ES2258870T3 - Preparados proteicos estabilizados para un adhesivo para tejidos. - Google Patents
Preparados proteicos estabilizados para un adhesivo para tejidos.Info
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Abstract
Adhesivo para tejidos con capacidad de almacenamiento, caracterizado porque contiene tres componentes separados entre sí, que son (i) un preparado proteico estabilizado, esencialmente libre de fibrinógeno, con capacidad de almacenamiento en estado líquido, que contiene el factor de coagulación sanguínea Xlll, (ii) un preparado proteico estabilizado, con capacidad de almacenamiento en estado líquido que contiene fibrinógeno, al que se agregó una o más sustancia(s) caotrópicas para evitar o reducir la agregación de fibrinógeno, (iii) un preparado que contiene trombina, que se ponen a disposición en un solo estuche preparado para una aplicación conjunta.
Description
Preparados proteicos estabilizados para un
adhesivo para tejidos.
El objeto de la invención es un adhesivo para
tejidos, así como preparados proteicos estabilizados para un
adhesivo para tejidos o preparados de aplicación parenteral, que
durante el almacenamiento en estado líquido o después de
almacenados en estado congelado, no muestran una importante pérdida
de su efecto al descongelar, ni tampoco después de un posterior
almacenamiento en estado líquido durante varios meses o años,
caracterizado porque se presentan separados el factor XIII y
fibrinógeno.
Se conoce que para la unión de tejidos humanos o
animales pueden usarse adhesivos para tejidos que se componen entre
otros, de los componentes principales fibrinógeno, factor XIII y
trombina. Estos preparados proteicos requieren de una estabilización
cuidadosa, a fin de mantener su efecto completo y sus propiedades de
aplicación hasta su uso en cirugía para la adhesión de tejidos.
La adhesión de tejidos es un método que ya se
describió a comienzos de este siglo y posteriormente en repetidas
oportunidades (S. Berget: Über Wirkungen des Fibrins. Dtsch. med.
Wschr. 35:663-5 (1909); E.P. Cronkite, E.L. Lozner,
J.M. Deavec Use of thrombin and fibrinogen in skin grafting. JAMA
124:976-8 (1944); H. Mattas; H.P. Dinges. H.
Lassmann, B. Mammoli, Wr. med. wschr. 37:517 (1972); H. Matras, H.P.
Dinges, H. Lassmann, B. Mammoli: J. max. fac. Surg. 1:37 (1973); H.
Matras, F. Braun, H. Lassmann, H.P. Ammerer, B. Mammoli: Plasma clot
welding of nerves (experimental report) J. max. fac. Surg.
1:2364(1973); H. Kudema, H. Matras. Wiener klin. Wschr.
87:495-496 (1975)). Mientras que al principio aún se
utilizaba plasma o fibrinógeno en polvo, luego se utilizó
fibrinógeno purificado, por ejemplo en forma de crioprecipitado.
Con la fabricación comercial de concentrados de
fibrinógeno/factor XIII y trombina a partir de la década del 70, la
adhesión de tejidos adquirió mucho mayor importancia y en la
actualidad se utiliza por ejemplo para reforzar suturas, la
hemostasis local, el sellado de cavidades corporales para evitar
pérdidas de fluidos, así como para la curación de heridas. La
adhesión de tejidos con adhesivos de fibrinas es un método
fisiológico y por lo tanto presenta ventajas respecto de su
tolerancia y degradabilidad frente a adhesivos sintéticos.
Los adhesivos para tejidos pueden obtenerse en
el mercado, ya sea como sustancias liofilizadas o como preparados
congelados. Pero después de la reconstitución o bien después de
descongelados, los productos sólo son estables durante pocos días en
solución, dado que p. Ej. en las soluciones de alta concentración de
fibrinógeno/factor XIII se produce una agregación y con ello un
aumento de viscosidad o una inactivación (p. ej. proteolítica) que
imposibilita un uso posterior.
Incluso los adhesivos para tejidos que se
describieron hasta el momento en la literatura y que aún no se
encuentran en venta en el mercado, por lo general se componen de
componentes congelados o liofilizados que deben ser descongelados o
disueltos antes de su uso. A efectos de mejorar la procesabilidad,
la solubilidad, el descongelamiento o la estabilidad del concentrado
de fibrinógeno, se describió en la Patente Europea 0 085 923, en la
Patente Alemana 196 17 369 y en la Patente Europea 0 856 317 el uso
de agentes caotrópicos o en general de aditivos que mejoran la
solubilidad de proteínas, como arginina o urea o sus derivados o
derivados de benceno, imidazol, pirazol, furano, tiazol y purina.
Aquí debe entenderse por agentes caotrópicos, aquellos agentes que
reducen o bien desestabilizan la interacción de proteínas o de
partes de ellas, y así reducen su tendencia a la agregación. Allí es
de importancia, asegurar la estabilidad de los componentes como
fibrinógeno y factor XIII, incluso en presencia de estos agentes
caotrópicos y en las condiciones escogidas. Ello no se logró hasta
el momento en concentrados de fibrinógeno/factor XIII congelados y a
almacenarse en estado líquido durante varias semanas y meses después
de descongelados.
Tanto durante el almacenamiento en estado
líquido, pero especialmente al almacenar en estado congelado, en
las formulaciones que se describieron hasta ahora a tal efecto, la
pérdida de la actividad del F XIII es tan elevada, que el contenido
del F XIII en presencia de cantidades efectivas de agentes
caotrópicos disminuye en forma considerable, con frecuencia ya
luego de pocas semanas o meses, en ocasiones hasta debajo del límite
de comprobación.
En las formulaciones correspondientes a la
Patente Europea 0 856 317 se observó que el ácido tranexámico
(AMCA), especialmente también en presencia de agentes caotrópicos, como por ejemplo arginina y sales inorgánicas, reduce considerablemente el contenido del F XIII durante el almacenamiento a -20ºC (Tab. 1b, preparación 1). El almacenamiento a 4ºC produjo en esa formulación un aumento de la viscosidad (Tab. 1a, preparación 1), lo que también excluye un almacenamiento más prolongado. Por lo tanto estas formulaciones deben denominarse como no estables en vista a la simultánea estabilidad de fibrinógeno y F XIII. También en el caso de las formulaciones conforme la DE 196 17 369 se presentan dificultades para mantener la actividad del F XIII (véase Tab. 1, preparación 2 y 3). En la EP 554 570 se describe una solución estable de fibrinógeno que se somete como mínimo a dos pasos de absorción, y puede así almacenarse durante un período más prolongado.
(AMCA), especialmente también en presencia de agentes caotrópicos, como por ejemplo arginina y sales inorgánicas, reduce considerablemente el contenido del F XIII durante el almacenamiento a -20ºC (Tab. 1b, preparación 1). El almacenamiento a 4ºC produjo en esa formulación un aumento de la viscosidad (Tab. 1a, preparación 1), lo que también excluye un almacenamiento más prolongado. Por lo tanto estas formulaciones deben denominarse como no estables en vista a la simultánea estabilidad de fibrinógeno y F XIII. También en el caso de las formulaciones conforme la DE 196 17 369 se presentan dificultades para mantener la actividad del F XIII (véase Tab. 1, preparación 2 y 3). En la EP 554 570 se describe una solución estable de fibrinógeno que se somete como mínimo a dos pasos de absorción, y puede así almacenarse durante un período más prolongado.
De la Patente Europea 0 487 713 además se conoce
un adhesivo biológico para tejidos humanos o animales que se
presenta estabilizado en forma líquida a bajas temperaturas. Ello ha
de lograrse en tanto el preparado que contiene fibrinógeno,
contenga un agente caotrópico en una concentración que oscila
aproximadamente entre 0,3 M y 1 M y el adhesivo se encuentra en
estado líquido a la temperatura de almacenamiento.
Típicamente, un concentrado de fibrinógeno de
tal tipo contiene aproximadamente citrato trisódico 4 mM, NaCl 240
mM, ácido aminocaproico 80 mM (EACA), glicina 240 mM, 1%
polisorbato, 0, 6 g/l de caprolato de sodio, urea 0,5 M en su caso
2.000 KlE/ml de aprotinina y un valor de pH 7,5. La estabilidad ya
se evaluó al cabo de 1 mes, lo que constituye muy poco tiempo para
un preparado terapéutico. No se determinó allí la actividad del F
XIII. J. Chabbat et al. también informaron de un concentrado
de fibrinógeno, que se mantiene estable a 4ºC durante 6 meses en
estado líquido (J. Chabbat, M. Tellier, P. Porte y M. Steinbuch:
Properties of a new fibrin glue stable in liquid state. Thromb. Res.
76: 525-533 (1994)). Este concentrado contenía como
aditivos caotrópicos, urea 0,5 M o arginina al 5% (= 0,29 M) además
de otros componentes de formulación, típicamente NaCl 60 mM/l, EACA
20 mM/l y glicina 60 mM/l. Aunque tampoco aquí se analizó el
contenido del F XIII.
Estas formulaciones líquidas que se describen en
la Patente Europea 0487713 y en la literatura, se caracterizan
porque se impide o se reduce la agregación (polimerización) y con
ello el aumento de la viscosidad del componente fibrinógeno
concentrado a temperatura de refrigerador. Aunque en estas
condiciones, se desactiva en mayor o menor grado el factor XIII, que
es un componente esencial de los concentrados de fibrinógeno para
adhesivos de fibrina. En las formulaciones previstas para un
almacenamiento en estado enfriado conforme la Patente Europea 0 487
713 o bien la publicación relacionada de Chabbat et al.
[J.Chabbat, M.Tellier, P.Porle y M.Steinbuch: Properties of a new
fibrin gluestable in liquid state. Thromb. Res.
76:525-533 (1994)], la inestabilidad del FXIII
representa en forma correspondiente un problema esencial, que
tampoco se soluciona a través de las formulaciones propuestas (véase
Tabla 1, preparados 4-5). Además, el contenido de
agentes caotrópicos es relativamente alto con aproximadamente 0,3 a
1,0 M/l, por lo que parece deseable lograr concentraciones menores
de agentes caotrópicos
(<0,3 M/l).
(<0,3 M/l).
Puede determinarse por lo tanto que al estudiar
la estabilidad de preparados de fibrinógeno/factor XIII, así como
la viscosidad de diversos preparados conocidos de fibrinógeno/factor
XIII en estado enfriado (0 a 10ºC) o en estado congelado con
posterior almacenamiento en estado enfriado (0 a 10ºC), se encontró
que las formulaciones que se describieron hasta ahora, no generan
preparados proteicos estables. Ya sea el fibrinógeno o el factor
XIII evidencian considerables reducciones de actividad a lo largo
del tiempo de almacenamiento o la agregación de fibrinógeno produce
un material viscoso que ya no puede aplicarse (véase Tab. 1,
preparados 1 a 5).
Se ofrece por lo tanto la tarea de desarrollar
preparados proteicos líquidos y estables a lo largo de varios
meses, o congelados y estables durante varios meses luego del
descongelado, en los cuales se encuentran estabilizados el
fibrinógeno o bien el factor XIII durante meses o años sin una
pérdida considerable de la acción.
Este objetivo se cumple a través de preparados
proteicos estabilizados, que presentan la ventaja frente al estado
de la técnica que se encuentran estabilizados a través de los
aditivos no sólo el fibrinógeno, sino también el factor XIII y
porque puede reducirse el contenido de reactivos caotrópicos, y ante
todo porque el fibrinógeno y el factor XIII se formulan por
separado y con ello se mantienen estables.
Ello se produce porque en preparados congelados
y a mantenerse estables durante varias semanas o meses después de
descongelados, se utiliza un agente caotrópico conforme la
definición que se indicó aquí, en concentraciones bajas para evitar
la agregación de fibrinógeno, porque se reduce la concentración de
sales inorgánicas y porque en su caso se utiliza un
antifibrinolítico, así como otros aditivos y sustancias buffer
usuales.
Como antifibrinolítico puede usarse aprotinina o
lisina o ácido \varepsilon-aminocaproico (EACA) o
ácido p-aminometilbenzoico (PAMBA) o sus sales
aceptables desde el punto de vista fisiológico. Durante los estudios
realizados para actuar sobre diversos antifibrinolíticos se encontró
sorprendentemente que la lisina, PAMBA o EACA no ejercen una
influencia negativa sobre la actividad del FXIII, mientras se
observó una acción negativa del ácido tranexámico. Como otros
estabilizadores para el F XIII pueden utilizarse p. ej. citrato
sódico, aminoácidos y azúcar.
Ambos preparados proteicos que contienen factor
XIII y fibrinógeno con sus respectivos estabilizadores, deben
almacenarse separados uno del otro y mezclarse con el preparado con
contenido de trombina, recién justo antes de su uso como adhesivo
para tejidos. El objeto de la invención es un adhesivo para tejidos,
que se compone de una solución que contiene el factor XIII
estabilizado, una solución que contiene el fibrinógeno estabilizado,
así como una solución que contiene trombina estabilizado, que se
disponen separadas entre sí en un solo estuche preparada para un uso
conjunto. Ello también presenta la ventaja adicional, que según sea
necesario, puede modificarse la proporción del factor XIII y del
fibrinógeno, adaptándose a la respectiva situación.
Se conocen y se describen concentrados de
fibrinógeno, en los cuales la estabilidad después de descongelados
se limita a pocos días. La duración limitada del concentrado de
fibrinógenos se debe entre otros factores a que pronto aumenta la
viscosidad debido a la agregación del fibrinógeno. Aunque puede
mantenerse una viscosidad reducida mediante el agregado de
compuestos que impiden la agregación, es decir compuestos
caotrópicos en estado líquido. Pero estos agentes presentan la
desventaja que en estado congelado (por ejemplo a -20ºC) producen
una reducción de la actividad del factor XIII. La merma de la
actividad del FXIII por lo general se produce de modo tanto más
rápido, cuanto mayor es la concentración de agentes caotrópicos.
Al desarrollar los preparados proteicos según la
invención, se demostró entonces, que no cualquier agente caotrópico
actúa del mismo modo sobre la estabilidad del factor XIII y que ante
todo también los demás aditivos a agregar según la invención,
ejercen una considerable influencia sobre la estabilidad del factor
XIII y sobre la viscosidad modificada por la agregación de
fibrinógeno. De este modo, la arginina se utiliza esencialmente con
la misma molaridad para evitar la polimerización o bien la
agregación de fibrinógeno como urea. Los aditivos antifibrinolíticos
como el ácido \varepsilon-aminocaproico (EACA), el
ácido p-aminometilciclohexancarboxílico (AMCA) o el
ácido p-aminometilbenzoico (PAMBA), así como sus
sales aceptables desde el punto de vista fisiológico actúan sobre la
agregación de fibrinógeno y la estabilidad del F XIII.
Especialmente, AMCA tiene en este caso un efecto negativo sobre la
actividad del F XIII durante el almacenamiento en estado congelado.
Sorprendentemente, el EACA, aunque posea una estructura química muy
similar al AMCA, no produce en condiciones equivalentes la misma
reducción del factor XIII que el AMCA. Se encontró además, que no se
reduce la actividad del F XIII en concentrados proteicos congelados,
en presencia de determinadas concentraciones de agentes caotrópicos,
si se prescinde totalmente o en parte del agregado de sales
inorgánicas realizado habitualmente hasta ahora. De ese modo, se
desarrolló un preparado según la invención, en el cual el
fibrinógeno después del congelado y posterior descongelado permanece
en estado líquido durante al menos varias semanas o incluso meses, y
se preserva la actividad, cuando esta formulación contiene como una
sustancia que impide o reduce la agregación de fibrinógeno, un
compuesto caotrópico en una cantidad inferior a 0,28 mol/l. Resultó
especialmente efectiva la arginina en una cantidad de
aproximadamente 2% en peso. Otros agentes levemente caotrópicos,
como citrulina, nicotinamida, urea u otros, o mezclas de éstos o
bien con arginina pueden usarse en una cantidad de hasta
aproximadamente 0,28 M, en especial de 0,1 a 0,20 M. Por lo demás,
pueden también usarse además de los antifibrinolíticos, sales
inorgánicas hidrosolubles en concentraciones de \leq 100 mmol/l,
en especial de \leq 550 mmol/l, de especial preferencia en
concentraciones de
\leq 20 mmol/l.
\leq 20 mmol/l.
En uno de las preparados de la invención se
mantiene estable tanto el fibrinógeno como también el factor XIII,
tanto durante el almacenamiento en estado congelado, como también en
estado líquido, como mínimo durante varias semanas/meses. También
puede resultar favorable para la estabilidad, el agregado de otros
componentes, como por ejemplo, sales del ácido cítrico o del ácido
láctico o uno o varios aminoácidos o un mono o disacárido o un
azúcar-alcohol o una de esas mezclas. En estas
composiciones, el preparado de la invención puede congelarse y
descongelarse nuevamente, o bien congelarse nuevamente después de la
reconstitución de un liofilizado de adhesivo de fibrina y
almacenarse en estado congelado como preparado estable de
fibrinógeno/F XIII. Dado que en los preparados proteicos
liofilizados o congelados utilizados como adhesivo para tejidos
usuales en el mercado, no es posible repetir el congelado, puede
verse aquí otra ventaja de las formulaciones según la invención.
Esta propiedad facilita el manipuleo con liofilizados luego de su
reconstitución o de preparados que se almacenan congelados, en caso
que no pueda utilizarse de una sola vez la cantidad completa de
ellos.
En los siguientes ejemplos se explica el
preparado de preparados de referencia de fibrinógeno,
fibrinógeno/factor XIII o bien de concentrados factor XIII para
controlar los valores de estabilidad de distintas formulaciones.
Como materiales de partida también pueden usarse por ejemplo
fibrinógeno, F XIII o trombina provenientes de una preparación
transgénica o bien recombinante:
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó un concentrado de fibrinógeno a
partir de un crioprecipitado mediante precipitación, absorción de
Al(OH)_{3}, inactivación de virus y una
precipitación adicional [véase P. Fuhge, P. Gratz, H. Geiger.
Moderne Methoden zur Herstellung de Gerinnungstherapeutika. Behring
Inst. Mitt. 79:164-176, (1966)]. Para la
inactivación o bien eliminación de virus pueden aplicarse diferentes
procedimientos químicos o físicos que actúan contra virus
recubiertos y/o no recubiertos. El concentrado de fibrinógeno se
ajustó mediante diafiltración y posterior concentración a la
respectiva composición, así como a una concentración final de
fibrinógeno superior a 15 mg/ml, de preferencia superior a 60 mg/ml.
La estabilidad de estos preparados de fibrinógeno se determinó en
presencia de azida sódica al 0,05% mediante almacenamiento a la
respectiva temperatura y el control de parámetros de análisis
relevantes, como fibrinógeno coagulable, actividad de F XIII,
viscosidad, degradación proteica a través de
SDS-PAGE etc.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó un factor XIII purificado a partir de
una fracción plasmática con contenido de FXIII (Fracción
1-Cohn) (H. E. Karges y R. Raps: Production and
virus safety of human F XIII concentrates. in: Factor XIII, eds. J.
McDonagh, R. Seitz, R. Egbring. Schattauer, Stuttgart/Nueva York
(1993), S. 66-76). Esa solución del F XIII, después
de la diálisis y eventualmente la ultrafiltración, se mezcló con los
estabilizadores a estudiar, y después de la filtración estéril, se
almacenó a diversas temperaturas o se utilizó para completar
concentrados de fibrinógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Al igual que en el Ejemplo 1, se preparó un
concentrado de fibrinógeno y se completó el contenido del F XIII
mediante el agregado de una solución del factor XIII. A través de
una posterior diálisis y concentración a aproximadamente 60 mg/ml
fibrinógeno y mayor, así como 10 U/ml de factor XIII y superior, se
obtuvieron los preparados utilizados para los estudios de
estabilidad. A fin de evitar el crecimiento de bacterias, las
preparados aún contenían 0,05% azida sódica o se filtraron estériles
utilizando filtros de 0,2 \mum de tamaño de poros.
\vskip1.000000\baselineskip
El concentrado de fibrinógeno liofilizado de un
adhesivo de fibrinas comercial (Beriplast P) se reconstituyó en
agua para inyectables o en una solución de aprotinina hasta un
contenido de fibrinógeno de >15 mg/ml, de preferencia a >60
mg/ml y se dializó contra mezclas de diferentes aditivos. En
presencia de 0,05% NaN_{3} para evitar el crecimiento de
bacterias, se almacenaron los concentrados de fibrinógeno/F XIII y
se determinó su estabilidad según diferentes tiempos.
\vskip1.000000\baselineskip
A partir de un crioprecipitado con posterior
absorción de AL(OH)_{3} e inactivación de virus, se
prepara un concentrado de fibrinógeno, cuya concentración del F
XIII se completamente eventualmente mediante el agregado de F XIII
purificado. Este concentrado se ajusta mediante diafiltración y
posterior concentrado a la respectiva composición, así como a una
concentración final de fibrinógeno de más de 15 mg/ml, de
preferencia de más de 40 mg/ml. Para comprobar la estabilidad de
almacenamiento se almacena en presencia de azida sódica al
0,05%.
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con los ejemplos que se mencionaron
precedentemente, se obtuvieron concentrados de fibrinógeno/factor
XIII, se dializaron contra diferentes buffer de formulación y se
liofilizaron. Los liofilizados resultantes se estudiaron
directamente respecto de la estabilidad o después de la
reconstitución, se almacenaron las soluciones obtenidas a
temperaturas de 0-10ºC y se verificó su estabilidad
del modo indicado.
Se determinó la estabilidad de preparados de
fibrinógeno, F XIII, así como fibrinógeno/F XIII, de acuerdo con
uno de los Ejemplos 1-6, mediante almacenamiento a
la respectiva temperatura y estudio de los parámetros de análisis
relevantes. Los resultados de estas pruebas se indican en las Tablas
1 a 3. Aunque por lo general también son adecuados otros métodos
para el preparado de fibrinógeno o factor XIII, que p. ej. pueden
contener otros pasos de purifica-
ción.
ción.
\vskip1.000000\baselineskip
También en concentrados líquidos de fibrinógeno
o bien fibrinógeno/factor XIII, que no se almacenan congelados, sino
sólo en estado enfriado a una temperatura de aproximadamente 0 a
10ºC, debe controlarse la agregación y por lo tanto el aumento de
viscosidad mediante el agregado de agentes caotrópicos. Por lo
general, a causa de ello se reduce en mayor o medida la actividad
del factor XIII (compárese Tab 1, preparación 4 y 5). Se encontró
entonces que puede impedirse o reducirse el aumento de viscosidad y
disminuirse la reducción del factor XIII, cuando se utiliza la
sustancia caotrópica en una cantidad inferior a 0,28 mol/l. Como
sustancias caotrópicas adecuadas resultaron, p. ej. arginina,
guanidina, citrulina, nicotinamida y sus mezclas, cuando se utilizan
en la cantidad que se indicó previamente. Es ventajoso además
agregar al preparado un antifibrinolítico, dentro de los cuales se
incluye preponderantemente aprotinina, lisina, ácido
\varepsilon-aminocaproico (EACA), ácido
p-amino-metilbenzoico (PAMBA) o una
de sus sales aceptables desde el punto de vista fisiológico o
derivados, así como estabilizador adicional del preparado de
fibrinógeno, o bien fibrinógeno-factor XIII, sales
aceptables desde el punto de vista fisiológico de ácidos
carboxílicos orgánicos, en especial del ácido cítrico o del ácido
láctico y eventualmente, uno o varios aminoácidos o un mono o
disacárido o azúcar-alcohol. De ese modo es posible
obtener un concentrado de fibrinógeno con un contenido de
fibrinógeno superior al 15 mg/ml, en especial superior a 60 mg/ml,
al utilizar agentes caotrópicos en una cantidad de hasta
0,28 M.
0,28 M.
Si se preparan mezclas de fibrinógeno y factor
XIII, la presencia simultánea de agentes caotrópicos y los aditivos
o mezclas que se mencionaron precedente, asegura que los preparados
alcancen respecto de las formulaciones conocidas, mejores valores de
estabilidad, tanto para el fibrinógeno, como también para el F
XIII. Esta mezcla de fibrinógeno y F XIII puede ponerse a
disposición en un solo estuche junto con una preparación que
contiene trombina, para un uso conjunto como adhesivo para
tejidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se demostró que puede mejorarse aún más la
estabilidad de una preparación líquida que contiene fibrinógeno y F
XIII, cuando se almacenan por separado el fibrinógeno y el factor
XIII, y se mezclan entre sí recién justo antes o bien durante el
uso. En este caso se estabiliza el concentrado del F XIII
independientemente del fibrinógeno. Como se demostró, puede
estabilizarse el preparado de factor XIII esencialmente libre de
fibrinógeno mediante el agregado de una sal aceptable desde el punto
de vista fisiológico de un ácido orgánico di o tricarboxílico, en
especial del ácido cítrico y el agregado de otros estabilizadores
usuales para F XIII en una cantidad de hasta 10% en peso, en
especial de hasta 5% en peso, así como mezclas de ellos, para el
almacenamiento en estado líquido a temperaturas de 0 a 10ºC o de 20
a 25ºC (véase Tabla 3). Como estabilizadores usuales para F XIII se
utilizan ventajosamente un mono o disacárido o
azúcar-alcoholes y aminoácidos del grupo glicina,
glicilglicina, alanina, cisteína, histidina, glutamina o sales
aceptables desde el punto de vista fisiológico del ácido glutamínico
o del ácido aspártico o sus mezclas. Además pueden eventualmente
agregarse aditivos para regular la osmolaridad, el valor del pH u
otros estabilizadores habituales para el F XIII. El concentrado de
fibrinógeno es estabilizado como ya se mencionó anterior-
mente.
mente.
El almacenamiento separado de preparados del
factor XIII-fibrinógeno a temperaturas de 0 a 10ºC,
que se proveyeron cada uno de estabilizadores específicos, permite
el preparado de un adhesivo de fibrinas, que incluye tres
componentes estables, líquidos, o sea el concentrado de fibrinógeno,
el concentrado de F XIII y el concentrado de trombina. De este modo,
los componentes son estables durante un período prolongado y
mantienen su actividad hasta que se mezclan entre sí justo antes o
durante el uso como adhesivo para tejidos. Las formulaciones aquí
indicadas también permiten el congelado de los distintos componentes
sin pérdida significativa de la actividad.
\vskip1.000000\baselineskip
Formulaciones análogas al estado de la
técnica:
- 1.
- 0,1 mol/l de NaCl, 3 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 8 g/l de glicina, 0,09 mol/l de L-arginina, 0,58 mol/l de AMCA, pH 7,4
- 2.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 1% glicina, 2% nicotamida, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,5
- 3.
- 1,8 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 16,3 g/l de glicina, 0,36 g/l de triton, 8,1 g/l de HSA, 0,2 mol/l de nicotamida, pH 7,3
- 4.
- 0,15 mol/l de NaCl, 0,29 mol/l de L-arginina, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,0
- 5.
- 0,15 mol/l de NaCl, 0,5 mol/urea, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,0
\vskip1.000000\baselineskip
Formulaciones de la invención, así como
preparados comparativas que contienen fibrinógeno o
fibrinógeno/factor XIII:
- 6.
- 6 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 0,12 mol/l de L-arginina, pH 7,4
- 7.
- 6 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 0,12 mol/l de L-arginina, 0,14 mol/l de citrulina, pH 7,4
- 8.
- 6 g/l Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,095 mol/l de L-arginina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,4
- 9.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,12 mol/l de L-arginina, 0,14 mol/l de citrulina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,4
- 10.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,12 mol/l de L-arginina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,4*
- 11.
- 0,1 mol/l de NaCl, 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}0, 0,24 mol/l de L-arginina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,4
- 12.
- 0,1 mol/l de NaCl, 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 320 mmol/l de L-Lys, pH 7,4
- 13.
- 6 mg/ml de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,12 mol/l de L-arginina, 0,14 mol/l de citrulina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,4
- 14.
- 14.3 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,0
- 15.
- 0,15 M NaCl, 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,0
- 16.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina x HCl, 60 mmol/l de FACA, pH 7,5
- 17.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina x HCl, 80 mmol/l de PAMBA, pH 7,2
- 18.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina x HCl, 8% manita, 80 mmol/l de EACA, pH 7,5
- 19.
- 6 g/l Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,15 M NaCl, 2% nicotamida, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,5
- 20.
- 0,15 mol/l de NaCl, 6 g/l Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 320 mmol/l de Lys, pH 7,5
- 21.
- 0,15 mol/l de NaCl, 6 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O 0,24 mol/l de L-arginina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,5
- 22.
- 5 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 320 mmol/l de Lys, pH 7,0
- 23.
- 6 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}0, 0,24 mol/l de L-arginina, 80 mmol/l de EACA, pH 7,0
- 24.
- 0,15 mol/l de NaCl, 6 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 2% L-His, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,5
- 25.
- 0,15 mol/l de NaCl, 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 0,24 mol/l de L-arginina, 2% sacarosa, 1.000 KIE/ml de aprotinina, pH 7,5
* preparación obtenida por la
reconstitución del correspondiente liofilizado con agua para
inyectables
\vskip1.000000\baselineskip
Formulaciones según la invención que contienen
el F XIII como componente individual:
- 26.
- 1,5 gl/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 2,9 g/l de NaCl, 3 g/l de L-arginina x HCI, pH 7,4
- 27.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, pH 7,4
- 28.
- 1,5 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 2,9 g/l de NaCl, pH 7,4
- 29.
- 3 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 1% Gly, pH 7,4
- 30.
- 3 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 2% manita, 10 mmol/l de L-His, pH 7,4
- 31.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 2% manita, pH 7,4
- 32.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 1% HSA, pH 7,4
- 33.
- 5 mmol/l de EDTA, 50 mmol/l Tris x HCI, pH 7,4
- 34.
- 6 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 1% L-His, pH 7,4
- 35.
- 1,5 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 2,92 g/l NaCl, 50 mmol/l de glicilglicina, pH 7,4
- 36.
- 3 g/l de Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O, 1% L-His, pH 7,4
- 37.
- 3 g/l de Na_{3} citrato x 2 H_{2}O, 38 mmol/l de glicilglicina, pH 7,4
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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| \begin{minipage}[t]{159mm} Evaluación de viscosidad (temperatura de almacenamiento 4^{o}C): 1 = viscosidad reducida, 2 = viscosidad media, 3 = viscosidad elevada. 4 = sólido a 4^{o}C. El tiempo de almacenamiento se indica en meses en todos las Tablas a continuación: \end{minipage} | |||||||||||||
| Preparación | |||||||||||||
| Tiempo de | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
| almacenamiento | |||||||||||||
| 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 0,5 | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 |
| 1 | 1 | 2 | 2 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 3 | 2 | 3 | 3 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 6 | 2 | 4 | 3 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 9 | 3 | nd | 3 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | ||||
| 12 | 3 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |||||
| Fibrinógeno (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: 4ºC | |||||||||||||
| Preparación | |||||||||||||
| Tiempo | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
| almacenamiento | |||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 0,5 | 103 | 98 | Nd | 106 | 100 | 97 | 94 | 105 | 91 | nd | 104 | 93 | 91 |
| 1 | 99 | 94 | 98 | 110 | 97 | 92 | 91 | 109 | 95 | 102 | 109 | 103 | 195 |
| 3 | 99 | (96) | (100) | 111 | 98 | 89 | 92 | 104 | 91 | 103 | 108 | 99 | 91 |
| 6 | 100 | (100) | (90) | 97 | 98 | 92 | 87 | 91 | 87 | 94 | 100 | 91 | |
| 9 | (96) | Nd | (81) | 98 | 84 | 80 | 80 | 86 | 86 | ||||
| 12 | (103) | nd | 93 | 89 | 80 | 75 | 90 | 90 | |||||
| Factor XIII (% del valor cero); temperatura de almacenamiento: 4ºC | |||||||||||||
| Preparación | |||||||||||||
| Tiempo | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
| almacenamiento | |||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
| 0,5 | 101 | 93 | nd | 73 | 81 | 98 | 100 | 100 | 102 | nd | 102 | ||
| 1 | 105 | 87 | 97 | 73 | 81 | 100 | 97 | 97 | 100 | 93 | 100 | ||
| 3 | 100 | (80) | (89) | 63 | 77 | 95 | 93 | 100 | 95 | 93 | 95 | ||
| 6 | 89 | (83) | (80) | 49 | 67 | 102 | 95 | 95 | 83 | 95 | |||
| 9 | (98) | nd | (78) | 42 | 65 | 92 | 80 | 86 | 86 | ||||
| 12 | (89) | nd | 39 | 69 | 83 | 92 | 85 | 85 |
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
| \begin{minipage}[t]{159mm} Evaluación de viscosidad (temperatura de almacenamiento 4^{o}C): 1 = viscosidad reducida, 2 = viscosidad media, 3 = viscosidad elevada. 4 = sólido a 4^{o}C. \end{minipage} | |||||||||||||
| Preparación | |||||||||||||
| Tiempo de | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
| almacenamiento | |||||||||||||
| 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | nd | 1 |
| 0,5 | 1 | 1 | nd | nd | nd | nd | 1 | 1 | 1 | nd | nd | nd | 1 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | nd | 1 |
| 3 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | nd | 1 |
| 6 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | nd | 1 |
| 9 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |||
| 12 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | ||||
| Fibrinógeno (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: -20ºC | |||||||||||||
| Preparación | |||||||||||||
| Tiempo de | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
| almacenamiento | |||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | nd | nd | 100 | 100 | 100 | 100 | nd | nd | nd | 100 |
| 0,5 | 96 | 101 | nd | nd | nd | nd | 99 | 100 | 99 | nd | nd | nd | 99 |
| 1 | 100 | 95 | 95 | nd | nd | 99 | 100 | 101 | 93 | nd | nd | nd | 93 |
| 3 | 99 | 100 | 100 | nd | nd | 99 | 103 | 114 | 101 | nd | nd | nd | 101 |
| 6 | 99 | 101 | 105 | nd | nd | 100 | 106 | 115 | 103 | nd | nd | nd | 103 |
| 9 | 89 | nd | 108 | nd | nd | 93 | 104 | 100 | 94 | 94 | |||
| 12 | 87 | nd | nd | nd | 100 | 95 | 100 | 99 | 99 | ||||
| Factor XIII (% del valor cero); temperatura de almacenamiento: -20ºC | |||||||||||||
| Preparación | |||||||||||||
| Tiempo | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 |
| almacenamiento | |||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | nd | nd | 100 | 100 | 100 | 100 | nd | nd | nd | 100 |
| 0,5 | 57 | 30 | nd | nd | nd | nd | 98 | 108 | 102 | nd | nd | nd | 102 |
| 1 | 48 | 8 | 15 | nd | nd | 100 | 102 | 102 | 95 | nd | nd | nd | 95 |
| 3 | 35 | 5 | 10 | nd | nd | 98 | 94 | 107 | 98 | nd | nd | nd | 98 |
| 6 | 24 | 5 | 15 | nd | nd | 107 | 98 | 102 | 97 | nd | nd | nd | 97 |
| 9 | 14 | nd | 10 | nd | nd | 95 | 100 | 102 | 93 | 93 | |||
| 12 | 1 | nd | nd | nd | 97 | 95 | 108 | 98 | 98 |
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
| \begin{minipage}[t]{159mm} Evaluación de viscosidad (temperatura de almacenamiento 4^{o}C): 1 = viscosidad reducida, 2 = viscosidad media, 3 = viscosidad elevada. 4 = sólido a 4^{o}C. \end{minipage} | ||||||||||||
| Tiempo de | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 0,5 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 3 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 6 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 9 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| 12 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | ||||||
| Fibrinógeno (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: 4ºC | ||||||||||||
| Tiempo de | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 0,5 | 100 | 93 | 98 | nd | 98 | 99 | 94 | 91 | 92 | 96 | 97 | 101 |
| 1 | 95 | 93 | 95 | 99 | 102 | 91 | 101 | 94 | 91 | 94 | 96 | 96 |
| 3 | 84 | 87 | 90 | 105 | 112 | 99 | 98 | 86 | 89 | 94 | 83 | 94 |
| 6 | 97 | 79 | 96 | 108 | 118 | 101 | 92 | 82 | 90 | 102 | 87 | |
| 9 | 95 | 88 | 89 | 94 | 112 | 109 | 98 | 88 | 96 | 97 | ||
| 12 | 77 | 8 | 96 | 94 | 86 | 78 | ||||||
| Factor XIII (% del valor cero); temperatura de almacenamiento: 4ºC | ||||||||||||
| Tiempo de | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||||||||
| 0,5 | nd | 93 | 96 | 93 | ||||||||
| 1 | 100 | 83 | 84 | 86 | ||||||||
| 3 | 82 | 80 | 71 | 76 | ||||||||
| 6 | 91 | 77 | 67 | |||||||||
| 9 | 91 | 80 | ||||||||||
| 12 | 77 |
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
| \begin{minipage}[t]{159mm} Evaluación de viscosidad (temperatura de almacenamiento -20^{o}C): 1 = viscosidad reducida, 2 = viscosidad media, 3 = viscosidad elevada. 4 = sólido a 4^{o}C. \end{minipage} | ||||||||||||
| Tiempo de | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 |
| 0,5 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 |
| 1 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 |
| 3 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | 1 |
| 6 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | 1 | |
| 9 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | ||
| 12 | nd | 1 | 1 | nd | 1 | 1 | 1 | 1 | nd | nd | ||
| Fibrinógeno (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: -20ºC | ||||||||||||
| Tiempo de | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | nd | 100 | 100 | nd | 100 | 100 | 100 | 100 | nd | nd | 100 | 100 |
| 0,5 | nd | 96 | 100 | nd | 100 | 96 | 91 | 86 | nd | nd | 90 | 94 |
| 1 | nd | 94 | 99 | nd | 98 | 100 | 99 | 93 | nd | nd | 94 | 97 |
| 3 | nd | 85 | 94 | nd | 94 | 92 | 97 | 93 | nd | nd | 85 | 90 |
| 6 | nd | 85 | 98 | nd | 98 | 90 | 99 | 92 | nd | nd | 89 | |
| 9 | nd | 86 | 95 | nd | 100 | 87 | 91 | 79 | nd | nd | ||
| 12 | nd | 84 | 93 | nd | 98 | 87 | 84 | 81 | nd | nd |
\vskip1.000000\baselineskip
| Factor XII (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: 4ºC | ||||||||||||
| Tiempo de | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 0,5 | 90 | 94 | nd | nd | nd | nd | nd | nd | nd | nd | nd | nd |
| 1 | 95 | 94 | 128 | 96 | 114 | 104 | 101 | 76 | 100 | 97 | 116 | 108 |
| 3 | 105 | 101 | 134 | 110 | 113 | 108 | 104 | 114 | 116 | 115 | 116 | 134 |
| 6 | 112 | 102 | 136 | 110 | 105 | 106 | 103 | 106 | 114 | 103 | 103 | 114 |
| 9 | 116 | 112 | 133 | 112 | 113 | 106 | 118 | 118 | 113 | 97 | 115 | |
| 12 | 117 | 134 | ||||||||||
| Factor XIII (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: -20ºC | ||||||||||||
| Preparación | ||||||||||||
| Tiempo de | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | 100 | |||||||||||
| 0,5 | 92 | |||||||||||
| 1 | 99 | |||||||||||
| 3 | 97 | |||||||||||
| 6 | 106 | |||||||||||
| 9 | 108 | |||||||||||
| 12 | 112 | |||||||||||
| Factor XIII (% del valor cero), temperatura de almacenamiento: 20 a 25ºC | ||||||||||||
| Preparación | ||||||||||||
| Tiempo de | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 |
| almacenamiento | ||||||||||||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||||
| 0,5 | nd | nd | nd | nd | nd | nd | nd | nd | ||||
| 1 | 120 | 105 | 104 | 104 | 109 | 103 | 115 | 119 | ||||
| 3 | 111 | 112 | 105 | 113 | 112 | 109 | 108 | 120 | ||||
| 6 | 94 | 104 | 99 | 102 | 105 | 102 | 109 | 202 | ||||
| 9 | 101 | 99 | 105 | 95 | 103 | 93 | 101 | |||||
| 12 | 97 | 105 |
Claims (10)
1. Adhesivo para tejidos con capacidad de
almacenamiento, caracterizado porque contiene tres
componentes separados entre sí, que son
(i) un preparado proteico estabilizado,
esencialmente libre de fibrinógeno, con capacidad de almacenamiento
en estado líquido, que contiene el factor de coagulación sanguínea
XIII,
(ii) un preparado proteico estabilizado, con
capacidad de almacenamiento en estado líquido que contiene
fibrinógeno, al que se agregó una o más sustancia(s)
caotrópicas para evitar o reducir la agregación de fibrinógeno,
(iii) un preparado que contiene trombina,
que se ponen a disposición en un solo estuche
preparado para una aplicación conjunta.
2. Adhesivo para tejidos con capacidad de
almacenamiento de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque al preparado proteico que contiene
fibrinógeno se agrega(n) una o varias sustancia(s)
caotrópica(s) en una concentración menor a 0,28 mol/l.
3. Un adhesivo para tejidos de acuerdo con la
reivindicación 1, caracterizado porque al preparado proteico
que contiene el factor XIII y es esencialmente libre de fibrinógeno
se le agregaron
- -
- una sal aceptable desde el punto de vista fisiológico de un ácido di, tri o tetracarboxílico, en especial del ácido cítrico, y
- -
- otros estabilizadores en parte conocidos y/o sustancias buffer para el factor XIII.
4. Adhesivo para tejidos de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque al preparado
proteico que contiene el factor XIII se agregaron como
estabilizadores adicionales
- -
- un mono o disacárido o un azúcar-alcohol y/o
- -
- un aminoácido del grupo glicina, glicilglicina, alanina, cisteína, histidina, glutamina o una sal aceptable desde el punto de vista fisiológico
- -
- un agente para reducir o impedir la oxidación y/o
- -
- una sustancia tensioactiva.
5. Adhesivo para tejidos de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque al preparado
proteico que contiene el fibrinógeno para evitar o reducir la
agregación de fibrinógeno se agregó uno o varios compuestos
caotrópicos del grupo que incluye arginina, guanidina, citrulina,
urea o derivados como nicotamida o sus mezclas.
6. Adhesivo para tejidos de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque al preparado
proteico que contiene al fibrinógeno se agregó adicionalmente un
antifibrinolítico seleccionado del grupo que incluye aprotinina,
ácido \varepsilon-aminocaproico (EACA), ácido
p-aminometilbenzoico (PAMBA), lisina o una de sus
sales aceptable desde el punto de vista fisiológicos.
7. Adhesivo para tejidos de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque al preparado
proteico que contiene el fibrinógeno se agregó adicionalmente como
estabilizador
- una sal aceptable desde el punto de vista
fisiológico de un ácido carboxílico orgánico, en especial del
ácido cítrico o del ácido láctico, o
- uno o varios aminoácidos o
- un mono o disacárido o
- un azúcar-alcohol o
- sales inorgánicas
o una de sus
mezclas.
8. Uso de los tres componentes separados entre
sí de un adhesivo de fibrina de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 6 para el preparado de un medicamento para uso
parenteral o tópico.
\newpage
9. Procedimiento para el preparado de un
adhesivo para tejidos con los tres componentes separados entre sí
de un adhesivo de fibrina de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque justo antes del
uso como adhesivo para tejidos, se mezclan entre sí el preparado
proteico que contiene el factor XIII y el preparado proteico que
contiene el fibrinógeno y luego durante la aplicación como adhesivo
para tejidos se agrega el componente que contiene trombina.
10. Procedimiento para el preparado de un
adhesivo para tejidos con los tres componentes separados entre sí
de un adhesivo de fibrinas de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque justo antes del
uso como adhesivo para tejidos se mezclan entre sí el preparado
proteico que contiene el factor XIII y el preparado proteico que
contiene la trombina y luego durante la aplicación como adhesivo
para tejidos se agrega el componente que contiene fibrinógeno.
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