ES2201101T3 - Uso de inhibidores de sulfatasas de esteroides. - Google Patents
Uso de inhibidores de sulfatasas de esteroides.Info
- Publication number
- ES2201101T3 ES2201101T3 ES95913919T ES95913919T ES2201101T3 ES 2201101 T3 ES2201101 T3 ES 2201101T3 ES 95913919 T ES95913919 T ES 95913919T ES 95913919 T ES95913919 T ES 95913919T ES 2201101 T3 ES2201101 T3 ES 2201101T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- dheas
- dhea
- group
- stimulation
- sensitization
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 77
- 108010087999 Steryl-Sulfatase Proteins 0.000 title claims description 17
- 102000009134 Steryl-Sulfatase Human genes 0.000 title description 16
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims abstract description 65
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims abstract description 21
- CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone sulfate Chemical compound C1[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N 0.000 claims description 114
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 claims description 37
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 claims description 36
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 229940123142 Steroid sulfatase inhibitor Drugs 0.000 claims description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 9
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 claims description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 2
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims 1
- 102100038021 Steryl-sulfatase Human genes 0.000 claims 1
- RVKFQAJIXCZXQY-CBZIJGRNSA-N [(8r,9s,13s,14s)-13-methyl-17-oxo-7,8,9,11,12,14,15,16-octahydro-6h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] sulfamate Chemical compound NS(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RVKFQAJIXCZXQY-CBZIJGRNSA-N 0.000 claims 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 claims 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 abstract description 92
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 59
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 abstract description 7
- CZWCKYRVOZZJNM-UHFFFAOYSA-N Prasterone sodium sulfate Natural products C1C(OS(O)(=O)=O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 113
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 94
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 80
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 80
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 66
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 66
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 230000004044 response Effects 0.000 description 34
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 33
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 33
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 26
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 23
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 22
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 15
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- QADHLRWLCPCEKT-UHFFFAOYSA-N Androstenediol Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CC=C21 QADHLRWLCPCEKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- QADHLRWLCPCEKT-LOVVWNRFSA-N androst-5-ene-3beta,17beta-diol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 QADHLRWLCPCEKT-LOVVWNRFSA-N 0.000 description 12
- 229950009148 androstenediol Drugs 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 9
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 9
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 9
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 8
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 8
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 8
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 8
- OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N Corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N corticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 5
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 5
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 5
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 5
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 5
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 5
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 4
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- GUGSXATYPSGVAY-DHKQUUGRSA-N 5-Androstenetriol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 GUGSXATYPSGVAY-DHKQUUGRSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 3
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 3
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 3
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 3
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- SJHPCNCNNSSLPL-CSKARUKUSA-N (4e)-4-(ethoxymethylidene)-2-phenyl-1,3-oxazol-5-one Chemical compound O1C(=O)C(=C/OCC)\N=C1C1=CC=CC=C1 SJHPCNCNNSSLPL-CSKARUKUSA-N 0.000 description 2
- JKKFKPJIXZFSSB-UHFFFAOYSA-N 1,3,5(10)-estratrien-17-one 3-sulfate Natural products OS(=O)(=O)OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 JKKFKPJIXZFSSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100387135 Caenorhabditis elegans dex-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 2
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 2
- -1 DHEA-7OH Chemical compound 0.000 description 2
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 230000001517 counterregulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000009547 dual-energy X-ray absorptiometry Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- JKKFKPJIXZFSSB-CBZIJGRNSA-N estrone 3-sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JKKFKPJIXZFSSB-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- 150000005845 steroid sulfates Chemical class 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-1,1,2,2-tetrafluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)Cl DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-6-[4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound OCC1OC(OC2C(O)C(O)C(O)OC2CO)C(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 HNLXNOZHXNSSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102000009133 Arylsulfatases Human genes 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 102000003676 Glucocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 101000686985 Mouse mammary tumor virus (strain C3H) Protein PR73 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 230000001548 androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002800 anti-glucocorticoid effect Effects 0.000 description 1
- 230000000947 anti-immunosuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000001297 coherence probe microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 229940042935 dichlorodifluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 229940087091 dichlorotetrafluoroethane Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 150000002167 estrones Chemical class 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- JFUIHGAGFMFNRD-UHFFFAOYSA-N fica Chemical compound FC1=CC=C2NC(C(=O)NCCS)=CC2=C1 JFUIHGAGFMFNRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 230000003314 glucocorticoidlike Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 239000005550 inflammation mediator Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229940062713 mite extract Drugs 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000031990 negative regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003281 pleural cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229940023144 sodium glycolate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 150000003595 thromboxanes Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical class [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- JEJAMASKDTUEBZ-UHFFFAOYSA-N tris(1,1,3-tribromo-2,2-dimethylpropyl) phosphate Chemical compound BrCC(C)(C)C(Br)(Br)OP(=O)(OC(Br)(Br)C(C)(C)CBr)OC(Br)(Br)C(C)(C)CBr JEJAMASKDTUEBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000006200 vaporizer Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
SE DESCRIBE UN NUEVO USO MEDICO DE INHIBIDORES PARA PREVENIR LOS EFECTOS FISIOLOGICOS NORMALES DE DHEA O ESTEROIDES RELACIONADOS SOBRE LAS RESPUESTAS INMUNE Y/O INFLAMATORIA QUE PERMITE DESCUBRIR UN EFECTO GLUCOCORTICOIDE ENDOGENO.
Description
Uso de inhibidores de sulfatasas de
esteroides.
La presente invención trata de un nuevo uso
médico de ciertos compuestos. En especial, trata del uso de
inhibidores que previenen el efecto fisiológico normal de DHEA o
esteroides relacionados sobre las respuestas inmunológica y/o
inflamatoria y, más especialmente, trata del uso de inhibidores de
una sulfatasa de esteroides sulfatados que revela un efecto
glucocorticoide endógeno.
Dehidroepiandrosterona (DHEA) es un esteroide
andrógeno suave producido por la corteza adrenal y las gónadas en
hombres y por las gónadas en los roedores. En todas las especies
está en parte bajo el control hipotálamo-pituitario
y es formada a partir de precursores esteroides comunes. Aunque
DHEA puede actuar como precursor de esteroides androgénicos
fisiológicamente más activos (por ejemplo testosterona), es
secretada normalmente como una hormona en sí misma. DHEA es
rápidamente sulfatada a DHEA-sulfato (DHEAS) antes
de ser liberada a la circulación, y es esta última especie la que
constituye la principal forma circulante del esteroide. Fuera del
SNC, DHEAS es en sí misma inactiva. Para ejercer sus efectos
fisiológicos, debe ser desulfatada por una sulfatasa de esteroides
sulfatados en el sitio de acción y entonces es capaz de influir
sobre eventos biológicos locales.
Los niveles de DHEAS circulante disminuyen con la
edad (a diferencia de otros esteroides) y existe cierta evidencia
que sugiere que la administración de DHEA exógena en ratones, puede
revertir algunos de los eventos fisiológicos asociados con el
fenotipo del envejecimiento (Daynes y col (1993) The Journal
of Immunology. Vol 150: 12, 5219-5230). Por
ejemplo, la administración de DHEAS puede revertir el incremento de
la producción de IL-6 en ratones añosos (Daynes
y col (1993) The Journal of Immunology. Vol 150: 12,
5219-5230). Además, DHEA puede regular la
sensibilidad de los adipocitos y el músculo esquelético a la
insulina (Cleary, (1991) P.S.E.B.M.Vol 196: 8-17).
Sin embargo, el papel fisiológico principal puede ser su capacidad
para influir sobre las respuestas inmunológicas.
La respuesta inmunológica a antígenos es
generalmente mediada por células (destrucción mediada por
células-T a través de antígenos procesados) o
humoral(producción de anticuerpos a través del reconocimiento
del antígeno completo). El patrón de producción de citoquinas por
las células T_{H} involucradas en la respuesta inmunológica,
puede influir en cuál de estos tipos de respuesta predomina: la
inmunidad mediada por células (T_{H1}) se caracteriza por la alta
producción de IL-2 e IFNg, y una baja producción
de IL-4, mientras que en la inmunidad humoral
(T_{H2}) el patrón es baja producción de IL-2 e
IFNg y alta producción de IL-4,
IL-5, IL-10. Dado que el patrón de
secreción es modulado a nivel de los órganos linfáticos
secundarios, la manipulación del patrón específico de citoquinas TH
puede influir en el tipo y extensión de la respuesta inmunológica
generada.
Se ha establecido adecuadamente que la
administración de glucocorticoides exógenos a ratones (y otras
especies) sensibilizados con albúmina de huevo, induce
inmunosupresión, en la que las células esplénicas expresan una
capacidad reducida de secretar IL-2 pero pueden
aumentar la secreción de IL-4 ante el estímulo
antigénico. Por el contrario, la administración de DHEA o DHEAS
aumenta notablemente la secreción de IL-2 e IFNg
sin afectar la liberación de IL-4. (Daynes y
col (1990) Eur. J. Immunol. 20: 793-802). Cuando
DHEA y dexametasona se administran conjuntamente, el efecto de la
DHEA predomina, lo que es consistente con la acción de la DHEA como
anti-glucocorticoide en este y otros sistemas
(Daynes y col (1990) Eur. J. Immunol. 20:
793-802, Browne y col (1992) The American
Journal of The Medical Sciences 303 No. 6,
366-371, y Blauer y col (1991)
Endocrinology 129 No. 6, 3174-3179). Estas
diferentes respuestas a glucocorticoides y DHEA son indicativas de
patrones de citoquinas tipo T_{H1} y T_{H2} respectivamente,
lo que sugiere que pueden influir de diferente manera sobre las
respuestas inmunológicas. Se observan efectos similares si células
esplénicas de animales sensibilizados son tratadas con
anti-CD3 en presencia de DHEA, DHEAS o dexametasona
(Daynes y col (1990) J. Exp. Med. 171:
979-996).
La respuesta al estímulo inmunológico de DHEAS
biológicamente inactiva, indica que existe conversión a la forma
activa DHEA por la sulfatasa de esteroides sulfatados, dentro de
los límites del tejido linfoide secundario. La localización de la
enzima convertidora (sulfatasa de esteroides sulfatados) está en las
células presentadoras de antígeno (CPA) ya que, en preparaciones de
células T purificadas tratadas con anticuerpo
anti-CD3, la DHEA, pero no la DHEAS, puede aumentar
la producción de IL-2. Sin embargo, si se agregan
macrófagos al sistema, los dos tipos de esteroides pueden provocar
un aumento en la respuesta de IL-2 (Daynes y
col (1990) J. Exp. Med. 171: 979-996).
Por lo tanto, el patrón de secreción de citoquinas por las células
T_{H} puede ser regulado dentro del microambiente linfoide
secundario bajo la influencia de esteroides adrenales, con
respuestas mediadas por células favorecidas por DHEA. Este sería un
efecto contraregulatorio al efecto normal de los glucocorticoides
endógenos (que inhiben las respuestas mediadas por células). En
efecto, se ha descrito un sitio de unión de alta afinidad para DHEA
en células T murinas que es distinto del receptor de
glucocorticoide de las células T (Meikle y col (1992) J.
Steroid Biochem. Molec. Biol. 42 No. 3/4,
293-304). Además, muchos de estas observaciones
sobre los efectos de los esteroides sobre las respuestas
inmunológicas en ratones, han sido demostradas usando células
humanas (Susuki y col (1991) Clinical Immunology e
Immunopathology 61, 202-211).
Las respuestas dependientes de T_{H1} y
T_{H2} muestran cierto grado de compartimentalización anatómica;
las áreas linfoides que drenan sitios no mucosos (por ejemplo
bazo, ganglios linfáticos periféricos) generan predominantemente
patrones de secreción de citoquinas T_{H1}, y las que drenan
sitios mucosos (por ejemplo las placas de Peyer) muestran
respuestas de tipo T_{H2}. En efecto, células tratadas con
anti-CD3 tomadas del bazo, ganglios linfáticos
periféricos o placas de Peyer de ratones sensibilizados tratados
con DHEA, muestran un aumento típico en la secreción de
IL-2 e IFNg, pero esto sólo ocurre en las células
esplénicas o de los ganglios linfáticos periféricos cuando el
tratamiento se realiza con DHEAS. De hecho, las células de las
placas de Peyer no aumentan la producción de IL-2
después del tratamiento con DHEAS pero muestran una secreción
aumentada de IL-4 y una baja secreción de
IL-2 típicas de una respuesta tipo T_{H2} (y
glucocorticoide). Esta influencia diferente de DHEA sobre la
producción de citoquinas de células TH se correlaciona con la
presencia de sulfatasa de DHEAS en estas áreas; por ejemplo, los
ganglios linfáticos braquiales y axilares
(no-mucosos) tienen una actividad de sulfatasa de
DHEAS 6 veces mayor que las placas de Peyer (mucosos)(Daynes y
col (1990) J. Exp. Med. 171: 979-996).
Por lo tanto, en las áreas linfoides donde generalmente tienen
lugar las respuestas inmunológicas mediadas por células, la
producción de citoquinas es influenciada por la DHEA producida
localmente, mientras que en las áreas donde predominan las
respuestas humorales, DHEA tiene menos influencia, permitiendo que
predominen los efectos de los glucocorticoides circulantes.
Cualquier efecto de DHEA es relativamente discreto dado que es
rápidamente re-sulfatada en el primer paso a través
del hígado. De esto se deduce que, sin embargo, en enfermedades en
las que la inmunidad celular contra antígenos específicos es
patológica (por ejemplo autoinmunidad), una reducción en la
influencia de DHEA sobre estas respuestas podría conducir a un
estado de relativa inmunosupresión con conservación de la inmunidad
humoral.
Creemos que la inhibición de la sulfatasa de
esteroides sulfatados dentro de los macrófagos u otras células
presentadoras de antígenos, podría conducir a una disminución de la
capacidad de las células T sensibilizadas para montar una respuesta
de tipo T_{H1} (aumento de IL-2 e INFg - reducción
de IL-4). De este modo, podría predominar la
influencia reguladora normal de otros esteroides como los
glucocorticoides.
Los inhibidores que impiden el efecto fisiológico
normal de DHEA o de esteroides relacionados, lo hacen actuando
como anti-glucocorticoides y, en consecuencia,
revelan un efecto tipo glucocorticoide endógeno. Dado que los
glucocorticoides pueden actuar en procesos inflamatorios y procesos
inmunológicos, este efecto tipo glucocorticoide endógeno podría
entonces manifestarse como una respuesta
anti-inflamatoria.
La invención se basa en un procedimiento
terapéutico para lograr un efecto tipo glucocorticoide endógeno en
un ser humano, que comprende la administración de una cantidad
efectiva de un inhibidor que impide el efecto fisiológico normal de
DHEA o esteroides relacionados sobre las respuestas inmunológica
y/o inflamatoria en dicho ser humano.
De esta manera, la invención proporciona el uso
de un inhibidor de sulfatasa de esteroides sulfatados para la
fabricación de un medicamento que revela un efecto tipo
glucocorticoide endógeno.
Del modo usado en la presente invención, el
término "DHEA o esteroides relacionados" se usa para denotar
DHEA y metabolitos fisiológicamente activos de DHEA como, por
ejemplo, DHEA-7OH, Androstenediol (AED),
Androstenetriol (AET) y DHEA-16OH.
Se cree que los inhibidores alcanzan sus efectos
terapéuticos por la remoción de una vía
contra-reguladora que existe in vivo a
través del efecto de DHEA o esteroides relacionados que revelan un
efecto tipo glucocorticoide endógeno.
El efecto tipo glucocorticoide endógeno puede
tener un componente anti-inflamatorio e
inmunosupresor. A través de la acción que revela un efecto tipo
glucocorticoide endógeno, los inhibidores producen indirectamente
una respuesta inmunosupresora y/o
anti-inflamatoria.
El medicamento fabricado de acuerdo con el
procedimiento de la presente invención, puede ser usado para
prevenir o tratar cualquier condición fisiológica generalmente
asociada con enfermedades inflamatorias y/o enfermedades que
requieren inmunosupresión.
Las enfermedades adecuadas para el tratamiento
con el inhibidor que impide el efecto fisiológico de DHEA o
esteroides relacionados sobre las respuestas inmunológicas y/o
inflamatorias de acuerdo con todos los aspectos de la invención
descritos en la presente invención, son preferentemente las que
resultan de la autoinmunidad, incluyendo, por ejemplo, artritis
reumatoidea, diabetes tipo I y tipo II, lupus eritematoso
sistémico, esclerosis múltiple, miastenia gravis, tiroiditis,
vasculitis, colitis ulcerosa, y enfermedad de Crohn, trastornos de
la piel, por ejemplo psoriasis y dermatitis de contacto; enfermedad
injerto contra huésped; eccema; asma y rechazo de órgano después
de un transplante.
El efecto del inhibidor de manifestar un efecto
tipo glucocorticoide endógeno puede determinarse midiendo las
respuestas anti-inflamatorias y/o
inmunosupresoras.
Los inhibidores que impiden el efecto fisiológico
normal de DHEA o esteroides relacionados sobre las respuestas
inmunológicas y/o inflamatorias, son inhibidores de una sulfatasa
de esteroides sulfatados (E.C. 3.1.6.2). Del modo usado en la
presente invención, el término "sulfatasa de esteroides
sulfatados" denota una enzima que puede remover un grupo sulfato
de un esteroide sulfatado. Esta enzima puede ser, por ejemplo, aril
sulfatasa C (E.C. 3.1.6.1) o, mejor aún, una específica para DHEAS o
esteroides sulfatados relacionados, es decir, metabolitos
sulfatados derivados de DHEAS.
\newpage
Ejemplos de inhibidores de sulfatasa de
esteroides sulfatados son descritas en Howarth y col J. Med.
Chem (1994) 37, 219-221; y Bioorganic and
Medicinal Chemistry Letters (1993) 3 (2) 313-318,
Endocrinology (1991) 129 No. 6, 3174-3179,
Bimbock y von Angener (1990) Biochemical Pharmacology 39
(11), 1709-1713; documentos de US Patent No.
5281587; Duncan y col (1993) Cancer Research 53,
298303; Li y col (1993) Steroids 58,
106-111; Dibbelt y col (1994) J. Steroid
Biochem. Molec. Biol. 50, 5/6, 261-266.
La interconversión de DHEA, AED,
DHEA-7OH, AET y DHEA-16OH puede
analizarse siguiendo las enseñanzas de Khalil y col
(1994)(J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 48 5/6
545-552) o por Alena y col (1992)(Biochem
288 959-964). Deberá usarse una fuente
adecuada de la actividad emzimática apropiada.
Existen sistemas de análisis disponibles
comercialmente para la medición de DHEA y DHEAS, como kits de
radioinmunoanálisis (ver, por ejemplo, Diagnostic Systems
Laboratories, 445 Medical Centre Blvd., Webster, Texas 77598).
Pueden formularse de manera convencional
composiciones farmacéuticas para el uso de acuerdo con la presente
invención, opcionalmente con uno o más vehículos, diluyentes o
excipientes fisiológicamente aceptados.
Los inhibidores para el uso de acuerdo con la
presente invención pueden formularse para administración por vía
oral, bucal, parenteral o rectal, o en una forma adecuada para la
administración nasal o por inhalación o insuflación.
Para la administración por vía oral, las
composiciones farmacéuticas pueden tener la forma de, por ejemplo,
comprimidos o cápsulas preparados por medios convencionales con
excipientes farmacéuticamente aceptables como agentes ligantes (por
ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o
hidroxipropil metilcelulosa); rellenos (por ejemplo, celulosa
microcristalina o fosfato hidrogenado de calcio); lubricantes (por
ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); desintegrantes
(por ejemplo, almidón de papa o glicolato sódico); o agentes
humidificantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio). Los
comprimidos pueden ser recubiertos por procedimientos bien
conocidos en la materia. Las preparaciones líquidas para
administración por vía oral pueden tener la forma de, por ejemplo,
soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un
producto seco para reconstitución con agua u otro vehículo adecuado
antes de su uso. Estas preparaciones líquidas pueden ser preparadas
por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables
como agentes suspensores, agentes emulsionantes, vehículos no
acuosos y conservantes. Las preparaciones también pueden contener
sales tampón, saborizantes, colorantes y agentes edulcorantes
apropiados.
Las preparaciones para administración por vía
oral pueden ser formuladas adecuadamente para lograr la liberación
controlada del compuesto activo.
Para la administración por vía bucal, las
composiciones pueden tener la forma de comprimidos o tabletas
formuladas de manera convencional.
El inhibidor puede ser formulado para
administración por vía parenteral, por ejemplo, como inyección en
bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden
presentarse en forma de dosificaciones unitarias. Las composiciones
pueden tener formas tales como suspensiones, soluciones o
emulsiones, en vehículos oleosos o acuosos, y pueden tener agentes
de fórmula como suspensores, estabilizantes y/o agentes
dispersantes. En forma alternativa, el ingrediente activo puede
presentarse en forma de polvo para ser reconstituido con un
vehículo adecuado, como por ejemplo agua estéril apirógena, antes
de ser usado.
El inhibidor también puede ser formulado en
composiciones rectales como supositorios o enemas de retención que
contengan, por ejemplo, bases convencionales para supositorios como
manteca de cacao u otros glicéridos.
Además de las formulaciones descritas
previamente, el inhibidor también puede formularse como preparación
de depósito. Estas formulaciones de larga acción pueden ser
administradas por implantación o por inyección intramuscular.
Para la administración por vía nasal o por
inhalación, los compuestos para uso de acuerdo con la presente
invención se disponen convenientemente en una presentación como
vaporizador de aerosol en envases presurizados o nebulizadores, con
el uso de propelentes adecuados, como por ejemplo
diclorodifluorometano, triclorofluorometano,
diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono, u otro gas
adecuado.
Las composiciones pueden, si se desea, ser
presentadas en un paquete o dispositivo dispensador que puede
contener una o más dosificaciones unitarias que contengan el
ingrediente activo. El paquete o dispositivo dispensador puede ser
acompañado de instrucciones para la administración.
La dosis a la que el inhibidor que impide el
efecto fisiológico normal de DHEA o esteroides relacionados sobre
las respuestas inmunológicas y/o inflamatorias será administrado,
dependerá de la naturaleza del inhibidor y la ruta de
administración, la potencia del inhibidor, y el peso corporal y
patología del paciente. Las dosificaciones pueden ser, por ejemplo,
entre 1 \mug/kg y 100 mg/kg, preferentemente entre 0,1 mg y 10
mg/kg y más preferentemente entre 0,1 mg y 1 mg/kg.
Como se indicó anteriormente, el inhibidor es un
inhibidor de una sulfatasa de esteroides sulfatados y
preferentemente sulfatasa de DHEAS (o un esteroide sulfatado
relacionado). La sulfatasa de esteroides sulfatados es una enzima
microsomal presente en muchos tejidos pero predominantemente en
tejido linfoide (presumiblemente macrófagos) y pituitario (Milewich
y col (1984) J. Steroid. Biochem. 21 No. 5,
529-538). Todavía no está claro si existen
isoformas de esta enzima o si la enzima de macrófagos es distinta
de la de otros tejidos. El inhibidor de la sulfatasa de esteroides
es, preferentemente, más específico para la sulfatasa de DHEAS que
se encuentra en macrófagos y otras células presentadoras de
antígenos.
Como una primera etapa simple para probar nuestra
hipótesis, se ha fabricado un par de derivados estructurales de
estrona que inhiben la sulfatasa de esteroides sulfatados. Para una
persona experta en la materia, será evidente que los derivados
estructurales de DHEA también podrían ser fabricados y estudiados
como se describe abajo. Estos han sido probados contra la enzima
presente en las líneas celulares de macrófagos y la sulfatasa
aislada de placenta humana, y después se estudió su capacidad para
inhibir una respuesta inmune en desarrollo en sistemas celulares
(por ejemplo, Reacción de Linfocitos Mezclados [RLM]) e in
vivo (por ejemplo, Hipersensibilidad Retardada [HTR]). Además,
se probó su capacidad de interferir con la producción de
IL-2 por células T mediada por DHEAS en presencia y
ausencia de macrófagos.
Los efectos de los inhibidores de acuerdo con la
presente invención sobre la inflamación pueden ser medidos in
vitro usando procedimientos conocidos en la materia como, por
ejemplo, medir la liberación de mediadores de la inflamación, por
ejemplo citoquinas, prostaglandinas, tromboxanos o FAP, e, in
vivo, usando procedimientos dependientes de la inflamación como
por ejemplo la pleuresía por carragenina descrita más en detalle en
la presente invención.
Los efectos de los inhibidores sobre la función
inmunológica pueden medirse in vitro usando procedimientos
bien conocidos en la materia como en una Reacción de Linfocitos
Mezclados, e in vivo en, por ejemplo, una Reacción de
Hipersensibilidad Retardada.
La invención se ilustra más detalladamente
haciendo referencia a los siguientes Ejemplos y Figuras, en las
cuales:
Figura 1 muestra una representación esquemática
de la influencia de los esteroides adrenales sobre la producción
de citoquinas de las células T_{H}.
Figura 2 muestra una representación gráfica de la
inhibición por CT2211 de la conversión de DHEAS por la sulfatasa
U937.
Figura 3 muestra una representación gráfica de la
inhibición por CT2251 de la conversión de DHEAS y ES por la
sulfatasa U937.
Figura 4 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
dhea 100\mug
-
\sqw
dheas 100\mug
-
\sqdlr
dexametasona 100\mug
-
\sqdr
dhea 100\mug+2210 2 mg
-
\sqdl
dhea 100\mug+2211 2 mg
-
\sqvh
dheas 100 \mug+2210 2 mg
-
\sqh
dheas 100 \mug+2211 2 mg
-
\sqp
CT2210 2mg
-
\sqpl
CT2211 2 mg
punto de análisis = 48 hs. Esteroides
administrados por vía subcutánea en los días 0, 4 y 5,
sensibilizados con oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al
0,25%.
Figura 5 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
aceite de oliva
-
\sqw
dhea 100\mug
-
\sqdlr
dheas 100\mug
-
\sqdl
dexametasona 100\mug
punto de análisis = 24 hs. Esteroides
administrados por vía subcutánea los días 0 y 5, sensibilizados con
oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al 0,25%.
- por anova ** p<0,05 vs control + dexametasona
-
\textdollar
\textdollar
p<0,05 vs control dhea + dheas
Figura 6 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
DHEAS (50 mg/kg)
-
\sqw
DHEAS (5 mg/kg)
-
\sqdlr
DHEAS (50 mg/kg) y corticosterona (5mg/kg)
-
\sqdr
DHEAS (5 mg/kg) y corticosterona (5mg/kg)
-
\sqdl
DHEAS (0,5mg/kg) y corticosterona (5mg/kg)
-
\sqvh
DHEAS (0,05mg/kg) y corticosterona(5mg/kg)
-
\sqh
DHEAS (0,005mg/kg) y corticosterona(5mg/kg)
-
\sqp
DHEAS(0,0005mg/kg) y corticosterona(5mg/kg)
-
\sqpl
corticosterona (5mg/kg)
Los esteroides son administrados por vía
subcutánea los días 0 y 4 en dmso 20%: aceite de oliva 80%,
sensibilizados con oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al
0,25%.
Los resultados se expresan como media \pm sem,
n = 10.
Figura 7 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
A
-
\sqb
dexametasona 5 mg/kg
-
\sqw
DHEA 5 mg/kg
-
\sqdlr
DHEA 5 mg/kg y Ct 2251 0,1 mg/kg
-
\sqdr
DHEA 5 mg/kg y Ct 2251 10 mg/kg
-
\sqdl
CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqvh
CT2251 10 mg/kg
B
-
\sqb
dexametasona 5 mg/kg
-
\sqw
DHEAS 5 mg/kg
-
\sqdlr
DHEAS 5 mg/kg y Ct 2251 0,1 mg/kg
-
\sqdr
DHEAS 5 mg/kg y Ct 2251 10 mg/kg
-
\sqdl
CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqvh
CT2251 10 mg/kg
Los esteroides son administrados por vía
subcutánea los días 0 y 4 sensibilizados con oxazalona al 2,5%,
estimulados con oxazalona al 0,25%.
Los resultados se expresan como media \pm sem,
n = 7
Figura 8 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
dexametasona 5 mg/kg
-
\sqw
CT2251 0,3 mg/kg
-
\sqdlr
CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqdr
CT2251 0,03 mg/kg
-
\sqdl
CT2251 0,01 mg/kg
-
\sqvh
CT2251 0,003 mg/kg
-
\sqh
CT2251 0,001 mg/kg
punto de análisis = 24 horas. Esteroides
administrados por vía subcutánea los días 0 y 4. Sensibilizados con
oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al 0,25%.
Resultados expresados como media \pm sem,
n=7-14
Figura 9 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
dexametasona 5 mg/kg
-
\sqw
dheas 50 mg/kg
-
\sqdlr
dheas 15 mg/kg
-
\sqdr
dheas 5 mg/kg
-
\sqdl
dheas 50 mg/kg y CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqvh
dheas 15 mg/kg y CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqh
dheas 5 mg/kg y CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqp
CT2251 0,1 mg/kg
punto de análisis = 24 horas, esteroides
administrados por vía subcutánea los días 0 y 4. Sensibilizados con
oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al 0,25%.
Resultados expresados como media \pm sem,
n=7-14
Figura 10 muestra
A
el efecto de CT2251 sobre los macrófagos y número
de células T en experimentos de sensibilización de contacto en
ratones
-
\sqdl
vehículo control
-
\sqdlr
DHEAS
-
\sqvh
DHEAS y CT2251 10 mg/kg
-
\sqw
CT2251 10 mg/kg
-
\sqdl
DEX 5 mg/kg
\newpage
B
-
\sqdlr
control negativo
-
\sqvh
vehículo control
-
\sqb
DHEAS
-
\sqh
DHEAS y CT2251 10 mg/kg
-
\sqb
Ct 2251 10 mg/kg
-
\sqh
DEX 5 mg/kg
-
\sqdr
orejas normales
resultados expresados como media \pm sem.
- *=p<0,05 vs DHEAS
\hskip2cm
=p<0,05 vs CT2251
-
\textdollar
=p<0,05 vs vehículo control
Figura 11 muestra un análisis histograma del
efecto de CT2251 sobre la Hipersensibilidad Retardada (HR)
A
-
\sqb
DHEA 5 mg/kg
-
\sqw
DHEAS 5 mg/kg
-
\sqdlr
DEXA 5 mg/kg
-
\sqdr
DHEA 5 mg/kg y CT2251 10 mg/kg
-
\sqdl
DHEA 5 mg/kg y CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqvh
CT2251 10 mg/kg
-
\sqh
CT2251 0,1 mg/kg
B
-
\sqb
DHEA 5 mg/kg
-
\sqw
DHEAS 5 mg/kg
-
\sqdlr
DEXA 5 mg/kg
-
\sqdr
DHEA 5 mg/kg y CT2251 10 mg/kg
-
\sqdl
DHEA 5 mg/kg y CT2251 0,1 mg/kg
-
\sqvh
CT2251 10 mg/kg
-
\sqh
CT2251 0,1 mg/kg
Los esteroides son administrados por vía
subcutánea los días 0 y 3. Respuesta a 24 hs después del
estímulo.
Resultados expresados como media \pm sem,
n=7-8
-
\textdollar
, *p<0,05 ANOVA
Figura 12 muestra un gráfico del efecto de CT2251
sobre HR en ratas. CT2251 es administrado por vía subcutánea los
días 0, 3 y 4.
\newpage
- \medcirc estímulo solamente
- \bullet vehículo control
- \blacktriangle CT2251 10 mg/kg
-
\sqbullet
CT2251 1 mg/kg
- \blacklozenge CT2251 0,1 mg/kg
Resultados expresados como media \pm sem, n =
6-7
Figura 13 muestra el efecto de CT2251 sobre
la
-
\sqw
- artritis inducida por colágeno en ratones
-
\sqdl
- pata sometida a experimento
severidad
datos expresados como media \pm sem, n = 10. La
incidencia de artritis fue 60% y 40% en los grupos de agua de
grifo y aceite de oliva respectivamente.
Figura 14 muestra
A
el efecto de CT2251 y DHEAS sobre la pleuresía
por carragenina
- --- exudado
- DEX 1 mg/kg, CT2251 10 mg/kg, DHEAS 5 mg/kg
B
el efecto de CT2251 y DHEAS sobre la pleuresía
por carragenina
- --- células totales
- DEX 1 mg/kg, CT2251 10 mg/kg, DHEAS 5 mg/kg.
Los resultados se expresan como media \pm
sem.
- * = dif. sig. vs control por ANOVA.
Figura 15 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
DHEA (5 mg/kg)
-
\sqw
DHEA (0,5 mg/kg)
-
\sqdlr
DHEA (0,05 mg/kg)
-
\sqdr
DHEA (0,005 mg/kg)
-
\sqdl
AED (5 mg/kg)
-
\sqvh
AED (0,5 mg/kg)
-
\sqh
AED (0,05 mg/kg)
Sensibilizados con oxazalona al 2,5%, estimulados
con oxazalona al 0,25%. Esteroides administrados por vía
subcutánea los días 0 y 4, dmso 20%:aceite de oliva 80%.
Resultados expresados como media \pm sem,
n=10.
Figura 16 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
DHEAS (5 mg/kg)
-
\sqw
DHEAS (0,5 mg/kg)
-
\sqdlr
DHEAS (0,05 mg/kg)
-
\sqdr
DHEAS (0,005 mg/kg)
-
\sqdl
AEDS (5 mg/kg)
-
\sqvh
AEDS (0,5 mg/kg)
-
\sqh
AEDS (0,05 mg/kg)
-
\sqw
AEDS (0,005 mg/kg)
-
\sqp
AEDS (0,0005 mg/kg)
Sensibilizados con oxazalona al 2,5%, estimulados
con oxazalona al 0,25%. Esteroides administrados por vía
subcutánea los días 0 y 4, dmso 20%:aceite de oliva 80%.
Resultados expresados como media \pm sem,
n=10.
Figura 17 muestra un análisis histograma de los
resultados de sensibilización por contacto.
-
\sqb
AEDS (5 mg/kg)
-
\sqw
AEDS (5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
-
\sqdlr
DHEAS (5 mg/kg)
-
\sqdr
DHEAS (5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
-
\sqdl
CT2251 (0,1 mg/kg)
-
\sqvh
DEX (5 mg/kg)
Sensibilizados con oxazalona al 2,5%, estimulados
con oxazalona al 0,25%. Esteroides administrados por vía
subcutánea los días 0 y 4, dmso 20%:aceite de oliva 80%.
Resultados expresados como media \pm sem,
n=10-11.
Figura 18 muestra un diagrama de flujo del
metabolismo de DHEA.
Procedimientos
a) Sulfatasa microsomal de esteroides de placenta
humana
Enzima: Microsomas de placenta humana
preparados como se describe en (Santner, S.J., y col (1984)
J. Clin. Endocrinol. Metab. 59 29).
Prueba Todas las pruebas fueron realizadas
por (al menos) duplicado.
La mezcla de la reacción estaba formada por PBS +
250 mM de sucrosa (microsomas placentarios), conteniendo
1\mumol/1DHEAS [concentración elegida porque aproximadamente
10*<K_{m}(app)] con 0,05% (v/v) de sustrato [^{3}H] y
0,05% (v/v) de DHEA [^{14}C]) en 0,5% (v/v) DMSO. La reacción fue
iniciada por adición de enzima diluida apropiadamente (de modo que
el 10% de la conversión del substrato ocurrió durante la prueba) e
incubado por 30 min a 30ºC. Las reacciones fueron detenidas por la
adición de 1000 \mul de tolueno a la mezcla de la reacción,
mezclado por vórtices (2 min 40 seg en velocidad máxima en un
mezclador por vórtices multitubos), luego se permitió reposar por 5
min. Se traspasaron 500 \mul de la capa superior (solvente) a un
frasco para centelleo, se agregaron 10 ml de líquido de centelleo
(Ultima Gold XR), y se contó la radioactividad en un contador de
centelleo. Como controles, la enzima fue excluida de algunas mezclas
de reacciones y 50% de las capas solvente y acuosa fueron
removidas y contadas para radioactividad con el objeto de
determinar la concentración basal (en la capa solvente) y total (en
la capa acuosa) de [^{3}H]. DHEA [^{14}C] es incluida para
permitir la corrección hacia atrás para tener en cuenta la
recuperación del producto (DHEA)(normalmente >98%).
Efectos de los inhibidores: Los
inhibidores fueron incluidos en la reacción anterior a diferentes
concentraciones en 0,5% (v/v) DMSO [o 5% (v/v) DMSO si era
necesario por la pobre solubilidad del inhibidor] llevando la
concentración final de DMSO en la prueba a 1% (v/v) [o 5,5%
(v/v)].
La enzima se probaría de manera similar para
actividad de sulfatasa de estrona-sulfato, pero con
ES en la prueba en lugar de DHEAS.
b) Sulfatasa de esteroides recombinante (como en
Stein y col J. Biol. Chem. 264.
13865-13872, 1990; Yen y col Cell, 49,
443-454, 1987).
Enzima: Sulfatasa de esteroide
recombinante de placenta humana (expresada en células NSO). Se
pueden usar extractos crudos, parcialmente puros o enzima pura. La
enzima se probará para la sulfatasa de esteroides de placenta humana
como se describió anteriormente, excepto que la solución tampón de
la prueba será Tris/HCl 50mM de pH apropiado (\sim7,5),
conteniendo 0,1% (v/v) de Triton x 100.
Cálculos
La proporción de dpm de 3H/14C para todas las
muestras incluyendo los controles (es decir, la proporción entre
dpm de 3H de la capa inferior de los controles "sin enzima" y
14C de la capa superior de los controles "sin enzima", para
obtener el total de 3H/14C).
Los valores de 3H/14C de los controles "sin
enzima" (antecedente), fueron sustraídos de muestras de
^{3}H/14C (no totales) para obtener los valores netos de
3H/14C.
Los valores netos de 3H/14C fueron divididos por
el total, después el resultado fue multiplicado por la
concentración del sustrato (1 \mumol/l) para obtener la
concentración del producto.
La concentración del producto fue dividida por el
tiempo de incubación (30 min) para obtener la velocidad (V) de
conversión del sustrato (en \mumol/l/min).
[1-((velocidad +
inhibidor)/(velocidad - inhibidor))] x 100 = % de
inhibición.
donde
velocidad + inhibidor =
velocidad en presencia del inhibidor,
y
velocidad - inhibidor =
velocidad en ausencia del
inhibidor
Se utilizó el programa de computación MULTICALC
(Pharmacia) para ajustar en el gráfico una curva no ponderada de 4
parámetros de porcentaje de inhibición (eje y) contra log
(concentración del inhibidor) (eje x), y para determinar la
concentración del inhibidor que reduce la actividad enzimática (en
ausencia del inhibidor) en 50% (CI50).
La actividad enzimática se determinó a una
variedad de concentraciones de substrato y después se calculó
K_{m} a partir de estos datos usando el programa de computación
Enzfitter (Leatherbarrow R.A. (1987) Enzfitter: a non.linear
regresión data análisis programme for the IBM PC. Elsevier Biosoft,
Cambridge U.K.). Esto se repetiría a una variedad de
concentraciones de inhibidor y se determinó K_{i} a partir de
los valores de K_{m}' obtenidos de acuerdo con la ecuación:
Km^{|} = Km(1
+[I]/K_{i}) donde Km^{|} = Km en presencia del inhibidor en la
concentración
[I].
La K_{i} media se tomará como una figura
representativa.
c) Actividad de la sulfatasa de DHEAS en
extractos de células U937
Procedimientos
Los inhibidores CT2211 y CT2251 fueron disueltos
en 100% de etanol y 100% de dimetilsulfóxido (DMSO)
respectivamente, a concentraciones de 20 mM. Éstos fueron
dosificados en sus respectivos solventes para obtener una gama de
concentraciones de prueba. Los sustratos tritiados de DHEAS y
estrona-sulfato fueron obtenidos de New England
Nuclear y diluidos en etanol para obtener una concentración final
de 70 nM para usar en la prueba. Las células U937 fueron
desarrolladas en RPLI con contenido de 10% de suero bovino fetal y
recolectadas a una concentración celular de 1x10^{6}/ml. Se
lavaron en un medio libre de suero, se guardaron a -70ºC a
1x10^{6}/ml en suero salino con tampón Tris a pH 7,4 + Triton
X-100 al 1% y sonicadas antes de ser usadas en la
prueba.
Se agregaron 50 \mul de sustrato en etanol a
cada tubo de ensayo y se quitó el solvente en un evaporador de
vacío rotatorio. Para CT2211 disuelto en etanol, se agregaron 25
\mul de cada dilución a un tubo de ensayo y el solvente fue
nuevamente removido por evaporación. Para CT2251 disuelto en DMSO,
se añadieron a cada tubo 25 \mul de células U937 sonicadas,
diluidas a un equivalente celular de 1,25 x 10^{7}/ml. Con
CT2251, se agregaron a cada tubo 225 \mul de células U937
sonicadas, obteniendo una concentración final de DMSO al 10%. Los
tubos fueron incubados a 37ºC durante 4 horas y la reacción
detenida con metanol. Después de centrifugado, se agregó líquido
de centelleo para extraer el sustrato desulfatado, y se contaron
las CPM presentes en una cuota-parte de la fase
orgánica, con un contador-beta.
La Figura 2 muestra la capacidad de CT2211 para
inhibir la sulfatasa derivada de células U937 usando DHEAS como
sustrato. La Figura 3 muestra la capacidad de CT2251 para inhibir
la misma enzima usando DHEAS y estrona-sulfato como
sustratos.
CPM
totales
Con el objeto de obtener cuentas totales, 10
\mul de la fracción acuosa de los tubos duplicados que
contenían sólo DHEA-s caliente, fueron contados
después de la adición de centelleante y se calculó cpm total del
modo siguiente:
cpm total = \frac{500}{10}
x cpm para 10
\mul
Proporción de
DHEA-s convertida a DHEA =
\frac{cpm-cpm \ basal}{cpm \ total} =
P
\muMoles de DHEA formada en 4 horas = P x no.
total de \muMoles por tubo =
M
v_{o} = M/tiempo en
minutos
Total (sustrato) = \muMolar frío + \muMolar
caliente
% de inhibición =
\left[1 - \frac{v_{o} + inhibidor}{v_{o} -
inhibidor}\right] x
100
donde v_{o} + inhibidor = velocidad en
presencia del inhibidor
y
v_{o} - inhibidor = velocidad en ausencia del
inhibidor.
La CI_{50} se determinó como se describió
previamente.
d) Otras actividades aún desconocidas de la
sulfatasa de DHEAS serán probadas ampliamente como se describe
arriba, usando un tampón adecuado (es decir, uno en el que la
enzima tiene actividad medible).
El efecto de los inhibidores de sulfatasa de
esteroides se examinará en las actividades de otras sulfatasas
relacionadas, es decir, aril-sulfatasas A y B.
\newpage
Se examinarán los efectos directos de sulfatasas
de esteroides sobre enzimas/receptores de la vía de los
glucocorticoides.
Se examinarán los efectos de los inhibidores de
la sulfatasa de esteroides sobre la
glucosa-6-fosfato dehidrogenasa.
Los efectos sobre estas enzimas/receptores se
considerarán perjudiciales y serán evitados hasta donde sea
posible.
Un estudio para identificar tales inhibidores
medirá la captación de DHEAS-[^{3}H] o un esteroide sulfatado
relacionado por una línea celular apropiada, y los efectos de los
inhibidores en esa captación. Esto se describe para
DHEAS-[^{3}H], pero será evidente para un experto en la materia
que esto podría ser modificado usando técnicas habituales para la
identificación de inhibidores de captación de esteroides sulfatados
relacionados.
1. Una línea celular apropiada (es decir, una que
toma DHEAS-[^{3}H] por encima de los niveles basales), se incuba
con 1 \muM de DHEAS conteniendo 1% (v/v) DHEAS-[^{3}H] a 37ºC,
durante un período de tiempo dado (>1h), en un medio de cultivo
celular libre de suero (RPMI) +/- distintas concentraciones del
inhibidor.
2. Al final de ese tiempo, las células se
recolectan (si se adhieren, primero se tripsiniza la placa de
cultivo celular) por centrifugación, se lava 3 veces con el
excedente (10 ml) del medio de cultivo celular libre de suero y se
cuenta la radioactividad en un contador de centelleo (todas las
células presentes en el líquido de centelleo).
3. Cálculo
[^{3}H] en células - [^{3}H] en una línea
celular adecuada conocida por no captar DHEAS (por ejemplo U937),
es decir basal = captación neta de [^{3}H].
% de inhibición = 1-
\left[\frac{captación \ neta \ de \ [^{3}H] + inhibidor}{captación
\ neta \ de \ [^{3}H] - inhibidor}\right] x
100
\vskip1.000000\baselineskip
donde captación neta de [^{3}H] + inhibidor =
captación en presencia del
inhibidor
y captación neta de [^{3}H] - inhibidor =
captación en ausencia del
inhibidor.
Determinados como se describió para la inhibición
de la actividad de sulfatasa.
Resultados obtenidos a la fecha:
1. vs actividad sulfatasa de DHEAS de U937
CT No | CI_{50} (uM) evidente |
2211 | 64 |
2251 | 0,04 |
2. vs actividad sulfatasa de DHEAS microsomal de
placenta humana
CT No | CI_{50} (uM) evidente |
2211 | 152 |
2251 | 0,005 |
\newpage
Los experimentos de la función de las células T
ex vivo se realizan donde la interacción entre
MHC-II y el receptor de las células T es un
requerimiento obligatorio para la activación de las células T. Los
inhibidores de la sulfatasa de esteroides sulfatados se prueban en
reacciones de linfocitos mezclados, que miden la activación tanto
de células T vírgenes como de células T de memoria, y en pruebas
de respuesta a toxoide tetánico y al ácaro del polvo doméstico, que
mide la respuesta de las células T de memoria de tipo Th1 + Th2
respectivamente.
El fundamento del experimento se basa en que,
cuando los linfocitos de un individuo se mezclan con los de otro
que expresa diferentes alelos HLA, se reconocerán cada uno como
extraño para el otro y los linfocitos se activarán. Esta activación
depende, en primer lugar, de las interacciones entre el complejo
CD3/TcR de las células T y la molécula de MHC-II de
las células presentadoras de antígenos. Se sabe que los anticuerpos
que se unen al MHC-II inhiben esta reacción.
Los linfocitos se preparan frescos para cada
experimento. Se coloca sangre venosa humana de dos individuos en
tubos libres de endotoxinas que contienen heparina. Las células
mononucleares de sangre periférica (CMSP) se preparan por
centrifugación de gradiente de densidad de acuerdo con las
instrucciones del fabricante (Pharmacia). La concentración de CMSP
se ajusta hasta 2x10^{6} cél/ml en medio RPMI 1640 (Gibco UK) que
contiene Glutamina 2 mM (Gibco UK), 100u/ml/100\mug/ml de
Penicilina/Estreptomicina (Gibco) y suero fetal de becerro al 10%
(Sigma UK), en el cual se realizan todas las manipulaciones,
diluciones e incubaciones. Las CMSP de un individuo son irradiadas
con 3000 rads. Estas células estimularán una respuesta por parte de
las del otro individuo.
Se preparan diluciones seriadas del inhibidor por
triplicado en placas micrometradas de 96 pocillos de fondo en U
(Falcon UK) de 100 \mul. También se preparan pocillos de control
que contienen solamente el medio de cultivo y niveles óptimos (100
nM) de Ciclosporina (Sandimmun, Sandoz), para establecer la
respuesta máxima y la inhibición máxima respectivamente. Se mezclan
juntos igual número de estimuladores irradiados y respondedores, y
se colocan 100 \mul en cada pocillo \pm el agregado de 10
\mul de DHEA-s. También se preparan como controles
pocillos que contienen solamente estimuladores o respondedores. El
experimento es incubado a 37ºC, con una humedad de 100%, en
CO_{2} al 5%, durante 5 días. La respuesta se mide a través de la
evaluación de la proliferación durante las últimas 18 horas de
cultivo por incubación con 1\muCi/pocillo de
Timidina-^{3}H (Amersham UK), recolección a
través de filtros de fibra de vidrio y
contado usando un contador beta.
Los resultados son graficados como CPM contra
concentración de inhibidor.
Se quita el sobrenadante y se estudia la
producción de IL-2, IFN\gamma, FNT y LT.
El principio del experimento es que los
linfocitos T de un individuo previamente inmunizado con Toxoide
Tetánico (TT) responderán al TT cuando sean
re-expuestos ex vivo. Esta activación es
dependiente de la interacción entre el complejo CD3/TcR en las
células T y la molécula del MHC-II en las células
que procesan y presentan antígenos. Se sabe que los anticuerpos que
se unen al MHC-II inhiben esta reacción.
Los linfocitos se preparan frescos para cada
experimento. Se coloca sangre venosa humana en tubos libres de
endotoxinas que contienen heparina. Las células mononucleares de
sangre periférica se preparan por centrifugación por gradiente de
densidad de acuerdo con las instrucciones del fabricante
(Pharmacia). La concentración de CMSP se ajusta hasta 2x10^{6}
cél/ml en medio RPMI 1640 (Gibco UK) que contiene Glutmina 2 mM
(Gibco UK), 100u/ml/100\mug/ml de Penicilina/Estreptomicina
(Gibco) y suero fetal de becerro al 10% (Sigma UK), en el cual se
realizan todas las manipulaciones, diluciones e incubaciones.
Se preparan diluciones seriadas del inhibidor por
triplicado en placas micrometradas de 96 pocillos de fondo en U
(Falcon UK) de 100 \mul. Se añaden a los pocillos 50 \mul de
una concentración óptima de TT determinada previamente por
experimentación. También se preparan pocillos de control que
contienen solamente el medio o Ciclosporina (Sandimmun, Sandoz)
(100 nM), para establecer la respuesta máxima y la inhibición
máxima respectivamente. Se agregan 50 \mul de CMSP a cada pocillo
\pm el agregado de 10 \mul de DHEA-s. El
experimento es incubado a 37ºC, a una humedad de 100%, en CO_{2}
al 5%, durante 7 días. La respuesta se mide evaluando la
proliferación durante las últimas 18 horas de cultivo por
incubación con 1\muCi/pocillo de
Timidina-^{3}H, recolección a través de un filtro
de fibra de vidrio y contado usando un contador beta.
Los resultados son graficados como CPM contra
concentración de inhibidor.
El sobrenadante también se quita y se prueba la
producción de citoquinas IL-2, IL-4,
IL-5, FNT, LT, IFN\gamma.
El principio del experimento es que los
linfocitos T de un individuo atópico de quien se conoce es alérgico
al ácaro del polvo doméstico, responderán al extracto de ácaro del
polvo doméstico cuando sean re-expuestos ex
vivo. Esta activación depende de la interacción entre el
complejo CD3/TcR de las células T y la molécula de
MHC-II en las células que procesan y presentan
antígenos.
Los linfocitos se preparan frescos para cada
experimento. Se coloca sangre venosa humana en tubos libres de
endotoxinas que contienen heparina. Las células mononucleares de
sangre periférica se preparan por centrifugación por gradiente de
densidad de acuerdo con las instrucciones del fabricante
(Pharmacia). La concentración de CMSP se ajusta hasta 2x10^{6}
cél/ml en medio RPMI 1640 (Gibco UK) que contiene Glutmina 2 mM
(Gibco UK), 100u/ml/100\mug/ml de Penicilina/Estreptomicina
(Gibco) y suero fetal de becerro al 10% (Sigma UK), en el cual se
realizan todas las manipulaciones, diluciones e incubaciones.
Se preparan diluciones seriadas del inhibidor por
triplicado en placas micrometradas de 96 pocillos de fondo en U
Falcon UK) de 100 \mul. Se añaden a los pocillos 50 \mul de una
concentración óptima de APD determinada previamente por
experimentación. También se preparan pocillos de control que
contienen solamente el medio o Ciclosporina (Sandimmun, Sandoz)
(100 nM), para establecer la respuesta máxima y la inhibición
máxima respectivamente. Se agregan 50 \mul de CMSP a cada pocillo
\pm DHEA-s. El experimento es incubado a 37ºC, a
una humedad de 100%, en CO_{2} al 5%, durante 7 días. La
respuesta se mide a través de la evaluación de la proliferación
durante las últimas 18 horas de cultivo por incubación con
1\muCi/pocillo de Timidina-^{3}H, recolección a
través de un filtro de fibra de vidrio y contado usando un contador
beta.
El sobrenadante también se quita y se analiza
para IL-2, IL-4,
IL-5, IFN\gamma, FNT y LT.
Los resultados son graficados como CPM contra
concentración de inhibidor.
Se realizan experimentos sobre la función de
células T ex vivo donde una interacción entre
MHC-II y el receptor de células T no es un
requerimiento obligatorio para la activación de células T.
Se usan los mitógenos PHA, Superantígenos y
OKT3.
Cuando las células T se mezclan con la lectina
fitohemaglutinina (PHA), enterotoxinas estafilocóccicas o el Ac
OKT3 anti-CD3, responderán transformándose en
células activadas, proliferando y secretando citoquinas.
Los linfocitos se preparan frescos para cada
experimento. Se coloca sangre venosa humana en tubos libres de
endotoxinas que contienen heparina. Las células mononucleares de
sangre periférica se preparan por centrifugación por gradiente de
densidad de acuerdo con las instrucciones del fabricante
(Pharmacia). La concentración de CMSP se ajusta hasta 2x10^{6}
cél/ml en medio RPMI 1640 (Gibco UK) que contiene Glutmina 2 mM
(Gibco UK), 100u/ml/100\mug/ml de Penicilina/Estreptomicina
(Gibco) y suero fetal de becerro al 10% (Sigma UK), en el cual se
realizan todas las manipulaciones, diluciones e incubaciones.
Se preparan diluciones seriadas del inhibidor por
triplicado en placas micrometradas de 96 pocillos de fondo en U
(Falcon UK) de 100 \mul. Se añaden a los pocillos 50 \mul de
una concentración óptima de mitógenos determinada previamente por
experimentación. También se preparan pocillos de control que
contienen solamente el medio o Ciclosporina (Sandimmun, Sandoz)
(100 nM), para establecer la respuesta máxima y la inhibición
máxima respectivamente. Se agregan 50 \mul de CMSP a cada pocillo
\pm 10 \mul de DHEA-s. El experimento es
incubado a 37ºC, a una humedad de 100%, en CO_{2} al 5%, durante
7 días. La respuesta se mide a través de la evaluación de la
proliferación durante las últimas 18 horas de cultivo por
incubación con 1\muCi/pocillo de
Timidina-^{3}H, recolección a través de un filtro
de fibra de vidrio y contado usando un contador beta.
Los resultados son graficados como CPM contra
concentración de inhibidor.
El sobrenadante también se quita para análisis de
citoquinas IL-2, 4, 5, LT, FNT, IFN\gamma e
IL-1.
Se probó el efecto de DHEA, DHEAS y sus
inhibidores en 2 modelos de función inmunológica en ratones.
En el día 0, los ratones fueron pintados en su
flanco derecho afeitado, con 50 \mul de oxazalona al 2,5% o un
vehículo (acetona 4:1 aceite de oliva). En el día 5, los animales
fueron expuestos en la zona dorsal de sus orejas derechas a 25
\mul de oxazalona al 0,75% o al 0,25%. El espesor de las orejas
se midió antes de la exposición de las orejas y 24, 48 y 72 horas
después, usando un micrómetro de ingeniero. Se estableció la
inflamación de la oreja como la diferencia en el espesor antes y
después de la prueba. Los datos se expresan como cambio porcentual
de los grupos tratados con el vehículo a los que se realizó la
sensibilización y la prueba.
En el día 0, se inyectó a los animales por vía
intravenosa 10^{6} SRBC lavadas en 0,1 ml de solución salina.
Cuatro días después, los animales fueron estimulados en la planta
de la pata trasera derecha con 10^{7} SRBC lavadas en 50 \mul
de solución salina. El espesor de la planta de la pata se midió
antes de la estimulación, 24, 48 y 72 horas después del estímulo
usando calibres. La inflamación de la planta de la pata se define
como la diferencia en el espesor antes y después del estímulo. Los
datos se expresan como el cambio en porcentaje de los grupos
tratados con el vehículo a los que se realizó sensibilización y
estímulo.
Se administraron DHEA y DHEAS en diferentes
momentos, generalmente al momento de la sensibilización (día 0) y
el momento del estímulo día 3 o 4 -modelo DTH- día 4 ó 5 -modelo
SC-, con el objeto de obtener un aumento de la respuesta
inmunológica por encima de los animales no tratados con
esteroides.
Se usaron diferentes dosis de inhibidores, y se
compararon con el efecto de dexametasona como potenciales agentes
inmunosupresores/antinflamantorios.
Se probó la capacidad inmunosupresora de tres
inhibidores de sulfatasa de esteroides sulfatados preparados según
se describe en Howarth y col. J. Med. Chem. (1994) 37
219-221 y Howarth y col (1993) Bioorganic &
Medicinal Chemistry Letter 3 (2) 313-318, en
un modelo de sensibilización de contacto en ratón. El protocolo
básico se ha resaltado anteriormente. Se realizaron dos
experimentos separados.
Los inhibidores probados fueron:
- CT2210: Estrona-3-0-(N,N,-dimetil)sulfamato
- CT2211: Estrona-3-metilfosfonato
- CT2251: Estrona-3-0-sulfamato
Experimento
1
Se sensibilizaron animales con oxazolona al 2,5%
en el día 0 y se estimularon en la oreja con oxazolona al 0,25%
en el día 5. Se administraron esteroides (DHEA, DHEAS, dexametasona
e inhibidores CT2210 y CT2211) en los días 0, 4 y 5 en inyecciones
por vía subcutánea, disueltos en aceite de oliva. Los datos se
presentan como cambio porcentual del grupo tratado con el vehículo
al que se realizó sensibilización y estimulación (control
positivo). Los animales fueron distribuidos al azar en 10 grupos de
tratamiento (n=7-8 por grupo).
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DHEA
100\mug/ratón
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEAS
100 \mug/ratón
Grupo 4: sensibilización y estimulación más
dexametasona 100 \mug/ratón
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEA
100\mug/ratón + CT2210 2 mg/ratón
Grupo 6: sensibilización y estimulación más DHEA
100\mug/ratón + CT2211 2 mg/ratón
Grupo 7: sensibilización y estimulación más DHEAS
100 \mug/ratón + CT2210 2 mg/ratón
Grupo 8: sensibilización y estimulación más DHEAS
100 \mug/ratón + CT2211 2 mg/ratón
Grupos 9/10: sensibilización y estimulación más
CT2210 o CT2211 2 mg/ratón
Los datos se exponen en la Figura 4 medidos 40
horas después de la estimulación. Tanto DHEA como DHEAS solos,
aumentaron el incremento normal del espesor de la oreja observado
con el procedimiento, lo que indica un efecto inmunoestimulante. La
dexametasona redujo la respuesta, lo que indica un efecto
inmunosupresor (o antinflamatorio). CT2210 y CT2211 fueron capaces
de revertir los efectos estimulantes tanto de DHEA como de DHEAS y,
además, fueron capaces de atenuar la inflamación de la oreja
observada en ausencia de DHEA o DHEAS. Estos datos indican que
CT2210 y CT2211, ambos inhibidores de la sulfatasa de esteroides
sulfatados, son inmunosupresores en este modelo.
Experimento
2
Se distribuyeron al azar animales en 5 grupos
(n=7-8) y se les administraron esteroides en los
días 0 y 5 por vía subcutánea, sensibilizados con oxazalona al 2,5%
y estimulados con oxazalona al 0,25%.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (control positivo).
Grupo 2: sensibilización y estimulación
solamente.
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEA
(100 \mug/ratón).
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEAS
(100 \mug/ratón).
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DEX
(100 \mug/ratón).
Los datos se exponen en la Figura 5, medidos a
las 24 horas después de la estimulación. Tanto DHEA como DHEAS
aumentaron significativamente la respuesta, mientras que fue
inhibida por DEX. Estos datos son consistentes con el papel de DHEA
y DHEAS como inmunoestimulantes/pro-inflamatorios
in vivo y de DEX como inmunosupresor/antinflamatorio.
Por ANOVA ** p<0,05 vs control +
dexametasona
\textdollar
\textdollarp<0,05 vs control dhea + dheas
Experimento
3
Los datos expuestos en la Figura 6 indican que
incrementando la dosis administrada de DHEAS (y por lo tanto su
conversión a DHEA), existe un efecto
anti-glucocorticoide funcional de DHEA en este
modelo.
Se administraron esteroides los días 0 y 4 por
vía subcutánea en dmso 20%:aceite de oliva 80%. Sensibilización con
oxazalona 2,5% y estimulados con oxazalona 0,25%. Los resultados se
presentan como media \pm sem, n=10.
Experimento
4
Se distribuyeron al azar animales en 9 grupos
(n=7) y se les administraron esteroides los días 0 y 4 por vía
subcutánea, sensibilizados con oxazalona al 2,5% y estimulados con
oxazalona al 0,25%. Los resultados se expresan como media \pm sem,
n=7.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (control positivo).
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DEX
(5 mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEA
(5 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEA
(5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg).
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEA
(5 mg/kg) y CT2251 (10 mg/kg).
Grupo 6: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más
CT2251 (10 mg/kg)
Grupo 8: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg)
Grupo 9: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 10: sensibilización y estimulación más
DHEAS (5 mg/kg) y CT2251 (10 mg/kg)
Los datos usando estos inhibidores relativamente
débiles se exponen en la Figura 7. Tanto DHEA como DHEAS aumentaron
la inflamación normal de la oreja, mientras que fue inhibida por
DEX. CT2251 (en ambas dosis) revirtió el aumento observado con
DHEAS, pero no el observado con DHEA. CT2251 por sí mismo (en ambas
dosis), inhibió significativamente la respuesta inflamatoria normal
de la oreja. Estos datos revelan que la inhibición de la sulfatasa
de esteroides sulfatados puede revertir el efecto estimulante de
DHEAS, sustrato para la enzima.
Además, la respuesta inflamatoria de la oreja en
sí misma es, al menos parcialmente, dependiente de un producto de
la actividad de una sulfatasa endógena como DHEA, dado que la
administración de CT2251 sólo provoca un efecto inmunosupresor o
antinflamatorio.
Experimento
5
Se distribuyeron animales al azar en 8 grupos
(n=7-14) y se les administraron esteroides los
días 0 y 4 (ver Figura 8). Sensibilizados con oxazalona al 2,5%,
estimulados con oxazalona al 0,25%. Los resultados se presentan como
la media \pm sem, n=7-14. Punto del análisis = 24
hs.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DEX
(5 mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,3 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,03 mg/kg).
Grupo 6: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,01 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,003 mg/kg)
Grupo 8: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,001 mg/kg)
La dexametasona inhibió el grado de inflamación
de la oreja. También el tratamiento con CT2251 lo hizo de forma
dosis-dependiente, siendo las dosis efectivas de
0,1 y mayores.
Experimento
6
Se distribuyeron al azar animales en 9 grupos
(n=7-14) y se les administraron esteroides en los
días 0 y 4 (ver Figura 9). Sensibilizados con oxazalona al 2,5%,
estimulados con oxazalona al 0,25%. Los resultados se presentan como
la media \pm sem. Punto de análisis = 24 hs.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DEX
(5 mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEAS
(50 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEAS
(15 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg)
Grupo 6: sensibilización y estimulación más DHEAS
(50 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más DHEAS
(15 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 8: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 9: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,1 mg/kg)
Los datos indican que el efecto inhibitorio de
CT2251 sobre la respuesta inflamatoria en la oreja puede ser
revertida incrementando las dosis de DHEAS, el sustrato para la
enzima sulfatasa.
Experimento
7
Se asignaron animales al azar a 7 grupos
(n=7-10) y se les administraron esteroides en el
día 0 y 5. 24 horas después de la estimulación, se resecaron las
orejas, se fijaron y se tiñeron con anticuerpos
anti-CD3 (células T) o
anti-Mac-1 (monocito/macrófagos) y
se contaron el número de células positivas en 10 campos al
azar.
Grupo 1: aceite de oliva solamente
Grupo 2: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (vehículo control)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg) y CT2251 (10 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más
CT2251 (10 mg/kg)
Grupo 6: sensibilización y estimulación más DEX
(5 mg/kg)
Grupo 7: orejas normales
Los datos de la Figura 10 revelan que DHEAS puede
aumentar el infiltrado celular inmunológico e inflamatorio en las
orejas estimuladas. Esto puede revertirse efectivamente con el
tratamiento concomitante con CT2251. CT2251 en sí mismo fue capaz
de reducir posteriormente el número de células infiltrantes CD3
positivas. Estas observaciones indican que la estimulación o
inhibición de la sulfatasa de esteroides sulfatados, puede aumentar
o atenuar el desplazamiento de células de tipo inmunológico e
inflamatorio en las orejas de los ratones sensibilizados.
- *=p<0,05 vs DHEAS
-
\textdollar
= p<0,05 vs vehículo control
- C=p<0,05 vs CT2251.
Se distribuyeron animales al azar en 10 grupos
(n=7-8) y se les administraron esteroides en los
días 0 y 4.
Los esteroides fueron administrados en los días 0
y 3 por vía subcutánea. La respuesta se evaluó a las 24 hs después
de la estimulación. Los resultados obtenidos se expresan como la
media \pm sem.
\textdollar, * p< 0,05 ANOVA.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
aceite de oliva (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DHEA
(5mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DEX
(5 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEA
(5 mg/kg) y CT2251 (10mg/kg)
Grupo 6: sensibilización y estimulación más DHEA
(5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg) y CT2251 (10 mg/kg)
Grupo 8: sensibilización y exposición más DHEAS
(5 mg/kg) y CT2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 9: sensibilización y estimulación más
CT2251 (10 mg/kg)
Grupo 10: sensibilización y estimulación más
CT2251 (0,1 mg/kg)
Los datos presentados en la Figura 11 son
consistentes con las observaciones hechas en el modelo de
sensibilización de contacto del ratón en términos de cómo DHEA/S,
DEX y CT2251 afectan los resultados. DHEA y DHEAS tienen efecto
claramente pro-inmunológico (o
pro-inflamatorio) y CT2251 puede efectivamente
revertir el aumento de la inflamación mediado por DHEAS. También
CT2251 en sí mismo puede reducir marcadamente la respuesta
inflamatoria en la pata.
Se sensibilizaron ratas Lewis con SRBC IV y se
estimularon 4 días después con 10^{8}SRBC en la planta de la
pata. La respuesta inflamatoria obtenida fue medida 24 y 48 hs
después. Las ratas fueron distribuidas al azar en 5 grupos
(n=6-7) y se les administraron esteroides en los
días 0, 3 y 4, por vía subcutánea. Los resultados se expresan como
la media \pm sem.
Grupo 1: solamente estimulación
Grupo 2: sensibilización y estimulación más
vehículo
Grupo 3: Sensibilización y estimulación más
CT2251 (10 mg/kg)
Grupo 4: Sensibilización y estimulación más
CT2251 (1 mg/kg)
Grupo 5: Sensibilización y exposición más CT2251
(0,1 mg/kg)
Los datos presentados en la Figura 12 indican que
CT2251 también puede suprimir una respuesta de HR en ratas.
Se sensibilizaron ratones DBA/1 masculinos con
colágeno tipo II en la base de la cola en FCA en el día 0. Los
animales recibieron posteriormente una inyección de CII en FICA
(Adyuvante de Freunds Incompleto) en el día 18, y se evaluó la
incidencia y la severidad de la artritis desde el día 25. Los
ratones fueron distribuidos al azar en 3 grupos (n=10).
Grupo 1: agua de grifo por vía oral en el día -1
y semanalmente
Grupo 2: aceite de oliva por vía oral en el día
-1 y semanalmente
Grupo 3: CT2251 (10 mg/kg) en el día -1 y
semanalmente
Los datos presentados en la Figura 13 muestran
una incidencia de 60 y 40% en los grupos tratados con agua de grifo
y aceite de oliva, con signos severos evidenciados en aquellos
portadores de la enfermedad. El tratamiento con CT2251 previno el
desarrollo de cualquier enfermedad.
Se anestesiaron ratas Wistar y se les
administraron inyecciones intra- pleurales de carragenina al 0,5% en
solución salina en hora 0. Seis horas después, se sacrificaron los
animales y la cavidad pleural se lavó con 1 ml de solución salina
citratada. Se midieron el volumen del líquido exudado y la
concentración celular del exudado.
Los animales se distribuyeron al azar en 5 grupos
de tratamiento (n=6).
Los resultados se presentan como la media \pm
sem, *= dif. sig. vs control por ANOVA.
Grupo 1: solamente aceite de oliva por vía
oral
Grupo 2: DEX (1 mg/kg) por vía oral a T = -1
h
Grupo 3: CT2251 (10 mg/kg) por vía oral a T = -24
hs y -1 h
Grupo 4: CT2251 (10 mg/kg) por vía oral a t = -1
h
Grupo 5: DHEAS (5 mg/kg) por vía oral a T = -24
hs y -1 h
Los datos presentados en la Figura 14 indican que
DEX puede inhibir completamente la formación de líquido y reducir
notablemente la afluencia celular (68%). El tratamiento con CT2251
a -24h y -1h reducen significativamente tanto el volumen del
exudado (43%) como el infiltrado celular (28%), lo que indica que
la inhibición de la sulfatasa de esteroide-sulfato
puede reducir una respuesta inflamatoria.
Efectos de metabolites putativos de
DHEA(S) en el modelo de sensibilización de contacto
\newpage
Experimento
1
Se distribuyeron los animales al azar en 8 grupos
(n=10) y se les administraron esteroides en los días 0 y 4, por vía
subcutánea 20% de DMSO:80% de aceite de oliva. Sensibilizados con
oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al 0,25%.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
vehículo (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DHEA
(5 mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEA
(0,5 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEA
(0,05 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEA
(0,005 mg/kg)
Grupo 6: sensibilización y estimulación más AED
(5 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más AED
(0,5 mg/kg)
Grupo 8: sensibilización y estimulación más AED
(0,05 mg/kg)
Los datos que se presentan en la Figura 15
indican que AED y DHEA pueden aumentar la respuesta inflamatoria en
la oreja en este modelo. El efecto de AED puede observarse
disminuir a dosis de 0,05 mg/kg o menores.
Experimento
2
Se distribuyeron animales al azar en 10 grupos
(n=10) y se les administraron esteroides en los días 0 y 4 por vía
subcutánea e DMSO 20%:aceite de oliva 80%. Sensibilizados con
oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al 0,25%. Los
resultados se obtuvieron como la media \pm sem.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
vehículo (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más DHEAS
(0,5 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEAS
(0,05 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEAS
(0,005 mg/kg)
Grupo 6: sensibilización y estimulación más AEDS
(5 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más AEDS
(0,5 mg/kg)
Grupo 8: sensibilización y estimulación más AEDS
(0,05 mg/kg)
Grupo 9: sensibilización y estimulación más AEDS
(0,005 mg/kg)
Grupo 10: sensibilización y estimulación más AEDS
(0,0005 mg/kg)
Los datos presentados en la Figura 16 muestran
que AEDS puede aumentar la respuesta inflamatoria en la oreja en
este modelo. Este efecto se alcanza con dosis al menos 1000 veces
menores que las observadas con DHEAS.
Experimento
3
Se distribuyeron animales al azar en grupos
(n=10-11) y se les administraron esteroides en los
días 0 y 4 por vía subcutánea en DMSO 20%:aceite de oliva 80%.
Sensibilizados con oxazalona al 2,5%, estimulados con oxazalona al
0,25%. Los resultados se informan como la media \pm sem.
Grupo 1: sensibilización y estimulación más
vehículo (control positivo)
Grupo 2: sensibilización y estimulación más AEDS
(5 mg/kg)
Grupo 3: sensibilización y estimulación más AEDS
(0,5 mg/kg) y CT 2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 4: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg)
Grupo 5: sensibilización y estimulación más DHEAS
(5 mg/kg) y CT 2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 6: sensibilización y estimulación más CT
2251 (0,1 mg/kg)
Grupo 7: sensibilización y estimulación más DEX
(5 mg/kg)
Los datos presentados en la Figura 17 indican que
la respuesta estimuladora observada con AEDS (y DHEAS), puede ser
inhibida por un inhibidor de sulfatasa. Esto demuestra que AEDS
puede servir como sustrato fisiológico para la enzima sulfatasa
in vivo.
Claims (6)
1. El uso de un inhibidor de sulfatasa de
esteroides sulfatados en la fabricación de un medicamento para
lograr un efecto terapéutico similar al de los glucocorticoides
endógenos.
2. El uso de la reivindicación 1, siendo el uso
del inhibidor de sulfatasa de esteroides sulfatados para la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de la
inflamación.
3. El uso de la reivindicación 1, siendo el uso
del inhibidor de sulfatasa de esteroides sulfatados para la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad
autoinmune.
4. El uso de la reivindicación 3, en el que la
enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, diabetes tipo I o
tipo II, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple,
miastenia gravis, tiroiditis, vasculitis, colitis ulcerosa,
enfermedad de Crohn, trastornos dérmicos, eccema, asma, rechazo de
órgano tras un transplante.
5. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en el que la sulfatasa de esteroides sulfatados es la
sulfatasa de DHEAS.
6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que el inhibidor de la sulfatasa de esteroides
sulfatados es
estrona-3-O-(N,N,dimetil) sulfamato
(CT2210), estrona-3-metilfosfonato
(CT2211) o
estrona-3-O-sulfamato
(CT2251).
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB9406715 | 1994-04-05 | ||
GB9406715A GB9406715D0 (en) | 1994-04-05 | 1994-04-05 | Medicaments |
GB9410621 | 1994-05-26 | ||
GB9410621A GB9410621D0 (en) | 1994-05-26 | 1994-05-26 | Medicaments |
GB9425759 | 1994-12-20 | ||
GBGB9425759.9A GB9425759D0 (en) | 1994-12-20 | 1994-12-20 | Medicaments |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2201101T3 true ES2201101T3 (es) | 2004-03-16 |
Family
ID=27267136
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES95913919T Expired - Lifetime ES2201101T3 (es) | 1994-04-05 | 1995-04-05 | Uso de inhibidores de sulfatasas de esteroides. |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6013642A (es) |
EP (1) | EP0758230B1 (es) |
AU (1) | AU2112995A (es) |
DE (1) | DE69531048T2 (es) |
ES (1) | ES2201101T3 (es) |
WO (1) | WO1995026717A1 (es) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9422777D0 (en) * | 1994-11-11 | 1995-01-04 | Imperial College | Assay |
US6046186A (en) * | 1997-12-24 | 2000-04-04 | Sri International | Estrone sulfamate inhibitors of estrone sulfatase, and associated pharmaceutical compositions and methods of use |
CA2260584C (en) * | 1998-02-04 | 2007-07-31 | Charlotte-Mecklenburg Hospital D/B/A Carolinas Medical Center | Androsterone derivatives for inhibiting dna binding of ap-1 and airway smooth muscle proliferation |
GB9807779D0 (en) | 1998-04-09 | 1998-06-10 | Ciba Geigy Ag | Organic compounds |
US6667299B1 (en) * | 2000-03-16 | 2003-12-23 | Hollis-Eden Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions and treatment methods |
US20060079492A1 (en) * | 1999-10-25 | 2006-04-13 | Ahlem Clarence N | Compositions and treatment methods |
US20030083231A1 (en) * | 1998-11-24 | 2003-05-01 | Ahlem Clarence N. | Blood cell deficiency treatment method |
WO2010050916A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | The Regents Of The University Of California | Estrogen receptor ligand treatment for neurodegenerative diseases |
US20050209208A1 (en) * | 2001-04-25 | 2005-09-22 | The Regents Of The University Of California | Use of estriol and other estranes, estrogens and estrogen receptor active compositions in the treatment of psoriasis and other autoimmune disorders |
US6936599B2 (en) * | 2001-04-25 | 2005-08-30 | The Regents Of The University Of California | Estriol therapy for multiple sclerosis and other autoimmune diseases |
US20130203722A1 (en) | 2006-09-26 | 2013-08-08 | Rhonda R. Voskuhl | Estriol therapy for autoimmune and neurodegenerative disease and disorders |
EP2164498A4 (en) | 2007-06-04 | 2010-09-08 | Univ California | PREGNANCY HORMONE ASSOCIATION FOR THE TREATMENT OF AUTOIMMUNE DISEASES |
ES2514140B1 (es) | 2013-03-26 | 2015-08-03 | Universidad Pablo De Olavide | Uso del inhibidor de sulfatasas esteroideas STX64 para el tratamiento del envejecimiento |
US11253498B2 (en) | 2017-06-01 | 2022-02-22 | Nexyon Biotech Co., Ltd. | Pharmaceutical composition for treatment of bone-related disease |
WO2018221966A1 (ko) * | 2017-06-01 | 2018-12-06 | 연세대학교 산학협력단 | 골 관련 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9003939D0 (en) * | 1990-02-21 | 1990-04-18 | Imperial College | Sulphatase inhibitors |
GB9118478D0 (en) * | 1991-08-29 | 1991-10-16 | Imperial College | Steroid sulphatase inhibitors |
-
1995
- 1995-04-05 US US08/721,987 patent/US6013642A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-05 WO PCT/GB1995/000780 patent/WO1995026717A1/en active IP Right Grant
- 1995-04-05 AU AU21129/95A patent/AU2112995A/en not_active Abandoned
- 1995-04-05 EP EP95913919A patent/EP0758230B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-05 ES ES95913919T patent/ES2201101T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-05 DE DE69531048T patent/DE69531048T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US6013642A (en) | 2000-01-11 |
EP0758230B1 (en) | 2003-06-11 |
AU2112995A (en) | 1995-10-23 |
WO1995026717A1 (en) | 1995-10-12 |
DE69531048T2 (de) | 2004-05-06 |
EP0758230A1 (en) | 1997-02-19 |
DE69531048D1 (de) | 2003-07-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2201101T3 (es) | Uso de inhibidores de sulfatasas de esteroides. | |
Montorsi et al. | Effect of yohimbine-trazodone on psychogenic impotence: a randomized, double-blind, placebo-controlled study | |
Bernardini et al. | Interactions between tumor necrosis factor-α, hypothalamic corticotropin-releasing hormone, and adrenocorticotropin secretion in the rat | |
Freeman et al. | Evaluation of a unique oral contraceptive in the treatment of premenstrual dysphoric disorder | |
Mendelson et al. | Suppression of sleep-related prolactin secretion and enhancement of sleep-related growth hormone secretion. | |
Goodman et al. | m-Chlorophenylpiperazine in patients with obsessive-compulsive disorder: absence of symptom exacerbation | |
Grando | New approaches to the treatment of pemphigus | |
Asano et al. | Suppressive effects of Tripterygium wilfordii Hook f., a traditional Chinese medicine, on collagen arthritis in mice | |
Kim et al. | Inhibitory effects of deer antler aqua-acupuncture, the pilose antler of Cervus korean TEMMINCK var. mantchuricus Swinhoe, on type II collagen-induced arthritis in rats | |
Olson et al. | Skin reactivity to codeine and histamine during prolonged corticosteroid therapy | |
Edwards | Effects of cyproterone acetate on aggressive behaviour and the seminal vesicles of male mice | |
KIRSNER et al. | The effect of reserpine upon basal gastric secretion in man | |
Rullan et al. | Cyclosporine and murine allergic contact dermatitis | |
Deputte et al. | Behavioral effects of an antiandrogen in adult male rhesus macaques (Macaca mulatta) | |
Pontiroli et al. | Development of pituitary adenoma in women with hyperprolactinaemia: clinical, endocrine, and radiological characteristics. | |
Cagnacci et al. | Exogenous melatonin enhances luteinizing hormone levels of women in the follicular but not in the luteal menstrual phase | |
Katz et al. | Serotonergic (5-HT2) mediation of anxiety-therapeutic effects of serazepine in generalized anxiety disorder | |
Hadley et al. | Stimulation of the hypothalamo‐pituitary‐adrenal axis in the rat by the type 4 phosphodiesterase (PDE‐4) inhibitor, denbufylline | |
Dammann et al. | The effects of lansoprazole, 30 or 60 mg daily, on intragastric pH and on endocrine function in healthy volunteers | |
Gall et al. | Clinical and pathophysiological aspects of hydroxyethyl starch-induced pruritus: evaluation of 96 cases | |
Lam et al. | Effect of an opiate antagonist on the responses of circulating catecholamines and the renin-aldosterone system to acute sympathetic stimulation by hand-grip in man | |
Dinan et al. | The influence of cortisol on spontaneous and 5HT stimulated prolactin release in man | |
Tariot et al. | Physiologic and neuroendocrine responses to intravenous naloxone in subjects with Alzheimer’s disease and age-matched controls | |
Hohagen et al. | Influence of the cholinergic agonist SDZ 210-086 on sleep in healthy subjects | |
Origoni et al. | Topical oxatomide: an alternative approach for the treatment of vulvar lichen sclerosus |