ES2242860T3 - Inhibidores peptidicos de fusion de larga vida contra infecciones por vih. - Google Patents
Inhibidores peptidicos de fusion de larga vida contra infecciones por vih.Info
- Publication number
- ES2242860T3 ES2242860T3 ES02729737T ES02729737T ES2242860T3 ES 2242860 T3 ES2242860 T3 ES 2242860T3 ES 02729737 T ES02729737 T ES 02729737T ES 02729737 T ES02729737 T ES 02729737T ES 2242860 T3 ES2242860 T3 ES 2242860T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- fmoc
- tbu
- peptide
- trt
- virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
La presente invención cumple con estas y otras necesidades y se centra en los derivados del péptido C34 de fórmulas I-VI, los cuales tienen actividad antiviral y/o antifusogénica. Estos derivados del péptido C34 presentan una mayor estabilidad in vivo y una menor tendencia a la degradación por peptidasas o proteasas. Como resultado, los compuestos de fórmulas I-VI minimizan la necesidad de administrar los péptidos de forma frecuente o incluso continua. Los presentes derivados de C34 pueden utilizarse, por ejemplo, como profilácticos contra y/o en el tratamiento de infecciones producidas por diversos virus, incluidos el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), el virus sincitial respiratorio humano (VSR), el virus de parainfluenza humano (VPH), el virus del sarampión (MV) y el virus de inmunodeficiencia del simio (VIS). La modificación realizada a la secuencia del péptido natural C34 le permite reaccionar con los grupos tiol disponibles de los componentes sanguíneos para formar enlaces covalentes estables. En una realización de la invención, el componente sanguíneo comprende una proteína sanguínea, incluida una proteína sanguínea móvil tal como la albúmina, que es la más preferente. Los compuestos de fórmulas I-VI inhiben la infección viral de las células; por ejemplo, inhibiendo la fusión célula-célula o la infección por el virus libre. La vía de infección puede implicar la fusión de membrana, como ocurre en el caso de los virus envueltos o encapsulados, o algún otro evento de fusión que implique estructuras virales y celulares.
Description
Inhibidores peptídicos de fusión de larga vida
contra infecciones por VIH.
Esta invención se refiere a derivados del péptido
C34 que son inhibidores de infecciones virales y/o muestran
propiedades antifusogénicas. En particular, esta invención se
refiere a derivados de C34 que presentan una actividad inhibidora
contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus
respiratorio sincitial (VRS), el virus de parainfluenza humana
(VPH), el virus del sarampión (MV), y el virus de la
inmunodeficiencia del simio (VIS) cuya acción es de larga duración
para el tratamiento de las respectivas infecciones virales.
Los eventos de fusión de membrana, aunque tienen
lugar normalmente en los procesos biológicos celulares, también
están implicados en diversos estados de enfermedad, incluyendo, por
ejemplo, la entrada de virus envueltos al interior de las células.
Se conocen péptidos que inhiben o, de otra manera, interrumpen los
eventos asociados a la fusión de membrana, incluyendo, por ejemplo,
la inhibición de la transmisión retroviral a las células no
infectadas.
El VIH pertenece a la familia lentivirus de los
retrovirus y prevalecen dos tipos de VIH, el VIH-1
y el VIH-2, habiendo sido identificadas varias cepas
de cada uno de ellos. El VIH tiene como objetivo las células
CD-4+, y la entrada viral depende de la unión de la
proteína gp120 del VIH a la glicoproteína CD4 y de un receptor
quimioquina en la superficie celular. Se sabe que el C34 presenta
actividad antiviral contra el VIH, incluyendo la inhibición de la
infección de células CD-4+ por un virus libre y/o la
inhibición de la formación del virus sincitial inducido por VIH
entre células CD-4+ infectadas y no infectadas. Se
piensa que la inhibición tiene lugar por la unión del C34 a la
primera región de repetición heptavalente en gp41 y, por ello,
impide que la primera y segunda regiones de repetición
heptavalentes formen la estructura fusigénica en horquilla.
Se sabe el C34 posee actividad antifusogénica, es
decir tiene la capacidad de inhibir o reducir el nivel de eventos
de fusión de membrana entre dos o más entidades, por ejemplo
virus-célula o célula-célula, si se
compara con el nivel de fusiones de membrana que se producen en
ausencia del péptido. De forma más específica, en WO 00/06599 se
describe la utilización de C34 para inactivar gp41, impidiendo o
reduciendo así la entrada del VIH-1 al interior de
las células.
De igual forma, en WO 99/59615 se describen las
secuencias intensificadoras del péptido originalmente derivadas a
partir de varias secuencias de proteínas retrovirales envueltas
(gp41) que mejoran las propiedades farmacocinéticas de cualquier
polipéptido núcleo al cual están enlazadas. La WO 99/59615 se
refiere además a los métodos para intensificar las propiedades
farmacocinéticas de cualquier polipéptido núcleo mediante enlace de
las secuencias del péptido intensificador al polipéptido núcleo.
Aunque muchos péptidos antivirales o
antifusogénicos descritos en la técnica muestran una actividad
antiviral y/o antifusogénica potente, el C34, al igual que tales
péptidos, tiene una corta vida media in vivo, principalmente
debido a su rápida eliminación del suero y a la actividad de
peptidasas y proteasas. Esto, a su vez, reduce mucho su actividad
antiviral efectiva.
Por tanto, existe la necesidad de un método para
prolongar la vida media de péptidos como el C34 in vivo sin
que esto afecte sustancialmente a la actividad antifusogénica.
De acuerdo con la presente invención, se
proporcionan ahora derivados del péptido C34 que tienen una vida
media in vivo ampliada si se compara con la de la secuencia
correspondiente del péptido C34 no modificado. De forma más
específica, la presente invención se refiere a los compuestos de
fórmulas I-VI mostradas a continuación, que son
capaces de reaccionar con los grupos tiol de un componente
sanguíneo, bien sea in vivo o ex vivo, para formar un
enlace covalente estable.
Los componentes sanguíneos preferentes comprenden
proteínas tales como inmunoglobulinas, incluidas IgG e IgM,
seroalbúmina, ferritina, proteínas de enlace a esteroides,
transferrina, proteína de enlace a tiroxina,
\alpha-2-macroglobulina, etc.,
especialmente seroalbúmina e IgG, y en particular seroalbúmina.
En otro aspecto de la invención, se proporciona
una composición farmacéutica que comprende los derivados de fórmulas
I a VI en combinación con vehículos farmacéuticamente aceptables.
Tal composición es útil para inhibir la actividad de VIH, VRS, VPH,
MV o VIS.
En otra realización de la presente invención, se
proporciona la utilización de un compuesto de fórmulas
I-VI, bien solo o en combinación con un vehículo
farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento
para la inhibición de la actividad de VIH, VRS, VPH, MV o VIS, en
la cual y preferentemente el compuesto de la presente invención
está enlazado de forma covalente a un componente sanguíneo, en
especial, donde el compuesto de la presente invención está enlazado
de forma covalente a un componente sanguíneo in vivo.
En otro aspecto de la presente invención, se
proporciona un conjugado que comprende los compuestos de fórmulas
I-VI enlazados de forma covalente a un componente
sanguíneo.
La presente invención cumple con estas y otras
necesidades y se centra en los derivados del péptido C34 de fórmulas
I-VI, los cuales tienen actividad antiviral y/o
antifusogénica. Estos derivados del péptido C34 presentan una mayor
estabilidad in vivo y una menor tendencia a la degradación
por peptidasas o proteasas. Como resultado, los compuestos de
fórmulas I-VI minimizan la necesidad de administrar
los péptidos de forma frecuente o incluso continua. Los presentes
derivados de C34 pueden utilizarse, por ejemplo, como profilácticos
contra y/o en el tratamiento de infecciones producidas por diversos
virus, incluidos el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), el
virus sincitial respiratorio humano (VSR), el virus de
parainfluenza humano (VPH), el virus del sarampión (MV) y el virus
de inmunodeficiencia del simio (VIS).
La modificación realizada a la secuencia del
péptido natural C34 le permite reaccionar con los grupos tiol
disponibles de los componentes sanguíneos para formar enlaces
covalentes estables. En una realización de la invención, el
componente sanguíneo comprende una proteína sanguínea, incluida una
proteína sanguínea móvil tal como la albúmina, que es la más
preferente.
Los compuestos de fórmulas I-VI
inhiben la infección viral de las células; por ejemplo, inhibiendo
la fusión célula-célula o la infección por el virus
libre. La vía de infección puede implicar la fusión de membrana,
como ocurre en el caso de los virus envueltos o encapsulados, o
algún otro evento de fusión que implique estructuras virales y
celulares.
Los componentes sanguíneos a los que se enlazan
de forma covalente los presentes derivados antivirales de C34 pueden
ser fijos o móviles. Los componentes sanguíneos fijos son
componentes de la sangre no-móviles e incluyen
tejidos, receptores de membrana, proteínas intersticiales,
proteínas de fibrina, colágenos, plaquetas, células endoteliales,
células epiteliales y sus receptores asociados de membrana y
membranosos, células somáticas del cuerpo, células de los músculos
esqueletales y lisos, componentes neuronales, osteocitos y
osteoclastos y todos los tejidos del cuerpo, especialmente aquellos
asociados a los sistemas circulatorio y linfático. Los componentes
sanguíneos móviles son los componentes sanguíneos que no poseen un
sitio fijo durante un periodo de tiempo prolongado, generalmente que
no excede los 5 minutos, normalmente un minuto. Estos componentes
sanguíneos no están asociados a una membrana y están presentes en la
sangre durante períodos de tiempo prolongados en una concentración
mínima de al menos 0,1 \mug/ml.
Los componentes sanguíneos móviles incluyen seroalbúmina, transferrina, ferritina e inmunoglobulinas tales como la IgM e IgG. La vida media de los componentes sanguíneos móviles es de al menos 12 horas aproximadamente.
Los componentes sanguíneos móviles incluyen seroalbúmina, transferrina, ferritina e inmunoglobulinas tales como la IgM e IgG. La vida media de los componentes sanguíneos móviles es de al menos 12 horas aproximadamente.
Durante el proceso de síntesis del derivado de
C34 se pueden necesitar grupos protectores. Estos grupos protectores
son convencionales en el campo de la síntesis de péptidos, y en
general se pueden describir como partes químicas capaces de
proteger al derivado del péptido frente a reacciones con otros
grupos funcionales. Existen diversos grupos protectores disponibles
en el mercado, y ejemplos de ellos pueden encontrarse en US
5.493.007 que se incorpora aquí como referencia. Ejemplos de grupos
protectores típicos adecuados incluyen grupos acetilo,
fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC),
t-butiloxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBZ),
etc. Además, la Tabla 1 proporciona las abreviaturas tanto de tres
letras como de una de los aminoácidos.
Aminoácidos naturales y sus abreviaturas | ||
Nombre | Abreviatura de 3 letras | Abreviatura de 1 letra |
Alanina | Ala | A |
Arginina | Arg | R |
Asparagina | Asn | N |
Ácido aspártico | Asp | D |
Tabla 1
(continuación)
Aminoácidos naturales y sus abreviaturas | ||
Nombre | Abreviatura de 3 letras | Abreviatura de 1 letra |
Cisteína | Cys | C |
Ácido glutámico | Glu | E |
Glutamina | Gln | Q |
Glicina | Gly | G |
Histidina | His | H |
Isoleucina | Ile | I |
Leucina | Leu | L |
Lisina | Lys | K |
Metionina | Met | M |
Fenilalanina | Phe | F |
Prolina | Pro | P |
Serina | Ser | S |
Treonina | Thr | T |
Triptófano | Trp | W |
Tirosina | Tyr | Y |
Valina | Val | V |
Los presentes derivados de C34 pueden
administrarse in vivo de modo que la conjugación con otros
componentes sanguíneos ocurra in vivo, o pueden conjugarse
primero con componentes sanguíneos in vitro y el derivado
conjugado resultante ser administrado in vivo.
La presente invención se aprovecha de las
propiedades de los péptidos antivirales y antifusogénicos
existentes. Los virus que pueden ser inhibidos por los péptidos
incluyen, sin limitarse a, todas las cepas de virus enumeradas, por
ejemplo, en US 6.013.263 y US 6.017.536 en las Tablas
V-VII y IX-XIV. Estos virus
incluyen, por ejemplo, retrovirus humanos, incluidos
VIH-1, VIH-2 y virus del
linfocito-T humano (HTLV-1 y
HTLV-II), y retrovirus no humanos, incluidos el
virus de la leucosis bovina, el virus del sarcoma felino, el virus
de la leucemia felina, el virus de la inmunodeficiencia del simio
(VIS), el virus del sarcoma del simio, la leucemia del simio y el
virus de la neumonía progresiva de la oveja. Los virus no
retrovirales también pueden ser inhibidos por los presentes
derivados de C34, incluidos el virus sincitial respiratorio humano
(VSR), el virus del moquillo canino, el virus de la Enfermedad de
Newcastle, el virus de parainfluenza humana (VPIH), los virus de la
gripe, los virus del sarampión (MV), los virus de
Epstein-Barr, los virus de la hepatitis B y los
virus de Mason-Pfizer del simio. Los virus no
envueltos también pueden ser inhibidos por los presentes derivados
de C34 e incluyen, sin limitarse a, picornavirus como los virus del
pollo, el virus de la hepatitis A, enterovirus, ecovirus, virus
Coxsackie, papovavirus como el virus del papiloma,
parvovirus, adenovirus y reovirus.
El objetivo de la presente invención consiste en
modificar la secuencia del péptido C34 para conferirle una
biodisponibilidad mejorada, una mayor vida media y una mejor
distribución mediante la conjugación selectiva del péptido sobre un
vehículo proteínico y sin básicamente modificar las propiedades
antivirales del péptido. El vehículo preferente (sin limitarse a
éste) para esta invención sería la albúmina conjugada a través de
su tiol libre.
Los presentes derivados de C34 están concebidos
para reaccionar de forma específica con los grupos tiol de proteínas
sanguíneas móviles. Tal reacción se establece mediante un enlace
covalente del péptido modificado con un enlace maleimida a un grupo
tiol de una proteína sanguínea móvil tal como una seroalbúmina o una
IgG.
Al ser los grupos tiol menos abundantes in
vivo que, por ejemplo, los grupos amino, el péptido C34
modificado con maleimida de la presente invención se enlazará de
forma covalente a unas pocas proteínas. Por ejemplo, en la albúmina
(la proteína más abundante en la sangre) existe solamente un único
grupo tiol. Por tanto, un conjugado
C34-maleimida-albúmina tenderá a
comprender aproximadamente una relación molar 1:1 del péptido C34
con respecto a la albúmina. Además de la albúmina, las moléculas de
IgG (clase II) poseen también tioles libres. Como las moléculas de
IgG y la seroalbúmina constituyen la mayoría de las proteínas
solubles en sangre, constituyen también la mayoría de los grupos
tiol libres disponibles en la sangre para enlazarse de forma
covalente al derivado del péptido C34.
Además, incluso entre las proteínas sanguíneas
que contienen tioles libre, incluidas las IgGs, el marcaje
específico con una maleimida conduce a la formación preferente de un
conjugado C34-maleimida-albúmina
debido a las características únicas de la albúmina misma. El único
grupo tiol libre de la albúmina, muy preservado entre las especies,
se encuentra en el residuo aminoácido 34 (Cys^{34}). Se ha
demostrado recientemente que el Cys^{34} de la albúmina ha
incrementado la reactividad relativa frente a tioles libres en otras
proteínas que contienen tioles libres. Esto se debe, en parte, al
muy bajo pK de 5,5 para el Cys^{34} de la albúmina. Éste es mucho
más bajo que los valores pK típicos para los residuos de cisteína en
general, que oscilan típicamente alrededor de 8. Debido a este bajo
pK, en condiciones fisiológicas normales el Cys^{34} de la
albúmina se encuentra predominantemente en forma ionizada, lo que
incrementa dramáticamente su reactividad. Además del bajo valor pK
del Cys^{34}, otro factor que aumenta la reactividad del
Cys^{34} es su emplazamiento, en un bolsillo hidrofóbico cerca de
la superficie de un bucle de la región V de la albúmina. Este
emplazamiento hace que el Cys^{34} esté disponible para los
ligantes de todo tipo y es un factor importante en el papel
biológico del Cys^{34} como captador de radicales libres y
eliminador de tioles libres. Estas propiedades convierten el
Cys^{34} en muy reactivo frente a la
maleimida-C34, y la aceleración de la velocidad de
reacción puede multiplicarse por 1.000 con respecto a las
velocidades de reacción de la maleimida-C34 con
otras proteínas que contienen tioles libres.
Otra ventaja de los conjugados
C34-maleimida-albúmina consiste en
la reproducibilidad asociada a la carga al 1:1 del C34 con respecto
a la albúmina, en particular en el Cys^{34}. Otras técnicas, como
la del glutaraldehído, DCC, EDC y demás activaciones químicas, por
ejemplo de aminas libres, carecen de esta selectividad. Por ejemplo,
la albúmina contiene 52 residuos de lisina de los cuales
25-30 se encuentran en la superficie de la albúmina
y por tanto están accesibles para la conjugación. La activación de
estos residuos de lisina, o como alternativa la modificación del
C34 para asociarse a través de estos residuos de lisina, resulta en
una población heterogénea de conjugados. Incluso si se emplean
relaciones molares 1:1 de C34 con respecto a la albúmina, el
rendimiento se compondrá de múltiples productos de conjugación,
conteniendo algunos 0, 1, 2 o más C34 por albúmina, y teniendo cada
uno un C34 acoplado al azar a uno o más de los 25-30
sitios de lisina disponibles. Dadas las numerosas combinaciones
posibles, la caracterización de la composición y naturaleza exactas
de cada conjunto de conjugados es difícil, y la reproducibilidad
lote a lote es casi imposible, convirtiendo estos conjugados en
menos deseables en la terapéutica. Además, aunque parezca que la
conjugación a través de los residuos de lisina de la albúmina tiene
al menos la ventaja de suministrar más agente terapéutico por
molécula de albúmina, los estudios han mostrado que es preferente
una relación 1:1 de agente terapéutico con respecto a la albúmina.
En el artículo de Stehle y col., "The Loading Rate Determines
Tumor Targeting properties of Methotrexate-Albumin
Conjugates in Rats", Anti-Cancer Drugs,
Vol. 8, pp. 677-685 (1988), incorporado aquí en su
totalidad, los autores informan que una relación 1:1 de metotrexato
anticanceroso con respecto a la albúmina conjugados a través de
glutaraldehído daban los resultados más alentadores. Estos
conjugados fueron recogidos preferentemente por las células
tumorales, mientras que los conjugados que llevaban moléculas de
metotrexato al 5:1 hasta 20:1 habían alterado los perfiles de HPLC y
fueron recogidos rápidamente por el hígado in vivo. Se
postula que, a estas proporciones más altas, los cambios
conformacionales de la albúmina disminuyen su efectividad como
vehículo terapéutico.
Mediante la administración controlada de los
presentes derivados de C34 in vivo se puede controlar el
marcaje específico de albúmina e IgG in vivo. En las
administraciones usuales, el 80-90% de los derivados
de C34 administrados marcarán albúmina y menos del 5% marcará IgG.
También se producirán trazas de marcaje de tioles libres como el
glutatión. Se prefiere este marcaje específico para su utilización
in vivo ya que permite un cálculo exacto de la vida media
estimada del C34.
Además de proporcionar un marcaje controlado
específico in vivo, los presentes derivados del C34 pueden
proporcionar un marcaje específico de la seroalbúmina e IgG ex
vivo. Tal marcaje ex vivo implica la adición de
derivados de C34 a la sangre, al suero o a una solución salina que
contenga seroalbúmina y/o IgG. Una vez haya tenido lugar la
conjugación ex vivo con el derivado de C34, se puede
readministrar el suero o la solución salina a la sangre del paciente
para un tratamiento in vivo, o un liofilizado.
Los presentes derivados de C34 pueden
sintetizarse mediante métodos estándar de la química de los péptidos
en fase sólida bien conocidos por cualquier especialista en la
técnica. Por ejemplo, el péptido puede sintetizarse mediante las
técnicas químicas en fase sólida siguiendo los procedimientos
descritos por Steward y col. en Solid Phase Peptide
Synthesis, 2ª Ed., Pierce Chemical Company, Rockford, III.,
(1984), utilizando un sintetizador Rainin PTI Symphony. De forma
similar, los fragmentos de péptidos pueden sintetizarse y
posteriormente combinarse o enlazarse conjuntamente para formar la
secuencia de péptidos C34 (condensación de segmentos).
Para la síntesis en fase sólida de los péptidos
se puede encontrar un resumen de las numerosas técnicas en Stewart y
col., en "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman
Co. (San Francisco), 1963, y Meienhofer, Hormonal Proteins and
Peptides, 1973, 2 46. Para la síntesis clásica en
solución, véase por ejemplo Schroder y col., "The
Peptides", volumen 1, Academic Press (New York). En general,
tales métodos comprenden la adición secuencial de uno o más
aminoácidos o de unos aminoácidos apropiadamente protegidos a una
cadena en crecimiento de péptidos en un polímero. Normalmente, tanto
el grupo amino como el carboxilo del primer aminoácido está
protegido con un grupo protector adecuado. Entonces el aminoácido
protegido y/o derivado se fija a un soporte sólido inerte o se
utiliza en solución añadiendo el aminoácido siguiente en la
secuencia que tiene el grupo complementario (amino o carboxilo)
apropiadamente protegido y en las condiciones adecuadas para la
formación del enlace amida. Se elimina entonces el grupo protector
de este residuo aminoácido recién añadido y se añade el siguiente
aminoácido (adecuadamente protegido), y así sucesivamente.
Después de que todos los aminoácidos deseados
hayan sido enlazados en la secuencia apropiada, cualquier grupo
protector remanente (y cualquier soporte sólido) se escindirá
secuencial o simultáneamente para proporcionar el péptido final. Por
simple modificación de este procedimiento general, es posible añadir
más de un aminoácido a la vez a una cadena creciente, por ejemplo,
por acoplamiento (en condiciones que no racemicen los centros
quirales) de un tripéptido protegido con un dipéptido apropiadamente
protegido para formar, después de desprotección, un
pentapéptido.
Un método particularmente preferente para
preparar los presentes derivados de C34 implica la síntesis en fase
sólida de los péptidos donde el aminoácido
\alpha-N-terminal está protegido
por un grupo ácido o básico sensible. Estos grupos protectores
deberían tener la propiedad de ser estables en las condiciones de
formación de enlaces de péptidos al mismo tiempo que han de ser
fácilmente eliminables sin destruir la cadena en crecimiento de
péptidos o sin racemizar cualquiera de los centros quirales
contenidos en ellos. Ejemplos de grupos N-protectores y
grupos protectores carboxilo se describen en Green, "Protective
Groups in Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York
pp. 152-186 (1981)), incorporado aquí como
referencia. Ejemplos de grupos N-protectores comprenden, sin
limitación, grupos alcanoilo inferiores como formilo, acetilo
("Ac"), propionilo, pivaloilo, t-butilacetilo y
similares; otros grupos acilo incluyen
2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo,
trifluoroacetilo, tricloroacetilo, ftalilo,
o-nitrofenoxiacetilo, clorobutirilo, benzoilo,
4-clorobenzoilo, 4-bromobenzoilo,
4-nitrobenzoilo y similares; grupos sulfonilo como
bencenosulfonilo, p-toluensulfonilo,
o-nitrofenilsulfonilo,
2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo
(pmc), y similares; grupos formadores de carbamato como
t-amiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo,
p-clorobenciloxicarbonilo,
p-metoxibenciloxicarbonilo, p-nitrobenciloxicarbonilo,
2-nitrobenciloxicarbonilo,
p-bromobenciloxicarbonilo,
3,4-dimetoxibenciloxicarbonilo,
3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo,
2,4-dimetoxibenciloxicarbonilo,
4-etoxibenciloxicarbonilo,
2-nitro-4,5-dimetoxibenciloxicarbonilo,
3,4,5-trimetoxibenciloxicarbonilo,
1-(p-bifenililo)-1-metiletoxicarbonilo,
\alpha,\alpha-dimetilo-3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo,
bencihidriloxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo (boc),
diisopropilmetoxicarbonilo, isopropiloxicarbonilo, etoxicarbonilo,
metoxicarbonilo, aliloxicarbonilo,
2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, fenoxicarbonilo,
4-nitrofenoxicarbonilo,
fluorenil-9-metoxicarbonilo,
isoborniloxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo,
adamantiloxicarbonilo, ciclohexiloxicarbonilo, feniltiocarbonilo y
similares; grupos arilalquilo como bencilo,
bifenilisopropiloxicarbonilo, trifenilmetilo, benciloximetilo,
9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc) y similares y
grupos sililo como trimetilsililo y similares. Los grupos
\alpha-N-protectores preferentes son
o-nitrofenilsulfonilo;
9-fluorenilmetiloxicarbonilo;
t-butiloxicarbonilo (boc), isoborniloxicarbonilo;
3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo;
t-amiloxicarbonilo;
2-ciano-t-butiloxicarbonilo
y similares, siendo el 9-fluorenilmetiloxicarbonilo
(Fmoc) aún más preferente; mientras que los grupos
N-protectores de cadena lateral comprenden el
2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo
(pmc), nitro, p-toluensulfonilo,
4-metoxibencenosulfonilo, Cbz, Boc y
adamantiloxicarbonilo para los grupos amino de cadena lateral como
en lisina y arginina; bencilo, o-bromobenciloxicarbonilo,
2,6-diclorobencilo, isopropilo,
t-butilo (t-Bu), ciclohexilo,
ciclopentilo y acetilo (Ac) para tirosina;
t-butilo, bencilo y tetrahidropiranilo para serina;
tritilo, bencilo, Cbz, p-toluensulfonilo y
2,4-dinitrofenilo para histidina; formilo para
triptófano; bencilo y t-butilo para ácido aspártico
y ácido glutámico; y trifenilmetilo (tritilo) para cisteína.
El grupo protector carboxilo se refiere
convencionalmente a un éster protector de ácido carboxílico o grupo
amida. Estos grupos protectores carboxilo son bien conocidos por los
especialistas en la técnica, habiéndose utilizado ampliamente en la
protección de grupos carboxilo en referencia a las penicilinas y
cefalosporinas tal como se describe en US-3.840.556
y US-3.719.667, cuyos descubrimientos se incorporan
aquí como referencia. Grupos protectores carboxilo representativos
comprenden, sin limitación, alquilos inferiores de 1 a 8 carbonos;
arilalquilo como fenetilo o bencilo y sus derivados sustituidos como
grupos alcoxibencilo o nitrobencilo; arilalquenilo como
feniletenilo; arilo y sus derivados sustituidos tales como
5-indanilo; dialquilaminoalquilo como
dimetilaminoetilo; grupos alcanoiloxialquilo como acetoximetilo,
butiriloximetilo, valeriloximetilo, isobutiriloximetilo,
isovaleriloximetilo,
1-(propioniloxi)-1-etilo,
1-(pivaloiloxil)-1-etilo,
1-metil-1-(propioniloxi)-1-etilo,
pivaloiloximetilo, propioniloximetilo; grupos
cicloalcanoiloxialquilo como ciclopropilcarboniloximetilo,
ciclobutilcarboniloximetilo, ciclopentilcarboniloximetilo,
ciclohexilcarboniloximetilo; aroiloxialquilo como benzoiloximetilo,
benzoiloxietilo; arilalquilcarboniloxialquilo tal como
bencilcarboniloximetilo, 2-bencilcarboniloxietilo;
alcoxicarbonilalquilo o cicloalquiloxicarbonilalquilo tal como
metoxicarbonilmetilo, ciclohexiloxicarbonilmetilo,
1-metoxicarbonil-1-etilo;
alcoxicarboniloxialquilo o cicloalquiloxicarboniloxialquilo tal
como metoxicarboniloximetilo,
t-butiloxicarboniloximetilo,
1-etoxicarboniloxi-1-etilo,
1-ciclohexiloxicarboniloxi-1-etilo;
ariloxicarboniloxialquilo tal como
2-(fenoxicarboniloxi)etilo,
2-(5-indaniloxicarboniloxi)etilo;
alcoxialquilcarboniloxialquilo tal como
2-(1-metoxi-2-metilpropan-2-oiloxi)etilo;
arilalquiloxicarboniloxialquilo tal como
2-(benciloxicarboniloxi)etilo;
arilalqueniloxicarboniloxialquilo tal como
2-(3-fenilpropen-2-iloxicarboniloxi)etilo;
alcoxicarbonilaminoalquilo tal como
t-butiloxicarbonilaminometilo;
alquilaminocarbonilaminoalquilo tal como
metilaminocarbonilaminometilo; alcanoilaminoalquilo tal como
acetilaminometilo; carboniloxialquilo heterocíclico tal como
4-metilpiperacinilcarboniloximetilo;
dialquilaminocarbonilalquilo tal como dimetilaminocarbonilmetilo,
dietilaminocarbonilmetilo; (5-(alquilo
inferior)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquilo
tal como
(5-t-butil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo;
y
(5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquilo
tal como
(5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo.
Los grupos protectores carboxiamida representativos comprenden, sin
limitación, grupos aminocarbonilo y alquilaminocarbonilo inferiores.
De los grupos protectores carboxilo anteriores, son preferentes
alquil inferior, cicloalquil o arilalquil ésteres, por ejemplo,
metil éster, etil éster, propil éster, isopropil éster, butil éster,
sec-butil éster, isobutil éster, amil éster,
isoamil éster, octil éster, ciclohexil éster, feniletil éster y
similares o un alcanoiloxialquil, cicloalcanoiloxialquil,
aroiloxialquil o arilalquilcarboniloxialquilo éster. Los grupos
protectores carboxiamida preferentes son los grupos
alquilaminocarbonilo inferiores.
En el método de síntesis en fase sólida de los
péptidos, el aminoácido
\alpha-C-terminal se fija a un
soporte sólido adecuado o resina. Los soportes sólidos adecuados
útiles para la síntesis anterior son aquellos materiales inertes a
los reactivos y condiciones de reacción de las reacciones
escalonadas de condensación-desprotección, así como
insolubles en los medios utilizados. El soporte sólido preferente
para la síntesis de los péptidos carboxi
\alpha-C-terminales es la resina
4-hidroximetilfenoxiacetil-4'-metilbencihidrilamina
(resina HMP). El soporte sólido preferente para los péptidos amida
\alpha-C-terminales es una resina
Ramage protegida por Fmoc, fabricada y vendida por Bachem Inc.,
Cali-
fornia.
fornia.
Al final de la síntesis en fase sólida, el
péptido es retirado de la resina y desprotegido, bien en operaciones
sucesivas o en una única operación. La retirada del péptido y su
desprotección pueden realizarse convencionalmente en una única
operación mediante tratamiento del polipéptido ligado a la resina
con un reactivo de disociación que comprende tioanisol,
triisopropilsilano, fenol y ácido trifluoroacético. En los casos en
los cuales el \alpha-C-terminal
del péptido es una alquilamida, la resina se disocia por aminolisis
con una alquilamina. Como alternativa, el péptido puede retirarse
por transesterificación, por ejemplo con metanol, seguido de
aminolisis o mediante transamidación directa. El péptido protegido
puede purificarse en este punto o llevarse directamente al paso
siguiente. La eliminación de los grupos protectores de cadena
lateral se lleva a cabo utilizando la mezcla de disociación descrita
anteriormente. El péptido totalmente desprotegido puede ser
purificado en una secuencia de pasos cromatográficos empleando todos
o cualquiera de los siguientes tipos: intercambio iónico en una
resina ligeramente básica (forma de acetato); cromatografía de
adsorción hidrofóbica sobre
poliestireno-divinilbenceno
no-derivatizado (tal como Amberlite XAD^{TM});
cromatografía de adsorción en gel de sílice; cromatografía de
intercambio iónico sobre carboximetilcelulosa; cromatografía de
partición, por ejemplo sobre Sephadex G-25^{TM},
LH-20^{TM} o distribución en contracorriente;
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), especialmente HPLC
de fase inversa sobre relleno de columna de fase enlazada sílice-
octilo- o fenilo/hexilsililo. Cualquier experto en la técnica será
capaz de determinar fácilmente cuáles serían los pasos
cromatográficos preferentes o las secuencias necesarias para obtener
una purificación aceptable del péptido
C34.
C34.
Los pesos moleculares de estos péptidos se
determinan mediante espectroscopía de masas con
electropulverización.
Los presentes derivados de C34 pueden utilizarse
bien solos o en combinación para optimizar sus efectos terapéuticos.
Pueden administrarse en un medio fisiológicamente aceptable, por
ejemplo agua desionizada, una solución de amortiguación fosfato
(PBS), solución salina, etanol acuoso u otro alcohol acuoso,
plasma, soluciones proteicas, manitol, glucosa acuosa, alcohol,
aceite vegetal, o similares. Otros aditivos que se pueden incluir
comprenden los amortiguadores, donde los medios son generalmente
amortiguados a un pH en el rango de aproximadamente 5 a 10, donde la
concentración de amortiguador oscilará generalmente entre
aproximadamente 50 y 250 mM, sales, donde la concentración de sal
oscilará generalmente entre aproximadamente 5 y 500 mM,
estabilizadores fisiológicamente aceptables y similares. Las
composiciones pueden ser liofilizadas para su conveniente
almacenamiento y transporte.
Los derivados de C34 pueden ser administrados por
vía parenteral, por ejemplo intravascular (IV), intraarterial (IA),
intramuscular (IM), subcutánea (SC), o similares. La administración
puede realizarse, si es lo apropiado, por transfusión. En algunos
casos, cuando la reacción del grupo funcional es relativamente
lenta, la administración puede ser oral, nasal, rectal,
transdérmica o por aerosol si la naturaleza del conjugado permite su
transferencia al sistema vascular. Normalmente se empleará una sola
inyección aunque se pueda utilizar más de una, si se desea. El
derivado de péptido puede administrarse por cualquier medio
conveniente, incluyendo jeringuillas, trocar, catéter o similares.
La forma particular de administración variará según la cantidad que
se deba administrar, si se trata de un único bolo o de una
administración continua, o similares. Preferentemente, la
administración será intravascular, el lugar de introducción no es
crítico para esta invención, preferentemente en un punto donde el
flujo sanguíneo sea rápido, por ejemplo, intravenosamente, por vena
periférica o central. Otras vías pueden emplearse si la
administración está asociada con técnicas de liberación retardada o
a una matriz protectora. La intención es que el derivado de C34 se
distribuya eficazmente en la sangre, de modo que pueda reaccionar
con los componentes de la misma. La concentración del conjugado
variará ampliamente y oscilará generalmente entre aproximadamente 1
pg/ml y 50 mg/ml. La totalidad administrada intravascularmente se
encontrará generalmente en el rango de aproximadamente 0,1 mg/ml a
aproximadamente 10 mg/ml, de forma más habitual entre
aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 5 mg/ml.
Al unirse a los componentes de larga vida en la
sangre, como inmunoglobulina, seroalbúmina, glóbulos rojos y
plaquetas, surgen cantidad de ventajas. La actividad de los
derivados de C34 se prolonga de días a semanas. Durante este período
de tiempo sólo se necesita una única administración. Se puede lograr
una mayor especificidad, ya que el compuesto activo estará enlazado
principalmente a moléculas grandes, donde es menos probable que sea
recogido intracelularmente para interferir en otros procesos
fisiológicos.
La formación del enlace covalente con el
componente sanguíneo puede ocurrir in vivo o ex vivo.
Para la formación del enlace covalente ex vivo, el derivado
de C34 se añade al suero sanguíneo o a una solución salina que
contiene componentes sanguíneos purificados como seroalbúmina humana
o IgG, para permitir la formación del enlace covalente
entre el derivado y el componente de la sangre. Según una forma preferente, el derivado de C34 se somete a reacción con seroalbúmina humana en una solución salina. Después de la formación del conjugado, éste último puede ser administrado al sujeto o ser liofilizado.
entre el derivado y el componente de la sangre. Según una forma preferente, el derivado de C34 se somete a reacción con seroalbúmina humana en una solución salina. Después de la formación del conjugado, éste último puede ser administrado al sujeto o ser liofilizado.
Se puede comprobar la actividad del péptido C34
y/o la presencia de derivados de C34 en la sangre del huésped
mamífero. Si se toma una muestra de sangre del huésped en distintos
momentos, se puede determinar si el péptido C34 se ha enlazado a los
componentes sanguíneos de larga duración en una cantidad suficiente
para ser terapéuticamente activo y, a continuación, se puede
determinar el nivel de C34 en sangre. Si se desea, también puede
determinarse a cual de los componentes sanguíneos se ha enlazado de
forma covalente el C34. La comprobación puede realizarse también
utilizando ensayos de actividad de C34, HPLC-MS o
anticuerpos dirigidos al C34.
Los ejemplos siguientes ilustran las
realizaciones preferentes de la invención y no se interpretarán de
ninguna manera como limitativos del alcance de la misma.
Los presentes derivados de C34 pueden
administrarse a pacientes de acuerdo con los métodos descritos a
continuación y demás métodos conocidos en la técnica. Las
dosificaciones terapéuticas efectivas de los presentes derivados de
C34 pueden determinarse mediante procedimientos bien conocidos por
los especialistas y éstos tendrán en cuenta cualquier en relación a
la posible toxicidad del C34.
El presente derivado de C34 puede ser
administrado también profilácticamente a individuos anteriormente no
infectados. Esto puede resultar ventajoso en aquellos casos donde un
individuo ha sido sometido a un gran riesgo de exposición a un
virus, como puede ocurrir cuando el individuo ha estado en contacto
con un individuo infectado con gran riesgo de transmisión viral.
Esto puede resultar especialmente ventajoso cuando existe una cura
conocida para el virus, como el virus VIH. Como ejemplo, la
administración profiláctica de un derivado de C34 sería ventajosa en
una situación en la cual un trabajador sanitario ha estado expuesto
a sangre procedente de un individuo infectado por VIH, o en otras
situaciones en las cuales un individuo dedicado a actividades de
alto riesgo hace que éste esté potencialmente expuesto al virus
VIH.
Al haber sido totalmente descrita, la invención
además puede ser valorada y entendida con referencia a los
siguientes ejemplos no limitativos.
Salvo que se indique de otra manera, la síntesis
de cada derivado de C34 ha sido realizada utilizando un
procedimiento automatizado en fase sólida en un Sintetizador de
Péptidos Symphony con intervención manual durante la generación del
derivado. La síntesis se realizó en una resina enlazante amida
Ramage protegida por Fmoc, utilizando aminoácidos protegidos por
Fmoc. El acoplamiento se realizó utilizando hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) como activador en solución de
N,N-dimetilformamida (DMF) y diisopropiletilamina
(DIEA) como base. El grupo protector Fmoc se eliminó mediante un
20% de piperidina/DMF. Cuando resultó necesario, se utilizó un
aminoácido protegido por Boc en N-terminal con el
fin de generar el N_{\alpha }-terminal libre
después de que el péptido se hubiera disociado de la resina. Todos
los aminoácidos utilizados durante la síntesis poseen la
estereoquímica L. Durante la síntesis, se utilizaron recipientes de
reacción de vidrio.
Compuesto de Fórmula
I
Paso
1
El ejemplo describe la síntesis del péptido en
fase sólida del compuesto a una escala de 100 \mumol. Se añadieron
secuencialmente a la resina los siguientes aminoácidos protegidos:
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Lys(Aloc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Thr(tBu)-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Arg(Pbf)-OH,
Fmoc-Asp(tBu)-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Met-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se
disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de
acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',
N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo protector Fmoc se realizó mediante una solución al 20% (v/v) de piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20 minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado con ácido acético activado mediante hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo protector Fmoc se realizó mediante una solución al 20% (v/v) de piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20 minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado con ácido acético activado mediante hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
Paso
2
La desprotección selectiva del grupo
Lys(Aloc) se realizó manualmente y se llevó a cabo tratando
la resina con una solución de 3 eq de
Pd(PPh_{3})_{4} disueltos en 5 ml de
C_{6}H_{6}-CHCl_{3} (1:1):2,5% NMM (v:v):5%
AcOH (v:v) durante 2 h (Paso 2). La resina se lavó entonces con
CHCl_{3} (6 x 5 ml), con AcOH al 20% en DCM (6 x 5 ml), DCM (6 x
5 ml) y DMF (6 x 5 ml).
Paso
3
La síntesis se re-automatizó
entonces para la adición de
Fmoc-AEEA-OH y ácido
3-maleimidopropiónico (Paso 3). Entre cada
acoplamiento, la resina se lavó 3 veces con
N,N-dimetilformamida (DMF) y 3 veces con isopropanol
(iPr-OH).
Paso
4
El péptido se disoció de la resina mediante TFA
85% / triisopropilsilano 5% (TIPS) / tioanisol 5% y fenol 5%,
seguido de precipitación por Et_{2}O helado en frío seco (Paso
4).
Compuesto de Fórmula
II
Paso
1
El ejemplo describe la síntesis del péptido en
fase sólida del compuesto a una escala de 100 \mumol. Se añadieron
secuencialmente a la resina los siguientes aminoácidos protegidos:
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Lys(Boc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Lys(Aloc)-OH,
Fmoc-Thr(tBu)-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Arg(Pbf)-OH,
Fmoc-Asp(tBu)-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Met-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se
disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de
acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',
N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo protector Fmoc se realizó utilizando una solución al 20% (v/v) de piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20 minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado con ácido acético activado por hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo protector Fmoc se realizó utilizando una solución al 20% (v/v) de piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20 minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado con ácido acético activado por hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
Paso
2
La desprotección selectiva del grupo
Lys(Aloc) se realizó manualmente y se llevó a cabo mediante
tratamiento de la resina con una solución de 3 eq de Pd
(PPh_{3})_{4} disueltos en 5 ml de
C_{6}H_{6}-CHCl_{3} (1:1):2,5% NMM (v:v):5%
AcOH (v:v) durante 2 h (Paso 2). La resina se lavó entonces con
CHCl_{3} (6 x 5 ml), AcOH al 20% en DCM (6 x 5 ml), DCM (6 x 5
ml) y DMF (6 x 5 ml).
Paso
3
La síntesis se re-automatizó
entonces para la adición de
Fmoc-AEEA-OH y ácido
3-maleimidopropiónico (Paso 3). Entre cada
acoplamiento, la resina se lavó 3 veces con
N,N-dimetilformamida (DMF) y 3 veces con isopropanol
(iPrOH).
Paso
4
El péptido se disoció de la resina mediante 85%
TFA / 5% TIS / 5% tioanisol y 5% fenol, seguido de precipitación con
Et_{2}O helado en frío seco (Paso 4).
Compuesto de Fórmula
III
Paso
1
El ejemplo describe la síntesis del péptido en
fase sólida del compuesto a una escala de 100 \mumol. Se añadieron
secuencialmente a la resina los siguientes aminoácidos protegidos:
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Thr(tBu)-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Lys(Aloc)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Arg(Pbf)-OH,
Fmoc-Asp(tBu)-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Met-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se
disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de
acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo
protector Fmoc se realizó utilizando una solución al 20% (v/v) de
piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20
minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado
con ácido acético activado por hexaflourofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
\newpage
Paso
2
La desprotección selectiva del grupo
Lys(Aloc) se realizó manualmente y se llevó a cabo mediante
tratamiento de la resina con una solución de 3 eq de Pd
(PPh_{3})_{4} disueltos en 5 ml de
C_{6}H_{6}-CHCl_{3} (1:1):2,5% NMM (v:v):5%
AcOH (v:v) durante 2 h (Paso 2). La resina se lavó entonces con
CHCl_{3} (6 x 5 ml), AcOH al 20% en DCM (6 x 5 ml), DCM (6 x 5
ml) y DMF (6 x 5 ml).
Paso
3
La síntesis se re-automatizó
entonces para la adición de
Fmoc-AEEA-OH y ácido
3-maleimidopropiónico (Paso 3). Entre cada
acoplamiento, la resina se lavó 3 veces con
N,N-dimetilformamida (DMF) y 3 veces con isopropanol
(iPrOH).
Paso
4
El péptido se disoció de la resina mediante 85%
TFA / 5% TIS / 5% tioanisol y 5% fenol, seguido de precipitación con
Et_{2}O helado en frío seco (Paso 4).
Compuesto de Fórmula
IV
Paso
1
El ejemplo describe la síntesis del péptido en
fase sólida del compuesto a una escala de 100 \mumol. Se añadieron
secuencialmente a la resina los siguientes aminoácidos protegidos:
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Thr(tBu)-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Lys(Aloc)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Arg(Pbf)-OH,
Fmoc-Asp(tBu)-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Met-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se
disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de
acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo
protector Fmoc se realizó utilizando una solución al 20% (v/v) de
piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20
minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado
con ácido acético activado por hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
Paso
2
La desprotección selectiva del grupo
Lys(Aloc) se realizó manualmente y se llevó a cabo mediante
tratamiento de la resina con una solución de 3 eq de Pd
(PPh_{3})_{4} disueltos en 5 ml de
C_{6}H_{6}-CHCl_{3} (1:1):2,5% NMM (v:v):5%
AcOH (v:v) durante 2 h (Paso 2). La resina se lavó entonces con
CHCl_{3} (6 x 5 ml), AcOH al 20% en DCM (6 x 5 ml), DCM (6 x 5
mL) y DMF (6 x 5 ml).
Paso
3
La síntesis se re-automatizó
entonces para la adición de
Fmoc-AEEA-OH y ácido
3-maleimidopropiónico (Paso 3). Entre cada
acoplamiento, la resina se lavó 3 veces con
N,N-dimetilformamida (DMF) y 3 veces con isopropanol
(iPrOH).
Paso
4
El péptido se disoció de la resina utilizando 85%
TFA / 5% TIS / 5% tioanisol y 5% fenol, seguido de precipitación con
Et_{2}O helado en frío seco (Paso 4).
Compuesto de Fórmula
V
Paso
1
El ejemplo describe la síntesis del péptido en
fase sólida del compuesto a una escala de 100 \mumol. Se añadieron
secuencialmente a la resina los siguientes aminoácidos protegidos:
Fmoc-Lys(Aloc)-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Thr(tBu)-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Arg
(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo protector Fmoc se realizó utilizando una solución al 20% (v/v) de piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20 minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado con ácido acético activado por hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
(Pbf)-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo protector Fmoc se realizó utilizando una solución al 20% (v/v) de piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20 minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado con ácido acético activado por hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
Paso
2
La desprotección selectiva del grupo
Lys(Aloc) se realizó manualmente y se llevó a cabo mediante
tratamiento de la resina con una solución de 3 eq de Pd
(PPh_{3})_{4} disueltos en 5 ml de
C_{6}H_{6}-CHCl_{3} (1:1): 2,5% NMM (v:v):5%
AcOH (v:v) durante 2 h (Paso 2). La resina se lavó entonces con
CHCl_{3} (6 x 5 ml), AcOH al 20% en DCM (6 x 5 ml), DCM (6 x 5
ml) y DMF (6 x 5 ml).
Paso
3
La síntesis se re-automatizó
entonces para la adición de ácido
3-maleimidopropiónico (Paso 3). Entre cada
acoplamiento, la resina se lavó 3 veces con
N,N-dimetilformamida (DMF) y 3 veces con isopropanol
(iPrOH).
Paso
4
El péptido se disoció de la resina mediante 85%
TFA / 5% TIS / 5% tioanisol y 5% fenol, seguido de precipitación con
Et_{2}O helado en frío seco (Paso 4).
Compuesto de Fórmula
VI
Paso
1
El ejemplo describe la síntesis del péptido en
fase sólida del compuesto a una escala de 100 \mumol. Se añadieron
secuencialmente a la resina los siguientes aminoácidos protegidos:
Fmoc-Lys(Aloc)-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Ser(tBu)-OH,
Fmoc-Thr(tBu)-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Asn(Trt)-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Arg(Pbf)-OH,
Fmoc-Asp(tBu)-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH,
Fmoc-Glu(tBu)-OH,
Fmoc-Met-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH. Se
disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) y, de
acuerdo con la secuencia, se activaron con hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA). La eliminación del grupo
protector Fmoc se realizó mediante una solución al 20% (v/v) de
piperidina en N,N-dimetilformamida (DMF) durante 20
minutos (paso 1). El grupo amino del aminoácido final fue acetilado
con ácido acético activado por hexafluorofosfato de
O-benzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametil-uronio
(HBTU) y diisopropiletilamina (DIEA).
Paso
2
La desprotección selectiva del grupo
Lys(Aloc) se realizó manualmente y se llevó a cabo mediante
tratamiento de la resina con una solución de 3 eq de
Pd(PPh_{3})_{4} disueltos en 5 ml de
C_{6}H_{6}-CHCl_{3} (1:1):2,5% NMM (v:v):5% de
AcOH (v:v) durante 2 h (Paso 2). La resina se lavó entonces con
CHCl_{3} (6 x 5 ml), AcOH al 20% en DCM (6 x 5 ml), DCM (6 x 5
ml) y DMF (6 x 5 ml).
Paso
3
La síntesis se re-automatizó
entonces para la adición de
Fmoc-AEEA-OH y ácido
3-maleimidopropiónico (Paso 3). Entre cada
acoplamiento, la resina se lavó 3 veces con
N,N-dimetilformamida (DMF) y 3 veces con isopropanol
(iPrOH).
Paso
4
El péptido se disoció de la resina mediante 85%
TFA / 5% TIS / 5% tioanisol y 5% fenol, seguido de precipitación con
Et_{2}O helado en frío seco (Paso 4).
Se determinó la actividad antiviral tal como se
describe en Journal of Virological Methods, 1988, 20,
309-321. Brevemente, se introdujeron varias
concentraciones del compuesto de prueba en cada pocillo de una placa
de microtitulación de fondo plano. Posteriormente, se añadió una
cepa de VIH (VIH-1 IIIB) y células
MT-4 a una concentración final de 200
CCID_{50}/pocillo y 30.000 células/pocillo respectivamente. Con
el fin de determinar la toxicidad del compuesto de prueba, se
incubaron paralelamente a los cultivos infectados por VIH unos
cultivos celulares simulados infectados que contenían un rango
idéntico de concentración del compuesto. A los 5 días de incubación
(37ºC, 5% de CO_{2}), se determinó la viabilidad de las células
por colorimetría con tetrazolio MTT. Los resultados de ambos
ensayos aparecen en la Tabla 2 siguiente.
Compuesto | Comentario | Ensayo antiviral IC50 (\muM) |
C34 natural | - | 0,0064 |
Fórmula I | Activado | 0,0063 |
Conjugado HSA | 0,1149 | |
Fórmula II | Activado | 0,0052 |
Conjugado HSA | 0,0200 | |
Fórmula III | Activado | 0,0077 |
Conjugado HSA | 0,0232 | |
Fórmula IV | Activado | 0,0048 |
Conjugado HSA | 0,0207 | |
Fórmula V | Activado | 0,0072 |
Conjugado HSA | 0,439 | |
Fórmula VI | Activado | 0,0047 |
Conjugado HSA | 0,0253 |
Claims (7)
1. Compuesto de Fórmulas I-VI
2. Composición farmacéutica que comprende un
compuesto según la reivindicación 1 en combinación con un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
3. Composición según la reivindicación 1, para
inhibir la actividad de VIH, VSR, VPH, MV o VIS.
4. Utilización de un compuesto según la
reivindicación 1, solo o en combinación con un vehículo
farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de un medicamento
para la inhibición de la actividad de VIH, VSR, VPH, MV o VIS.
5. Utilización de un compuesto según la
reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para la
inhibición de la actividad de VIH, VSR, VPH, MV o VIS, donde dicho
compuesto se enlaza de forma covalente a un componente de la
sangre.
6. Utilización de un compuesto según la
reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para la
inhibición de la actividad de VIH, VSR, VPH, MV o VIS, donde dicho
compuesto es capaz de enlazarse de forma covalente a un componente
de la sangre in vivo.
7. Conjugado que comprende un compuesto según la
reivindicación 1, enlazado de forma covalente a un componente de
la sangre.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29424101P | 2001-05-31 | 2001-05-31 | |
US294241P | 2001-05-31 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2242860T3 true ES2242860T3 (es) | 2005-11-16 |
Family
ID=23132509
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES04015696T Expired - Lifetime ES2277173T3 (es) | 2001-05-31 | 2002-05-31 | Inhibidores peptidos de fusion de larga vida contra infecciones por vih. |
ES02729737T Expired - Lifetime ES2242860T3 (es) | 2001-05-31 | 2002-05-31 | Inhibidores peptidicos de fusion de larga vida contra infecciones por vih. |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES04015696T Expired - Lifetime ES2277173T3 (es) | 2001-05-31 | 2002-05-31 | Inhibidores peptidos de fusion de larga vida contra infecciones por vih. |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7741453B2 (es) |
EP (1) | EP1390399B1 (es) |
JP (2) | JP4463545B2 (es) |
AT (3) | ATE345353T1 (es) |
AU (1) | AU2002302277A1 (es) |
CA (1) | CA2448891A1 (es) |
DE (3) | DE60216151T2 (es) |
DK (1) | DK1479691T3 (es) |
ES (2) | ES2277173T3 (es) |
HK (1) | HK1071379A1 (es) |
PT (1) | PT1479691E (es) |
WO (1) | WO2002096935A2 (es) |
Families Citing this family (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7601691B2 (en) | 1999-05-17 | 2009-10-13 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Anti-obesity agents |
AU761591B2 (en) | 1999-05-17 | 2003-06-05 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection |
US6887470B1 (en) | 1999-09-10 | 2005-05-03 | Conjuchem, Inc. | Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components |
US20040266673A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-12-30 | Peter Bakis | Long lasting natriuretic peptide derivatives |
US6514500B1 (en) * | 1999-10-15 | 2003-02-04 | Conjuchem, Inc. | Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!} |
EA003922B1 (ru) * | 1999-05-17 | 2003-10-30 | Конджачем, Инк. | Продолжительно действующие инсулинотропные пептиды |
US20090175821A1 (en) * | 1999-05-17 | 2009-07-09 | Bridon Dominique P | Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo |
JP4280070B2 (ja) | 2001-02-16 | 2009-06-17 | コンジュケム バイオテクノロジーズ インコーポレイテッド | 胃腸疾患および胃腸障害の処置のための長期持続性グルカゴン様ペプチド2(glp−2) |
US7741453B2 (en) | 2001-05-31 | 2010-06-22 | Conjuchem Biotechnologies, Inc. | Long lasting fusion peptide inhibitors for HIV infection |
US20070207952A1 (en) * | 2003-03-24 | 2007-09-06 | Sequoia Pharmaceuticals | Long Acting Biologically Active Conjugates |
ES2411962T3 (es) | 2003-10-24 | 2013-07-09 | Gencia Corporation | Métodos y composiciones para suministrar polinucleótidos |
US20090123468A1 (en) | 2003-10-24 | 2009-05-14 | Gencia Corporation | Transducible polypeptides for modifying metabolism |
US8133733B2 (en) | 2003-10-24 | 2012-03-13 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides to target tissues |
US8062891B2 (en) | 2003-10-24 | 2011-11-22 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides to plants |
US8507277B2 (en) | 2003-10-24 | 2013-08-13 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides |
PT2100904E (pt) * | 2004-04-23 | 2010-09-24 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Fase sólida para utilização num método para a purificação de conjugados de albumina |
CA2565658A1 (en) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Compounds for specific viral target |
US8039432B2 (en) * | 2005-11-09 | 2011-10-18 | Conjuchem, Llc | Method of treatment of diabetes and/or obesity with reduced nausea side effect |
US20070269863A1 (en) * | 2005-12-22 | 2007-11-22 | Bridon Dominique P | Process for the production of preformed conjugates of albumin and a therapeutic agent |
US20090099074A1 (en) * | 2007-01-10 | 2009-04-16 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Modulating food intake |
US20090088378A1 (en) * | 2007-01-12 | 2009-04-02 | Omar Quraishi | Long lasting inhibitors of viral infection |
WO2008144590A2 (en) * | 2007-05-16 | 2008-11-27 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting modified antifusogenic peptide for preventing hiv infection |
CA2687700A1 (en) * | 2007-05-16 | 2008-11-27 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Cysteic acid derivatives of anti-viral peptides |
GB0720503D0 (en) * | 2007-10-22 | 2007-11-28 | Angeletti P Ist Richerche Bio | New compound |
JP2011506442A (ja) * | 2007-12-11 | 2011-03-03 | コンジュケム バイオテクノロジーズ インコーポレイテッド | インスリン分泌性ペプチド結合体の製剤 |
US8815295B1 (en) | 2011-12-22 | 2014-08-26 | Alabama State University | Anti respiratory syncytial virus peptide functionalized gold nanoparticles |
MX349035B (es) | 2012-05-17 | 2017-07-07 | Extend Biosciences Inc | Portadores para el suministro mejorado de farmaco. |
JP6946182B2 (ja) | 2014-10-22 | 2021-10-06 | エクステンド バイオサイエンシズ インコーポレーテッドExtend Biosciences, Inc | 治療用ビタミンdコンジュゲート |
US9789197B2 (en) | 2014-10-22 | 2017-10-17 | Extend Biosciences, Inc. | RNAi vitamin D conjugates |
US9616109B2 (en) | 2014-10-22 | 2017-04-11 | Extend Biosciences, Inc. | Insulin vitamin D conjugates |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4652629A (en) * | 1985-07-03 | 1987-03-24 | The Salk Institute For Biological Studies | Synthetic peptide-based anti-rabies compositions and methods |
US5612034A (en) * | 1990-10-03 | 1997-03-18 | Redcell, Inc. | Super-globuling for in vivo extended lifetimes |
FR2686899B1 (fr) * | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
KR100358209B1 (ko) * | 1992-07-20 | 2003-01-24 | 듀크 유니버시티 | Hiv복제를저해하는조성물 |
GB9316895D0 (en) * | 1993-08-13 | 1993-09-29 | Guy S And St Thomas Hospitals | Hepatoselective insulin analogues |
EP0602290B1 (en) | 1992-12-04 | 1999-08-25 | ConjuChem, Inc. | Antibody-conjugated Hepatitis B surface antigen and use thereof |
US5614487A (en) * | 1993-05-28 | 1997-03-25 | Genentech, Inc. | Sustained release pharmaceutical composition |
US6017536A (en) * | 1993-06-07 | 2000-01-25 | Trimeris, Inc. | Simian immunodeficiency virus peptides with antifusogenic and antiviral activities |
US6479055B1 (en) | 1993-06-07 | 2002-11-12 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission |
US6342225B1 (en) * | 1993-08-13 | 2002-01-29 | Deutshces Wollforschungsinstitut | Pharmaceutical active conjugates |
AU3370795A (en) | 1994-08-15 | 1996-03-07 | B-Level Corp. | Auxiliary surface-forming member for construction elements |
ATE381948T1 (de) * | 1995-05-10 | 2008-01-15 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Cytotoxinkonjugate umfassend dipeptide |
US6576636B2 (en) * | 1996-05-22 | 2003-06-10 | Protarga, Inc. | Method of treating a liver disorder with fatty acid-antiviral agent conjugates |
US6150088A (en) * | 1997-04-17 | 2000-11-21 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Core structure of gp41 from the HIV envelope glycoprotein |
ATE218892T1 (de) | 1997-11-07 | 2002-06-15 | Conjuchem Inc | Affinitätsmarkierer für menschliches serum albumin |
JP2001522863A (ja) | 1997-11-07 | 2001-11-20 | コンジュケム,インコーポレーテッド | Rgd含有ペプチドおよび内因性担体の新規コンジュゲート |
US6107489A (en) * | 1998-03-17 | 2000-08-22 | Conjuchem, Inc. | Extended lifetimes in vivo renin inhibitors |
IL133053A0 (en) | 1998-03-23 | 2001-03-19 | Conjuchem Inc | Local delivery of long lasting therapeutic agents |
US6258782B1 (en) * | 1998-05-20 | 2001-07-10 | Trimeris, Inc. | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties |
US6656906B1 (en) | 1998-05-20 | 2003-12-02 | Trimeris, Inc. | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties |
US20030190740A1 (en) * | 1998-10-13 | 2003-10-09 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc | Stabilized bioactive peptides and methods of identification, synthesis, and use |
MXPA01003770A (es) * | 1998-10-13 | 2002-05-06 | Univ Georgia Res Found | Peptidos bioactivos estabilizados, y metodos de identificacion, sintesis y uso de los mismos. |
AU2604200A (en) | 1999-01-08 | 2000-07-24 | Panacos Pharmaceuticals, Inc. | Methods of eliciting broadly neutralizing antibodies targeting hiv-1 gp41 |
EP1591453A1 (en) | 1999-05-17 | 2005-11-02 | ConjuChem Inc. | Modified peptides yy and conjugates thereof |
US20090175821A1 (en) * | 1999-05-17 | 2009-07-09 | Bridon Dominique P | Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo |
EA003922B1 (ru) | 1999-05-17 | 2003-10-30 | Конджачем, Инк. | Продолжительно действующие инсулинотропные пептиды |
AU761591B2 (en) * | 1999-05-17 | 2003-06-05 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection |
AU764103B2 (en) | 1999-05-17 | 2003-08-07 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting anti-angiogenic peptides |
DE19926154A1 (de) | 1999-06-09 | 2000-12-14 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung |
DE19926475A1 (de) | 1999-06-10 | 2000-12-14 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Träger-Pharmaka-Konjugate |
WO2001017568A2 (en) | 1999-09-07 | 2001-03-15 | Conjuchem, Inc. | Bioconjugation in vivo to pulmonary or blood components |
US7090851B1 (en) * | 1999-09-10 | 2006-08-15 | Conjuchem Inc. | Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection |
EP1237912B1 (en) | 1999-12-16 | 2007-12-12 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Five-helix protein |
US7741453B2 (en) | 2001-05-31 | 2010-06-22 | Conjuchem Biotechnologies, Inc. | Long lasting fusion peptide inhibitors for HIV infection |
NZ539539A (en) | 2002-09-24 | 2006-11-30 | Frontier Biotechnologies Co | HIV gp41 c-terminal peptide derivatives that are inhibitors of viral infection and/or exhibit antifusogenic properties |
US7556813B2 (en) | 2002-09-27 | 2009-07-07 | Trimeris, Inc. | Antiviral peptide-polymer conjugate comprising a polymer covalently attached to two or more synthetic HIV gp41 HR1 and/or HR2 peptides |
MXPA05002851A (es) | 2002-09-27 | 2005-09-08 | Tanox Inc | Composiciones sinergicas para la prevencion y el tratamiento del sindrome de inmunodeficiencia adquirida. |
US20050113292A1 (en) | 2003-07-18 | 2005-05-26 | Vanderbilt University | Compositions of protein mimetics and methods of using same against HIV-1, SARS-coV and the like |
PT2100904E (pt) | 2004-04-23 | 2010-09-24 | Conjuchem Biotechnologies Inc | Fase sólida para utilização num método para a purificação de conjugados de albumina |
CA2565658A1 (en) | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Compounds for specific viral target |
US20070269863A1 (en) | 2005-12-22 | 2007-11-22 | Bridon Dominique P | Process for the production of preformed conjugates of albumin and a therapeutic agent |
-
2002
- 2002-05-31 US US10/478,811 patent/US7741453B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-05-31 CA CA002448891A patent/CA2448891A1/en not_active Abandoned
- 2002-05-31 PT PT04015696T patent/PT1479691E/pt unknown
- 2002-05-31 ES ES04015696T patent/ES2277173T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-31 AT AT04015696T patent/ATE345353T1/de active
- 2002-05-31 EP EP02729737A patent/EP1390399B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-31 AT AT06023309T patent/ATE412667T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-05-31 JP JP2003500114A patent/JP4463545B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-05-31 AU AU2002302277A patent/AU2002302277A1/en not_active Abandoned
- 2002-05-31 DK DK04015696T patent/DK1479691T3/da active
- 2002-05-31 DE DE60216151T patent/DE60216151T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-31 AT AT02729737T patent/ATE295370T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-05-31 WO PCT/CA2002/000806 patent/WO2002096935A2/en active IP Right Grant
- 2002-05-31 DE DE60204137T patent/DE60204137T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-31 DE DE60229677T patent/DE60229677D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-05-31 ES ES02729737T patent/ES2242860T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-05-17 HK HK05104106A patent/HK1071379A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-08-19 JP JP2008211236A patent/JP2008308506A/ja not_active Ceased
-
2010
- 2010-04-26 US US12/767,646 patent/US20110166061A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US7741453B2 (en) | 2010-06-22 |
DK1479691T3 (da) | 2007-03-12 |
ATE345353T1 (de) | 2006-12-15 |
WO2002096935A3 (en) | 2003-10-02 |
ATE412667T1 (de) | 2008-11-15 |
JP2008308506A (ja) | 2008-12-25 |
DE60229677D1 (de) | 2008-12-11 |
EP1390399B1 (en) | 2005-05-11 |
US20050065075A1 (en) | 2005-03-24 |
DE60216151D1 (de) | 2006-12-28 |
DE60204137T2 (de) | 2006-01-26 |
US20110166061A1 (en) | 2011-07-07 |
DE60216151T2 (de) | 2007-09-27 |
HK1071379A1 (en) | 2005-07-15 |
ES2277173T3 (es) | 2007-07-01 |
CA2448891A1 (en) | 2002-12-05 |
PT1479691E (pt) | 2007-02-28 |
WO2002096935A2 (en) | 2002-12-05 |
ATE295370T1 (de) | 2005-05-15 |
EP1390399A2 (en) | 2004-02-25 |
JP4463545B2 (ja) | 2010-05-19 |
DE60204137D1 (de) | 2005-06-16 |
AU2002302277A1 (en) | 2002-12-09 |
JP2005500274A (ja) | 2005-01-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2242860T3 (es) | Inhibidores peptidicos de fusion de larga vida contra infecciones por vih. | |
US7582301B1 (en) | Long-lasting antiviral fusion inhibitor peptide conjugates comprising albumin and human immunodeficiency virus (HIV) peptides | |
ES2209885T3 (es) | Peptidos insulinotropicos de larga duracion. | |
US20090088377A1 (en) | Cysteic acid derivatives of anti-viral peptides | |
US7090851B1 (en) | Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection | |
ES2558680T3 (es) | Inhibidores derivados de péptidos de fusión contra la infección del VIH | |
CN101289500A (zh) | 病毒感染的长效融合肽抑制剂 | |
EP1479691B1 (en) | Long lasting fusion peptide inhibitors for HIV infection | |
US20090088378A1 (en) | Long lasting inhibitors of viral infection | |
EP1752469B1 (en) | Long lasting fusion peptide inhibitors for HIV infection | |
US20120065369A1 (en) | Long lasting fusion peptide inhibitors for hiv infection |