ES2253892T3 - Preparacion farmaceutica de factor vii. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la purificación de factor VII de un material biológico y producción de un preparado de factor VII por adsorción del factor VII en un material cromatográfico, elución fraccionada del factor VII con una actividad amidolítica específica de como mínimo 50 U/mg, donde la elución se realiza con un tampón sin adición de inhibidores de coagulación sanguínea y donde el caudal unitario de elución es como mínimo de 0, 15 volúmenes de columna por minuto, y obtención del factor VII a partir del producto de elución, de manera que el preparado de factor VII tiene un porcentaje inferior al 5% de factor VIIa con respecto a la cantidad total de factor VII.
Description
Preparación farmacéutica de factor VII.
La invención se refiere a un preparado
farmacéutico a base de factor de coagulación sanguíneo VII así como
a un procedimiento pata la purificación del factor VII.
La coagulación de la sangre se produce por una
serie de reacciones consecutivas de diferentes factores de
coagulación sanguíneos. Cuando existe una falta de factores de
coagulación sanguíneos se impide la formación de fibrina a partir de
fibrinógeno y, por tanto, el cierre de las heridas; la consecuencia
es un mayor riesgo de hemorragia o la aparición de las mismas. Un
caso de este tipo se presenta cuando existe una carencia de factores
de coagulación sanguíneos que dependen de la vitamina K, como son
los factores II, VII, IX y X, carencia que puede ser provocada,
sobre todo, por estar afectada la función hepática, pero también por
una carencia heredada del factor de coagulación sanguíneo. Para un
tratamiento sustitutivo se utilizan los correspondientes factores de
coagulación de la sangre. El tratamiento con estos preparados
conduce, en la mayoría de los casos, a detener la hemorragia.
El factor VII puede obtenerse a partir de
material biológico como sangre, plasma o cultivos celulares,
obteniéndose en forma purificada en caso de emplear sangre o plasma
como material de partida, en la mayoría de los casos, junto con,
como mínimo, uno de los factores II, IX ó X de estructura similar.
Como materia prima para la obtención de un preparado de factor VII
más purificado también puede emplearse un preparado de complejo de
protrombina basado en los factores II, VII, IX y X o bien un
complejo de protrombina que contiene una fracción de plasma.
Para el tratamiento de pacientes en los que se
presenta una falta de factor VIII y que han desarrollado un
inhibidor dirigido contra el factor VIII con frecuencia se propone
un preparado de factor VIIa. Por ejemplo, en la EP 0 082 182 y en
von Hedner y col., (Haemostasis 19, 335-353 (1989))
se describen preparados de factor VIIa altamente purificado.
El factor VII es relativamente fácil de activar
para convertirse en factor VIIa. Se ha descubierto, por ejemplo, que
el cimógeno factor VII se activa rápidamente mediante una serie de
enzimas fisiológicas, como son el factor IXa y factor Xa (Wildgoose
y col., Blood, Vol. 73, Nº 7, 1989, páginas
1888-1895).
En la EP 0 770 625 se describe que a medida que
aumenta el esfuerzo de un proceso de purificación se produce la
activación del factor VII. Para prevenir el riesgo de formación de
factor VIIa se propone, por tanto, la adición de inhibidores de
coagulación sanguínea, por ejemplo antitrombina III/heparina, o
inhibidores reversibles como benzamidina, durante la purificación
cromatográfica de afinidad.
De la misma forma se protege la molécula de
factor VII de su proteolisis durante su aislamiento, utilizando
benzamidina durante todo el proceso de purificación, tal como se
describe en Radcliffer, R. y col., Journal Biological Chemistry 250,
1975, páginas 388-395.
El problema de la activación del factor VII,
sobre todo en presencia de superficies con una carga positiva, por
ejemplo al entrar en contacto con un material de intercambio
aniónico, se encuentra descrito en Pedersen y col. (Biochemistry,
28, 1989, 9331-9336). Aquí se encontró que el factor
VII recombinante podía purificarse en presencia de benzamidina para
obtener una proteína homogénea. En ausencia del inhibidor se activó
espontáneamente el factor VII recombinante. Esta activación
autocatalítica también representa, por tanto, un problema en
preparados en los que ya no existen ni siquiera trazas de
componentes de activación fisiológicos.
Los inhibidores de coagulación sanguíneos en sí
no son deseados en un preparado farmacéutico para el tratamiento de
estados debidos a una falta de un factor de coagulación de la
sangre. Aunque sí se añaden inhibidores fisiológicos, como
antitrombina III o heparina, por razones de estabilidad, es decir
para activar los factores de coagulación sanguíneos en preparados de
complejo de protrombina. Sin embargo, sería deseable poner a
disposición preparados que tuvieran una estabilidad suficiente, a
ser posible, sin la adición de tales inhibidores.
En el catálogo Sigma, 1997, se describe un
preparado de factor VII mezclado con clorhidrato de benzamidina 1mM,
un inhibidor de coagulación de la sangre.
La DE 195 31 637 a se refiere a un preparado que
comprende tanto el factor VII como también el factor VIIa. En esta
memoria no se revela que el preparado ha de comprender un porcentaje
pequeño de factor VIIa. Debido a que este preparado ha de tener
forzosamente un porcentaje decisivo del factor VII activado, este
documento se distancia claramente de la presente invención.
En la WO 94/22905 se describe la purificación del
factor VII por medio de cromatografía en gel, donde se añaden iones
cinc a las sustancias tampón eluyentes para inhibir así la
activación del factor VII. Partiendo de este documento como estado
de la técnica más próximo se considera objetivo de la presente
invención proporcionar un procedimiento que conduce a un preparado
estable de factor VII, que tiene menos del 5% del factor VIIa con
respecto a la cantidad total de factor VII, preparado que, sin
embargo, está libre de inhibidores de coagulación sanguíneos, así
como un preparado que se puede obtener con este procedimiento.
\newpage
Bajaj y col., (Journal of Biological Chemistry
256 (1) (1981), 253-259) se refiere a un preparado
de factor VII que comprende benzamidina, de manera que el factor VII
no se sigue activando durante el almacenamiento. Además, se describe
que después de eliminar la benzamidina, el preparado se siguió
activando a partir de una relación factor VII/factor VIIa de 1,5 y
hasta una relación de 2,5, lo que corresponde a la presencia de
aproximadamente un 10% de factor activado. Así, por tanto, también
es necesario según este documento un inhibidor de la coagulación
sanguínea para poner a disposición un producto estable durante el
almacenamiento y que comprenda factor VII.
El objetivo de la invención consiste en
proporcionar un preparado farmacéutico de factor VII con un
porcentaje lo más reducido posible de factor VII activado, con una
estabilidad suficiente en ausencia de inhibidores de coagulación
sanguíneos. Además, se pretende poner a disposición un procedimiento
de purificación para la producción de preparados de factor VII,
procedimiento que se pueda realizar de forma eficiente y cuidadosa
para poder renunciar a la utilización de inhibidores tales como la
benzamidina.
Este objetivo se alcanza según la invención
mediante un procedimiento para la purificación del factor VII a
partir de un material biológico y para la producción de un preparado
de factor VII mediante la absorción del factor VII en un material
cromatográfico, elución fraccionada del factor VII con una actividad
amidolítica específica de como mínimo 50 U/mg, donde la elución se
realiza con un tampón, sin adición de inhibidores de coagulación
sanguíneos y donde el caudal unitario de la elución es de como
mínimo 0,15 volúmenes de columna por minuto, y obtención de factor
VII a partir del producto de elución de manera que el preparado de
factor VII tiene un porcentaje de factor VIIa inferior al 5% con
respecto a la cantidad total de factor VII.
Como material de partida para la producción del
preparado de factor VII según la invención normalmente se utiliza un
material biológico complejo. Entre estos se encuentran la sangre, el
plasma, fracciones de plasma, cultivos celulares o bien fracciones
de cultivos celulares. Sin embargo, también se puede utilizar un
preparado con calidad farmacéutica como material de partida, el
cual, además de factor VII, también contiene otras proteínas, por
ejemplo un preparado de complejo de protrombina que contiene los
factores II, VII, IX y X.
Con el fin evitar el riesgo de transmisión de
agentes patógenos causa de infección en humanos, entre ellos virus
transmisibles por la sangre como el HIV y el virus de la hepatitis,
por ejemplo HAV, HBV, HCV, HGV y parvovirus, pero también los
agentes infecciosos BSE y CJD, se aplica una serie de medidas. El
factor VII puede someterse, en cada caso, antes o después de la
purificación cromatográfica, a un procedimiento para la
desactivación o desenriquecimiento de agentes patógenos humanos. De
preferencia, se toman como mínimo dos medidas que lleven a la
desactivación o el desenriquecimiento por diferentes mecanismos.
Entre estas se cuentan métodos químicos,
químico-físicos y físicos. Los métodos en los que se
utilizan sustancias virucidas se realizan, de preferencia, antes o
durante el procedimiento de purificación cromatográfica para poder
eliminar el medio virucida a la vez que se purifica el factor
VII.
Entre las medidas efectivas para desactivar virus
se encuentran, por ejemplo, el tratamiento con disolventes orgánicos
y/o agentes de dispersión (EP 0 131 740, EP 0 050 061,
PCT/AT98/00090), el tratamiento con medios caotrópicos (WO
90/15613), procedimientos de tratamiento térmico, preferentemente en
estado liofilizado, seco o húmedo (véase la EP 0 159 311),
procedimientos de combinación (EP 0 519 901) y métodos físicos.
Estos últimos, por ejemplo, provocan la desactivación de los virus
mediante radiación con luz, a veces en presencia de
fotosensibilizadores (EP 0 471 794 y WO 97/37686).
Entre los procedimientos de desenriquecimiento de
los agentes patógenos humanos ha de tenerse en cuenta, en especial,
el filtrado con ultrafiltros, filtros de lecho profundo o
nanofiltros (véanse la WO 97/40861, AT A 1029/97). Pero también
contribuyen al desenriquecimiento de posibles agentes patógenos
existentes, etapas de precipitación o bien otras medidas de
purificación de proteínas, por ejemplo la adsorción.
El procedimiento para la purificación del factor
VII y la producción de un preparado de factor VII según la invención
comprende como mínimo una etapa de cromatografía. Aquí se adsorbe el
factor VII y se efectúa la elución de forma selectiva, obteniéndose
fracciones. Para la siguiente obtención del factor VII a partir del
producto de elución se eligen aquellas fracciones en las que la
actividad específica de las proteínas arriba mencionadas es de al
menos 50 U/mg de proteína, preferentemente como mínimo 100 U/mg, en
especial de purificación superior.
Como tampón de elución se utiliza preferentemente
una sustancia tampón con un pH en el rango neutro, por ejemplo un
rango de 5-9, en especial de 6 a 7,5, y con una
fuerza iónica correspondiente a un contenido de NaCl inferior a 1 M.
Como ya se ha descrito antes, no se añade al tampón de elución
ninguno de los inhibidores de coagulación sanguínea mencionados. Los
inhibidores fisiológicos eventualmente existentes en el material de
partida se separan ya durante la adsorción y, en caso dado, durante
la purificación subsiguiente del factor VII adsorbido con una
sustancia tampón por lavado, de forma que el factor VII se obtiene,
en cualquier caso, sin que contenga inhibidores. También aquí se
puede ver la estabilidad extraordinaria del factor VII altamente
purificado, que se puede someter entonces a las medidas de
tratamiento usuales de producción de preparados farmacéuticos o de
diagnóstico.
La cromatografía se realiza bien según un
procedimiento por lotes o bien en columna. Para un mejor control del
caudal unitario o bien del tiempo de contacto del factor VII con el
material cromatográfico se prefiere el procedimiento en columna. Los
materiales preferentes son portadores con ligandos de carga positiva
que se pueden utilizar como intercambiadores de aniones.
Como intercambiadores aniónicos se pueden
utilizar, en principio, todos aquellos intercambiadores aniónicos
basados en hidratos de carbono o en polímeros sintéticos, que tengan
una afinidad con el factor VII (protrombina), por ejemplo
DEAE-Sephacel®, DEAE-Sephadex®,
DEAE-Sepharose CL6B®, DEAE-Sepharose
Fast Flow®, QAE-Sephadex®,
Q-Sepharose Fast Flow®, Q-Sepharose
High Performance®, Q-Sepharose Big Beads® (todos de
la firma Pharmacia);
DEAE-Tris-Acryl®,
DEAE-Spherodex®,
Q-Hyper-D® (todos de la firma
Sepracor); Macroprep DEAE®, Macroprep Q® (todos de la firma
BioRad); DEAE-Toyopearl®,
QAE-Toyopearl®, Toyopearl Super-Q®
(todos de la firma Tosohaas); Protein PAK DEAE® (Waters); Fractogel
EMD-TMAE®, Fractogel EMD-DEAE®,
Fractogel EMD-DMAE®, Licrospher 1000 TMAE®,
Licrospher 1000 DEAE® y Licrospher 4000 DMAE® (todos de la firma
MERCK).
Especialmente, se utilizan intercambiadores
iónicos estables bajo presión, por ejemplo Fractogel
TMAE-EMD, Express IonQ, Sonree 30Q.
Sorprendentemente, se ha mostrado que incluso en estos materiales se
evita el fenómeno de la activación del factor VII si el tiempo de
contacto con el material de intercambio aniónico o bien el tiempo de
permanencia en la columna es corto, por ejemplo inferior a 5
minutos. En una columna se elige, por tanto, preferentemente un
caudal unitario de como mínimo 2,5 cm/minuto, en especial 3,0
cm/minuto, para la elución del factor VII adsorbido.
El caudal unitario corresponde como mínimo a un
0,15 del volumen de columna por minuto, de preferencia 0,17, en
especial un 0,2 del volumen de columna por minuto.
Otros materiales portadores para la purificación
cromatográfica son, por ejemplo, ligandos con una afinidad
específica para el factor VII, como el factor tissue (factor de
tejido), anticuerpos y péptidos. Otros materiales preferentes
contienen grupos hidrófobos.
Como gel para la cromatografía de interacción
hidrófoba se utiliza, preferentemente,
Phenyl-Sepharose High Performance® (firma
Pharmacia), pero también otros geles cromatográficos, por ejemplo
Butyl-Sepharose®, Octyl-Sepharose®,
Phenyl-Sepharose®, Phenyl-Sepharose
Fast Flow High Sub®, Phenyl-Sepharose Fast Flow Low
Sub® (todos de la firma Pharmacia); Fractogel
TSK-Butyl® (firma MERCK);
Macroprep-Methy-HIC-Support®,
Macroprep
t-Butyl-HIC-Support®
(todos de la firma BioRad), TSK-Gel Butyl
Toyopearl®, TSK-Gel Phenyl Toyopearl® y
TSK-Gel Ether Toyopearl® (todos de la firma
Tosohaas).
Como otros materiales portadores también se
pueden utilizar medios de filtración en gel como Superose 12,
Superdex 75.
En un tipo de realización especialmente
preferente, para la producción de un preparado del factor VII se
utilizan también combinaciones de los procedimientos cromatográficos
indicados, por ejemplo una combinación de la cromatografía de
intercambio aniónico y la cromatografía de interacción hidrófoba. En
caso dado, a continuación se puede realizar una filtración en gel
para la siguiente purificación. Según esto y de preferencia, en el
procedimiento según la invención, como material cromatográfico se
utiliza un intercambiador aniónico y un material adecuado para la
cromatografía hidrófoba.
El factor VII purificado según la invención no
solamente se puede formular siguiendo las medidas usuales de
diálisis/diafiltración, sino también filtración estéril y
concentración para obtener un preparado farmacéutico de factor VII.
Al igual, también se pueden proporcionar preparados de combinación
que contienen, además de otras sustancias activas, el factor VII
purificado según la invención.
Según otro aspecto, la presente invención se
refiere a un preparado basado en factor VII de coagulación sanguínea
con un porcentaje inferior al 5% de factor VIIa, porcentaje referido
a la cantidad total de factor VII, con una actividad amidolítica
específica mínima de 50 U/mg y una estabilidad en ausencia de
inhibidores de coagulación sanguíneos, preparado que está libre de
inhibidores de coagulación de la sangre, que se puede obtener por el
procedimiento de la invención según se ha descrito más arriba.
De acuerdo con la invención, por primera vez es
posible producir un preparado de factor VII altamente purificado sin
utilizar los inhibidores de coagulación sanguínea conocidos, en
especial sin la adición de antitrombina III y/o de heparina,
benzamidina, inhibidor de tripsina procedente de semillas de soja,
fluoruro de fenilmetilsulfonilo o EDTA. Se ha descubierto que, bajo
las condiciones descritas a continuación, no se activa el factor VII
durante un procedimiento de purificación cromatográfico incluso
aunque sin existir la protección de enzimas proteolíticas o bien la
activación por contacto. Por tanto, el preparado del factor VII
altamente purificado no contiene ninguno de los inhibidores
mencionados o bien en menos del límite de determinación. En cuanto
se hubo obtenido una actividad específica de como mínimo 50 U/mg,
pudo demostrarse sorprendentemente que el factor VII era
extraordinariamente estable (incluso frente a procesos de activación
autocatalíticos) sin que fuera necesaria la adición de un inhibidor
específico de activación de FVII.
La estabilidad del factor VII altamente
purificado puede buscarse, sobre todo, pero no exclusivamente (véase
Pedersen y col., 1989 en cuanto a la activación autocatalítica), en
el desenriquecimiento de las proteasas específicas del factor VII,
entre ellas los factores IXa y Xa. Con ello se garantiza que un
preparado, como es un preparado farmacéutico de infusión, de factor
VII altamente purificado con un mínimo de 50 U/mg de proteína,
preferentemente como mínimo 100 U/mg, en particular como mínimo 500
U/mg de proteína, en casos especiales incluso como mínimo 1.000 U/mg
y hasta la pureza teórica de aproximadamente 2.000 U/mg, puede
mantenerse en estado listo para su uso durante un tiempo más largo
incluso en ausencia de inhibidores de coagulación sanguínea, sin que
aumente el porcentaje de factor VIIa en el preparado por encima de
una medida admisible.
El preparado según la invención tiene un
porcentaje de factor VIIa inferior al 5% con respecto a la cantidad
total de factor VII, preferentemente inferior al 3%, en especial
inferior al límite de determinación (por ejemplo en el ensayo según
Seligson y col., Haemostasis 13, 186-191, 1983).
El preparado según la invención es, por ejemplo,
un concentrado de calidad farmacéutica que se puede utilizar para
producir preparados farmacéuticos combinados. Tales preparados
combinados pueden contener otras sustancias activas, por ejemplo
proteínas dependientes de la vitamina K, entre éstas uno o varios de
los factores sanguíneos II, IX, X, proteína C o proteína S. Así, por
ejemplo, se puede preparar un preparado de complejo de protrombina
que contiene los factores II, VII, IX y X añadiendo el preparado de
factor VII según la invención a un complejo de protrombina
parcial.
El preparado de infusión del factor VII según la
invención puede presentarse bajo una forma con una concentración
relativamente alta debido a la reducida carga de impurezas, por
ejemplo con una concentración de 50 a 5.000 U/ml. Con ello se
simplifica considerablemente la administración del preparado en
forma de inyección en bolo o infusión temporal.
La estabilidad del preparado puede ensayarse en
su estado listo para su uso, para ver si cumple los criterios de
estabilidad según la invención; es decir, incubándolo a temperatura
ambiente durante un período mínimo de 12 horas, preferentemente de
más de 30 horas. De esta manera se puede determinar que el preparado
según la invención sigue conteniendo menos del 5% de factor
VIIa.
Sin embargo, el preparado según la invención
también puede presentarse en una forma comercial duradera,
preferentemente en forma de liofilizado. Después de la
reconstitución se puede comprobar de nuevo su extraordinaria
estabilidad y que tampoco se producen efectos negativos durante la
liofilización/reconstitución en cuanto a la activación (temprana) de
FVII. Otras formas son preparados congelados o preparados líquidos
que son estables durante un tiempo de almacenamiento más largo, en
caso dado después de añadir estabilizadores, como son proteínas
portadoras y/o hidratos de carbono, de preferencia a 4ºC.
El factor VII en el preparado según la invención,
a pesar de sus características de estabilidad (incluso en cuanto a
la autoactivación), es, en cualquier caso, un factor VII activable
que se puede activar sin más, por ejemplo in vivo, después de
lo cual es activo para la coagulación de la sangre según el factor
VII nativo. De preferencia se utiliza una proteína nativa de factor
VII, por ejemplo de factor VII plasmático humano, o de factor VII
recombinante humano. En la recombinación de ácidos nucleicos también
pueden utilizarse análogos de factor VII que, en todo caso, puedan
activarse de la misma forma o en mayor medida (Sridhara y col., Am.
J. Hematology 53, 66-71, 1996).
En particular y según la invención, se pone a
disposición un preparado de complejo de protrombina el cual, además
del factor VII altamente purificado y estable, contiene como mínimo
uno de los factores de coagulación sanguínea II, IX y X.
Preferentemente, estos otros factores de coagulación sanguínea
también se han purificado como factores separados antes de producir,
con la correspondiente formulación, el preparado combinado. Además,
se puede prever un contenido de heparina, según una recomendación de
Menache y col., Thrombosis Diathes. Haemorrh. 33,
645-647 (1975), para la producción de preparados
farmacéuticos que contienen factor IX.
Por tanto, la presente invención también se
refiere a un preparado farmacéutico que contiene un factor VII según
la invención o bien un preparado de factor VII según la invención.
Este preparado puede contener, de preferencia, además como mínimo
uno, especialmente todos los factores de coagulación sanguínea II,
IX y X.
Según una forma de realización preferente, se
formula el preparado según la invención como preparado farmacéutico
para su infusión.
La invención se describe más detalladamente con
ayuda de los siguientes ejemplos.
Se adsorben 340 l de
crio-sobrenadante en Al(OH)_{3} y se
eluyen con 22,5 g de Na_{2}HPO_{4} x 2 H_{2}O/l (pH 8,5) con
un contenido del 1% (v/v) de Tween 80 (vegetal) y se mezclan con un
complejo AT III/Heparina (350 IU heparina/kg de producto de elución,
40 IU AT III/kg de producto de elución). El producto de elución que
contiene Tween se concentra aproximadamente 15 veces mediante
ultrafiltración en una membrana con un límite de exclusión \leq 30
kD aproximadamente y se diafiltra contra 10 volúmenes de Tris/HCl 20
mM (pH 7,0) (tampón Tris). Después de la filtración a 0,2 \mu y
ajuste de la concentración de Tween en un 15% (v/v), se incuba
durante 3 horas a 40ºC para la desactivación de virus. La solución
(3 l) diluida al doble de volumen con el tampón Tris se aplica sobre
una columna BPG100/165 Fraktogel TMAE-EMD 650M
(firma MERCK), se realiza un post-lavado con tampón
Tris y a continuación se lava en tampón Tris con un gradiente de
escala de NaCl creciente (50, 100, 150, 200, 250, 1.000 mM/l), se
eluye y se regenera. El caudal unitario es, con una altura de lecho
de 16,5 cm, como mínimo de 2,5 a 3 cm/min.
El producto de elución de 200
mM-NaCl (aprox. 5 l) se concentra aproximadamente 60
veces a una concentración de proteína de 5 mg/ml después de la
adición de 43,8 IU heparina/kg y 5,0 IU ATIII/kg por
ultrafiltración en una membrana con un límite de exclusión \leq 30
kD aproximadamente. Después de la diafiltración contra una solución
4,8 mM de citrato de Na x 2 H_{2}O y 61,6 mM NaCl/l se ajusta el
pH a un valor de 8,0 \pm 0,5 y se congela y liofiliza la solución.
El producto de la liofilización se humedece hasta una humedad
residual del 7-8% y se calienta para la
desactivación de virus durante 10 horas a 60ºC y 1 hora a 80ºC.
| Fracción | Act. específica* | Activación de | Factor de |
| [U FVII/mg prot.] | FVII** | purificación | |
| [U FVIIa/U FVII] | |||
| Plasma | 0,02 | - | 1 |
| Al(OH)_{3}-prod. de elución | |||
| n. Tween | 5 | 0,05 | 200 |
| TMAE-prod. de elución | 100 | 0,25 | 5.000 |
| Liofilizado con trat. térmico | 100 | 0,35 | 5.000 |
| *: actividad específica teórica máxima: 2.000 U FVII/mg de proteína | |||
| **: activación completa con una relación FVIIa/FVII de 15-20. |
Hasta la producción del preparado tratado
térmicamente (polvo suelto) se procede igual que en el Ejemplo 1. El
polvo suelto se disuelve en el volumen original con Milli
Q-Agua (firma Millipore) (concentración proteínica
aproximada 5 mg/ml), se aumenta el contenido de sal de 60 a 2.000 mM
NaCl/l y se aplica sobre una columna HP XK50/96 fenilsefarosa
(firma Pharmacia) ajustada con 20 mM de Tris/HCl (pH 7,4; 2.000 mM
NaCl/l). Después de la aplicación de 75 ml de solución de polvo
suelto de FVII con un caudal unitario de 10 ml/min, se realiza un
post-lavado con aproximadamente 10 SV y se lava a
continuación en las siguientes etapas con NaCl, se efectúa la
elución o bien se regenera:
| 1.200 | mM de NaCl/l |
| 850 | mM de NaCl/l |
| 500 | mM de NaCl/l |
| 0 | mM de NaCl/l, en cada caso en 20 mM de Tris/HCl (pH 7,4) |
Aproximadamente 2,8 l del producto de elución de
850 mM de NaCl se concentran 5 veces a continuación por
ultrafiltración en una membrana con un límite de exclusión \leq 30
kD y se diafiltra contra 20 mM bicarbonato amónico y se liofiliza
bajo sublimación de las sales. El liofilizado sin sal se introduce a
1/50 del volumen original en 0,4% de
Na_{3}-citrato x 2 H_{2}O 0,8% NaCl (pH 7,0) y
se retampona en una columna XK26/100 superosa 12 (firma Pharmacia)
ajustada con el mismo tampón bajo una purificación reducida con un
caudal unitario de 2,5 ml/min.
| Fracción | Act. específica* | Activación de | Rendimiento | Factor de |
| [U FVII/mg prot.] | FVII** | De F VII | purificación | |
| [U FVIIa/U FVII] | [%] | |||
| Plasma | 0,02 | - | - | 1 |
| Al(OH)_{3}-prod. elución | ||||
| n. Tween | 5 | 0,05 | 100 | 200 |
| TMAE-prod. de elución | 100 | 0,25 | 80 | 5.000 |
| Liofilizado trat. térmico | 100 | 0,35 | 61 | 5.000 |
| Eluato fenilsefarosa | 500 | 0,4 | 43 | 25.000 |
| Eluato de superosa 12 | 1.000 | 0,5 | 35 | 50.000 |
En una columna 650 M XK26/16,5 Fractogel
TMA-EMD (firma MERCK) se comprobó la purificación de
FVII a partir de un eluato Al(OH)_{3} después de la
desactivación de virus con un 15% de Tween (aplicación 36 mg de
proteína/ml de gel) con diferentes caudales unitarios a 22ºC. Las
condiciones de la cromatografía corresponden al Ejemplo 1.
| Caudal unitario | Activación |
| [cm/min] | [U F7a/U F7] |
| 0,94 | 7,6 |
| 1,88 | 2,65 |
| 2,35 | 0,45 |
| 2,83 | 0,24 |
Se muestra que a medida que aumenta el caudal
unitario decrece el contenido del factor activado. El coeficiente de
activación sigue entonces aproximadamente constante a partir de un
valor superior de aproximadamente 2,5 a 3 cm/s.
Se incubaron durante 38 horas a 22ºC alícuotas de
100-300 ml de los eluatos que contienen FVII de la
cromatografía TMAE o fenilsefarosa preparados según los Ejemplos 1
y 2, y después de transcurrir este tiempo se comprobó la actividad
de FVII amidolítica (Immunochrom FVII:C, firma IMMUNO AG), la
coagulación de FVIIa (Staclot VIIa-Rtf, firma
Diagnostica Stago) y la concentración proteica (Bradford) en
comparación con una alícuota recién congelada a -20ºC.
La actividad del factor VII se midió
cinéticamente bajo condiciones de una activación completa de FVII
por tromboplastina y Ca^{2+} y la activación siguiente de FX
también añadido con un sustrato FXa cromógeno. Se procedió de
acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
Con un factor de tejido soluble recombinante se
puede medir, con ayuda de un coagulómetro, en presencia de
fosfolípido y plasma por defecto de FVII sólo la coagulación
provocada por FVIIa. Se procedió según la prescripción del
fabricante Diagnostica Stago.
| Fracción | Proteína | U FVII/chrom/mg | U FVIIa | U FVIIa |
| (mg/ml) | Act. espec. | Act. t=0 | Act. t=38 | |
| TMAE, 200 mM | 0,04-0,08 | 150-200 | 0,1-0,3 | 0,3-0,8 |
| Fenilsef.,750 mM | 0,02-0,04 | 500-1.000 | 0,1-0,2 | 0,1-0,3 |
Se puede ver que con los preparados obtenidos
según la invención, incluso con un almacenamiento de 38 horas a
22ºC, no se presenta ninguna activación de FVII digna de mención.
Esto es tanto más sorprendente ya que con los preparados de factor
VII conocidos hasta la fecha siempre se presentó una activación
considerable (entre otros también por autocatálisis), que solamente
se podía evitar o bien postergar añadiendo inhibidores
específicos.
Claims (17)
1. Procedimiento para la purificación de factor
VII de un material biológico y producción de un preparado de factor
VII por adsorción del factor VII en un material cromatográfico,
elución fraccionada del factor VII con una actividad amidolítica
específica de como mínimo 50 U/mg, donde la elución se realiza con
un tampón sin adición de inhibidores de coagulación sanguínea y
donde el caudal unitario de elución es como mínimo de 0,15 volúmenes
de columna por minuto, y obtención del factor VII a partir del
producto de elución, de manera que el preparado de factor VII tiene
un porcentaje inferior al 5% de factor VIIa con respecto a la
cantidad total de factor VII.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque como material cromatográfico se utiliza
un intercambiador aniónico en una columna.
3. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque como material de cromatografía se
utiliza un portador con grupos hidrófobos.
4. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque como material cromatográfico se utiliza
un portador adecuado para la filtración en gel.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque se purifica el
factor VII de sangre, plasma, una fracción de plasma, un cultivo de
células o una fracción de cultivo de células.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el factor VII se
obtiene de la fracción de elución obtenida que contiene el factor
VII con una actividad amidolítica específica mínima de 100 U/mg.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como material
cromatográfico se utiliza un intercambiador aniónico y como otro
material de cromatografía un material adecuado para la cromatografía
hidrófoba.
8. Preparado basado en factor de coagulación
sanguíneo VII con un porcentaje inferior al 5% de factor VIIa, con
respecto a la cantidad total de factor VII, con una actividad
amidolítica específica mínima de 50 U/mg y con una estabilidad en
ausencia de inhibidores de coagulación sanguínea, preparado que está
libre de inhibidores de coagulación sanguínea, y se obtiene por un
procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7.
9. Preparado según la reivindicación 8,
caracterizado por una actividad amidolítica específica mínima
de 100 U/mg.
10. Preparado según la reivindicación 8 ó 9, con
una concentración de factor VII de 50 a 5.000 U/ml.
11. Preparado según la reivindicación 8 ó 9 en
forma liofilizada.
12. Preparado según una de las reivindicaciones 8
a 11, caracterizado porque es estable en un estado listo para
su uso a temperatura ambiente durante un período mínimo de 12
horas.
13. Preparado según una de las reivindicaciones 8
a 12, caracterizado porque el factor VII es un factor VII
recombinante que se puede activar.
14. Preparado según una de las reivindicaciones 8
a 12, caracterizado porque el factor VII es un factor VII
plasmático nativo.
15. Preparado según una de las reivindicaciones 8
a 14, caracterizado porque se ha formulado como preparado
farmacéutico de infusión.
16. Preparado farmacéutico que contiene un factor
VII y se obtiene según el procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 7, donde el preparado está libre de inhibidores
de coagulación de la sangre.
17. Preparado según la reivindicación 16,
caracterizado porque además contiene como mínimo uno de los
factores de coagulación sanguíneos II, IX y X.
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| AU2001256148A1 (en) * | 2000-05-03 | 2001-11-12 | Novo-Nordisk A/S | Subcutaneous administration of coagulation factor vii |
| US20030211094A1 (en) | 2001-06-26 | 2003-11-13 | Nelsestuen Gary L. | High molecular weight derivatives of vitamin k-dependent polypeptides |
| IL162239A0 (en) | 2001-12-21 | 2005-11-20 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Liquid composition of factor vii polypeptides |
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| EP1507556B1 (en) * | 2002-05-02 | 2016-07-27 | Wyeth Holdings LLC | Calicheamicin derivative-carrier conjugates |
| GB0210121D0 (en) | 2002-05-02 | 2002-06-12 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
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| CA2519020A1 (en) * | 2003-03-18 | 2004-09-30 | Novo Nordisk Health Care Ag | Method for the production of gla-residue containing serine proteases |
| WO2004082708A2 (en) * | 2003-03-18 | 2004-09-30 | Novo Nordisk Health Care Ag | Liquid, aqueous, pharmaceutical compositions of factor vii polypeptides |
| DK2085470T3 (da) | 2003-03-20 | 2012-08-06 | Bayer Healthcare Llc | FVII- eller FVIIa-varianter |
| US20060116324A1 (en) * | 2003-06-13 | 2006-06-01 | Novo Nordisk Healthcare A/G | Novel formulations |
| EP1646398A2 (en) * | 2003-06-13 | 2006-04-19 | Novo Nordisk Health Care AG | Formulations comprising factor viia and a factor vii related polypeptide |
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| CN102872451A (zh) * | 2003-08-14 | 2013-01-16 | 诺和诺德医疗保健公司 | 因子vii多肽类的含水液体药物组合物 |
| WO2005034990A1 (ja) * | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | アンチトロンビンｉｉｉ含有止血用組成物 |
| PL1711513T3 (pl) | 2003-12-01 | 2014-12-31 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Nanofiltracja roztworów czynnika vii w celu usunięcia wirusów |
| US20070037966A1 (en) * | 2004-05-04 | 2007-02-15 | Novo Nordisk A/S | Hydrophobic interaction chromatography purification of factor VII polypeptides |
| CA2565414A1 (en) * | 2004-05-04 | 2005-11-24 | Novo Nordisk Health Care Ag | O-linked glycoforms of polypeptides and method to manufacture them |
| JP2008514216A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | Ｄｅｓｇｌａ−ｖｉｉ因子ポリペプチド構造の除去による、ｖｉｉ因子ポリペプチドの原体の精製 |
| PT1841863E (pt) * | 2005-01-14 | 2010-10-25 | Bayer Healthcare Llc | Método para a purificação de factor vii |
| EP1907540B1 (en) * | 2005-07-22 | 2012-12-19 | Bayer HealthCare LLC | In-solution activation of factor vii |
| EP1924689B1 (en) * | 2005-09-01 | 2014-08-13 | Novo Nordisk Health Care AG | Hydrophobic interaction chromatography purification of factor vii polypeptides |
| EP1924688A1 (en) * | 2005-09-01 | 2008-05-28 | Novo Nordisk Health Care AG | Purification of coagulation factor vii polypeptides |
| AU2008292264A1 (en) * | 2007-08-24 | 2009-03-05 | Novo Nordisk Health Care Ag | Reduction of dimer content in factor VII polypeptide compositions by heat treatment |
| CN102046653B (zh) | 2008-05-30 | 2015-02-18 | 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 | 控制多肽修饰反应的方法 |
| WO2012082933A1 (en) | 2010-12-15 | 2012-06-21 | Baxter International, Inc. | Eluate collection using conductivity gradient |
| TWI641382B (zh) * | 2013-01-31 | 2018-11-21 | 韓美藥品股份有限公司 | 於包含因子ｖｉｉ之組成物中使病毒失活之方法 |
| ES2906118T3 (es) | 2016-12-22 | 2022-04-13 | Km Biologics Co Ltd | Método cromatográfico para recolectar factor VII de coagulación sanguínea con alto rendimiento |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4357321A (en) * | 1980-01-28 | 1982-11-02 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method and composition for treating clotting factor inhibitors |
| US4456591A (en) * | 1981-06-25 | 1984-06-26 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Therapeutic method for activating factor VII |
| EP0129634B1 (en) | 1983-06-27 | 1988-05-04 | Börje Drettner | An instrument for the treatment of sinusitis |
| GR860984B (en) * | 1985-04-17 | 1986-08-18 | Zymogenetics Inc | Expression of factor vii and ix activities in mammalian cells |
| AT399095B (de) * | 1986-03-27 | 1995-03-27 | Vukovich Thomas Dr | Verfahren zur auftrennung von proteinen mittels gradientenelution und vorrichtung zur durchführung des verfahrens |
| US5094960A (en) * | 1988-10-07 | 1992-03-10 | New York Blood Center, Inc. | Removal of process chemicals from labile biological mixtures by hydrophobic interaction chromatography |
| FR2684999A1 (fr) * | 1991-12-16 | 1993-06-18 | Aquitaine Dev Transf Sanguine | Procede de fabrication d'un concentre de facteur vii active de haute purete essentiellement depourvu des facteurs vitamine k dependants et des facteurs viiic et viiicag. |
| US6039944A (en) * | 1992-02-28 | 2000-03-21 | Zymogenetics, Inc. | Modified Factor VII |
| DK38293D0 (da) * | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Novo Nordisk As | Fremstilling af proteiner |
| DE4325872C1 (de) * | 1993-08-02 | 1994-08-04 | Immuno Ag | Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation |
| JPH08237146A (ja) | 1995-02-23 | 1996-09-13 | Mitsubishi Electric Corp | インタリーブ装置及びインタリーブ方法、デインタリーブ装置及びデインタリーブ方法、送信装置、受信装置及び受信方法 |
| DE19531637A1 (de) * | 1995-08-28 | 1997-03-06 | Immuno Ag | Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung |
| DE19538715A1 (de) * | 1995-10-18 | 1997-04-30 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Reinigung von Faktor VII und aktiviertem Faktor VII |
| JPH1059866A (ja) * | 1996-08-19 | 1998-03-03 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 血液凝固第ｖｉｉ因子及び／もしくは活性化血液凝固第ｖｉｉ因子の製造方法 |
| JPH10237146A (ja) | 1997-02-21 | 1998-09-08 | Nagoya Yuka Kk | ホルムアルデヒド吸収剤 |
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