ES2272319T3

ES2272319T3 - Compuestos heterociclicos y metodos para modular la funcion de cxcr3.

Info

Publication number: ES2272319T3
Application number: ES00959489T
Authority: ES
Inventors: Thomas J. Schall; Daniel J. Dairaghi; Brian E. Mcmaster
Original assignee: Chemocentryx Inc
Current assignee: Chemocentryx Inc
Priority date: 1999-08-27
Filing date: 2000-08-25
Publication date: 2007-05-01
Anticipated expiration: 2020-08-25
Also published as: EP1216232B1; JP2003508388A; US20060063763A1; JP4831906B2; US6559160B1; EP1216232A1; DE60031285T2; AU7080500A; DE60031285D1; ATE342257T1; US6992084B2; WO2001016114A2; US20030119854A1; WO2001016114A3

Abstract

Una composición que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto que tiene la fórmula: en la cual el subíndice n es un número entero de 0 a 4; Ar es fenilo sustituido en donde el sustituyente se selecciona de halógeno, OR'', -OC(O)R'', -NR''R", -SR'', -R'', -CN, -NO2, -CO2R'', -CONR''R", -C(O)R'', -OC(O)NR''R", -NR"C(O)R'', -NR"C(O)2R'', -NR''-C(O)NR"R"'', -NH-C(NH2)=NH, -NR''C(NH2)=NH, -NH- C(NH2)=NR'', -S(O)R'', -S(O2)R'', -S(O2)NR''R", -N3, -CH(Ph)2, perfluoro-alcoxi(C1-C4), y perfluoroalquilo(C1-C4), en un número que varía desde cero hasta el número total de valencias libres del sistema de anillos aromáticos; y donde R'', R", y R"'' se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo(C1-C8) y heteroalquilo, arilo insustituido y heteroarilo (arilo insustituido)-alquilo(C1-C4), y (arilo insustituido)oxi-alquilo(C1-C4); R1 es un miembro seleccionado del grupo constituido por alquilo(C5-C15) sustitui- do o insustituido; R2 es un miembro seleccionado del grupo constituido por alquilo(C1-C8) sustitui- do o insustituido; cada R3 representa independientemente un sustituyente arilo seleccionado del grupo constituido por halógeno, hidroxi, alquilo(C1-C8), alcoxi(C1-C8), nitro, ciano, ami- no y mono- o dialquilamino; X es N; Y s un miembro seleccionado del grupo constituido por alquileno(C2-C8) sustitui- do o insustituido y hetero-alquileno(C2-C8) sustituido o insustituido; y Z es -NR4R5 en donde R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo constituido por hidrógeno y alquilo(C1-C8) o R4 y R5 pueden combinarse con el átomo de nitrógeno al cual está unido cada uno para formar un anillo de cinco, seis o siete miembros; en donde alquilo es un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada, o cíclico, o combinación de los mismos, que puede ser totalmente saturado, mono- o poliinsatura- do y puede incluir radicales di- y multivalentes; cuando dichos restos alquilo, alquileno o heteroalquileno están sustituidos, los sustituyentes se seleccionan independientemente del grupo constituido por -OR'', =O, =NR, =N-OR'', -NR''R", -SR'', -halógeno, -SiR''R"R"'', -OC(O)R'', -C(O)R'', -CO2R'', -CONR''R", -OC(O)NR''R", -NR"C(O)R'', -NR''-C(O)NR"R"'', -NR"C(O2)R'', -NH- C(NH2)=NH, -NR''C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR'', -S(O)R'', -S(O)2R'', -S(O)2NR''R", -CN y -NO2, y R'', R" y R"'' se refieren cada uno independientemente a hidrógeno, alquilo(C1- C8) insustituido y heteroalquilo.

Description

Compuestos heterocíclicos y métodos para modular la función de CXCR3.

Remisiones a solicitudes afines

Esta solicitud reivindica prioridad a la Solicitud Provisional U.S. No. Ser. 60/151.212, presentada el 27 de agosto de 1999.

Antecedentes de la invención

Las quimioquinas son citoquinas quimiotácticas que son liberadas por una gran diversidad de células para atraer macrófagos, células T, eosinófilos, basófilos y neutrófilos a sitios de inflamación (revisado en Schall, Cytokine, 3: 165-183 (1991), Schall, et al., Curr. Opin. Immunol., 6: 865-873 (1994) y Murphy, Rev. Immun., 12: 593-633 (1994)). Además de estimular la quimiotaxis, pueden ser inducidos selectivamente por las quimioquinas otros cambios en células sensibles, con inclusión de cambios en la forma celular, aumentos transitorios en la concentración de iones calcio libres ([Ca^{2+}])_{i} intracelulares, exocitosis de gránulos, regulación ascendente de integrinas, formación de lípidos bioactivos (v.g., leucotrienos) y estallido respiratorio, asociado con la activación de los leucocitos. Así pues, las quimioquinas son desencadenantes precoces de la respuesta inflamatoria, causando liberación de mediadores inflamatorios, quimiotaxis y extravasación a sitios de infección o inflamación.

Existen cuatro clases de quimioquinas, CXC (\alpha), CC (\beta), C (\gamma), y CX_{3} (\delta), dependiendo de si las dos primeras cisteínas están separadas por un solo aminoácido (C-X-C), son adyacentes (C-C), tienen un par cisteína ausente (C), o están separadas por tres aminoácidos (CXC_{3}). Las \alpha-quimioquinas, tales como interleuquina-8 (IL-8), la proteína de actividad estimulante del crecimiento de melanomas (MGSA), y el factor 1 derivado de células estromáticas (SDF-1), son quimiotácticas fundamentalmente para neutrófilos y linfocitos, mientras que las quimioquinas \beta, tales como RANTES, MIP-1\alpha, MIP-1\beta, la proteína-1 quimiotáctica de los monocitos (MCP-1), MCP-2, MCP-3 y eotaxina son quimiotácticas para macrófagos, células T, eosinófilos y basófilos (Deng, et al., Nature, 381: 661-666 (1996)). La quimioquina C linfotactina exhibe especificidad para linfocitos (Kelner, et al., Science, 266: 1395-1399 (1994)), mientras que la quimioquina CX_{3}C fractalquina exhibe especificad para linfocitos y monocitos (Bazán, et al., Nature, 385: 640-644 (1997).

Las quimioquinas fijan receptores específicos de la superficie celular pertenecientes a la familia de las proteínas con siete dominios transmembranales acopladas a proteína G (revisado en Horuk, Trends Pharm. Sci., 15: 159-165 (1994)) que se denominan "receptores de quimioquinas". Al fijarse a sus ligandos cognados, los receptores de quimioquinas transducen una señal intracelular a través de la proteína G trímera asociada, dando como resultado un aumento rápido en la concentración intracelular de calcio. Existen al menos doce receptores de quimioquinas humanas que se fijan o responden a \beta-quimioquinas con el patrón característico siguiente: CCR1 (o "CKR-1" o "CC-CKR-1") MIP-1\alpha, MIP-1\beta, MCP-3, RANTES (Ben_Barruch, et al., J. Biol.. Chem., 270: 22123-22128 (1995); Neote, et al., Cell, 72:415-425 (1993)); CCR2A y CCR2B (o "CKR-2A"/"CKR2A" o "CC-CKR-2A"/"CC-CKR2A") MCP-1, MCP-3, MCP-4; CCR3 (o "CKR-3" o "CC-CKR-3") eotaxina, RANTES, MCP; (Ponath, et al., J. Exp. Med., 183:2437-2448 (1996)); CCR4 (o "CKR-4" o "CC-CKR-4") TARC, MDC (Imai, et al., J. Biol.. Chem., 273:1764-1768 (1998); CCR5 (o "CKR-5" o "CC-CKR-5") MIP-1\alpha, RANTES, MIP-1\beta (Sansón, et al., Biochemistry, 35:3362-3367 (1996)); CCR6 MIP-3 alfa (Greaves, et al., J. Exp. Med., 186:837-844 (1997)) CCR7 MIP-3 beta y 6Ckine (Campbell, et al., J. Cell Biol., 141:1053-1059 (1998)); CCR8 I-309, HHV8 vMIP-I, HHV-8 vMIP-II, MCV vMCC-I (Dairaghi, et al., J. Biol. Chem., 274:21569-21574 (1999)); CCR9 Teck (Zaballos, et al., J. Immunol., 162:5671-5675 (1999)), D6 MIP-1 beta, RANTES, y MCP-3 (Nibbs, et al., J. Biol. Chem., 272:32078-32083 (1997)), y el antígeno del grupo sanguíneo Duffy RANTES, MCP-1 (Chaudhun, et al., J. Biol. Chem., 269:7835-7838 (1994)).

Los receptores de quimioquinas, tales como CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CX_{3}CR1, y XCR1 se han visto implicados como mediadores importantes de trastornos y enfermedades inflamatorios e inmunorreguladores, con inclusión de asma y enfermedades alérgicas, así como patologías autoinmunes tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis.

El receptor de quimioquinas CXCR3 se expresa primariamente en los linfocitos T, y su actividad funcional puede medirse por elevación de calcio citosólico o quimiotaxis. Se hizo referencia previamente al receptor como GPR9 o CKR-L2. Su localización cromosómica es inusual entre los receptores de quimioquinas, en el sentido de que está localizado en Xq13. Ligandos que han sido identificados como selectivos y de alta afinidad son las quimioquinas CXC, IP10, MIG e ITAC.

La expresión altamente selectiva de CXCR3 hace que la misma sea una diana ideal para intervención con objeto de interrumpir un tráfico inadecuado de las células T. Las indicaciones clínicas para dicha intervención se encuentran en enfermedades autoinmunes mediadas por las células T tales como esclerosis múltiple, artritis reumatoide, y diabetes tipo I. Una infiltración inapropiada de células T ocurre también en la psoriasis y otras afecciones patógenas inflamatorias de la piel, aunque las enfermedades pueden no ser verdaderos trastornos autoinmunes. A este respecto, la regulación ascendente de la expresión de IP-10 en los queratinocitos es una característica común en las inmunopatologías cutáneas. La inhibición de CXCR3 puede ser beneficiosa en la reducción del rechazo en el transplante de órganos. La expresión ectópica de CXCR3 en ciertos tumores, especialmente subconjuntos de enfermedades malignas de las células B, indican que los inhibidores selectivos de CXCR3 serán valiosos en la inmunoterapia de tumores, particularmente la atenuación de metástasis.

A la vista de la importancia clínica de CXCR3, la identificación de compuestos que modulan la función de CXCR3 representa una ruta atractiva en el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos. Compuestos de este tipo son los proporcionados en esta invención.

Sumario de la invención

La presente invención está dirigida a composiciones que comprenden compuestos que son moduladores de la actividad del receptor de la quimioquina CXCR3 y son útiles en la prevención o el tratamiento de ciertos trastornos y enfermedades inflamatorios e inmunorreguladores, que incluyen asma y enfermedades alérgicas, así como patologías autoinmunes tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis; y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Considerada desde un aspecto, por consiguiente, la invención proporciona una composición definida en la reivindicación 1. La invención está dirigida también al uso, como se define en la reivindicación 10, de estos compuestos y composiciones en la prevención o el tratamiento de enfermedades en las cuales están implicados receptores de la quimioquina CXCR3. La invención proporciona también composiciones de la invención para uso en terapia médica. La invención proporciona también un método in vitro como se define en la reivindicación 9.

Descripción de la invención Abreviaturas y definiciones

El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro constituyente, significa, a no ser que se indique otra cosa, una cadena lineal o ramificada, o radical de hidrocarburo cíclico, o combinación de los mismos, que puede ser totalmente saturado, mono- o poli-insaturado y puede incluir radicales di- y multivalentes, que tienen el número de átomos de carbono designado (es decir, C_{1}-C_{10} significa 1 a 10 carbonos). Ejemplos de radicales de hidrocarburos saturados incluyen grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, ciclohexilo, (ciclohexil)metilo, ciclopropilmetilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y análogos. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más enlaces dobles o enlaces triples. Ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo, y los homólogos e isómeros superiores. El término "alquilo", a no ser que se indique otra cosa, tiene por objeto incluir también aquellos derivados de alquilo que se definen más adelante con mayor detalle como "heteroalquilo". Grupos alquilo que se limitan a grupos hidrocarbonados se denominan "homoalquilo".

El término "alquileno", en sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical bivalente derivado de un alcano, como se ilustra por -CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, e incluye adicionalmente aquellos grupos descritos más adelante como "heteroalquileno". Típicamente. un grupo alquilo (o alquileno) tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, siendo preferidos en la presente invención aquellos grupos que tienen 10 átomos de carbono o menos. Un "alquilo inferior" o "alquileno inferior" es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, que tiene generalmente 8 átomos de carbono o menos.

Los términos "alcoxi", "alquilamino" y "alquiltio" (o tioalcoxi) se utilizan en su sentido convencional, y se refieren a aquellos grupos alquilo unidos al resto de la molécula por un átomo de oxígeno, un grupo amino, o un átomo de azufre, respectivamente.

El término "heteroalquilo", en sí mismo o en combinación con otro término, significa, a no ser que se indique otra cosa, una cadena lineal o ramificada estable, o un radical de hidrocarburo cíclico, o combinaciones de los mismos, constituidos por el número indicado de átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por O, N, Si, y S, y en el cual los átomos de nitrógeno y azufre pueden estar oxidados opcionalmente y el heteroátomo nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El o los heteroátomos O, N y S pueden estar situados en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo. El heteroátomo Si puede estar situado en cualquier posición del grupo heteroalquilo, con inclusión de la posición en la cual el grupo alquilo está unido al resto de la molécula. Ejemplos incluyen CH_{2}CH_{2}-O-CH_{3}, -CH_{2}-CH_{2}-NH-CH_{3}, -CH_{2}-CH_{2}-N(CH_{3})-CH_{3}, -CH_{2}-S-CH_{2}-CH_{3}, -CH_{2}-CH_{2}, -S(O)-CH_{3}, -CH_{2}-CH_{2}-S(O)_{2}-CH_{3}, -CH=CH-O-CH_{3}, -Si(CH_{3})_{3}, -CH_{2}-CH=N-OCH_{3}, y -CH=CH-N(CH_{3})-CH_{3}. Hasta dos heteroátomos pueden ser consecutivos, tales como, por ejemplo, -CH_{2}-NH-OCH_{3} y -CH_{2}-O-Si(CH_{3})_{3}. Análogamente, el término "heteroalquileno", en sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un radical bivalente derivado de heteroalquilo, como se ilustra por -CH_{2}-CH_{2}-S-CH_{2}-CH_{2}- y -CH_{2}-S-CH_{2}-CH_{2}-NH-CH_{2}-. Para los grupos heteroalquileno, los heteroátomos pueden ocupar también cualquiera o ambos de los extremos de la cadena (v.g., alquileno-oxi, alquilenodioxi, alquilenoamino, alquilenodiamino, y análogos). Todavía adicionalmente, para los grupos enlazadores de alquileno y heteroalquileno, no está implicada orientación alguna del grupo
enlazador.

Los términos "cicloalquilo" y "heterocicloalquilo", en sí mismos o en combinación con otros términos, representan, a no ser que se indique otra cosa, versiones cíclicas de "alquilo" y "heteroalquilo", respectivamente. Adicionalmente, para heterocicloalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición en la cual está unido el heterociclo al resto de la molécula. Ejemplos de cicloalquilo incluyen ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo y análogos. Ejemplos de heterocicloalquilo incluyen 1-(1,2,5,6-tetrahidropiridilo), 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4-morfolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrotien-2-ilo, tetrahidrotien-3-ilo, 1-piperazinilo, 2-piperazinilo, y análogos.

Los términos "halo" o "halógeno", en sí mismo o como parte de otro sustituyente, significan, a no ser que se indique otra cosa, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, debe entenderse que términos tales como "haloalquilo" incluyen monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "halo-alquilo(C_{1}-C_{4})" debe entenderse que incluye trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y análogos.

El término "arilo" significa, a no ser que se indique otra cosa, un sustituyente de hidrocarburo poliinsaturado, típicamente aromático, que puede ser un solo anillo o anillos múltiples (hasta 3 anillos) que están condensados entre sí o enlazados covalentemente. El término "heteroarilo" hace referencia a grupos (o anillos) arilo que contienen desde cero a cuatro heteroátomos seleccionados de N, O y S, en donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados, y el o los átomos de nitrógeno están opcionalmente cuaternizados. Un grupo heteroarilo puede estar unido al resto de la molécula a través de un heteroátomo. Ejemplos no limitantes de grupos arilo y heteroarilo incluyen fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1-pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo-, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 5-indolilo, 1-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo, y 6-quinolilo. Sustituyentes para cada uno de los sistemas de anillos arilo y heteroarilo arriba indicados se seleccionan del grupo de sustituyentes aceptables descrito más
adelante.

Para brevedad, el término "arilo", cuando se utiliza en combinación con otros términos (v.g., ariloxi, ariltioxi, arilalquilo) incluye tanto anillos arilo como anillos heteroarilo como se define arriba. Así pues, debe entenderse que el término "alquilarilo" incluye aquellos radicales en los cuales un grupo arilo está unido a un grupo alquilo (v.g., bencilo, fenetilo, piridilmetilo y análogos) con inclusión de aquellos grupos alquilo en los cuales un átomo de carbono (v.g., un grupo metileno) ha sido reemplazado, por ejemplo, por un átomo de oxígeno (v.g., fenoximetilo, 2-piridiloximetilo, 3-(1-naftiloxi)propilo, y análogos).

Debe entenderse que cada uno de los términos anteriores (v.g., "alquilo", "heteroalquilo", "arilo" y "heteroarilo") incluye tanto formas sustituidas como formas insustituidas del radical indicado. Sustituyentes preferidos para cada tipo de radical se proporcionan a continuación.

Sustituyentes para los radicales alquilo y heteroalquilo (con inclusión de aquellos grupos a los que se hace referencia en muchos casos como alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, y heterocicloalquenilo) puede ser una diversidad de grupos seleccionados de: -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R'', -SR', -halógeno, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO_{2}R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'',
-NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)_{2}R', -NH-C(NH_{2})=NH, -NR'C(NH_{2})=NH, -NH-C(NH_{2})=NR', -S(O)R', -S(O)_{2}R', -S(O)_{2}NR'R'', -CN y -NO_{2} en un número comprendido entre cero y (2m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. R', R'' y R''' se refieren independientemente cada uno a hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{8}) insustituido y heteroalquilo, arilo insustituido, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo insustituido, alcoxi o grupos tioalcoxi, o grupos aril-(alquilo C_{1}-C_{4}). Cuando R' y R'' están unidos al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de cinco, seis o siete miembros. Por ejemplo, debe entenderse que -NR'R'' incluye 1-pirrolidinilo y 4-morfolinilo. A partir de la exposición anterior de los sustituyentes, una persona con experiencia en la técnica comprenderá que debe sobreentenderse que el término "alquilo" incluye grupos tales como haloalquilo (v.g., -CF_{3} y -CH_{2}CF_{3}) y acilo (v.g., -C(O)CH_{3}, -C(O)CF_{3}, -C(O)CH_{2}OCH_{3}, y
análogos).

Análogamente, los sustituyentes para los grupos arilo y heteroarilo son diversos y se seleccionan de: -halógeno,
-OR', -OC(O)R', -NR'R'', -SR', -R', -CN, -NO_{2}, -CO_{2}R', -CONR'R'', -C(O)R', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R',
-NR''C(O)_{2}R', -NR'-C(O)NR''R''', -NHC(NH_{2})=NH, -NR'C(NH_{2})=NH, -NH-C(NH_{2})=NR', -S(O)R', -S(O)_{2}R', -S(O)_{2}NR'R'', -N_{3}, -CH(Ph)_{2}, perfluoro-alcoxi (C_{1}-C_{4}), y perfluoro-alquilo (C_{1}-C_{4}), en un número que va desde cero al número total de valencias libres en el sistema de anillos aromáticos); y donde R', R'' y R''' se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{8}) y heteroalquilo, arilo y heteroarilo insustituidos (arilo insustituido)-(alquilo C_{1}-C_{4}), y (arilo insustituido)oxi-alquilo (C_{1}-C_{4}).

Dos de los sustituyentes en los átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden estar reemplazados opcionalmente con un sustituyentes de la fórmula -T-C(O)-(CH_{2})_{q}-U-, en donde T y U son independientemente -NH-, -O-, -CH_{2}- o un enlace simple, y q es un número entero de 0 a 2. Alternativamente, dos de los sustituyentes en átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden estar reemplazados opcionalmente con un sustituyente de la fórmula -A-(CH_{2})_{r}-B-, en donde A y B son independientemente -CH_{2}-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S(O)_{2}NR'- o un enlace simple, y r es un número entero de 1 a 3. Uno de los enlaces simples del nuevo anillo así formado puede estar reemplazado opcionalmente con un enlace doble. Alternativamente, dos de los sustituyentes en átomos adyacentes del anillo arilo o heteroarilo pueden estar reemplazados opcionalmente con un sustituyente de la fórmula -(CH_{2})_{s}-X-(CH_{2})_{t}-, donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3, y X es -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, o -S(O)_{2}NR'-. El sustituyente R' en -NR'- y -S(O)_{2}NR'- se selecciona de hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4} insusti-
tuido.

Tal como se utiliza en esta memoria, debe entenderse que el término "heteroátomo" incluye oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S) y silicio (Si). Debe entenderse que el término "sales farmacéuticamente aceptables" incluye sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos que se describen en esta memoria. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, pueden obtenerse sales de adición de base por contacto de la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, sea pura o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables incluyen sales de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, o de magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido por contacto de la forma neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico, o ácidos fosforosos y análogos, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos tales como los ácidos acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico, y análogos. Se incluyen también sales de aminoácidos tales como alginato y análogas, y sales de ácidos orgánicos tales como los ácidos glucurónico o galacturónico y análogos (véase, por ejemplo, Berge, S.M., et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen a la vez funcionalidades básicas y ácidas que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición de base o de ácido.

Las formas neutras de los compuestos pueden regenerarse por contacto de la sal con una base o un ácido y aislamiento del compuesto originario de la manera convencional. La forma originaria del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás las sales son equivalentes a la forma originaria del compuesto para los propósitos de la presente invención.

Además de las formas de sal, la presente invención proporciona compuestos que se encuentran en forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en esta memoria son aquellos compuestos que sufren fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos pueden convertirse en los compuestos de la presente invención por métodos químicos o bioquímicos en un ambiente ex vivo. Por ejemplo, los profármacos se pueden convertir lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se ponen en un depósito de parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuado.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas y en formas solvatadas, con inclusión de formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y se pretende que estén abarcadas dentro del alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas cristalinas o amorfas múltiples. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y tienen por objeto estar comprendidas dentro del alcance de la presente invención.

Ciertos compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o enlaces dobles; debe entenderse que todos los racematos, diastereoisómeros, isómeros geométricos e isómeros individuales están abarcados dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención pueden contener también proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isótopos radioactivos, tales como por ejemplo tritio (^{3}H), yodo-125 (^{125}I) o carbono-14 (^{14}C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, sean o no radiactivas, deben considerarse abarcadas dentro del alcance de la presente invención.

General

La presente invención está dirigida a compuestos y composiciones útiles en la modulación de la actividad de los receptores de quimioquinas, particularmente CXCR3. De acuerdo con ello, los compuestos de la presente invención son aquéllos que inhiben al menos una función no característica de una proteína CXCR3 de mamífero, por ejemplo, una proteína CXCR3 humana. La capacidad de un compuesto para inhibir una función de este tipo puede demostrarse en un ensayo de fijación (v.g., fijación de ligandos o fijación de promotores), un ensayo de señalización (v.g., activación de una proteína G de mamífero, inducción del aumento rápido y transitorio en la concentración de calcio citosólico libre), y/o función de respuesta celular (v.g., estimulación de quimiotaxis, exocitosis, o liberación de mediadores inflamatorios por leucocitos).

Compuestos que Modulan la Actividad de CXCR_{3}

En un aspecto, la presente invención proporciona composiciones que comprenden un excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto que modula la actividad de CXCR3. Los compuestos tienen la fórmula general:

1

En la fórmula I, el símbolo Ar representa un grupo fenilo sustituido. Sustituyentes preferidos en el grupo fenilo se seleccionan de halógeno, alquilo (C_{1}-C_{4}), haloalquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi (C_{1}-C_{4}), haloalcoxi (C_{1}-C_{4}), nitro y ciano. Más preferiblemente, los sustituyentes en el grupo fenilo se seleccionan de halógeno y alcoxi (C_{1}-C_{4}).

Volviendo a la fórmula I anterior, el símbolo R^{1} representa un grupo alquilo (C_{5}-C_{15}) sustituido o insustituido, preferiblemente, un grupo alquilo (C_{5}-C_{15}) sustituido. En un grupo de realizaciones particularmente preferido, R^{1} es un grupo acilo (C_{5}-C_{15}) que es saturado o insaturado. Ejemplos de grupos R^{1} preferidos incluyen pentanoílo, hexanoílo, heptanoílo, octanoílo, decanoílo y análogos. Muy preferiblemente, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}).

El símbolo R^{2} representa un grupo alquilo (C_{1}-C_{8}) sustituido o insustituido. Preferiblemente, R^{2} es un grupo alquilo (C_{1}-C_{8}) insustituido, más preferiblemente un grupo alquilo (C_{1}-C_{4}) insustituido. En otras realizaciones preferidas, R^{2} es un grupo metilo, etilo o propilo, muy preferiblemente un grupo metilo.

El símbolo -(R^{3})_{n} representa una diversidad de sustituyentes del grupo arilo que pueden ocupar cualquiera de las valencias disponibles en el anillo aromático. Para aquellas realizaciones en las cuales n es un número entero de 2 a 4 (sustitución múltiple), cada uno de los grupos R^{3} se seleccionará independientemente de halógeno, hidroxilo, alquilo (C_{1}-C_{8}), alcoxi (C_{1}-C_{8}), nitro, ciano, amino, y mono- o di-alquilamino. En realizaciones preferidas, n es un número entero de 0 a 2, y cada R^{3} (cuando está presente) se selecciona de halógeno, hidroxilo, alquilo (C_{1}-C_{4}), alcoxi (C_{1}-C_{4}), y nitro.

En la fórmula I anterior, la letra X representa N.

La letra Y representa un grupo enlazador que es un grupo alquileno (C_{2}-C_{8}) sustituido o insustituido o grupo enlazador heteroalquileno (C_{2}-C_{8}). Como ejemplos ilustrativos de tales grupos enlazadores pueden citarse -CH_{2}-CH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}OCH_{2}CH_{2}-, y análogos.

La letra Z representa -NR^{4}R^{5}, en cuya fórmula R^{4} y R^{5} son independientemente hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{8}), o R^{4} y R^{5} pueden combinarse con el nitrógeno al cual está unido cada uno para formar un anillo de cinco, seis, o siete miembros. Preferiblemente, R^{4} y R^{5} son iguales y se seleccionan de metilo, etilo y propilo, o están combinados con el nitrógeno al cual está unido cada uno para formar un anillo de pirrolidina. En un grupo particularmente preferido de realizaciones, Z es un grupo dimetilamino.

Además de las realizaciones preferidas proporcionadas para cada uno de los sustituyentes anteriores, ciertas combinaciones de sustituyentes son también preferidas en la presente invención. Por ejemplo, en un grupo de realizaciones preferidas, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}). Más preferiblemente, fenilo sustituido, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}), y R^{2} es un grupo acilo (C_{1}-C_{4}) insustituido y R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{4}) insustituido. Todavía más preferiblemente, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}), R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{4}) insustituido e Y es alquileno (C_{2}-C_{5}). En otras realizaciones preferidas adicionales, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}), R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{4}) insustituido, Y es alquileno (C_{2}-C_{5}) y Z es un dimetil-amino.

En otro grupo adicional de realizaciones preferidas, n es 0, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}), R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{4}) insustituido, Y es etileno y Z es dimetilamino. De modo muy preferible, n es 0, R^{1} es un grupo acilo (C_{8}-C_{14}), R^{2} es alquilo (C_{1}-C_{4}) insustituido, Y es etileno, Z es dimetilamino y Ar es un grupo fenilo sustituido en posición 4, más preferiblemente, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 4-bromofenilo, 4-metilfenilo, y 4-metoxifenilo.

En un grupo de realizaciones muy preferidas, el compuesto tiene una fórmula seleccionada del grupo:

2

3

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4

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Composiciones que modulan la actividad de CXCR3

La presente invención proporciona composiciones para modular la actividad de receptores de quimioquinas en humanos y animales. Las composiciones comprenden un compuesto como se define anteriormente en esta memoria con un vehículo o diluyente farmacéutico.

"Modulación" de la actividad de receptores de quimioquinas, tal como se utiliza en esta memoria en sus diversas formas, tiene por objeto abarcar antagonismo, agonismo, antagonismo parcial y/o agonismo parcial de la actividad asociada con un receptor de quimioquinas particular, preferiblemente el receptor CXCR3. El término "composición", tal como se utiliza en esta memoria, tiene por objeto abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el vehículo, diluyente o excipiente tiene que ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no deletéreo para el receptor de la misma.

Las composiciones farmacéuticas para la administración de los compuestos de esta invención pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Todos los métodos incluyen el paso de poner el ingrediente activo en asociación con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones farmacéuticas se preparan poniendo en asociación uniforme e íntimamente el ingrediente activo con un vehículo líquido o un vehículo sólido finamente dividido o ambos, y a continuación, en caso necesario, conformación del producto en la formulación deseada. En la composición farmacéutica, el compuesto objeto activo se incluye en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado sobre el proceso o la condición de enfermedad.

Las composiciones farmacéuticas que contienen el ingrediente activo pueden encontrarse en una forma adecuada para uso oral, por ejemplo, como tabletas, trociscos, pastillas, suspensiones acuosas o aceitosas, polvos dispersables o gránulos, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones destinadas a uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas, y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo constituido por agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes a fin de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y agradables al paladar. Las tabletas contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de tabletas. Estos excipientes pueden ser por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegrantes, por ejemplo, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglomerantes, por ejemplo almidón, gelatina o goma arábiga, y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden carecer de recubrimiento o pueden estar recubiertas por técnicas conocidas para retardar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y proporcionar con ello una acción sostenida durante un período de tiempo más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Aquéllas pueden estar recubiertas también por las técnicas descritas en las patentes U.S. núms. 4.256.108; 4.166.452; y 4.265.874 para formar tabletas terapéuticas osmóticas para liberación controlada.

Las formulaciones para uso oral pueden presentarse también como cápsulas de gelatina dura en las cuales el ingrediente activo está mezclado con un diluyente inerte sólido, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en las cuales el ingrediente activo está mezclado con agua o un medio aceitoso, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de parafina o aceite de oliva.

Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Excipientes de este tipo son agentes de suspensión, por ejemplo carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinil-pirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga; agentes dispersantes o humectantes pueden ser un fosfátido existente naturalmente, por ejemplo lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo poli(estearato de oxietileno), o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetileno-oxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tales como monooleato de polioxietilen-sorbitol), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilen-sorbitán. Las suspensiones acuosas pueden contener también uno o más conservantes, por ejemplo p-hidroxibenzoato de etilo o de n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.

Las suspensiones aceitosas pueden formularse por suspensión del ingrediente activo en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como aceite de parafina. Las suspensiones aceitosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Los agentes edulcorantes tales como los expuestos anteriormente, y agentes saborizantes, pueden añadirse para proporcionar una preparación agradable al paladar. Estas composiciones pueden conservarse por adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.

Polvos y gránulos dispersables adecuados para preparación de una suspensión acuosa por adición de agua proporcionan el ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, agentes de suspensión y uno o más conservantes. Agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión se ilustran por los ya mencionados anteriormente. Excipientes adicionales, por ejemplo agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes pueden estar presentes también.

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden encontrarse también en la forma de emulsiones de aceite en agua. La fase acuosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo aceite de parafina o mezclas de los mismos. Agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas existentes naturalmente, por ejemplo goma arábiga o goma tragacanto, fosfátidos existentes naturalmente, por ejemplo soja, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitán y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilen-sorbitán. Las emulsiones pueden contener también agentes edulcorantes y sabori-
zantes.

Jarabes y elixires pueden formularse con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propilen-glicol, sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones pueden contener también un demulcente, un conservante y agentes saborizantes y colorantes.

Las composiciones farmacéuticas pueden encontrarse en la forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con la técnica conocida utilizando los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril puede ser también una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo no irritante con inclusión de mono- o diglicéridos sintéticos. Adicionalmente, ácidos grasos tales como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar también en la forma de supositorios para administración rectal del fármaco. Estas composiciones pueden prepararse por mezcla del fármaco con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a las temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal y por consiguiente fundirá en el recto para liberar el fármaco. Materiales de este tipo son manteca de cacao y polietilen-glicoles.

Para uso tópico, se emplean cremas, ungüentos, jaleas, soluciones o suspensiones, etc., que contienen los compuestos de la presente invención. Tal como se utiliza en esta memoria, debe entenderse también que la aplicación tópica incluye el uso de elixires bucales y gargarismos.

La composición farmacéutica y el método de la presente invención pueden comprender adicionalmente otros compuestos terapéuticamente activos como se indica en esta memoria que se aplican usualmente en el tratamiento de las condiciones patológicas arriba mencionadas.

Métodos de Tratamiento de las afecciones o enfermedades mediadas por CXCR3

Los compuestos de las composiciones de la presente invención son utilizables en métodos de tratamiento de afecciones o enfermedades mediadas por CXCR3 por administración a un individuo que padece una de dichas afecciones o enfermedades, de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula I anterior. Tal como se define el "sujeto" en esta memoria, incluye animales tales como mamíferos, con inclusión, pero sin carácter limitante, de primates (v.g., humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones y análogos.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa la cantidad del presente compuesto que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano que es pretendida por el investigador, veterinario, doctor en medicina u otro profesional clínico.

Enfermedades y afecciones asociadas con inflamación, infección y cáncer pueden tratarse con los presentes compuestos y composiciones. En un grupo de realizaciones, enfermedades o afecciones, que incluyen enfermedades crónicas, de humanos u otras especies pueden tratarse con inhibidores de la función de CXCR3. Estas enfermedades o afecciones incluyen: (1) enfermedades inflamatorias o alérgicas tales como anafilaxis o respuestas de hipersensibilidad sistémicas, alergias a los fármacos, alérgicas a picaduras de insectos; enfermedades inflamatorias intestinales, tales como la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, ileítis y enteritis; vaginitis; psoriasis y dermatosis inflamatorias tales como dermatitis, eczema, dermatitis atópica, dermatitis alérgica por contacto, urticaria; vasculitis; espondiloartropatías; escleroderma; enfermedades respiratorias alérgicas tales como asma, rinitis alérgica, enfermedades de hipersensibilidad pulmonar, y análogas, (2) enfermedades autoinmunes, tales como artritis (reumatoide y psoriásica), esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, diabetes, glomerulonefritis, y análogas, (3) rechazo de injertos (con inclusión de rechazo de haloinjertos y enfermedad de rechazo inverso), y (4) otras enfermedades en las cuales deben inhibirse las respuestas inflamatorias indeseables (v.g., ateroesclerosis, miositis, enfermedades neurodegenerativas, enfermedad de Alzheimer, encefalitis, meningitis, hepatitis, nefritis, sepsis, sarcoidosis, conjuntivitis, otitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, sinusitis y síndrome de Behcet). En otro grupo de realizaciones, las enfermedades o afecciones se tratan con agonistas de la función de CXCR3. Ejemplos de enfermedades a tratar con agonistas de CXCR3 incluyen cánceres, enfermedades entre las cuales juega un papel la angiogénesis o neovascularización (enfermedades neoplásticas, retinopatía y degeneración macular), enfermedades infecciosas y enfermedades
inmunosupresoras.

Dependiendo de la enfermedad a tratar y el estado del sujeto, los compuestos de la presente invención pueden administrarse por vías oral, parenteral (v.g., intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ICV, inyección o infusión intracisternal, inyección subcutánea, o implante), por spray de inhalación, nasal, vaginal, rectal, sublingual, o rutas tópicas de administración y pueden formularse, solas o en conjunto, en formulaciones unitarias de dosificación adecuadas que condiciones vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales, adyuvantes y vehículos apropiados para cada ruta de administración.

En el tratamiento o la prevención de afecciones que requieren la modulación de receptores de quimioquinas, un nivel de dosificación apropiado será por regla general aproximadamente 0,001 a 100 mg por kg de peso corporal del paciente por día, que puede administrarse en una sola dosis o en dosis múltiples. Con preferencia, el nivel de dosificación será aproximadamente 0,01 a aproximadamente 25 mg/kg por día; de modo más preferible aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg/kg por día. Un nivel de dosificación adecuado puede ser aproximadamente 0,01 a 25 mg/kg por día, aproximadamente 0,05 a 10 mg/kg por día, o aproximadamente 0,1 a 5 mg/kg por día. Dentro de este intervalo, la dosificación puede ser 0,005 a 0,05, 0,05 a 0,5 ó 0,5 a 5,0 mg/kg por día. Para administración oral, las composiciones se proporcionan preferiblemente en la forma de tabletas que contienen 1,0 a 1000 miligramos del ingrediente activo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0, y 1000,0 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosificación al paciente a tratar. Los compuestos pueden administrarse en un régimen de 1 a 4 veces al día, preferiblemente una o dos veces al día.

Se comprenderá, sin embargo, que el nivel de dosis específico y la frecuencia de dosificación para cualquier paciente particular puede variar y dependerá de una diversidad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de acción de dicho compuesto, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el modo y el tiempo de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad de la afección particular, y el hospedador sometido a terapia.

Los compuestos de la presente invención pueden combinarse con otros compuestos que tienen utilidades afines para prevenir y tratar trastornos y enfermedades inflamatorias e inmunorreguladores, que incluyen asma y enfermedades alérgicas, así como patologías autoinmunes tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis, y las patologías arriba indicadas.

Por ejemplo, en el tratamiento o la prevención de la inflamación, los presentes compuestos pueden utilizarse en asociación con un agente antiinflamatorio o analgésico tal como un agonista de opiáceos, un inhibidor de las lipoxigenasas, tal como un inhibidor de la 5-lipoxigenasa, un inhibidor de ciclooxigenasas, tal como un inhibidor de la ciclooxigenasa-2, un inhibidor de interleuquinas tal como un inhibidor de la interleuquina-1, un antagonista de NMDA, un inhibidor del óxido nítrico o un inhibidor de la síntesis de óxido nítrico, un agente antiinflamatorio no esteroidal, o un agente antiinflamatorio supresor de citoquinas, por ejemplo con un compuesto tal como acetaminofén, aspirina, codieno, fentanil, ibuprofeno, indometacina, ketorolac, morfina, naproxeno, fenacetina, piroxicam, un analgésico esteroidal, sufentanil, sunlindac, tenidap, y análogos. De modo similar, los presentes compuestos pueden administrarse con un mitigador del dolor; un potenciador tal como cafeína, un antagonista H2, simeticona, hidróxido de aluminio o de magnesio; un anticongestivo tal como fenilefrina, fenilpropanolamina, pseudoefedrina, oximetazolina, epinefrina, nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina, o levo-desoxi-efedrina; un antitusígeno tal como codeína, hidrocodona, caramifén, carbetapentano, o dextrametorfano; un diurético; y una antihistamina sedante o no sedante. Análogamente, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con otros fármacos que se utilizan en el tratamiento/prevención/supresión o mejora de las enfermedades o afecciones para las cuales son útiles los compuestos de la presente invención. Dichos otros fármacos pueden administrarse, por una ruta y en una cantidad utilizada comúnmente para ellos, simultánea o secuencialmente con un compuesto de la presente invención. Cuando un compuesto de la presente invención se utiliza simultáneamente con uno o más fármacos diferentes, se prefiere una composición farmacéutica que contiene dichos otros fármacos además del compuesto de la presente invención. De acuerdo con ello, las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen aquéllas que contienen también uno o más ingredientes activos adicionales, además de un compuesto de la presente invención. Ejemplos de otros ingredientes activos que pueden combinarse con un compuesto de la presente invención, sea administrados por separado o en las mismas composiciones farmacéuticas, incluyen, pero sin carácter limitante: (a) antagonistas de VLA-4, (b) esteroides tales como beclometasona, metilprednisolona, betametasona, prednisona, dexametasona, e hidrocortisona; (c) inmunosupresores tales como ciclosporina, tacrolimus, rapamicina y otros inmunosupresores de tipo FK-506; (d) antihistaminas (antagonistas H1 de la histamina) tales como bromofeniramina, clorfeniramina, desclorfeniramina, triprolidina, clemastina, difenhidramina, difenilpiralina, tripelennamina, hidroxizina, metdilazina, prometazina, trimeprazina, azatidina, ciproheptadina, antazolina, feniramina, pirilamina, astemizol, terfenadina, loratadina, cetirizina, feexofenadina, descarboetoxiloratadina, y análogas; (e) anti-asmáticos no esteroidales tales como agonistas \beta2 (terbutalina, metaproterenol, fenoterol, isoetarina, albuterol, bitolterol, y pirbuterol), teofilina, cromolín-sodio, atropina, bromuro de ipratropio, antagonistas de leucotrienos (zafirlukast, montelukast, pranlukast, iralukast, pobilukast, SKB-106,203), inhibidores de la biosíntesis de leucotrienos (zileutón, BAY-1005); (f) agentes antiinflamatorios no esteroidales (NSAIDs) tales como derivados del ácido propiónico (alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, indoprofeno, quetoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprozina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico, y tioxaprofeno); derivados de ácido acético (indometacina, acemetacina, alclofenac, clidanac, diclofenac, fenclofenac, ácido fenclózico, fentiazac, furofenac, ibufenac, isoxepac, oxpinac, sulindac, tiopinac, tolmetín, zidometacina, y zomepirac); derivados del ácido fenámico (ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico y ácido tolfenámico); derivados del ácido bifenilcarboxílico (diflunisal y flufenisal), oxicams (isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxican), salicilatos (ácido acetil-salicílico, sulfasalazina) y las pirazolonas (apazona, bezpiperilón, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona, fenilbutazona); (g) inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2); (h) inhibidores de la fosfodiesterasa tipo IV (PDE-IV); (i) otros antagonistas de los receptores de quimioquinas, especialmente CCR-1, CCR-2, CCR-3 y CCR-5; (j) agentes que rebajan el colesterol tales como inhibidores de la reductasa HMG-CoA (lovastatina, simvastatina y pravastatina, fluvastatina, atorvastatina, y otras estatinas), secuestrantes (colestiramina y colestipol), ácido nicotínico, derivados del ácido fenofíbrico (gemfibrozil, clofibrat, fenofibrato y benzafibrato), y probucol; (k) agentes anti-diabéticos tales como insulina, sulfonilureas, biguanidas (metformina), inhibidores de la \alpha-glucosidasa (acarbosa) y glitazonas (troglitazona y pioglitazona); (l) preparaciones de interferón beta (interferón beta-1\alpha, interferón beta-1\beta); (m) otros compuestos tales como ácido 5-aminosalicílico y profármacos del mismo, antimetabolitos tales como azatioprina y 6-mercaptopurina, y agentes citotóxicos quimioterapéuticos del cáncer. La relación en peso del compuesto de la presente invención al segundo ingrediente activo puede variar y dependerá de la dosis eficaz de cada ingrediente. Por regla general, se utilizará una dosis eficaz de cada uno. Así, por ejemplo, cuando un compuesto de la presente invención se combina con un NSAID, la relación en peso del compuesto de la presente invención al NSAID variará por regla general desde aproximadamente 1000:1 a aproximadamente 1:1000, con preferencia aproximadamente 200:1 a aproximadamente 1:200. Combinaciones de un compuesto de la presente invención y otros ingredientes activos estarán también por regla general dentro del intervalo arriba mencionado, pero en cada caso, debería utilizarse una dosis eficaz de cada ingrediente activo.

Método de evaluación de moduladores supuestos de CXCR3

En otro aspecto adicional, la presente invención incluye métodos para evaluar agonistas o antagonistas específicos supuestos de la función de CXCR3. De acuerdo con ello, la presente invención está dirigida al uso de estos compuestos en la preparación y ejecución de ensayos de evaluación para compuestos que modulan la actividad del receptor de la quimioquina CXCR3. Por ejemplo, los compuestos de esta invención son útiles para aislar mutantes de receptores, que son herramientas de escrutinio excelentes para compuestos más potentes. Adicionalmente, los compuestos de esta invención son útiles en establecimiento o la determinación del sitio de fijación de otros compuestos al receptor de la quimioquina CXCR3, v.g., por inhibición competitiva. Los compuestos de la presente invención son útiles también para la evaluación de moduladores específicos supuestos del receptor de la quimioquina CXCR3, con relación a otros receptores de quimioquinas que incluyen CCR-1, CCR-2, CCR-2A, CCR-2B, CCR-3, CCR-4, CCR-5 y CXCR-4. Un experto en la técnica apreciará que una evaluación exhaustiva de agonistas y antagonistas específicos de los receptores de quimioquinas anteriores se ha visto dificultada por la falta de disponibilidad de compuestos no peptídicos (metabólicamente resistentes) con afinidad de fijación alta para estos receptores. Así pues, los compuestos proporcionados en esta invención son particularmente útiles en este contexto.

Preparación de moduladores de CXCR3

Los compuestos de fórmula I utilizados en la presente invención se pueden preparar de acuerdo con esquemas de síntesis generales proporcionados a continuación.

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100

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Como se muestra en el Esquema 1, un ácido antranílico sustituido (i) puede acilarse con un cloruro de acilo apropiado (típicamente en un disolvente tal como DMF) para formar el derivado de amida ii. La ciclación de ii con, por ejemplo, anhídrido acético forma una benzoxazinona iii. La introducción de un grupo lateral arilo puede realizarse tratando iii con un derivado de anilina o una heteroaril-amina para efectuar la formación del anillo de quinazolin-4-ona y producir iv. Manipulaciones ulteriores del apéndice en la posición C2 del anillo de quinazolin-4-ona pueden llevarse a cabo sometiendo primeramente a bromación el carbono unido a C2 para formar v, y desplazando luego el grupo bromo lábil con, por ejemplo, Z-Y-NH_{2} para formar vi. Ejemplos de nucleófilos adecuados incluyen N,N-dimetiletilenodiammina, N,N-dimetilpropilenodiammina y análogos. Finalmente, la alquilación (o acilación) del agrupo amino con R^{1}-X proporciona el compuesto del título vii.

Varios puntos en la ruta de síntesis permiten el reemplazamiento de grupos funcionales. Los ácidos antranílicos sustituidos (i, Esquema 1) pueden utilizarse para introducir/modificar la sustitución de las posiciones 5-8 de la 3H-quinazolin-4-ona (v.g. R^{3} de la fórmula I). La modificación del grupo 2-alquilo (v.g. R^{2} de fórmula I) puede realizarse por introducción de una diversidad de grupos acilo en el primer paso (véase, paso a, Esquema 1). Análogamente, el grupo 3N-fenilo (v.g. Ar) se modifica seleccionando un gran número de anilinas sustituidas para utilizar en el tercer paso de formación de 3H-quinazolin-4-ona del Esquema 1. Finalmente, la funcionalidad alquil-amino (v.g. R^{1}, Y, y Z) se modifica en los pasos quinto y sexto. La ruta es muy adecuada para la generación rápida de análogos que difieren en la funcionalidad alquil-amino (v.g. R^{1}, Y y Z) debido a que estos grupos se introducen en los dos pasos
finales.

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema 1

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5

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Un segundo método para la síntesis de 3H-quinazolin-4-onas reduce el número de pasos y facilita la modificación del núcleo de quinazolinona (v.g. R^{3} y Ar en la fórmula I). En el Esquema 2, el núcleo de 3H-quinazolino-4-ona se ensambla en un solo paso a partir del ácido antranílico acilado y una anilina (véase paso b, Esquema 2). El menor número de pasos en este método proporciona una ruta más conveniente para modificar la sustitución de 3H-quinazolin-4-ona (v.g. R^{3} en la fórmula I, y R_{A} en el Esquema 2). Aparte de la reacción en un solo paso para generar el núcleo de 3H-quinazolin-4-ona (véase el paso b, Esquema 2), la secuencia de síntesis del Esquema 2 mimetiza la del
Esquema 1.

Esquema 2

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6

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Ensayos de evaluación para moduladores de CXCR3

Pueden utilizarse una diversidad de ensayos para evaluar los compuestos proporcionados en esta memoria, que incluyen ensayos de fijación de CXCR3, ensayos de señalización de CXCR3, ensayos de quimiotaxis, y otros ensayos de respuesta celular.

En un ensayo adecuado, se utiliza una proteína CXCR3 (aislada o recombinante) que tiene al menos una propiedad, actividad o característica funcional de una proteína CXCR3 de mamífero. La propiedad puede ser una propiedad de fijación (a, por ejemplo, un ligando o inhibidor), una actividad de señalización (v.g., activación de una proteína G de mamífero, inducción del aumento rápido y transitorio en la concentración de calcio citosólico libre [Ca^{++}]_{i}), función de respuesta celular (v.g., estimulación de la quimiotaxis o liberación de mediadores inflamatorios por leucocitos), y análogos.

En una realización, una composición que contiene una proteína CXCR3 o variante de la misma se mantiene en condiciones adecuadas para fijación. El receptor de CXCR3 se pone en contacto con un supuesto agente (o una segunda composición que contiene al menos un supuesto agente) a ensayar, y se detecta o mide la fijación.

En un grupo de realizaciones preferidas, el ensayo es un ensayo basado en células y se utilizan células que se someten a transfección estable o transitoriamente con un vector o casete de expresión que tiene una secuencia de ácido nucleico que codifica el receptor de CXCR3. Las células se mantienen en condiciones apropiadas para expresión del receptor y se ponen en contacto con un supuesto agente en condiciones apropiadas para que tenga lugar la fijación. La fijación puede detectarse utilizando técnicas estándar. Por ejemplo, la extensión de la fijación puede determinarse con relación a un control adecuado (por ejemplo, con relación al ruido de fondo en ausencia de un supuesto agente, o con relación a un ligando conocido). Opcionalmente, puede utilizarse una fracción celular, tal como una fracción de membrana, que contiene el receptor en lugar de células enteras.

La detección de la fijación o formación de complejo puede detectarse directa o indirectamente. Por ejemplo, el supuesto agente puede marcarse con un marcador adecuado (v.g., marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador isotópico, marcador enzimático, y análogos) y la fijación puede determinarse por detección del marcador. La fijación específica y/o competitiva puede evaluarse por estudios de competición o desplazamiento, utilizando agente sin marcar o un ligando (v.g., IP-10, ITAC o Mig) como competidor.

En otras realizaciones, pueden utilizarse ensayos de inhibición de la fijación para evaluar los presentes compuestos. En estos ensayos, los compuestos se evalúan como inhibidores de la fijación de ligando utilizando, por ejemplo, IP-10, ITAC o Mig. En esta realización, el receptor de CXCR3 se pone en contacto con un ligando tal como IP-10, ITAC o Mig y se realiza una medida de la fijación del ligando. El receptor se pone luego en contacto con un agente de ensayo en presencia de un ligando (v.g., IP-10 o Mig) y se efectúa una segunda medida de la fijación. Una reducción en la extensión de la fijación del ligando es indicativa de inhibición de la fijación por el agente de ensayo. Los ensayos de inhibición de la fijación pueden realizarse utilizando células enteras que expresan CXCR3, o una fracción de membrana de células que expresan CXCR3.

La fijación de un receptor acoplado a proteína G, por ejemplo por un agonista, puede dar como resultado un suceso de señalización por el receptor. De acuerdo con ello, pueden utilizarse también ensayos de señalización para evaluar los compuestos de la presente invención, y la inducción de la función de señalización por un agente puede monitorizarse utilizando cualquier método adecuado. Por ejemplo, la actividad de proteína G, tal como hidrólisis de GTP a GDP, o sucesos de señalización posteriores desencadenados por la fijación del receptor pueden ensayarse por métodos conocidos (véase, por ejemplo, el documento PCT/US97/15915; Neote, et al., Cell, 72: 415-425 (1993); Van Ripper, et al., J. Exp. Med., 177: 851-856 (1993) y Dahinden, et al., J. Exp. Med., 179: 751-756
(1994)).

Pueden utilizarse también ensayos de quimiotaxis para valorar la función del receptor y evaluar los compuestos proporcionados en esta invención. Estos ensayos están basados en la migración funcional de células in vitro o in vivo inducida por un agente, y pueden utilizarse para valorar la fijación y/o el efecto sobre la quimiotaxis de ligandos, inhibidores, o agonistas. Ensayos adecuados se describen en el documento PCT/US 97/15915; Springer, et al., documento WO 94/20142; Berman et al., Immunol. Invest., 17: 625-677 (1988); y Kavanaugh et al., J. Immunol., 146: 4149-4156 (1991)).

Los compuestos proporcionados en esta memoria pueden evaluarse también utilizando modelos de inflamación para valorar la capacidad del compuesto para ejercer un efecto in vivo. Modelos adecuados se describen como sigue: un modelo de oveja para asma (véase, Weg, et al., J. Exp. Med., 177: 561 (1993)); y un modelo de hipersensibilidad de tipo retardado en la rata (véase Rand, et al., Am. J. Pathol., 148: 855-864 (1996)). Otro modelo útil para evaluar los presentes compuestos es el modelo de encefalomielitis experimental autoinmune (EAE) para la esclerosis múltiple, que ensaya la expresión y función de receptores de quimioquinas (véase, Ransohoff, et al., Cytokine Growth Factor Rev., 7: 35-46 (1996), y Karpus, et al., J. Immunol. 161: 2667-2671 (1998)).

Adicionalmente, pueden utilizarse también ensayos de infiltración de leucocitos para evaluar un compuesto (véase, Van Damme, et al., J. Exp. Med., 176: 59-65 (1992); Zachariae, et al., J. Exp. Med., 171: 2177-2182 (1990); y Jose, et al., J. Exp. Med., 179: 881-887 (1994)).

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Ejemplos

Los ejemplos siguientes se ofrecen para ilustración; la materia que constituye el objeto de los Ejemplos 5-7 no forma parte de la invención pero representa ejemplos útiles para comprender la invención.

En los ejemplos que siguen, a no ser que se indique otra cosa, las temperaturas se dan en grados Celsius (ºC); las operaciones se realizaron a la temperatura de la sala o del ambiente (típicamente un intervalo de aproximadamente 18-25ºC); la evaporación del disolvente se realizó utilizando un evaporador rotativo a presión reducida (típicamente, 4,5-30 mmHg) con una temperatura de baño de hasta 60ºC; el curso de las reacciones se siguió típicamente por TLC y los tiempos de reacción se proporcionan únicamente para ilustración; los productos exhibían datos ^{1}H-NMR y/o microanalíticos satisfactorios; los rendimientos se proporcionan únicamente para ilustración; y se utilizan también las abreviaturas convencionales siguientes: pf (punto de fusión), l (litro(s)), ml (mililitros), mmol (milimoles), g (gramos), mg (miligramos), min (minutos), y h (horas).

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Ejemplo 1

Este ejemplo ilustra una síntesis en seis pasos del compuesto 1.11

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1.1 Amidación del ácido antranílico

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A un matraz de fondo redondo con tres bocas, de 500 ml, equipado con termómetro, embudo de goteo, y una varilla de agitación magnética eficiente que contenía ácido antranílico (0,5 moles, 68,5 g) y N,N-dimetilformamida (250 ml) se añadió cloruro de propionilo (0,55 moles, 47,8 ml) gota a gota a un ritmo tal que la temperatura de la mezcla se mantuviera por debajo de 40ºC. El producto comenzó a precipitar después que se hubo añadido aproximadamente la mitad del cloruro de ácido, y la suspensión se agitó enérgicamente a la temperatura ambiente durante 2 horas más una vez completada la adición. La mezcla resultante se vertió en agua (2,0 l) y se agitó durante 1 hora más. El producto precipitado se recogió por filtración, se lavó con agua fría, y se secó en un desecador a la temperatura ambiente a presión reducida sobre P_{2}O_{5} para proporcionar el compuesto del título (62,8 g, rendimiento 65%).

1.2 Ciclación del ácido N-propionil-antranílico (a)

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El compuesto a (48,3 g, 0,25 moles) se disolvió en anhídrido acético (180 ml) en un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con varilla de agitación magnética y cabeza de destilación Claisen (con entrada de vacío). El matraz se calentó lentamente en un baño de aceite hasta una temperatura de baño de 170-180ºC. La mezcla de reacción se agitó enérgicamente y el ácido acético producido se separó lentamente por destilación a la presión atmosférica. Una vez que la temperatura de vapor del destilado alcanzó aproximadamente 140ºC, la mezcla de reacción se calentó durante 15 minutos más, y se enfrió luego hasta que la temperatura alcanzó 60ºC. El exceso de anhídrido acético se separó por destilación a presión reducida (aproximadamente 20 mmHg). El residuo se enfrió y el producto solidificó. El producto sólido se trituró con n-hexano (75 ml), y se aisló por filtración para proporcionar el compuesto b (31,5 g, 72%) que se llevó adelante sin purificación ulterior.

1.3 Adición de 4-fluoroanilina a 2-etil-3,1-[4H]benzoxazina-4-ona (b)

10

El compuesto b (31,5 g, 0,18 moles) y 4-fluoroanilina (18,7 g, 0,19 moles) se combinaron en cloroformo (75 ml) y se calentaron a reflujo durante 9 h. Después que la TLC indicó que el material de partida se había consumido, se evaporó el cloroformo a presión reducida. Se añadieron etilenglicol (50 ml) y pelets de NaOH (0,32 g) al residuo, y el matraz se equipó con una cabeza de destilación Claisen y una varilla de agitación magnética. El matraz se sumergió en un baño de aceite y se calentó de nuevo hasta 130-140ºC de temperatura de baño con agitación enérgica, y se mantuvo a dicha temperatura durante 5 h mientras se eliminaba agua por destilación. Una vez completada la reacción, la solución clara se enfrió a la temperatura ambiente y se dejó en reposo durante una noche para precipitar completamente el producto. El pH de la suspensión se ajustó a pH 7-8 por adición de HCl acuoso al 3%. El producto cristalino se separó por filtración y se lavó con agua fría, después de lo cual se recristalizó en isopropanol para proporcionar el compuesto c (27,0 g, rendimiento 56%).

1.4 Bromación de 2-etil-3-(4-fluorofenil)quinazolin-4-ona (c)

11

El compuesto c (26,8 g, 0,10 moles), acetato de sodio anhidro (10,0 g) y ácido acético glacial (130 ml) se combinaron en un matraz de 250 ml, con tres bocas y fondo redondo equipado con termómetro, embudo de goteo y una varilla de agitación magnética eficiente. Una solución de bromo (16,0 g, 0,10 moles) en ácido acético (10 ml) se añadió gota a gota a la solución anterior a 40ºC durante un periodo de aproximadamente 1-2 h. Una vez completada la adición, la mezcla se vertió en agua (1500 ml) y se agitó a la temperatura ambiente durante aproximadamente 1-2 h. El producto precipitado se aisló por filtración, se lavó con agua caliente para eliminar la tasa del ácido acético, se lavó luego con una pequeña cantidad de isopropanol y se secó para proporcionar 31,2 g (rendimiento 90%) de compuesto d.

1.5 Adición de N,N-dimetiletilenodiamina al compuesto d

12

El compuesto d (6,94 g, 0,020 moles) y N,N-dimetiletilenodiamina (3,56 ml, 0,032 moles) se combinaron en etanol (30 ml) y se calentaron a reflujo durante 5 h. Después de enfriar, se evaporó el disolvente a presión reducida. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y se lavó una sola vez con solución acuosa al 10% de Na_{2}CO_{3} y luego con agua. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El producto bruto resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice como adsorbente con un eluyente de CHCl_{3}-MeOH 20:1 para proporcionar el compuesto e (3,2 g, rendimiento 45%).

1.6 Acilación del compuesto e

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13

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El compuesto e (354 mg, 1 mmol) se disolvió en una mezcla de 1,4-dioxano (3 ml) y trietilamina (0,14 ml, 1 mmol). La mezcla de reacción se puso en un baño de agua y se añadió cloruro de decanoílo (0,21 ml, 1 mmol). La mezcla resultante se agitó lentamente durante 15 h a la temperatura ambiente, y se concentró luego a presión reducida. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y se lavó sucesivamente con solución acuosa al 10% de Na_{2}CO_{3} y luego dos veces con agua. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida para proporcionar el compuesto 1.11 (3,2 g, rendimiento 80%).

Ejemplo 2

Este ejemplo ilustra la preparación de compuestos adicionales utilizando la metodología arriba descrita.

Preparación del Compuesto 2.1

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El compuesto 2.1 se preparó siguiendo los métodos arriba descritos para 1.11, con la excepción de que se utilizó 4-metoxianilina en lugar de 4-fluoroanilina. A continuación se proporcionan los datos de caracterización para 2.1: aceite viscoso incoloro; ^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 140ºC) \delta 0.90 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 1.16-1.48 (m, 14H), 1.46 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.92-2.10 (m, 2H), 2.05 (s, 6H), 2.16-224 (m, 1H), 2.41 (ddd, 1H, J_{1} = 5.2 Hz, J_{2} = 8.8 Hz, J_{3} = 12.0 Hz), 3.30(ddd, 1H, J_{1} = 4.8 Hz, J_{2} = 8.4 Hz, J_{3} = 14.0 Hz), 3.41 (ddd, 1H, J_{1} = 6.0 Hz, J_{2} = 9.2 Hz, J_{3} = 14.8 Hz), 3.86 (s, 3H), 5.10 (br q, 1H, J = 5.6 Hz), 7.05 (br m, 2H), 7.20 (br m, 1H), 7.32(br m, 1H), 7.32 (br m, 1H), 7.54(ddd, 1H, J_{1} = 1.2 Hz, J_{2} = 8.0 Hz, J_{3} = 8.2 Hz), 7.72(d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.84 (ddd, 1H, J_{1} = 2.0 Hz, J_{2} = 7.2 Hz, J_{3} = 8.4 Hz), 8.15 (dd, J_{1} = 0,8 Hz, J_{2} = 7,6 Hz) ppm. A la temperatura ambiente, el compuesto existe como una mezcla de rotámeros amídicos cis/trans, aprox. 3:2 por ^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 25ºC) \delta 4,82 (q, 1,4H, J = 6,8 Hz) & 5,19 (q, 1,0H, J = 7,2 Hz) ppm. MS (ESI^{+}) 521,5 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 2.2

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El compuesto 2.2 se preparó siguiendo los métodos arriba descritos para 1.11, con la excepción de que se utilizó 3-(dimetilamino)-1-aminopropano en lugar de 2-(dimetilamino)aminoetano. A continuación siguen los datos de caracterización para 2.2: aceite viscoso incoloro;

^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 140ºC) \delta 0.89 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.20-1.48 (m, 14H), 1.45 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.50-1.74 (m, 2H), 1.98-2.07 (m, 1H), 2.05 (s, 6H), 2.08-2.22(m, 3H), 3.21 (ddd,1H, J_{1} = 5.6 Hz, J_{2} = 10.4 Hz, J_{3} = 15.2 Hz), 3.34 (ddd, 1H, J_{1} = 5.2 Hz, J = 10.0 Hz, J_{3} = 15.2 Hz), 5.13 (q, 1H, J = 6.0 Hz), 7.30 (brm, 3H), 7.49 (brm, 1H), 7.55 (ddd, 1H, J_{1} = 1.2 Hz, J_{2} = 7.2 Hz, J_{3} = 8.0 Hz), 7.72 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.85 (ddd, 1H, J_{1} = 1.2 Hz, J_{2} = 6.8 Hz, J_{3} = 8.0 Hz), 8.14 (dd, 1H, J_{1}, = 1.2 Hz, J_{2} = 8.0 Hz) ppm. A la temperatura ambiente, el compuesto existe como una mezcla de rotámeros amídicos cis/trans, aprox. 2:3 por ^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 25ºC) \delta 4,78 (q, 1,0H, J = 6,8 Hz) & 5,24 (q, 1,5H, J = 6,8 Hz) ppm. MS (ESI^{+}) 523,4 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 2.3

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El compuesto 2.3 se preparó siguiendo los métodos arriba descritos para 1.11, con la excepción de que se utilizó 1-yododecano en lugar de cloruro de decanoílo. A continuación siguen los datos de caracterización para 2.3: aceite viscoso incoloro; ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) \delta 0,87 (t, 3H, J = 7.6 Hz), 1.20-1.35 (m, 15H), 1.66-1.74 (m, 2H), 2.88-2.96 (m, 1H), 3.09-3.16 (m, 1H), 3.40 (s, 6H), 3.47 (q, 1H, J = 6.8 Hz), 3.56-3.62 (m, 2H), 3.62-3.71 (m, 1H), 3.73-3.80 (m, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.49 (ddd, 1H, J_{1} = 1.2 Hz, J_{2} = J_{3} = 8.0 Hz), 7.71 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 7.79 (ddd, 1H, J_{1} = 1.6 Hz, J_{2} = 6.8 Hz, J_{3} = 8.4 Hz), 8.25(dd, 1H, J_{1} = 1.2 Hz, J_{2} = 8.0 Hz) ppm. MS(ESI^{+}) 495.4 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 2.4

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El compuesto 2.4 se preparó siguiendo los métodos arriba descritos para 1.11, con la excepción de que se utilizó 1-(2-aminoetil)piperidina en lugar de 2-(dimetilamino)-1-amino-etano. A continuación siguen los datos de caracterización para 2.4: aceite viscoso incoloro;

^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 140ºC) \delta 0.89(t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.18-1.48 (m, 20H), 1.45 (d, 3H, J=6.4 Hz), 1.98-2.08 (m, 2H), 2.18-2.33 (m, 5H), 2.40-2.48 (m, 1H), 3.29 (ddd, 1H, J_{1} = 5.6 Hz, J_{2} = 8.8 Hz, J_{3}= 14.4 Hz), 3.43 (ddd, 1H, J_{1} = 5.2 Hz, J_{2} = 8.4 Hz, J_{3} = 14.0 Hz), 5.11 (brm, 1H), 7.30 (brm, 3H), 7.49 (brm, 1H), 7.55 (dd, 1H, J_{1}=7.6 Hz, J_{2} = 8.0 Hz), 7.72 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.85 (ddd, 1H, J_{1} = 1.2 Hz, J_{2} = 7.2 Hz, J_{3} = 8.4 Hz), 8.14 (dd, 1H, J_{1} = 1.6 Hz, J_{2} = 8.0 Hz) ppm. A la temperatura ambiente, el compuesto existe como una mezcla de rotámeros amídicos cis/trans, aprox. 1:1 por ^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 251ºC) \delta 4,75 (q, 0,9H, J = 7,2 Hz) & 5,23 (q, 1,0H, J = 7,2 Hz) ppm. MS (ESI^{+}) 549,3 [MH]^{+}.

Ejemplo 3

Este ejemplo ilustra la preparación del Compuesto 3.1

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3.1 Preparación de ácido 5-metoxi-2-propionilamino-benzoico (f) a partir de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico

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A una solución a la temperatura ambiente de 5,068 g de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico (30,3 mmol, 1,00 equiv) disuelto en 25 ml de MDF seca se añadieron 2,90 ml de cloruro de propionilo (33,3 mmol, 1,10 equiv) gota a gota por medio de un embudo de adición durante un periodo de 45 minutos. Una vez completada la adición del cloruro de acilo, la mezcla de reacción heterogénea se agitó durante 14 horas a la temperatura ambiente y se vertió luego en 300 ml de agua. La mezcla agua/DMF resultante, con precipitado blanco, se agitó enérgicamente a la temperatura ambiente durante 1 hora, pasado cuyo tiempo se recogió el sólido por filtración a vacío, lavando el sólido con agua fría (2 x 50 ml). El sólido blanco se secó a vacío sobre pentóxido de fósforo durante 1 noche para proporcionar 5,17 g de f como un sólido blanco; rendimiento 76%; p.f. 139,7ºC. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,32 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 2,53 (q, 2H, J = 7,6 Hz), 3,86 (s, 3H), 7,24 (dd, 1H, J_{1} = 3,0 Hz, J_{2} = 9,2 Hz), 7,63 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 8,70 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 10,80 (s, 1H) ppm. MS (ESI^{-}) 222,1 [M-H]^{-}.

3.2 Preparación de 2-etil-3-(4-fluorofenil)-6-metoxi-3H-quinazolin-4-ona (g) a partir de ácido 5-metoxi-2-propionilamino-benzoico (f)

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A una mezcla de 2,036 g de f (9,12 mmol, 1,00 equiv) y 1,013 g de 4-fluoroanilina (9,12 mmol, 1,00 equiv) suspendida en 18 ml de tolueno se añadió una solución de 0,358 ml de tricloruro de fósforo (4,10 mmol, 0,450 equiv) disuelto en 5 ml de tolueno gota a gota con un embudo de adición durante un periodo de 15 minutos. La mezcla heterogénea resultante se calentó a reflujo durante 6 horas, después de cuyo tiempo la TLC indicó que no quedaba cantidad alguna de f (R_{f} = 0,15, 40% acetato de etilo en hexano). A la mezcla de reacción mantenida a la temperatura ambiente se añadieron 30 ml de solución acuosa al 10% de carbonato de sodio y la bifase resultante se agitó enérgicamente hasta que se disolvieron todos los sólidos. El tolueno se separó a vacío y se formó un precipitado. El sólido se recogió por filtración, y se lavó con agua (2 x 50 ml). El sólido secado al aire se purificó por recristalización en alcohol isopropílico para proporcionar 1,945 g de g como agujas incoloras, y se secó a vacío sobre pentóxido de fósforo; rendimiento 72%; p.f. 153,7ºC. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,24 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 2,44 (q, 2H, J = 7,6 Hz), 3,93 (s, 3H), 7,28 (2 x d, 2 x 2H, J = 4,4 Hz), 7,40 (dd, 1H, J_{1} = 2,8 Hz, J_{2} = 9,2 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,68 (d, 1H, J = 9,2 Hz) ppm. MS (ESI^{+}) 299,1 [MH]^{+}.

3.3 Preparación de 2-(1-bromoetil)-3-(4-fluorofenil)-6-metoxi-3H-quinazolin-4-ona (h) a partir de 2-etil-3-(4-fluorofenil)-6-metoxi-3H-quinazolin-4-ona (g)

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21

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A una mezcla de 1,016 g de g (3,406 mmol, 1,000 equiv) y 0,335 g de acetato de sodio (4,09 mmol, 1,20 equiv) en 20 ml de ácido acético glacial a 40ºC (temperatura externa, baño de aceite) se añadió una solución de 0,175 ml de bromo (3,41 mmol, 1,00 equiv) disuelto en 3 ml de ácido acético glacial gota a gota desde un embudo de adición durante un periodo de 30 minutos. Después de 3,5 horas, la TLC indicó que no quedaba cantidad alguna de g (R_{f} = 0,33, acetato de etilo al 33% en hexano) y la solución de reacción se vertió en 250 ml de agua. La mezcla resultante se agitó enérgicamente a la temperatura ambiente durante 2 horas, después de cuyo tiempo el precipitado se recogió por filtración a vacío, lavando con agua moderadamente caliente (aprox. 40ºC) (2 x 50 ml). El sólido se secó a vacío sobre pentóxido de fósforo durante una noche, proporcionando 1,103 g de h como un sólido blanco; rendimiento 86%; p.f. 166,4ºC. ^{1}H NMR (CDC1_{3}) \delta 2.08 (d, 3H, J = 6.7 Hz), 3.94 (s, 3H), 4.58 (q, 1H, J = 6.7 Hz), 7.18 (ddd, 1H, J_{1} = 2.7 Hz, J_{2} = 4.7 Hz, J_{3} = 8.4 Hz), 7.29 (ddd, 2H, J_{1} = 2.9 Hz, J_{2} = 8.2 Hz, J_{3} = 17.7 Hz), 7.42 (dd, 1H, J_{1} = 2.9 Hz, J_{2} = 8.9 Hz), 7.59 (ddd, J_{1} = 2.7 Hz, J_{2} 4.8 Hz, J_{3} = 5.4 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 2.9 Hz). 7.76 (d, 1H, J = 8.9 Hz) ppm. MS (ESI^{+}) 377.0 [MH]^{+}.

3.4 Preparación de 2-[1-(2-dimetilaminoetilamino)-etil]-3-(4-fluorofenil)-6-metoxi-3H-quinazolin-4-ona (j) a partir de 2-(1-bromoetil)-3-(4-fluorofenil)-6-metoxi-3H-quinazolin-4-ona (h)

22

Una mezcla de 0,273 g de h (0,724 mmol, 1,00 equiv) y 0,127 ml de 2-(dimetilamino)-1-aminoetano (1,16 mmol, 1,60 equiv) en 6 ml de etanol se calentó a reflujo durante 23 horas, después de cuyo tiempo la TLC indicó que no quedaba cantidad alguna de h (R_{f} = 0,73, acetato de etilo al 40% en hexano). El etanol se separó a vacío y el concentrado se repartió entre diclorometano (30 ml) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (25 ml). La capa acuosa separada se extrajo de nuevo con diclorometano (30 ml) y los extractos orgánicos reunidos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar un vidrio amarillo. El material bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (3,5 cm d.e. x 12 cm h) eluyendo con metanol al 5% en cloroformo. Las fracciones que contenían el producto a R_{f} = 0,16 (metanol al 10% en cloroformo) se reunieron y concentraron a vacío para proporcionar 260 mg de j como un sólido vítreo amarillo pálido; rendimiento 94%; p.f. 124,8ºC. ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 1,26 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 2,20 (s, 3H), 2,23 (dt, 1H, J_{1} = 4.8 Hz, J_{2} = 11.6 Hz), 2.42 (dt, 1H, J_{1} = 4.8 Hz, J_{2} = 10.0 Hz), 2.49-2.54 (m, 1H), 2.57-2.63 (m, 1H), 2.71 (br s, 1H), 3.42 (q, 1H, J = 6.8 Hz), 3.91 (s, 3H), 7.23-7.28 (m, 4H), 7.37 (dd, 1H, J_{1} = 2.8 Hz, J_{2} = 8.8 Hz), 7.62 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 8.8 Hz) ppm. MS(ESI^{+}) 385.2 [MH]^{+}.

3.5 Preparación de 3.1 a partir de 2-[1-(2-dimetilaminoetilamino)-etil]-3-(4-fluorofenil)-6-metoxi-3H-quinazolin-4-ona (j)

23

A una solución a la temperatura ambiente de 120 mg de j (0,313 mmol, 1,00 equiv), 0,048 ml de trietilamina (0,345 mmol, 1,10 equiv), y 2,0 mg de DMAP (0,016 mmol, 0,052 equiv) disuelta en 2 ml de 1,4-dioxano se añadieron 0,065 ml de cloruro de decanoílo (0,313 mmol, 1,00 equiv); se formó un precipitado incoloro. La mezcla de reacción se agitó durante una noche a la temperatura ambiente y se concentró luego a vacío para separar el dioxano. El concentrado resultante se repartió entre diclorometano y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (25 ml de cada uno). La capa acuosa separada se extrajo de nuevo con diclorometano (25 ml) y los extractos orgánicos reunidos se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar un aceite vítreo amarillo. El producto bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (3,5 cm d.e. x 8 cm h) eluyendo con metanol al 3% en cloroformo. Las fracciones que contenían el producto a R_{f} = 0,42 (metanol al 10% en cloroformo) se reunieron y se concentraron a vacío para proporcionar 104 mg de 3.1 como un sólido blanco; rendimiento 62%; p.f. 120,2ºC. ^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 140ºC) \delta 0.90 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.18-1.48(m, 14H), 1.44 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.94-2.06 (m, 2H), 2.05 (s, 6H), 2.13-2.21 (m, 1H), 2.36-2.44(m, 1H), 3.25 (ddd, 1H, J_{1} = 5.2 Hz, J_{2} 8.8 Hz, J_{3} = 14.4 Hz), 3.39 (ddd, 1H, J_{1} = 6.0 Hz, J_{2} = 9.2 Hz, J_{3} = 15.2 Hz), 3.91 (s, 3H), 5.10 (br m, 1H), 7.30 (br m, 3H), 7.46 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7.48 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7,57 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 7,69 (d, 1H, J = 8,8 Hz) ppm. A la temperatura ambiente, el compuesto existe como una mezcla de rotámeros amídicos cis/trans, aprox. 1:1 por ^{1}H NMR (d_{6}-DMSO; T = 25ºC, \delta 4,75 (q, 1,0H, J = 6,8 Hz) & 5,25 (q, 1,0H, J = 6,8 Hz) ppm. MS (ESI^{+}) 539,5 [MH]^{+}.

Ejemplo 4

Este ejemplo ilustra la preparación de compuestos adicionales utilizando la metodología proporcionada en el Ejemplo 3.

Preparación de 4.1

24

\vskip1.000000\baselineskip

El compuesto 4.1 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó 4-metoxianilina en lugar de 4-fluoroanilina. Siguen los datos de caracterización para 4.1: sólido blanco, p.f. 124,2ºC. MS (ESI^{+}) 551,5 [MH]^{+}.

Preparación de 4.2

25

\vskip1.000000\baselineskip

El compuesto 4.2 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-6-cloro-benzoico en lugar de ácido 2-amino-6-metoxi-benzoico y se utilizó 4-metoxianilina en lugar de 4-fluoroanilina. Siguen los datos de caracterización para 4.2: sólido amarillo pálido, de punto de fusión bajo. MS (ESI^{+}) 555,3 [MH]^{+}

Preparación de 4.3

26

El compuesto 4.3 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-6-nitro-benzoico en lugar de ácido 2-amino-6-metoxi-benzoico. Siguen los datos de caracterización para 4.3: aceite anaranjado. MS (ESI^{+}) 554,3 [MH]^{+}

Preparación de 4.4

27

El compuesto 4.4 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-5-metil-benzoico en lugar de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico. Siguen los datos de caracterización para 4.4: sólido blanco, p.f. 121,0ºC. MS (ESI^{+}) 523,4 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 4.5

28

El compuesto 4.5 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-5-cloro-benzoico en lugar de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico. Siguen los datos de caracterización para 4.5: sólido blanco, p.f. 122,9ºC. MS (ESI^{+}) 543,3 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 4.6

29

El compuesto 4.6 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-5-yodo-benzoico en lugar de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico. Siguen los datos de caracterización para 4.6: sólido amarillo pálido de punto de fusión bajo. MS (ESI^{+}) 635,3 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 4.7

30

El compuesto 4.7 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-3,4,5-trimetoxi-benzoico en lugar de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico. Siguen los datos de caracterización para 4.7: sólido amarillo pálido, p.f. 106,7ºC. MS (ESI^{+}) 599,5 [MH]^{+}.

Preparación del compuesto 4.8

31

El compuesto 4.8 se preparó siguiendo la síntesis de 3.1 arriba descrita, con la excepción de que se utilizó ácido 2-amino-6-fluoro-benzoico en lugar de ácido 2-amino-5-metoxi-benzoico. Siguen los datos de caracterización para 4.8: aceite viscoso incoloro. MS (ESI^{+}) 527,3 [MH]^{+}.

Ejemplo 5

Este ejemplo ilustra la preparación del Compuesto 5.1 a partir del compuesto 4.6

32

Un matraz de reacción de Schlenck resellable se cargó con 32 mg de 4.6 (50 \mumol, 1,0 equiv), 14 mg de carbonato de potasio (100 \mumol, 2,0 equiv), 10 mg de ácido fenilborónico (82 \mumol, 1,6 equiv), 10 mg de tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (8,7 \mumol, 0,17 equiv), y 2,0 ml de DMF. La mezcla se desgasificó por congelación-vacío-descongelación (tres ciclos), se expuso luego a atmósfera de nitrógeno y se calentó a 80ºC (temperatura externa, baño de aceite) durante 2 horas, después de cuyo tiempo MS y TLC indicaban que no quedaba cantidad alguna de 4.6 ([MH]^{+} = 635,3; M_{f} = 0,26, metanol al 6% en cloroformo). La DMF se eliminó a vacío y el concentrado se adsorbió en una columna de gel de sílice (2,5 cm d.e. x 12 cm h) y se eluyó con metanol al 3% en cloroformo. Las fracciones que contenían el producto se reunieron y se concentraron a vacío para proporcionar 23 mg de 5.1 como un aceite incoloro; rendimiento 79%. MS (ESI^{+}) 585,3 [MH]^{+}.

Ejemplo 6

Este ejemplo ilustra la preparación del compuesto 6.1 a partir del Compuesto 4.6

33

Un matraz de reacción de Schlenck resellable se cargó con 17 mg de 4.6 (26 \mumol, 1,0 equiv), 15 \mul de fenilacetileno (135 mmol, 5,2 equiv), 2,0 mg de dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II) (2,7 \mumol, 0,1 equiv), 1,0 mg de yoduro de cobre (I) (4,0 \mumol, 0,15 equiv), y 3,0 ml de trietilamina. La mezcla se desgasificó por congelación-vacío-descongelación (tres ciclos), se expuso luego a atmósfera de nitrógeno y se agitó a la temperatura ambiente. Después de 1,5 horas, la MS indicó que no quedaba cantidad alguna de 4.6 y la mezcla de reacción se concentró a vacío y se adsorbió luego en una columna de gel de sílice (2,5 cm d.e. x 10 cm h) y se eluyó con metanol al 3% en cloroformo. Las fracciones que contenían el producto se reunieron y concentraron a vacío para proporcionar 16 mg de 6.1 como un aceite incoloro; rendimiento 98%. MS (ESI^{+}) 609,3 [MH]^{+}.

Ejemplo 7

Este ejemplo ilustra la preparación del compuesto 7.1 a partir del compuesto 6.1.

34

Se introdujo hidrógeno gaseoso (por medio de un balón) en un matraz purgado con nitrógeno cargado con 8,2 mg de 6.1 (13 \mumol, 1,0 equiv), 14 mg de paladio sobre carbono activado (10% en peso de Pd; 13 \mumol, equiv), y 3,0 ml de metanol. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 16 horas y se filtró luego a través de un taco de Celita. El filtrado se concentró a vacío para proporcionar una película de color amarillo pálido. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (2,5 cm d.e. x 10 cm h) eluyendo con metanol al 3% en cloroformo. Las fracciones que contenían el producto a R_{f} = 0,29, metanol al 6% en cloroformo, se reunieron y se concentraron a vacío para proporcionar 6,6 mg de 7.1 como una película incolora; rendimiento 80%. MS (ESI^{+}) 613,4 [MH]^{+}.

Ejemplo 8

Este ejemplo ilustra la preparación del compuesto 8.1 a partir del compuesto 4.3.

35

Se introdujo hidrógeno gaseoso (por medio de un balón) en un matraz purgado con nitrógeno y cargado con 12,8 mg de 4.3 (23 \mumol, 1,0 equiv), 12 mg de paladio sobre carbono activado (10% en peso Pd; 12 \mumol, 0,52 equiv), y 4,0 ml de metanol. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 16 horas y se filtró luego a través de un taco de Celita. El filtrado se concentró a vacío para proporcionar una película de color amarillo-anaranjado. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (2,5 d.e. x 10 cm h) eluyendo con metanol al 5% en cloroformo. Las fracciones que contenían el producto a R_{f} = 0,11, metanol al 10% en cloroformo, se reunieron y se concentraron a vacío para proporcionar 5,8 mg de 8.1 como una película incolora; rendimiento 48%. MS (ESI^{+}) 524,3 [MH^{+}].

Ejemplo 9

Este ejemplo ilustra procedimientos de evaluación utilizados en la caracterización de los compuestos de la presente invención.

Se obtuvieron placas originales de genotecas químicas a partir de vendedores comerciales y contenían compuestos individuales a una concentración de 5 mg/ml en DMSO, o en algunos casos a 1 mg/ml. A partir de éstas, se prepararon placas de múltiples compuestos que contenían 10 compuestos en cada pocillo, y se diluyeron éstas en DMSO al 20% a una concentración de 50 \mug/ml (10 \mug/ml para las que comenzaban a 1 mg/ml). Una parte alícuota de 20 \mul de cada mezcla se puso en las placas de ensayo, las cuales se guardaron congeladas hasta su utilización.

Se prepararon células que expresaban CXCR3 de acuerdo con métodos estándar y se utilizaron en la mayoría de los ensayos. Las células se cultivaron en IMDM-5% FBS, y se recogieron cuando la concentración estaba comprendida entre 0,5 y 1,0 x 10^{6} células/ml. Las células se centrifugaron y se resuspendieron en tampón de ensayo (HEPES 20 mM, NaCl 80 mM, CaCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 5 mM, y con 0,2% de seroalbúmina bovina, pH 7,1) a una concentración de 5,6 x 10^{6} células/ml. Utilizando un sistema automático Multi-Probe, se añadieron 0,09 ml de células a cada pocillo de las placas de ensayo de prueba utilizadas para el ensayo que contenían los compuestos, seguido por 0,09 ml de ^{125}I-IP-10 (de New England Nuclear) diluido en tampón de ensayo (concentración final \sim25-100 pM, con \sim50.000 cpm por pocillo). La concentración final de los compuestos era 1-5 \mug/ml en cada caso. Las placas se sellaron y se incubaron durante aproximadamente 3 horas a 4ºC en una plataforma de sacudidas. (En algunos experimentos se utilizó MIG radiomarcado). Las placas de ensayo se recogieron utilizando placas de filtro Packard, pre-impregnadas en solución de PEI, en el aparato de recogida a vacío. Se añadió fluido de centelleo (35 \mul) a cada uno de los pocillos, se sellaron las placas y se sometieron a recuento en un contador de centelleo Top Count. Los pocillos de control contenían o bien sólo diluyente (para recuentos totales) o un exceso de IP-10 (1 \mug/ml, para fijación inespecífica) y se utilizaron para calcular el porcentaje de inhibición total para cada serie de compuestos. Ensayos adicionales sobre compuestos individuales se realizaron de la misma manera. Los valores CI_{50} son las concentraciones requeridas para reducir en un 50% la fijación de IP-10 marcado al receptor.

Se realizaron ensayos de movilización de calcio por marcación de linfocitos de sangre periférica humana (cultivados en 10 ng/ml de IL-2 durante al menos 12 días) con tinte INDO-1 (45 min a la temperatura ambiente), lavado con PBS, y resuspensión en tampón fundente (HBSS con 1% de suero de bovino fetal). Para cada ensayo, se incubaron 1 x 10^{6} células a 37ºC en la cubeta de un espectrómetro PTI, y se representó gráficamente la relación de emisión a 400/490 mm a lo largo del tiempo (típicamente 2-3 minutos), añadiéndose los compuestos en 5 segundos, seguidos por IP-10 u otras quimioquinas.

Los ensayos de quimiotaxis se realizaron utilizando placas de filtro de 5 \mum (Neuroprobe) con la sustancia quimioatrayente colocada en la cámara inferior, y una suspensión de células de 50.000 a 100.000 células en la cámara superior. Los ensayos se incubaron 1-2 horas a 37ºC, y el número de células en la cámara inferior se cuantificó utilizando un ensayo CyQuant (Molecular Probes).

La fijación de IP-10 o MIG a CXCR3 se optimizó primeramente por ensayo de diversos valores de pH y concentraciones de sal en cuanto a su efecto en un ensayo de competición homóloga. La fijación máxima de MIG radiomarcado tiene lugar en condiciones de sal baja (80 mM), en comparación con sal normal (140 mM), si bien no existe diferencia alguna entre pH 7,1 y 7,4.

Ejemplo 10

Este ejemplo proporciona una tabla de compuestos preparados utilizando métodos similares a los proporcionados en el Ejemplo 1, y evaluados utilizando los métodos descritos en el Ejemplo 9. En la Tabla siguiente, la actividad se expresa como sigue: +, CI_{50} > 5 \muM; ++, 5 \mum > CI_{50} > 0,8 \muM; +++, CI_{50} \leq 0,8 \muM

TABLA 1

36

Adicionalmente, el compuesto 1.11 se ensayó contra otros cinco receptores de quimioquinas en linfocitos activados, y no interfería con la señalización por dichas quimioquinas.

Debe entenderse que los ejemplos y realizaciones descritos en esta memoria se dan únicamente para propósitos ilustrativos y que diversas modificaciones o cambios pueden ser ideadas a la vista de los mismos por las personas expertas en la técnica y deben incluirse dentro del espíritu y el ámbito de esta solicitud y del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patente citadas en esta memoria se incorporan por la presente por referencia en su totalidad para todos los fines.

Claims

1. Una composición que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto que tiene la fórmula:

37

en la cual

el subíndice n es un número entero de 0 a 4;

Ar es fenilo sustituido en donde el sustituyente se selecciona de halógeno, OR', -OC(O)R', -NR'R'', -SR', -R', -CN, -NO_{2}, -CO_{2}R', -CONR'R'', -C(O)R', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR''C(O)_{2}R', -NR'-C(O)NR''R''', -NH-C(NH_{2})=NH, -NR'C(NH_{2})=NH, -NH-C(NH_{2})=NR', -S(O)R', -S(O_{2})R', -S(O_{2})NR'R'', -N_{3}, -CH(Ph)_{2}, perfluoro-alcoxi(C_{1}-C_{4}), y perfluoroalquilo(C_{1}-C_{4}), en un número que varía desde cero hasta el número total de valencias libres del sistema de anillos aromáticos; y donde R', R'', y R''' se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo(C_{1}-C_{8}) y heteroalquilo, arilo insustituido y heteroarilo (arilo insustituido)-alquilo(C_{1}-C_{4}), y (arilo insustituido)oxi-alquilo(C_{1}-C_{4});

R^{1} es un miembro seleccionado del grupo constituido por alquilo(C_{5}-C_{15}) sustituido o insustituido;

R^{2} es un miembro seleccionado del grupo constituido por alquilo(C_{1}-C_{8}) sustituido o insustituido;

cada R^{3} representa independientemente un sustituyente arilo seleccionado del grupo constituido por halógeno, hidroxi, alquilo(C_{1}-C_{8}), alcoxi(C_{1}-C_{8}), nitro, ciano, amino y mono- o dialquilamino;

X es N;

Y s un miembro seleccionado del grupo constituido por alquileno(C_{2}-C_{8}) sustituido o insustituido y hetero-alquileno(C_{2}-C_{8}) sustituido o insustituido; y

Z es -NR^{4}R^{5} en donde R^{4} y R^{5} se seleccionan independientemente del grupo constituido por hidrógeno y alquilo(C_{1}-C_{8}) o R^{4} y R^{5} pueden combinarse con el átomo de nitrógeno al cual está unido cada uno para formar un anillo de cinco, seis o siete miembros;

en donde

alquilo es un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada, o cíclico, o combinación de los mismos, que puede ser totalmente saturado, mono- o poliinsaturado y puede incluir radicales di- y multivalentes;

cuando dichos restos alquilo, alquileno o heteroalquileno están sustituidos, los sustituyentes se seleccionan independientemente del grupo constituido por -OR', =O, =NR, =N-OR', -NR'R'', -SR', -halógeno, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO_{2}R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O_{2})R', -NH-C(NH_{2})=NH, -NR'C(NH_{2})=NH, -NH-C(NH_{2})=NR', -S(O)R', -S(O)_{2}R', -S(O)_{2}NR'R'', -CN y -NO_{2}, y R', R'' y R''' se refieren cada uno independientemente a hidrógeno, alquilo(C_{1}-C_{8}) insustituido y heteroalquilo.

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R^{1} es un grupo acilo(C_{8}-C_{14}).

3. La composición de acuerdo con la reivindicación 2, en donde R^{2} es alquilo(C_{1}-C_{4}) insustituido.

4. La composición de acuerdo con la reivindicación 3, en donde Y es alquileno (C_{2}-C_{5}).

5. La composición de acuerdo con la reivindicación 4 en donde Z es dimetilamino.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 5, en donde n es 0.

7. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, en donde R^{2} es metilo e Y es etileno.

8. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, en donde dicho fenilo sustituido se selecciona del grupo constituido por 4-fluorofenilo, 4-metoxifenilo, 4-clorofenilo, 4-metilfenilo y 4-bromofenilo.

9. Un método in vitro de modulación de la función de CXCR3 que comprende poner en contacto una proteína CXCR3 o una forma truncada de la misma con una cantidad moduladora de CXCR3 de un compuesto como se define en la reivindicación 1.

10. Uso de un compuesto como se define en la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por CXCR3 seleccionada del grupo constituido por esclerosis múltiple, artritis reumatoide, diabetes tipo I, psoriasis, cáncer e infección por HIV.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicha afección o enfermedad mediada por CXCR3 es esclerosis múltiple.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicho medicamento está formulado para administración oral o intravenosa.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicho medicamento es para administración a un individuo seleccionado del grupo constituido por humano, rata, perro, vaca, caballo y ratón.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde dicho individuo es humano.

15. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14 en donde dicho compuesto es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8.

16. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde n es 0, R^{1} es acilo(C_{5}-C_{15}) insustituido, R^{2} es alquilo(C_{1}-C_{4}) insustituido, Y es alquileno(C_{2}-C_{4}) insustituido, y Z se selecciona del grupo constituido por metilamino, dimetil-amino, etilamino y dietilamino.

17. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso en terapia médica.

18. La composición de la reivindicación 17, en donde dicho uso es en el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por CXCR3.

19. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicha afección o enfermedad mediada por CXCR3 se selecciona del grupo constituido por esclerosis múltiple, artritis reumatoide, diabetes tipo I, psoriasis, cáncer e infección por HIV.