ES2291191T3 - Antagonistas del canal gardos. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto que tiene la estructura: en la que, m, n y p se seleccionan independientemente entre 0 y 1 y al menos uno de m, n y p es 1; cuando m, n y p son todos 1, los sustituyentes fluoro en el anillo 1 y en el anillo 2 están localizados en una posición seleccionada independientemente entre orto respecto al sustituyente acetamida, meta respecto al sustituyente acetamida y para respecto al sustituyente acetamida, y el sustituyente en el anillo 3 está en una posición seleccionada entre orto respecto al sustituyente acetamida y para respecto al sustituyente acetamida; y cuando p es 0, y m es 1 y n es 1, el sustituyente fluoro en el anillo 1 está en posición para respecto al sustituyente acetamida, y el sustituyente en el anillo 2 está localizado en una posición seleccionada entre orto respecto al sustituyente acetamida y para respecto al sustituyente acetamida.
Description
Antagonistas del canal Gardos.
Esta solicitud reivindica prioridad a la
Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº de Serie 60/135.511,
presentada el 24 de marzo de 1999.
La presente invención se refiere a compuestos
orgánicos que son inhibidores específicos, potentes y seguros del
canal de potasio activado por Ca^{2+} (canal Gardos) de los
eritrocitos. Más particularmente, la invención se refiere a
inhibidores basados en triarilmetano sustituido con flúor que
muestran una resistencia remarcadamente potenciada a la degradación
en medios biológicos in vitro y muestran
semi-vidas prolongadas in vivo con relación
a sus homólogos no fluorados.
La enfermedad de células falciformes se ha
reconocido en África Occidental desde hace varios siglos. La anemia
de células falciformes y la existencia de hemoglobina falciforme (Hb
S) fue la primera enfermedad genética en entenderse a nivel
molecular. Hoy en día se reconoce como el resultado morfológico y
clínico de una sustitución de glicina a valina en la posición Nº 6
de la cadena de beta globina (Ingram, Nature 178:
792-794 (1956)). El origen del cambio aminoacídico
y de la patología es la consecuencia de una sustitución de un único
nucleótido (Marotta y col., J. Biol. Chem.
252:5040-5053 (1977)).
La fuente principal de morbilidad y mortalidad
de pacientes que padecen la enfermedad de células falciformes es la
oclusión vascular causada por las células falciformes, que causa
episodios repetidos de dolor de forma tanto aguda como crónica y
también causa daño orgánico creciente con el paso del tiempo. Desde
hace tiempo se ha reconocido y aceptado que la deformación y
distorsión de los eritrocitos falciformes después de la
desoxigenación completa está causada por la polimerización y
gelificación intracelular de la hemoglobina falciforme, hemoglobina
S (Hb S). El fenómeno está bien revisado y analizado por Eaton y
col., Blood 70: 1245 (1987). La gelificación y polimerización
intracelular de Hb S puede suceder en cualquier momento durante un
retorno del eritrocito a través de la vasculatura. Por tanto, los
eritrocitos en pacientes con enfermedad de células falciformes que
no contienen hemoglobina S polimerizada pueden pasar a través de la
microcirculación y volver a los pulmones sin distorsionarse, pueden
distorsionarse en las venas o pueden distorsionarse en los
capilares.
La probabilidad de cada uno de estos
acontecimientos está determinada por el retraso en el tiempo de la
gelificación intracelular con relación al tiempo de tránsito
capilar apropiado (Eaton, y col., Blood 47: 621 (1976)). A su vez,
el retraso en el tiempo depende del estado de oxigenación de la
hemoglobina, acortando la desoxigenación el retraso en el tiempo.
Si es termodinámicamente imposible que la gelificación intracelular
tenga lugar, o si el retraso en el tiempo a presiones de oxígeno
venoso es más de aproximadamente 15 segundos, no sucederá la
distorsión de las células. Si el retraso en el tiempo es entre
aproximadamente 1 y 15 segundos, los glóbulos rojos probablemente
se distorsionarán en las venas. Si el retraso en el tiempo es menor
de aproximadamente 1 segundo, los glóbulos rojos se distorsionarán
en los capilares.
Para glóbulos rojos que se distorsionan en los
capilares, son posibles varios acontecimientos consecuentes. Estos
varían desde la ausencia de efecto en el tiempo de tránsito, hasta
la oclusión transitoria del capilar, a un bloqueo más permanente
que finalmente puede provocar isquemia o infarto de las células
adyacentes, y en la destrucción posterior del glóbulo rojo.
Los eritrocitos normales están compuestos de
aproximadamente un 70% de agua. El agua cruza la membrana de un
eritrocito normal en milisegundos. La pérdida de agua de la célula
causa un aumento exponencial en la viscosidad citoplasmática ya que
la concentración media de hemoglobina celular (MCHC) se eleva por
encima de aproximadamente 32 g/dl. Como la viscosidad
citoplasmática es un determinante principal de la deformabilidad y
distorsión de los eritrocitos, la deshidratación del eritrocito
tiene consecuencias reológicas y patológicas sustanciales. La
regulación de la deshidratación de los eritrocitos está reconocida
como un enfoque terapéutico importante para tratar la enfermedad de
células falciformes. Como el agua celular sigue cualquier cambio
osmótico en la concentración de iones intracelulares, el
mantenimiento de la concentración de potasio en los glóbulos rojos
es de particular importancia (Stuart y col., Brit J. Haematol.
69:1-4 (1988)).
Se han intentado muchos enfoques para tratar
terapéuticamente las células falciformes deshidratadas (disminuyendo
de este modo la polimerización de la hemoglobina S bajando la
osmolalidad del plasma) con éxito limitado, incluyendo los
siguientes enfoques: infusión intravenosa de agua destilada (Gye y
col., Am. J. Med. Sci. 266: 267-277 (1973));
administración de la hormona antidiurética vasopresina junto con una
elevada ingesta de fluido y restricción salina (Rosa y col., M.
Eng. J. Med. 303:1138-1143 (1980)); Charache y col.,
Blood 58: 892-896 (1981)); el uso de monensina para
aumentar el contenido de cationes de la célula falciforme (Clark y
col., J. Clin. Invest. 70: 1074-1080(1982));
Fahim y col., Life Sciences 29:
1959-1966(1981)); administración intravenosa
de citrato de cetiedilo (Benjamin y col., Blood 67:
1442-1447 (1986)); Berkowitz y col., Am. J Hematol.
17: 217-223 (198/1)); Stuart y col., J. Clin.
Pathol. 40: 1182-1186 (1987)); y el uso de
oxpentifilina (Stuart y col., supra).
Otro enfoque hacia el tratamiento terapéutico de
células falciformes deshidratadas implica alterar el flujo de
potasio en el eritrocito dirigiéndose un canal de potasio
dependiente de calcio (Ishi y col., Proc. Natl. Acad. Sci. 94 (21):
11651-6 (1997)). Este canal de potasio activado por
calcio también se menciona como el canal Gardos (Brugnara y col.,
J. Clin. Invest. 92: 520-526 (1993)). Recientemente,
un canal de potasio activado por calcio de conductancia intermedia
humano clonado, hlK1, demostró ser sustancialmente similar al canal
Gardos en términos tanto de sus propiedades biológicas como
farmacológicas (Ishi, supra).
Los procedimientos que se han usado para inhibir
el canal Gardos incluyen la administración a eritrocitos de
imidazol, nitroimidazol y agentes antimicóticos de triazol tales
como clotrimazol (Patente de Estados Unidos Nº 5.273.992 de
Brugnara y col.). El clotrimazol, un agente antimicótico que
contiene imidazol, ha demostrado ser un inhibidor específico,
potente del canal Gardos de eritrocitos normales y falciformes, y
evita la deshidratación dependiente de Ca^{2+} de las células
falciformes tanto in vitro como in vivo (Brugnara,
supra; De Franceschi y col., J. Clin. Invest. 93:
1670-1676 (1994)). Cuando se combina con un
compuesto que estabiliza la oxiconformación de Hb S, el clotrimazol
induce una reducción aditiva en la velocidad de coagulación de un
filtro de microporos y puede atenuar la formación de células
irreversiblemente falciformes (Stuart y col., J. Haematol. 86:
820-823 (1994)). Otros compuestos que contienen un
resto heteroarilo tipo imidazol que se creía que eran útiles para
reducir la deshidratación de los eritrocitos falciformes mediante la
inhibición del canal Gardos incluyen miconazol, econazol,
butoconazol, oxiconazol y sulconazol. Aunque estos compuestos han
demostrado ser eficaces para reducir la deshidratación de las
células falciformes, se ha descubierto
que otros compuestos de imidazol son incapaces de inhibir el canal Gardos y evitar la pérdida de potasio.
que otros compuestos de imidazol son incapaces de inhibir el canal Gardos y evitar la pérdida de potasio.
El documento WO 97/34589 describe una clase de
compuestos químicos descritos como fármacos eficaces en el
tratamiento de la enfermedad de células falciformes y enfermedades
caracterizadas por proliferación celular no deseada o anormal. Los
compuestos activos son compuestos de triarilmetano sustituidos o
análogos de los mismos en los que uno o más de los grupos arilo
está reemplazado con un grupo heteroarilo, cicloalquilo o
heterocicloalquilo y/o el átomo de carbono terciario está
reemplazado con un átomo diferente tal como Si, Ge, N o P. Se ha
informado de que los compuestos inhiben la proliferación de células
de mamífero, inhiben el canal Gardos de los eritrocitos, reducen la
deshidratación de eritrocitos falciformes y/o retrasan la aparición
de distorsión o deformación de los eritrocitos.
Como la anemia de células falciformes es una
enfermedad crónica, los agentes indicados para el tratamiento
mostrarán de forma ideal ciertas características que son menos
esenciales en los fármacos para tratar una enfermedad curable (por
ejemplo, infecciones fúngicas). Un inhibidor del canal Gardos
clínicamente útil mostrará toxicidad extremadamente baja durante un
transcurso prolongado de administración, tendrá una excelente
biodisponibilidad, será altamente específico para el canal Gardos y
será potente en sus interacciones con este canal.
Aunque el clotrimazol y ciertos compuestos
relacionados han demostrado inhibir el canal Gardos y evitar la
pérdida de potasio, estos compuestos son menos ideales como agentes
clínicos para el tratamiento de la anemia de células falciformes.
Es de preocupación principal el hecho de que la administración
prolongada de antimicóticos de imidazol ha demostrado provocar
hepatotoxicidad (véase, por ejemplo, Rodriguez y col., Toxicology 6:
83-92 (1995); Findor y col., Medicina 58:
277-81 (1998); y Rodriguez y col., J. Biochem.
Toxicol. 11: 127-31 (1996)). La tendencia a la
toxicidad de un agente debe equilibrarse con otras características
tales como biodisponibilidad, selectividad de diana y potencia.
Los inhibidores del canal Gardos actualmente
conocidos tienen bajas semi-vidas in vivo y
bajas biodisponibilidades. Estas deficiencias son de particular
preocupación en conexión con estos fármacos, ya que deben
administrarse de forma regular durante una parte significativa de
la vida de una persona. Con dichos fármacos, el cumplimiento del
paciente con el régimen de dosificación es crucial, y cuanto más
simple es el régimen, será más probable que el paciente cumpla el
régimen. Los inhibidores del canal Gardos que tienen bajas
biodisponibilidades deben administrarse frecuentemente, elevando el
riesgo de dosis olvidadas y los consiguientes niveles inadecuados
en plasma de los fármacos para evitar la deshidratación de los
eritrocitos. Además de la dosificación frecuente, los agentes que
tienen bajas biodisponibilidades generalmente deben administrarse en
dosificaciones mayores que agentes análogos con mejores
biodisponibilidades. A mayores dosificaciones, los efectos
secundarios indeseables y la toxicidad llegan a ser una
preocupación muy real.
Bartroli y col., Arzneim. Forsch. / Drug Res.,
42, 6, 832-835 (1992) describen la síntesis y las
actividades comparativas in vitro de derivados difluoro de
compuestos trifenilmetano imidazol y otros compuestos relacionados
frente a una serie de hongos.
Además de su baja biodisponibilidad, los
inhibidores del canal Gardos conocidos tales como clotrimazol
también tienen potencia relativamente baja en su interacción con el
canal Gardos. La baja potencia de los compuestos se exacerba por su
baja biodisponibilidad y la rápida eliminación sistémica. Un
inconveniente adicional de muchos inhibidores del canal Gardos
conocidos es la naturaleza no específica de sus interacciones con
los canales de potasio activados por calcio: estos agentes
interaccionan fácilmente con canales de potasio activados por
calcio diferentes del canal Gardos. Tomado en conjunto, la baja
potencia, la baja especificidad y baja biodisponibilidad de los
inhibidores del canal Gardos conocidos obligan a una dosificación
mayor y más frecuente, aumentando de este modo el riesgo de efectos
secundarios indeseables y toxicidad.
En vista de los inconvenientes descritos
anteriormente de los inhibidores del canal Gardos actualmente
conocidos, se espera un avance sustancial en el tratamiento de la
anemia de células falciformes a partir del descubrimiento de
inhibidores del canal Gardos que no contengan imidazol como
componente estructural, estén apreciablemente biodisponibles, se
metabolicen y se excreten lentamente y sean tanto potentes como
específicos en sus interacciones con el canal Gardos. De forma
bastante sorprendente, la presente invención proporciona inhibidores
del canal Gardos que tienen estas características.
La Figura 1 es un diagrama de la concentración
plasmática media frente al tiempo para los compuestos 1 (i.v.
(\blacklozenge), oral (\ding{115})), 3 (i.v. (*), oral
(\bullet)) y 18 (i.v. (\sqbullet), oral (x)). Las dosificaciones
fueron, i.v. (1 mg/kg) y oral (10 mg/kg).
Reducir la deshidratación de los eritrocitos
falciformes mediante el bloqueo del canal Gardos es un enfoque
terapéutico poderoso hacia el tratamiento y/o prevención de la
enfermedad de células falciformes. Los compuestos capaces de
inhibir el canal Gardos como medio para reducir la deshidratación de
las células falciformes son muy deseables, y son un objetivo de la
presente invención. Aunque son de demostrable eficacia, los
inhibidores del canal Gardos basados en imidazol que se han
explorado hasta la fecha están impedidos por varios inconvenientes
que incluyen un potencial bien documentado de hepatotoxicidad. Esta
toxicidad está exacerbada por las bajas potencias de los
inhibidores, interacciones no específicas con canales de potasio
activados por calcio diferentes del canal Gardos y bajas
biodisponibilidades, cada uno de los cuales motiva la administración
de dosificaciones mayores y más frecuentes de los inhibidores.
En contraste con estos agentes conocidos, un
inhibidor del canal Gardos de segunda generación farmacéuticamente
útil mostrará estabilidad prolongada en un medio biológico y
potencia y selectividad para el canal Gardos. Un agente ideal se
degrada a menos del 60% después de dos horas de incubación en un
medio biológico (por ejemplo, una preparación microsómica) y tiene
una CI_{50} para el canal Gardos de no más de 30 nM. Además, estos
agentes son al menos 100 veces más selectivos para el canal Gardos
que para otros canales de potasio, tales como I_{Ks}.
Ahora se ha descubierto que inhibidores basados
en trifenilacetamida del canal Gardos, en los que uno o más grupos
fenilo están sustituidos con uno o más átomos de flúor o restos que
contienen flúor, tienen semi-vidas in vivo y
estabilidades metabólicas in vitro que están potenciadas a un
grado sorprendente con relación tanto a clotrimazol como a
trifenilacetamidas no fluoradas análogas. Por ejemplo, el
clotrimazol (19) se degrada al 94,2% después de incubar dos horas
en una preparación microsómica de hígado y una
trifenilmetilacetamida no fluorada (20) se degrada al 87% después
de 2 horas. En marcado contraste, los compuestos difluorados
representativos de la invención 3 y 5 se degradan, respectivamente,
solamente al 24% y al 29% después de una incubación similar.
Aunque estudios sobre antimicóticos de
trifenilimidazol fluorados demostraron que estos agentes fluorados
se metabolizaban menos rápidamente que sus análogos clorados, estos
agentes también eran menos activos farmacológicamente que derivados
clorados análogos (véase,Conte y col.,
Arneim-Forsch./Drug Res. 42: 854-858
(1992); y Bartoli, y col., Arneim-Forsch./Drug Res.
42: 832-835 (1992)). Sorprendentemente, sin embargo,
se observa una tendencia bastante opuesta para los compuestos de la
invención: los compuestos fluorados no son solamente más potentes,
sino también inhibidores más selectivos del canal Gardos que el
clotrimazol. Por ejemplo, los compuestos 3 y 5 son aproximadamente
8 y 10 veces más potentes que el clotrimazol respecto al canal
Gardos. Además, los compuestos 3 y 5 son aproximadamente 16 y 17
veces más selectivos para el canal Gardos sobre otros canales de
iones potasio (por ejemplo, I_{Ks}) que el clotrimazol.
Por tanto, en un primer aspecto, la presente
invención proporciona un compuesto que tiene una estructura de
acuerdo con la Fórmula (I):
en la
que,
m, n y p se seleccionan
independientemente entre 0 y 1 y al menos uno de m, n
y p es 1;
cuando m, n y p son todos
1, los sustituyentes fluoro en el anillo 1 y en el anillo 2 están
localizados en una posición seleccionada independientemente entre
orto respecto al sustituyente acetamida, meta
respecto al sustituyente acetamida y para respecto al
sustituyente acetamida, y el sustituyente en el anillo 3 está en un
posición seleccionada entre orto respecto al sustituyente
acetamida y para respecto al sustituyente acetamida; y
cuando p es 0, y m es 1 y n
es 1, el sustituyente fluoro en el anillo 1 está en posición
para respecto al sustituyente acetamida, y el sustituyente
en el anillo 2 está localizado en una posición seleccionada entre
orto respecto al sustituyente acetamida y para
respecto al sustituyente acetamida.
En un segundo aspecto, la presente invención
proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto
de acuerdo con la Fórmula (I) en mezcla con un excipiente
farmacéuticamente aceptable. Dicha preparación puede administrarse
en procedimientos de la invención.
El control de las enfermedades (por ejemplo,
enfermedad de células falciformes) mediante la alteraciónde los
flujos iónicos celulares de las células afectadas por una enfermedad
es un enfoque terapéutico poderoso. Además, la comprensión básica
del papel de los flujos iónicos celulares tanto en procesos
patológicos como en la fisiología normal promete proporcionar
nuevas modalidades terapéuticas, regímenes y agentes. Los compuestos
que alteran los flujos iónicos celulares, particularmente los que
inhiben el flujo de potasio, son muy deseables como fármacos y como
sondas para dilucidar los mecanismos básicos subyacentes a estos
flujos iónicos. De forma similar, los procedimientos que utilizan
estos compuestos en investigación básica y en aplicaciones
terapéuticas son herramientas valiosas en el arsenal tanto del
investigador como del médico. Por lo tanto, dichos compuestos y
procedimientos también son un objetivo de la presente invención.
Por tanto, en un tercer aspecto, la presente
invención proporciona un procedimiento para inhibir el flujo de
potasio de una célula. El procedimiento comprende poner en contacto
una célula con una cantidad de un compuesto de acuerdo con la
Fórmula (I) eficaz para inhibir el flujo de potasio.
Una vía terapéutica importante para el
tratamiento de la enfermedad de células falciformes es prevenir o
retardar la deshidratación de los eritrocitos manipulando los
flujos iónicos celulares de los eritrocitos. Por tanto, en otro
aspecto, la invención proporciona un procedimiento para reducir la
deshidratación de los eritrocitos. El procedimiento comprende poner
en contacto un eritrocito con una cantidad de un compuesto de
acuerdo con la Fórmula (I) eficaz para reducir la deshidratación de
los eritrocitos.
En un quinto aspecto, la invención proporciona
un procedimiento para la fabricación de un medicamento para tratar
o prevenir la enfermedad de células falciformes. El procedimiento
comprende administrar a un sujeto que padece la enfermedad de
células falciformes una cantidad terapéuticamente eficaz de un
compuesto que tiene una estructura de acuerdo con la Fórmula
(I).
Los compuestos de la invención representan una
nueva clase de inhibidores del flujo de potasio activado por calcio
que presentan excelente resistencia a la degradación metabólica y
tanto selectividad como potencia hacia el canal Gardos que están
potenciadas con relación a sus análogos no fluorados. Por tanto, en
un sexto aspecto, la presente invención proporciona un
procedimiento para potenciar la resistencia a la degradación en un
medio biológico de un inhibidor del canal de potasio, que comprende
un resto trifenilmetilo.
Estos y otros objetivos y ventajas de la
presente invención serán evidentes a partir de la siguiente
descripción detallada y ejemplos.
"MCHC", es la "concentración de
hemoglobina corpuscular media".
"SAD-1" es un modelo de
ratón transgénico de la enfermedad de células falciformes como se
describe por Trudel y col., EMBO J., 10 (11):
3157-3165(1991).
"Medio biológico", como se usa en este
documento se refiere a medios biológicos tanto in vitro como
in vivo. Los "medios biológicos" in vitro
ejemplares incluyen cultivo celular, cultivo tisular,
homogeneizados, plasma y sangre. Las aplicaciones in vivo
generalmente se realizan en mamíferos, preferiblemente seres
humanos.
"Fluoroalquilo" se refiere a una subclase
de "alquilo sustituido" que abarca grupos alquilo o alquilo
sustituido que están parcialmente fluorados o
per-fluorados. La sustitución con flúor puede ser
solamente una sustitución del resto alquilo o puede ser en
sustancialmente cualquier combinación con cualquier otro
sustituyente o grupo de
sustituyentes.
sustituyentes.
\newpage
Como se ha analizado anteriormente, el bloqueo
de la deshidratación falciforme mediante la inhibición del canal
Gardos es un enfoque terapéutico poderoso para el tratamiento y/o
prevención de la enfermedad de células falciformes. Estudios in
vitro han demostrado que el clotrimazol, un agente antimicótico
que contiene imidazol, bloquea el flujo de K^{+} activado por
Ca^{2+} y la deshidratación celular en eritrocitos falciformes
(Brugnara y col., J. Clin. Invest. 92: 520-526
(1993)). Estudios en un modelo de ratón transgénico para la
enfermedad de células falciformes, el ratón SAD-1
(Trudel y col., EMBO J. 11: 3157-3165 (1991)),
muestran que la administración oral de clotrimazol conduce a la
inhibición del canal Gardos de los glóbulos rojos, un contenido
aumentado de K^{+} en los glóbulos rojos, una concentración
disminuida de hemoglobina corpuscular media (MCHC) y densidad
celular disminuida (De Franceschi y col., J. Clin. Invest. 93:
1670-1676 (1994)). Además, la terapia con
clotrimazol oral induce la inhibición del canal Gardos y reduce la
deshidratación de los eritrocitos en pacientes con la enfermedad de
células falciformes (Brugnara y col., J. Clin. Invest. 97:
1227-1234 (1996)). Otros agentes antimicóticos, que
inhiben el canal Gardos in vitro, incluyenmiconazol,
econazol butoconazol, oxiconazol y sulconazol (Patente de Estados
Unidos Nº 5.273.992 expedida a Brugnara y col.). Todos estos
compuestos contienen un anillo tipo imidazol, es decir, un anillo
heteroarilo que contiene dos o más nitrógenos.
Aunque es de eficacia demostrable, los
inhibidores basados en imidazol del canal Gardos que se han
explorado hasta la fecha están impedidos por varios inconvenientes
que incluyen un potencial bien documentado de hepatotoxicidad. Esta
toxicidad está exacerbada por las bajas potencias de los
inhibidores, las interacciones no específicas con canales de
potasio diferentes del canal Gardos y las bajas biodisponibilidades,
cada uno de los cuales motiva la administración de dosificaciones
mayores y más frecuentes de los inhibidores.
Para proporcionar agentes farmacéuticos
superiores capaces de inhibir el canal Gardos, deben cumplirse tres
criterios farmacológicos. Primero, los compuestos deben ser estables
en un medio biológico, de modo que al menos el 40% del compuesto
permanezca intacto después de dos horas en este medio. Además, los
compuestos deben ser inhibidores potentes del canal Gardos, que
tengan una CI_{50} para este canal de menos de o igual a 30 nM.
Además de su potencia para el canal Gardos, los compuestos también
deben ser selectivos en su interacción con este canal. Los
compuestos deben tener una selectividad medida por un índice
CI_{50} (I_{Ks}/Gardos) de más de o igual a 80.
En un primer aspecto, la presente invención
proporciona un compuesto que tiene una estructura de acuerdo con la
Fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que,
m, n y p se seleccionan
independientemente entre 0 y 1 y al menos uno de m, n
y p es 1;
cuando m, n y p son todos
1, los sustituyentes fluoro en el anillo 1 y en el anillo 2 están
localizados en una posición seleccionada independientemente entre
orto respecto al sustituyente acetamida, meta
respecto al sustituyente acetamida y para respecto al
sustituyente acetamida, y el sustituyente en el anillo 3 está en
una posición seleccionada entre orto respecto al sustituyente
acetamida y para respecto al sustituyente acetamida; y
cuando p es 0, y m es 1 y n
es 1, el sustituyente fluoro en el anillo 1 está en posición
para respecto al sustituyente acetamida, y el sustituyente
en el anillo 2 está localizado en una posición seleccionada entre
orto respecto al sustituyente acetamida y para
respecto al sustituyente acetamida.
\newpage
En una realización actualmente preferida, los
compuestos de la invención tienen una estructura de acuerdo con la
Fórmula (II):
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que, m, n y
p se seleccionan independientemente entre 0 y 1, y al menos
uno de m, n y p es
1.
Los compuestos de acuerdo con esta estructura se
presentan en la Tabla 1 e incluyen los compuestos
1-5.
En otra realización preferida, los compuestos de
la invención tienen una estructura de acuerdo con la Fórmula
III:
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que m es 0 ó
1.
Los compuestos de acuerdo con la Fórmula III se
presentan en la Tabla 1 e incluyen los compuestos 3 y 5.
Los compuestos que están estructuralmente muy
relacionados con compuestos de la invención también se presentan en
la Tabla 1. Los compuestos que están estructuralmente relacionados
con los compuestos de la invención sirven como "medida
inicial" para la evaluación de las ventajas y propiedades
inesperadas y beneficios de los compuestos fluorados de la
invención.
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Los compuestos de la invención pueden prepararse
por técnicas que son convencionales en la técnica de la síntesis
orgánica. Los materiales de partida y reactivos apropiados pueden
obtenerse en el mercado o pueden prepararse por técnicas de química
orgánica convencionales. Los procedimientos preferidos se ilustran
por los ejemplos específicos. Una vía sintética ejemplar se
proporciona en el Esquema 1.
\newpage
Esquema
1
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\vskip1.000000\baselineskip
En el Esquema 1, la síntesis de una
trifenilacetamida sustituida con flúor transcurre desde el
trifenilmetanol sustituido con flúor correspondiente que se prepara
a partir de una benzofenona sustituida con flúor y un reactivo que
añade un resto fenilo o fenilo sustituido con flúor a la cetona
benzofenona. El trifenilmetanol sustituido con flúor se convierte
posteriormente en el trifenilacetonitrilo sustituido con flúor
correspondiente exponiendo el alcohol a cloruro de acetilo seguido
de cianuro de cobre. La acetamida puede formarse haciendo
reaccionar el nitrilo intermedio con una mezcla de ácido sulfúrico y
acético glacial. Otras vías sintéticas que conducen a especies de
trifenilmetano sustituido con flúor, particularmente acetamidas,
pertenecen a las capacidades de los especialistas en la
técnica.
Para que los compuestos funcionen como
inhibidores farmacéuticamente útiles del canal Gardos, los
compuestos candidatos deben demostrar tanto biodisponibilidad como
estabilidad in vivo aceptables. Se considera que los
compuestos tienen un nivel suficiente de estabilidad cuando al menos
el 40% de una cantidad inicial del compuesto permanece intacto
después de dos horas de incubación en un medio biológico (por
ejemplo, preparación microsómica). Este nivel de estabilidad es
particularmente importante para tratar un síndrome crónico tal como
anemia de células falciformes. A los sujetos que experimentan
tratamiento par la anemia de células falciformes se les debe
dosificar de forma regular el agente anti-distorsión
(por ejemplo, el inhibidor del canal Gardos) durante toda su vida.
Entre otras preocupaciones, dicho régimen de dosificación de por
vida presenta un grave riesgo de cumplimiento variable del paciente
con el régimen. Si el título de la medicación en el sistema del
paciente disminuye como resultado de un mal cumplimiento, esto eleva
el riesgo de la existencia de un acontecimiento de células
falciformes y el dolor y daño físico y fisiológico consecuente. Los
compuestos que tienen tiempos de residencia in vivo
aumentados y biodisponibilidad aumentada permiten un régimen de
dosificación simplificado (es decir,menos dosis/día y/o menos
medicación). Además, la reducción de la cantidad de compuesto
administrado conlleva la reducción de los efectos secundarios como
resultado de la medicación y/o sus metabolitos. Por tanto, es muy
deseable proporcionar inhibidores del canal Gardos que demuestren
buenas biodisponibilidades y estabilidades potenciadas in
vivo.
La estabilidad de los compuestos en diversos
medios biológicos puede ensayarse por procedimientos conocidos en
la técnica. En una realización, la estabilidad de los compuestos se
ensaya en una preparación in vitro. En una realización
preferida, la preparación in vitro es una preparación
microsómica de hígado. Los resultados de dichos ensayos in
vitro proporcionan datos relevantes para la estabilidad in
vivo de los compuestos de la invención. Se conocen en la
técnica otros ensayos in vitro útiles para ensayar la
estabilidad de los compuestos de la invención.
Además de los procedimientos in vitro,
pueden realizarse procedimientos in vivo tales como estudios
farmacocinéticos en un intervalo de modelos animales. Pueden
administrarse uno o más compuestos de la invención a un animal,
preferiblemente una rata, a diferentes dosificaciones y/o por
diferentes vías (por ejemplo,i.v., i.p., p.o.). Pueden recogerse
muestras de sangre, orina y/o heces en momentos puntuales en serie y
las muestras pueden ensayarse para la presencia y/o concentración
del(de los) compuesto(s) de la invención y/o los
metabolitos del(de los) compuesto(s).
Puede utilizarse cualquier cantidad apropiada
para comparar datos de diferentes compuestos. Las cantidades
ejemplares incluyen, semi-vida, biodisponibilidad,
cantidad de compuesto que permanece intacto después de un periodo
de tiempo predeterminado y similares. En una realización preferida,
se utiliza la cantidad de compuesto que permanece intacto después
de un periodo de tiempo predeterminado. Como se usa en este
documento, "intacto" se refiere a compuesto que no se ha
metabolizado o degradado de otro modo en una especie diferente a
partir del compuesto original.
\newpage
En una realización preferida, el periodo de
tiempo predeterminado es de aproximadamente dos horas a
aproximadamente setenta y dos horas, más preferiblemente de
aproximadamente 4 horas a aproximadamente veinticuatro horas. En
otra realización preferida la cantidad de compuesto intacto que
permanece después de un periodo de tiempo predeterminado de dos
horas es al menos el 40% de la muestra inicial, preferiblemente al
menos el 50% y más preferiblemente al menos el 70%.
Cualquier técnica que permita la detección y,
preferiblemente, la cuantificación del(de los)
compuesto(s) y/o metabolitos es apropiada para su uso en el
ensayo de los compuestos de la invención. Estos procedimientos
incluyen procedimientos espectrométricos (por ejemplo,RMN (por
ejemplo, ^{19}F RMN), EM, IR, UV/vis), procedimientos
cromatográficos (por ejemplo,CL, CG, HPCL) y procedimientos híbridos
que utilizan procedimientos tanto espectrométricos como
cromatográficos (por ejemplo, CG/EM, CL/EM, CL/EM/EM). Además, los
procedimientos pueden utilizar marcadores detectable tales como
compuestos de la invención que están marcados con radioisótopos (por
ejemplo, ^{3}H, ^{15}N, ^{14}C) o marcadores fluorescentes
(por ejemplo, fluoresceína, rodamina). Otros procedimientos para
ensayar la persistencia in vivo de pequeñas moléculas
orgánicas, particularmente las aplicables a moléculas bioactivas,
serán evidentes para los especialistas en la técnica.
Para desarrollar inhibidores del canal Gardos
farmacéuticamente útiles, los compuestos candidatos deben demostrar
actividad aceptable hacia el canal diana. Los compuestos se
consideran suficientemente potentes si tienen una CI_{50} para el
canal Gardos de no más de 30 nM.
Como se ha analizado anteriormente en el
contexto de la estabilidad de los compuestos, este nivel de
actividad es particularmente importante para tratar un síndrome
crónico tal como anemia de células falciformes. Las diversas
preocupaciones acerca del cumplimiento del paciente y los efectos
secundarios están bien abordados por los inhibidores del canal
Gardos que tienen una potencia para el canal Gardos de 30 nM.
La actividad de los compuestos de la invención
hacia los canales iónicos, tales como el canal Gardos puede
ensayarse utilizando procedimientos conocidos en la técnica. Por
ejemplo, véase, Brugnara y col., J. Biol. Chem., 268(12):
8760-8768 (1993). Utilizando los procedimientos
descritos en esta referencia, puede ensayarse tanto el porcentaje
de inhibición del canal Gardos como la CI_{50} de los compuestos
de la invención.
En un ensayo ejemplar, la inhibición por los
compuestos de ensayo de un canal Gardos de eritrocito puede
ensayarse usando glóbulos rojos humanos. El grado de inhibición
puede medirse usando un material detectable tal como ^{86}Rb. En
un ensayo ejemplar, utilizando ^{86}Rb, puede ensayarse la
inhibición del canal Gardos exponiendo glóbulos rojos a ^{86}Rb y
un compuesto de ensayo y midiendo la cantidad de ^{86}Rb captada
por las células. Numerosas variaciones de este ensayo serán
evidentes para los especialistas en la técnica.
La potencia de los compuestos de la invención
puede ensayarse usando eritrocitos por un procedimiento tal como el
descrito por Brugnara y col., J. Clin. Invest., 92:
520-526 (1993). En resumen, los eritrocitos se
exponen a un compuesto de ensayo y un medio que contiene ^{86}Rb.
La velocidad inicial de transporte de ^{86}Rb puede calcularse a
partir de un parámetro tal como la pendiente de mínimos cuadrados
lineal de la captación de ^{86}Rb por la(s)
célula(s). Las constantes de inhibición pueden calcularse por
procedimientos convencionales usando ajuste a curvas no lineales
asistido por ordenador.
Se conocen en la técnica otros procedimientos
para ensayar la actividad de los canales iónicos y la actividad de
agentes que afectan a los canales iónicos. La selección de un
procedimiento de ensayo apropiado pertenece a la capacidad de los
especialistas en la técnica. Véase, por ejemplo, Hille, B., IONIC
CHANNELS OF EXCITABLE MEMBRANES, Sinaner Associates, Inc.
Sunderland, MA (1992).
Los resultados de los ensayos de inhibición del
canal Gardos y eritrocitos utilizando compuestos de la invención y
otros compuestos muy relacionados se presentan en la siguiente Tabla
2. Los números de compuesto en la Tabla 2 son remisiones a las
estructuras de los compuestos presentados en la Tabla 1.
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Para que los compuestos funcionen como
inhibidores del canal Gardos farmacéuticamente útiles, los
compuestos candidatos deben demostrar selectividad aceptable hacia
el canal diana. Los compuestos que tienen selectividad por el canal
Gardos, medida por el índice de CI_{50} de un compuesto para
I_{Ks} frente a su CI_{50} para el canal Gardos de al menos 80
se consideran suficientemente selectivos. Los registros de corriente
I_{Ks} se hicieron usando la metodología de pinzamiento zonal de
células completas en miocitos de cobaya como se describe en Turgeon
y col., Circulation Research 75: 879-86 (1994).
La selectividad de un compuesto particular por
el canal Gardos con relación a otro canal de iones potasio se
determina convenientemente como una proporción de dos cantidades
relacionadas con la unión del compuesto (por ejemplo,CI_{50}). En
una realización preferida, la selectividad se determina usando las
actividades determinadas como se ha analizado anteriormente, sin
embargo, se conocen otros procedimientos para ensayar la actividad
de los canales iónicos y la actividad de agentes que afectan a los
canales iónicos en la técnica. La selección de procedimientos de
ensayo apropiados pertenece a las capacidades de los especialistas
en la técnica. Véase, por ejemplo, Hille, B., IONIC CHANNELS OF
EXCITABLE MEMBRANES, Sinaner Associates, Inc. Sunderland, MA
(1992).
Los resultados de las determinaciones de
selectividad para los compuestos de la invención y otros compuestos
muy relacionados se presentan en la Tabla 2. La selectividad de los
compuestos por el canal Gardos se determinó con relación a
I_{Ks}, un canal de iones potasio ejemplar. Los números de
compuesto en la Tabla 2 son remisiones a las estructuras de los
compuestos presentados en la Tabla 1.
Como puede observarse a partir de los resultados
presentados anteriormente, los compuestos de la invención
demuestran una selectividad marcado por el canal Gardos frente a
otros canales de iones potasio (por ejemplo, I_{Ks}). Además, los
compuestos de la invención son inhibidores potentes del canal
Gardos. Además, las semi-vidas in vivo de
estos compuestos están potenciadas de forma demostrable con relación
a compuestos no fluorados tales como clotrimazol.
En una realización, los compuestos de la
invención son inhibidores potentes, selectivos y estables del flujo
de potasio, tal como el mediado por el canal Gardos.
Los compuestos de la invención son
preferiblemente estables en un medio biológico, tal como una
preparación enzimática microsómica in vitro permaneciendo al
menos un 40% del compuesto intacto después de dos horas de
incubación en el medio biológico, preferiblemente más del 50% y más
preferiblemente más del 70%.
Aunque sin el deseo de limitarse por ninguna
teoría particular de funcionamiento, actualmente se cree que
ciertas características estructurales de los compuestos de la
invención (es decir, reemplazo de hidrógeno con flúor) están
actualmente implicadas en la estabilidad, selectividad y potencia de
estos compuestos. Por tanto, en una realización preferida, los
inhibidores de la invención comprenden un resto arilo, en el que al
menos un átomo de hidrógeno del resto arilo está reemplazado por un
radical que comprende un átomo de flúor. En esta realización, la
invención abarca derivados fluorados de los compuestos que inhiben
el flujo de iones potasio, particularmente los que tienen actividad
inhibidora del canal Gardos (por ejemplo, agentes antimicóticos,
por ejemplo, miconazol, econazol, butoconazol, oxiconazol y
sulconazol). Otros agentes que tienen actividad inhibidora del
canal de iones potasio, y particularmente el canal Gardos
y al menos un resto arilo que lleva al menos un átomo de flúor están dentro del alcance de la presente invención.
y al menos un resto arilo que lleva al menos un átomo de flúor están dentro del alcance de la presente invención.
En una realización preferida, el resto arilo es
un grupo fenilo. En otra realización preferida, el resto arilo es
un constituyente de un grupo trifenilmetilo.
El(los) compuesto(s) de la
invención pueden administrarse per se o en forma de una
composición farmacéutica en la que el(los)
compuesto(s) activos(s) está(n) en mezcla con uno o
más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente
aceptables. Por tanto, además de los compuestos que afectan a los
flujos de iones celulares (por ejemplo, actividad inhibidora del
canal Gardos), la presente invención también proporciona
formulaciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la
invención.
En un segundo aspecto, la invención proporciona
una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la
invención de acuerdo con la Fórmula (I) en mezcla con un excipiente
farmacéuticamente aceptable. En una realización preferida, los
compuestos son aquellos de acuerdo con la Fórmula (II) y más
preferiblemente de acuerdo con la Fórmula (III).
Los compuestos descritos en este documento, o
sales de adición o hidratos farmacéuticamente aceptables de los
mismos, pueden formularse para suministrarse a un paciente usando
una amplia diversidad de vías o modos de administración. Las vías
de administración adecuadas incluyen, administración por inhalación,
transdérmica, oral, ocular, rectal, a través de la mucosa,
intestinal y parenteral, incluyendo inyecciones intramusculares,
subcutáneas e intravenosas.
Los compuestos descritos en este documento, o
sales y/o hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos,
pueden administrarse individualmente, en combinación con otros
compuestos de la invención, y/o en cócteles combinados con otros
agentes terapéuticos. La elección de los agentes terapéuticos que
pueden co-administrarse con los compuestos de la
invención dependerá, en parte, de la afección que se está
tratando.
Por ejemplo, cuando se administra a pacientes
que padecen la enfermedad de células falciformes, los compuestos de
la invención pueden administrarse en cócteles que contienen agentes
usados para tratar el dolor, infección y otros síntomas y efectos
secundarios habitualmente asociados con la enfermedad de células
falciformes. Dichos agentes incluyen, por ejemplo,analgésicos,
antibióticos, etc. Los compuestos también pueden administrarse en
cócteles que contienen otros agentes que se usan comúnmente para
tratar la enfermedad de células falciformes, incluyendo butirato y
derivados de butirato (Perrine y col., N. Engl. J. Med.
328(2): 81-86 (1993)); hidroxiurea (Charache
y col., N. Engl. J. Med. 323(20): 1317-1322
(1995)); eritropoyetina (Goldberg y col., N. Engl. J. Med.
323(6): 366-372 (1990)); y sales de la dieta
tales como magnesio (De Franceschi y col., Blood 88(648a):
2580 (1996)).
Las composiciones farmacéuticas para su uso de
acuerdo con la presente invención pueden formularse de manera
convencional usando uno o más vehículos fisiológicamente aceptables
que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el
procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden
usarse farmacéuticamente. La formulación apropiada depende de la
vía de administración elegida.
Para inyección, los agentes de la invención
pueden formularse en soluciones acuosas, preferiblemente en tampones
fisiológicamente compatibles tales como solución de Hanks, solución
de Ringer, o tampón salino fisiológico. En una realización
actualmente preferida, la formulación comprende y un alcohol y/o
glicol. Otros componentes útiles de esta formulación incluyen, por
ejemplo, tensioactivos, emulsivos y materiales tales como aceites
etoxilados. Una formulación ejemplar comprende un compuesto de la
invención, poli(etilenglicol) 400, etanol y agua en una
proporción 1:1:1.
Otra formulación ejemplar comprende un compuesto de la invención, agua, poli(etilenglicol) 400 y Cremophor-EL.
Otra formulación ejemplar comprende un compuesto de la invención, agua, poli(etilenglicol) 400 y Cremophor-EL.
Para administración a través de la mucosa (por
ejemplo,bucal, rectal, nasal, ocular, etc.), se usan en la
formulación penetrantes apropiados para atravesar la barrera. Dichos
penetrantes son conocidos en líneas generales en la técnica.
Para administración oral, los compuestos pueden
formularse fácilmente combinando el(los) compuesto(s)
acti-
vos(s) con vehículos farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Dichos vehículos posibilitan que los compuestos de la invención se formulen en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, pastas, suspensiones y similares, para ingestión oral por un paciente a tratar. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden combinarse con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después añadiendo auxiliares adecuados, si se desea, para obtener núcleos de comprimido o gragea. Los excipientes adecuados son, en particular, cargas tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden añadirse agentes disgregantes, tales como polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato sódico.
vos(s) con vehículos farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Dichos vehículos posibilitan que los compuestos de la invención se formulen en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, pastas, suspensiones y similares, para ingestión oral por un paciente a tratar. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden combinarse con un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después añadiendo auxiliares adecuados, si se desea, para obtener núcleos de comprimido o gragea. Los excipientes adecuados son, en particular, cargas tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, y/o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden añadirse agentes disgregantes, tales como polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo tal como alginato sódico.
Los núcleos de gragea están provistos de
revestimientos adecuados. Para este propósito, pueden usarse
soluciones de azúcar concentradas, que opcionalmente pueden
contener goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel carbopol,
polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de laca, y
disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Pueden
añadirse colorantes o pigmentos a los comprimidos o revestimientos
de gragea para la identificación o para caracterizar diferentes
combinaciones de dosis de compuesto activo.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden
usarse de forma oral incluyen cápsulas de ajuste por presión
fabricadas de gelatina, así como cápsulas precintadas, blandas
fabricadas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o
sorbitol. Las cápsulas de ajuste por presión pueden contener los
ingredientes activos en mezcla con una carga tal como lactosa,
aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco
o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En las
cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o
suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos,
parafina líquida, o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden
añadirse estabilizantes. Todas las formulaciones para administración
oral deben estar en dosificaciones adecuadas para cada
administración.
Para administración bucal, las composiciones
pueden tomar la forma de comprimidos o pastillas formuladas de una
manera convencional.
Para administración por inhalación, los
compuestos para su uso de acuerdo con la presente invención se
suministran convenientemente en forma de una presentación de
pulverización en aerosol desde envases presurizados o un
nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo,
diclorodifluorometano, triclorofluorometano,
diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En
el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede
determinarse proporcionando una válvula para suministrar una
cantidad medida. Pueden formularse cápsulas y cartuchos de, por
ejemplo, gelatina para su uso en un inhalador o insuflador que
contiene una mezcla en polvo del compuesto y una base de polvo
adecuada tal como lactosa o almidón.
Los compuestos pueden formularse para
administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección
en embolada o infusión continua. Las formulaciones para inyección
pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo,
enampollas o en recipientes de múltiples dosis, con un conservante
añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como
suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o
acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como
agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes, tales como
polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido algínico o una sal
del mismo tal como alginato sódico.
Las formulaciones farmacéuticas para
administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los
compuestos activos en forma soluble en agua, tales como los
descritos anteriormente para administración intravenosa. Además,
las suspensiones de los compuestos activos pueden prepararse en
forma de suspensiones de inyección oleosas adecuadas. Los
disolventes o vehículos lipófilos adecuados incluyen aceites grasos
tales como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos,
tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las
suspensiones de inyección acuosas pueden contener sustancias que
aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como
carboximetilcelulosa sódica, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, la
suspensión también puede contener estabilizantes adecuados o
agentes que aumentan la solubilidad de los compuestos para permitir
la preparación de soluciones altamente concentradas.
Como alternativa, el ingrediente activo puede
estar en forma de polvo para la constitución con un vehículo
adecuado, por ejemplo,agua libre de pirógenos estéril, antes de su
uso.
Los compuestos también pueden formularse en
composiciones rectales tales como supositorios o enemas de
retención, por ejemplo,que contienen bases de supositorio
convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Además de las formulaciones descritas
previamente, los compuestos también pueden formularse en forma de
una preparación de depósito. Dichas formulaciones de larga acción
pueden administrarse por implante o suministro transcutáneo (por
ejemplo, de forma subcutánea o intramuscular), inyección
intramuscular o un parche transdérmico. Por tanto, por ejemplo, los
compuestos pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos
adecuados (por ejemplo, en forma de una emulsión en un aceite
aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco
solubles, por ejemplo, como una sal poco soluble.
Las composiciones farmacéuticas también pueden
comprender vehículos o excipientes en fase sólida o gel adecuados.
Los ejemplos de dichos vehículos o excipientes incluyen carbonato
cálcico, fosfato cálcico, diversos azúcares, almidones, derivados
de celulosa, gelatina, y polímeros tales como
polietilenglicoles.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para
su uso con la presente invención incluyen composiciones en las que
el ingrediente activo está contenido en una cantidad
terapéuticamente eficaz, es decir, en una cantidad eficaz para
conseguir su propósito pretendido. La cantidad eficaz real para una
aplicación particular dependerá, entre otros, de la afección que se
está tratando. Por ejemplo, cuando se administra en procedimientos
para reducir la deshidratación de células falciformes y/o el
retardo de la existencia de deformación o distorsión de los
eritrocitos in situ, dichas composiciones contendrán una
cantidad de ingrediente activo eficaz para conseguir este
resultado. La determinación de una cantidad eficaz pertenece a las
capacidades de los especialistas en la técnica, especialmente a la
luz de la descripción detallada de este documento.
Para cualquier compuesto descrito en este
documento, la cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse
inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Las
concentraciones plasmáticas diana serán aquellas concentraciones de
compuesto(s) activo(s) que son capaces de inducir la
inhibición del canal Gardos. En realizaciones preferidas, la
actividad del canal Gardos está al menos un 25% inhibida. Las
concentraciones plasmáticas diana de compuesto(s)
activo(s) que son capaces de inducir al menos aproximadamente
el 50%, 75%, o incluso el 90% o mayor de inhibición del flujo de
potasio del canal Gardos se prefieren actualmente. El porcentaje de
inhibición del canal Gardos en el paciente puede controlarse para
evaluar lo apropiado de la concentración plasmática de fármaco
conseguida, y la dosificación puede ajustarse a la alza o a la baja
para conseguir el porcentaje de inhibición deseado.
Como se sabe bien en la técnica, las cantidades
terapéuticamente eficaces para su uso en seres humanos también
pueden determinarse a partir de modelos animales. Por ejemplo, una
dosis para seres humanos puede formularse para conseguir una
concentración en circulación que se haya descubierto que es eficaz
en animales. Un modelo animal particularmente útil par la
enfermedad de células falciformes es el modelo de ratón
SAD-1 (Trudel y col., EMBO J. 11: 31573165 (1991)).
La dosificación en seres humanos puede ajustarse controlando la
inhibición del canal Gardos y ajustando la dosificación a la alza o
a la baja, como se ha descrito anteriormente.
Una dosis terapéuticamente eficaz también puede
determinarse a partir de datos humanos para los compuestos que se
sabe que muestran actividades farmacológicas similares, tales como
clotrimazol y otros agentes antimicóticos (véase, por ejemplo,
Brugnara y col., JPET 273:266272 (1995)); Benzaquen y col., Nature
Medicine 1: 534-540 (1995); Brugnara y col., J.
Clin. Invest. 97 (5): 1227-1234 (1996)). La dosis
aplicada puede ajustarse en base a la biodisponibilidad relativa y
potencia del compuesto administrado en comparación con
clotrimazol.
El ajuste de la dosis para conseguir la eficacia
máxima en seres humanos en base a los procedimientos descritos
anteriormente y otros procedimientos que son bien conocidos en la
técnica pertenece a las capacidades de los especialistas en la
técnica.
En el caso de administración local, la
concentración sistémica en circulación del compuesto administrado no
será de particular importancia. En dichos casos, el compuesto se
administra para conseguir una concentración en el área local eficaz
para conseguir el resultado pretendido.
Para su uso en la profilaxis y/o tratamiento de
la enfermedad de células falciformes, incluyendo episodios crónicos
de células falciformes y crisis agudas de células falciformes, una
concentración en circulación de compuesto administrado de
aproximadamente 0,001 \GammaM a 20 \GammaM se considera eficaz,
siendo preferido de aproximadamente 0,01 \GammaM a
5 \GammaM.
5 \GammaM.
Las dosis del paciente para administración oral
de los compuestos descritos en este documento, que es el modo
preferido de administración para la profilaxis y para el tratamiento
de episodios crónicos de células falciformes, típicamente varía de
aproximadamente 1 mg/día a aproximadamente 10.000 mg/día, más
típicamente de aproximadamente 10 mg/día a aproximadamente 1.000
mg/día, y mucho más típicamente de aproximadamente 50 mg/día a
aproximadamente 500 mg/día. Indicado en términos de peso corporal
del paciente, las dosificaciones típicas varían de aproximadamente
0,01 a aproximadamente 150 mg/kg/día, más típicamente de
aproximadamente 0,1 a aproximadamente 15 mg/kg/día, y mucho más
típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg/kg/día.
Para otros modos de administración, la cantidad
de dosificación y el intervalo pueden ajustarse individualmente
para proporcionar niveles plasmáticos del compuesto administrado
eficaces para la indicación clínica particular que se está
tratando. Por ejemplo, si las crisis falciformes agudas son la
manifestación más dominante, en una realización, un compuesto de
acuerdo con la invención puede administrarse en concentraciones
relativamente elevadas múltiples veces por día. Como alternativa,
si el paciente muestra solamente crisis falciformes periódicas en
una base poco frecuente, periódica o irregular, en una realización,
puede ser más deseable administrar un compuesto de la invención a
concentraciones eficaces mínimas y usar un régimen de administración
menos frecuente. Esto proporcionará un régimen terapéutico que
puede ser proporcional a la gravedad de la enfermedad de células
falciformes del individuo.
Utilizando los contenidos proporcionados en este
documento, puede programarse un régimen de tratamiento profiláctico
o terapéutico eficaz que no causa toxicidad sustancial y aún sea
completamente eficaz para tratar los síntomas clínicos demostrados
por el paciente particular. Esta programación debe implicar la
elección cuidadosa del compuesto activo considerando factores tales
como la potencia del compuesto, biodisponibilidad relativa, peso
corporal del paciente, presencia y gravedad de los efectos
secundarios adversos, modo preferido de administración y el perfil
de toxicidad del agente seleccionado.
La proporción entre toxicidad y efecto
terapéutico para un compuesto particular es su índice terapéutico y
puede expresarse como la proporción entre DL_{50} (la cantidad de
compuesto letal en un 50% de la población) y DE_{50} (la cantidad
de compuesto eficaz en un 50% de la población). Se prefieren
compuestos que muestran índices terapéuticos elevados. Los datos de
índices terapéuticos obtenidos de ensayos de cultivo celular y/o
estudios animales pueden usarse para formular un intervalo de
dosificaciones para su uso en seres humanos. La dosificación de
dichos compuestos preferiblemente está dentro de un intervalo de
concentraciones plasmáticas que incluyen la DE_{50} con poca o
ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este
intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía
de administración utilizada. Véase, por ejemplo Fingl y col., en:
THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Cap.1, pág.1, 1975. La
formulación exacta, vía de administración y dosificación pueden
elegirse por le médico individual en vista de la afección del
paciente y el procedimiento particular en que el compuesto
se
usa.
usa.
Además de los compuestos y formulaciones
farmacéuticas analizados en detalle anteriormente, la presente
invención proporciona varios procedimientos en los que los
compuestos de la invención encuentran uso. Los procedimientos
varían entre aquellos que podrían usarse en un ajuste de laboratorio
para sondear los mecanismos básicos de, por ejemplo,
farmacocinética, actividad del fármaco, origen de la enfermedad y
progresión y similares.
Por tanto, en un tercer aspecto, la invención
proporciona un procedimiento para inhibir el flujo de potasio de
una célula. El procedimiento comprende poner en contacto una célula
con una cantidad eficaz de un compuesto que tiene una estructura de
acuerdo con la Fórmula I. En una realización preferida, los
compuestos tienen una estructura de acuerdo con la Fórmula II y más
preferiblemente de acuerdo con la Fórmula III.
Este aspecto de la invención tiene un amplio
intervalo de usos, pero se prefiere como una modalidad para el
estudio de los mecanismos básicos subyacentes al flujo de potasio y
el mecanismo de la actividad de los agentes que modulan este flujo.
Además, los compuestos de la invención pueden utilizarse como
herramientas en el descubrimiento de nuevos agentes que modulen el
flujo de potasio. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden
utilizarse en ensayos, tales como ensayos competitivos, para
ensayar la eficacia de inhibidores putativos del flujo de potasio.
Estos procedimientos de la invención pueden realizarse tanto in
vitro como in vivo. Los ensayos de acuerdo con la
presente invención pueden realizarse, por ejemplo, modificando
procedimientos reconocidos en la técnica para permitir la
incorporación de los compuestos de la invención en ellos. Dicha
modificación pertenece a las capacidades de los especialistas en la
técnica.
En otra realización preferida, este
procedimiento se usa terapéuticamente para tratar o prevenir una
afección que pueda verse afectada positivamente por la modulación
del flujo de potasio. En una realización actualmente preferida, la
afección es la enfermedad de células falciformes.
En un cuarto aspecto, la invención proporciona
un procedimiento para reducir la deshidratación de los eritrocitos.
Este procedimiento comprende poner en contacto un eritrocito con una
cantidad eficaz de un compuesto que tiene una estructura de acuerdo
con la Fórmula I. En una realización preferida, los compuestos
tienen una estructura de acuerdo con la Fórmula II y más
preferiblemente de acuerdo con la Fórmula III.
Este aspecto de la invención tiene una amplia
fama de uso incluido, por ejemplo, el estudio del mecanismo de la
deshidratación de los eritrocitos, la investigación de los
compuestos que inhiben o invierten la deshidratación de los
eritrocitos y el tratamiento o prevención de las afecciones
asociadas con la deshidratación de los eritrocitos.
En un quinto aspecto, la invención proporciona
un procedimiento para la fabricación de un medicamento para tratar
o prevenir la enfermedad de células falciformes. El procedimiento
comprende administrar a un sujeto que padece la enfermedad de
células falciformes, una cantidad terapéuticamente eficaz de un
compuesto que tiene una estructura de acuerdo con la Fórmula I. En
una realización preferida, los compuestos tienen una estructura de
acuerdo con la Fórmula II y más preferiblemente de acuerdo con la
Fórmula III.
Este aspecto de la invención puede utilizarse
para prevenir la aparición de acontecimientos agudos de células
falciformes o para mejorar los efectos de estos acontecimientos.
Además, el procedimiento puede usarse para tratar y/o prevenir la
enfermedad crónica de células falciformes. Los procedimiento pueden
hacer uso de los compuestos de la invención per se o,
preferiblemente, las formulaciones farmacéuticas de la invención.
Los modos de administración relevantes, la elección de los niveles
de dosificación y la frecuencia de la dosificación se han analizado
anterior-
mente.
mente.
En un sexto aspecto, la presente invención
proporciona un procedimiento para potenciar la resistencia a la
degradación en un medio biológico de un inhibidor del canal de
potasio, que comprende un resto fenilo. El procedimiento comprende
sustituir un radical que comprende un resto fenilo por un átomo de
hidrógeno en el radical fenilo del inhibidor.
El procedimiento puede practicarse usando
inhibidores del canal de potasio que tienen un intervalo de
estructuras. La única limitación en la estructura del inhibidor es
que el anillo fenilo debe estar presente como un componente de la
estructura del inhibidor. En una realización preferida, el anillo
fenilo es un componente de un radical trifenilmetilo. En una
realización preferida adicional, la degradación se reduce a menos
del 60% del compuesto que se está degradando después de ponerse en
contacto con un medio biológico durante dos horas.
La sustitución del radical flúor por hidrógeno
puede conseguirse por los procedimientos descritos en ese documento
o por otros procedimientos convencionales en química orgánica. Puede
ensamblarse un amplio intervalo de compuestos que tienen la
sustitución requerida a partir de los compuestos
fluoro-arilo que están fácilmente disponibles de
proveedores comerciales tales como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee,
WI). Además, existen numerosas vías sintéticas convencionales para
el fácil ensamblaje de materiales de partida apropiados para los
compuestos ensamblados de acuerdo con el procedimiento de la
invención.
Al elegir las dianas para convertir los
derivados fluoro, un especialista en la técnica entenderá que es
deseable comenzar con compuestos que contienen arilo que tienen
actividad conocida hacia el canal Gardos. Muchos agentes
reconocidos en la técnica que tienen propiedades antimicóticas
tienen actividad demostrable de canal Gardos. Por tanto, un
especialista en la técnica elegiría agentes que tienen la actividad
antimicótica, o análogos de estos compuestos, para preparar
análogos fluorados de ellos. El ensayo de los nuevos agentes para la
potencia y resistencia a degradación biológica puede conseguirse de
forma rutinaria por un especialista en la técnica utilizando los
procedimientos proporcionados en este documento además de los
conocidos en la técnica. Además, a través de la experimentación
rutinaria utilizando estos procedimientos, un especialista en la
técnica puede ensayar rápidamente una o más moléculas que contienen
arilo para la actividad hacia el canal Gardos. Los derivados
fluorados de dianas prometedoras después pueden prepararse y
ensayarse, como se ha analizado anteriormente.
Los presentes inhibidores del canal Gardos
basados en trifenilacetamida, en los que uno o más de los grupos
fenilo está sustituido con uno o más átomos de flúor o restos que
contienen flúor, tienen estabilidades metabólicas sorprendentemente
elevadas con relación a inhibidores conocidos tales como
clotrimazol. Por ejemplo, el clotrimazol 19 está un 94,2% degradado
después de dos horas de incubación en una preparación microsómica de
hígado. En contraste, los compuestos fluorados representativos de
la invención, tales como 3 y 5 están solamente un 24% y un 29%
degradados después de una incubación similar. Estas
trifenilacetamidas fluoradas también son notablemente más estables
que sus análogos no fluorados. Por ejemplo, el compuesto 20 está un
87% degradado después de una incubación similar.
Aunque se observa una tendencia general hacia la
estabilidad potenciada después de la sustitución con flúor, esto no
es cierto para todos los derivados fluorados. Por ejemplo, una
trifenilacetamida sustituida 9 en dos de los anillo fenilo en las
posiciones 3 y 3' estaba un 97% degradada después de dos horas en
una preparación microsómica. Por tanto, en este caso, la
sustitución de fluoro aumentó aparentemente la cantidad de
degradación con relación tanto a clotrimazol como a una
trifenilacetamida no fluorada.
De forma similar, los compuestos análogos que
tienen dos sustituyentes fluoro en un anillo también se degradaron
rápidamente. Por ejemplo, después de dos horas en una preparación
microsómica, los derivados sustituidos en las posiciones 2, 4 (8) y
las posiciones 3, 4 (7) estaban un 61% y un 85% degradados,
respectivamente. Además, ciertos compuestos que se monosustituyeron
en cada uno de los tres anillo fenilo también se degradaron
rápidamente. Por ejemplo, un derivado sustituido en las posiciones
3, 3' y 3'' (17) estaba un 82% degradado después de dos horas en
una preparación microsómica.
En vista de lo anterior, se ha descubierto que
solamente patrones de sustitución seleccionados confieren el nivel
necesario de estabilidad a las trifenilacetamidas fluoradas. También
se observa una variación similar en la potencia y selectividad del
compuesto con patrón de sustitución.
Un resultado inesperado de que sea sustituido
hidrógeno por flúor en los anillos fenilo es una potencia
notablemente potenciada de los compuestos de la invención para el
canal Gardos con relación a clotrimazol y trifenilacetamidas no
fluoradas. Por ejemplo, una trifenilacetamida no fluorada 20 tiene
una CI_{50} de 50 nM para el canal Gardos. En contraste, una
trifenilacetamida monofluorada análoga 2 tiene una CI_{50} de 15
nM, que refleja una mejora del 330% en la potencia.
Aunque se observa una tendencia general hacia la
potencia mejorada para los derivados de trifenilacetamida fluorada,
ciertos patrones de sustitución parecen mejorar de forma más
profunda la potencia con relación al compuesto precursor sin
sustituir. Un aspecto particular de esta tendencia general es que
los derivados en los que más de un anillo está sustituido son
generalmente más potentes que aquellos en los que solamente un
anillo está sustituido. Por ejemplo, el compuesto 8 tiene dos
sustituyentes fluoro en un único anillo en las posiciones 2 y 4 y
una CI_{50} de 34 nM. En contraste, el compuesto 12, tiene un
sustituyente fluoro en un anillo en la posición 2, un sustituyente
fluoro en otro anillo en la posición 4', y una CI_{50} de 5 nM.
Esto refleja una mejora en la potencia de 12 sobre 8 de casi un
700%. Además, el compuesto 12 tiene una potencia del 1000% mayor
que la del compuesto precursor no fluorado 20. Esto refleja un
aumento en la potencia sobre el clotrimazol del 2000%.
A pesar de la tendencia hacia el aumento de la
potencia, el grado de mejora en la potencia del compuesto no es
predecible, a priori, a partir de la cantidad de
sustituyentes por anillo. Por ejemplo, el compuesto 9 tiene un
sustituyente fluoro en un anillo en la posición 3, un sustituyente
fluoro en otro anillo en la posición 3' y una CI_{50} de 30 nM.
Un compuesto similar 11, que tiene un sustituyente fluoro en un
anillo en la posición 2, un sustituyente fluoro en otro anillo en
la posición 4' y una CI_{50} de 5 nM, tiene un aumento en la
potencia de 11 sobre 9 del 600%.
Como se ha analizado anteriormente, se ha
descubierto que la potencia de trifenilacetamidas fluoradas para el
canal Gardos puede manipularse por la elección sensata tanto de la
cantidad de sustituyentes fluoro como de su colocación en los
anillos fenilo de estos compuestos. Sorprendentemente, se observan
efectos similares para la selectividad por el canal Gardos de estos
compuestos.
Además de la potencia y biodisponibilidad, un
agente farmacéutico para tratar la anemia de células falciformes
inhibiendo el flujo de iones debe ser selectivo por el canal de
iones que es su diana. La interacción del agente con canales
diferentes de la diana probablemente causará efectos secundarios
indeseados y potencialmente dañinos. Por ejemplo, se sabe que el
clotrimazol y algunos de sus análogos interaccionan con el
componente lento de la corriente de potasio de rectificación
retardada en miocitos, I_{Ks}. El bloqueo de esta corriente está
unido a una muerte repentina debida a fibrilación ventricular
(Turgeon y col., Circulation Research 75: 879-86
(1994)). Por lo tanto, los compuestos que muestran selectividad por
el canal Gardos sobre I_{Ks} probablemente demostrarán ser
agentes farmacéuticos más seguros y más eficaces.
Otro resultado inesperado más de la fluoración
de uno o más de los anillos de los inhibidores del canal Gardos es
una selectividad aumentada de estos compuestos por el canal Gardos
con relación a otros canales de potasio. Varias de las
trifenilacetamidas sustituidas con fluoro de la invención demuestran
una selectividad drásticamente mejorada por el canal Gardos frente
a I_{Ks}, con relación tanto al clotrimazol como a la
trifenilacetamida no fluorada precursora. Por ejemplo, los
compuestos 3 y 5 son aproximadamente 16 veces y 18 veces más
selectivos para el canal Gardos frente a I_{Ks} que el
clotrimazol. Además, estos compuestos son ambos aproximadamente 6
veces más selectivos para el canal Gardos que la trifenilacetamida
no sustituida precursora 20.
Ahora se ha descubierto que los derivados de
trifenilmetano sustituido con flúor, particularmente los compuestos
de nitrógeno sustituidos con flúor tales como trifenilacetamidas
inhiben de forma eficaz el canal Gardos de los eritrocitos. Además,
los compuestos sustituidos con flúor presentan una resistencia a la
degradación en un medio biológico que está potenciada a un grado
sorprendente con relación a los compuestos correspondientes que no
están sustituidos con flúor.
Los compuestos, composiciones y procedimientos
de la presente invención se ilustran adicionalmente por los
siguientes ejemplos.
El Ejemplo 1 ilustra procedimientos para la
síntesis y caracterización de compuestos de la invención. Los
compuestos de la invención se aislaron en forma sustancialmente pura
y en buenos rendimientos utilizando los procedimientos detallados
en este Ejemplo.
El Ejemplo 2 ilustra el ensayo de los compuestos
de la invención para su resistencia la degradación en un medio
biológico. En este Ejemplo, microsomas de hígado humano forman el
medio biológico. Se ha descubierto que los compuestos de la
invención presentan una resistencia remarcable a la degradación por
la preparación microsómica, con relación a compuestos de
trifenilmetilo no fluorados.
El Ejemplo 3 expone un estudio farmacocinético
de los compuestos de la invención en rata. Se ha descubierto que
los compuestos fluorados de la invención muestran una
semi-vida in vivo que estaba potenciada con
relación a derivados no fluorados.
El Ejemplo 4 describe un bioensayo para medir la
inhibición del canal de potasio (canal Gardos) por los compuestos
de la invención.
Este Ejemplo ilustra procedimientos para la
síntesis y caracterización de compuestos de la invención. Los
compuestos de la invención se aislaron en forma sustancialmente pura
y en buenos rendimientos utilizando los procedimientos detallados a
continuación. El ejemplo proporciona procedimientos de alcance
general que pueden usarse para sintetizar compuestos de la
invención diferentes de los específicamente ejemplificados.
Los reactivos se usaron según se recibieron a
menos que se indique otra cosa. El procedimiento de Franco y col.,
J. Chem. Soc. Perkins Trans. II, 443 (1988), se usó para preparar
reactivos de fluorofenillitio no comerciales y fluorobenzofenonas.
Todas las reacciones sensibles a la humedad se realizaron en una
atmósfera de nitrógeno usando material de vidrio secado en horno.
Las reacciones se controlan por CCF en gel de sílice 60 F_{254}
con detección revelando con tinción de Hanessian (Khadem y col.,
Anal. Chem., 1958, 30, (1965)). La cromatografía en columna se
realizó usando gel de sílice Selecto (32-63
\GammaM). Los puntos de fusión se determinaron en una unidad
Electrothermal IA9000 y están sin corregir. Los espectros ^{1}H
(300 MHz) y ^{19}F (282 MHz) se registraron en una máquina de RMN
Varian (Gemini 2000) a temperatura ambiente en CDCl_{3.} Se usó
tetrametilsilano como referencia interna. La separación quiral de
compuesto 1 se realizó por Tecnologías Quirales usando una columna
CHUZ-ACEL OD-R y acetonitrilo/agua
como eluyente.
El Compuesto 1 se preparó en un rendimiento del
28% en cuatro etapas a partir de precursores disponibles en el
mercado.
Se añadió gota a gota bromuro de fenilmagnesio
(1,83 ml, 5,5 mmol) a una solución en agitación de
2,4'-difluorobenzofenona (1,09 g, 5,0 mmol) en
t-butilmetil éter (12 ml) a temperatura ambiente ("ta",
\sim25ºC). Después de que se completara la adición la reacción se
calentó a reflujo durante 3 h. La solución se enfrió a ta y se
vertió en HCl 1,0 M enfriado en hielo (ac.) (20 ml). Los extractos
orgánicos se extrajeron con EtOAc (3x10 ml) y se secaron
(Na_{2}SO_{4}). La concentración a presión reducida dio el
producto deseado
(2-fluorofenil)-(4-fluorofenil)fenilmetanol
en forma de un aceite marrón pálido que se usó en la siguiente
reacción sin purificación adicional.
Se añadió
(2-fluorofenil)-(4-fluorofenil)fenilmetanol
(1,47 g, 5,0 mmol) a una solución al 20% de cloruro de acetilo en
diclorometano (10 ml) a ta. La solución resultante se agitó durante
12 h después de lo cual el disolvente se retiró por evaporación. Se
añadió tolueno (2 x 20 ml) al residuo y se evaporó produciendo
2-fluorofenil-(4-fluorofenil)fenilclorometano
en bruto que se usó sin purificación en la siguiente etapa.
Se añadió cianuro de cobre (0,50 g, 5,5 mmol) al
residuo y la mezcla resultante se calentó a 130ºC durante 2,5 h.
Una vez que la reacción se hubo enfriado a aproximadamente 110ºC, se
añadió tolueno (30 ml) y la mezcla se agitó vigorosamente durante
10 min. La mezcla se filtró y el disolvente se retiró a presión
reducida. Se añadió hexano caliente (30 ml) al material en bruto y
la mezcla se agitó vigorosamente durante 30 min. La filtración y el
lavado con más hexano dieron el producto ciano deseado en forma de
un sólido blanco, que se usó sin purificación adicional.
Se añadió una solución de ácido sulfúrico
concentrado (10 ml) y ácido acético glacial (10 ml) a
(2-fluorofenil)-(4-fluorofenil)fenilacetonitrilo
en bruto (1,48 g, 5,0 mmol) a ta. La solución naranja resultante se
agitó y se calentó a 130ºC durante 3 h. La reacción se enfrió a 0ºC
y se neutralizó por la adición gota a gota de hidróxido de amonio.
Se añadió agua (30 ml) y los extractos orgánicos se extrajeron con
cloroformo (3 x 30 ml). Las fracciones orgánicas se combinaron y se
lavaron secuencialmente con agua (2x10 ml) y salmuera (20 ml). La
fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a presión
reducida. Se añadió hexano (30 ml) al aceite marrón claro resultante
iniciando la precipitación. El precipitado se molió y se lavó
secuencialmente con hexano caliente (30 ml). La cristalización en
hexano/diclorometano dio el producto deseado
(2-fluorofenil)-(4-fluorofenil)
fenilacetamida en forma de un sólido cristalino blanco (0,45 g, 1,4
mmol, 28%, 4 etapas).
El Compuesto 3 se preparó en tres etapas a
partir de los precursores disponibles en el mercado en rendimiento
del 58%.
Se añadió gota a gota bromuro de fenilmagnesio
(100 ml, 0,1 mol) a una solución en agitación de
4,4'-difluorobenzofenona (20 g, 0,092 mol) en
t-butilmetil éter (150 ml) a ta. Después de que se completara
la adición, la reacción se calentó a reflujo durante 3 h. La
solución se enfrió a ta y se vertió en HCl 1,0 M acuoso enfriado en
hielo (100 ml). Los extractos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2
x 50 ml) y se secaron (Na_{2}SO_{4}). La concentración a
presión reducida dio
bis(4-fluorofenil)fenilmetanol en
forma de un aceite marrón pálido. Después de secar al vacío durante
2 h, el material en bruto se usó en la siguiente reacción sin
purificación adicional.
Se añadió
bis(4-fluorofenil)fenilmetanol (0,092
mol) a una solución al 20% de cloruro de acetilo en diclorometano
(50 ml) a ta. La solución púrpura resultante se agitó durante 12 h
después de lo cual el disolvente se retiró por evaporación. Se
añadió tolueno (100 ml) al residuo y después se evaporó, produciendo
bis(4-fluorofenil)fenilclorometano en
bruto que se usó sin purificación en la siguiente etapa.
Se añadió cianuro de cobre (8,24 g, 0,11 mol) al
residuo en bruto y la mezcla se calentó a 140ºC durante 3 h. La
reacción se enfrió a 100ºC y se añadió tolueno (100 ml). La mezcla
resultante se agitó vigorosamente durante 10 min., se enfrió a ta,
se filtró a través de un corto lecho de gel de sílice y el
disolvente se retiró a presión reducida produciendo un sólido
marrón. Se añadió hexano caliente (100 ml) al material en bruto en
polvo y la mezcla se agitó vigorosamente durante 4 h. La filtración
y el lavado con hexano adicional dieron el
bis(4-fluorofenil)fenilacetonitrilo
deseado en forma de un sólido blanco (18,9 g, 67%).
Se añadió una solución de ácido sulfúrico
concentrado (50 ml) y ácido acético glacial (50 ml) a
bis(4-fluorofenil)fenilacetonitrilo
(18,9 g, 0,06 mol) a ta. La solución naranja resultante se agitó y
se calentó a 130ºC durante 3 h. La reacción se enfrió a 0ºC, se
vertió en agua en hielo (150 ml) y se neutralizó con hidróxido de
amonio. Los extractos orgánicos se extrajeron con cloroformo (3 x
100 ml), se combinaron y se lavaron con salmuera (2 x 50 ml). Los
extractos orgánicos se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron
a presión reducida produciendo un sólido
amarillo-naranja. El sólido se agitó con hexano
caliente (100 ml) durante 30 min. y se filtró. La cristalización en
diclorometano/hexano dio bis(4-fluorofenil)
fenilacetamida (3) en forma de un sólido cristalino blanco (16,9 g,
0,052 mol, 87%).
El Compuesto 5 se preparó en un rendimiento del
66% en cuatro etapas a partir de precursores disponibles en el
mercado.
Se añadió gota a gota bromuro de
p-fluorofenilmagnesio (124 ml, 0,12 mol) a una solución en
agitación de 2,4'-difluorobenzofenona (24,5 g, 0,11
mol) en t-butilmetil éter (100 ml) a ta. Después de que se
completara la adición, la reacción se calentó a reflujo durante 3
h. La solución después se enfrió a ta y se vertió en HCl 1,0 M
enfriado en hielo (ac.) (100 ml). Los extractos orgánicos se
extrajeron con EtOAc (3 x 70 ml) y se secaron (Na_{2}SO_{4}).
La concentración a presión reducida dio el producto deseado
bis(4-fluorofenil)-2-fluorofenilmetanol
en forma de un aceite amarillo pálido que se usó en la siguiente
reacción sin purificación adicional.
Se añadió una solución al 20% de cloruro de
acetilo en diclorometano (60 ml) a
bis(4-fluorofenil)-2-fluorofenilmetanol
en bruto a ta. La solución resultante se agitó durante 12 h después
de lo cual el disolvente se retiró por evaporación. Se añadió
tolueno (100 ml) al residuo y después se evaporó produciendo
bis(4-fluorofenil)-2-fluorofenilclorometano
en bruto que se usó sin purificación en la siguiente etapa.
Se añadió cianuro de cobre (12 g, 0,13 mol) al
material en bruto y la mezcla resultante se calentó a 160ºC durante
3 h. La reacción se enfrió a aproximadamente 110ºC, se añadió
tolueno (100 ml) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 10 min.
La mezcla se enfrió, se filtró a través de un corto lecho de sílice
y se concentró a presión reducida. Se añadió hexano caliente (100
ml) al material en bruto y la mezcla se agitó vigorosamente durante
30 min. La filtración y el lavado con más hexano dieron el
bis(4-fluorofenil)-2-
fluorofenilacetonitrilo deseado en forma de un sólido blanco (25,3
g, 70%).
Se añadió una solución de ácido sulfúrico
concentrado (10 ml) y ácido acético glacial (10 ml) a
bis(4-fluorofenil)-2-fluorofenilacetonitrilo
(5,0 g, 0,015 mol) a ta. La solución naranja resultante se agitó y
se calentó a 130ºC durante 2 h. La reacción se enfrió a 0ºC y se
vertió en hielo (50 g). La mezcla resultante se neutralizó por la
adición gota a gota de hidróxido de amonio. Se añadió
CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y los extractos orgánicos se extrajeron
con CH_{2}Cl_{2} adicional (3 x 30 ml). Las fracciones
orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con agua (2x10 ml) y
salmuera (20 ml). La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se
concentró a presión reducida produciendo un sólido
amarillo/naranja. El sólido se transformó en un polvo y se lavó
repetidamente con hexano caliente (50 ml) hasta que no fue evidente
ninguna coloración en el filtrado. La cristalización en
hexano/diclorometano dio el producto deseado
bis(4-fluorofenil)-2-
fluorofenilacetamida 5 en forma de un sólido cristalino blanco
(4,98 g, 0,0145 mol, 94%).
El Compuesto 16 se preparó en un rendimiento del
11% en cuatro etapas a partir de precursores disponibles en el
mercado.
Se añadió gota a gota n-butillitio (4 ml,
10 mmol) a una solución en agitación de
bromo-3-fluorobenceno (1,75 g, 10
mmol) en THF (25 ml) a -78ºC. Después de 20 minutos se añadió
4,4'-benzofenona (1,96 g, 9 mmol). La reacción se
dejó calentar a 0ºC en un periodo de 30 min. Se añadió NH_{4}Cl
saturado (ac.) (30 ml) y la agitación se continuó durante 30 min.
Se añadió EtOAc (20 ml), los extractos orgánicos se separaron, se
lavaron con salmuera (20 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por
cromatografía en columna (hexano al 100% a CH_{2}Cl_{2} al 100%)
produciendo
bis(4-fluorofenil)-3-fluorofenilmetanol
(2,81 g, 92%).
Se añadió
bis(4-fluorofenil)-3-fluorofenilmetanol
(999 mg, 3,18 mmol) a una solución al 20% de cloruro de acetilo en
diclorometano (10 ml) a ta. La solución púrpura resultante se agitó
durante 12 h después de que el disolvente se retirara por
evaporación. Se añadió tolueno (20 ml) al residuo y después se
evaporó produciendo
bis(4-fluorofenil)-3-fluorofenilclorometano
en bruto que se usó en la siguiente etapa sin purificación.
Se añadió cianuro de cobre (344 mg, 3,82 mmol)
al material en bruto y la mezcla resultante se calentó a 140ºC
durante 3 h. La reacción se enfrió a aproximadamente 110ºC, se
añadió tolueno (50 ml) y la mezcla se agitó vigorosamente durante
10 min. La mezcla se enfrió a ta, se filtró a través de un corto
lecho de sílice y el disolvente se retiró a presión reducida
produciendo un sólido beige. Se añadió hexano caliente (100 ml) al
material en bruto en polvo y la mezcla se agitó vigorosamente
durante 1 h. La filtración y el lavado con hexano adicional dieron
bis(4-fluorofenil)-3-fluorofenilacetonitrilo
en forma de un sólido blanco que se usó sin purificación
adicional.
Se añadió una solución de ácido sulfúrico
concentrado (10 ml) y ácido acético glacial (10 ml) a
bis(4-fluorofenil)-3-fluorofenilacetonitrilo
(3,18 mmol) a ta. La solución naranja resultante se agitó y se
calentó a 130ºC durante 3 h. La reacción se enfrió a 0ºC, se vertió
en agua en hielo (50 ml) y se neutralizó con hidróxido de amonio.
Los extractos orgánicos se extrajeron con cloroformo (3 x 50 ml).
Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (2
x 20 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a presión
reducida produciendo un sólido amarillo-naranja. El
sólido se agitó con hexano caliente (50 ml) durante 30 minutos y se
filtró. La cristalización en diclorometano/hexano dio el producto
deseado
bis(4-fluorofenil)-3-fluorofenilacetamida
16 en forma de un sólido cristalino blanco (147 mg, 0,43 mmol, 11%,
4 etapas).
Los compuestos de la invención se caracterizaron
por una combinación de espectroscopia ^{1}H y ^{19}F RMN y se
determinaron los puntos de fusión de los compuestos.
1: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,39-7,26 (8H, m), 7,16-6,90 (5H,
m), 5,83 (1H, s a), 5,72 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -103,4 (1F, s), -115,8 (1F, s); p.f.
180-181ºC.
2: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,37-7,28 (6H, m), 7,15, 7,05 (2H, m), 6,93 (1H, dt,
J = 8 y 2 Hz), 5,90 (1H, s a), 5,68 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -103,4 (1F, m); p.f. 210ºC.
3: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,37-7,20 (9H, m), 7,04-6,91 (4H,
m),5,81 (1H, s a), 5,71 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -115,7 (2F, s);p.f.
180-181ºC.
4: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,37-7,24 (12H, m), 6,97 (2H, t, J = 8,5 Hz), 5,83
(1H, s a), 5,75 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -116,2 (1F, s); p.f.
193-194ºC.
5: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,41-7,34 (1H, m), 7,29-7,23 (4H,
m), 7,16 (1H, ddd, J = 18,1, 8,1 y 1,2 Hz), 7,15 (1H, d,
J = 7,7 Hz), 7,05-6,97 (4H, m), 6,93-6,87 (1H, dt, J = 8,0 y 1,4 Hz), 5,90 (1H, s a), 5,74 (1H, s a); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -103,3 (1F, s), -115,5 (2F, s); p.f. 168-169ºC.
J = 7,7 Hz), 7,05-6,97 (4H, m), 6,93-6,87 (1H, dt, J = 8,0 y 1,4 Hz), 5,90 (1H, s a), 5,74 (1H, s a); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -103,3 (1F, s), -115,5 (2F, s); p.f. 168-169ºC.
6: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,64-7,54 (4H, m), 7,40-7,34 (6H,
m), 5,70 (2H, s a); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): 137,3
(2F, d, J = 19,2 Hz), -155,8 (1F, t, J = 21,4 Hz), -161,9 (2F, dd, J
= 21,4 y 17,1 Hz).
7: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,37-7,31 (6H, m), 7,28-7,20 (5H,
m), 7,12-7,04 (2H, m), 5,90 (1H, s a), 5,74 (1H, s
a); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -137,8 a -137,9 (1F,
m), -140,3 a -140,4 (1F, m); p.f. 174-175ºC.
8: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,37-7,28 (10H, m), 6,95-6,83 (2H,
m), 6,81-6,75 (1H, m), 5,92 (1H, s a), 5,80 (H,
sa); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -99,1 (1F, dd, J =
19,2 y 8,5 Hz), -111,6(1F, m); p.f.
187-188ºC.
9: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,38-7,22 (7H, m), 7,09-6,96 (6H,
m), 5,83(1H, s a), 5,77 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -112,6 (2F, dd, J = 17,1 y 6,4 Hz);
p.f. 195-196ºC.
13: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,26-7,19 (6H, dd, J = 9,0 y 5,4 Hz),
7,20-7,01 (6H, t, J = 8,7 Hz), 5,83 (1H, s a), 5,69
(1H, sa); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -115,3 (3F, s);
p.f. 180-181ºC.
14: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,39-7,27 (9H, m), 7,17-7,03 (4H,
m), 5,90 (1H, s a), 5,85 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -102,9 (2F, s); p.f.
166-167ºC.
15: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,41-7,34 (2H, m), 7,29-7,23 (4H,
m), 7,17-7,05 (4H, m), 6,99 (2H, t, J = 8,7 Hz),
5,78 (2H, s a); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -103,0
(2F, s), -115,9 (1F, m); p.f. 187-188ºC.
16: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,34-7,20 (6H, m), 7,06-6,97 (6H,
m), 5,90 (1H, s a), 5,71 (1H, s a); ^{19}F RMN
\Gamma(CHCl_{3}): -112,2 (1F, dd, J = 17,1 y 7,4 Hz),
-115,1 a -115,2 (2F, m); p.f. 165-166ºC.
17: ^{1}H RMN \Gamma(CHCl_{3}):
7,35-7,21 (3H, m), 7,06-6,97 (9H,
m), 7,17-7,05 (4H, m), 5,96 (1H, s a), 5,76 (1H, s
a); ^{19}F RMN \Gamma(CHCl_{3}): -112,2 (3F, dd, J=
17,1 y 8,5 Hz); p.f. 186-188ºC.
Ese Ejemplo ilustra el ensayo de los compuestos
de la invención para su resistencia a la degradación en un medio
biológico. En este Ejemplo, los microsomas de hígado humano forman
el medio biológico. Se descubrió que los compuestos de la invención
presentaban una resistencia remarcable a la degradación por la
preparación microsómica, con relación a compuestos de
trifenilmetilo no fluorados.
Se ensayaron diecisiete compuestos de
triarilmetano fluorados, clotrimazol, y un compuesto de
triarilmetano clorado 18 para la estabilidad metabólica in
vitro enuna mezcla de reacción de microsomas de hígado humano.
La mezcla de reacción contenía 1,0 mg/ml de proteína microsómica de
hígado humano, fosfato potásico 100 mM (pH 7,4), MgCl_{2} 10 mM y
un sistema de generación de NADPH. Los compuestos se ensayaron a una
concentración de 5 \GammaM a 37ºC y se calculó la cantidad de
compuesto intacto que permanecía en la mezcla después dos horas en
términos de porcentaje de la dosis original que permaneces.
Los resultados de este estudio demuestran que
los compuestos fluorados de la invención tienen una resistencia
potenciada a la degradación en un medio biológico que compuestos no
fluorados análogos. Los resultados se recogen en la Tabla 2,
anterior.
Este Ejemplo ilustra un estudio farmacocinético
de los compuestos de la invención en rata. Se descubrió que los
compuestos fluorados de la invención mostraban una
semi-vida in vivo que estaba potenciada con
relación a derivados no fluorados.
Los estudios farmacocinéticos se realizaron en
ratas para ampliar el descubrimiento de que la sustitución
seleccionada con fluoro de los anillos fenilo aumentaba la
estabilidad metabólica in vitro a un estudio in vivo.
El compuesto 1, compuesto 3 y compuesto 18 se administraron a grupos
de tres a cinco ratas Sprague-Dawley macho a dosis
de 1 mg/kg i.v. y 10 mg/kg p.o. para determinar el T½ y la
biodisponibilidad oral. Se recogieron muestras de sangre en 9
momentos puntuales desde la predosificación hasta 24 horas después
de la dosificación p.o. y en 11 momentos puntuales desde la
predosificación hasta 24 horas después de la dosificación i.v. Las
muestras se prepararon y analizaron para la concentración plasmática
de compuesto usando CL-EM/EM.
Como se ha predicho a partir de los datos de
metabolismo in vitro, el compuesto 18 tenía muy mala
biodisponibilidad oral con solamente niveles muy bajos (31 a 65
ng/ml) que aparecen en plasma entre 0,25 y 1 hora después de la
dosificación y no presentando niveles detectables en la muestra a
las 2 horas después de la dosis. Por vía i.v., la eliminación del
torrente sanguíneo fue rápido. Como los niveles plasmáticos eran tan
bajos en las muestras después de la dosificación oral, el
porcentaje de biodisponibilidad no podía calcularse para el
compuesto 18.
En marcado contraste con los resultados
obtenidos con el compuesto 18, el compuesto 1 tenía mucho mejor
biodisponibilidad oral, el 35%, y la disponibilidad oral para el
compuesto 3 se calculó como el 100%.
Los resultados de este experimento
farmacocinético se presentan gráficamente en la Fig. 1.
El Ejemplo 4 describe un bioensayo para medir la
inhibición de un canal de potasio activado por calcio, el canal
Gardos, en glóbulos rojos por los compuestos de la invención.
Se lavó sangre completa heparinizada tres veces
con Tampón de Flujo Modificado (MFB: NaCl 140 mM; KCl 5 mM; Tris 10
mM; EGTA 0,1 mM; pH = 7,4). Las células lavadas después se incubaron
durante 3 horas con ^{86}Rb (5 \muCi/ml). Después de este
periodo de incubación, los RBC se lavaron tres veces con MFB frío.
Los RBC cargados con ^{86}Rb lavados después se incubaron con un
compuesto de ensayo de la invención durante 10 minutos. El flujo de
^{86}Rb después se inició por la adición de 20 \mul/ml de una
solución MFB que contenía CaCl_{2} 10 mM y A23187 100 \muM, un
ionóforo de calcio. Esto produjo una concentración final de
CaCl_{2} 200 \muM y A23187 2 \muM en el medio de incubación.
Las células se incubaron durante 10 minutos, se centrifugaron y se
retiró el sobrenadante. Las muestras se contaron en un contador de
centelleo líquido Wallace Microbeta por emisión Cerenkov. Se
determinó el contenido total de RBC ^{86}Rb lisando los RBC con
agua y después precipitando la proteína usando una mezcla 50:50 de
etanol:cloroformo. Después de una centrifugación en microfuga de 20
minutos, se separaron las fases acuosa y orgánica y la fase acuosa
se retiró y se contó. El eflujo se expresa como un porcentaje del
contenido celular inicial de ^{86}Rb.
El bioensayo descrito anteriormente demostró que
los compuestos de la invención son inhibidores excelentes del canal
Gardos. Los resultados numéricos para los estudios de inhibición se
presentan en la Tabla 2, supra.
\vskip1.000000\baselineskip
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Claims (22)
1. Un compuesto que tiene la estructura:
en la
que,
m, n y p se seleccionan
independientemente entre 0 y 1 y al menos uno de m, n
y p es 1;
cuando m, n y p son todos
1, los sustituyentes fluoro en el anillo 1 y en el anillo 2 están
localizados en una posición seleccionada independientemente entre
orto respecto al sustituyente acetamida, meta
respecto al sustituyente acetamida y para respecto al
sustituyente acetamida, y el sustituyente en el anillo 3 está en
una posición seleccionada entre orto respecto al sustituyente
acetamida y para respecto al sustituyente acetamida; y
cuando p es 0, y m es 1 y n
es 1, el sustituyente fluoro en el anillo 1 está en posición
para respecto al sustituyente acetamida, y el sustituyente
en el anillo 2 está localizado en una posición seleccionada entre
orto respecto al sustituyente acetamida y para
respecto al sustituyente acetamida.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la
que,
m, n y p se seleccionan
independientemente entre 0 y 1, y al menos uno de m, n
y p es 1.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
2, que tiene la estructura:
en la que n es 0 ó
1.
\newpage
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, que tiene la estructura:
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, que tiene la estructura
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, que tiene la estructura
7. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 en forma de un hidrato.
8. Un compuesto de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para su uso como un compuesto
farmacéutico.
9. Un compuesto de la reivindicación 8 para el
tratamiento de anemia de células falciformes.
10. Una composición farmacéutica que comprende
un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en mezcla
con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
11. Un producto farmacéutico que comprende una
combinación de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1
a 9 y otro agente terapéutico.
12. Un producto de la reivindicación 11, en el
que el otro agente terapéutico es para tratar un síntoma o efecto
secundario asociado con la enfermedad de células falciformes.
13. Un producto de la reivindicación 11, en el
que el otro agente terapéutico es para tratar la enfermedad de
células falciformes, por ejemplo es butirato, derivados de butirato,
hidroxiurea, eritropoyetina o una sal de la dieta, por ejemplo una
sal de magnesio.
14. Un procedimiento para inhibir el flujo de
potasio de una célula in vitro, comprendiendo dicho
procedimiento poner en contacto dicha célula con una cantidad
eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7
o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación
10.
15. El procedimiento de la reivindicación 14, en
el que dicha célula es un eritrocito.
16. Un procedimiento para reducir la
deshidratación de los eritrocitos in vitro, comprendiendo
dicho procedimiento poner en contacto dicho eritrocito con una
cantidad de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a
7 eficaz para reducir dicha deshidratación, o una composición
farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10.
17. Uso de un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para la fabricación de un medicamento para
inhibir el flujo de potasio de una célula.
18. Uso de un compuesto de una cualquiera de as
reivindicaciones 1 a 7 para la fabricación de un medicamento para
reducir la deshidratación de los eritrocitos.
19. Uso de un compuesto de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de un
medicamento para tratar o prevenir un acontecimiento de enfermedad
de células falciformes.
20. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 17
a 19, en el que el medicamento comprende una combinación definida
en cualquiera de las reivindicaciones 11, 12 ó 13.
21. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 17
a 19, en el que el medicamento es para su administración en terapia
de combinación con un segundo medicamento que comprende otro agente
terapéutico.
22. Uso de la reivindicación 21, en el que el
otro agente terapéutico es como se ha definido en la reivindicación
12 o la reivindicación 13.
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