ES2338098T3 - Terapia de combinacion de enfermedades respiratorias usando anticuerpos y agentes antiinflamatorios. - Google Patents

Abstract

Uso de al menos un anticuerpo neutralizante anti-virus respiratorio sincitial (RSV), incluyendo variantes neutralizantes y terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas, y al menos un corticosteroide para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad respiratoria y para la mejoría de la inflamación causada por una infección por RSV, donde el medicamento está destinado a administrarse por vía sistémica.

Description

Terapia de combinación de enfermedades respiratorias usando anticuerpos y agentes antiinflamatorios.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevas composiciones que comprenden anticuerpos y corticosteroides con la adición opcional de agentes antivirales útiles en el tratamiento y/o la prevención de enfermedades y los síntomas secundarios a enfermedades, especialmente a enfermedades respiratorias.

Antecedentes de la invención

La incidencia actual de infecciones causadas por microbios resistentes o difíciles de controlar, incluyendo tanto virus como bacterias, ha generado la necesidad de nuevas estrategias para controlar dichos organismos, así como para tratar los ya infectados.

Entre los agentes infecciosos más difíciles de controlar y tratar están los virus. Por ejemplo, el virus respiratorio sincitial (RSV) es una causa principal de enfermedad respiratoria aguda en niños pequeños ingresados en hospitales y la causa principal de infecciones del tracto respiratorio inferior en niños pequeños. Un obstáculo principal en la producción de una vacuna eficaz contra agentes tales como el RSV ha sido la cuestión de la seguridad. Por el contrario, el uso de inmunoglobulinas contra dichos agentes virales ha demostrado ser de algún valor. Por ejemplo, los estudios han demostrado que la inmunoglobulina de RSV de alto título era eficaz en la profilaxis para infecciones por RSV en modelos animales. Sin embargo, las inmunoglobulinas, aunque eran altamente eficaces en animales cuando se usaban profilácticamente, eran mínimamente eficaces cuando se usaban terapéuticamente. Por lo tanto, el uso de anticuerpos para tratar animales, tales como seres humanos, sin alguna fuente de terapia adicional puede resultar relativamente ineficaz. Por consiguiente, el uso de anticuerpos con agentes adicionales podría ser más útil y un contenido de la presente invención es la identificación de dichos agentes para terapia de combinación con anticuerpos. La presente invención resuelve los problemas experimentados por regímenes de tratamiento previos por combinación de diferentes formas de terapia como un medio para tratar la enfermedad. Por ejemplo, el tratamiento con un anticuerpo neutralizante en solitario no aborda las cuestiones sobre inflamación, mientras que el tratamiento con agentes antiinflamatorios en solitario no controla el avance del virus. Por lo tanto, el tratamiento del RSV con esteroides, que se ha demostrado en algunos casos que tiene escaso efecto cuando se administra por vía sistémica en lugar de por vía tópica, se muestra en este documento que tiene un efecto superior cuando se administra por vía sistémica junto con un anticuerpo neutralizante potente.

Las bacterias también suponen un desafío formidable en el área del control y la prevención de enfermedades. Esto es especialmente cierto con el aumento de las infecciones intrahospitalarias en hospitales y en otros sitios y el uso de anticuerpos de alto título en el control de dichas infecciones sería una solución bien recibida a este problema.

Como resultado, una estrategia alternativa a la terapia microbiana ha sido el desarrollo de anticuerpos, especialmente anticuerpos monoclonales neutralizantes, con actividad neutralizante altamente específica. Un inconveniente de esta vía ha sido la necesidad de producir anticuerpos humanos en lugar de los de ratón o rata y por tanto minimizar el desarrollo de respuestas de anticuerpos humanos anti-ratón o anti-rata que potencialmente den como resultado inmunopatología.

Una estrategia alternativa ha sido la producción de anticuerpos en los que los genes que codifican las regiones variables de las cadenas pesada y ligera de ratón se han acoplado con los genes para las regiones constantes de las cadenas pesada y ligera humanas para producir anticuerpos quiméricos o híbridos.

En algunos casos, se han injertado CDR de ratón sobre regiones constantes y flanqueantes humanas, sustituyéndose algunos de los aminoácidos de la región flanqueante de ratón por aminoácidos humanos situados en posiciones correspondientes para proporcionar un anticuerpo "humanizado". [Patentes de Estados Unidos Nº 5.693.761 y 5.693.762].

Se ha preparado un anticuerpo anti-RSV humanizado con buena afinidad y se está comercializando actualmente.

Además, han hecho su aparición varios agentes terapéuticos distintos útiles contra virus tales como el virus respiratorio sincitial (RSV), así como el virus parainfluenza (PIV). Sin embargo, algunos de estos agentes químicos, tales como la ribavirina, han mostrado inconvenientes. Por lo tanto, por ejemplo, la ribavirina, aunque actualmente está autorizada para la terapia de la neumonía y la bronquiolitis por RSV (Hall y col, N. Engl. J. Med., 308: 1443 (1983); Hall y col., JAMA, 254: 3047 (1985), su valor todavía es controvertido [véase: Ohmit y col, J. Clin. Epidemiol., 49, 963 (1996)] y tiene que administrarse diariamente durante un periodo de 18 horas mediante inhalación de aerosol. Además, el nivel de infecciones secundarias después de la suspensión del tratamiento es significativamente superior que en pacientes sin tratar.

Aunque se han demostrado los efectos beneficiosos de anticuerpos conocidos tales como palivizumab y RespiGam® (ambos producidos por Medlmmune, Gaithersburg, MD), todavía tiene que demostrarse el papel de dichos agentes como corticosteroides en la terapia de la bronquiolitis y la neumonía por el virus respiratorio sincitial (RSV). Aunque algunos de los problemas pueden haberse debido a incoherencias en la selección y dosificación de los esteroides utilizados, se ha demostrado que la combinación de corticosteroides con anticuerpos tales como los mencionados en este documento reduce enormemente los títulos virales sin alterar el grado de inflamación (véase Prince y col, J. Inf. Dis., (2000), a continuación). Por lo tanto, la presente invención ha resuelto gran parte del problema logrando una reducción espectacular de las infecciones respiratorias del tracto inferior (LRI) en animales usando esteroides en combinación con un anticuerpo monoclonal contra RSV.

Breve sumario de la presente invención

La presente invención se refiere a composiciones que comprenden un anticuerpo monoclonal neutralizante, incluyendo anticuerpos de alta afinidad contra virus respiratorios así como otros organismos causantes de enfermedades y/o insuficiencia respiratoria, así como otros agentes terapéuticos útiles en el tratamiento de enfermedades respiratorias.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporcionan composiciones terapéuticas que contienen un anticuerpo neutralizante, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, así como uno o más agentes antiinflamatorios adicionales capaces de funcionar coordinados para tratar y/o prevenir infecciones antivirales, especialmente las del sistema respiratorio, más especialmente las enfermedades causadas por RSV.

En una realización, la composición terapéutica de la presente invención comprende un anticuerpo anti-RSV, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, útil en el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad respiratoria inducida por virus, y un agente antiinflamatorio adicional útil en el tratamiento de una infección por RSV.

En una realización diferente, la presente memoria descriptiva también se refiere a composiciones que comprenden un anticuerpo neutralizante anti-RSV, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, y un agente antiinflamatorio adicional, siendo este último eficaz contra las inflamaciones que acompañan a una infección por RSV, tales como infecciones por otros virus, por ejemplo, virus parainfluenza (PIV), así como por bacterias, hongos y otros diversos parásitos.

En una realización preferida, el anticuerpo monoclonal neutralizante usado en las composiciones de la presente invención es un anticuerpo desvelado en la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307. El uso de variantes estructurales de este anticuerpo también se contempla específicamente por la presente invención.

En una realización preferida, una composición terapéutica de la presente invención comprende un anticuerpo neutralizante anti-RSV, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, más preferentemente un anticuerpo específico para el epítope F del RSV, o una variante del mismo, incluyendo fragmentos activos del mismo, y corticosteroides, que tienen un valor terapéutico en el tratamiento de enfermedades víricas del sistema respiratorio, preferentemente enfermedades causadas por RSV, influenza y PIV.

En una realización más preferida de la presente invención, el propio agente antiinflamatorio es un anticuerpo.

En otra realización más preferida, la composición terapéutica comprende un anticuerpo neutralizante anti-RSV, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, un anticuerpo anti-interleucina-6 (anti-IL-6) y un agente antiinflamatorio que no sea un anticuerpo, tal como un agente antiinflamatorio incluyendo un esteroide.

En una realización preferida, dicho agente antiinflamatorio es un corticosteroide. En una realización más preferida, el anticuerpo es un anticuerpo específico para el antígeno F del RSV, especialmente un anticuerpo con la misma especificidad de epítope de un anticuerpo como se desvela en la Patente Estados Unidos Nº 5.824.307 o una variante inmunológicamente activa del mismo, y el corticosteroide se selecciona del grupo constituido por cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, betametasona, beclametasona y dexametasona.

Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar composiciones antimicrobianas que comprenden anticuerpos antimicrobianos, agentes antiinflamatorios y, opcionalmente, un agente antimicrobiano adicional tal como un agente antiviral, por ejemplo, ribavirina, amantadina, rimantadina o un inhibidor de neuraminidasa.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra los resultados de la terapia del RSV empleando una composición de la presente invención. En este documento, la composición terapéutica emplea un anticuerpo anti-RSV (denominado comercialmente palivizumab) y triamcinolona. En este documento, el anticuerpo anti-RSV es una inmunoglobulina IgG que es útil en el tratamiento de enfermedades respiratorias causadas por virus (véase: Pediatrics, 102 (3 Pt. 1), págs. 631-637 (1998)), tales como RSV y PIV, y cuya secuencia se describe como Medi-493 en Johnson y col, J. of Infectious Diseases, 176, 1215-1224 (1997) o en las Figuras 7 y 8 de la Patente de Estados Unidos Nº: 5.824.307. Los resultados representan una combinación de los resultados del Ejemplo 1 (repetido en su totalidad para dar dos conjuntos de datos completos) y parte de los resultados del Ejemplo 2.

La Figura 2 muestra los resultados del tratamiento de ratas algodoneras infectadas con virus respiratorio sincitial usando una terapia combinada de anticuerpos/esteroides. El panel A muestra el título de RSV para cada uno de los grupos de animales cuyo tratamiento se describe en el Ejemplo 1. El panel B muestra los resultados para la puntuación compuesta de la patología, el panel C la puntuación de la peribronquiolitis, el panel D la puntuación de la alveolitis y el panel E la puntuación de la neumonía intersticial.

La Figura 3 muestra los resultados de la terapia de combinación de anticuerpos/esteroides sobre la neumonía por RSV en ratas algodoneras como se describe en el Ejemplo 2. El panel A muestra los resultados para el título de virus y el panel B muestra los resultados para puntuación compuesta de la patología.

La Figura 4 muestra los resultados de la terapia de combinación de anticuerpos/esteroides sobre la neumonía por RSV en ratas algodoneras como se describe en el Ejemplo 2. El panel A muestra los resultados para el título de virus para los grupos 1-3, el panel B muestra los resultados para el título de virus para los grupos 4-6 y el panel C muestra los resultados para la puntuación compuesta de la patología. Estos datos indican una ausencia de patología de rebote después de una terapia de combinación sistémica.

La Figura 5 muestra los resultados de una terapia de combinación de anticuerpos/esteroides sobre la neumonía por RSV en ratas algodoneras usando varios esteroides diferentes con el mismo anticuerpo. Las dosis de tratamiento para cada grupo de animales se muestran en la parte inferior del histograma.

La Figura 6 muestra los efectos de la terapia combinada de anticuerpos/esteroides sobre los niveles de ARNm en ratas algodoneras con neumonía por RSV. El panel A muestra el título de virus y el panel B muestra la puntuación de la patología con fines de referencia. Los paneles C a G muestran los niveles de ARNm.

La Figura 7 muestra la patología pulmonar después del tratamiento con anticuerpo y esteroides. La Figura 1A muestra las puntuaciones medias aritméticas pulmonares (más el error típico) para el grado de bronquiolitis, alveolitis y neumonía intersticial observadas en ratas algodoneras el día 6 después de la infección con 10^{6,5} ufp de virus respiratorio sincitial (excluyendo los controles sin infectar) después la terapia indicada. Cada grupo representa 8 ó 9 animales. La Figura 1B muestra las puntuaciones compuestas de la patología después de una infección con 10^{6,5} ufp de virus respiratorio sincitial, con muestreo de la histopatología pulmonar los días 6, 8, 10, 12 y 14 después de la terapia indicada. Cada grupo representa 3 ó 4 animales.

Sumario detallado de la invención

Un problema al que se enfrentan los médicos clínicos en sus intentos por controlar las infecciones inducidas por virus es la inflamación de tejidos respiratorios delicados y sensibles que a menudo acompaña a dicha infección a medida que el sistema respiratorio intenta responder a la infección.

Se presenta una solución a este problema mediante las composiciones de la presente invención, que se refieren a composiciones terapéuticamente eficaces que comprenden un anticuerpo monoclonal neutralizante, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, contra virus respiratorios, tales como, por ejemplo, el virus respiratorio sincitial (RSV) e incluso el virus parainfluenza (PIV), influenza A, influenza B, influenza C, así como agentes virales relacionados que causan enfermedades respiratorias, y otros agentes terapéuticos, incluyendo otros anticuerpos y agentes que no sean anticuerpos, útiles en el tratamiento de una enfermedad respiratoria y en la mejoría de la inflamación causada por dichas infecciones.

Las composiciones y tratamientos de acuerdo con la presente invención representan una solución a este problema aprovechando las capacidades únicas de los anticuerpos, especialmente los utilizados en este documento, para controlar los estragos de las infecciones bacterianas y víricas, más particularmente ya que afectan a los tejidos delicados del sistema respiratorio, y de este modo contrarrestar los efectos de otro modo perjudiciales de depender únicamente de agentes antimicrobianos altamente potentes y potencialmente tóxicos que, debido a sus propiedades químicas y biológicas, deben administrarse forzosamente en dosificaciones moderadas y a veces inferiores a las eficaces.

Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar composiciones terapéuticas que comprenden un anticuerpo, tal como un anticuerpo neutralizante, incluyendo un anticuerpo neutralizante de alta afinidad, especialmente un anticuerpo anti-RSV, más especialmente un anticuerpo que tiene la misma afinidad que un anticuerpo cuyas secuencias de la cadena variable se desvelan en las Figuras 7 y 8 de la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307, tal como anticuerpos con una afinidad y especificidad similar al palivizumab mencionado anteriormente (usado en el experimento de la Figura 1), incluyendo todas las variantes inmunológicamente activas y fragmentos de las mismas, así como uno o más agentes adicionales capaces de funcionar por separado o coordinados para tratar y/o prevenir la inflamación del sistema respiratorio causada por la infección con agentes virales tales como RSV y PIV. Dichas composiciones también sirven para combatir y/o aliviar los efectos fisiológicos y/o inmunológicos perjudiciales de dichas infecciones, especialmente infecciones del sistema respiratorio, más especialmente enfermedades causadas por RSV o PIV y/u otros virus.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo, tal como un anticuerpo neutralizante, incluyendo un anticuerpo neutralizante de alta afinidad e incluyendo variantes activas y fragmentos de las mismas, que tiene especificidad por uno o más epítopes del virus respiratorio sincitial (RSV), y al menos un agente antiinflamatorio capaz de aliviar los efectos de la inflamación causada por una infección vírica, y en la que dichos agentes están suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable, incluyendo todos los diluyentes y/o excipientes aceptables.

Los anticuerpos, tales como Palivizumab, útiles en la presente invención pueden incluir una molécula de anticuerpo completa (es decir, una estructura tetramérica con la organización H_{2}L_{2} común) o fragmentos activos de la misma. Dichos fragmentos incluyen, pero sin limitación, Fab, F(ab')_{2} anticuerpos de cadena sencilla, anticuerpos quiméricos tales como anticuerpos quiméricos humanos-murinos, anticuerpos humanizados, estando estos últimos formados por regiones flanqueantes y constantes humanas con regiones determinantes de complementariedad (CDR) procedentes de una especie distinta de la humana, tales como murinas, así como anticuerpos completamente sintéticos (es decir, recombinantes) que tienen secuencias de aminoácidos diferentes de las de cualquier anticuerpo producido en la naturaleza o generado hasta ahora por el hombre. Dichos anticuerpos totalmente sintéticos pueden producirse por clonación en células recombinantes producidas para tal fin o por síntesis química directa in vitro.

El anticuerpo neutralizante antiviral, por ejemplo, anti-RSV, de la presente invención también puede incluir moléculas de anticuerpos y fragmentos activos de las mismas que tienen una secuencia de aminoácidos diferente de la de un anticuerpo como se desvela en la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307 (y, por lo tanto, ser una variante del mismo), siempre que se mantenga una buena potencia contra el virus respiratorio, tal como el RSV, u otro agente microbiano causante de enfermedad.

De acuerdo con la presente invención, los anticuerpos útiles en los procedimientos desvelados en este documento tienen típicamente constantes de afinidad por sus epítopes antigénicos respectivos que están en intervalo de no más de aproximadamente 1 nM (o de al menos aproximadamente 10^{-9} M). Debido a que dichas altas afinidades no se miden fácilmente, excepto por los procedimientos descritos en este documento, dicho valor puede considerarse comúnmente parte de un intervalo y, por ejemplo, puede estar dentro de 100 veces los valores en nM enumerados en este documento. Por lo tanto, pueden ser aproximadamente 100 veces mayores (10^{-7} M) o menores (10^{-11} M) que este valor, o pueden igualar este valor, y todavía ser útiles en la presente invención. Debido a que ésta es una constante de disociación, cuanto mayor es el valor mayor es el grado de disociación del antígeno y el anticuerpo y, por lo tanto, menor es la afinidad. Dichos valores pueden convertirse fácilmente en constantes de asociación tomando la inversa de la constante de disociación y ajustando las unidades a la inversa de la molaridad en lugar de a la molaridad. En tal caso, la afinidad del anticuerpo por su antígeno aumentará con constantes de asociación crecientes. Dichos anticuerpos neutralizantes se conocen en la técnica (véase, por ejemplo, los anticuerpos desvelados en las Figuras 7 y 8 de la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307 en las que la afinidad se indica mediante una constante de disociación, que está en la naturaleza de una constante de unión, para dar unidades de molaridad). Como se usa en este documento, una alta afinidad constituiría una constante de disociación de aproximadamente 10^{-9} M o inferior. Como tal, la afinidad del anticuerpo por su antígeno es inversamente proporcional al valor de esta constante (es decir, cuanto mayor es la constante menor es la afinidad). Dicha constante se calcula fácilmente a partir de las constantes de velocidad para las reacciones de asociación-disociación, según se miden por una metodología cinética convencional para reacciones de anticuerpos (véase en la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307 un procedimiento sugerido para hacer esto).

Las composiciones no están limitadas en su modo de administración al paciente. Por lo tanto, dicha administración puede incluir la administración por vía parenteral así como oral, y por lo tanto incluir la administración por vía intravenosa, intramuscular, pulmonar y cualquier tipo de administración sistémica. En la administración de la terapia de combinación de la presente invención debe tenerse claramente en mente que los efectos producidos por dicho tratamiento son el resultado de la combinación de agentes utilizados en este documento, pero que dichos agentes no tienen que administrarse necesariamente de forma simultánea o como parte de la misma mezcla y, si es adecuado, pueden administrarse en diferentes momentos y en dosificaciones independientes calculadas para tener el efecto terapéutico global máximo aunque estos efectos puedan producirse por separado por los diferentes componentes de las composiciones reivindicadas.

En otras realizaciones, la composición de la presente invención comprende un anticuerpo anti-RSV, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, además de un anticuerpo cuya especificidad se dirige contra algún otro agente viral. Dichas realizaciones incluyen composiciones que comprenden anticuerpos anti-RSV adicionales, incluyendo anticuerpos de alta afinidad. Una realización específica de dicha composición comprende un anticuerpo como se desvela en las Figuras 7 y 8 de la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307 y un anticuerpo anti-RSV adicional.

Las composiciones de la presente invención también pueden comprender un agente antiviral que no sea un anticuerpo, u otro agente antimicrobiano, además del anticuerpo o anticuerpos neutralizantes y de los agentes antiinflamatorios que comprenden comúnmente las composiciones desveladas en este documento. Dichas composiciones pueden incluir un solo agente antiviral o dos o más agentes antivirales, a concentraciones y dosificaciones similares o diferentes dependiendo de la eficacia del agente contra el virus en cuestión, así como de las necesidades del paciente y de las determinaciones e inclinaciones del médico, a cuyo buen juicio se dejan dichas decisiones. En una realización preferida, dicho agente antiviral es un agente químico antiviral potente, pero también puede ser algún otro anticuerpo antiviral. Por lo tanto, una composición preferida incluye una mezcla de anticuerpos antivirales o una mezcla de anticuerpos antivirales y antibacterianos con especificidades diferentes y un agente antiinflamatorio, incluyendo esteroides y anticuerpos antiinflamatorios.

Se conocen pruebas de la eficacia de la utilización de un tratamiento de enfermedades respiratorias tales como bronquiolitis y neumonía usando anticuerpos y glucocorticoides en combinación. (Véase: Prince y col, J. Infectious Diseases, 182: 1326-30 (2000), que combina el anticuerpo monoclonal palivizumab con acetónido de triamcinolona en ratas algodoneras (Sigmodon hispidus).

Un agente antiviral tal como ribavirina puede administrarse por vía oral, después de lo cual su biodisponibilidad es de aproximadamente el 45% con concentraciones máximas en plasma después de aproximadamente 1 a 2 horas. Las dosis individuales en adultos están en el intervalo de 600 a 1200 mg. La vía de administración general para la ribavirina es por aerosol con una dosis para lactantes de aproximadamente 1,4 mg/kg de peso corporal por hora y un tratamiento durante aproximadamente 12 a 18 horas al día durante un periodo de 3 a 7 días. Sin embargo, la dosificación para los agentes antivirales particulares (tales como amantadina, rimantadina o un inhibidor de neuraminidasa) que pueden administrarse junto con los anticuerpos y agentes antiinflamatorios de la presente invención puede ser diferente dependiendo del agente y de la gravedad de la afección que se trate. A pesar de dichas consideraciones, las dosificaciones de dichos agentes que no son anticuerpos para uso en las terapias de combinación desveladas en este documento comúnmente diferirán sólo ligeramente, si lo hacen, de las dosificaciones usadas normalmente en el tratamiento de la enfermedad en cuestión.

De acuerdo con la presente invención, la patología debida al RSV se debe tanto a la destrucción tisular directa como a la inflamación debida al reclutamiento de células inmunes, citocinas y quimiocinas. Se conoce en la técnica una terapia de combinación para el RSV, tal como la que implica agentes antivirales y antiinflamatorios. [Véase: Prince y col., Patente de Estados Unidos 5.290.540]. De hecho, se ha descubierto que algunos corticosteroides no son particularmente útiles para tratar la inflamación debida al RSV. Esos casos implicaban corticosteroides administrados por vía sistémica (véase, por ejemplo, la ineficacia descrita de la prednisolona administrada por vía sistémica en RSV en lactantes, en Bulow y col, Prednisolone treatment of Respiratory Syncytial Virus Infection: a randomized controlled trial of 147 Infants, Pediatrics, 104 (6 diciembre 1999), pág. e77). Por el contrario, el uso de dichos agentes junto con un anticuerpo antiviral auténtico (es decir, anti-RSV), tal como un anticuerpo neutralizante, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, tales como los descritos en este documento para usar en las terapias de la presente invención, especialmente cuando la dosis apropiada y el esteroide se seleccionan para dicho uso, proporciona una estrategia nueva y eficaz para tra-
tar infecciones respiratorias mediante terapia de combinación (véanse los resultados proporcionados por la Figura 1).

Como se describe en la bibliografía, puede no ser de mucho valor eliminar los efectos de la infección vírica de células del sistema respiratorio usando agentes antivirales y anticuerpos dirigidos contra dichos virus si, de hecho, la afección vírica ya ha desencadenado un efecto inflamatorio (es decir, un efecto inmunológico) que continuará agravando la afección patológica mucho después de que se haya eliminado el propio agente viral del área infectada. [Véase: Prince y Porter, J. Infect. Dis., 173: 598 (1996)]. Para evitar dichos efectos secundarios indeseables del tratamiento con un agente antiviral, tal como los anticuerpos y otros agentes antivirales útiles en la presente invención, es deseable tener un régimen antiinflamatorio eficaz en su lugar.

En vista de lo anterior, la presente memoria descriptiva también se refiere a una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo neutralizante antimicrobiano, incluyendo anticuerpos de alta afinidad e incluyendo variantes inmunológicamente activas y fragmentos de las mismas, que tiene especificidad por uno o más epítopes del virus respiratorio sincitial (RSV), y al menos un agente antiinflamatorio, en la que dicho anticuerpo y agente están suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable, que incluye todos los diluyentes y excipientes apropiados.

De acuerdo con la descripción de este documento, dicho agente antiinflamatorio puede incluir un anticuerpo o un agente que no sea un anticuerpo. Cuando dicho agente antiinflamatorio es un anticuerpo, una realización preferida incluirá un anticuerpo anti-citocina o anti-quimiocina, por ejemplo, un anticuerpo anti-interleucina, especialmente un anticuerpo anti-interleucina-6 (anti-IL-6), un anti-interferón (anti-IFN) o un anti-factor de necrosis tumoral (anti-TNF). Dichos anticuerpos pueden ser de naturaleza policlonal o monoclonal.

También de acuerdo con la presente invención, cuando dicha composición comprende un agente antiinflamatorio, dicho agente puede ser un corticosteroide, seleccionándose preferentemente dicho corticosteroide del grupo constituido por cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, betametasona, beclametasona y dexametasona. Dichos agentes pueden administrarse comúnmente como sus sales correspondientes, pero esto no es específicamente necesario para la práctica de la invención de este documento.

Una realización especialmente preferida de las composiciones de la presente invención comprende un anticuerpo anti-RSV, especialmente palivizumab, y un agente antiviral, por ejemplo, y un agente antiinflamatorio, especialmente un corticosteroide.

Las composiciones farmacéuticas comprenderán suficiente anticuerpo activo y agentes antivirales y/o antiinflamatorios para producir una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición, es decir, una cantidad suficiente para reducir la cantidad de virus infeccioso, por ejemplo, RSV. Las composiciones farmacéuticas también contendrán un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, que incluye cualquier agente farmacéutico que por sí mismo no induzca la producción de anticuerpos perjudiciales para el individuo que recibe la composición y que pueda administrarse sin una toxicidad excesiva. Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, líquidos tales como agua, solución salina, glicerol y etanol. Está disponible una discusión minuciosa de excipientes farmacéuticamente aceptables en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Pub. Co., N. J. 1991).

La presente invención también se refiere a procedimientos de tratamiento y/o prevención de una enfermedad respiratoria, especialmente enfermedades causadas por el virus respiratorio sincitial, que comprenden administrar a un animal, especialmente a un paciente humano, en riesgo de padecer dicha enfermedad o aquejado de dicha enfermedad, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición seleccionada del grupo constituido por las composiciones desveladas en este documento.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un procedimiento para el tratamiento de un animal, especialmente un paciente humano, que padece una enfermedad respiratoria del tracto inferior, tal como RSV, y en el que dicha enfermedad está causada por un agente microbiano, especialmente cuando dicho agente ha causado, o es probable que cause, una inflamación de los tejidos infectados de este modo o de los tejidos que rodean a dichos tejidos infectados.

Las dosificaciones óptimas para los anticuerpos anti-RSV que componen las composiciones de la presente invención pueden estar en el intervalo de 5 a 20 mg/kg de peso corporal, siendo el óptimo para el palivizumab de aproximadamente 15 mg/kg de peso corporal (cuando se administra por vía intravenosa). Los agentes antimicrobianos que no son anticuerpos, cuando se usan en dichas composiciones, distintos de los anticuerpos antivirales empleados en este documento, se administran comúnmente en el intervalo de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 1 gramo por kg de peso corporal. Los agentes antiinflamatorios usados en las composiciones desveladas en este documento están comúnmente en el intervalo de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 1 gramo por kg de peso corporal. Cuando dicho agente antiinflamatorio es un esteroide, el intervalo de dosificaciones estará en el intervalo de 10 \mug a aproximadamente 1 gramo por kg de peso corporal, siendo un intervalo preferido de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal.

Un ejemplo de un agente infeccioso primario que se controlará mediante las composiciones y procedimientos de la presente invención es el virus respiratorio sincitial, pero es posible que también puedan estar presentes otros agentes infecciosos como patógenos oportunistas. Éstos pueden incluir otros virus, especialmente virus influenza A, influenza B e influenza C y parainfluenza (PIV), especialmente PIV3, alguna variante o mutante del RSV, un coronavirus respiratorio e incluso un adenovirus, y diversos tipos de agentes bacterianos que son fuentes de infección primaria dentro del sistema respiratorio o que son agentes capaces de agravar enfermedades víricas existentes o que debilitan el sistema respiratorio para hacerlo más susceptible a dichas enfermedades víricas.

Los agentes infecciosos adicionales que actúan como patógenos oportunistas no se limitan a los virus y bacterias. Por lo tanto, una infección adicional puede estar causada por organismos no virales o bacterianos, incluyendo diversos hongos y otros parásitos. Como resultado, las composiciones de acuerdo con la presente invención también pueden comprender agentes antiinfecciosos distintos de agentes antivirales. Las composiciones terapéuticamente activas dentro de la presente invención pueden comprender por lo tanto un anticuerpo anti-RSV y un agente antibacteriano, incluyendo antibióticos, así como agentes antifúngicos y agentes antiparasitarios de amplio espectro o de espectro reducido. Además, todos estos últimos agentes adicionales pueden ser por sí mismos anticuerpos policlonales o monoclonales de baja o alta afinidad con especificidad contra bacterias u hongos u otros parásitos que infectan el sistema respiratorio, así como otros sistemas relacionados o no relacionados.

Las composiciones desveladas de acuerdo con la presente invención para la terapia de enfermedades como se enumeran en este documento pueden incluir fácilmente múltiples anticuerpos contra el mismo virus o contra virus diferentes, o contra un virus y un agente infeccioso microbiano adicional, o contra algún agente infeccioso microbiano no viral, y pueden incluir además agentes no inmunológicos en combinación con dichos anticuerpos. En realizaciones específicas de la presente invención, las composiciones desveladas en este documento pueden incluir un anticuerpo contra un virus, tal como el RSV, más un anticuerpo contra un agente bacteriano, especialmente uno que infecte el sistema respiratorio, tal como que cause tuberculosis y, opcionalmente, un agente antiviral. Una composición terapéutica dentro de la presente invención puede comprender asimismo un anticuerpo antiviral, un agente antiviral no inmunológico, tal como ribavirina, amantadina, rimantadina o un inhibidor de neuraminidasa (siendo estos tres últimos agentes muy útiles contra la gripe), donde el RSV es el agente infeccioso primario, y un agente antimicrobiano eficaz en el tratamiento de algún patógeno no viral, tal como bacterias, incluyendo el agente de la tuberculosis, o contra algún agente parasitario, y un agente antiinflamatorio, tal como cualquiera de los ya desvelados anteriormente en este documento.

Por lo tanto, de acuerdo con la presente invención, el agente antiinfeccioso usado en una composición con el anticuerpo anti-RSV, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, puede ser un agente antibacteriano, incluyendo, pero sin limitación un macrólido, una penicilina, una cefalosporina o una tetraciclina, o puede ser un agente antifúngico, incluyendo, pero sin limitación, anfotericina b, fluconazol o ketoconazol, o un agente antiparasitario, incluyendo, pero sin limitación, trimetroprim, pentamidina o una sulfonamida. Los agentes antiinfecciosos pueden ser un agente antiviral tal como ribavirina, amantadina, rimantadina o un inhibidor de neuraminidasa. Dichos agentes adicionales también pueden incluir agentes útiles contra otros virus, así como otros agentes útiles contra el RSV.

Sin embargo, en todas las realizaciones preferidas de la presente invención, la enfermedad primaria a tratar y/o prevenir usando las composiciones desveladas en este documento está causada por el virus respiratorio sincitial (RSV).

Con la llegada de procedimientos de biología molecular y tecnología recombinante, ahora es posible producir anticuerpos para usar en la presente invención por medios recombinantes, y de este modo generar secuencias génicas que codifiquen secuencias aminoacídicas específicas que se encuentran en la estructura polipeptídica de los anticuerpos. Esto ha permitido la fácil producción de anticuerpos que tienen secuencias características de anticuerpos neutralizantes de diferentes especies y fuentes.

De acuerdo con lo anterior, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos anti-RSV, más preferentemente anticuerpos cuya especificidad es contra el mismo epítope del RSV que el anticuerpo de la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307, e incluyen todas las variantes terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas producidas por procedimientos recombinantes o por síntesis directa de los polipéptidos del anticuerpo.

Los anticuerpos anti-RSV útiles en las composiciones de la presente invención comprenderán comúnmente una región constante de mamífero, preferentemente humana, y una región variable, comprendiendo dicha región variable regiones flanqueantes de las cadenas pesada y ligera y CDR de las cadenas pesada y ligera, en los que las regiones flanqueantes de las cadenas pesada y ligera proceden de un anticuerpo de mamífero, preferentemente un anticuerpo humano, y en los que las CDR proceden de un anticuerpo de alguna especie distinta de la humana, preferentemente un ratón. Cuando los aminoácidos flanqueantes también proceden de un mamífero no humano, éste último es preferentemente un ratón.

Además, los anticuerpos, incluyendo anticuerpos de alta afinidad, de la invención se unen al mismo epítope que el anticuerpo del que proceden las CDR, y donde al menos una de las CDR de dicho anticuerpo contiene sustituciones de aminoácidos, y donde dichas sustituciones comprenden la sustitución de uno o más aminoácidos en las regiones CDR por aminoácidos no idénticos, preferentemente los aminoácidos de las posiciones correspondientemente alineadas de las regiones CDR del anticuerpo humano que contribuyen a los dominios flanqueantes y constantes.

El huésped contemplado al que está destinado el tratamiento o la profilaxis con las composiciones descritas en este documento es generalmente un animal, especialmente un mamífero, más especialmente un paciente humano.

Otra realización preferida de la invención proporciona un procedimiento de tratamiento de enfermedades del tracto respiratorio superior y/o inferior en un huésped, especialmente las causadas por el virus respiratorio sincitial, susceptible de padecer o que padece dicha enfermedad, que comprende administrar al huésped una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende un anticuerpo anti-RSV, más preferentemente el anticuerpo desvelado en las Figuras 7 y 8 desveladas en la Patente de Estados Unidos Nº 5.824.307, incluyendo variantes terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas, un agente antiviral distinto del anticuerpo anti-RSV previamente indicado, con actividad contra RSV, y un agente antiinflamatorio, siendo dicha composición suficientemente activa para producir un efecto terapéutico contra dicha enfermedad.

Dicha composición puede administrarse por cualquier medio adecuado, incluyendo, pero sin limitación, las vías oral, intravenosa, intramuscular, pulmonar y nasal. Dicha composición puede administrarse directamente en el tracto respiratorio superior o inferior del huésped. Un virus típico a tratar es el virus respiratorio sincitial, pero pueden tratarse simultáneamente otros virus, tales como virus parainfluenza, especialmente de tipo 3. De acuerdo con los procedimientos de tratamiento descritos en este documento, el agente antiviral puede ser inmunoglobulina G humana, que comprende anticuerpos contra RSV o algún otro virus oportunista.

En otra realización preferida, la invención proporciona un procedimiento de tratamiento de infecciones por virus respiratorio sincitial del tracto respiratorio inferior (principalmente niños) y superior (principalmente adultos) en un paciente humano, susceptible de padecer o que padece dicha infección, que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la presente invención, comprendiendo dicha composición una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-RSV y un corticosteroide.

Dicha composición terapéutica puede administrarse por cualquier vía conveniente y clínicamente aceptable, pero se administrará generalmente por vía sistémica y de este modo puede ser oral, intramuscular o intravenosa, usando la composición en forma de una solución o suspensión. Una de las innovaciones de los procedimientos de la presente invención es la capacidad de proporcionar un tratamiento de enfermedades eficaz, tal como de la neumonía por RSV y otras enfermedades víricas, tales como la gripe y la enfermedad causada por PIV, mediante un tratamiento sistémico.

Dicho tratamiento también puede incluir la administración de una composición que comprende un anticuerpo anti-RSV, como se desvela en este documento, incluyendo variantes terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas, y un anticuerpo anti-RSV adicional, incluyendo anticuerpos de alta afinidad o variantes terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas, y una cantidad terapéuticamente activa de un corticosteroide, siendo dicha composición eficaz para producir un efecto terapéutico contra dicha enfermedad. Dicha composición puede estar en forma de una solución o una suspensión. La administración de dicha composición puede ser por cualquier medio deseado y eficaz, incluyendo las vías intravenosa e intramuscular. El agente antiinflamatorio también puede incluir una inmunoglobulina G humana que puede administrarse por vía sistémica. El agente antiinflamatorio puede ser un corticos-
teroide.

Las composiciones de la presente invención son útiles contra una diversidad de agentes patológicos, especialmente los que infectan el sistema respiratorio. Las composiciones de acuerdo con la presente invención pueden comprender además un agente antiinfeccioso adicional, preferentemente un agente antiviral tal como ribavirina, pero también pueden incluir otros agentes antiinfecciosos eficaces contra virus distintos del RSV e incluir agentes antiinfecciosos eficaces contra patógenos oportunistas, tales como virus distintos del RSV, incluyendo virus parainfluenza, influenza A, influenza B, influenza C, así como patógenos no virales, incluyendo bacterias, hongos y diversos parásitos. Por supuesto, también están disponibles otros agentes antiinfecciosos y antiinflamatorios conocidos por los expertos en la materia para su uso de acuerdo con la presente invención.

A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos usados en este documento tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la materia a la que pertenece la presente invención. Aunque puede usarse cualquier procedimiento y material similar o equivalente a los descritos en este documento en la práctica o ensayo de la presente invención, los procedimientos y materiales preferidos se describen a continuación. A menos que se mencione otra cosa, las técnicas empleadas o contempladas en este documento son metodologías convencionales bien conocidas por un experto en la materia. Los materiales, procedimientos y ejemplos son sólo ilustrativos y no limitantes.

La presente invención se describirá ahora por medio de los siguientes ejemplos no limitantes.

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Ejemplo 1

Se realizó el siguiente procedimiento usando ratas algodoneras endogámicas (Sigmodon hispidus). El día 0, se dividieron ratas algodoneras adultas jóvenes en 9 grupos de 12 animales cada uno (total; 108 animales). La identificación de cada grupo en términos de tratamiento era de la forma siguiente;

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1

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En cada caso (Grupos B-I), se administraron por vía intranasal aproximadamente 10^{6,5} unidades formadoras de placas (ufp) de virus respiratorio sincitial (RSV/Long) en un volumen de 100 \mul.

El día 3, comenzó el tratamiento como se ha descrito anteriormente para cada uno de los grupos. Cada uno de los animales se pesó y se trató de acuerdo con el régimen indicado. Toda la administración de anticuerpos y esteroides era intramuscular (es decir, sistémica) y tanto los anticuerpos como los esteroides se administraron juntos. El anticuerpo era palivizumab, donde 15 mg/kg era la dosis usada en cada caso. Todas las dosificaciones se administran como mg por kg de peso corporal.

El día 4 se sacrificaron seis animales de cada grupo, se bisecaron sus pulmones, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico. Los seis animales restantes de cada uno de los grupos D a I se trataron con la dosis de triamcinolona indicada anteriormente pero no se administró anticuerpo adicional.

El día 5, los seis animales restantes de cada grupo se trataron de nuevo como se ha descrito para el día 4 (de nuevo sin anticuerpo adicional).

El día 6, los 6 animales restantes de cada grupo se sacrificaron y se recogieron los datos como se ha descrito para el día 4. Por lo tanto, sus pulmones se bisecaron, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico.

Los resultados de estos experimentos se muestran gráficamente en la Figura 2 (de la a a la e). La Figura 2(a) muestra los resultados del título de RSV en ratas de cada grupo. La Figura 2(b) muestra una puntuación compuesta de la patología, la Figura 2(c) una puntuación de la peribronquiolitis, la Figura 2(d) una puntuación de la alveolitis y la Figura 2(e) la puntuación de la neumonía intersticial.

En general, el anticuerpo en solitario aceleraba la eliminación viral cuando se administraba comenzando a los 3 días después de la infección, pero no tenía un efecto significativo sobre la patología pulmonar. Por el contrario, la administración de los esteroides en solitario tenía un efecto positivo sobre la patología pulmonar a costa de una eliminación viral retardada. La combinación de anticuerpo más esteroides mostraba una eliminación viral acelerada y una reducción acelerada de la patología pulmonar. Los experimentos realizados en este documento indicaban que la dosis óptimas para el régimen combinado eran de anticuerpo 15 mg/kg (en este documento, palivizumab) y triamcinolona 16 mg/kg.

Este experimento se repitió en una población separada de 108 ratas algodoneras divididas en grupos y tratadas como se acaba de describir con resultados similares descritos en la Figura 3 (Figura 3(a) que muestra el título de virus y Figura 3(b) que muestra la puntuación compuesta de la patología). Las conclusiones de este documento son resultado de los datos de ambos experimentos. Los resultados para las puntuaciones compuestas de la patología se muestran en la Figura 1 que refleja los resultados de ambos conjuntos de experimentos.

Ejemplo 2

Se realizó el siguiente procedimiento usando ratas algodoneras endogámicas (Sigmodon hispidus). El día 0, se dividieron 150 ratas algodoneras adultas jóvenes en 6 grupos de 25 animales cada uno. La identificación de cada grupo en términos de tratamiento era de la forma siguiente:

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En cada caso (Grupos B-F), se administraron por vía intranasal aproximadamente 10^{6,5} unidades formadoras de placas (ufp) de virus respiratorio sincitial (RSV/Long) en un volumen de 100 \mul.

El día 3, comenzó el tratamiento como se ha descrito anteriormente para cada uno de los grupos indicados (en este documento, grupos C-F). Todos los animales se trataron de acuerdo con el régimen indicado, recibiendo los animales de los grupos C-F anticuerpos y recibiendo los animales de los grupos D-F además esteroide (triamcinolona). Toda la administración de anticuerpos y esteroides era intramuscular (es decir, sistémica) y tanto el anticuerpo como el esteroide se administraron juntos. El anticuerpo era palivizumab, donde 15 mg/kg era la dosis usada en cada caso. La triamcinolona se administró a cada grupo a una dosis de 16 mg/kg. Todas las dosis se administran como mg por kg de peso corporal.

El día 4, los animales de cada uno de los grupos D a F se trataron con 16 mg/kg de triamcinolona pero no se administró anticuerpo adicional.

El día 5, los animales se trataron de nuevo exactamente como el día 4.

El día 6, se sacrificaron cinco animales de cada grupo, y se bisecaron sus pulmones, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico. Los 6 animales restantes de cada grupo se sacrificaron y se recogieron los datos como se ha descrito para el día 4. Por lo tanto, sus pulmones se bisecaron y se homogeneizaron, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico. Los animales restantes se trataron de la forma siguiente: el grupo E recibió otra dosis de triamcinolona a 16 mg/kg mientras que los animales del grupo F recibieron una dosis de triamcinolona a 4 mg/kg.

El día 7, los animales de los grupos E y F se trataron de nuevo exactamente como el día 6: el grupo E recibió otra dosis de triamcinolona a 16 mg/kg mientras que los animales del grupo F recibieron una dosis de triamcinolona a 4 mg/kg.

El día 8, se sacrificaron cinco animales de cada grupo, y se bisecaron sus pulmones, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico. Los animales restantes se trataron de la forma siguiente: el grupo E recibió otra dosis de triamcinolona a 16 mg/kg mientras que los animales del grupo F recibieron una dosis de triamcinolona a 4 mg/kg.

El día 10, se sacrificaron cinco animales de cada grupo, y se bisecaron sus pulmones, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico.

El día 12, se sacrificaron cinco animales de cada grupo, y se bisecaron sus pulmones, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico.

El día 14, se sacrificaron cinco animales de cada grupo, y se bisecaron sus pulmones, homogeneizándose la mitad para la cuantificación viral e inflándose la otra mitad con formalina para el examen histológico.

Los resultados de estos experimentos se muestran gráficamente en la Figura 4 (paneles A-C). La Figura 4(a) muestra los resultados del título de RSV en ratas de los grupos A-C. La Figura 2(b) muestra los resultados del título de RSV para los grupos D-F. La Figura 4(c) muestra una puntuación compuesta de la patología.

Se ha descrito en la bibliografía [véase: Prince y Porter, J. Infect. Dis., 173: 598-608 (1996)] para la terapia combinada del PIV que la terapia a corto plazo (días 3, 4 y 5) daba como resultado una eliminación permanente de virus infeccioso pero se producía un "efecto rebote" de la patología pulmonar después del día 6. Cuando se continuaba con la terapia hasta el día 8 no se producía un efecto rebote de patología. Sin embargo, esos resultados implican anticuerpo y corticosteroide administrados por vía tópica. En los presentes experimentos, ambos se administraron por vía sistémica y muestran claramente la ausencia de un efecto rebote después de una terapia de corta duración (días 3, 4 y 5).

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Ejemplo 3

Se realizó el siguiente procedimiento usando ratas algodoneras endogámicas (Sigmodon hispidus). El día 0, se dividieron ratas algodoneras adultas jóvenes en 8 grupos de 4 animales cada uno (total: 32 animales). La identificación de cada grupo en términos de tratamiento era de la forma siguiente:

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En cada caso (Grupos B-H), se administraron por vía intranasal aproximadamente 10^{6,5} unidades formadoras de placas (ufp) de virus respiratorio sincitial (RSV/Long) en un volumen de 100 \mul.

El día 3, comenzó el tratamiento como se ha descrito anteriormente para cada uno de los grupos. Cada uno de los animales se pesó y se trató de acuerdo con el régimen indicado. El anticuerpo era palivizumab, donde 15 mg/kg era la dosis usada en cada caso. Todas las dosificaciones se administran como mg por kg de peso corporal.

El día 4, los animales de los grupos D a H se trataron como se ha descrito para el día 3 pero no se administró anticuerpo adicional.

El día 5, los animales de los grupos D a H se trataron como el día 5 (de nuevo sin anticuerpo adicional).

El día 6, todos los animales se sacrificaron. Los pulmones de todos los animales se inflaron con formalina para el examen histológico.

Los resultados de este experimento se resumen en la Figura 5 para puntuaciones medias aritméticas de la patología. Este experimento compara la eficacia de la triamcinolona, del solumedrol y de la dexametasona, administrándose los dos últimos por vías y programas de administración oral usados comúnmente en pediatría. La mayor dosis de solumedrol (8 mg/kg/día) funcionaba casi tan bien como la triamcinolona pero ninguna de las dosis de la dexametasona funcionaba tan bien (aunque reducía la patología pulmonar en comparación con los animales sin tratar), y por lo tanto el solumedrol representa un candidato potencial para ensayos clínicos.

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Ejemplo 4

Se realizó el siguiente procedimiento usando ratas algodoneras endogámicas (Sigmodon hispidus). El día 0, se dividieron ratas algodoneras adultas jóvenes en 3 grupos de 6 animales cada uno (total: 32 animales). La identificación de cada grupo en términos de tratamiento era de la forma siguiente:

5

En cada caso (Grupos B y C), se administraron por vía intranasal aproximadamente 10^{6,5} unidades formadoras de placas (ufp) de virus respiratorio sincitial (RSV/Long) en un volumen de 100 \mul.

El día 3, se comenzó el tratamiento como se ha descrito anteriormente para cada uno de los grupos. Cada uno de los animales se pesó y se trató de acuerdo con el régimen indicado. El anticuerpo era palivizumab, donde 15 mg/kg era la dosis usada en cada caso. Todas las dosificaciones se administran como mg por kg de peso corporal. El tratamiento con anticuerpo y esteroide era intramuscular (i. m.).

El día 4, se sacrificaron tres animales de cada grupo y sus pulmones se seccionaron en tres partes de la forma siguiente: los dos lóbulos izquierdos se inflaron con formalina para histología, los 3 lóbulos derechos se trataron retirándose el lóbulo superior para análisis de ARN mientras que los lóbulos restantes se homogeneizaron para titulación de virus. Los animales restantes del grupo 3 se trataron con triamcinolona como el día 3 pero sin ningún anticuerpo.

El día 5, los animales del grupo C se trataron como el día 4 (de nuevo sin anticuerpo adicional).

El día 6, se sacrificaron todos los animales restantes. Se procesaron los pulmones de todos los animales como se ha descrito para el día 3.

Los resultados de este experimento se resumen en la Figura 6. Se midió el ARN mensajero en dos tipos celulares: CD4 y CD8, proteína F de RSV y cuatro citocinas (TNF-\alpha, IFN-\gamma, IL-1-\alpha e IL-6). [TNF = factor de necrosis tumoral, IFN = interferón, IL = interleucina]. Los resultados muestran que la terapia combinada reducía significativamente los niveles de ARNm de ambos marcadores celulares (CD4 y CD8) y de las cuatro citocinas. Sin embargo, el nivel de ARNm para la proteína F del RSV en realidad aumentaba, a pesar de la ausencia de virus infeccioso.

Ejemplo 5

Se infectaron por vía intranasal veintiocho (28) ratas algodoneras (CR) con 6,5 logaritmos de RSV (como 0,1 ml de inóculo), conduciendo a una patología pulmonar espectacular 6 días después de la infección (PI). El día 3 PI (el máximo para la infección vírica), 7 grupos de 4 animales recibieron uno de los siguientes: ninguna terapia o MAb (15 mg/kg) intramuscular (i. m.) (MAb = palivizumab), triamcinolona i. m. (TRI; Steris Laboratories, Phoenix, AZ) a 16 mg/kg y MAb; metilprednisolona i. p. (MED; Solu-Medrol® Pharmacia and Upjohn, Kalamazoo, MI) 4 mg/kg y MAb; MED i. p. a 8 mg/kg y MAb; dexametasona i. p. (DEX; Elkins-Sinn, Cherry Hill, NJ) 0,6 mg/kg y MAb; o DEX i. p. 1,2 mg/kg y MAb (TRI y DEX una vez al día, MED dividida en dosis cada 6 horas). Todos los glucocorticoides se repitieron los días 4 y 5. La dosis, frecuencia y vía de administración de la dexametasona y de la metilprednisolona se extrapolaron a partir de las recomendaciones de uso en seres humanos.

El día 6, todos los grupos (incluyendo 4 CR sin infectar) se sacrificaron (en general por asfixia con dióxido de carbono). Para la patología, los tejidos se inflaron y se fijaron con formalina y se cortaron secciones coronales de parafina a 4 \mum de grosor. Los cortes de tejido pulmonar se puntuaron en una escala de gravedad de 0 (normal) a 100 (patología marcada) para bronquiolitis, alveolitis y neumonía intersticial.

El día 6, la infección por RSV sin tratar mostraba componentes significativos de peribronquiolitis, neumonía intersticial y alveolitis con un infiltrado mononuclear predominante. Era evidente una escasa o ninguna mejora para los tejidos el día 6 después del tratamiento con palivizumab en solitario el día 3. La infección por RSV el día 6 después del tratamiento con palivizumab el día 3 y metilprednisolona los días 3, 4 y 5 mostraba una reducción en los infiltrados inflamatorios hasta un nivel próximo al del control sin infectar. Se observaron todos estos tejidos a 64X con tinción de hematoxilina y eosina. Los resultados se muestran gráficamente en la Figura 7A y se resumen de la forma siguiente en términos de puntuación de la patología (de 0 a 100).

TABLA 1

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6

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El tratamiento con palivizumab en solitario no reducía la patología. La combinación de este MAb con TRI y MED reducía la patología hasta niveles casi basales.

Ejemplo 6

Se infectaron por vía intranasal cuatro grupos de 20 ratas algodoneras cada uno con 10^{6,5} ufp de RSV long. El tercer día después de la infección los animales de tres de los grupos recibieron una dosis de palivizumab intramuscular (15 mg/kg) y una terapia concurrente de glucocorticoides los días 3, 4 y 5 a las siguientes dosis: acetónido de triamcinolona (16 mg/kg i. m. una vez al día); metilprednisolona (4 mg/kg dividida como 1 mg/kg cada 6 horas) o dexametasona (0,6 mg/kg i. p. una vez al día). Los animales se sacrificaron los días 6, 8, 10, 12 y 14 después de la infección para determinar la titulación viral y la histopatología.

El tejido pulmonar se homogeneizó en 10 partes de solución salina equilibrada de Hanks complementada con sacarosa 0,218 M, glutamato 4,4 mM, KH_{2}HPO_{4} 3,8 mM y KH_{2}HPO_{4} 7,2 mM y se almacenó a -70ºC para la titulación viral. El tejido se trató para determinar la patología como ya se ha descrito. Los resultados se muestran en la Figura 7B.

La inflamación después de la infección por RSV era significativa el día 6 después de la infección pero remitía lentamente a lo largo de los 8 días siguientes (como se muestra en la Figura 7B). Los tres grupos tratados con glucocorticoides tenían reducciones mayores en la patología pero ningún grupo tenía un efecto rebote de histopatología durante el periodo de dos semanas. El día 6 se recuperaron 10^{6,5} ufp de RSV por gramo de los pulmones de los animales sin tratar mientras que sólo se recuperaron 10^{3} ufp/g de los pulmones de animales tratados con triamcinolona/palivizumab los días 6 y 8 después de la infección. No se detectó replicación viral adicional en ningún grupo durante el resto del experimento. Este bajo nivel de replicación viral sin signos de efecto rebote eliminaba la necesidad de análisis estadístico comparativo de las titulaciones virales.

Claims (12)

1. Uso de al menos un anticuerpo neutralizante anti-virus respiratorio sincitial (RSV), incluyendo variantes neutralizantes y terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas, y al menos un corticosteroide para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad respiratoria y para la mejoría de la inflamación causada por una infección por RSV, donde el medicamento está destinado a administrarse por vía sistémica.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo neutralizante tiene afinidad por el epítope F del virus respiratorio sincitial.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que dicha composición comprende al menos un anticuerpo neutralizante antimicrobiano adicional de una especificidad diferente, incluyendo variantes neutralizantes y terapéuticamente activas y fragmentos de las mismas.

4. El uso de la reivindicación 3, en el que dicha composición comprende además al menos un anticuerpo con especificidad por un epítope que se encuentra en un microbio no viral.

5. El uso de la reivindicación 1, que comprende además un anticuerpo antiinflamatorio, donde dicho anticuerpo se selecciona del grupo constituido por un anticuerpo anti-citocina, anti-quimiocina, anti-interleucina, un anticuerpo anti-interferón y un anticuerpo anti-factor de necrosis tumoral.

6. El uso de la reivindicación 1, en el que el corticosteroide se selecciona del grupo constituido por cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, betametasona, beclametasona y dexametasona.

7. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho al menos un corticosteroide es una combinación de triamcinolona y metilprednisolona.

8. El uso de la reivindicación 1, que comprende además una cantidad terapéuticamente eficaz de un segundo agente antiviral.

9. El uso de la reivindicación 8, en el que dicho agente antiviral es ribavirina, amantadina, rimantadina o un inhibidor de neuraminidasa.

10. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo es Medi-493 (o palivizumab).

11. El uso de la reivindicación 1, en el que dicha composición comprende además un anticuerpo antibacteriano.

12. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo y dicho corticosteroide están destinados a administrarse al mismo tiempo.