EP0806946A2 - Verwendung von carotinoiden zur herstellung von arzneimitteln zur behandlung von dermatosen - Google Patents

Verwendung von carotinoiden zur herstellung von arzneimitteln zur behandlung von dermatosen

Info

Publication number
EP0806946A2
EP0806946A2 EP96902950A EP96902950A EP0806946A2 EP 0806946 A2 EP0806946 A2 EP 0806946A2 EP 96902950 A EP96902950 A EP 96902950A EP 96902950 A EP96902950 A EP 96902950A EP 0806946 A2 EP0806946 A2 EP 0806946A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
treatment
carotenoids
carotene
minutes
histamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP96902950A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Wolfgang Schmutzler
Karl Kolter
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BASF SE
Original Assignee
BASF SE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE1995103604 external-priority patent/DE19503604A1/de
Priority claimed from DE1995139743 external-priority patent/DE19539743A1/de
Application filed by BASF SE filed Critical BASF SE
Publication of EP0806946A2 publication Critical patent/EP0806946A2/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/01—Hydrocarbons
    • A61K31/015—Hydrocarbons carbocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/047—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates having two or more hydroxy groups, e.g. sorbitol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to the use of carotenoids for the production of medicaments for the treatment of inflammatory diseases which are not caused by an infection with microorganisms and not by exposure to light, in particular abacterial, non-light-induced dermatoses.
  • Inflammatory diseases in the sense of this invention can be both allergic and non-allergic in nature, the inflammatory reaction of the affected tissues not being caused by an infection with microorganisms and not being induced by exposure to light.
  • Dermatoses for example contact urticaria, urticaria pigmentosa
  • cutan-vascular forms of allergy such as, for example, neurodermatitis or urticaria or hyperkeratosis such as, for example, psoriasis
  • Reactive oxygen species or singlet oxygen most likely play an important role in the pathogenesis of various allergic and non-allergic inflammations. It is also suspected that such species are involved in the degranular tion with release of mediators from mast cells. What is certain is that degranulation of the mast cells and the basophilic granulocytes in the blood is the first step in the initiation of an allergic reaction.
  • histamine One of the most important mediators of allergic reactions is histamine and the inhibition of its release or action is an important principle in the therapy of allergic-inflammatory diseases.
  • glucocorticoids and hi-antagonists have been used so far, the latter being only suitable for systemic use.
  • Bronchial spasmolytics, cromones or steroid therapeutic agents are used in the treatment of bronchial asthma.
  • steroids or immunosuppressants are mostly used.
  • retinol vitamin A
  • retinoic acid derivatives for the treatment of some inflammatory dermatoses.
  • retinol was used for the therapy of juvenile acne and psoriasis, this therapy proving to be unsuitable because of the signs of overdose.
  • retinoids isotretinoin and etretinate are also suitable in principle for the treatment of acne and inflammatory hyperkeratoses such as psoriasis, but like retinol they easily lead to overdose symptoms.
  • etretinate can be classified as very problematic due to its strong teratogenic effect.
  • retinoids isotretinoin and etretinate can inhibit histamine release in human mast cells (D. Eichelberg and W. Schmutzler, Arch. Dermatol. Res., 280, 155-157 (1988)).
  • these active ingredients are not necessarily recommended for therapeutic use.
  • cartoinoids such as ß-carotene (Provita ⁇ min A) or canthaxanthin have been used for the therapy of light-induced dermatoses such as erythropoietic protoporphyria and sunlight urticaria as well as pigment disorders (vitiligo) (A. Hollander, "News from American dermatology ", The dermatologist, pp.
  • the object of the present invention was to expand the treatment options for certain inflammatory diseases, in particular dermatoses, by providing new means for this purpose.
  • carotenoids inhibit histamine release and are suitable for the use defined at the outset.
  • carotenoids used according to the invention are also canthaxanthin, zeaxanthin, citranaxanthin, astaxanthin or lycopene.
  • the carotenoids are preferably used in the form of solubilizates.
  • the carotenoids can be used both in topical and in systemically active preparations.
  • dosage forms customary for this purpose such as ointments, creams, gels, lotion, emulsions or solutions, are suitable in principle.
  • the carotenoids can both be injected and administered orally. All usual forms are suitable as oral dosage forms, e.g. Capsules, coated tablets, tablets or liquid preparations.
  • Dosage forms for topical use can contain 0.05 to 15, preferably 0.2 to 4% by weight of carotenoids. Depending on the severity of the illness to be treated, the dosage can be in wide limits can be varied, since side effects are virtually excluded due to the good tolerability of the carotenoids.
  • Daily doses of 5 to 750, preferably 10 to 300 mg are recommended for systemic therapy.
  • carotenoids are suitable for the production of medicaments for the treatment of allergic-inflammatory diseases of the nasal mucosa and the intestinal mucosa. Furthermore, they are suitable for the treatment of systemic allergic-inflammatory diseases. Preference is given to the production of medicaments for the treatment of skin diseases not induced by the action of light.
  • the histamine-inhibiting effect is described in the experiments below.
  • the carotenoid used was ⁇ -carotene in the form of a solubilizate, consisting of 4% by weight of ⁇ -carotene, 22% by weight of ethoxylated 12-hydroxystearic acid as a solubilizer and water ad 100% by weight.
  • the experiments were carried out on adenoid mast cells, skin mast cells and peripheral monocytes.
  • the stimulation was done with Concanavalin A or the inflammation mediator C5a.
  • Adenoid vegetation (pharyngeal tonsil) is placed in Hanks buffer immediately after the operation and passed through the complete test within 90 to 120 minutes.
  • the tissue is first comminuted with an "Mclwain and Buddle science chopper" (literature: Handbuch der experimental Pharma ⁇ kologie, vol. 18/1, 342, 1966).
  • a part by weight of adenoid is taken up in a 5-fold volume of Hanks buffer and placed in an ice bath.
  • the suspension is now drawn up five times with a plastic syringe (without a cannula) and squeezed out again. After resting in the ice bath for 10 minutes, the same process is repeated again.
  • the ZeilSuspension is filtered through three layers of gauze, then centrifuged for 5 minutes at 125 xg. The supernatant is suctioned off, the sediment is resuspended in 1 ml Hanks buffer and made up with 10 ml Hanks buffer. The cell suspension is filtered through a Vyon filter with 100 ⁇ pore size (W. Kopp cell rubber, Aachen), centrifuged again, resuspended and again filtered through Vyon filters.
  • the mixture was centrifuged at 4 ° C. and the histamine in the supernatant and sediment were determined separately using the radioimmunoassay (Dianova-Immunotechmaschinesgesellschaft, Hamburg).
  • the monocytes are isolated with a purity of approx. 85% from leukocyte concentrates (buffy coats) by centrifugal centrifugation.
  • the buffy coats are distributed over 2 tubes and brought to a total volume of 30 ml with spinner medium (Gibco, Paisley, Scotland).
  • This suspension is carefully layered over 20 ml of Ficoll (Pharmacia, Freiburg i. Brsg.) And centrifuged at 532 x g at 20 ° C. for 40 minutes. The band over the Ficoll is removed (the rest is discarded) and made up to 50 ml with spinner medium.
  • the sediment After 10 minutes of centrifugation at 299 x g and 4 ° C, the sediment is resuspended in 10 ml of spinner medium and centrifuged again. The sediment is resuspended in 3 ml and placed on a prepared 55% Percoll gradient (300 to 600 million mononuclear cells / tubes). After centrifugation at 532 x g for 40 minutes and 20 ° C., the monocytes are found in the upper band and the lymphocytes in the lower band. The upper band is removed and washed three times in spinner (resuspend sediment in spinner), make up to 50 ml and centrifuge at 299 x g for 10 minutes). After the second wash, the number of living monocytes is determined by a vitality count with trypan blue and, after the last wash, set to a cell number of 3 million cells per 200 ⁇ l of Iscoves medium.
  • the sediment is then resuspended in such a way that 200 ⁇ l contain approx. 3 ⁇ 10 6 living cells.
  • Iscoves medium 200 ⁇ l of Iscoves medium (Gibco, Paisley, Scotland) are added to the mixture, 50 ⁇ l of a dilution of beta-carotene or placebo solution in Iscoves medium in order to obtain the desired final concentration. After 60 minutes of equilibration, either 50 ⁇ l buffer or 50 ⁇ l C5a solution (Sigma,
  • the mixture is centrifuged and the histamine content is determined separately in the supernatant and sediment using the radioimmunoassay (Dianova-Immunotech, Hamburg).
  • DMEM buffer Dulbecco's Minimum Essential Medium
  • the skin mast cells are isolated from foreskin tissue, which is placed in buffer immediately after the operation and processed within 24 hours.
  • the tissue is crushed manually and washed twice by suspending the tissue with 10 ml DMEM buffer / 1 g tissue, centrifuging for 5 minutes at 4 ° C. and 1000 rpm and separating from the buffer. This is followed by treatment with Collagenase I (Washington / Cell Systems, Remagen; 142 U / mg) and hyaluronic type IS (Sigma; 440 U / mg), 10 ml DMEM buffer containing 1.5 mg / g per gram of tissue. ml collagenase and 0.5 mg / ml hyaluronidase can be used.
  • the mixture is incubated for 60 minutes at 37 ° C. in a shaking bath. After the incubation, a suspension is produced by mechanical dispersion using a syringe, which is filtered through 3-layer gauze and then centrifuged for 5 minutes at 4 ° C. and 1000 rpm. The supernatant is decanted, the cell pellet suspended in 1 ml DMEM buffer and made up to 10 ml with buffer and again under the conditions mentioned above. centrifuged. This process is repeated two more times and the cell pellet is taken up in 1 ml of DMEM buffer.
  • the cell pellets were equilibrated with 2 ml of a CaCl 2 -containing DMEM buffer (2.8 mmolar of CaCl) and the various concentrations of beta-carotene in a water bath at 37 ° C. After 5 minutes, 50 mg of substance P (neuropeptide; Sigma company) were added in a volume of 50 ⁇ l, so that the final volume was 500 ⁇ l. After a further 10 minutes of incubation at 37 ° C., the mixture was centrifuged at 4 ° C. and the histamine in the supernatant and sediment were determined separately using the radioimmunoassay (Dianova-Iirauumotechmaschinesgesellschaft, Hamburg).
  • substance P neuropeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen, die nicht durch Lichteinwirkung oder eine Infektion mit Mikroorganismen hervorgerufen werden.

Description

Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Dermatosen
Beschreibung
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Carotinoi¬ den zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von entzünd¬ lichen Erkrankungen, die nicht durch eine Infektion mit Mikroor- ganismen und nicht durch Lichteinwirkung hervorgerufen werden, insbesondere abakterielle, nichtlichtinduzierte Dermatosen.
Entzündliche Erkrankungen im Sinne dieser Erfindung können sowohl allergischer als auch nicht-allergischer Natur sein, wobei die entzündliche Reaktion der betroffenen Gewebe nicht durch eine Infektion mit Mikroorganismen hervorgerufen und nicht durch Lichteinwirkung induziert wird.
Entsprechende Erkrankungen sind beispielsweise:
Pollinose (saisonale Rhinitis)
Perenniale Rhinitis
Polyposis nasi entzündliche Erkrankungen des Gastrointestinaltrakts wie beispielsweise Enterocolitis regionalis (Morbus Crohn) ,
Colitis ulcerosa, Colon irritabile
Dermatosen beispielsweise Kontakturtikaria, Urtikaria pigmen- tosa
Vasculitis allergica - Insektenallergie
Asthma bronchiale allergische Reaktionen des äußeren Auges allergische und pseudoallergische Arzneimittelreaktionen systemische Mastozytose - Autoimmunerkrankungen beispielsweise systemischer Lupus ery- thematodes, Sjögrens Syndrom, Thyreoditis, Insulitis, Glome- rulonephritis
Nichtlichtinduzierte, abakterielle entzündliche Dermatosen sind vor allem cutan-vaskuläre Formen der Allergie wie beispielsweise Neurodermitis oder Urticaria oder auch Hyperkeratosen wie bei¬ spielsweise die Psoriasis.
Bei der Pathogenese verschiedener allergischer und nichtallergi- scher Entzündungen spielen höchstwahrscheinlich reaktive Sauer¬ stoff-Spezies oder Singulett-Sauerstoff eine wichtige Rolle. Man vermutet auch eine Beteiligung solcher Spezies an der Degranula- tion mit Freisetzung von Mediatoren aus Mastzellen. Sicher ist, daß eine Degranulation der Mastzellen und der basophilen Granulo- zyten im Blut den ersten Schritt bei der Einleitung einer aller¬ gischen Reaktion darstellt.
Einer der wichtigsten Mediatoren allergischer Reaktionen ist das Histamin und die Hemmung seiner Freisetzung oder Wirkung stellt ein wichtiges Prinzip bei der Therapie von allergisch-entzündli¬ chen Erkrankungen dar.
Nach neueren Unternehmungen wird Histamin nicht nur in MastZel¬ len, sondern auch in menschlichen Monozyten in beträchtlichen Maßen freigesetzt (G. Zwadlo-Klarwasser et al., Agent Actions 41, Special Conf. Issue: C99-C100, (1994)).
Bei der Therapie allergischer Dermatosen Erkrankungen, beispiels¬ weise sind bisher vor allem Glucokortikoide und Hi-Antagonisten eingesetzt worden, wobei letztere sich nur zur systemischen An¬ wendung eignen.
Bei der Behandlung von Asthma bronchiale werden neben Bronchio- spasmolytika, Cromone oder Steroid-Therapeutika eingesetzt. Bei Autoimmunerkrankungen kommen meist Steroide oder auch Immun- suppresiva zum Einsatz.
Zur Behandlung einiger entzündlicher Dermatosen ist die Anwendung von Retinol (Vitamin A) und Retinsäurederivaten bekannt. So wurde Retinol zur Therapie von juveniler Akne und von Psoriasis einge¬ setzt, wobei sich diese Therapie wegen der Überdosierungserschei- nungen als wenig geeignet erwies.
Auch die Retinoide Isotretinoin und Etretinat eignen sich grund¬ sätzlich zur Therapie von Akne und entzündlichen Hyperkeratosen wie Psoriasis, führen aber wie Retinol leicht zu Überdosierungs- Symptomen. Zudem ist Etretinat wegen seiner stark teratogenen Wirkung als sehr problematisch einzustufen.
(Vgl. "W. Forth (Herausg.), Pharmakologie und Toxikologie, S. 404-5, 4. Auflage, BI Wissenschaftsverlag, Mannheim).
Es wurde auch gefunden, daß die Retinoide Isotretinoin und Etre¬ tinat in menschlichen Mastzellen die Histaminfreisetzung inhibie¬ ren können (D. Eichelberg und W. Schmutzler, Arch. Dermatol. Res., 280. 155-157 (1988)). Wegen der bereits erwähnten Nebenwir- kungen empfehlen sich diese Wirkstoffe jedoch nicht unbedingt zur therapeutischen Anwendung. Weiterhin ist bekannt, daß Cartoinoide wie ß-Carotin (Provita¬ min A) oder Canthaxanthin zur Therapie lichtinduzierter Dermato¬ sen wie erythropoetischer Protoporphyrie und Sonnenlichturticaria sowie von PigmentStörungen (Vitiligo) angewandt wurden (A. Hol- lander, "Neues aus der amerikanischen Dermatologie", Der Haut¬ arzt, S. 379-383 (1971)). Die therapeutische Wirkung von Carotinoiden bei Sonnenlichturticaria gilt aber als unsicher (F. Lawlor et al., Z. Hautkrankh., £5,, 17-27 (1989); A. Taaffe, Postgrad. Med. J. , 51, 732-736 (1977).
Zur Behandlung der allergisch-entzündlichen Neurodermitis gibt es bisher keine gesicherte Therapie.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, die Behandlungsmög- lichkeiten bestiirimter entzündlicher Erkrankungen, insbesondere Dermatosen, durch die Bereitstellung von für diesen Zweck neuen Mitteln zu erweitern.
Es wurde nun gefunden, daß Carotinoide die Histaminfreisetzung inhibieren und sich für die eingangs definierte Verwendung eig¬ nen.
Erfindungsgemäß verwendete Carotinoide sind neben dem bevorzugten ß-Carotin auch Canthaxanthin, Zeaxanthin, Citranaxanthin, Astaxanthin oder Lykopin. Die Carotinoide werden bevorzugt in Form von Solubilisaten eingesetzt.
Die Carotinoide können sowohl in topischen als auch in systemisch wirkenden Zubereitungen eingesetzt werden.
Zur topischen Anwendung eignen sich grundsätzlich alle für diesen Zweck üblichen Darreichungsformen wie Salben, Cremes, Gele, Lo¬ tionen, Emulsionen oder Lösungen.
Zur systemischen Behandlung können die Carotinoide sowohl inji¬ ziert als auch oral verabreicht werden. Als orale Darreichungs- formen eignen sich alle dafür üblichen Formen wie z.B. Kapseln, Dragees, Tabletten oder flüssige Zubereitungen.
Die Herstellung solcher Darreichungsformen und die dafür üblichen pharmazeutischen Hilfsstoffe sind dem Fachmann bekannt.
Darreichungsformen für die topische Anwendung können 0,05 bis 15, vorzugsweise 0,2 bis 4 Gew.-% an Carotinoiden enthalten. Die Do- sierung kann je nach Schwere der zu behandelnden Erkrankung in weiten Grenzen variiert werden, da wegen der guten Verträglich¬ keiten der Carotinoide Nebenwirkungen quasi ausgeschlossen sind.
Zur systemischen Therapie empfehlen sich Tagesdosen von 5 bis 750, vorzugsweise 10 bis 300 mg.
Aufgrund der guten Verträglichkeit und des geringen toxischen Potentials der Carotinoide eignen sich diese hervorragend zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von nichtlichtindu- strierten, entzündlichen akuten oder chronisch rezidivierenden Erkrankungen, die nicht durch eine Infektion mit Mikroorganismen hervorgerufen werden.
Erfindungsgemäß eignen sich Carotinoide zur Herstellung von Arz- neimitteln zur Behandlung von allergisch-entzündlichen Erkrankun¬ gen der Nasenschleimhaut und der Darmschleimhaut. Weiterhin eig¬ nen sie sich zur Behandlung von systemischen allergisch-entzünd¬ lichen Erkrankungen. Bevorzugt ist die Herstellung von Arzneimit¬ teln zur Behandlung von nicht durch Lichteinwirkung induzierten Hauterkrankungen.
Wegen der inhibierenden Wirkung auf die Histaminfreisetzung eig¬ nen sie sich besonders bevorzugt zur Therapie von allergisch-ent¬ zündlichen Dermatosen wie der Neurodermitis.
In den nachstehenden Versuchen wird die histamininhibierende Wir¬ kung beschrieben. Als Carotinoid wurde dabei ß-Carotin in Form eines Solubilisats, bestehend aus 4 Gew.-% ß-Carotin, 22 Gew.-% ethoxilierter 12-HydroxyStearinsäure als Solubilisator und Wasser ad 100 Gew.-%, eingesetzt.
Die Versuche wurden an adenoidalen Mastzellen, Hautmastzellen und peripheren Monozyten durchgeführt. Die Stimulierung erfolgte mit Concanavalin A oder dem Entzündungsmediator C5a.
Bestimmung der Histaminfreisetzung aus adenoidalen Mastzellen, peripheren Blutmonozyten und Hautmastzellen. Testverfahren
1. Mastzellen aus adenoiden Vegetationen
Als Medium wird durchgehend kompletter Hanks-Puffer vom pH 7,4 folgender Zusammensetzung verwendet:
1. 100 ml 8,5 g % NaCl
2. 10 ml 4,0 g % KC1 3. 10 ml 0,6 g % KH2P04
4. 10 ml 0,6 g % Na2HP04x2H20
5. 10 ml 3,5 g % NaHC03 (stets frisch bereitet)
6. 10 ml 1,4 g % CaCl x2H20
7. 10 ml 1,0 g % MgCl2x6H20 8. 10 ml 1,0 g % MgS04x7H20
9. 1,0 g D-Glucose 10. Doppelt-destilliertes Wasser auf 1000 ml auffüllen
Zur Histaminfreisetzung wurden die Zellen mit Concanavalin A (Sigma, München) stimuliert.
Isolierung der Mastzellen
Adenoide Vegetationen (Rachenmandel) werden unmittelbar nach der Operation in Hanks-Puffer eingelegt und innerhalb von 90 bis 120 Minuten durch den kompletten Versuch geführt. Hierzu wird das Gewebe zunächst mit einem "Mcllwain and Buddle tis- sue chopper" (Literatur: Handbuch der experimentellen Pharma¬ kologie, Band 18/1, 342, 1966) zerkleinert. Ein Gewichtsteil Adenoid wird im 5-fachen Volumen Hanks-Puffer aufgenommen und ins Eisbad gestellt. Die Suspension wird nunmehr fünfmal mit einer Plastikspritze (ohne Kanüle) aufgesogen und wieder aus¬ gedrückt. Nach 10-minütiger Ruhe im Eisbad wird der gleiche Vorgang nochmals wiederholt. Die ZeilSuspension wird durch drei Lagen Mull filtriert, anschließend 5 Minuten mit 125 x g zentrifugiert. Der Überstand wird abgesaugt, das Sediment in 1 ml Hanks-Puffer resuspendiert und mit 10 ml Hanks-Puffer aufgefüllt. Die Zellsuspension wird durch ein Vyon-Filter mit 100 μ-Porengröße (W. Kopp Zellkautschuk, Aachen) filtriert, wieder zentrifugiert, resuspendiert und nochmals durch Vyon- Filter filtriert. Danach wird wieder zentrifugiert und das Sediment in "1 ml Hanks-Puffer aufgenommen. In dieser Suspen¬ sion werden die Zellen nach Anfärbung mit Alcianblau-Lösung (1 g Alcianblau, 45 ml absoluter Alkohol, 45 ml 1 % Natriu - sulfathydrit, 10 ml Eisessig) gezählt. Zur Testung wurden 2 bis 3x 105 Mastzellen mit Hanks-Puffer und den verschiedenen Konzentrationen des Beta-Carotins im Wasserbad bei 37°C eguilibriert. Nach 5 Minuten wurden 50 mg Concanavalin A in einem Volumen von 50 μl zugesetzt, so daß das Endvolumen des Ansatzes 500 μl betrug. Nach 10 Minuten weiterer Inkubation bei 37°C wurde bei 4°C zentrifugiert und das Histamin in Überstand und Sediment getrennt bestimmt unter Verwendung des Radio-Immuno-Assays (Dianova-Immunotech Vertriebsgesellschaft, Hamburg).
Die Ergebnisse sind in Tabelle I aufgeführt.
Tabelle I
Con A-stimulierte Histaminfreisetzung in Adenoidzellen
Konzentration Histaminfreisetzung
[mol/1] [% Gesamthistamin] ß-Carotin bzw. Placebo gemittelt (n=7) ß-Carotin
0 (Basiswert Puffer) 21,7 ιo-6 16,5 ιo-5 12,5
10-4 7,1
10-3 2,1
Placebo
0 (Basiswert Puffer) 14,6 ιo-6 12,9
10-5 15,2
10-3 4,7
Monozyten
Aus Leukozytenkonzentraten (buffy coats) werden durch Gra- dientenzentrifugation die Monozyten mit einer Reinheit von ca. 85 % isoliert. Hierzu werden die buffy coats auf 2 Rör- chen verteilt und mit Spinner-Medium (Gibco, Paisley, Schott¬ land) auf ein Gesamtvolumen von 30 ml gebracht. Diese Suspen¬ sion wird vorsichtig über 20 ml Ficoll (Pharmacia, Frei¬ burg i. Brsg.) geschichtet und 40 Minuten mit 532 x g bei 20°C zentrifugiert. Die Bande über dem Ficoll wird abgenommen (der Rest verworfen) und auf 50 ml mit Spinner-Medium aufge¬ füllt. Nach 10 Minuten Zentrifugation mit 299 x g und 4°C wird das Sediment in 10 ml Spinner-Medium resuspendiert und nochmals zentrifugiert. Das Sediment wird in 3 ml resuspen- diert und auf einen vorbereiteten 55%igen Percoll-Gradienten gegeben (300 bis 600 Millionen mononukleäre Zellen/Röhrchen) . Nach Zentrifugation mit 532 x g für 40 Minuten und 20°C fin¬ den sich in der oberen Bande die Monozyten und in der unteren Bande die Lymphozyten wieder. Die obere Bande wird abgenommen und dreimal in Spinner gewaschen (Sediment in Spinner resus¬ pendieren) , auf 50 ml auffüllen und 10 Minuten bei 299 x g zentrifugieren) . Nach dem zweiten Waschen wird durch eine Vi¬ talitätszählung mit Trypanblau die Anzahl der lebenden Mono¬ zyten festgesetzt und nach dem letzten Waschen auf eine Zell- zahl von 3 Millionen Zellen pro 200 μl Iscoves-Medium einge¬ stellt.
Anschließend wird das Sediment so resuspendiert, daß 200 μl ca. 3 x 106 lebende Zellen enthalten.
Dem Ansatz werden noch 200 μl Iscoves-Medium (Gibco, Paisley, Schottland) zugesetzt, 50 μl einer Verdünnung von Beta-Caro- tin oder Placebolösung in Iscoves-Medium um die gewünschte Endkonzentration zu erhalten. Nach 60 Minuten Equilibrierung werden entweder 50 μl Puffer oder 50 μl C5a-Lösung (Sigma,
München) zur Herstellung einer C5a-Endkonzentration von 10-8 M für ein Endvolumen von 500 μl zugesetzt.
Nach 60 Minuten Inkubation wird zentrifugiert und der Hista- mingehalt mit dem Radio-Immuno-Assay (Dianova-Immunotech, Hamburg) in überstand und Sediment gesondert bestimmt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle II aufgeführt. Tabelle II
Spontane und C5a-induzierte Histaminfreisetzung (in % des Ge¬ samthistamins) aus peripheren Blutmonozyten des Menschen in An- und Abwesenheit von Beta-Carotin (n = 4)
Konz. Spontan [mol/1] Histaminfreisetzung [%] ß-Carotin Placebo
0 (Basis¬ 4.1 4.1 wert)
10"6 1.9 1.6 lO"5 0.7 1.8 lO-4 1.7 3.2
10-3 5.7 21.3
Konz. C5a tmol/1] ß-Carotin Placebo
0 (Basis¬ 2.4 2.4 wert)
10"6 2.9 3.2
10-3 9.3 26.9
Enzymatische Isolierung von humanen Hautmastzellen
DMEM-Puffer: Dulbecco's Minimum Essential Medium
Die Hautmastzellen werden aus Vorhautgewebe isoliert, welches unmittelbar nach der Operation in Puffer gegeben und inner¬ halb von 24 h weiterverarbeitet wird. Das Gewebe wird manuell zerkleinert und zweimal gewaschen, indem das Gewebe mit 10 ml DMEM-Puffer/1 g Gewebe suspendiert, 5 Minuten bei 4°C und 1000 upm zentrifugiert und vom Puffer abgetrennt wird. Anschließend erfolgt eine Behandlung mit Collagenase I (Washington/Cell Systems, Remagen; 142 U/mg) und Hyaluroni- dase Typ I-S (Sigma; 440 U/mg) , wobei pro Gramm Gewebe 10 ml DMEM-Puffer mit 1,5 mg/ml Collagenase und 0,5 mg/ml Hyaluronidase eingesetzt werden. Der Ansatz wird 60 Minu¬ ten bei 37°C im Schüttelbad inkubiert. Nach der Inkubation wird durch mechanische Dispersion mit Hilfe einer Spritze eine Suspension hergestellt, die durch 3-lagigen Mull fil¬ triert und anschließend 5 Minuten bei 4°C und 1000 upm zen¬ trifugiert wird. Der Überstand wird dekantiert, das Zell¬ pellet in 1 ml DMEM-Puffer suspendiert und mit Puffer auf 10 ml aufgefüllt und wiederum unter den oben genannten Bedin- gungen zentrifugiert. Dieser Vorgang wird noch zweimal wiederholt und das Zellpellet in 1 ml DMEM-Puffer aufge¬ nommen.
Anschließend erfolgt eine Zellzählung, wobei die Zellen nach Kimura mit Toluidinblau angefärbt werden (450 μl Kimura- lösung pro 50 μl ZeilSuspension) . Die Auszählung erfolgt in einer Neubauerkammer unter Auszählung aller 9 großen Quadrate.
Zur Testung wurden die Zellpellets mit jeweils 2 ml eines CaCl2-enthaltenden DMEM-Puffers (2,8 mmolar an CaCl ) und den verschiedenen Konzentrationen des Beta-Carotins im Wasserbad bei 37°C equilibriert. Nach 5 Minuten wurden 50 mg Substanz P (Neuropeptid; Firma Sigma) in einem Volumen von 50 μl zuge¬ setzt, sodaß das Endvolumen 500 μl betrug. Nach 10 Minuten weiterer Inkubation bei 37°C wurde bei 4°C zentrifugiert und das Histamin in Überstand und Sediment getrennt bestimmt unter Verwendung des Radio-Immuno-Assays (Dianova-Iirauumotech Vertriebsgesellschaft, Hamburg).
Die Ergebnisse sind in Tabelle III aufgeführt,
Tabelle III
Substanz P-stimulierte Histaminfreisetzung in Hautmastzellen
Konzentration Histaminfreisetzung +) [mol/1] [% Gesamthistamin] ß-Carotin
0 9,1
10"5 8,2
10"4 4,5
10- 5,4
Konzentration Histaminfreisetzung +' [mol/1] [% Gesamthistamin]
Placebo
0 5,2
10"5 6,2 lO"3 6,2
+) gemittelt über n=ll Versuche Mit steigender ß-Carotin-Konzentration tritt eine Hemmung der Histaminausschüttung ein. Dies ist bei den Leerversuchen (Placebo) nicht zu beobachten.

Claims

Patentansprüche
1. Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung eines Arzneimit- tels zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen, die nicht durch eine Infektion mit Mikroorganismen und nicht durch Lichteinwirkung hervorgerufen werden.
2. Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung eines Arzneimit- tels zur topischen oder systemischen Behandlung von nicht- lichtinduzierten, abakteriellen entzündlichen Dermatosen.
3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, betreffend die Behandlung von Neurodermitis.
4. Verwendung nach Anspruch 2, betreffend die Behandlung von Psoriasis.
5. Verwendung nach Anspruch 2, betreffend die Behandlung von nichtlichtinduzierter Urticaria.
6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei als Carotinoid ß-Carotin eingesetzt wird.
7. Verwendung nach Anspruch 6, wobei das Carotinoid als wäßriges Solubilisat eingesetzt wird.
EP96902950A 1995-02-03 1996-02-02 Verwendung von carotinoiden zur herstellung von arzneimitteln zur behandlung von dermatosen Withdrawn EP0806946A2 (de)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19503604 1995-02-03
DE1995103604 DE19503604A1 (de) 1995-02-03 1995-02-03 Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Dermatosen
DE19539743 1995-10-25
DE1995139743 DE19539743A1 (de) 1995-10-25 1995-10-25 Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen
PCT/EP1996/000381 WO1996023489A2 (de) 1995-02-03 1996-02-02 Verwendung von carotinoiden zur herstellung von arzneimitteln zur behandlung von dermatosen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP0806946A2 true EP0806946A2 (de) 1997-11-19

Family

ID=26012140

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP96902950A Withdrawn EP0806946A2 (de) 1995-02-03 1996-02-02 Verwendung von carotinoiden zur herstellung von arzneimitteln zur behandlung von dermatosen

Country Status (6)

Country Link
US (1) US5886053A (de)
EP (1) EP0806946A2 (de)
JP (1) JPH10513444A (de)
AU (1) AU4715796A (de)
CA (1) CA2210957A1 (de)
WO (1) WO1996023489A2 (de)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19653410A1 (de) * 1996-12-20 1998-06-25 Basf Ag Verwendung von Carotinoid-Solubilisaten zum Färben von Lebensmitteln und pharmazeutischen Zubereitungen
SE522246C2 (sv) * 1997-02-27 2004-01-27 Astacarotene Ab Oralt preparat för profylaktisk och terapeutisk behandling av Helicobacter Sp. infektion
JP2002513411A (ja) 1997-04-04 2002-05-08 ヘンケル コーポレーション 高いバイオアベイラビリティを有するルテインエステル
SE512531C2 (sv) 1997-09-04 2000-03-27 Astacarotene Ab Användning av åtminstone en typ av xantofyller för framställning av ett läkemedel för profylaktisk och/eller terapeutisk förbättring av muskelfunktionsdurationen hos däggdjur och/eller behandling av muskelstörningar eller - sjukdomar hos däggdjur
SE511237C2 (sv) * 1997-12-16 1999-08-30 Astacarotene Ab Användning av åtminstone en typ av xantofyller för framställning av ett humant eller verinärmedicinskt läkemedel för profylaktisk behandling av mastit hos däggdjursmammor
SE524337C2 (sv) 1998-10-16 2004-07-27 Astacarotene Ab Användning av åtminstone en typ av xantofyller för framställning av ett läkemedel för profylaktisk och/eller terapeutisk behandling av matsmältningsbesvär
SE9903619D0 (sv) * 1999-10-07 1999-10-07 Astacarotene Ab Use and method of treatment
SE0001071D0 (sv) * 2000-03-27 2000-03-27 Astacarotene Ab Method of inhibiting the expression of inflammatory cytokines and chemokines
US7078040B2 (en) * 2000-03-27 2006-07-18 Fuji Chemical Industry Co., Ltd. Method of inhibiting the expression of inflammatory cytokines and chemokines
DE10221212A1 (de) * 2002-05-13 2003-11-27 Andreas Maack Sporopollenin enthaltende lösliche Zusammensetzung und Verwendung
US20050026874A1 (en) * 2002-07-29 2005-02-03 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid ether analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of liver disease
US20050004235A1 (en) * 2002-07-29 2005-01-06 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of liver disease
US7723327B2 (en) * 2002-07-29 2010-05-25 Cardax Pharmaceuticals, Inc. Carotenoid ester analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of liver disease
US20050148517A1 (en) * 2002-07-29 2005-07-07 Lockwood Samuel F. Carotenoid ether analogs or derivatives for controlling connexin 43 expression
US20050059659A1 (en) * 2002-07-29 2005-03-17 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid analogs or derivatives for controlling C-reactive protein levels
US7375133B2 (en) * 2002-07-29 2008-05-20 Cardax Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions including carotenoid ether analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of disease
US7345091B2 (en) * 2002-07-29 2008-03-18 Cardax Pharmaceuticals, Inc. Carotenoid ether analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of disease
US20050059635A1 (en) * 2002-07-29 2005-03-17 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid ester analogs or derivatives for controlling C-reactive protein levels
US7521584B2 (en) * 2002-07-29 2009-04-21 Cardax Pharmaceuticals, Inc. Carotenoid analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of disease
US7763649B2 (en) * 2002-07-29 2010-07-27 Cardax Pharmaceuticals, Inc. Carotenoid analogs or derivatives for controlling connexin 43 expression
US20050009788A1 (en) * 2002-07-29 2005-01-13 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid ester analogs or derivatives for controlling connexin 43 expression
US7320997B2 (en) * 2002-07-29 2008-01-22 Cardax Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions including carotenoid ester analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of disease
US20050049248A1 (en) * 2002-07-29 2005-03-03 Lockwood Samuel Fournier Carotenoid ether analogs or derivatives for controlling C-reactive protein levels
US20050143475A1 (en) * 2002-07-29 2005-06-30 Lockwood Samuel F. Carotenoid analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of ischemic reperfusion injury
EP1532108B1 (de) 2002-07-29 2016-06-29 Cardax Pharma, Inc. Astaxanthinester zur vermeidung und verbesserung von krankheiten
JP3780236B2 (ja) * 2002-08-07 2006-05-31 キヤノン株式会社 ガスが浸透した材料の保管方法
JP2006503194A (ja) * 2002-10-18 2006-01-26 コーロン インダストリーズ インク 微細多孔質繊維及びその製造方法
US20060058269A1 (en) * 2004-04-14 2006-03-16 Lockwood Samuel F Carotenoid analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of inflammation
CA2564066A1 (en) * 2004-04-14 2005-11-03 Hawaii Biotech, Inc. Carotenoid analogs or derivatives for the inhibition and amelioration of inflammation
US7351424B2 (en) * 2004-07-22 2008-04-01 Bio Lut S.A. De C.V. Enhanced purity trans-lutein-ester compositions and methods of making same
US20060269497A1 (en) * 2005-05-27 2006-11-30 Yamaha Hatsudoki Kabushiki Kaisha Trichogenous agent
FR2935610B1 (fr) * 2008-09-05 2010-10-29 Lvmh Rech Composition cosmetique ou dermatologique contenant un melange d'huiles essentielles et son utilisation, notamment pour le soin des peaux sensibles ou sensibilisees
TWI492744B (zh) * 2009-12-04 2015-07-21 Abbott Lab 使用類胡蘿蔔素調節早產兒發炎症之方法
US9034342B2 (en) * 2010-03-25 2015-05-19 Gateway Health Alliances, Inc Methods and compositions to reduce fat gain, promote weight loss in animals

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2591105B1 (fr) * 1985-12-11 1989-03-24 Moet Hennessy Rech Composition pharmaceutique, notamment dermatologique, ou cosmetique, a base de phases lamellaires lipidiques hydratees ou de liposomes contenant un retinoide ou un analogue structural dudit retinoide tel qu'un carotenoide.
DE4031094A1 (de) * 1990-10-02 1992-04-09 Basf Ag Verfahren zur herstellung von stabilen injizierbaren (beta)-carotin-solubilisaten
FR2683722B1 (fr) * 1991-11-14 1995-05-24 Arkopharma Laboratoires Medicament pour le traitement de fond de l'asthme a base de beta-carotene.

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO9623489A2 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO1996023489A3 (de) 1996-10-03
AU4715796A (en) 1996-08-21
WO1996023489A2 (de) 1996-08-08
US5886053A (en) 1999-03-23
JPH10513444A (ja) 1998-12-22
CA2210957A1 (en) 1996-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0806946A2 (de) Verwendung von carotinoiden zur herstellung von arzneimitteln zur behandlung von dermatosen
EP2192911B1 (de) Pflanzenextrakt aus thc-armen cannabis zur behandlung von erkrankungen
DE69735814T2 (de) Verwendung von komplexen in die herstellung von präparaten zur behandlung empfindlicher haut, verfahren zur herstellung und hypoallergenische präparate
DE69822546T2 (de) Kosmetische oder pharmazeutische Zusammensetzung, die ein Kulturmedium eines Mikroorganismus enthält
WO1994001089A1 (de) Liposomen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur herstellung eines arzneimittels
DE69818806T2 (de) Antimikrobielle kosmetische präparate
AT392732B (de) Hautregenerierende und hydratisierende kosmetische mittel sowie ein verfahren zu deren herstellung
DE4106026C2 (de)
CN112006970B (zh) 一种抗瘙痒功效组合物及其制备方法与应用
DE60128238T2 (de) Antiallergische verbindungen und diese enthaltende medikamente, nahrungsmittel, getränke oder kosmetika sowie verfahren zu deren herstellung
DE3936328A1 (de) Pharmazeutische praeparate
EP0201053B1 (de) Verwendung von Pollenextrakten zur Herstellung von pharmazeutischen Präparaten zur prophylaktischen Behandlung von Allergien
DE69814058T2 (de) Neue Salicylsäurederivate und ihre Verwendung in kosmetischen oder dermatologischen Zusammensetzung
EP0501206B1 (de) Phenonverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
DE19539743A1 (de) Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen
DE19503604A1 (de) Verwendung von Carotinoiden zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Dermatosen
EP2877153B1 (de) Vitaminzubereitung
DE1667890C3 (de) Dermatologische und kosmetische äußerlich anzuwendende Mittel zur Be handlung von Hautkollagenosen
EP3795163A1 (de) Topische pflanzenextraktformulierung enhaltend urtica dioica und vitamin a
DE3723248A1 (de) Verwendung von thiosulfinsaeurederivaten zur behandlung von entzuendungserkrankungen
EP0010208A1 (de) Pharmazeutisches Mittel, enthaltend all-E- oder 13-Z-7,8-Dehydro-Retinsäure und Verfahren zu seiner Herstellung
EP1131101B1 (de) Khellin-zubereitung und deren verwendung zur topischen therapie
US5091522A (en) Retinoic esters of d-desosamine, process for their preparation and their use in human or veterinary medicine and in cosmetic compositions
CH690023A5 (de) Mittel zur Behandlung krankhafter Zellveränderungen der Nasenschleimhaut.
EP1371372A1 (de) Verwendung von Wirkstoffgemischen enthaltend Tocopherole und Extrakte des Harpagophytum procumbens zur Herstellung eines Medikamentes gegen rheumatische Arthritis

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 19970728

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB IT LI NL SE

17Q First examination report despatched

Effective date: 20010504

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION HAS BEEN WITHDRAWN

18W Application withdrawn

Withdrawal date: 20010910