” as used in the present invention includes, but is not limited to, carboplatin, cislaptin and oxaliplatin. Carboplatin can be administered, for example, in the form of a commercial CARBOPLAT ™ product. Oxaliplatin can be administered, for example, in the form of a commercial ELOXATIN ™ product.

Понятие «соединения, связывающие/понижающие активность протеин- или липидкиназ, или другие антиангиогенные соединения», как оно используется в настоящем изобретении, включает, но не ограничивается ими, ингибиторы протеинтирозинкиназы и/или серин- или треонинкиназы или ингибиторы липидкиназы, например, соединения, связывающие, понижающие или ингибирующие активность представителей семейства факторов роста эпидермиса рецепторных тирозинкиназ (EGFR, ЕrbВ2, ЕrbВ3, ЕrbВ4, в виде гомо- или гетеродимеров); представителей семейства факторов роста эндотелия сосудов рецепторных тирозинкиназ (VEGFR); рецепторы тромбоцитарного фактора роста (PDGFR); рецепторы факторов роста фибробластов (FGFR); рецептор 1 инсулиноподобного фактора роста (IGF-1R); представителей семейства Trk-рецепторных тирозинкиназ; представителей семейства Axl-рецепторных тирозинкиназ; Ret-рецепторную тирозинкиназу; Kit/SCFR-рецепторную тирозинкиназу; представителей Аbl-семейства и продукты слияния их генов (например, BCR-Abl); представителей протеинкиназы С (РКС) и Raf семейства серин/треониновых киназ; представителей МЕК, SRC, JAK, FAK, PDK или РI(3) семейства киназ или семейства киназ, близких киназе РI(3); и/или членов семейства циклин-зависимых киназ (CDK). Понятие также включает антиангиогенные соединения, имеющие другой механизм активности, например, не связанный с ингибированием протеин- или липидкиназ.The term “protein / lipid kinase binding / lowering compounds or other anti-angiogenic compounds” as used in the present invention includes, but is not limited to, protein tyrosine kinase inhibitors and / or serine or threonine kinase or lipid kinase inhibitors, for example, binding, lowering or inhibiting the activity of representatives of the family of epidermal growth factors of receptor tyrosine kinases (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, in the form of homo- or heterodimers); representatives of the family of vascular endothelial growth factors receptor tyrosine kinases (VEGFR); platelet growth factor receptors (PDGFR); fibroblast growth factor receptors (FGFR); insulin-like growth factor receptor 1 (IGF-1R); members of the Trk receptor tyrosine kinase family; representatives of the Axl receptor tyrosine kinase family; Ret receptor tyrosine kinase; Kit / SCFR receptor tyrosine kinase; representatives of the Аbl family and products of the fusion of their genes (for example, BCR-Abl); representatives of protein kinase C (PKC) and Raf of the serine / threonine kinase family; representatives of MEK, SRC, JAK, FAK, PDK or PI (3) of the kinase family or kinase family close to PI (3) kinase; and / or members of the cyclin-dependent kinase (CDK) family. The term also includes antiangiogenic compounds having a different mechanism of activity, for example, not associated with the inhibition of protein or lipid kinases.

Соединениями, которые связывают, понижают или ингибируют активность VEGFR, являются, главным образом, соединения, белки или антитела, которые ингибируют VEGF-рецепторную тирозинкиназу, ингибируют VEGF-рецептор или связываются с VEGF. В частности, это соединения, белки или моноклональные антитела, которые в общих чертах или подробно описываются в WO 98/35958, например, 1-(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазин или его фармацевтически приемлемая соль, например, сукцинат, в WO 00/27820, например, производное амида N-арил(тио)антраниловой кислоты, например, 2-[(4-пиридил)метил]амино-N-[3-метокси-5-(трифторметил)фенил]бензамид или 2-[(1-оксидо-4-пиридил)метил]амино-N-[3-трифторметилфенил]бензамид, или в WO 00/09495, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 и в ЕР 0769947; соединения, которые описаны М.Prewett и др. в Cancer Research, 59, 1999, сс.5209-5218; F.Yuan и др. в Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 1996, сс.14765-14770; Z. Zhu и др. в Cancer Res., 58, 1998, cc.3209-3214; J.Mordenti и др. в Toxicologic Pathology, 27, 1999, cc.14-21; в WO 00/37502 и WO 94/10202; продукт Angiostatin™, описанный M.S.O'Reilly и др. в Cell, 79, 1994, сс.315-328; продукт Endostatin™, описанный M.S.O'Reilly и др. в Cell, 88, 1997, сс.277-285; амидные производные антраниловой кислоты; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; или антитела к VEGF, или антитела к рецептору VEGF, например, RhuMab.Compounds that bind, lower, or inhibit VEGFR activity are mainly compounds, proteins or antibodies that inhibit VEGF receptor tyrosine kinase, inhibit the VEGF receptor, or bind to VEGF. In particular, these are compounds, proteins or monoclonal antibodies that are broadly or in detail described in WO 98/35958, for example, 1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for example succinate, in WO 00/27820, for example, an amide derivative of N-aryl (thio) anthranilic acid, for example 2 - [(4-pyridyl) methyl] amino-N- [3-methoxy-5- (trifluoromethyl) phenyl] benzamide or 2 - [(1-oxide-4-pyridyl) methyl] amino-N- [3-trifluoromethylphenyl] benzamide, or in WO 00/09495, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 and in EP 0769947; the compounds described by M. Prewett et al. in Cancer Research, 59, 1999, pp. 5209-5218; F.Yuan et al. In Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 1996, ss. 1465-14770; Z. Zhu et al. In Cancer Res., 58, 1998, cc. 3209-3214; J. Mordenti et al. In Toxicologic Pathology, 27, 1999, cc. 14-21; in WO 00/37502 and WO 94/10202; Angiostatin ™ product described by M.S. O'Reilly et al. in Cell, 79, 1994, pp. 315-328; Endostatin ™ product described by M.S. O'Reilly et al. in Cell, 88, 1997, pp. 277-285; amide derivatives of anthranilic acid; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; or antibodies to VEGF, or antibodies to a VEGF receptor, for example, RhuMab.

Под антителами подразумевают интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела, образованные, по крайней мере, из 2 интактных антител, и фрагменты антител такой длины, которая обеспечивает желаемую биологическую активность.Antibodies are understood to mean intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies formed from at least 2 intact antibodies, and antibody fragments of a length that provides the desired biological activity.

Соединения, которые связывают, понижают или ингибируют активность семейства рецепторов факторов роста эпидермиса, являются, главным образом, соединениями, белками или антителами, которые ингибируют представителей семейства EGF-рецепторных тирозинкиназ, например, EGF-рецептора, ЕrbВ2, ЕrbВ3 и ЕrbВ4, связывают EGF или EGF-родственные лиганды, или которые обладают двойственным ингибирующим воздействием по отношению к ErbB- и VEGF-рецепторной киназе. В частности, это такие соединения, протеины или моноклональные антитела, которые в общих чертах или подробно, описываются в WO 97/02266, например, соединение из примера 39, или в ЕР 0564409, WO 99/03854, ЕР 0520722, ЕР 0566226, ЕР 0787722, ЕР 0837063, US 5747498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 и, особенно, в WO 96/30347 (например, соединение, известное как CP 358774), WO 96/33980 (например, соединение ZD 1839) и WO 95/03283 (например, соединение ZM105180) или РСТ/ЕР 02/08780; например, трастузумаб (продукт Herpetin^R), цетуксимаб, Иресса, OSI-774, CI-1033, ЕКВ-569, GW-2016, El.l, Е2.4, Е2.5, Е6.2, Е6.4, E2.11, Е6.3 или Е7.6.3.Compounds that bind, lower or inhibit the activity of the epidermis growth factor receptor family are mainly compounds, proteins or antibodies that inhibit members of the EGF receptor tyrosine kinase family, for example, the EGF receptor, ErbB2, ErbB3 and ErbB4, bind EGF or EGF-related ligands, or which have a dual inhibitory effect on ErbB and VEGF receptor kinases. In particular, these are such compounds, proteins or monoclonal antibodies that are described in general or in detail in WO 97/02266, for example, the compound of Example 39, or in EP 0564409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0566226, EP 0787722, EP 0837063, US 5747498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983, and especially in WO 96/30347 (for example, a compound known as CP 358774), WO 96 / 33980 (e.g., compound ZD 1839) and WO 95/03283 (e.g., compound ZM105180) or PCT / EP 02/08780; e.g. trastuzumab (Herpetin ^R product), cetuximab, Iressa, OSI-774, CI-1033, ЕКВ-569, GW-2016, El.l, Е2.4, Е2.5, Е6.2, Е6.4, E2 .11, E6.3 or E7.6.3.

Соединениями, которые связывают, понижают или ингибируют активность PDGFR, являются, главным образом, соединения, которые ингибируют PDGF-рецептор, например, производное N-фенил-2-пиримидинамина, например, иматиниб.Compounds that bind, lower, or inhibit PDGFR activity are mainly compounds that inhibit the PDGF receptor, for example, an N-phenyl-2-pyrimidinamine derivative, for example, imatinib.

Соединениями, которые связывают, понижают или ингибируют активность представителей семейства с-Аbl и продуктов слияния их генов, являются, например, производное N-фенил-2-пиримидинамина, например, иматиниб; PD180970; AG957 или NSC 680410.Compounds that bind, lower, or inhibit the activity of members of the c-Ab family and fusion products of their genes are, for example, a derivative of N-phenyl-2-pyrimidinamine, for example, imatinib; PD180970; AG957 or NSC 680410.

Соединения, которые связывают, понижают или ингибируют активность представителей семейств протеинкиназы С, Raf, МЕК, SRC, JAK, FAK и PDK, или представителей семейства РI(3)-киназы или родственной РI(3)-киназы, и/или представителей семейства циклин-зависимых киназ (CDK), являются, главным образом, такими соединениями, как производные стауроспорина, которые описываются в ЕР 0296110, например, мидостаурин. Примеры других соединений включают, например, UCN-01, сафингол, BAY 43-9006, Бриостатин 1, Перифозин; UO 126; Илмофозин; RO 318220 и RO 320432; GO 6976, Изис 3521; или LY333531/LY379196.Compounds that bind, lower, or inhibit the activity of members of the protein kinase C, Raf, MEK, SRC, JAK, FAK, and PDK families, or members of the PI (3) kinase family or related PI (3) kinase family and / or members of the cyclin family -dependent kinases (CDKs) are mainly compounds such as staurosporin derivatives, which are described in EP 0296110, for example, midostaurine. Examples of other compounds include, for example, UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Briostatin 1, Perifosin; UO 126; Ilmofosin; RO 318220 and RO 320432; GO 6976, Isis 3521; or LY333531 / LY379196.

Другими антиангиогенными соединениями являются, например, талидомид (THALOMID) и TNP-470.Other antiangiogenic compounds are, for example, thalidomide (THALOMID) and TNP-470.

Соединения, которые связывают, понижают или ингибируют активность протеин- или липидфосфатазы, - это, например, ингибиторы фосфатазы 1, фосфатазы 2А, PTEN или CDC25, например, окадаевая кислота или ее производное.Compounds that bind, lower, or inhibit the activity of protein or lipid phosphatase are, for example, phosphatase 1, phosphatase 2A, PTEN or CDC25 inhibitors, for example, okadaeva acid or its derivative.

Соединениями, которые индуцируют процессы клеточной дифференциации, являются, например, ретиноевая кислота, α-, γ- или δ-токоферол или α-, γ- или δ-токотриенол.Compounds that induce cell differentiation processes are, for example, retinoic acid, α-, γ- or δ-tocopherol or α-, γ- or δ-tocotrienol.

Понятие «ингибитор циклооксигеназы», как оно используется в настоящем изобретении, включает, но не ограничивается ими, например, целекоксиб (продукт Celebrex^R), рофекоксиб (продукт Vioxx^R), эторикоксиб, вальдекоксиб или 5-алкил-2-ариламинофенилуксусную кислоту, например, 5-метил-2-(2'-хлор-6'-фторанилино)фенилуксусную кислоту.The term "cyclooxygenase inhibitor" as used in the present invention includes, but is not limited to, for example, celecoxib (Celebrex ^R product), rofecoxib (Vioxx ^R product), etoricoxib, valdecoxib or 5-alkyl-2-arylaminophenylacetic acid, for example , 5-methyl-2- (2'-chloro-6'-fluoroanilino) phenylacetic acid.

Понятие «ингибитор гистондезацетилазы», как оно используется в настоящем изобретении, включает MS-27-275, SAHA, пироксамид, FR-901228 и вальпроевую кислоту, но не ограничивается ими.The term "histone deacetylase inhibitor" as used in the present invention includes, but is not limited to, MS-27-275, SAHA, pyroxamide, FR-901228 and valproic acid.

Понятие «дифосфонаты», как оно используется в настоящем изобретении, включает этридоновую, клодроновую, тилудроновую, памидроновую, алендроновую, ибандроновую, ризедроновую и золедроновую кислоту, но не ограничивается этими соединениями. Этридоновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта DIDRONEL™. Клодроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта BONEFOS™. Тилудроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта SKELID™. Памидроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта AREDIA™. Алендроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта FOSAMAX™. Ибандроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта BONDRANAT™. Ризедроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ACTONEL™. Золедроновую кислоту можно вводить, например, в форме коммерческого продукта ZOMETA™.The term "diphosphonates" as used in the present invention includes, but is not limited to, ethridonic, clodronic, tiludronic, pamidronic, alendronic, ibandronic, risedronic and zoledronic acid. Etridonic acid can be administered, for example, in the form of a commercial DIDRONEL ™ product. Clodronic acid can be administered, for example, in the form of a commercial BONEFOS ™ product. Tiludronic acid can be administered, for example, in the form of a commercial SKELID ™ product. Pamidronic acid can be administered, for example, in the form of a commercial AREDIA ™ product. Alendronic acid can be administered, for example, in the form of a commercial FOSAMAX ™ product. Ibandronic acid can be administered, for example, in the form of a commercial product BONDRANAT ™. Risedronic acid may be administered, for example, in the form of a commercial ACTONEL ™ product. Zoledronic acid can be administered, for example, in the form of a commercial ZOMETA ™ product.

Понятие «ингибитор металлопротеиназы матрикса», как оно используется в настоящем изобретении, включает, но не ограничивается ими, коллагеновые пептидомиметические и непептидомиметические ингибиторы, производные тетрациклина, например, гидроксамат пептидомиметического ингибитора батимастата и его биодоступный при пероральном введении аналог маримастат, приномастат, BMS-279251, BAY 12-9566, ТАА211 или AAJ996.The term “matrix metalloproteinase inhibitor”, as used in the present invention, includes, but is not limited to, collagen peptidomimetic and non-peptidomimetic inhibitors, tetracycline derivatives, for example, hydroxamate peptidomimetic inhibitor bathimastat and its bioavailable analogue of marimastat, B-27, promatast25 , BAY 12-9566, TAA211 or AAJ996.

Понятие «mTOR - ингибитор», как оно используется в настоящем изобретении, означает рапамицин (сиролимус) или его производное, но не ограничивается этими соединениями. Рапамицин - известный макролидный антибиотик, образуемый Streptomyces hygroscopicus. Приемлемые производные рапамицина включают, например, соединения формулы АThe term "mTOR inhibitor", as used in the present invention, means rapamycin (sirolimus) or its derivative, but is not limited to these compounds. Rapamycin is a known macrolide antibiotic formed by Streptomyces hygroscopicus. Suitable rapamycin derivatives include, for example, compounds of formula A

гдеWhere

R_1aa означает СН₃ или С₃-С₆алкинил;R _1aa means CH ₃ or C ₃ -C ₆ alkynyl;

R_2aa означает Н или -СН₂-СН₂-ОН, 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропаноил или тетразолил, и Х_аа означает=O, (Н,Н) или (Н,ОН),R _2aa means H or —CH ₂ —CH ₂ —OH, 3-hydroxy-2- (hydroxymethyl) -2-methylpropanoyl or tetrazolyl, and X _aa means = O, (H, H) or (H, OH),

при условии, что R_2aa не является Н, когда Х_аа означает=O и R_1aa означает СН₃; или его пролекарство, когда R_2aa означает -СН₂-СН₂-ОН, например, его физиологически гидролизуемый простой эфир.provided that R _{2aa is} not H when X _aa means = O and R _1aa means CH ₃ ; or a prodrug thereof, when R _2aa is —CH ₂ —CH ₂ —OH, for example, a physiologically hydrolyzable ether thereof.

Соединения формулы А описываются, например, в W0 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, US 5362718 или WO 99/15530, в настоящее изобретение они включаются в виде ссылок. Их можно приготовить согласно описанию или аналогично способам, описанным в этих ссылках.Compounds of formula A are described, for example, in W0 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, US 5362718 or WO 99/15530, and are hereby incorporated by reference. They can be prepared as described or similarly to the methods described in these references.

Предпочтительными производными рапамицина являются 32-дезоксорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32-дезоксорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32(S)дигидрорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32(S)-дигидро-40-орто-(2-гидроксиэтил)рапамицин и, более предпочтительно, 40-орто-(2-гидроксиэтил)рапамицин. Другими примерами производных рапамицина являются, например, CCI779 или 40-[3-гидроксиметил)-2-метилпропаноат]рапамицин или его фармацевтически приемлемая соль, как описано в US 5362718, АВТ578 или 40-(тетразолил)рапамицин, особенно 40-эпи-(тетразолил)-рапамицин, например, описанные в WO 99/15530, или рапалоги, описанные в WO 98/02441 и WO01/14387, например, АР23573.Preferred rapamycin derivatives are 32-deoxorapamycin, 16-pent-2-ynloxy-32-deoxorapamycin, 16-pent-2-ynyloxy-32 (S) dihydrorapamycin, 16-pent-2-ynyloxy-32 (S) -dihydro-40 ortho- (2-hydroxyethyl) rapamycin and, more preferably, 40-ortho- (2-hydroxyethyl) rapamycin. Other examples of rapamycin derivatives are, for example, CCI779 or 40- [3-hydroxymethyl) -2-methylpropanoate] rapamycin or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as described in US 5362718, ABT578 or 40- (tetrazolyl) rapamycin, especially 40-epi- ( tetrazolyl) -rapamycin, for example, described in WO 99/15530, or rapalogy described in WO 98/02441 and WO01 / 14387, for example, AP23573.

В каждом случае, когда упоминаются заявки на патенты или научные публикации, касающиеся сущности соединений, они включаются в настоящее изобретение в виде ссылок. Подобным образом включаются также фармацевтически приемлемые соли этих соединений, соответствующие рацематы, диастереоизомеры, энантиомеры, таутомеры и соответствующие кристаллические модификации описанных выше соединений, если таковые представлены, например, сольваты, гидраты и полиморфы, которые описаны в цитируемых публикациях. Соединения, которые в настоящем изобретении используются в качестве активных ингредиентов комбинаций, могут быть получены и введены, как описано в цитируемых документах. Также в рамках настоящего изобретения представлена комбинация, содержащая более двух разных активных ингредиентов, как изложено выше; например, фармацевтическая комбинация в рамках настоящего изобретения могла бы включать три или более активных ингредиента. Более того, и первое средство, и сопутствующее средство не являются одним и тем же ингредиентом.In each case, when patent applications or scientific publications concerning the nature of the compounds are mentioned, they are incorporated into the present invention by reference. Similarly, pharmaceutically acceptable salts of these compounds, corresponding racemates, diastereoisomers, enantiomers, tautomers and corresponding crystalline modifications of the above compounds, if any, for example, the solvates, hydrates and polymorphs described in the cited publications, are also included. The compounds that are used as the active ingredients of the combinations in the present invention can be prepared and administered as described in the cited documents. Also included within the scope of the present invention is a combination comprising more than two different active ingredients, as set forth above; for example, a pharmaceutical combination within the scope of the present invention could include three or more active ingredients. Moreover, both the first agent and the concomitant agent are not the same ingredient.

Применение агонистов С1Ф, например, агонистов С1Ф, включающих группу формулы X, в лечении солидных опухолей, которые детально изложены в настоящем изобретении выше, можно продемонстрировать в испытаниях на животных и в клинических исследованиях, например, в соответствии со способами, описанными ниже.The use of C1F agonists, for example, C1F agonists, including a group of formula X, in the treatment of solid tumors, which are described in detail in the present invention above, can be demonstrated in animal trials and in clinical studies, for example, in accordance with the methods described below.

A. In vitroA. In vitro

А.1. Противоопухолевая активностьA.1. Antitumor activity

Используют линию клеток рака молочной железы мыши, первоначально выделенную из карциномы молочной железы, например, линию JygMC(A). Перед началом исследования количество клеток доводят до титра 5×10⁵ для посева в планшет со свежей питательной средой. Клетки инкубируют в свежей среде, содержащей 2,5 мМ тимидина, без фетальной телячьей сыворотки (ФТС) в течение 12 ч и затем дважды промывают физиологическим раствором с фосфатным буфером (ФСБ) с последующим добавлением свежей среды, содержащей 10% ФТС, и дополнительно инкубируют еще в течение 12 ч. После этого клетки инкубируют в свежей среде без ФТС, содержащей 2,5 мМ тимидина, в течение 12 ч. Для отделения клеток их дважды смывают ФСБ и вновь высевают в планшеты со свежей средой, содержащей 10% ФТС. После синхронизации, клетки инкубируют без/с различными концентрациями соединения формулы I в течение 3, 6, 9, 12, 18 или 24 ч. После обработки 0,2% раствором ЭДТА клетки собирают, фиксируют 70% раствором этанола, охлажденным до температуры таяния льда, гидролизуют с РНКазой А (тип 1-А: фирма Sigma Chem.Co.), взятой в количестве 250 мкг/мл, при 37°С в течение 30 мин и окрашивают иодидом пропидиума в концентрации 10 мг/мл в течение 20 мин. После инкубационного периода количество клеток определяют двумя способами: подсчетом клеток в счетчике Coulter и SRB-колориметрическим анализом. При данных условиях агонист С1Ф, например, соединение Б в форме гидрохлорида, ингибирует пролиферацию опухолевых клеток в диапазоне концентраций 10^-12-10^-6 М.A mouse breast cancer cell line originally isolated from breast carcinoma is used, for example, the JygMC line (A). Before the start of the study, the number of cells is adjusted to a titer of 5 × 10 ⁵ for plating on a tablet with fresh nutrient medium. Cells are incubated in fresh medium containing 2.5 mM thymidine without fetal calf serum (FCS) for 12 hours and then washed twice with physiological saline with phosphate buffer (PBS), followed by fresh medium containing 10% FCS, and further incubated for another 12 hours. After this, the cells are incubated in fresh medium without FCS containing 2.5 mM thymidine for 12 hours. To separate the cells, they are washed twice with FSB and plated again in plates with fresh medium containing 10% FCS. After synchronization, the cells are incubated without / with various concentrations of the compounds of formula I for 3, 6, 9, 12, 18 or 24 hours. After treatment with 0.2% EDTA solution, the cells are harvested, fixed with 70% ethanol solution, cooled to ice melting temperature , hydrolyzed with RNase A (type 1-A: Sigma Chem.Co.), taken in an amount of 250 μg / ml, at 37 ° C for 30 minutes and stained with propidium iodide at a concentration of 10 mg / ml for 20 minutes. After the incubation period, the number of cells is determined in two ways: counting cells in a Coulter counter and SRB colorimetric analysis. Under these conditions, a C1F agonist, for example, compound B in the form of a hydrochloride, inhibits the proliferation of tumor cells in a concentration range of 10 ^-12 -10 ^-6 M.

А.2. Анализ С1Ф-опосредованного образования трубочек в эндотелиальных клетках пупочной вены человека ОКПВЧ)A.2. Analysis of C1F-mediated tubule formation in human umbilical vein endothelial cells

Для анализа образования трубочек используют клетки ЭКПВЧ из 2-8 пассажа; при этом до сбора клеток их плотность никогда не превышает 70%. Клетки готовят для анализа, промывая сбалансированным для герпеса физиологическим раствором (HBSS, фирма Clonetics) с последующей обработкой раствором трипсин/ЭДТА (0,25 мг/мл, фирма Clonetics). После отделения примерно 90% клеток от планшета, добавляют равный объем трипсин-нейтрализующего раствора (TNS, фирма Clonetics), затем клетки собирают в конические пробирки, содержащие, по крайней мере, 10 мл сред ЕВМ-2 (фирма Clonetics)+0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (фирма Sigma). Клетки центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, супернатант удаляют и добавляют 5 мл свежей среды ЕВМ-2+0,1% БСА. Клетки подсчитывают с помощью гематоцитометра и объем клеточной суспензии доводят до конечной концентрации 500000 клеток/мл. В конические пробирки помещают по 100 нмоль изучаемых соединений и по 1 мл раствора коклюшного токсина (КТ) в концентрации 10 нг/мл, затем вносят по 1 мл клеточной суспензии в каждую пробирку. После этого пробирки инкубируют в течение получаса при 37°С в атмосфере 5% СО₂. Миграционный анализ проводят, используя 24-многолуночные вставные планшеты Fluoro-Blok, покрытые фибронектином (размер пор 8 мкм, фирма Falcon #351147), вместо отдельных вставок в 24-луночный планшет.Клетки и исследуемые соединения подготавливают и предварительно инкубируют, как описано выше, затем по 100 мкл добавляют в каждую соответствующую лунку вставного планшета. По 300 мкл среды ЕВМ-2+2% десорбированного древесного угля, без С1Ф, вносят в лунки, помеченные «нет стимуляции (-)», и по 300 мкл среды, содержащей С1Ф (500 нмоль), вносят в лунки, помеченные «стимуляция (+)». После этого планшет инкубируют в течение 4 ч при 37°С в атмосфере 5% СО₂.For the analysis of tubule formation, UHF cells from passage 2-8 are used; in this case, before cell collection, their density never exceeds 70%. Cells were prepared for analysis by washing with cold-balanced physiological saline (HBSS, Clonetics) followed by trypsin / EDTA (0.25 mg / ml, Clonetics). After separating approximately 90% of the cells from the plate, an equal volume of trypsin-neutralizing solution (TNS, Clonetics) is added, then the cells are collected in conical tubes containing at least 10 ml of EBM-2 media (Clonetics) +0.1 % bovine serum albumin (BSA) (Sigma). The cells are centrifuged at 1000 rpm for 5 min, the supernatant is removed and 5 ml of fresh EBM-2 + 0.1% BSA medium is added. Cells are counted using a hematocytometer and the volume of the cell suspension is adjusted to a final concentration of 500,000 cells / ml. 100 nmol of the studied compounds and 1 ml of pertussis toxin (CT) solution at a concentration of 10 ng / ml are placed in conical tubes, then 1 ml of cell suspension is added to each tube. After that, the tubes are incubated for half an hour at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ . Migration analysis was carried out using 24-well Fluoro-Blok fibronectin coated plug-in plates (pore size 8 μm, Falcon # 351147) instead of individual inserts in a 24-well plate. Cells and test compounds were prepared and pre-incubated as described above. then 100 μl is added to each corresponding well of the insert plate. 300 μl of EBM-2 medium + 2% desorbed charcoal, without C1F, is added to the wells labeled “no stimulation (-)”, and 300 μl of medium containing C1F (500 nmol) is added to the wells labeled “stimulation (+) ". After that, the plate is incubated for 4 hours at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ .

Кальцеин AM, 50 мкг/ампулу (фирма Molecular Probes #С3100) готовят следующим образом: сначала добавляют в ампулу 20 мкл ДМСО, затем 12,5 мл HBSS (на планшет) нагревают до 37°С и 150 мкл добавляют в ампулу; содержимое ампулы переносят обратно в оставшийся HBSS, до получения конечной концентрации 4 мкг/мл кальцеина AM.Calcein AM, 50 μg / ampoule (Molecular Probes # C3100) is prepared as follows: first add 20 μl DMSO to the ampoule, then 12.5 ml HBSS (per plate) is heated to 37 ° C and 150 μl is added to the ampoule; the contents of the ampoule are transferred back to the remaining HBSS until a final concentration of 4 μg / ml calcein AM is obtained.

Планшет Fluoro-blok вынимают из термостата, отделяют верхний вставной планшет и постукивают по нему, чтобы удалить излишек среды, прилипший к вставкам. Затем вставной планшет переносят на свежий 24-луночный планшет, содержащий по 500 мкл в лунке кальцеина AM, в концентрации 4 мкг/мл. После этого планшет инкубируют в течение 1

ч при 37°С в атмосфере 5% СО₂.The Fluoro-blok tablet is removed from the thermostat, the upper insert tablet is removed and tapped to remove excess media adhering to the inserts. Then, the insert plate was transferred to a fresh 24-well plate containing 500 μl per well of calcein AM at a concentration of 4 μg / ml. After this, the plate is incubated for 1

h at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ .

После инкубации планшет считывают на приборе Cytofluor II при волне возбуждения 485 нм и волне эмиссии 530 нм. Покрытие Fluoro-Blok во вставках позволяет подсчитывать только те клетки, которые мигрируют на дно. Для анализа данные заносят в программу Excel, построение диаграмм осуществляют с использованием программы SigmaPlot, для критериев значимости (проверка по критерию Стьюдента) используют программу SigmaStat (фиг.7).After incubation, the plate is read on a Cytofluor II instrument with an excitation wave of 485 nm and an emission wave of 530 nm. The Fluoro-Blok coating in the inserts only counts cells that migrate to the bottom. For analysis, the data are entered into the Excel program, the construction of diagrams is carried out using the SigmaPlot program, for the significance criteria (student test), the SigmaStat program is used (Fig. 7).

Образование трубочек определяют путем подсчета количества точек ветвления (два независимых соединяющихся тяжа) в трех независимых полях зрения при 4-х-кратном увеличении. Результаты описывают следующим образом:The formation of tubules is determined by counting the number of branch points (two independent connecting strands) in three independent fields of view at 4x magnification. The results are described as follows:

ОбработкаTreatment Точки ветвленияBranch points ФСБFSB 8±58 ± 5 С1ФC1F 42±1342 ± 13 Соединение FТY720-фосфатCompound FTY720-phosphate 48±1548 ± 15 Соединение FТY720-фосфат+С1ФCompound FTY720-phosphate + C1F 14±714 ± 7 Соединение В-фосфатCompound B-phosphate 44±1644 ± 16 Соединение В-фосфат+С1ФCompound B-phosphate + C1F 18±618 ± 6

Данные результаты показывают уникальную способность соединения FТY720-фосфат или соединения В-фосфат действовать в качестве агониста ангиогенеза как такового и, что удивительно, в качестве антагониста С1Ф-опосредованного ангиогенеза. Предпочтительной формой для соединения В-фосфата является рацемат или R-энантиомер. КТ используют в качестве контроля ингибирования Giα (ЕDG-1)-опосредованной активности.These results show the unique ability of the FTY720-phosphate compound or the B-phosphate compound to act as an angiogenesis agonist per se and, surprisingly, as an antagonist of C1F-mediated angiogenesis. A preferred form for the B-phosphate compound is a racemate or R-enantiomer. CT is used as a control for the inhibition of Giα (EDG-1) -mediated activity.

Б. In vivoB. In vivo

Б.1. Противоопухолевая активностьB.1. Antitumor activity

Противоопухолевую активность выражают отношением O/К% (среднее увеличение опухолевых масс у обработанных животных к среднему увеличению опухолевых масс у контрольных животных, умноженное на 100).Antitumor activity is expressed by the ratio O / K% (average increase in tumor masses in treated animals to average increase in tumor masses in control animals, multiplied by 100).

Аликвотные пробы раковых клеток (1×10⁷), например, клеток меланомы человека А375, прививают мышам линии BALB/c-nu/nu. Когда опухоли достигнут размера примерно 10×10 мм, животных произвольно делят на четыре подгруппы и начинают лечить соединением формулы I. После двухнедельного лечения животных забивают, а опухоли и ткани готовят для морфологического и молекулярного анализа. Размер опухолей определяют с помощью циркуля. В данном анализе агонист С1Ф, например, соединения Б или В (в форме гидрохлорида), замедляет рост опухолей при введении в дозе от 0,5 до 5 мг/кг; контролем является физиологический раствор: например, соединение В-НС1 при 5-кратном введении в течение недели приводит к значению О/К - 30%.Aliquots of cancer cells (1 × 10 ⁷ ), for example, human A375 melanoma cells, were inoculated into BALB / c-nu / nu mice. When the tumors reach a size of about 10 × 10 mm, the animals are randomly divided into four subgroups and begin to be treated with the compound of formula I. After two weeks of treatment, the animals are killed and the tumors and tissues are prepared for morphological and molecular analysis. The size of the tumors is determined using a compass. In this assay, a C1F agonist, for example, compound B or C (in the form of hydrochloride), slows the growth of tumors when administered at a dose of 0.5 to 5 mg / kg; physiological saline is the control: for example, compound B-HC1, when administered 5 times during the week, results in an O / K value of 30%.

Б.2. Комбинация с ингибитором VEGF-R-протеинтирозинкиназыB.2. Combination with a VEGF-R protein tyrosine kinase inhibitor

Голых мышей с привитыми опухолями молочных желез человека MDA-MB-435 лечат в течение двух недель ингибитором VEGF-R-протеинтирозинкиназы, например, сукцинатом 1-(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазина, в дозе 100 мг/кг перорально при 5-кратном введении в течение недели, агонистом С1Ф-рецептора, например, соединением В (гидрохлоридом), в дозе 2,5 мг/кг внутривенно при 5-кратном введении в течение недели, или комбинацией из обоих соединений. Противоопухолевый эффект выражают отношением O/К%, как указано выше. Комбинация соединения В-НСl с сукцинатом 1-(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазина оказывает большее противоопухолевое действие (O/К% 27) по сравнению с одним из средств (соединением В-НСl, О/К 66%; сукцинатом 1-(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазина, 0/К% 91). Хорошие противоопухолевые ответы получают также, когда голым мышам прививают клетки меланомы человека А375 и лечат сходным образом, с помощью той же комбинации: комбинированное лечение приводит к показателю 0/К% 15, в то время как лечение с помощью только одного из средств - к показателям 0/К% 35 и 44, соответственно.Naked mice with inoculated human mammary tumors MDA-MB-435 are treated for two weeks with a VEGF-R protein tyrosine kinase inhibitor, for example, 1- (4-chlororanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine succinate, at a dose of 100 mg / kg orally with 5-fold administration during the week, with a C1F receptor agonist, for example, compound B (hydrochloride), at a dose of 2.5 mg / kg intravenously with 5-fold administration over the course of a week, or a combination of both. The antitumor effect is expressed by the ratio O / K%, as described above. The combination of compound B-Hcl with succinate 1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine has a greater antitumor effect (O / K% 27) compared with one of the means (compound B-Hcl, O / K 66 %; 1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine succinate, 0 / K% 91). Good antitumor responses are also obtained when human mouse A375 melanoma cells are inoculated and treated similarly using the same combination: combined treatment leads to 0 / K% 15, while treatment with only one of the drugs results in indicators 0 / K% 35 and 44, respectively.

Б.3. Антиангиогенная активностьB.3. Antiangiogenic activity

Пористые камеры, содержащие (i) сфингозин-1-фосфат (5 мкмоль/камеру) или (ii) VEGF человека (1 мкг/камеру) в 0,5 мл 0,8% (мас./объем) агара (содержащего гепарин, 20 ед./мл), вводят мышам подкожно в бок. С1Ф или VEGF индуцируют рост васкуляризированной ткани вокруг камеры. Данный ответ является дозозависимым и характеризуется количественно измерением веса и кровяного наполнения ткани. Мышей обрабатывают один раз в сутки (i) перорально соединением А (0,3, 3, 30 или 50 мг/кг), или (ii) внутривенно R-энантиомером соединения В (2,5 мг/кг), или (iii) внутривенно S-энантиомером соединения В (2,5 мг/кг), или (iv) перорально, или внутривенно раствором (5% глюкоза, 10 мл/кг), начиная за 4-6 ч до введения камер и продолжая в течение 4-х суток. Животных забивают для измерения васкуляризированных тканей через 24 ч после введения последней дозы. Определяют вес и кровяное наполнение васкуляризированных тканей вокруг камеры. Животные, которых лечили соединением А, или R- или S-энантиомером соединения В, показывают снижение веса и/или кровяного наполнения васкуляризированных тканей по сравнению с аналогичными показателями у животных, которые получали только один растворитель.Porous chambers containing (i) sphingosine-1-phosphate (5 μmol / chamber) or (ii) human VEGF (1 μg / chamber) in 0.5 ml of 0.8% (w / v) heparin agar, 20 units / ml), injected into mice subcutaneously in the side. C1F or VEGF induces the growth of vascularized tissue around the chamber. This response is dose-dependent and is characterized quantitatively by measuring the weight and blood filling of the tissue. Mice are treated once daily (i) orally with compound A (0.3, 3, 30 or 50 mg / kg), or (ii) intravenously with the R-enantiomer of compound B (2.5 mg / kg), or (iii) intravenously by the S-enantiomer of compound B (2.5 mg / kg), or (iv) by oral or intravenous solution (5% glucose, 10 ml / kg), starting 4-6 hours before administration of the chambers and continuing for 4- x days. Animals are sacrificed to measure vascularized tissue 24 hours after the last dose. The weight and blood filling of the vascularized tissues around the chamber are determined. Animals that were treated with compound A, or the R- or S-enantiomer of compound B, showed a decrease in weight and / or blood filling of vascularized tissues compared with those in animals that received only one solvent.

В. Клиническое исследованиеB. Clinical study

В.1. Исследование клинической эффективности агонистов С1Ф-рецептора, например, соединений формул I, II или III, например, соединений А, Б или ВIN 1. Investigation of the clinical efficacy of C1F receptor agonists, for example, compounds of formulas I, II or III, for example, compounds A, B or C

В исследовании участвуют 20 больных с прогрессирующими солидными опухолями в поздней стадии, резистентными или трудно поддающимися стандартной терапии; они получают упомянутое соединение в дозе, которая подбирается путем постепенного повышения дозы. Проводят еженедельное врачебное и лабораторное обследование общего клинического состояния больных. Изменение состояния опухоли и метастаз оценивают каждые 2 месяца путем рентгенологического исследования. Первоначально больные получают лечение в течение 2-х месяцев. После этого лечение продолжают до тех пор, пока заболевание не перестает прогрессировать и пока больные удовлетворительно переносят лекарство.The study involved 20 patients with advanced solid tumors in the late stage, resistant or difficult to respond to standard therapy; they receive the said compound in a dose, which is selected by gradually increasing the dose. Conduct a weekly medical and laboratory examination of the general clinical condition of patients. Changes in tumor status and metastasis are assessed every 2 months by x-ray examination. Initially, patients receive treatment for 2 months. After this, treatment is continued until the disease progresses and the patients tolerate the drug satisfactorily.

Основные переменные для оценки результата лечения: безопасность (побочные эффекты), стандартные биохимические показатели сыворотки и форменных элементов крови, размеры опухоли по оценке методом компьютерной томографии (КТ) или магнитно-резонансной интроскопии (МРИ).The main variables for evaluating the outcome of treatment are safety (side effects), standard biochemical parameters of serum and blood cells, tumor sizes as estimated by computed tomography (CT) or magnetic resonance imaging (MRI).

8.2. Комбинированное лечение8.2. Combination treatment

Подходящими клиническими исследованиями являются, например, открытые нерандомизированные с повышением доз исследования пациентов с запущенными солидными опухолями. Такие исследования показывают, в частности, синергизм активных ингредиентов в комбинации, предлагаемой в настоящем изобретении. Благоприятные эффекты на пролиферативные заболевания можно установить непосредственно по результатам этих исследований или по изменениям в ходе исследования, которые по существу известны любому специалисту в данной области. Такие исследования, в частности, применимы для сравнения эффектов монотерапии, в которой используются активные ингредиенты, и эффектов от применения комбинации настоящего изобретения. Предпочтительно, дозу средства (а) повышают до тех пор, пока не будет достигнута максимально переносимая доза; сопутствующее средство (б) вводят в фиксированной дозе. Альтернативно, средство (а) вводят в фиксированной дозе, а дозу сопутствующего средства (б) повышают. Каждый больной получает дозы средства (а) либо ежедневно, либо с перерывами. Эффективность лечения в таких исследованиях может быть установлена, например, после 12, 18 или 24 недель путем рентгенологической оценки опухолей с интервалом 6 недель.Suitable clinical studies are, for example, open non-randomized dose-increasing studies of patients with advanced solid tumors. Such studies show, in particular, the synergism of the active ingredients in the combination of the present invention. The beneficial effects on proliferative diseases can be established directly from the results of these studies or by changes in the course of the study, which are essentially known to any person skilled in the art. Such studies, in particular, are applicable for comparing the effects of monotherapy in which the active ingredients are used and the effects of using a combination of the present invention. Preferably, the dose of the agent (a) is increased until the maximum tolerated dose is reached; concomitant agent (b) is administered in a fixed dose. Alternatively, agent (a) is administered in a fixed dose, and the dose of concomitant agent (b) is increased. Each patient receives a dose of the drug (a) either daily or intermittently. The effectiveness of treatment in such studies can be established, for example, after 12, 18 or 24 weeks by X-ray evaluation of tumors with an interval of 6 weeks.

Альтернативой является двойной слепой метод с плацебо контролем; его можно использовать для того, чтобы подтвердить преимущества упомянутой в настоящем изобретении комбинации.An alternative is the double blind method with placebo control; it can be used to confirm the advantages of the combination mentioned in the present invention.

Суточные дозы, необходимые при варианте осуществления способа настоящего изобретения, в нем, когда используется только один агонист С1Ф-рецептора, варьируют в зависимости, например, от соединения, которое используется, организма, способа введения и тяжести заболевания, лечение которого проводится. Предпочтительная суточная доза находится в диапазоне от 0,1 до 100 мг; ее вводят в качестве однократной дозы или делят на несколько доз. Приемлемыми суточными дозами для больных являются дозы, например, порядка 0,1-50 мг, прием пероральный. Агонист С1Ф-рецептора может быть введен любым стандартным способом, особенно энтерально, например, перорально, например, в форме таблеток, капсул или микстур, через нос, посредством ингаляций, или парентерально, например, в форме растворов или суспензий для инъекций. Приемлемые формы унифицированной дозировки для перорального введения включают примерно от 0,1 до 30 мг, обычно от 0,25 до 30 мг агониста рецептора С1Ф, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми растворителями или носителями. Для того чтобы ингибировать ангиогенез, важно подобрать достаточно высокую дозу агониста рецептора С1Ф, поскольку низкие концентрации агонистов С1Ф-рецептора стимулируют ангиогенез. Приемлемую дозу для обеспечения антиангиогенного действия, когда больному вводится С1Ф-агонист, можно подобрать путем повышения концентрации и дозы, как описано выше для А, Б и В.The daily doses required in an embodiment of the method of the present invention, when only one C1P receptor agonist is used, vary depending, for example, on the compound that is used, the body, the route of administration and the severity of the disease being treated. A preferred daily dose is in the range of 0.1 to 100 mg; it is administered as a single dose or divided into several doses. Acceptable daily doses for patients are doses, for example, of the order of 0.1-50 mg, oral administration. The C1F receptor agonist can be administered by any standard route, especially enteral, for example, orally, for example, in the form of tablets, capsules or medicines, through the nose, by inhalation, or parenterally, for example, in the form of injectable solutions or suspensions. Acceptable unit dosage forms for oral administration include from about 0.1 to 30 mg, usually from 0.25 to 30 mg of a C1F receptor agonist, together with one or more pharmaceutically acceptable solvents or carriers. In order to inhibit angiogenesis, it is important to select a sufficiently high dose of a C1P receptor agonist, since low concentrations of a C1P receptor agonist stimulate angiogenesis. An acceptable dose to provide an antiangiogenic effect when a C1F agonist is administered to a patient can be selected by increasing the concentration and dose, as described above for A, B and C.

Комбинацию настоящего изобретения можно также применять в комбинации с хирургическим вмешательством, слабо выраженной продолжительной гипертермией целого организма и/или лучевой терапией.The combination of the present invention can also be used in combination with surgery, mild prolonged hyperthermia of the whole organism and / or radiation therapy.

Введение фармацевтической комбинации настоящего изобретения приводит к положительному эффекту, например, синергетическому терапевтическому эффекту, например, в отношении замедления, купирования или реверсирования новообразований, распространения или роста метастаз, или большей длительности опухолевого ответа, или подавления ангиогенеза; применение фармацевтической комбинации может также привести и к другим ценным эффектам, например, к уменьшению побочных эффектов, улучшенному качеству жизни или уменьшенной смертности и болезненности, по сравнению с монотерапией, при которой применяется только один из фармацевтически активных ингредиентов, используемых в комбинации настоящего изобретения. Особенно это касается лечения рака, который не поддается лечению другими химиотерапевтическими средствами, известными как противораковые.The administration of a pharmaceutical combination of the present invention leads to a beneficial effect, for example, a synergistic therapeutic effect, for example, in relation to the retardation, stopping or reversing of neoplasms, the spread or growth of metastases, or the longer duration of the tumor response, or the suppression of angiogenesis; the use of a pharmaceutical combination can also lead to other valuable effects, for example, a reduction in side effects, an improved quality of life or reduced mortality and pain compared to monotherapy, in which only one of the pharmaceutically active ingredients used in the combination of the present invention is used. This is especially true for the treatment of cancer, which cannot be treated with other chemotherapeutic agents known as anti-cancer.

Другое преимущество заключается в том, что в комбинации настоящего изобретения можно использовать более низкие дозы активных ингредиентов, дозы могут быть меньше и применяться реже, или более низкие дозы можно использовать для того, чтобы уменьшить степень побочных эффектов в ходе сдерживания роста опухолевого образования. Это находится в соответствии с пожеланиями и потребностями пациентов.Another advantage is that in the combination of the present invention, lower doses of the active ingredients can be used, doses can be lower and less commonly used, or lower doses can be used to reduce side effects during the inhibition of tumor growth. This is in accordance with the wishes and needs of patients.

В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения в нем предпочтительная фармацевтическая комбинация включает:In accordance with one embodiment of the present invention, a preferred pharmaceutical combination comprises:

а) соединения формул I, II, III, IVa, IVб, V или VI, например, соединение А, Б или В, иa) compounds of formulas I, II, III, IVa, IVb, V or VI, for example, compound A, B or C, and

б) одно или несколько соединений в качестве сопутствующих средств, таких, как указанные выше в параграфах (ii), (iii), (iv), (v), (vii) или (xi), например, карбоплатин, цисплатин, паклитаксел, доцетаксел, гемцитабин, доксорубицин,соединение,b) one or more compounds as concomitant agents, such as those mentioned in paragraphs (ii), (iii), (iv), (v), (vii) or (xi) above, for example, carboplatin, cisplatin, paclitaxel, docetaxel, gemcitabine, doxorubicin, compound,

которое связывает, понижает или ингибирует активность представителей семейства факторов роста эндотелия сосудов рецепторных тирозинкиназ (VEGFR) илиwhich binds, lowers or inhibits the activity of representatives of the family of vascular endothelial growth factors receptor tyrosine kinases (VEGFR) or

рецепторов тромбоцитарного фактора роста (PDGFR), или дифосфонатов или mTOR-ингибитора.platelet growth factor receptor (PDGFR), or diphosphonates or an mTOR inhibitor.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к использованию агониста С1Ф-рецептора (а) в комбинации с химиотерапевтическим средством (б) в лечении лимфатического или миелоидного рака, например, как описано выше. Комбинация может включать, в качестве дополнительного сопутствующего средства (б), например, бусульфан, цитарабин, 6-тиогуанин, флударабин, гидроксимочевину, прокарбазин, блеомицин или метотрексат.В качестве сопутствующих средств (б), например, для использования в лечении лимфатического рака, предпочтительными являются ингибиторы топоизомеразы II, например, даунорубицин или, особенно, соединения, которые связывают, понижают или ингибируют активность PDGFR или представителей семейства с-Аbl и продуктов слияния их генов, например, иматиниб.Another embodiment of the present invention relates to the use of a C1P receptor agonist (a) in combination with a chemotherapeutic agent (b) in the treatment of lymphatic or myeloid cancer, for example, as described above. The combination may include, as an additional concomitant agent (b), for example, busulfan, cytarabine, 6-thioguanine, fludarabine, hydroxyurea, procarbazine, bleomycin or methotrexate. As concomitant agents (b), for example, for use in the treatment of lymphatic cancer, inhibitors of topoisomerase II, for example, daunorubicin, or especially compounds that bind, reduce or inhibit the activity of PDGFR or members of the c-Al family and fusion products of their genes, for example, imatinib, are preferred.

Понятия «совместное введение», или «комбинированное введение», или подобные понятия, как они используются в настоящем изобретении, означают введение выбранных терапевтических средств одному больному, и подразумевают также применение таких режимов лечения, при которых средства не обязательно вводятся одним и тем же способом или в одно и то же время.The terms “co-administration”, or “combined administration”, or similar concepts, as used in the present invention, mean the administration of the selected therapeutic agents to one patient, and also mean the use of such treatment regimens in which the agents are not necessarily administered in the same way or at the same time.

Одной из задач настоящего изобретения было представить фармацевтическую композицию, включающую количество комбинации настоящего изобретения, которое при совместном применении терапевтически эффективно в отношении пролиферирующего злокачественного заболевания. В этой композиции первое средство (а) и сопутствующее средство (б) могут вводиться вместе, одно за другим, или раздельно в форме одной комбинированной унифицированной дозы или в виде двух унифицированных дозовых форм. Форма унифицированной дозы также может быть фиксированной комбинацией.One of the objectives of the present invention was to provide a pharmaceutical composition comprising an amount of a combination of the present invention, which, when used together, is therapeutically effective against a proliferating malignant disease. In this composition, the first agent (a) and the concomitant agent (b) can be administered together, one after the other, or separately in the form of a single combined unit dose or in two unit dosage forms. The unit dosage form may also be a fixed combination.

Фармацевтические композиции, согласно настоящему изобретению, можно приготовить способом, известным per se. Они пригодны для энтерального, например, перорального или ректального, и парентерального введения млекопитающим (теплокровным животным), включая людей. Композиции содержат терапевтически эффективное количество, по крайней мере, одного фармакологически активного компонента комбинации, например, как указано выше, или в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или растворителями, особенно пригодными для энтерального или парентерального применения.The pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared by a method known per se. They are suitable for enteral, for example, oral or rectal, and parenteral administration to mammals (warm-blooded animals), including humans. The compositions contain a therapeutically effective amount of at least one pharmacologically active component of the combination, for example, as described above, or in combination with one or more pharmaceutically acceptable carriers or solvents, especially suitable for enteral or parenteral use.

Приемлемые фармацевтические композиции содержат, например, активный ингредиент (или активные ингредиенты) приблизительно в количестве от 0,1% до 99,9%, предпочтительно, от 1% до 60%. Фармацевтические препараты для комбинированной терапии для энтерального или парентерального введения являются, например, формами унифицированных доз, таких как таблетки с сахарным покрытием, таблетки, капсулы, суппозитории или ампулы. Если не указано иначе, их готовят известным per se способом, например, с помощью таких обычных процессов, как перемешивание, гранулирование, покрытие сахарной оболочкой, растворение или лиофилизация.Suitable pharmaceutical compositions contain, for example, the active ingredient (or active ingredients) in an amount of about 0.1% to 99.9%, preferably 1% to 60%. Pharmaceutical preparations for combination therapy for enteral or parenteral administration are, for example, in unit dosage forms such as sugar coated tablets, tablets, capsules, suppositories or ampoules. Unless otherwise indicated, they are prepared in a manner known per se, for example, using conventional processes such as mixing, granulation, sugar coating, dissolution or lyophilization.

Ценным является то, что содержание единицы смешанной фармацевтической композиции состоит из отдельных доз каждого составляющего компонента комбинации, взятых в количестве, которое в отдельности недостаточно для проявления активности; необходимое эффективное количество может быть достигнуто введением множества дозовых единиц.It is valuable that the content of a unit of a mixed pharmaceutical composition consists of separate doses of each constituent component of the combination, taken in an amount that is individually insufficient for the manifestation of activity; the required effective amount can be achieved by the introduction of multiple dose units.

В частности, терапевтически эффективное количество каждого компонента комбинации настоящего изобретения можно вводить одновременно или последовательно в любом порядке, компоненты можно вводить по отдельности или в виде фиксированной комбинации. Например, способ сдерживания прогрессирования или лечения пролиферирующего злокачественного заболевания, согласно настоящему изобретению, может включать: (i) введение первого средства (а) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и (ii) введение сопутствующего средства (б) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли; введение осуществляется одновременно или последовательно в любом порядке, в количествах, терапевтически эффективных при совместном применении, предпочтительно в количествах, оказывающих синергетический эффект, например, в суточных или прерывистых дозировках, соответствующих количествам, описанным в настоящем изобретении. Отдельные компоненты комбинации настоящего изобретения можно вводить по отдельности в разное время на протяжении курса лечения или одновременно в виде раздельных форм или в виде единой комбинированной формы. Понятие «введение» также включает в себя использование пролекарства как компонента комбинации, которое in vivo превращается в компонент комбинации. Настоящее изобретение, поэтому, следует понимать, как охватывающее все перечисленные режимы одновременного или чередующегося лечения, и понятие «введение» следует интерпретировать соответствующим образом.In particular, a therapeutically effective amount of each component of a combination of the present invention can be administered simultaneously or sequentially in any order, the components can be administered individually or as a fixed combination. For example, a method of inhibiting the progression or treatment of a proliferating malignant disease according to the present invention may include: (i) administering the first agent (a) in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt and (ii) administering the concomitant agent (b) in free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt; the introduction is carried out simultaneously or sequentially in any order, in amounts that are therapeutically effective when used together, preferably in quantities that have a synergistic effect, for example, in daily or intermittent dosages corresponding to the amounts described in the present invention. The individual components of the combination of the present invention can be administered separately at different times during the course of treatment, either simultaneously as separate forms or as a single combined form. The term “administration” also includes the use of a prodrug as a component of a combination, which in vivo is converted into a component of the combination. The present invention, therefore, should be understood as encompassing all of the listed modes of simultaneous or alternating treatment, and the concept of "introduction" should be interpreted accordingly.

Эффективная дозировка каждого из компонентов комбинации настоящего изобретения может варьировать в зависимости от того, используется ли индивидуальное соединение, или фармацевтическая композиция, а также в зависимости от способа введения, заболевания, лечение которого проводится, и его тяжести. Поэтому, режим дозировки комбинации настоящего изобретения выбирается с учетом различных факторов, включая способ введения, функцию почек и печени больного. Рядовой врач или ветеринар может легко определить и прописать эффективное количество отдельных активных ингредиентов, необходимое для предупреждения, противодействия или сдерживания развития заболевания. Оптимальным является выбор такой концентрации активных ингредиентов, которая попадает в допустимый диапазон концентраций, обеспечивающих эффективность лечения при отсутствии токсичности; такой выбор основывается на кинетической способности активных ингредиентов достигать мишеней.The effective dosage of each of the components of the combination of the present invention may vary depending on whether an individual compound or pharmaceutical composition is used, as well as on the route of administration, the disease being treated, and its severity. Therefore, the dosage regimen of the combination of the present invention is selected taking into account various factors, including the route of administration, the kidney and liver function of the patient. An ordinary doctor or veterinarian can easily determine and prescribe the effective amount of the individual active ingredients needed to prevent, counteract or inhibit the development of the disease. It is optimal to choose a concentration of active ingredients that falls within the acceptable range of concentrations that ensure the effectiveness of treatment in the absence of toxicity; this choice is based on the kinetic ability of the active ingredients to reach targets.

Суточные дозировки первого средства или компонента (а) будут, конечно, варьировать в зависимости от различных факторов, например, от выбранного соединения, особенности заболевания, лечение которого проводится, и желаемого эффекта. В целом удовлетворительные результаты достигаются при введении агониста С1Ф-рецептора, например, соединения А, Б или В в суточных дозах порядка приблизительно 0,1-100 мг, в виде однократной дозы или в виде нескольких раздельных доз. Агонист С1Ф-рецептора можно вводить любым традиционным способом, в особенности энтерально, например, перорально, например, в форме таблеток, капсул, микстур, или парентерально, например, в форме растворов или суспензий для инъекций. Приемлемые формы разовых доз для перорального введения включают приблизительно от 0, 1 до 30 мг компонента (а), например, от 0,1 до 25 мг, совместно с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми растворителями или носителями.The daily dosages of the first agent or component (a) will, of course, vary depending on various factors, for example, the compound selected, the particular disease being treated, and the desired effect. In general, satisfactory results are achieved with the administration of a C1F receptor agonist, for example, compound A, B or C, in daily doses of the order of about 0.1-100 mg, as a single dose or in several separate doses. The C1P receptor agonist can be administered by any conventional route, especially enteral, for example, orally, for example, in the form of tablets, capsules, potions, or parenterally, for example, in the form of injectable solutions or suspensions. Suitable unit dosage forms for oral administration include from about 0.1 to about 30 mg of component (a), for example from 0.1 to 25 mg, together with one or more pharmaceutically acceptable solvents or carriers.

Фадрозол можно вводить человеку перорально в диапазоне доз, варьирующих, приблизительно от 0,5 до 10 мг/сутки, предпочтительно от 1 до 2,5 мг/сутки. Экземестан можно вводить человеку перорально в диапазоне доз, варьирующих, приблизительно от 5 до 200 мг/сутки, предпочтительно от 10 до 25 мг/сутки. Этот препарат можно также вводить парентерально, приблизительно от 50 до 500 мг/сутки, предпочтительно от 100 до 250 мг/сутки. Если это лекарство будет вводиться в отдельной фармацевтической композиции, его можно вводить в форме, описанной в GB 2177700. Форместан можно вводить человеку парентерально в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 100 до 500 мг/сутки, предпочтительно от 250 до 300 мг/сутки. Анастрозол можно вводить человеку перорально в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 0,25 до 20 мг/сутки, предпочтительно от 0,5-2,5 мг/сутки. Аминоглутемид можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 200 до 500 мг/сутки.Fadrozole can be administered orally to humans in a dosage range ranging from about 0.5 to 10 mg / day, preferably from 1 to 2.5 mg / day. Exemestane can be administered orally to humans in a dosage range ranging from about 5 to 200 mg / day, preferably from 10 to 25 mg / day. This drug can also be administered parenterally, from about 50 to 500 mg / day, preferably from 100 to 250 mg / day. If this medicine is to be administered in a separate pharmaceutical composition, it can be administered in the form described in GB 2177700. Formestane can be administered to a person parenterally in a dosage range ranging from about 100 to 500 mg / day, preferably from 250 to 300 mg / day. Anastrozole can be administered orally to humans in a dosage range ranging from about 0.25 to 20 mg / day, preferably from 0.5 to 2.5 mg / day. Aminoglutemide can be administered to humans in a dosage range ranging from about 200 to 500 mg / day.

Цитрат тамоксифена можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 10 до 40 мг/сутки.Tamoxifen citrate can be administered to humans in a dosage range ranging from about 10 to 40 mg / day.

Винбластин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 1,5 до 10 мг/м² /сутки. Сульфат винкристина можно вводить человеку парентерально в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 0,025 до 0,05 мг/кг массы тела в неделю. Винорельбин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 10 до 50 мг/м² /сутки.Vinblastine can be administered to humans in a dose range ranging from about 1.5 to 10 mg / m ² / day. Vincristine sulfate can be administered to a person parenterally in a dose range ranging from about 0.025 to 0.05 mg / kg body weight per week. Vinorelbine can be administered to humans in a dose range ranging from about 10 to 50 mg / m ² / day.

Фосфат этопозида можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 25 до 115 мг/м² /сутки, например, 56,8 или 113,6 мг/м² /сутки.Etoposide phosphate can be administered to humans in a dose range ranging from about 25 to 115 mg / m ² / day, for example, 56.8 or 113.6 mg / m ² / day.

Тенипозид можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 75 до 150 мг, приблизительно каждые две недели. Доксорубицин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 10 до 100 мг/м² /сутки, например, 25 или 50 мг/м² /сутки. Эпирубицин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 10 до 200 мг/м²/сутки. Идарубицин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 0,5 до 50 мг/м² /сутки. Митоксантрон можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 2,5 до 25 мг/м² /сутки.Teniposide can be administered to humans in a dosage range ranging from about 75 to 150 mg, approximately every two weeks. Doxorubicin can be administered to humans in a dosage range ranging from about 10 to 100 mg / m ² / day, for example, 25 or 50 mg / m ² / day. Epirubicin can be administered to humans in a dose range ranging from about 10 to 200 mg / m ² / day. Idarubicin can be administered to humans in a dose range ranging from about 0.5 to 50 mg / m ² / day. Mitoxantrone can be administered to humans in a dose range ranging from about 2.5 to 25 mg / m ² / day.

Паклитаксел можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 50 до 300 мг/м²/сутки. Доцетаксел можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 25 до 100 мг/м² /сутки.Paclitaxel can be administered to humans in a dosage range ranging from about 50 to 300 mg / m ² / day. Docetaxel can be administered to humans in a dosage range ranging from about 25 to 100 mg / m ² / day.

Циклофосфамид можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 50 до 1500 мг/м²/сутки. Мелфалан можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 0,5 до 10 мг/м² /сутки.Cyclophosphamide can be administered to humans in a dose range ranging from about 50 to 1500 mg / m ² / day. Melphalan can be administered to humans in a dose range ranging from about 0.5 to 10 mg / m ² / day.

5-Фторурацил можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 50 до 1000 мг/м² /сутки, например, 500 мг/м²/сутки. Капецитабин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 10 до 1000 мг/м² /сутки. Гемцитабин гидрохлорид можно вводить человеку в дозе, примерно равной или большей чем 1000 мг/м² в неделю. Метотрексат можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 5 до 500 мг/м² в сутки.5-Fluorouracil can be administered to humans in a dose range ranging from about 50 to 1000 mg / m ² / day, for example, 500 mg / m ² / day. Capecitabine can be administered to humans in a dosage range ranging from about 10 to 1000 mg / m ² / day. Gemcitabine hydrochloride can be administered to humans at a dose approximately equal to or greater than 1000 mg / m ² per week. Methotrexate can be administered to humans in a dosage range ranging from about 5 to 500 mg / m ² per day.

Топотекан можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 1 до 5 мг/м² /сутки. Иринотекан можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 50 до 350 мг/м²/сутки.Topotecan can be administered to humans in a dose range ranging from about 1 to 5 mg / m ² / day. Irinotecan can be administered to humans in a dose range ranging from about 50 to 350 mg / m ² / day.

Карбоплатин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 200 до 400 мг/м² приблизительно каждые четыре недели. Цисплатин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 25 до 75 мг/м² приблизительно каждые три недели. Оксалиплатин можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 50 до 85 мг/м² каждые две недели.Carboplatin can be administered to humans in a dosage range ranging from about 200 to 400 mg / m ² approximately every four weeks. Cisplatin can be administered to humans in a dosage range ranging from about 25 to 75 mg / m ² approximately every three weeks. Oxaliplatin can be administered to humans in a dosage range ranging from about 50 to 85 mg / m ² every two weeks.

Иматиниб можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 2,5 до 850 мг в сутки, более предпочтительно от 5 до 600 мг/сутки и еще более предпочтительно от 20 до 300 мг/сутки.Imatinib can be administered to humans in a dosage range ranging from about 2.5 to 850 mg per day, more preferably from 5 to 600 mg / day, and even more preferably from 20 to 300 mg / day.

Алендроновую кислоту можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 5 до 10 мг/сутки. Клодроновую кислоту можно вводить человеку, например, в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 750 до 1500 мг/сутки. Этридоновую кислоту можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 200 до 400 мг/сутки. Ибандроновую кислоту можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 1 до 4 мг каждые три - четыре недели. Ризедроновую кислоту можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 20 до 30 мг/сутки. Памидроновую кислоту можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 15 до 90 мг каждые три-четыре недели. Тилудроновую кислоту можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 200 до 400 мг/сутки.Alendronic acid can be administered to humans in a dose range ranging from about 5 to 10 mg / day. Clodronic acid can be administered to humans, for example, in a dose range ranging from about 750 to 1500 mg / day. Etridonic acid can be administered to humans in a dose range ranging from about 200 to 400 mg / day. Ibandronic acid can be administered to humans in a dose range ranging from about 1 to 4 mg every three to four weeks. Risedronic acid can be administered to humans in a dose range ranging from about 20 to 30 mg / day. Pamidronic acid can be administered to humans in a dosage range ranging from about 15 to 90 mg every three to four weeks. Tiludronic acid can be administered to humans in a dose range ranging from about 200 to 400 mg / day.

Трастузумаб можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 1 до 4 мг/м² в неделю.Trastuzumab can be administered to humans in a dosage range ranging from about 1 to 4 mg / m ² per week.

Бикалутамид можно вводить человеку в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 25 до 50 мг/м² /сутки.Bicalutamide can be administered to humans in a dose range ranging from about 25 to 50 mg / m ² / day.

1-(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазин или его соль, например, сукцинат, можно вводить человеку в диапазоне доз приблизительно от 50 до 1500, более предпочтительно от 100 до 750, и наиболее предпочтительно от 250 до 500 мг/сутки.1- (4-chloroanilino) -4- (4-pyridylmethyl) phthalazine or its salt, for example succinate, can be administered to a person in a dosage range of from about 50 to 1500, more preferably from 100 to 750, and most preferably from 250 to 500 mg / day.

Рапамицин или его производное, например, 40-орто-(2-гидроксиэтил)-рапамицин, можно вводить в диапазоне доз, варьирующих приблизительно от 0,1 до 25 мг.Rapamycin or a derivative thereof, for example, 40-ortho- (2-hydroxyethyl) -rapamycin, can be administered in a dosage range ranging from about 0.1 to 25 mg.

Пример состава: мягкие капсулыComposition Example: Soft Capsules

Соединение формулы I, например, соединение А,A compound of formula I, for example, compound A, 30 мг30 mg гидрохлоридhydrochloride   Полиэтиленгликоль 300Polyethylene glycol 300 300 мг300 mg Полисорбат 80Polysorbate 80 20 мг20 mg ВсегоTotal 350 мг350 mg

Агонисты С1Ф-рецептора, например, агонист С1Ф-рецептора, включающий группу формулы X, хорошо переносятся пациентами в дозировках, которые необходимы для применения в соответствии с настоящим изобретением. Например, острая LD₅₀ для соединения А>10 мг/кг при пероральном введении крысам и обезьянам.C1P receptor agonists, for example, a C1P receptor agonist comprising a group of formula X, are well tolerated by patients in dosages that are necessary for use in accordance with the present invention. For example, an acute LD ₅₀ for compound A> 10 mg / kg when administered orally to rats and monkeys.

С другой стороны, настоящее изобретение относится к использованию С1Ф-агонистов в качестве проангиогенных лекарственных средств. В последнее время считается общепризнанным, что индукция неоангиогенеза является отличной мишенью при ряде заболеваний (например, таких как миокардиальный ангиогенез, заживление раны или диабетическая сосудистая дисфункция/ васкулопатия).On the other hand, the present invention relates to the use of C1F agonists as pro-angiogenic drugs. Recently, it has been widely accepted that the induction of neoangiogenesis is an excellent target in a number of diseases (for example, myocardial angiogenesis, wound healing, or diabetic vascular dysfunction / vasculopathy).

Как описано выше, агонисты С1Ф-рецептора в высоких концентрациях (2 мкМ или выше, например, 2-5 мкМ или около 5 мкМ) проявляют антиангиогенные эффекты, и агонисты С1Ф-рецептора могут ингибировать VEGF-индуцированный ангиогенез. В противоположность этому, низкие концентрации (0,1-1 мкМ, например, 0,1-0,5 мкМ или 0,5-1 мкМ) С1Ф-агонистов усиливают ангиогенез и способны потенцировать VEGF-опосредованный ангиогенез. Таким образом, С1Ф-агонисты могут проявлять двухфазные эффекты в отношении ангиогенеза.As described above, high concentration C1F receptor agonists (2 μM or higher, for example, 2-5 μM or about 5 μM) exhibit anti-angiogenic effects, and C1F receptor agonists can inhibit VEGF-induced angiogenesis. In contrast, low concentrations (0.1-1 μM, for example 0.1-0.5 μM or 0.5-1 μM) of S1F agonists enhance angiogenesis and are capable of potentiating VEGF-mediated angiogenesis. Thus, C1F agonists can exhibit biphasic effects with respect to angiogenesis.

Соответственно, настоящее изобретение также предусматривает:Accordingly, the present invention also provides:

8. Использование С1Ф-агониста, например, С1Ф-агониста, содержащего группу формулы X, например, соединение А или соединение А-фосфат, в индукции процесса неоангиогенеза, например, в качестве проангиогенного агента, например, в тех случаях, где показано стимулирование ангиогенеза.8. The use of a C1F agonist, for example, a C1F agonist containing a group of formula X, for example, compound A or compound A-phosphate, in the induction of neoangiogenesis, for example, as a pro-angiogenic agent, for example, in cases where angiogenesis stimulation is indicated .

9. Способ приготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, связанных с ингибированием процесса неоангиогенеза, например, заболеваний, связанных с антиангиогенными факторами, например, в тех случаях, где показано стимулирование ангиогенеза, например, в заживлении раны или в лечении инфаркта миокарда или диабетической сосудистой дисфункции/васкулопатии; способ включает использование агониста С1Ф-рецептора, например, С1Ф-агониста, включающего группу формулы X, например, соединение А или соединение А-фосфат, в качестве активного ингредиента.9. A method of preparing a medicament for the treatment or prevention of diseases associated with inhibition of the process of neoangiogenesis, for example, diseases associated with antiangiogenic factors, for example, in cases where stimulation of angiogenesis is shown, for example, in wound healing or in the treatment of myocardial infarction or diabetic vascular dysfunction / vasculopathy; the method involves the use of a C1F receptor agonist, for example, a C1F agonist, including a group of formula X, for example, compound A or compound A-phosphate, as an active ingredient.

10. Способ лечения или предупреждения заболеваний, связанных с ингибированием процесса неоангиогенеза, например, заболеваний, связанных с антиангиогенными факторами, например, в тех случаях, где показано стимулирование ангиогенеза, например, в таких случаях, как заживление раны или лечение инфаркта миокарда или диабетической сосудистой дисфункции/васкулопатии; способ включает введение субъекту, который нуждается в таком лечении, эффективного количества агониста С1Ф-рецептора, например, С1Ф-агониста, включающего группу формулы X, например, соединения А или соединения А-фосфат.10. A method of treating or preventing diseases associated with inhibition of the process of neoangiogenesis, for example, diseases associated with antiangiogenic factors, for example, in cases where stimulation of angiogenesis is indicated, for example, in cases such as wound healing or treatment of myocardial infarction or diabetic vascular dysfunction / vasculopathy; the method comprises administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a C1P receptor agonist, for example a C1F agonist, including a group of formula X, for example, compound A or compound A-phosphate.

С1Ф-агонисты, приемлемые для стимулирования ангиогенеза, включают соединения, которые указаны выше в качестве средств для лечения рака, например, С1Ф-агонисты, включающие группу формулы X, или соединения, соответствующие формулам I-IX, или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры. Предпочтительным С1Ф-агонистом является соединение А-фосфат.Можно использовать только один С1Ф-агонист, или комбинацию с одним или несколькими другими средствами, которые стимулируют ангиогенез, например, VEGF.C1F agonists suitable for stimulating angiogenesis include compounds as indicated above for treating cancer, for example C1F agonists comprising a group of formula X, or compounds corresponding to formulas I-IX, or pharmaceutically acceptable salts or esters thereof . A preferred phosphate agonist is compound A-phosphate. You can use only one C1F agonist, or a combination with one or more other agents that stimulate angiogenesis, for example, VEGF.

Для того чтобы стимулировать ангиогенез, важно подобрать в достаточной мере низкую дозу агониста С1Ф-рецептора, поскольку высокие концентрации агонистов С1Ф-рецептора ингибируют ангиогенез. Приемлемую дозу для того, чтобы обеспечить проангиогенное действие, когда С1Ф-агонист вводится больному, можно подобрать на основании исследований повышения концентраций и доз, как описано выше, п.п. А, Б и В.In order to stimulate angiogenesis, it is important to select a sufficiently low dose of the C1P receptor agonist, since high concentrations of the C1P receptor agonists inhibit angiogenesis. An acceptable dose in order to provide a pro-angiogenic effect when the C1F agonist is administered to the patient can be selected based on studies of increasing concentrations and doses, as described above, A, B and C.

Описание чертежейDescription of drawings

Фиг.1 показывает, что соединение А-фосфат существенно стимулирует образование капилляроподобной сети колоколообразным дозозависимым способом с максимальной активностью в примерной дозе 0,5 мкМ.Figure 1 shows that the compound A-phosphate significantly stimulates the formation of a capillary-like network in a bell-shaped dose-dependent manner with maximum activity in an approximate dose of 0.5 μM.

Фиг.2 показывает, что ни соединение А-фосфат, ни соединение А в концентрациях от 0,5 до 1 мкМ не ослабляют VEGF-опосредованное ремоделирование, но лучше взаимодействуют с полипептидным фактором роста.Figure 2 shows that neither compound A-phosphate, nor compound A in concentrations of 0.5 to 1 μM do not attenuate VEGF-mediated remodeling, but interact better with polypeptide growth factor.

Фиг.3 показывает, что образование трубочек, стимулируемое как соединением А-фосфат, так и С1Ф, практически полностью ингибируется коклюшным токсином (КТ, 50 нг/мл), ингибитором гетеротримерных G-белков α_i/o-типа. Это можно объяснить возможным вовлечением сигнальных событий, опосредованных EDG-1 (С1Ф₁)-рецептором, в стимулируемые соединением А-фосфат биологические ответы.Figure 3 shows that the formation of tubules stimulated by both the A-phosphate and C1P compounds is almost completely inhibited by pertussis toxin (CT, 50 ng / ml), an inhibitor of heterotrimeric α _{i / o} type G proteins. This can be explained by the possible involvement of signaling events mediated by the EDG-1 (C1F ₁ ) receptor in biological responses stimulated by the A-phosphate compound.

Фиг.4 показывает, что сфингозин в концентрации 1 мкМ, который сам, по-видимому, является менее эффективным, чем С1Ф, ослабляет способность как С1Ф, так и соединения А-фосфат индуцировать капилляроподобные структуры, без ингибирующего воздействия на VEGF-индуцированное образование трубочек. В этом отношении, сфингозин ведет себя иначе, чем соединение А. Эти данные указывают на то, что равновесие между сфингозином и С1Ф, по-видимому, является крайне важным для активации эндотелиальных клеток/ангиогенеза, что наиболее вероятно осуществляется через представителей семейства EDG-рецепторов. Существенно, что в высоких концентрациях сфингозин и соединение А (2-5 мкМ) ингибируют образование трубочек, инициированное VEGF.Figure 4 shows that sphingosine at a concentration of 1 μM, which itself is apparently less effective than C1P, weakens the ability of both C1P and A-phosphate compounds to induce capillary-like structures, without inhibitory effects on VEGF-induced tube formation . In this regard, sphingosine behaves differently than compound A. These data indicate that the equilibrium between sphingosine and C1P seems to be crucial for activation of endothelial cells / angiogenesis, which is most likely done through members of the EDG receptor family . It is significant that at high concentrations, sphingosine and compound A (2-5 μM) inhibit the formation of tubules initiated by VEGF.

Фиг.5 показывает, что обработка ЭКПВЧ соединением А-фосфат в концентрации 0,5 мкМ может вызвать временную активацию ERK1/2 с пиком фосфорилирования/ активации на 10-й минуте и возвратом к исходному уровню на 20-й минуте.Figure 5 shows that treatment with UHF with A-phosphate compound at a concentration of 0.5 μM can cause a temporary activation of ERK1 / 2 with a peak phosphorylation / activation at 10 minutes and a return to baseline at 20 minutes.

Фиг.6. Исследовали способность соединения А, соединения А-фосфат, сфингозина и С1Ф также индуцировать тканевой фактор на ЭКПВЧ. Полученные данные показывают, что ни одно из этих соединений, примененное само по себе, или в комбинации с другими соединениями, не повышают активности тканевого фактора, как показано на Фиг.6. Соединение А и соединение А-фосфат могут несколько усилить содержание VEGF-индуцируемого тканевого фактора, но не ФНО-α-индуцируемого тканевого фактора.6. The ability of Compound A, Compounds A-phosphate, sphingosine, and C1F to also induce tissue factor on EHF was investigated. The data obtained show that none of these compounds, used alone or in combination with other compounds, do not increase the activity of tissue factor, as shown in Fig.6. Compound A and compound A-phosphate can slightly increase the content of VEGF-induced tissue factor, but not TNF-α-induced tissue factor.

Фиг.7 показывает действие соединения В в анализе С1Ф-опосредованного образования трубочек ЭКПВЧ.Fig. 7 shows the effect of Compound B in the analysis of C1F-mediated EHF tubule formation.

Список сокращений:List of abbreviations:

БСА: бычий сывороточный альбуминBSA: bovine serum albumin

ECGS: совокупность факторов роста эндотелиальных клетокECGS: a collection of endothelial cell growth factors

С: сфингозинC: sphingosine

JNK1/2: c-jun-N-концевая киназа 1/2JNK1 / 2: c-jun-N-terminal kinase 1/2

Эквиваленты ТФ: эквиваленты тканевого фактораTF Equivalents: Tissue Factor Equivalents

EGR-1/NFAT: белок 1 ответного начального роста / ядерный факторEGR-1 / NFAT: Responsive Initial Growth Protein 1 / Nuclear Factor

активированных Т-клетокactivated T cells

А1Ф: соединение А-фосфат (FTY720-фосфат)A1F: compound A-phosphate (FTY720-phosphate)

ПХЛ: повышенная хемилюминесценцияPCL: increased chemiluminescence

ФСБ: фосфатно-солевой буферFSB: phosphate buffered saline

Роль агонистов С1Ф-рецептора, например С1Ф-агонистов, содержащих группу формулы X, в стимулировании ангиогенеза можно продемонстрировать на примере описанных ниже методов.The role of C1P receptor agonists, for example, C1P agonists containing a group of formula X, in stimulating angiogenesis can be demonstrated by the example of the methods described below.

Г. Культура клеток и материалыD. Cell Culture and Materials

Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (ЭКПВЧ) культивируют при температуре 37°С в атмосфере 5% СО₂ в среде M199 с добавлением 20% SCS (фирма HyClone, Логан, Юта, США), 1ед./мл гепарина, 50 мкг/мл ECGS, 2 мМ глутамина, 100 ед./мл пенициллина и 0,1 мг/мл стрептомицина. В эксперименте используют клетки до пятого пассажа. Используют клетки, инкубированные в условиях кратковременного голодания, для чего ЭКПВЧ культивируют в течение 5 ч в среде M199 с пониженным содержанием SCS (1%). Рекомбинантный VEGF165 человека получают от фирмы PromoCell (Гейдельберг, Германия). Поликлональные антитела к фосфо-специфической ERK1/2, р38 киназе, антитела к нефосфо-ЕRК1/2 и хемилюминесцентный реагент LumiGLO (фирма New England Biolabs, Беверли, Массачусетс), поликлональные антитела к IkВ (фирма Santa Cruz Biotechnology, Санта-Круз, Калифорния). Конъюгаты ослиного антитела к кроличьему иммуноглобулину G (IgG) и овечьего антитела к IgG мыши с пероксидазой приобретены у фирмы Amersham LIFE SCIENCE (Amersham Place, Англия). Блоттинг-мембраны Immobilon P - продукция фирмы Millipore (Бедфорд, Массачусетс, США). Сфингозин получен от фирмы Sigma Chemical Co.; С1Ф - от фирмы Biomol. Исходный раствор соединения А-фосфат готовят следующим образом. Соединение А-фосфат растворяют в метаноле, содержащем следы концентрированной НСl (0,5 мг соединения А-фосфат в 500 мкл метанола, содержащего 2 мкл HCI). Из полученного раствора упаривают под вакуумом растворитель и полученный осадок растворяют (вариант 1) в 0,1% растворе обезжиренного БСА в стерильной деионизированной воде (500 мкл) или (вариант 2) в 0,5% растворе Тритона Х-100 в деионизированной воде. Полученные исходные растворы (2,5 мМ) обрабатывают ультразвуком и хранят при температуре 4°С.Human umbilical vein endothelial cells (UHEC) are cultured at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ in M199 medium with the addition of 20% SCS (HyClone, Logan, Utah, USA), 1 unit / ml heparin, 50 μg / ml ECGS , 2 mm glutamine, 100 units / ml penicillin and 0.1 mg / ml streptomycin. In the experiment, cells are used until the fifth passage. Cells incubated under short-term starvation conditions are used, for which EHEC is cultured for 5 h in M199 medium with a reduced SCS content (1%). Recombinant human VEGF165 is obtained from PromoCell (Heidelberg, Germany). Polyclonal antibodies to phospho-specific ERK1 / 2, p38 kinase, antibodies to non-phospho-ERK1 / 2 and chemiluminescent reagent LumiGLO (New England Biolabs, Beverly, Mass.), Polyclonal antibodies to IkB (Santa Cruz Biotechnology California, Santa C ) Conjugates of a donkey antibody to rabbit immunoglobulin G (IgG) and sheep mouse anti-mouse IgG antibody with peroxidase were purchased from Amersham LIFE SCIENCE (Amersham Place, England). Immobilon P blot membranes are Millipore products (Bedford, Massachusetts, USA). Sphingosine obtained from Sigma Chemical Co .; C1F - from the company Biomol. A stock solution of compound A-phosphate is prepared as follows. Compound A-phosphate was dissolved in methanol containing traces of concentrated HCl (0.5 mg of compound A-phosphate in 500 μl of methanol containing 2 μl of HCI). The solvent was evaporated from the resulting solution in vacuo, and the resulting precipitate was dissolved (option 1) in a 0.1% solution of defatted BSA in sterile deionized water (500 μl) or (option 2) in a 0.5% solution of Triton X-100 in deionized water. The resulting stock solutions (2.5 mM) were sonicated and stored at 4 ° C.

Анализ коагуляцииCoagulation analysis

Клетки высевают в 6-луночные планшеты при плотности 80-90% и выращивают в течение ночи. Клетки собирают из планшет и анализируют активность тканевого фактора по методике, описанной М. Gauss в J. Biol. Chem., 271, 1996, сс.17629-17634; D. Mechtcheriakova в Blood, 93, 1999, сс.3811-3823. Вкратце анализ проводят следующим образом: клетки, после индукции в течение 4 ч с VEGF (1,5 нМ), ФНО-α (100 ед./мл), С (0,5-2 мкМ), С1Ф (0,5-2 мкМ), соединением А (0,5-2 мкМ) и соединением А-фосфат (0,5-2 мкМ), дважды промывают, после чего собирают в 1 мл коагулирующего буфера (12 мМ ацетата натрия, 7 мМ диэтилбарбитата и 130 мМ хлорида натрия; рН 7,4). 50 мкл ресуспендированных клеток смешивают с 50 мкл нитратной плазмы; время коагуляции определяют после рекальцификации в 50 мкл раствора СаС1₂ (концентрация 20 мМ) при температуре 37°С. Эквиваленты ТФ определяют, используя стандартную кривую, полученную по тромбопластину из мозга кролика.Cells are seeded in 6-well plates at a density of 80-90% and grown overnight. Cells are harvested from the plate and tissue factor activity analyzed according to the method described by M. Gauss in J. Biol. Chem., 271, 1996, pp. 17629-17634; D. Mechtcheriakova in Blood, 93, 1999, pp. 3811-3823. Briefly, the analysis is carried out as follows: cells, after induction for 4 hours with VEGF (1.5 nM), TNF-α (100 units / ml), C (0.5-2 μM), C1F (0.5- 2 μM), compound A (0.5-2 μM) and compound A-phosphate (0.5-2 μM), washed twice, and then collected in 1 ml of coagulating buffer (12 mm sodium acetate, 7 mm diethylbarbitate and 130 mM sodium chloride; pH 7.4). 50 μl of resuspended cells are mixed with 50 μl of nitrate plasma; coagulation time is determined after recalcification in 50 μl of a solution of CaCl ₂ (concentration of 20 mm) at a temperature of 37 ° C. TF equivalents are determined using a standard curve obtained from thromboplastin from the rabbit brain.

Д. Вестерн-блот анализD. Western blot analysis

После различных обработок клетки дважды промывают холодным ФСБ, лизируют в 100 мкл буфера Лэммли, собирают и прогревают в течение 5 мин при температуре 95°С. Полученные в итоге лизаты клеток разделяют путем денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-ПААГ) и переносят на Immobilon Р-мембрану. Мембрану блокируют с помощью ФСБ, содержащего 0,1% твин-20 и 3% снятого молока, в течение 30 мин и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч с первичным антителом, разведенным в блокирующем буфере. Полученную мембрану промывают три раза в течение 5 мин ФСБ, содержащим 0,1% твин-20, и инкубируют с конъюгатом вторичного антитела с пероксидазой в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывания мембрану инкубируют в течение 1 мин с реагентом ECL (реагент для электрогенерированной хемилюминесценции) и экспонируют пленку в течение времени, достаточного для получения результата. Для повторного исследования с другим антителом мембрану дважды промывают в ФСБ, десорбируют в течение 30 мин при 55°С с десорбирующим буфером (62,5 мМ трис-HCl, рН 6,8, 2% SDS, 100 мМ 2-меркаптоэтанол) и промывают ФСБ три раза в течение 5 мин при комнатной температуре. После каждого иммунологического анализа мембраны хранят влажными, завернутыми в саран (SaranWrap), при 4°С.After various treatments, the cells are washed twice with cold FSB, lysed in 100 μl of Laemmli buffer, collected and heated for 5 min at a temperature of 95 ° C. The resulting cell lysates were separated by denaturing polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) and transferred to an Immobilon P membrane. The membrane is blocked using PBS containing 0.1% tween-20 and 3% skim milk for 30 minutes and incubated at room temperature for 1 hour with the primary antibody diluted in blocking buffer. The resulting membrane was washed three times for 5 min with PBS containing 0.1% tween-20 and incubated with a conjugate of a secondary antibody with peroxidase for 1 h at room temperature. After washing, the membrane is incubated for 1 min with ECL reagent (reagent for electro-generated chemiluminescence) and the film is exposed for a time sufficient to obtain a result. For re-testing with another antibody, the membrane is washed twice in PBS, stripped for 30 minutes at 55 ° C with stripping buffer (62.5 mM Tris-HCl, pH 6.8, 2% SDS, 100 mM 2-mercaptoethanol) and washed FSB three times for 5 min at room temperature. After each immunological analysis, the membranes are kept moist, wrapped in saran (SaranWrap), at 4 ° C.

Анализ ангиогенеза на матригеле in vitroIn vitro Matrigel Angiogenesis Assay

Морфогенез эндотелиальных клеток, заключающийся в образовании капилляроподобных структур, проводят на матрице матригеля с редуцированным количеством фактора роста (фирма BD Bioscience) в соответствии с инструкцией по применению. Вкратце анализ проводят следующим образом: ЭКПВЧ обрабатывают трипсином, ресуспендируют в бессывороточной среде М199, содержащей соевый ингибитор трипсина (1 мг/мл, фирма Sigma). После центрифугирования клетки ресуспендируют в бессывороточной среде, доводя до плотности 0,5×10⁵ клеток/мл, и клеточную суспензию высевают в 96-луночные планшеты для культур клеток (фирма Costar, Corning Incorporated), в которые предварительно вносят по 50 мкл матригеля без/с различными стимуляторами: VEGF в концентрации 1,5 нМ, С1Ф в концентрации 0,1-2 мкМ, С в концентрации 0,5-2 мкМ, соединение А в концентрации 0,5-2 мкМ и соединение А-фосфат в концентрации 0,1-2 мкМ. Через 8 ч клетки на матригеле фиксируют 3% раствором формальдегида в ФСБ и хранят при температуре 4°С. Результаты оценивают количественно по изображениям, сделанным с помощью микроскопа «Nikon Diaphot», оснащенным охлаждаемой камерой с многозарядным устройством (фирма Kappa GmbH, Gleichen, Германия), путем прямого подсчета точек ветвления в двух полях зрения микроскопа по каждой лунке в двукратной повторности.Morphogenesis of endothelial cells, which consists in the formation of capillary-like structures, is carried out on a Matrigel matrix with a reduced amount of growth factor (BD Bioscience) in accordance with the instructions for use. Briefly, the analysis is carried out as follows: EHEC is treated with trypsin, resuspended in serum-free M199 medium containing a soybean trypsin inhibitor (1 mg / ml, Sigma). After centrifugation, the cells were resuspended in serum-free medium, adjusted to a density of 0.5 × 10 ⁵ cells / ml, and the cell suspension was plated in 96-well cell culture plates (Costar, Corning Incorporated), in which 50 μl of Matrigel was previously added without / with various stimulants: VEGF at a concentration of 1.5 nM, C1F at a concentration of 0.1-2 μM, C at a concentration of 0.5-2 μM, compound A at a concentration of 0.5-2 μM and compound A-phosphate at a concentration 0.1-2 μM. After 8 hours, the cells on matrigel are fixed with a 3% solution of formaldehyde in PBS and stored at 4 ° C. The results are quantified by images taken with a Nikon Diaphot microscope equipped with a cooled chamber with a multiply charged device (Kappa GmbH, Gleichen, Germany) by directly counting the branch points in two fields of the microscope for each well in duplicate.

Е. Анализ in vitro на матригеле формирования трубочек (капилляроподобных структур) в результате морфогенеза эндотелиальных клеток вследствие индукции соединением А-фосфат и возможное участие в этом процессе G_i-опосредованного сигнального метаболического пути (или путей)E. In vitro analysis of matrigel formation of tubules (capillary-like structures) as a result of morphogenesis of endothelial cells due to induction of A-phosphate and the possible participation in this process of a G _i- mediated signaling metabolic pathway (or pathways)

Эффект соединения А и соединения А-фосфат на морфогенетическую дифференциацию эндотелиальных клеток определяют с использованием анализа ангиогенеза in vitro на матригеле. Морфогенез эндотелиальных клеток представляет собой сложный процесс, который требует взаимодействий клетки с внеклеточным матриксом, сопровождаемый реконструкцией матрикса, индуцированной миграцией, межклеточными взаимодействиями, и периваскулярным протеолизом. Как показано на фиг.1, соединение А-фосфат в большой степени может активировать образование капилляроподобной сети колоколообразным дозозависимым способом, показывающим максимальную активность вблизи концентрации 0,5 мкМ. Количество точек ветвления в поле зрения микроскопа, которое отражает индукционную потенцию стимула, сравнимо для соединения А-фосфат и С1Ф, и может значительно превышать эффекты, инициируемые VEGF. Само по себе соединение А в концентрации 0,5-1 мкМ имеет слабое, по сравнению с соединением А-фосфат, но последовательно повышающееся действие. Ни соединение А-фосфат, ни соединение А в концентрации 0,5-1 мкМ не ослабляют реконструкцию, опосредованную VEGF, но даже скорее взаимодействуют с полипептидным фактором роста (см., например, фиг.2). Более того, образование трубочек, стимулируемое соединением А-фосфат или С1Ф, полностью ингибируется коклюшным токсином (КТ, 50 нг/мл), ингибитором гетеротримерных G-белков α_i/o-типа. Это можно интерпретировать как возможное вовлечение EDG-1 (С1Ф₁ рецептор-опосредованных сигнальных действий в стимулируемые соединением А-фосфат биологические ответы (см., например, фиг.3). Сфингозин в концентрации 1 мкМ, который сам, по-видимому, является менее активным, чем С1Ф, ослабляет способность и С1Ф, и соединения А-фосфат индуцировать капилляроподобные структуры, без проявления ингибирующего действия на образование трубочек, индуцируемое VEGF (см., например, фиг.4). В этом отношении, сфингозин ведет себя иначе, чем соединение А. Эти данные указывают на то, что равновесие между сфингозином и С1Ф, по-видимому, является крайне важным для активации эндотелиальных клеток/ангиогенеза, наиболее вероятно, через семейство EDG-рецепторов. Существенно то, что высокие концентрации сфингозина и соединения А (2-5 мкМ) ингибируют VEGF-инициируемое образование трубочек. Эти данные говорят о двухфазном дозозависимом воздействии соединения А и соединения А-фосфат на ангиогенез in vitro.The effect of compound A and compound A-phosphate on the morphogenetic differentiation of endothelial cells is determined using an in vitro angiogenesis assay on matrigel. Endothelial cell morphogenesis is a complex process that requires cell interactions with the extracellular matrix, accompanied by matrix reconstruction induced by migration, intercellular interactions, and perivascular proteolysis. As shown in FIG. 1, the A-phosphate compound to a large extent can activate the formation of a capillary-like network in a bell-shaped dose-dependent manner, showing maximum activity near a concentration of 0.5 μM. The number of branch points in the field of view of the microscope, which reflects the induction potential of the stimulus, is comparable for the compound A-phosphate and C1P, and can significantly exceed the effects initiated by VEGF. By itself, compound A at a concentration of 0.5-1 μM has a weak, compared with compound A-phosphate, but consistently increasing effect. Neither compound A-phosphate nor compound A at a concentration of 0.5-1 μM attenuates VEGF-mediated reconstruction, but even more likely interacts with the polypeptide growth factor (see, for example, FIG. 2). Moreover, the formation of tubules stimulated by the compound A-phosphate or C1F is completely inhibited by pertussis toxin (CT, 50 ng / ml), an inhibitor of heterotrimeric α _{i / o} type proteins. This can be interpreted as a possible involvement of EDG-1 (C1F ₁ receptor-mediated signaling in the A-phosphate-stimulated biological responses (see, for example, FIG. 3). Sphingosine at a concentration of 1 μM, which itself is apparently less active than C1P, it weakens the ability of both C1P and A-phosphate compounds to induce capillary-like structures, without exhibiting an inhibitory effect on tube formation induced by VEGF (see, for example, figure 4). In this regard, sphingosine behaves differently, than compound A. These data have suggest that the balance between sphingosine and C1P appears to be crucial for activation of endothelial cells / angiogenesis, most likely through the EDG receptor family. It is significant that high concentrations of sphingosine and compound A (2-5 μM) inhibit VEGF-induced tube formation, which suggests a two-phase dose-dependent effect of compound A and compound A-phosphate on in vitro angiogenesis.

Ж. Активация ERK1/2 МАР-киназ соединением А-фосфатG. Activation of ERK1 / 2 MAP kinases by A-phosphate compound

Сигнальная трансдукция посредством МАР-киназ играет ключевую роль в осуществлении различных функций эндотелиальных клеток. Обработка ЭКПВЧ соединением А-фосфат в концентрации 0,5 мкМ может вызвать временную активацию ERK1/2, с пиком фосфорилирования/активации на 10-й минуте и возвратом к исходному уровню на 20-й минуте (см. фиг.5). При этом в ЭКПВЧ не обнаруживают активации соединением А-фосфат р38-киназы и JNK1/2. Более того, соединение А-фосфат может инициировать активацию ERK1/2 дозозависимым способом, показывая наибольшую активность при концентрации 2 мкМ. Эти данные противоположны результатам анализа образования трубочек, где соединение А-фосфат в концентрации 2 мкМ может проявлять меньшую активность, чем в концентрации 0,5 мкМ. Ни соединение А, ни сфингозин не способны индуцировать активацию МАР-киназы в эндотелиальных клетках в кинетическом диапазоне обработки от 5 минут до 60 минут. Чтобы оценить возможную роль воспалительной /NFκВ-зависимой программы в биологических ответах эндотелиальных клеток, стимулируемых соединением А-фосфат, повторно исследуют мембраны с антителами к IκВ. Обработка соединением А-фосфат не влияет на уровень IκВ. Более того, обработка эндотелиальных клеток соединением А-фосфат вероятно не индуцирует экспрессию Е-селектина как NFκВ-зависимого вторичного ответного гена. Таким образом, эти данные убедительно указывают на то, что подача сигнала соединением А-фосфат невовлекает NFκВ-активацию - главный каскад в острой воспалительной реакции в эндотелиальных клетках.Signal transduction via MAP kinases plays a key role in the implementation of various functions of endothelial cells. Treatment with an UHF compound of A-phosphate at a concentration of 0.5 μM can cause a temporary activation of ERK1 / 2, with a peak phosphorylation / activation at 10 minutes and a return to baseline at 20 minutes (see FIG. 5). In this case, the activation of the compound A-phosphate p38 kinase and JNK1 / 2 is not detected in the UHEC. Moreover, compound A-phosphate can initiate the activation of ERK1 / 2 in a dose-dependent manner, showing the highest activity at a concentration of 2 μM. These data are the opposite of the results of analysis of the formation of tubes, where the compound A-phosphate at a concentration of 2 μM may be less active than at a concentration of 0.5 μM. Neither compound A nor sphingosine is able to induce the activation of MAP kinase in endothelial cells in the kinetic range of treatment from 5 minutes to 60 minutes. In order to evaluate the possible role of the inflammatory / NFκB-dependent program in the biological responses of endothelial cells stimulated by the A-phosphate compound, membranes with antibodies to IκB are re-examined. Treatment with compound A-phosphate does not affect the level of IκB. Moreover, treatment of endothelial cells with A-phosphate compound probably does not induce expression of E-selectin as an NFκB-dependent secondary response gene. Thus, these data convincingly indicate that signaling with the A-phosphate compound does not involve NFκB activation, the main cascade in the acute inflammatory response in endothelial cells.

З. Соединения А и А-фосфат не индуцируют экспрессии тканевого фактора на эндотелиальных клетках.H. Compounds A and A-phosphate do not induce tissue factor expression on endothelial cells.

Важной отличительной особенностью как классического индуктора воспаления ФНО-α, так и главного ангиогенного фактора роста VEGF, на эндотелиальных клетках является их способность к усилению тканевого фактора. Исследовали способность соединения А, соединения А-фосфат, сфингозина и С1Ф также индуцировать тканевой фактор на ЭКПВЧ. Полученные данные показывают, что ни одно из этих соединений, ни в одиночку, ни в комбинациях, не может повышать активность тканевого фактора (см., например, фиг.6). Соединение А и соединение А-фосфат могут в небольшой степени усиливать тканевой фактор, индуцированный VEGF, но не ФНО-α. Вместе, полученные данные указывают на то, что соединение А, соединение А-фосфат, сфингозин и С1Ф по механизму действия отличаются от ангиогенного VEGF и индуцирующего воспаление ФНО-α.An important distinguishing feature of both the classic inducer of TNF-α inflammation and the main angiogenic growth factor VEGF on endothelial cells is their ability to enhance tissue factor. The ability of Compound A, Compounds A-phosphate, sphingosine, and C1F to also induce tissue factor on EHF was investigated. The data obtained show that none of these compounds, alone or in combination, can increase the activity of tissue factor (see, for example, Fig.6). Compound A and compound A-phosphate can slightly enhance tissue factor induced by VEGF, but not TNF-α. Together, the data obtained indicate that compound A, compound A-phosphate, sphingosine and C1F differ in the mechanism of action from angiogenic VEGF and inflammation-inducing TNF-α.

И. Способность агонистов С1Ф-рецептора к связыванию с отдельными С1Ф-рецепторами человека можно установить в следующих испытаниях:I. The ability of the C1P receptor agonists to bind to individual human C1P receptors can be established in the following tests:

Временная трансфекция С1Ф-рецепторов человека в клетки НЕК293Temporary transfection of human C1P receptors into HEK293 cells

Проводят клонирование EDG-рецепторов и С_i-белков, смешивают равные количества 4-х кДНК: EDG-рецептора, G_i-α, G_i-β и Gi-γ; полученную смесь используют для трансфекции монослойных культур клеток НЕК293, для чего применяют метод преципитации фосфатом кальция (M.Wigler и др. в Cell., 11, 1977, с.223; DS. Im и др. в Mol. Pharmacol., 57, 2000, с.753). Вкратце метод заключается в следующем: смесь ДНК, содержащую 25 мкг ДНК и 0,25 М СаСl, добавляют к раствору 2 мМ Na₂HPO₄ в HEPES-буфере. Субконфлюэнтные монослои клеток НЕК293 протравливают 25 мМ хлорохином и затем осадок ДНК наносят на клетки. Спустя 4 ч монослои отмывают физиологическим раствором с фосфатным буфером и добавляют питательную среду (90% 1:1 модифицированная по Dulbecco основная среда (DMEM):F-12+10% фетальная телячья сыворотка). Спустя 48-72 ч после добавления ДНК клетки собирают, смывая их НМЕ-буфером (в мМ: 20 HEPES, 5MgCl₂, 1 ЭДТА, рН 7,4), содержащем 10% сахарозы, на льду, и гомогенизируют с помощью гомогенизатора Даунса. После центрифугирования при 800 g супернатант разводят НМЕ без сахарозы и центрифугируют при 100000 g в течение 1 ч. Образовавшийся осадок повторно гомогенизируют и центрифугируют в течение еще одного часа при 100000 g. Полученный грубый осадок мембран ресуспендируют в НМЕ с сахарозой, делят на аликвоты и быстро замораживают путем погружения в жидкий азот. Мембраны хранят при температуре -70°С. Концентрацию белка определяют спектроскопическим анализом белков по Bradford.Cloning of EDG receptors and C _i proteins is carried out, equal amounts of 4 cDNAs are mixed: EDG receptor, G _i -α, G _i -β and Gi-γ; the resulting mixture is used to transfect monolayer cultures of HEK293 cells, for which the calcium phosphate precipitation method is used (M.Wigler et al. in Cell., 11, 1977, p. 223; DS. Im et al. in Mol. Pharmacol., 57, 2000, p. 753). Briefly, the method is as follows: a mixture of DNA containing 25 μg of DNA and 0.25 M CaCl is added to a solution of 2 mM Na ₂ HPO ₄ in HEPES buffer. Subconfluent monolayers of HEK293 cells are etched with 25 mM chloroquine and then a DNA pellet is applied to the cells. After 4 hours, the monolayers are washed with saline with phosphate buffer and culture medium is added (90% 1: 1 Dulbecco modified basic medium (DMEM): F-12 + 10% fetal calf serum). 48-72 hours after the addition of DNA, cells were collected by washing them with NME buffer (in mM: 20 HEPES, 5MgCl ₂ , 1 EDTA, pH 7.4) containing 10% sucrose on ice and homogenized using a Downes homogenizer. After centrifugation at 800 g, the supernatant was diluted with HME without sucrose and centrifuged at 100,000 g for 1 h. The resulting precipitate was re-homogenized and centrifuged for another hour at 100,000 g. The resulting coarse membrane pellet was resuspended in NME with sucrose, aliquoted and rapidly frozen by immersion in liquid nitrogen. Membranes are stored at a temperature of -70 ° C. Protein concentration is determined by spectroscopic analysis of proteins according to Bradford.

Анализ связывания ГТФγS с использованием С1Ф-рецепторных / НЕК293 мембранных препаратовGTPγS Binding Assay Using C1P Receptor / HEK293 Membrane Preparations

Исследования связывания ГТФγS проводят по методике, описанной DS. Im и др. в Mol. Pharmacol., 57, 2000, с.753. Лиганд-опосредованное связывание ГТФγS с G-белками оценивают в ГТФ-связывающем буфере (в мМ: 50 HEPES, 100 NaCl, 10 MgCl₂, рН 7,5), используя 25 мкг препарата мембран клеток НЕК293, подвергнутых временной трансфекции. Лиганд добавляют к мембранам в присутствии 10 мкМ ГДФ и 0,1 нМ [³⁵S] ГТФγS (1200 Ки/ммоль) и инкубируют при 30°С в течение 30 мин. Связанный ГТФγS отделяют от несвязанного, используя сборник фирмы Brandel (Гейтерсберг, Мэриленд, США), и считают с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика.GTPγS binding studies are carried out according to the method described by DS. Im et al. In Mol. Pharmacol., 57, 2000, p. 753. Ligand-mediated binding of GTPγS to G proteins was evaluated in a GTP binding buffer (in mM: 50 HEPES, 100 NaCl, 10 MgCl ₂ , pH 7.5) using 25 μg transient transfection of HEK293 cell membranes. The ligand is added to the membranes in the presence of 10 μM HDF and 0.1 nM [ ³⁵ S] GTPγS (1200 Ci / mmol) and incubated at 30 ° C for 30 minutes. Bound GTPγS is separated from unbound using a Brandel digest (Gaithersburg, Maryland, USA) and counted using a liquid scintillation counter.

Claims (11)

1. Применение агониста рецептора сфингозин-1-фосфата, выбранного из 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диола (FTY720), в свободной форме, в форме фармацевтически приемлемой соли или FТY720-фосфата, для приготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения лимфопролиферативного или миелопролиферативного расстройства, где лекарственное средство вводится вместе с химиотерапевтическим средством.1. The use of a sphingosine-1-phosphate receptor agonist selected from 2-amino-2- [2- (4-octylphenyl) ethyl] propan-1,3-diol (FTY720), in free form, in the form of a pharmaceutically acceptable salt or FTY720-phosphate, for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of lymphoproliferative or myeloproliferative disorder, wherein the medicament is administered together with a chemotherapeutic agent. 2. Применение по п.1, где лимфопролиферативное расстройство является опухолями крови или лимфатической системы.2. The use according to claim 1, where the lymphoproliferative disorder is a tumor of the blood or lymphatic system. 3. Применение по п.1, где миелопролиферативное расстройство является миелоидными опухолями.3. The use according to claim 1, where the myeloproliferative disorder is myeloid tumors. 4. Применение по любому из предшествующих пунктов, где лекарственное средство вводится периодически.4. The use according to any one of the preceding paragraphs, where the drug is administered periodically. 5. Применение по любому из предшествующих пунктов, где агонистом рецептора сфингозин-1-фосфата является 2-амино-2-[2-(4-октил-фенил)этил]пропан-1,3-диол в свободной форме, в форме фармацевтически приемлемой соли.5. The use according to any one of the preceding paragraphs, where the sphingosine-1-phosphate receptor agonist is 2-amino-2- [2- (4-octyl-phenyl) ethyl] propan-1,3-diol in free form, in the form of a pharmaceutically acceptable salt. 6. Применение по любому из предшествующих пунктов, где агонистом рецептора сфингозин-1-фосфата является гидрохлорид 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диола.6. The use according to any one of the preceding claims, wherein the sphingosine-1-phosphate receptor agonist is 2-amino-2- [2- (4-octylphenyl) ethyl] propane-1,3-diol hydrochloride. 7. Применение по любому из предшествующих пунктов, где лекарственное средство вводится одновременно или последовательно с химиотерапевтическим средством.7. The use according to any one of the preceding paragraphs, where the drug is administered simultaneously or sequentially with a chemotherapeutic agent. 8. Применение по любому из предшествующих пунктов, где химиотерапевтическое средство выбирается из
i. ингибитора ароматазы,
ii. антиэстрогена, антиандрогена или агониста гонадорелина,
iii. ингибитора топоизомеразы I или ингибитора топоизомеразы II,
iv. средства, активного в отношении микротрубочек, алкилирующего средства, противоопухолевого антиметаболита или соединения платины,
v. соединения, связывающего/понижающего активность протеин- или липидкиназы или активность протеин- или липидфосфатазы, другого антиангиогенного соединения или соединения, которое индуцирует процессы клеточной дифференциации,
vi. рецептора брадикинина 1 или антагониста ангиотензина II,
vii. ингибитора циклооксигеназы, дифосфоната, ингибитора гистондезацетилазы, ингибитора гепараназы, модификатора биологического ответа, ингибитора многих мишеней, или ингибитора, который блокирует антиапоптозные метаболические пути,
viii. ингибитора Ras-онкогенных изоформ,
ix. ингибитора теломеразы,
х. ингибитора протеазы, ингибитора металлопротеиназы матрикса, ингибитора метионинаминопептидазы, или ингибитора протеосом, и/или
xi. mTOR-ингибитора.8. The use according to any one of the preceding paragraphs, where the chemotherapeutic agent is selected from
i. aromatase inhibitor
ii. anti-estrogen, anti-androgen or gonadorelin agonist,
iii. topoisomerase I inhibitor or topoisomerase II inhibitor,
iv. an agent active against microtubules, an alkylating agent, an antitumor antimetabolite, or a platinum compound,
v. a compound that binds / reduces the activity of protein or lipid kinase or the activity of protein or lipid phosphatase, another antiangiogenic compound or compound that induces cell differentiation processes,
vi. bradykinin 1 receptor or angiotensin II antagonist,
vii. cyclooxygenase inhibitor, diphosphonate, histone deacetylase inhibitor, heparanase inhibitor, biological response modifier, many target inhibitor, or an inhibitor that blocks antiapoptotic metabolic pathways,
viii. an inhibitor of Ras oncogenic isoforms,
ix. telomerase inhibitor
x a protease inhibitor, a matrix metalloproteinase inhibitor, a methionine aminopeptidase inhibitor, or a proteosome inhibitor, and / or
xi. mTOR inhibitor. 9. Применение по п.8, где химиотерапевтическое средство выбирается из бусульфана, цитарабина, 6-тиогуанина, флударабина, гидроксимочевины, прокарбазина, блеомицина, метотрексата, ингибитора топоизомеразы II или соединения, которое связывает, понижает или ингибирует активность рецепторов фактора роста тромбоцитов (PDGFR) или представителей семейства с-Аbl и продуктов слияния их генов, и где применение используется для лечения или предупреждения опухолей крови или лимфатической системы.9. The use of claim 8, where the chemotherapeutic agent is selected from busulfan, cytarabine, 6-thioguanine, fludarabine, hydroxyurea, procarbazine, bleomycin, methotrexate, a topoisomerase II inhibitor, or a compound that binds, lowers or inhibits the activity of platelet growth factors PD ( ) or representatives of the c-Аbl family and fusion products of their genes, and where the use is used to treat or prevent blood tumors or the lymphatic system. 10. Применение агониста рецептора сфингозин-1-фосфата 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диола в свободной форме, в форме фармацевтически приемлемой соли или FТY720-фосфата для получения лекарственного средства для лечения солидной опухоли или ингибирования роста солидных опухолей, при условии, что опухоль является отличной от опухоли груди, простаты, мочевого пузыря, почки или легкого.10. Use of a 2-amino-2- [2- (4-octylphenyl) ethyl] propane-1,3-diol sphingosine 1-phosphate receptor agonist in free form, in the form of a pharmaceutically acceptable salt or FTY720-phosphate, for the manufacture of a medicament for treating a solid tumor or inhibiting the growth of solid tumors, provided that the tumor is different from a tumor of the breast, prostate, bladder, kidney or lung. 11. Применение агониста рецептора сфингозин-1-фосфата 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диола в свободной форме, в форме фармацевтически приемлемой соли для приготовления лекарственного средства для лечения инвазивности солидных опухолей или симптомов, связанных с таким опухолевым ростом, предотвращения метастатического распространения опухолей или предотвращения, или ингибирования роста микрометастаза при условии, что опухоль является отличной от опухоли груди, простаты, мочевого пузыря, почки или легкого. 11. The use of a sphingosine-1-phosphate receptor agonist of 2-amino-2- [2- (4-octylphenyl) ethyl] propane-1,3-diol in free form, in the form of a pharmaceutically acceptable salt, for the preparation of a medicament for the treatment of solid invasiveness tumors or symptoms associated with such tumor growth, preventing the metastatic spread of tumors, or preventing or inhibiting the growth of micrometastasis, provided that the tumor is different from a tumor in the breast, prostate, bladder, kidney, or lung.

Images