ES2231908T3 - Cepas novedosas de lactobacilos utiles en el tratamiento de trastornos del aparato digestivo. - Google Patents

Cepas novedosas de lactobacilos utiles en el tratamiento de trastornos del aparato digestivo.

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Abstract

NUEVOS LACTOBACILLUS UTILES PARA EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS DEL APARATO DIGESTIVO, MAS ESPECIFICAMENTE CEPAS DE LACTOBACILLUS PARACASEI Y LACTOBACILLUS SALIVARIUS, EL PROCESO DE PREPARACION DE ESTOS LACTOBACILLUS, Y COMPOSICIONES FARMACEUTICAS, SUPLEMENTOS DIETETICOS Y PRODUCTOS ALIMENTARIOS QUE LOS CONTIENEN.

Description

Cepas novedosas de lactobacilos útiles en el tratamiento de trastornos del aparato digestivo.
1. Campo de la invención
La presente invención se refiere a lactobacilos novedosos útiles para tratar trastornos del aparato digestivo, más especialmente, cepas novedosas de Lactobacillus paracasei y Lactobacillus salivarius, el procedimiento de preparación de las mismas, composiciones farmacéuticas, suplementos dietéticos y productos alimenticios (por ejemplo, leche, yogur u otros productos lácteos) que los contienen.
Los lactobacilos están dispersos en la naturaleza. Numerosas especies están presentes en frutas, verduras y productos lácteos (leche fermentada, queso y yogur), mientras que sólo algunas cepas se encuentran en el tubo digestivo y las vías urogenitales de mamíferos e insectos.
Desde la antigüedad, se conoce la actividad beneficiosa de los lactobacilos en los trastornos digestivos y durante mucho tiempo han sido ingeridos con la leche y los productos lácteos.
2. Antecedentes tecnológicos
En la mayor parte de los casos, los lactobacilos conocidos administrados con la dieta o de otras formas no son capaces de atravesar el medio ácido gástrico y/o de resistir los jugos biliares, y de este modo llegar vivos y viables al lugar de acción en el intestino y desarrollar colonias lo suficientemente numerosas como para ejercer efectos terapéuticos significativos en plazos cortos.
El tratamiento de los trastornos digestivos así realizado suele requerir tiempos de administración prolongados, y con frecuencia es poco eficaz en los casos más graves y persistentes.
El documento US-5.032.399 desvela una cepa específica de Lactobacillus acidophilus recuperado de la flora intestinal normal, que ha sido denominado Lactobacillus GG y que posteriormente ha sido reclasificado como Lactobacillus casei subs. rhamnosus, al que se atribuye tener efectos beneficiosos en el tratamiento de trastornos digestivos, ser estable en ácidos y en jugos biliares y ser capaz de adherirse a las células de la mucosa intestinal humana, de producir ácido láctico y de crecer eficazmente in vitro.
Recientemente, el solicitante ha comercializado, con el nombre "Enterobacilli Proge Farm", un suplemento dietético que contiene lactobacilos recuperados de la flora intestinal, indicado para el tratamiento de trastornos del aparato digestivo. Dicho suplemento dietético, al igual que otros productos comerciales que contienen lactobacilos, debe ser almacenado a bajas temperaturas, específicamente, en un frigorífico (a +4ºC).
3. Problema que ha de resolverse
Diversas cepas de lactobacilos recuperados del ambiente intestinal, cuando se utilizan después de la selección a escala de laboratorio, se comportan como buenas colonizadoras tanto in vitro como in vivo, actuando en poco tiempo y con resultados satisfactorios.
Sin embargo, para que sean adecuadas para la comercialización a gran escala y para su uso por los consumidores, dichas cepas bacterianas deben ser sometidas a tratamientos tecnológicos (como liofilización, mezcla con excipientes, subdivisión en diferentes unidades de dosis y formulación en preparados farmacéuticos o suplementos dietéticos) que con frecuencia afectan negativamente a dichas cepas, provocando que pierdan con facilidad sus peculiares propiedades probióticas y su capacidad original de colonización.
Un problema tecnológico adicional es la escasa estabilidad para el almacenamiento de las cepas comerciales de lactobacilos, que habitualmente exige almacenamiento en frigorífico y que, en cualquier caso, pierden fácilmente gran parte de su actividad.
4. Resumen
El solicitante ha encontrado ahora de forma inesperada un procedimiento que permite seleccionar a escala industrial cepas de lactobacilos extremadamente viables y resistentes a los tratamientos tecnológicos, cuyas cepas son útiles para los tratamientos terapéuticos, profilácticos y al menos probióticos de trastornos del aparato digestivo en seres humanos, comprendiendo dicho procedimiento la incubación en un medio nutritivo de una mezcla previamente liofilizada y después rehidratada que contiene múltiples cepas de lactobacilos, y seleccionando las primeras colonias bacterianas que proliferan, que se desarrollan como muy tarde durante las primeras 12 horas, y preferentemente, durante las primeras 10 horas de incubación, en dicho medio nutritivo a una temperatura entre aproximadamente 30ºC y aproximadamente 40ºC, preferentemente a 37ºC.
La etapa de incubación de las mezclas de cepas liofilizadas se suele realizar en una placa, en un medio nutritivo al que se añade agar, preferentemente, en un medio MRS agarizado (caldo de Man Rogosa Sharpe).
La formación de las colonias se pone adecuadamente de manifiesto mediante un microscopio óptico, en particular, observando el reverso de la placa.
La mezcla que ha de liofilizarse procede de la flora bacteriana intestinal normal de un ser humano sano y, típicamente, se obtiene a partir de muestras biológicas que contienen un elevado número de especies bacterianas (por ejemplo, mucosa intestinal, heces), recuperadas del ambiente intestinal humano o de su contenido mediante técnicas convencionales.
Antes de ser sometidas al procedimiento de la presente invención, estas muestras son objeto de pretratamientos adecuados según procedimientos convencionales (por ejemplo, pretratamientos físicos como la homogenización y/o dilución en un diluyente adecuado, por ejemplo, agua).
El presente procedimiento comprende además una o más etapas de preselección por incubación en un medio nutritivo conocido selectivo para lactobacilos, en las condiciones de incubación conocidas para el desarrollo de lactobacilos, de lo que se obtienen mezclas bacterianas muy enriquecidas en lactobacilos.
Dicha etapa de preselección se lleva a cabo preferentemente antes de la liofilización, sobre la muestra biológica preferentemente pretratada como se ha descrito más arriba, para obtener mezclas bacterianas que posteriormente son sometidas a liofilización y a las restantes etapas de selección según la presente invención, efectuándose esta etapa típicamente en un medio líquido, por ejemplo, un medio MRS líquido al que opcionalmente se añaden otros nutrientes o sustancias útiles, como se especifica más adelante.
Otros objetos de la presente invención son cepas de lactobacilos y los cultivos bacterianos seleccionados a través del presente procedimiento, los preparados o formulaciones que contienen los presentes lactobacilos combinados con un vehículo aceptable farmacéuticamente o por lo menos fisiológicamente, como composiciones terapéuticas y/o profilácticas, suplementos dietéticos, dispositivos médicos, productos alimenticios.
5. Descripción detallada
El presente procedimiento permite seleccionar lactobacilos altamente viables, adecuados para su formulación a escala industrial como preparados farmacéuticos o suplementos dietéticos, que se revelaron muy eficaces y ventajosos en el tratamiento de diversos trastornos del aparato digestivo.
Según una realización de la presente invención, las mezclas de cepas bacterianas que han de ser sometidas al presente procedimiento proceden de muestras de heces humanas. Según otra realización de la presente invención, las mezclas que contienen un gran número de lactobacilos pertenecientes a la flora microbiana intestinal humana son liofilizadas, rehidratadas, incubadas en un medio nutritivo, incubando las cepas seleccionadas como se describe más arriba, y sometiéndolas posteriormente a una o más de las siguientes etapas de selección, preferentemente, a todas ellas, en cualquier orden:
a) incubación en un medio nutritivo que contiene bilis, a una concentración de al menos el 0,1% en peso por volumen, y selección de las cepas que proliferan en dicho medio;
b) incubación en un medio ácido nutritivo, manteniendo el pH inferior o igual a 5,5 (preferentemente, por debajo de 3,5), y selección de las cepas que proliferan en dicho medio;
c) incubación en un medio nutritivo que contiene células de la mucosa intestinal del sujeto que vaya a tratarse, especialmente seres humanos, y selección de las bacterias capaces de adherirse a las células a una velocidad media correspondiente a la adherencia de al menos 50 bacterias por cada célula intestinal en un tiempo de incubación de hasta 5 minutos;
d) incubación de las cepas en un medio nutritivo y selección de las bacterias que producen al menos 3,5 mEq de ácido láctico por 10^{10} UFC (unidades formadoras de colonias) a 37ºC en un período de 24 horas;
e) incubación de las cepas en un medio nutritivo, y selección de las cepas bacterianas que proliferan a 37ºC con un tiempo de generación inferior a una hora, preferentemente, de aproximadamente 45 minutos.
Las etapas de selección indicadas anteriormente como a) a e) se realizan típicamente en las condiciones operativas descritas en el documento US-5.032.399 y el documento EP-199.535 correspondiente, con la diferencia de que las mezclas de microorganismos de una selección previa, derivadas de la colección de microorganismos capaces de diferenciarse en un medio nutritivo incubados con cepas previamente liofilizadas y rehidratadas, son sometidas a las etapas a) a d).
Más específicamente, el presente procedimiento comprende las siguientes etapas:
1) incubación de una mezcla de microorganismos que contienen múltiples lactobacilos en un medio selectivo para lactobacilos, y colección de las células bacterianas así desarrolladas;
2) liofilización de las células bacterianas obtenidas de la etapa anterior, preferentemente, en presencia de uno o más aditivos para liofilización;
3) rehidratación de la mezcla liofilizada de la etapa anterior;
4) incubación de la mezcla liofilizada y rehidratada resultante en un medio nutritivo, preferentemente, en un medio selectivo para lactobacilos, y colección de las células desarrolladas, como muy tarde, durante las primeras 12 horas, preferentemente, durante las primeras 10 horas de incubación a 37ºC en dicho medio nutritivo.
Los cultivos de lactobacilos recuperados según este procedimiento se pueden contaminar a veces por trazas de cepas bacterianas que pertenecen a otras especies de la flora microbiana intestinal, sin apartarse del ámbito de la presente invención.
El medio selectivo para lactobacilos es, por ejemplo, un caldo de cultivo MRS (caldo de Man Rogosa Sharpe, Oxoid), comercializado por DIFCO y descrito en J. Applied Bacteriol. (1960), 23, 130, con la composición publicada en dichos documentos US-5.032.399 y EP-B199.535, u otro medio selectivo conocido para esta fin, opcionalmente, con adición de otros nutrientes u otras sustancias. Por ejemplo, se puede usar un medio MRS con sales biliares añadidas (por ejemplo, en una concentración de 0,5% en peso por volumen total del caldo).
La incubación en un medio selectivo para iactobacilos según la etapa 1) típicamente se realiza en un medio líquido.
Como en la etapa 4), la incubación de las cepas bacterianas liofilizadas y rehidratadas se efectúa típicamente en placas de agar, preferentemente en un medio selectivo para lactobacilos, aunque como alternativa se puede efectuar en un medio nutritivo diferente convencional para su desarrollo.
Las etapas de incubación de lactobacilos mencionadas anteriormente se llevan a cabo típicamente a una temperatura de 30ºC a 40ºC, preferentemente, a 37ºC, de preferencia, en una atmósfera ligeramente anaerobia.
La liofilización se lleva a cabo preferentemente en presencia de aditivos conocidos como protectores de liofilización, por ejemplo, leche desnatada en polvo (por ejemplo, en cantidades de aproximadamente 10-12% en peso de los lactobacilos que ha de liofilizarse), sacarosa, glicerol o, por lo menos, según técnicas convencionales alternativas de liofilización.
El presente procedimiento permite seleccionar lactobacilos, como por ejemplo, las cepas depositadas en el Instituto Pasteur, tal y como se describen a continuación, con una elevada resistencia a los tratamientos tecnológicos, y especialmente con una alta viabilidad y alta estabilidad al almacenamiento a temperaturas de +15ºC/+20ºC, y además, con una o más de las siguientes características ventajosas y sorprendentes: capacidad de producir ácido láctico en una forma estereomérica L-(+) sustancialmente pura, o al menos en una cantidad muy superior al isómero D(-), resistencia a diversos antibióticos, en especial, resistencia a tetraciclinas pero con sensibilidad a otros antibióticos, en particular, rifampicina y eritromicina.
Según otra característica ventajosa, los lactobacilos obtenidos por el presente procedimiento son incapaces de transferir su resistencia a las tetraciclinas a otros microorganismos, incluidos los patógenos.
En particular, los lactobacilos de la presente invención tienen las siguientes características adicionales:
- estabilidad frente a los ácidos;
- estabilidad frente a los jugos biliares;
- capacidad de adherirse a las células de la mucosa intestinal;
- capacidad de crecer eficazmente in vitro.
La capacidad de producir sólo, o en cualquier caso, con una alta prevalencia, ácido L-(+)-láctico, es decir, el isómero L(+), que no se metaboliza por el cuerpo, y puede permanecer durante un largo tiempo en la luz intestinal, en donde ejerce sus efectos, resulta extremadamente ventajosa, puesto que el ácido láctico producido por los lactobacilos es al menos en parte responsable de los efectos beneficiosos de la colonización del tubo digestivo por los lactobacilos, oponiéndose así a los patógenos, presumiblemente a través de un descenso del pH del ambiente
intestinal.
La sensibilidad a algunos tipos de antibióticos que muestran los lactobacilos según la presente invención es una característica importante y ventajosa. De hecho, se sabe que los fenómenos de "resistencia cruzada" a los antibióticos pueden ocurrir a través de migración de material de plásmidos de un microorganismo a otro. Por lo tanto, la administración de lactobacilos resistentes a todos los antibióticos es potencialmente peligrosa para el cuerpo, puesto que podrían seleccionarse cepas patógenas resistentes a todos los antibióticos.
En consecuencia, es importante de la bacteria láctica administrada para el tratamiento de trastornos del aparato digestivo sea sensible al menos a algunos antibióticos, de modo que se disponga de armas terapéuticas adecuadas, en caso de que se produjera dicha resistencia cruzada.
A diferencia de los lactobacilos recuperados mediante el presente procedimiento, diversas cepas conocidas de lactobacilos, entre las que se encuentra la bacteria láctica GG desvelada en el documento US-5.032.399, resultó ser resistente a todos los antibióticos, y por lo tanto desventajosa desde este punto de vista.
La selección según el procedimiento de la invención puede realizarse periódicamente, de modo que se aíslen y se usen cepas de diferente lisotipo, manteniendo no obstante características probióticas, como por ejemplo:
- capacidad de alcanzar el lugar de acción permaneciendo íntegras;
- capacidad de asentarse en el aparato digestivo;
- producción de ácido L-(+)-láctico.
La posibilidad de seleccionar cepas de diferente lisotipo permite asegurar la productividad y eficacia del procedimiento de fermentación y/o la colonización segura del intestino e incluso en presencia de fagos, que son capaces de fagocitar y destruir lactobacilos tanto en el ambiente de fermentación como en la luz intestinal, poniendo así en peligro la producción de lactobacilos o los tratamientos terapéuticos o dietéticos que los utilizan.
Además, las cepas de lactobacilos de la invención están dotadas, de forma inesperada, de una estabilidad mayor que las obtenidas por procedimientos conocidos, ya que pueden almacenarse durante largos períodos a temperaturas superiores a 4ºC, en particular a aproximadamente +15ºC/+20ºC. Por ejemplo, al cabo de aproximadamente 18 a 24 meses a unos 22ºC, el descenso de células viables observado es sólo de 1 unidad logarítmica.
Gracias a esta propiedad, las preparaciones de la invención muestran cantidades de lactobacilos vivos que solamente tienen aproximadamente 1 logaritmo de células por dosis unitaria menos que el número de células vivas en el tiempo cero, incluso meses después de la comercialización, a diferencia de lo que sucede con diversos composiciones comerciales según la técnica anterior, que exhiben un gran descenso de las células vivas en comparación con las especificadas en el momento del envasado, y que por lo tanto es frecuente que resulten poco eficaces desde el punto de vista terapéutico.
De hecho, el tratamiento con lactobacilos según la presente invención obtiene resultados favorables, por ejemplo, la casi completa remisión de la diarrea, incluso cuando es severa y pertinaz, como cuando se debe a la radioterapia antitumoral, en períodos de tiempo cortos, es decir aproximadamente uno o dos días, un tiempo llamativamente menor que el requerido por los lactobacilos de la técnica anterior. La rapidez de acción se puede atribuir, por lo menos en parte, a la mayor estabilidad de almacenamiento que muestran los lactobacilos de la invención.
De forma más precisa, el procedimiento de la invención permitió seleccionar cepas novedosas de lactobacilos pertenecientes a las especies paracasei y salivarius, en particular tres cepas depositadas bajo la cobertura del tratado de Budapest en la "Collection National de Cultures de Microorganismes" (CNCM) del Instituto Pasteur (25, Rue du Docteur Roux, 75724 PARIS CEDEX 15), con los siguientes números de acceso:
- Bacteria láctica PF1S, depositada el 3 de abril de 1996, con el número de acceso CNCM I-1687, con la denominación taxonómica Lactobacillus paracasei;
- Bacteria láctica PF2P, depositada el 3 de abril de 1996, con el número de acceso CNCM I-1688, con la denominación taxonómica Lactobacillus paracasei;
- Bacteria láctica PF1S1, depositada el 6 de diciembre de 1996, con el número de acceso CNCM-I-1794, con la denominación taxonómica Lactobacillus salivarius.
Las tres cepas de Lactobacilos paracasei y salivarius identificadas más arriba por su número de acceso producen de forma exclusiva ácido L-(+) láctico, son sensibles a eritromicina y rifampicina y resistentes a tetraciclinas, estables en ácidos y resistentes a pH 3,5 durante 30 minutos a 40ºC.
En particular, las cepas de L. paracasei, particularmente la bacteria láctica PF2P CNCM I-1688, son resistentes a aztreonam, cefoxitina, vancomicina y tetraciclina, y sensibles a eritromicina, rifampicina y cefotaxima, y fermentan la ribosa; y las cepas de salivarius, como por ejemplo, la cepa PF1S1 CNCM I-1794, son resistentes a cefotaxima y tetraciclina, y sensibles a eritromicina y rifampicina.
Los lactobacilos según la presente invención pueden administrarse como tales o añadirse a un vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico o al menos fisiológico, para obtener diferentes tipos de preparaciones y formulaciones, como por ejemplo, composiciones farmacéuticas, suplementos dietéticos o productos alimenticios, en particular productos lácteos (como leche, yogur), que son objetos adicionales de la presente invención.
Los presentes preparados o formulaciones contienen al menos una bacteria láctica según la presente invención, preferentemente, mezclas de al menos una bacteria láctica de las especies paracasei o salivarius, en particular, en cantidades eficaces para los tratamientos terapéuticos, profilácticos o probióticos deseados y que pueden prepararse, por ejemplo, según técnicas convencionales.
El vehículo puede contener excipientes, aditivos, diluyentes otras substancias útiles, siempre que sean farmacológica o fisiológicamente aceptables.
Para el tratamiento de los trastornos del aparato digestivo de acuerdo con la invención, los lactobacilos administran típicamente por vía oral, preferentemente como mezclas de paracasei y salivarius.
La cantidad diaria eficaz para los seres humanos está comprendida entre aproximadamente 10^{7} y aproximadamente 2 x 10^{9} lactobacilos diarios, para un adulto (de peso medio de 50-70 kg), o entre 10^{6} y 10^{8} lactobacilos en los
lactantes.
Los preparados típicos para el tratamiento de los trastornos del aparato digestivo según la presente invención contienen, por ejemplo, entre 10^{6} y 3 x 10^{9} UFC de lactobacilos por dosis unitaria.
Los preparados según la presente invención contienen preferentemente lactobacilos en forma liofilizada.
Para este propósito, mezclas acuosas que contienen lactobacilos, y preferentemente al menos un aditivo de liofilización, se suelen liofilizar en las condiciones descritas más arriba para el procedimiento de selección de lactobacilos según la invención, o según los procedimientos conocidos.
Preferentemente, para los fines de la invención, los lactobacilos, típicamente en forma liofilizada, se combinan con excipientes o aditivos seleccionados de: vitaminas (como vitaminas del grupo B, por ejemplo, vitamina B1, B2, vitamina C y mezclas de ellas), hidratos de carbono (por ejemplo, edulcorantes, como sacarosa y maltodextrinas), y dióxido de silicio, preferentemente en mezcla, por ejemplo, mezclas de vitaminas B1, B2, C, sacarosa, maltodextrinas y dióxido de silicio.
Las vitaminas están presentes en cantidades que dependen de las dosis típicas de la vitamina, por ejemplo, aproximadamente 0,1-5 mg de vitamina B1 o B2 por 10^{9} lactobacilos y aproximadamente 5-20 mg de vitamina C por 10^{9} lactobacilos; los hidratos de carbono están presentes, por ejemplo, en cantidades de 500-1000 mg por 10^{9} lactobacilos (por ejemplo, aproximadamente 500-800 mg de sacarosa por 10^{9} lactobacilos, preferentemente combinada con aproximadamente 100-300 mg de maltodextrinas por 10^{9} lactobacilos); el dióxido de silicio está presente por ejemplo, en cantidades de aproximadamente 0,5-5,0 mg por 10^{9} lactobacilos.
Preferentemente, en el producto final, el producto liofilizado que contiene los lactobacilos se empaqueta en sobres de lámina de papel/ aluminio/ polietileno.
Los lactobacilos de la invención son valiosos para el tratamiento de diversos trastornos del tubo digestivo, por ejemplo, los debidos a alteraciones del equilibrio de la flora intestinal, en particular diarrea y estreñimiento, por ejemplo, la diarrea específica e inespecífica (especialmente la diarrea asociada a antibióticos), inflamaciones intestinales crónicas, colitis, flatulencia, pirosis, gastroenteritis, estomatitis aftosa, trastornos del peristaltismo, otros procedimientos de alteración de la función gastrointestinal y/o dismicrobiosis como consecuencia de cirugía, trastornos renales o hepáticos, radioterapia, desequilibrios dietéticos, estrés emocional, envejecimiento o trastornos del sistema inmu-
nitario.
Además los lactobacilos de la invención son eficaces en el tratamiento del intestino irritable. Esto es un resultado especialmente inesperado puesto que, aunque se sabe que los lactobacilos colonizan fundamentalmente el intestino distal, no se tiene conocimiento de que sean capaces de colonizar el colon en grandes cantidades.
A continuación, se comunican algunas realizaciones ejemplares de la invención.
Ejemplo
Composición para uso oral, en forma liofilizada, contenida en sobres de lámina de papel/aluminio/polietileno, cada uno de los cuales contiene:
- Lactobacillus paracasei PF2P, en cantidades de al menos 10^{9} UFC;
- Lactobacillus salivarius PF1S1, en cantidades de al menos 10^{9} UFC;
Vitamina B1 mg 0,6;
Vitamina B2 mg 0,5;
Vitamina C mg 20,0;
Sacarosa mg 1417,8;
(Continuación)
Maltodextrinas mg 400,0;
Sabor de nata mg 50,0;
Dióxido de silicio mg 5,0;
o bien
- Lactobacillus paracasei PF1S, en cantidades de al menos 10^{9} UFC;
- Lactobacillus salivarius PF1S1, en cantidades de al menos 10^{9} UFC;
Vitamina B1 mg 0,6;
Vitamina B2 mg 0,5;
Vitamina C mg 20,0;
Sacarosa mg 1417,8;
Maltodextrinas mg 400,0;
Sabor de nata mg 50,0;
Dióxido de silicio mg 5,0.
Las siguientes tablas muestran los perfiles de fermentación de las tres cepas de lactobacilos depositadas en el Instituto Pasteur, obtenidas por medio del sistema API 50CHL.
TABLA 1
La cepa de L. paracasei PF1S-CNCM I-1687 fermenta los siguientes hidratos de carbono:
L-arabinosa, ribosa, galactosa, D-glucosa, D- fructosa, D-manosa, L-sorbosa, ramnosa, dulcitol, inositol, manitol, sorbitol, \alpha-metil-D-manósido, \alpha-metil-D-glucósido, N-acetilglucosamina, amigdalina, arbutina, esculina, salicina, celobiosa, maltosa, lactosa, meilibiosa, sacarosa, trehalosa, sacarosa, inulina, melicitosa, \beta-gentobiosa, D-turanosa, D-tagatosa.
TABLA 2
L. paracasei PF2P-CNCM I-1688 fermenta los siguientes hidratos de carbono:
L-arabinosa, ribosa, galactosa, D-glucosa, D-fructosa, D-manosa, L-sorbosa, ramnosa, dulcitol, inositol, manitol, sorbitol, \alpha-metil-D-manósido, \alpha-metil-D-glucósido, N-acetilglucosamina, amigdalina, arbutina, esculina, salicina, celobiosa, maltosa, lactosa, meilibiosa, sacarosa, trehalosa, sacarosa, inulina, melicitosa, \alpha-gentobiosa, D-turanosa, D-tagatosa.
TABLA 3
La cepa de L. salivarius PF1S1-CNCM I-1794 fermenta los siguientes hidratos de carbono:
Galactosa, D-glucosa, D-fructosa, D-manosa, manitol, sorbitol, N-acetilglucosamina, maltosa, lactosa, meilibiosa, sacarosa, trehalosa, D-rafinosa, xilitol, D-arabitol.

Claims (16)

1. Un procedimiento de selección de cepas de lactobacilos útiles en el tratamiento de trastornos del tubo digestivo en seres humanos, que comprende la incubación en un medio nutritivo de una mezcla que contiene múltiples cepas de lactobacilos, procedentes de la flora bacteriana intestinal humana normal, previamente liofilizadas y después rehidratadas, seguida de la selección de las colonias que se desarrollan, como muy tarde, durante las primeras 12 horas de incubación en dicho medio nutritivo a una temperatura de entre 30ºC y 40ºC.
2. Un procedimiento según la reivindicación 1, que comprende las siguientes etapas:
1) incubación de una mezcla de microorganismos que contienen múltiples lactobacilos en un medio selectivo para lactobacilos, y colección de las células bacterianas así desarrolladas;
2) liofilización de las células bacterianas de la etapa anterior, en presencia de uno o más aditivos de liofilización;
3) rehidratación de la mezcla liofilizada de la etapa anterior;
4) incubación de la mezcla liofilizada y rehidratada resultante, en un medio selectivo para lactobacilos o en otros medios nutritivos, y colección de las células desarrolladas, como muy tarde, durante las primeras 12 horas de incubación a 37ºC en dicho medio nutritivo.
3. Un procedimiento según las reivindicaciones 1 ó 2, en el que la colección de las células desarrolladas después de la incubación de la mezcla liofilizada y rehidratada anterior se lleva a cabo en las primeras 10 horas de incubación a 37ºC.
4. Un procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que la incubación se lleva a cabo en un caldo de cultivo MRS.
5. Un procedimiento según las reivindicaciones 1 a 4, en el que la incubación de la mezcla liofilizada y rehidratada anterior se lleva a cabo en placas, en un medio nutritivo al que se añade agar.
6. Un procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que la liofilización se lleva a cabo en presencia de aditivos de liofilización seleccionados de leche desnatada en polvo, sacarosa y glicerol.
7. Un procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que la incubación de las cepas liofilizadas y rehidratadas anteriores va seguida de una o más de las siguientes etapas de selección, llevadas a cabo en cualquier orden:
a) incubación en un medio nutritivo que contiene bilis, en concentraciones de al menos 0,1% en peso por volumen, y selección de las cepas que proliferan en ese medio;
b) incubación en un medio nutritivo ácido, de un pH inferior o igual de 5,5, y selección de las cepas que proliferan en ese medio;
c) incubación en un medio nutritivo que contiene células de mucosa intestinal del sujeto que ha de tratarse, y selección de las bacterias capaces de adherirse a las células a una velocidad media que corresponde a la adherencia de al menos 50 bacterias por cada célula intestinal en un período de incubación inferior o igual a 5 minutos;
d) incubación de las cepas en un medio nutritivo y selección de las bacterias que producen al menos 3,5 mEq de ácido láctico por 10^{10} UFC (unidades formadoras de colonias) a 37ºC en un período de 24 horas;
e) incubación de las cepas en un medio nutritivo, y selección de las cepas bacterianas que proliferan con un período de generación inferior a una hora a 37ºC.
8. Un cultivo seleccionado entre los siguientes cultivos depositados en la colección CNCM del Instituto Pasteur:
- Lactobacillus paracasei, CNCM I-1687;
- Lactobacillus paracasei, CNCM I-1688;
- Lactobacillus salivarius, CNCM I-1794.
9. Un preparado para el tratamiento de trastornos del aparato digestivo en seres humanos, que contiene una cantidad eficaz de al menos una cepa de bacteria láctica tal y como se define en la reivindicación 8, combinada con un vehículo aceptable farmacéutica o fisiológicamente.
10. Un preparado según la reivindicación 9, seleccionado de composiciones farmacéuticas, suplementos dietéticos y productos alimenticios.
11. Un preparado según la reivindicación 10, para su uso oral.
12. Un preparado según la reivindicación 9, en el que dicha bacteria láctica está en forma liofilizada.
13. Un preparado según la reivindicación 9, seleccionado de composiciones farmacéuticas y suplementos dietéticos, en el que los lactobacilos están combinados con excipientes o aditivos seleccionados de vitaminas, hidratos de carbono y dióxido de silicio.
14. Un preparado según la reivindicación 9, que contiene vitamina B1 y B2, vitamina C y mezclas de las mismas, sacarosa, maltodextrinas y dióxido de silicio.
15. El uso de un cultivo que contiene una cepa de bacteria láctica tal y como se define en la reivindicación 8 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de trastornos del aparato digestivo en seres humanos.
16. El uso según la reivindicación 15, en el que dichos trastornos se seleccionan del grupo seleccionado entre diarrea específica e inespecífica, estreñimiento, colitis, flatulencia, pirosis, gastroenteritis, estomatitis aftosa y síndrome de intestino irritable.
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