ES2299245T3

ES2299245T3 - Analogos de glutamina y lisina marcados.

Info

Publication number: ES2299245T3
Application number: ES99922325T
Authority: ES
Inventors: Anthony Eamon Storey; Marivi Mendizabal; Susan Champion; Alex Gibson; Benedicte Guilbert; Ian Andrew Wilson; Peter Knox
Original assignee: GE Healthcare Ltd
Current assignee: GE Healthcare Ltd
Priority date: 1998-05-15
Filing date: 1999-05-14
Publication date: 2008-05-16
Anticipated expiration: 2019-05-14
Also published as: JP2002515510A; EP1077998B1; ATE384075T1; US7049289B1; US20060292075A1; JP4199420B2; EP1077998A1; HUP0102154A2; IL139385A0; BR9910468A; KR100660509B1; NO20005751L; NO20005751D0; RU2205186C2; CN101407543A; CN1309661A; AU3942899A; IL139385A; CA2332277A1; DE69937996D1

Abstract

Un compuesto de fórmula: Y-(CR2)n-X-NHJ en la que: X es C=O ó -CR2-; n es un entero de valor entre 1 y 6; Y es R1R2CR- en el que uno de R1 y R2 es -NH(B)pZ1 y el otro es -CO(B)qZ2 en los que p y q son enteros de valor entre 0 y 45, y cada B se escoge de manera independiente entre Q o un resto de aminoácido, en el que Q es un péptido cíclico; Z1 y Z2 son agentes complejantes metálicos (L) u otros grupos protectores tal como se han definido anteriormente que son grupos biocompatibles que inhiben o suprimen el metabolismo in vivo del péptido; J y cada grupo R se escogen de manera independiente entre H, alquilo C1-4, alquenilo C1-4, alquinilo C1-4, alcoxialquilo o hidroxialquilo C1-4; con la condición que: (i) el número total de restos de aminoácidos en los grupos R1 y R2 no exceda de 45; (ii) cuando X es CR2, entonces Z2 es un agente complejante metálico (L); (iii) al menos uno de R1 y R2 soporta al menos un resto detectable adecuado para la formación de imagen radiofarmacéutica escogido entre un radioisótopo no metálico o un radiometal; (iv) R1 o R2 incluyen uno o más fragmentos de restos de péptidos de alfa2-antiplasmina, fibronectina, beta-caseína, tétanos, amiloide, trappin y poliglutamina, dicho fragmento de péptido contiene al menos tres restos de aminoácidos

Description

Análogos de glutamina y lisina marcados.

La presente invención se refiere a una clase de compuestos útiles en el diagnóstico de emplazamientos de trombosis, embolismo o infección venosa y arterial, a las composiciones farmacéuticas que los contienen, a su uso en el diagnóstico de la enfermedad y a los procedimientos para su preparación.

Las soluciones anteriores de los productos radiofarmacéuticos de formación de imagen del trombo incluyen fibrinógeno o plasminógeno radiomarcado; el fragmento E1 radiomarcado de la fibrina humana; los activadores radiomarcados del plasminógeno tales como el activador del plasminógeno del tejido (t-PA) y los anticuerpos antifibrina marcados. Se han descrito también procedimientos basados en la detección de emplazamientos de acumulación plaquetaria tales como la administración de plaquetas radiomarcadas (usando, por ejemplo, ^{111}I oxina) o anticuerpos antiplaqueta radiomarcados. Los esfuerzos más recientes se han centrado en péptidos o polipéptidos radiomarcados tales como el motivo de adhesión celular RGD (en el que R, G y D son las abreviaturas estándar de los aminoácidos arginina, glicina y ácido aspártico, de manera respectiva); el factor 4 plaquetario o fragmentos del mismo o péptidos anticoagulantes tales como desintegrinas.

El Factor XIII es una glicoproteína del plasma que está presente en la sangre y en algunos tejidos en una forma catalíticamente inactiva (o zimógeno). El Factor XIII se transforma en su forma activa, el Factor XIIIa, mediante la trombina en presencia de iones de calcio. El Factor XIIIa se conoce también como transglutaminasa del plasma, fibrinoligasa o factor estabilizante de la fibrina. La etapa final en la formación de un coágulo de sangre es el entrecruzamiento covalente de la fibrina que se forma por la rotura proteolítica del fibrinógeno por la trombina. Las moléculas de fibrina se alinean y el enzima del Factor XIIIa cataliza el entrecruzamiento covalente de los grupos NH_{2} y CONH_{2} de los restos lisilo y glutaminilo de manera respectiva proporcionando rigidez estructural al coágulo de sangre. El entrecruzamiento estabiliza la estructura del coágulo de fibrina y confiere resistencia a la fibrinolisis. La formación entrecruzada es una faceta importante de la coagulación normal de la sangre y la cicatrización de la herida así como de dolencias patológicas tales como la trombosis. Como los infartos aterotrombóticos cerebrales son un subtipo común de apoplejía, los sustratos del Factor XIIIa pueden permitir el diagnóstico de la apoplejía. También puede estar implicado en la aterosclerosis, los procesos inflamatorios, el crecimiento tumoral y la metástasis. El Documento WO 91/16931 describe que los análogos radiomarcados del Factor XIII (en el que se ha inactivado el emplazamiento activo mediante la sustitución de aminoácidos) son útiles como compuestos radiofarmacéuticos de formación de imagen del trombo.

Se sabe también que el Factor XIIIa cataliza la incorporación de aminas de bajo peso molecular en los emplazamientos \gamma-glutamina de las proteínas. De manera similar, el Factor XIIIa cataliza también la incorporación de análogos de glutamina de bajo peso molecular en restos del lisilo. De esta manera dichas aminas de bajo peso molecular (o análogos de la glutamina) funcionan como inhibidores competitivos del entrecruzamiento de lisilo/glutaminilo de las proteínas inducido por el Factor XIIIa.

Se ha descrito un intervalo de aminas sintéticas que son inhibidores competitivos de la de la putrescina (1,4-butanodiamina) marcada en la N,N'-dimetilcaseína catalizada por la transglutaminasa de hígado de cerdo [L. Lorand y col., Biochem., 18, 1756 (1979)].

El Documento WO 89/00051 (Cytrx Biopool Ltd.) reivindica un procedimiento para hacer diana en depósitos de fibrina usando un compuesto marcado que está enlazado de manera covalente con la fibrina mediante el Factor XIIIa. El compuesto de enlace con la fibrina se define por ser "cualquier péptido que sea un sustrato para el enzima de la sangre conocido comúnmente como Factor XIIIa". Se dice que los péptidos preferidos incluyen la secuencia del tetrapéptido -Asn-Gln-Glu-Gln- (o NQEQ en una notación de abreviatura estándar de aminoácidos. También se describe la secuencia del péptido 12-mer procedente del término NH_{2} del enzima alfa-2-antiplasmina:

NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH

conjuntamente con un análogo sintético:

NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Tyr-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH,

(denotados NQEQVSPLTLTLLK y NQEQVSPYTLTLLK de manera respectiva). El último se radiomarcó con ^{125}I y se demostró que se recaptaba en los coágulos de trombina in vitro.

Se ha descubierto ahora que los análogos sintéticos de lisina y glutamina marcados con un resto detectable adecuado pueden funcionar también como sustratos para el enzima del Factor XIIIa. El uso de grupos protectores adecuado proporciona compuestos que son menos susceptibles al metabolismo in vivo, de manera especial mediante las peptidasas y son por tanto agentes que hacen diana más útiles.

La presente invención proporciona los siguientes compuestos:

Y-(CR_{2})_{n}-NHJ

en los que:

X es C=O o CR^{2};

n es un entero de valor entre 1 y 6;

Y es R^{1}R^{2}CR-

en el que uno de R^{1} y R^{2} es -NH(B)_{p}Z^{1} y el otro es -CO(B)_{q}Z^{2} en el que

p y q son enteros de valor entre 0 y 45, y

cada B se escoge de manera independiente entre Q o un aminoácido,

en el que Q es un péptido cíclico

Z^{1} y Z^{2} son agentes complejantes metálicos (L) u otros grupos protectores tal como se han definido anteriormente que son grupos biocompatibles que inhiben o suprimen el metabolismo in vivo del péptido;

J y cada grupo R se escogen de manera independiente entre H, alquilo C_{1-4}, alquenilo C_{1-4}, alquinilo C_{1-4}, alcoxialquilo o hidroxialquilo C_{1-4}; con la condición que:

(i): el número total de restos de aminoácidos en los grupos R^{1} y R^{2} no exceda de 45;

(ii): cuando X es CR_{2}, entonces Z^{2} es un agente complejante metálico;

(iii): al menos uno de R^{1} y R^{2} soporta al menos un resto detectable adecuado para la formación de imagen radiofarmacéutica escogido entre un radioisótopo no metálico o un radiometal;

(iv): R^{1} o R^{2} incluye uno o más fragmentos de restos de péptidos de \alpha_{2}-antiplasmina, fibronectina, beta-caseína, tétanos, amiloide, trappin y poliglutamina, dicho fragmento de péptido contiene al menos tres restos de aminoácidos.

La invención incluye también kits para la preparación de los anteriores compuestos marcados con un resto detectable y el uso de estos y los compuestos relacionados en el diagnóstico de la trombosis, embolismo, aterosclerosis, inflamación o cáncer.

Por el término "péptido cíclico" se entiende una secuencia de 5 a 15 aminoácidos en la que los dos aminoácidos terminales se enlazan conjuntamente mediante un enlace covalente que puede ser un enlace péptido o disulfuro o un enlace sintético no péptido tal como enlace tioéter, fosfodiéster, disiloxano o uretano.

Por el término "aminoácido" se entiende un aminoácido L o D, un análogo de aminoácido o aminoácido mimético que se puede producir de manera natural o de origen puramente sintético, y puede ser ópticamente puro, es decir, un enantiómero puro y por tanto quiral, o una mezcla de enantiómeros. De manera preferible, los aminoácidos de la presente invención son ópticamente puros. Por el término "aminoácido mimético" se entiende análogos sintéticos de aminoácidos que se producen de manera natural que son isósteros, es decir, se han diseñado para imitar la estructura estérica y electrónica del compuesto natural. Dichos isósteros son bien conocidos por aquellas personas expertas en la técnica e incluyen, pero no se limitan a depsipéptidos, retroinverso péptidos, tioamidas, cicloalcanos o tetrazoles 1,5-disustituidos [véase M. Goodman, Biopolymers, 24, 137, (1985)].

Por el término "grupo protector" se entiende un grupo biocompatible que inhibe o suprime el metabolismo in vivo del péptido o aminoácido en el término amino o carboxilo. Dichos grupos son bien conocidos por aquellas personas expertas en la técnica y se escogen de manera adecuada entre, para el término amino (Z'): acetilo, Boc (en el que Boc es terc-butiloxicarbonilo), Fmoc (en el que Fmoc es fluoroenilmetoxicarbonilo), benciloxicarbonilo, trifluoroacetilo, alquiloxicarbonilo, Dde [es decir, 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohexilideno)etil], Npys (es decir, 3-nitro-2-piridina sulfenil), o un grupo metálico complejante; y para el término carboxilo (Z^{2}), una carboxamida, terc-butil éster, éster bencílico, ciclohexil éster, amino alcohol o un grupo metálico complejante. De manera preferible, el grupo protector es un grupo metálico complejante, lo más preferible es un grupo metálico complejante enlazado a un metal, es decir, un complejo metálico. El término carboxilo de los péptidos es particularmente susceptible a una rotura in vivo por las enzimas carboxipeptidasas. Consecuentemente, el grupo metálico complejante o complejo metálico se liga de manera preferible en el término carboxilo. Cuando cualquiera de R^{1} es -NH(B)_{p-1} o R^{2} es -CO(B)_{q-1}, entonces el grupo protector QZ^{2} puede ser el enlace covalente que cierra el anillo del péptido cíclico (Q).

Un "resto detectable" es un resto que es adecuado para la formación de imagen radiofarmacéutica escogido entre un radioisótopo no metálico o un radiometal.

Se pueden encontrar las secuencias de aminoácidos de la \alpha_{2}-antiplasmina, fibronectina, beta-caseína, fibrinógeno y trombospondina en las siguientes referencias: precursor de la \alpha_{2}-antiplasmina [M. Tone y col., J. Biochem, 102, 1033, (1987)]; beta-caseina [L. Hansson y col., Gene, 139, 193, (1994)], fibronectina [A. Gutman y col, FEBS Lett, 207, 145, (1996)]; precursor de la trombospondina-1 [V. Dixit y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 5449, (1986)] R. F. Doolittle, Ann. Rev. Biochem., 53, 195, (1984).

De manera preferible, la secuencia de aminoácidos se toma desde el término N de:

(i)\alpha_{2}-antiplasmina

: es decir, NH_{2}-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH o las variantes de esta en las que se han intercambiado, añadido o eliminado uno o más aminoácidos tales como:

4

(ii) Caseína

: es decir, Ac-Leu-Gly-Pro-Gly-Gln-Ser-Lys-Val-lie-Gly.

El número de restos de aminoácidos es de manera preferible de 2 a 30, lo más preferible de 3 a 20, de manera especial de 3 a 15.

Los compuestos preferidos tienen J igual a H, es decir, terminan en un grupo NH_{2}. X es de manera preferible C=O, es decir, se prefieren los compuestos de fórmula Y-(CR_{2})_{n}-CONH_{2}. Los compuestos más preferidos son de fórmula Y-(CR_{2})_{x}-(CH_{2})_{2}-CONH_{2} ó Y-(CR_{2})_{y}-(CH_{2})_{4}NH_{2} en las que x es un entero de valor entre 0 y 4, e y es un entero de valor entre 0 y 3. Se prefieren de manera especial los compuestos que tienen la misma cadena secundaria tal como glutamina, es decir, los análogos de glutamina de fórmula Y-(CR_{2})_{x}-(CH_{2})_{2}CONH_{2}.

Los radioisótopos no metálicos adecuados para uso en la presente invención incluyen, pero no se limitan a: radioyodo tal como ^{121}I, ^{125}I, ^{131}I, de manera preferible ^{123}I; emisores de positrones tales como ^{18}F, ^{11}C o ^{75}Br e isótopos para terapia, por ejemplo, ^{211}At.

Los compuestos de esta invención que comprenden agentes metálicos complejantes tienen de manera preferible sólo un tipo único de molécula diana ligada, es decir, el sustituyente -(CR_{2})_{n}-X-NHJ. Pueden estar presentes otros sustituyentes en el agente complejante, pero el sustituyente -(CR_{2})_{n}-X-NHJ es el que se espera que sea principalmente responsable de las propiedades de biolocalización. El radiometal puede ser tanto un emisor de positrones (tal como ^{68}Ga o ^{64}Cu) o un emisor \gamma tal como ^{99m}Tc, ^{111}In, ^{113}In o ^{67}Ga.

Los radiometales más preferidos para la formación de imagen son los emisores \gamma, de manera especial ^{99m}Tc. Cualquiera de los complejos metálicos que se escoja, se prefiere en gran medida que éste esté enlazado con el sustrato del Factor XIIIa de tal manera que no experimente un metabolismo fácil en la sangre con el resultado de que el complejo metálico se rompa a partir del sustrato del Factor XIIIa antes de que el Factor XIIIa marcado alcance el emplazamiento deseado in vivo del que se va a tomar la imagen. El sustrato del Factor XIIIa está por tanto enlazado covalentemente de manera preferible con los complejos metálicos de la presente invención.

Estos iones metálicos se complejan usando un agente metálico complejante, o, de manera más preferible, un agente quelante. Los agentes quelantes comprenden 2-10 átomos donantes de metales enlazados covalentemente conjuntamente por un esqueleto no coordinador. Los agentes quelantes preferidos tienen 4-8 átomos donantes de metales y tienen los átomos donantes de metales en cualquiera de una cadena abierta o disposición macrocíclica o las combinaciones de las mismas. Los agentes quelantes más preferidos tienen 4-6 átomos donantes de metales y forman anillos de quelato de 5 ó 6 miembros cuando se coordinan con el centro metálico. Dichos agentes quelantes polidentados y/o macrocíclicos forman complejos metálicos estables que pueden sobrevivir al estímulo de los ligandos endógenos en competencia por el metal in vivo, tales como las proteínas transferrina o del plasma. De manera alternativa, es posible usar agentes complejantes monodentados que forman complejos estables con el ión metálico deseado, incluso aunque no formen anillos de quelato tras la coordinación metálica. Los ejemplos de agentes complejantes conocidos de este tipo, que son particularmente adecuados para el uso con ^{99m}Tc, son las hidracinas, fosfinas, arsinas, o isonitrilos.

Los ejemplos de agentes quelantes adecuados son bidentados tales como diaminas o difosfinas, tridentados tales como monoaminoditioles, o tetradentados tales como diamino dioxinas (Documento US 4615876) o dichos ligandos que incorporan donantes de amida (Documento WO 94/08949); los ligandos tetradentados del Documento WO 94/22816; diaminoditioles N_{2}S_{2}, diamidotioles o amidoaminotioles; tioltriamidas N_{3}S; ligandos N_{4} tales como tetraaminas, ligandos de amina o amida macrocíclica tales como ciclam, oxociclam (que forma un complejo neutro con el tecnecio) o dioxociclam; o ditiosemicarbazonas. Los ligandos anteriormente descritos son particularmente adecuados para el tecnecio, pero son útiles también para otros metales. Se describen otros ligandos adecuados en el Documento WO 91/01144 de Sandoz, que incluye ligandos que son particularmente adecuados para el indio, itrio y gadolinio, de manera especial ligandos de aminocarboxilato macrocíclico y ácido aminofosfónico. Se conocen y se describen en el Documento US 4885363 los ligandos que forman complejos metálicos no iónicos (es decir, neutros) de gadolinio. El ligando puede comprender también una secuencia corta de aminoácidos tales como el tripéptido Cys/aminoácido/Cys del Documento WO 92/13572 o los ligandos del péptido descritos en el Documento EP 0719790 A2.

Los agentes quelantes preferidos tienen la fórmula

RN[CR_{2}]_{a}N(CR_{2})_{b}CR=NOH]_{2}

en la que

cada a es 2 ó 3

cada b es 1 ó 2

uno de R es aminoalquileno mediante el cual el agente quelante se une al resto de la molécula

cada otra R es de manera independiente H, hidrocarbilo C_{1}-C_{10}, alcoxilo, alcoxialquilo, amina, amida, hidroxilo, hidroxialquilo o carboxilato o dos grupos R tomados conjuntamente con los átomos a los que están enlazados forman un anillo carboxílico heterocíclico saturado o insaturado.

Se prefieren los agentes quelantes metálicos no basados en péptido que proporcionan un control mejorado sobre el enlace y la liberación de los iones metálicos.

Se conoce bien la preparación de agentes quelantes que tienen ligado sobre sí un grupo funcional ("quelatos bifuncionales"). Los grupos funcionales que se han ligado a los agentes quelantes incluyen: amina, ácido carboxílico, cianato, tiocianato, maleimida y éster activo tal como N-hidroxisuccinimida. Se proporcionan en el Documento WO 95/19187 ejemplos de conjugados quelato-amina para los ligandos de diaminodioxima. Cuando la funcionalidad deseada del sustrato del Factor XIIIa es una amina, se pueden preparar los ligandos de la presente invención mediante reacción de un compuesto bifuncional que contiene un grupo amina (de manera preferible protegido mediante el uso de grupos protectores adecuados conocidos por aquellas personas expertas en la técnica), y un grupo reactivo tal como cloruro de sulfonilo, cloruro ácido, éster activo o un haluro de alquilbenceno. A continuación el grupo reactivo puede acoplarse con cualquiera del grupo amino pendiente de un quelato bifuncional, o usarse para derivatizar uno o más de los átomos donantes de amina de un ligando que contiene N. De manera alternativa, podría hacerse reaccionar una diamina monoprotegida con un quelato bifuncional con un grupo éster o carboxilo pendiente activo para dar el grupo amina protegido enlazado con el sistema ligando mediante un enlace amida. En ambas rutas sintéticas esbozadas anteriormente, el conjugado ligando - amina protegida resultante se desprotege a continuación bajo las condiciones adecuadas para dar el ligando funcionalizado con amina deseado. Cuando la funcionalidad deseada del sustrato del Factor XIIIa es un grupo carboxamida, se pueden preparar los ligandos deseados, por ejemplo, mediante reacción de una omega-haloalquil carboxamida de longitud de cadena adecuada con un quelato bifuncional con un grupo amina pendiente, dando el ligando enlazado con la carboxamida deseada.

Se pueden preparar los complejos metálicos de la presente invención haciendo reaccionar una solución del metal en el estado de oxidación apropiado con el ligando al pH apropiado. La solución puede contener de manera preferible un ligando que compleja débilmente con el metal (tal como cloruro, gluconato o citrato), es decir, se prepara el complejo metálico mediante intercambio del ligando o transquelación. Dichas condiciones son útiles para suprimir reacciones secundarias indeseables tales como la hidrólisis del ión metálico. Cuando el ión metálico es ^{99m}Tc, el material de partida inicial es pertecnetato de sodio procedente de un generador ^{99}Mo. El tecnecio está presente en el ^{99m}Tc-pertecnetato en el estado de oxidación Tc(VII), que es relativamente no reactivo. La preparación de los complejos de tecnecio de bajo estado de oxidación Tc(I) a Tc(V) requiere por tanto normalmente la adición de un agente reductor adecuado tal como el ión estanoso para facilitar la complejación. Se describen a continuación, de manera adicional, los reductores adecuados.

Los complejos metálicos deberían presentar también de manera preferible un fondo bajo no específico de la sangre.

De esta manera, la presente invención se refiere principalmente a agentes diagnósticos para formación de imagen de emplazamientos en el cuerpo de mamíferos en los que se activa el enzima de Factor XIII y se depositan proteínas de la sangre tales como fibrina y colágeno. Los presentes agentes son particularmente útiles para la formación de imagen del cuerpo humano. Los agentes comprenden sustratos para el enzima del Factor XIIIa que se marcan con un complejo metálico adecuado para el diagnóstico externo por imagen tal como un metal (para centelleografía). El complejo metálico de la presente invención tiene un grupo funcional amino o carboxamida pendiente que está disponible para el enlace covalente con la proteína glutamil carboxamida o los grupos lisilamina de manera respectiva mediante el enzima del Factor XIIIa. La íntima relación de la fibrina y el Factor XIIIa pone de relieve el uso potencial de los agentes de la presente invención para el diagnóstico de los estados de enfermedad en los que existe deposición de fibrina o acumulación y activación del factor XIII. Se sabe que el incremento en la deposición de fibrina es característico de enfermedades tales como la trombosis, aterosclerosis, hígado fibrótico, y coagulación intravascular diseminada. La fibrina se deposita también en los emplazamientos de inflamación del tejido asociada con muchos procesos de enfermedad, tales como infección, enfermedad autoinmune o cáncer. El Factor XIII y la transglutaminasa del tejido se activan durante estados fisiológicos conocidos. Durante la apóptosis y la generación de nuevas estructuras de la matriz de proteínas se observan niveles elevados de enzimas. Los presentes agentes pueden usarse también de esta manera para la detección de la apóptosis y los estados de enfermedad tales como la artritis cuando se produce un aumento de la deposición de la matriz de proteínas. Ya que el Factor XIII se activa in vivo en el emplazamiento de interés (es decir, trombo, embolismo, etc) esto proporciona un mecanismo de localización para los complejos metálicos de la presente invención. A continuación los complejos metálicos enlazados covalentemente se pueden diagnosticar externamente por imagen mediante centelleografía con radionucleidos, proporcionando por lo tanto un medio de diagnóstico no invasivo del emplazamiento de la enfermedad.

La presente invención se refiere también a los kits para la preparación de los complejos metálicos enlazados con los sustratos del Factor XIIIa. Los kits se diseñan para proporcionar productos estériles adecuados para la administración a seres humanos, por ejemplo, mediante inyección en la corriente sanguínea. Se discuten a continuación las formas de realización posibles. Cuando el resto detectable es ^{99m}Tc el kit podría comprender un vial conteniendo el ligando libre o el agente quelante del metal conjuntamente con un agente reductor farmacéuticamente aceptable tal como ditionito de sodio, bisulfito de sodio, ácido ascórbico, ácido formanidina sulfínico, ión estannoso, Fe(II) o Cu(I), de manera preferible una sal estannosa tal como cloruro estannoso o tartrato estannoso. De manera alternativa, el kit contendría un complejo metálico que, tras la adición del radiometal experimenta la transmetalación (es decir, el intercambio del ligando), que proporciona el producto deseado. Para ^{99m}Tc, el kit se liofiliza de manera preferible y se diseña para reconstituirse con ^{99m}-Tc-pertecnetato (TcO_{4}^{-}) estéril procedente del radioisótopo generador 99mTc para proporcionar una solución adecuada para la administración a un ser humano sin manipulación adicional.

Se pueden proporcionar también los agentes de la presente invención en forma de dosis unitaria lista para la inyección a un ser humano y podría, por ejemplo, en una jeringa estéril prerrellena.

La jeringa que contiene la dosis unitaria podría también suministrarse dentro de un blindaje protector de la jeringa (para proteger al operario de la dosis radioactiva potencial).

Los anteriores kits o jeringas prerrellenas pueden contener de manera opcional ingredientes adicionales tales como tampones; solubilizantes farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, ciclodextrinas o tensioactivos tales como Pluronic, Tween o fosfolípidos); estabilizantes o antioxidantes farmacéuticamente aceptables (tales como ácido ascórbico, ácido gentísico o ácido paraaminobenzoico) o agentes de volumen para la liofilización (tales como cloruro de sodio o manitol).

Los siguientes ejemplos ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención y su uso en la formación de imagen. En los Ejemplos 1-9 se proporciona la síntesis de los compuestos concretos de la presente invención, su radiomarcado con ^{123}I o ^{99m}Tc en los Ejemplos 10-12. Se incluye el Compuesto 1 (técnica anterior) como ejemplo comparativo. En el Ejemplo 13 se proporciona la evidencia del aumento de la estabilidad en plasma in vitro. En los Ejemplos 15 y 17 de manera respectiva se proporcionan las evidencias de la captación en los coágulos de sangre in vitro e in vivo, con la biodistribución en ratas normales de los compuestos radiomarcados informados en el Ejemplo 16. La estabilidad del ^{123}I-Compuesto 1 en plasma in vitro es mala (véase el Ejemplo 13), debido presumiblemente a la actividad de la proteasa. La introducción de los grupos protectores en los términos carboxilo y amino según sea para los Compuestos 2-5 y 7-49 radiomarcados confiere un aumento sustancial de la estabilidad en plasma.

La mayoría de los compuestos ensayados presentan elevada recaptación en el coágulo in vitro y por tanto, avidez por el coágulo. Los otros compuestos son de potencia inferior mostrando los compuestos 14, 16, 18, 31, 34, 36, 46 y 48 una reducción significativa en la recaptación. La eliminación del residuo Gin de la posición 2 de las secuencias derivadas de la \alpha_{2}-antiplasmina, tal como en el compuesto 14, produce una gran caída en la recaptación de este trazador, sugiriendo fuertemente de esta manera que Gln-2 es un aminoácido esencial en este tipo de secuencia.

Se proporcionan en los Ejemplos 16 y 17 los detalles de la biodistribución en ratas normales y en los modelos de coágulo recién formado y maduro. La velocidad de aclaramiento de la sangre de estos compuestos es relativamente rápida con semividas biológicas entre 1-2 horas. Se proporciona como ejemplo representativo la biodistribución del ^{99m}Tc-Compuesto 3, en este caso se estima la t_{N} de dos horas. El aclaramiento rápido de los tejidos base tales como sangre, pulmón, corazón y músculo muestra que el agente de la presente invención posee farmacocinética aceptable para la formación de imagen y muestra su potencial como radiodiagnóstico. Aunque se observa alguna excreción hepatobiliar de estos compuestos, la ruta principal de excreción es mediante el tracto urinario.

La recaptación en los coágulos recién formados y maduros en los modelos de rata para muchos de los compuestos radiomarcados es muy buena (concentración relativa o CR = 5-15), con relaciones de coágulo a tejido base muy favorables para el formación de imagen (> 5). El Ejemplo 18 muestra que el ^{99m}Tc-Compuesto 5 es adecuado para la formación de imagen de los coágulos en el modelo de rata.

Los ^{99m}Tc-Compuestos 2 - 49 han mejorado la estabilidad en plasma en comparación con el ^{123}I-compuesto 1 (CR = 1,5), que puede ser responsable de la mejora in vivo de la captación del coágulo observada con estos compuestos.

La comparación de los resultados de la recaptación del coágulo del Ejemplo 17 para coágulos recién formados y maduros muestra que los agentes presentes presentan una recaptación que es constante e independiente de la madurez del coágulo. De esta manera, dichos agentes mejorarán la capacidad de la formación de imagen de los coágulos preexistentes, tales como aquellos que se encuentran con el embolismo pulmonar.

Parte experimental

En la siguiente tabla:

Z es benciloxicarbonilo,

Fmoc es fluorenilmetoxicarbonilo,

Ac es acetilo

Pn44 es

6

Pn216 es

7

Hínico es

\vskip1.000000\baselineskip

8

9

\newpage

(Continuación)

10

Todos los compuestos excepto aquellos denotados, se analizaron usando espectrometría de masas ES^{+}. Aquellos compuestos denotados por ^{a} se analizaron mediante FAB y los denotados por ^{b} mediante espectrometría de masas MALDI-TOF.

Ejemplo 1

Síntesis de los Compuestos 1 y 2

Se ensambló el péptido protegido Ac-Asn(Trt)-Gln(OtBu)-Gln(Trt)-Val-Ser(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-Gly-OH en resina de 2-clorotritilo anclando Fmoc-Lys(Boc) a la resina, y a continuación ciclos sucesivos de desprotecciones/acoplamientos con los aminoácidos protegidos apropiados (tal como se describe en P-Lloyd-Williams, F. Albericio y E. Girald; Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, 1997). Se obtuvo el compuesto del título por rotura usando TFA al 0,1% en diclorometano, desprotección y purificación mediante RP-HPLC (Sistema A).

Ejemplo 2

Síntesis de los Compuestos 3-9, 12-21, 28-33, 35, 37, 42 y 45-49

Se ensambló el péptido protegido apropiado tal como en el Ejemplo 1 con los aminoácidos protegidos apropiados. Se rompió el fragmento protegido procedente de la resina y se acopló a continuación con 6-aminoetil-3,3,6,9,9-pentametil-4,8-diazaundecano-2,10-diona dioxina (preparada tal como se describe en el Documento WO 95/19187), 3,3,11,11-tetrametil-7-aminoetil-4,7,10-triazatridecano-2,12-dionadioxima (preparada tal como se describe en el Documento WO 98/31399) o N-hidroxisuccinimida éster del ácido 6-Boc-hidrazinopiridina-3-carboxílico (preparado tal como se describe en la Patente de los Estados Unidos 5.206.370) en solución usando BOP como agente de acoplamiento. Se obtuvieron los compuestos del título mediante desprotección en TFA/agua/trietilsilano (90/5/5) y se purificaron mediante RP-HPLC (Sistema A).

Ejemplo 3

Síntesis de los Compuestos 22-27

Se añadieron en un vial Eppendorf los compuestos 5, 8 ó 9 (1 mg), tampón de acetato de amonio (400 \muL, 0,2 M, pH 4), ioduro de sodio (0,5 eq., 15 mg/10 ml en NaOh 0,1 M) y ácido peracético (1,5 eq., solución 0,1 M). Se mezcló vigorosamente la mezcla de reacción durante 1 minuto y se separaron y recogieron los productos mono y diyodo mediante HPLC preparativa. Se repitió el procedimiento para proporcionar cantidades suficientes de los productos aislados.

Ejemplo 4

Síntesis de los Compuestos 10 y 11

Se disolvieron Fmoc-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(tBu)-Gln(Trt)-Val-Ser(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Leu-Leu-Lys
(Boc)-Gly (200 mg, 0,73 mmol), Pn216 (30 mg, 0,87 mmol) y HBTU (33 mg, 0,87 mmol) en DMF anhidro (2,5 ml). Se añadió a la solución diisopropiletilamina (20 ml, 1,15 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1,75 horas. A continuación se trató la mezcla de reacción con piperidina (0,5 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se purificó el producto mediante HPLC semipreparativa para dar un sólido de color blanco (171 mg, 82%); ES^{+}-MS: m/z 952,40 (M+3H^{+}).

Se disolvieron en DMF anhidro (1 ml) ácido 1-adamantenocarboxílico o ácido 3,5-bis(trifluorometil)benzoico (1,5 equivalentes molares), el péptido protegido Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(tBu)-Gln(Trt)-Val-Ser(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-Gly-Pn216 (1 equivalente molar) y HBTU (1,2-1,5 equivalentes molares). Se añadió diisopropiletilamina (11 equivalentes molares) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente hasta que se juzgó que estaba completa mediante HPLC. A continuación se trató el fragmento péptido protegido con ácido trifluoroacético al 95% en CH_{2}Cl_{2}. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 a 4 h. Se purificó el producto procedente de la mezcla de reacción mediante HPLC en fase inversa.

Ejemplo 5

Síntesis del Compuesto 34

Se sintetizó el péptido protegido como en el ejemplo con la excepción del Fmoc-Asn(Trt)-\Psi;(CH2NH)-Gln(Trt)-OH que se obtuvo de acuerdo con la metodología clásica para la síntesis de los enlaces péptidos reducidos, mediante afinación reductora de Gln(Trt) con el aldehído derivado de Fmoc-Asn(Trt) (véase G. Guichard y col., Peptide Res., 6(3), 121 (1993) y las referencias de dicho documento.

Se preparó y purificó el compuesto resultante tal como en el ejemplo 2.

Ejemplo 6

Síntesis de los Compuestos 36, 38 y 39

Se sintetizó el péptido protegido tal como en el ejemplo 1 pero en una resina Rink. Tras la eliminación de la protección N de la glicina, se hizo reaccionar el péptido con anhídrido glutámico mientras sigue aún en la resina. La activación con BOP/HOBt del ácido glutarato carboxílico y el acoplamiento con 6-aminoetil-3,3,6,9,9-pentametil-4,8-diazaundecano-2,10-diona dioxina o 3,3,11,11-tetrametil-7-aminoetil-4,7,10-triazatridecano-2,12-dionadioxima en la resina, proporcionó el producto protegido. La rotura con TFA/agua (95/5) dio como resultado el material bruto que se purificó usando RP-HPLC (Sistema A).

Ejemplo 7

Síntesis de los Compuestos 40 y 41

Se mantuvo a reflujo durante 5 horas bajo nitrógeno una solución del peso molecular requerido del amino-\omega-succinimidil carbonato de \alpha-N-(terc-butoxicarbonil)-poli(etilén glicol) y un equivalente molar de 6-aminoetil-3,3,6,9,9-pentametil-4,8-diazaundecano-2,10-diona dioxima o 3,3,11,11-tetrametil-7-aminoetil-4,7,10-triazatridecano-2,12-dionadioxima en tetrahidrofurano anhidro (5 ml). Se redujo a vacío la mezcla de reacción dejando un sólido de color blanco que se purificó mediante cromatografía instantánea usando isopropanol/amonio/agua 10:1:1 para dar el compuesto del título como un sólido de color blanco. Se eliminó el grupo protector Boc usando HCl al 37% añadido gota a gota a una solución enfriada en hielo en metanol. A continuación se agitó la solución a temperatura ambiente durante 4 horas. Se basificó la mezcla de reacción a pH - 10 mediante la adición de NaOH 4 M (4,18 ml). Se aisló el producto mediante HPLC semipreparativa (sistema D).

Se disolvió el sólido procedente del anterior en DMF y se añadió éste al fragmento péptido protegido. Se añadieron diisopropiletilamina y HBTU y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente hasta finalización de la reacción. Se purificó el producto mediante HPLC (sistema E) para dar una goma incolora.

Se disolvió esta goma en diclorometano (2 ml) y se trató la solución con TFA (0,2 ml) durante 5 horas. Se basificó la reacción con NaOH 1 M (2 ml) y se eliminaron los compuestos volátiles a vacío. Se añadió MeOH (2,5 ml) al residuo y se filtró la mezcla usando un filtro Acrodisc (LCR13 PVDF 0,45 m). Se aisló el producto procedente de la solución metabólica mediante HPLC (sistema E).

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Ejemplo 8

Síntesis del Compuesto 43

Se acopló el ácido 12-N-Fmoc-aminododecanoico a la 3,11,11-tetrametil-7-aminoetil-4,7,10-triazatridecano-2,12-dionadioxima tal como se ha descrito anteriormente. Se eliminó el grupo protector Fmoc mediante piperidina al 20% en DMF y se purificó el producto mediante HPLC (sistema F).

Se acopló el producto anterior con el fragmento péptido protegido y se desprotegió posteriormente tal como se ha descrito anteriormente. Se purificó el producto mediante HPLC (sistema G).

Ejemplo 9

Síntesis del Compuesto 44

Se ensambló el péptido H-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Val-Ser(tBu)-Pro-Tyr(tBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-Gly-OH en una resina de cloruro de 2-clorotritilo, mediante una estrategia basada en Fmoc, mediante elongación por etapas con BOP/HOBt. Se eliminó la protección N-terminal mediante tratamiento con piperidina y se rompió parcialmente el péptido protegido a partir del soporte sólido mediante TFA al 0,5% en solución de diclorometano.

Se llevó a cabo la ciclación en solución a una concentración 10 mM en DMF, con BOP como reactivo de condensación, en presencia de bicarbonato de sodio sólido de acuerdo con una metodología conocida (véase por ejemplo M. Rodríguez y col., Int. J. Pept. Protein Res., 35, 441, 1990).

La desprotección final en una mezcla de TFA/agua/etano ditiol (90/5/5) dio como resultado el producto del título bruto que se purificó mediante RP-HPLC (Sistema A).

Ejemplo 10

Marcado de los Compuestos 1-2 y del Compuesto 44 con I-123

Se añadió tampón de acetato de amonio (200 \mul, 0,2 M, pH 4,0) a la solución ligando (20 \mul, 1,5 \mug), y Na^{127}I (10 \mul, 1,5 \mug) en un tubo Eppendorf. Se mezcló vigorosamente la solución y se añadió a continuación Na^{123}I (5-50 \mul, 111 MBq). Se mezcló la solución vigorosamente antes de la adición se solución de PAA (10 \mul, 0,01 M), mezclando de manera adicional a continuación. Se midió la actividad de la preparación. En todos los casos, se separó el producto requerido de subproductos de la reacción y los sustratos no marcados mediante HPLC.

Ejemplo 11

Marcado de los Compuestos 3, 5-43, 45-49 con Tc-99m

Se transfirió una alícuota de 0,1 ml del compuesto disuelto en H_{2}O (1 mg/ml) a un vial de vidrio de 10 ml relleno con nitrógeno conjuntamente con solución salina desoxigenada (0,9% p/v, 1 ml) y 0,035 ml de NaOH acuoso (0,1 M). Se añadió a esta solución eluato generador de tecnecio (1 ml, aprox. 0,4 GBq) y a continuación solución de cloruro estannoso (0,1 ml, circa de 10 \mug). El pH de marcado fue 9,0-10,0. Se incubaron los viales a la temperatura ambiente de laboratorio (15-25ºC) durante 30 minutos para efectuar el marcado. Se diluyó a la concentración radioactiva deseada la preparación resultante o se llevó a cabo la purificación mediante HPLC (Sistema B) para eliminar el material de partida no marcado y las impurezas radioactivas antes del ensayo. Tras la purificación se eliminó el solvente orgánico bajo vacío y se volvió a disolver la muestra en aproximadamente 5ml de tampón fosfato 0,1 M a pH 7,4 para dar una concentración de trabajo de 6-9 MBq/ml. Se evaluó la pureza radioquímica antes del uso mediante el sistema de cromatografía en capa fina (TLC) descrito a continuación:

i): ITLC SG 2 cm X 20 cm eluído con solución salina al 0,9% p/v

ii): Whatman Nº 12 cm X 20 cm eluído con 50 : 50 v/v de acetonitrilo : H_{2}O.

Los sustratos marcados permanecieron en, o cercanos a, el origen en el sistema TLC (i) y se mueven cerca del frente del solvente en el sistema (ii). Cuando se analizó mediante el equipo de detección apropiado la pureza radioquímica está normalmente en exceso del 85% del compuesto marcado.

Ejemplo 12

Marcado del Compuesto 4 con Tc-99m

Se transfirió una alícuota de 0,1 ml del compuesto disuelto en agua (1 mg/ml) a un vial de vidrio de 10 ml relleno con nitrógeno conjuntamente con tricita disuelta en agua (0,5 ml, 37,5 mg) y sal sódica de fosfinodinotris (ácido benceno sulfónico)tris disuelta en agua (0,1 ml, 10 mg). Se añadió a esta solución eluato generador de tecnecio (1 ml, aprox 0,4 GBq) y a continuación una solución de cloruro estannoso en ClH 0,1 M (0,22 ml, circa de 2 \mug). El pH de marcado fue de 4,5-5,5. Se incubaron los viales a 60ºC durante 30 minutos para efectuar el marcado. Se llevó a cabo la purificación y evaluación de la pureza radioquímica tal como en el Ejemplo 10.

Ejemplo 13

Estabilidad en plasma in vitro

A una porción del compuesto (50 \mul, 10 MBq/ml) se le añadieron un volumen igual de plasma (rata o ser humano) o solución salina. Se incubaron las mezclas a 37ºC y se midió la estabilidad mediante HPLC (sistema C) a 0, 30 y 120 minutos. La dilución de la solución salina actuó como control.

11

Ejemplo 14

Sistemas HPLC

Caudal: 1 ml/min en todos los sistemas

Sistema A

Columna: Waters C18 250 x 4,5 mm. Tamaño de partícula 4 micrómetros

Gradiente:: Perfil de elución 10-60% B en 25 min.

Eluyente A:: TFA acuoso al 0,1%

Eluyente B:: TFA al 0,1% en acetonitrilo.

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Sistema B

Columna: Waters C18 150 x 3,9 mm. Tamaño de partícula 4 micrómetros

Gradiente:: Perfil de elución 0-100% B en 22 min.

Eluyente A:: TFA acuoso al 0,1%

Eluyente B:: TFA al 0,1% en acetonitrilo.

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Sistema C

Columna: Waters C18 150 x 3,9 mm. Tamaño de partícula 4 micrómetros

Gradiente:: Perfil de elución 0-100% B en 20 min.

Eluyente A:: Tampón de NH4OAc 50 mM (pH 5,6)

Eluyente B:: Acetonitrilo.

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Sistema D

Columna: Hamilton PRP-1.305 mm x 7,0 mm;

Gradiente:: Perfil de elución 0-65% B en 10 min.

Eluyente A:: Amonio acuoso al 5%

Eluyente B:: Acetonitrilo.

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Sistema E

Columna: Hamilton PRP-1.150 mm x 4,1 mm;

Gradiente:: Perfil de elución 0-100% B en 15 min.

Eluyente A:: Amonio acuoso al 5%

Eluyente B:: Acetonitrilo.

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Sistema F

Columna: Polymer reempacados PLPR-S, 150 mm x 2,5 mm;

Gradiente:: Perfil de elución 0-100% B en 15 min.

Eluyente A:: Amonio acuoso al 5%

Eluyente B:: Acetonitrilo.

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Sistema G

Columna: Hamilton PRP-1.150 mm x 4,1 mm;

Gradiente:: Perfil de elución 0-100% B en 15 min.

Eluyente A:: TFA acuoso al 0,1%

Eluyente B:: TFA al 0,1% en acetonitrilo.

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Ejemplo 15

Incorporación en coágulos en plasma humano

Se investigó la incorporación de sustratos radiomarcados a la fibrina mediante la inducción in vitro de un coágulo de plasma humano de la siguiente manera. A un vial de vidrio siliconizado de 5 ml se añadieron, (a) 800 \mul de solución salina tamponada con tris(hidroximetil)aminometano a pH 7,5 que contenía cloruro de calcio (Tris 50 mM, cloruro de sodio 150 mM, cloruro de calcio 4 mM), (b) aproximadamente 40 \mul de solución de sal fisiológica que contenía 100 unidades de trombina por ml, (c) aproximadamente 400 \mul de plasma humano que contenía el sustrato radiomarcado a una concentración de normalmente 10 kBq/ml. Para ayudar a la inducción del coágulo se añadió al vial de reacción una varilla de vidrio rugoso. Se prepararon viales control de manera similar pero con la omisión de la trombina y el cloruro de calcio.

Tras la incubación de la solución de ensayo a temperatura ambiente de laboratorio (circa de 20ºC) durante 60 minutos, se interrumpió la reacción con la adición de aproximadamente 400 \mul de una solución fría de sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético 33,5 mM. Se separaron los coágulos del suero mediante filtración a vacío sobre filtros de nitrocelulosa de 0,45 \muM (preempapados en BSA al 1,5%/solución salina tamponada con tris(hidroximetil)aminoetano a pH 7,5 que contenía Tween 20 al 0,1%) y se lavaron con aproximadamente 2 x 10 ml de solución salina tamponada con tris(hidroximetil)aminoetano a pH 7,5 que contenía Tween 20 hasta una concentración final de 0,1% v/v. Se calculó la proporción de radioactividad total mediante conteo en un equipo de detección adecuado.

La fracción de la radioactividad retenida en el filtro, tras la sustracción del enlace no específico determinado a partir del control, es una medida de la incorporación en los coágulos filtrados.

13

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(Continuación)

14

Ejemplo 16

Biodistribución en ratas normales

La resolución de una imagen de coágulo es dependiente de la combinación de la velocidad de incorporación del compuesto radiofarmacéutico y su velocidad de aclaramiento en sangre/tejidos. Por esta razón se ha determinado la biodistribución de diversos compuestos en ratas. Se inyectaron ratas Male Wistar (100-150 g por vía i.v. con 0,1-0,1 ml de solución de trazador radiomarcado (8 MBq/ml) y se diseccionaron en diferentes momentos después de la inyección. Se midió el % de DI en cada uno de los tejidos seleccionados. Se mantuvieron algunos animales en jaulas de metabolismo para ser capaces de determinar de % de DI excretada en la orina y en las heces. Los tiempos de disección usados por el agente fueron 15, 30, 60, 240 min. Se muestran los datos como promedio de % de DI (n = 3).

^{99m}Tc-Compuesto 3

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Ejemplo 17

Incorporación en coágulos inducidos en un modelo de rata Modelo de la vena cava inferior de rata (IVC)

Se anestesiaron las ratas (machos Wistar, 250-350 g) con uretano al 15%. Tras la laparotomía, se aisló la vena cava y se liberó del tejido graso que la rodeaba. Se insertó un alambre de platino (1,5 cm x 0,5 mm) en la vena cava inferior y 5 min después de la cirugía, se inyectaron 0,4 ml de ácido elágico (1,2 x 10^{-4} M) por vía intravenosa a través de la vena femoral previamente canulada, y se dejó formar el coágulo. El peso promedio de los coágulos formados en este modelo fue de alrededor de 27 mg n= 32 (intervalo de 5-50 mg). Se inyectaron los compuestos 5 min (coágulo recién formado) y 60 min (coágulo maduro) después de la inducción. Tras 60 min, se sacrificaron los animales y se retiró el coágulo, se peso y se contó. Otros tejidos, por ejemplo, sangre, pulmón, corazón, también se diseccionaron y contaron. Se determinó la recaptación del trazador en el coágulo como concentración relativa (cpm/g de coágulo por dosis/g de animal) y del coágulo al tejido base.

Resultados Coágulos recién formados

16

Coágulos maduros

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Ejemplo 18

Formación de imagen de coágulos inducidos en un modelo de rata

Se indujeron los coágulos en machos de ratas Wistar (250-350 g) tal como se ha descrito en el Ejemplo 17, con la excepción que para estos experimentos se localizó el alambre de platino en la vena yugular. Se inyectaron los compuestos 60 min después de la inyección y se adquirieron las imágenes planares entre 15-189 min después de la inyección. Se usó una cámara gamma médica Park Isocam I para estos experimentos, fueron cuentas de 300 K o 150 K del tórax que se recogieron usando un colimador LEUHR o un LEPH. Se visualizaron los coágulos a partir de 15 min después de la inyección. Alcanzando el coágulo más grande la relación base a los 180 min después de la inyección debido a un aclaramiento rápido del compuesto.

Abreviaturas

Ac: Acetilo

Boc: Terc-butiloxicarbonilo

Comp: Compuesto

DMF: Dimetilformamida

ES: Electroespray

FAB: Bombardeo rápido de átomos

Fmoc: Fluorenilmetoxicarbonilo

HPLC: Cromatografía líquida de alta resolución

MALDI-TOF: Desorción ionización mediante láser asistida por matriz - analizador de tiempo de vuelo

NaI: Naftilalanina

RCP: Pureza radioquímica

RP-HPLC: Cromatografía líquida de alta resolución de fase inversa

TFA: Ácido trifluoroacético

TLC: Cromatografía en capa fina.

Claims

1. Un compuesto de fórmula:

Y-(CR_{2})_{n}-X-NHJ

en la que:

X es C=O ó -CR_{2}-;

n es un entero de valor entre 1 y 6;

Y es R^{1}R^{2}CR- en el que uno de R^{1} y R^{2} es -NH(B)_{p}Z^{1} y el otro es -CO(B)_{q}Z^{2} en los que p y q son enteros de valor entre 0 y 45, y

cada B se escoge de manera independiente entre Q o un resto de aminoácido,

en el que Q es un péptido cíclico;

(ii): cuando X es CR_{2}, entonces Z^{2} es un agente complejante metálico (L);

(iv): R^{1} o R^{2} incluyen uno o más fragmentos de restos de péptidos de \alpha_{2}-antiplasmina, fibronectina, beta-caseína, tétanos, amiloide, trappin y poliglutamina, dicho fragmento de péptido contiene al menos tres restos de aminoácidos.

2. El compuesto de la reivindicación 1 en el que el fragmento péptido de la condición (iv) procede de \alpha_{2}-antiplasmina.

3. El compuesto de la reivindicación 2 en el que el aminoácido en la posición 2 del término N del péptido es glutamina.

4. El compuesto de las reivindicaciones 1 a 3 en el que J es H.

5. El compuesto de la reivindicación 4 de fórmula:

Y-(CR_{2})_{x}-(CH_{2})_{2}CONH_{2}

\hskip0.3cm

ó

\hskip0.3cm

Y-(CR_{2})_{y}-(CH_{2})_{4}NH_{2}

en la que x es un entero de valor entre 0 y 4, e y es un entero de valor entre 0 y 3.

6. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que al menos uno de Z^{1} y Z^{2} es un agente metálico complejante.

7. El compuesto de la reivindicación 6 en el que Z^{2} es un agente metálico complejante y Z^{1} no es un agente metálico complejante.

8. Un complejo metálico de los compuestos de la reivindicación 6 o la reivindicación 7.

9. El complejo metálico de la reivindicación 8 en el que el metal es un radiometal.

10. El complejo radiometálico de la reivindicación 9 en el que el radiometal es ^{99m}Tc.

11. Una preparación para la administración a un ser humano que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

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12. Un kit que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 útil en la preparación de los complejos metálicos de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10.

13. Un compuesto de fórmula:

Y-(CR_{2})_{n}-X-NHJ

en la que: Y, X, R, n y J son tal como se han definido en la reivindicación 1;

para uso como un agente diagnóstico para emplazamientos de trombosis o embolismo.

14. Un complejo radiometálico del compuesto definido en la reivindicación 10, en el que al menos uno de Z^{1} y Z^{2} es un agente metálico complejante;

para uso como agente diagnóstico para emplazamientos de trombosis o embolismo.