ES2260859T3 - Profarmacos polimericos con bloqueo trialquilo facilitado de agentes bioactivos que contienen amino. - Google Patents
Profarmacos polimericos con bloqueo trialquilo facilitado de agentes bioactivos que contienen amino.Info
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Abstract
Un compuesto que comprende la fórmula: (Ver fórmula) R, en el que: B es H, OH, OSiR13, un residuo de un fragmento blanco que contiene amina o un residuo de un fragmento que contiene hidroxilo; L1 y L2 son fragmentos de unión bifuncionales; Y2 es O o S; R2 se selecciona del grupo constituido por alquilos C1_6, alquilos C3_12 ramificados, cicloalquilos C3_8, alquilos C1_6 sustituidos, cicloalquilos C3_8 sustituidos, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos C1_6, heteroalquilos C1_6 sustituidos, alcoxi C1_66, fenoxi y heteroalcoxi C1_6; R9, R10 y R13 son independientemente uno de hidrógeno, alquilos C1_6, alquilos C3_12 ramificados, cicloalquilos C3_8, alquilos C1_6 sustituidos, cicloalquilos C3_8 sustituidos, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos C1_6, heteroalquilos C1_6 sustituidos, alcoxi C1_6, fenoxi y heteroalcoxi C1_6; Ar es un fragmento que, cuando está incluido en la Fórmula (I), forma un hidrocarburo aromático con múltiples sustituciones o un grupo heterocíclico con múltiples sustituciones; (m) es cero o uno; y R11 es un residuo polímero.
Description
Profármacos poliméricos con bloqueo trialquilo
facilitado de agentes bioactivos que contienen amino.
La presente invención se refiere a profármacos
dobles. En particular, la invención se refiere a profármacos dobles
basados en polímeros que tienen enlaces reversibles que incluyen
fracciones amino o hidroxilo de compuestos químicos y materiales
biológicamente activos tales como enzimas, proteínas y
similares.
A lo largo de los años se han propuesto diversos
procedimientos para administrar a mamíferos materiales
biológicamente eficaces. Muchos agentes medicinales están
disponibles como sales solubles en agua y pueden incluirse en
formulaciones farmacéuticas con relativa facilidad. Los problemas
sobrevienen cuando el agente medicinal deseado es insoluble en
fluidos acuosos o se degrada rápidamente in vivo. Por
ejemplo, los alcaloides son a menudo especialmente difíciles de
solubilizar.
Una manera de solubilizar agentes medicinales es
incluirlos como parte de un profármaco soluble. Los profármacos
incluyen derivados químicos de un compuesto biológicamente activo
principal que, tras la administración, eventualmente libera el
compuesto principal in vivo. Los profármacos permiten al
artesano modificar el inicio y/o duración de la acción de un agente
in vivo y puede modificar el transporte, distribución o
solubilidad de un fármaco en el cuerpo. Además, las formulaciones de
profármacos a menudo reducen la toxicidad y/o superan dificultades
que se encuentran cuando se administran preparaciones farmacéuticas.
Los ejemplos típicos de profármacos incluyen fosfatos orgánicos o
ésteres de alcoholes o trialcoholes. Ver Remington's Pharmaceutical
Sciences, 16º Ed., A. Osol, Ed. (1980), cuya descripción se
incorpora en este documento por referencia.
Los profármacos son a menudo formas del
compuesto activo o principal, biológicamente inertes, o
sustancialmente inactivos. La tasa de liberación del fármaco activo,
es decir, la tasa de hidrólisis, está influenciada por diversos
factores pero especialmente por el tipo de enlace que une al fármaco
principal con el modificador. Debe tenerse cuidado para evitar
preparar profármacos que se eliminan a través del riñón o del
sistema reticuloendotelial, etc. antes de que se produzca una
cantidad de hidrólisis suficiente del compuesto principal.
Incorporando un polímero como parte del sistema del profármaco puede
incrementarse la vida media en circulación del fármaco.
Aunque los conceptos mencionados anteriormente
sobre sistemas de administración basados en profármacos han probado
ser útiles en muchas circunstancias, existen no obstante
situaciones en las que resultan deseables otras alternativas. Por
ejemplo, Bundgaard en "The Double Prodrug Concept and Its
Applications" en Advanced Drug Delivery, Reviews, 3 (1989)
39-65, (cuyo contenido se incorpora en este
documento como referencia) señala que en muchos casos es difícil
obtener un profármaco con la combinación apropiada de estabilidad
adecuada in vitro y alta susceptibilidad para regenerar el
fármaco principal in vivo. Como señala Bundgaard, una manera
promisoria de superar algunos de los problemas encontrados
previamente incluye el uso de compuestos latentes en cascada o
"pro-profármacos". En tales sistemas, la
secuencia de reacción hidrolítica incluye una primera etapa que
usualmente es un clivaje enzimático y la segunda etapa incluye una
hidrólisis no enzimática que tiene lugar sólo después de que la
primera etapa haya ocurrido. El uso de sistemas de transporte
basados en polímeros como parte de la tecnología de compuestos
latentes en cascada no se ha descrito.
Shan y col. destacó recientemente los problemas
asociados con la preparación de profármacos de fármacos que
contienen aminas en "Prodrug Strategies Based on Intramolecular
Cyclization Reactions" J. Pharm. Sci. Julio 1997 Vol. 86, Nº 7,
765-767, (cuyo contenido se incluye en este
documento como referencia). Para evitar la relativa estabilidad del
enlace amida, los autores describen profármacos que incorporan
diversos fragmentos capaces de sufrir reacciones de ciclización para
liberar el fármaco principal. Los mecanismos desencadenantes
químicos o biológicos que inician las reacciones de ciclización son
independientes de aquellos necesarios para liberar el fármaco
original por medio de hidrólisis del enlace amida. Nuevamente, se
describen sistemas no basados en polímeros.
Se cree que a pesar del trabajo descrito en el
campo de los profármacos, no se abordaron suficientemente algunos
problemas específicos. Por ejemplo, las técnicas descritas
anteriormente no abordan suficientemente los problemas de
solubilidad de muchos compuestos principales. Además, tampoco se
desarrolló suficientemente el problema de diseñar para obtener un
aumento suficiente de la vida media circulante para el profármaco.
Por ello, sigue existiendo una necesidad de proveer técnicas
adicionales para brindar al artesano técnicas alternativas para
unión a vehículos de transporte para regular el efecto biológico.
Además, sería deseable proveer técnicas adicionales para abordar
problemas asociados con residuos amino y/o hidroxilo de compuestos
principales y así evitar la hidrólisis excesivamente rápida o lenta
de la forma de transporte del compuesto principal a pH
fisiológico.
\newpage
La presente invención aborda los problemas
descritos anteriormente. En un aspecto de la invención, se proveen
compuestos de Fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en los
que:
B es H, OH, OSiR_{13}, un residuo de un
fragmento blanco que contiene amina o un residuo de un fragmento que
contiene hidroxilo; L_{1} es un fragmento de unión bifuncional tal
como
o
\vskip1.000000\baselineskip
L_{2} es un fragmento de unión bifuncional tal
como
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
G es
---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{Y _{1} }}
---
o
CH_{2};
Y_{1-2} son independientemente
O ó S;
M es X ó Q; en el que
X es un grupo aceptor de electrones;
Q es un fragmento que contiene un par de
electrones libres ubicados a una distancia de tres a seis átomos
desde C(=Y_{2});
R_{1}, R_{2} y R_{4} son
independientemente uno de alquilos C_{1-6},
alquilos C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6}, heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos, alcoxi C_{1-6}, fenoxi y heteroalcoxi
C_{1-6};
R_{7}, R_{8}, R_{9}, R_{10} y R_{13}
son independientemente hidrógeno o un miembro del grupo que define
R_{1}, R_{2} y R_{4};
Ar es un fragmento que cuando está incluido en
la Fórmula (I) forma un hidrocarburo aromático con múltiples
sustituciones o un grupo heterocíclico con múltiples
sustituciones;
(m) es cero o uno;
(n) es cero o un número entero positivo;
(p) es cero, uno o dos;
(q) es tres o cuatro; y
R_{11} es un residuo polímero, tal como un
óxido de polialquileno soluble en agua.
En ciertos aspectos de preferencia, Ar es un
fenilo sustituido con dialquilo tal como un dimetilfenilo y/o B es
un grupo saliente tal como N-hidroxibenzotriazolilo,
N-hidroxiftalimidilo, halógeno,
p-nitrofenoxi, imidazolilo,
N-hidroxisuccinimidilo, tiazolidiltiona u otros
grupos activadores. Alternativamente, B es un residuo de un
compuesto conteniendo amino o hidroxilo para el que es deseable
mejorar una o más de sus propiedades de solubilidad en agua,
disminución de antigenicidad, administración de profármaco y/o
liberación controlada. Por ejemplo, B puede ser un residuo de una
enzima, proteína o compuesto orgánico tal como daunorrubicina,
doxorrubicina, mostaza de p-aminoanilina,
camptotecina, paclitaxel, AraC, etc.
Para los objetivos de la presente invención,
debe entenderse que el término "residuo" significa la parte de
un compuesto biológicamente activo que permanece tras sufrir la
reacción en la que la parte vehículo del profármaco ha sido unida
por modificación de un grupo hidroxilo o amino.
Para los objetivos de la presente invención,
debe entenderse que el término "alquilo" incluye alquilos
C_{1-12} sustituidos lineales o ramificados,
incluyendo alcoxi, cicloalquilos C_{3-8} o
cicloalquilos sustituidos, etc.
Los profármacos dobles de la presente invención
son sistemas de administración únicos. De preferencia la parte
polimérica se libera primero por hidrólisis o actividad esterasa y
posteriormente el fragmento resultante "segundo profármaco"
sufre una reacción de ciclización para regenerar el compuesto
principal conteniendo amina o hidroxilo (es decir bioactivo) in
vivo.
Algunas de las mayores ventajas de los
compuestos profármacos dobles de la presente invención es que son
capaces de solubilizar compuestos que contienen amina o hidroxilo
extendiendo su vida media comparada con la de sus homólogos
profármacos nativos o "segundos". La parte polimérica puede
también impartir un efecto de reducción de antigenicidad en el
compuesto principal. Otra ventaja de los sistemas de la presente
invención es que el enlace entre la parte polimérica y el compuesto
"segundo profármaco" como se describió anteriormente, está
diseñado para hidrolizarse o clivarse a una velocidad que permite al
compuesto conservar su estabilidad y vida media circulante
aumentadas. El fármaco nativo, sin embargo, no es liberado en este
punto. La molécula nativa o principal deseada se liberará una vez
que el "segundo profármaco" haya sufrido la reacción de bloqueo
por lactonización de trialquilo relativamente rápida. Resulta
fácilmente evidente que este enfoque de profármaco doble de la
presente invención ofrece características únicas e inesperadas que
mejoran la vida media circulante y la solubilidad de las moléculas
nativas o sin modificar.
Se proveen también procedimientos para fabricar
y usar los compuestos y conjugados descritos en este documento.
Las Figuras 1-2 ilustran de
manera esquemática dos procedimientos para formar profármacos dobles
de la presente invención.
Las Figuras 3-16 ilustran los
esquemas de reacción asociados con los Ejemplos.
En un aspecto de la invención, se proveen
compuestos de fórmula (I):
en los
que:
B es H, OH, OSiR_{13}, un residuo de un
fragmento blanco que contiene amina o un residuo de un fragmento que
contiene hidroxilo; L_{1} es un fragmento de unión bifuncional tal
como
o
L_{2} es un fragmento de unión bifuncional tal
como
G es
---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{Y _{1} }}
---
o
CH_{2};
Y_{1-2} son independientemente
O ó S;
M es X ó Q; en el que
X es un grupo aceptor de electrones
Q es un fragmento que contiene un par de
electrones libres ubicados a una distancia de tres a seis átomos
desde C(=Y_{2});
R_{1}, R_{2} y R_{4} son
independientemente uno de alquilos C_{1-6},
alquilos C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6}, heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos, alcoxi C_{1-6}, fenoxi y heteroalcoxi
C_{1-6};
R_{7}, R_{8}, R_{9}, R_{10} y R_{13}
son independientemente uno de hidrógeno, alquilos
C_{1-6}, alquilos C_{3-12}
ramificados, cicloalquilos C_{3-8}, alquilos
C_{1-6} sustituidos, cicloalquilos
C_{3-8} sustituidos, arilos, arilos sustituidos,
aralquilos, heteroalquilos C_{1-6}, heteroalquilos
C_{1-6} sustituidos, alcoxi
C_{1-6}, fenoxi y heteroalcoxi
C_{1-6};
Ar es un fragmento que cuando está incluido en
la Fórmula (I) forma un hidrocarburo aromático con múltiples
sustituciones o un grupo heterocíclico con múltiples
sustituciones;
(m) es cero o uno;
(n) es cero u un número entero positivo;
(p) es cero, uno o dos;
(q) es tres o cuatro; y
R_{11} es un residuo polímero.
En referencia a la Fórmula I, puede verse que el
fragmento Ar es un fragmento que cuando está incluido en la Fórmula
I forma un hidrocarburo aromático con múltiples sustituciones o un
grupo heterocíclico con múltiples sustituciones. Una característica
clave es que el fragmento Ar es de naturaleza aromática.
Generalmente, para ser aromático, los electrones \pi deben
compartirse dentro de una "nube" por encima y por debajo del
plano de una molécula cíclica. Además, el número de electrones \pi
debe satisfacer la regla de Hückle (4n+2). Los expertos en la
técnica se darán cuenta de que una miríada de fragmentos satisfará
los requerimientos aromáticos del fragmento para la Fórmula I y por
lo tanto son adecuados para el uso en este documento.
Los fragmentos hidrocarbonados aromáticos de
preferencia incluyen, sin limitación:
en los que J es O, S o NR_{14}, E
y Z son independientemente CR_{14} o NR_{14}; y R_{14} se
selecciona del mismo grupo que aquel que define R_{9} en la
Fórmula I por ejemplo hidrógeno, alquilos C_{1-6},
etc. También se contemplan isómeros de los anillos de 5 y 6 miembros
como también sistemas benzo y dibenzo y sus congéneres relacionados.
Los artesanos expertos en la técnica también apreciarán que los
anillos aromáticos puedan sustituirse opcionalmente con heteroátomos
tales como O, S, NR_{14}, etc. siempre que se cumpla con la regla
de Hückle. Además, las estructuras aromáticas o heterocíclicas
pueden opcionalmente estar sustituidas con halógeno(s), y/o
cadenas laterales. Sin embargo, todas las estructuras adecuadas para
fragmentos Ar de la presente invención son capaces de permitir que
los fragmentos L_{2} y R_{2} estén en conformación orto dentro
del mismo plano, como se muestra a
continuación:
en los que L_{2} y R_{2} son
como se definió anteriormente con respecto a la Fórmula (I) y
R_{3}, R_{5} y R_{6} se seleccionan independientemente del
grupo que define a R_{9} o un grupo ciano, nitro, carboxilo,
acilo, acilo sustituido,
carboxialquilo.
En aspectos de preferencia de la presente
invención, R_{2} es alquilo C_{1-6}. De más
preferencia, R_{2} es metilo. Además, R_{1} y R_{4} son de
preferencia alquilo, por ejemplo metilo. Y_{1-2}
son de preferencia O, y (p) es de preferencia uno.
Para los objetivos de la presente invención, los
alquilos sustituidos incluyen carboxialquilos, aminoalquilos,
dialquilaminos, hidroxialquilos y mercaptoalquilos; los
cicloalquilos sustituidos incluyen fragmentos tales como
4-clorociclohexilo; los arilos incluyen fragmentos
tales como naftilo; los arilos sustituidos incluyen fragmentos tales
como 3-bromofenilo; los aralquilos incluyen
fragmentos tales como toluilo; los heteroalquilos incluyen
fragmentos tales como etiltiofeno; los heteroalquilos sustituidos
incluyen fragmentos tales como 3-metoxitiofeno;
alcoxi incluye fragmentos tales como metoxi; y fenoxi incluye
fragmentos tales como 3-nitrofenoxi. Debe entenderse
que halo incluye fluoro, cloro, iodo y bromo.
Como se muestra anteriormente, la invención
incluye fragmentos de enlace bifuncionales L_{1} y L_{2}, con
L_{1} sirviendo para unir R_{11} y C(=Y_{2}) y L_{2} uniendo
el fragmento Ar y B. En formas de realización de preferencia,
L_{1} incluye el fragmento (M) que es un grupo aceptor de
electrones (nombrado en este documento como X) o un fragmento
conteniendo un par de electrones libres ubicados a una distancia de
tres a seis átomos desde C(=Y_{2}) (nombrado en este documento
como Q). L_{1} y L_{2} pueden también incluir fragmentos
bifuncionales tales como alquilos C_{1-6},
alquilos C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, etc.
El primer enlace lábil del sistema de
profármacos dobles, que une L_{1} a
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{Y _{2} }},
se selecciona para hidrolizarse,
tal como por medio de hidrólisis catalizada por una esterasa in
vivo a una velocidad que genere cantidades suficientes del
compuesto "segundo" profármaco dentro de un tiempo adecuado
tras la administración. El término "cantidades suficientes"
para los objetivos de la presente invención significará una cantidad
que puede sufrir posteriormente bloqueo por lactonización de
trialquilo in vivo para liberar el compuesto nativo y obtener
el efecto deseado. Cuando está presente como parte de L_{1}, (n)
es de preferencia 1 ó
2.
En aquellos aspectos de la fórmula I donde
L_{1} incluye M, el fragmento puede ser un grupo aceptor de
electrones, nombrado en este documento como X. En particular, X
puede ser fragmentos tales como O, NR_{12},
---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{Y _{3} }} ---
\uelm{N}{\uelm{\para}{}}
---,
S, SO y SO_{2} donde Y_{3} es igual a como
se definió para Y_{1} y R_{12} es igual a como se definió para
R_{9}, es decir H, alquilos C_{1-6}, etc., y
R_{12} es igual a como se definió para R_{9}, por ejemplo H,
alquilos C_{1-6}, alquilos ramificados, etc.. De
preferencia, sin embargo cuando X es NR_{12}, R_{12} es H.
Resulta de preferencia que X sea O o NR_{12}.
Alternativamente, cuando L_{1} incluye Q, que
es un fragmento que contiene un par de electrones libres ubicados a
una distancia de tres a seis átomos desde el fragmento C(=Y_{2}),
el polímero R_{11}, está unido a Q de preferencia por medio de un
heteroátomo tal como oxígeno. En una forma de realización de
preferencia, el par de electrones libres está a 5 átomos de este
oxígeno. Q puede seleccionarse de la lista no limitante de grupos
alquilos C_{2-4} o cicloalquilos
C_{3-8}, arilos o aralquilos sustituidos con un
miembro del grupo constituido por O, S y NR_{12}. El par de
electrones libres puede estar en cualquier lugar dentro del
fragmento Q siempre que se mantenga la separación definida entre el
par de electrones libres y el oxígeno.
En estas formas de realización, R_{11} está
unido a Q por medio de NR_{12}, O o S. Por lo tanto, Q ayuda a la
hidrólisis del enlace del profármaco de manera anquimérica por que
el fragmento con el par de electrones libres puede generar un anillo
de tres a seis miembros, de preferencia de cinco miembros como
subproducto tras la hidrólisis del enlace éster de preferencia.
Q puede también seleccionarse del grupo
constituido por grupos alquilo C_{2-4},
cicloalquilos, arilos, aralquilos sustituidos con un miembro del
grupo constituido por NH, O, S,
-CH_{2}-C(=O)-NH-, y fenilos
sustituidos en orto tales como
Los compuestos profármacos de la presente
invención están diseñados de tal manera que el t_{1/2} de
hidrólisis < el t_{1/2} de eliminación en plasma.
Los enlaces incluidos en los compuestos tienen
velocidad de hidrólisis en plasma del mamífero tratado
suficientemente rápida para permitir liberación de cantidades
suficientes de compuestos principales, es decir el compuesto
bioactivo conteniendo amino o hidroxilo, previo a la eliminación.
Algunos compuestos de preferencia de la presente invención, es decir
aquellos en los que (n) es 1, tienen un t_{1/2} de hidrólisis en
plasma en el intervalo de aproximadamente 5 minutos a
aproximadamente 12 horas. De preferencia, las composiciones tienen
un t_{1/2} de hidrólisis en plasma en el intervalo de
aproximadamente 0,5 a aproximadamente 8 horas y de mayor preferencia
de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 horas.
Una vez que la primera hidrólisis éster del
profármaco doble tuvo lugar in vivo, usualmente por medio de
actividad esterasa o actividad moderada por el pH o reacción de
ciclización, se cliva el residuo polimérico quedando el fragmento de
segundo profármaco resultante. Este profármaco único sufre otra
reacción de lactonización independiente in vivo para producir
el compuesto principal o nativo deseado. Esta reacción espontánea
tiene lugar tras la primera etapa de hidrólisis que controla la
velocidad y se inicia por la simple eliminación de un protón del
intermediario aromático que provoca una reacción de lactonización y
liberación de la molécula principal. La reacción se muestra a
continuación.
La liberación de un compuesto principal
conteniendo hidroxilo tendrá lugar de manera similar.
Las composiciones de "profármacos dobles"
de la presente invención incluyen un polímero soluble en agua,
R_{11}. En aspectos de preferencia de la invención, R_{11}
incluye un grupo de cierre A que puede ser hidrógeno, fragmentos
alquilo C_{1-6}, carboxialquilo, alquilos de
dialquilacilurea, o un compuesto de fórmula (II) que se muestra a
continuación que forma un bisistema:
\vskip1.000000\baselineskip
en el que B' es igual que B u otro
miembro del grupo definido por B y las variables restantes como se
expusieron anteriormente con respecto a la Fórmula
(I).
Los ejemplos adecuados de tales polímeros
incluyen óxidos de polialquileno tales como polietilenglicoles que,
de preferencia, son sustancialmente no antigénicos. La fórmula
general de PEG y sus derivados, es decir
A'-O-(CH_{2}CH_{2}O)_{x}-(CH_{2})_{a}-A,
donde (x) representa el grado de polimerización (es decir
10-2.300) o el número de unidades de repetición en
la cadena polimérica y depende del peso molecular del polímero; (n)
es cero o un entero positivo; A es un grupo de cierre como se
definió en este documento, es decir un H, amino, carboxi, halo,
alquilo C_{1-6} u otro grupo activador y A' es el
mismo que A u otro fragmento A. También resultan útiles los
polipropilenglicoles, derivados de PEG ramificados tales como
aquellos descritos en la Patente de EEUU de asignación común Nº
5.643.575, "PEGs estrella" y PEGs multiarmados tales como
aquellos descritos en Shearwaters Polymers, Inc. catálogo
"Polyethilene Glycol Derivatives 1997-1998";
cuya descripción se incorpora en este documento como referencia.
Debe entenderse que el polímero soluble en agua será funcionalizado
para el enlace por medio de M, X o Q en este documento. A modo de
ejemplo, la parte PEG de los profármacos puede ser, sin limitación,
alguno de los siguientes compuestos:
-
C(=Y)-(CH_{2})_{n}-O-(CH_{2}CH_{2}O)_{x}-A,
-C(=Y)-Y-(CH_{2})_{n}-O-(CH_{2}CH_{2}O)_{x}-A
y
-
C(=Y)-NR_{12}-(CH_{2})_{n}-O-(CH_{2}CH_{2}O)_{x}-A
donde Y es O o S y R_{12}, (n) y (x) son como se definieron
anteriormente.
En muchos aspectos de la invención, resultan de
preferencia poietilenglicoles (PEGs), PAOs terminados en alquilo
C_{1-4}, mono activados, tales como
polietilenglicoles terminados en monometilo (mPEGs).
Con el objeto de proveer el enlace hidrolizable
deseado, pueden usarse polímeros activados por mono o diácidos tales
como ácidos PEG o diácidos PEG así como también mono o di PEG aminas
y mono o di PEG dioles. Los PAO ácidos adecuados pueden sintetizarse
convirtiendo mPEG-OH en un etil éster y posterior
saponificación. Ver también, Gehrhardt, H., y col. Polymer Bulletin
18: 487 (1987) y Veronese, F.M., y col., J. Controlled Release 10:
145 (1989). Alternativamente, el PAO ácido puede sintetizarse
convirtiendo mPEG-OH en un éster de
t-butilo y posterior clivaje ácido. Ver, por
ejemplo, la Patente de EEUU de asignación común Nº 5.605.976. Las
descripciones de cada una de las anteriores se incorporan en este
documento por referencia.
Aunque los PAOs y PEGs pueden variar
sustancialmente en el peso molecular promedio, usualmente se
seleccionan polímeros en el intervalo de aproximadamente 2.000 a
aproximadamente 100.000 para los objetivos de la presente invención.
Resultan de preferencia los pesos moleculares desde aproximadamente
5.000 hasta aproximadamente 50.000 y particularmente de preferencia
desde 5.000 hasta aproximadamente 40.000. El peso molecular promedio
del polímero seleccionado para inclusión en el "profármaco
doble" debe ser suficiente como para proveer circulación
suficiente del "profármaco doble" previamente a la hidrólisis
del enlace. Dentro de los intervalos provistos anteriormente,
resultan de preferencia los polímeros con peso molecular en
intervalos de al menos 20.000 en algunos aspectos para fragmentos
quimioterapéuticos y orgánicos. En el caso de algunos nucleofilos
tales como ciertas proteínas, enzimas y similares, son de
preferencia polímeros con un intervalo de peso molecular desde
aproximadamente 2.000 hasta aproximadamente 20.000.
Las sustancias poliméricas incluidas en este
documento son de preferencia solubles en agua a temperatura
ambiente. Una lista no limitante de tales polímeros incluye
homopolímeros de óxido de polialquileno tales como polietilenglicol
(PEG) o polipropilenglicoles, polioles polioxietilenados,
copolímeros de los mismos y copolímeros en bloque de los mismos, a
condición de que se mantenga la solubilidad en agua de los
copolímeros en bloque.
Como una alternativa a polímeros basados en PAO,
pueden usarse materiales efectivamente no antigénicos tales como
dextrán, alcoholes polivinílicos, polímeros basados en
carbohidratos, poliaminoácidos, hidroxipropilmetacrilamida (HPMA) y
copolímeros de los mismos, etc. y similares, si se emplea el mismo
tipo de activación como el descrito en este documento para PAOs tal
como PEG. Los expertos en la técnica reconocerán que la lista
anterior es meramente ilustrativa y que se contemplan todos los
materiales poliméricos con las cualidades descritas en este
documento. Para los objetivos de la presente invención,
"efectivamente no antigénico" significa todo material
polimérico conocido en la técnica como no tóxico y que no provoca
una respuesta inmune apreciable en un mamífero.
Los profármacos dobles de la presente invención
pueden prepararse al menos de dos maneras. Una técnica mostrada
esquemáticamente en la Figura 1 incluye:
a. proveer un compuesto intermedio (III)
en el que M_{2} es un grupo
protector clivable o reversible, B_{2} es un grupo saliente tal
como OH y todas las demás variables que se expusieron anteriormente
con respecto a la Fórmula
(I);
b. tratar el compuesto intermedio (III) con un
ácido fuerte tal como TFA (ácido trifluoroacético) u otro ácido
trihaloacético, HCl, ácido sulfúrico, etc., o por hidrogenación
catalítica para eliminar el grupo protector; y
c. hacer reaccionar el compuesto intermedio
(III) desprotegido obtenido en la etapa b. con un fragmento capaz de
reaccionar con L_{1} tal como un polímero activado, es decir un
polímero que tiene un grupo funcional reactivo, (nombrado R_{15}
en la Figura 1) por ejemplo, p-nitrofenilo o
carbonato de succinimidilo, carbonilimidazol, tiazolidiniltiona, o
similares, y un grupo separador opcional, es decir CR_{9}R_{10},
para formar una forma de transporte del profármaco doble activada de
fórmula (IV):
en la que B_{2} es un grupo
saliente y todas las demás variables como se expusieron
anteriormente con respecto a la Fórmula (I); y
opcionalmente
d. unir un residuo de un compuesto que contiene
amina o hidroxilo, por ejemplo el fármaco a transportar, al
compuesto (IV) desplazando B_{2} en una reacción con un compuesto
que contiene amina o hidroxilo. Ver Figura 1. Pueden usarse técnicas
similares cuando se usan otros fragmentos aromáticos como materiales
de inicio.
Alternativamente, el profármaco doble puede
prepararse como se muestra en la Figura 2 con fines ilustrativos
con un compuesto que contiene amina mediante:
a. la unión de un compuesto que contiene amina o
hidroxilo al compuesto intermedio (III);
b. la eliminación del grupo protector y
c. la reacción del compuesto intermedio
desprotegido con un polímero activado para formar el profármaco
doble.
Aunque no se ilustra en la Figura 2 en el
esquema de reacción para un compuesto que contiene OH, el esquema de
reacción no obstante tendría lugar de la manera mostrada en la
Figura 2 con un enlace éster formado entre el sistema de transporte
y el residuo profármaco.
El compuesto intermedio (III) puede prepararse
usando técnicas de síntesis orgánica estándar. Por ejemplo, los
derivados bloqueados de ácido dialquilfenilpropiónico tales como
ácido
3-(2'-Boc-alanil-4',4'-dimetilfenil)-3,3-dimetilpropiónico
pueden sintetizarse usando un procedimiento descrito por Binghe
Wang, y col., Synthesis of a Novel
Esterase-Sensitive Cyclic Prodrug System for
Peptides That Utilizes a "Trimethyl Lock" - Facilitated
Lactonization Reaction. J. Org. Chem. 1997, 62, 1363), cuya
descripción se incorpora en este documento como referencia. Para los
expertos en la técnica resultarán evidentes materiales de inicio
aromáticos alternativos sin una excesiva experimentación.
La unión del compuesto principal al compuesto
intermedio (III) o (IV) puede llevarse a cabo usando técnicas de
síntesis estándar mediante agentes de acoplamiento conocidos por los
expertos en la técnica tales como
1,3-diisopropilcarbodiimida (DIPC),
dialquilcarbodiimidas, haluros de
2-halo-1-alquil-piridinio,
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDC), anhídrido cíclico del ácido propanfosfónico (PPACA) y
diclorofosfatos de fenilo. Alternativamente cuando B es un buen
grupo saliente tal como aquellos expuestos anteriormente en G.1., no
se necesita un agente de acoplamiento y la reacción tiene lugar en
presencia de una base.
La eliminación del grupo protector se lleva a
cabo de la misma manera descrita en el primer procedimiento.
En aquellos aspectos en los que B es un grupo
saliente, los grupos salientes adecuados incluyen, sin limitación,
fragmentos tales como N-hidroxibenzotriazolil,
halógeno, N-hidroxiftalimidil,
p-nitrofenoxi, imidazolil,
N-hidroxisuccinimidil; tiazolidiniltiona u otros
grupos salientes resultarán evidentes para aquellos expertos en la
técnica.
Los grupos salientes pueden ser unidos a la
parte L_{2} del compuesto una vez que se ha formado la parte
profármaco "doble", es decir la parte PEG. Los expertos en la
técnica entenderán las reacciones de síntesis usadas y descritas en
este documento sin excesiva experimentación. Generalmente, con fines
ilustrativos y sin limitación, las formas activadas del sistema de
transporte de profármacos doble se preparan mediante acilación el
hidroxi aromático de un compuesto de fórmula (V) que se muestra a
continuación:
en el
que:
L_{2} y B_{2} son como se establecieron
anteriormente y a partir de entonces haciendo reaccionar el
compuesto resultante acilado con un grupo activador para el
acoplamiento a un blanco, por ejemplo, compuestos tales como
4-nitrofenil-cloroformato, carbonato
de disuccinimidilo (DSC), carbonildiimidazol, tiazolidintiona,
etc., para proveer el derivado deseado.
Una vez en el lugar, la forma "activada"
del profármaco PEG está lista para conjugación con un compuesto que
contiene amina o hidroxilo. A continuación se muestran algunas
formas de transporte activadas.
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En aquellos aspectos de la invención, por
ejemplo tras la formación del transporte del profármaco, B es un
residuo de un compuesto que contiene amina, una lista no limitante
de compuestos adecuados incluye residuos de compuestos orgánicos,
enzimas, proteínas, polipéptidos, etc.. Los compuestos orgánicos
incluyen, sin limitación, fragmentos tales como compuestos de
antraciclina incluyendo daunorrubicina, doxorrubicina; mostaza de
p-aminoanilina, Ara-C (arabinósido
de citosina) y compuestos antimetabolito relacionados, por ejemplo,
Gemcitabina, etc.. Alternativamente, B puede ser un residuo de un
agente cardiovascular, antineoplásico, antiinfeccioso, antifúngico
que contiene amina, tal como nistatina y anfotericina B, agente
ansiolítico, agente gastrointestinal, agente activador del sistema
nervioso central, agente analgésico, de fertilidad, anticonceptivo,
agente antiinflamatorio, agente esteroidal, agente antiuricémico,
agente vasodilatador, agente vasoconstrictor, etc..
Las proteínas, polipéptidos, enzimas, péptidos y
similares adecuados que tienen al menos un grupo amino disponible
para unión al polímero incluyen materiales que tienen actividades
fisiológicas o farmacológicas así como aquellos que son capaces de
catalizar reacciones en solventes orgánicos. El único requerimiento
adicional de los materiales que contienen aminas es que mantengan al
menos alguna parte de la actividad asociada con la proteína, enzima,
péptido, etc. sin modificar tras la hidrólisis de la parte de
transporte del profármaco.
Las proteínas, polipéptidos y péptidos adecuados
de interés incluyen, pero no se limitan a, hemoglobina, proteínas
séricas tales como factores sanguíneos incluyendo Factores VII, VIII
y IX; inmunoglobulinas, citoquinas tales como interleuquinas, es
decir. IL-1 a IL-13, \alpha,
\beta y \gamma interferones, factores estimulantes de colonias
incluyendo factores estimulantes de colonias de granulocitos,
factores de crecimiento derivados de plaquetas y proteínas
activadoras de fosfolipasa (PLAP). Otras proteínas de interés
biológico o terapéutico general incluyen insulina, proteínas de
plantas tales como lectinas y ricinas, factores de necrosis tumoral
y proteínas relacionadas, factores de crecimiento tales como
factores de crecimiento y transformación, tales como TGF\alphas o
TGF\betas y factores de crecimiento epidérmico, hormonas,
somatomedinas, eritropoyetina, hormonas pigmentarias, factores de
liberación hipotalámicos, hormonas antidiuréticas, prolactina,
gonadotrofina coriónica, hormona estimulante de folículos, hormona
estimulante de tiroides, activador tisular de plasminógeno y
similares. Las inmunoglobulinas de interés incluyen IgG, IgE, IgM,
IgA, IgD y fragmentos de las mismas.
Algunas proteínas tales como las interleuquinas,
interferones y factores estimulantes de colonias existen en forma no
glicosilada, usualmente como resultado de usar técnicas
recombinantes. Las versiones no glicosiladas también están dentro de
las proteínas de la presente invención.
Las enzimas de interés incluyen enzimas
específicas de carbohidratos, enzimas proteolíticas,
oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y
ligasas. Sin limitación a enzimas en particular, los ejemplos de
enzimas de interés incluyen asparaginasa, arginasa, arginina
desaminasa, adenosina desaminasa, superóxido dismutasa,
endotoxinasas, catalasas, quimotripsina, lipasas, uricasas,
adenosina difosfatasa, tirosinasas y bilirrubina oxidasa. Las
enzimas específicas de carbohidratos de interés incluyen glucosa
oxidasas, glucodasas, galactosidasas, glucocerebrosidasas,
glucouronidasas, etc.
También se incluye en este documento cualquier
parte de un polipéptido que demuestra bioactividad in vivo.
Esto incluye secuencias de aminoácidos, ácidos nucléicos (ADN, ARN),
ácidos nucléicos peptídicos (PNA), fragmentos de anticuerpos,
proteínas de unión de cadena única, ver, por ejemplo la Patente de
EEUU Nº 4.946.778, cuya descripción se incorpora en este documento
como referencia, moléculas de unión incluyendo fusiones de
anticuerpos o fragmentos, anticuerpos policlonales, anticuerpos
monoclonales y anticuerpos catalíticos.
Las proteínas o partes de las mismas pueden
prepararse o aislarse usando técnicas conocidas por los expertos en
la técnica tales como cultivos tisulares, extracción de fuentes
animales o procedimientos de ADN recombinante. Las fuentes
transgénicas de proteínas, polipéptidos, secuencias de aminoácidos o
similares también están contempladas. Tales materiales se obtienen
de animales transgénicos, es decir, ratones, cerdos, vacas, etc., en
los que las proteínas se expresan en leche, sangre o tejidos.
También están contemplados como fuentes los insectos transgénicos y
los sistemas de expresión con ultravirus. Más aún, las versiones
mutantes de las proteínas, tales como interferones mutantes se
encuentran dentro del alcance de la invención.
Otras proteínas de interés son proteínas de
alergenos tales como ambrosia, Antígeno E, veneno de abeja, alergeno
de ácaro y similares. Las anteriores son ilustrativas de las
proteínas que son adecuadas para la presente invención. Debe
entenderse que aquellas proteínas, como se definen en este
documento, no nombradas específicamente pero que tienen un grupo
amino disponible están también dentro del alcance de la presente
invención.
En un aspecto de preferencia de la invención, el
compuesto que contiene amino es un compuesto biológicamente activo
que es adecuado para uso medicinal o diagnóstico en el tratamiento
de animales, por ej., mamíferos, incluyendo seres humanos, para
afecciones para las que tal tratamiento es deseado. La lista
anterior es ilustrativa y no limitante de los compuestos que pueden
ser modificados. Los expertos comprenderán que tales otros
compuestos pueden modificarse de manera similar sin excesiva
experimentación. Debe entenderse que aquellos materiales
biológicamente activos no mencionados específicamente pero que
tienen grupos amino adecuados también se encuentran dentro del
alcance de la presente invención.
Las únicas limitaciones en los tipos de
moléculas que contienen amino para ser incluidas en este documento
son que esté disponible al menos una (primaria o secundaria)
posición conteniendo amina que puede reaccionar y unirse con la
parte del vehículo y que no haya pérdida sustancial de bioactividad
tras la liberación del sistema de profármaco doble y la regeneración
del compuesto principal.
La camptotecina es un alcaloide citotóxico
soluble en agua producido por árboles naturales de la China
Camptotheca accuminata y árboles naturales de la India nothapodytes
foetida. La camptotecina y compuestos relacionados y análogos son
también conocidos por ser agentes potenciales anticáncer o
antitumorales y han mostrado que exhiben estas actividades in
vitro e in vivo. La camptotecina y compuestos
relacionados son también candidatos para conversión en profármacos
dobles de la presente invención.
La camptotecina y ciertos análogos relacionados
comparten la estructura:
Se prepararon diversos análogos conocidos a
partir de esta estructura central. Por ejemplo, el anillo A en
cualquiera o ambas posiciones 10- y 11- puede sustituirse con un OH.
El anillo A puede sustituirse también en la posición 9- con un
alquilo C_{1-30} lineal o ramificado o alcoxi
C_{1-17}, opcionalmente unido al anillo por un
heteroátomo es decir -O o S. El anillo B puede estar sustituido en
la posición 7- con un alquilo C_{1-30} lineal o
ramificado o alquilo sustituido, cicloalquilo
C_{5-8}, alcoxi C_{1-30},
fenilalquilo, etc., alquilcarbamato, alquilcarbazidas, derivados de
fenilhidrazina, amino, aminoalquil, aralquil, etc.. Son posibles
otras sustituciones en los anillos C, D y E. Ver, por ejemplo, las
Patentes de EEUU Nº 5.004.758; 4.943.579; Re 32.518, cuyos
contenidos se incorporan en este documento como referencia. Tales
derivados pueden obtenerse usando técnicas sintéticas conocidas sin
excesiva experimentación. Los derivados de camptotecina de
preferencia para uso en este documento incluyen aquellos que
incluyen un 20-OH u otro fragmento OH capaz de
reaccionar directamente con formas activadas de los sistemas de
transporte de polímeros descritos en este documento o los fragmentos
intermedios de unión, por ejemplo ácido iminodiacético, etc., los
que posteriormente se unen a un polímero tal como PEG. Las
referencias a análogos de camptotecina se hicieron en este documento
con fines ilustrativos y no limitantes.
Una clase de compuestos incluidos en las
composiciones de profármacos dobles de la presente invención son los
taxanos. Para los objetivos de la presente invención, el término
"taxano" incluye todos los compuestos dentro de la familia
taxano y terpenos. Por ello, el taxol (paclitaxel), derivados
sustituidos en 3' de
tert-butoxi-carbonilamina
(taxoteros) y similares así como otros análogos que son fácilmente
sintetizados usando técnicas orgánicas estándar o están disponibles
en fuentes comerciales tales como Sigma Chemical de St. Louis,
Missouri están dentro del alcance de la presente invención. Los
taxanos representativos se muestran a continuación.
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\vskip1.000000\baselineskip
Paclitaxel: R'_{1} = C_{6}H_{5}; R'_{2}
= CH_{3}CO; Taxotero: R'_{1} = (CH_{3})_{3}CO;
R'_{2} = H
Se descubrió que estos derivados son agentes
eficaces anticáncer. Numerosos estudios indican que los agentes
tienen actividad contra diversas neoplasias. Hasta el momento, su
uso ha estado limitado severamente por, entre otras cosas, su escaso
abastecimiento, pobre solubilidad en agua e hipersensibilidad. Debe
entenderse que otros taxanos incluyendo los
7-arilcarbamatos y 7-carbazatos
descritos en las Patentes de EEUU de asignación común Nº 5.622.986 y
5.547.981 pueden incluirse también en profármacos dobles de la
presente invención. Los contenidos de las patentes de EEUU
anteriores se incorporan en este documento como referencia. La única
limitación en el taxano es que debe ser capaz de sufrir una reacción
de sustitución basada en hidroxilo tal como en la posición 2'. El
Paclitaxel, sin embargo, es un taxano de preferencia.
Además de las moléculas descritas anteriormente,
las formulaciones de profármacos dobles de la presente invención
pueden prepararse usando muchos otros compuestos. Por ejemplo,
pueden usarse compuestos biológicamente activos como
gemcitabina:
etopósido:
o
agentes antifúngicos basados en triazol tal como
fluconazol:
o
ciclopirox:
Es necesario que los compuestos principales
seleccionados para formas de profármacos dobles no sean
sustancialmente insolubles en agua, aunque los profármacos dobles
basados en polímeros de la presente invención son especialmente
adecuados para administrar tales compuestos insolubles en agua.
Otros compuestos principales útiles incluyen, por ejemplo, ciertas
proteínas, enzimas y péptidos biológicamente activas de bajo peso
molecular, incluyendo péptidoglicanos, así como otros agentes
antitumorales; agentes cardiovasculares tal como forskolin;
antineoplásicos tales como combretastatina, vinblastina,
doxorrubicina, Ara-C, maitansina, etc.;
antiinfecciosos tales como vancomicina, eritromicina, etc.;
antifúngicos, tales como nistatina, anfotericina B, triazoles,
papulocandinas, pneumocandinas, equinocandinas, polioxinas,
nikkomicinas, pradimicinas, benanomicinas, etc., ver, "Antibiotics
That Inhibit Fungal Cell Wall Development" Annu. Rev. Microbiol.
1994, 48:471-97, cuyo contenido se incorpora en este
documento como referencia; agentes ansiolíticos, agentes
gastrointestinales, agentes activadores del sistema nervioso
central, agentes analgésicos, de fertilidad, anticonceptivos,
agentes antiinflamatorios, agentes esteroidales, agentes
antiuricémicos, agentes vasodilatadores, agentes vasoconstrictores,
y similares.
Se advierte que los compuestos principales
adecuados para incorporar en las composiciones de profármacos dobles
de la invención, pueden ser por sí mismos sustancias o compuestos
inactivos tras la liberación hidrolítica desde la composición a la
que están unidos, pero que se volverán activos tras otro proceso o
reacción química. Por ejemplo, un fármaco anticáncer que se
administra en el torrente sanguíneo por medio del sistema de
transporte de profármacos dobles, puede permanecer inactivo hasta
entrar en una célula cancerosa o tumoral, en la que es activado por
la química de la célula cancerosa o tumoral, por ejemplo, por medio
de una reacción enzimática exclusiva de esa célula. Tras la
conjugación, el compuesto remanente que contiene amina o hidroxilo
se refiere al residuo del compuesto sin conjugar.
En otro aspecto de la invención, se proveen
tipos híbridos de los sistemas de profármacos dobles poliméricos
descritos en este documento. En particular, el sistema híbrido
incluye no solo el sistema de profármacos dobles reversible sino
también un segundo sistema polimérico basado en tipos de enlaces más
permanentes. Los híbridos pueden prepararse al menos mediante dos
procedimientos. Por ejemplo, el conjugado de proteína y profármaco
doble bloqueado basado en trialquilo puede sintetizarse primero y
posteriormente polimerizarse con PEG usando cualquier polímero
activado conocido en la técnica tal como tiazolidiniltiona o PEG
activado con succinidinilcarbonato. Alternativamente, la reacción de
conjugación más permanente puede llevarse a cabo primero (es decir
se PEGhila el compuesto principal) y los conjugados resultantes
pueden usarse para formar los conjugados de profármaco doble
bloqueados con trialquilo descritos en este documento. Debe
entenderse que los sistemas híbridos serán más adecuados para
proteínas, enzimas y similares en los que están disponibles
múltiples grupos amino o una combinación de grupos amino o hidroxilo
para la unión del profármaco polimérico. Para los objetivos de la
presente invención, el término "polímeros activados" debe
entenderse que incluye polímeros que contienen uno o más grupos
terminales capaces de reaccionar con uno o más grupos
\alpha-amino, grupos
\varepsilon-amino, nitrógenos de histidina, grupos
carboxilo, grupos sulfhidrilo, etc. que se encuentran en enzimas,
proteínas, etc., así como tales grupos hallados en compuestos
orgánicos preparados sintéticamente.
El fragmento terminal de activador puede ser
cualquier grupo que facilita la conjugación del polímero con el
material biológicamente activo, es decir, proteína, enzima, etc. ya
sea antes o después de la síntesis del sistema de transporte de
profármacos doble de la presente invención. Ver, por ejemplo, la
Patente de EEUU Nº 4.179.337, cuya descripción se incorpora en este
documento como referencia. Tales grupos activadores pueden ser
fragmentos seleccionados de:
I. Grupos funcionales capaces de reaccionar con
un grupo amino tales como:
- a)
- carbonatos tales como p-nitrofenilo o succinimidilo; ver, por ejemplo la Patente de EEUU Nº 5.122.614, cuya descripción se incorpora en este documento como referencia;
- b)
- carbonilimidazol;
- c)
- azlactonas; ver, por ejemplo la Patente de EEUU Nº 5.321.095, cuya descripción se incorpora en este documento por referencia;
- d)
- imidotionas cíclicas, ver, por ejemplo la Patente de EEUU Nº 5.349.001, cuya descripción se incorpora en este documento por referencia; o
- e)
- isocianatos o isotiocianatos;
- f)
- ésteres activos tales como N-hidroxisuccinidimilo o N-hidroxibenzotriazolilo.
II. Grupos funcionales capaces de funcionar con
grupos ácido carboxílico y grupos carbonilo reactivos tales como
- a)
- aminas primarias; o
- b)
- grupos funcionales hidrazina e hidrazida tales como acilhidrazidas, carbazatos, semicarbamatos, tiocarbazatos, etc..
III. Grupos funcionales capaces de reaccionar
con grupos mercapto o sulfhidrilo tales como maleimidas; ver, por
ejemplo, Shearwater Polymers Catalog "Polyethylene Glycol
Derivatives 1997-1998", cuya descripción se
incorpora en este documento como referencia
IV. Grupos funcionales capaces de reaccionar con
grupos hidroxilo tales como ácidos (carboxílicos) u otros
nucleofilos capaces de reaccionar con un centro electrofílico, tales
comos isocianato, ésteres o carbonatos activados, imidas cíclicas,
tionas, etc.
El fragmento activador puede incluir también un
fragmento separador ubicado cerca del polímero. El fragmento
separador puede ser un heteroalquilo, alcoxi, alquilo, conteniendo
hasta 18 átomos de carbono o también una cadena polimérica
adicional. Los fragmentos separadores pueden agregarse usando
técnicas de síntesis estándar.
La presente invención permite procedimientos de
tratamiento para diversas afecciones médicas en mamíferos. Los
procedimientos incluyen administrar al mamífero que necesita tal
tratamiento, una cantidad eficaz de una composición de la invención,
como se describe en este documento, tal como un profármaco doble de
doxorrubicina. Las composiciones de profármaco son útiles para,
entre otras cosas, tratar enfermedades similares a aquellas tratadas
con el compuesto principal, por ejemplo terapia de reemplazo
enzimático, enfermedad neoplásica, reducción de carga tumoral,
prevención de metástasis o neoplasmas y prevención de recurrencias
de tumores o crecimientos neoplásicos en mamíferos.
La cantidad de profármaco administrada dependerá
de la cantidad de molécula principal incluida en el mismo.
Generalmente, la cantidad de profármaco usado en los procedimientos
de tratamiento es aquella cantidad que permite alcanzar eficazmente
resultados terapéuticos deseados en mamíferos. Naturalmente, las
dosificaciones de los diversos compuestos profármacos variarán
dependiendo del compuesto principal, velocidad de hidrólisis in
vivo, peso molecular del polímero, etc.. En general, los
derivados poliméricos de profármacos dobles de derivados de mostaza
nitrogenada se administran en cantidades que varían desde
aproximadamente 5 hasta aproximadamente 500 mg/m^{2} por día. El
intervalo expuesto anteriormente es ilustrativo y los expertos en la
técnica determinarán la dosificación óptima del profármaco
seleccionado en base a la experiencia clínica y a la indicación del
tratamiento. Las dosificaciones reales serán evidentes para los
expertos sin excesiva experimentación. Las composiciones, incluyendo
profármacos, de la presente invención pueden incluirse en una o más
composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a
mamíferos. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma
de una solución, suspensión, comprimido, cápsula o similar,
preparadas de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la
técnica. Se contempla también la administración de tales
composiciones por vía oral y/o parenteral dependiendo de las
necesidades del experto en la técnica. Puede utilizarse una solución
y/o suspensión de la composición, por ejemplo, como un vehículo para
inyección o infiltración de la composición por cualquiera de los
procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, por inyección
intravenosa, intramuscular, subdérmica y similares.
Tal administración puede también realizarse por
infusión dentro de una cavidad corporal, así como por inhalación y/o
por vía intranasal. De preferencia, sin embargo, los profármacos se
administran por vía parenteral a los mamíferos que los
necesitan.
Los siguientes ejemplos sirven para proveer otra
apreciación de la invención pero no tienen la intención de
restringir de ninguna manera el alcance de la invención. Los números
subrayados y en negrita de los Ejemplos corresponden con aquellos
mostrados en las Figuras.
Ejemplo
1
Se agitó 1 g (2,54 mmol) de éster de
t-Boc-alanina de ácido
3-(2'-hidroxi-4',6'-dimetilfenil)-3,3-dimetilpropiónico,
1 (sintetizado usando el procedimiento de J. Org. Chem, 1997, 62,
1363), en 20 ml de TFA-CH_{2}Cl2 (1:1, v/v) a
temperatura ambiente durante 2 horas. Se eliminó el solvente bajo
vacío y se agregó éter al residuo para precipitar 2 (0,6873 g,
67%).
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,41
(3H, s, C(CH_{3})_{2}), 1,42 (3H, s,
C(CH_{3})_{2}), 1,54 (3H, d, J = 8,1 Hz,
CHCH_{3}, 2,21 (3H, s, Ar-CH_{3}),
2,45 (3H, s, Ar-CH_{3}), 2,65 (2H, s,
CH_{2}COOH), 4,36 (1H, d, J = 8,1 Hz, CHCH_{3}),
6,57 (1H, s, Ar-H), 6,81 (1H, s,
Ar-H).
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
15,27 (Ar-CH_{3}), 19,57 (Ar-CH_{3}), 24,66
(CHCH_{3}), 30,92 (C(CH_{3})_{2}), 38,28
(CH_{2}COOH), 47,32 (C(CH_{3})_{2}),
48,45 (CHCH_{3}), 122,23, 132,30, 133,97, 135,61, 138,05,
149,10 (Ar), 169,50
(-COOAr), 172,50 (COOH).
(-COOAr), 172,50 (COOH).
Ejemplo
2
Se agregaron 2 g (0,39 mmol) de SC PEG (5 kDa),
3, a la mezcla de 175,8 mg (0,6 mmol) de 2 y 280 \mul (1,5 mmol)
de N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) en 40 ml de
diclorometano anhidro (DCM). Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante toda la noche. Se eliminó el solvente y
se cristalizó el producto desde 80 ml de 2-propanol
para dar 1,86 g (93%) de 4 como un sólido blanco.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,01 (Ar-CH_{3}), 18,94 (Ar-CH_{3}), 24,07
(CHCH_{3}), 30,11 (C(CH_{3})_{2}), 30,20
(C(CH_{3})_{2}), 37,49 (CH_{2}COOH),
46,04 (C(CH_{3})_{2}), 49,11 (CHCH_{3}),
57,59, (OCH_{3}), 62,86-70,68 (PEG),
121,37, 131,04, 132,80, 134,54, 136,71, 148,62 (Ar), 154,80
(OC(=O)NH), 170,82 (-COOAr), 171,27
(COOH).
Ejemplo
3
Se agregaron 38,4 mg (0,2 mmol) de hidrocloruro
de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDC) a la mezcla de 0,5 g (0,1 mmol) de 4, 84,6 mg (0,15 mmol) de
hidrocloruro de daunorrubicina, 5, 40,4 mg (0,4 mmol) de
N-metilmorfolina (NMM), y 20,3 mg (0,2 mmol) de
hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) en 10 ml de
DCM anhidro a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura
ambiente durante la noche y se filtró. Se concentró el filtrado bajo
vacío y se recristalizó el residuo desde 20 ml de
2-propanol para dar 0,44 g (88%) de 6. El ensayo UV
mostró 0,7 equivalentes (70% de rendimiento de acoplamiento) de
5.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
15,66, 15,81, 18,96, 23,56, 24,45, 29,96, 30,78, 30,84, 32,32,
33,65, 38,61, 44,13, 17,78, 49,45, 55,48, 57,73,
63,17-75,35 (PEG), 99,79, 109,81, 109,94, 117,75,
117,80, 118,37, 119,26, 121,45, 131,39, 133,02, 133,21, 133,92,
134,74, 134,78, 134,85, 135,04, 137,30, 148,88, 154,36, 155,17,
155,41, 159,84, 169,36, 171,81, 185,14, 185,33, 210,58.
Ejemplo
4
Se agregaron 0,5 g (0,1 mmol) de mPEG (5 kDa)
tiazolidintiona a la mezcla de 44 mg (0,15 mmol) de 2 y 70 \mul
(0,4 mmol) de DIPEA en 10 ml de DCM anhidro a temperatura ambiente.
Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche. Se
eliminó el solvente bajo presión reducida y se recristalizó el
residuo desde 2-propanol para dar 0,44 g (88%) de
producto como un sólido blanco.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,22, 19,17, 24,29, 30,37, 37,71, 46,37, 47,29, 57,85,
67,40-72,38 (PEG), 121,58, 131,38, 132,95, 134,85,
136,99, 148,75, 169,08, 170,53, 171,50.
Ejemplo
5
Se agregaron 39 mg (0,2 mmol) de EDC a la mezcla
de 0,5 g (0,1 mmol) de 8, 85 mg (0,1 mmol) de 5, 40 mg (0,4 mmol) de
(NMM), y 20 mg (0,2 mmol) de HOBT en 10 ml de DCM anhidro a 0ºC. Se
agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche
y se filtró. Se concentró el filtrado bajo vacío y se recristalizó
el residuo desde 20 ml de 2-propanol para dar 0,45 g
(90%) de 9.
Ejemplo
6
Se agregó 1 g (0,025 mmol) de PEG (40 kDa)
ditiazolidintiona, 10, a la mezcla de 29 mg (0,099 mmol) de 2 y 36,6
\mul (0,20 mmol) de DIPEA en 15 ml de DCM anhidro. Se agitó la
mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche. Se eliminó el
solvente bajo presión reducida y se recristalizó el residuo desde
2-propanol para dar 0,8 g (80%) de 11 como un
sólido blanco.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,90, 19,48, 24,45, 30,81, 38,34, 46,83, 47,87,
68,52-72,82 (PEG), 76,19, 77,83, 122,00, 131,77,
133,76, 135,40, 137,51, 149,46, 169,28, 170,88, 171,55.
Ejemplo
7
Se agregaron 94,5 mg (0,492 mmol) de EDC a la
mezcla de 2,5 g (0,0615 mmol) de 11 (40 kDa), 208 mg (0,3688 mmol)
de 5, 99,4 mg (0,984 mmol) de (NMM), y 49,8 mg (0,369 mmol) de HOBT
en 50 ml de DCM anhidro a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante la noche y se filtró. Se concentró el
filtrado bajo vacío y se recristalizó el residuo desde
2-propanol (200 ml) para dar 2,3 g (92%) de 12. El
ensayo UV mostró 1,9 equivalentes (95% de rendimiento de
acoplamiento) de 5.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,14, 19,31, 23,55, 24,63, 28,80, 31,15, 32,78, 34,77, 39,23,
44,97, 48,12, 56,18, 66,80-75,95 (PEG), 100,14,
110,93, 118,68, 119,13, 121,81, 131,88, 133,86, 134,02, 134,96,
135,03, 137,96, 149,56, 155,20, 160,73, 169,73, 170,22, 171,34,
186,05, 210,41.
\newpage
Ejemplo
8
Se agregaron 37,8 mg (0,20 mmol) de EDC a la
mezcla de 1,0 g (0,027 mmol) de 4 (40 kDa), 39,8 mg (0,15 mmol) de
hidrocloruro de
p-amino-(N,N-di-2-cloroetil)anilina,
13 (sintetizado usando un procedimiento modificado de Edwards y col.
Cytotoxic Compounds. Part XVII. o-, m-, and
p-(Bis-2-chloroethylamino)phenol,
p-[N-(2-Chloroethyl)methylamino)phenol,
N,N-Bis-2-chloroethyl-p-phenylenediamine,
and
N,N-Bis-2-chloroethyl-N'-methyl-p-phenylenediamine
as Sources of Biologically Active Carbamates. JCS Perkin 1, 1973,
2397.), 39,7 mg (0,39 mmol) de NMM, y 19,9 mg (0,15 mmol) de HOBT en
20 ml de DCM anhidro a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante la noche y se filtró. Se concentró el
filtrado bajo vacío y se recristalizó el residuo desde
2-propanol (100 ml) para dar 0,8 g (80%) de 14. El
ensayo UV mostró 1,5 equivalentes (75% de rendimiento de
acoplamiento) de la mostaza nitrogenada aromática.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
15,63, 19,35, 24,86, 30,99, 31,10, 39,12, 39,81, 47,99, 48,36,
52,84, 67,79-71,79 (PEG), 111,59, 120,97, 121,57,
129,54, 131,86, 133,83, 135,38, 137,93, 141,53, 149,12, 168,37,
170,25, 171,66.
Ejemplo
9
Se realizó una mezcla azeotrópica de 3 g (0,074
mmol) de 11 en 60 ml de tolueno por destilación de 20 ml de tolueno
durante 2 horas. Se enfrió la solución hasta 35ºC y se agregaron 47
mg (0,37 mmol) de cloruro de oxalilo y 2 \mul de DMF. Se agitó la
solución a 35-40ºC durante 4 horas, posteriormente
se agregaron 53 mg (0,44 mmol) de
2-mercaptotiazolina y 32 mg (0,44 mmol) de DIPEA. Se
mantuvo la mezcla a reflujo durante la noche y se concentró bajo
vacío. Se recristalizó el residuo desde 250 ml de
2-propanol para dar 15 (2,72 g, (90%) como un sólido
blanco.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,38, 19,28, 24,63, 27,54, 31,06, 31,15, 39,00, 47,37, 51,56,
55,32, 67,48-71,10 (PEG), 121,52, 131,43, 132,63,
134,86, 137,20, 148,79, 168,82, 170,90, 171,86, 200,58.
Ejemplo
10
Acoplamiento de 11 con Doxorrubicina, 16: Se
agitó a temperatura ambiente durante toda la noche una mezcla de
1,25 mg (0,031 mmol) de 11, 105 mg (0,18 mmol) de hidrocloruro de
doxorrubicina, 16, 50 mg (0,50 mmol) de NMM, 25 mg (0,18 mmol) de
HOBT, y 50 mg (0,25 mmol) de EDC en 15 ml de DCM anhidro. Se eliminó
el solvente bajo vacío y se recristalizó el residuo desde
2-propanol para dar 850 mg (68%) de 17. El ensayo
UV mostró 1,64 equivalentes (82% de rendimiento de acoplamiento) de
16.
Acoplamiento de 15 con 16: Se mantuvo a reflujo
durante toda la noche una mezcla de 0,25 mg (0,006 mmol) de 15, 40
mg (0,07 mmol) de 16, y 25 mg (0,20 mmol) de dimetilaminopiridina
(DMAP) en 10 ml de DCM anhidro. Se eliminó el solvente bajo vacío y
se recristalizó el residuo desde 2-propanol para
dar 0,23 g (92%) de 17. El ensayo UV mostró 1,82 equivalentes (91%
de rendimiento de acoplamiento) de 16.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
15,21, 15,83, 18,75, 24,39, 27,81, 30,60, 30,63, 32,27, 34,80,
38,71, 43,90, 46,71, 47,87, 55,48, 64,27, 66,05,
67,43-71,05 (PEG), 75,69, 99,38, 109,47, 117,46,
118,68, 118,92, 120,45, 127,10, 131,70, 133,17, 132,89, 133,45,
133,75, 134,50, 137,44, 148,88, 154,41, 154,81, 159,69, 169,16,
170,15, 170,98, 185,20, 185,46, 212,40.
Ejemplo
11
Se disolvieron 2,5 g (0,47 mmol) de 8 y 108 mg
(0,94 mmol) de N-hidroxisuccinimida en 40 ml de DCM
anhidro a 0ºC. Se agregaron a la mezcla 114 mg (0,94 mmol) de DMAP y
118 mg (0,94 mmol) de DIPC. Se agitó la mezcla de reacción a
temperatura ambiente durante la noche. Se eliminó el solvente bajo
vacío y se recristalizó el residuo desde 2-propanol
para dar 2,1 g (84%) de 18 como un sólido blanco.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,38, 19,46, 24,47, 24,75, 30,11, 30,36, 38,21, 43,66, 47,58,
58,12, 67,97-71,13 (PEG), 121,81, 131,80, 131,93,
135,68, 137,01, 148,89, 165,87, 168,55, 169,34, 171,03.
Ejemplo
12
Se agregaron 450 mg (0,083 mmol, 317
equivalentes) de conector de PEG,18, a 37,5 mg (416 \mul, 0,00027
mmol) de (L)-asparaginasa nativa, 19, en 3 ml de
tampón fosfato de sodio (0,1 M, pH 7,8) con agitación suave. Se
agitó la solución a 30ºC durante 30 minutos. Para controlar la
conjugación de PEG se usó una columna de GPC (Zorbax
GF-450: El conjugado PEG-Asp tiene
un tiempo de retención de 8,5 minutos. Al finalizar la reacción
(como se evidenció por la ausencia de enzima nativa), se diluyó la
mezcla con 12 ml de tampón de formulación (0,05 M de fosfato de
sodio, 0,85% de cloruro de sodio, pH 7,3) y se diafiltró con un
concentrador Centriprep (Amicon) con un peso molecular de corte de
50.000 daltons para eliminar el PEG sin reaccionar. Se continuó la
diafiltración a 4ºC hasta no detectar PEG libre mezclando cantidades
iguales de filtrado y PMA (ácido polimetacrílico en HCl 0,1 M) al
0,1%.
El producto, 20, no es estable en solución de
tampón básico durante largos períodos de tiempo, por lo tanto la
solución se liofiliza y se almacena 20 en el congelador (-20ºC).
Tras 15 días de almacenamiento en estas condiciones, el análisis de
GPC indica menos del 0,8% de descomposición. La actividad específica
de 20 preparado fresco es de 137 UI/mg (asparaginasa nativa = 217
UI/mg). La modificación proteica de asparaginasa con
SS-PEG (un conector permanente) usando un
procedimiento correspondiente a la Patente de EEUU Nº 4.179.337
descrita anteriormente da una actividad similar de 120 UI/mg. Se usa
un ensayo TNBS para calcular el porcentaje de modificación de la
proteína y el ensayo Biuret para controlar la concentración de
proteína.
Ejemplo
13
Se midió la velocidad de hidrólisis de 20 en
plasma de rata usando una columna de GPC (Zorbax
GF-450) y se encontró que tiene una vida media <
2 horas. La vida media en tampón fosfato (pH 7,4) se determinó como
>> 2 horas.
Ejemplo
14
Se hicieron reaccionar 393 mg (0,073 mmol, 70
equivalentes) de 18 con 150 mg (1,664 ml, 0,00106 mmol) de
(L)-asparaginasa nativa, 19, en 30 ml de tampón
fosfato de sodio (0,1 M, pH 7,8) como se describió en el Ejemplo 14
a 30ºC durante 15 minutos para proveer una solución de 20, seguido
por el agregado de 1,272 g (0,245 mmol, 230 equivalentes) de
SS-PEG. Se agitó la solución de reacción durante
otros 15 minutos. Se mantuvo el pH de la mezcla de reacción en 7,8
con hidróxido de sodio 0,5 M. Se diluyó la mezcla de reacción don 30
ml de agua estéril y se diafiltró usando un concentrador Centriprep
(Amicon) con un peso molecular de corte de 50.000 daltons para
eliminar el PEG sin reaccionar. Se continuó la diafiltración a 4ºC
hasta no detectar PEG libre mezclando cantidades iguales de filtrado
y PMA (ácido polimetacrílico en HCl 0,1 M) al 0,1%. Se usó una
columna de GPC (Zorbax GF-450) para seguir el curso
de la reacción. La solución final del producto, 20A, se liofilizó y
se almacenó en congelador.
Ejemplo
15
Se disolvieron 100 mg de asparaginasa modificada
con conector híbrido, 20A, en 30 ml de tampón fosfato, pH 7,8 y se
agitó a 30ºC durante la noche. Se diluyó esta solución con 30 ml de
agua estéril y se diafiltró usando un concentrador Centriprep
(Amicon) con un peso molecular de corte de 50.000 daltons para
eliminar el PEG libre que se forma por clivaje selectivo de un
conector de PEG reversible, 8 del conjugado. La solución contiene
ahora únicamente asparaginasa conjugada con SS-PEG,
20B. Por lo tanto se hidrolizó el conector reversible, dejando
únicamente unido a la asparaginasa el PEG unido de forma
relativamente permanente.
Ejemplo
16
Se agregaron 392 mg (3,11 mmol) de DIPC a una
mezcla de 0,5 g (1,55 mmol) de
1-O-t-butildimetilsilil-3-(2'-hidroxi-4',6'-dimetilfenil)-3,3-dimetilpropanol,
21, (sintetizado usando el procedimiento de R.P.Borchardt, y col.
Amine Prodrugs Which Utilize Hydroxy Amide Lactonization. II. A
Potential Esterase-Sensitive Amide Prodrug.
Pharmaceu. Res. 1991, 8,455), 568 mg (4,66 mmol) de DMAP, 668 mg
(3,11 mmol) de
t-Boc-Prolina-OH en
15 ml de DCM anhidro a 0ºC. Se agitó la mezcla a temperatura
ambiente durante la noche, se filtró y concentró. Se purificó el
residuo por cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de
etilo: hexano = 3:7, v/v) para dar 700 mg (87%) de 22.
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,04,
(s, 3H, CH_{3}-Si), 0,14 (s, 3H,
CH_{3}-Si), 0,88 (s, 3H,
CH_{3}-C), 0,92 (s, 3H,
CH_{3}-C), 1,51 (s, 9H,
Si(CH_{3})_{3}), 1,55 (s, 9H,
C(CH)_{3}), 2,00 (m, 2H, CH_{2}O), 2,07 (t,
2H, CH_{2}CH_{2}CH_{2}, J = 8,1 Hz), 2,25 (s, 3H,
PhCH_{3}), 2,30 (m, 2H, CHCH_{2}), 2,55 (s, 3H,
PhCH_{3}), 3,53 (t, 2H, CH_{2}N, J = 8,1 Hz),
4,57 (bs, 1H, COCHN), 6,65 (bs, 1H, PhH), 6,82 (s, 1H,
PhH).
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
18,23, 20,06, 25,14, 25,70, 25,98, 28,49, 32,00, 32,06, 39,51,
46,24, 46,62, 59,74, 60,93, 80,08, 122,73, 132,14, 134,56, 135,87,
138,30, 150,68, 171,84.
Ejemplo
17
Se agitó una solución de 2,82 g (5,43 mmol) de
23 en 10 ml de tetrahidrofurano, 10 ml de H_{2}O y 30 ml de ácido
acético glacial a temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminó el
solvente bajo vacío para dar un producto crudo 23 como un aceite
incoloro, que se llevó a siguiente etapa sin otra purificación.
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,01,
0,77, 0,84, 1,38, 1,40, 1,42, 1,93, 1,97, 2,01, 2,13, 2,38, 2,43,
3,47, 4,48, 6,50, 6,70.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
-3,71, 19,95, 20,29, 23,19, 25,06, 25,20, 25,59, 28,44, 31,78,
32,04, 32,27, 33,21, 39,33, 42,96, 46,01, 46,53, 46,62, 59,62,
60,22, 64,95, 66,59, 80,44, 103,87, 122,59, 132,04, 132,27, 134,23,
135,79, 135,89, 138,14, 150,37, 150,37, 150,55, 154,52, 171,86,
175,10.
Ejemplo
18
Se agregó una solución de 2,5 g (6,2 mmol) de 23
en 125 ml de cloruro de metileno anhidro a una solución de 2,88 g
(13,4 mmol) de clorocromato de piridinio en 125 ml de DCM anhidro.
Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora y
posteriormente se filtró a través de celite. Se eliminó el solvente
bajo vacío y se purificó el residuo por cromatografía en columna de
gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 3:7, v/v). Se disolvió el
producto, aldehído, en 25 ml de acetona y se agregó a una solución
de 1 g (6,3 mmol) de KMnO_{4} en 25 ml de
acetona-H_{2}O (1:1, v/v). Se agitó la mezcla a
temperatura ambiente durante la noche. Se agregaron 40 ml de
H_{2}O y se eliminó la acetona bajo vacío previo a la filtración a
través de Celite. Se ajustó el pH de la solución a 3,0 con HCl 1N,
posteriormente se extrajo con acetato de etilo (30 ml, 2 veces). Se
eliminó el solvente bajo presión reducida y se agregó hexano para
precipitar 24 (550 mg, 21% desde 23).
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,41,
1,43, 1,50, 1,61, 1,97, 2,21, 2,30, 2,33, 2,54, 2,85, 3,56, 4,56,
6,57, 6,79.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
20,09, 24,13, 25,27, 28,14, 28,56, 29,87, 31,40, 31,57, 39,12,
46,79, 47,40, 59,76, 80,68, 122,56, 132,43, 134,04, 136,27, 138,29,
150,21, 171,87.
Ejemplo
19
Se agitaron 0,55 g (1,31 mmol) de éster de
t-Boc-prolina de ácido
3-(2'-hidroxi-4',6'-dimetilfenil)-3,3-dimetilpropiónico,
24, en 10 ml de TFA-CH_{2}Cl_{2} (1:1, v/v) a
temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminó el solvente
completamente bajo vacío para dar 25 como un sólido espumoso
amarillo (0,436 g, 77%).
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,53,
1,55, 2,03, 2,19, 2,48, 2,59, 2,76, 3,32, 4,61, 6,54, 6,85,
9,80.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
13,86, 23,73, 24,86, 28,27, 31,70, 31,92, 38,99, 46,43, 47,76,
60,33, 122,25, 133,08, 133,74, 136,65, 138,89, 149,30, 168,35.
Ejemplo
20
Se agregaron 52,6 g (0,41mmol) de DIPEA a la
solución de 65 mg (0,15 mmol) de 25 y 1 g (0,025 mmol) de 10 en 15
ml de DCM. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante toda la
noche. Se eliminó el solvente bajo vacío y se recristalizó el
residuo desde 2-propanol para dar 0,85 g (85%) de 26
como un sólido blanco.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
19,61, 24,39, 27,34, 30,72, 38,11, 45,86, 59,13,
68,40-71,45 (PEG), 122,18, 131,78, 133,40, 135,04,
137,18, 149,36, 168,65, 170,67, 171,18.
\newpage
Ejemplo
21
Se agregaron 13,2 g (0,07mmol) de EDC a la
mezcla de 0,35 g (0,01 mmol) de 26, 29 mg (0,005 mmol) de 5, 13,9 mg
(0,14 mmol) de NMM, y 6,97 mg (0,05 mmol) de HOBT en 20 ml de DCM
anhidro a 0ºC. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente
durante toda la noche y se filtró. Se concentró el filtrado bajo
vacío y se recristalizó el residuo desde 2-propanol
(50 ml) para dar 0,35 g (84%) de 27. El ensayo UV mostró 2,0
equivalentes (100% de rendimiento de acoplamiento) de 5.
Ejemplo
22
El compuesto 28 se preparó usando el
procedimiento provisto en el Ejemplo 16. Por ello se hicieron
reaccionar 500 mg (1,55 mmol) de 21, 587,6 mg (3,11 mmol) de
t-Bock-\beta-alanina-OH,
474 \mul (3,11 mmol) de DIPC, y 568 mg (4,66 mmol) de DMAP en 15
ml de DCM anhidro para dar 580 mg (76%) de 28.
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,00,
(s, 6H, 2 x CH_{3}-Si), 0,87 (s, 6H, 2 x
CH_{3}C), 1,48 (s, 18H,
C(CH_{3})_{3} y
Si
(CH_{3})_{3}), 2,05 (t, 2H, CH_{2}C, J = 5,4 Hz), 2,26 (s, 3H, PhCH_{3}), 2,54 (s, 3H, PhCH_{3}), 2,79 (t, 2H, CH_{2}C(=O), J = 5,4 Hz), 3,50 (t, 4H, NHCH_{2} y CH_{2}O, J = 8,1 Hz), 5,01 (bs, 1H, NH), 6,58 (s, 1H, PhH), 6,84 (s, 1H, PhH).
(CH_{3})_{3}), 2,05 (t, 2H, CH_{2}C, J = 5,4 Hz), 2,26 (s, 3H, PhCH_{3}), 2,54 (s, 3H, PhCH_{3}), 2,79 (t, 2H, CH_{2}C(=O), J = 5,4 Hz), 3,50 (t, 4H, NHCH_{2} y CH_{2}O, J = 8,1 Hz), 5,01 (bs, 1H, NH), 6,58 (s, 1H, PhH), 6,84 (s, 1H, PhH).
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
18,18, 20,11, 25,20, 25,88, 28,36, 31,78, 35,40, 36,00, 38,99,
45,94, 60,69, 79,35, 122,91, 132,38, 133,99, 135,92, 138,40, 149,46,
155,79, 171,73.
El compuesto 29 se preparó usando el mismo
procedimiento que se describió para la conversión de 22 en 27
(Ejemplos 17-21).
Ejemplo
23
El compuesto 30 se preparó usando el
procedimiento dado en el Ejemplo 16. Se hicieron reaccionar el
compuesto 21, 150 mg (0,57 mmol), 189,4 mg (0,93 mmol) de ácido
t-Bock-\alpha-aminoisobutírico,
117 mg (0,93 mmol) de DIPC, y 133,7 mg (0,93 mmol) de DMAP en 25 ml
de DCM anhidro y tras purificar, se obtuvieron 76 mg (32%) de
30.
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 0,00,
(s, 6H, 2 x CH_{3}-Si), 0,87 (s, 6H, 2 x
CH_{3}C), 1,48 (s, 18H,
C(CH_{3})_{3} y
Si
(CH_{3})_{3}), 1,70 (s, 6H, C(CH_{3})_{2}), 2,06 (t, 2H, CH_{2}C, J = 8,1 Hz), 2,19 (s, 3H, PhCH_{3}), 2,54 (s, 3H, PhCH_{3}), 3,50 (t, 2H, CH_{2}O, J = 8,1 Hz), 5,19 (bs, 1H, NH), 6,70 (s, 1H, PhH), 6,81 (s, 1H, PhH).
(CH_{3})_{3}), 1,70 (s, 6H, C(CH_{3})_{2}), 2,06 (t, 2H, CH_{2}C, J = 8,1 Hz), 2,19 (s, 3H, PhCH_{3}), 2,54 (s, 3H, PhCH_{3}), 3,50 (t, 2H, CH_{2}O, J = 8,1 Hz), 5,19 (bs, 1H, NH), 6,70 (s, 1H, PhH), 6,81 (s, 1H, PhH).
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
18,16, 50,13, 25,13, 25,17, 25,33, 25,90, 28,33, 31,92, 32,04,
39,28, 45,08, 45,83, 56,44, 60,80, 61,61, 79,96, 116,65, 122,70,
126,74, 132,17, 134,12, 136,07, 138,04, 151,07, 154,70, 174,24.
El compuesto 30 se sometió a los procedimientos
de los Ejemplos 17-21 para obtener el compuesto
31.
Ejemplo
24
Se agitó a temperatura ambiente durante toda la
noche una solución de 300 mg (0,056 mmol) de 8, 68,3 mg (0,28 mmol)
de Ara-C, 32, y 65 mg (0,34 mmol) de EDC en 10 ml de
piridina anhidra. Se agregó éter etílico a la solución de reacción
para precipitar el producto crudo que se cristalizó desde
2-propanol para dar 180 mg (53%) de 33.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,07, 19,85, 25,35, 31,56, 32,11, 39,00, 48,39, 49,40, 58,61,
61,51, 68,53-72,18 (PEG), 74,70, 85,43, 87,72,
95,36, 122,00, 132,30, 132,34, 133,32, 135,74, 138,27, 145,62,
149,35, 155,46, 161,74, 171,37, 172,04, 172,20.
Ejemplo
25
El compuesto 34 puede prepararse a partir de 11
acoplado con 32 o desde 1 acoplado con 32 seguido por desprotección
y acoplamiento con 10 como en los Ejemplos
26-28.
Acoplamiento de 11 con 32: Se agitó una solución
de 1 g (0,025 mmol) de 11, 120 mg (0,50 mmol) de 32 y 57 mg (0,30
mmol) de EDC en 10 ml de piridina anhidra a temperatura ambiente
durante 3 días. Se eliminó el solvente bajo vacío y se recristalizó
el residuo desde IPA para dar 640 mg (64%) de 34. El ensayo UV
mostró 1,67 equivalentes (84% de rendimiento de acoplamiento) de
32.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
14,87, 18,58, 24,54, 31,30, 31,36, 38,66, 47,68, 49,09, 61,12,
67,54-71,05 (PEG), 74,76, 85,19, 86,54, 94,69,
121,25, 131,85, 133,08, 134,73, 137,35, 144,94, 148,58, 154,39,
160,88, 170,96, 171,26, 172,38.
Ejemplo
26
Se agitó una mezcla de 700 mg (1,78 mmol) de 1,
1,73 g (7,12 mmol) de 32, 0,96 g (7,12 mmol) de HOBT, y 2,73 g
(14,25 mmol) de EDC en 50 ml de piridina anhidra a temperatura
ambiente durante 2 horas y posteriormente se agitó a 40ºC durante la
noche. Se eliminó el solvente y se usaron 50 ml de DCM parta
disolver la mezcla, posteriormente se lavó con agua (3 veces, 30 ml)
y HCl 0,1 N. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio
anhidro y se eliminó el solvente bajo vacío para dar el producto
crudo que se purificó mediante cromatografía en columna de gel de
sílice (metanol 5 a 10% en DCM) para dar 638,8 mg (52%) de 35 como
un sólido blanco.
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,42,
1,55, 2,17, 2,26, 2,46, 2,79, 3,84, 3,91, 4,14, 4,33, 4,53, 5,49,
6,07, 6,17, 6,52, 6,76, 7,31, 7,67, 8,16, 8,62.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
17,77, 20,11, 25,36, 28,31, 31,51, 31,96, 39,57, 50,18, 50,45,
61,88, 74,50, 80,15, 85,90, 88,58, 96,25, 122,51, 132,82, 133,34,
136,73, 138,22, 146,57, 149,90, 155,65, 155,96, 162,08,
171,89,
174,06.
174,06.
Ejemplo
27
Se agitó el compuesto 35 (638,8 mg, 1,03 mmol)
en 6 ml de DCM anhidro y 4 ml de TFA a temperatura ambiente durante
2 horas. Se agregó éter etílico a la solución para precipitar el
producto crudo que se filtró y lavó con éter para dar 36 como un
sólido blanco (534,5 mg, 82%).
^{1}H NMR (270 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 1,52 (s, 3H,
(CH_{3})_{2}CH) 1,55 (s, 3H,
(CH_{3})_{2}CH), 1,62, (d, 1H, J = 8,1 Hz),
(CH_{3})_{2}
CH), 2,22 (s, 3H, CH_{3}Ar), 2,57 (s, 3H, CH_{3}Ar), 2,97 (s, 2H, CH_{2}C(=O)), 3,41-4,27 (m, 5H, Ara-Cs H-2'-H5'), 6,09 (d, 1H, J = 5,4 Hz, Ara-Cs H-1'), 6,67 (s, 1H, Ar-H), 6,90 (s, 1H, Ar-H), 7,12 (d, J = 5,4 Hz, H-6), 8,05 (d, J = 8,1 Hz, H-5), 8,67 (bs, 1H, TFA).
CH), 2,22 (s, 3H, CH_{3}Ar), 2,57 (s, 3H, CH_{3}Ar), 2,97 (s, 2H, CH_{2}C(=O)), 3,41-4,27 (m, 5H, Ara-Cs H-2'-H5'), 6,09 (d, 1H, J = 5,4 Hz, Ara-Cs H-1'), 6,67 (s, 1H, Ar-H), 6,90 (s, 1H, Ar-H), 7,12 (d, J = 5,4 Hz, H-6), 8,05 (d, J = 8,1 Hz, H-5), 8,67 (bs, 1H, TFA).
^{13}C NMR (67,80 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 15,45, 19,67, 24,97, 31,05,
31,23, 38,56, 40,41, 48,53, 49,02, 61,02, 64,94, 74,64, 76,14,
85,74, 86,95, 94,32, 122,32, 132,41, 134,08, 135,67, 138,09, 146,71,
149,20, 154,50, 158,21, 158,72, 162,02, 169,68, 171,87.
Ejemplo
28
Se agitó una solución de 778 mg (0,019 mmol) de
10, 40 mg (0,077 mmol) de 36, y 20 mg (0,15 mmol) de DIPEA en 10 ml
de DCM anhidro a temperatura ambiente durante la noche. Se eliminó
el solvente bajo vacío y se recristalizó el residuo desde
2-propanol para dar 650 mg (rendimiento 84%) de 34
como un sólido blanco. Los datos de NMR correspondieron con el
producto del Ejemplo 25.
Ejemplo
29
Se agitó una mezcla de 359 mg (0,91 mmol) de 1,
960 mg (3,65 mmol) de gemcitabina, 492 mg (3,65 mmol) de HOBT, 737
mg (7,29 mmol) de NMM, y 390 mg (2,04 mmol) de EDC en 25 ml de
piridina anhidra a temperatura ambiente durante 3 días. Se concentró
la mezcla bajo vacío y se purificó el residuo por cromatografía en
columna (acetato de etilo) para dar 280 mg (48%) de 38.
^{1}H NMR (270 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,26
(s, 3H), 1,28 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,55 (s, 3H),
1,63 (bs, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,53 (s, 3H), 2,92 (dd, 2H, J = 29,7,
16,2 Hz) 3,96 (m, 2H), 4,50 (bs, 1H), 5,41 (bs, 1H), 6,21 (bs, 1H),
6,50 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,35 (d, 1H, J = 5,4 Hz), 8,02 (d, 1H, J
= 8,1 Hz), 9,37 (bs, 1H).
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
17,40, 20,16, 25,54, 26,89, 28,28, 29,68, 31,36, 31,93, 39,29,
50,05, 50,53, 59,57, 68,96, 80,68, 81,50, 97,50, 122,46, 132,92,
133,49, 136,66, 138,25, 144,97, 149,64, 155,75, 162,89,
172,04,
173,48.
173,48.
\newpage
Ejemplo
30
Se agitó el compuesto 38 (280 mg, 0,44 mmol) en
5 ml de TFA y 5 ml de DCM anhidro a temperatura ambiente durante 1
hora. Se eliminó el solvente bajo vacío y se agregó éter etílico
para precipitar el producto que se recogió por filtración y se lavó
con éter etílico para dar 250 mg (87%) de 39.
^{1}H NMR (270 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 1,48 (d, 6H, J = 8,1 Hz) 1,58
(d, 6H, J = 5,4 Hz), 2,95 (s, 3H), 3,61-3,66 (m,
1H), 3,77-3,90 (m, 2H), 4,14 (m, 1H), 4,45 (m, 1H),
4,72 (m, 1H), 5,23 (bs, 1H), 6,16 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 6,34 (bs, 1H)
6,60 (s, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,13 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,18 (d, 1H, J
= 8,1 Hz), 8,47 (bs, 3H).
^{13}C NMR (67,80 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 15,38, 19,63, 24,92, 30,99,
31,07, 31,15, 48,47, 49,12, 58,73, 68,35, 81,07, 95,81, 122,19,
122,91, 132,41, 133,95, 135,65, 138,09, 144,75, 149,07, 154,14,
162,69, 169,65, 172,05.
Ejemplo
31
Se agitó una solución de 778 mg (0,019 mmol) de
10, 50 mg (0,077 mmol) de 39, y 20 mg (0,15 mmol) de DIPEA en 10 ml
de DCM anhidro a temperatura ambiente durante la noche. Se eliminó
el solvente bajo vacío y se recristalizó el residuo desde
2-propanol para dar 40.
Ejemplo
32
Se agitó una mezcla de 1,0 g (0,025 mmol) de 11,
13,7 mg (0,10 mmol) de p-nitrofenol, 12,4 mg (0,10
mmol) de DIPC, y 12,0 mg (0,10 mmol) de DMAP en 10 ml de DCM anhidro
a 0ºC hasta temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la
solución y se usó éter etílico para precipitar un sólido, que se usó
para la siguiente etapa sin otra purificación. Se hizo reaccionar el
éster de p-nitofenol de 11 con 45 mg (0,15 mmol) de
melfalan en presencia de 51 mg (0,40 mmol) de DIPEA en 10 ml de
N,N-dimetilformamida anhidra a temperatura ambiente
durante la noche. Se agregó éter etílico para precipitar el producto
crudo que se recristalizó desde 2-propanol para dar
700 mg (70%) de producto.
^{13}C NMR (67,80 MHz, CDCl_{3}) \delta
16,35, 16,70, 19,59, 20,64, 21,31, 24,67, 25,12, 31,04, 31,15,
36,02, 38,47, 39,12, 40,01, 47,18, 47,40, 48,35, 52,84, 61,62,
68,08-71,63 (PEG), 111,22, 125,57, 130,44, 131,67,
131,72, 133,81, 135,66, 135,90, 137,36, 142,80, 144,17, 149,02,
154,62, 168,34, 169,26, 168,25, 171,8, 171,52.
Ejemplo
33
Se preparó el compuesto 44 a partir de
2,5-fenomenológica, 43, usando un procedimiento
descrito (L. A. Cohen, y col., J. Am. Chem. Soc. 1972, 94,
9158).
Se convierte el compuesto 44 en el compuesto 45
mediante el procedimiento usado para la preparación del compuesto 1
como se describió. Se somete el compuesto 45 a los procedimientos de
los Ejemplos 29-31 para obtener el compuesto 46.
Las diversas publicaciones, patentes,
solicitudes de patente y solicitudes publicadas nombradas en esta
solicitud se incorporan en este documento por referencia.
Aunque se han descrito las que actualmente se
cree que son las formas de realización de preferencia de la
invención, los expertos en la técnica reconocerán que pueden
realizarse cambios y modificaciones sin apartarse del espíritu de la
invención. Se pretende reivindicar todos los cambios y
modificaciones que estén comprendidas dentro del verdadero ámbito de
la invención.
Claims (34)
1. Un compuesto que comprende la fórmula:
en el
que:
B es H, OH, OSiR_{13}, un residuo de un
fragmento blanco que contiene amina o un residuo de un fragmento que
contiene hidroxilo; L_{1} y L_{2} son fragmentos de unión
bifuncionales;
Y_{2} es O o S;
R_{2} se selecciona del grupo constituido por
alquilos C_{1-6}, alquilos
C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6}, heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos, alcoxi C_{1-6}, fenoxi y heteroalcoxi
C_{1-6};
R_{9}, R_{10} y R_{13} son
independientemente uno de hidrógeno, alquilos
C_{1-6}, alquilos C_{3-12}
ramificados, cicloalquilos C_{3-8}, alquilos
C_{1-6} sustituidos, cicloalquilos
C_{3-8} sustituidos, arilos, arilos sustituidos,
aralquilos, heteroalquilos C_{1-6}, heteroalquilos
C_{1-6} sustituidos, alcoxi
C_{1-6}, fenoxi y heteroalcoxi
C_{1-6};
Ar es un fragmento que, cuando está incluido en
la Fórmula (I), forma un hidrocarburo aromático con múltiples
sustituciones o un grupo heterocíclico con múltiples
sustituciones;
(m) es cero o uno; y
R_{11} es un residuo polímero.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que
en el
que:
M es X ó Q; en el que
X es un grupo aceptor de electrones;
Q es un fragmento que contiene un par de
electrones libres ubicados a una distancia de tres a seis átomos
desde C(=Y_{2});
(n) es cero o un entero positivo;
(q) es tres o cuatro; y
R_{7} y R_{8} se seleccionan
independientemente del grupo que define a R_{9}.
3. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que L_{2} es R_{1}
en el que G
es
---
\uelm{C}{\uelm{\dpara}{Y _{1} }}
---o
CH_{2};
Y_{1} es O o S;
(p) es cero, uno o dos; y
R_{1} y R_{4} se seleccionan
independientemente del grupo que define a R_{2}.
4. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que Ar se selecciona del grupo constituido por:
en los que J es O, S o
NR_{14};
E y Z son independientemente CR_{14} o
NR_{14}; y
R_{14} se selecciona independientemente del
grupo que define a R_{9}.
5. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que Ar es
en el que R_{3}, R_{5} y
R_{6} se seleccionan independientemente del grupo que define a R9
o un grupo ciano, nitro, carboxilo, acilo, acilo sustituido o
carboxialquilo.
6. El compuesto de la reivindicación 5, en el
que R_{2} y R_{5} se seleccionan independientemente del grupo
constituido por alquilos C_{1-6}.
7. El compuesto de la reivindicación 6, en el
que R_{2} y R_{5} son metilo.
8. El compuesto de la reivindicación 5, en el
que R_{3} y R_{6} son hidrógeno.
9. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que R_{11} además comprende un grupo de cierre A.
10. El compuesto de la reivindicación 9, en el
que A se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, CO_{2}H,
fragmentos alquilo C_{1-6}, alquilos de
dialquilacilurea y
en el que B' es igual a B u otro
miembro del grupo definido por
B.
11. El compuesto de la reivindicación 3, en el
que R_{1} y R_{4} se seleccionan independientemente del grupo
constituido por CH_{3} y CH_{2}CH_{3}.
12. El compuesto de la reivindicación 2, en el
que X se selecciona del grupo constituido por O, NR_{12}, S, SO y
donde R_{12} se selecciona del grupo constituido por hidrógeno,
alquilos C_{1-6}, alquilos
C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6} y heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos.
13. El compuesto de la reivindicación 12, en el
que X se selecciona del grupo constituido por O y NR_{12}.
14. El compuesto de la reivindicación 2, en el
que Q se selecciona del grupo constituido por grupos alquilos
C_{2-4}, cicloalquilos, arilos, aralquilos
sustituidos con un miembro del grupo constituido por NH, O, S,
-CH_{2}-C(O)-NH-, y fenilos
sustituidos en posición orto.
15. El compuesto de la reivindicación 2, en el
que (n) es un número entero desde 1 hasta 12.
16. El compuesto de la reivindicación 15, en el
que (n) es 1 ó 2.
17. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que (m) es 0.
18. El compuesto de la reivindicación 3, en el
que (p) es uno.
19. El compuesto de la reivindicación 2, en el
que Y_{1-2} son ambos 0.
20. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que R_{11} comprende un óxido de polialquileno.
21. El compuesto de la reivindicación 20, en el
que dicho óxido de polialquileno comprende polietilenglicol.
22. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que dicho residuo polímero tiene un peso molecular desde
aproximadamente 2.000 hasta aproximadamente 100.000.
23. El compuesto de la reivindicación 22, en el
que dicho residuo polímero tiene un peso molecular desde
aproximadamente 5.000 hasta aproximadamente 40.000.
24. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que R_{11} se selecciona del grupo constituido por
-C(=Y)-(CH_{2})_{a}-O-(CH_{2}CH_{20})_{x}-A,
-C(=Y)-Y-(CH_{2})_{a}-(CH_{2}CH_{20})_{x}-A
y
-C(=Y)-NR_{12}-(CH_{2})_{a}-O-(CH_{2}CH_{20})_{x}-A,
en los que (a) es cero o un número entero
positivo;
Y es O o S;
A es un grupo de cierre; y
(x) representa el grado de polimerización.
25. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que B es un grupo saliente seleccionado del grupo constituido por
N-hidroxibenzotriazolilo, halógeno,
N-hidroxiftalimidilo, p-nitrofenoxi,
imidazolilo, N-hidroxisuccinimidilo, tiazolidiltiona
y un grupo activador ácido.
26. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que B es un residuo de un miembro del grupo constituido por
antraciclinas, daunorrubicina, doxorrubicina, mostaza de
p-hidroxianilina, Ara-C, arabinósido
de citosina y gemcitabina.
27. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que B es un residuo de una enzima, proteína o un compuesto que
contiene amina seleccionado del grupo constituido por agentes
cardiovasculares, antineoplásicos, antiinfecciosos, antifúngicos,
agentes ansiolíticos, agentes gastrointestinales, agentes
activadores del sistema nervioso central, agentes analgésicos,
agentes de fertilidad, agentes anticonceptivos, agentes
antiinflamatorios, agentes esteroidales, agentes antiuricémicos,
agentes vasodilatadores y agentes vasoconstrictores.
28. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que B incluye un segundo sistema de transporte polimérico.
29. Un compuesto de la reivindicación 1,
seleccionado del grupo constituido por:
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en los que, R_{3}, R_{5} y
R_{6} se seleccionan independientemente del grupo que define a
R_{9} o se seleccionan del grupo constituido por ciano, nitro,
carboxilo, acilo, acilo sustituido y
carboxialquilo;
n es cero o un número entero positivo;
p es un número entero desde 1 hasta 3;
J es O, S o se selecciona independientemente del
grupo que define a R_{9};
M es X o Q, y X es un grupo aceptor de
electrones y Q es un fragmento que contiene un par de electrones
libres ubicados a una distancia de tres a seis átomos desde
C(=Y_{2});
G es -C(Y_{1})-o
CH_{2} e Y_{1} es O o S;
R_{1}, R_{4}, R_{7} y R_{8} se
seleccionan independientemente del grupo constituido por hidrógeno,
alquilos C_{1-6}, alquilos
C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6} y heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos; y PEG es un residuo polietilenglicol.
30. Un procedimiento para preparar una forma de
transporte de profármaco, que comprende:
a. proveer un compuesto intermedio (III)
en el
que
M_{2} es un grupo protector clivable o
reversible;
L_{1} y L_{2} son fragmentos de unión
bifuncionales;
B_{2} es un grupo saliente;
Y_{2} es O o S;
R_{2} se selecciona del grupo constituido por
alquilos C_{1-6}, alquilos
C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6} y heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos; y
Ar es un fragmento que, cuando está incluido en
el compuesto (III), forma un hidrocarburo aromático con múltiples
sustituciones o un grupo heterocíclico con múltiples
sustituciones;
b. tratar el compuesto intermedio (III) con un
ácido o por hidrogenación catalítica para eliminar el grupo
protector; y
c. hacer reaccionar el compuesto intermedio
(III) desprotegido con un fragmento capaz de reaccionar con
L_{1}.
31. El procedimiento de la reivindicación 30,
que además comprende la etapa de:
d. hacer reaccionar el compuesto resultante en
la etapa c) con un compuesto que contiene amina o hidroxilo para
formar un conjugado.
32. El procedimiento de la reivindicación 30 en
el que el fragmento capaz de reaccionar con L_{1}, es un polímero
activado.
33. Un procedimiento para preparar una forma de
transporte de profármaco, que comprende:
a. hacer reaccionar un compuesto intermedio
(III)
en el
que
M_{2} es un grupo protector clivable o
reversible;
L_{1} y L_{2} son fragmentos de unión
bifuncionales;
B_{2} es un grupo saliente;
Y_{2} es O o S;
R_{2} se selecciona del grupo constituido por
alquilos C_{1-6}, alquilos
C_{3-12} ramificados, cicloalquilos
C_{3-8}, alquilos C_{1-6}
sustituidos, cicloalquilos C_{3-8} sustituidos,
arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos
C_{1-6} y heteroalquilos C_{1-6}
sustituidos; y
Ar es un fragmento que, cuando está incluido en
el compuesto (III), forma un hidrocarburo aromático con múltiples
sustituciones o un grupo heterocíclico con múltiples
sustituciones;
con un compuesto que contiene amina o hidroxilo
para formar un segundo compuesto intermedio;
b. tratar el segundo compuesto intermedio con un
ácido o por hidrogenación catalítica para eliminar el grupo
protector; y
c. hacer reaccionar el segundo compuesto
intermedio desprotegido con un polímero activado.
34. Un profármaco para uso en un procedimiento
para tratamiento de un mamífero, en el que el profármaco es un
compuesto como se definió en la reivindicación 1 en el que B es un
residuo de un fragmento terapéutico que contiene amina o
hidroxilo.
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