ES2332031B2 - Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. - Google Patents
Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2332031B2 ES2332031B2 ES200930246A ES200930246A ES2332031B2 ES 2332031 B2 ES2332031 B2 ES 2332031B2 ES 200930246 A ES200930246 A ES 200930246A ES 200930246 A ES200930246 A ES 200930246A ES 2332031 B2 ES2332031 B2 ES 2332031B2
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- mycelium
- fungal
- obtaining
- procedure
- modified
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 35
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 10
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 10
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 10
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 8
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 8
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 8
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 244000129140 Amanita caesarea Species 0.000 claims description 6
- 241001063964 Boletus aereus Species 0.000 claims description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 5
- 235000012908 Amanita caesarea Nutrition 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 5
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 claims description 5
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007642 baf medium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000017168 chlorine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000001508 sulfur Nutrition 0.000 claims description 4
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 claims description 3
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 239000011572 manganese Substances 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 241000134916 Amanita Species 0.000 claims description 2
- 241000222455 Boletus Species 0.000 claims description 2
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000002548 Cistus Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000984090 Cistus Species 0.000 claims description 2
- 241000219492 Quercus Species 0.000 claims description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000001055 magnesium Nutrition 0.000 claims description 2
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000014786 phosphorus Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000007686 potassium Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 10
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 240000008289 Quercus suber Species 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 240000008772 Cistus ladanifer Species 0.000 description 1
- 235000005241 Cistus ladanifer Nutrition 0.000 description 1
- 241001480588 Macrolepiota Species 0.000 description 1
- 235000016977 Quercus suber Nutrition 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000001187 pylorus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- A01G1/04—
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G18/00—Cultivation of mushrooms
- A01G18/10—Mycorrhiza; Mycorrhizal associations
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
Abstract
Procedimiento para la obtención a gran escala de
inóculo miceliar de basidiomicetos.
La presente invención proporciona un
procedimiento para la obtención in vitro de micelio fúngico
en cultivo puro, aislado, tanto de los cuerpos fructíferos de
especies fúngicas de interés, como de secciones de raicillas de
plantas micorrizadas con dichas especies fúngicas.
Description
Procedimiento para la obtención a gran escala de
inóculo miceliar de basidiomicetos.
La presente invención se encuadra dentro del
campo general de agrobiotecnología y en particular se refiere a la
producción a gran escala de inóculo micelial de especies
fúngicas.
Hasta el presente, no hay referencias acerca de
la producción a gran escala de inóculo micelial de las especies
fúngicas Amanita caesarea y Boletus aereus. Existe
pues un gran interés en encontrar un procedimiento sencillo, rápido
y económico para la obtención de micelio en cultivo puro de dichas
especies, para su utilización en la producción en vivero de plantas
micorrizadas de especies forestales de interés comercial, con fines
de restauración forestal y recuperación de la producción micológica
en las zonas naturales, así como, para la producción controlada, en
vivero-plantación, de hongos comestibles de gran
importancia comercial.
La presente invención proporciona un
procedimiento para la obtención in vitro de micelio fúngico
en cultivo puro, aislado, tanto de los cuerpos fructíferos de
especies fúngicas de interés, como de secciones de raicillas de
plantas micorrizadas con dichas especies fúngicas.
Así pues, en un primer aspecto, la presente
invención se refiere a un procedimiento para la obtención de
micelio fúngico en cultivo puro que comprende las siguientes
etapas:
- a)
- Aislamiento del micelio fúngico a partir de cuerpos fructíferos de hongos y/o secciones de raicillas de plantas micorrizadas,
- b)
- Inoculación del micelio aislado en la etapa a) en un medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM),
- c)
- Purificación del micelio,
- d)
- Desarrollo del micelio purificado en la etapa c) en un medio de cultivo líquido BAF modificado,
- e)
- Obtención del inóculo miceliar
En un aspecto más particular de la presente
invención, el aislamiento del micelio fúngico se realiza a partir
de cuerpos fructíferos; en un aspecto más en particular, el hongo a
partir del cual se obtiene el micelio es seleccionado de la Clase
Basidiomicetos, en particular es seleccionado de entre los géneros
Amanita y Boletus. En otro aspecto más en particular,
el hongo a partir del cual se obtiene el micelio es Amanita
caesarea. En otro aspecto particular, el otro hongo a partir del
cual se obtiene el micelio es Boletus aereus.
En otro aspecto más en particular de la presente
invención, el aislamiento del micelio fúngico se realiza a partir
de secciones de raicillas de plantas micorrizadas, en un aspecto
más en particular, el micelio es seleccionado de entre los géneros
Quercus y Cistus.
En otro aspecto más en particular de la presente
invención, el medio de cultivo sólido MOM de la etapa b) contiene
como nutrientes calcio, nitrógeno, fósforo, potasio, magnesio,
cloro, azufre, sacarosa, levadura y agar. En un aspecto más en
particular, el medio de cultivo sólido de avena modificado de la
etapa b) contiene 0,5 g de Ca
(NO_{3})_{2}4H_{2}O;
0,2 g de PO_{4}KH_{2}; 0,1 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,1 g de KCl; 5,0 g de sacarosa; 3,5 g de avena en polvo; 0,1 g de extracto de levadura y 8,0 g de agar.
0,2 g de PO_{4}KH_{2}; 0,1 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,1 g de KCl; 5,0 g de sacarosa; 3,5 g de avena en polvo; 0,1 g de extracto de levadura y 8,0 g de agar.
En otro aspecto más en particular de la presente
invención, la purificación de la etapa c) se realiza en una placa
Petri (1) que contiene otra placa Petri (2) de menor diámetro en su
interior dejando un espacio entre ellas (3) en la que se deposita el
medio de cultivo MOM, que una vez solidificado el medio se retira
la placa Petri (2) de menor tamaño dejando un espacio central (4)
donde se deposita el inóculo de micelio.
En un aspecto más en particular de la presente
invención el medio BAF modificado de la etapa d) contiene como
nutrientes calcio, fósforo, potasio, magnesio, manganeso, zinc,
hierro, cloro, azufre, peptona, tiamina, biotina, inositol, ácido
fólico, glucosa y levadura. En un aspecto más en particular, el
medio BAF modificado de la etapa d) contiene
0,1 g de Cl_{2}Ca; 0,5 g de PO_{4}KH_{2}; 0,5 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,005 g de SO_{4}Mn; 0,001 g de SO_{4}Zn; 0,01 g de Cl_{3}Fe 7H_{2}O; 2,0 g de peptona; 0,0005 g de tiamina; 0,00001 g de biotina; 0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa y 0,2 g de extracto de levadura. En un aspecto más en particular, el medio BAF modificado de la etapa d) tiene un pH comprendido entre 5-6.5.
0,1 g de Cl_{2}Ca; 0,5 g de PO_{4}KH_{2}; 0,5 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,005 g de SO_{4}Mn; 0,001 g de SO_{4}Zn; 0,01 g de Cl_{3}Fe 7H_{2}O; 2,0 g de peptona; 0,0005 g de tiamina; 0,00001 g de biotina; 0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa y 0,2 g de extracto de levadura. En un aspecto más en particular, el medio BAF modificado de la etapa d) tiene un pH comprendido entre 5-6.5.
La figura 1 muestra dos perspectivas diferentes
1a y 1b del sistema utilizado para la purificación del micelio
fúngico.
La figura 1a corresponde a una placa de Petri de
un diámetro de 9 cm (1) en cuyo fondo se coloca de forma centrada
una placa (2) de 5 cm de diámetro, que se muestra con trazo
discontinuo. Como resultado de esta configuración entre ambas placas
se crea un espacio circular de 2 cm de ancho (3) en el que se
deposita el medio de cultivo fundido.
La figura 1b muestra el espacio central (4) que
queda cuando, una vez enfriado el medio, se retira la placa
interpuesta. En dicho espacio vacío central es donde se sitúa el
inóculo del micelio, que se desarrolla hasta alcanzar la sección
periférica (3) donde se encuentra el medio para la purificación,
liberándose así de la posible presencia de bacterias, las cuales
quedan retenidas en la sección central de las placas, al no poder
desarrollarse por ausencia de nutrientes.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para la obtención in vitro de micelio en
cultivo puro, aislado, tanto de los cuerpos fructíferos de especies
fúngicas, como de secciones de raicillas de plantas de alcornoque
(Quercus suber) y de jara pringosa (Cistus ladanifer)
micorrizadas con hongos.
En la presente invención cuando nos referimos a
especies fúngicas de interés comercial nos referimos en general a
especies fúngicas de Basidiomicetos como Clytocybe sp. o
Macrolepiota sp., y en particular a Amanita caesarea y
Boletus aereus.
El proceso se inició aislando, en cámara de
flujo laminar, pequeñas secciones de la parte más interna del
himenio del píleo de carpóforos maduros de Amanita caesarea y
de Boletus aereus, por separado, a los que se les había
eliminado previamente la pellis. Seguidamente, se procedió a la
inoculación de dichas secciones, en condiciones de máxima asepsia,
en cámara de flujo laminar, en placas Petri de plástico de 5 cm de
diámetro, previamente esterilizadas en autoclave, a las que se
adicionó con anterioridad el medio nutritivo a utilizar: medio de
cultivo sólido de avena modificado (MOM) cuya composición/litro de
medio fue: 0,5 g de Ca(NO_{3})_{2}4H_{2}O; 0,2 g
de PO_{4}KH_{2}; 0,1 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,1 g de KCl;
5,0 g de sacarosa; 3,5 g de avena en polvo; 0,1 g de extracto de
levadura y 8,0 g de agar. Estas placas se mantuvieron en cámara a
20ºC hasta que el micelio se desarrolló, llegando a ocupar toda la
superficie de la placa.
El proceso anteriormente descrito se realizó
igualmente utilizando como inóculo, secciones de raicillas aisladas
de ejemplares de las citadas especies vegetales que previamente
habían sido micorrizados con Amanita caesarea y Boletus
aereus, y en las que mediante examen al microscopio óptico se
había comprobado la existencia de micorrizas de dichos hongos.
Posteriormente, el micelio obtenido en ambos
casos, se sometió a un proceso de purificación, con objeto de
eliminar la posibilidad de existencia de contaminación bacteriana,
utilizándose para ello placas Petri de 9 cm de diámetro en las que
el medio de cultivo (el medio MOM anteriormente descrito) se
dispuso solamente en una sección circular periférica de 2 cm
(placas preparadas con la ayuda de placas de 5 cm de diámetro, tal
como se muestra en la figura 1). En la parte central de estas placas
se colocaron secciones de 1x1 cm del medio sólido de crecimiento
MOM conteniendo el micelio fúngico. Estas placas se mantuvieron en
cámara a 20ºC hasta que el micelio se desarrolló ocupando toda la
superficie de la placa.
Una vez purificado el micelio se transfirió una
pequeña porción de éste, para su desarrollo a gran escala, a
matraces erlenmeyer conteniendo medio de cultivo líquido BAF
modificado, con una composición/litro de medio: 0,1 g de Cl_{2}Ca;
0,5 g de PO_{4}KH_{2}; 0,5 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,005 g
de SO_{4}Mn; 0,001 g de SO_{4}Zn; 0,01 g de Cl_{3}Fe
7H_{2}O;
2,0 g de peptona; 0,0005 g de tiamina; 0,00001 g de biotina; 0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa, y 0,2 g de extracto de levadura, el cultivo se mantuvo bajo condiciones controladas: 25ºC, oscuridad, pH 6 y agitación constante a 120 rpm.
2,0 g de peptona; 0,0005 g de tiamina; 0,00001 g de biotina; 0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa, y 0,2 g de extracto de levadura, el cultivo se mantuvo bajo condiciones controladas: 25ºC, oscuridad, pH 6 y agitación constante a 120 rpm.
En 5 días se obtuvo un crecimiento masivo
(1:10^{6}) del micelio en cultivo puro dispuesto para la
inoculación de las plantas a micorrizar.
Este proceso es susceptible de desarrollarse
fácilmente en biorreactores de tipo industrial para una rápida
producción, en condiciones controladas, de grandes cantidades de
inóculo micelial purificado.
Claims (13)
1. Procedimiento de obtención in vitro de
micelio fúngico en cultivo puro que comprende las siguientes
etapas:
- a)
- Aislamiento del micelio fúngico,
- b)
- Inoculación del micelio aislado en la etapa a) en un medio de cultivo sólido de avena modificado (MOM)
- c)
- Purificación del micelio,
- d)
- Desarrollo del micelio purificado en la etapa c) en un medio de cultivo Biotina-Aneurina-Ácido Fólico (BAF) modificado,
- e)
- Obtención del micelio fúngico
2. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 1, donde el aislamiento del micelio fúngico
se realiza a partir de cuerpos fructíferos de hongos.
3. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 2, donde el hongo a partir del cual se
obtiene el micelio es seleccionado de entre los géneros
Boletus y Amanita.
4. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 3, donde el hongo a partir del cual se
obtiene el micelio es Amanita caesarea.
5. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 3, donde el hongo a partir del cual se
obtiene el micelio es Boletus aereus.
6. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 1, donde el aislamiento del micelio fúngico
se realiza a partir de secciones de raicillas de plantas
micorrizadas.
7. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 6, donde las plantas a partir de las cuales
es obtenido el micelio es seleccionado de entre los géneros
Quercus, o Cistus.
8. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde el medio
de cultivo sólido de avena modificada (MOM) de la etapa b) contiene
como nutrientes calcio, nitrógeno, fósforo, potasio, magnesio,
cloro, azufre, sacarosa, levadura y agar.
9. Procedimiento de obtención de micelio fúngico
según la reivindicación 8, donde el medio de cultivo sólido de
avena modificado de la etapa b) contiene entre 0,5 g de
Ca(NO_{3})_{2} 4H_{2}O; 0,2 g de
PO_{4}KH_{2}; 0,1 g de SO_{4}Mg 7H_{2}O; 0,1 g de KCl; 5,0 g
de Sacarosa; 3,5 g de avena en polvo; 0,1 g de extracto de levadura
y 8,0 g de agar.
10. Procedimiento de obtención de micelio
fúngico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde
la purificación de la etapa c) se realiza en una placa Petri (1)
que contiene otra placa Petri (2) de menor diámetro en su interior
dejando un espacio entre ellas (3) en el que se deposita el medio
de cultivo MOM que una vez solidificado el medio se retira la placa
Petri (2) de menor tamaño dejando un espacio circular (4) donde se
deposita el inóculo de micelio.
11. Procedimiento de obtención de micelio
fúngico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde
el medio líquido BAF modificado de la etapa d) contiene como
nutrientes calcio, fósforo, potasio, magnesio, manganeso, zinc,
hierro, cloro, azufre, peptona, tiamina, biotina, inositol, ácido
fólico, glucosa y levadura.
12. Procedimiento de obtención de micelio
fúngico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde
el medio BAF modificado de la etapa d) contiene 0,1 g de
Cl_{2}Ca; 0,5 g de PO_{4}KH_{2}; 0,5 g de SO_{4}Mg
7H_{2}O; 0,005 g de SO_{4}Mn; 0,001 g de SO_{4}Zn; 0,01 g de
Cl_{3}Fe 7H_{2}O; 2,0 g de peptona; 0,0005 g de tiamina; 0,00001
g de biotina;
0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa, y 0,2 g de extracto de levadura,
0,05 g de inositol; 0,0001 g de ácido fólico; 5,0-20,0 g de glucosa, y 0,2 g de extracto de levadura,
13. Procedimiento de obtención de micelio
fúngico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde
el medio líquido BAF modificado de la etapa d) tiene un pH
comprendido entre 5-6.5.
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930246A ES2332031B2 (es) | 2009-06-02 | 2009-06-02 | Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. |
| MX2011012647A MX2011012647A (es) | 2009-06-02 | 2010-06-01 | Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. |
| PCT/ES2010/000241 WO2010139817A1 (es) | 2009-06-02 | 2010-06-01 | Procedimiento para la obtención a gran escala de inóculo miceliar de basidiomicetos |
| EP10782999A EP2438809A4 (en) | 2009-06-02 | 2010-06-01 | PROCESS FOR THE LARGE PRODUCTION OF MYZEL INOKULA FROM BASIDIA MUSHROOMS |
| CL2011003013A CL2011003013A1 (es) | 2009-06-02 | 2011-11-28 | Procedimiento de obtencion in vitro de micelio fungico en cultivo puro que comprende las etapas: a)aislamiento del micelio fungico, b)inoculacion del micelio aislado en la etapa a) en un medio de cultivo solido de avena modificado (mom), c)purificacion del micelio, d)desarrollo de dicho micelio en cultivo baf y e)obtencion del micelio. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930246A ES2332031B2 (es) | 2009-06-02 | 2009-06-02 | Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2332031A1 ES2332031A1 (es) | 2010-01-22 |
| ES2332031B2 true ES2332031B2 (es) | 2010-05-31 |
Family
ID=41488790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200930246A Active ES2332031B2 (es) | 2009-06-02 | 2009-06-02 | Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2438809A4 (es) |
| CL (1) | CL2011003013A1 (es) |
| ES (1) | ES2332031B2 (es) |
| MX (1) | MX2011012647A (es) |
| WO (1) | WO2010139817A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2387666B2 (es) * | 2012-07-31 | 2013-01-24 | Universidad Politécnica de Madrid | Procedimiento para la obtención a gran escala de inóculo miceliar de basidiomicetos mejorado |
| CN105567576A (zh) * | 2016-01-25 | 2016-05-11 | 四川保兴现代农业科技股份有限公司 | 一种牛肝菌的液体菌种繁育方法和大田仿生栽培方法 |
| CN111575397B (zh) * | 2020-06-01 | 2022-05-03 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种基于dna微条形码技术的有毒鹅膏菌物种鉴定方法及应用 |
| CN113736666B (zh) * | 2021-06-03 | 2022-08-23 | 景洪宏臻农业科技有限公司 | 一种黑牛肝菌菌株与应用 |
| CN115287200B (zh) * | 2022-08-19 | 2023-05-12 | 景洪宏臻农业科技有限公司 | 一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1220807A (en) * | 1967-05-17 | 1971-01-27 | Nat Res Dev | Production of fermentation and cultivation media |
-
2009
- 2009-06-02 ES ES200930246A patent/ES2332031B2/es active Active
-
2010
- 2010-06-01 WO PCT/ES2010/000241 patent/WO2010139817A1/es active Application Filing
- 2010-06-01 EP EP10782999A patent/EP2438809A4/en not_active Withdrawn
- 2010-06-01 MX MX2011012647A patent/MX2011012647A/es active IP Right Grant
-
2011
- 2011-11-28 CL CL2011003013A patent/CL2011003013A1/es unknown
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| MOLINA, R.; PALMER, J.G. Isolation, maintenance and pure culture manipulation of ectomycorrhizal fungi. Methods and Principles of Mycorrhizal Research. N.C. Schenck, Universidad de Florida. 1982. Páginas 115-129. ISBN-10: 1890540462. ISBN-13: 978-0890540466. * |
| OCHORA, J. et al. Symbiotic seed germination in twelve Kenyan orchid species. Systematics and Geography of Plants. 2001. Vol. 71, N$^{o}$ 2, páginas 585-593, especialmente página 585. ISSN 1374-7886. * |
| PEREIRA, G. et al. Efecto del pH sobre el crecimiento in vitro de hongos ectomicorrícicos recolectados de plantaciones de Pinus radiata.Bosque. 2007. Vol. 28, N$^{o}$ 3, páginas 215-219. ISSN 0304-8799. * |
| ROYO, P. et al. Síntesis micorrícica de Lactarius deliciosus Fr. y Pinus sylvestris L. Investigación Agraria. Sistemas y Recursos Forestales. 1998. Vol. 7, N$^{o}$ 1 y 2, páginas 85-94. ISSN 1131-7965. * |
| SANCHEZ , F. et al. Características culturales de algunos hongos ectomicorrícicos en cultivo puro. Revista Iberoamericana de Micología. Diciembre, 2000. Vol. 17, N$^{o}$ 4, páginas 127-134, especialmente páginas 127 y 128. ISSN 1130-1406. * |
| SANTIAGO-MARTÍNEZ, G. et al. Crecimiento en siete medios nutritivos y síntesis in vitro de una cepa de Laccaria bicolor. Agrociencia. Noviembre-diciembre 2003. Vol. 37, N$^{o}$ 6, páginas 575-584. ISSN 1405-3195. * |
| TORRES, P.; HONRUBIA, M. Descripción de algunos hongos ectomicorrícicos en cultivo puro. Boletín Sociedad Micológica de Madrid. 1993. N$^{o}$ 18, páginas 163-170, especialmente páginas 163 y 164. ISSN: 0214-140X. * |
| ZETTLER, L.W. et al. Conservation-driven propagation of an epiphytic orchid (Epidendrum nocturnum) with a mycorrhizal fungus. HortScience. Febrero, 2007. Vol. 42, N$^{o}$ 1, páginas 135- 139. ISSN 0018-5345. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2438809A1 (en) | 2012-04-11 |
| CL2011003013A1 (es) | 2012-05-11 |
| WO2010139817A1 (es) | 2010-12-09 |
| EP2438809A4 (en) | 2012-12-26 |
| MX2011012647A (es) | 2012-01-12 |
| ES2332031A1 (es) | 2010-01-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2332031B2 (es) | Procedimiento para la obtencion a gran escala de inoculo miceliar de basidiomicetos. | |
| ES2387666B2 (es) | Procedimiento para la obtención a gran escala de inóculo miceliar de basidiomicetos mejorado | |
| RU2012154695A (ru) | Система и способ получения летучих органических соединений за счет грибов | |
| CN203999584U (zh) | 复合式丛枝菌根真菌分室培养装置 | |
| CN102911878A (zh) | 一株棘孢木霉菌株及其应用 | |
| Akhtar et al. | Mass production techniques of arbuscular mycorrhizal fungi: major advantages and disadvantages: a review | |
| Arenas et al. | Mycelium of Terfezia claveryi as inoculum source to produce desert truffle mycorrhizal plants | |
| KR20120024421A (ko) | 버섯 액체 종균의 제조방법 | |
| CN102835288A (zh) | 土传病害鉴定病圃的建立方法 | |
| JP6517640B2 (ja) | ブナシメジの栽培方法 | |
| CN102041254B (zh) | 极大螺旋藻 | |
| KR20150115489A (ko) | 아버스큘라 균근균(Arbuscular-Mycorrhizal Fungi, AMF) 접종원 대량 생산방법 | |
| CN1483324A (zh) | 真菌杀虫剂固体深层发酵制造新方法 | |
| JP2010200749A (ja) | きのこの液体種菌の製造方法 | |
| CN107755424B (zh) | 利用二氧化碳加富和内生菌互作提高植物提取效率的方法 | |
| Bi et al. | Establishment of monoxenic culture between the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus sinuosum and Ri T-DNA-transformed carrot roots | |
| CN105567574A (zh) | 一株高产紫杉醇的红豆杉内生真菌 | |
| Zhang et al. | A new species of Emericella from Tibet, China | |
| CN105917971B (zh) | 快速诱导瓶栽白灵菇子实体形成和单个菇蕾比率的方法 | |
| Jamali et al. | First report of Paecilomyces marquandii from Iran | |
| CN110819574B (zh) | 一种从淤泥中筛选裂解红球藻的粘细菌的方法 | |
| CN102487723A (zh) | 一种无覆土工厂化生产瓶栽或袋栽大杯香菇的方法 | |
| Lee et al. | Proliferation of Tricholoma matsutake mycelial mats in pine forest using mass liquid inoculum | |
| CN106434390A (zh) | 一种姬松茸原生质体的制备方法 | |
| CN106258743A (zh) | 一种国槐的移栽方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20100122 Kind code of ref document: A1 |
|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2332031B2 Country of ref document: ES |