ES2338305T3 - TREATMENT METHOD THAT USES BINDING-IMMUNOGEN CONJUGATES. - Google Patents

Abstract

A method and pharmaceutical composition are provided for enhancing the endogenous immune response-mediated elimination of a population of pathogenic cells in a host animal wherein the pathogenic cells preferentially express, uniquely express or overexpress a binding site for a particular ligand. The invention comprises administering to a host animal harboring the population of pathogenic cells the ligand conjugated to an immunogen capable of activating a toll-like receptor. At least one additional therapeutic factor can be administered wherein the therapeutic factor is a compound capable of stimulating an endogenous immune response wherein the compound does not bind to the ligand-immunogen conjugate

Description

Método de tratamiento que utiliza conjugados ligando-inmunógeno.Treatment method that uses conjugates ligand-immunogen.

Sector de la invenciónInvention Sector

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para su utilización en el tratamiento de estados patológicos caracterizados por la existencia de poblaciones de células patogénicas. Más particularmente, se administran complejos ligando-inmunógeno dirigidos a células a un huésped patológico, opcionalmente en combinación con un estimulador del sistema inmune, para aumentar y/o redirigir las respuestas inmunes del huésped a las células patogénicas.The present invention relates to a pharmaceutical composition for use in the treatment of pathological states characterized by the existence of populations of pathogenic cells. More particularly, they are administered ligand-immunogen complexes targeting cells at a pathological host, optionally in combination with a immune system stimulator, to increase and / or redirect Host immune responses to pathogenic cells.

Antecedentes y características de la invenciónBackground and characteristics of the invention

El sistema inmune de los mamíferos proporciona un medio para el reconocimiento y la eliminación de células tumorales, otras células patogénicas y la invasión de patógenos exógenos. Aunque el sistema inmune proporciona normalmente una línea fuerte de defensa, existen aún muchos casos en los que las células cancerosas, otras células patogénicas, o agentes infecciosos, eluden una respuesta inmune del huésped y proliferan o persisten con la patogenicidad concomitante del huésped. Se han desarrollado agentes quimioterapéuticos y terapias con radiación para eliminar neoplasmas replicantes. Sin embargo, la mayoría de los agentes quimioterapéuticos, si no todos, disponibles actualmente y los regímenes de terapia con radiación presentan efectos secundarios adversos ya que no sólo trabajan para destruir células cancerosas, sino también afectan a células huésped normales, tales como células del sistema hematopoyético. Además, los agentes quimioterapéuticos tienen una eficacia limitada en casos en los que se desarrolla resistencia del huésped al fármaco.The mammalian immune system provides a means for the recognition and elimination of cells tumor, other pathogenic cells and invasion of pathogens exogenous Although the immune system normally provides a strong line of defense, there are still many cases in which cancer cells, other pathogenic cells, or agents infectious, elude an immune response from the host and proliferate or persist with concomitant pathogenicity of the host. They have developed chemotherapeutic agents and radiation therapies to eliminate replicating neoplasms. However, most of the chemotherapeutic agents, if not all, currently available and radiation therapy regimens have side effects  Adverse because they not only work to destroy cancer cells, but also affect normal host cells, such as cells of the hematopoietic system. In addition, chemotherapeutic agents they have limited efficacy in cases in which it develops host resistance to the drug.

Los patógenos exógenos también pueden proliferar en un huésped evitando una respuesta inmune competente o cuando el sistema inmune del huésped se ha comprometido por terapias con fármacos o por otros problemas de salud. Aunque se han desarrollado muchos compuestos terapéuticos, muchos patógenos son o se vuelven resistentes a dichos agentes terapéuticos. La capacidad de las células cancerosas y los organismos infecciosos de desarrollar resistencia a los agentes terapéuticos, y los efectos secundarios adversos de los fármacos anticáncer disponibles actualmente, destacan la necesidad de desarrollar nuevas terapias específicas para poblaciones de células patogénicas con una toxicidad menor para el huésped.Exogenous pathogens can also proliferate in a host avoiding a competent immune response or when the Host immune system has been compromised by therapies with drugs or other health problems. Although they have developed many therapeutic compounds, many pathogens are or become resistant to said therapeutic agents. The capacity of cancer cells and infectious organisms to develop resistance to therapeutic agents, and side effects adverse effects of currently available anti-cancer drugs, highlight the need to develop new specific therapies for pathogenic cell populations with a lower toxicity for the guest

Los investigadores han desarrollado protocolos terapéuticos para destruir células cancerosas dirigiendo compuestos citotóxicos específicamente a dichas células. Estos protocolos utilizan toxinas conjugadas a ligandos que se unen a receptores únicos para las células cancerosas o sobreexpresadas por éstas en un intento por minimizar la liberación de la toxina a células normales. Utilizando esta estrategia, se han desarrollado ciertas inmunotoxinas que consisten en anticuerpos dirigidos a receptores específicos en células patogénicas, estando los anticuerpos unidos a toxinas, tales como ricina, exotoxina de Pseudomonas, toxina de la difteria y el factor de necrosis tumoral. Estas inmunotoxinas reconocen células tumorales que transportan los receptores específicos reconocidos por el anticuerpo (Olsnes, S., Immunol. Today, 10, págs. 291-295, 1989; Melby, E.L., Cancer Res., 53 (8), págs. 1755-1760, 1993; Better, M.D., Publicación PCT No. WO 91/07418, publicada el 30 de mayo de 1991).Researchers have developed protocols Therapeutics to destroy cancer cells by directing compounds cytotoxic specifically to said cells. These protocols use toxins conjugated to ligands that bind to receptors unique to cancer cells or overexpressed by them in a attempt to minimize the release of the toxin to cells normal. Using this strategy, certain immunotoxins consisting of antibodies directed at receptors specific in pathogenic cells, the antibodies being bound to toxins, such as ricin, Pseudomonas exotoxin, toxin from the Diphtheria and tumor necrosis factor. These immunotoxins recognize tumor cells that carry receptors specific antibodies recognized by the antibody (Olsnes, S., Immunol. Today, 10, p. 291-295, 1989; Melby, E.L., Cancer Res., 53 (8), p. 1755-1760, 1993; Better, M.D., PCT Publication No. WO 91/07418, published May 30, 1991).

Otra estrategia para el reconocimiento selectivo de poblaciones de células cancerosas o patógenos exógenos en un huésped es aumentar la respuesta inmune del huésped contra las células patogénicas, evitando de este modo la necesidad de administrar compuestos que también pueden mostrar una toxicidad independiente para el huésped. Una estrategia divulgada para la inmunoterapia es la de unir anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos multiméricos diseñados genéticamente, a la superficie de la célula tumoral para expresar la región constante de los anticuerpos en la superficie celular e inducir, de este modo, la citólisis de la célula tumoral mediante diversos procesos mediados por el sistema inmune (De Vita, V.T., Biologic Therapy of Cancer (Terapia biológica del cáncer), 2a ed. Philadelphia, Lippincott, 1995; Soulillou, J.P., patente de Estados Unidos No. 5.672.486). Sin embargo, esta estrategia se ha complicado por las dificultades en la definición de antígenos específicos para tumores. Otra estrategia que depende de la competencia inmune del huésped es dirigir un anticuerpo anti-receptor de células T o anticuerpos anti-receptor Fc a las superficies de células tumorales para promover la unión directa de las células inmunes a los tumores (Kranz, D. M., patente de Estados Unidos No. 5.547.668). También se ha descrito una estrategia basada en vacunas que depende de una vacuna que comprende antígenos fusionados a citoquinas, modificando la citoquina la inmunogenicidad del antígeno de la vacuna y, de este modo, estimulando la respuesta inmune al agente patogénico (Pillai, S., Publicación PCT No. WO 91/11146, publicada el 7 de febrero de 1991). Este método depende de la modulación indirecta de la respuesta inmune descrita. Otra estrategia para la citólisis de poblaciones de células no deseadas utiliza IL-1 o fragmentos de Fab de globulina anti-timocito unida a antígenos para eliminar las células T no deseadas; sin embargo, en base a los datos experimentales descritos, el método parece eliminar sólo el 50% de la población de células reconocidas y da lugar a una citólisis no específica in vivo (es decir, el 50% de los linfocitos de la sangre periférica que no son células T también mueren (Pouletty, P., Publicación PCT No. WO 97/37690, publicada de 16 de octubre de 1997). De este modo, aún existe una necesidad significativa de terapias dirigidas al tratamiento de estados patológicos caracterizados por la existencia de poblaciones de células patogénicas en un huésped afectado.Another strategy for selective recognition of populations of cancerous cells or exogenous pathogens in a host is to increase the host's immune response against pathogenic cells, thus avoiding the need for administer compounds that may also show toxicity independent for the guest. A strategy disclosed for the immunotherapy is to bind antibodies, for example, antibodies genetically engineered multimerics, to the surface of the cell tumor to express the constant region of antibodies in the cell surface and thus induce the cytolysis of the tumor cell through various processes mediated by the system immune system (De Vita, V.T., Biologic Therapy of Cancer  of cancer), 2nd ed. Philadelphia, Lippincott, 1995; Soulillou, J.P., U.S. Patent No. 5,672,486). However, this strategy has been complicated by difficulties in defining tumor specific antigens. Another strategy that depends on host immune competence is to direct an antibody anti-T cell receptor or antibody anti-Fc receptor to cell surfaces tumor to promote direct binding of immune cells to tumors (Kranz, D. M., U.S. Patent No. 5,547,668). A vaccine-based strategy that depends on of a vaccine comprising antigens fused to cytokines, cytokine modifying the immunogenicity of the antigen of the vaccine and, thus, stimulating the immune response to the agent pathogenic (Pillai, S., PCT Publication No. WO 91/11146, published February 7, 1991). This method depends on the modulation. Indirect immune response described. Another strategy for cytolysis of unwanted cell populations uses IL-1 or globulin Fab fragments antigen-bound anti-thymocyte to eliminate unwanted T cells; however, based on the data Experimental described, the method seems to eliminate only 50% of the population of recognized cells and results in a cytolysis not specific in vivo (i.e. 50% of blood lymphocytes peripheral that are not T cells also die (Pouletty, P., PCT Publication No. WO 97/37690, published October 16, 1997). Thus, there is still a significant need for therapies aimed at the treatment of pathological conditions characterized by the existence of cell populations pathogenic in an affected host.

La inmunidad se puede clasificar como inmunidad innata o adaptativa, siendo la inmunidad adaptativa mediada por las células T y las células B que muestran especificidad y memoria. La respuesta inmune innata es una respuesta inmediata que puede ser mediada por células fagocíticas, células citolíticas naturales, células T, y otras células, y el sistema complemento. Las células fagocíticas, tales como monocitos/macrófagos y células dendríticas (células que presentan antígenos), llevan a cabo funciones duales que incluyen la eliminación y la degradación de agentes infecciosos o antígenos exógenos y la presentación de los componentes de los patógenos ingeridos a células T intactas en el contexto de autoantígenos MHC o de tipo MHC. Las células T intactas reconocen el antígeno exógeno en el contexto de antígenos MHC o de tipo MHC y se diferencian en células T_{H}1 o T_{H}2 maduras que, a continuación, pueden inducir la inmunidad adaptativa.Immunity can be classified as immunity innate or adaptive, being adaptive immunity mediated by T cells and B cells that show specificity and memory. The innate immune response is an immediate response that can be mediated by phagocytic cells, natural cytolytic cells, T cells, and other cells, and the complement system. The cells phagocytic, such as monocytes / macrophages and dendritic cells (cells that have antigens), perform dual functions which include the elimination and degradation of infectious agents or exogenous antigens and the presentation of the components of pathogens ingested to intact T cells in the context of MHC or MHC type autoantigens. Intact T cells recognize the exogenous antigen in the context of MHC or MHC type antigens and they differ in mature TH1 or TH2 cells that, at Then they can induce adaptive immunity.

Las células inmunes que median en la inmunidad innata son capaces de distinguir entre agentes propios y agentes patogénicos mediante la utilización de receptores en la superficie de estas células que reconocen motivos conservados en los patógenos que no están presentes en eucariotas superiores. Una de dichas clases de receptores es la familia de receptores de tipo toll que se conservan entre insectos y humanos y se identificaron por primera vez en Drosophila.Immune cells that mediate innate immunity are able to distinguish between own agents and pathogenic agents by using receptors on the surface of these cells that recognize motifs conserved in pathogens that are not present in higher eukaryotes. One such class of receptors is the family of toll-like receptors that are conserved between insects and humans and were first identified in Drosophila .

La familia de receptores de tipo toll contiene, como mínimo, diez miembros (TLRs 1-10) y los receptores de tipo toll están presentes en la superficie de monocitos/macrófagos y células dendríticas. Los receptores de tipo toll se activan a través del reconocimiento de motivos conservados en los patógenos, pero no se sabe si la activación tiene lugar a través de la unión directa del motivo conservado al receptor de tipo toll o a través de la unión a un receptor de acceso que interacciona con el receptor de tipo toll. La activación de los receptores de tipo toll da lugar a la secreción de citoquinas y la inducción de una respuesta inmune innata en la que las células T intactas se diferencian en células T_{H}1 o T_{H}2. De este modo, los receptores de tipo toll pueden proporcionar una unión crítica entre el reconocimiento inmune innato y la posterior activación de la inmunidad adaptativa.The family of toll-like receptors contains, at least ten members (TLRs 1-10) and toll type receptors are present on the surface of monocytes / macrophages and dendritic cells. Type receivers toll are activated through the recognition of preserved motives in pathogens, but it is not known if activation takes place at through the direct attachment of the conserved motif to the type receptor toll or through the connection to an access receiver that interacts with the toll type receiver. The activation of toll type receptors results in cytokine secretion and the induction of an innate immune response in which T cells intact differentiate into TH1 or TH2 cells. Of this mode, toll type receptors can provide a bond criticism between innate and subsequent immune recognition activation of adaptive immunity.

Las moléculas capaces de activar los receptores de tipo toll pueden ser componentes de agentes patogénicos, tales como dipéptido muramilo, LPS, lipopéptidos, lipoproteínas, peptidoglicano, ácido lipoteicoico, lipoarabinomanano, y Zymosan (un preparado de pared celular de levadura), o pueden ser otras moléculas endógenas a un huésped, tal como fibronectina o proteína de choque térmico. Estas moléculas activan los receptores de tipo toll a través de un proceso de unión directa que promueve la secreción de citoquinas a partir de monocitos/macrófagos y células dendríticas que dan lugar a una respuesta inmune innata, o el receptor de tipo toll se puede activar indirectamente a través de un receptor de acceso.The molecules capable of activating the receptors toll type may be components of pathogenic agents, such as muramyl dipeptide, LPS, lipopeptides, lipoproteins, peptidoglycan, lipoteicoic acid, lipoarabinomannan, and Zymosan (a yeast cell wall preparation), or they can be others endogenous molecules to a host, such as fibronectin or protein of thermal shock. These molecules activate type receptors toll through a direct union process that promotes the cytokine secretion from monocytes / macrophages and cells dendritic that give rise to an innate immune response, or the toll type receiver can be activated indirectly through an access receiver

La presente invención se refiere a la utilización de una composición en un método de eliminación de poblaciones de células patogénicas en un huésped mediante el incremento del reconocimiento del sistema inmune del huésped de dichas poblaciones de células y en respuesta a las mismas. De manera eficaz, se incrementa la antigenicidad de los patógenos celulares para aumentar la eliminación mediada por la respuesta inmune endógena de la población de células patogénicas. El método evita o minimiza la utilización de agentes terapéuticos citotóxicos o antimicrobianos. El método comprende la administración de un conjugado ligando-inmunógeno, en el que el ligando es capaz de unirse específicamente a una población de células patogénicas in vivo que expresa de manera única, preferentemente expresa o sobreexpresa un resto de unión a ligando, y el inmunógeno es una molécula capaz de activar un receptor de tipo toll y es capaz de provocar una respuesta inmune innata en el animal huésped. La eliminación mediada por el sistema inmune de las células patogénicas está dirigida por la unión del componente ligando del conjugado ligando-inmunógeno a un receptor, un transportador, u otra proteína presentada en la superficie expresada de manera única, sobreexpresada o preferentemente expresada por la célula patogénica. Una proteína presentada en la superficie expresada de manera única, sobreexpresada o preferentemente expresada por la célula patogénica es un receptor que no está presente o lo está en cantidades más bajas en células no patogénicas que proporcionan medios para la eliminación selectiva de las células patogénicas. Se puede administrar simultáneamente, como mínimo, un factor terapéutico adicional, por ejemplo, un estimulante del sistema inmune, al animal huésped para aumentar la eficacia
terapéutica.The present invention relates to the use of a composition in a method of eliminating pathogenic cell populations in a host by increasing recognition of the host immune system of said cell populations and in response thereto. Effectively, the antigenicity of cell pathogens is increased to increase the elimination mediated by the endogenous immune response of the pathogenic cell population. The method avoids or minimizes the use of cytotoxic or antimicrobial therapeutic agents. The method comprises the administration of a ligand-immunogen conjugate, in which the ligand is capable of specifically binding to a population of pathogenic cells in vivo that uniquely, preferably expressly or overexpresses a ligand binding moiety, and the immunogen It is a molecule capable of activating a toll-like receptor and is capable of eliciting an innate immune response in the host animal. The immune system-mediated elimination of pathogenic cells is directed by the binding of the ligand component of the ligand-immunogen conjugate to a receptor, a transporter, or other protein presented on the surface expressed uniquely, overexpressed or preferentially expressed by the cell. pathogenic A protein presented on the surface expressed uniquely, overexpressed or preferentially expressed by the pathogenic cell is a receptor that is not present or is in lower amounts in non-pathogenic cells that provide means for the selective elimination of pathogenic cells. At least one additional therapeutic factor, for example, an immune system stimulant, can be administered simultaneously to the host animal to increase efficacy.
therapy.

En una realización, el presente método incluye las etapas de administrar ligandos capaces de una unión in vivo específica de afinidad elevada a proteínas de superficie celular expresadas de manera única, preferentemente expresadas, o sobreexpresadas en la población de células patogénicas reconocidas, estando los ligandos conjugados a inmunógenos capaces de activar un receptor de tipo toll y proporcionar una inmunidad innata en el animal huésped, y administrar simultáneamente, como mínimo, un factor terapéutico que es un activador de la respuesta inmune endógena. En una realización preferente, el método implica administrar una composición de un conjugado ligando-inmunógeno al animal huésped, en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión al receptor de folato (por ejemplo, se pueden utilizar análogos de ácido fólico o un ligando de unión al receptor de folato no relacionado con folato). El ligando se conjuga, por ejemplo, mediante unión covalente, al inmunógeno. Se puede administrar, como mínimo, un factor terapéutico adicional, no capaz de unirse específicamente al complejo ligando-inmunógeno, pero capaz de estimular o aumentar una respuesta inmune endógena, al animal huésped conjuntamente con la administración de los conjugados ligando-inmunógeno.In one embodiment, the present method includes the steps of administering ligands capable of a specific in vivo binding of high affinity to uniquely expressed, preferably expressed, or overexpressed cell surface proteins in the population of recognized pathogenic cells, the ligands being conjugated. to immunogens capable of activating a toll-like receptor and providing innate immunity in the host animal, and simultaneously administering at least one therapeutic factor that is an activator of the endogenous immune response. In a preferred embodiment, the method involves administering a composition of a ligand-immunogen conjugate to the host animal, wherein the ligand is folic acid or another folate receptor binding ligand (for example, folic acid analogs or a folate receptor binding ligand not related to folate). The ligand is conjugated, for example, by covalent binding, to the immunogen. At least one additional therapeutic factor, not capable of specifically binding the ligand-immunogen complex, but capable of stimulating or increasing an endogenous immune response, can be administered to the host animal in conjunction with administration of ligand-immunogen conjugates.

Según otra realización, se da a conocer una composición para su utilización en un método para aumentar la eliminación específica mediada por la respuesta inmune endógena de una población de células patogénicas en un animal huésped que alberga la población en la que los miembros de la población celular presentan un sitio de unión accesible para un ligando. El método comprende la etapa de administrar al huésped una composición de un conjugado ligando-inmunógeno que comprende un complejo del ligando y un inmunógeno, en el que el inmunógeno es un nucleótido y es capaz de activar un receptor de tipo toll y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión a receptor de folato y administrar al huésped, como mínimo, una composición adicional que comprende un factor terapéutico, en el que el factor terapéutico es un compuesto capaz de estimular una respuesta inmune endógena, en el que el compuesto no se une al conjugado ligando-inmunógeno.According to another embodiment, a composition for use in a method to increase the specific elimination mediated by the endogenous immune response of a population of pathogenic cells in a host animal that it houses the population in which the members of the cell population present an accessible binding site for a ligand. The method it comprises the step of administering to the host a composition of a ligand-immunogen conjugate comprising a ligand complex and an immunogen, in which the immunogen is a nucleotide and is able to activate a toll-like receptor and in the that the ligand is folic acid or another receptor binding ligand of folate and administer to the host at least one composition additional comprising a therapeutic factor, in which the factor therapeutic is a compound capable of stimulating an immune response endogenous, in which the compound does not bind to the conjugate ligand-immunogen.

En una realización preferente, se da a conocer una composición para utilizar en un método para aumentar la eliminación específica mediada por la respuesta inmune endógena de una población de células patogénicas en un animal huésped que alberga la población, en el que la población expresa preferentemente, expresa de manera única, o sobreexpresa un receptor de folato. El método comprende la etapa de administrar al huésped una composición que comprende un ligando unido covalentemente a un inmunógeno, en el que el inmunógeno nucleótido es capaz de activar un receptor de tipo toll y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión al receptor de folato.In a preferred embodiment, it is disclosed a composition to use in a method to increase the specific elimination mediated by the endogenous immune response of a population of pathogenic cells in a host animal that it houses the population, in which the population expresses preferably, express uniquely, or overexpress a folate receptor The method comprises the step of administering to host a composition comprising a bound ligand covalently to an immunogen, in which the nucleotide immunogen is able to activate a toll-like receptor and in which the ligand it is folic acid or another folate receptor binding ligand.

En otra realización, la población de células patogénicas reconocidas es una población de células cancerosas. En otra realización, la población de células reconocidas son células infectadas por virus. En otra realización, la población de células reconocidas es una población de organismos exógenos, tales como bacterias, micoplasmas, levaduras u hongos. En otra realización, la población de células reconocidas es una población de macrófagos activados que media en un estado patológico. El conjugado ligando-inmunógeno se une a la superficie de las células tumorales o de los organismos patogénicos y "marca" los miembros celulares de la población de células reconocidas con el inmunógeno, proporcionando, de este modo, una respuesta mediada por el sistema inmune dirigida a la población de células marcadas. El inmunógeno puede ser reconocido directamente por células inmunes y puede tener lugar la citólisis directa de las células patogénicas.In another embodiment, the cell population Pathogenic recognized is a population of cancer cells. In another embodiment, the population of recognized cells are cells virus infected In another embodiment, the cell population recognized is a population of exogenous organisms, such as bacteria, mycoplasmas, yeasts or fungi. In another embodiment, the recognized cell population is a population of macrophages activated that mediates in a pathological state. The conjugate ligand-immunogen binds to the surface of the tumor cells or pathogenic organisms and "brand" the cell members of the cell population recognized with the immunogen, thus providing a response mediated by the immune system aimed at the population of labeled cells. He immunogen can be recognized directly by immune cells and direct cytolysis of cells can take place pathogenic

La eliminación de los patógenos exógenos, las células endógenas infectadas o neoplásicas o células patogénicas se puede aumentar mediante la administración de un factor terapéutico capaz de estimular una respuesta inmune endógena. En una realización, el estimulante del sistema inmune es una interleuquina, tal como IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, o un IFN, tal como IFN-\alpha, IFN-\beta o IFN-\gamma, o GM-CSF. En otra realización, el estimulante del sistema inmune puede ser una composición de citoquinas que comprende combinaciones de citoquinas, tales como IL-2, IL-12 o IL-15 en combinación con IFN-\alpha, IFN-\beta o IFN-\gamma, o GM-CSF, o cualquier combinación eficaz de las mismas, o cualquier otra combinación eficaz de citoquinas. Las citoquinas identificadas anteriormente estimulan las respuestas de T_{H}1, pero también se pueden utilizar las citoquinas que estimulan las respuestas de T_{H}2, tales como IL-4, IL-10, IL-11, o cualquier combinación eficaz de las mismas. Además, se pueden utilizar combinaciones de citoquinas que estimulan las respuestas de T_{H}1 junto con citoquinas que estimulan las respuestas de T_{H}2.The elimination of exogenous pathogens, the infected or neoplastic endogenous cells or pathogenic cells are may increase by administering a therapeutic factor able to stimulate an endogenous immune response. In a realization, the immune system stimulant is an interleukin, such as IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, or an IFN, such as IFN-?, IFN-? Or IFN-?, Or GM-CSF. In other embodiment, the immune system stimulant can be a cytokine composition comprising combinations of cytokines,  such as IL-2, IL-12 or IL-15 in combination with IFN-?, IFN-? Or IFN-?, Or GM-CSF, or any effective combination thereof, or any other combination effective cytokines. The cytokines identified above Stimulate TH 1 responses, but you can also use the cytokines that stimulate the responses of T_ {2}, such as IL-4, IL-10, IL-11, or any effective combination thereof. In addition, combinations of cytokines that stimulate the responses of T_ {1} together with cytokines that Stimulate TH 2 responses.

En otra realización, se da a conocer una composición farmacéutica. La composición farmacéutica comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno, en el que el inmunógeno es capaz de activar un receptor de tipo toll y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión al receptor de folato, y un portador farmacéuticamente aceptable para el mismo.In another embodiment, a pharmaceutical composition The pharmaceutical composition comprises therapeutically effective amounts of a conjugate ligand-immunogen, in which the immunogen is capable of activating a toll-like receptor and in which the ligand is acidic folic or other folate receptor binding ligand, and a carrier pharmaceutically acceptable to it.

En otra realización, se da a conocer una composición farmacéutica que comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno, en el que el inmunógeno es capaz de activar un receptor de tipo toll y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión al receptor de folato, un factor terapéutico, en el que el factor terapéutico es un compuesto capaz de estimular una respuesta inmune endógena, en el que el compuesto no se une al conjugado ligando-inmunógeno, y un portador farmacéuticamente aceptable para el mismo. En una realización, la composición farmacéutica se encuentra en una forma de dosificación parenteral de liberación prolongada. En otra realización, el factor terapéutico es un estimulante del sistema inmune que comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cualquier interleuquina, incluyendo IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15 e IL-18, un IFN, tal como IFN-\alpha, IFN-\beta o IFN-\gamma, y GM-CSF, o combinaciones de los mismos.In another embodiment, a pharmaceutical composition comprising therapeutically amounts effective of a ligand-immunogen conjugate, in the that the immunogen is capable of activating a toll-like receptor and in which the ligand is folic acid or another ligand binding to folate receptor, a therapeutic factor, in which the factor therapeutic is a compound capable of stimulating an immune response endogenous, in which the compound does not bind to the conjugate ligand-immunogen, and a pharmaceutically carrier acceptable to it. In one embodiment, the composition Pharmaceutical is in a parenteral dosage form extended release. In another embodiment, the therapeutic factor it is an immune system stimulant that comprises a compound selected from the group consisting of any interleukin, including IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15 and IL-18, an IFN, such as IFN-?, IFN-? Or IFN-?, And GM-CSF, or combinations thereof.

Descripción breve de los dibujosBrief description of the drawings

Figura 1. Terapia con dipéptido muramilo y dipéptido muramilo-folato para ratones implantados con un tumor.Figure 1. Muramyl dipeptide therapy and muramyl folate dipeptide for implanted mice With a tumor

Figura 2. Terapia con CpG y Cpg-folato para ratones implantados con un tumor.Figure 2. CpG therapy and Cpg-folate for mice implanted with a tumor.

Descripción detallada de la invenciónDetailed description of the invention

Se dan a conocer composiciones para el tratamiento terapéutico de un huésped con un estado patológico mediado por células patogénicas o de un huésped infectado con organismos patogénicos. Los métodos dan lugar a un aumento de la eliminación mediada por la respuesta del sistema inmune de poblaciones de células patogénicas mediante la conversión/marcaje de las células patogénicas como antigénicas dando lugar a su reconocimiento y eliminación por el sistema inmune del huésped. El método utiliza un conjugado ligando-inmunógeno capaz de unirse con afinidad elevada a células cancerosas u otros agentes patogénicos o células patogénicas. La unión con afinidad elevada puede ser inherente al ligando y se puede modificar (aumentar) mediante la utilización de un ligando modificado químicamente o a partir de una unión química concreta entre el ligando y el inmunógeno que está presente en el conjugado. El método también puede utilizar una terapia de combinación mediante el empleo del conjugado ligando-inmunógeno y un factor terapéutico adicional capaz de aumentar la eliminación mediada por la respuesta del sistema inmune de las poblaciones de células patogénicas.Compositions for the therapeutic treatment of a host with a pathological state mediated by pathogenic cells or from a host infected with pathogenic organisms The methods lead to an increase in elimination mediated by the immune system response of pathogenic cell populations by conversion / labeling of pathogenic cells as antigen giving rise to their recognition and elimination by the host's immune system. He method uses a ligand-immunogen conjugate capable of binding with high affinity to cancer cells or others pathogenic agents or pathogenic cells. The union with affinity raised can be inherent in the ligand and can be modified (increase) by using a modified ligand chemically or from a specific chemical bond between the ligand and the immunogen that is present in the conjugate. He method can also use a combination therapy using the use of the ligand-immunogen conjugate and a factor additional therapy capable of increasing elimination mediated by the immune system response of cell populations pathogenic

La composición de la presente invención se utiliza para aumentar la eliminación mediada por la respuesta del sistema inmune endógeno de una población de células patogénicas en un animal huésped que alberga la población de células patogénicas. La presente invención es aplicable a poblaciones de células patogénicas que causan una variedad de patologías, tales como cáncer, inflamación, enfermedades autoinmunes y enfermedades infecciosas. De este modo, la población de células patogénicas puede ser una población de células cancerosas que es tumorigénica, incluyendo tumores benignos y tumores malignos, o puede ser no tumorigénica. La población de células cancerosas puede surgir espontáneamente o mediante procesos, tales como mutaciones presentes en la línea germinal del animal huésped o mutaciones somáticas, o se puede inducir químicamente, víricamente o por radiación. La presente invención se puede utilizar para tratar cánceres, tales como carcinomas, sarcomas, linfomas, enfermedad de Hodgekin, melanomas, mesoteliomas, linfoma de Burkitt, carcinomas nasofaríngeos, leucemias y mielomas. La población de células cancerosas puede incluir los cánceres oral, de tiroides, endocrino, de piel, gástrico, esofágico, laríngeo, pancreático, de colon, de vejiga, óseo, ovárico, cervical, uterino, de mama, testicular, de próstata, rectal, de riñón, de hígado y de pulmón.The composition of the present invention is used to increase elimination mediated by the response of endogenous immune system of a population of pathogenic cells in a host animal that harbors the population of pathogenic cells. The present invention is applicable to cell populations pathogens that cause a variety of pathologies, such as cancer, inflammation, autoimmune diseases and diseases infectious Thus, the population of pathogenic cells it can be a population of cancer cells that is tumorigenic, including benign tumors and malignant tumors, or it may be not tumorigenic The population of cancer cells may arise spontaneously or by processes, such as mutations present in the germ line of the host animal or somatic mutations, or It can be induced chemically, virally or by radiation. The The present invention can be used to treat cancers, such such as carcinomas, sarcomas, lymphomas, Hodgekin's disease, melanomas, mesotheliomas, Burkitt lymphoma, carcinomas nasopharyngeal, leukemia and myeloma. Cell population Cancer can include oral, thyroid, endocrine, skin, gastric, esophageal, laryngeal, pancreatic, colon, de bladder, bone, ovarian, cervical, uterine, breast, testicular, prostate, rectal, kidney, liver and lung.

La población de células patogénicas también puede ser una población de patógenos exógenos o una población de células que alberga un patógeno exógeno, por ejemplo, un virus. La presente invención es aplicable a dichos patógenos exógenos, tales como bacterias, hongos, virus, micoplasma y parásitos. Los agentes infecciosos que se pueden tratar con la presente invención son cualquier organismo infeccioso reconocido en la técnica que causa patogénesis en un animal, incluyendo organismos, tales como bacterias que son cocos o bacilos gram negativos o gram positivos, virus de ADN y ARN, incluyendo virus de ADN, tales como virus de papiloma, parvovirus, adenovirus, virus del herpes y virus vacuna, y virus de ARN, tales como arenavirus, coronavirus, rinovirus, virus sincitial respiratorio, virus de la gripe, picomavirus, paramixovirus, reovirus, retrovirus y rabdovirus. De particular interés son las bacterias que son resistentes a antibióticos, tales como las especies de Estreptococos y las especies de Estafilococos resistentes a antibióticos, o bacterias que son susceptibles a antibióticos, pero que causan infecciones recurrentes tratadas con antibióticos, de manera que los organismos resistentes finalmente se desarrollan. Dichos organismos se pueden tratar con los conjugados ligando-inmunógeno de la presente invención en combinación con dosis inferiores de antibióticos que se administrarían normalmente a un paciente para evitar el desarrollo de estas cepas bacterianas resistentes a antibiótico. La presente invención también es aplicable a cualquier hongo, especie de micoplasma, parásitos, u otros organismos infecciosos que causan enfermedades en los animales. Entre los ejemplos de hongos que se pueden tratar con el método de la presente invención se incluyen hongos que se desarrollan, tales como mohos, o son del tipo levadura, incluyendo, por ejemplo, hongos que causan enfermedades, tales como tiña, histoplasmosis, blastomicosis, aspergilosis, criptococcosis, esporotricosis, coccidioidomicosis, paracocidio-idomicosis y candidiasis. La presente invención se puede utilizar para tratar infecciones parasíticas, incluyendo infecciones causadas por tenia somática, tremátodos sanguíneos, lombrices de tejidos, amebas, y las especies de Plasmodium, Trypanosoma, Leishmania, y Toxoplasma. Los parásitos de particular interés son aquellos que expresan receptores de folato y se unen a folato; sin embargo, la literatura está repleta de referencias a ligandos que muestran una afinidad elevada por organismos infecciosos. Por ejemplo, se pueden utilizar de forma similar las penicilinas y cefalosporinas conocidas por su actividad antibiótica y la unión específica a precursores de la pared celular bacteriana como ligandos para la preparación de conjugados ligando-inmunógeno para su utilización según la presente invención. Los conjugados ligando-inmunógeno de la presente invención también se pueden dirigir a una población de células que albergan patógenos endógenos, en la que los antígenos específicos de patógeno se expresan preferentemente en la superficie de células que albergan los patógenos, y actúan como receptores para el ligando, uniéndose específicamente el ligando al antígeno.The population of pathogenic cells can also be a population of exogenous pathogens or a population of cells that houses an exogenous pathogen, for example, a virus. The present invention is applicable to said exogenous pathogens, such as bacteria, fungi, viruses, mycoplasma and parasites. Infectious agents that can be treated with the present invention are any infectious organism recognized in the art that causes pathogenesis in an animal, including organisms, such as bacteria that are gram negative or gram positive cocci or bacilli, DNA and RNA viruses, including DNA viruses, such as papillomavirus, parvovirus, adenovirus, herpes virus and vaccine virus, and RNA viruses, such as arenavirus, coronavirus, rhinovirus, respiratory syncytial virus, influenza virus, picomavirus, paramyxovirus, reovirus, retrovirus and rhabdovirus. Of particular interest are bacteria that are resistant to antibiotics, such as Streptococcus species and Staphylococcus species resistant to antibiotics, or bacteria that are susceptible to antibiotics, but that cause recurrent infections treated with antibiotics, so that resistant organisms They finally develop. Such organisms can be treated with the ligand-immunogen conjugates of the present invention in combination with lower doses of antibiotics that would normally be administered to a patient to prevent the development of these antibiotic resistant bacterial strains. The present invention is also applicable to any fungus, mycoplasma species, parasites, or other infectious organisms that cause disease in animals. Examples of fungi that can be treated with the method of the present invention include fungi that develop, such as molds, or are of the yeast type, including, for example, fungi that cause diseases, such as ringworm, histoplasmosis, blastomycosis. , aspergillosis, cryptococcosis, sporotrichosis, coccidioidomycosis, paracocide-idomycosis and candidiasis. The present invention can be used to treat parasitic infections, including infections caused by somatic tapeworm, blood trematodes, tissue worms, amoebas, and Plasmodium, Trypanosoma, Leishmania , and Toxoplasma species. Parasites of particular interest are those that express folate receptors and bind folate; However, the literature is full of references to ligands that show high affinity for infectious organisms. For example, penicillins and cephalosporins known for their antibiotic activity and specific binding to bacterial cell wall precursors can be used as ligands for the preparation of ligand-immunogen conjugates for use according to the present invention. The ligand-immunogen conjugates of the present invention can also be directed to a population of cells that harbor endogenous pathogens, in which the pathogen-specific antigens are preferentially expressed on the surface of cells harboring the pathogens, and act as receptors for the ligand, specifically binding the ligand to the antigen.

Adicionalmente, la población de células patogénicas puede ser una población de macrófagos activados que media en un estado patológico. Los macrófagos activados sobreexpresan a menudo proteínas de la superficie celular, tales como el receptor de folato. Los macrófagos activados pueden agravar o causar estados patológicos, tales como colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, artritis reumatoide, osteomielitis, arterosclerosis, enfermedad de injerto contra huésped, psoriasis, osteoporosis, sarcoidosis, esclerosis múltiple, y otras enfermedades inflamatorias y autoinmunes. La población de células de macrófagos activados también puede ser una población de macrófagos activados infectados con patógenos, tales como las especies Salmonella, Shigella y Tuberculosis. Los macrófagos activados son reconocidos para la eliminación como resultado de la unión de los conjugados ligando-inmunógeno a la superficie celular de los macrófagos activados.Additionally, the population of pathogenic cells can be a population of activated macrophages that mediates in a pathological state. Activated macrophages often overexpress cell surface proteins, such as the folate receptor. Activated macrophages can aggravate or cause pathological conditions, such as ulcerative colitis, Crohn's disease, rheumatoid arthritis, osteomyelitis, atherosclerosis, graft versus host disease, psoriasis, osteoporosis, sarcoidosis, multiple sclerosis, and other inflammatory and autoimmune diseases. The population of activated macrophage cells can also be a population of activated macrophages infected with pathogens, such as Salmonella, Shigella and Tuberculosis species. Activated macrophages are recognized for elimination as a result of the binding of ligand-immunogen conjugates to the cell surface of activated macrophages.

La composición de la presente invención se puede utilizar tanto en la medicina clínica humana como para aplicaciones veterinarias. De este modo, los animales huéspedes que albergan la población de organismos patogénicos y tratados con conjugados ligando-inmunógeno pueden ser humanos o, en el caso de aplicaciones veterinarias, pueden ser animales de laboratorio, agrícolas, domésticos o salvajes. La presente invención también se puede aplicar a animales huéspedes, incluyendo humanos, animales de laboratorio, tales como roedores (por ejemplo, ratones, ratas, hámsters, etc.), conejos, monos, chimpancés, animales domésticos, tales como perros, gatos y conejos, animales agrícolas, tales como vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras y animales salvajes en cautividad, tales como osos, pandas, leones, tigres, leopardos, elefantes, cebras, jirafas, gorilas, delfines y ballenas.The composition of the present invention can be use both in human clinical medicine and for applications veterinarians In this way, the host animals that house the population of pathogenic organisms and treated with conjugates ligand-immunogen can be human or, in the case of veterinary applications, they can be laboratory animals, Agricultural, domestic or wild. The present invention is also may apply to host animals, including humans, animals of laboratory, such as rodents (for example, mice, rats, hamsters, etc.), rabbits, monkeys, chimpanzees, pets, such as dogs, cats and rabbits, farm animals, such as cows, horses, pigs, sheep, goats and wild animals in captivity, such as bears, pandas, lions, tigers, leopards, Elephants, zebras, giraffes, gorillas, dolphins and whales.

El conjugado ligando-inmunógeno se administra preferentemente al animal huésped de manera parenteral, por ejemplo, de manera intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa. Alternativamente, el conjugado se puede administrar al animal huésped mediante otros procesos médicamente útiles, tales como la administración oral y se puede utilizar cualquier dosis eficaz y forma de dosificación terapéutica adecuada, incluyendo formas de dosificación de liberación prolongada. El método de la presente invención se puede utilizar en combinación con la extirpación quirúrgica del tumor, terapia por radiación, quimioterapia o terapias biológicas, tales como otras inmunoterapias que incluyen la terapia con anticuerpos monoclonales, el tratamiento con agentes inmunomoduladores, la transferencia adoptiva de células efectoras inmunes, el tratamiento con factores de crecimiento hematopoyético, citoquinas y vacunación.The ligand-immunogen conjugate it is preferably administered to the host animal in a manner parenteral, for example, intradermally, subcutaneously, intramuscular, intraperitoneal or intravenous. Alternatively, the conjugate can be administered to the host animal by other medically useful processes, such as oral administration and you can use any effective dose and dosage form adequate therapy, including dosage forms of prolonged release The method of the present invention can be use in combination with surgical removal of the tumor, radiation therapy, chemotherapy or biological therapies, such like other immunotherapies that include antibody therapy monoclonal, treatment with immunomodulatory agents, the adoptive transfer of immune effector cells, treatment with hematopoietic growth factors, cytokines and vaccination.

Según la presente invención, el componente ligando de los conjugados ligando-inmunógeno es el ácido fólico y otras moléculas de unión a receptor de folato, incluyendo ligandos de unión a receptor de folato no relacionados con folato.According to the present invention, the component ligand of the ligand-immunogen conjugates is the folic acid and other folate receptor binding molecules, including unrelated folate receptor binding ligands with folate.

El sitio de unión para el ligando es el receptor de folato. La presente invención contempla además la utilización de combinaciones de conjugados ligando-inmunógeno para maximizar el reconocimiento de las células patogénicas para la eliminación mediante una respuesta del sistema inmune innato.The binding site for the ligand is the receptor Folate The present invention further contemplates the use of ligand-immunogen conjugate combinations for maximize recognition of pathogenic cells for Elimination by an innate immune system response.

Los inmunógenos aceptables para la utilización en la presente invención son inmunógenos de nucleótidos capaces de activar un miembro de la familia de receptores de tipo toll (por ejemplo, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR9 o TLR10) y provocar una respuesta del sistema inmune innato. Los inmunógenos adecuados para su utilización en la presente invención incluyen ligandos capaces de activar un receptor de tipo toll, tales como nucleótidos, tales como nucleótidos CpG.Immunogens acceptable for use in the present invention are nucleotide immunogens capable of activate a family member of toll-like receptors (by example, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR9 or TLR10) and cause a Innate immune system response. The right immunogens for their use in the present invention include capable ligands of activating a toll-like receptor, such as nucleotides, such as CpG nucleotides.

Los ligandos e inmunógenos de la presente invención se pueden conjugar mediante la utilización de cualquier método reconocido en la técnica de formación de un complejo. Éste puede incluir un enlace covalente, iónico o de hidrógeno del ligando al inmunógeno, ya sea directamente o indirectamente a través de un grupo de enlace, tal como un enlazador divalente. El conjugado se forma habitualmente mediante unión covalente del ligando al inmunógeno a través de la formación de enlaces amida, éster o imino entre los grupos ácido, aldehído, hidroxilo, amino o hidrazo en los respectivos componentes del complejo. En una realización preferente, el ligando es ácido fólico, un análogo del ácido fólico, o cualquier otra molécula de unión al receptor de folato, y el ligando folato se conjuga al inmunógeno mediante un procedimiento que utiliza anhídrido trifluoroacético para preparar \gamma-ésteres de ácido fólico a través de un intermedio de pteroil azida. Este procedimiento preferente da lugar a la síntesis de un ligando folato, conjugado al inmunógeno sólo a través del grupo \gamma-carboxilo de los grupos ácido glutámico de folato, en el que el \gamma-conjugado se une al receptor de folato con una afinidad elevada, evitando la formación de mezclas de un \alpha-conjugado y el \gamma-conjugado. Alternativamente, los \alpha-conjugados puros se pueden preparar a partir de intermedios en los que el grupo \gamma-carboxilo se bloquea selectivamente, el \alpha-conjugado se forma y el grupo \gamma-carboxilo se desbloquea posteriormente utilizando protocolos y procedimientos de síntesis orgánica reconocidos en la técnica. Alternativamente, se pueden utilizar ligandos de unión a receptor de folato no relacionados con folato.The ligands and immunogens of the present invention can be conjugated by using any method recognized in the technique of complex formation. This may include a covalent, ionic or hydrogen bond of the binding to the immunogen, either directly or indirectly through of a linking group, such as a divalent linker. He conjugate is usually formed by covalent bonding of the binding the immunogen through the formation of amide bonds, ester or imino among the acid, aldehyde, hydroxyl, amino or groups hydrated in the respective components of the complex. In a preferred embodiment, the ligand is folic acid, an analogue of folic acid, or any other receptor binding molecule of folate, and the folate ligand is conjugated to the immunogen by a procedure that uses trifluoroacetic anhydride to prepare γ-folic acid esters through an intermediate of Pteroyl Azide This preferred procedure results in the synthesis of a folate ligand, conjugated to the immunogen only through the γ-carboxyl group of the acid groups glutamic folate, in which the γ-conjugate binds to the folate receptor with a high affinity, avoiding formation of mixtures of an α-conjugate and the γ-conjugate. Alternatively, the pure α-conjugates can be prepared at starting from intermediates in which the group γ-carboxyl is selectively blocked, the α-conjugate is formed and the group γ-carboxyl is subsequently unlocked using protocols and procedures of organic synthesis recognized in the art. Alternatively, they can be used non-related folate receptor binding ligands folate

Los conjugados ligando-inmunógeno de la presente invención aumentan la eliminación de una población de células patogénicas mediada por la respuesta del sistema inmune endógeno. La respuesta del sistema inmune endógeno incluye una respuesta del sistema inmune mediada por células, y cualquier otra respuesta del sistema inmune endógena al animal huésped. Por ejemplo, la respuesta del sistema inmune endógeno puede implicar un receptor de tipo toll que expresa células inmunes, tales como macrófagos y células dendríticas, que juegan papeles significativos en la respuesta del sistema inmune innato al actuar como células presentadoras de antígenos. Los conjugados ligando-inmunógeno liberados actúan como agentes reticulantes para el reclutamiento del receptor de tipo toll que expresa células inmunes a células patogénicas. El reconocimiento directo del inmunógeno liberado por los receptores de tipo toll expresados en la superficie de células presentadoras de antígeno puede dar lugar a la producción de citoquinas, tales como IL-12 e IL-18, que inducen a las células T intactas a diferenciarse en células T_{H}1. Alternativamente, el inmunógeno puede activar un receptor de tipo toll indirectamente a través de la interacción con una proteína de acceso, conduciendo por último a una respuesta del sistema inmune innato que implica la diferenciación de las células T intactas en células T_{H}1. Por lo tanto, la activación de receptores de tipo toll proporciona un mecanismo innato mediante el cual los conjugados ligando-inmunógeno activan preferentemente la inmunidad mediada por células activadas contra la población de células patogénicas.The conjugates ligand-immunogen of the present invention increase the elimination of a population of pathogenic cells mediated by the response of the endogenous immune system. System response Endogenous immune includes a mediated immune system response by cells, and any other response of the endogenous immune system to the host animal. For example, the immune system response Endogenous may involve a toll-like receptor that expresses immune cells, such as macrophages and dendritic cells, which play significant roles in the immune system response innate by acting as antigen presenting cells. The released ligand-immunogen conjugates act as crosslinking agents for type receptor recruitment toll that expresses cells immune to pathogenic cells. He direct recognition of the immunogen released by the receptors of toll type expressed on the surface of presenting cells of antigen can lead to the production of cytokines, such as IL-12 and IL-18, which induce intact T cells to differentiate into T H cells 1. Alternatively, the immunogen can activate a type receptor toll indirectly through interaction with a protein access, ultimately leading to an immune system response innate which involves the differentiation of intact T cells in T H cells 1. Therefore, the activation of type receptors toll provides an innate mechanism by which conjugates ligand-immunogen preferentially activate the cell-mediated immunity activated against the population of pathogenic cells.

El inmunógeno también se puede internalizar por células presentadoras de antígenos a través de la interacción con receptores de tipo toll o mediante fagocitosis o endocitosis dando lugar al procesamiento del inmunógeno y a la presentación a las células T intactas en el contexto de antígenos MHC o de tipo MHC (por ejemplo, CD1) en la superficie de células presentadoras de antígenos. Como resultado de la presentación de antígenos, las células presentadoras de antígenos inducen a las células T intactas a diferenciarse en células T_{H}1, pero también se puede inducir una respuesta T_{H}2. La polarización de la respuesta del sistema inmune hacia una respuesta T_{H}1 o T_{H}2 depende de las citoquinas liberadas durante la interacción de las células T con las células presentadoras de antígenos. Las respuestas T_{H}1 y T_{H}2 son el resultado de la presentación de antígenos combinada con la liberación de citoquinas estimuladoras de las células presentadoras de antígenos (por ejemplo, IL-12 e IL-18 para inducir la respuesta T_{H}1 e IL-4 para inducir la respuesta T_{H}2). Las citoquinas efectoras también se pueden liberar de células T_{H}1 (por ejemplo, IFN-\gamma) y células T_{H}2 (por ejemplo, IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13) para promover posteriormente la diferenciación de células T. También se considera que la respuesta del sistema inmune innato utilizará la secreción de citoquinas que regulan dichos procesos como la multiplicación y la migración de células inmunes.The immunogen can also be internalized by antigen presenting cells through interaction with toll-like receptors or by phagocytosis or endocytosis giving place for immunogen processing and presentation at intact T cells in the context of MHC or MHC type antigens (for example, CD1) on the surface of presenting cells of antigens As a result of antigen presentation, the antigen presenting cells induce intact T cells to differentiate into TH1 cells, but it can also be induced an answer T_ {2}. The polarization of the system response immune to a response T H 1 or T H 2 depends on the cytokines released during the interaction of T cells with antigen presenting cells. The answers T_ {H} 1 and T_ {2} are the result of the combined antigen presentation with the release of cytokine stimulators from cells antigen presenting (for example, IL-12 e IL-18 to induce the response T H 1 e IL-4 to induce the response TH 2). The effector cytokines can also be released from T H cells 1 (for example, IFN-?) and TH 2 cells (for example, IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13) to promote subsequently the differentiation of T cells. It is also considered that the innate immune system response will use the secretion of cytokines that regulate these processes such as multiplication and Immune cell migration.

Los ligandos de receptores de tipo toll pueden inducir una respuesta humoral como resultado de la inducción de una inmunidad innata. En este caso, los ligandos de receptores de tipo toll se pueden unir a receptores de tipo toll en células dendríticas (un tipo de célula presentadora de antígenos) promoviendo la maduración de las células dendríticas. A continuación, las células dendríticas maduras migran hacia nódulos linfáticos de drenaje, donde inducen la inmunidad adaptativa (por ejemplo, una respuesta humoral), mediante la estimulación de linfocitos T para secretar citoquinas que promueven las respuestas humorales.Toll-like receptor ligands can induce a humoral response as a result of the induction of a innate immunity In this case, receptor type ligands toll can bind to toll type receptors in cells dendritic (a type of antigen presenting cell) promoting the maturation of dendritic cells. TO then mature dendritic cells migrate to nodules lymphatic drainage, where they induce adaptive immunity (by example, a humoral response), by stimulating T lymphocytes to secrete cytokines that promote responses humoral

Si la inmunidad adaptativa (es decir, una respuesta humoral) es inducida como consecuencia de la inducción de la inmunidad innata, se considera que los anticuerpos se dirigirán a las células tumorales de organismos infecciosos mediante la unión a conjugados ligando-inmunógeno que preferentemente se unen a estas células u organismos invasores y que las células patogénicas morirán mediante la lisis mediada por complemento, ADCC, fagocitosis dependiente de anticuerpo, o la agrupación de anticuerpos de receptores. El proceso citotóxico también puede implicar otros tipos de respuestas del sistema inmune, tales como inmunidad mediada por células, así como respuestas secundarias que surgen cuando las células presentadoras de antígenos atraídas fagocitan las células no deseadas y presentan antígenos de tumores naturales o antígenos de patógenos exógenos al sistema inmune para la eliminación de las células u organismos que transportan los antígenos.If adaptive immunity (that is, a humoral response) is induced as a result of the induction of Innate immunity, it is considered that the antibodies will target tumor cells of infectious organisms by binding to ligand-immunogen conjugates that are preferably bind to these invading cells or organisms and that the cells pathogens will die by complement-mediated lysis, ADCC,  antibody dependent phagocytosis, or clustering of receptor antibodies. The cytotoxic process can also involve other types of immune system responses, such as cell-mediated immunity, as well as secondary responses that arise when the antigen presenting cells attracted phagocytize unwanted cells and present tumor antigens natural or antigens of pathogens exogenous to the immune system to the elimination of the cells or organisms that transport the antigens

Se puede administrar al huésped, como mínimo, una composición adicional que comprende un factor terapéutico en combinación o como adyuvante a la metodología descrita anteriormente, para aumentar la eliminación de la población de células patogénicas mediada por la repuesta del sistema inmune endógeno, o se puede administrar más de un factor terapéutico adicional. El factor terapéutico es un compuesto capaz de estimular una respuesta del sistema inmune endógeno u otro factor terapéutico capaz de complementar la eficacia del complejo ligando-inmunógeno administrado. El método de la presente invención se puede realizar mediante la administración al huésped, además de los conjugados descritos anteriormente, de compuestos o composiciones capaces de estimular una respuesta del sistema inmune endógeno, incluyendo citoquinas o factores del crecimiento de células inmunes, tales como interleuquinas 1-18, factor de células madre, FGF básico, EGF, G-CSF, GM-CSF, ligando FLK-2, HILDA, MIP-1\alpha, TGF \alpha, TGF \beta, M-CSF, IFN \alpha, IFN \beta, IFN \gamma, CD23 soluble, LIF y combinaciones de los mismos.It can be administered to the host at least an additional composition comprising a therapeutic factor in combination or as an adjuvant to the described methodology previously, to increase the elimination of the population of pathogenic cells mediated by immune system response endogenous, or more than one therapeutic factor can be administered additional. The therapeutic factor is a compound capable of stimulating an endogenous immune system response or other therapeutic factor able to complement the effectiveness of the complex ligand-immunogen administered. The method of The present invention can be carried out by administration to host, in addition to the conjugates described above, of compounds or compositions capable of stimulating a response of endogenous immune system, including cytokines or growth of immune cells, such as interleukins 1-18, stem cell factor, basic FGF, EGF, G-CSF, GM-CSF, ligand FLK-2, HILDA, MIP-1α, TGF α, TGFβ, M-CSF, IFNα, IFN β, IFNγ, soluble CD23, LIF and combinations of the same.

También se pueden utilizar combinaciones terapéuticamente eficaces de estas citoquinas. En una realización preferente, por ejemplo, se utilizan cantidades terapéuticamente eficaces de IL-2, por ejemplo, en cantidades que varían desde 5.000 IU/dosis/día hasta 500.000 IU/dosis/día en un régimen diario de dosis múltiples, e IFN-\alpha, por ejemplo, en cantidades que varían desde 7.500 IU/dosis/día hasta 150.000 IU/dosis/día en un régimen diario de dosis múltiples, junto con conjugados ligando-inmunógeno para eliminar las células patogénicas en un animal huésped que alberga dicha población de células. En otra realización preferente, IL-12 e IFN-\alpha se utilizan en cantidades terapéuticamente eficaces junto con los conjugados ligando-inmunógeno, y aún en otra realización preferente, IL-15 e IFN-\alpha se utilizan en cantidades terapéuticamente eficaces junto con los conjugados ligando-inmunógeno. En una realización preferente alternativa, IL-2, IFN-\alpha o IFN-\gamma y GM-CSF se utilizan en combinación junto con los conjugados ligando-inmunógeno. Preferentemente, el factor o factores terapéuticos utilizados, tales como IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, IFN-\alpha, IFN-\gamma y GM-CSF, incluyendo combinaciones de los mismos, activa o activan las células citolíticas naturales y/o las células T (es decir, células T_{H}1). Alternativamente, el factor terapéutico o combinaciones de los mismos, incluyendo una interleuquina en combinación con un interferón y GM-CSF, pueden activar otras células efectoras inmunes, tales como macrófagos, células B, neutrófilos, células LAK o similares, o el factor terapéutico puede activar células T_{H}2 (por ejemplo, IL-4, IL-10 o IL-11). La presente invención también considera la utilización de cualquier otra combinación eficaz de citoquinas, incluyendo las combinaciones de otras interleuquinas e interferones y factores estimuladores de colonias.You can also use combinations Therapeutically effective of these cytokines. In one embodiment preferably, for example, therapeutically amounts are used effective IL-2, for example, in amounts that range from 5,000 IU / dose / day to 500,000 IU / dose / day in a daily multiple dose regimen, and IFN-?, for example, in amounts ranging from 7,500 IU / dose / day to 150,000 IU / dose / day in a daily multiple dose regimen, together with ligand-immunogen conjugates to eliminate pathogenic cells in a host animal that hosts said cell population. In another preferred embodiment, IL-12 and IFN-? Are used in therapeutically effective amounts together with the conjugates ligand-immunogen, and still in another embodiment preferred, IL-15 and IFN-? se used in therapeutically effective amounts together with the ligand-immunogen conjugates. In one embodiment alternative preferred, IL-2, IFN-? Or IFN-? And GM-CSF are used in combination with the ligand-immunogen conjugates. Preferably, the therapeutic factor or factors used, such as IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, IFN-?, IFN-? And GM-CSF, including combinations thereof, activate or activate cells natural cytolytics and / or T cells (i.e. cells T_ {H} 1). Alternatively, the therapeutic factor or combinations thereof, including an interleukin in combination with a interferon and GM-CSF, can activate other cells immune effectors, such as macrophages, B cells, neutrophils, LAK cells or the like, or the therapeutic factor can activate TH 2 cells (for example, IL-4, IL-10 or IL-11). The present invention also considers the use of any other effective combination of cytokines, including combinations of other interleukins and interferons and stimulatory factors of colonies

Los agentes quimioterapéuticos, que son citotóxicos por sí mismos y pueden actuar aumentando la permeabilidad del tumor, se pueden utilizar en combinación con los conjugados ligando-inmunógeno y citoquinas en el método de la presente invención y entre dichos agentes quimioterapéuticos se incluyen adrenocorticoides, agentes alquilantes, antiandrógenos, antiestrógenos, andrógenos, estrógenos, antimetabolitos, tales como citosina arabinósido, análogos de purina, análogos de pirimidina, y metotrexato, busulfano, carboplatino, clorambucilo, cisplatino y otros compuestos de platino, tamoxifeno, taxol, ciclofosfamida, alcaloides de plantas, prednisona, hidroxiurea, tenipósido, antibióticos, tales como mitomicina C y bleomicina, mostazas de nitrógeno, nitrosoureas, vincristina, vinblastina, agentes inflamatorios y proinflamatorios, y cualquier otro agente quimioterapéutico reconocido en la técnica. Otros agentes terapéuticos que se pueden administrar de forma adyuvante a la administración de los presentes conjugados, incluyen penicilinas, cefalosporinas, vancomicina, eritromicina, clindamicina, rifampina, cloramfenicol, aminoglicósidos, gentamicina, anfotericina B, aciclovir, trifluridina, ganciclovir, zidovudina, amantadina, ribavirina, y cualquier otro compuesto antimicrobiano reconocido en la técnica.Chemotherapeutic agents, which are cytotoxic by themselves and can act by increasing the tumor permeability, can be used in combination with ligand-immunogen conjugates and cytokines in the method of the present invention and between said agents Chemotherapeutic agents include adrenocorticoids, agents alkylating agents, antiandrogens, antiestrogens, androgens, estrogens, antimetabolites, such as cytosine arabinoside, analogues of purine, pyrimidine analogs, and methotrexate, busulfan, carboplatin, chlorambucil, cisplatin and other compounds of platinum, tamoxifen, taxol, cyclophosphamide, plant alkaloids, prednisone, hydroxyurea, teniposide, antibiotics, such as mitomycin C and bleomycin, nitrogen mustards, nitrosoureas, vincristine, vinblastine, inflammatory and proinflammatory agents, and any other chemotherapeutic agent recognized in the art. Other therapeutic agents that can be administered adjuvant to the administration of the present conjugates, include penicillins, cephalosporins, vancomycin, erythromycin, clindamycin, rifampin, chloramphenicol, aminoglycosides, gentamicin, amphotericin B, acyclovir, trifluridine, ganciclovir, zidovudine, amantadine, ribavirin, and any other compound Antimicrobial recognized in the art.

La eliminación de la población de células patogénicas comprenderá una reducción o eliminación de masa tumoral o de organismos patogénicos o células patogénicas que dan lugar a una respuesta terapéutica. En el caso de un tumor, la eliminación puede ser una eliminación de células del tumor primario o de células que han desarrollado metástasis o están en el proceso de disociarse del tumor primario. También se considera según la presente invención un tratamiento profiláctico para prevenir la regeneración de un tumor después de su extirpación mediante cualquier estrategia terapéutica, incluyendo la extirpación quirúrgica del tumor, la terapia por radiación, quimioterapia, o terapia biológica. El tratamiento profiláctico puede ser un tratamiento inicial con el conjugado ligando-inmunógeno, tal como un tratamiento en un régimen diario de dosis múltiples, y/o puede ser un tratamiento adicional de series de tratamientos después de un intervalo de días o meses después del tratamiento o tratamientos iniciales.The elimination of the cell population pathogenic will comprise a reduction or elimination of tumor mass or of pathogenic organisms or pathogenic cells that give rise to A therapeutic response In the case of a tumor, the removal it can be a removal of primary tumor cells or cells that have developed metastases or are in the process of dissociating of the primary tumor. It is also considered according to this invention a prophylactic treatment to prevent regeneration of a tumor after its removal by any strategy therapeutic, including the surgical removal of the tumor, the radiation therapy, chemotherapy, or biological therapy. He Prophylactic treatment may be an initial treatment with the ligand-immunogen conjugate, such as a treatment in a daily multiple dose regimen, and / or it can be an additional treatment of treatment series after a range of days or months after treatment or treatments initials.

La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad de conjugado ligando-inmunógeno eficaz para "marcar" una población de células patogénicas en un animal huésped para la eliminación específica mediante una respuesta del sistema inmune endógeno. Opcionalmente, la composición comprende además una cantidad de un compuesto capaz de estimular una respuesta del sistema inmune endógeno, en el que el compuesto no se une al conjugado ligando-inmunógeno. El compuesto es eficaz para aumentar la eliminación de las células patogénicas. La composición farmacéutica contiene cantidades terapéuticamente eficaces del conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico y el factor puede comprender una citoquina, tal como IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15 o IL-18 o combinaciones de citoquinas, incluyendo IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15 o IL-18 e interferones, tales como IFN-\alpha o IFN-\gamma, y combinaciones de interferones, interleuquinas, y factores estimuladores de colonias, tales como GM-CSF.The present invention also relates to pharmaceutical compositions comprising an amount of conjugate  ligand-immunogen effective to "mark" a population of pathogenic cells in a host animal for the specific elimination through an immune system response endogenous. Optionally, the composition further comprises a amount of a compound capable of stimulating a response of endogenous immune system, in which the compound does not bind to the ligand-immunogen conjugate. The compound is effective. to increase the elimination of pathogenic cells. The pharmaceutical composition contains therapeutically amounts effective ligand-immunogen conjugate and the therapeutic factor and the factor may comprise a cytokine, such like IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15 or IL-18 or combinations of cytokines, including IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15 or IL-18 and interferons, such as IFN-? or IFN-?, And combinations of interferons, interleukins, and colony stimulating factors, such as GM-CSF.

La dosis diaria unitaria del conjugado ligando-inmunógeno puede variar significativamente dependiendo de la patología des huésped, el estado patológico en tratamiento, el peso molecular del conjugado, su ruta de administración y la distribución en el tejido, y la posibilidad de utilizar simultáneamente otros tratamientos terapéuticos, tales como la terapia con radiación. La cantidad eficaz a administrar a un paciente se basa en el área superficial del cuerpo, el peso del paciente, y la valoración del médico sobre la patología del paciente. Una dosis eficaz puede variar de 1 ng/kg a 1 mg/kg, más preferentemente de 1 \mug/kg a 500 \mug/kg, y lo más preferente de 1 \mug/kg a 100 \mug/kg.The daily unit dose of the conjugate ligand-immunogen can vary significantly depending on the pathology of the host, the pathological state in treatment, the molecular weight of the conjugate, its route of administration and distribution in the tissue, and the possibility of simultaneously use other therapeutic treatments, such like radiation therapy. The effective amount to administer to a patient is based on the surface area of the body, the weight of the patient, and the doctor's assessment of the pathology of the patient. An effective dose can vary from 1 ng / kg to 1 mg / kg, more preferably 1 µg / kg to 500 µg / kg, and most preferably from 1 µg / kg to 100 µg / kg.

Se puede utilizar cualquier régimen eficaz para la administración del conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico, si está incluido. Por ejemplo, el conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico se pueden administrar como dosis únicas, o se pueden dividir y administrar como un régimen diario de dosis múltiples. Además, se puede utilizar un régimen escalonado, por ejemplo, de uno a tres días por semana, como alternativa al tratamiento diario y con el objetivo de definir la presente invención, dicho régimen diario intermitente o escalonado se considera que es equivalente al tratamiento diario y se encuentra en el alcance de la presente invención. En una realización preferente de la presente invención, el huésped se trata con múltiples inyecciones del conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico para eliminar la población de células patogénicas. En una realización, el huésped se inyecta múltiples veces (preferentemente de 2 a 50 veces) con el conjugando ligando-inmunógeno, por ejemplo, a intervalos de 12-72 horas o a intervalos de 48-72 horas. Se pueden administrar al paciente inyecciones adicionales del conjugado ligando-inmunógeno en un intervalo de días o meses después de la inyección o inyecciones iniciales y las inyecciones adicionales previenen la reaparición de la enfermedad. Alternativamente, la inyección o inyecciones iniciales del conjugado ligando-inmunógeno pueden prevenir la reaparición de la enfermedad.Any effective regimen can be used to administration of the ligand-immunogen conjugate and The therapeutic factor, if included. For example, the conjugate ligand-immunogen and the therapeutic factor can be  administered as single doses, or can be divided and administered as a daily multiple dose regimen. In addition, you can use a staggered regimen, for example, one to three days per week, as an alternative to daily treatment and with the aim of define the present invention, said intermittent daily regimen or staggered is considered to be equivalent to daily treatment and It is within the scope of the present invention. In a preferred embodiment of the present invention, the host is treated with multiple conjugate injections ligand-immunogen and the therapeutic factor for eliminate the population of pathogenic cells. In one embodiment, the host is injected multiple times (preferably 2 to 50 times) with the ligand-immunogen conjugate, by example, at intervals of 12-72 hours or at intervals from 48-72 hours. They can be administered to the patient additional conjugate injections ligand-immunogen in a range of days or months after the injection or initial injections and injections additional prevent the recurrence of the disease. Alternatively, the initial injection or injections of the conjugate ligand-immunogen can prevent recurrence of the illness.

El factor terapéutico se puede administrar al animal huésped antes, después o a la vez que el conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico se puede administrar como parte de la misma composición que contiene el conjugado o como parte de una composición diferente de la del conjugado ligando-inmunógeno. En la presente invención se puede utilizar cualquiera de dichas composiciones terapéuticas que contienen el factor terapéutico en una dosis terapéuticamente eficaz. Adicionalmente, se puede utilizar más de un tipo de conjugado ligando-inmunógeno. Por ejemplo, el animal huésped se puede tratar con dipéptido muramilo y taxol o un nucleótido CpG unido al mismo o diferentes ligandos en un protocolo de dosificación simultánea. En el caso de agentes quimioterapéuticos y antimicrobianos, el factor terapéutico se puede administrar en una dosis subóptima junto con el conjugado ligando-inmunógeno en una terapia de combinación para evitar el desarrollo de la resistencia al agente quimioterapéutico o antimicrobiano por el animal huésped.The therapeutic factor can be administered by host animal before, after or at the same time as the conjugate ligand-immunogen and the therapeutic factor can be administer as part of the same composition that contains the conjugated or as part of a composition other than that of the ligand-immunogen conjugate. At the moment invention any of said compositions can be used Therapeutics containing the therapeutic factor in one dose therapeutically effective. Additionally, more than one can be used type of ligand-immunogen conjugate. For example, the host animal can be treated with muramyl dipeptide and taxol or a CpG nucleotide bound to the same or different ligands in a simultaneous dosing protocol. In the case of agents chemotherapeutic and antimicrobial, the therapeutic factor is can be administered in a suboptimal dose together with the conjugate ligand-immunogen in a combination therapy to avoid the development of resistance to the agent chemotherapeutic or antimicrobial by the host animal.

El conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico se inyectan de forma preferente parenteralmente y dichas inyecciones pueden ser inyecciones intraperitoneales, inyecciones subcutáneas, inyecciones intramusculares, inyecciones intravenosas o inyecciones intratecales. El conjugado ligando-inmunógeno y el factor terapéutico también se puede liberar utilizando una bomba lenta. Entre los ejemplos de formas de dosificación parenteral se incluyen soluciones acuosas del agente activo, en una solución salina isotónica, una solución de glucosa al 5% u otros portadores líquidos farmacéuticamente aceptables conocidos, tales como alcoholes líquidos, glicoles, ésteres y similares. La forma de dosificación parenteral según la presente invención puede estar en forma de un liofilizado reconstituible que comprende la dosis de conjugado ligando-inmunoconjugado y el factor terapéutico. En un aspecto preferente de la presente realización, se puede administrar cualquiera de un conjunto de formas de dosificación de liberación prolongada conocidas en la técnica, tales como, por ejemplo, las matrices de hidratos de carbono biodegradables descritas en las patentes de Estados Unidos Nos. 4.713.249; 5.266.333; y 5.417.982.The ligand-immunogen conjugate and the therapeutic factor are injected preferentially parenterally and said injections may be injections intraperitoneal, subcutaneous injections, injections intramuscular, intravenous injections or injections intrathecal. The ligand-immunogen conjugate and the therapeutic factor can also be released using a pump slow. Examples of parenteral dosage forms include include aqueous solutions of the active agent, in a solution Isotonic saline, a 5% glucose solution or other carriers known pharmaceutically acceptable liquids, such as liquid alcohols, glycols, esters and the like. The way of parenteral dosage according to the present invention may be in form of a reconstitutable lyophilisate comprising the dose of ligand-immunoconjugate conjugate and factor therapeutic. In a preferred aspect of the present embodiment, you can manage any of a set of ways to prolonged release dosage known in the art, such such as, for example, carbohydrate matrices biodegradable described in United States patents Nos. 4,713,249; 5,266,333; and 5,417,982.

La ingestión oral también se puede utilizar para administrar los conjugados ligando-inmunógeno y el factor terapéutico y dichas formas de dosificación incluyen jarabes, pulverizadores u otras formas de dosificación líquida, "gel-seal", o una cápsula o comprimido oblongo. La administración bucal o sublingual comprende poner en contacto la mucosa oral y faríngea del paciente con la dosis de conjugado ligando-inmunógeno y factor terapéutico en una forma de dosificación líquida farmacéuticamente aceptable, tal como un jarabe o un pulverizador, o en una forma de dosificación soluble en saliva, que se mantienen en la boca del paciente para formar una solución de saliva en contacto con la mucosa oral y faríngea. Ejemplos de formas de dosificación solubles en saliva son pastillas y comprimidos.Oral ingestion can also be used to administer the ligand-immunogen conjugates and the therapeutic factor and said dosage forms include syrups, sprayers or other forms of liquid dosage, "gel-seal", or an oblong capsule or tablet. Oral or sublingual administration involves contacting the oral and pharyngeal mucosa of the patient with the conjugate dose ligand-immunogen and therapeutic factor in a Pharmaceutically acceptable liquid dosage form, such as a syrup or a sprayer, or in a soluble dosage form in saliva, which remain in the patient's mouth to form a saliva solution in contact with the oral and pharyngeal mucosa. Examples of saliva soluble dosage forms are pills and tablets

Los conjugados ligando-inmunógeno y el factor terapéutico destinados a la administración bucal o sublingual según la presente invención se administran al paciente en una forma de dosificación adaptada para inducir el contacto con la mucosa oral y faríngea del paciente. De este modo, la forma de dosificación puede estar en forma de una solución líquida, tal como un jarabe, pulverizador u otra forma de dosificación líquida a administrar y podría utilizarse por el paciente de manera que induzca el contacto con los tejidos de la mucosa oral. Alternativamente, los conjugados con factor terapéutico se pueden administrar mediante ingestión oral, en la que los compuestos se formulan en un jarabe para ser ingerido por el paciente y no mantenerse en la boca. Los jarabes para cualquier utilización pueden ser aromatizados o no aromatizados y se pueden formular utilizando una solución acuosa tamponada como base con la adición de edulcorantes calóricos o no calóricos, aceites aromatizantes y tensoactivos/dispersantes farmacéuticamente aceptables. Se pueden preparar de forma similar otras formas de dosificación líquida, incluyendo soluciones o pulverizadores y se pueden administrar bucalmente, sublingualmente o mediante ingestión oral.The conjugates ligand-immunogen and the therapeutic factor intended for oral or sublingual administration according to this invention are administered to the patient in a dosage form adapted to induce contact with the oral and pharyngeal mucosa of the patient. In this way, the dosage form can be in form of a liquid solution, such as a syrup, sprayer or another liquid dosage form to administer and could used by the patient in a way that induces contact with tissues of the oral mucosa. Alternatively, conjugates with Therapeutic factor can be administered by oral ingestion, in which the compounds are formulated in a syrup to be ingested by the patient and not keep in the mouth. Syrups for Any use can be flavored or unscented and can be formulated using a buffered aqueous solution as a base with the addition of caloric or non-caloric sweeteners, oils Pharmaceutical flavorings and surfactants / dispersants acceptable. Other forms of liquid dosage, including solutions or sprayers and it can be administered orally, sublingually or by ingestion oral.

Preferentemente, los conjugados con factor terapéutico para la administración bucal/sublingual en la presente invención se formulan en una forma de dosificación sólida, tal como una pastilla o un comprimido. Esta formulación contiene preferentemente un portador soluble en saliva y puede contener opcionalmente excipientes deseables, tales como tampones o ayudantes para la formación de comprimidos.Preferably, the conjugates with factor Therapeutic for oral / sublingual administration here invention are formulated in a solid dosage form, such as A pill or a tablet. This formulation contains preferably a carrier soluble in saliva and may contain optionally desirable excipients, such as buffers or tablet formation aids

Las pastillas para su utilización según la presente invención se pueden preparar, por ejemplo, mediante técnicas reconocidas en el sector para formar comprimidos compactos, en los que los conjugados y el factor terapéutico se dispersan en un portador sólido comprimible, opcionalmente combinado con cualquier ayudante para la formación de comprimidos apropiado, tal como un lubricante (por ejemplo, estearato de magnesio), y se comprime en comprimidos. El componente portador sólido para dichas formulaciones de comprimidos puede ser un sólido soluble en saliva, tal como un almidón soluble en agua fría o un monosacárido o disacárido, de manera que la pastilla se disolverá fácilmente en la boca. El pH de las formulaciones descritas anteriormente puede variar de 4 a 8,5. Las pastillas para su utilización según la presente invención se pueden preparar utilizando otras técnicas de formulación de dosificación unitaria sólida reconocidas en el sector.The tablets for use according to The present invention can be prepared, for example, by recognized techniques in the sector to form tablets compact, in which the conjugates and the therapeutic factor are dispersed in a compressible solid carrier, optionally combined with any appropriate tablet formation assistant, such as a lubricant (for example, magnesium stearate), and it compress in tablets. The solid carrier component for said Tablet formulations can be a solid soluble in saliva, such as a cold water soluble starch or a monosaccharide or disaccharide, so that the tablet will dissolve easily in the mouth. The pH of the formulations described above can vary from 4 to 8.5. The tablets for use according to The present invention can be prepared using other techniques of solid unit dosage formulation recognized in the sector.

Los comprimidos para su utilización según la presente invención se pueden preparar de una manera similar a la descrita para la preparación de pastillas o mediante otras técnicas reconocidas en el sector para formar comprimidos compactos, tales como vitaminas masticables. Entre los componentes portadores sólidos adecuados para la formación de comprimidos se incluyen manitol, celulosa microcristalina, carboximetil celulosa y fosfato cálcico dibásico.The tablets for use according to the The present invention can be prepared in a manner similar to described for the preparation of tablets or by other techniques recognized in the sector to form compact tablets, such as chewable vitamins Between solid carrier components suitable for the formation of tablets include mannitol, microcrystalline cellulose, carboxymethyl cellulose and calcium phosphate dibasic

Las formas de dosificación sólida para la administración por ingestión oral incluyen formas de dosificación, tales como comprimidos oblongos, cápsulas, y "gel-seals". Dichas formas de dosificación sólida se pueden preparar utilizando protocolos estándar de formación de comprimidos y excipientes para proporcionar cápsulas, comprimidos oblongos o "gel-seals" que contienen el conjugado y el factor terapéutico. Cualquier forma de dosificación sólida para su utilización según la presente invención, incluyendo pastillas y comprimidos, puede estar en una forma adaptada para la liberación sostenida.Solid dosage forms for the Administration by oral ingestion include dosage forms, such as oblong tablets, capsules, and "gel-seals". Said dosage forms solid can be prepared using standard protocols of formation of tablets and excipients to provide capsules, oblong tablets or "gel-seals" that contain the conjugate and the therapeutic factor. Any form of solid dosage for use according to the present invention, including pills and tablets, may be in a form adapted for sustained release.

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Ejemplo de referencia 1Reference Example one

Efecto de conjugados folato-dipéptido muramilo en la supervivencia de ratones con implantes de tumores pulmonaresEffect of muramyl folate-dipeptide conjugates in the survival of mice with tumor implants pulmonary

Se inyectaron ratones Balb/c hembras en el día 0 con 5 x 10^{5} células M109, una línea celular singénica de cáncer de pulmón que expresa niveles elevados de receptor de folato. En un esfuerzo por reducir el tiempo requerido para obtener datos de supervivencia a largo plazo, las células tumorales se implantaron intraperitonealmente cerca del hígado. A continuación, los puntos del cáncer se dejaron unirse y crecer. A continuación, se inyectaron los animales con PBS (control) o se inyectaron simultáneamente con folato-dipéptido muramilo (MDP) (15 nmoles/kg), IL-2 (5.000 IU/dosis), e IFN-\alpha (25.000 U/dosis) en los días 7, 8, 9, 11 y 14 después de la implantación de células tumorales. Se conjugó el folato a MDP a través de un puente de etilendiamina unido a gamma carboxilo. Se inyectaron animales adicionales con 80 nmoles/kg de MDP, 15 nmoles/kg de folato-MDP u 80 nmoles/kg de MDP e IL-2 e IFN-\alpha en las concentraciones especificadas anteriormente. La eficacia de esta inmunoterapia se evaluó mediante el seguimiento de la supervivencia en función del tiempo de ratones tratados con folato-MDP en comparación con animales de control. Tal como se muestra en la figura 1, todos los ratones de control murieron antes del día 21, mientras que los ratones tratados con MDP-folato + IL-2 + IFN-\alpha sobrevivieron hasta el día 40. Adicionalmente, la capacidad del folato-MDP en combinación con IL-2 e IFN-\alpha para promover la supervivencia a largo plazo de ratones con tumores es fuertemente sinérgica, ya que la combinación de IL-2 e IFN-\alpha presentaba un efecto escaso sobre la supervivencia a largo plazo de ratones y el folato-MDP solo presentaba un efecto insignificante sobre la supervivencia de los ratones.Female Balb / c mice were injected on day 0 with 5 x 10 5 M109 cells, a syngeneic cell line of lung cancer that expresses elevated levels of folate receptor. In an effort to reduce the time required to obtain data of long-term survival, tumor cells were implanted intraperitoneally near the liver. Then the points of cancer were allowed to join and grow. They were then injected  animals with PBS (control) or injected simultaneously with muramyl folate dipeptide (MDP) (15 nmoles / kg), IL-2 (5,000 IU / dose), and IFN-? (25,000 U / dose) on days 7, 8, 9, 11 and 14 after implantation of tumor cells. It conjugated folate to MDP through an ethylene diamine bridge linked to gamma carboxyl Additional animals were injected with 80 nmoles / kg of MDP, 15 nmoles / kg of folate-MDP or 80 nmoles / kg of MDP and IL-2 and IFN-? In the concentrations specified above. The effectiveness of this immunotherapy was assessed by monitoring survival depending on the time of mice treated with folate-MDP compared to control animals. As shown in Figure 1, all control mice died before day 21, while mice treated with MDP-folate + IL-2 + IFN-? Survived until day 40. Additionally, the capacity of folate-MDP in combination with IL-2 and IFN-? to promote long-term survival of mice with tumors It is strongly synergistic, since the combination of IL-2 and IFN-? Presented a poor effect on long-term survival of mice and the folate-MDP only had an insignificant effect on the survival of the mice.

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Ejemplo 2Example 2

Efecto de conjugados folato-CpG sobre la supervivencia de ratones con implantes de tumores pulmonaresEffect of folate-CpG conjugates on survival of mice with lung tumor implants

Se inyectaron ratones Balb/c hembras en el día 0 con 5 x 10^{5} células M109, una línea celular singénica de cáncer de pulmón que expresa niveles elevados de receptor de folato. En un esfuerzo por reducir el tiempo requerido para obtener datos de supervivencia a largo plazo, las células tumorales se implantaron intraperitonealmente cerca del hígado. A continuación, los puntos del cáncer se dejaron unirse y crecer. A continuación, se inyectaron los animales con PBS (control), CpG (1500 nmoles/kg) o se inyectaron con folato-CpG (1500 nmoles/kg) en los días 7 y 8 después de la implantación de las células tumorales. El folato se conjugó con CpG 5'amino a través de un puente de péptido. La eficacia de esta inmunoterapia se evaluó mediante el seguimiento de la supervivencia en función del tiempo. Tal como se muestra en la figura 2, todos los ratones de control murieron antes del día 25, mientras que los ratones tratados con CpG sobrevivieron hasta el día 44 y los ratones tratados con folato-CpG sobrevivieron hasta el día 50.Female Balb / c mice were injected on day 0 with 5 x 10 5 M109 cells, a syngeneic cell line of lung cancer that expresses elevated levels of folate receptor. In an effort to reduce the time required to obtain data of long-term survival, tumor cells were implanted intraperitoneally near the liver. Then the points of cancer were allowed to join and grow. They were then injected  animals with PBS (control), CpG (1500 nmoles / kg) or injected with folate-CpG (1500 nmoles / kg) in the days 7 and 8 after implantation of the tumor cells. He Folate was conjugated with CpG 5'amino through a peptide bridge. The efficacy of this immunotherapy was evaluated by monitoring of survival as a function of time. As shown in Figure 2, all control mice died before day 25, while mice treated with CpG survived until day 44 and mice treated with folate-CpG They survived until day 50.

Claims (13)

1. Composición farmacéutica en una forma de dosificación parenteral que comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno, en el que el inmunógeno activa un receptor de tipo toll, en el que el inmunógeno es un nucleótido y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión a receptor de folato y un portador farmacéuticamente aceptable para los mismos, caracterizada porque la composición comprende además IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, o combinaciones de las mismas.1. Pharmaceutical composition in a parenteral dosage form comprising therapeutically effective amounts of a ligand-immunogen conjugate, in which the immunogen activates a toll-like receptor, in which the immunogen is a nucleotide and in which the ligand is acidic. folic or other folate receptor binding ligand and a pharmaceutically acceptable carrier thereof, characterized in that the composition further comprises IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL -18, or combinations thereof. 2. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1, que comprende además IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, o combinaciones de las mismas, en combinación con IFN-\alpha o IFN-\gamma.2. Pharmaceutical composition, according to claim 1, further comprising IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, or combinations thereof, in combination with IFN-? or IFN-?. 3. Composición farmacéutica en una forma de dosificación parenteral que comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno, en el que el inmunógeno activa un receptor de tipo toll, en el que el inmunógeno es un nucleótido y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión a receptor de folato y un portador farmacéuticamente aceptable para los mismos, caracterizada porque la composición comprende además IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, IFN-\alpha, IFN-\gamma, GM-CSF, o combinaciones de las mismas.3. Pharmaceutical composition in a parenteral dosage form comprising therapeutically effective amounts of a ligand-immunogen conjugate, in which the immunogen activates a toll-like receptor, in which the immunogen is a nucleotide and in which the ligand is acidic. folic or other folate receptor binding ligand and a pharmaceutically acceptable carrier thereof, characterized in that the composition further comprises IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL -18, IFN-?, IFN-?, GM-CSF, or combinations thereof. 4. Composición farmacéutica, según las reivindicaciones 1 a 3, en la que el ligando se conjuga al inmunógeno a través de una unión que comprende un enlace covalente, iónico o de hidrógeno.4. Pharmaceutical composition, according to claims 1 to 3, wherein the ligand is conjugated to the immunogen through a junction comprising a covalent bond, ionic or hydrogen. 5. Composición farmacéutica, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el inmunógeno es un nucleótido CpG.5. Pharmaceutical composition, according to any of the preceding claims, wherein the immunogen is a CpG nucleotide. 6. Composición farmacéutica, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en una forma de dosificación de liberación prolongada parenteral.6. Pharmaceutical composition, according to any of the preceding claims, in a dosage form of extended parenteral release. 7. Utilización de una composición farmacéutica en una forma de dosificación parenteral que comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno y en el que el inmunógeno activa un receptor de tipo toll y en el que el inmunógeno es un nucleótido y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión a receptor de folato, en la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, caracterizado porque el medicamento comprende además IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, o combinaciones de las mismas.7. Use of a pharmaceutical composition in a parenteral dosage form comprising therapeutically effective amounts of a ligand-immunogen conjugate and wherein the immunogen activates a toll-like receptor and wherein the immunogen is a nucleotide and in which the ligand is folic acid or another folate receptor binding ligand, in the preparation of a medicament for the treatment of cancer, characterized in that the medicament further comprises IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL- 12, IL-15, IL-18, or combinations thereof. 8. Utilización, según la reivindicación 6, en la que el medicamento comprende además IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, o combinaciones de las mismas, en combinación con IFN-\alpha o IFN-\gamma.8. Use according to claim 6 in the that the medicine also includes IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, or combinations thereof, in combination with IFN-? Or IFN-?. 9. Utilización de una composición farmacéutica en una forma de dosificación parenteral que comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno, en el que el inmunógeno activa un receptor de tipo toll y en el que el inmunógeno es un nucleótido y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión a receptor de folato, en la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, caracterizado porque el medicamento comprende además IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, IFN-\alpha, IFN-\gamma, GM-CSF, o combinaciones de las mismas.9. Use of a pharmaceutical composition in a parenteral dosage form comprising therapeutically effective amounts of a ligand-immunogen conjugate, in which the immunogen activates a toll-like receptor and in which the immunogen is a nucleotide and in which the ligand is folic acid or another folate receptor binding ligand, in the preparation of a medicament for the treatment of cancer, characterized in that the medicament further comprises IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL- 12, IL-15, IL-18, IFN-?, IFN-?, GM-CSF, or combinations thereof. 10. Utilización, según las reivindicaciones 7 a 9, en la que el ligando se conjuga al inmunógeno a través de una unión que comprende un enlace covalente, iónico o de hidrógeno.10. Use according to claims 7 to 9, in which the ligand is conjugated to the immunogen through a binding comprising a covalent, ionic or hydrogen bond. 11. Utilización, según las reivindicaciones 7 a 10, en la que el inmunógeno es un nucleótido CpG.11. Use according to claims 7 to 10, in which the immunogen is a CpG nucleotide. 12. Utilización, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores 7 a 11, en la que el medicamento es una forma de dosificación de liberación prolongada parenteral.12. Use, according to any of the previous claims 7 to 11, wherein the medicament is a parenteral prolonged release dosage form. 13. Composición farmacéutica, según las reivindicaciones 1-6, en una forma de dosificación parenteral que comprende cantidades terapéuticamente eficaces de un conjugado ligando-inmunógeno para su utilización en la activación de un receptor de tipo toll, en el que el inmunógeno es un nucleótido y en el que el ligando es ácido fólico u otro ligando de unión a receptor de folato y un portador farmacéuticamente aceptable para los mismos, en combinación con IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, IFN-\alpha, IFN-\gamma, GM-CSF, o combinaciones de las mismas.13. Pharmaceutical composition, according to claims 1-6, in a dosage form parenteral comprising therapeutically effective amounts of a ligand-immunogen conjugate for use in the activation of a toll-like receptor, in which the immunogen is a nucleotide and in which the ligand is folic acid or other folate receptor binding ligand and a carrier pharmaceutically acceptable thereto, in combination with IL-2, IL-4, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-18, IFN-?, IFN- γ, GM-CSF, or combinations thereof.