EA045260B1 - Композиции и способы для лечения рака легкого - Google Patents
Композиции и способы для лечения рака легкого Download PDFInfo
- Publication number
- EA045260B1 EA045260B1 EA201992315 EA045260B1 EA 045260 B1 EA045260 B1 EA 045260B1 EA 201992315 EA201992315 EA 201992315 EA 045260 B1 EA045260 B1 EA 045260B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- amino acid
- cdr
- seq
- antibody
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 title claims description 99
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 title claims description 94
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 title claims description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 36
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 159
- 101800000285 Big gastrin Proteins 0.000 claims description 110
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 98
- RZIMNEGTIDYAGZ-HNSJZBNRSA-N pro-gastrin Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 RZIMNEGTIDYAGZ-HNSJZBNRSA-N 0.000 claims description 98
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 73
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 66
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 57
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 37
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 36
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 35
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 33
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 20
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 17
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 14
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 10
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 claims description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 9
- 102400000948 Big gastrin Human genes 0.000 claims description 7
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims description 7
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims description 7
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims description 7
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 7
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 4
- 108010066264 gastrin 17 Proteins 0.000 claims description 4
- GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N gastrin-17 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N 0.000 claims description 4
- FMIHGWZLPSIAFY-WGFKALLTSA-N gastrin-34 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 FMIHGWZLPSIAFY-WGFKALLTSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 claims description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 claims description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 claims description 2
- 108010017400 glycine-extended gastrin 17 Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 2
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 claims description 2
- 238000003339 best practice Methods 0.000 claims 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 16
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 13
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 13
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 13
- -1 progastrin amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 10
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 8
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 7
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 7
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 6
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 6
- 102000000763 Survivin Human genes 0.000 description 6
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 6
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 6
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 6
- 208000003569 Central serous chorioretinopathy Diseases 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 3
- IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N (6-azaniumylidene-1,6-dimethoxyhexylidene)azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=N)CCCCC(=N)OC IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-(4-isothiocyanatophenyl)propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C(C)CN(CC(O)=O)CC(N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-(5-hydroxy-2,2-dimethylchromen-6-yl)propan-1-one Chemical compound OC1=C2C=CC(C)(C)OC2=CC=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 101100075829 Caenorhabditis elegans mab-3 gene Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 2
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 102100021022 Gastrin Human genes 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 101150057615 Syn gene Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 208000002517 adenoid cystic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 2
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 2
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 201000006385 lung benign neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101150091368 mab-20 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 108010012766 preprogastrin Proteins 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N toluene 2,6-diisocyanate Chemical compound CC1=C(N=C=O)C=CC=C1N=C=O RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- JKHVDAUOODACDU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O JKHVDAUOODACDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHVODYOQUSEYJJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]amino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)C(CC1)CCC1CN1C(=O)C=CC1=O IHVODYOQUSEYJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 2,2-diamino-1,4-bis(4-azidophenyl)-3-butylbutane-1,4-dione Chemical compound C=1C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=1C(=O)C(N)(N)C(CCCC)C(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1-methyl-7h-purine-6-thione Chemical compound S=C1N(C)C(N)=NC2=C1NC=N2 FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanehydrazide Chemical compound C1=CC(CCCC(=O)NN)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 241000545417 Aleurites Species 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101000669426 Aspergillus restrictus Ribonuclease mitogillin Proteins 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710158575 Cap-specific mRNA (nucleoside-2'-O-)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108700032819 Croton tiglium crotin II Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000970 DNA cross-linking effect Effects 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000585 Diphtheria toxin fragment A Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 229940123414 Folate antagonist Drugs 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- JRZJKWGQFNTSRN-UHFFFAOYSA-N Geldanamycin Natural products C1C(C)CC(OC)C(O)C(C)C=C(C)C(OC(N)=O)C(OC)CCC=C(C)C(=O)NC2=CC(=O)C(OC)=C1C2=O JRZJKWGQFNTSRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 208000002927 Hamartoma Diseases 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 1
- 244000302512 Momordica charantia Species 0.000 description 1
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 101100413173 Phytolacca americana PAP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 231100000742 Plant toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 1
- 231100000632 Spindle poison Toxicity 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 description 1
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 108010001818 alpha-sarcin Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002465 dabrafenib Drugs 0.000 description 1
- BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N dabrafenib Chemical compound S1C(C(C)(C)C)=NC(C=2C(=C(NS(=O)(=O)C=3C(=CC=CC=3F)F)C=CC=2)F)=C1C1=CC=NC(N)=N1 BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229930191339 dianthin Natural products 0.000 description 1
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 108010028531 enomycin Proteins 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- QTQAWLPCGQOSGP-GBTDJJJQSA-N geldanamycin Chemical compound N1C(=O)\C(C)=C/C=C\[C@@H](OC)[C@H](OC(N)=O)\C(C)=C/[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H](C)CC2=C(OC)C(=O)C=C1C2=O QTQAWLPCGQOSGP-GBTDJJJQSA-N 0.000 description 1
- SYECJBOWSGTPLU-UHFFFAOYSA-N hexane-1,1-diamine Chemical compound CCCCCC(N)N SYECJBOWSGTPLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000007798 limiting dilution analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 108010010621 modeccin Proteins 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000003123 plant toxin Substances 0.000 description 1
- 150000003057 platinum Chemical class 0.000 description 1
- 229920001484 poly(alkylene) Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000649 purine antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003790 pyrimidine antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 201000007416 salivary gland adenoid cystic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- MKNJJMHQBYVHRS-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[11-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)undecanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCCCCCN1C(=O)C=CC1=O MKNJJMHQBYVHRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ULARYIUTHAWJMU-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O ULARYIUTHAWJMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007888 toxin activity Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N trichothecene Chemical compound C12([C@@]3(CC[C@H]2OC2C=C(CCC23C)C)C)CO1 LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N 0.000 description 1
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
Description
Введение
Настоящее изобретение относится к предупреждению и лечению рака, более конкретно, оно относится к способам и композициям для предупреждения или лечения рака легкого. Композиции согласно данному изобретению содержат молекулу, связывающую прогастрин, в частности антитело против hPG (человеческий прогастрин), тогда как способы согласно данному изобретению включают применение молекулы, связывающей прогастрин, и, в частности, антитела против hPG.
Рак легкого остается самой летальной злокачественной опухолью в мире. Несмотря на улучшения в хирургическом лечении системной терапии и лучевой терапии 5-летняя выживаемость для всех пациентов с диагнозом рака легкого остается от 15 до 20%.
Рак легкого включает два главных типа опухолей, а именно мелкоклеточный рак легкого (SCLC) и немелкоклеточный рак легкого (NSCLC). SCLC представляет 15-18% всех случаев рака легкого, тогда как NSCLC составляет примерно от 80 до 85% случаев рака легкого. Другие типы рака легкого, такие как аденокистозная карцинома, лимфомы и саркомы, а также доброкачественные опухоли легкого, являются редкими.
Мелкоклеточный и немелкоклеточный рак легкого лечат по-разному. В частности, SCLC является более отвечающим на химиотерапию и лучевую терапию, чем другие типы рака легкого. Однако сложно добиться излечения, так как SCLC имеет более выраженную тенденцию к широкой диссеминации ко времени постановки диагноза. К настоящему времени отсутствуют молекулярные биомаркеры, которые были переведены на широкораспространенную клиническую практику рака легкого. Способы лечения зависят от развития рака и обычно включают хирургию для маленьких локализованных опухолей или химиотерапию, возможно, в комбинации с лучевой терапией.
Следовательно, все еще существует потребность в новых композициях и способах для предупреждения или лечения рака легкого.
Это является целью настоящего изобретения.
Описание изобретения
Согласно настоящему изобретению теперь предложено антитело, специфично связывающееся с прогастрином, для применения в предупреждении или лечении рака легкого. Согласно настоящему изобретению также предложены композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого, где указанная композиция содержит антитело, связывающееся с прогастрином, и способы предупреждения или лечения рака легкого, включающие применение композиции, содержащей антитело, связывающееся с прогастрином, одно или в комбинации с любыми другими известными профилактическими или терапевтическими способами против рака легкого.
Антитела против hPG, описанные в данном документе, в частности нейтрализующие антитела против hPG, ингибируют PG-зависимую пролиферацию клеток опухоли легкого, делая их полезными терапевтическими агентами для лечения рака легкого. Соответственно также предложены фармацевтические композиции, содержащие антитело против hPG, и способы применения антител против hPG и/или фармацевтических композиций для лечения рака легкого. Фармацевтические композиции можно готовить для любого удобного пути введения, включающего, например, парентеральную, подкожную или внутривенную инъекцию, и они типично будут включать антитело против hPG и один или более чем один приемлемый носитель, эксципиент и/или разбавитель, подходящие для желательного способа введения, и могут включать другие возможные компоненты, как будет дополнительно описано ниже. Для терапевтических применений данные композиции могут быть упакованы в стандартные лекарственные формы для легкости применения.
Способы лечения обычно включают введение субъекту, нуждающемуся в лечении, например субъекту, у которого диагностирован рак легкого, эффективного количества антитела против PG и/или его фармацевтической композиции с получением терапевтической пользы. Терапевтическая польза, описанная ниже более подробно, включает любое уменьшение интенсивности рака легкого, например замедление или остановку прогрессирования рака легкого, уменьшение тяжести рака легкого, ингибирование роста опухолей легкого или пролиферации клеток рака легкого, уменьшение размера опухолей легкого и/или уменьшение сывороточных уровней PG у пациентов с раком легкого. Субъект может представлять собой человека или может не являться человеком, включая домашнее животное (например, кошка, собака, корова, свинья, лошадь) или не домашнее животное. Предпочтительно субъект, подлежащий лечению, представляет собой человека. Субъекты, у которых терапия антителом против hPG является полезной, могут представлять собой пациентов на любой стадии прогрессирования заболевания (например, со стадией 0, I, II, III или IV рака легкого), пациентов, которые получали терапию против рака легкого (например, химиотерапию, лучевую терапию, хирургическую резекцию), или пациентов, которые получают другую терапию против рака легкого.
Также предложены способы ингибирования роста стволовой клетки рака легкого у пациента посредством введения пациенту, нуждающемуся в ингибировании роста стволовой клетки рака легкого, антитела против PG и/или его фармацевтической композиции в эффективном количестве для ингибирования указанной стволовой клетки рака легкого.
В целом ряде воплощений антитела против PG являются эффективными в уменьшении пролифера
- 1 045260 ции, или увеличении дифференциации или скорости клеточной гибели стволовых клеток рака легкого, или в уменьшении концентрации прогастрина в крови у пациентов, подвергавшихся лечению. В других воплощениях антитела против PG и/или их фармацевтическую композицию можно вводить сопутствующе с или после второго эффективного терапевтического средства для ингибирования роста стволовых клеток колоректального рака, например антитела, имеющего специфичность, отличную от специфичности в отношении прогастрина.
Лечение антителами против hPG в том виде, в котором оно описано в данном документе, можно объединять с или дополнять другой терапией. Неограничивающие примеры другой терапии против рака легкого включают химиотерапевтическое лечение, лучевую терапию, хирургическую резекцию и терапию антителами, как описано в данном документе. В конкретном примере антитела против hPG вводятся в комбинации с химиотерапевтическими средствами. В другом конкретном примере антитела против hPG вводятся дополнительно к хирургической резекции.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим антитела против PG, предпочтительно с фармацевтически приемлемым носителем и/или эксципиентом. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция дополнительно содержит второе терапевтическое средство. В некотором воплощении второе терапевтическое средство представляет собой биологическое средство или химиотерапевтическое средство. Примеры биологических средств включают моноклональные антитела против EGFR (рецептор эпидермального фактора роста) и моноклональные антитела против VEGF (фактор роста эндотелия сосудов), тогда как химиотерапевтические средства содержат такие соединения как, например, алкилирующие агенты, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, ингибиторы митоза, ингибиторы функции хроматина, средства против ангиогенеза, антиэстрогенные средства, антиандрогенные средства и иммуномодуляторы.
Человеческий препрогастрин - пептид из 101 аминокислоты (эталонная аминокислотная последовательность: ААВ19304.1) - представляет собой первичный продукт трансляции гена гастрина. Прогастрин образуется отщеплением первых 21 аминокислоты (сигнальный пептид) от препрогастрина. 80-аминокислотная цепь прогастрина подвергается дальнейшему процессингу посредством отщепления и модификации ферментами до нескольких биологически активных гормональных форм гастрина: гастрина 34 (G34) и гастрина 34 с глициновым удлинением (G34-Gly), содержащих аминокислоты 38-71 прогастрина, гастрина 17 (G17) и гастрина 17 с глициновым удлинением (G17-Gly), содержащих аминокислоты 55-71 прогастрина.
Моноклональные антитела против человеческого прогастрина (антитела против hPG) и их применение для диагностики или терапии были описаны в следующих документах: WO 2011/083088 для колоректального рака, WO 2011/083090 для рака молочной железы, WO 2011/083091 для рака поджелудочной железы, WO 2011/116954 для колоректального и желудочно-кишечного рака: WO 2012/013609 и WO 2011/083089 для патологий печени.
Настоящее изобретение станет понятнее из подробного описания, приведенного в данном документе, и из сопровождающих графических материалов, которые приводятся лишь в качестве иллюстрации и не ограничивают намеченный объем данного изобретения.
В первом аспекте настоящее изобретение относится к молекуле, связывающей прогастрин, для применения в предупреждении или лечении рака легкого. Согласно настоящему раскрытию также предложена композиция для применения в предупреждении или лечении рака простаты, где указанная композиция содержит антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент.
Молекулой, связывающей прогастрин в данном документе называется любая молекула, которая связывается с прогастрином, но не связывается с гастрином-17 (G17), гастрином-34 (G34), гастрином 17 с глициновым удлинением (G17-Gly) или гастрином 34 с глициновым удлинением (G34-Gly). Молекула, связывающая прогастрин, по настоящему изобретению может представлять собой любую молекулу, связывающую прогастрин, такую как, например, молекула антитела или молекула рецептора. Предпочтительно молекула, связывающая прогастрин, представляет собой антитело против прогастрина (антитело против PG) или его антигенсвязывающий фрагмент.
Термин прогастрин обозначает пептид прогастрина млекопитающего и, в частности, человеческого прогастрина. Во избежание сомнений без какого-либо точного определения выражение человеческий прогастрин или hPG относится к человеческому PG последовательности SEQ ID NO: 1. А именно человеческий прогастрин содержит N-концевой и С-концевой домены, которые не присутствуют в упомянутых выше формах биологически активного гормона гастрина. Предпочтительно последовательность указанного N-концевого домена представлена SEQ ID NO: 2. В другом предпочтительном воплощении последовательность указанного С-концевого домена представлена SEQ ID NO: 3.
Таким образом, в первом воплощении данное изобретение относится к антителу, которое связывается с прогастрином, но не связывается с любым из других продуктов, происходящих от гена гастрина, для применения в лечении рака легкого.
Под терминами связывающий, связывается или т.п. подразумевается то, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который является относительно стабильным при физиологических условиях. Способы определения того, связываются ли две молекулы, хорошо известны в данной области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмон- 2 045260 ный резонанс и т.п. В конкретном воплощении указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с прогастрином с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза больше, чем его аффинность в отношении связывания с неспецифичной молекулой, такой как БСА (бычий сывороточный альбумин) или казеин. В более конкретном воплощении указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается только с прогастрином.
Выражение рак легкого обозначает рак, который возникает в тканях легкого, обычно в клетках, выстилающих дыхательные пути. Термин рак легкого в том виде, в котором он используется в данном документе, охватывает, в частности, мелкоклеточный рак легкого (SCLC), включающий мелкоклеточную карциному и комбинированную мелкоклеточную карциному, и немелкоклеточные раковые заболевания легкого (NSCLC), включающие плоскоклеточную карциному, крупноклеточную карциному и аденокарциному. Другие типы рака легкого, такие как аденокистозные карциномы, лимфомы и саркомы, а также доброкачественные опухоли легкого, такие как гамартомы, также включаются в раковые заболевания легкого в том виде, в котором данный термин используется в данном документе.
В конкретном воплощении согласно данному изобретению предложено антитело против PG для применения в предупреждении или лечении рака легкого, причем указанное антитело распознает эпитоп, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности прогастрина.
В более конкретном воплощении указанное антитело против PG для применения в предупреждении или лечении рака легкого распознает эпитоп прогастрина, где указанный эпитоп включает аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности N-концевой части прогастрина, где указанная аминокислотная последовательность может включать остатки 10-14 hPG, остатки 9-14 hPG, остатки 4-10 hPG, остатки 2-10 hPG или остатки 2-14 hPG, где аминокислотная последовательность hPG представляет собой SEQ ID NO: 1.
В более конкретном воплощении антитело против PG для применения в предупреждении или лечении рака легкого распознает эпитоп прогастрина, где указанный эпитоп включает аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности С-концевой части прогастрина, где указанная аминокислотная последовательность может включать остатки 71-74 hPG, остатки 69-73 hPG, остатки 71-80 hPG (SEQ ID NO: 40), остатки 76-80 hPG или остатки 67-74 hPG, где аминокислотная последовательность hPG представляет собой SEQ ID NO: 1.
В более конкретном воплощении антитело против PG для применения в предупреждении или лечении рака легкого имеет аффинность в отношении прогастрина по меньшей мере 5000 нМ, по меньшей мере 500, 100, 80, 60, 50, 4о, 30, 20, 10, 7, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5, 0,1 нМ, 50, 10, 5, 1 пМ или по меньшей мере 0,1 пМ при определении таким способом, как вышеописанный способ.
Предпочтительно антитело против PG для применения в предупреждении или лечении рака легкого представляет собой нейтрализующее антитело против PG.
Выражение нейтрализующее антитело против PG обозначает антитело, которое связывается с PG и блокирует PG-зависимую сигнализацию, приводя к ингибированию PG-индуцированных ответов в опухолевых клетках и, в частности, в клетках опухолей легкого. Ингибирование PG-индуцированных ответов клеток рака легкого может быть опосредовано репрессией дифференциации клеток, репрессией клеточной гибели и/или стимуляцией пролиферации клеток.
Подразумевается то, что термин антитело в том виде, в котором он используется в данном документе, включает поликлональные и моноклональные антитела. Антитело (или иммуноглобулин) состоит из гликопротеина, содержащего по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, взаимосвязанные дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область (или домен) тяжелой цепи (сокращенные в данном документе как HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена: СН1, СН2 и СН3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенную в данном документе как LCVR или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен: CL. Области VH и VL могут быть дополнительно подразделены на области гипервариабельности, именуемые областями, определяющими комплементарность (CDR) или гипервариабельными областями, которые, главным образом, отвечают за связывание с эпитопом антигена, и в которые вкрапляются области, которые являются более консервативными, именуемые каркасными областями (FR). Способ идентификации CDR в пределах легкой и тяжелой цепей антитела и определения их последовательности является хорошо известным специалисту. Во избежание сомнений, в отсутствие в тексте любого указания на противоположное, выражение CDR означает гипервариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела, как определено IMGT, где уникальная нумерация IMGT обеспечивает стандартизированное ограничение каркасных областей и областей, определяющих комплементарность, CDR1-IMGT: 27-38, CDR2.
Уникальная нумерация IMGT была определена для сравнения вариабельных доменов, каким бы ни был рецептор антигена, тип цепи или вид [Lefranc M.-P., Immunology Today, 18, 509 (1997) / Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999) / Lefranc, M.-P., Pommie, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V., Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]. В уникальной нумерации IMGT консервативные аминокислоты всегда имеют то же самое положение, например цистеин 23 (1-й CYS), триптофан
- 3 045260 (КОНСЕРВАТИВНЫЙ TRP), гидрофобная аминокислота 89, цистеин 104 (2-й CYS), фенилаланин или триптофан 118 (J-PHE или J-TRP). Уникальная нумерация IMGT обеспечивает стандартизированное ограничение каркасных областей (FR1-IMGT: положения 1-26, FR2-IMGT: 39-55, FR3-IMGT: 66-104 и FR4-IMGT: 118-128) и областей, определяющих комплементарность: CDR1-IMGT: 27-38, CDR2-IMGT: 56-65 и CDR3-IMGT: 105-117. Так как пробелы представляют собой незанятые положения, длины CDR-IMGT (показанные между скобками и разделенные точками, например [8.8.13]) становятся ключевой информацией. Уникальная нумерация IMGT используется в 2D (двумерных) графических представлениях, обозначенных как IMGT Colliers de Perles [Ruiz, M., Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002) / Kaas, Q., Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)], и в 3D (трехмерных) структурах в IMGT/3Dstructure-DB [Kaas, Q., Ruiz, M., Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)].
Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, организованных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями хозяина или факторами, включая разные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (Clq) классической системы комплемента. Антитела могут быть разных изотипов (а именно IgA, IgD, IgE, IgG или IgM).
В конкретном воплощении указанное антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент выбрано из группы, состоящей из: поликлональных антител, моноклональных антител, химерных антител, одноцепочечных антител, камелизированных антител, антител IgA1, антител IgA2, антител IgD, антител IgE, антител lgG1, антител lgG2, антител lgG3, антител lgG4 и антител IgM.
Поликлональное антитело представляет собой антитело, которое продуцировалось среди или в присутствии одного или более чем одного другого неидентичного антитела. В общем, поликлональные антитела продуцируются из В-лимфоцитов в присутствии нескольких других В-лимфоцитов, продуцирующих неидентичные антитела. Обычно поликлональные антитела получают непосредственно из иммунизированного животного.
Термин моноклональное антитело обозначает антитело, возникающее из почти гомогенной популяции антител, где данная популяция содержит идентичные антитела за исключением нескольких возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут находиться в минимальных пропорциях. Моноклональное антитело возникает в результате роста одного клона клеток, такого как гибридома, и отличается тяжелыми цепями одного класса и подкласса и легкими цепями одного типа.
Подразумевается то, что выражение антигенсвязывающий фрагмент антитела указывает любой пептид, полипептид или белок, сохраняющий способность связываться с мишенью (также обычно именуемой антигеном) указанного антитела, обычно с тем же самым эпитопом, и содержит аминокислотную последовательность из по меньшей мере 5 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 10 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 15 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 20 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 25 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 40 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 50 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 60 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 70 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 80 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 90 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 100 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 125 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 150 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 175 смежных аминокислотных остатков или по меньшей мере 200 смежных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности антитела.
В конкретном воплощении указанный антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере одну CDR антитела, из которого она происходит. Кроме того, в предпочтительном воплощении указанный антигенсвязывающий фрагмент содержит 2, 3, 4 или 5 CDR, более предпочтительно 6 CDR антитела, из которого они происходят.
Антигенсвязывающие фрагменты могут быть выбраны без ограничения из группы, состоящей из фрагментов Fv, scFv (sc обозначает одноцепочечный), Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc, или диател, или слитых белков с разупорядоченными пептидами, такими как XTEN (удлиненный рекомбинантный полипептид) или мотивы PAS, или любого фрагмента время полужизни которого было бы увеличено химической модификацией, такой как добавление поли(алкилен)гликоля, такого как поли(этилен)гликоль (PEGилирование) (пэгилированные фрагменты называются Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')2-PEG или Fab'-PEG) (PEG обозначает полиэтиленгликоль), или посредством включения в липосому, причем указанные фрагменты имеют по меньшей мере одну из характерных CDR антитела по изобретению. Предпочтительно указанные антигенсвязывающие фрагменты будут составлены или будут состоять из частичной последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи антитела, из которого они происходят, причем указанная частичная последовательность является достаточной для сохранения такой же специфичности связывания, что и у антитела, из которого она происходит, и достаточной аффинности, предпочтительно по меньшей мере равной 1/100, более предпочтительно по меньшей мере 1/10 аффинности антитела, из которого она происходит, в отношении мишени.
- 4 045260
В другом конкретном воплощении в способе диагностики рака легкого согласно изобретению биологический образец от субъекта приводится в контакт с антителом, связывающимся с прогастрином, где указанное антитело было получено способом иммунизации, известным специалисту в данной области, где в качестве иммуногена используется пептид, аминокислотная последовательность которого содержит всю аминокислотную последовательность прогастрина или ее часть. Более конкретно, указанный иммуноген содержит пептид, выбранный среди пептида, аминокислотная последовательность которого содержит или состоит из аминокислотной последовательности полноразмерного прогастрина и, в частности, полноразмерного человеческого прогастрина SEQ ID NO: 1;
пептида, аминокислотная последовательность которого соответствует части аминокислотной последовательности прогастрина и, в частности, полноразмерного человеческого прогастрина SEQ ID NO: 1;
пептида, аминокислотная последовательность которого соответствует части или всей аминокислотной последовательности N-концевой части прогастрина и, в частности, пептидам, содержащим или состоящим из аминокислотной последовательности SWKPRSQQPDAPLG (SEQ ID NO: 2); и пептида, аминокислотная последовательность которого соответствует части или всей аминокислотной последовательности С-концевой части прогастрина и, в частности, пептидам, содержащим или состоящим из аминокислотной последовательности QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN (SEQ ID NO: 3);
пептида, аминокислотная последовательность которого соответствует части аминокислотной последовательности С-концевой части прогастрина и, в частности, пептидам, содержащим аминокислотную последовательность FGRRSAEDEN (SEQ ID NO: 40), соответствующую аминокислотам 71-80 прогастрина.
Специалисту будет понятно то, что такую иммунизацию можно использовать для получения либо поликлональных, либо моноклональных антител в зависимости от того, что является желательным. Способы получения каждого из данных типов антител хорошо известны в данной области. Таким образом, специалист легко выберет и применит способ получения поликлональных и/или моноклональных антител против любого данного антигена.
Примеры моноклональных антител, которые были получены с использованием иммуногена, содержащего аминокислотную последовательность SWKPRSQQPDAPLG, соответствующую аминокислотной последовательности 1-14 человеческого прогастрина (N-концевая оконечность) включают моноклональные антитела, обозначенные как mab3, mab4, mab16, mab19 и mab20, как описано в следующих табл. 1-4, но не ограничиваются ими. Были описаны другие моноклональные антитела, хотя и не ясно, связываются ли фактически данные антитела с прогастрином (WO 2006/032980). Экспериментальные результаты картирования эпитопов показывают то, что mab3, mab4, mab6, mab19 и mab20 действительно специфично связываются с эпитопом в пределах указанной N-концевой аминокислотной последовательности hPG. Поликлональные антитела, специфично распознающие эпитоп в пределах N-конца прогастрина, представленного SEQ ID NO: 2, были описаны в данной области (см., например, WO 2011/083088).
Таблица 1
| Депонирование гибридомы | mAb | Аминокислотные последовательности | SEQ ID NO | |
| 6В5В11С10 | тАЬЗ | CDR 1 VH | GYIFTSYW | SEQ ID NO 4 |
| CDR 2 VH | FYPGNSDS | SEQ ID NO 5 | ||
| CDR3VH | TRRDSPQY | SEQ ID NO 6 | ||
| CDR 1 VL | QSIVHSNGNTY | SEQ ID NO 7 | ||
| CDR 2 VL | KVS | SEQ ID NO 8 | ||
| CDR3VL | FQGSHVPFT | SEQ ID NO 9 | ||
| mVH 3 | EVQLQQSGTVLARPGASVKMS CKASGYIFTSYWVHWVKQRPG QGLEWIGGFYPGNSDSRYNQ | SEQ ID NO 41 |
- 5 045260
| KFKGKATLTAVTSASTAYMDLS SLTNEDSAVYFCTRRDSPQYW GQGTTLTVSS | ||||
| mVL 3 | DVLMTQTPLSLPVSLGDQASIS CRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQ KPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRLEAED LGVYYCFQGSHVPFTFGGGTK LEIK | SEQ ID NO 42 | ||
| huVH 3 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVS CKASGYIFTSYWVHWVRQAPG QRLEWMGGFYPGNSDSRYSQ KFQGRVTITRDTSASTAYMELS SLRSEDTAVYYCTRRDSPQYW GQGTLVTVSS | SEQ ID NO 53 | ||
| huVL 3 | DWMTQSPLSLPVTLGQPASIS CRSSQSIVHSNGNTYLEWFQQ RPGQSPRRLIYKVSNRFSGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAE DVGVYYCFQGSHVPFTFGGGT KVEIK | SEQ ID NO 54 |
Таблица 2
| Депонирование гибридомы | mAb | Аминокислотные последовательности | SEQ ID NO | |
| 20D2C3G2 | mAb4 | CDR 1 VH | GYTFSSW | SEQ ID NO 10 |
| CDR 2 VH | FLPGSGST | SEQ ID NO 11 | ||
| CDR3VH | ATDGNYDWFAY | SEQ ID NO 12 | ||
| CDR 1 VL | QSLVHSSGVTY | SEQ ID NO 13 | ||
| CDR 2 VL | KVS | SEQ ID NO 14 | ||
| CDR3VL | SQSTHVPPT | SEQ ID NO 15 | ||
| mVH 4 | QVQLQQSGAELMKPGASVKIS CKATGYTFSSSWIEWLKQRPG | SEQ ID NO 43 | ||
| HGLEWIGEFLPGSGSTDYNEK FKGKATFTADTSSDTAYMLLSS LTSEDSAVYYCATDGNYDWFA YWGQGTLVTVSA | ||||
| mVL4 | DLVMTQTPLSLPVSLGDQASIS CRSSQSLVHSSGVTYLHWYLQ KPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPD RFSGSGSGTDFTLKISRVEAED LGVYFCSQSTHVPPTFGSGTK LEIK | SEQ ID NO 44 | ||
| huVH 4 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVS CKASGYTFSSSWMHWVRQAP GQGLEWMGIFLPGSGSTDYAQ KFQGRVTMTRDTSTSTVYMEL SSLRSEDTAVYYCATDGNYDW FAYWGQGTLVTVSS | SEQ ID NO 55 |
- 6 045260
| huVL4 | DIVMTQTPLSLSVTPGQPASIS CKSSQSLVHSSGVTYLYWYLQ KPGQSPQLLIYKVSNRFSGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAE DVGVYYCSQSTHVPPTFGQGT KLEIK | SEQ ID NO 56 |
Таблица 3
| Депонирование гибридомы | mAb | Аминокислотные последовательности | SEQ ID NO | |
| 1E9D9B6 | mAb16 | CDR 1 VH | GYTFTSYY | SEQ ID NO 16 |
| CDR 2 VH | INPSNGGT | SEQ ID NO 17 | ||
| CDR3VH | TRGGYYPFDY | SEQ ID NO 18 | ||
| CDR 1 VL | QSLLDSDGKTY | SEQ ID NO 19 | ||
| CDR 2 VL | LVS | SEQ ID NO 20 | ||
| CDR3VL | WQGTHSPYT | SEQ ID NO 21 | ||
| mVH 16 | QVQLQQSGAELVKPGASVKLS | SEQ ID NO 45 | ||
| CKASGYTFTSYYMYWVKQRP GQGLEWIGEINPSNGGTNFNE KFKSKATLTVDKSSSTAYMQLS SLTSEDSAVYYCTRGGYYPFD YWGQGTTLTVSS | ||||
| mVL 16 | DWMTQTPLTLSVTIGRPASIS CKSSQSLLDSDGKTYLYWLLQ RPGQSPKRLIYLVSELDSGVPD RITGSGSGTDFTLKISRVEAED LGVYYCWQGTHSPYTFGGGT KLEIK | SEQ ID NO 46 | ||
| huVH 16a | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVS CKASGYTFTSYYMYWVRQAP GQGLEWMGIINPSNGGTSYAQ KFQGRVTMTRDTSTSTVYMEL SSLRSEDTAVYYCTRGGYYPF DYWGQGTTVTVSS | SEQ ID NO 57 | ||
| huVH 16b | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVS CKASGYTFTSYYMHWVRQAP GQGLEWMGIINPSNGGTSYAQ KFQGRVTMTRDTSTSTVYMEL SSLRSEDTAVYYCTRGGYYPF DYWGQGTTVTVSS | SEQ ID NO 58 | ||
| huVH 16c | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVS CKASGYTFTSYYMYWVRQAP GQGLEWMGEINPSNGGTNYA QKFQGRVTMTRDTSTSTVYME LSSLRSEDTAVYYCTRGGYYP FDYWGQGTTVTVSS | SEQ ID NO 59 | ||
| huVL 16a | DWMTQSPLSLPVTLGQPASIS CRSSQSLLDSDGKTYLYWFQQ RPGQSPRRLIYLVSNRDSGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAE DVGVYYCWQGTHSPYTFGQG TKLEIK | SEQ ID NO 60 |
- 7 045260
| huVL 16b | DWMTQSPLSLPVTLGQPASIS CRSSQSLLDSDGKTYLNWFQQ RPGQSPRRLIYLVSNRDSGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAE DVGVYYCWQGTHSPYTFGQG TKLEIK | SEQ ID NO 61 | ||
| huVL 16c | DWMTQSPLSLPVTLGQPASIS CRSSQSLLDSDGKTYLYWFQQ RPGQSPRRLIYLVSERDSGVP DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAE DVGVYYCWQGTHSPYTFGQG TKLEIK | SEQ ID NO 62 |
Таблица 4
| Депонирование гибридомы | mAb | Аминокислотные последовательности | SEQ ID NO | |
| 1B3B4F11 | mAb19 | CDR 1 VH | GYSITSDYA | SEQ ID NO 22 |
| CDR2VH | ISFSGYT | SEQ ID NO 23 | ||
| CDR3VH | AREVNYGDSYHFDY | SEQ ID NO 24 | ||
| CDR 1 VL | SQHRTYT | SEQ ID NO 25 | ||
| CDR2 VL | VKKDGSH | SEQ ID NO 26 | ||
| CDR3VL | GVGDAIKGQSVFV | SEQ ID NO 27 | ||
| mVH 19 | DVQLQESGPGLVKPSQSLSLT CTVTGYSITSDYAWNWIRQFP GNKLEWMGYISFSGYTSYNPS LKSRISVTRDTSRNQFFLQLTS VTTEDTATYYCAREVNYGDSY HFDYWGQGTIVTVSS | SEQ ID NO 47 | ||
| mVL 19 | QLALTQSSSASFSLGASAKLTC TLSSQHRTYTIEWYQQQSLKP PKYVMEVKKDGSHSTGHGIPD RFSGSSSGADRYLSISNIQPED EAIYICGVGDAIKGQSVFVFGG GTKVTVL | SEQ ID NO 48 | ||
| huVH 19a | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLT CTVSGYSITSDYAWNWIRQHP GKGLEWIGYISFSGYTYYNPSL KSRVTISVDTSKNQFSLKLSSV TAADTAVYYCAREVNYGDSYH FDYWGQGTLVTVSS | SEQ ID NO 63 | ||
| huVH 19b | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLT CTVSGYSITSDYAWSWIRQHP GKGLEWIGYISFSGYTYYNPSL KSRVTISVDTSKNQFSLKLSSV TAADTAVYYCAREVNYGDSYH FDYWGQGTLVTVSS | SEQ ID NO 64 | ||
| huVH 19c | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLT CTVSGYSITSDYAWNWIRQHP GKGLEWIGYISFSGYTSYNPSL KSRVTISVDTSKNQFSLKLSSV TAADTAVYYCAREVNYGDSYH FDYWGQGTLVTVSS | SEQ ID NO 65 |
- 8 045260
| huVL 19а | QLVLTQSPSASASLGASVKLTC TLSSQHRTYTIEWHQQQPEKG PRYLMKVKKDGSHSKGDGIPD RFSGSSSGAERYLTISSLQSED EADYYCGVGDAIKGQSVFVFG GGTKVEIK | SEQ ID NO 66 | ||
| huVL 19b | QLVLTQSPSASASLGASVKLTC TLSSQHRTYTIAWHQQQPEKG PRYLMKVKKDGSHSKGDGIPD RFSGSSSGAERYLTISSLQSED EADYYCGVGDAIKGQSVFVFG GGTKVEIK | SEQ ID NO 67 | ||
| huVL 19с | QLVLTQSPSASASLGASVKLTC TLSSQHRTYTIEWHQQQPEKG PRYLMEVKKDGSHSKGDGIPD RFSGSSSGAERYLTISSLQSED EADYYCGVGDAIKGQSVFVFG GGTKVEIK | SEQ ID NO 68 |
Примеры моноклональных антител, которые могут быть получены с использованием иммуногена, содержащего аминокислотную последовательность QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN (С-концевая часть прогастрина), соответствующую аминокислотной последовательности 55-80 человеческого прогастрина, включают антитела, обозначенные в следующих табл. 5 и 6 как mab8 и mab13, но не ограничиваются ими. Экспериментальные результаты картирования эпитопов показывают то, что mab13 действительно специфично связывается с эпитопом в пределах указанной С-концевой аминокислотной последовательности hPG.
Таблица 5
| Депонирование гибридомы | mAb | Аминокислотные последовательности | SEQ ID NO | |
| 1C10D3B9 | mAb8 | CDR 1 VH | GFTFTTYA | SEQ ID NO 28 |
| CDR 2 VH | ISSGGTYT | SEQ ID NO 29 | ||
| CDR3VH | ATQGNYSLDF | SEQ ID NO 30 | ||
| CDR 1 VL | KSLRHTKGITF | SEQ ID NO 31 | ||
| CDR 2 VL | QMS | SEQ ID NO 32 | ||
| CDR3VL | AQNLELPLT | SEQ ID NO 33 | ||
| mVH 8 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRL SCAASGF I Fl I YAMSWVRQA PGKGLEWVATISSGGTYTYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCATQGN YSLDFWGQGTTVTVSS | SEQ ID NO 49 | ||
| mVL 8 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASI SCRSSKSLRHTKGITFLYWYL QKPGQSPQLLIYQMSNLASG VPDRFSSSGSGTDFTLKISRV EAEDVGVYYCAQNLELPLTF | SEQ ID NO 50 |
- 9 045260
| GGGTKVEIK | ||
| VH hZ8CV1 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRL SCAASGH I Ы I YAMSWVRQA PGKGLEWVSSISSGGTYTYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCATQGN YSLDFWGQGTTVTVSS | SEQ ID NO 69 |
| VL hZ8CV1 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASI SCRSSKSLRHTKGITFLYWYL QKPGQSPQLLIYQMSNRASG VPDRFSGSGSGTDFTLKISRV EAEDVGVYYCAQNLELPLTF GGGTKVEIK | SEQ ID NO 70 |
| VH hZ8CV2 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRL SCAASGH I Η I I YAMSWVRQA PGKGLEWVATISSGGTYTYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCATQGN YSLDFWGQGTTVTVSS | SEQ ID NO 71 |
| VL hZ8CV2 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASI SCRSSKSLRHTKGITFLYWYL QKPGQSPQLLIYQMSNLASG VPDRFSSSGSGTDFTLKISRV EAEDVGVYYCAQNLELPLTF GGGTKVEIK | SEQ ID NO 72 |
| CH hZ8CV2 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRL SCAASGFTFTTYAMSWVRQA PGKGLEWVATISSGGTYTYY ADSVKGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCATQGN YSLDFWGQGTTVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAA LGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTQTYICNVN | SEQ ID NO 73 |
- 10 045260
| HKPSNTKVDKRVEPKSCDKT HTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCWVD VSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSL TCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSP GK | ||||
| CL hZ8CV2 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASI SCRSSKSLRHTKGITFLYWYL QKPGQSPQLLIYQMSNLASG VPDRFSSSGSGTDFTLKISRV EAEDVGVYYCAQNLELPLTF GGGTKVEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASWCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNRGEC | SEQ ID NO 74 |
Таблица 6
| Депонирование гибридомы | mAb | Аминокислотные последовательности | SEQ ID NO | |
| 2C6C3C7 | гпАЫЗ | CDR 1 VH | GFIFSSYG | SEQ ID NO 34 |
| CDR 2 VH | INTFGDRT | SEQ ID NO 35 | ||
| CDR3VH | ARGTGTY | SEQ ID NO 36 | ||
| CDR 1 VL | QSLLDSDGKTY | SEQ ID NO 37 | ||
| CDR 2 VL | LVS | SEQ ID NO 38 | ||
| CDR3VL | WQGTHFPQT | SEQ ID NO 39 | ||
| mVH 13 | EVQLVESGGGLVQPGGSLKL SCAASGFIFSSYGMSWVRQS PDRRLELVASINTFGDRTYYP DSVKGRFTISRDNAKNTLYLQ MTSLKSEDTAIYYCARGTGTY WGQGTTLTVSS | SEQ ID NO 51 | ||
| mVL 13 | DVVLTQTPLTLSVTIGQPASIS CKSSQSLLDSDGKTYLNWLL QRPGQSPKRLIYLVSKLDSGV PDRFTGSGSGTDFTLKISRVE AEDLGVYYCWQGTHFPQTF GGGTKLEIK | SEQ ID NO 52 | ||
| huVH 13a | EVQLVESGGGLVQPGGSLRL SCAASGFIFSSYGMSWVRQA PGKGLEWVANINTFGDRTYY VDSVKGRFTISRDNAKNSLYL QMNSLRAEDTAVYYCARGTG TYWGQGTLVTVSS | SEQ ID NO 75 |
- 11 045260
| huVH 13b | EVQLVESGGGLVQPGGSLRL SCAASGFIFSSYGMSWVRQA PGKGLEWVASINTFGDRTYY VDSVKGRFTISRDNAKNSLYL QM NSLRAEDTAVYYCARGTG TYWGQGTLVTVSS | SEQ ID NO 76 | ||
| huVL 13а | DVVMTQSPLSLPVTLGQPASI SCRSSQSLLDSDGKTYLNWF QQRPGQSPRRLIYLVSNRDS GVPDRFSGSGSGTDFTLKIS RVEAEDVGVYYCWQGTHFP QTFGGGTKVEIK | SEQ ID NO 77 | ||
| huVL 13b | DVVMTQSPLSLPVTLGQPASI SCRSSQSLLDSDGKTYLNWF QQRPGQSPRRLIYLVSKRDS GVPDRFSGSGSGTDFTLKIS RVEAEDVGVYYCWQGTHFP QTFGGGTKVEIK | SEQ ID NO 78 |
Другие примеры включают моноклональные и/или поликлональные антитела против hPG, полученные с использованием иммуногена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.
Термины антитела против N-конца hPG и антитела против С-конца hPG обозначают антитела, связывающиеся с эпитопом, содержащим аминокислоты, расположенной в N-концевой части hPG, или с эпитопом, содержащим аминокислоты, расположенной в С-концевой части hPG соответственно. Предпочтительно термин антитела против N-конца hPG относится к антителам, связывающимся с эпитопом, расположенным в домене прогастрина, последовательность которого представлена SEQ ID NO: 2. В другом предпочтительном воплощении термин антитела против С-конца hPG относится к антителам, связывающимся с эпитопом, расположенным в домене прогастрина, последовательность которого представлена SEQ ID NO: 3.
Термин эпитоп относится к области антигена, с которой связывается антитело. Эпитопы могут быть определены как структурные или функциональные. Функциональные эпитопы обычно представляют собой поднабор структурных эпитопов, и они содержат те аминокислоты, которые непосредственно содействуют аффинности взаимодействия. Эпитопы также могут быть конформационными. В некоторых воплощениях эпитопы могут включать детерминанты, которые представляют собой химически активные поверхностные группировки молекул, такие как аминокислоты, боковые сахарные цепи, фосфорильные группы или сульфонильные группы, и в некоторых воплощениях они могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики и/или специфические характеристики заряда. Определение эпитопа, связанного антителом, может осуществляться любой методикой картирования эпитопа, известной специалисту в данной области. Эпитоп может содержать разные аминокислоты, которые расположены последовательно в пределах аминокислотной последовательности белка. Эпитоп также может содержать аминокислоты, которые не расположены последовательно в пределах аминокислотной последовательности белка.
В конкретном воплощении указанное антитело представляет собой моноклональное антитело, выбранное в группе, состоящей из следующих:
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4, 5 и 6 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 4, 5 и 6 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 7, 8 и 9 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 7, 8 и 9 соответственно;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 13, 14 и 15 соответственно, или последова- 12 045260 тельностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 13, 14 и 15 соответственно;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16, 17 и 18 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 16, 17 и 18 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 19, 20 и 21 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 19, 20 и 21 соответственно;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 22, 23 и 24 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 22, 23 и 24 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 25, 26 и 27 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 25, 26 и 27 соответственно;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно по меньшей мере три из CDR-H1, CDR-H2 и CDRН3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 28, 29 и 30 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 28, 29 и 30 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 31, 32 и 33, соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 31, 32 и 33 соответственно, и моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 34, 35 и 36 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 34, 35 и 36 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDRL2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 37, 38 и 39 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 37, 38 и 39 соответственно.
В значении по настоящему изобретению процентная доля идентичности или % идентичности между двумя последовательностями нуклеиновых кислот или аминокислот означает процентную долю идентичных нуклеотидов или аминокислотных остатков между двумя последовательностями, подлежащими сравнению, полученную после оптимального выравнивания, причем данная процентная доля является чисто статистической и различия между двумя данными последовательностями распределяются по их длине случайным образом. Сравнение двух последовательностей нуклеиновых кислот или аминокислот традиционно проводится посредством сравнения последовательностей после их оптимального выравнивания, причем указанное сравнение возможно проводить по отрезкам или с использованием окна выравнивания. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может проводиться, помимо сравнения вручную, посредством способов, известных специалисту в данной области.
Для аминокислотной последовательности, демонстрирующей по меньшей мере 80%-ную, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ную идентичность с контрольной аминокислотной последовательностью, предпочтительные примеры включают последовательности, содержащие эталонную последовательность, определенные модификации, а именно делецию, присоединение или замену по меньшей мере одной аминокислоты, усечение или удлинение. В случае замены одной или более чем одной последовательной или непоследовательной аминокислоты, предпочтительными являются замены, при которых замененные аминокислоты заменяются эквивалентными аминокислотами. Здесь подразумевается то, что выражение эквивалентные аминокислоты указывает любые аминокислоты, которые вероятно подлежат замене одной из структурных аминокислот, однако, без модификации биологических активностей соответствующих антител, и данные конкретные примеры определены ниже.
Эквивалентные аминокислоты можно определять либо по их структурной гомологии с аминокислотами, которые они заменяют, либо по результатам сравнительных анализов биологической активности между разными антителами, которые вероятно будут генерированы.
В более конкретном воплощении указанное антитело представляет собой моноклональное антитело,
- 13 045260 выбранное в группе, состоящей из следующих:
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности
SEQ ID NO: 41 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 42;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности
SEQ ID NO: 43 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 48;
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 50; и моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 51 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52.
В другом конкретном воплощении антитело, использованное в способе по изобретению, представляет собой гуманизированное антитело.
Выражение гуманизированное антитело в том виде, в котором оно используется в данном документе, означает антитело, которое содержит области CDR, происходящие из антитела, происходящего не от человека, причем другие части данной молекулы антитела происходят от одного или нескольких человеческих антител. Кроме того, некоторые из остатков скелетных сегментов (именуемых FR, что обозначает каркас) могут быть модифицированы для сохранения аффинности связывания согласно методикам, известным специалисту в данной области (Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986). Целью гуманизации является уменьшение иммуногенности ксеногенного антитела, такого как мышиное антитело, для введения человеку, при сохранении полной аффинности связывания с антигеном и специфичности антитела.
Гуманизированные антитела по изобретению или их фрагменты можно получать методиками, известными специалисту в данной области (такими как, например, методики, описанные в документах Singer et al., J. Immun., 150:2844-2857, 1992). Такие гуманизированные антитела являются предпочтительными для их применения в способах, включающих диагностику in vitro или предупредительное и/или терапевтическое лечение in vivo. Другие методики гуманизации также известны специалисту в данной области. В самом деле, антитела могут быть гуманизированы с использованием целого ряда методик, включая пересадку CDR (ЕР 0451261, ЕР 0682040, ЕР 0939127, ЕР 0566647, US 5530101, US 6180370, US 5585089, US 5693761, US 5639641, US 6054297, US 5886152 и US 5877293), маскировку поверхностных остатков (венирование) или изменение поверхности (ЕР 0592106; ЕР 0519596; Padlan Б.А., 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka G.M. et al., 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814; Roguska M.A. et al., 1994, Proc. Natl. Acad. ScL, USA, 91:969-973) и перетасовку цепей (патент США № 5565332). Человеческие антитела могут быть получены целым рядом способов, известных в данной области, включая способы фагового дисплея. См. также патенты США № 4444887, 4716111, 5545806 и 5814318; и международные патентные заявки с номерами публикации WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 и WO 91/10741.
В более конкретном воплощении указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело, выбранное в группе, состоящей из следующих:
гуманизированное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4, 5 и 6 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 4, 5 и 6 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 7, 8 и 9 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 7, 8 и 9 соответственно;
гуманизированное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 13, 14 и 15 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 13, 14 и 15 соответственно;
гуманизированное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16, 17 и 18 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравни- 14 045260 вания с последовательностями SEQ ID NO: 16, 17 и 18 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и
CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 19, 20 и 21 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 19, 20 и 21 соответственно;
гуманизированное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 22, 23 и 24 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 22, 23 и 24 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 25, 26 и 27 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 25, 26 и 27 соответственно;
гуманизированное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 28, 29 и 30 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 28, 29 и 30 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 31, 32 и 33 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 31, 32 и 33 соответственно; и гуманизированное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 34, 35 и 36 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 34, 35 и 36 соответственно, и легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну, предпочтительно по меньшей мере две, предпочтительно три из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 37, 38 и 39 соответственно, или последовательностей с по меньшей мере 80%-ной, предпочтительно 85, 90, 95 и 98%-ной идентичностью после оптимального выравнивания с последовательностями SEQ ID NO: 37, 38 и 39 соответственно, где указанное антитело также содержит константные области легкой цепи и тяжелой цепи, происходящие из человеческого антитела.
В другом более конкретном воплощении указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело, выбранное в группе, состоящей из следующих:
гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54;
гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56;
гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 57, 58 и 59 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 60, 61 и 62;
гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 63, 64 и 65 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 66, 67 и 68;
гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 69 и 71 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 70 и 72; и гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 75 и 76 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 77 и 78, где указанное антитело также содержит константные области легкой цепи и тяжелой цепи, происходящие из человеческого антитела.
Более конкретно, указанное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 71 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 72, причем указанное антитело также содержит константные области легкой цепи и тяжелой цепи, происходящие из человеческого антитела.
Даже более предпочтительно указанное антитело содержит тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 73 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 74.
- 15 045260
В другом аспекте согласно данному изобретению также предложены иммуноконъюгаты (взаимозаменяемо именуемые конъюгаты антитело-лекарственное средство или ADC), содержащие антитело, связывающееся с прогастрином, как описано в данном документе, причем указанное антитело конъюгировано с одним или более чем одним цитотоксическим агентом, таким как химиотерапевтический агент, лекарственное средство, агент, ингибирующий рост, токсин (например, белковый токсин, ферментативно активный токсин бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, или их фрагменты) или радиоактивный изотоп (т.е. радиоконъюгат).
Иммуноконъюгаты использовали для местной доставки цитотоксических агентов, т.е. лекарственных средств, которые умерщвляют или ингибируют рост или пролиферацию клеток, при лечении рака (Lambert, J. (2005), Curr. Opinion in Pharmacology, 5:543-549; Wu et al. (2005), Nature Biotechnology, 23(9):1137-1146; Payne, G. (2003), i 3:207-212; Syrigos and Epenetos (1999), Anticancer Research, 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997), Adv. Drug Deliv. Rev., 26:151-172; U.S. Pat. № 4975278). Иммуноконъюгаты обеспечивают целевую доставку группировки лекарственного средства в опухоль и внутриклеточное накопление в ней, где системное введение неконъюгированных лекарственных средств может приводить к неприемлемым уровням токсичности для нормальных клеток, а также опухолевых клеток, которые пытаются устранить (Baldwin et al, Lancet (Mar. 15, 1986), p. 603-05; Thorpe (1985), Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (A. Pinchera et al., eds), p. 475-506. И поликлональные антитела, и моноклональные антитела были описаны как полезные в данных стратегиях (Rowland et al. (1986), Cancer Immunol. Immunother., 21:183-87). Лекарственные средства, используемые в данных способах, включают дауномицин, доксорубицин, метотрексат и виндезин (Rowland et al. (1986) выше). Токсины, используемые в конъюгатах антитело-токсин, включают бактериальные токсины, такие как дифтерийный токсин, растительные токсины, такие как рицин, низкомолекулярные токсины, такие как гелданамицин (Mandler et al. (2000), J. Nat. Cancer Inst., 92(19):1573-1581; Mandler et al. (2000), Bioorganic & Med. Chem. Letters, 10:1025-1028; Mandler et al. (2002), Bioconjugate Chem., 13:786-791), майтанзиноиды (ЕР 1391213; Liu et al. (1996), Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:8618-8623) и калихеамицин (Lode et al. (1998), Cancer Res., 58:2928; Hinman et al. (1993), Cancer Res., 53:3336-3342). Данные токсины могут оказывать их цитотоксические эффекты посредством механизмов, включающих связывание с тубулином, связывание с ДНК или ингибирование топоизомеразы. Некоторые цитотоксические лекарственные средства имеют тенденцию к тому, чтобы быть неактивными или менее активными при конъюгировании с большими антителами или лигандами рецептора белка.
В некоторых воплощениях иммуноконъюгат содержит антитело и химиотерапевтический агент или другой токсин. Полезные химиотерапевтические агенты в получении иммуноконъюгатов описываются в данном документе (например, выше). Ферментативно активные токсины и их фрагменты, которые можно использовать, включают цепь А дифтерийного токсина, несвязывающиеся активные фрагменты дифтерийного токсина, цепь А экзотоксина (из Pseudomonas aeruginosa), цепь А рицина, цепь А абрина, цепь А модекцина, альфа-сарцин, белки Aleurites fordii, диантиновые белки, белки Phytolaca americana (PAPI, PAPII и PAP-S), ингибитор Momordica charantia, курцин, кротин, ингибитор Sapaonaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трикотецены. См., например, WO 93/21232, опубликованную 28 октября 1993 г. Доступен целый ряд радиоизотопов для продукции радиоконъюгированных антител. Примеры включают 212Bi, 131I, 131In, 90Y и 186Re. Конъюгаты антитела и цитотоксического агента получают с использованием целого ряда бифункциональных агентов, связывающихся с белком, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитиол)пропионат (SPDP), иминотиолан (IT), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис-(п-азидобензоил)гександиамин), бис-диазониевые производные (такие как бис-(пдиазония бензоил)-этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол 2,6-диизоцианат) и бис-активные фторные соединения (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицин можно получать, как описано в Vitetta et al, Science, 238:1098 (1987). Меченная углеродом 14 1-изотиоцианатобензил-3метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTPA) представляет собой типичный хелатор для конъюгирования радиоизотопа с антителом. См. WO 94/11026.
В данном документе также рассматриваются конъюгаты антитела и одного или более чем одного низкомолекулярного токсина, такого как калихеамицин, майтанзиноиды, доластатины, ауростатины, трихотецен и СС 1065, и производные данных токсинов, которые имеют активность токсина.
Иммуноконъюгат по изобретению может дополнительно содержать линкер.
Термины линкер, линкерное звено или связка означают химическую группировку, содержащую ковалентную связь или цепочку атомов, которая ковалентно присоединяет связывающий белок к по меньшей мере одному цитотоксическому агенту.
Линкеры могут быть получены с использованием целого ряда бифункциональных связывающихся с белком агентов, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(Ммалеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие как
- 16 045260 дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис-(пазидобензоил)гександиамин), бис-диазониевые производные (такие как бис-(п-диазония бензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол 2,6-диизоцианат) и биоактивные фторные соединения (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Меченная углеродом-14 1-изотиоцианатобензил-3метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTPA) представляет собой типичный хелатирующий агент для конъюгирования цитотоксических агетов с системой адресования. Другими сшивающими реактивами могут быть BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC, сульфо-SMPB и SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые имеются в продаже (например, у Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, III., США).
Линкер может быть нерасщепляемым или расщепляемым.
В другом аспекте согласно данному изобретению предложена композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого, причем указанная композиция содержит антитело, распознающее эпитоп, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности прогастрина.
В более конкретном воплощении указанная композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого содержит антитело, распознающее эпитоп прогастрина, где указанный эпитоп включает аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности N-концевой части прогастрина, где указанная аминокислотная последовательность может включать остатки 10-14 hPG, остатки 9-14 hPG, остатки 4-10 hPG, остатки 2-10 hPG или остатки 2-14 hPG, где аминокислотная последовательность hPG представляет собой SEQ ID NO: 1.
В более конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого содержит антитело, распознающее эпитоп прогастрина, где указанный эпитоп включает аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности С-концевой части прогастрина, где указанная аминокислотная последовательность может включать остатки 71-74 hPG, остатки 69-73 hPG, остатки 71-80 hPG (SEQ ID NO: 40), остатки 76-80 hPG или остатки 67-74 hPG, где аминокислотная последовательность hPG представляет собой SEQ ID NO: 1.
В более конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого содержит антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент, который имеет аффинность в отношении прогастрина по меньшей мере 5000 нМ, по меньшей мере 500, 100, 80, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 7, 5, 4, 3, 2, 1, 0,5, 0,1 нМ, 50, 10, 5, 1 пМ или по меньшей мере 0,1 пМ при определении таким способом, как описанный выше.
В даже более конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого содержит антитело, связывающееся с прогастрином, где указанная молекула, связывающаяся с прогастрином, или ее антигенсвязывающий фрагмент представляет собой нейтрализующее антитело.
В другом конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого содержит антитело, связывающееся с прогастрином, где указанная молекула, связывающаяся с прогастрином, или ее антигенсвязывающий фрагмент представляет собой гуманизированное антитело.
В конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого содержит антитело, связывающееся с прогастрином, где указанная молекула, связывающаяся с прогастрином, или ее антигенсвязывающий фрагмент конъюгированы с одним или более чем одним цитотоксическим агентом, таким как химиотерапевтический агент, лекарственное средство, агент, ингибирующий рост, токсин (например, белковый токсин, ферментативно активный токсин бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, или их фрагменты) или радиоактивный изотоп (т.е. радиоконъюгат), как описано выше.
В другом конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого для пациента содержит антитело, связывающееся с прогастрином, где у указанного пациента был диагностирован рак легкого, где концентрация прогастрина выше в биологическом образце от указанного пациента, чем в контрольном образце. Предпочтительно у указанного пациента был диагностирован рак легкого посредством приведения в контакт антитела против PG с биологическим образцом указанного пациента.
Биологический образец в том виде, в котором он используется в данном документе, представляет собой образец биологической ткани или жидкости, который содержит нуклеиновые кислоты или полипептиды, например, белок, полинуклеотид или транскрипт рака легкого. Такой образец должен обеспечивать определение уровней экспрессии прогастрина. Известно то, что прогастрин является секретируемым белком. Предпочтительные биологические образцы для определения уровня белка прогастрина, таким образом, включают биологические жидкости. Термин биологическая жидкость в том виде, в котором он используется в данном документе, означает любую жидкость, которая включает вещество биологического происхождения. Предпочтительные биологические жидкости для применения в настоящем изобретении включают жидкости организма животного, например млекопитающего, предпочтительно человеческого субъекта. Жидкость организма может представлять собой любую жидкость организма, включающую кровь, плазму, сыворотку, лимфу, спинномозговую жидкость (CSF), слюну, пот и мочу, но
- 17 045260 не ограничивающуюся ими. Предпочтительно указанные предпочтительные жидкие биологические образцы включают такие образцы, как образец крови, образец плазмы или образец сыворотки. Более предпочтительно биологический образец представляет собой образец крови. В самом деле такой образец крови может быть получен совершенно безвредным отбором крови у пациента и, таким образом, обеспечивает неинвазивную оценку рисков того, что у субъекта разовьется опухоль.
Термин биологический образец в том виде, в котором он используется в данном документе, также включает образец солидного рака пациента, подлежащего анализу, когда раковое заболевание представляет собой солидное раковое заболевание. Такой образец солидного рака обеспечивает проведение специалистом любого типа измерения уровня биомаркера по изобретению. В некоторых случаях способы по изобретению могут дополнительно включать предварительную стадию отбора образца солидного рака от пациента. Образцом солидного рака называется образец опухолевой ткани. Даже у ракового пациента ткань, которая является местом опухоли, все еще содержит неопухолевую здоровую ткань. Образец рака, таким образом, должен ограничиваться опухолевой тканью, взятой от пациента. Указанный раковый образец может представлять собой образец биопсии или образец, отобранный в результате хирургической резекционной терапии.
Биологический образец типично получают из эукариотического организма, наиболее предпочтительно млекопитающего или птицы, рептилии или рыбы. В самом деле субъект, который может быть подвергнут способу, описанному в данном документе, может представлять собой любого млекопитающего животного, включая человека, собаку, кошку, крупный рогатый скот, козу, свинью, кабана, овцу и обезьяну; или птицу; рептилию или рыбу. Предпочтительно субъект представляет собой человека; человеческий субъект может быть известен как пациент.
Под получением биологического образца в данном документе подразумевается получение биологического образца для применения в способах, описанных в данном изобретении. Чаще всего это будет осуществляться удалением образца клеток из животного, но также может осуществляться применением ранее выделенных клеток (например, выделенных другим человеком, в другое время и/или для другой цели) или осуществлением способов по изобретению in vivo. Особенно полезными будут архивные ткани, имеющие историю лечения или результата.
Данный образец может быть получен и при необходимости приготовлен согласно способам, известным специалисту в данной области. В частности, в данной области хорошо известно то, образец следует отбирать у субъекта натощак.
В более конкретном аспекте настоящее изобретение относится к композиции для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно изобретению, где указанное антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны среди антител против N-конца прогастрина и антител против С-конца прогастрина.
Композиции антитела для применения в способах по изобретению могут быть приготовлены в виде разных препаратов, включая водную суспензию, но не ограничиваясь ей, для введения разными путями, включающими парентеральный, подоболочечный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, инфузию или болюсное введение, но не ограничивающимися ими. В некоторых воплощениях данную композицию готовят для парентерального введения и в некоторых конкретных воплощениях - внутривенной инъекции посредством инфузии.
В конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно данному изобретению содержит эффективную дозу антител против прогастрина по изобретению в интервале от 0,001 мг/кг до примерно 250 мг/кг, которая может даваться за одно введение или за многие, раздельные введения.
В конкретном воплощении композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно данному изобретению содержит антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранные среди поликлональных антител, моноклональных антител, химерных антител, одноцепочечных антител, камелизированных антител, антител IgA1, антител IgA2, антител IgD, антител IgE, антител IgG1, антител IgG2, антител IgG3, антител IgG4 и антител IgM. Предпочтительно указанные антитела представляют собой антитела, описанные выше. Более предпочтительно указанные антитела представляют собой гуманизированные антитела.
Предпочтительно настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей композицию для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Более конкретно, фармацевтическая композиция для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно изобретению содержит антитело, как описано выше, и фармацевтически приемлемый носитель.
В более конкретном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей композицию для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно изобретению и фармацевтически приемлемый носитель, где указанное антитело против прогастрина вводится в дозе от 0,001 до 250 мг/кг и предпочтительно в дозе по меньшей мере 0,005 мг/кг, по меньшей мере 0,01 мг/кг, по меньшей мере 0,05 мг/кг, по меньшей мере 0,1 мг/кг, по меньшей мере 0,5 мг/кг, по меньшей мере 1 мг/кг, по меньшей мере 5 мг/кг, по меньшей мере 10 мг/кг, по меньшей мере 50 мг/кг или по
- 18 045260 меньшей мере 100 мг/кг. В другом аспекте настоящее изобретение относится к набору частей, содержащему композицию для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно изобретению и противораковую терапевтическую молекулу.
В самом деле лечение моноклинальными антителами против PG, как описано в данном документе, можно объединять с или использовать в качестве дополнительного с другой терапией. Неограничивающие примеры другой терапии включают химиотерапевтическое лечение, лучевую терапию, хирургическую резекцию и терапию антителами.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к набору частей, содержащему композицию для применения в предупреждении или лечении рака легкого согласно изобретению и противораковую терапевтическую молекулу, выбранную среди следующих: химиотерапевтическая молекула, молекула таргетной терапии.
В конкретном воплощении настоящее изобретение относится к наборам частей, содержащим композицию для лечения рака легкого по изобретению и химиотерапевтическую молекулу для одновременного, последовательного или раздельного введения. Полезные химиотерапевтические молекулы для данной цели включают антагонисты фолатов, антагонисты пуринов, антагонисты пиримидинов, молекулы, алкилирующие ДНК, лекарственные средства, сшивающие ДНК, антибиотики, комплексы платины, ингибиторы протеасом, яды для митотического веретена, ингибиторы топоизомеразы, ингибиторы тирозинкинзы и другие, но не ограничиваются ими.
В другом конкретном воплощении настоящее изобретение относится к наборам частей, содержащим композицию согласно данному изобретению и композицию, содержащую другую молекулу таргетной терапии для одновременного, последовательного или раздельного введения. Такая молекула таргетной терапии включает антитела, которые нацелены на EGFR (рецептор эпидермального фактора роста), такие как цетуксимаб или панитумумаб, антитела, которые нацелены на VEGF (фактор роста эндотелия сосудов), такие как бевацизумаб, антитела, которые нацелены на HER2 (человеческий EGF-подобный рецептор 2), такие как трастузумаб или пертузумаб, антитела, которые нацелены на PD-1 и PDL-1, такие как пембролизумаб, антитела, которые нацелены на CTLA-4 (антиген-4 цитотоксических Т-лимфоцитов), такие как ипилимумаб, низкомолекулярные лекарственные средства, которые нацелены на EGFR, такие как эрлотиниб, низкомолекулярные лекарственные средства, которые нацелены на BRAF, такие как вемурафениб или дабрафениб, рекомбинантный слитый белок, который нацелен на VEGF, такой как афлиберцепт, но не ограничивается ими.
В другом конкретном аспекте настоящее изобретение относится к применению антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента для диагностики рака легкого.
В другом конкретном аспекте настоящее изобретение относится к применению антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента для предупреждения или лечения рака легкого.
В более конкретном аспекте настоящее изобретение относится к применению антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента для предупреждения или лечения рака легкого у пациента, где была определена концентрация прогастрина в биологическом образце указанного пациента, и она выше, чем концентрация прогастрина контрольного биологического образца.
В другом конкретном аспекте данное изобретение относится к применению фармацевтической композиции по изобретению для предупреждения рецидива рака легкого. Соответственно согласно настоящему раскрытию предложены полезные способы и композиции для лечения рака легкого и предупреждения рецидива рака легкого у животных, включая человека. Данные способы лечения включают введение субъекту, у которого диагностирован рак легкого, эффективного количества антитела, которое специфично связывается с прогастрином, для обеспечения терапевтической пользы. Антитело против PG может вводиться одно, в виде монотерапии, или в сочетании с или дополнительно к другим способам лечения, таким как резекция опухоли, лучевая терапия, химиотерапия, терапия другим антителом и т.д.
Солидные опухоли не обязательно представляют собой гомогенные ткани. Скорее некоторые опухоли содержат целый ряд поврежденных типов клеток, имеющих отличные фенотипические и функциональные свойства. В данном отношении такие опухоли являются аналогичными ненормальным органам. Клетки, составляющие солидные опухоли, отличаются в отношении степени, в которой они способны инициировать образование новой опухоли при пересадке в новое место у того же самого хозяина или новому хозяина того же самого или другого вида. Клетки, имеющие данное свойство, известны как клетки, инициирующие опухоль или раковое заболевание или в качестве альтернативы опухолевые или раковые стволовые клетки. См., например, Hardavella et al., 2016, Lung cancer stem cells-characteristics, phenotype, Transl Lung Cancer Res., 2016, 5(3):272-279. Такие клетки являются высокоонкогенными.
В общем, раковые стволовые клетки определяются двумя свойствами: способностью к самообновлению и способностью к образованию дочерних клеток, которые дифференцируются в нестволовые клетки. Самообновление представляет собой способность подвергаться клеточному делению, при этом одна или обе дочерние клетки остаются недифференцированными, сохраняющими способность давать еще одну другую раковую стволовую клетку с аналогичной способностью к пролиферации, что и родительская клетка. Это свойство позволяет раковым стволовым клеткам в конечном счете давать большое
- 19 045260 число клеток, которые составляют растущую опухоль. Раковые стволовые клетки также имеют способность производить дочерние клетки, которые дифференцируются, давая спектр более дифференцированных нестволовых или составляющих объем опухолевых клеток, находящихся во многих солидных опухолях. Таким образом, при трансплантации раковые стволовые клетки могут восстанавливать тип опухоли, из которой они произошли, даже после многократных серийных трансплантаций. Кроме того, полагают то, что раковые стволовые клетки имеют генетические мутации и/или эпигенетические изменения, которые приводят к измененным картинам пролиферации и/или низким показателям апоптоза.
Раковые стволовые клетки могут быть идентифицированы согласно целому ряду фенотипических характеристик, которые отличают их от основной массы опухолевых клеток. Полезные способы для оценки того, содержит ли опухоль или линия клеток раковые стволовые клетки, знакомы специалистам в данной области. Такие способы описываются, например, в Hardavella et al., 2016, Lung cancer stem cellscharacteristics, phenotype, Transl Lung Cancer Res., 2016, 5(3):272-279, a также в WO 2012/013609. Конкретные примеры данных способов также описываются в примерах настоящей заявки.
В более конкретном аспекте настоящее изобретение относится к применению антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента для предупреждения или лечения рака легкого для пациента, где у указанного пациента имеется метастаз.
В даже более конкретном аспекте настоящее изобретение относится к применению антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента для предупреждения или лечения рака легкого для пациента, где у указанного пациента имеется метастаз, и где была определена концентрация прогастрина в биологическом образце указанного пациента, и она выше, чем концентрация прогастрина контрольного биологического образца.
Компоненты, из которых состоит комбинация, могут вводиться одновременно, раздельно или последовательно, таким образом, чтобы получать максимальную эффективность данной комбинации; для каждого введения возможно варьирование его продолжительности от быстрого введения до непрерывной перфузии.
Термин одновременное введение в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к введению двух соединений композиции согласно изобретению в одной и уникальной фармацевтической форме. Термин раздельное введение в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к введению, в то же самое время, двух соединений композиции согласно изобретению в отличных фармацевтических формах. Термин последовательное введение в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к последовательному введению двух соединений композиции согласно изобретению, причем каждое находится в отличной фармацевтической форме.
Термин терапевтически эффективное количество в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к минимальной концентрации или количеству соединения (или соединений), которое является эффективным для предупреждения, облегчения, ослабления или уменьшения интенсивности симптомов заболевания или для продления жизни пациента, которого лечат.
В другом аспекте согласно настоящему раскрытию предложен способ предупреждения рецидива рака простаты, включающий введение эффективного количества антитела против PG субъекту, нуждающемуся в предупреждении. Способы предупреждения рецидива рака печени согласно настоящему раскрытию осуществляются посредством введения одного или более чем одного антитела против PG, способного нейтрализовать PG, описанного выше, индивидам, подверженным риску рецидива рака легкого.
Субъекты, нуждающиеся в предупреждении рецидива рака простаты, представляют собой индивидов, которых ранее лечили против рака легкого, которые подвергаются риску, но у которых не был вновь диагностирован рак легкого. Подходящие субъекты включают индивидов, которых ранее лечили против рака легкого любыми способам, включающими хирургическую резекцию, химиотерапию или любую другую терапию.
Эффективное предупреждение рецидива рака легкого включает полное и продолжающееся отсутствие рецидива рака легкого, но не ограничивается им. В некоторых воплощениях эффективное предупреждение измеряется по отсутствию опухолей рака легкого или стволовых клеток рака легкого, полученных от субъекта, подверженного риску рецидива рака легкого. В некоторых воплощениях эффективное предупреждение определяется по отсутствию увеличения концентрации PG в крови у субъекта, подверженного риску рецидива рака легкого.
Лечение против PG может вводиться одно в виде монотерапии или в комбинации или дополнительно к одному или более чем одному другому лечению. Другие лечения включают, без ограничения, хирургическую резекцию и лечение вторым терапевтическим средством, таким как химиотерапевтическое средство или антитело, как описано выше. Комбинированное лечение в том виде, в котором оно предложено в данном документе, включает введение пациенту по меньшей мере двух лечений, одно из которых представляет собой лечение против PG с использованием по меньшей мере одного антитела против PG, и другое из которых представляет собой лечение терапевтическим средством или процедуру.
Антитело против PG и второе средство могут вводиться одновременно, последовательно или раздельно. Указывается то, что антитело против PG и второе средство в том виде, в котором они используются в данном документе, вводятся последовательно, если они вводятся пациенту в те же самые сутки,
- 20 045260 например, на протяжении того же самого посещения пациента. Последовательное введение может происходить с интервалом 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 ч. В отличие от этого указывается то, что антитело против PG и второе средство вводятся раздельно, если они вводятся пациенту в разные сутки, например, антитело против PG и второе терапевтическое средство могут вводиться с интервалами 1 сутки, 2 суток или 3 суток, одна неделя, 2 недели или один месяц. В способах по настоящему раскрытию введение антитела против PG по раскрытию может предшествовать или следовать после введения второго средства. В качестве неограничивающего примера антитело против PG и второе средство могут вводиться сопутствующе в течение определенного периода времени с последующим вторым периодом времени, в котором введение антитела против PG и второго средства чередуются. Характеристики воплощений данного изобретения станут еще очевиднее из следующего подробного описания примеров, приведенного ниже.
Описание графических материалов
На чертеже показан анализ пролиферации клеток: клетки NCI-H358 обрабатывали либо контрольным антителом, либо Hz против hPG 8CV2 (PG Hz) - гуманизированным антителом против С-конца hPG.
Примеры
Пример 1. Нейтрализующая активность антител против hPG в отношении линий раковых клеток.
1.1. Нейтрализующая активность моноклональных антител против hPG.
Моноклональные антитела к PG тестируются на их способность ингибировать пролиферацию нескольких линий клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин. Выживание клеток из каждой из данных линий клеток анализируется с использованием разных моноклональных антител против hPG.
Для каждого эксперимента 50000 клеток высевают в 6-луночные планшеты в среду, содержащую фетальную телячью сыворотку, и инкубируют в течение 8 ч. Клетки голодают без сыворотки в течение ночи, и, начиная в 24 ч после посева (время Т0), клетки обрабатывают в шестикратной повторности каждые 12 ч в течение 48 ч, в отсутствие телячьей сыворотки, 1-20 мкг/мл моноклональных контрольных антител (моноклональное антитело против пуромицина) (СТ mAb) или 1-20 мкг/мл mAb (моноклональное антитело) против hPG, где указанное mAb представляет собой моноклональное антитело против С-конца hPG или моноклональное антитело против N-конца hPG.
Указанное mAb представляет собой антитело против С-конца hPG, выбранное среди следующих:
антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 28, 29 и 30, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 31, 32 и 33, антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 34, 35 и 36, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 37, 38 и 39; или антитело против N-конца hPG, выбранное среди следующих:
моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4, 5 и 6 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 7, 8 и 9, антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 13, 14 и 15 соответственно, антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16, 17 и 18 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 19, 20 и 21 соответственно, антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 22, 23 и 24 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 25, 26 и 27 соответственно.
Число клеток в Т0 подсчитывается в контрольной лунке для каждого эксперимента.
В частности, число живых клеток как в контрольных, так и в обработанных mAb против hPG лунках подсчитывается в 48 ч, затем рассчитывается разница между каждым числом клеток и числом клеток, определенным в Т0. Образующееся число клеток, обработанных mAb против hPG, затем выражается как процентная доля от числа клеток, обработанных контрольным mAb.
Обработка моноклональными антителами против hPG уменьшает число клеток по сравнению с контрольным антителом. Статистическая значимость определяется с использованием однофакторного дисперсионного анализа с апостериорным критерием Тьюки: * р меньше 0,05; ** р меньше 0,01 и *** р меньше 0,001. В каждой линии клеток антитела против hPG уменьшают выживание клеток.
1.2. Нейтрализующая активность гуманизированных антител против hPG в отношении выживания клеток.
Гуманизированные антитела к PG тестируются на их способность ингибировать пролиферацию нескольких линий клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин. Выживание клеток из каждой из данных линий клеток анализируется с исполь
- 21 045260 зованием разных моноклональных антител против hPG.
Для каждого эксперимента 50000 клеток высевают в 6-луночные планшеты в среду, содержащую фетальную телячью сыворотку, и инкубируют в течение 8 ч. Клетки голодают без сыворотки в течение ночи, и, начиная в 24 ч после посева (время Т0), клетки обрабатывают в шестикратной повторности каждые 12 ч в течение 48 ч в отсутствие фетальной телячьей сыворотки, 1-20 мкг/мл гуманизированных контрольных антител (антитело против человеческого FcG1 от BioXCell) (CT Hz) или 1-20 мкг/мл Hz (гуманизированное антитело) против hPG, где указанное Hz представляет собой гуманизированное антитело против С-конца hPG или гуманизированное антитело против N-конца hPG. Число клеток в Т0 подсчитывается в контрольной лунке для каждого эксперимента.
В частности, число живых клеток как в контрольных, так и в обработанных Hz против hPG лунках подсчитывается в 48 ч, затем рассчитывается разница между каждым числом клеток и числом клеток, определенным в Т0. Образующееся число клеток, обработанных Hz против hPG, затем выражается как процентная доля от числа клеток, обработанных контрольным mAb.
Обработка Hz антителами против hPG уменьшает число клеток по сравнению с обработкой контрольным антителом. Статистическая значимость определяется с использованием однофакторного дисперсионного анализа с апостериорным критерием Тьюки: * р меньше 0,05; ** р меньше 0,01; и *** р меньше 0,001. В каждой линии клеток антитела против hPG уменьшают выживание клеток.
1.3. Нейтрализующая активность моноклональных антител против hPG в отношении частоты раковых стволовых клеток.
Моноклональные антитела к PG тестируются на их способность уменьшать частоту раковых стволовых клеток (CSC) с использованием анализа предельного разведения (ELDA) в нескольких линиях клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин. Частота CSC от каждой из данных линий клеток анализируется с использованием разных моноклональных антител против hPG.
Для каждого эксперимента клетки высевают в Р96 с ультраслабым прикреплением (ULA) (96-луночные планшеты) при фиксированных клеточных концентрациях на лунку с использованием проточного цитометра FACS Aria, и используется интервал концентраций от одной до 500 клеток на лунку. Клетки культивируются в течение вплоть до 11 суток в планшетах ULA со среди М11 (Macari et al, Oncogene, 2015) и каждые 3 или 4 суток обрабатываются 1-20 мкг/мл моноклональных контрольных антител (моноклональное антитело против пуромицина) (СТ mAb) или 1-20 мкг/мл mAb против hPG, где указанное mAb представляет собой моноклональное антитело против С-конца hPG или моноклональное антитело против N-конца hPG.
В частности, в конце фазы инкубации планшеты наблюдают с использованием фазово-контрастного микроскопа, и оценивается число позитивных лунок на клеточную концентрацию. Наконец, используется доступное в интернете программное средство для ELDA (http://www.bioinf.wehi.edu.au/software/elda/) для расчета частот CSC каждой группы обработки и анализа любого статистического различия между группами (модифицированный критерий хи-квадрат).
Обработка моноклинальными антителами против hPG уменьшает частоту CSC по сравнению с обработкой контрольным антителом.
1.4. Нейтрализующая активность гуманизированных антител против hPG в отношении частоты раковых стволовых клеток.
Анализ образования сфер.
Гуманизированные антитела к PG тестируются на их способность уменьшать частоту раковых стволовых клеток (CSC) с использованием анализа образования сфер в нескольких линиях клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин.
Для каждого эксперимента 700 клеток высевают в 24-луночные планшеты с ультраслабым прикреплением (ULA). Клетки культивируются в течение вплоть до 7 суток в планшетах ULA со среди М11 (Macari et al, Oncogene, 2015) и каждые 3 или 4 суток обрабатываются 20 мкг/мл гуманизированных контрольных антител (против человеческого FcG1, от BioXCell) (CT Hz) или 20 мкг/мл Hz против hPG (PG Hz), где указанное Hz представляет собой гуманизированное антитело против С-конца hPG или гуманизированное антитело против N-конца hPG.
В частности, в конце фазы инкубации лунки фотографируют посредством микроскопии в режиме светлого поля, анализируют изображения, и подсчитывают сферы со средним диаметром больше 25 мкм.
Обработка гуманизированными антителами против hPG уменьшает частоту CSC по сравнению с обработкой контрольным антителом.
Анализ предельного разведения.
Гуманизированные антитела к PG тестируются на их способность уменьшать частоту раковых стволовых клеток (CSC) с использованием анализа предельного разведения (ELDA) в нескольких линиях клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин. Частота CSC от каждой из данных линий клеток анализируется с использованием разных гуманизированных антител против hPG.
Для каждого эксперимента клетки высевают в Р96 с ультраслабым прикреплением (ULA)
- 22 045260 (96-луночные планшеты) при фиксированных клеточных концентрациях на лунку с использованием проточного цитометра FACS Aria, и используется интервал концентраций от одной до 500 клеток на лунку. Клетки культивируются в течение вплоть до 11 суток в планшетах ULA со средой М11 (Macari et al., Oncogene, 2015) и каждые 3 или 4 суток обрабатываются 1-20 мкг/мл гуманизированных контрольных антител (антитело против человеческого FcG1 от BioXCell) (CT Hz) или 1-20 мкг/мл Hz против hPG, где указанное Hz представляет собой гуманизированное антитело против С-конца hPG или гуманизированное антитело против N-конца hPG.
В частности, в конце фазы инкубации планшеты наблюдают с использованием фазово-контрастного микроскопа, и оценивается число позитивных лунок на клеточную концентрацию. Наконец, используется доступное в интернете программное средство для ELDA (http://www.bioinf.wehi.edu.au/software/elda/) для расчета частот CSC каждой группы обработки и анализа любого статистического различия между группами (модифицированный критерий хи-квадрат).
Обработка гуманизированными антителами против hPG уменьшает частоту CSC по сравнению с обработкой контрольным антителом.
1.5. Нейтрализующая активность моноклональных антител против hPG в отношении пути WNT/в-катенина.
Моноклональные антитела к PG тестируются на их способность ингибировать путь WNT/в-катенина у нескольких линий клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин, с использованием экспрессии белка сурвивина - хорошо известного генамишени пути WNT/в-катенина - в качестве показателя. Экспрессия сурвивина из каждой из данных линий клеток анализируется с использованием разных моноклональных антител против hPG.
Для каждого эксперимента 50000 клеток высевают в 6-луночные планшеты в среду, содержащую фетальную телячью сыворотку, и инкубируют в течение 8 ч. Клетки голодают без сыворотки в течение ночи, и, начиная через 24 ч после посева, клетки обрабатывают в шестикратной повторности каждые 12 ч в течение 72 ч, в отсутствие фетальной телячьей сыворотки, 1-20 мкг/мл моноклональных контрольных антител (моноклональное антитело против пуромицина) (СТ mAb) или 1-20 мкг/мл mAb против hPG, где указанное mAb представляет собой моноклональное антитело против С-конца hPG или моноклональное антитело против N-конца hPG.
В частности, после 72 ч обработки клетки отбирают, и общий белок экстрагируют с использованием буфера RIPA (радиоиммунопреципитационный анализ). Равное количество белка от клеток, обработанных СТ mAb или mAb против hPG, затем подвергают вестерн-блоттингу с использованием антитела против сурвивина (моноклональное антитело, #2802 от Cell Signaling) и антитела против актина в качестве контроля загрузки (моноклональное антитело, #А4700 от SIGMA). Количественное измерение проводится с использованием хемисистемы GBOX от Syngene.
Обработка моноклинальными антителами против hPG уменьшает экспрессию сурвивина по сравнению с обработкой контрольным антителом. Статистическая значимость определяется с использованием непарного Т-критерия Стьюдента: * р меньше 0,05; ** р меньше 0,01; и *** р меньше 0,001.
1.6. Нейтрализующая активность гуманизированных антител против hPG в отношении пути WNT/в-катенина.
Гуманизированные антитела к PG тестируются на их способность ингибировать путь WNT/в-катенина у нескольких линий клеток, обычно используемых для исследования рака легкого, которые продуцируют и секретируют прогастрин, с использованием экспрессии белка сурвивина - хорошо известного генамишени пути WNT/в-катенина - в качестве показателя. Экспрессия сурвивина из каждой из данных линий клеток анализируется с использованием разных гуманизированных антител против hPG.
Для каждого эксперимента 50000 клеток высевают в 6-луночные планшеты в среду, содержащую фетальную телячью сыворотку, и инкубируют в течение 8 ч. Клетки голодают без сыворотки в течение ночи, и, начиная через 24 ч после посева, клетки обрабатывают в шестикратной повторности каждые 12 ч в течение 72 ч, в отсутствие телячьей сыворотки, 1-20 мкг/мл гуманизированных контрольных антител (антитело против человеческого FcG1, от BioXCell) (CT Hz) или 1-20 мкг/мл Hz против hPG, где указанное Hz представляет собой гуманизированное антитело против С-конца hPG или гуманизированное антитело против N-конца hPG.
В частности, после 72 ч обработки клетки отбирают, и общий белок экстрагируют с использованием буфера RIPA. Равное количество белка из клеток, обработанных CT Hz или Hz против hPG, затем подвергают вестерн-блоттингу с использованием антитела против сурвивина (моноклональное антитело, #2802 от Cell Signaling) и антитела против актина в качестве контроля загрузки (моноклональное антитело, #А4700 от SIGMA). Количественное измерение проводится с использованием хемисистемы GBOX от Syngene.
Обработка гуманизированными антителами против hPG уменьшает экспрессию сурвивина по сравнению с обработкой контрольным антителом. Статистическая значимость определяется с использованием непарного Т-критерия Стьюдента: * р меньше 0,05; ** р меньше 0,01; и *** р меньше 0,001.
-
Claims (13)
- Пример 2. Нейтрализующая активность антител против hPG в отношении линий раковых клеток.Нейтрализующая активность гуманизированных антител против hPG в отношении выживания клеток.Гуманизированные антитела к PG тестируются на их способность ингибировать пролиферацию нескольких линий клеток, обычно используемых для исследования рака легкого (т.е. NCI-H358, А549 или NCI-H460), которые продуцируют и секретируют прогастрин. Выживание клеток из каждой из данных линий клеток анализировали с использованием разных моноклональных антител против hPG.200000 Клеток NCI-H358 высевали в 6-луночные планшеты в среду, содержащую фетальную телячью сыворотку, и инкубировали в течение 8 ч. Клетки голодали без сыворотки в течение ночи. С 24 ч после посева (время Т0), клетки обрабатывали каждые 12 ч в течение 48 ч, в отсутствие фетальной телячьей сыворотки, 20 мкг/мл гуманизированных контрольных антител (антитело против человеческого FcG1, от BioXCell) (CT Hz) или 20 мкг/мл Hz против hPG 8CV2 (PG Hz), где указанное Hz представляет собой гуманизированное антитело против С-конца PG. Число клеток в Т0 подсчитывали в контрольной лунке для каждого эксперимента.В частности, число живых клеток как в контрольных, так и в обработанных Hz против hPG лунках подсчитывали в 48 ч. Затем рассчитывали разницу между каждым числом клеток и числом клеток, определенным в Т0.Обработка Hz антителами против hPG уменьшала число клеток по сравнению с обработкой контрольным антителом. Статистическую значимость определяли с использованием t-критерия: ** р меньше 0,01. В каждой линии клеток антитела против hPG уменьшали выживание клеток (см. чертеж).Библиографические ссылки1. Yanaoka et al., Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2008, 17(4).
- 2. Pepe et al., J. Natl. Cancer Inst, 2008, Oct., 100(20).
- 3. Leja et al., Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, 2014, Dec., 28(6).ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение моноклонального антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента для изготовления лекарства для предупреждения или лечения рака легкого, где указанное моноклональное антитело специфично связывается с прогастрином, но не связывается с гастрином-17 (G17), гастрином-34 (G34), гастрином 17 с глициновым удлинением (G17-Gly) или гастрином 34 с глициновым удлинением (G34-Gly), причем указанное моноклональное антитело, связывающееся с прогастрином, выбрано среди антител против N-конца прогастрина и антител против С-конца прогастрина, и причем указанное моноклональное антитело выбрано из группы, состоящей из следующего:антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4, 5 и 6 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 7, 8 и 9 соответственно;антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 13, 14 и 15 соответственно;антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 16, 17 и 18 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 19, 20 и 21 соответственно;антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 22, 23 и 24 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 25, 26 и 27 соответственно;антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 28, 29 и 30 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 31, 32 и 33 соответственно; и антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 34, 35 и 36 соответственно, и легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 37, 38 и 39 соответственно.2. Применение по п.1, где указанное моноклональное антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент выбрано среди одноцепочечных антител, камелизированных антител, антител IgA1, антител IgA2, антител IgD, антител IgE, антител IgG1, антител IgG2, антител IgG3, антител IgG4 и антител IgM.3. Применение по любому из пп.1 или 2, где указанное моноклональное антитело, связывающееся с прогастрином, или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой нейтрализующее антитело.
- 4. Применение по любому из пп.1-3, где указанное моноклональное антитело выбрано из группы, состоящей из следующих:моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 41 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 42;- 24 045260 моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 43 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44;моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 45 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46;моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 47 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 48;моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 49 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 50; и моноклональное антитело, содержащее тяжелую цепь аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 51 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52.
- 5. Применение по любому из пп.1-4, где указанное моноклональное антитело представляет собой гуманизированное антитело.
- 6. Применение по п.5, где указанное моноклональное антитело выбрано из группы, состоящей из следующих:гу манизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54;гу манизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56;гу манизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 57, 58 и 59, и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 60, 61 и 62;гум анизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 63, 64 и 65, и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 66, 67 и 68;гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 69 и 71, и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 70 и 72; и гуманизированное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 75 и 76, и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности, выбранной между SEQ ID NO: 77 и 78, где указанное антитело также содержит константные области легкой цепи и тяжелой цепи, происходящие из человеческого антитела.
- 7. Применение по любому из пп.5 или 6, где указанное моноклональное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 71 и вариабельную область легкой цепи аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 72, причем указанное антитело также содержит константные области легкой цепи и тяжелой цепи, происходящие из человеческого антитела.
- 8. Применение по любому из пп.5-7, где указанное моноклональное антитело содержит тяжелую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 73 и легкую цепь аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 74.
- 9. Применение фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество моноклонального антитела, связывающегося с прогастрином, или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-8, и фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент для изготовления лекарства для предупреждения или лечения рака легкого.
- 10. Применение по п.9, где указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит второе терапевтическое средство.
- 11. Применение по п.10, где указанное второе терапевтическое средство представляет собой биологическое средство или химиотерапевтическое средство.
- 12. Применение по п.11, где указанное биологическое средство представляет собой моноклональное антитело против EGFR (рецептор эпидермального фактора роста) или моноклональное антитело против VEGF (фактор роста эндотелия сосудов).
- 13. Применение по п.11, где указанное химиотерапевтическое средство выбрано из группы алкилирующих агентов, антиметаболитов, противоопухолевых антибиотиков, ингибиторов митоза, ингибиторов функции хроматина, средств против ангиогенеза, антиэстрогенных средств, антиандрогенных средств и иммуномодуляторов.-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17305382.8 | 2017-03-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA045260B1 true EA045260B1 (ru) | 2023-11-09 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI816396B (zh) | 特異性針對gucy2c之抗體及其用途 | |
| KR102453227B1 (ko) | 항-axl 길항성 항체 | |
| CA2919790C (en) | Anti-cxcr4 antibodies and antibody-drug conjugates | |
| AU2018242156B2 (en) | Compositions and methods for detecting and treating prostate cancer using progastrin binding molecule | |
| JP6931228B2 (ja) | 抗ｃｄ２６抗体と他の抗癌剤とを組み合わせた癌治療用組成物 | |
| KR20170080675A (ko) | 항-fgfr2/3 항체 및 이의 이용 방법 | |
| AU2017341000A1 (en) | Therapy for drug-resistant cancer by administration of anti-HER2 antibody/drug conjugate | |
| KR20110081812A (ko) | 다중특이적 항체 | |
| AU2010229994A1 (en) | Anti-FGFR3 antibodies and methods using same | |
| CA3058265C (en) | Compositions and methods for treating lung cancer | |
| EA045260B1 (ru) | Композиции и способы для лечения рака легкого | |
| EA042429B1 (ru) | Композиции и способы для диагностики и лечения рака предстательной железы с использованием молекулы, связывающей прогастрин | |
| TWI847270B (zh) | D3結合分子及其用途 | |
| WO2023041041A1 (en) | D3-binding molecules and uses thereof | |
| TW202340246A (zh) | D3結合分子及其用途 |