ES2254930T3 - Derivados de la 2-(1-bencil-1h-pirazolo (3,4-b)piridin-3il)-5-(4-piridinil)-4-pirimidinamina y su uso como estimuladores de guanilatociclasa. - Google Patents
Derivados de la 2-(1-bencil-1h-pirazolo (3,4-b)piridin-3il)-5-(4-piridinil)-4-pirimidinamina y su uso como estimuladores de guanilatociclasa.Info
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Abstract
Compuestos de fórmula (I) en la que R1 representa cloro, ciano, trifluorometilo o metoxi, y R2 representa hidrógeno o flúor, o R1 representa flúor y R2 representa flúor, así como sales, isómeros e hidratos de los mismos.
Description
Derivados de la
2-(1-bencil-1H-pirazolo(3,4-b)piridin-3-il)-5-(4-piridinil)-4-pirimidinamina
y su uso como estimuladores de guanilatociclasa.
La presente invención se refiere a compuestos
químicos que estimulan la guanilatociclasa soluble, a su preparación
y a su uso como medicamentos, en especial como medicamentos para el
tratamiento de enfermedades cardiocirculatorias y/o disfunción
sexual.
Uno de los sistemas de transmisión celular más
importantes en células de mamíferos es el monofosfato cíclico de
guanosina (GMPc). Junto con el monóxido de nitrógeno (NO), que se
libera del endotelio y transmite señales hormonales y mecánicas,
constituye el sistema NO/GMPc. Las guanilatociclasas catalizan la
biosíntesis de GMPc a partir de trifosfato de guanosina (GTP). Los
representantes hasta ahora conocidos de esta familia pueden
clasificarse tanto por características estructurales como también
por el tipo de los ligandos en dos grupos: las guanilatociclasas
particulares estimulables por péptidos natriuréticos y las
guanilatociclasas solubles estimulables por NO. Las
guanilatociclasas solubles están compuestas por dos subunidades y
contienen con la máxima probabilidad un hemo por heterodímero que es
una parte del centro regulador. Esto tiene una importancia capital
para el mecanismo de activación. El NO puede unirse al átomo de
hierro del hemo y aumentar de este modo claramente la actividad de
la enzima. Las preparaciones exentas de hemo no pueden por el
contrario estimularse por NO. También el CO es capaz de fijarse al
átomo central de hierro del hemo, siendo la estimulación por CO
claramente menor que la de por NO.
Mediante la formación de GMPc y la regulación de
fosfodiesterasas, canales de iones y proteinquinasas resultante de
ello, la guanilatociclasa juega un papel decisivo en distintos
procesos fisiológicos, en especial en la relajación y proliferación
de células de músculo liso, la agregación y adhesión plaquetaria y
la transmisión de señales neuronales así como en enfermedades que
son consecuencia de una alteración de los procesos anteriormente
indicados. En condiciones patofisiológicas el sistema NO/GMPc puede
estar suprimido, lo que por ejemplo puede conducir a hipertensión
arterial, a una activación plaquetaria, a una proliferación celular
incrementada, disfunción endotelial, aterosclerosis, angina de
pecho, insuficiencia cardiaca, trombosis, apoplejía cerebral,
disfunción sexual e infarto de
miocardio.
miocardio.
Una posibilidad de tratamiento para tales
enfermedades independiente del NO, dirigido a influir en la ruta de
la señal del GMPc es un enfoque prometedor debido a la elevada
eficiencia y pocos efectos secundarios que son de esperar.
Para la estimulación terapéutica de la
guanilatociclasa soluble se han utilizado hasta ahora exclusivamente
compuestos como nitratos orgánicos, cuya actividad se basa en NO.
Este se forma por bioconversión y activa la guanilatociclasa soluble
por fijación al átomo central de hierro del hemo. Además de los
efectos secundarios, el desarrollo de tolerancias pertenece a los
inconvenientes decisivos de este modo de tratamiento.
En los últimos años se han descrito algunas
substancias que estimulan directamente la guanilatociclasa soluble,
es decir sin liberación previa de NO, como por ejemplo el
3-(5'-hidroximetil-2'-furil)-1-bencilindazol
(YC-1, Wu y col., Blood 84 (1994), 4226; Mülsch y
col., Br. J. Pharmacol. 120 (1997), 681), Fettsäuren (Goldberg y
col., J. Biol. Chem. 252 (1977), 1279), el hexafluorofosfato de
difenilyodonio (Pettibone y col., Eur. J. Pharmacol. 116 (1985),
307), la isoliquiritigenina (Yu y col., Brit. J. Pharmacol. 114
(1995), 1587) así como distintos derivados de pirazol substituidos
(documento WO 98/16223).
Además en los documentos WO 98/16507, WO
98/23619, WO 00/06567, WO 00/06568, WO 00/06569, WO 00/21954, WO
02/42299, WO 02/42300, WO 02/42301, WO 02/42302, WO 02/092596 y WO
03/004503 están descritos derivados de pirazolopiridina como
estimuladores de la guanilatociclasa soluble. Entre estas
solicitudes de patente están también descritas pirazolopirimidinas
que presentan un resto pirimidina en posición 3. Tales compuestos
presentan una actividad in vitro muy elevada en lo que
respecta a la estimulación de la guanilatociclasa soluble. No
obstante se ha mostrado que estos compuestos presentan algunos
inconvenientes en lo que respecta a sus propiedades in vivo,
como por ejemplo su comportamiento en el hígado, su comportamiento
farmacocinético, su relación dosis-actividad o su
ruta de metabolización.
Ha sido por consiguiente el cometido de la
presente invención proporcionar otros derivados de pirazolopiridina
que actúen como estimuladores de la guanilatociclasa soluble, pero
no presenten los inconvenientes anteriormente mencionados de los
compuestos del estado de la técnica.
Este cometido se resuelve conforme a la presente
invención mediante los compuestos según la reivindicación 1. Estos
nuevos derivados de pirazolopiridina se caracterizan por un resto de
4-amino-5-(piridin-4-il)-pirimidina
en la posición 3 así como un resto bencilo en la posición 1.
\newpage
En concreto la presente invención se refiere a
compuestos de fórmula (I)
en la
que
- R^{1}
- representa cloro, ciano, trifluorometilo o metoxi,
y
- R^{2}
- representa hidrógeno o flúor,
o
- R^{1}
- representa flúor y
- R^{2}
- representa flúor,
así como sales, isómeros e hidratos
de los
mismos.
Los compuestos de fórmula (I) conforme a la
invención pueden también presentarse en forma de sus sales. En
general son aquí de mencionar sales con bases o ácidos orgánicos o
inorgánicos.
En el marco de la presente invención se prefieren
sales fisiológicamente inocuas. Sales fisiológicamente inocuas del
compuesto conforme a la invención pueden ser sales de las
substancias conforme a la invención con ácidos minerales, ácidos
carboxílicos o sulfónicos. Son especialmente preferidos p.ej. sales
con ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido
fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido
p-toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido
naftalenodisulfónico, ácido acético, ácido propiónico, ácido
láctico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido
maleico o ácido benzoico.
Igualmente pueden ser sales fisiológicamente
inocuas sales de metales o de amonio del compuesto conforme a la
invención que posea un grupo carboxilo libre. Son especialmente
preferidas, p.ej., las sales de sodio, potasio, magnesio o calcio
así como las sales de amonio, derivadas del amoniaco, o de aminas
orgánicas como por ejemplo la etilamina, di- o trietilamina, di- o
trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, arginina,
lisina o etilendiamina.
Los compuestos conforme a la invención pueden
presentarse en formas tautómeras. Esto es sabido por el técnico en
la materia y tales formas están igualmente comprendidas en el
alcance de la invención.
Además, los compuestos conforme a la invención
pueden presentarse en forma de sus posibles hidratos.
Un símbolo * en un enlace significa el punto de
unión en la molécula.
\newpage
Preferiblemente son compuestos de fórmula
(Ia)
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- R^{1a}
- está seleccionado del grupo de
\vskip1.000000\baselineskip
así como sales, isómeros e hidratos
de los
mismos.
Es preferido el compuesto de fórmula (Ia), en la
que
R^{1a}
\hskip0.2cmrepresenta
así como sales, isómeros e hidratos
del
mismo.
La preparación de los compuestos de fórmula (I)
conforme a la invención puede realizarse conforme a pasos de
reacción habituales familiares para el técnico en la materia, por
ejemplo análogamente a los procedimientos descritos en la síntesis
de los ejemplos de realización.
Los compuestos conforme a la invención de formula
(I) muestran un valioso espectro farmacológico de actividad no
previsible.
Los compuestos de fórmula (I) conforme a la
invención provocan una relajación vascular y una inhibición de la
agregación de trombocitos y conducen a un descenso de la presión
sanguínea así como a un aumento del flujo sanguíneo coronario. Estas
actividades están mediadas a través de una estimulación directa de
la guanilatociclasa soluble y un incremento del GMPc intracelular.
Además, los compuestos de fórmula (I) conforme a la invención
refuerzan la actividad de substancias que incrementan el nivel del
GMPc, como por ejemplo el EDRF (endothelium derived relaxing factor,
factor relajante derivado del endotelio), donadores de NO,
protoporfirina IX, ácido araquidónico o derivados de
fenilhidrazina.
Por consiguiente pueden utilizarse en
medicamentos para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares,
como por ejemplo para el tratamiento de la hipertensión sanguínea y
de la insuficiencia cardiaca, de angina de pecho estable e
inestable, enfermedades vasculares periféricas y cardiacas, de
arritmias, para el tratamiento de enfermedades tromboembólicas e
isquemias, como el infarto de miocardio, apoplejía cerebral, ataques
transitorios e isquémicos, trastornos de la circulación periférica,
prevención de la restenosis, como después de terapias
trombolíticas, angioplastias transluminales percutáneas (PTA),
angioplastias coronarias transluminales percutáneas (PTCA), bypass,
así como para el tratamiento de arteriosclerosis, enfermedades
asmáticas y enfermedades del sistema urogenital, como por ejemplo
hipertrofia prostática, disfunción eréctil, disfunción sexual
femenina, osteoporosis, glaucoma, hipertonía pulmonar, gastroparesia
e incontinencia.
Los compuestos de fórmula (I) conforme a la
invención son también adecuados para combatir enfermedades del
sistema nervioso central caracterizadas por trastornos del sistema
NO/GMPc. En especial son adecuados para la mejora de la percepción,
la capacidad de concentración, la capacidad de aprendizaje o la
capacidad de memoria tras trastornos cognitivos, como los que se
presentan en especial en situaciones/enfermedades/síndromes como
"mild cognitive impairment" (deterioro cognitivo leve),
trastornos del aprendizaje y la memoria asociados a la vejez,
pérdidas de memoria asociadas a la vejez, demencia vascular,
traumatismo craneoencefálico, apoplejía cerebral, demencia que
aparece tras apoplejía cerebral ("post stroke dementia"),
traumatismo craneoencefálico post-traumático,
trastornos generales de la concentración, trastornos de la
concentración en niños con problemas de aprendizaje y memoria,
enfermedad de Alzheimer, demencia con corpúsculos de Lewy, demencia
con degeneración de los lóbulos frontales incluyendo el síndrome de
Pick, enfermedad de Parkinson, parálisis nuclear progresiva,
demencia con degeneración corticobasal, esclerosis amiolateral
(ALS), enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, degeneración
talámica, demencia de Creutzfeld-Jacob, demencia por
VIH, esquizofrenia con demencia o psicosis de Korsakoff. Estos son
adecuados también para el tratamiento de enfermedades del sistema
nervioso central, como estados de ansiedad, tensión y depresión,
disfunciones sexuales y trastornos del sueño de etiología
nerviosocentral, así como para la regulación de trastornos
patológicos de la ingestión de alimentos, estimulantes y drogas.
Además, los compuestos de fórmula (I) conforme a
la invención son también adecuados para la regulación de la
circulación cerebral y representan por consiguiente agentes valiosos
para combatir la migraña.
También son adecuados los compuestos de fórmula
(I) conforme a la invención para la profilaxis y para combatir las
consecuencias de eventos de infarto cerebral (apoplexia cerebri)
como ataque apoplético, isquemias cerebrales y traumatismo
craneoencefálico. Estos pueden utilizarse igualmente para combatir
estados dolorosos.
Además, los compuestos de fórmula (I) conforme a
la invención poseen actividad antiinflamatoria y pueden por
consiguiente utilizarse como agentes inhibidores de la
inflamación.
Además de esto, la presente invención comprende
también la combinación de al menos uno de los compuestos de fórmula
(I) conforme a la invención con uno o varios nitratos orgánicos o
donadores de NO.
Los nitratos orgánicos y donadores de NO en el
marco de la invención son en general substancias que despliegan su
actividad terapéutica liberando NO o especies de NO. Son preferidos
el nitroprusiato sódico, la nitroglicerina, el dinitrato de
isosorbida, el mononitrato de isosorbida, la molsidomina y el
SIN-1.
Además, la presente invención comprende también
la combinación con uno o varios compuestos que inhiben la
degradación del monofosfato cíclico de guanosina (GMPc). Estos son
preferiblemente inhibidores de las fosfodiesterasas 1, 2 y 5;
nomenclatura de Beavo y Reifsnyder (1990) TiPS 11 págs. 150 a
155. Son especialmente preferidos a este respecto inhibidores de la
fosfodiesterasa 5 (inhibidores de PDE V), en especial uno de los
compuestos sildenafilo (Viagra^{TM}, documentos,
EP-A 0 463 756, WO 94/28902), vardenafilo (documento
WO 99/24433) o tadalafilo (documento WO 95/19978). Mediante estos
inhibidores se potencia la actividad de los compuestos conforme a la
invención y se incrementa el efecto farmacológico deseado.
Son otro objeto de la presente invención
medicamentos que contienen al menos un compuesto conforme a la
invención, preferiblemente junto con uno o varios coadyuvantes o
vehículos farmacológicamente inocuos, así como su uso para los fines
anteriormente indicados.
El principio activo puede actuar sistémica y/o
localmente. Con este fin puede administrarse de modo adecuado, como
p.ej. oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal,
rectal, transdérmico, conjuntival, tópico o como implante.
Para estas vías de administración el principio
activo puede administrarse en formas de administración
adecuadas.
Para la administración oral son adecuadas formas
de administración conocidas que liberan el principio activo
rápidamente y/o de forma modificada, como p.ej. comprimidos
(comprimidos no recubiertos y recubiertos, p.ej. comprimidos
provistos de recubrimientos resistentes al jugo gástrico o
comprimidos peliculares), cápsulas, grageas, granulados, pildoritas,
polvos, emulsiones, suspensiones, soluciones y aerosoles.
La administración parenteral puede realizarse
evitando un paso de resorción (intravenosa, intraarterial,
intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o incluyendo una
resorción (intramuscular, subcutánea, intracutánea, percutánea o
intraperitoneal). Para administración parenteral son adecuadas como
formas de administración, entre otras, los preparados de inyección e
infusión en forma de soluciones, suspensiones, emulsiones,
liofilizados y polvos estériles.
Para las otras vías de administración son
adecuadas p.ej. formas medicamentosas de inhalación (entre otras
inhaladores de polvos, nebulizadores), gotas/soluciones nasales,
aerosoles; comprimidos o cápsulas de administración lingual,
sublingual, bucal, supositorios, preparaciones óticas y oftálmicas,
cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lo-
ciones, mezclas para agitar), suspensiones lipófilas, pomadas, cremas, leche, pastas, polvos para esparcir o implantes.
ciones, mezclas para agitar), suspensiones lipófilas, pomadas, cremas, leche, pastas, polvos para esparcir o implantes.
Los principios activos pueden transformarse de
modo conocido de por sí en las formas de administración mencionadas.
Esto se realiza utilizando coadyuvantes inertes no tóxicos
farmacéuticamente adecuados. Para esto cuentan entre otros vehículos
(p.ej. celulosa microcristalina), disolventes (p.ej.
polietilenglicoles líquidos), emulsionantes (p.ej. dodecilsulfato
sódico), dispersantes (p.ej. polivinilpirrolidona), biopolímeros
sintéticos y naturales (p.ej. albúmina), estabilizadores (p.ej.
antioxidantes como ácido ascórbico), colorantes (p.ej. pigmentos
inorgánicos como óxidos de hierro) o correctores del sabor y/u olor.
El principio activo puede presentarse dado el caso también en forma
microencapsulada en uno o más de los vehículos anteriormente
indicados.
El compuesto de fórmula (I) terapéuticamente
activo debe estar presente en los preparados farmacéuticos
anteriormente mencionadao en una concentración de aproximadamente
0,1 a 99,5, preferiblemente de aproximadamente 0,5 a 95% en peso, de
la mezcla total.
Los preparados farmacéuticos anteriormente
mencionados pueden contener además del compuesto de fórmula (I)
conforme a la invención también otros principios activos
farmacéuticos.
En general ha mostrado ser ventajoso tanto en
medicina como en veterinaria administrar el principio activo
conforme a la invención en cantidades totales de aproximadamente
0,001 a aproximadamente 50, preferiblemente de 0,001 a 10 mg/kg, de
peso corporal cada 24 horas, dado el caso en forma de varias
monodosis, para la consecución de los resultados deseados. Una
monodosis contiene el principio activo conforme a la invención
preferiblemente en cantidades de aproximadamente 0,001 a
aproximadamente 30, en especial de 0,001 a 3 mg/kg de peso
corporal.
La presente invención se ilustra seguidamente con
más detalle mediante ejemplos preferidos no limitantes. En tanto no
se indique otra cosa todos los datos cuantitativos están referidos
en porcentajes en peso. Las relaciones de disolventes, relaciones de
dilución y datos de concentración de soluciones líquido/líquido
están respectivamente referidas en volumen.
Se aturdieron conejos golpeándolos en la nuca y
se desangraron. Se retiró la aorta, se desprendió del tejido
adherido, se dividió en anillos de 1,5 mm de ancho y se llevaron
individualmente bajo tensión previa a baños de organos de 5 ml con
solución de Krebs-Henselheit gaseada con carbógeno y
calentada a 37ºC de la siguiente composición (mM): NaCl: 119; KCl:
4,8; CaCl_{2} x 2 H_{2}O: 1; MgSO_{4} x 7 H_{2}O: 1,4;
KH_{2}PO_{4}: 1,2; NaHCO_{3}: 25; glucosa: 10. La fuerza de
contracción se determinó con células Statham UC2, se intensificó,
se digitalizó mediante un transductor A/D (DAS-1802
HC, Keithley Instruments München) y se registró paralelamente con un
registrador de trazo continuo. Para generar una contracción se
añadió fenilefrina al baño acumulativamente en concentración
creciente. Después de varios ciclos de control la substancia de
ensayo se examinó en cada paso sucesivo de dosificación
respectivamente creciente y se compararon la altura de la
contracción con la altura de la contracción alcanzada en el paso
anterior. De aquí se calculó la concentración que era precisa para
reducir la altura del valor de control al 50% (CI_{50}). El
volumen de aplicación estándar fue de 5 \mul, la proporción de
DMSO en la solución del baño correspondió al 0,1%.
Conejos Chinchilla machos adultos con un peso de
3-5 kg se adaptaron después de su suministro durante
varios días manteniéndolos separados. Tuvieron libre acceso al agua
y pudieron tomar pienso dos horas por día. Los animales se
mantuvieron en un ritmo día-noche de 10/14 horas
(luz encendida a partir de las 8.00 horas), la temperatura ambiente
ascendió a 22-24ºC.
Por grupo de tratamiento se utilizaron de tres a
seis animales y se pesaron inmediatamente antes del comienzo del
estudio. Para la administración i.v. se disolvieron las substancias
en Transcutol (GATTEFOSSE GmbH) y se diluyeron en una relación 3/7
con una solución de Cremophor al 20% (Cremophor (BASF), agua). Se
inyectó un volumen de 0,5 ml/kg en la vena de la oreja. Las
substancias hidrosolubles se inyectaron en solución de sal común al
0,9%.
Para la administración oral las substancias de
ensayo se disolvieron en una mezcla de glicerina:agua:
polietilenglicol 6:10:9,69 y se administraron en un volumen de 1
ml/kg con sonda esofágica.
En condiciones de reposo el pene del conejo no es
visible en la región púbica y está totalmente cubierto por la piel
del pene. La erección se evaluó midiendo la longitud de la
emergencia del pene con un pie de rey. La medición se realizó 5, 10,
15, 30, 45, 60 y 120 min después de la administración de la
substancia, tras administración oral también tras 3, 4, 5 y 6 horas.
Los animales se sacaron para ello cada vez de la jaula, se sujetaron
por la piel del pescuezo y las patas traseras, se giraron sobre el
lomo y se midieron. Se realizaron controles con disolvente
correspondientes. (Véase la bibliografía: E. Bischoff, K. Schneider,
Int. J. of Impotence Res. 2001, 13, 230-235; E.
Bischoff, U. Niewoehner, H. Haning, M. Es Sayed, T. Schenke, K. H.
Schlemmer, The Journal of Urology, 2001, 165,
1316-1318; E. Bischoff, Int. J. Impotence Res. 2001,
13, 146-148).
La substancia a investigar se administró a los
animales (p.ej. rata, perro) intravenosamente como solución, la
administración oral se realizó como solución o suspensión mediante
sonda esofágica. Tras la administración de la substancia, en
momentos establecidos se extrajo sangre a los animales, esta se
heparinizó y a continuación se obtuvo a partir de ella por
centrifugación plasma. La substancia se cuantificó analíticamente en
el plasma por EM/LC-EM. A partir de las curvas
concentración en plasma-tiempo así determinadas se
calcularon los parámetros farmacocinéticos mediante un programa de
cálculo farmacocinético validado.
El potencial de inhibición de isoenzimas
P-450, que son importantes para el metabolismo, se
analizó automáticamente en formato de 96 pocillos. A este respecto
se utilizaron dos ensayos distintos.
En el ensayo basado en la formación de
metabolitos fluorescentes se utilizaron enzimas recombinantes (p.ej.
CYP1A2, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6 o 3A4) y en general substratos que
contenían estructuras parciales de fluoresceína o cumarina. Se
utilizaron respectivamente una concentración de substrato y 8
concentraciones del inhibidor potencial. Tras incubación con la
respectiva enzima recombinante CYP se determinó mediante un lector
de fluorescencia la medida de metabolitos fluorescentes en
comparación con el control (sin inhibidor) y se calculó un valor de
CI_{50} [Anal. Biochem, 248, 188 (1977)].
En el 2º ensayo se utilizaron como fuente de
enzima microsomas hepáticos humanos y como substrato selectivo de
isoforma CYP fenacetina (CYP1A2), diclofenac (CYP2C9),
dextrometorfano (CYP2D6) y midazolam (CYP3A4). La formación del
respectivo metabolito se midió mediante EM/LC-EM.
Bajo la hipótesis de inhibición competitiva se calcularon a partir
de la disminución de la formación de metabolitos en comparación con
los controles valores K_{i} (1 concentración de substrato, 3
concentraciones de inhibidor).
Para el estudio del potencial de efectos
secundarios de las substancias conforme a la invención en lo que
respecta a una inducción de enzimas citocromo P450 se cultivaron
hepatocitos humanos primarios con una densidad celular de 2,5 x
10^{5} células entre dos capas de colágeno en placas de
microvaloración de 24 pocillos a 37ºC con 5% de CO_{2} durante 8
días. El medio de cultivo celular se cambió diariamente.
Tras 48 horas de cultivo los hepatocitos se
trataron durante 5 días en determinación doble con distintas
concentraciones de las substancias de ensayo en comparación con los
inductores rifampicina (RIF; 50 \mum), omeprazol (OME; 100 \mum)
y fenobarbital (PB; 2 mM). Las concentraciones finales de las
substancias de ensayo se encontraron en 0,01-10
\mug/ml.
En los cultivos celulares se determinó el efecto
inductivo de las substancias de ensayo sobre las enzimas citocromo
P450 (CYP) 1A2, 2B6, 2C19 y 3A4 por adición de los substratos
7-etoxirresorrufina (CYP1A2),
[^{14}C]-S-mefenitoína (CYP2B6 y
2C19) y [^{14}C]-testosterona (CYP3A4) el 8º día.
De las actividades enzimáticas CYP1A2, 2B6, 2C19 y 3A4 así medidas
de células tratadas en comparación con células no tratadas se
determinó el potencial inductivo de las substancias de ensayo.
- ACN
- acetonitrilo
- AE
- acetato de etilo
- eq.
- Equivalente
- Equiv.
- Equivalente
- DCI
- ionización química directa (en EM)
- DCM
- diclorometano
- DIEA
- N,N- diisopropiletilamina
- DMAP
- Dimetilaminopiridina
- DMSO
- Dimetilsulfóxido
- DMF
- N,N-Dimetilformamida
- EI
- ionización por impacto electrónico (en EM)
- EM
- espectroscopia de masas
- ESI
- ionización por electronebulización (en EM)
- h
- hora(s)
- HPLC
- cromatografía de alta resolución, de alta presión
- EM-LC
- espectroscopia de masas con cromatografía líquida acoplada
- LDA
- diisopropilamida de litio
- P.f.
- punto de fusión
- RMN
- resonancia magnética nuclear
- RP-HPLC
- HPLC de fase inversa
- R_{t}
- tiempo de retención (en HPLC)
- TA
- temperatura ambiente
- THF
- tetrahidrofurano
- TLC
- cromatografía en capa fina
Instrumento: Micromass Platform LCZ, HP1100;
Columna: Symmetry C18, 50 mm x 2,1 mm, 3,5 \mum; Eluyente A: agua
+ 0,05% de ácido fórmico, Eluyente B: acetonitrilo + 0,05% de ácido
fórmico; Gradiente: 0,0 min 90%A -> 4,0 min 10%A -> 6,0 min
10%A; Horno: 40ºC; Flujo: 0,5 ml/min; Detección UV:
208-400 nm.
Instrumento: Waters Alliance 2790 LC; Columna:
Symmetry C18, 50 mm x 2,1 mm, 3,5 \mum; Eluyente A: agua + 0,1% de
ácido fórmico, Eluyente B: acetonitrilo + 0,1% de ácido fórmico;
Gradiente: 0,0 min 5%B -> 5,0 min 10%B -> 6,0 min 10%B;
Temperatura: 50ºC; Flujo: 1,0 ml/min; Detección UV: 210 nm.
Instrumento: HP 1100 con detección DAD; Columna:
Kromasil RP-18, 60 mm x 2 mm, 3,5 \mum; Eluyente
A: 5 ml HClO_{4}/1 H_{2}O, B = ACN; Gradiente: 0 min 2%B; 0,5
min 2%B, 4,5 min 90%B, 6,5 min 90%B; Flujo: 0,75 ml/min; Temp.:
30ºC; Detección UV: 210 nm.
Columna: YMC-Gel; Eluyente:
acetonitrilo/agua (gradiente); Flujo: 50 ml/min; Temp.: 25ºC;
Detección UV: 210 nm.
\vskip1.000000\baselineskip
Se dispusieron 2,74 g (54,75 mmol) de hidrato de
hidrazina en 10 ml de metanol y se mezclaron con una solución de
3,00 g (14,60 mmol) de bromuro de 2-clorobencilo en
5 ml de metanol a TA. De este modo la temperatura subió a
35-40ºC, después la mezcla se agitó durante 3 horas
a TA. Se eliminó el disolvente a vacío y el residuo se suspendió en
100 ml de dietiléter, se secó sobre sulfato magnésico y se
filtró.
Rendimiento global: 2,34 g (100% del teórico)
EM/LC (método 2): R_{t} = 0,37 min
EM(EI): m/z = 157 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 3,29-3,69
(s, 2H), 3,84 (s, 2H), 7,18-7,56 (m, 4H), 10,22 (s
a, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación se realizó análogamente a lo
descrito en el ejemplo 1A a partir de 2,74 g (54,75 mmol) de hidrato
de hidrazina y 3,02 g (14,60 mmol) de bromuro de
2,3-difluorobencilo. Para el procesamiento se
purificó el residuo por cromatografía de resolución rápida
(eluyente: diclorometano:metanol 30:1-10:1).
Rendimiento global: 1,51 g (65% del teórico)
EM/LC (método 2): R_{t} = 0,32 min
EM(EI): m/z = 159 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 3,75-3,88
(m, 2H), 4,61-4,94 (s a, 3H),
7,07-7,39 (m, 3H).
\newpage
La preparación de los siguientes compuestos se
realizó análogamente a lo descrito en el Ejemplo 1A:
Se dispusieron 517 g (7,60 mol) de metilato
sódico en 3000 ml de dietiléter y enfriando con hielo se mezclaron
con 1121 g (7,60 mol) de éster dietílico del ácido oxálico en el
transcurso de 35 minutos. Se agitó después durante 15 minutos y se
enfrió nuevamente. En el transcurso de 20 minutos se añadieron gota
a gota 312 g (7,60 mol) de acetonitrilo. Se agitó durante la noche a
TA y los cristales formados de filtraron con succión, se lavaron con
dietiléter y se secaron.
Rendimiento global: 1030 g (83% del teórico)
RMN-^{1}H (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta = 1,27 (t, 3H), 4,17 (c, 2H), 7,60 (s,
1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron bajo argón 2,29 g (14,60 mmol) de
1-(2-clorobencil)hidrazina del ejemplo 1A en
60 ml de dioxano. A esto se le añadieron 2,38 g (814,60 mmol) de
(1E)-1-ciano-3-etoxi-3-oxo-1-propen-2-olato
sódico del ejemplo 6A y 2,66 g (1,80 ml; 23,36 mmol) de ácido
trifluoroacético. La mezcla se mantuvo a reflujo durante la noche y
sin más procesamiento se le hizo reaccionar posteriormente.
EM/LC (método 2): R_{t} = 2,45 min
EM(EI): m/z = 280 (M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
La preparación se realizó análogamente a lo
descrito en el ejemplo 7A a partir de 1,50 g (9,48 mmol) de
1-(2,3-difluorobencil)hidrazina del ejemplo
2A, 1,55 g (9,48 mmol) de
(1E)-1-ciano-3-etoxi-3-oxo-1-propen-2-olato
sódico del ejemplo 6A, 1,73 g (1,17 ml; 15,18 mmol) de ácido
trifluoroacético y 40 ml de dioxano.
EM/LC (método 1): R_{t} = 3,90 min
EM(EI): m/z = 282 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 1,24 (t, 3H), 4,18 (c,
2H), 4,19-4,46 (s a, 2H), 5,32 (s, 2H), 5,76 (s,
1H), 6,59-6,72 (m, 1H), 7,07-7,24
(m, 1H), 7,27-7,46 (m, 1H).
\newpage
La preparación de los siguientes compuestos se
realizó análogamente a lo descrito en el Ejemplo 1A:
Se dispuso bajo argón la solución de 4,08 g
(14,60 mmol) del éster etílico del ácido
5-amino-1-(2-clorobencil)-1H-pirazol-3-carboxílico
del ejemplo 7A y se mezcló con 1,99 g (1,35 ml; 17,52 mmol) de ácido
trifluoroacético y 1,45 g (14,60 mmol) de
3-dimetilaminoacroleína. Se calentó a reflujo
durante 3 horas y para el procesamiento se eliminó el disolvente de
la mezcla. El residuo se purificó por cromatografía de resolución
rápida sobre gel de sílice (eluyente: ciclohexano:acetato de etilo
7:1).
Rendimiento global: 2,94 g (64% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 4,74 min
EM(EI): m/z = 316 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 1,37 (t, 3H), 4,41 (c,
2H), 5,91 (s, 2H), 7,00-7,08 (m, 1H),
7,12-7,22 (m, 1H), 7,34-7,43 (m,
1H), 7,46-7,49 (m, 1H), 7,83 (d, 1H), 8,50 (dd, 1H),
8,71 (dd, 1H).
La preparación se realizó análogamente a lo
descrito en el ejemplo 12A a partir de 4,11 g (14,60 mmol) de éster
etílico del ácido
5-amino-1-(2,3-difluorobencil)-1H-pirazol-3-carboxílico
del ejemplo 8A, 1,99 g (1,35 ml; 17,52 mmol) de ácido
trifluoroacético y 1,45 g (14,60 mmol) de
3-dimetilaminoacroleína.
Rendimiento global: 1,94 g (29% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 3,31 min
EM(EI): m/z = 318 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 1,37 (t, 3H), 4,41 (c,
2H), 5,91 (s, 2H), 7,00-7,08 (m, 1H),
7,11-7,22 (m, 1H), 7,33-7,45 (m,
1H), 7,49 (dd, 1H), 8,50 (dd, 1H), 8,71 (dd, 1H).
\newpage
La preparación de los siguientes compuestos se
realizó análogamente a lo descrito en el Ejemplo 12A:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron a temperatura ambiente 2,94 g
(9,31 mmol) de éster etílico del ácido
1-(2-clorobencil)-1H-pirazol[3,4-b]piridin-3-carboxílico
del ejemplo 12A en 50 ml de solución 5,5 molar de amoniaco en
metanol. Se agitó durante 16 horas a TA y de nuevo se evaporó a
sequedad en rotavapor. El residuo se mezcló de nuevo con 50 ml de
solución de amoniaco y se agitó durante 3 horas a 50ºC. Esto se
repitió durante 3 días. Tras el último secado se suspendió el
residuo en 40 ml de dietiléter y los cristales formados se filtraron
con succión y se secaron. Las aguas madre se evaporaron nuevamente
en rotavapor y la mezcla se mezcló nuevamente con 50 ml de solución
de amoniaco y se agitó en autoclave a 80ºC a presión propia. El
residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida en gel de
sílice (eluyente: ciclohexano:acetato de etilo 5:1).
Rendimiento global: 1,33 g (50% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 4,09 min
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,85 (s, 2H), 6,87 (dd,
1H), 7,25 (dt, 1H), 7,34 (dt, 1H), 7,40 (dd, 1H), 7,51 (dd, 1H),
7,78 (s a, 2H), 8,58 (dd, 1H), 8,64 (dd, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron a temperatura ambiente 1,90 g
(5,99 mmol) de éster etílico del ácido
1-(2,3-difluorobencil)-1H-pirazol[3,4-b]piridin-3-carboxílico
del ejemplo 13A en 50 ml de solución 5,5 molar de amoniaco en
metanol. Se agitó durante 16 horas a TA y a continuación se evaporó
a sequedad en rotavapor. Se mezcló todavía dos veces con
diclorometano y se evaporó a sequedad en rotavapor.
Rendimiento global: 0,87 g (50% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 4,00 min
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,86 (s, 2H),
6,90-7,03 (m, 1H), 7,07-7,22 (m,
1H), 7,29-7,49 (m, 2H), 7,71 (d, 2H),
8,57(dd, 1H), 8,66 (dd, 1H).
\newpage
La preparación de los siguientes compuestos se
realizó análogamente a lo descrito en el Ejemplo 17A:
Se suspendieron 1,19 g (4,16 mmol) de
1-(2-clorobencil)-1H-pirazol
[3,4-b]piridin-3-carboxamida
del ejemplo 17A en 30 ml de THF y se mezclaron con 0,84 g (0,86 ml;
10,66 mmol) de piridina y 3,00 g (1,75 ml; 10,66 mmol) de anhídrido
trifluoroacético. Se agitó durante la noche a temperatura ambiente.
A continuación la mezcla de reacción se vertió en 300 ml de agua y
se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas
reunidas se lavaron con solución saturada de hidrogenocarbonato
sódico y solución saturada de cloruro sódico, se secaron con sulfato
magnésico y se evaporaron en rotavapor.
Rendimiento global: 0,880 g (79% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 4,70 min
EM(EI): m/z = 269 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,92 (s, 2H), 7,18 (dd,
1H), 7,26-7,44 (m, 2H), 7,47-7,61
(m, 2H), 8,52 (dd, 1H), 8,80 (dd, 1H).
La preparación se realizó análogamente a lo
descrito en el ejemplo 22A con 0,84 g (2,91 mmol) de
1-(2,3-difluorobencil)-1H-pirazol[3,4-b]piridin-3-carboxamida
del ejemplo 18A, 0,59 g (0,60 ml; 7,46 mmol) de piridina y 2,10 g
(1,22 ml; 7,46 mmol) de anhídrido trifluoroacético.
Rendimiento global: 0,784 g (99% del teórico)
EM/LC (método 2): R_{t} = 3,22 min
EM(EI): m/z = 271 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,93 (s, 2H),
7,04-7,28 (m, 2H), 7,33-7,51 (m,
1H), 7,52-7,63 (m, 1H), 8,51 (dd, 1H), 8,81 (dd,
1H).
\newpage
La preparación de los siguientes compuestos se
realizó análogamente a lo descrito en el Ejemplo 22A:
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron bajo argón 380 mg (1,41 mmol) del
ejemplo 22A en 6 ml de metanol. A esto se le añadieron 45,84 g (0,85
mmol) de metilato sódico y se agitó después durante 5 h a 50ºC. A
continuación se añadieron 189,12 mg (3,54 mmol) de cloruro amónico y
se agitó después a reflujo durante 2 horas. La solución de reacción
se evaporó en rotavapor a vacío y el residuo se suspendió con 25 ml
de solución saturada de carbonato sódico y se extrajo con acetato de
etilo tres veces con sendos 75 ml. Las fases orgánicas reunidas se
secaron sobre sulfato magnésico, se filtraron y se secaron. El
residuo se suspendió en 50 ml de dietiléter y el producto precipitó
con ácido clorhídrico 4 normal en dioxano. El precipitado se filtró
y se secó a alto vacío.
Rendimiento global: 0,200 g (44% del teórico)
EM/LC (método 2): R_{t} = 1,51 min
EM(EI): m/z = 286 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,95 (s, 2H), 7,07 (dd,
1H), 7,29 (dt, 1H), 7,37 (dt, 1H), 7,49-7,59 (m,
2H), 8,58 (dd, 1H), 8,77 (dd, 1H), 9,42 (s a, 4H).
Se suspendieron bajo argón 760 mg (2,81 mmol) del
ejemplo 23A en 10 ml de metanol. A esto se le añadieron 30,4 g (0,56
mmol) de metilato sódico y se agitó después a TA durante 4 h. A
continuación se añadieron 225,6 mg (4,22 mmol) de cloruro amónico y
se agitó después a TA durante 5 horas. Tras adición de 20,5 mg de
ácido clorhídrico concentrado la temperatura se enfrió de nuevo a TA
y se eliminó el disolvente del producto a vacío. El residuo se
suspendió en solución de carbonato sódico al 10% y se extrajo tres
veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secaron,
se filtraron y se secaron. El residuo se suspendió en 15 ml de
dietiléter y el producto precipitó con ácido clorhídrico 1 molar en
dioxano. El precipitado se filtró y se secó a alto vacío.
Rendimiento global: 0,775 g (76% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 2,65 min
EM(EI): m/z = 288 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,94 (s, 2H),
7,08-7,24 (m, 1H), 7,34-7,47 (m,
1H), 7,54 (dd, 1H), 8,55 (dd, 1H), 8,78 (dd, 1H), 9,39 (s a,
4H).
La preparación de los siguientes compuestos se
realizó análogamente a lo descrito en el Ejemplo 27A:
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitaron a 100ºC durante 2 h 7,52 g (63,7
mmol) de 4-piridilacetonitrilo y 11,09 g (63,7 mmol)
de terc-butoxibis(dimetilamino)metano.
Además, la dimetilamina y el t-butanol que se
liberaba se evacuó a la atmósfera en una ligera corriente a presión
reducida mediante una bomba de vacío. La cromatografía de resolución
rápida (diclorometano/acetato de etilo 50:1 -> 20:1) proporcionó
el compuesto del título.
Rendimiento: 10,2 g (93% del teórico)
Valor R_{f}: 0,29 (diclorometano/AE 20/1)
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 3,25 (s, 6H, 2 x
CH_{3}), 7,25 (d, 2H, Ar-H), 7,80 (s, 1H, ArH),
8,33 (d, 2H, Ar-H).
EM(ESI pos.): m/z = 174
([M+H]^{+})
Se mezclaron 100 g (0,613 mol) de sal sódica del
éster etílico del ácido cianopirúvico (síntesis análoga a la de
Borsche y Manteuffel, Liebigs Ann. 1934, 512,
97) con buena agitación bajo argón en 2,5 l de dioxano a temperatura
ambiente con 111,75 g (75 ml, 0,98 mol) de ácido trifluoroacético y
se agitó durante 10 min, disolviéndose una gran parte del producto
de partida. Entonces se añadieron 85,93 g (0,613 mol) de
2-fluorobencilhidrazina y se mantuvieron a
ebullición durante la noche. Tras enfriar se filtraron los cristales
precipitados con succión, se lavaron con dioxano y la solución bruta
se hizo reaccionar posteriormente.
La solución obtenida del ejemplo
33A-1 se mezcló con 61,25 ml (60,77 g, 0,613 mol) de
dimetilaminoacroleína y 56,28 ml (83,88 g, 0,736 mol) de ácido
trifluoroacético y se mantuvo a ebullición bajo argón durante 3
días. A continuación se evaporó el disolvente a vacío, se vertió el
residuo en 2 l de agua y se extrajo tres veces con sendos 1 l de
acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secaron con
sulfato magnésico y se evaporaron en rotavapor. Se cromatografió en
2,5 kg de gel de sílice y se eluyó con un gradiente de
tolueno/tolueno-acetato de etilo = 4:1.
Rendimiento: 91,6 g (50% del teórico a través de dos pasos).
P.f.: 85ºC
R_{f} (SiO_{2},
tolueno-acetato de etilo 1:1): 0,83
Se dispusieron 10,18 g (34 mmol) del éster
obtenido en el ejemplo 33A-2 en 150 ml de metanol
saturado a 0-10ºC con amoniaco. Se agitó durante dos
días a temperatura ambiente y a continuación se concentró a
vacío.
R_{f} (SiO_{2},
tolueno-acetato de etilo 1:1): 0,33
Se disolvieron 36,1 g (133 mmol) de
1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboxamida
del ejemplo 33A-3 en 330 ml de THF y se mezclaron
con 27 g (341 mmol) de piridina. A continuación se añadieron en el
transcurso de 10 min 47,76 ml (71,66 g, 341 mmol) de anhídrido
trifluoroacético con lo que la temperatura subió a 40ºC. Se agitó
durante a noche a temperatura ambiente. A continuación la mezcla de
reacción se vertió en 1 l de agua y se extrajo tres veces con sendos
0,5 l de acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con solución
saturada de hidrogenocarbonato sódico y con ácido clorhídrico 1 N,
se secó con sulfato magnésico y se evaporó en rotavapor.
Rendimiento: 33,7 g (100% del teórico)
P.f.: 81ºC
R_{f} (SiO_{2},
tolueno-acetato de etilo 1:1): 0,74
Se disolvieron 30,37 g (562 mmol) de metilato
sódico en 1,5 l de metanol y se añadieron 36,45 g (144,5 mmol) de
3-ciano-1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridina
(del ejemplo 33A-4). Se agitó durante 2 horas a
temperatura ambiente y la solución obtenida se utilizó directamente
para el siguiente paso.
La solución obtenida de éster metílico del ácido
(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximídico
en metanol del ejemplo 33A-5 se mezcló con 33,76 g
(32,19 ml, 562 mmol) de ácido acético glacial y 9,28 g (173 mmol) de
cloruro amónico y se agitó a reflujo durante la noche. El disolvente
se evaporó a vacío, se frotó bien el residuo con acetona y el sólido
precipitado se filtró con succión.
RMN-^{1}H
(DMSO-d_{6}, 200 MHz): \delta = 5,93 (s, 2H),
7,1-7,5 (m, 4H), 7,55 (dd, 1H), 8,12 (dd, 1H), 8,30
(dd, 1H), 9,5 (s a, 4H intercambiables) ppm.
EM(EI): m/z = 270,2
(M-HCl)
Se suspendieron en xileno 0,50 g (1,9 mmol) de
1-(2-fluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida
del ejemplo 33A y
4-[(dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo
(0,32 g, 1,9 mmol) del ejemplo 32A y se mezclaron con
BF_{3}*OEt_{2} (71 \mul, 79 mg, 0,56 mmol, 0,3 equiv.). Tras
19 h a 140ºC se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a
vacío. El compuesto del título se purificó por cromatografía de
resolución rápida en gel de sílice (diclorometano:metanol 20:1) y
subsiguiente agitación con acetonitrilo.
Rendimiento: 0,24 g (33% del teórico)
Valor R_{f}: 0,17 (AE/Metanol 20:1)
P.f.: 254ºC
Tiempo de retención: R_{t} = 2,7 min (columna
Symmetry, C-18, 3,5 \mum, 50X2,1 mm, flujo 0,5
ml/min, 40ºC, gradiente: agua (+0,1% de ácido fórmico):acetonitrilo
(+0,1% de ácido fórmico) a 0 min: 90:10, a 7,5 min 10:90)
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,81 (s, 2H, CH_{2}),
7,0-7,6 (m, 9H, Ar-H, NH_{2}),
8,64 (m_{c}, 3H, Ar-H), 9,05 (d, 1H,
Ar-H).
EM(ESI pos.): m/z = 398
([M+H]^{+})
EM(ESI neg.): m/z = 396
([M+H]^{+})
Se condensaron aprox. 15 ml de amoniaco en un
matraz enfriado con hielo seco. A esto se le añadieron 0,347 g
(0,015 mol) de sodio y se dejó agitando después durante 30 minutos.
Se añadieron entonces 1,50 g (0,004 mol) del compuesto del ejemplo
34A y se dejó agitando después durante 3 horas. A la mezcla se le
añadieron entonces 1,21 g (0,023 mol) de cloruro amónico y se
eliminó durante la noche el amoniaco restante en forma de gas a
través de una columna lavadora. Para el procesamiento se mezcló con
agua y los cristales se filtraron con succión y se secaron. El
residuo se purificó por cromatografia en columna (eluyente:
diclorometano:metanol 8:2) y a continuación por
RP-HPLC.
Rendimiento global: 0,50 g (65% del teórico)
EM/LC (método 2). R_{t} = 1,09 min
EM(EI): m/z = 290 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 6,57 (s a, 2H), 7,25 (dd,
1H), 7,52 (dd, 2H), 7,90 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,55 (dd, 1H), 8,70
(dd, 1H), 9,03 (dd, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron en una mezcla de alcohol
bencílico:isobutanol 3:1 a TA 410 mg (1,27 mmol) de clorhidrato de
1-(2-clorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida
del ejemplo 27A y 242,46 mg (1,40 mmol) de
4-[dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo
del ejemplo 32A. A continuación se añadieron 25,75 mg (0,25 mmol) de
trietilamina y se agitó durante la noche a 113ºC. A continuación se
eliminó el disolvente a vacío y se aplicó sobre gel de sílice. Se
cromatografió (eluyente: diclorometano:metanol 30:1). Las fracciones
limpias reunidas se juntaron nuevamente y se purificaron por
RP-HPLC preparativa.
Rendimiento global: 70 mg (13% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 3,52 min
EM(EI): m/z = 414 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (400 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,89 (s, 2H), 6,95 (d,
1H), 7,14 (s a, 2H), 7,27 (t, 1H), 7,35 (t, 1H), 7,41 (dd, 1H),
7,50-7,58 (m, 3H), 8,28 (s, 1H),
8,61-8,73 (m, 1H), 9,07 (dd, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se suspendieron en una mezcla de alcohol
bencílico:isobutanol 3:1 a TA 680 mg (1,88 mmol) de clorhidrato de
1-(2,3-difluorobencil)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-carboximidamida
del ejemplo 28A y 358 mg (2,07 mmol) de
4-[dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo
del ejemplo 32A. A continuación se añadieron 38,1 mg (0,38 mmol) de
trietilamina y se agitó durante la noche a 87-90ºC.
Se mezcló de nuevo con 0,5 eq. de
4-[dimetilamino)metilen]-piridinacetonitrilo
del ejemplo 32A y se agitó seis horas más a 87-90ºC.
Se diluyó con 3 ml de alcohol bencílico y 19 ml de isobutanol y se
calentó brevemente a 113ºC. Se filtró en caliente y el filtrado se
enfrió lentamente agitando. A continuación se eliminó el disolvente
a vacío y se aplicó sobre gel de sílice. Se cromatografió (eluyente:
diclorometano:metanol 30:1-20:1). Las fracciones
limpias reunidas se juntaron nuevamente y se purificaron por
RP-HPLC.
RP-HPLC.
Rendimiento global: 180 mg (23% del teórico)
EM/LC (método 1): R_{t} = 3,24 min
EM(EI): m/z = 416 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (200 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,89 (s, 2H),
6,95-7,08 (m, 1H), 7,09-7,26 (m,
3H), 7,30-7,48 (m, 2H), 7,54 (dd, 2H), 8,28 (s, 1H),
8,61-8,73 (m, 1H), 9,05 (dd, 1H).
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Los siguientes compuestos se prepararon
análogamente al ejemplo 1:
Se suspendieron bajo argón en 6 ml de
dimetilformamida 60 mg (0,21 mmol) de
2-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-3-il)-5-(4-piridinil)-4-pirimidinamina
del ejemplo 35A. Tras adición de 26,38 mg (0,25 mmol) de carbonato
sódico se agitó durante una hora a 50ºC. A continuación se añadieron
40,66 mg (0,21 mmol) de bromuro de 2-cianobencilo y
se dejó agitando durante la noche a 50ºC. Para el procesamiento se
filtró y el filtrado se ajustó a pH 4-5 con ácido
clorhídrico 1 normal y se purificó por RP-HPLC.
Rendimiento global: 40 mg (48% del teórico)
EM/LC (método 2): R_{t} = 1,84 min
EM(EI): m/z = 405 (M+H)^{+}
RMN-^{1}H (300 MHz,
DMSO-d_{6}): \delta = 5,99 (s, 2H), 6,69 (s,
1H), 7,02-7,17 (m, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,41 (dd, 1H),
7,47-7,57 (m, 2H), 7,59-7,68 (m,
1H), 7,85-7,94 (m, 1H), 8,28 (s, 1H),
8,63-8,69 (m, 3H), 9,06 (dd, 1H).
Claims (12)
1. Compuestos de fórmula (I)
en la
que
- R^{1}
- representa cloro, ciano, trifluorometilo o metoxi,
y
- R^{2}
- representa hidrógeno o flúor,
o
- R^{1}
- representa flúor y
- R^{2}
- representa flúor,
así como sales, isómeros e hidratos
de los
mismos.
2. Compuestos de fórmula (Ia) conforme a la
reivindicación 1
en la
que
- R^{1}
- está seleccionado del grupo de
así como sales, isómeros e hidratos
de los
mismos.
3. Compuesto de fórmula (Ia) conforme a la
reivindicación 2, en la que
R^{1a} 46
\hskip0.2cmrepresenta
así como sales, isómeros e hidratos
del
mismo.
4. Compuestos de fórmula (I), como está definida
en la reivindicación 1, para el tratamiento de enfermedades.
5. Medicamentos que contengan al menos un
compuesto de fórmula (I), como está definida en la reivindicación 1,
y al menos un coadyuvante adicional.
6. Medicamentos que contengan al menos un
compuesto de fórmula (I), como está definida en la reivindicación 1,
en combinación con al menos un nitrato orgánico o donador de NO.
7. Medicamentos que contengan al menos un
compuesto de fórmula (I), como está definida en la reivindicación 1,
en combinación con al menos un compuesto que inhiba la degradación
del monofosfato cíclico de guanosina (GMPc).
8. Uso de compuestos de fórmula (I), como está
definida en la reivindicación 1, para la fabricación de medicamentos
para el tratamiento de enfermedades cardiocirculatorias.
9. Uso de compuestos de fórmula (I), como está
definida en la reivindicación 1, para la fabricación de medicamentos
para el tratamiento de la hipertonía.
10. Uso de compuestos de fórmula (I), como está
definida en la reivindicación 1, para la fabricación de medicamentos
para el tratamiento de enfermedades tromboembólicas e isquemias.
11. Uso de compuestos de fórmula (I), como está
definida en la reivindicación 1, para la fabricación de medicamentos
para el tratamiento de la disfunción sexual, en especial de la
disfunción eréctil y la disfunción sexual femenina.
12. Uso conforme a una de las reivindicaciones 9
a 11, utilizando compuestos de fórmula (I), como está definida en la
reivindicación 1, en combinación con al menos un nitrato orgánico o
donador de NO o en combinación con al menos un compuesto que inhiba
la degradación del monofosfato cíclico de guanosina (GMPc).
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