ES2283050T3 - Dispositivo analitico para ensayos basados en membrana. - Google Patents
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Abstract
La invención se refiere a procedimientos para realizar dispositivos de ensayo analíticos y procedimientos para el empleo de dispositivos de ensayo analíticos, tales como inmunoensayos. El dispositivo de ensayo analítico incluye una capa soporte superior impermeable a los líquidos (10) que define un borde (12) alrededor de un orificio abierto (11), y una membrana de reacción porosa (13) que está próxima a la capa de apoyo superior (10) de forma que esta parte de la superficie superior (14) de la membrana de reacción (13) y el borde (12) definen un pocillo para recibir la muestra (11). La superficie superior (14) de la membrana de reacción (13) se sella con la superficie inferior de la capa de apoyo superior (10) mediante un adhesivo soluble en agua (19) que forman entre ellos un sello impermeable a los líquidos. Un cuerpo absorbente (15) está próximo a y en comunicación líquida con la superficie inferior de la membrana de reacción (13). El dispositivo de ensayo analítico se emplea para la detección de una sustancia blanco con posibilidades de unión, en una muestra líquida potencial que contenga a la sustancia blanco.
Description
Dispositivo analítico para ensayos basados en
membrana.
El campo técnico de esta invención se refiere a
dispositivos analíticos para su uso en la determinación de la
presencia de una sustancia diana que puede unirse (es decir,
analito) en una muestra líquida que se sospecha que contiene tal
sustancia. Para este fin se han utilizado numerosos dispositivos
analíticos, en diversas configuraciones. Muchos de estos
dispositivos emplean membranas de reacción sobre las que se
inmoviliza un receptor que puede unirse específicamente a la
sustancia diana. En el ensayo que emplea estos tipos de
dispositivos, normalmente la muestra que va a someterse a prueba se
aplica a la membrana de reacción. Si la sustancia diana está
presente en la muestra, se unirá al receptor inmovilizado. Se
utilizan diversos métodos para determinar si la sustancia diana se
ha unido al receptor, indicándose así su presencia en la muestra.
En un método comúnmente utilizado, se aplica a la membrana un
anticuerpo que puede unirse específicamente a la sustancia diana y
que está unido a un marcador detectable.
Los dispositivos e inmunoensayos basados en
membranas han simplificado enormemente los diagnósticos médicos. En
el pasado, los ensayos de inmunoabsorción unidos a enzimas (ELISA)
eran el tipo más común de ensayo diagnóstico. Estos ensayos se
realizaban normalmente por técnicos expertos en un laboratorio
clínico. Con un ELISA típico, se requieren tiempos de incubación
relativamente largos. Por tanto, normalmente se tarda más de una
hora en realizar el ensayo. Adicionalmente, los ELISA están
diseñados para someter a prueba muestras por lotes. Por tanto,
generalmente no se somete a prueba una muestra hasta que se ha
obtenido un número suficiente de muestras para someter a prueba.
Como resultado, puede que un paciente no reciba los resultados de
la prueba hasta días después de facilitar una muestra. Los
inmunoensayos basados en membranas tienen la ventaja de que pueden
realizarse individualmente o en lotes. Por tanto los inmunoensayos
basados en membranas pueden realizarse en la consulta de un médico,
en lugar de en un laboratorio clínico. Pueden realizarse pruebas
individuales, y los resultados se obtienen normalmente en menos de
10 minutos. También pueden facilitarse resultados cuantitativos
mediante instrumentos especiales diseñados para leer los resultados
de prueba.
La sensibilidad de los inmunoensayos de tipo de
membrana de reacción (es decir, la capacidad para detectar niveles
muy bajos de la sustancia diana) puede aumentarse si la muestra se
concentra a través de la membrana de reacción. Con algunos
dispositivos, la concentración de la muestra a través de la
membrana de reacción se logra teniendo un material absorbente por
debajo de la membrana de reacción que extrae la muestra, que se
añade a la parte superior de la membrana, a través de la membrana y
hacia el material absorbente por debajo. Los inmunoensayos basados
en membrana que utilizan materiales absorbentes para concentrar la
muestra se ejemplifican en la patente estadounidense número
5.006.464 concedida a Chu et al., la patente estadounidense
número 4.818.677 concedida a Hay-Kaufman et
al., y la patente estadounidense número 4.632.901 concedida a
Valkirs et al., y la patente estadounidense número 5.185.127
concedida a Vonk et al.
La membrana y el material absorbente de los
dispositivos analíticos descritos en cada una de las patentes a las
que se ha hecho referencia anteriormente, están contenidas en un
alojamiento de plástico que tiene un elemento superior y un
elemento inferior que están unidos entre sí bajo compresión para
mantener a la membrana y al material absorbente en su sitio y en
contacto entre sí. El uso de compresión suficiente facilita el
flujo descendente de la muestra a través de la membrana. Si hay
compresión insuficiente, la muestra tendería a fluir lateralmente a
través de la membrana, reduciéndose así la cantidad de muestra que
fluye a través del centro de la membrana de reacción en el que
normalmente se sitúa el receptor. Estos tipos de dispositivos
analíticos normalmente se montan individualmente, lo que puede
hacer que el proceso de fabricación sea complicado y costoso.
Hay una necesidad continuada de simplificar
adicionalmente los inmunoensayos basados en membranas y los
dispositivos analíticos para ellos, así como el proceso de
fabricación del dispositivo analítico para hacerlos más fáciles de
usar y más asequibles. Esto es particularmente cierto en los países
en vías de desarrollo, en los que sería ideal un dispositivo
analítico y un ensayo diagnóstico sencillos, rápidos, sensibles,
específicos, estables en el almacenamiento y económicos.
La presente invención proporciona un dispositivo
analítico que puede usarse en ensayos analíticos, tal como un
inmunoensayo, para la detección de una sustancia diana que puede
unirse en una muestra líquida que contiene posiblemente la
sustancia diana. En su realización más sencilla, el dispositivo
analítico comprende una capa de soporte superior impermeable a los
líquidos que define un borde alrededor de un orificio abierto. Una
membrana de reacción porosa que tiene una superficie superior y una
superficie inferior es proximal a la capa de soporte superior, de
manera que una parte del borde y la superficie superior de la
membrana de reacción define un pocillo de recepción de muestra. La
superficie superior de la membrana de reacción está sellada a la
superficie inferior de la capa de soporte superior mediante
adhesivo insoluble en agua de manera que se forme un sellado
impermeable a los líquidos entre ellas, en la que dicho sellado
impermeable a los líquidos se mantiene en ausencia de compresión
entre dicha capa de soporte superior y dicha capa de soporte
inferior. Un cuerpo absorbente es proximal a, y está en
comunicación fluida con, la superficie inferior de la membrana de
reacción.
El dispositivo analítico de la presente
invención comprende además una capa de soporte inferior impermeable
a los líquidos que está unida a la superficie inferior del cuerpo
absorbente.
La figura 1 es una vista en perspectiva en
despiece ordenado de un dispositivo analítico según la presente
invención que muestra la disposición de los componentes del
dispositivo.
La figura 2 es una vista desde arriba del
dispositivo analítico según la presente invención.
La figura 3 es una vista en alzado en sección
transversal de las capas del dispositivo analítico de la figura 2 a
lo largo del plano 3-3.
Las figuras 4a-4d,
5a-5c, 6a-6c, 7a-7c,
8a-8c, 9a, 9b, 10a, 10b, 11a y 11b representan
diferentes configuraciones para la capa de soporte superior y la
membrana de reacción.
La figura 12 representa un esquema de
fabricación para el dispositivo analítico.
La presente invención proporciona un dispositivo
analítico de fabricación sencilla y fácil para su uso en ensayos
analíticos sensibles para la detección de una sustancia diana que
puede unirse en una muestra líquida que contiene posiblemente la
sustancia diana. Se utiliza un adhesivo insoluble en agua para
adherir una membrana de reacción que tiene un receptor unido sobre
ella que puede unirse a la sustancia diana, y un cuerpo absorbente,
a una capa de soporte superior impermeable a los líquidos. El uso
de un adhesivo insoluble en agua, no sólo sirve para el fin de
mantener el dispositivo junto estructuralmente, sino que también
forma un sellado impermeable a los líquidos que evita el flujo
lateral de la muestra líquida a través de la superficie de membrana,
hasta el punto de que fuerza al flujo descendente de la muestra a
través la membrana y hacia el material absorbente. Este tipo de
sellado entre la membrana y la capa de soporte superior impermeable
a los líquidos también puede ralentizar la velocidad de flujo de la
muestra que fluye lateralmente a través de la membrana, aumentando
así el tiempo de reacción entre la sustancia diana y el receptor,
dando como resultado un aumento en la sensibilidad.
Los dispositivos analíticos de la técnica
anterior a menudo comprenden elementos de alojamiento superior e
inferior ajustados que se unen entre sí bajo compresión,
manteniendo así la membrana en su sitio entre el orificio abierto y
el material absorbente. Ejemplos de este tipo de dispositivo
analítico se facilitan en la patente estadounidense número
4.632.901, y en la patente estadounidense número 5.185.127. Aunque
tales elementos de alojamiento ajustados pueden utilizarse en la
práctica de la presente invención, el uso de un adhesivo insoluble
en agua para formar una protección impermeable a los líquidos hace
innecesario el uso de los elementos de alojamiento ajustados. En
otro tipo de dispositivo analítico, aunque no utiliza elementos de
alojamiento ajustados, las capas de soporte superior e inferior se
termosellan juntas, lo que produce la compresión suficiente para
mantener la membrana de reacción en su sitio entre el orificio
abierto y el material absorbente. Un ejemplo de este tipo de
dispositivo se muestra en la patente estadounidense número
4.818.677. De nuevo, aunque este tipo de dispositivo puede usarse
para poner en práctica la presente invención, el uso de un adhesivo
insoluble en agua hace que esto sea innecesario.
Una ventaja de no utilizar compresión para
mantener la membrana de reacción en su sitio entre el orificio
abierto y el material absorbente es que la superficie superior de
la membrana de reacción permanece relativamente plana una vez
montado el dispositivo analítico. Por tanto, con el uso, cuando se
añade la muestra a la membrana de reacción, es más probable que la
muestra cubra uniformemente la totalidad de la superficie expuesta
de la membrana de reacción. Por tanto, si hay dos o más regiones de
receptor inmovilizado sobre la membrana, pasará aproximadamente el
mismo volumen de muestra a través de cada zona del receptor. Por el
contrario, el uso de compresión para formar un sellado impermeable
a los líquidos entre el borde del orificio abierto y la membrana de
reacción, puede hacer que la superficie superior de la membrana de
reacción se vuelva ligeramente cóncava o con forma de cúpula. Por
tanto, cuando se añade la muestra a la membrana de reacción, puede
que no cubra uniformemente la totalidad de la superficie de la
membrana de reacción. Esto puede hacer que el dispositivo sea menos
adecuado para algunos inmunoensayos en los que son necesarios
resultados cuantitativos.
El dispositivo analítico es de construcción
sencilla y puede obtenerse utilizando materiales fácilmente
disponibles. En referencia a la figura 1, el dispositivo analítico
comprende una capa (10) de soporte impermeable a los líquidos que
define un borde (12) alrededor de un orificio (11) abierto. Una
membrana (13) de reacción porosa está situada por debajo de la capa
de soporte superior de manera que, una vez montado el dispositivo,
se define un pocillo de recepción de muestra por la superficie (14)
superior expuesta de la membrana de reacción y el borde (12)
alrededor del orificio (11) abierto. Un cuerpo (15) absorbente está
situado por debajo de la membrana de reacción. El dispositivo puede
comprender además una capa (16) de soporte inferior impermeable a
los líquidos que tiene una superficie superior en contacto con la
superficie inferior del cuerpo absorbente.
La capa de soporte superior puede formarse a
partir de cualquier material impermeable al agua tal como metal,
plástico o cerámica. Incluso puede usarse papel que se vuelva
impermeable al agua (por ejemplo, papel aceitoso). Los plásticos
flexibles son particularmente útiles porque son económicos, fáciles
de manejar y proporcionan suficiente soporte para la membrana de
reacción y el cuerpo absorbente. Adicionalmente, el plástico
flexible puede cortarse o perforarse fácilmente para formar el
orificio abierto. Los plásticos adecuados incluyen nylon, Mylar,
hojas acrílicas, hojas de poliéster, hojas de polivinilo, etc.
En la realización más sencilla de la invención,
un único orificio abierto circular está cortado en la capa de
soporte superior, tal como se representa en las figuras 1, 2, 4a, y
5a, sin embargo el orificio abierto puede ser de cualquier otra
forma adecuada. Además, una única capa de soporte superior puede
tener más de un orificio abierto, de manera que se formen múltiples
pocillos de recepción de muestra en el montaje. Esto permite que se
utilice un único dispositivo analítico para someter a prueba
múltiples analitos en una única muestra y/o en múltiples muestras.
Por tanto, se apreciará
que la configuración del/de los orificio(s) abierto(s) puede variar dependiendo del uso deseado del dispositivo analítico.
que la configuración del/de los orificio(s) abierto(s) puede variar dependiendo del uso deseado del dispositivo analítico.
La membrana de reacción porosa está sellada a la
superficie inferior de la capa de soporte superior de manera que
el borde que rodea al orificio abierto y la superficie superior
expuesta de la membrana de reacción define un pocillo de recepción
de muestra. Por tanto, en referencia a la figura 2 que representa
una realización del dispositivo analítico tras el montaje, una
parte de la superficie (14) superior de la membrana de reacción
está expuesta de manera que, cuando se realiza el ensayo analítico,
la muestra que va a someterse a prueba y los reactivos del ensayo
pueden añadirse directamente a la membrana de reacción. La membrana
de reacción está dimensionada para cubrir completamente el orificio
abierto. Preferiblemente, la membrana de reacción será de la misma
forma que el orificio abierto y de tamaño sólo ligeramente mayor
que el orificio abierto, de manera que pueda sellarse a la
superficie inferior de la capa de soporte superior en la periferia
del orificio abierto. Sin embargo, la forma de la membrana de
reacción y la forma del orificio abierto pueden diferir tal como se
muestra en las figuras 4 y 6-8.
Las figuras 4 a 11 muestran algunas de las
infinitas configuraciones posibles para el orificio (11) abierto de
la capa (10) de soporte superior y la superficie (14) superior de
la membrana (13) de reacción. En la realización más sencilla, en
referencia a las figuras 4a y 4c, la capa de soporte superior tiene
un orificio abierto circular y la membrana de reacción también es
circular. Sin embargo, tal como se muestra en la figura 4c, la
membrana de reacción no tiene que ser de la misma forma que el
orificio abierto. El punto (22) mayor en el centro de la membrana
de reacción representa la ubicación en la que está inmovilizado el
receptor, y el punto (23) menor representa donde está ubicada una
sustancia control. Las formas y los tamaños relativos de las zonas
del receptor y el control no son importantes, siempre que puedan
distinguirse unas de otras. En lugar de utilizar diferentes tamaños
de puntos de receptor y control, marcadores de posición en la
superficie de la capa de soporte superior pueden llevar esto a
cabo. En algunas situaciones, puede que no sea necesario tener una
zona de control en la membrana de reacción. Por tanto, puede ser
conveniente tener el receptor inmovilizado en la totalidad de la
superficie expuesta de la membrana de reacción. Esto se representa
en la figura 4d, en la que el círculo interno representa la parte
expuesta de la superficie superior de la membrana de reacción, y la
zona no sombreada fuera del círculo interno representa la parte no
expuesta de la membrana de reacción que está adherida a la
superficie inferior de la capa de soporte superior.
Aunque los puntos son la configuración más
sencilla para inmovilizar el receptor y/o los controles, ya que
pueden formarse añadiendo simplemente gotas de reactivos control
y/o receptor a la(s) superficie(s) de la(s)
membrana(s), también pueden usarse otras formas. Por
ejemplo, en la patente estadounidense número 4.916.056, la zona del
receptor forma una barra, y el control negativo forma una barra que
cruza la barra del receptor, de manera que una vez realizado el
inmunoensayo, un signo "menos" indica la ausencia de sustancia
diana en la muestra sometida a prueba y un signo "positivo"
indica la presencia de sustancia diana en la muestra. La figura 11b
representa una membrana de muestra que tiene múltiples receptores
inmovilizados en la forma de barras paralelas.
Tal como se trató anteriormente, pueden formarse
múltiples pocillos de recepción de muestra tal como se representa
en las figuras 8, 9 y 10, de manera que una única muestra puede
someterse a prueba para detectar más de una sustancia diana,
mediante la inoculación de una parte de la muestra en cada pocillo
de recepción de muestra y la realización de un ensayo separado para
cada sustancia diana. Alternativamente, puede usarse un único
dispositivo analítico con más de un pocillo de recepción de muestra
para someter a prueba la presencia de la misma sustancia diana en
muestras diferentes. Una membrana separada puede colocarse por
debajo de cada orificio abierto, tal como se representa en las
figuras 8b, 9b, y 10b. Alternativamente, puede usarse una única
membrana de reacción, con múltiples zonas de receptor y control,
tal como se representa en la figura 8c.
En algunos inmunoensayos, puede llevarse a cabo
un procedimiento de ensayo para someter a prueba los múltiples
analitos presentes en una única muestra, de manera que sólo es
necesario un pocillo de recepción de muestra. Las figuras 5, 6, 7 y
11 representan realizaciones del dispositivo analítico que puede
utilizarse en un inmunoensayo de este tipo.
La altura del borde del pocillo de recepción de
muestra puede aumentarse, con el fin de aumentar la capacidad del
pocillo de recepción de muestra o reducir la posibilidad de
derramamiento de la muestra. Esto puede realizarse simplemente
aumentando el espesor de la capa de soporte superior, o uniendo un
elemento (17) que define un depósito, tal como se representa en las
figuras 2 y 3, a la superficie superior de la capa de soporte
superior. El elemento que define un depósito está formado de
cualquier material impermeable al agua que puede ser igual o
diferente del material utilizado para formar la capa de soporte
superior. Tiene un orificio abierto que tiene el mismo diámetro y
la misma forma que el orificio abierto de la capa de soporte
superior. En referencia a la figura 3, el orificio abierto del
elemento que define un depósito y el orificio abierto de la capa de
soporte superior están acoplados para definir un borde (18) del
pocillo de recepción de muestra.
Para la membrana de reacción puede utilizarse
cualquier material poroso adecuado que pueda inmovilizar el
reactivo de receptor empleado en el ensayo analítico. Los
materiales adecuados incluyen nitrocelulosa, fibra de vidrio,
poliéster, nitrato de celulosa, poliéster, policarbono, nylon, y
otros materiales naturales y sintéticos que pueden acoplarse
directa o indirectamente al receptor seleccionado. Normalmente, la
membrana comprenderá cargas positivas y/o negativas que permiten
que se una la molécula de receptor. Algunos materiales de la
membrana están cargados, tal como el nitrato de celulosa que tiene
cargas negativas parciales a las que contribuyen los grupos nitro.
Pueden pretratarse otros materiales para proporcionar una membrana
cargada. Por ejemplo, el poliéster puede derivatizarse con grupos
carboxilo o amino para proporcionar una membrana cargada o bien
negativa o bien positivamente. El nylon puede tratarse con ácido
para romper los enlaces peptídicos para proporcionar cargas
positivas (a partir de los grupos amina) y cargas negativas (a
partir de los grupos carboxilo).
La expresión "membrana de reacción"
pretende incluir el material poroso al que se une el reactivo de
receptor empleado en el ensayo analítico así como material de
soporte poroso adicional, si lo hay, que forma la superficie
inferior de la membrana de reacción. Por ejemplo, una membrana de
reacción preferida comprende una hoja de nitrocelulosa reforzada
con un papel poroso. Además también puede usarse nitrocelulosa
soportada por poliéster poroso comercialmente disponible. Un
ejemplo representativo de nitrocelulosa reforzada con papel está
comercialmente disponible de EY Laboratories Inc. (San Mateo, CA;
números de catálogo PBNC15-1,
PBNC15-10, PBNC15M-1, y
PBNC15M-10). Esta membrana preferida es
sustancialmente más duradera que la nitrocelulosa sola y puede
emplearse sin ningún otro componente de soporte. Esto permite el
montaje del dispositivo y el maneo más fácil. Adicionalmente, se ha
encontrado que los dispositivos analíticos que emplean
nitrocelulosa reforzada con papel para la membrana de reacción
tienen un aumento de la sensibilidad en determinados
inmunoensayos.
La porosidad de la membrana tiene una gran
influencia sobre la velocidad de flujo del líquido y la
sensibilidad del ensayo. Cuanto mayor es el tamaño de poro de la
membrana, mayor es la velocidad de flujo para un líquido dado.
Cuando la velocidad de flujo aumenta, el tiempo de interacción
disponible entre la molécula diana en la muestra y el receptor
inmovilizado en la membrana de reacción disminuye, disminuyendo así
la sensibilidad del ensayo. Adicionalmente, los tamaños de poro más
grandes proporcionan menos área superficial para inmovilizar la
molécula de receptor, que es otro parámetro atribuible a la
disminución de la sensibilidad del ensayo. Para la mayor parte de
los ensayos, la porosidad de la membrana está preferiblemente en el
intervalo de 0,1 a 12 \mum y más preferiblemente, de 0,45 a 3
\mum.
El poder de drenaje de la membrana puede afectar
a la sensibilidad del ensayo y depende del espesor y de la
naturaleza del material de la membrana. El poder de drenaje puede
medirse como la migración de una disolución patrón a través de una
distancia determinada por unidad de tiempo. Frecuentemente, la
sensibilidad del ensayo puede aumentarse seleccionando una membrana
que tiene un poder de drenaje relativamente bajo.
En referencia a la figura 3, la superficie
superior no expuesta de la membrana de reacción está sellada a la
superficie inferior de la capa de soporte superior con un adhesivo
(19) insoluble en agua, de manera que se forme un sellado
impermeable a los líquidos entre el borde (12) de la capa de
soporte superior alrededor del orificio abierto y la superficie
(14) superior no expuesta de la membrana de reacción. La expresión
"sellado impermeable a los líquidos" significa que cuando la
muestra y los reactivos posteriores se añaden al pocillo de
recepción de muestra, el líquido tiende a fluir a través de la
membrana de reacción hacia el cuerpo absorbente por debajo, en
lugar de lateralmente a través de la membrana hacia la superficie
superior no expuesta de la membrana de reacción. El sellado
impermeable a los líquidos minimiza así el flujo lateral de la
muestra a través de la membrana. Por tanto, se evita la necesidad
de utilizar compresión entre la membrana y el cuerpo absorbente
para forzar el flujo descendente de la muestra a través de la
membrana y hacia el cuerpo absorbente. El flujo descendente de la
muestra ayuda a concentrar la muestra a través del centro de la
membrana de reacción donde normalmente se inmoviliza al receptor
una vez montado el aparato analítico. Además, se ralentiza la
velocidad de flujo a través de la membrana, lo que aumenta la
cantidad de tiempo en que la sustancia diana, si está presente en
la muestra, está en contacto con el receptor. Esto proporciona un
aumento de la sensibilidad del inmunoensayo que emplea el
dispositivo analítico.
En la presente invención puede utilizarse
cualquier adhesivo insoluble en agua, siempre que pueda formar un
sellado impermeable a los líquidos entre el borde del pocillo de
recepción de muestra y la periferia no expuesta de la superficie
superior de la membrana de reacción. Debido a su facilidad de
manejo, se prefieren los adhesivos sensibles a la presión. Un
adhesivo sensible a la presión recubierto sobre una superficie
puede formar una superficie de película adhesiva permanente que,
bajo una ligera presión, se adhiere inmediatamente a otras
superficies diversas a temperatura ambiente. La cinta adhesiva
doméstica y la cinta transparente de marca Scotch^{TM} son
ejemplos de productos que están hechos con adhesivos sensibles a la
presión. Ejemplos de adhesivos sensibles a la presión insolubles en
agua adecuados incluyen los basados en derivados de polivinilo o
poli(ácido acrílico), cauchos naturales o sintéticos, y
polisiloxanos. El tipo particular de adhesivo sensible a la presión
usado no es importante, excepto en que los diferentes adhesivos
pueden variar en coste, lo que hace que los adhesivos menos caros
sean los más preferibles. En la práctica de la presente invención
puede utilizarse cinta adhesiva por un lado, tal como la cinta
adhesiva doméstica o la cinta quirúrgica. El lado no adhesivo de la
cinta forma la superficie superior de la capa de soporte superior y
la membrana de reacción se adhiere al lado adhesivo. También pueden
usarse hojas de plástico transparente que tienen adhesivo sensible
a la presión recubierto en un lado.
Un cuerpo (15) absorbente está colocado proximal
a la superficie inferior de la membrana de reacción de manera que
esté en comunicación fluida con la membrana de reacción. Por tanto,
la superficie superior del cuerpo absorbente puede estar
inmediatamente adyacente a la superficie inferior de la membrana de
reacción. Alternativamente, puede haber una capa intermedia entre
la membrana de reacción y el cuerpo absorbente, siempre que la capa
intermedia permita la transferencia de líquido desde la membrana de
reacción hasta el cuerpo absorbente. Como ejemplo de capa
intermedia, puede insertarse un material poroso entre la membrana
de reacción y el cuerpo absorbente para proporcionar soporte
adicional para la membrana de reacción. Como otro ejemplo de una
capa intermedia, puede usarse un septo impermeable a los líquidos
que tiene aberturas en él para dirigir adicionalmente el flujo de
muestra a través del centro de la membrana de reacción. Tales
septos se describen en la patente estadounidense número 5.006.464.
En las realizaciones de la invención en las que se desea la
facilidad de fabricación y los costes reducidos, la superficie
superior del cuerpo absorbente normalmente está inmediatamente
adyacente a la superficie inferior de la membrana de reacción.
En la presente invención puede usarse cualquier
material absorbente empleado convencionalmente que pueda extraer o
drenar el líquido a través de una membrana porosa, tal como, por
ejemplo, mediante la acción de capilaridad. Materiales conocidos
útiles incluyen fibras de acetato de celulosa, poliéster,
poliolefina y otros materiales de este tipo. Además pueden usarse
capas de papel de filtro o papel tisú para baño comercialmente
disponible. El cuerpo absorbente proporciona un medio para recoger
la muestra proporcionando "succión" uniforme para suministrar
la muestra desde el pocillo, a través de la membrana de reacción, y
hacia el cuerpo absorbente. Por tanto, el cuerpo absorbente actúa
también como un depósito para mantener la muestra, y los diversos
reactivos que se utilizan cuando se realiza el ensayo. En
consecuencia, cuando se usa en ensayos en los que se utilizan
volúmenes relativamente grandes de líquido, el cuerpo absorbente
debe tener alta capacidad absorbente para evitar o minimizar la
posibilidad de flujo de retorno de la muestra y los reactivos desde
el cuerpo absorbente de nuevo hacia la membrana de reacción.
Como con la membrana de reacción, el poder de
drenaje del cuerpo absorbente puede ser un parámetro importante. El
tiempo de drenaje se define en cuanto al tiempo requerido para que
el agua recorra una distancia definida (7,5 cm) a través del papel
absorbente y se refiere al gramaje, el espesor y la composición del
papel. El poder de drenaje puede variar enormemente de un material
al siguiente. Por tanto, las propiedades del dispositivo analítico y
la velocidad de flujo de la muestra y los reactivos pueden
modificarse variando el material absorbente utilizado.
El área superficial de la superficie superior
del cuerpo absorbente normalmente será mayor que la de la membrana
de reacción, de manera que la superficie superior del cuerpo
absorbente puede unirse a la superficie inferior de la capa de
soporte superior. Normalmente, el mismo adhesivo insoluble en agua
usado para adherir la membrana de reacción a la capa de soporte
superior se utiliza también para adherir el cuerpo absorbente a la
capa de soporte superior. El adhesivo insoluble en agua mantiene la
estructura junta con una presión de compresión mínima sobre el
cuerpo absorbente y la membrana de reacción, evitando así los
efectos de la presión de compresión ya mencionados.
En referencia de nuevo a la membrana de
reacción, además de su porosidad, su diámetro y su espesor pueden
afectar a la sensibilidad del ensayo. Preferiblemente, la membrana
de reacción tiene un área superficial que es sólo ligeramente
mayor que el orificio abierto de la capa de soporte superior, de
manera que la superficie no expuesta de la membrana de reacción
tiene un diámetro promedio inferior a 8 mm, preferiblemente,
inferior a 3 mm, en el que, en referencia a la figura 3, el
diámetro de la zona no expuesta es la distancia desde la superficie
expuesta de la membrana de reacción hasta la pared (20) lateral de
la membrana de reacción.
El espesor de la membrana de reacción (es decir,
la "pared (20) lateral", que es la distancia entre la
superficie superior y la inferior de la membrana de reacción) puede
variar dependiendo de las características de flujo necesarias para
un inmunoensayo dado. Normalmente, el espesor oscilará desde 0,05
mm hasta 3,0 mm, y más comúnmente desde 0,1 hasta 1,0 mm. Con
algunos inmunoensayos, se ha encontrado que cuando el espesor de la
membrana de reacción es mayor de aproximadamente 0,1 mm, y
preferiblemente, en el intervalo de 0,2 mm a 1,0 mm, puede lograrse
una mayor sensibilidad. Cuando se utiliza una membrana de reacción
suficientemente espesa, se forma una bolsa (21) de aire por la
superficie inferior de la capa de soporte superior, la pared
lateral de la membrana de reacción, y la superficie superior del
cuerpo absorbente. Se cree que se logra el aumento de la
sensibilidad porque no hay ningún material absorbente
inmediatamente adyacente a la pared lateral de la membrana de
reacción, que tendería a extraer la muestra añadida hacia fuera
desde el centro de la membrana. Por tanto, la bolsa de aire
facilita adicionalmente el flujo descendente de la muestra añadida
a través de la membrana de reacción. Adicionalmente, una membrana
de reacción más espesa puede permitir que esté disponible más
receptor para unirse a la sustancia diana, proporcionándose así un
aumento adicional en la sensibilidad del ensayo. Se cree que los
dispositivos de la técnica anterior que tienen membranas de
reacción relativamente delgadas, tales como membranas de
nitrocelulosa inferiores a 0,1 mm de espesor que no están
reforzadas con papel, tienden da permitir que la muestra fluya
hacia los lados a través de la membrana de reacción, en lugar de
hacia abajo a través de la parte media de la membrana de reacción.
Esto puede ser particularmente cierto con los dispositivos
mantenidos juntos bajo compresión y en los que la membrana de
reacción tiene menos área superficial que el cuerpo absorbente
subyacente, de manera que no se logra una bolsa de aire que aumenta
la sensibilidad y el material absorbente entra en contacto con la
pared lateral de la membrana de reacción, facilitando así el flujo
hacia los lados de la muestra a través de la membrana de reacción y
hacia el material absorbente.
El dispositivo analítico de la presente
invención comprende además una capa (16) de soporte inferior
impermeable a los líquidos que está unida a la superficie inferior
del cuerpo absorbente. La capa de soporte inferior está constituida
normalmente por el mismo material que la capa de soporte superior,
aunque puede ser diferente. Tal como ya se ha observado, los
dispositivos analíticos típicos de la técnica anterior comprenden
elementos de alojamiento superior e inferior que se ajustan entre
sí, de manera que mantengan la membrana de reacción y el cuerpo
absorbente en su sitio utilizando compresión. Dado que la membrana
de reacción y el cuerpo absorbente del dispositivo analítico de la
presente invención están adheridos a la capa de soporte superior
usando cola insoluble en agua, no hay necesidad de utilizar
compresión para mantenerlos juntos. Por tanto, no hay necesidad de
utilizar elementos de alojamiento superior e inferior ajustados, o
sellados de otro modo, aunque los elementos de alojamiento
ajustados o sellados podrían servir como las capas de soporte
superior e inferior del dispositivo analítico de la presente
invención si se desea. En una realización de la invención, las
capas de soporte superior e inferior no están ajustadas entre sí y
no están en contacto entre sí, de manera que cada lado del
dispositivo analítico está "abierto" y los lados del cuerpo
absorbente son visibles. Esto se muestra en la figura 2, en la que
el cuerpo (15) absorbente es visible en los lados del dispositivo
analítico.
Debido a que el diseño del dispositivo analítico
es relativamente sencillo en comparación con el de los
dispositivos de la técnica anterior, el coste del material es
inferior y el proceso de fabricación es más fácil. Pueden
prepararse simultáneamente múltiples dispositivos analíticos.
Por ejemplo, si se utiliza plástico flexible
para formar la capa de soporte superior, puede obtenerse una tira
del plástico que sea suficientemente larga como para formar el
número deseado de dispositivos. Por ejemplo, puede obtenerse una
tira lo suficientemente larga como para formar 5 capas de soporte.
A continuación, se cortarían 5 agujeros separados uniformemente en
el plástico. La capa de soporte superior puede adquirirse con
adhesivo soluble en agua ya adherido a la superficie inferior, o el
adhesivo puede aplicarse durante el proceso de fabricación. Más
convenientemente, el adhesivo se aplicará a la totalidad de la
superficie inferior de la capa de soporte superior.
Alternativamente, el adhesivo puede aplicarse sólo alrededor del
orificio abierto de la capa de soporte superior y alrededor del
perímetro de la superficie inferior de la capa de soporte superior,
de manera que la membrana de reacción y el cuerpo absorbente puedan
adherirse a ella.
Continuando con este ejemplo, se colocarían 5
membranas de reacción precortadas sobre el orificio abierto.
Entonces se adheriría una tira de material absorbente a la
superficie inferior expuesta de la capa de soporte superior,
formando el cuerpo absorbente. Finalmente, si va a utilizarse una
capa de soporte inferior, el material utilizado para formar la capa
de soporte inferior se adheriría a la superficie inferior del
cuerpo absorbente, preferiblemente, con un adhesivo insoluble en
agua. Finalmente, la tira montada se cortaría de manera que se
formen 5 dispositivos analíticos individuales.
Como variación al método de fabricación
anterior, el material usado para formar las capas de soporte
inferiores podría tener adhesivos aplicados sobre el mismo. A
continuación, podría unirse el material que forma los cuerpos
absorbentes. Podría prepararse una tira separada que comprende el
material que forma las capas de soporte superiores y las membranas
de reacción. El material para las capas de soporte superiores
tendría agujeros precortados para el orificio abierto, y adhesivo
insoluble en agua aplicado a la superficie inferior del material de
la capa de soporte superior. Las membranas de reacción podrían
colocarse entonces sobre los orificios abiertos y adherirse a la
superficie inferior del material de soporte superior mediante el
adhesivo. La tira de material absorbente y el material de soporte
inferior podrían unirse entonces a la superficie inferior de la
capa de soporte superior/tira de membrana de reacción. El material
laminado montado se cortaría entonces en dispositivos analíticos
individuales. Naturalmente, un experto en la técnica apreciará que
hay muchas formas diferentes en que podrían montarse los
dispositivos. Por ejemplo, en lugar de utilizar las tiras, cuando
se monta simultáneamente una fila de dispositivos analíticos,
podrían usarse grandes cuadrados de material, de manera que se
preparen simultáneamente las filas y las columnas de los
dispositivos analíticos y después se corten posteriormente en
dispositivos individuales.
El diseño sencillo del dispositivo analítico
hace que sea posible utilizar rodillos para el montaje, tal como se
muestra en la figura 12. El material que forma la capa de soporte
superior flexible que tiene adhesivo sensible a la presión
recubierto en un lado y agujeros precortados (para el pocillo de
recepción de muestra) está en un rodillo (101). El siguiente
rodillo (102) contiene el material para la membrana de reacción,
precortado a una anchura adecuada. Hay un tercer rodillo (103) para
el material que forma el cuerpo absorbente, y hay un cuarto rodillo
(104) para el material que forma la capa de soporte inferior, que
también tiene un adhesivo sensible a la presión recubierto en un
lado. Los diversos componentes se montan juntos utilizando una
prensa (105) de rodillos. Una vez unidos los cuatro componentes, la
capa de soporte superior puede etiquetarse con un dispositivo (106)
de etiquetado o de código de barras para indicar el tipo de prueba
para el que va a utilizarse el dispositivo. Un inoculador (107)
puede inocular a la membrana de reacción del dispositivo analítico
montado el receptor apropiado. Finalmente, un dispositivo (108) de
corte puede cortar dispositivos analíticos individuales. Durante el
montaje o tras el corte pueden producirse otras modificaciones o
tratamientos para el dispositivo analítico, que no están
representadas en la figura 12. Por ejemplo, las membranas de
reacción de los dispositivos analíticos pueden someterse entonces a
tratamientos adicionales, tales como etapas de bloqueo. Finalmente,
se seguirían diversos procedimientos de control de calidad antes de
envasar los dispositivos hasta que estén listos para su uso.
El receptor, en el caso de los inmunoensayos,
puede unirse específicamente a la sustancia diana en una muestra
biológica, tal como orina, sangre, o saliva. Un experto habitual en
la técnica apreciará que la expresión "unión específica" se
refiere a unir juntas las sustancias que se ajustan entre sí, tal
como un antígeno y un anticuerpo dirigido al mismo. Además, se
apreciará que el término "receptor", dependiendo del contexto,
puede referirse a una única molécula que puede unirse
específicamente a una sustancia diana que puede estar presente en
una muestra líquida. Sin embargo, el término también puede
referirse a un número o concentración suficiente de moléculas de
receptor necesario para lograr la detección de la sustancia diana.
Cuando la molécula diana es un anticuerpo particular, el receptor
será un antígeno para el que el anticuerpo es específico. Por
tanto, tal como se usa en el presente documento, el término
"antígeno" se refiere a cualquier sustancia que puede provocar
una respuesta inmunitaria e incluye, pero sin limitarse a,
antígenos frente al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH),
antígenos frente al virus de la hepatitis (VHC, VHB, VHA),
Toxoplasmosis gondii, citomegalovirus, Helicobacter
pylori, rubéola, y similares. En algunos casos, la molécula
diana será un antígeno, y el receptor será un anticuerpo que se une
específicamente al antígeno. El receptor puede aplicarse a la
membrana de reacción directamente, y llegar a inmovilizarse en la
misma, o recubrirse en micropartículas, tales como perlas de látex,
que quedan atrapadas entonces por la membrana de reacción. En la
técnica se conocen métodos adecuados para aplicar el receptor a la
membrana de reacción.
Además del receptor, una zona definida de la
membrana de reacción expuesta puede contener además una molécula de
control. Por ejemplo, la proteína A puede utilizarse como un
control adecuado para determinar si el inmunoensayo se ha realizado
apropiadamente. El uso de la proteína A como control se describe en
la patente estadounidense número 5.541.059. En la técnica se
conocen bien otros controles adecuados.
Tal como se observó anteriormente, el receptor
y, si se usan, los controles, se aplican normalmente sólo a
regiones definidas de la superficie de membrana expuesta. El
receptor se inoculará a menudo sobre el centro de la membrana de
reacción de manera que el perímetro de la superficie expuesta de la
membrana de reacción no tendrá molécula de receptor sobre ella. Sin
embargo, en algunas situaciones, puede ser apropiado cubrir toda la
superficie expuesta de la membrana de reacción con el receptor. Si
se inocula el receptor sobre una región limitada de la superficie
de membrana expuesta, la membrana de reacción puede tratarse con
una composición de bloqueo que evita que la sustancia diana y otros
componentes de la muestra se unan de manera no específica a la
membrana de reacción. Para ensayos en los que la unión no
específica no es un problema, la etapa de bloqueo puede ser
innecesaria. Además, el uso de una nitrocelulosa reforzada con
papel de buena calidad puede hacer que la etapa de bloqueo sea
innecesaria en algunos ensayos. Si se necesita una etapa de
bloqueo, una composición de bloqueo común comprende albúmina sérica
bovina (BSA) y/o detergentes de solubilización de proteínas tales
como los descritos normalmente en catálogos químicos (por ejemplo,
VWR Scientific Inc., Filadelfia, PA). El BSA se usa normalmente en
cantidades de desde aproximadamente el 1 hasta el 10% y los
detergentes se usan normalmente en cantidades de desde
aproximadamente el 0,01 hasta aproximadamente el 5%. Detergentes
adecuados incluyen derivados de polioxietilensorbitano y éteres de
polioxietileno. Un derivado de polioxietilensorbitano adecuado es
el monolaurato de polioxietilensorbitano (20) (vendido como TWEEN
20 por ICI Americas, Inc.). Éteres de polioxietileno adecuados
incluyen los vendidos con el nombre comercial TRITON por Rohm &
Haas, tales como TRITON X-100.
El tratamiento de bloqueo de membrana se produce
normalmente después de que ya se haya montado el dispositivo
analítico y se haya inmovilizado el receptor a la membrana de
reacción. Se aplicará una cantidad suficiente de composición de
bloqueo para cubrir la superficie expuesta de la membrana de
reacción al pocillo de reacción. Si el pocillo de reacción tiene un
diámetro de 1 cm, aproximadamente 50 \mul de la composición de
bloqueo deberán ser suficientes. Tras secarse la composición de
bloqueo, el dispositivo analítico está listo para su uso. El
dispositivo analítico puede envasarse hasta que esté listo para su
uso.
Los inmunoensayos que utilizan el dispositivo
analítico de la presente invención pueden ser muy sencillos y
rápidos, pueden ser cualitativos o cuantitativos. Pueden realizarse
muchos tipos diferentes de inmunoensayos, conocidos en la técnica,
usando estos dispositivos analíticos. Los dispositivos analíticos
pueden adaptarse para su uso en muchos tipos diferentes de ensayos.
Por ejemplo, la sustancia diana puede ser una hormona, anticuerpo,
antígeno, proteína, etc. Una lista no exhaustiva de posibles
sustancias dianas se proporciona en la patente estadounidense
número 5.006.464. El formato del inmunoensayo dependerá de la
sustancia diana que se busca detectar. De nuevo, esto ya se conoce
en la técnica.
Se apreciará que con el fin de maximizar la
sensibilidad para la detección de una sustancia diana particular,
puede modificarse diversos componentes del dispositivo analítico
y/o procedimiento de ensayo, tales como la porosidad, espesor y
tipo de material usado para la membrana de reacción. Las
disoluciones de bloqueo y lavado y los reactivos de receptor y
detección (por ejemplo, anticuerpo o proteína A marcada con
marcadores detectables tales como enzimas, oro coloidal, marcadores
fluorescentes, marcadores quimioluminiscentes, marcadores
bioluminiscentes, etc.) también afectarán a la sensibilidad del
ensayo. Los dispositivos analíticos pueden usarse en ensayos que
requieren de poca a ninguna manipulación de la muestra y pueden
realizarse en menos de 1 minuto.
Los siguientes ejemplos y dibujos son sólo para
fines ilustrativos.
Este ejemplo demuestra que los dispositivos
analíticos pueden prepararse a partir de materiales fácilmente
disponibles. Se obtienen hojas de plástico con adhesivo sensible a
la presión recubierto sobre un lado (Cleer-Adheer®
preparado por C-LINE Products, Inc.) de una tienda
de artículos de papelería y se cortan en cuadrados de 1'' x 1''
para formar las capas de soporte superiores del dispositivo
analítico. Se corta un agujero de 1/8'' en el medio de cada
cuadrado usando una perforadora. Se corta el material de membrana
de reacción, que también puede obtenerse de una tienda de artículos
de papelería (por ejemplo, papel de celulosa tal como toallas de
papel domésticas ordinarias, hojas de nylon porosas, papel de
acetato de celulosa poroso, papel de de transferencia de tinta o
cualquier otro material con buena calidad de filtración), en
círculos de ¼'' usando una perforadora de ¼''. Se adhiere el
círculo de membrana de reacción al lado adhesivo de la capa de
soporte superior para cubrir el agujero de 1/8''. Se obtiene
material absorbente que tiene un espesor adecuado y se corta en
cuadrados de 1'' x 1'' y se adhiere al lado adhesivo de la capa de
soporte superior para formar el cuerpo absorbente. Se prepara una
capa de soporte inferior a partir del mismo plástico recubierto con
adhesivo sensible a la presión que se usa para la capa de soporte
superior y se adhiere a la superficie inferior del cuerpo
absorbente.
Se prepararon dispositivos analíticos usando los
siguientes componentes y se montaron tal como se muestra en las
figuras 1-3: se cortaron capas de soporte superiores
que medían 3,8 cm cuadrados a partir de plásticos de
poli(cloruro de vinilo) flexibles, pero rígidos (tienda al
por menor Tap Plastics) que tenían un adhesivo sensible a la
presión, insoluble en agua, sobre un lado. Se perforaron agujeros
de 8 mm de diámetro en el centro de las capas de soporte
superiores. Se perforaron membranas de reacción circulares, de 11
mm de diámetro, a partir de nitrocelulosa reforzada con papel que
tiene un espesor de aproximadamente 0,8 mm (EY Laboratories Inc.
número de catálogo PBNC15-1) y se adhirieron a la
capa de soporte superior de manera que se cubrió el agujero. Se
adhirió un cuerpo absorbente compuesto por 3,8 cm cuadrados de
material absorbente (de Whatman, número de catálogo
F427-05) al lado adhesivo de la capa de soporte
superior. Se adhirió una capa de soporte inferior, que medía 3,8 cm
cuadrados y comprendía el mismo material plástico y adhesivo que la
capa de soporte superior, a la superficie inferior del cuerpo
absorbente. Se colocó un elemento que define un depósito, que
comprendía el mismo material plástico material y adhesivo que la
capa de soporte superior, que medía aproximadamente 3,8 cm x 1,5
cm, y que tenía un agujero de 8 mm de diámetro perforado en el
centro, sobre la parte superior de la capa de soporte superior tal
como se muestra en la figura 2.
Se preparó una disolución 1 mg/ml de IgG de
conejo (EY número de catálogo AF541-1) en solución
salina tamponada con fosfato (0,05 M pH 7,4) que contenía albúmina
sérica bovina al 1% (diluyente PBS/BSA). Se colocó una gota de ½
\mul sobre el centro de la superficie expuesta de la membrana de
reacción. No hubo tratamiento adicional de la membrana de reacción
(por ejemplo, tratamiento bloqueante). Se dejó que se secase la
disolución de IgG. Se preparó una disolución 6 \mug/ml de
proteína A/oro coloidal (disponible de
EY-Laboratories Inc, número de catálogo
GP-01, GP-01-100, o
FC-PRO-5) en Tween 20 al 0,5% y se
añadieron 50 \mul a la membrana de reacción. Apareció un punto de
color púrpura-rojo donde se había colocado la IgG.
El resto de la membrana de reacción permaneció blanco. Esto
demuestra que el dispositivo analítico puede usarse para detectar
bajas concentraciones de IgG.
La disolución de IgG puede diluirse en serie y
colocarse cada dilución sobre la membrana de un dispositivo
analítico. Puede generarse una curva patrón y puede determinarse el
punto final de la detección del ensayo descrito anteriormente
realizando las etapas del ensayo y determinando la concentración
inferior de IgG que puede visualizarse. Pueden someterse a prueba
muestras que contienen cantidades desconocidas de IgG tal como
anteriormente, y puede compararse la intensidad del punto
rojo-púrpura resultante (si lo hay) con la curva
patrón para obtener resultados
semi-cuantitativos.
Se montaron dispositivos analíticos tal como se
describió en el ejemplo 2. Se inocularon las membranas de reacción
de cada dispositivo con 0,5 \mul de 1 mg/ml de disolución de
proteína A. Se prepararon diluciones en serie de una concentración
conocida de suero humano normal en el diluyente de PBS/BSA descrito
en el ejemplo 2. Se añadió una gota de 80 \mul de cada dilución de
suero humano a la membrana de reacción y se dejó que se absorbiese
completamente. Se añadió una gota de 80 \mul de la disolución de
proteína A/oro coloidal descrita en el ejemplo 2 a la membrana de
reacción y se dejó que se absorbiese completamente. Se añadió agua
destilada (120 \mul) a la membrana de reacción para lavar los
reactivos no unidos a través de la membrana. Al final del ensayo,
un punto púrpura-rojo fue visible sobre el
dispositivo analítico que se usó para someter a prueba la presencia
de IgG en una dilución 1/1000 de suero humano normal, indicando que
IgG estaba presente y era detectable en la dilución usando el
dispositivo analítico y los procedimientos de ensayo
anteriores.
Claims (12)
1. Dispositivo analítico para su uso en ensayos
para la detección de una sustancia diana que puede unirse en una
muestra líquida que contiene posiblemente dicha sustancia diana,
que comprende:
(a) una capa (10) de soporte superior
impermeable a los líquidos que tiene una superficie superior y una
superficie inferior, definiendo dicha capa de soporte superior un
borde (12) alrededor de un orificio (11) abierto;
(b) una membrana (13) de reacción porosa que
tiene una superficie (14) superior y una superficie inferior
proximal a dicha capa de soporte superior, definiendo una parte de
dicha superficie superior de la membrana de reacción y dicho borde
un pocillo de recepción de muestra, estando dicha superficie
superior de la membrana de reacción sellada a la superficie
inferior de dicha capa de soporte superior mediante adhesivo (19)
insoluble en agua de manera que se forme un sellado impermeable a
los líquidos entre ellas, en el que dicho sellado impermeable a los
líquidos se mantiene en ausencia de compresión entre dicha capa de
soporte superior y dicha capa de soporte inferior;
(c) un cuerpo (15) absorbente que tiene una
superficie superior y una superficie inferior, en el que dicha
superficie superior de cuerpo absorbente es proximal a, y está en
comunicación fluida con, la superficie inferior de dicha membrana
de reacción; y
(d) una capa (16) de soporte inferior
impermeable a los líquidos que tiene una superficie superior que es
proximal a la superficie inferior de dicho cuerpo absorbente.
2. Dispositivo analítico según la reivindicación
1, en el que dicha superficie superior de dicho cuerpo absorbente
se extiende más allá de la periferia de dicha membrana de
reacción.
3. Dispositivo analítico según la reivindicación
1, en el que dicha capa de soporte superior y dicha capa de soporte
inferior no están ajustadas ni selladas entre sí.
4. Dispositivo analítico según la reivindicación
2, en el que dicha membrana de reacción tiene una pared (20)
lateral y en el que se forma una bolsa (21) de aire por la
superficie inferior de dicha capa de soporte superior, dicha pared
lateral de la membrana de reacción, y la superficie superior de
dicho cuerpo absorbente.
5. Dispositivo analítico según la reivindicación
2, en el que dicha pared lateral de dicha membrana de reacción
porosa tiene una altura de desde 0,2 hasta 1,0 mm.
6. Dispositivo analítico según la reivindicación
1, en el que dicho adhesivo insoluble en agua es sensible a la
presión.
7. Dispositivo analítico según la reivindicación
1, en el que dicha capa de soporte superior comprende un plástico
flexible.
8. Dispositivo analítico según la reivindicación
1 que comprende además un elemento (17) que define un depósito
unido a dicha superficie superior de dicha capa de soporte
superior.
9. Dispositivo analítico según la reivindicación
1, en el que dicha membrana de reacción comprende
nitrocelulosa.
10. Dispositivo analítico según la
reivindicación 9, en el que la superficie inferior de dicha
membrana de reacción comprende al menos un material de soporte
permeable a los líquidos unido en contacto íntimo con dicha
nitrocelulosa.
11. Dispositivo analítico según la
reivindicación 7, en el que dicho material de soporte se selecciona
del grupo que consiste en papel, fibra de vidrio y poliéster.
12. Dispositivo analítico según la
reivindicación 1, en el que una zona expuesta de dicha superficie
superior de dicha membrana de reacción tiene inmovilizado sobre
ella un receptor que puede unirse directa o indirectamente a dicha
sustancia diana que puede unirse, estando dicho receptor
inmovilizado concentrado en una región limitada de dicha zona
expuesta de dicha superficie superior.
l3. Dispositivo analítico según la
reivindicación 12, en el que dicho receptor es un antígeno o un
anticuerpo.
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