EP0698008A1 - Novel lupane derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing same - Google Patents

Novel lupane derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing same

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EP0698008A1
EP0698008A1 EP94916260A EP94916260A EP0698008A1 EP 0698008 A1 EP0698008 A1 EP 0698008A1 EP 94916260 A EP94916260 A EP 94916260A EP 94916260 A EP94916260 A EP 94916260A EP 0698008 A1 EP0698008 A1 EP 0698008A1
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EP
European Patent Office
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acid
oyl
temperature
region
general formula
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP94916260A
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German (de)
French (fr)
Inventor
Norbert Dereu
Michel Evers
Christèle Poujade
Françoise Soler
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Aventis Pharma SA
Original Assignee
Rhone Poulenc Rorer SA
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Filing date
Publication date
Application filed by Rhone Poulenc Rorer SA filed Critical Rhone Poulenc Rorer SA
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Withdrawn legal-status Critical Current

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    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
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    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
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    • C07C271/28—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atom of at least one of the carbamate groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring
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    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
    • C07C2603/90—Ring systems containing bridged rings containing more than four rings

Definitions

  • the present invention relates to lupane derivatives, of general formula:
  • R 1 and R 2 are hydroxy or acyloxy and R 3 is in particular methyl. These derivatives are useful in the field of anticancer agents.
  • R ' is a hydrogen atom or an alkyl radical
  • X represents a carbamoyl, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl radical
  • y is a substituted phenylene radical of general formula:
  • R 1 and R 2 which are identical or different, represent hydrogen or halogen atoms or alkyl, alkyloxy or nitro radicals, at least one being other than hydrogen,
  • R ° and R °° identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals (it being understood that each unit -CRoR °° is not necessarily identical to the previous one) and, n is an integer from 6 to 12, m is an integer from 0 to 2 and p is an integer from 0 to 2 and are such that m + n + p is between 6 and 12, as well as their pharmaceutically acceptable salts when they exist, exhibit a cytoprotective effect cells infected with an HIV virus (Human Immunodeficiency Virus) as well as an activity inhibiting the production of reverse transcriptase of an HIV virus.
  • HIV virus Human Immunodeficiency Virus
  • the alkyl radicals are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms and that the halogen atoms can be chosen from fluorine, chlorine, bromine and iodine .
  • the products of general formula (I) have stereoisomeric forms, it is also understood that the stereoisomeric forms and their mixtures also come within the scope of the present invention.
  • the lupane derivative of general formula (I) can be obtained from a lupane derivative of general formula:
  • R °, R °°, m and p are defined as above and R "'is defined as above.
  • the hydroxy radicals of the lupane derivative of general formula (IV) are preferably protected by radicals compatible which can be set up and removed without touching the rest of the molecule.
  • R ' is a hydrogen atom
  • the protective groups can be chosen from the radicals described by TW GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) or by Me OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973) . It is in particular advantageous to use protective radicals which can be eliminated simultaneously. We will choose radicals which can be eliminated in neutral, basic or acidic medium.
  • the hydroxy radicals can be protected in the ester state (formyloxy, acetoxy, isbutbut, trichloroacetyloxy, phenoxyacetyloxy, benzyloxy); in this case, the elimination is carried out by hydrolysis in a basic medium, in particular in the presence of soda at a temperature of between 10 and 50 ° C.
  • Protection can also be carried out in the ketone state, in the form of carbonate by a radical —COOR a in which R a is an alkyl or benzyl radical optionally substituted or else by a trialkylsilyl radical; the acid protective rafts can be chosen from alkyl (methyl, ethyl, t.butyl), substituted alkyl (trichlorethyl, haloethyl, p.
  • toluenesulfonyl-ethyl benzyl, benzyl substituted by a nitro radical, benzhydryl, triphenylmethyl, benzyloxymethyl ...), alkyloxyalkyl (methoxymethyl), tetrahydropyranyl or trimethylsilyl.
  • the reaction is carried out according to the usual methods of condensation of an amine on an acid.
  • an acid acceptor such as an organic nitrogenous base (trialcoylamine, pyridine, N-methyl-morpholine, d ⁇ aza-1,8 b ⁇ cyclo [5.4.0] undecene-7, diaza1,5 bicyclo [4.3.0] nonene-5 for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (dichloromethane, dichlorethane, chloroform for example) or an amide (dimethylformamide for example).
  • a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodnmide hydrochloride for example) and optionally ment in the presence of a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide, at a temperature between -20 and 40 ° C.
  • a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodnmide hydrochloride for example)
  • a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide
  • the condensation of the drain of general formula (Va) is preferably carried out from the hydrochloride of the amine. It is generally carried out on the acid chloride or on an activated ester.
  • the acid derived from lupane, of general formula (IVa) can be prepared by the action of an amino acid of general formula:
  • the reaction of the amino acid on the chloride of lupen-20 (29) oic-28 acid of general formula (VII) is carried out according to the usual methods which do not alter the rest of the molecule.
  • the operation is carried out in particular in the presence of an organic nitrogenous base such as a trialkylamine (triethylamine for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (chloroform, 1,2-dichloroethane, dichloromethane) or in tetrahydrofuran or in a mixture of these solvents, at a temperature between 15 and 30 ° C.
  • the acid chloride of the lupane derivative of general formula (VII) can be prepared according to known methods. For example, the reaction is carried out by the action of oxalyl chloride or thionyl chloride, in a chlorinated solvent such as chloroform, dichloroethane or dichloromethane.
  • the amino acid of general formula (VI) can be prepared as described below in the examples.
  • the amine derived from lupane, of general formula (IVb), for which R '' 'is a hydrogen atom, can be prepared from a lupane derivative of general formula (VII), by the action of a diamine of general formula:
  • the derivatives (IVb) for which R '' 'is a methyl radical can be obtained by N-methylation of the product of general formula (IVb) for which R' '' is a hydrogen atom, according to the method of A. KATRITSKY , J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987).
  • the products of general formula (Va) or (Vb) can be prepared according to or by analogy with the methods described below in the examples.
  • the new lupane derivatives of general formula (I) can be purified if necessary by physical methods such as crystallization or chromatography.
  • the preparation is carried out by means of chiral derivatives of general formula (Va) or (Vb). It is understood that when it is desired to obtain a chiral intermediate, the separation is carried out according to the usual methods which do not affect the rest of the molecule, such as for example chromatography on a chiral phase, or by conversion of the racemic mixture into diastereoisomers and separation by crystallization or chromatography.
  • the products according to the invention can be converted into metal salts or into addition salts with a nitrogenous base according to the methods known per se.
  • These salts can be obtained by the action of a metal base (for example alkaline or alkaline earth), ammonia or an amine on a product according to the invention, in an appropriate solvent.
  • the salt formed precipitates after optional concentration of the solution; it is separated by filtration.
  • salts with alkali metals sodium, potassium, lithium
  • alkaline earth metals magnesium, calcium
  • the ammonium salt the salts of nitrogenous bases (ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine, diphenylenediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, argiinne, lysine, leucine).
  • nitrogenous bases ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine,
  • the new lupane derivatives according to the present invention are particularly useful for the prophylaxis and treatment of AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) and associated syndromes [ARC (AIDS related complex)].
  • prophylaxis we mean the treatment of subjects who have been exposed to HIV viruses, in particular asymptomatic HIV-positive people who are at risk of developing the disease in the months or years to come after primary infection.
  • the products according to the invention which are inhibitors of the cytopathogenic effect of HIV and inhibitors of the production of reverse transcriptase in cell culture at concentrations devoid of cytotoxic or cytostatic effect, are of particular interest. It has also been demonstrated that the products according to the invention are active for the treatment of conditions in which viruses of the herpes family are involved.
  • Herpes family is indeed the cause of many ailments, some of which can be very serious. It includes Herpes simplex, varicella-zoster, cytomegalovirus and Epstein-Barr virus. Herpes simplex can range from mild forms like cold sores to more serious forms like genital herpes and can even cause life-threatening encephalitis. Varicella zoster is the virus responsible for chickenpox and shingles, it can also cause more serious conditions including encephalitis.
  • Cytomegalovirus infections are generally asymptomatic in healthy subjects, but can become the cause of serious ophthalmic infections (retinitis) which can lead to blindness, morbidity and mortality in immunocompromised subjects (patients with AIDS or any other immunodeficiency, for example after organ transplantation or after cancer chemotherapy). Cytomegalovirus is also responsible for severe clinical manifestations for the fetus or the newborn in the case of a primary infection during pregnancy or during the transfusion of seropositive blood to a seronegative newborn.
  • 125 ⁇ l of a suspension of CEM cells (8 ⁇ 10 4 cells per ml) are then added to RPMI medium containing 10% fetal calf serum, 100 IU / ml of penicillin, 100 ⁇ g / ml of streptomycin and 2 ⁇ moles / ml of glutamine and the microplates are incubated for one hour at 37 ° C., under an atmosphere containing 5% carbon dioxide. For each concentration, the test is divided into two parts: one part (3 wells) on infected cells, for determining the antiviral activity and the other part (3 wells) on non-infected cells, to determine the cytotoxicity of the products.
  • the first series is then infected with HIV-1 (100 ⁇ l per well of a suspension of LAV-1-BRU virus containing 200-300 TCID50) while the other series receives 100 ⁇ l of RPMI medium as defined above. After 5 days of incubation, 100 ⁇ l of cells are removed to measure cell viability [determined according to a modification of the technique described by R. PAUWELS et al., J. VIROL. Meth., 20, 309-321 (1988)]. 10 ⁇ l of a solution containing 7 mg of MTT [3- (4, 5-dimethyl 2-thiazolyl bromide) -2,5-phenyltetrazolium bromide] per ml of isotonic phosphate buffer are added to this sample.
  • the protection rate (in%) of a given product is determined from the optical densities (OD) by the formula:
  • the inhibitory concentration 50% is determined.
  • the protection rate provided by the products according to the invention is between 20 and 100%.
  • the 50% inhibitory concentration of the products according to the invention is between 0.05 and 50 ⁇ g / ml when it can be determined.
  • the technique used consists in measuring the cytopathogenic effect of the virus and its protection by using products of general formula (I).
  • the antiviral activity is assessed by measuring the EC 50 (concentration necessary to inhibit 50% of the cytopathogenic effect induced by the virus).
  • the reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • 25 cm 3 of ethyl acetate are added.
  • the insoluble material is filtered and rinsed with a total of 25 cm of ethyl acetate.
  • the filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • the solid obtained (1.06 g) is chromatographed on a column 4 cm in diameter and 40 cm high in silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 95: 5 (in volumes), collecting 25 cm 3 fractions.
  • the first 35 fractions are eliminated, and the eluent is replaced by a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 90:10 (by volume), collecting fractions of 25 cm 3 .
  • the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the reaction mixture is acidified to a pH close to 2 using 5N hydrochloric acid and then 50 cm of distilled water are added.
  • the solid is separated by filtration and rinsed with 50 cm 3 in total of distilled water and then air dried.
  • the solid is suspended in 20 cm 3 of distilled water, filtered and rinsed with 50 cm 3 in total of distilled water and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-am ⁇ nooctano ⁇ que acid can be prepared as follows:
  • the residue is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate (60-40 by volume).
  • the fractions containing the product are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the methyl 5-amino-2-chlorobenzoate can be obtained in the following way: To 100 cm 3 of methanol cooled to a temperature close to -20 ° C., add in 1 minute, 1.5 cm 3 of thionyl chloride. Stirring is continued for 5 minutes at a temperature in the region of -20 ° C., then added
  • Ethyl 2-am ⁇ no-5-fluorobenzoate can be obtained in the following manner:
  • the reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • 50 cm 3 of ethyl acetate are added.
  • the insoluble material is filtered and rinsed with a total of 50 cm 3 of ethyl acetate.
  • the filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • the solid obtained (2.07 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 93: 7 (by volume).
  • Methyl 3-amino-4-chlorob nzoate can be obtained in the following manner:
  • the mixture is brought to a temperature in the region of 20 ° C. and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 20 ° C.
  • the solid obtained (2.25 g) is taken up in 50 cm 3 of diethyl ether, filtered, rinsed with 40 cm total of diethyether and then dried under atmospheric pressure. 2.09 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate hydrochloride are thus obtained in the form of a white solid.
  • the hydrochloride is dissolved in a mixture of 50 cm 3 of distilled water, 5 cm 3 of 2N sodium hydroxide and 50 cm 3 of ethyl acetate.
  • the aqueous phase is decanted, the aqueous phase is extracted by 25 cm 3 of ethyl acetate.
  • the combined organic phases are dried over magnesium sulfate and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 1.71 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate are thus obtained.
  • the solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (4.5 g) is chromatographed on a column 6 cm in diameter containing 240 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride, ethyl acetate and methanol 9-9-1 by volume, collecting 75 cm fractions.
  • the first 7 fractions are eliminated; the following 43 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (650 mg) is chromatographed on a column 3.5 cm in diameter containing 115 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methanol and ethyl acetate 1-19 in volumes by collecting 50 cm 3 fractions.
  • the first 3 fractions are eliminated; the next 4 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 570 mg are thus obtained which are purified again by chromatography (column 3.5 cm in diameter, 100 g of silica (0.02-0.045 mm), eluent: ethyl acetate, volume of the fractions: 75 cm 3 ).
  • the first 19 fractions are eliminated; the following 31 are combined and concentrated under reduced pressure
  • the solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 50 cm 3 of distilled water and 50 cm 3 of ethyl acetate are added.
  • the organic phase is extracted and the aqueous phase is exhausted with 75 cm 3 in total of ethyl acetate.
  • the organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (1.6 g) is chromatographed on a column 5 cm in diameter containing 210 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 19-1 in volumes by collecting fractions of 75 cm3.
  • the first 67 fractions are eliminated; the following 63 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the organic phase is then dried over sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with dichloromethane.
  • the 120 fractions of 2 cm 3 are eliminated and the eluent is replaced by a mixture of dichloromethane and ethyl acetate (8: 2) (by volume).
  • the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • reaction mixture is acidified to a fold close to 2 using 4 cm 3 of hydrochloric acid
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane can be obtained in the following manner: 1000 cm 3 of a solution in dichloromethane of 3 ⁇ -acetoxylup chloride 20 (29) -en-28-oyl (prepared from 30 g of 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid) are added dropwise in approximately 10 hours to a solution of 46, 8 g of 1,7-diaminoheptane in
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride is prepared according to J. PROVITA and A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun., 41, 1200 (1976).
  • 3 ⁇ -acetoxylu ⁇ -20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
  • Methyl 4-amino-2-hydroyybenzoate can be prepared according to DJ Drain, DD Martin, BW Mitchell, DE Seymour and FS Spnng, J. Chem. Soc, 1498-1503 (1949).
  • Methyl 4-amino-2-chlorobenzoate can be prepared according to M. Rubin, U.C. Marks, II.Wishinsky and A. Lanzilotti, J. Am.Chem. Soc., 68, 623-24 (1946).
  • Example 12
  • Methyl 3-amino-2-hydroxybenzoate can be prepared according to A. Einborn and B. Pfyl J. Liebig's Ann. Chem., 311, 34-73 (1900).
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
  • Methyl 5-amino-2-hydroyybenzoate can be prepared according to F. Wessely, K. Benedikt and II. Benger, Monat. Chem., 80, 197-201 (1949).
  • Example 14
  • the organic phase is then dried over magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (1.1 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia 24-6-1 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-d ⁇ aminoheptane can be obtained as described in Example 9.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-d ⁇ aminoheptane can be obtained as described in Example 9.
  • 3-Bromo-5-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared in the manner below.
  • a suspension of 5 g of methyl 3-bromo ⁇ sophthalate in 20 cm 3 of a 0.50 N solution of barium hydroxide is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the solid is filtered, washed with 5 cm 3 of methanol and then treated with 20 cm 3 of 4N hydrochloric acid.
  • the aqueous phase is extracted with 40 cm 3 of diethyl ether.
  • the combined organic phases are washed with 40 cm 3 of distilled water, dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane can be obtained as described in Example 9.
  • 3-fluoro-4-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared in the following manner:
  • a solution of 2.5 g of dimethyl fluoro terephthalate and 11.8 cm 3 of 1N sodium hydroxide in 30 cm 3 of methanol is carried for 90 min. at a temperature close to reflux.
  • the reaction medium cooled to a temperature in the region of 25 ° C, is acidified with 12 cm 3 of 1N hydrochloric acid.
  • the white solid formed is filtered, washed with 100 cm 3 of distilled water and then dissolved in 100 cm 5 of ethyl acetate.
  • the organic phase is dried over magnesium sulphate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (520 mg) is recrystallized successively from 1,2-d ⁇ chloroethane and from water.
  • 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared as follows: A solution of 2 g of methyl 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoate and 428 mg of potassium hydroxide in a mixture of 40 cm 3 of methanol and 5 cm 3 of dimethylformamide is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 25 ° C and then for 20 hours at a temperature in the region of 50 ° C.
  • the suspension obtained is extracted using 200 cm 3 of ethyl acetate.
  • the organic phase is washed with 200 cm 3 of distilled water.
  • the organic phase is dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (3.4 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and methanol 9: 1 (by volume).
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing at least one product of general formula (I) optionally in the form of a salt, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants , or with another agent intended for the treatment of AIDS, an antiviral, immunomodulatory or antimicrobial agent.
  • a product of general formula (I) optionally in the form of a salt, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants , or with another agent intended for the treatment of AIDS, an antiviral, immunomodulatory or antimicrobial agent.
  • composition according to the invention is capable of keeping cells infected with an IIIV virus alive and therefore of reducing the progression to AIDS or of reducing its severity in subjects already infected by reducing the mortality of the infected cells.
  • the compositions can be used orally, parenterally or rectally.
  • compositions can be used for curative or preventive purposes in subjects having an immunodeficiency and / or infected with an HIV virus.
  • constitution of these compositions will be adapted to the particular case of the digestive tract of the immunocompromised.
  • compositions for oral administration tablets, pills, capsules, powders or granules can be used.
  • the active product according to the invention is mixed with one or more inert diluents or adjuvants, such as sucrose, lactose or starch.
  • compositions can include substances other than diluents, for example a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
  • a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
  • compositions for oral administration pharmaceutically acceptable solutions, suspensions, emulsions, syrups and elixirs containing inert diluents such as water or paraffin oil can be used.
  • inert diluents such as water or paraffin oil
  • These compositions can also include substances other than diluents, for example wetting, sweetening or flavoring products.
  • compositions for parenteral administration can be sterile solutions or emulsions.
  • solvent or vehicle propylene glycol, a polyethylene glycol, vegetable oils, in particular olive oil, injectable organic esters, for example ethyl oleate, can be used.
  • compositions can also contain adjuvants, in particular wetting agents, isotonizers, emulsifiers, dispersants and stabilizers.
  • Sterilization can be done in several ways, for example using a bacteriological filter, by irradiation or by heating. They can also be prepared in the form of sterile solid compositions which can be dissolved at the time of use in sterile water or any other sterile injectable medium.
  • compositions for rectal administration are suppositories or rectal capsules, which contain, in addition to the active principle, excipients such as cocoa butter, semi-synthetic glycerides or polyethylene glycols.
  • excipients such as cocoa butter, semi-synthetic glycerides or polyethylene glycols.
  • the doctor will determine the dosage he considers most appropriate based on preventive or curative treatment, depending on age, weight, degree of infection and other factors specific to the subject to be addressed. Generally, the doses are between 10 and 100 mg / kg orally for an adult.
  • the present invention also relates to combinations consisting of one or more lupane derivatives of general formula (I), and / or where appropriate their salts, and of another active principle known for its anti-retrovirus activity, optionally in the presence pharmaceutically acceptable excipients.
  • the anti-retrovirus agents which can be combined are chosen from agents which are compatible and inert with respect to the lupane derivative of general formula (I). Without limitation, these agents are chosen from reverse transcriptase inhibitors [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), dideoxycytidine (DDC), TIBO, nevirapine, PMEA, D4T, pyridones, ⁇ -APA, HEPT ...] , among protease inhibitors [such as RO 31-8959 or A 77003], or among tat protein inhibitors [such as RO 24-7429, for example).
  • reverse transcriptase inhibitors zidovudine (AZT), didanosine (DDI), dideoxycytidine (DDC), TIBO, nevirapine, PMEA, D4T, pyridones, ⁇ -APA, HEPT ...
  • protease inhibitors such as RO 31-8959 or A 77003
  • Active product tablets having the following composition are prepared according to the usual technique:

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Abstract

Lupane derivatives of general formula (I) in which R is a radical of general formula (II) for which R' is a hydrogen atom or an alkyl radical, X is carbamoyl, N-méthyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl, Y is substituted phenylene of general formula (III), in which R1 and R2 are H, halogen, alkyl, alkyloxy or nitro, provided that both are not H, R° and R°°, which are the same or different, are hydrogen atoms or alkyl radicals and n is 6 to 12, m is 0 to 2 and p is 0 to 2, with: 6 < m+n+p < 12, the alkyl radicals (1 to 4C) being straight or branched. The invention also concerns the salts of said derivatives when they exist and their preparation. The products according to the invention are especially useful in the treatment of AIDS and in infections induced by the herpes family of viruses.

Description

NOUVEAUV DÉRIVES DU LUPANE, LEUR PREPARATION ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES OUI LES CONTIENNENT  NEW LUPANE DERIVATIVES, THEIR PREPARATION AND THE PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS YES CONTAINING THEM
La présente invention concerne des dérivés du lupane, de formule générale : The present invention relates to lupane derivatives, of general formula:
leurs sels, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. their salts, their preparation and the pharmaceutical compositions containing them.
Dans la demande de brevet japonais J 01 143 832 ont été décrits des dérivés de la bétuline de formule générale : In Japanese patent application J 01 143 832, betulin derivatives of the general formula have been described:
dans laquelle R1 et R2 sont hydroxy ou acyloxy et R3 est notamment méthyle. Ces dérivés sont utiles dans le domaine des anticancéreux. wherein R 1 and R 2 are hydroxy or acyloxy and R 3 is in particular methyl. These derivatives are useful in the field of anticancer agents.
Il a été maintenant trouvé que les dérivés du lupane de formule générale (I) dans laquelle : R représente un radical de formule générale :It has now been found that the lupane derivatives of general formula (I) in which: R represents a radical of general formula:
dans laquelle R' est un atome d'hydrogène ou de radical alcoyle, in which R 'is a hydrogen atom or an alkyl radical,
X représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, y est un radical phénylène substitué de formule générale : X represents a carbamoyl, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl radical, y is a substituted phenylene radical of general formula:
dans laquelle R1 et R2 identiques ou différents représentent des atomes d'hydrogène ou d'halogène ou des radicaux alcoyle, alcoyloxy ou nitro, l'un au moins étant autre que l'hydrogène, in which R 1 and R 2, which are identical or different, represent hydrogen or halogen atoms or alkyl, alkyloxy or nitro radicals, at least one being other than hydrogen,
R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que chaque motif -CRºR°° n'est pas nécessairement identique au précédent) et, n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 2 et p est un nombre entier de 0 à 2 et sont tels que m + n + p soit compris entre 6 et 12, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables lorsqu'ils existent, manifestent un effet cytoprotecteur de cellules infectées par un virus HIV (Human Immunodefîciency Virus) ainsi qu'une activité inhibitrice de la production de transcriptase inverse d'un virus HIV. R ° and R °° identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals (it being understood that each unit -CRºR °° is not necessarily identical to the previous one) and, n is an integer from 6 to 12, m is an integer from 0 to 2 and p is an integer from 0 to 2 and are such that m + n + p is between 6 and 12, as well as their pharmaceutically acceptable salts when they exist, exhibit a cytoprotective effect cells infected with an HIV virus (Human Immunodeficiency Virus) as well as an activity inhibiting the production of reverse transcriptase of an HIV virus.
Dans la formule générale ci-dessus, il est entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone et que les atomes d'halogène peuvent être choisis parmi le fluor, le chlore, le brome et l'iode. Dans les cas où R° et Rºº sont différents, les produits de formule générale (I) présentent des formes stéréoisomères, il est également entendu que les formes stéréoisomères ainsi que leurs mélanges entrent aussi dans le cadre de la présente invention. In the general formula above, it is understood that the alkyl radicals are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms and that the halogen atoms can be chosen from fluorine, chlorine, bromine and iodine . In cases where R ° and Rºº are different, the products of general formula (I) have stereoisomeric forms, it is also understood that the stereoisomeric forms and their mixtures also come within the scope of the present invention.
Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) peut être obtenu à partir d'un dérivé du lupane de formule générale : According to the invention, the lupane derivative of general formula (I) can be obtained from a lupane derivative of general formula:
dans laquelle R" représente un radical de formule générale in which R "represents a radical of general formula
— (CH2)n—COOH (IVa) - (CH 2 ) n — COOH (IVa)
ou  or
— (CH2)n-NH—R'" (IVb) dans lesquelles n est défini comme précédemment et R" ' est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, par action respectivement d'une aminé ou d'un acide de formules générales : - (CH 2 ) n-NH — R '"(IVb) in which n is defined as above and R"' is a hydrogen atom or a methyl radical, by the action respectively of an amine or of an acid of general formulas:
ou or
dans lesquelles R° , R°°, m et p sont définis comme précédemment et R" ' est défini comme ci-dessus. in which R °, R °°, m and p are defined as above and R "'is defined as above.
Il est entendu que les radicaux hydroxy du dérivé du lupane de formule générale (IV) sont de préférence protégés par des radicaux compatibles qui peuvent être mis en place et éliminés sans toucher au reste de la molécule. De même lorsque R' est un atome d'hydrogène il est nécessaire de protéger préalablement la fonction acide du produit de formule générale (Va) ou (Vb). A titre d'exemple les groupements protecteurs peuvent être choisis parmi les radicaux décrits par T.W. GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) ou par Me OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plénum Press (1973). Il est notamment avantageux d'utiliser des radicaux protecteurs pouvant être éliminés simultanément. On choisira des radicaux pouvant être éliminés en milieu neutre, basique ou acide. It is understood that the hydroxy radicals of the lupane derivative of general formula (IV) are preferably protected by radicals compatible which can be set up and removed without touching the rest of the molecule. Likewise when R 'is a hydrogen atom, it is necessary to protect the acid function of the product of general formula (Va) or (Vb) beforehand. By way of example, the protective groups can be chosen from the radicals described by TW GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) or by Me OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973) . It is in particular advantageous to use protective radicals which can be eliminated simultaneously. We will choose radicals which can be eliminated in neutral, basic or acidic medium.
Notamment, les radicaux hydroxy peuvent être protégés à l'état d'ester (formyloxy, acétoxy, î.butoxy, trichloracétyloxy, phénoxyacétyloxy, benzyloxy); dans ce cas, l'élimination s'effectue par hydrolyse en milieu basique, notamment en présence de soude à une température comprise entre 10 et 50°C. La protection peut également être effectuée à l'état de cétone, sous forme de carbonate par un radical -COORa dans lequel Ra est un radical alcoyle ou benzyle éventuellement substitués ou encore par un radical trialcoylsilyle; les radieaux protecteurs d'acide peuvent être choisis parmi les radicaux alcoyle (méthyle, éthyle, t.butyle), alcoyle substitué (trichloréthyle, haloéthyle, p. toluenesulfonyl-éthyle, benzyle, benzyle substitué par un radical nitro, benzhydryle, triphénylméthyle, benzyloxyméthyle...), alcoyloxyalcoyle (méthoxyméthyle), tétrahydropyranyle ou triméthylsilyle. In particular, the hydroxy radicals can be protected in the ester state (formyloxy, acetoxy, isbutbut, trichloroacetyloxy, phenoxyacetyloxy, benzyloxy); in this case, the elimination is carried out by hydrolysis in a basic medium, in particular in the presence of soda at a temperature of between 10 and 50 ° C. Protection can also be carried out in the ketone state, in the form of carbonate by a radical —COOR a in which R a is an alkyl or benzyl radical optionally substituted or else by a trialkylsilyl radical; the acid protective rafts can be chosen from alkyl (methyl, ethyl, t.butyl), substituted alkyl (trichlorethyl, haloethyl, p. toluenesulfonyl-ethyl, benzyl, benzyl substituted by a nitro radical, benzhydryl, triphenylmethyl, benzyloxymethyl ...), alkyloxyalkyl (methoxymethyl), tetrahydropyranyl or trimethylsilyl.
La réaction s'effectue selon les méthodes habituelles de condensation d'une amine sur un acide. Notamment, on opère en présence d'un accepteur d'acide tel qu'une base organique azotée (trialcoylamine, pyridine, N-méthyl-morpholine, dιaza-1,8 bιcyclo[5.4.0] undécène-7, diaza1,5 bicyclo [4.3.0] nonène-5 par exemple) dans un solvant organique comme un solvant chloré (dichloromethane, dichloréthane, chloroforme par exemple) ou un amide (diméthylformamide par exemple). Il est également possible d ' opérer en présence d ' un agent de condensation tel qu'un carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodnmιde par exemple) et éventuelle ment en présence d'un catalyseur tel que le N-hydroxybenzotriazole ou le N-hydroxysuccinimide, à une température comprise entre -20 et 40°C. The reaction is carried out according to the usual methods of condensation of an amine on an acid. In particular, one operates in the presence of an acid acceptor such as an organic nitrogenous base (trialcoylamine, pyridine, N-methyl-morpholine, dιaza-1,8 bιcyclo [5.4.0] undecene-7, diaza1,5 bicyclo [4.3.0] nonene-5 for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (dichloromethane, dichlorethane, chloroform for example) or an amide (dimethylformamide for example). It is also possible to operate in the presence of a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodnmide hydrochloride for example) and optionally ment in the presence of a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide, at a temperature between -20 and 40 ° C.
La condensation de l'draine de formule générale (Va) s'effectue de préférence à partir du chlorhydrate de l'aminé. On opère généralement sur le chlorure de l'acide ou sur un ester activé. The condensation of the drain of general formula (Va) is preferably carried out from the hydrochloride of the amine. It is generally carried out on the acid chloride or on an activated ester.
L'acide dérivé du lupane, de formule générale (IVa) peut être préparé par action d'un amino acide de formule générale : The acid derived from lupane, of general formula (IVa) can be prepared by the action of an amino acid of general formula:
H2N-(CH2)n-COOH (VI) dans laquelle n est défini comme précédemment et dont la fonction acide a été préalablement protégée, sur le chlorure de l'acide de formule : H 2 N- (CH 2 ) n -COOH (VI) in which n is defined as above and whose acid function has been previously protected, on the acid chloride of formula:
suivie de l'élimination des radicaux protecteurs. La réaction de l'amino acide sur le chlorure de l'acide lupèn-20(29)oïque-28 de formule générale (VII) s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'altèrent pas le reste de la molécule. On opère notamment en présence d'une base organique azotée telle qu'une trialcoylamine (triéthylamine par exemple) dans un solvant organique tel qu'un solvant chloré (chloroforme, dιchloro-1,2 éthane, dichloromethane) ou dans le tetrahydrofurane ou dans un mélange de ces solvants, à une température comprise entre 15 et 30°C. Le chlorure d'acide- du dérivé du lupane de formule générale (VII) peut être préparé selon les méthodes connues. A titre d'exemple, on opère par action du chlorure d'oxalyle ou du chlorure de thionyle, dans un solvant chloré comme le chloroforme, le dichloroéthane ou le dichloromethane. followed by the removal of protective radicals. The reaction of the amino acid on the chloride of lupen-20 (29) oic-28 acid of general formula (VII) is carried out according to the usual methods which do not alter the rest of the molecule. The operation is carried out in particular in the presence of an organic nitrogenous base such as a trialkylamine (triethylamine for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (chloroform, 1,2-dichloroethane, dichloromethane) or in tetrahydrofuran or in a mixture of these solvents, at a temperature between 15 and 30 ° C. The acid chloride of the lupane derivative of general formula (VII) can be prepared according to known methods. For example, the reaction is carried out by the action of oxalyl chloride or thionyl chloride, in a chlorinated solvent such as chloroform, dichloroethane or dichloromethane.
La protection et la libération des radicaux protecteurs s'effectuent comme décrit précédemment The protection and the release of the protective radicals are carried out as described above.
L'amino acide de formule générale (VI) peut être préparé comme décrit ci-après dans les exemples. L'aminé dérivée du lupane, de formule générale (IVb), pour laquelle R' ' ' est un atome d'hydrogène, peut être préparée à partir d'un dérivé du lupane de formule générale (VII), par action d'une diamine de formule générale : The amino acid of general formula (VI) can be prepared as described below in the examples. The amine derived from lupane, of general formula (IVb), for which R '' 'is a hydrogen atom, can be prepared from a lupane derivative of general formula (VII), by the action of a diamine of general formula:
H2N-(CH2)n-NH2 (VIII) dans laquelle n est défini comme précédemment. H 2 N- (CH 2 ) n -NH 2 (VIII) in which n is defined as above.
Les dérivés (IVb) pour lesquels R''' est un radical méthyle peuvent être obtenus par N-méthylation du produit de formule générale (IVb) pour lequel R''' est un atome d'hydrogène, selon la méthode de A. KATRITSKY, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987). Les produits de formule générale (Va) ou (Vb) peuvent être préparés selon ou par analogie avec les méthodes décrites ci-après dans les exemples. The derivatives (IVb) for which R '' 'is a methyl radical can be obtained by N-methylation of the product of general formula (IVb) for which R' '' is a hydrogen atom, according to the method of A. KATRITSKY , J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987). The products of general formula (Va) or (Vb) can be prepared according to or by analogy with the methods described below in the examples.
Les nouveaux dérivés du lupane de formule générale (I) peuvent être purifiés le cas échéant par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie. The new lupane derivatives of general formula (I) can be purified if necessary by physical methods such as crystallization or chromatography.
Lorsque le dérivé du lupane de formule générale (I) présente des formes stéréoisomères, la préparation s'effectue au moyen de dérivés chiraux de formule générale (Va) ou (Vb). Il est entendu que lorsque l'on veut obtenir un intermédiaire chiral, la séparation s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'affectent pas le reste de la molécule, telles que par exemple la chromatographie sur phase chirale, ou par conversion du mélange racémique en diastéréoisomères et séparation par cristallisation ou chromatographie. When the lupane derivative of general formula (I) has stereoisomeric forms, the preparation is carried out by means of chiral derivatives of general formula (Va) or (Vb). It is understood that when it is desired to obtain a chiral intermediate, the separation is carried out according to the usual methods which do not affect the rest of the molecule, such as for example chromatography on a chiral phase, or by conversion of the racemic mixture into diastereoisomers and separation by crystallization or chromatography.
Lorsque le radical R' (dans R) est un atome d'hydrogène, les produits selon l'invention peuvent être transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec une base azotée selon les méthodes connues en soi. Ces sels peuvent être obtenus par action d'une base métallique (par exemple alcaline ou alcalino terreuse), de l'ammoniaque ou d'une amine sur un produit selon l'invention, dans un solvant approprié. Le sel formé précipite après concentration éventuelle de la solution ; il est séparé par filtration. When the radical R ′ (in R) is a hydrogen atom, the products according to the invention can be converted into metal salts or into addition salts with a nitrogenous base according to the methods known per se. These salts can be obtained by the action of a metal base (for example alkaline or alkaline earth), ammonia or an amine on a product according to the invention, in an appropriate solvent. The salt formed precipitates after optional concentration of the solution; it is separated by filtration.
Comme exemples de sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être cités les sels avec les métaux alcalins (sodium, potassium, lithium) ou avec les métaux alcalinoterreux (magnésium, calcium), le sel d'ammonium, les sels de bases azotées (éthanolamine, diéthanolamine, triméthylamine, triéthylamine, méthylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-diméthyléthanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphénéthylamine, NN'-dibenzyléthylènediamine, diphénylènediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, argiinne, lysine, leucine, dibenzylamine). Examples of pharmaceutically acceptable salts which may be mentioned are the salts with alkali metals (sodium, potassium, lithium) or with alkaline earth metals (magnesium, calcium), the ammonium salt, the salts of nitrogenous bases (ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine, diphenylenediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, argiinne, lysine, leucine).
Les nouveaux dérivés du lupane selon la présente invention sont particulièrement utiles pour la prophylaxie et le traitement du SIDA (syndrome d'immunodéfîcience acquise) et de syndromes associés [ARC (AIDS related complex)]. Par prophylaxie nous sous-entendons le traitement des sujets qui ont été exposés aux virus HIVs, en particulier les séropositifs asymptomatiques qui présentent le risque de développer la maladie dans les mois ou les années à venir après la primoinfection. The new lupane derivatives according to the present invention are particularly useful for the prophylaxis and treatment of AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) and associated syndromes [ARC (AIDS related complex)]. By prophylaxis we mean the treatment of subjects who have been exposed to HIV viruses, in particular asymptomatic HIV-positive people who are at risk of developing the disease in the months or years to come after primary infection.
Les produits selon l'invention, qui sont inhibiteurs de l'effet cytopathogene du HIV et inhibiteurs de la production de transcriptase inverse en culture cellulaire à des concentrations dépourvues d'effet cytotoxique ou cytostatique, sont particulièrement intéressants. Il a été également démontré que les produits selon l'invention sont actifs pour le traitement des affections dans lesquelles interviennent des virus de la famille des herpès. The products according to the invention, which are inhibitors of the cytopathogenic effect of HIV and inhibitors of the production of reverse transcriptase in cell culture at concentrations devoid of cytotoxic or cytostatic effect, are of particular interest. It has also been demonstrated that the products according to the invention are active for the treatment of conditions in which viruses of the herpes family are involved.
La famille des herpès est en effet à l'origine de nombreuses affections dont certaines peuvent être très graves. Elle comprend l'Herpès simplex, le varicella-zoster, le cytomégalovirus et le virus d'Epstein-Barr. L'Herpès simplex peut varier de formes bénignes comme l'herpès labial aux formes plus sérieuses comme l'herpès génital et peut même être responsable d'encéphalites mettant la vie du patient en danger. Le varicella zoster est le virus responsable de la varicelle et du zona, il peut également être à l'origine d'affections plus graves parmi lesquelles des encéphalites. Les infections à cytomégalovirus sont en général asymptomatiques chez les sujets sains, mais peuvent devenir la cause d'infections ophtalmiques graves (retinites) pouvant conduire à la cécité, de morbidité et de mortalité chez des sujets immunodéprimés (malades atteints du SIDA ou de toute autre immunodéfîcience, par exemple après transplantation d'organes ou après chimiothérapie anticancéreuse). Le cytomégalovirus est également responsable de manifestations cliniques sévères pour le foetus ou le nouveau-né dans le cas d'une primo-infection pendant la grossesse ou lors de la transfusion de sang séropositif à un nouveauné séronégatif. The herpes family is indeed the cause of many ailments, some of which can be very serious. It includes Herpes simplex, varicella-zoster, cytomegalovirus and Epstein-Barr virus. Herpes simplex can range from mild forms like cold sores to more serious forms like genital herpes and can even cause life-threatening encephalitis. Varicella zoster is the virus responsible for chickenpox and shingles, it can also cause more serious conditions including encephalitis. Cytomegalovirus infections are generally asymptomatic in healthy subjects, but can become the cause of serious ophthalmic infections (retinitis) which can lead to blindness, morbidity and mortality in immunocompromised subjects (patients with AIDS or any other immunodeficiency, for example after organ transplantation or after cancer chemotherapy). Cytomegalovirus is also responsible for severe clinical manifestations for the fetus or the newborn in the case of a primary infection during pregnancy or during the transfusion of seropositive blood to a seronegative newborn.
Les activités ont été mises en évidence dans les tests suivants : The activities were highlighted in the following tests:
Activité vis-à-vis de l'effet cytopathogene du virus HIV Les produits en poudre ont été mis en solution à raison de 2 mg de produit par 2 ml (environ 4 × 10 M) dans du diméthylformamide (DMF) pour obtenir une solution stock de produit à 100 % de DMF. Le test est réalisé sur la lignée lymphoblastoide CEM 4. Dans une microplaque de 96 puits on dépose 25 μl/puits d'une solution de produit à tester dans du tampon phosphate isotonique (TPI) ou de TPI seul dans le cas des contrôles. Les produits sont étudiés à 8 concentrations, à raison de 6 puits par concentration. On ajoute alors 125 μl d'une suspension de cellules CEM (8 × 104 cellules par ml) dans le milieu RPMI contenant 10 % de sérum de veau foetal, 100 Ul/ml de pénicilline, 100 μg/ml de streptomycine et 2 μmoles/ml de glutamine et les microplaques sont incubées une heure à 37°C, sous une atmosphère contenant 5 % de gaz carbonique. Pour chaque concentration, l'essai est partagé en deux parties : une partie (3 puits) sur cellules infectées, pour la détermination de l'activité antivirale et l'autre partie (3 puits) sur cellules non infectées, pour déterminer la cytotoxicité des produits. On infecte alors la première série avec HIV-1 (100 μl par puits d'une suspension de virus LAV-1-BRU contenant 200-300 TCID50) tandis que l'autre série reçoit 100 μl de milieu RPMI tel que défini précédemment. Au bout de 5 jours d'incubation, 100 μl de cellules sont prélevés pour mesurer la viabilité cellulaire [déterminée selon une modification de la technique décrite par R. PAUWELS et coll., J. VIROL. Meth., 20, 309-321 (1988)]. On ajoute à ce prélèvement 10 μl d'une solution contenant 7 mg de MTT [bromure de 3- (4 , 5-dιméthyl 2-thiazolyl)-2,5-dιphényltétrazolium] par ml de tampon phosphate îsotonique. Après 3 heures d'incubation à 37°C le surnageant est enlevé. Le MTT est converti en un sel de formazan (bleu) uniquement à l'intérieur des cellules vivantes. On ajoute alors 100 μl d'isopropanol (contenant 0,04 mole/l d'acide chlorhydrique) et les microplaques sont agitées jusqu'à la solubilisation du bleu de formazan. L'absorbance à 540 nm est lue avec un lecteur automatique de réactions ELISA en microplaques. Cette absorbance est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes. Activity vis-à-vis the cytopathogenic effect of the HIV virus The powdered products were dissolved in an amount of 2 mg of product per 2 ml (approximately 4 × 10 M) in dimethylformamide (DMF) to obtain a solution 100% DMF product stock. The test is carried out on the lymphoblastoid CEM 4 line. In a 96-well microplate, 25 μl / well of a solution of product to be tested is deposited in isotonic phosphate buffer (TPI) or TPI alone in the case of the controls. The products are studied at 8 concentrations, at the rate of 6 wells per concentration. 125 μl of a suspension of CEM cells (8 × 10 4 cells per ml) are then added to RPMI medium containing 10% fetal calf serum, 100 IU / ml of penicillin, 100 μg / ml of streptomycin and 2 μmoles / ml of glutamine and the microplates are incubated for one hour at 37 ° C., under an atmosphere containing 5% carbon dioxide. For each concentration, the test is divided into two parts: one part (3 wells) on infected cells, for determining the antiviral activity and the other part (3 wells) on non-infected cells, to determine the cytotoxicity of the products. The first series is then infected with HIV-1 (100 μl per well of a suspension of LAV-1-BRU virus containing 200-300 TCID50) while the other series receives 100 μl of RPMI medium as defined above. After 5 days of incubation, 100 μl of cells are removed to measure cell viability [determined according to a modification of the technique described by R. PAUWELS et al., J. VIROL. Meth., 20, 309-321 (1988)]. 10 μl of a solution containing 7 mg of MTT [3- (4, 5-dimethyl 2-thiazolyl bromide) -2,5-phenyltetrazolium bromide] per ml of isotonic phosphate buffer are added to this sample. After 3 hours of incubation at 37 ° C the supernatant is removed. MTT is converted to a formazan salt (blue) only inside living cells. 100 μl of isopropanol (containing 0.04 mole / l of hydrochloric acid) are then added and the microplates are agitated until the formazan blue is dissolved. The absorbance at 540 nm is read with an automatic microplate ELISA reaction reader. This absorbance is proportional to the quantity of living cells.
Le taux de protection (en %) d'un produit donné est déterminé à partir des densités optiques (DO) par la formule : The protection rate (in%) of a given product is determined from the optical densities (OD) by the formula:
DO (cell. traitées et inf.)-DO (cell. non traitées et inf.) DO (treated and inf cell) - DO (untreated and treated cell)
DO (cell. traitées et non inf.)-DO(cell. non traitées et inf .)  DO (cell treated and not inf.) - DO (cell not treated and inf.)
Le cas échéant la concentration inhibitrice 50 % est déterminée. If necessary, the inhibitory concentration 50% is determined.
Les résultats démontrent que pour des concentrations de produit testé comprises entre 0,01 et 10 μg/ml, on obtient une diminution significative de l'effet cytopathogene. The results demonstrate that for concentrations of the tested product of between 0.01 and 10 μg / ml, a significant reduction in the cytopathogenic effect is obtained.
Le taux de protection procuré par les produits selon l'invention est compris entre 20 et 100 %. La concentration inhibitrice 50 % des produits selon l'invention est comprise entre 0,05 et 50 μg/ml lorsqu'elle peut être déterminée. The protection rate provided by the products according to the invention is between 20 and 100%. The 50% inhibitory concentration of the products according to the invention is between 0.05 and 50 μg / ml when it can be determined.
Détermination multiplication virale par dosage de la transcriptase inverse du virus HIV L'activité de la transcriptase inverse est mesurée dans 10 μl de surnageant de cultuie. A l'aide du kit de dosage poly r (A) reverse transcriptase [3H]-SPA enzyme assay (RPQN 0100, Amersham, GB) selon la procédure piéconisée par le fabricant. Le temps de réaction est de 6 heures et la radioactivité comptée à l'aide d'un compteur microbeta [TOPCOUNT® PACKARD]. Determination of viral multiplication by assaying the reverse transcriptase of the HIV virus The activity of the reverse transcriptase is measured in 10 μl of culture supernatant. Using the poly r (A) reverse transcriptase [ 3 H] -SPA enzyme assay assay kit (RPQN 0100, Amersham, GB) according to the procedure approved by the manufacturer. The reaction time is 6 hours and the radioactivity counted using a microbeta counter [TOPCOUNT ® PACKARD].
On observe des inhibitions de la production de transcriptase inverse associée au virus, comprises entre 20 et 100 % aux concentrations testées (0,01 à 10 μg/ml). Inhibitions of the production of reverse transcriptase associated with the virus are observed, between 20 and 100% at the concentrations tested (0.01 to 10 μg / ml).
Action sur les virus de la famille des herpès : L'action des dérivés de formule générale (I) sur les virus de la famille des herpès a été mise en évidence dans la technique décrite par NEYTS et coll., Virology, 179, 41-50 (1990). Action on viruses of the herpes family: The action of the derivatives of general formula (I) on viruses of the herpes family has been demonstrated in the technique described by NEYTS et al., Virology, 179, 41- 50 (1990).
La technique employée consiste dans la mesure de l'effet cytopathogene du virus et de sa protection par utilisation des produits de formule générale (I). L'activité antivirale est appréciée par la mesure de la CE50 (concentration nécessaire pour inhiber 50 % de l'effet cytopathogéne induit par le virus). The technique used consists in measuring the cytopathogenic effect of the virus and its protection by using products of general formula (I). The antiviral activity is assessed by measuring the EC 50 (concentration necessary to inhibit 50% of the cytopathogenic effect induced by the virus).
Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la présente invention. Exemple 1 The following examples, given without limitation, illustrate the present invention. Example 1
A une solution de 1 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique dans 30 cm3 de dichloromethane, on ajoute 1, 15 cm3 de chlorure de thionyle. La solution est agitée 15 heures à une température voisine de 20°C puis le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (1,05 g) et 695 mg de chlorhydrate de 5-amιno-2-chloro- benzoate de méthyle sont mis en suspension dans 50 cm3 de dichloromethane puis on ajoute 0,44 cm3 de triéthylamine. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le mélange reactionnel est concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Au solide résiduel, on ajoute 25 cm3 d'acétate d'éthyle. L'insoluble est filtré et rincé par au total 25 cm d'acétate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le solide obtenu (1,06 g) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre et 40 cm de haut de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 95:5 (en volumes), en recueillant des fractions de 25 cm3. Les 35 premières fractions sont éliminées, et l'éluant est remplacé par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 90:10 (en volumes) en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 380 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)- 8-amιnooctanoyl]-3-amιno-6-chloro benzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,10 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 95:5 en volumes). 0,45 cm3 de soude 5N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amιno-6-chloro benzoate de méthyle dans 4,6 cm3 de méthanol etTo a solution of 1 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) -8-aminooctanoic acid in 30 cm 3 of dichloromethane, 1.15 cm 3 of thionyl chloride are added. The solution is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. then the reaction mixture is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. The residue obtained (1.05 g) and 695 mg of methyl 5-amino-2-chloro benzoate hydrochloride are suspended in 50 cm 3 of dichloromethane and then 0.44 cm 3 of triethylamine is added. After 15 hours of stirring at a temperature in the region of 20 ° C, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C. To the residual solid, 25 cm 3 of ethyl acetate are added. The insoluble material is filtered and rinsed with a total of 25 cm of ethyl acetate. The filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C. The solid obtained (1.06 g) is chromatographed on a column 4 cm in diameter and 40 cm high in silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 95: 5 (in volumes), collecting 25 cm 3 fractions. The first 35 fractions are eliminated, and the eluent is replaced by a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 90:10 (by volume), collecting fractions of 25 cm 3 . The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 380 mg of methyl N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupen-28-oyl) - 8-amιnooctanoyl] -3-methyl-6-chloro benzoate are obtained in the form of a meringue. white (Rf = 0.10; chromatography on a thin layer of silica; eluent dichloromethane - ethyl acetate 95: 5 by volume). 0.45 cm 3 of 5N sodium hydroxide are added in approximately 5 minutes to a solution of 370 mg of N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3 -amιno-6-methyl chloro benzoate in 4.6 cm 3 of methanol and
2,3 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis on ajoute 50 cm d'eau distillée. Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtration et rincé par 50 cm3 au total d'eau distillée puis séché à l'air. Le solide est rais en suspension dans 20 cm3 d'eau distillée, filtré et rincé par 50 cm3 au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 285 mg d'acide N'- [N-(3β-hydroxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-6-chloro benzoïque fondant à une température voisine de 135-40°C (pâteux). L'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoιque peut être préparé de la manière suivante : 2.3 cm of tetrahydrofuran and the reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The reaction mixture is acidified to a pH close to 2 using 5N hydrochloric acid and then 50 cm of distilled water are added. After 1 hour of stirring, the solid is separated by filtration and rinsed with 50 cm 3 in total of distilled water and then air dried. The solid is suspended in 20 cm 3 of distilled water, filtered and rinsed with 50 cm 3 in total of distilled water and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 285 mg of N'- [N- (3β-hydroxy-20 (29) -lupen-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-6-chloro benzoic acid melting at a temperature close to 135-40 ° C (pasty). N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoιque acid can be prepared as follows:
Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 330 mg d'acide 8-aminooctanoïque et 410 mg de chlorotriméthylsilane dans 50 cm3 de dichloromethane, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute 1 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparé à partir d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oιque) puis 0,81 cm3 de triéthylamine. L'agitation est maintenue pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35ºC. Le résidu est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (60-40 en volumes). Les fractions contenant le produit sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,1 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoιque sous la forme d'un meringue blanche (Rf = 0,4 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle (60-40 en volumes)). After having refluxed for 3 hours, a mixture of 330 mg of 8-aminooctanoic acid and 410 mg of chlorotrimethylsilane in 50 cm 3 of dichloromethane, the solution is cooled to around 20 ° C. and 1 g of 3β-acetoxylup chloride is added. -20 (29) -èn-28-oyle (prepared from 3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oιque acid) then 0.81 cm 3 of triethylamine. Stirring is continued for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C and the solvent is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35ºC. The residue is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate (60-40 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 1.1 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoιque acid are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.4; layer chromatography thin silica; eluent: cyclohexane, ethyl acetate (60-40 by volume)).
Le 5-amino-2-chlorobenzoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante : A 100 cm3 de méthanol refroidis a une température voisine de -20°C, ajouter en 1 minute, 1, 5 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 5 minutes à une température voisine de -20°C puis on ajouteThe methyl 5-amino-2-chlorobenzoate can be obtained in the following way: To 100 cm 3 of methanol cooled to a temperature close to -20 ° C., add in 1 minute, 1.5 cm 3 of thionyl chloride. Stirring is continued for 5 minutes at a temperature in the region of -20 ° C., then added
1,72 g d'acide 5-amιno-2-chlorobenzoιque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 30 minutes et maintient l'agitation1.72 g of 5-amino-2-chlorobenzoic acid. It is allowed to return to a temperature close to 20 ° C. in 30 minutes and the stirring is continued
15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est chauffé 6 heures à une température voisine du reflux. Le mélange est ramené à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 20°C. Le solide obtenu est repris par 50 cm3 de diéthyléther, filtré, rincé par 60 cm au total de diéthyéther puis séché à pression atmosphérique. On obtient ainsi 2,6 g de chlorhydrate de 5-amino-2-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'un solide blanc. Exemple 2 15 hours at a temperature close to 20 ° C. The reaction mixture is heated for 6 hours to a temperature close to reflux. The mixture is brought to a temperature in the region of 20 ° C and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 20 ° C. The solid obtained is taken up in 50 cm 3 of diethyl ether, filtered, rinsed with 60 cm total of diethyl ether and then dried at atmospheric pressure. 2.6 g of methyl 5-amino-2-chlorobenzoate hydrochloride are thus obtained in the form of a white solid. Example 2
A une solution de 1,3 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl) 8-aminooctanoique dans 6 cm3 de tetrahydrofurane et 0,282 cm3 de triéthylamine refroidie à une température voisine de -10°C, on ajoute en 10 minutes 0,273 cm de chloroformiate d'isobutyle. Le mélange reactionnel est agité 30 minutes à une température voisine de -10°C puis on ajoute goutte à goutte en 15 minutes une solution de 440 mg de chlorhydrate de 2-amino-5-fluorobenzoate d'éthyle dans 6 cm de dioxane et 2 cm3 d'eau distillée maintenant la température voisine de -10°C. Le mélange reactionnel est agité 48 heures à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine dp 40"C. Le résidu obtenu est repris parTo a solution of 1.3 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl) 8-aminooctanoic acid in 6 cm 3 of tetrahydrofuran and 0.282 cm 3 of triethylamine cooled to a temperature close to -10 ° C, 0.273 cm of isobutyl chloroformate is added over 10 minutes. The reaction mixture is stirred for 30 minutes at a temperature in the region of -10 ° C., then a solution of 440 mg of ethyl 2-amino-5-fluorobenzoate hydrochloride in 6 cm of dioxane and 2 is added dropwise over 15 minutes. cm 3 of distilled water maintaining the temperature in the region of -10 ° C. The reaction mixture is stirred for 48 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of dp 40 "C. The residue obtained is taken up in
20 cm3 de dichloromethane et lavé successivement par 20 cm3 d'eau distillée, une solution aqueuse d'acide méthanesulfonique 1N puis 3 fois par 20 cm3 d'eau distillée. La phase organique est sechée sur sulfate de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite20 cm 3 of dichloromethane and washed successively with 20 cm 3 of distilled water, an aqueous solution of 1N methanesulfonic acid and then 3 times with 20 cm 3 of distilled water. The organic phase is dried over sodium sulfate and then concentrated to dryness under reduced pressure
(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le solide résiduel (1,6 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 97-3 (en volumes), les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 550 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn- 28-oyl)-8-aminooctanoyl]-2-amino-5-fluorobenzoate d'éthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,20 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 97:3 en volumes). 1,75 cm3 de soude 4N sont ajoutes en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N '-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]- 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle dans 3 cm3 de méthanol et 6 cm3 de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant(2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. The residual solid (1.6 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 97-3 (by volume), the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 550 mg of N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupen- 28-oyl) -8-aminooctanoyl] -2-amino-5-ethyl fluorobenzoate are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.20; chromatography on a thin layer of silica; eluent dichloromethane - ethyl acetate 97: 3 by volume). 1.75 cm 3 of 4N sodium hydroxide are added in approximately 5 minutes to a solution of 370 mg of N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] - 2 -amιno-5-ethyl fluorobenzoate in 3 cm 3 of methanol and 6 cm 3 of tetrahydrofuran and the reaction mixture is stirred for
15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est repris par 30 cm3 d'eau distillée est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide de 2,2 cm3 d'acide chlorhydrique 5N . Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtra tion et rincé par 30 cm3 au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 465 mg d'acide N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-2-amino-5-fluorobenzoïque fondant à une température voisine de 145°C. 15 hours at a temperature close to 20 ° C. The reaction mixture is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C. The residue is taken up in 30 cm 3 of distilled water and is acidified to a pH close to 2 using 2.2 cm 3 of 5N hydrochloric acid. After 1 hour of stirring, the solid is separated by filtra tion and rinsed with 30 cm 3 in total of distilled water and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 465 mg of N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupen-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -2-amino-5-fluorobenzoic acid thus melting at a temperature in the region of 145 are obtained. ° C.
Le 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle peut être obtenu de la manière suivante : Ethyl 2-amιno-5-fluorobenzoate can be obtained in the following manner:
Dans une solution de 3 , 1 g d'acide 2-amino-5-fluoro benzoïque dans 50 cm d'éthanol à une température voisine de 40°C, on fait passer durant approximativement 20 minutes un courant d'acide chlorhydrique gazeux de manière à obtenir une solution saturée, puis on chauffe 3 heures à une température voisine du reflux. Le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide pâteux obtenu est repris par un mélange de 20 cm3 d'éthanol et de 100 cm3 d'oxyde d' îsopropyle, puis refroidi à une température voisine de 5°C. Le solide est séparé par filtration, lavé par 60 cm au total d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsiIn a solution of 3.1 g of 2-amino-5-fluoro benzoic acid in 50 cm of ethanol at a temperature in the region of 40 ° C., a stream of gaseous hydrochloric acid is passed for approximately 20 minutes so to obtain a saturated solution, then heating for 3 hours at a temperature close to reflux. The reaction mixture is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The pasty solid obtained is taken up in a mixture of 20 cm 3 of ethanol and 100 cm 3 of isopropyl ether, then cooled to a temperature in the region of 5 ° C. The solid is separated by filtration, washed with a total of 60 cm of isopropyl ether and dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 30 ° C. We thus obtain
3,54 g de chlorhydrate de 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 120°C. 3.54 g of ethyl 2-amιno-5-fluorobenzoate hydrochloride in the form of a white solid melting at a temperature in the region of 120 ° C.
Exemple 3 Example 3
A une solution de 2 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique dans 60 cm3 de dichloromethane, on ajoute 2,30 cm3 de chlorure de thionyle. La solution est agitée 15 heures à une température voisine de 20 °C puis le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (2,10 g) et mis en suspension dans 60 cm de dichloromethane, puis 1,16 g de 3-amιno-4-chlorobenzoate de méthyle sont ajoutés. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le mélange reactionnel est concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Au solide résiduel, on ajoute 50 cm3 d'acétate d'éthyle. L'insoluble est filtré et rincé par au total 50 cm3 d'acétate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le solide obtenu (2,07 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 93:7 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 540 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl]-3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,22 ; chromatographie sur couche mince silice , éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 93:7 en volumes). 0,66 cm3 de soude 5N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl)-3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle dans 6,6 cm de méthanol et 3,3 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C, acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est repris par 20 cm d'eau distillée après 1 heure d'agitation à une température voisine de 20°C. Le solide est séparé par fil- tration et rincé par 50 cm au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 450 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-chlorobenzoïque fondant à une température voisine de 135-140°C (pâteux). 2.30 cm 3 of thionyl chloride is added to a solution of 2 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoic acid in 60 cm 3 of dichloromethane. The solution is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C, then the reaction mixture is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. The residue obtained (2.10 g) and suspended in 60 cm of dichloromethane, then 1.16 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate are added. After 15 hours of stirring at a temperature in the region of 20 ° C, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C. To the residual solid, 50 cm 3 of ethyl acetate are added. The insoluble material is filtered and rinsed with a total of 50 cm 3 of ethyl acetate. The filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C. The solid obtained (2.07 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 93: 7 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 540 mg of N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl] -3-methyl-4-chlorobenzoate are obtained in the form of a white meringue. (Rf = 0.22; silica thin layer chromatography, eluent dichloromethane - ethyl acetate 93: 7 by volume). 0.66 cm 3 of 5N sodium hydroxide are added in approximately 5 minutes to a solution of 370 mg of N '- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-aminooctanoyl) -3 -methyl-4-chlorobenzoate in 6.6 cm of methanol and 3.3 cm of tetrahydrofuran and the reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C, acidified to a pH in the region of 2 to using 5N hydrochloric acid and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. The residue is taken up in 20 cm of distilled water after 1 hour of stirring at a temperature in the region of 20 ° C. The solid is separated by filtration and rinsed with a total of 50 cm of distilled water and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 450 mg of N '- [N- (3β-hydroxy-20 (29) -lupen-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-4-chlorobenzoic acid melting at a temperature close to 135 are thus obtained. -140 ° C (pasty).
Le 3-amino-4-chlorob nzoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante : Methyl 3-amino-4-chlorob nzoate can be obtained in the following manner:
A 100 cm de méthanol refroidis à une température voisine de -20°C, on ajoute en 1 minute, 1,5 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 5 minutes à une température voisine de -20°C puis on ajoute 1,72 g d'acide 3-amino-4-chlorobenzoïque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 30 minutes et on maintient l'agitation 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est chauffé 3 heures à une température voisine du reflux.To 100 cm of methanol cooled to a temperature in the region of -20 ° C., 1.5 cm 3 of thionyl chloride are added over 1 minute. Stirring is continued for 5 minutes at a temperature in the region of -20 ° C., then 1.72 g of 3-amino-4-chlorobenzoic acid are added. It is allowed to return to a temperature in the region of 20 ° C in 30 minutes and the stirring is continued for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The reaction mixture is heated for 3 hours to a temperature close to reflux.
Le mélange est ramené à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 20°C. Le solide obtenu (2,25 g) est repris par 50 cm3 de diéthyléther, filtre, rince par 40 cm au total de diethyether puis séché sous pression atmosphérique. On obtient ainsi 2,09 g de chlorhydrate de 3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'un solide blanc. Le chlorhydrate est mis en solution dans un mélange de 50 cm3 d'eau distillée, 5 cm3 d'hydroxyde de sodium 2N et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est décantée, la phase aqueuse est extraite pai 25 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de magnésium puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,71 g de 3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle. The mixture is brought to a temperature in the region of 20 ° C. and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 20 ° C. The solid obtained (2.25 g) is taken up in 50 cm 3 of diethyl ether, filtered, rinsed with 40 cm total of diethyether and then dried under atmospheric pressure. 2.09 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate hydrochloride are thus obtained in the form of a white solid. The hydrochloride is dissolved in a mixture of 50 cm 3 of distilled water, 5 cm 3 of 2N sodium hydroxide and 50 cm 3 of ethyl acetate. The aqueous phase is decanted, the aqueous phase is extracted by 25 cm 3 of ethyl acetate. The combined organic phases are dried over magnesium sulfate and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 1.71 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate are thus obtained.
Exemple 4 Example 4
A une solution de 1 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique, dans 100 cm3 de dichloromethane, on ajoute 300 mg de 3-amino-4-méthylbenzoate de méthyle, 240 mg d'hydrate de 1 -hydroxybenzotriazole, 610 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodumide et 0,67 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC. On ajoute 50 cm3 d'eau distillée et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 75 cm au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,8 g) est chromatographie sur une colonne de 5,5 cm de diamètre contenant 240 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 9-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm3. Les 43 premières fractions sont éliminées; les 37 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 950 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl)-3-amino-4-méthylbenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,18 ; chromato graphie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (9-1 en volumes)). To a solution of 1 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoique, in 100 cm 3 of dichloromethane, 300 mg of 3-amino-4-methylbenzoate are added. methyl, 240 mg of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 610 mg of 1- (3-dιméthylamιnopropyl) -3-ethylcarbodumide hydrochloride and 0.67 cm of triethylamine. The solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40ºC. 50 cm 3 of distilled water and 50 cm 3 of ethyl acetate are added. The organic phase is extracted and the aqueous phase is exhausted with a total of 75 cm of ethyl acetate. The organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (1.8 g) is chromatographed on a column 5.5 cm in diameter containing 240 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 9-1 by volume, collecting 75 cm 3 fractions. The first 43 fractions are eliminated; the following 37 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 950 mg of N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl) -3-methyl-4-methylbenzoate are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.18; chromato written on a thin layer of silica; eluent: methylene chloride-ethyl acetate (9-1 by volume)).
Une solution de 950 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthylbenzoate de méthyle, 1,4 cm3 de soude 5N, 6 cm3 de tetrahydrofurane et 12 cm3 de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25°C puis 1,5 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée sont ajoutés. Après 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 720 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthylbenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 155°C. A 950 mg solution of methyl N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-4-methylbenzoate, 1.4 cm 3 of 5N sodium hydroxide, 6 cm 3 of tetrahydrofuran and 12 cm 3 of methanol is stirred for 24 hours at a temperature in the region of 25 ° C. then 1.5 cm 3 of 5N hydrochloric acid and 10 cm 3 of distilled water are added. After 30 minutes with stirring, the solid is separated by filtration, washed with 50 cm 3 in total of distilled water and air dried. 720 mg of N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-4-methylbenzoic acid are thus obtained, in the form of a white solid melting at around 155 ° C.
Exemple 5 Example 5
Une solution de 420 mg d'acide 3-amino-2-méthylbenzoique et 0,71 cm3 de chlorotriméthylsilane dans 30 cm3 de dichloromethane est chauffée au reflux pendant 3 heures, puis refroidie à une température voisine de 25°C. A cette solution, on ajoute successivement 30 cm3 de dichloromethane, 1,5 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique, 360 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 900 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodnmιde et 1,47 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (4,5 g) est chromatographie sur une colonne de 6 cm de diamètre contenant 240 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène, d'acétate d'éthyle et de méthanol 9-9-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm . Les 7 premières fractions sont éliminées; les 43 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 780 mg d'acide N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl]-3-amino-2-méthylbenzoïque, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,1 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle-méthanol (9-9-1 en volumes)). Une solution de 780 mg d'acide N '-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amιno-2-méthylbenzoïque, 0,7 cm3 de soude 5N, 5 cm3 de tétrahydrofuiane et 10 cm de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25°C puis 1,0 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée sont ajoutés. Apres 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air. Le résidu obtenu (650 mg) est chromatographie sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 115 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de méthanol et d'acétate d'éthyle 1-19 en volumes en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 3 premières fractions sont éliminées ; les 4 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 570 mg qui sont purifiés une nouvelle fois par chromatographie (colonne de 3,5 cm de diamètre, 100 g de silice (0,02-0,045 mm), éluant : acétate d'éthyle, volume des fractions : 75 cm3). Les 19 premières fractions sont éliminées ; les 31 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduiteA solution of 420 mg of 3-amino-2-methylbenzoic acid and 0.71 cm 3 of chlorotrimethylsilane in 30 cm 3 of dichloromethane is heated at reflux for 3 hours, then cooled to a temperature in the region of 25 ° C. To this solution, 30 cm 3 of dichloromethane, 1.5 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoic acid, 360 mg of hydrate of 1 are successively added. -hydroxybenzotriazole, 900 mg of 1- (3-methylethylamopropyl) -3-ethylcarbodnmιde hydrochloride and 1.47 cm 3 of triethylamine. The solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (4.5 g) is chromatographed on a column 6 cm in diameter containing 240 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride, ethyl acetate and methanol 9-9-1 by volume, collecting 75 cm fractions. The first 7 fractions are eliminated; the following 43 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 780 mg of N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl] -3-amino-2-methylbenzoic acid are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.1; chromatography on a thin layer of silica; eluent: methylene chloride-ethyl acetate-methanol (9-9-1 by volume)). A solution of 780 mg of N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-2-methylbenzoic acid, 0.7 cm 3 of 5N sodium hydroxide, 5 cm 3 of tetrahydrofuiane and 10 cm of methanol is stirred for 24 hours at a temperature in the region of 25 ° C. then 1.0 cm 3 of 5N hydrochloric acid and 10 cm 3 of distilled water are added. After 30 minutes with stirring, the solid is separated by filtration, washed with 50 cm 3 in total of distilled water and air dried. The residue obtained (650 mg) is chromatographed on a column 3.5 cm in diameter containing 115 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methanol and ethyl acetate 1-19 in volumes by collecting 50 cm 3 fractions. The first 3 fractions are eliminated; the next 4 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 570 mg are thus obtained which are purified again by chromatography (column 3.5 cm in diameter, 100 g of silica (0.02-0.045 mm), eluent: ethyl acetate, volume of the fractions: 75 cm 3 ). The first 19 fractions are eliminated; the following 31 are combined and concentrated under reduced pressure
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 190 mg obtenus sont dissous dans 1 cm3 de méthanol et additionnés de 20 cm3 d'eau distillée. Le solide obtenu est séparé par filtration et lavé par 100 cm3 d'eau distillée. On obtient ainsi 330 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-2-méthylbenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 152°C. (2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C. The 190 mg obtained are dissolved in 1 cm 3 of methanol and added with 20 cm 3 of distilled water. The solid obtained is separated by filtration and washed with 100 cm 3 of distilled water. 330 mg of N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-2-methylbenzoic acid are thus obtained, in the form of a white solid melting at around 152 ° C.
Exemple 6 A une solution de 1 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque, dans 100 cm3 de dichloromethane, on ajoute 330 mg de 3-amιno-4-méthoxybenzoate de méthyle, 240 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 610 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodiimide et 0,67 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute 50 cm3 d'eau distillée et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 75 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,6 g) est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 210 g de silice (0,02- 0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acé- tate d'éthyle 19-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm3. Les 67 premières fractions sont éliminées; les 63 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 780 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-lup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,18 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (19-1 en volumes)). EXAMPLE 6 To a solution of 1 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoic acid, in 100 cm 3 of dichloromethane, 330 mg of 3-amιno- is added. Methyl 4-methoxybenzoate, 240 mg of 1-hydroxybenzotriazole hydrate, 610 mg of 1- (3-dιméthylamιnopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride and 0.67 cm3 of triethylamine. The solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 50 cm 3 of distilled water and 50 cm 3 of ethyl acetate are added. The organic phase is extracted and the aqueous phase is exhausted with 75 cm 3 in total of ethyl acetate. The organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (1.6 g) is chromatographed on a column 5 cm in diameter containing 210 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 19-1 in volumes by collecting fractions of 75 cm3. The first 67 fractions are eliminated; the following 63 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. This gives 780 mg of methyl N '- [N- (3β-acetoxy-lup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-4-methoxybenzoate, in the form d '' a white meringue (Rf = 0.18; chromatography on a thin layer of silica; eluent: methylene chloride-ethyl acetate (19-1 by volume)).
Une solution de 780 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl)-3-amino-4-méthoxybenzoate de méthyle, 1,4 cm3 de soude 5N, 5 cm3 de tetrahydrofurane et 10 cm3 de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25ºC et on ajoute 2,0 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée. Après 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 650 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthoxybenzoique, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 138°C. A solution of 780 mg of methyl N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl) -3-amino-4-methoxybenzoate, 1.4 cm 3 of 5N sodium hydroxide, 5 cm 3 of tetrahydrofuran and 10 cm 3 of methanol is stirred for 24 hours at a temperature in the region of 25 ° C. and 2.0 cm 3 of 5N hydrochloric acid and 10 cm 3 of distilled water are added. After 30 minutes with stirring, the solid is separated by filtration, washed with 50 cm 3 in total of distilled water and air dried. 650 mg of N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -3-amino-4-methoxybenzoic acid are thus obtained, in the form of a white solid melting at around 138 ° C.
Exemple 7 Example 7
A une solution, refroidie à -10°C, de 1,96 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque, dans 9 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,45 cm3 de triethylamine, on ajoute 0,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle. L'agitation est maintenue pendant 30 minutes et on ajoute goutte a goutte une solution de 597 mg de 4-amino-3-méthoxybenzoate de méthyle dans 9 cm3 de dioxane et 3 cm3 d'eau distillée. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine deTo a solution, cooled to -10 ° C, of 1.96 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoïque, in 9 cm 3 of tetrahydrofuran and 0.45 cm 3 of triethylamine, 0.3 cm 3 of isobutyl chloroformate is added. Stirring is continued for 30 minutes and a solution of 597 mg of methyl 4-amino-3-methoxybenzoate in 9 cm 3 of dioxane and 3 cm 3 of distilled water is added dropwise. The solution is stirred for 12 hours at a temperature close to
20°C puis on ajoute 80 cm3 d'eau distillée et 20 cm3 de chlorure de méthylène. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 40 cm au total de chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium an hydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,74 g) est chromatographie sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 19-1 en volumes en recueillant des fractions de 5 cm3. Les 73 premières fractions sont éliminées ; les 80 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (20 mm de mercure;20 ° C then 80 cm 3 of distilled water and 20 cm 3 of methylene chloride are added. The organic phase is extracted and the aqueous phase is exhausted with a total of 40 cm of methylene chloride. The organic extracts are combined, dried over magnesium sulfate an hydra and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (1.74 g) is chromatographed on a column 2.5 cm in diameter containing 50 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 19-1 by volume, collecting 5 cm 3 fractions. The first 73 fractions are eliminated; the following 80 are combined and concentrated under reduced pressure (20 mm of mercury;
2,7 kPa) a une tempeiature voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,18 g de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-3-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C. 1.18 g of methyl N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -4-methyl-3-methoxybenzoate are thus obtained, in the form d '' a white meringue
(Rf = 0,41 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (19-1 en volumes)). (Rf = 0.41; thin layer chromatography on silica; eluent: methylene chloride-ethyl acetate (19-1 by volume)).
Une solution de 420 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amino-3-methoxybenzoate de méthyle, 1,3 cm3 de soude 4N, 3,5 cm3 de tetrahydrofurane et 2 cm3 de méthanol est agitéeA solution of 420 mg of methyl N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -4-amino-3-methoxybenzoate, 1.3 cm 3 of 4N sodium hydroxide, 3.5 cm 3 of tetrahydrofuran and 2 cm 3 of methanol is stirred
24 heures à une température voisine de 25°C puis le solvant est évaporé à sec, sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est dilué dans 20 cm3 d'eau distillée et on ajoute 2 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure sous agitation, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 172 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-3-méthoxybenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 133°C. Exemple 8 24 hours at a temperature close to 25 ° C then the solvent is evaporated to dryness, under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C. The residue is diluted in 20 cm 3 of distilled water and 2 cm 3 of 4N hydrochloric acid are added. After 1 hour with stirring, the solid obtained is separated by filtration, washed with 50 cm 3 in total of distilled water and dried under reduced pressure (15.5 Pa) at a temperature in the region of 35 ° C. 172 mg of N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -4-amino-3-methoxybenzoic acid are thus obtained, in the form of a white solid melting at around 133 ° C. Example 8
A une solution de 2 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amι-nooctanoique, dans 100 cm3 de dichloromethane, on ajoute 2,13 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue pendant 15 heures puis le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute au résidu une solution de 1,51 g de 4-amino-5-chloro-2-methoxybenzoate de méthyle et 0,84 cm3 de triethylamine dans 100 cm de dichloromethane. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 100 cm d'eau distillée. La phase organique est extraite, la vée 2 fois par 100 cm3 d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC. Le résidu obtenu (3,2 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 70-30 en volumes. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,7 g de N '-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl]-4-amιno-5-chloro-2-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une poudre blanche fondant vers 156°C. 2.13 cm 3 of thionyl chloride are added to a solution of 2 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amι-nooctanoique, in 100 cm 3 of dichloromethane . Stirring is continued for 15 hours then the solvent is evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. A solution of 1.51 g of methyl 4-amino-5-chloro-2-methoxybenzoate and 0.84 cm 3 of triethylamine in 100 cm of dichloromethane is added to the residue. The solution is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. and then 100 cm of distilled water are added. The organic phase is extracted, the vee 2 times per 100 cm 3 of distilled water, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40ºC. The residue obtained (3.2 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate 70-30 by volume. The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 1.7 g of methyl N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl] -4-methyl-5-chloro-2-methoxybenzoate are thus obtained, in the form of a white powder melting at around 156 ° C.
Une solution de 1,7 g de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-5-chloro-2-méthoxybenzoate de méthyle,A solution of 1.7 g of methyl N '- [N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl] -4-amino-5-chloro-2-methoxybenzoate,
25,5 cm3 de soude 5N, 25,5 cm3 de tetrahydrofurane et 51 cm3 de méthanol est agitée 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est dilué par 20 cm3 de méthanol puis acidifié par de l'acide chlorhydrique 2N. On ajoute 200 cm3 d'eau distillée et après 2 heures sous agitation, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé jusqu'à neutralité par de l'eau distillée et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. La poudre obtenue est chromatographiée sur une colonne de silice (0,02- 0,045 mm) éluée avec de l'acétate d'éthyle. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite25.5 cm 3 of 5N sodium hydroxide, 25.5 cm 3 of tetrahydrofuran and 51 cm 3 of methanol is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The reaction mixture is diluted with 20 cm 3 of methanol and then acidified with 2N hydrochloric acid. 200 cm 3 of distilled water are added and after 2 hours with stirring, the solid obtained is separated by filtration, washed until neutral with distilled water and dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a similar temperature 40 ° C. The powder obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with ethyl acetate. The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est repris par(2.7 kPa) at a temperature close to 40 ° C. The residue is taken up by
10 cm3 d'éther éthylique, filtré, lavé par 5 cm3 d'éther éthylique et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de10 cm 3 of ethyl ether, filtered, washed with 5 cm 3 of ethyl ether and dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to
20°C. On obtient ainsi 120 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn- 28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amino-5-chloro-2-méthoxybenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 164°C. 20 ° C. 120 mg of N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn- 28-oyl) -8-aminooctanoyl] -4-amino-5-chloro-2-methoxybenzoic acid are thus obtained. form a white solid, melting at around 164 ° C.
Exemple 9 A une suspension de 383 mg d'acide 3-méthoxycarbonyl-5-nitro ben- zoïque dans 20 cm3 de dichloromethane, on ajoute 260 mg d'hydrate deEXAMPLE 9 To a suspension of 383 mg of 3-methoxycarbonyl-5-nitro benzoic acid in 20 cm 3 of dichloromethane, 260 mg of hydrate is added.
1-hydroxybenzotriazole et 916 mg de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane dans 20 cm3 de dichloromethane. A la solutior obtenue, on ajoute successivement 844 mg de chlorhydrate de 1-(3- diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodnmιde puis 0,87 cm3 de triethylamine en solution dans 20 cm3 de dichloromethane. La solution est agitée à une température voisine de 20°C durant 15 heures puis le mélange reactionnel est lavé 3 fois avec 20 cm d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de sodium est concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec du dichloromethane. Les 120 fractions de 2 cm3 sont éliminées et l'éluant est remplacé par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle (8:2) (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 740 mg de N-[(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyl]-5-nιtrobenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,80 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 8:2 en volumes). 9 cm3 de soude N sont ajoutes en 5 minutes environ a une solution de1-hydroxybenzotriazole and 916 mg of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane in 20 cm 3 of dichloromethane. To the solution obtained, 844 mg of 1- (3- dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodnmιde then 0.87 cm 3 of triethylamine dissolved in 20 cm 3 of dichloromethane. The solution is stirred at a temperature in the region of 20 ° C for 15 hours then the reaction mixture is washed 3 times with 20 cm of distilled water. The organic phase is then dried over sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with dichloromethane. The 120 fractions of 2 cm 3 are eliminated and the eluent is replaced by a mixture of dichloromethane and ethyl acetate (8: 2) (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 740 mg of N - [(3β-acetoxy-20 (29) -lupen-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoyl] -5-methyl nobenzoate are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.80 ; thin layer chromatography on silica; eluent dichloromethane - ethyl acetate 8: 2 by volume). 9 cm 3 of sodium hydroxide N are added in approximately 5 minutes to a solution of
740 mg de 3-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyl]-5-nιtrobenzoate de méthyle dans 4 cm3 de méthanol et 9 cm3 de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant740 mg of 3- [N- (3β-acetoxy-20 (29) -lupen-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoyl] -5-methylnobenzoate in 4 cm 3 of methanol and 9 cm 3 of tetrahydrofuran and the mixture reaction is agitated for
15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pli voisin de 2 à l'aide 4 cm3 d'acide chlorhydrique15 hours at a temperature close to 20 ° C. The reaction mixture is acidified to a fold close to 2 using 4 cm 3 of hydrochloric acid
4N. Après 1 heure d'agitation, on ajoute 100 cm3 d'eau distillée et4N. After 1 hour of stirring, 100 cm 3 of distilled water are added and
50 cm de dichloromethane. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 50 cm3 de dichloromethane. Les phases organiques réunies sont séchée sur sulfate de sodium, puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide obtenu (360 mg) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24:6:1 (en volumes), en recueillant des fractions de 5 cm Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient 170 mg d'acide 3-[N-(3β-hydroxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyl]-5-nιtrobenzoïque fondant à une température voisine de 118°C. Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane peut être obtenu de la manière suivante : 1000 cm3 d'une solution dans le dichloromethane de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de 30 g d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) sont ajoutés goutte à goutte en environ 10 heures à une solution de 46,8 g de 1 , 7-diaminoheptane dans50 cm of dichloromethane. The organic phase is decanted, the aqueous phase is extracted with 50 cm 3 of dichloromethane. The combined organic phases are dried over sodium sulfate, then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The solid obtained (360 mg) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia 24: 6: 1 (by volume), collecting fractions of 5 cm The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 170 mg of 3- [N- (3β-hydroxy-20 (29) -lupen-28-oyl) -7-aminoheptylcarbamoyl] -5-n-trobenzoic acid are obtained, melting at a temperature in the region of 118 ° C. The N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane can be obtained in the following manner: 1000 cm 3 of a solution in dichloromethane of 3β-acetoxylup chloride 20 (29) -en-28-oyl (prepared from 30 g of 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid) are added dropwise in approximately 10 hours to a solution of 46, 8 g of 1,7-diaminoheptane in
120 cm 3 de dichloromethane. Le mé ,lange re ,actionnel est agite durant120 cm 3 of dichloromethane. The reactive mixture is agitated during
15 heures à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC. Le résidu est repris par 2000 cm3 d'eau distillée. Le solide est filtré, lavé par 3 fois 200 cm3 d'eau distillée, puis mis en solution dans15 hours at a temperature close to 20 ° C then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 40ºC. The residue is taken up in 2000 cm 3 of distilled water. The solid is filtered, washed with 3 times 200 cm 3 of distilled water, then dissolved in
500 cm d'éthanol. La solution est filtrée, le solide est lavé 2 fois avec 50 cm d'éthanol et les filtrats sont évaporés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 28 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane sous la forme d'une meringue jaune. (Rf = 0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes)). 500 cm of ethanol. The solution is filtered, the solid is washed twice with 50 cm of ethanol and the filtrates are evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 50 ° C. The residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of chloroform, methanol and 20% ammonia (24-6-1 by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 28 g of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane are thus obtained in the form of a yellow meringue. (Rf = 0.25; chromatography on a thin layer of silica; eluent: chloroform-methanol-ammonia at 20% (24-6-1 by volume)).
Le chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle est préparé d'après J. PROVITA et A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun., 41, 1200 (1976). 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride is prepared according to J. PROVITA and A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun., 41, 1200 (1976).
Exemple 10 Example 10
En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-4-amino-2-hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 4-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pF=206°C, (28%). By operating in analogy with Example 1, N- {N- [3β-hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoyl} -4-amino-2-hydroxybenzoic acid was prepared from 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid and methyl 4-amino-2-hydroxybenzoate, mp = 206 ° C, (28%).
L'acide 3β-acétoxyluρ-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoïque peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 . Le 4-amino-2-hydroyybenzoate de méthyle peut être préparé selon D.J. Drain, D.D. Martin, B.W. Mitchell, D.E. Seymour et F. S. Spnng, J. Chem. Soc, 1498-1503 (1949). 3β-acetoxyluρ-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1. Methyl 4-amino-2-hydroyybenzoate can be prepared according to DJ Drain, DD Martin, BW Mitchell, DE Seymour and FS Spnng, J. Chem. Soc, 1498-1503 (1949).
Exemple 11 En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-amιnooctanoyl)-4-amιno-2-chlorobenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 4-amino-2-chlorobenzoate de méthyle, pF=165°C, (54%). L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 . Example 11 Operating by analogy with Example 1, N- {N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-amιnooctanoyl) -4-amιno-2-chlorobenzoic acid a was prepared from 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid and methyl 4-amino-2-chlorobenzoate, mp = 165 ° C, (54%). 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
Le 4-amino-2-chlorobenzoate de méthyle peut être préparé selon M. Rubin, U.C. Marks, II.Wishinsky et A. Lanzilotti, J. Am.Chem. Soc., 68, 623-24 (1946). Exemple 12 Methyl 4-amino-2-chlorobenzoate can be prepared according to M. Rubin, U.C. Marks, II.Wishinsky and A. Lanzilotti, J. Am.Chem. Soc., 68, 623-24 (1946). Example 12
En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-3-amιno-2-hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoιque et de 3-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pF=132°C, (22%). By operating by analogy with Example 1, N- {N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoyl} -3-amιno-2-hydroxybenzoic acid was prepared starting from 3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoιque acid and methyl 3-amino-2-hydroxybenzoate, mp = 132 ° C, (22%).
L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 . 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
Le 3-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle peut être préparé selon A. Einborn et B. Pfyl J. Liebig's Ann. Chem., 311, 34-73 (1900). Exemple 13 Methyl 3-amino-2-hydroxybenzoate can be prepared according to A. Einborn and B. Pfyl J. Liebig's Ann. Chem., 311, 34-73 (1900). Example 13
En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-5-amino-2-hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 5-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pr=218°C, (6%). L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 . By operating by analogy with Example 1, N- {N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoyl} -5-amino-2-hydroxybenzoic acid was prepared from 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid and methyl 5-amino-2-hydroxybenzoate, pr = 218 ° C, (6%). 3β-acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
Le 5-amino-2-hydroyybenzoate de méthyle peut être préparé selon F. Wessely, K. Benedikt et II. Benger, Monat. Chem., 80, 197-201 (1949). Exemple 14 Methyl 5-amino-2-hydroyybenzoate can be prepared according to F. Wessely, K. Benedikt and II. Benger, Monat. Chem., 80, 197-201 (1949). Example 14
A une solution de 310 mg d'acide 5-méthylιsophtalιque dans 55 cm3 de dichloromethane, on ajoute 0,50 cm3 de triethylamine et 0,15 cm-3 de chlorure d'oxalyle. Après 20 minutes d'agitation à une température voisine de 25°C, on ajoute une solution de 910 mg de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιamιnoheptane dans 10 cm3 de dichloromethane. La solution est agitée à une température voisine de 20°C durant 5 heures puis le mélange reactionnel est lavé avec 20 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0,5N et 60 cm3 d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,1 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes) . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 400 mg d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-méthylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,37; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 19:1 en volumes). 1 cm3 de soude 5N sont ajoutés à une solution de 400mg d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)- . -(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-méthyl- benzoïque dans 40 cm3 de méthanol et 20 cm3 de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité 38 heures à une température voisine deTo a solution of 310 mg of 5-methylsophthalic acid in 55 cm 3 of dichloromethane, 0.50 cm 3 of triethylamine and 0.15 cm-3 of oxalyl chloride are added. After 20 minutes of stirring at a temperature in the region of 25 ° C., a solution of 910 mg of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-dιamιnoheptane is added in 10 cm 3 of dichloromethane. The solution is stirred at a temperature in the region of 20 ° C for 5 hours then the reaction mixture is washed with 20 cm 3 of an aqueous solution of 0.5N hydrochloric acid and 60 cm 3 of distilled water. The organic phase is then dried over magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (1.1 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia 24-6-1 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 400 mg of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -3- (7-aminoheptylcarbamoyl) -5-methylbenzoic acid are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0 , 37; thin layer chromatography on silica; eluent dichloromethane - methanol 19: 1 by volume). 1 cm 3 of 5N sodium hydroxide is added to a solution of 400 mg of N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) - acid. - (7-aminoheptylcarbamoyl) -5-methyl-benzoic in 40 cm 3 of methanol and 20 cm 3 of tetrahydrofuran and the reaction mixture is stirred 38 hours at a temperature close to
20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 par de l'acide chlorhydrique concentré. Après une heure d'agitation, on ajoute 150 cm3 d'eau distillée. Le solide est filtré et rincé par 25 cm3 d'eau distillée. Le solide est dissout dans 30 cm3 de chloroforme, séché sur du sulfate de magnésium, puis évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 250 mg d'acide N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-méthylbenzoique sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 180°C. 20 ° C. The reaction mixture is acidified to a pH close to 2 with concentrated hydrochloric acid. After one hour of stirring, 150 cm 3 of distilled water are added. The solid is filtered and rinsed with 25 cm 3 of distilled water. The solid is dissolved in 30 cm 3 of chloroform, dried over magnesium sulphate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. We thus obtains 250 mg of N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -3- (7-aminoheptylcarbamoyl) -5-methylbenzoic acid in the form of a white solid melting at a neighboring temperature 180 ° C.
Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9. The N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-dιaminoheptane can be obtained as described in Example 9.
Exemple 15 Example 15
En opérant par analogie avec l'exemple du RPR107926 (Exemple 9 de ST93023), l'acide N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-bromobenzoïque a été préparé à partir de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane et d'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoique, pF=121°C, (31%). By operating by analogy with the example of RPR107926 (Example 9 of ST93023), N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -3- (7-aminoheptylcarbamoyl) -5-bromobenzoic acid was prepared from N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-dιaminoheptane and 3-bromo-5-methoxycarbonylbenzoic acid, mp = 121 ° C, (31 %).
Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9. The N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-dιaminoheptane can be obtained as described in Example 9.
L'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière ci-dessous. Une suspension de 5 g de 3-bromoιsophtalate de méthyle dans 20 cm3 d'une solution 0,50 N d'hydroxyde de baryum est agitée 20 heures à une température voisine de 20°C. Le solide est filtré, lavé avec 5 cm3 de méthanol puis traité par 20 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. La phase aqueuse est extraite par 40 cm3 de diéthylether. Les phases organiques réunies sont lavées par 40 cm3 d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, puis évaporées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide obtenu (2,19 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,65 g d'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoique sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,80; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant: chloroforme, méthanol et ammoniaque 24-6-1 (en volumes). Exempl e 16 3-Bromo-5-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared in the manner below. A suspension of 5 g of methyl 3-bromoιsophthalate in 20 cm 3 of a 0.50 N solution of barium hydroxide is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C. The solid is filtered, washed with 5 cm 3 of methanol and then treated with 20 cm 3 of 4N hydrochloric acid. The aqueous phase is extracted with 40 cm 3 of diethyl ether. The combined organic phases are washed with 40 cm 3 of distilled water, dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The solid obtained (2.19 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia 24-6-1 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 1.65 g of 3-bromo-5-methoxycarbonylbenzoic acid are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.80; chromatography on a thin layer of silica; eluent: chloroform, methanol and ammonia 24-6- 1 (by volume). Example 16
En opérant par analogie avec l'exemple 9, l'acide N- (3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4-(7-aminoheptylcarbamoyl)-2-fluorobenzoïque a été préparé à partir de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-di-aminoheptane et d'acide 3-fluoro-4-méthoxycarbonylbenzoιque, pF=150°C, (32%). By operating in analogy with Example 9, N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -4- (7-aminoheptylcarbamoyl) -2-fluorobenzoic acid was prepared from N - (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-di-aminoheptane and 3-fluoro-4-methoxycarbonylbenzoιque acid, mp = 150 ° C, (32%).
Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9. The N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane can be obtained as described in Example 9.
L'acide 3-fluoro-4-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière suivante: 3-fluoro-4-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared in the following manner:
Une solution de 2,5 g de fluoro téréphtalate de diméthyle et de 11,8 cm3 d'hydroxyde de sodium 1N dans 30 cm3 de méthanol est portée durant 90 min. à une température voisine du reflux. Le milieu reactionnel refroidi à une température voisine de 25°C est acidifié par 12 cm3 d'acide chlorhydrique 1N. Le solide blanc formé est filtré, lavé par moyen de 100 cm3 d'eau distillée puis mis en solution dans 100 cm5 d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de- magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (520 mg) est recristallise successivement dans le 1,2-dιchloroéthane et dans l'eau. On obtient ainsi 230 mg d'acide 3-fluoro-4-éthoxycarbonylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,49; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 17:3 en volumes). Exemple 17 A solution of 2.5 g of dimethyl fluoro terephthalate and 11.8 cm 3 of 1N sodium hydroxide in 30 cm 3 of methanol is carried for 90 min. at a temperature close to reflux. The reaction medium, cooled to a temperature in the region of 25 ° C, is acidified with 12 cm 3 of 1N hydrochloric acid. The white solid formed is filtered, washed with 100 cm 3 of distilled water and then dissolved in 100 cm 5 of ethyl acetate. The organic phase is dried over magnesium sulphate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (520 mg) is recrystallized successively from 1,2-dιchloroethane and from water. 230 mg of 3-fluoro-4-ethoxycarbonylbenzoic acid are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.49; chromatography on a thin layer of silica; eluent dichloromethane - methanol 17: 3 by volume). Example 17
En opérant par analogie avec l'exemple 9, l'acide 5-(t-butyloxycarbonylamino)-3-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl)benzoïque a été préparé à partir de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane et d'acide 5-(t-butyloxycarbonylamino)-3-méthoxycarbonylbenzoïque, pF=180-90 °C, (38%). Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9. By analogy with Example 9, 5- (t-butyloxycarbonylamino) -3- {N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -7-aminoheptylcarbamoyl) benzoic acid was prepared from N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane and 5- (t-butyloxycarbonylamino) -3-methoxycarbonylbenzoic acid, mp = 180-90 ° C, (38%). The N- (3β-acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-dιaminoheptane can be obtained as described in Example 9.
L'acide 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière suivante: Une solution de 2 g de 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoate de méthyle et de 428 mg d'hydroxyde de potassium dans un mélange de 40 cm3 de méthanol et de 5 cm3 de diméthylformamide est agitée 20 heures à une température voisine de 25°C puis 20 heures à une température voisine de 50°C. Le millieu reactionnel est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C puis repris par 150 cm3 d'eau distillée et acidifié à pH = 2 au moyen d'acide chlorhydrique 4N. La suspension obtenue est extraite au moyen de 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par 200 cm3 d'eau distillée. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (3,4 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de dichloromethane et de méthanol 9:1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 2,4 g acide 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,34; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 9:1 en volumes). 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared as follows: A solution of 2 g of methyl 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoate and 428 mg of potassium hydroxide in a mixture of 40 cm 3 of methanol and 5 cm 3 of dimethylformamide is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 25 ° C and then for 20 hours at a temperature in the region of 50 ° C. The reaction medium is evaporated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C and then taken up in 150 cm 3 of distilled water and acidified to pH = 2 using 4N hydrochloric acid. The suspension obtained is extracted using 200 cm 3 of ethyl acetate. The organic phase is washed with 200 cm 3 of distilled water. The organic phase is dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (3.4 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and methanol 9: 1 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 2.4 g of 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoic acid are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.34; chromatography on a thin layer of silica; eluent dichloromethane - methanol 9: 1 by volume ).
A une solution de 5 g de 5-amιnoιsophtalate de diméthyle et de 24 cm3 d'hydroxyde de sodium 2N, refroidie à 5°C, on ajoute goutte à goutte en approximativement 30 min. une solution de 6,27 g de carbonate de di tert-butyle dans 12 cm-3 de tetrahydrofurane. AprèsTo a solution of 5 g of dimethyl 5-amιnoιsophthalate and 24 cm 3 of 2N sodium hydroxide, cooled to 5 ° C, is added dropwise in approximately 30 min. a solution of 6.27 g of di tert-butyl carbonate in 12 cm- 3 of tetrahydrofuran. After
5heures de chauffage à une température voisine de 50°C, 6,27 g de carbonate de di tert-butyle dans 12 cm3 de tetrahydrofurane sont ajoutés et le milieu reactionnel est chauffé 8 heures à une température voisine de 50°C. Le mélange reactionnel est ensuite refroidi à une température voisine de 25°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Au résidu obtenu, 100 cm3 d'eau distillée sont additionnés. La phase aqueuse est extraite par 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée successivement par 200 cm3 d'eau distillée, 200 cm*3 d'une solution saturée en acide citrique, 200 cm3 d'une solution saturée en chlorure de sodium et finalement par 100 cm3 d'eau distillée. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (5,0 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec du dichlorométhane. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,52 g de 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,25; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane). 5 hours of heating at a temperature in the region of 50 ° C, 6.27 g of di-tert-butyl carbonate in 12 cm 3 of tetrahydrofuran are added and the reaction medium is heated for 8 hours to a temperature in the region of 50 ° C. The reaction mixture is then cooled to a temperature in the region of 25 ° C and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) to a temperature in the region of 40 ° C. To the residue obtained, 100 cm 3 of distilled water are added. The aqueous phase is extracted with 200 cm 3 of ethyl acetate. The sentence organic is washed successively with 200 cm 3 of distilled water, 200 cm * 3 of a saturated solution of citric acid, 200 cm 3 of a saturated solution of sodium chloride and finally with 100 cm 3 of distilled water. The organic phase is dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. The residue obtained (5.0 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with dichloromethane. The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 3.52 g of methyl 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoate are thus obtained in the form of a white meringue (Rf = 0.25; chromatography on a thin layer of silica; eluent dichloromethane).
La présente invention concerne également les compositions pharmaceu- tiques contenant au moins un produit de formule générale (I) éventuellement sous forme de sel, à l'état pur ou sous forme d'une association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables, ou avec un autre agent destiné au traitement du SIDA, un agent antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien. The present invention also relates to pharmaceutical compositions containing at least one product of general formula (I) optionally in the form of a salt, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants , or with another agent intended for the treatment of AIDS, an antiviral, immunomodulatory or antimicrobial agent.
La composition selon l'invention est capable de maintenir en vie les cellules infectées par un virus IIIV et donc de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets déjà infectés en réduisant la mortalité des cellules infectées. Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale ou rectale. The composition according to the invention is capable of keeping cells infected with an IIIV virus alive and therefore of reducing the progression to AIDS or of reducing its severity in subjects already infected by reducing the mortality of the infected cells. The compositions can be used orally, parenterally or rectally.
Les compositions peuvent être utilisées à titre curatif ou à titre préventif chez des sujets présentant une immunodéfîcience et/ou infectés par un virus HIV. Bien entendu, la constitution de ces compositions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des îmmunodéprimés. The compositions can be used for curative or preventive purposes in subjects having an immunodeficiency and / or infected with an HIV virus. Of course, the constitution of these compositions will be adapted to the particular case of the digestive tract of the immunocompromised.
Comme compositions solides pour administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des gélules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon. As solid compositions for oral administration, tablets, pills, capsules, powders or granules can be used. In these compositions, the active product according to the invention is mixed with one or more inert diluents or adjuvants, such as sucrose, lactose or starch.
Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou un enrobage destiné à une libération contrôlée. These compositions can include substances other than diluents, for example a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions pharmaceutiquement acceptables, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants. As liquid compositions for oral administration, pharmaceutically acceptable solutions, suspensions, emulsions, syrups and elixirs containing inert diluents such as water or paraffin oil can be used. These compositions can also include substances other than diluents, for example wetting, sweetening or flavoring products.
Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. The compositions for parenteral administration can be sterile solutions or emulsions. As solvent or vehicle, propylene glycol, a polyethylene glycol, vegetable oils, in particular olive oil, injectable organic esters, for example ethyl oleate, can be used.
Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, îsotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants. These compositions can also contain adjuvants, in particular wetting agents, isotonizers, emulsifiers, dispersants and stabilizers.
La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable. Sterilization can be done in several ways, for example using a bacteriological filter, by irradiation or by heating. They can also be prepared in the form of sterile solid compositions which can be dissolved at the time of use in sterile water or any other sterile injectable medium.
Les compositions par administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le beurre de cacao, des glycérides semi-synthétiques ou des polyéthylèneglycols . En thérapeutique humaine, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids, du degré de l'infection et des autre facteurs propres au sujet à traiter. Généralement, les doses sont comprises entre 10 et 100 mg/kg par voie orale pour un adulte. The compositions for rectal administration are suppositories or rectal capsules, which contain, in addition to the active principle, excipients such as cocoa butter, semi-synthetic glycerides or polyethylene glycols. In human therapy, the doctor will determine the dosage he considers most appropriate based on preventive or curative treatment, depending on age, weight, degree of infection and other factors specific to the subject to be addressed. Generally, the doses are between 10 and 100 mg / kg orally for an adult.
La présente invention concerne également les associations constituées d'un ou plusieurs dérivés du lupane de formule générale (I), et/ou le cas échéant leurs sels, et d'un autre principe actif connu pour son activité anti-rétrovirus, éventuellement en présence d'excipients pharmaceutiquement acceptables. The present invention also relates to combinations consisting of one or more lupane derivatives of general formula (I), and / or where appropriate their salts, and of another active principle known for its anti-retrovirus activity, optionally in the presence pharmaceutically acceptable excipients.
Les agents anti-rétrovirus pouvant être associés sont choisis parmi des agents compatibles et inertes vis-à-vis du dérivé du lupane de formule générale (I). A titre non limitatif ces agents sont choisis parmi des inhibiteurs de la reverse transcriptase [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), didéoxycytidine (DDC), TIBO, névirapine, PMEA, D4T, pyridones, α-APA, HEPT... ], parmi des inhibiteurs de la protéase [comme par exemple le RO 31-8959 ou le A 77003], ou parmi des inhibiteurs de la protéine tat [comme par exemple le RO 24-7429]. The anti-retrovirus agents which can be combined are chosen from agents which are compatible and inert with respect to the lupane derivative of general formula (I). Without limitation, these agents are chosen from reverse transcriptase inhibitors [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), dideoxycytidine (DDC), TIBO, nevirapine, PMEA, D4T, pyridones, α-APA, HEPT ...] , among protease inhibitors [such as RO 31-8959 or A 77003], or among tat protein inhibitors [such as RO 24-7429, for example).
L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention. The following example illustrates a composition according to the invention.
Exemple Example
On prépare selon la technique habituelle des comprimés de produit actif ayant la composition suivante : Active product tablets having the following composition are prepared according to the usual technique:
- acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-3- amιno-2-méthylbenzoιque 100 mg - acid N '- [N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoyl] -3- amιno-2-methylbenzoιque 100 mg
- amidon 332 mg - starch 332 mg
- silice 120 mg - stéarate de magnésium 12 mg - silica 120 mg - magnesium stearate 12 mg

Claims

REVENDICATIONS
1 - Un dérivé du lupane de formule générale : 1 - A lupane derivative of general formula:
dans laquelle R représente un radical de formule générale : in which R represents a radical of general formula:
dans laquelle R' est un atome d'hydrogène ou de radical alcoyle, in which R 'is a hydrogen atom or an alkyl radical,
X représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, Y est un radical phénylène substitué de formule générale : X represents a carbamoyl, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl radical, Y is a substituted phenylene radical of general formula:
dans laquelle R1 et R2 identiques ou différents représentent des atomes d'hydrogène ou d'halogène ou des radicaux alcoyle, alcoyloxy ou nitro, l'un au moins étant autre que l'hydrogène, R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle et, n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 2 et p est un nombre entier de 0 à 2 et sont tels que m + n + p soit compris entre 6 et 12, étant entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables lorsqu'ils existent et le cas échéant leurs formes stéréoisomères et leurs mélanges. in which R 1 and R 2, which are identical or different, represent hydrogen or halogen atoms or alkyl, alkyloxy or nitro radicals, at least one being other than hydrogen, R ° and R °° identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals and, n is an integer from 6 to 12, m is an integer from 0 to 2 and p is an integer from 0 to 2 and are such that m + n + p is between 6 and 12, it being understood that the radicals alkyl are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms, as well as their pharmaceutically acceptable salts when they exist and, where appropriate, their stereoisomeric forms and their mixtures.
2 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit rie l'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amιno-4-méthylbenzoïque. 2 - A lupane derivative according to claim 1, characterized in that it is the acid N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl ] -3-amιno-4-methylbenzoic acid.
3 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aιnino-2-méthylbenzoïque. 3 - A lupane derivative according to claim 1, characterized in that it is N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl acid ] -3-aιnino-2-methylbenzoic acid.
4 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-3-méthoxybenzoïque. 4 - A lupane derivative according to claim 1, characterized in that it is N '- [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-aminooctanoyl acid ] -4-amιno-3-methoxybenzoic acid.
5 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl)-4-amino-2-chlorobenzoïque. 6 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit ri<- l'acide M-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl)-5-amino-2-hydroxybenzoïque. 5 - A lupane derivative according to claim 1, characterized in that it is N- {N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoyl) acid) -4-amino-2-chlorobenzoic acid. 6 - A lupane derivative according to claim 1, characterized in that it is ri <- M- [N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8- acid aminooctanoyl) -5-amino-2-hydroxybenzoic acid.
7 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir une amine ou un acide de formules générales : 7 - Process for the preparation of a lupane derivative according to claim 1, characterized in that an amine or an acid of general formulas is made to act:
ou dans lesquelle- Rº , Rº°, m et p sont définis comme dans la revendication 1 et R" ' est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, sur un dérivé du lupane de formule générale : or in which- Rº, Rº °, m and p are defined as in claim 1 and R "'is a hydrogen atom or a methyl radical, on a lupane derivative of general formula:
dans laquelle R" représente un radical de formule générale : in which R "represents a radical of general formula:
— (CH2)n—COOH - (CH 2 ) n — COOH
ou  or
— (CH2)n-NH-R"' dans lesquelles n est défini comme dans la revendication 1 et R" ' est défini comme ci-dessus, puis élimine le cas échéant des radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel, lorsqu'ils existent. - (CH 2 ) n-NH-R "'in which n is defined as in claim 1 and R"' is defined as above, then eliminates protective radicals where appropriate and optionally transforms the product obtained into a salt , when they exist.
8 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon la revendication 1, à l'état pur ou en association avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceutiquement acceptable et/ou en association avec un autre principe actif antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien. 8 - Pharmaceutical composition characterized in that it contains at least one product according to claim 1, in the pure state or in association with any compatible and pharmaceutically acceptable diluent or adjuvant and / or in association with another antiviral, immunomodulatory active principle or antimicrobial.
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