EA040709B1

EA040709B1 - Производные индола и бензимидазола в качестве двойных антагонистов рецепторов 5-ht2a и 5-ht6

Info

Publication number: EA040709B1
Application number: EA202091737
Authority: EA
Inventors: Марцин Колачковский; Адам Буцки; Йоанна Снециковская; Моника Марцинковская
Original assignee: Адамед Фарма С.А.
Priority date: 2018-02-21
Filing date: 2019-02-20
Publication date: 2022-07-20

Description

Настоящее изобретение относится к новым 4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Н-индолам и 4(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-Ш-бензимидазолам. Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим соединения, и этим соединениям, и фармацевтической композиции для применения в качестве лекарственного препарата.

Деменция представляет собой совокупность прогрессирующего ухудшения когнитивных функций, ассоциированных с поведенческими и физиологическими расстройствами и сложностями в ежедневной деятельности (Hersch and Falzgraf, 2007). К наиболее важной категории факторов, повреждающих головной мозг до такой степени, что возникают симптомы деменции, относятся нейродегенеративные заболевания, которые приводят к прогрессирующей дегенерации нервной ткани. В классификации ICD-10 различают, помимо прочего, деменцию альцгеймеровского типа (DAT), а также деменцию при болезни Пика (лобно-височную), деменцию при болезни Гентингтона, деменцию при болезни Паркинсона и очень похожую деменцию с тельцами Леви. Причиной повреждения головного мозга, которое приводит к деменции, могут быть инфекционные заболевания, такие как болезнь Крейтцфельдта-Якоба (причисленная одновременно к нейродегенеративным заболеваниям), ВИЧ/СПИД-инфекция или нейроборрелиоз. Помимо нейродегенеративных и инфекционных заболеваний симптомы деменции могут быть также связаны с сосудистыми заболеваниями, такими как инсульт, которые могут обуславливать так называемое острое проявление деменции или сосудистой деменции (после ряда инсультов). В пожилом возрасте наиболее распространенной причиной деменции является болезнь Альцгеймера. Глобальная распространенность деменции оценивается приблизительно в 3,9% населения Земли в возрасте старше 60 лет (Ferri et al., 2005), а это означает, что в настоящее время 35,6 млн человек в мире имеют разные формы деменции. В свете предполагаемого увеличения продолжительности жизни данное число к 2030 г. вырастет вдвое и к 2050 г. вырастет втрое. Следовательно, деменция представляет собой очень серьезную и обостряющуюся медицинскую и социальную проблему.

В дополнение к аксиальным когнитивным расстройствам, до 60% пациентов с деменцией также испытывают так называемые поведенческие и психологические симптомы деменции (BPSD). Среди них можно выделить следующие: психотические расстройства (бред и галлюцинации), депрессия, апатия, сексуальная расторможенность, раздражительность, словесная и физическая агрессия, психомоторное возбуждение и тревожность (Carson et al., 2006; Jeste et al., 2008). Например, от 40 до 60% пациентов с деменцией испытывают существенные депрессивные расстройства на некоторой стадии заболевания (Hersch and Falzgraf, 2007), при этом распространенность психотических симптомов может достигать 63% пациентов в случае бреда и 41% в случае галлюцинаций (Jeste et al., 2008). BPSD могут возникать на любой стадии заболевания, при этом некоторые симптомы больше распространены при легкой степени деменции (депрессия, апатия, тревожность, раздражительность), тогда как другие больше распространены на поздних стадиях деменции (бред, галлюцинации, расторможенность) (Hersch and Falzgraf, 2007). Неоднократно было продемонстрировано, что именно BPSD представляют собой основную тяготу как для пациентов с деменцией, так и их опекунов, и могут ощущаться еще острее, чем основное когнитивное нарушение. Возникновение BPSD также ассоциировано с неблагоприятным прогнозом в отношении прогрессирования заболевания, более быстрой потерей когнитивной функции и соответствующим ухудшением повседневной жизни. Психоз, волнение, агрессия и депрессия, сопутствующие деменции, являются ведущими прогностическими факторами для помещения пациента в лечебное учреждение и основными целями в лечении BPSD с клинической и социальной точек зрения (Amano et al., 2009; Gauthier et al., 2010; Hersch and Falzgraf, 2007).

До средины 1990-х гг. приоритетными лекарственными средствами в лечении BPSD были антипсихотические препараты первого поколения (т.е. типичные нейролептики), особенно в случае бреда и галлюцинаций. Было продемонстрировано, что основной представитель данного класса лекарственных средств, галоперидол, не влияет на возбуждение или поведенческие симптомы в целом, он снижает агрессию. Вместе с тем метаанализ клинических испытаний продемонстрировал отсутствие отличий между антипсихотическими препаратами первого поколения в их эффективности в отношении BPSD (Sink et al., 2005). В течение следующих лет типичные нейролептики были частично заменены в лечении BPSD антипсихотическими лекарственными средствами второго поколения (т.е. нетипичными нейролептиками) (De Deyn et al., 2005), которые характеризуются меньшей склонностью к индуцированию экстрапирамидных расстройств (экстрапирамидных симптомов - EPS) и более высокой эффективностью по сравнению с лекарственными средствами первого поколения (Liperoti et al., 2008). Однако эффективность и безопасность лекарственных средств, применяемых в настоящее время в лечении BPSD, не являются удовлетворительными (Nobili et al., 2009). Обзор 16 клинических испытаний с применением антипсихотических препаратов второго поколения в лечении BPSD, проведенных в рамках деятельности Cochrane (Cochrane Library), показал, что рисперидон и оланзапин были эффективны в лечении агрессии, при этом рисперидон был также более эффективен, чем плацебо, в лечении психоза, ассоциированного с деменцией (Ballard and Waite, 2006). Однако оба лекарственных средства вызывали значительные побочные эффекты в виде экстрапирамидных расстройств и осложнений сердечно-сосудистой природы. В то же время арипипразол не продемонстрировал преимущества по сравнению с плацебо в лечении бреда и галлюцинаций у пациентов с психозом, связанным с болезнью Альцгеймера (De Deyn et al., 2005). Применение

- 1 040709 антипсихотических препаратов в лечении BPSD дополнительно усложняется тем фактом, что такие лекарственные средства усугубляют имеющиеся когнитивные нарушения, что является особенно неблагоприятным для пациентов с деменцией (Fasano et al., 2012; Jeste et al., 2008; Vigen et al., 2011).

В свете таких фактов с 2005 г. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) требует размещения специальных предупреждений на информационных листках антипсихотических препаратов второго поколения. Такие предупреждения (так называемые особые предупреждения) связаны с возникновением серьезных побочных эффектов и повышенным риском смерти в случае применения нетипичных нейролептиков пациентами с деменцией (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, 2005 г.). С 2008 г. требование подобных предупреждений также применялось в случае антипсихотических препаратов первого поколения (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, 2008 г.).

Несмотря на это, антипсихотические препараты все еще широко применяются пациентами с BPSD (Schneider et al., 2006; Schulze et al., 2013b), в основном из-за отсутствия более благоприятной альтернативы (Schulze et al., 2013a). В настоящее время не существует лекарственных средств, одобренных для лечения психоза, ассоциированного с деменцией, а также не существует антидепрессантов, анксиолитиков, лекарственных средств против агрессии, разработанных конкретно для удовлетворения терапевтических потребностей пожилых людей.

Психоз при деменции может иметь отличную, нежели в случае шизофрении, нейробиологическую основу. Действительно, пациенты, страдающие психозом при болезни Альцгеймера, часто испытывают зрительные галлюцинации и ошибочно распознают людей, осуществляющих уход или лечение - симптомы, которые обычно не наблюдаются у пациентов с шизофренией. И наоборот, аномальный или смешанный бред, который часто возникает у пациентов с шизофренией, не часто наблюдается у пациентов с деменцией (Jeste and Finkel, 2000). Выразительный характер психотических симптомов при деменции предполагает, что задействованы разные нейромедиаторные системы. В частности, могут быть вовлечены серотонинергические системы, поскольку галлюцинации при деменции подобны тем галлюцинациям, которые обусловлены серотонинергическими агонистами, такими как мескалин или лизергиновая кислота (Marsh, 1979). Сильные зрительные галлюцинации также могут быть вызваны антагонистами NMDAрецептора, такими как кетамин или фенциклидин (Siegel, 1978), но менее часто вызываются дофаминомиметиками, такими как амфетамин или кокаин, которые широко применяются в доклиническом скрининге новых лекарственных средств от шизофрении (Jones et al., 2011).

Имеются убедительные данные, подтверждающие важность серотониновой системы в разработке BPSD. Например, полиморфизмы гена серотонинового рецептора ассоциированы со зрительными и слуховыми галлюцинациями у пациентов с болезнью Альцгеймера (AD) (Holmes et al., 1998). Генетический полиморфизм промоторного участка серотонинового транспортера (генотип L/L) был ассоциирован с агрессивным поведением (Sukonick et al., 2001). Другие исследования показывают вовлечение рецепторов 5НТ2А и 5НТ6 в патогенез AD (Lorke et al., 2006), а также ассоциированность рецепторов 5-НТ6 с психотическими симптомами у пациентов с AD (Marcos et al., 2008).

Было обнаружено, что галлюцинации, преимущественно зрительные, обусловленные психотомиметическими веществами, такими как LSD (диэтиламид D-лизергиновой кислоты) или DOI (2,5-диметокси4-йодамфетамин), связаны с активацией рецепторов 5-НТ_2А в коре головного мозга (Nichols, 2004). С учетом клинического сходства их галлюциногенных эффектов с теми, которые наблюдаются у пациентов с деменцией, было выдвинуто предположение о причастности обычных фармакологических механизмов, включая серотонинергическую дисрегуляцию. Причастность блокады серотониновых рецепторов 5-НТ_2Ак антипсихотической активности была дополнительно подтверждена активностью антагонистов рецептора 5-НТ_2А в глутаматергических моделях психоза, ассоциированной с облегчением глутаматергической передачи в коре головного мозга (Varty et al., 1999). Соответствующим вышеизложенному есть тот факт, что пимавансерин, селективный обратный агонист рецептора 5-НТ_2А, представляет собой первое антипсихотическое лекарственное средство, которое было одобрено в 2016 г. для лечения психоза при болезни Паркинсона. Однако важно отметить, что пимавансерин обладает значительной аффинностью к каналам hERG (приблизительно 210 нМ), которая может вызывать изменения в ECG, потенциально приводя к угрожающим жизни видам аритмии. Более того, пимавансерин не обладает аффинностью к рецепторам 5-НТ6.

Сходящиеся линии доказательств свидетельствуют о том, что блокада серотониновых рецепторов 5 НТ6 (5 HT6R) может быть связана с: (i) прокогнитивными эффектами из-за облегчения холинергической передачи (Liu and Robichaud, 2009; Riemer et al., 2003), (ii) антидепрессантной активностью из-за повышения норадренергического и дофаминергического тонуса, а также (iii) анксиолитическим эффектом, опосредованным взаимодействием с GABA-ергической передачей (Wesolowska, 2010; Wesolowska and Nikiforuk, 2007). Эти результаты дополнительно подтверждаются исключительной локализацией рецепторов 5-НТ6 в центральной нервной системе (CNS), особенно в лимбической и кортикальной областях головного мозга, вовлеченных в контроль настроения и когнитивной деятельности (Woolley et al., 2004).

- 2 040709

Холиномиметический компонент блокады рецепторов 5-НТ₆, в дополнение к его значимости для прокогнитивной активности, также, по-видимому, является существенным с точки зрения потенциально благоприятных антипсихотических эффектов. Действительно, было показано, что антагонисты мускаринового рецептора обладают антипсихотическими свойствами (Maehara et al., 2008). Таким образом, хотя селективная блокада рецепторов 5-НТ6 не индуцирует антипсихотическую активность отдельно, она может способствовать ее усилению. В соответствии с вышеизложенным недавние исследования показали, что комбинация антагонизма в отношении рецепторов 5-НТ_2А и 5-НТ₆ может обеспечивать более сильный антипсихотический эффект, чем независимое применение селективного антагониста каждого из этих рецепторов (Fijal et al., 2014).

Повышенная терапевтическая эффективность двойных антагонистов рецепторов 5-НТ2А и 5-НТ₆ у пациентов с деменцией может быть обусловлена не только усиленной антипсихотической активностью в результате синергетической модуляции глутаматергической и холинергической передачи, но также и прокогнитивной активностью, опосредованной блокадой рецепторов 5-НТ₆, преимущественно холиномиметической природы. Такие свойства являются крайне важными, поскольку наличие психоза при деменции неразрывно связано с когнитивным нарушением (Murray et al., 2014).

Следовательно, двойной антагонист рецепторов 5-НТ2А и 5-НТ₆, который объединяет как антипсихотическую, так и прокогнитивную активность в одной молекуле, решает наиболее важные терапевтические проблемы при психозе, связанном с деменцией.

В международной заявке WO 2007/006677 раскрываются некоторые производные бензимидазолона и гидроиндолона в качестве селективных антагонистов 5-НТ₆, селективных антагонистов 5-НТ2А или и тех, и других. В описании не уточняется, какие соединения представляют собой двойные антагонисты рецепторов 5-НТ2А и 5-НТ6, однако в своем ответе на письменное заключение заявитель раскрыл значения активности для четырех соединений в отношении обоих рецепторов. Тем не менее, все раскрытые соединения, имеющие производные бензимидазолона, замещенные 4-пиперазином, содержат незамещенный азот пиперазина в качестве донора водородной связи. Более того, наличие карбонильной группы в положении 2 отрицательно влияет на метаболическую и химическую стабильность таких соединений, и в случае соединений бензимидазола существует вероятность образования таутомера лактам-лактим, который является нежелательным из-за дополнительной ионизации в некоторых диапазонах рН, и образования дополнительного донорного участка водородной связи. Все это отрицательно влияет на проникновение через биологические мембраны и, следовательно, препятствует всасыванию из желудочнокишечного тракта и проникновению через гематоэнцефалический барьер.

В международной заявке WO 2008/055808 раскрываются конкретные соединения в качестве селективных антагонистов 5-НТ₆, селективных антагонистов 5-НТ2А или и тех, и других. Соединения, раскрытые в данной международной заявке, содержат необязательно замещенную амидную группу в положении 2. Соединения характеризуются низкой метаболической и химической стабильностью из-за гидролиза амидной группы до карбоксилата. Кроме того, наличие амидной группы не позволяет получать соединения с двойной аффинностью, т.е. не только к 5-НТ₆, но также и к 5-НТ2А.

В международных заявках WO 2010/056644 и WO 2013/001499 раскрываются соединения, содержащие в положении 2 замещение алкильной группой или вообще не содержащие замещения, т.е. в положении 2 находится атом водорода. Опять же, соединения с двойной аффинностью, т.е. не только к 5-НТ₆, но также и к 5-НТ_2А, не могут быть получены.

До сих пор не идентифицировано ни одного соединения, которое представляло бы собой потенциальное лекарственное средство, объединяющее антипсихотическую и прокогнитивную активность в одной молекуле, действующее посредством антагонизма рецепторов 5-НТ2А и 5-НТ₆ и, с другой стороны, характеризующееся благоприятными свойствами в отношении, например, биологической доступности и легкости проникновения через гематоэнцефалический барьер.

Таким образом, в уровне техники все еще существует потребность в таких соединениях.

Следовательно, в настоящем изобретении представлены новые соединения с 4-(пиперазин-1-ил)-2(трифторметил)-Ш-индольным или 4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазольным ядром в качестве двойного антагониста рецепторов 5-НТ2А и 5-НТ₆, обладающие благоприятными как in vitro, так и in vivo характеристиками и, следовательно, являющиеся перспективными кандидатами в клинических испытаниях.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I),

- 3 040709 где

G представляет собой СН или N;

R¹ представляет собой Н, С₁-С₄-алкил, НО-С₁-С₄-алкил или С₁-С₄-алкил-О-С₁-С₄-алкил;

R² выбран из группы, состоящей из фенильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем, или

5- или 6-членной гетероарильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем, где заместитель выбран из F, Cl, Br, С1-С₄-алкил-, С₁-С₄-алкил-О-.

В первом варианте осуществления в соединениях формулы (I) G представляет собой СН.

В альтернативном варианте осуществления в соединениях формулы (I) G представляет собой N.

Предпочтительно в соединениях формулы (I) R¹ представляет собой Н, метил или 2-гидроксиэтил.

В одном предпочтительном варианте осуществления соединений формулы (I) R² выбран из фенильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем.

В другом предпочтительном варианте осуществления соединений формулы (I) R² выбран из 5- или 6-членной гетероарильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем. В данном предпочтительном варианте осуществления 5- или 6-членный гетероарил предпочтительно выбран из фурила, тиенила, тиазолила или пиридила.

В еще одном, наиболее предпочтительном варианте осуществления

R выбран из группы, состоящей из фенильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем, или

5- или 6-членной гетероарильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем, где 5- или 6-членный гетероарил выбран из фурила, тиенила, тиазолила или пиридила, где заместитель выбран из F, Cl, Br, С1-С₄-алкил-, С₁-С₄-алкил-О-.

Во всех вариантах осуществления, когда R² представляет собой замещенную группу, он замещен одним или двумя заместителями. Более предпочтительно он замещен одним заместителем.

Предпочтительно в определениях группы R² заместитель выбран из F, Cl, метила или метокси.

В качестве альтернативы также предпочтительно, если группа R² является незамещенной.

Можно указать следующие конкретные соединения формулы (I) по настоящему изобретению:

-бензил-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол,

-бензил-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол,

2-{4-[1 -бензил-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол-4-ил]пиперазин-1 -ил} этанол,

-(фуран-2-илметил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензимидазол,

1-[(5-метилфуран-2-ил)метил]-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол,

-(3 -хлорбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензимидазол,

-(3 -фторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензимидазол,

-(3,4-дихлорбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензо[d]имидазол,

1-(3-хлор-4-фторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензо[d]имидазол,

1-(3,4-дифторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензо[d]имидазол,

1-(3,5-дихлорбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензо[d]имидазол,

-бензил-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

-(3,4-дихлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(4-хлор-3 -фторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

4-(пиперазин-1 -ил)-1 -(1,3-тиазол-2-илметил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(4-хлор-3 -фторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1-(фуран-2-илметил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

-(3 -метоксибензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(3 -фторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(3 -хлорбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(фуран-2-илметил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(3,4-дифторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(3 -метоксибензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

-(3 -фторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-(3,4-дифторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

-бензил-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

-(3 -хлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1-[(5-метилфуран-2-ил)метил]-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

1-[(5-метилтиофен-2-ил)метил] -4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

4-(пиперазин-1-ил)-1-(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

4-(пиперазин-1-ил)-1-(тиофен-3-илметил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

4-(4-метилпиперазин-1-ил)-1-(тиофен-3 -илметил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

4-(4-метилпиперазин-1-ил)-1-(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

- 4 040709

4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-1 -[(5-метил-1,3-тиазол-2-ил)метил] -2-(трифторметил)-1 H-индол.

В одном особенно предпочтительном варианте осуществления

G представляет собой N, R² представляет собой незамещенную фенильную группу, и

R¹ представляет собой Н, и соединение представляет собой

В еще одном особенно предпочтительном варианте осуществления

G представляет собой СН, R² представляет собой незамещенную 2-фурильную группу, и R¹ представляет собой Н, и соединение представляет собой

G представляет собой СН, R² представляет собой незамещенную 2-фурильную группу, и R¹ представляет собой -СН₃, и соединение представляет собой

И в еще одном особенно предпочтительном варианте осуществления

G представляет собой СН, R² представляет собой 5-метил-2-фурильную группу, и R¹ представляет собой Н, и соединение представляет собой

Механизм действия соединений по настоящему изобретению основан на селективной блокаде обоих серотониновых рецепторов, 5-НТ2А и 5-НТ₆, чья роль в патомеханизме и фармакотерапии психотических и когнитивных расстройств была полностью подтверждена как в доклинических, так и клинических исследованиях.

- 5 040709

Следовательно, соединения по настоящему изобретению могут быть применимыми в медицине в качестве лекарственных препаратов для лечения и/или предупреждения состояний, чувствительных к контролю серотониновой системы, особенно антагонизму рецепторов 5-НТ2А и 5-НТ₆, при этом подразумеваются такие состояния как когнитивные расстройства различных типов, например болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, деменция с тельцами Леви, психоз, связанный с деменцией, шизофрения, шизоаффективные расстройства, шизофреноформные расстройства, бредовые синдромы и другие психотические состояния, связанные и не связанные с приемом психоактивных веществ, аффективное расстройство, биполярное расстройство, одержимость, депрессия, тревожные расстройства различной этиологии, стрессовые реакции, расстройства сознания, кома, алкогольный делирий и различной этиологии, агрессия, психомоторное возбуждение и другие расстройства поведения, нарушения сна различной этиологии, абстинентные синдромы различной этиологии, зависимость, болевые синдромы различной этиологии, интоксикация психоактивными веществами, нарушения мозгового кровообращения различной этиологии, психосоматические расстройства различной этиологии, конверсионные расстройства, диссоциативные расстройства, нарушения мочеиспускания, аутизм и другие нарушения развития, например, никтурия, заикание, виды тика, психопатологические симптомы и неврологические расстройства на фоне других заболеваний центральной и периферической нервных систем.

Таким образом, во втором аспекте настоящее изобретение относится к соединению по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного препарата.

Предпочтительно соединение по настоящему изобретению можно применять в лечении когнитивных расстройств различных типов, среди прочего болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, психоза, связанного с деменцией, шизофрении, бредовых синдромов и других психотических состояний, связанных и не связанных с приемом психоактивных веществ, депрессии, тревожных расстройств различной этиологии, нарушений сна различной этиологии.

В лечении расстройств центральной нервной системы соединения формулы (I) можно вводить в форме фармацевтической композиции или состава, содержащих их.

Следовательно, в третьем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его соль и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Подробное описание

Термины, использованные в настоящем изобретении, имеют следующие значения. Иные термины, не определенные ниже, имеют значения, понятные специалистам в данной области техники.

Термин С1-С₄-алкил означает насыщенный углеводород с прямой или разветвленной цепью, содержащий 1-4 атома углерода. Примерами С1-С₄-алкила являются метил, этил, н-пропил, изопропил, нбутил, трет-бутил, втор-бутил. Более предпочтительно C₁-С₄-алкил представляет собой C₁-С₃-алкил, Ср С2-алкил или C₁-алкил. Обозначение C₁-С₃-алкил, С1-С2-алкил означает насыщенный углеводород с прямой или разветвленной цепью, содержащий 1-3 или 1-2 атома углерода соответственно. Наиболее предпочтительно С1-С₄-алкил представляет собой С1-С₂-алкил, который представляет собой метильную группу (сокращенно СН₃) или этильную группу.

Термин 5- или 6-членная гетероарильная группа означает моноциклическую ароматическую кольцевую группу, содержащую 1-4 гетероатома, выбранные из атомов азота, серы и кислорода, и включает, например, фурильную группу, тиенильную группу, пирролильную группу, имидазолильную группу, пиразолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, триазолильную группу, оксадиазолильную группу, тиадиазолильную группу, тетразолильную группу, пиридильную группу, пиримидильную группу, пиридазинильную группу и пиразинильную группу. Предпочтительно 5- или 6-членная гетероарильная группа выбрана из фурильной группы, тиенильной группы, триазолильной группы или пиридильной группы.

Поскольку соединения по настоящему изобретению являются основными, они могут образовывать подходящие соли присоединения кислоты.

Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты относятся к таким солям, которые сохраняют биологическую эффективность свободных оснований и которые не являются нежелательными с точки зрения биологии. Соли присоединения кислоты могут быть образованы с помощью неорганических (минеральных) кислот или органических кислот. Как примеры кислот могут быть указаны хлористоводородная, бромистоводородная, йодистоводородная, фосфорная, серная, азотная, угольная, янтарная, малеиновая, муравьиная, уксусная, пропионовая, фумаровая, лимонная, винная, молочная, бензойная, салициловая, глутаминовая, аспарагиновая, п-толуолсульфоновая, бензолсульфоновая, метансульфоновая, этансульфоновая, нафталинсульфоновая, такая как 2-нафталинсульфоновая, памовая, ксинафоевая, гексановая кислота.

Соединения формулы (I) можно получить с применением следующих способов.

Соединения формулы (I), где G представляет собой N, т.е. соединения на основе 4-(пиперазин-1ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазольного ядра, можно получить в соответствии со следующей схемой реакции 1.

- 6 040709

Схема реакции 1.

R¹

Η

R₂-

_F основание растворитель

A-2 ,R¹ основание растворитель

R²

NaoSoC/ EtOH / вода или r!

Fe / TFA

r² xHCI

2. 36% HCl z-PrOH

TFA температура

А-5 соединение формулы (I), G=N

Вначале 2,6-дифторнитробензол А-1 обрабатывали производным пиперазина (R¹ = Me, ВОС) в присутствии основания (как правило, K2CO3). Затем осуществляли реакцию полученного продукта А-2 с бензиламином (R = арил, гетероарил) в присутствии основания (как правило, K2CO3), что обеспечивало получение соединения А-3. Далее получали бисанилин А-4 посредством восстановления нитрогруппы в А-3 с помощью либо дитионита натрия при повышенной температуре, либо металлического железа Наконец, осуществление реакции бисанилина А-4 с TFA и последующее образование HCl-соли обеспечивало получение ожидаемых бензимидазолов А-5.

Схема реакции 2.

На схеме реакции 2 изображен иллюстративный пример, когда осуществляли реакцию 1-(3-фтор-2нитрофенил)пиперазина А-6 с 2-бромэтилацетатом в присутствии K2CO3 с получением производного пиперазина А-2С

Схема реакции 3.

Ri R

А-4 а.7 W W

А-8 А-5 соединение формулы (Т), G-N

На схеме реакции 3 изображены примеры, когда R² = 2-фурил или 5-метил-2-фурил. В данном случае осуществляли реакцию бисанилина А-4 с TFAA с получением смеси соединений А-7 и А-8. Соединение А-7 количественно превращали в А-8 с применением АсОН и полученное таким образом соединение А-8 обрабатывали 36% раствором HCl с последующим повышением основности с получением в результате необходимых бензимидазолов А-5, соединения формулы (I), где G=N.

Альтернативно соединения формулы (I), где G представляет собой СН, т.е. соединения на основе 4(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазольного ядра, можно получать в соответствии со следующей схемой реакции 4.

- 7 040709

Схема реакции 5.

Вначале 3-бром-2-метиланилин В-1 обрабатывали трифторуксусным ангидридом с получением амида В-2. Затем осуществляли реакцию полученного продукта В-2 с бромом в присутствии пероксида бензоила и при свете, что обеспечивало получение соединения В-3. Далее бензилбромид В-4 превращали в производное фосфония и подвергали циклизации в горячем DMF с получением индола В-4. Введение защитной бензильной группы при атоме азота индола с последующим проведением реакции сочетания с производным пиперазина (R¹ = Me, BOC) обеспечивало получение соединения В-6. Удаление защитной бензильной группы в присутствии кислорода и трет-бутоксида калия обеспечивало получение структурного блока В-7. Наконец, осуществление реакции индола В-7 с бензилбромидом (R² = арил, гетероарил) и в некоторых случаях последующее образование HCl-соли обеспечивало получение конечных трифториндолов В-9, соединения формулы (I), где G=CH. Необязательно можно повысить основность HClсолей трифториндолов В-9 и превратить их в другую фармацевтически приемлемую соль или применять как свободное основание.

Схема реакции 6.

R¹

N r²ch₂oh Г J PPh₃, DIAD

TFA, затем рТ Ycf, ^ьгз повышение основности, \—R² или в - 7 НС1, затем в - э повышение основности

На схеме реакции 6 изображен альтернативный подход к получению соединений В-9 с применением условий реакции Мицунобу. Осуществляли реакцию индола В-7 с подходящим бензиловым спиртом в присутствии трифенилфосфина и диизопропилазадикарбоксилата. Продукт В-8 реакции обрабатывали с помощью TFA или HCl в выбранном растворителе с последующим повышением основности с получением соединения В-9 в виде свободного основания.

Соль присоединения кислоты можно получать простым способом путем осуществления реакции соединения формулы (I) в форме свободного основания с подходящей неорганической или органической кислотой в количестве, практически эквимолярном соединению формулы (I), необязательно в подходящем растворителе, таком как органический растворитель, с образованием соли, которую обычно выделяют, например, посредством кристаллизации и фильтрации.

Например, свободное основание соединения формулы (I) можно превратить в соответствующую гидрохлоридную соль посредством обработки раствора соединения, например в метаноле, стехиометрическим количеством хлористоводородной кислоты или хлороводорода в метаноле, этаноле, диэтиловом эфире или другом подходящем растворителе с последующим выпариванием растворителей.

- 8 040709

В качестве альтернативы гидрохлоридные соли можно получать во время удаления защитной Nтрет-бутоксикарбонильной группы при атоме азота пиперидина с применением хлороводорода в метаноле, этаноле, диэтиловом эфире или другом подходящем растворителе с последующим выпариванием растворителей, как проиллюстрировано на примере превращения соединения В-8 в соединение В-9.

В лечении вышеуказанных заболеваний соединения формулы (I) можно вводить в качестве химического соединения, но, как правило, их будут применять в форме фармацевтических композиций, содержащих соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, определенную выше, в качестве активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями и/или вспомогательными веществами.

В лечении вышеуказанных заболеваний соединение формулы (I) или фармацевтическую композиции по настоящему изобретению можно вводить любым путем, предпочтительно перорально или парентерально, и они будут иметь форму состава, предназначенного для применения в медицине, в зависимости от предполагаемого пути введения.

Твердые составы могут быть представлены в форме, например, таблеток или капсул, полученных с помощью обычных средств с использованием фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, таких как связывающие средства (например, прежелатинизированный крахмал маиса, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, сахароза, карбоксиметилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, кросповидон, картофельный крахмал или натрия крахмалгликолят); смачивающие средства (например, лаурилсульфат натрия). На таблетки можно наносить покрытие в соответствии со способами, хорошо известными из уровня техники, в виде традиционных оболочек, оболочек для задерживания/контролирования высвобождения или кишечнорастворимых оболочек.

Жидкие составы для перорального введения могут быть представлены в форме, например, растворов, сиропов или суспензий, или же они могут быть представлены в виде сухого продукта для растворения с помощью воды или другой подходящей среды-носителя перед использованием. Такие жидкие составы можно получить с помощью традиционных средств с использованием фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, таких как суспендирующие средства (например, сорбитовый сироп, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры); эмульгирующие средства (например, лецитин или аравийская камедь); неводные среды-носители (например, миндальное масло, масляные сложные эфиры, этиловый спирт или фракционированные растительные масла) и консерванты (например, метил п- или пропилгидроксибензоат или сорбиновая кислота). Составы могут также содержать подходящие буферы, ароматизаторы, красители и подсластители.

Составы для перорального введения можно соответствующим образом составлять с помощью способов, известных специалистам в данной области, с достижением контролируемого высвобождения активного соединения.

Парентеральное введение предусматривает введение посредством внутримышечной и внутривенной инъекции или инфузии. Составы для парентерального введения могут находиться в стандартной лекарственной форме, например, в ампулах или в многодозовых контейнерах, с добавленным консервантом. Композициям можно также придавать форму суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных средах-носителях, и они могут содержать препаратообразующие средства, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства.

Альтернативно соединения формулы (I) могут находиться в форме порошка для растворения с помощью подходящей среды-носителя, например, стерильной апирогенной воды.

Способ лечения с применением соединений по данному изобретению будет предусматривать введение терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, субъекту, который нуждается в таком лечении.

Рекомендуемая доза соединений по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 1000 мг в сутки в виде однократной или разделенной общей дозы. Специалисту в данной области будет понятно, что выбор дозы, необходимой для достижения желаемого биологического эффекта, будет зависеть от ряда факторов, например, конкретного соединения, применения, способа введения, возраста и состояния пациента, и точная дозировка в конечном итоге будет определена на усмотрение лечащего врача.

- 9 040709

Примеры

Аббревиатуры: AcOEt этилацетат

АсОН уксусная кислота

ACN ацетонитрил

Ъг s широкий синглет

СНС1з хлороформ d дублет dd дублет дублетов ddd дублет дублета дублетов dq дублет квартетов

DCM дихлорметан

EbO диэтиловый эфир

DIPEA Ν,Ν ’-диизопропил-N ’ ’-этиламин

DMSO диметилсулъфоксид

ЕЮН этанол экв. эквиваленты

ESI ионизация электрораспылением

ч. час(часы)

НС1 хлороводород

HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография

- 10 040709

LiOH гидроксид лития л литр(литры) т мультиплет

МеОН метанол

MgSO4 сульфат магния мл миллилитр(миллилитры)

ИаНСОз бикарбонат натрия

M12S2O4 дитионит натрия

NaOH гидроксид натрия

Na₂SO₄ сульфат натрия

NMR ядерный магнитный резонанс

К₂СОз карбонат калия i-PrOH 2-пропанол, изопропанол q квартет

RP-HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой s синглет sep септет

SQDMS одноквадруполъный масс-спектрометр t триплет

TFA трифторуксусная кислота

TFAA трифторуксусный ангидрид

THF тетрагидрофуран

TLC тонкослойная хроматография

UPLCMS улътраэффективная жидкостная хроматография/масс-спектрометрия TLC проводили на силикагеле 60 F254 на алюминиевой фольге (Sigma-Aldrich, Merck) с применением подходящих систем растворителей. Визуализацию в общем осуществляли посредством УФ-излучения (254 нм).

Способ UPLC-MS.

Способ А.

Анализы UPLCMS проводили на жидкостном хроматографе UPLC, оснащенном детектором PDA и детектором SQD MS, работающем при ESI(+) или ESI(-), с применением колонки С18, 2,1 ммх100 мм, 1,7 мкм (AQUITY UPLC ВЕН или эквивалентной). В качестве подвижной фазы применяли метанол класса для HPLC или LC/MS, воду класса для HPLC, муравьиную кислоту класса для HPLC или LC/MS, 25% раствор аммиака класса ч.д.а. и их смесь. Условия эксплуатации были следующими: расход подвижной фазы 0,45 мл/мин, длина волны 210-400 нм, объем введенной пробы 1 мкл, температура колонки 60°С, температура автоматического пробоотборника 5°С.

Анализ проводили 3,3 мин +0,5 мин для задержки введения следующей пробы. Градиентное элюирование с линейным протеканием:

- 11 040709

Анализ проводили 5,5 мин +1,5 мин для задержки введения следующей пробы. Градиентное элю-

Время [мин.]	% А	%В	Градиентная кривая
0,0	95	5	-
1,8	5	95	линейная(6)
3,3	95	5	с мгновенным переходом (11)

ирование с линейным протеканием:

Время [мин.]	% А	%В	Градиентная кривая
0,0	80,0	20,0	-
4,0	0,1	99,9	линейная (6)
5,5	80,0	20,0	с мгновенным переходом (11)

Растворы получали следующим образом.

Получение подвижной фазы А1 - основный градиент: 25 мкл муравьиной кислоты и 250 мкл 25% раствора аммиака добавляли к 250 мл воды. Дегазировали с использованием ультразвуковой бани в тече ние 10 мин.

Получение подвижной фазы А2 - кислотный градиент: 50 мкл муравьиной кислоты добавляли к 250 мл воды. Дегазировали с использованием ультразвуковой бани в течение 10 мин.

Подвижная фаза В: градиент метанола наивысшей степени очистки.

Способ В.

Анализы UPLC-MS или UPLC-MS/MS проводили на системе UPLC-MS/MS, содержащей ACQUITY UPLC от Waters (Waters Corporation, Милфорд, Массачусетс, США), в сочетании с масс-спектрометром TQD от Waters (режим ионизации электрораспылением ESI с тандемным квадруполем). Хроматографические разделения проводили с применением колонки Acquity UPLC ВЕН (этиленовый мостиковый гибрид) С18: 2,1 ммх100 мм и размер частиц 1,7 мкм. Температуру колонки поддерживали на уровне 40°С и проводили элюирование при условиях градиента с применением от 95% до 0% элюента А в течении 10 мин при скорости потока 0,3 мл/мин. Элюент А, вода/муравьиная кислота (0,1%, об./об.); элюент В, ацетонитрил/муравьиная кислота (0,1%, об./об.). Вводили в общем 10 мкл каждого образца и регистрировали хроматограммы с применением детектора eλ PDA от Waters. Спектры анализировали в диапазоне 200-700 нм с разрешением 1,2 нм и скоростью введения образцов 20 точек/с. Настройки MSдетектирования масс-спектрометра TQD от Waters были следующими: температура источника 150°С, температура десольватации 350°С, скорость потока газа для десольватации 600 л/ч, скорость потока конусного газа 100 л/ч, капиллярный потенциал 3,00 кВ и конусный потенциал 20 В. Азот применяли как для распыления, так и для высушивания. Данные получали в режиме сканирования, охватывающем диапазон значений масса/заряд от 50 до 1000 с интервалами 0,5 с; суммировали 8 снимков с получением конечного спектра. Анализы на основе индуцированной столкновениями диссоциации (CAD) проводили с энергией 20 эВ и в источнике наблюдали все фрагментации. Следовательно, спектры ионов получали в диапазоне 50-500 масса/заряд. Для получения данных применяли программное обеспечение MassLynx V 4.1 (Waters). Получали стандартные растворы (1 мг/мл) каждого соединения в смеси, содержащей ацетонитрил/воду (1/1, об./об.) аналитической степени чистоты.

Процедуры синтеза.

А. Соединения на основе бензимидазольного ядра.

Соединение А-2А: трет-бутил-4-(3-фтор-2-нитрофенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 1 л, оснащенную механической мешалкой, добавляли 2,6-дифторнитробензол (16,5 г, 104 ммоль) и колбу заполняли с помощью DMSO (170 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃(31,6 г, 229 ммоль) и N-BOC-пиперазин (21,2 г, 114 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 40°С и перемешивали в течение 2,5 ч при данной температуре. Реакционную смесь выливали в воду (400 мл) и разбавляли с помощью DCM (500 мл). Фазы разделяли и органическую фазу промывали водой (2x150 мл), солевым раствором (100 мл), высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Твердый остаток

- 12 040709 растворяли в МеОН (120 мл), затем добавляли по каплям воду (15 мл) и всю смесь охлаждали до 5°С и хранили при данной температуре в течение 2 ч. По прошествии этого времени твердый продукт А-2А (21,9 г) фильтровали и промывали смесью МеОН:вода (10:1, 20 мл). Объем фильтрата уменьшали наполовину и хранили его при 5°С в течение 16 ч. Дополнительную порцию соединения А-2А (6,3 г) фильтровали и объединяли с ранее полученным твердым веществом. В результате продукт А-2А получали в виде желтого твердого вещества (28,2 г, выход 83%) с чистотой 95% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

Соединение А-3А: трет-бутил-4-[3-(бензиламино)-2-нитрофенил]пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (12 г, 45 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (100 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (9,31 г, 67,5 ммоль) и бензиламин (5,82 г, 54 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 120°С и перемешивали в течение 2 ч при данной температуре. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал 1% площади пика субстрата. Реакционную смесь выливали в лед (приблизительно 150 г) и разбавляли с помощью AcOEt (300 мл). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью AcOEt (2x300 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и растворитель удаляли in vacuo. В результате продукт А-3А получали в виде желтого твердого вещества (11,9 г, выход 84%) с чистотой 95% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение А-4А: трет-бутил-4-[2-амино-3-(бензиламино)фенил]пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 500 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-3А (4 г, 9,7 ммоль) и EtOH (200 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (5,06 г, 29,1 ммоль) в воде (50 мл) в течение 1 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (30 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (30 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт А-4А получали в виде темно-коричневого масла (3,01 г) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение А-5А, соединение 1: 1-бензил-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол в форме гидрохлоридной соли.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-4А (382 мг, 1 ммоль) и TFA (2 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (50 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток очищали с применением колоночной хроматографии (от 10% до 20% МеОН в DCM). Фракции с продуктом концентрировали, повторно растворяли в 20 мл i-PrOH и добавляли 0,5 мл 36% раствора HCl. Растворители удаляли in vacuo и остаток растворяли в 5 мл i-PrOH, a затем добавляли 20 мл Et₂O. Твердый продукт фильтровали и промывали с помощью Et₂O (5 мл). В результате получали конечный продукт А-5А, соединение 1, в форме гидрохлоридной соли в виде бежевого твердого вещества (141 мг,

- 13 040709 выход 39%) с чистотой 99,24% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,53 (d, J = 6,7 Гц, 2Н), 7,37-7,25 (m, 4H), 7,19 (d, J = 8,2 Гц, 1H),

7,11-7,03 (m, 2H), 6,78 (d, J= 7,8 Гц, 1H), 5,67 (s, 2H), 3,80 (dd, J = 6,6, 3,8 Гц, 4Н), 3,30 (m, J= 4,9 Гц, 4Н).

¹³С ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) δ 143,20, 137,63, 137,46, 137,31 (q, J = 38,2 Гц), 132,61, 129,22, 128,20,

127,05, 126,51, 119,40 (q, J= 271,1 Гц), 108,98, 104,74, 48,12, 46,39, 42,92.

Соединение А-3В: N-бензил-3-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-нитроанилин.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли 2,6дифторнитробензол А-1 (5 г, 31 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (50 мл). Затем добавляли высушенный K2CO3 (8,5 г, 62 ммоль) и 1-метилпиперазин (3,3 г, 33 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 30°С и перемешивали в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал отсутствие пика субстрата. К реакционной смеси добавляли другую порцию K2CO3 (5,1 г, 37 ммоль) с последующим добавлением бензиламина (3,96 г, 37 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал 70% превращения соединения А-2В. Добавляли еще одну порцию K2CO3 (3 г, 22 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи при 70°С. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал отсутствие соединения А-2В в реакционной смеси. Реакционную смесь выливали в лед (приблизительно 400 г), где продукт начал кристаллизоваться. Твердое вещество фильтровали и ополаскивали водой. Полученное таким образом неочищенное влажное соединение А-3В применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение А-4В: N¹-бензил-3-(4-метилпиперазин-1 -ил)бензол-1,2-диамин.

В колбу объемом 1 л, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли влажное соединение А3В из предыдущей стадии и EtOH (500 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (16,2 г, 93 ммоль) в воде (100 мл) в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH в вакууме и добавляли AcOEt (200 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (30 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт А-4В получали в виде темно-коричневого масла (4,2 г) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение А-5В, соединение 2: 1-бензил-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hбензимидазол в форме гидрохлоридной соли.

В колбу объемом 90 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-4В (600 мг, 2 ммоль) и TFA (5,8 г, 51 ммоль) в атмосфере аргона и реакционную смесь нагревали до 80°С в течение 2 ч. Избыток кислоты удаляли в вакууме. Остаток растворяли в 15 мл сухого IPA и добавляли 5 мл 36% раствора HCl. Через 1 ч перемешивания смесь выпаривали до сухого состояния. Остаток нагревали с обратным холодильником с 5 мл диоксана и несколькими каплями IPA в течение 30 мин. Раствор охлаждали при 3°С в течение ночи без перемешивания. Затем твердое вещество фильтровали, промывали диоксаном и высушивали в вакуумной сушилке. В результате получали конечный продукт А-5В, соединение 2, в форме гидрохлоридной соли, в виде бежевого твердого вещества (100 мг, выход 12%) с чистотой 98,09% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 11,41 (s, 1H), 7,39-7,25 (m, 4H), 7,21 (d, J= 8,2 Гц, 1H), 7,11-7,03 (m,

- 14 040709

2H), 6,79 (d, J= 7,8 Гц, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,55-4,24 (m, 2H), 3,65-3,44 (m, 2Н), 3,46-3,19 (m, 4H), 2,82 (s, 3Н).

¹³С ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) δ 142,82, 137,61, 137,36 (q, J= 37,9 Гц), 136,38, 132,63, 129,49, 129,22,

128,20, 127,04, 126,52, 120,48, 118,32, 109,14, 104,83, 52,48, 48,13, 46,51, 42,49, 25,92.

Соединение А-2С: 2-[4-(3-фтор-2-нитрофенил)пиперазин-1-ил]этилацетат.

В колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли 1-(3-фтор-2нитрофенил)пиперазин А-6 (5 г, 22,5 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим ACN (50 мл). Затем добавляли высушенный K2CO3 (6,0 г, 45 ммоль) и 2-бромэтилацетат (4,45 г, 26,6 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 20 ч при данной температуре. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал отсутствие пика субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и твердое вещество фильтровали. В результате продукт А-2С получали в виде желтого твердого вещества (6,8 г, выход 99%) с чистотой 99% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

Соединение А-ЗС: 2-{4-[3-(бензиламино)-2-нитрофенил]пиперазин-1-ил}этилацетат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2С (6,6 г, 22 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (60 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (6,07 г, 44 ммоль) и бензиламин (2,59 г, 24,2 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 20 ч при данной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь выливали в лед (приблизительно 60 г) и разбавляли с помощью AcOEt (300 мл). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью AcOEt (2x300 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и растворитель удаляли in vacuo. В результате продукт А-3С получали в виде желтого твердого вещества (6,3 г, выход 72%) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение А-5С, соединение 3: 2-{4-[1-бензил-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол-4ил]пиперазин-1-ил}этанол в форме гидрохлоридной соли.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли TFA (10 мл) и смесь нагревали до 70°С. Затем добавляли металлическое железо (1,12 г, 20 ммоль) и соединение А-3С (2,0 г, 5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при данный температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (100 мл). Добавляли по каплям 2 М раствор NaHCO₃ для достижения рН~8 и затем фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x100 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток растворяли в 50 мл THF и затем добавляли 5 мл воды и 1 г LiOH. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре. По прошествии этого времени органический растворитель удаляли in vacuo и в смесь добавляли 100 мл AcOEt. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью AcOEt (2x100 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и растворитель удаляли in vacuo. Остаток очищали с применением колоночной хроматографии (от 10 до 20% МеОН в DCM). После удаления растворителей остаток растворяли в 20 мл i-PrOH и добавляли 0,5 мл 36% раствора HCl. Растворители удаляли in vacuo и остаток повторно растворяли в 5 мл i-PrOH и затем добавляли 20 мл Et₂O. Твердый продукт фильтровали и промывали с помощью Et2O. В результате получали конечное соединение А- 15 040709

5С, соединение 3, в форме гидрохлоридной соли в виде бежевого твердого вещества (81 мг, выход 3,7%) с чистотой 97% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 10,78 (s, 1H), 7,37-7,25 (m, 4H), 7,20 (d, J= 8,2 Гц, 1H), 7,10-7,04 (m,

2Н), 6,78 (d, J= 7,8 Гц, 1H), 5,67 (s, 2Н), 4,39 (d, J= 11,9 Гц, 2Н), 3,85 (dd, J= 6,2, 4,3 Гц, 2Н), 3,67 (d, J=11,2

Гц, 2Н), 3,37 (m, 4Н), 3,26 (q, J= 5,2 Гц, 2Н).

¹³С ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) δ 142,82, 137,62, 137,34 (q, J = 37,4), 136,39, 132,59, 129,23, 128,22, 127,05, 126,52, 119,40 (q, J= 270,7 Гц), 109,04, 104,82, 58,30, 55,45, 51,56, 48,12,46,32.

Соединение A-3D: трет-бутил-4-(3 -(фуран-2-илметиламино)-2-нитрофенил)пиперазин-1 -карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (1,63 г, 5 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (6 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (2,07 г, 15 ммоль) и фурфуриламин (6,5 ммоль, 631 мг) и реакционную смесь нагревали до 80°С и перемешивали в течение 16 ч при данной температуре. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал 5% площади пика субстрата А-2А. Реакционную смесь выливали в лед (приблизительно 50 г) и разбавляли с помощью AcOEt (30 мл). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью AcOEt (2x30 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и растворитель удаляли in vacuo. Остаток твердого вещества растворяли в небольшом количестве МеОН при умеренном нагревании и затем хранили при 5°С в течение ночи. Полученное таким образом твердое вещество фильтровали, ополаскивали с помощью холодного МеОН (5 мл) и высушивали при высоком вакууме. Фильтрат концентрировали in vacuo, предварительно адсорбировали на силикагель и очищали с применением колоночной хроматографии с гравитационным элюированием (10% AcOEt в н-гексане). После удаления растворителей продукт объединяли с ранее полученным твердым веществом. В результате продукт A-3D получали в виде красно-коричневого твердого вещества (1,29 г, выход 64%) с чистотой 98% в соответствии с анализом UPLCMS.

Соединение A-4D: трет-бутил-4-(2-амино-3 -(фуран-2-илметиламино)фенил)пиперазин-1 -карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-3D (850 мг, 2,1 ммоль) и EtOH (20 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,83 г, 10,5 ммоль) в воде (12 мл) в течение 1 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (30 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (30 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт A-4D получали в виде темно-коричневого масла (705 мг) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение А-8А: трет-бутил-4-(1-(фуран-2-илметил)-2-(трифторметил)-Ш-бензимидазол-4-ил)пиперазин-1 -карбоксилат.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-4D (100 мг, 0,27 ммоль) и сухой ACN в атмосфере аргона и реакционную смесь охлаждали до 0°С. Затем добавляли DIPEA (243 мг, 1,88 ммоль) с последующим добавлением по каплям (0,5 ч) свежеполученного раствора TFAA (216 мг, 1,03 ммоль) в ACN (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре

- 16 040709 в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал 15% площади пика продукта А8А и 35% площади пика нециклизированного продукта А-7А. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и воды и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и удаляли растворитель in vacuo. Остаток предварительно адсорбировали на силикагель и очищали с применением колоночной хроматографии (от 10 до 15% AcOEt в н-гексане). После удаления растворителей получали две фракции. Первую фракцию, ожидаемый продукт А-8А, получали в виде бесцветного масла (107 мг, выход 44%) с чистотой 99% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А). Вторая фракция (100 мг) представляла собой смесь (1:1) ожидаемого продукта А-8А и нециклизированного продукта А-7А. Возможно количественное превращение данной смеси в чистое соединение А-8А с применением АсОН в EtOH при нагревании с обратным холодильником.

Соединение A-5D, соединение 4: 1-(фуран-2-илметил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hбензимидазол.

В колбу объемом 25 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-8А (100 мг, 0,22 ммоль) и EtOH (2 мл) с последующим добавлением 36% раствора HCl (0,5 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 40 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOH (5 мл), охлаждали до приблизительно 5°С и добавляли по каплям 25% раствор NH4OH (0,5 мл). Затем добавляли воду и DCM и фазы разделя ли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл) и объединенные органические фазы промы вали водой, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. В результате конечный продукт A-5D, соединение 4, получали в виде светло-коричневого твердого вещества (59 мг, выход 76%) с чистотой 97,34% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7,59 (d, J= 1,6 Гц, 1H), 7,34-7,26 (m, 2H), 6,66 (ddd, J = 10,6, 5,6, 3,2 Гц, 1H), 6,55 (d,J= 3,2 Гц, 1H), 6,42 (dd, J= 3,3, 1,8 Гц, 1H), 5,60 (s, 2H), 3,42 (m, 4H), 2,90 (m, 4H).

¹³С ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) δ 149,34, 145,53, 144,41, 137,69, 136,82 (q, J= 38,2 Гц), 133,01, 127,36, 119,94 (q, J= 271,5 Гц), 111,59, 110,35, 108,70, 104,01,51,13,46,42,41,97.

Соединение А-3Е: трет-бутил-4-(3-((5 -метилфуран-2-ил)метиламино)-2-нитрофенил)пиперазин-1карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (650 мг, 2 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (4 мл). Затем добавляли высушенный K2CO3 (691 мг, 5 ммоль) и 5-метилфурфуриламин (2,6 ммоль, 289 мг) и реакционную смесь нагревали до 80°С и перемешивали в течение 16 ч. После этого реакционную смесь выливали в воду (приблизительно 50 мл) и разбавляли с помощью DCM (20 мл). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, вы сушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток предварительно адсорбировали на силикагель и очищали с применением колоночной хроматографии (10% AcOEt в н-гексане). В результате конечный продукт А-3Е получали в виде красно-коричневого твердого вещества (450 мг, выход 54%) с чистотой 95% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

Соединение А-4Е: трет-бутил-4-(2-амино-3 -((5-метилфуран-2-ил)метиламино)фенил)пиперазин-1 карбоксилат.

- 17 040709

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-3Е (492 мг,

1,18 ммоль) и EtOH (17 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем одной порцией добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,21 г, 5,9 ммоль) в воде (4,3 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 10 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры.

Добавляли воду (20 мл) и AcOEt (30 мл) и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью AcOEt (2x30 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт А-4Е получали в виде темно-коричневого масла (402 мг) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки (способ А).

Соединение А-8В: трет-бутил-4-(1-((5-метилфуран-2-ил)метил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол4-ил)пиперазин-1 -карбоксилат.

В колбу объемом 25 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-4Е (216 мг, 0,56 ммоль) и сухой ACN в атмосфере аргона. Затем добавляли DIPEA (145 мг, 1,12 ммоль) с последующим добавлением по каплям (20 мин) TFAA (130 мг, 0,62 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал 15% площади пика продукта А-8В и 35% площади пика нециклизированного продукта А-7В. Реакционную смесь выливали в насыщенный раствор NaHCO₃ (20 мл), разбавляли с помощью 30 мл DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток растворяли в EtOH (6 мл) и добавляли 0,5 мл АсОН. Затем смесь нагревали до 80°С и перемешивали при данной температуре в течение 2 ч. По прошествии этого времени все растворители удаляли и остаток растворяли в AcOEt (10 мл). Органическую фазу промывали с помощью насыщенного раствора NaHCO₃, высушивали над MgSO₄ и растворитель удаляли in vacuo. Остаток предварительно адсорбировали на силикагель и очищали с применением колоночной хроматографии (20% AcOEt в н-гексане). В результате продукт А-8В получали в виде бесцветного масла (115 мг, выход 45%) с чистотой 99% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

Соединение А-5Е, соединение 5: 1-((5-метилфуран-2-ил)метил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1 H-бензимидазол.

В колбу объемом 25 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-8В (115 мг, 0,25 ммоль) и EtOH (7 мл) с последующим добавлением 36% раствора HCl (1,5 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. По прошествии этого времени добавляли другую порцию концентрированной HCl (0,7 мл) и реакционную смесь дополнительно перемешивали в течение 24 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (10 мл), охлаждали до приблизительно 5°С и добавляли по каплям 25% раствор NH₄OH (2 мл). Затем добавляли DCM (30 мл) и фазы разделяли. Водную фазу еще раз экстрагировали с помощью DCM (30 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и растворитель удаляли in vacuo. Остаток предварительно адсорбировали на силикагель и очищали с применением колоночной хроматографии (92:8:0,5 DCM:MeOH:NH₄OH). В результате конечный продукт А-5Е, соединение 5, получали в виде светло-коричневого твердого вещества (60 мг, выход 66%) с чистотой 96% в соответствии с анализом UPLCMS (способ А).

¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,29 (t, J = 8,0 Гц, 1H), 7,11 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,66 (d, J = 8,0 Гц, 1H),

- 18 040709

6,16 (m, 1H), 5,87 (m, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,55 (m, 4H), 3,15 (m, 4H), 2,21 (s, 3Н).

¹³С ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ 152,76, 146,23, 145,16, 137,33 (q, J = 38,9 Гц), 136,98, 133,23, 126,21,

119,17 (q, J= 271,1 Гц), 109,91, 108,16, 106,45, 103,11,51,00,46,08,41,60, 13,47.

Соединение A-3F: трет-бутил-4-(3-((3-хлорбензил)амино)-2-нитрофенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (1,20 г, 3,69 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (5 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (0,97 г, 7,01 ммоль) и 3-хлорбензиламин (0,84 г, 5,91 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 48 ч при данной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодный солевой раствор (75 мл) и разбавляли водой (75 мл). Полученный осадок отфильтровывали, промывали водой, высушивали на воздухе и кристаллизовали из EtOH (99,9%, 10 мл) с получением продукта A-3F в виде желтого твердого вещества (0,77 г, выход 47%) с чистотой 100% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

Соединение A-4F: трет-бутил-4-(2-амино-3 -((3 -хлорбензил)амино)фенил)пиперазин-1 -карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-3F (0,75 г, 1,68 ммоль) и EtOH (28 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем в течение одной минуты добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,31 г, 7,55 ммоль) в воде (9 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (20 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (20 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт A-4F получали в виде бежевого кристаллизующегося масла (0,63 г) и применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение A-5F, соединение 6: 1-(3-хлорбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол в форме гидрохлоридной соли.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-4F (0,31 г, 0,74 ммоль) и TFA (1,48 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (40 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x15 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт повторно растворяли в 37 мл i-PrOH и добавляли 0,3 мл 36% раствора НС1. Растворители удаляли in vacuo и остаток растворяли в 5 мл i-PrOH, а затем добавляли 20 мл Et₂O. Твердый продукт фильтровали и промывали с помощью Et2O (5 мл). В результате получали конечный продукт A-5F, соединение 6, в форме гидрохлоридной соли в виде бежевого твердого вещества (104 мг, выход 33%) с чистотой 100% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ 9,41 (br s, 2H), 7,38-7,26 (m, 3Н), 7,23-7,14 (m, 2H), 6,91 (d, J= 3,1 Гц, 1H), 6,77 (d, J= 7,7 Гц, 1H), 5,68 (s, 2H), 3,77 (br s, 4H), 3,28 (br s, 4H).

¹³C ЯМР (75 МГц, DMSO-d6) δ 143,2, 139,0, 137,6, 137,0 (q, J= 2 Гц), 133,8, 132,5, 131,2, 128,2, 127,2, 126,5, 125,0, 119,3 (q, J=271 Гц), 109,1, 104,6, 47,4, 46,4, 43,0.

- 19 040709

Соединение A-3G: трет-бутил-4-(3-((3-фторбензил)амино)-2-нитрофенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (1,20 г, 3,69 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (5 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (0,97 г, 7,01 ммоль) и 3-фторбензиламин (0,74 г, 5,91 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 48 ч при данной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодный солевой раствор (75 мл) и разбавляли водой (75 мл). Полученный осадок отфильтровывали, промывали водой, высушивали на воздухе и кристаллизовали из EtOH (99,9%, 10 мл) с получением продукта A-3G в виде желтого твердого вещества (0,73 г, выход 46%) с чистотой 100% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

Соединение A-4G: трет-бутил-4-(2-амино-3-((3-фторбензил)амино)фенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-3G (0,70 г, 1,63 ммоль) и EtOH (27 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем в течение одной минуты добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,27 г, 7,32 ммоль) в воде (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (20 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (20 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт A-4G получали в виде бледно-бежевого масла (0,60 г) и применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение A-5G, соединение 7: 1-(3-фторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол в форме гидрохлоридной соли.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-4G (0,30 г, 0,75 ммоль) и TFA (1,5 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (40 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x15 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO4 и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт повторно растворяли в 37 мл i-PrOH и добавляли 0,3 мл 36% раствора HCl. Растворители удаляли in vacuo и остаток растворяли в 5 мл i-PrOH, а затем добавляли 20 мл Et₂O. Твердый продукт фильтровали и промывали с помощью Et₂O (5 мл). В результате получали конечный продукт A5G, соединение 7, в форме гидрохлоридной соли в виде бежевого твердого вещества (100 мг, выход 32%) с чистотой 98,84% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 9,42 (br s, 2H), 7,39-7,27 (m, 2H), 7,18 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 7,10 (dt, J = 2,6, 8,3 Гц, 1H), 6,93 (d, J = 10,0 Гц, 1H), 6,82-6,74 (m, 2H), 5,68 (s, 2H), 3,81-3,74 (m, 4H), 3,28 (br s, 4H).

¹³C ЯМР (75 МГц, DMSO-d₆) δ 162,6 (d, J = 244 Гц), 143,2, 139,3 (d, J = 7,2 Гц), 137,6 (q, J = 2 Гц), 137,0, 132,6, 131,4 (d, J = 8,3 Гц), 127,2, 122,4 (d, J = 2,8 Гц), 119,3 (d, J = 271 Гц), 115,1 (d, J =21 Гц), 113,6 (d, J= 22,5 Гц), 109,1, 104,6,47,5,46,4,43,0.

- 20 040709

Соединение А-3Н: трет-бутил-4-(3-((3,4-дихлорбензил)амино)-2-нитрофенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (1,10 г, 3,38 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (5 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (0,7 г, 5,07 ммоль) и 3,4-дихлорбензиламин (0,65 г, 3,72 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 24 ч при данной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодный солевой раствор (75 мл) и разбавляли водой (75 мл). Полученный осадок отфильтровывали, промывали водой, высушивали на воздухе и кристаллизовали из EtOH (99,9%, 10 мл) с получением продукта А-ЗН в виде красного твердого вещества (0,7 г, выход 43%) с чистотой 94,4% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

Соединение А-4Н: трет-бутил-4-(2-амино-3-((3,4-дихлорбензил)амино)фенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-3Н (0,7 г, 1,54 ммоль) и EtOH (22 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем в течение 1 мин добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,08 г, 6,2 ммоль) в воде (7 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (15 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (15 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт А-4Н получали в виде желтоватого масла (0,285 г) и применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение А-5Н, соединение 8: 1-(3,4-дихлорбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H бензо [d] имидазол.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-4Н (0,14 г, 0,33 ммоль) и TFA (0,7 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (20 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x10 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Полученный неочищенный продукт очищали с применением колоночной хроматографии (нгексан/DCM/метанол/NH₃(_водн.) 4,0/5,0/1,0/0,02, об./об./об./об.) с получением конечного продукта А-5Н, соединения 8, в виде бледно-желтого кристаллизующегося масла (120 мг, выход 85%) с чистотой 95,75% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ 7,60-7,49 (m, 2Н), 7,44-7,23 (m, 4 Н), 7,17-7,06 (m, 2Н), 6,97-6,84 (m, 2Н), 6,72-6,63 (m, 2Н), 5,66 (s, 2Н), 3,57-3,50 (m, 4Н), 3,08-2,99 (m, 4Н).

¹³С ЯМР (75 МГц, CD3OD) δ 166,1, 160,9, 145,1, 140,3, 136,5 (q, J= 1,7 Гц), 136,7, 132,6, 126,7, 124,3, 120,2, 116,9 (q, J= 271 Гц), 108,7, 108,1, 102,8,50,1,44,9,43,8.

Соединение A-3I: трет-бутил-4-(3-((3-хлор-4-фторбензил)амино)-2-нитрофенил)пиперазин-1карбоксилат.

- 21 040709

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (1,1 г, 3,38 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (5 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (1,16 г, 8,45 ммоль) и 3-хлор-4-фторбензиламин (0,85 г, 5,4 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 24 ч при данной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодный солевой раствор (75 мл) и разбавляли водой (75 мл). Полученный осадок отфильтровывали, промывали водой, высушивали на воздухе и кристаллизовали из EtOH (99,9%, 10 мл) с получением продукта A-3I в виде желтоватого твердого вещества (0,5 г, выход 32%) с чистотой 93% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

Соединение A-4I: трет-бутил-4-(2-амино-3 -((3 -хлор-4-фторбензил)амино)фенил)пиперазин-1 -карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-3I (0,5 г, 1,07 ммоль) и EtOH (15 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (0,75 г, 4,37 ммоль) в воде (5 мл) в течение 1 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (20 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (20 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт A-4I получали в виде желтоватого масла (0,452 г) и применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение A-5I, соединение 9: 1-(3-хлор-4-фторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hбензо [d] имидазол.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-4I (0,240 г, 0,55 ммоль) и TFA (1,2 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (20 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x10 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Полученный неочищенный продукт очищали с применением колоночной хроматографии (нгексан/DCM/метанол/NH₃(_водн.) 4,0/5,0/1,0/0,02, об./об./об./об.) с получением конечного продукта A-5I, соединение 9, в виде желтого кристаллизующегося масла (200 мг, выход 90%) с чистотой 97,50% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 7,22-7,43 (m, 3Н), 7,09 (d,J= 7,69 Гц, 1H), 6,97 (ddd, J = 2,18, 4,68, 8,53 Гц, 1H), 6,67 (d, J= 7,69 Гц, 1H), 5,64 (s, 2H), 3,43-3,50 (m, 4H), 2,87-2,94 (m, 4H), протон NH не обна ружен.

¹³С ЯМР (75 МГц, DMSO-d₆) δ 158,7, 155,3 (d, J= 271 Гц), 145,1, 136,5 (q, J= 1,7 Гц), 134,5 (d, J = 3,6 Гц) 132,6, 128,9, 127,2 (d, J= 7,6 Гц), 121,2, 120,6 (q, J = 271 Гц), 117,9, 117,6, 108,4, 103,1, 50,5, 46,9, 45,9.

Соединение A-3J: трет-бутил-4-(3-((3,4-дифторбензил)амино)-2-нитрофенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (1,10 г, 3,38 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (5 мл). Затем добавляли высушенный K2CO3 (0,7 г, 5,07 ммоль) и 3,4-дифторбензиламин (0,64 г, 3,72 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 24 ч при данной температуре. По прошествии этого времени

- 22 040709 реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодный солевой раствор (75 мл) и разбавляли водой (75 мл). Полученный осадок отфильтровывали, промывали водой, высушивали на воздухе и кристаллизовали из EtOH (99,9%, 10 мл) с получением продукта A-3J в виде желтоватого твердого вещества (0,8 г, выход 53%) с чистотой 94,4% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

Соединение A-4J: трет-бутил-4-(2-амино-3-((3,4-дифторбензил)амино)фенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-3J (0,8 г, 1,78 ммоль) и EtOH (25 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем в течение 1 мин добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,24 г, 7,14 ммоль) в воде (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (15 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (15 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт A-4J получали в виде желтоватого масла (0,400 г) и применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение A-5J, соединение 10: 1-(3,4-дифторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hбензо [d] имидазол.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение A-4J (0,396 г, 1,0 ммоль) и TFA (2,0 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (30 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO4 и удаляли растворитель in vacuo. Полученный неочищенный продукт очищали с применением колоночной хроматографии (нгексан/DCM/метанол/NH₃(_водн) 4,0/5,0/1,0/0,02, об./об./об./об.) с получением конечного продукта A-5J, соединение 10, в виде желтого кристаллизующегося масла (350 мг, выход 88%) с чистотой 95,01% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 7,44-7,17 (m, 3Н), 7,17-7,09 (m, 1H), 6,88-6,77 (m, 1H), 6,71 (d,J= 7,7 Гц, 1Н), 5,64 (s, 2Н), 3,65-3,51 (m, 4н), 3,16-3,03 (m, 4Н), протоны NH не обнаружены.

¹³С ЯМР (75 МГц, DMSO-d6) δ 151,43 (dd, J= 248 Гц и 12,7 Гц), 148,16 (dd, J= 248 Гц и 12,8 Гц), 144,30, 137,4, 136,8 (q, J = 38,2 Гц), 134,19 (dd, J = 5,7, 3,6 Гц), 132,5, 127,2, 123,33 (q, J= 3,4 Гц), 119,7 (q, J= 271 Гц), 118,38 (d, J= 17,5 Гц), 116,10 (d,J= 18,0 Гц), 108,7, 103,8, 79,6, 48,8, 47,0, 44,7.

Соединение А-ЗК: трет-бутил-4-(3-((3,5-дихлорбензил)амино)-2-нитрофенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 50 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-2А (0,9 г, 2,76 ммоль) в атмосфере аргона и колбу заполняли сухим DMSO (5 мл). Затем добавляли высушенный K₂CO₃ (0,95 г, 6,9 ммоль) и 3,5-дихлорфторбензиламин (0,78 г, 4,43 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 24 ч при данной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодный солевой раствор (75 мл) и разбавляли водой (75 мл). Полученный осадок отфильтровывали, промывали водой, высушивали на воздухе и кристаллизовали из EtOH (99,9%, 10 мл) с получением продукта А-ЗК в виде желтоватого твердого вещества (0,97 г, выход 78%) с чистотой 95% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

- 23 040709

Соединение А-4К: трет-бутил-4-(2-амино-3-((3,5-дихлорбензил)амино)фенил)пиперазин-1-карбоксилат.

В колбу объемом 100 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-ЗК (0,97 г, 2,16 ммоль) и EtOH (30 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°С. Затем в течение 1 мин добавляли свежеприготовленный раствор дитионита натрия (1,5 г, 8,66 ммоль) в воде (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин при 80°С и затем ее охлаждали до комнатной температуры. Удаляли EtOH и добавляли AcOEt (20 мл). Фазы разделяли и водную фазу еще раз экстрагировали с помощью AcOEt (20 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Неочищенный продукт А-4К получали в виде желтоватого масла (0,890 г) и применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Соединение А-5К, соединение 11: 1-(3,5-дихлорбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hбензо [d] имидазол.

В колбу объемом 10 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, добавляли соединение А-4К (0,225 г, 0,538 ммоль) и TFA (1,0 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По прошествии этого времени анализ UPLCMS показал полное расходование субстрата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM (20 мл) и добавляли по каплям насыщенный раствор NaHCO₃ до достижения рН~8. Затем добавляли воду и DCM и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x10 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO4 и удаляли растворитель in vacuo. Полученный неочищенный продукт очищали с применением колоночной хроматографии (нгексан/DCM/метанол/NH₃(_водн) 4,0/5,0/1,0/0,02, об./об./об./об.) с получением конечного продукта А-5К, соединение 11, в виде желтого кристаллизующегося масла (180 мг, выход 78%) с чистотой 95% в соответствии с анализом UPLCMS (способ В).

1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 7,33-7,25 (m, 1H), 6,97 (dd, J= 0,6, 8,3 Гц, 1Н), 6,89-6,80 (m, 1Н), 6,776,72 (m, 1Н), 6,62 (dd, J = 2,2, 8,1 Гц, 2Н), 5,60 (s, 2Н), 3,56-3,49 (m, 5Н), 3,08 (dd, J=4,1, 5,9 Гц, 5Н), протоны NH не обнаружены.

¹³С ЯМР (75 МГц, CD3OD) δ 145,4, 137,3, 136,0 (q, J= 1,7 Гц), 133,6, 132,4, 131,1, 129,1, 129,0, 127,1, 126,6, 126,3, 119,0 (q, J= 271 Гц), 108,2, 102,1,51,7,46,3,45,1.

В. Соединения на основе индольного ядра.

Соединение В-2: N-(3-бром-2-метилфенил)-2,2,2-трифторацетамид.

В колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки и заполненную 150 мл DCM, добавляли 12,1 г (65 ммоль) 3-бром-2-метиланилина. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли 16 мл (200 ммоль) пиридина с последующим добавлением по каплям 23 мл (165 ммоль) ангидрида трифторуксусной кислоты при данной температуре. После добавления реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при температуре <5°С и в течение 2,5 ч при к.т. По прошествии этого времени реакцию гасили с помощью 50 мл NH₄Cl _насыщ и разбавляли с помощью 50 мл воды. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x100 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и растворитель удаляли in vacuo. В результате продукт получали в виде белого твердого вещества (14,7 г, выход 80%) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение В-3: N-[3-бром-2-(бромметил)фенил]-2,2,2-трифторацетамид.

- 24 040709

Колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, холодильником и освещенную лампой мощностью в 100 Вт, заполняли с помощью 120 мл CCl4, 8,1 г (29 ммоль) В-2 и 0,38 г бензоилпероксида. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником и добавляли несколькими порциями 2,1 мл брома в 10 мл CCl₄ с помощью шприца. После добавления реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи. На следующий день TLC показала нехватку субстрата. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли с помощью 120 мл DCM и выливали в 100 мл 2М раствора тиосульфата натрия. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x60 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором и растворитель удаляли in vacuo. Остаток разбавляли смесью DCM:гексан 1:3, и продукт осаждался в виде белого твердого вещества, 9,1 г, выход 88%.

Соединение В-4: 4-бром-2-(трифторметил)-Ш-индол.

Колбу объемом 500 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, заполняли с помощью 200 мл сухого толуола и 20,1 г (56 ммоль) субстрата В-3. После этого добавляли 15,9 г (61 ммоль) РРН₃. Затем реакционную смесь нагревали до 60°С и перемешивали в течение 2 ч. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали <5°С и белое твердое вещество фильтровали, промывали с помощью Et₂O и быстро высушивали в потоке воздуха. Затем твердое вещество нагревали с обратным холодильником с 250 мл DMF в течение ночи - анализ UPLC показал завершение реакции. Растворитель выпаривали, остаток разбавляли с помощью 50 мл водн. раствора NaHCO₃ и 3 раза экстрагировали с помощью 50 мл этилацетата. Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Необработанный продукт подвергали хроматографии со смесью этилацетат:гексан 3:7 с получением 13,5 г маслянистого продукта, выход 92%.

Соединение В-5: 1-бензил-4-бром-2-(трифторметил)-Ш-индол.

Колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, заполняли с помощью 80 мл сухого DMF и 13,1 г (0,05 моль) субстрата В-4. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°С и осторожно добавляли 2,4 г (0,06 моль) гидрида натрия (60% в масле). Через 10 мин после добавления добавляли по каплям 5,95 мл (0,05 моль) бензилбромида при данной температуре (0°С). После добавления всех реагентов реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч при температуре <5°С и в течение 2,5 ч при к.т. По прошествии этого времени реакцию гасили с помощью 5 мл воды и выпаривали. Остаток разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали с помощью DCM (3x70 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄ и выпаривали. Продукт получали в виде белого твердого вещества (17,5 г, выход ~100%) и применяли на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Соединение В-6А: 1 -бензил-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол.

Сухую колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, осушительной трубкой с CaCl₂ и холодильником, заполняли с помощью 150 мл сухого диоксана, 17,9 г (50 ммоль, 1 экв.) субстрата В-5, 5,64 мл (1 экв.) метилпиперазина, 1,4 г (0,03 экв.) Pd₂(dba)₃ и 33,6 г (2 экв.) Cs₂CO₃. Колбу тщательно продували с помощью аргона. После этого добавляли 2,24 г (0,07 экв.) BINAP и реакционную смесь нагревали до 100°С и перемешивали в течение ночи. На следующий день реакционную смесь охлаждали,

- 25 040709 выливали в 200 мл воды, фильтровали через целит и экстрагировали с помощью DCM (3x100 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток подвергали хроматографии со смесью DCM:MeOH:NH₃ (500:19:1) с получением 14 г маслянистого продукта В-6А, выход 75%.

Соединение В -6В: трет-бутил-4-[1 -бензил-2-(трифторметил)-1 Н-индол-4-ил] пиперазин-1 -карбоксилат.

Получали соединение В-6В, начиная с В-5 (7,1 г, 20 ммоль), в соответствии с такой же методикой, как и для соединения В-6А, с использованием N-BOC-пиперазина вместо метилпиперазина. После очистки получали 8,7 г соединения В-6В в виде светло-коричневого твердого вещества (выход 66%).

Соединение В-7А: 4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол.

Колбу объемом 500 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, заполняли с помощью 70 мл сухого DMSO и 14 г (37,5 ммоль) субстрата В-6А. Затем реакционную смесь охлаждали до 10°С и добавляли по каплям 160 мл (160 ммоль, 4,6 экв.) 1М t-BuOK в THF. Реакционную смесь охлаждали до приблизительно 2°С и барботировали кислород через реакционную смесь с помощью стеклянной трубки, пока не наблюдали полное расходование субстрата (приблизительно 5 ч, температуру реакции поддерживали приблизительно 5°С). По прошествии этого времени реакционную смесь выливали в воду со льдом (200 мл) и экстрагировали с помощью этилацетата (3x100 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и растворитель выпаривали. Остаток подвергали хроматографии со смесью DCM:MeOH (95:5) с получением 6,5 г продукта В-7А, выход 61%.

Соединение В-7В: трет-бутил-4-[2-(трифторметил)-1H-индол-4-ил]пиперазин-1-карбоксилат.

Колбу объемом 250 мл, оснащенную якорем магнитной мешалки, заполняли с помощью 120 мл сухого THF, 45 мл сухого DMSO и 5,3 г (11,5 ммоль) субстрата В-6В. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли 12 г (107 ммоль, 10 экв.) t-BuOK. После этого барботировали кислород через реакционную смесь с помощью стеклянной трубки, пока не наблюдали полное расходование субстрата (обычно 2-4 ч, температуру реакции поддерживали на уровне приблизительно 5°С). По прошествии этого времени реакционную смесь выливали в воду со льдом (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x70 мл). Объединенные органические фазы промывали водой, солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и растворитель выпаривали. Остаток подвергали хроматографии со смесью AcOEt:гексан (1:9) с получением 3,8 г продукта В-7В, выход 90%.

Общая процедура А для получения соединений В-8.

В высушенную и заполненную инертным газом колбу добавляли индол В-7 (1 экв.) и сухой DMF (0,1 М) и реакционную смесь охлаждали до 0°С. Добавляли гидрид натрия (60% в минеральном масле) (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин при 0-5°С и 1 ч при комнатной температуре. По прошествии этого времени реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли по каплям производное бензила (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного расходования исходного материала. Добавляли DCM и воду и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (3x10 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, высушивали над

- 26 040709

Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии.

Соединение В-8В, соединение 13: 1-(3,4-дихлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол.

Продукт В-8В, соединение 13, получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7А (50 мг, 0,17 ммоль), в виде светло-коричневого масла (29 мг, выход 37%, чистота 97,72% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение В-8С, соединение 14: 1-(4-хлор-3-фторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол.

Продукт В-8С, соединение 14, получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7А (50 мг, 0,17 ммоль), в виде светло-коричневого масла (37 мг, выход 49%, чистота 96,5% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-8D: трет-бутил-4-[1-(тиазол-2-илметил)-2-(трифторметил)индол-4-ил]пиперазин-1карбоксилат.

Продукт B-8D получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (63 мг, 0,17 ммоль), в виде светло-коричневого масла (36 мг, выход 45%).

Соединение В-8Е: трет-бутил-4-[1-[(4-хлор-3-фторфенил)метил]-2-(трифторметил)индол-4-ил]пиперазин-1-карбоксилат.

- 27 040709

Продукт В-8Е получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (63 мг, 0,17 ммоль), в виде светло-коричневого масла (46 мг, выход 53%).

Соединение B-8F: трет-бутил-4-[1-(фуран-2-илметил)-2-(трифторметил)-1H-индол-4-ил]пиперазин1-карбоксилат.

Гидрид натрия (22 мг, 60% в минеральном масле, 0,54 ммоль) добавляли в раствор В-7В (200 мг, 0,54 ммоль) в сухом DMF в атмосфере аргона при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и затем добавляли 2-(бромметил)фуран (105 мг, 0,65 ммоль). Через 1 ч добавляли следующие порции гидрида натрия (22 мг, 60% в минеральном масле, 0,54 ммоль) и 2(бромметил)фурана (31 мг, 0,19 ммоль) и обеспечивали продолжение реакции в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали с помощью DCM (2x20 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (AcOEt/гексан, 7/93 об./об.). В результате конечный продукт B-8F получали в виде серого твердого вещества (170 мг, выход 70%).

Соединение B-8G: 1-(3-метоксибензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол.

Продукт B-8G получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7А (100 мг, 0,35 ммоль), в виде светло-коричневого масла (89 мг, выход 63%, чистота 96% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение В-8Н, соединение 19: 1-(3-фторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол.

Продукт В-8Н, соединение 19, получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (100 мг, 0,27 ммоль), с последующим удалением защитной ВОС-группы с помощью 200 мкл TFA в 1 мл DCM при к.т. с получением 58 мг твердого вещества, выход 57%, чистота 99% в соответствии с анализом UP- 28 040709

LCMS.

Соединение В-81: трет-бутил-4-[1-(3-хлорбензил)-2-(трифторметил)-1Н-индол-4-ил]пиперазин-1карбоксилат.

Продукт В-81 получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (150 мг, 0,41 ммоль), в виде желтого масла (190 мг, выход 94%, чистота 98,5% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-8J, соединение 21: 1-(фуран-2-илметил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол.

Гидрид натрия (16 мг, 60% в минеральном масле, 0,40 ммоль) добавляли в раствор В-7А (100 мг, 0,37 ммоль) в сухом DMF в атмосфере аргона при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и затем добавляли 2-(бромметил)фуран (64 мг, 0,40 ммоль). Через 18 ч добавляли следующие порции гидрида натрия (16 мг, 60% в минеральном масле, 0,40 ммоль) и 2(бромметил)фурана (64 мг, 0,40 ммоль) и обеспечивали продолжение реакции в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали с помощью этилацетата (2x20 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄ и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (DCM/MeOH/NH_{3 водн}, 98/2/0,5 об./об./об.) и далее посредством препаративной HPLC. В результате конечный продукт B-8J, соединение 21, получали в виде светло-желтого масла (22 мг, 16%, чистота 99,7% в соответствии с анализом UPLCMS).

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 7,55 (m, 1H), 7,32 (d, J = 8,4 Гц, 1H), 7,24 (dd, J = 8,2, 7,8 Гц, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,61 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 6,38 (m, 2H), 5,46 (s, 2H), 3,12 (m, 4H), 2,54 (m, 4H), 2,25 (s, 3Н).

Соединение B-8K, соединение 22: 1-(3,4-дифторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол.

Продукт В-8К, соединение 22, получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7А (100 мг, 0,37 ммоль). Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (DCM/MeOHNH_{3 водн}, 98/2/0,5 об./об./об.) и далее посредством препаративной TLC. В результате конечный продукт получали в виде светло-желтого масла (40 мг, выход 13%, чистота 94,7% в соответствии с анализом UPLCMS).

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 7,34 (m, 1H), 7,21 (dd, J= 8,5, 7,6 Гц, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,08 (d, J= 8,4 Гц, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,66 (m, 1H), 6,62 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 5,54 (s, 2H), 3,17 (m, 4H), 2,56 (m, 4H), 2,26 (s, 3Н).

Соединение B-8L: трет-бутил-4-[1-(3-метоксибензил)-2-(трифторметил)-1Н-индол-4-ил]пиперазин- 29 040709

-карбоксилат.

Продукт B-8L получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (150 мг, 0,41 ммоль), в виде желтого масла (180 мг, выход 90%, чистота 99,5% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение В-8М: 1-(3-фторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Н-индол.

Продукт В-8М получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7А (100 мг, 0,35 ммоль), в виде светло-коричневого масла (97 мг, выход 71%, чистота 96% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-8N: трет-бутил-4-[1 -(3,4-дифторбензил)-2-(трифторметил)-1 H-индол-4-ил]пиперазин-1 карбоксилат.

Продукт B-8N получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (200 мг, 0,54 ммоль), в виде бесцветного масла (210 мг, выход 78%).

Соединение В-8Р: 1-(3-хлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол.

Продукт В-8Р получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7А (100 мг, 0,35 ммоль), в виде светло-желтого масла (74 мг, выход 52%, чистота 98% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-8S: трет-бутил-4-[1-(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)-Ш-индол-4-ил]пиперазин-1карбоксилат.

- 30 040709

Соединение B-8S получали с применением общей процедуры А (вместо бромида применяли мезилат, 1,5 экв., 16 ч при 60°С), начиная с В-7В (507 мг, 1,37 ммоль), в виде светло-коричневого твердого вещества (420 мг, выход 65%, чистота 95% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение В-8Т: трет-бутил-4-[1-(тиофен-3-илметил)-2-(трифторметил)-Ш-индол-4-ил]пиперазин1-карбоксилат.

Соединение В-8Т получали с применением общей процедуры А (вместо бромида применяли мезилат, 3 экв., 16 ч при 60°С), начиная с В-7В (500 мг, 1,35 ммоль), в виде светло-коричневого твердого вещества (250 мг, выход 40%, чистота 95% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-8V, соединение 34: 4-(4-метилпиперазин-1-ил)-1-[(5-метил-1,3-тиазол-2-ил)метил]-2(трифторметил)-1H-индол.

Соединение B-8V, соединение 34, получали с применением общей процедуры А, начиная с В-7В (142 мг, 0,5 ммоль), в виде аморфного твердого вещества (120 мг, выход 61%, чистота 99,7% в соответствии с анализом UPLCMS).

Общая процедура В для получения соединений В-8 и В-9.

В высушенную и заполненную инертным газом колбу добавляли индол В-7 (1 экв.) и сухой THF (0,1 М) и реакционную смесь охлаждали до 0°С. Добавляли (5-метил-2-фурил)метанол (2 экв.), трифенилфосфин (1,5 экв.) и DIAD (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин при 0-5°С и 1 ч при комнатной температуре. Добавляли DCM и воду и фазы разделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM (3x10 мл) и объединенные органические фазы промывали водой, высушивали над Na₂SO₄ и удаляли растворитель in vacuo. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии и препаративной HPLC.

Соединение B-9Q, соединение 28: 1-[(5-метилфуран-2-ил)метил]-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол.

Соединение B-9Q, соединение 28, получали с применением общей процедуры В, начиная с В-7В (184 мг, 0,5 ммоль) с последующим удалением защитной ВОС-группы с помощью 200 мкл TFA в 1 мл

- 31 040709

DCM при к.т., в виде аморфного твердого вещества (16 мг, выход 9%, чистота 99% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-9R, соединение 29: 1-[(5-метилтиофен-2-ил)метил]-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол.

Соединение B-9R, соединение 29, получали с применением общей процедуры В, начиная с В-7В (184 мг, 0,5 ммоль) с последующим удалением защитной ВОС-группы с помощью 400 мкл TFA в 4 мл DCM при к.т., в виде светло-коричневого твердого вещества (22 мг, выход 12%, чистота 96,6% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-9F, соединение 17: 1-(фуран-2-илметил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hиндол.

Трифторуксусную кислоту (2 мл) добавляли в перемешиваемый раствор соединения B-8F (170 мг, 0,38 ммоль) в 5 мл DCM при 0°С. Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем ее концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в 30 мл DCM, промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (2x20 мл), солевым раствором (20 мл) и высушивали над MgSO₄. Растворитель удаляли in vacuo и неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (DCM/MeOH/NH_{3 водн}, 95/5/0,5 об./об./об.). В результате конечный продукт B-9F, соединение 17, получали в виде светложелтого масла (41 мг, выход 31%, чистота 98,9% в соответствии с анализом UPLCMS).

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7,58 (m, 1H), 7,35 (d, J = 8,4 Гц, 1H), 7,27 (dd, J = 8,2, 7,8 Гц, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,63 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 6,41 (m, 2H), 5,50 (s, 2H), 3,07 (m, 4H), 2,95 (m, 4H).

Соединение B-9N, соединение 25: 1-(3,4-дифторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Hиндол.

М раствор HCl в диоксане (1,0 мл) добавляли по каплям к перемешиваемому раствору B-8N (105 мг, 0,26 ммоль) в 3 мл THF. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем добавляли 2 мл Et₂O и реакционную смесь перемешивали дополнительно в течение 0,5 ч. Белое твердое вещество фильтровали, промывали с помощью Et₂O (2x5 мл) и высушивали в вакууме. Твердое вещество суспендировали в 20 мл AcOEt, добавляли 1 М NaOH (10 мл) и смесь тщательно перемешивали в течение 10 мин. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью солевого раствора и высушивали над MgSO4. Растворитель удаляли in vacuo и неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (DCM/MeOH/NH_{3 водн}, 93/7/0,5 об./об./об.). В результате конечный продукт B-9N, соединение 25, получали в виде светло-желтого масла (40 мг, выход 39%, чистота 96,7% в соответствии с анализом UPLCMS).

- 32 040709 ¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,21 (m, 1H), 7,09-7,04 (m, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,85 (d, J = 8,3 Гц, 1H), 6,816,73 (m, 2H), 6,67 (d, J= 7,7 Гц, 1H), 5,39 (s, 2H), 3,31 (m, 4H), 3,23 (m, 4Н).

Общая процедура С для получения соединений В-9.

В колбу объемом 25 мл добавляли соединение В-8 с последующим добавлением THF (5 мл) и 4 М HCl в диоксане (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного расходования исходного материала, затем добавляли 10 мл Et₂O и реакционную смесь дополнительно перемешивали в течение 0,5 ч. Белое твердое вещество фильтровали, промывали с помощью Et₂O (2x10 мл) и высушивали в вакууме.

Соединение B-9D, соединение 15: 4-(пиперазин-1-ил)-1-(1,3-тиазол-2-илметил)-2-(трифторметил)1Н-индол в форме гидрохлоридной соли.

н хНС1

Продукт B-9D, соединение 15 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С, начиная с B-8D (36 мг, 0,08 ммоль), в виде белого твердого вещества (19 мг, выход 61%, чистота 99% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение В-9Е, соединение 16: 1-(4-хлор-3-фторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол в форме гидрохлоридной соли.

Продукт В-9Е, соединение 16 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С, начиная с В-8Е (46 мг, 0,09 ммоль), в виде белого твердого вещества (9 мг, выход 22%, чистота 98% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-9G, соединение 18: 1-(3-метоксибензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол в форме гидрохлоридной соли.

Продукт B-9G, соединение 18 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С, начиная с B-8G (89 мг, 0,22 ммоль), в виде белого твердого вещества (92 мг, выход 92%, чистота 99,5% в соответствии с анализом UPLCMS).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 11,22 (br s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,26-7,11 (m, 3H), 6,81 (dd, J= 8,1, 2,5 Гц, 1H), 6,69 (d, J= 7,5 Гц, 1H), 6,54 (m, 1H), 6,45 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 5,52 (s, 2Н), 3,71 (d, J= 12,7 Гц, 2Н), 3,51 (d, J= 11,8 Гц, 2Н), 3,38-3,27 (m, 2H), 3,27-3,17 (m, 2Н), 2,84 (d, J=4,7 Гц, 3Н).

Соединение B-9I, соединение 20: 1-(3-хлорбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1Н-индол в форме гидрохлоридной соли.

- 33 040709

Продукт B-9I, соединение 20 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С (2,5 мл 4 M HCl в течение 24 ч), начиная с B-8I (190 мг, 0,39 ммоль), в виде белого твердого вещества (137 мг, выход 82%, чистота 97,8% в соответствии с анализом UPLCMS).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-dg) δ 9,55 (br s, 2Н), 7,38 (s, 1Н), 7,34-7,29 (m, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,18 (d, J= 8,4 Гц, 1H), 7,04 (d, J= 2,0 Гц, 1H), 6,82 (ddd, J= 5,8, 3,0, 1,9 Гц, 1H), 6,71 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 5,59 (s, 2H), 3,46-3,25 (m, 8H).

Соединение B-9L, соединение 23: индол в форме гидрохлоридной соли.

1-(3 -метоксибензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)- 1H-

Продукт B-9L, соединение 23 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С (2,5 мл 4M HCl в течение 24 ч), начиная с B-8L (180 мг, 0,37 ммоль), в виде белого твердого вещества (126 мг, выход 81%, чистота 98,7% в соответствии с анализом UPLCMS).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,53 (br s, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,25-7,12 (m, 3Н), 6,81 (dd, J = 8,0, 2,5 Гц, 1H), 6,69 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 6,54 (br s, 1H), 6,45 (d, J= 7,6 Гц, 1H), 5,52 (s, 2Н), 3,67 (s, 3Н), 3,40 (m, 4H), 3,32 (m, 4H).

Соединение В-9М, соединение 24: 1-[(3-фторфенил)метил]-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-Ш-индол в форме гидрохлоридной соли.

Продукт В-9М, соединение 24 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С, начиная с В-8М (97 мг, 0,25 ммоль), в виде белого твердого вещества (102 мг, выход 92%, чистота 99,2% в соответствии с анализом UPLCMS).

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-dg) δ 11,30 (br s, 1H), 7,37-7,28 (m, 2H), 7,28-7,21 (m, 1H), 7,18 (d, J= 8,5 Гц, 1H), 7,08 (td, J= 8,7, 2,6 Гц, 1H), 6,77 (dt, J= 10,1, 2,0 Гц, 1H), 6,71 (dd, J = 7,9, 5,8 Гц, 2Н), 5,59 (s, 2Н), 3,72 (d,J= 12,5 Гц, 2Н), 3,52 (d,J= 11,7 Гц, 2Н), 3,39-3,19 (m, 4H), 2,84 (d, J= 4,7 Гц, 3Н).

Соединение В-9Р, соединение 27: 1-(3-хлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)1Н-индол в форме гидрохлоридной соли.

- 34 040709

Продукт В-9Р, соединение 27 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры С, начиная с В-8Р (74 мг, 0,18 ммоль), в виде белого твердого вещества (80 мг, выход 99%, чистота 97,95% в соответствии с анализом UPLCMS).

¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 11,39 (br s, 1H), 7,35-7,29 (m, 3Н), 7,28-7,23 (m, 1H), 7,18 (d, J= 8,4 Гц, 1H), 7,04 (q, J= 1,3 Гц, 1H), 6,82 (ddd, J= 5,6, 3,5, 1,7 Гц, 1H), 6,71 (d, J = 7,6 Гц, 1H), 5,59 (s, 2Н), 3,763,68 (m, 2Н), 3,52 (d, J = 11,7 Гц, 2Н), 3,39-3,19 (m, 4H), 2,84 (d,J=4,7 Гц, 3H).

Общая процедура D для получения соединений В-9.

В колбу объемом 25 мл добавляли соединение В-8 с последующим добавлением диоксана (10 мл) и концентрированной HCl (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 10 мин. Растворитель выпаривали и остаток перекристаллизовывали из i-PrOH. Твердое вещество фильтровали, промывали с помощью i-PrOH (2x5 мл) и высушивали в вакууме.

Соединение B-9S, соединение 30: 4-(пиперазин-1-ил)-1-(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)-IHиндол в форме гидрохлоридной соли.

Продукт B-9S, соединение 30 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры D, начиная с B-8S (420 мг, 0,90 ммоль), в виде светло-коричневого твердого вещества (180 мг, выход 40%, чистота 95% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение В-9Т, соединение 31: 4-(пиперазин-1-ил)-1-(тиофен-3-илметил)-2-(трифторметил)-Шиндол в форме гидрохлоридной соли.

Продукт В-9Т, соединение 31 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением общей процедуры D, начиная с В-8Т (250 мг, 0,54 ммоль), в виде светло-коричневого твердого вещества (130 мг, выход 48%, чистота 96,7% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-9U, соединение 32: 4-(4-метилпиперазин-1-ил)-1-(тиофен-3-илметил)-2(трифторметил)-1H-индол в форме гидрохлоридной соли.

- 35 040709

В круглодонную колбу добавляли соединение В-9Т (250 мг, 0,62 ммоль) с последующим добавлением МеОН (5,5 мл), АсОН (40 мкл) и формальдегида (600 мкл, 37% водный раствор). Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 0,5 ч и по прошествии этого времени все растворители выпаривали. Остаток растворяли в диоксане (10 мл) и концентрированной HCl (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 10 мин. Растворитель выпаривали и остаток перекристаллизовывали из iPrOH. Твердое вещество фильтровали, промывали с помощью i-PrOH (2x5 мл) и высушивали в вакууме. В результате получали соединение B-9U, соединение 32 в форме гидрохлоридной соли, в виде светлокоричневого твердого вещества (48 мг, выход 19%, чистота 95% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединение B-9W, соединение 33: 4-(4-метилпиперазин-1-ил)-1-(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)1Н-индол в форме гидрохлоридной соли.

Продукт B-9W, соединение 33 в форме гидрохлоридной соли, получали с применением такого же количества реагентов, как и для соединения B-9U. В результате получали продукт B-9W, соединение 33, начиная с B-9S (65 мг, 0,16 ммоль), в виде светло-коричневого твердого вещества (39 мг, выход 59%, чистота 99% в соответствии с анализом UPLCMS).

Соединения в следующих примерах были синтезированы в соответствии с описанными в данном документе процедурами или способами, известными из литературы, с применением подходящих исходных материалов и способов, известных специалисту в данной области техники.

ADN	№ соед.	Структура	Название	Аналитические данные
4174	1	н ό L 1 %^CFad	1 -бензил-4-(пиперазин-1 ил)-2-(трифторметил)- 1Hбензимидазол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,24%, 361,2 [М+Н]⁺, время удерживания: 2,08 мин.;

- 36 040709

4182	2	ό \|Χ Αχ ί X %^CFs	1-бенз ил-4-(4метилпиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)-1Нбензимидазол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 98,09%, 375,2 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,69 мин.;
4183	3	Yoh 0 Ν ί X	2-{4-[1-бензил-2- (трифторметил)- 1Нбензимидазол-4ил] пиперазин-1 -ил} этанол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 96,95%, 405,3 [М+Н]⁺, время удерживания: 1,78 мин.;
4281	4	Η Λ Ν ί X %^cf= д	1-(фуран-2-илметил)-4(пиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)- 1Нбензимидазол	Способ А (анализ в основном градиенте): 97,34%, 350,8 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,55 мин.;
4282	5	Η ό ^\|Χ хД-N ( X %^CF3 ΧΧ'Ν X	1 - [(5 -метил фуран-2ил)метил] -4-(пиперазин-1 ил)-2-(трифторметил)-1Нбензимидазол	Способ А (анализ в основном градиенте): 96,72%, 364,7 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,86 мин.;

- 37 040709

4185	6	Η 0 Ν СХгсд Cl	1 -(3-хлорбензил)-4(пиперазин- 1-ил)-2(трифтор метил)- Шбензимидазол*	Способ В (UPLC-MS): 100%, 395,1 [М+Н]⁺, время удерживания: 5,29 мин.;
4189	7	H ύ N L X>^CF3 d F	1 -(3-фторбензил)-4(пиперазин- 1-ил)-2(трифтор метил)-Шбензимидазол*	Способ В (UPLC-MS): 98,84%, 379,1 [М+Н]⁺, время удерживания: 4,92 мин.;
4209	8	H ό N tt J %^CF3 о ^CI CI	1 -(3,4-дихлорбензил)-4(пиперазин- 1-ил)-2(трифтор метил)- Шбензо[б]имидазол	Способ В (UPLC-MS): 93,00%, 428,99 [М+Н]⁺, время удерживания: 5,82 мин.;
4202	9	H 0 У I /^^С\|=з A Cl	1 -(3 -хлор -4- фторбензил) -4(пиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)- Шбензо[б]имидазол	Способ В (UPLC-MS): 97,50%, 413,04 [М+Н]⁺, время удерживания: 5,39 мин.;

- 38 040709

4203	10	Η ό Ν .4	1 -(3,4-дифторбензил)-4(пиперазин- Гил)-2(трифторметил)- Шбензо[с!]имидазол	Способ В (UPLC-MS): 95,01%, 397,09 [М+Н]⁺, время удерживания: 5,01 мин.;
4206	11	Η Ν β Λ ‘Ύ CI	1-(3,5 -дихлорбензил)-4(пиперазин- Гил)-2(трифторметил)- Шбензо[б]имидазол	Способ В (UPLC-MS): 95,00%, 428,99 [М+Н]⁺, время удерживания: 5,80 мин.;
4177	12	Η ύ Ν Q>^cf3 Α	1 -бензил-4-(пиперазин-1 ил)-2-(трифтор метил)- \Ниндол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 97%, 359,4 [М+Н]⁺, время удерживания: 2,21 мин.;
4227	13	C И?^з Ν CI	1 - (3,4-д их лор бензил)-4- (4метилпиперазин-1-ил)-2(трифторметил)- Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 97,72%, 443,6 [М+Н]⁺, время удерживания: 4,249 мин.;

- 39 040709

4228	14	ό ГТ чУ Cl	1-(4-хлор-3-фторбензил)-4(4-метилпиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)- Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 96,14%, 425,8[М+Н]⁺, время удерживания: 4,165 мин.;
4229	15	Η ό ΙΨ ГТУ^ср ₃ Й Λ^Ν	4-(пиперазин-1 -ил)-1-(1,3тиазол-2-илметил)-2(трифторметил)- Ш-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,23%, 366,8\|М+Н]⁺, время удерживания: 3,063 мин.;
4230	16	CO Ο ^хО^”Йо	1-(4-хлор-3-фторбензил)-4(пиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)- Ш-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,57%, 411,8[М+Н]⁺, время удерживания: 3,954 мин.;
4231	17	Η ύ ГГ ОЙ>^СРз	1-(фуран-2-илметил)-4(пиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)- Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 98,90%, 349,8 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,54 мин.;

- 40 040709

4232	18	ό IT ГХА^срз \ /А	1-(3-метоксибензил)-4-(4метилпиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)- Ш-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,5%, 403,52 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,96 мин.;
4233	19	Η ό CXV^s UT'N ^F~0	1 -(3-фторбензил)-4(пиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)- Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 98,97%, 378,18 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,744 мин.;
4234	20	Η 0 N^Z ГхА^Срз A	1 -(3-хлорбензил)-4(пиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)-1 Н-индол*	Способ А(анализ в основном градиенте): 97,8%, 393,83 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,91 мин.;

- 41 040709

4235	21	co о	1 -(фуран-2- ил метил) -4-(4метилпиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)-Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,70%, 364,3 [М+Н]+, время удерживания: 3,79 мин.;
4240	22	Ύ О со	1 -(3,4-дифторбензил )-4-(4метилпиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)-Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 94,70%, 409,8 [М+Н]⁺, время удерживания: 4,00 мин.;
4241	23	н ύ [ΧΎ \ Y °~w	1-(3-метоксибензил)-4(пиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)- 1Н-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 98,7%, 389,41 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,73 мин.;

-42040709

4242	24	О	1-(3-фторбензил)-4-(4метилпиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)- 1Н-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,2%, 391,41 [М+Н]⁺, время удерживания: 6,51 мин.;
4243	25	Η ύ Ν^Ζ F	Г(3,4-дифторбензил )-4(пиперазин-1 -ил)-2(трифторметил)-1Н- индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 96,75%, 395,9 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,75 мин.;
4244	26	CL^ О	1-бензил-4-(4метилпиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)-Ш-индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,6%, 374,98 [М+Н]⁺, время удерживания: 4,011 мин.;
4245	27	ύ ГГ fXVcF₃ °Ώ	1-(3-хлорбензил)-4-(4метилпиперазин- 1-ил)-2(трифторметил)- Ш-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 97,95%, 407,86 [М+Н]⁺, время удерживания: 4,10 мин.;

- 43 040709

4250	28	Η ό Ν д/	1 - [(5 -метилфуран-2ил) метил] -4-(пиперазин-1 ил)-2-(трифторметил)- 1Ниндол	Способ А (анализ в основном градиенте): 99%, 363,91 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,849 мин.;
4251	29	ο	1 - [(5 -метилтиоф ен-2ил) метил] -4-(пиперазин-1 ил)-2-(трифторметил)- Шиндол	Способ А (анализ в основном градиенте): 96,65%, 380,30 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,934 мин.;
4252	30	ο	4-(пиперазин-1-ил)-1- (тиофен-2-илметил)-2(трифторметил)-1 Н-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 95%, 365,57 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,74 мин.;
4253	31	ο	4-(пиперазин-1-ил)-1- (тиофен-3-илметил)-2(трифторметил)- 1Н-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 96,5%, 365,82 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,75 мин.;

- 44 040709

4254	32	п О	4-(4-метилпиперазин-1 -ил)1-(тиофен-3-илметил)-2(трифторметил)- 1Н-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 95%, 379,86 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,99 мин.;
4255	33	п О	4-(4-метилпиперазин-1 -ил)1-(тиофен-2-илметил)-2(трифторметил)- 1Н-индол*	Способ А (анализ в основном градиенте): 98,5%, 379,51 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,98 мин.;
4288	34	К QO- О ω	4-(4-метилпиперазин-1 -ил)1 - [(5 - метил- 1,3 -тиазол-2ил)метил]-2(трифторметил)- 1Н- индол	Способ А (анализ в основном градиенте): 99,7%, 395,4 [М+Н]⁺, время удерживания: 3,738 мин.;
*Соединения, полученные в	юрме гидрохлоридной соли

Биологические примеры

Биологический пример 1. Анализы на связывание рецептора.

Приготовление растворов тестируемого и эталонного соединений. Готовили 1 мМ исходные растворы тестируемых соединений в DMSO. Последовательные разведения соединений проводили в 96луночном микропланшете в аналитических буферах с применением автоматической системы пипетирования epMotion 5070 (Eppendorf). Каждое соединение тестировали в 10 концентрациях от 1,0Е-6 до 1,0Е11 М (конечная концентрация).

Анализ на связывание рецептора 5-НТ2А.

Связывание радиолиганда проводили с применением мембран из клеток CHO-K1, стабильно трансфицированных рецептором 5-НТ2А человека (PerkinElmer). Все анализы проводили в двух повторностях. 50 мкл рабочего раствора тестируемых соединений, 50 мкл [3Н]-кетансерина (конечная концентрация 1 нМ) и 150 мкл разбавленных мембран (7 мкг белка на лунку), приготовленных в аналитическом буфере (50 мМ трис, рН 7,4, 4 мМ CaCl₂, 0,1% аскорбиновой кислоты), переносили в полипропиленовый 96луночный микропланшет с применением 96-луночной станции пипетирования Rainin Liquidator (MettlerToledo). Для определения неспецифического связывания применяли Миансерин (10 мкМ). Микропланшет покрывали герметизирующей лентой, перемешивали и инкубировали в течение 60 мин при 27°С. Реакцию останавливали быстрой фильтрацией через предварительно пропитанный 0,5% полиэтиленимином фильтровальный мат GF/B в течение 30 мин. Проводили десять быстрых промывок с помощью 200 мкл 50 мМ трис-буфера (4°С, рН 7,4) с применением системы автоматизированного коллектора Harvester-96 MACH III FM (Tomtec). Фильтровальные маты высушивали при 37°С в инкубаторе с нагнетаемым с помощью вентилятора потоком воздуха и затем твердый сцинтиллятор MeltiLex плавили на фильтровальных матах при 90°С в течение 5 мин. Показатели радиоактивности считывали в сцинцилляционном счетчике MicroBeta2 (PerkinElmer). Аппроксимацию данных проводили по уравнению односайтового связывания с подбором кривой с помощью Prism 6 (программное обеспечение GraphPad) и значения Ki оценивали согласно уравнению Ченга-Прусоффа.

- 45 040709

Анализ на связывание рецептора 5-НТ6.

Связывание радиолиганда проводили с применением мембран из клеток CHO-K1, стабильно трансфицированных рецептором 5-НТ6 человека (PerkinElmer). Все анализы проводили в двух повторностях. 50 мкл рабочего раствора тестируемых соединений, 50 мкл [3H]-LSD (конечная концентрация 1 нМ) и 150 мкл разбавленных мембран (8 мкг белка на лунку), приготовленных в аналитическом буфере (50 мМ трис, рН 7,4, 10 мМ MgCl2, 0,1 мМ EDTA), переносили в полипропиленовый 96-луночный микропланшет с применением 96-луночной станции пипетирования Rainin Liquidator (MettlerToledo). Для определения неспецифического связывания применяли метиотепин (10 мкМ). Микропланшет покрывали герметизирующей лентой, перемешивали и инкубировали в течение 60 мин при 37°С. Реакцию останавливали быстрой фильтрацией через предварительно пропитанный 0,5% полиэтиленимином фильтровальный мат GF/A в течение 30 мин. Проводили десять быстрых промывок с помощью 200 мкл 50 мМ трис-буфера (4°С, рН 7,4) с применением системы автоматизированного коллектора Harvester-96 MACH III FM (Tomtec). Фильтровальные маты высушивали при 37°С в инкубаторе с нагнетаемым с помощью вентилятора потоком воздуха и затем твердый сцинтиллятор MeltiLex плавили на фильтровальных матах при 90°С в течение 5 минут. Показатели радиоактивности считывали в сцинцилляционном счетчике MicroBeta2 (PerkinElmer). Аппроксимацию данных проводили по уравнению односайтового связывания с подбором кривой с помощью Prism 6 (программное обеспечение GraphPad) и значения Ki оценивали согласно уравнению Ченга-Прусоффа.

Аффинность связывания in vitro
	5-НТ6	5-НТ2А
	Ki [нМ]	Ki [нМ]
1	1,3	4,2
2	2,2	3,1
6	1,7	3,8
7	1,6	2,9
8	2	2,9
12	0,29	2,1
13	0,98	2,6
14	0,65	0,39
16	0,62	0,82
17	0,62	1,6
18	0,27	4,2
19	0,35	1,3
20	0,53	2,2
21	0,18	0,54
22	0,5	0,45
24	0,092	0,73
25	0,37	0,71
26	0,087	0,91
28	4	0,48
29	0,11	0,37
30	0,071	0,33
31	0,11	1,5
32	0,061	2,3
33	0,069	0,17

Представленные выше результаты подтверждают, что все тестируемые соединения обладают высокой аффинностью к обоим рецепторам, 5-НТ2А и 5-НТ6, подтверждая их свойства как лиганда со специфичностью к двум рецепторам.

- 46 040709

Биологический пример 2. Анализы на функциональную активность.

Приготовление растворов тестируемого и эталонного соединений. Готовили 1 мМ исходные растворы тестируемых соединений в DMSO. Последовательные разведения проводили в 96-луночном микропланшете в аналитических буферах с применением автоматической системы пипетирования epMotion 5070 (Eppendorf). Проводили два независимых эксперимента в двух повторностях и тестировали 6-10 значений концентрации.

Анализы на функциональную активность в отношении 5-НТ2А и 5-НТ6. Клеточные функциональные анализы на основе экворина проводили с помощью у-облученных рекомбинантных клеток СНО-Ki, экспрессирующих нацеленный на митохондрии экворин, GPCR человека (5-НТ2А или 5-НТ6) и неселективный G-белок α16 (PerkinElemer). Анализы проводили в соответствии со стандартным протоколом, предоставленным производителем. После размораживания клетки переносили в аналитический буфер (DMEM/F12 Хэма с 0,1% BSA без содержания протеазы) и центрифугировали. Сгусток клеток ресуспендировали в аналитическом буфере и добавляли коэлентеразин h при конечной концентрации 5 мкМ. Клеточную суспензию инкубировали при 21°С, защищали от света с постоянным перемешиванием в течение 4 ч и затем разбавляли аналитическим буфером до концентрации 250000 клеток/мл. После 1 часа инкубации 50 мкл клеточной суспензии распределяли с применением автоматических форсунок, встроенных в радиометрический и люминесцентный планшетный счетчик MicroBeta2 LumiJET (PerkinElmer, США), в белый непрозрачный 96-луночный микропланшет, предварительно загруженный тестируемыми соединениями. Регистрировали немедленное излучение генерированного света с последующей мобилизацией кальция в течение 30-60 с. В режиме антагониста через 15-30 мин инкубации добавляли эталонный агонист в вышеуказанную аналитическую смесь и снова регистрировали излучение света. Конечная концентрация эталонного агониста равнялась ЕС80: 40 нМ серотонина для рецептора 5-НТ6 и 30 нМ аметилсеротонина для рецептора 5-НТ2А. Анализы проводили в режиме агониста (5-НТ6 AGO и 5-НТ2А AGO), а также в режиме антагониста (5-НТ6 ANT и 5-НТ2А ANT).

IC50 и ЕС50 определяли посредством анализа методом нелинейной регрессии с применением программного обеспечения GraphPad Prism 6.0. Использовали log IC50 для получения Kb посредством применения аппроксимации Ченга-Прусоффа.

	Функциональная активность in vitro
	5-НТ6 AGO	5-НТ6 ANT	5-HT2A AGO	5-ΗΤ2Α ΑΝΤ
	ЕС50 [нМ]	Kb [нМ]	EC50 [нМ]	КЬ [нМ]
1	Н. Ρ.	2,5	Η. Ρ.	18
7	Н. Р.	1,9	Η. Ρ.	22
12	Н. Р.	0,49	Η. Ρ.	31
13	Н. Р.	9,1	Η. Ρ.	Η. И.
14	Н. Р.	5,5	Η. Ρ.	59
16	Н. Р.	4,4	Η. Ρ.	55
17	Н. Р.	0,47	Η. Ρ.	10
19	Н. Р.	0,14	Η. Ρ.	21
20	Н. Р.	1,2	Η. Ρ.	53
21	Н. Р.	0,27	Η. Ρ.	4,3
22	Н. Р.	4,8	Η. Ρ.	26
23	Н. Р.	0,26	Η. Ρ.	28
24	Н. Р.	1,1	Η. Ρ.	28
25	Н. Р.	0,65	Η. Ρ.	20
27	Н. Р.	0,31	Η. Ρ.	56
28	Н. Р.	0,25	Η. Ρ.	16
29	Н. Р.	0,051	Η. Ρ.	9,8
30	Н. Р.	0,65	Η. Ρ.	5,5
31	Н. Р.	0,2	Η. Ρ.	16
32	Н. Р.	0,37	Η. Ρ.	11
33	Н. Р.	0,28	Η. Ρ.	9,7

Н. И. - не исследовали,

Н. Р. - нельзя рассчитать (расчет значений ЕС50 был невозможен, поскольку соединения совсем не проявляли эффекта агониста)

Представленные выше результаты подтверждают, что все тестируемые соединения обладают высо- 47 040709 кими антагонистическими свойствами в отношении обоих рецепторов, 5-НТ2А и 5-НТ6, подтверждая их свойства как антагониста со специфичностью к двум рецепторам.

Биологический пример 3. Эффекты соединений 1 и 17 на подергивания головы, индуцированные агонистом рецептора 5-HT_2A/c, гидрохлоридом 1-(2,5-диметокси-4-йодфенил)-2-аминопропана (DOI), у крыс Вистар.

А. Субъекты.

Применяли самцов крыс Вистар (Charles River, Зульцфельд, Германия), которых не подвергали обработке лекарственным средством. Крыс размещали по четыре на стандартную пластиковую клетку и содержали в комнате с постоянными условиями окружающей среды (22±1°С, относительная влажность 60%, цикл света-темноты 12:12 с включением света в 07:00 утра). Животных получали от специалиста по разведению животных за 2 недели до начала поведенческих процедур. В течение данного времени субъектов несколько раз взвешивали и обследовали руками. Крыс также приучали к пероральному введению тестируемых соединений в форме гидрохлоридной соли посредством дозирования дистиллированной воды с помощью зонда (1-2 мл). Водопроводная вода и стандартный лабораторный рацион (Labofeed H, WPIK, Кцыня, Польша) были доступны без ограничения.

Поведение с крысами в данном исследовании полностью соответствовало этическим стандартам, изложенным в соответствующих польских и европейских (директива №2010/63/ЕС) нормах. Все процедуры были пересмотрены и одобрены комитетом по этике.

B. DOI-индуцированные подергивания головы.

Все тесты проводили в звукоизолирующем экспериментальном помещении в промежутке времени между 10:00 утра и 04:00 вечера. DOI-индуцированные подергивания головы оценивали, как описано у Millan et al. (2000). Крысам вводили путем инъекции DOI (2,5 мг/кг, внутрибрюшинно) и их помещали в стеклянные клетки для наблюдения (25x25x40 см, ШхВхД) с подстилкой в виде древесной стружки на дне. Через 5 мин обученный наблюдатель подсчитывал подергивания головы в течение 5 мин. (300 с). Перорально вводили тестируемые соединения в форме гидрохлоридной соли, через 180 мин после чего начинали период наблюдения для разных групп субъектов, которые не подвергались обработке лекарственным средством.

C. Лекарственные средства.

DOI растворяли в стерильном физиологическом растворе (Baxter, Варшава, Польша) и вводили внутрибрюшинно в объеме 1,0 мл/кг. Тестируемые соединения в форме гидрохлоридной соли растворяли в 0,5% Tween и вводили перорально в объеме 2,0 мл/кг. Все растворы готовили непосредственно перед применением и обеспечивали их защиту от света.

D. Анализ данных.

Общее количество подергиваний головы (n/5 мин) анализировали с помощью дисперсионного анализа Краскела-Уоллиса (ANOVA). U-критерий Манна-Уитни применяли для отдельных апостериорных сравнений (табл. 1). Значимыми считали Р-значения ниже чем 0,05. Применяли пакет программного обеспечения Statistica 12.0 для Windows (StatSoft, Талса, Оклахома, США) для анализа всех данных.

Результаты.

Оба тестируемых соединения дозозависимым образом ослабляли индуцированные DOI (2,5 мг/кг) подергивания головы с минимальной эффективной дозой (MED) 3,0 мг/кг для соединения 1 и 1,0 мг/кг для соединения 17.

Биологический пример 4. Эффекты соединений 1 и 17 на скополамин-индуцированную недостаточность в отношении обучения и памяти в тесте пассивного избегания у крыс Вистар.

A. Субъекты.

Применяли самцов крыс Вистар (Charles River, Зульцфельд, Германия), которых не подвергали обработке лекарственным средством. Крыс размещали по четыре на стандартную пластиковую клетку и содержали в комнате с постоянными условиями окружающей среды (22±1°С, относительная влажность 60%, цикл света-темноты 12:12 с включением света в 07:00 утра). Животных получали от специалиста по разведению животных за 2-3 недели до начала поведенческих процедур. В течение данного времени субъектов несколько раз взвешивали и обследовали руками. Крыс также приучали к пероральному введению тестируемых соединений в форме гидрохлоридной соли посредством дозирования дистиллированной воды с помощью зонда (1-2 мл). Водопроводная вода и стандартный лабораторный рацион (Labofeed H, WPIK, Кцыня, Польша) были доступны без ограничения.

B. Тест пассивного избегания с переходом.

Эффекты тестируемых соединений на функции обучения и памяти оценивали с применением теста пассивного избегания с переходом (Ishiyama et al., 2007). Аппарат для проведения теста пассивного избегания (PACS-30, Columbus Instruments, Колумбус, Огайо, США) содержал четыре идентичных клетки из нержавеющей стали с черными покровными элементами из оргстекла. Каждая клетка состояла из осве- 48 040709 щенного и темного отделений (23x23x23 см) и решетчатого дна из нержавеющей стали. Два отделения разделяли посредством автоматической раздвижной двери (PACS-30, Columbus).

В ходе периода тренировки (обнаружение) животных по отдельности помещали в освещенное отделение и давали возможность свободно его исследовать в течение 10 с. Затем открывали раздвижную дверь и измеряли латентный период перехода для животных в отношении входа в темное отделение с 300-секундным временем окончания. Как только животные заходили в темное отделение, двери закрывали. Обеспечивали неизбежное электроболевое раздражение лап (0,5 мА в течение 3 с) через 3 с через решетчатое дно с помощью генератора разряда с током постоянной силы (Columbus). Внутрибрюшинно вводили скополамин (0,3 мг/кг) за 30 мин до периода тренировки. Перорально вводили тестируемые соединения в форме гидрохлоридной соли или их среду-носитель за 180 мин до начала периода тренировки.

Период тестирования (выражения) проводили через 24 ч после периода тренировки с применением такого же подхода, но без какого-либо электроболевого раздражения лап или введения лекарственного средства. Измеряли латентный период перехода для животных в отношении входа в темное отделение с 300-секундным временем окончания. Изменения, индуцированные тестируемыми соединениями для латентного периода перехода в отношении входа в темное отделение в ходе периода тестирования, рассматривали как меру их промнестических или амнестических эффектов (Ishiyama et al., 2007).

C. Лекарственные средства.

Скополамин (предоставленный Adamed) растворяли в стерильном физиологическом растворе (0,9% NaCl; Baxter, Варшава, Польша) и вводили внутрибрюшинно в объеме 2,0 мл/кг. Тестируемые соединения в форме гидрохлоридной соли растворяли в 0,5% Tween и вводили перорально в объеме 2,0 мл/кг. Все растворы готовили непосредственно перед применением и обеспечивали их защиту от света.

D. Презентация данных и анализ.

Значения веса тела (г) и латентность тренировки/тестирования (с) анализировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Поскольку данные в отношении пассивного избегания не были нормально распределены, латентный период перехода также анализировали с помощью ANOVA Краскела-Уоллиса и U-критерия Манна-Уитни. Значимыми считали Р-значения ниже чем 0,05. Применяли пакет программного обеспечения Statistica 12.0 для Windows (StatSoft, Талса, Оклахома, США) для анализа всех данных.

Результаты.

Оба тестируемых соединения, вводимых в комбинации со скополамином (0,3 мг/кг), значительно продлевали латентный период перехода в отношении входа в темное отделение в ходе периода тестирования. Минимальная эффективная доза (MED) составляла 3,0 мг/кг для соединения 1 и 1,0 мг/кг для соединения 17.

- 49 040709

Литературные источники.

Amano, N., Inuzuka, S., Ogihara, T., 2009. Behavioral and psychological symptoms of dementia and medical treatment. Psychogeriatr. Off. J. Jpn. Psychogeriatr. Soc. 9, 45-49. https://doi.Org/10.llll/j.1479-8301.2009.00284.x

Ballard, C., Waite, J., 2006. The effectiveness of atypical antipsychotics for the treatment of aggression and psychosis in Alzheimer’s disease. Cochrane Database Syst. Rev. CD003476. https://doi.org/10.1002/14651858.CD003476.pub2

Carson, S., McDonagh, M.S., Peterson, K., 2006. A systematic review of the efficacy and safety of atypical antipsychotics in patients with psychological and behavioral symptoms of dementia. J. Am. Geriatr. Soc. 54, 354-361. https://doi.0rg/lO.llll/j. 15325415.2005.00566.x

De Deyn, P., Jeste, D.V., Swanink, R., Kostic, D., Breder, C., Carson, W.H., Iwamoto, T., 2005. Aripiprazole for the treatment of psychosis in patients with Alzheimer’s disease: a randomized, placebo-controlled study. J. Clin. Psychopharmacol. 25, 463-467.

Fasano, A., Plotnik, M., Bove, F., Berardelli, A., 2012. The neurobiology of falls. Neurol. Sci. Off. J. Itai. Neurol. Soc. Itai. Soc. Clin. Neurophysiol. 33, 1215-1223.

https://doi.org/10.1007/sl0072-012-1126-6

Ferri, C.P., Prince, M., Brayne, C., Brodaty, H., Fratiglioni, L., Ganguli, M., Hall, K., Hasegawa, K., Hendrie, H., Huang, Y., Jorm, A., Mathers, C., Menezes, P.R., Rimmer, E.,

- 50 040709

Scazufca, M., Alzheimer’s Disease International, 2005. Global prevalence of dementia: a

Delphi consensus study. Lancet Lond. Engl. 366, 2112-2117. https://doi.org/10.1016/S0140-

6736(05)67889-0

Fijal, K., Popik, P., Nikiforuk, A., 2014. Co-administration of 5-HT6 receptor antagonists with clozapine, risperidone, and a 5-HT2A receptor antagonist: effects on prepulse inhibition in rats. Psychopharmacology (Berl.) 231, 269-281. https://doi.org/10.1007/s00213-013-32342

Gauthier, S., Cummings, J., Ballard, C., Brodaty, H., Grossberg, G., Robert, P., Lyketsos, C., 2010. Management of behavioral problems in Alzheimer’s disease. Int. Psychogeriatr. 22, 346-372. https://doi.org/10.1017/S1041610209991505

Hersch, E.C., Falzgraf, S., 2007. Management of the behavioral and psychological symptoms of dementia. Clin. Interv. Aging 2, 611-621.

Holmes, C., Arranz, M.J., Powell, J.F., Collier, D.A., Lovestone, S., 1998. 5-HT2A and 5HT2C receptor polymorphisms and psychopathology in late onset Alzheimer’s disease. Hum. Mol. Genet. 7, 1507-1509.

Home I Cochrane Library [WWW Document], n.d. URL http://www.cochranelibrary.com/ (accessed 2.7.18).

Jeste, D.V., Blazer, D., Casey, D., Meeks, T., Salzman, C., Schneider, L., Tariot, P., Yaffe, K., 2008. ACNP White Paper: update on use of antipsychotic drugs in elderly persons with dementia. Neuropsychopharmacol. Off. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 33, 957970. https://doi.org/10.1038/sj.npp.1301492

Jeste, D.V., Finkel, S.I., 2000. Psychosis of Alzheimer’s disease and related dementias. Diagnostic criteria for a distinct syndrome. Am. J. Geriatr. Psychiatry Off. J. Am. Assoc. Geriatr. Psychiatry 8, 29-34.

Jones, C.A., Watson, D.J.G., Fone, K.C.F., 2011. Animal models of schizophrenia. Br. J. Pharmacol. 164, 1162-1194. https://doi.Org/10.llll/j.1476-5381.2011.01386.x

- 51 040709

Liperoti, R., Pedone, C., Corsonello, A., 2008. Antipsychotics for the treatment of behavioral and psychological symptoms of dementia (BPSD). Curr. Neuropharmacol. 6, 117-124.

https://doi.org/10.2174/157015908784533860

Liu, K.G., Robichaud, A.J., 2009. 5-HT6 antagonists as potential treatment for cognitive dysfunction. Drug Dev. Res. 70, 145-168. https://doi.org/10.1002/ddr.20293

Lorke, D.E., Lu, G., Cho, E., Yew, D.T., 2006. Serotonin 5-HT2A and 5-HT6 receptors in the prefrontal cortex of Alzheimer and normal aging patients. BMC Neurosci. 7, 36. https://doi.org/10.1186/1471-2202-7-36

Maehara, S., Hikichi, H., Satow, A., Okuda, S., Ohta, H., 2008. Antipsychotic property of a muscarinic receptor agonist in animal models for schizophrenia. Pharmacol. Biochem. Behav. 91, 140-149. https://doi.Org/10.1016/j.pbb.2008.06.023

Marcos, B., Garcia-Alloza, M., Gil-Bea, F.J., Chuang, T.T., Francis, P.T., Chen, C.P., Tsang, S.W.T.Y., Lai, M.K.P., Ramirez, M.J., 2008. Involvement of an altered 5-HT -{6} receptor function in behavioral symptoms of Alzheimer’s disease. J. Alzheimers Dis. JAD 14, 43-50.

Marsh, A., 1979. Visual hallucinations during hallucinogenic experience and schizophrenia. Schizophr. Bull. 5, 627-630.

Murray, P.S., Kirkwood, C.M., Gray, M.C., Fish, K.N., Ikonomovic, M.D., Hamilton, R.L., Kofler, J.K., Klunk, W.E., Lopez, O.L., Sweet, R.A., 2014. Hyperphosphorylated tau is elevated in Alzheimer’s disease with psychosis. J. Alzheimers Dis. JAD 39, 759-773. https://doi.org/10.3233/JAD-131166

Nichols, D.E., 2004. Hallucinogens. Pharmacol. Ther. 101, 131-181.

https://doi.Org/10.1016/j.pharmthera.2003.l 1.002

Nobili, A., Pasina, L., Trevisan, S., Riva, E., Lucca, U., Tettamanti, M., Matucci, M., Tarantola, M., 2009. Use and misuse of antipsychotic drugs in patients with dementia in Alzheimer special care units. Int. Clin. Psychopharmacol. 24, 97-104.

Riemer, C., Borroni, E., Levet-Trafit, B., Martin, J.R., Poli, S., Porter, R.H.P., Bos, M., 2003. Influence of the 5-HT6 receptor on acetylcholine release in the cortex: pharmacological characterization of 4-(2-bromo-6-pynOlidin-l-ylpyridine-4-sulfonyl)phenylamine, a potent

- 52 040709 and selective 5-HT6 receptor antagonist. J. Med. Chem. 46, 1273-1276.

https://doi.org/10.1021/jm021085c

Schneider, L.S., Tariot, P.N., Dagerman, K.S., Davis, S.M., Hsiao, J.K., Ismail, M.S., Lebowitz, B.D., Lyketsos, C.G., Ryan, J.M., Stroup, T.S., Sultzer, D.L., Weintraub, D., Lieberman, J.A., CATIE-AD Study Group, 2006. Effectiveness of atypical antipsychotic drugs in patients with Alzheimer’s disease. N. Engl. J. Med. 355, 1525-1538. http s: //doi. org/10.105 6/NE JMoa061240

Schulze, J., Glaeske, G, van den Bussche, H., Kaduszkiewicz, H., Koller, D., Wiese, B., Hoffmann, F., 2013a. Prescribing of antipsychotic drugs in patients with dementia: a comparison with age-matched and sex-matched non-demented controls. Pharmacoepidemiol. Drug Saf. 22, 1308-1316. https://doi.org/10.1002/pds.3527

Schulze, J., van den Bussche, H., Glaeske, G., Kaduszkiewicz, H., Wiese, B., Hoffmann, F., 2013b. Impact of safety warnings on antipsychotic prescriptions in dementia: nothing has changed but the years and the substances. Eur. Neuropsychopharmacol. J. Eur. Coll. Neuropsychopharmacol. 23, 1034-1042. https://doi.Org/10.1016/j.euroneuro.2013.02.001

Siegel, R.K., 1978. Phencyclidine and ketamine intoxication: a study of four populations of recreational users. NIDA Res. Monogr. 119-147.

Sink, K.M., Holden, K.F., Yaffe, K., 2005. Pharmacological treatment of neuropsychiatric symptoms of dementia: a review of the evidence. JAMA 293, 596-608. https://doi.Org/10.1001/jama.293.5.596

Sukonick, D.L., Pollock, B.G., Sweet, R.A., Mulsant, B.H., Rosen, J., Klunk, W.E., Kastango, K.B., DeKosky, S.T., Ferrell, R.E., 2001. The 5-HTTPR*S/*L polymorphism and aggressive behavior in Alzheimer disease. Arch. Neurol. 58, 1425-1428.

Varty, G.B., Bakshi, V.P., Geyer, M.A., 1999. M100907, a serotonin 5-HT2A receptor antagonist and putative antipsychotic, blocks dizocilpine-induced prepulse inhibition deficits in Sprague-Dawley and Wistar rats. Neuropsychopharmacol. Off. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 20, 311-321, https://doi.org/10.1016/S0893-133X(98)00072-4

Vigen, C.L.P., Mack, W.J., Keefe, R.S.E., Sano, M., Sultzer, D.L., Stroup, T.S., Dagerman, K.S., Hsiao, J.K., Lebowitz, B.D., Lyketsos, C.G., Tariot, P.N., Zheng, L., Schneider, L.S., 2011. Cognitive effects of atypical antipsychotic medications in patients with Alzheimer’s disease: outcomes from CATIE-AD. Am. J. Psychiatry 168, 831-839.

https://doi.org/10.1176/appi.ajp.2011.08121844

Wesolowska, A., 2010. Potential role of the 5-HT6 receptor in depression and anxiety: an overview of preclinical data. Pharmacol. Rep. PR 62, 564-577.

Wesolowska, A., Nikiforuk, A., 2007. Effects of the brain-penetrant and selective 5-HT6 receptor antagonist SB-399885 in animal models of anxiety and depression. Neuropharmacology 52, 1274-1283. https://doi.Org/10.1016/j.neuropharm.2007.01.007

Woolley, M.L., Marsden, C.A., Fone, K.C.F., 2004. 5-ht6 receptors. Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord. 3, 59-79.

-

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение общей формулы (I), ) 2 ^R (I), или его фармацевтическая соль, где

G представляет собой СН или N;

R¹ представляет собой Н, С1-С₄-алкил, НО-С1-С₄-алкил или С1-С₄-алкил-О-С1-С₄-алкил;

R² выбран из группы, состоящей из фенильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем, или 5- или 6-членного гетероарила, выбранного из фурила, тиенила, тиазолила или пиридила, незамещенного или замещенного по меньшей мере одним заместителем, где заместитель выбран из F, Cl, Br, С₁-С₄-алкил-, С₁-С₄-алкил-О-.
2. Соединение по п.1, где G представляет собой СН.
3. Соединение по п.1, где G представляет собой N.
4. Соединение по любому из пп.1-3, где R¹ представляет собой Н, метил или 2-гидроксиэтил.
5. Соединение по любому из пп.1-4, где R² выбран из фенильной группы, незамещенной или замещенной по меньшей мере одним заместителем.
6. Соединение по п.5, где заместитель выбран из F, Cl, метила или метокси.
7. Соединение формулы (I) по п.1, выбранное из группы, состоящей из следующего:

1 -бензил-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензимидазол, 1-бензил-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол, 2-{4-[1-бензил-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол-4-ил]пиперазин-1-ил}этанол, 1-(Φуран-2-илметил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол, 1-[(5-метилфуран-2-ил)метил]-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензимидазол, 1 -(3 -хлорбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензимидазол,

1 -(3 -фторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензимидазол,

1 -(3,4-дихлорбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензо[d]имидазол, 1-(3-хлор-4-фторбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензо[d]имидазол, 1 -(3,4-дифторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-бензо[d]имидазол, 1-(3,5-дихлорбензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-бензо[d]имидазол, 1 -бензил-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1 -(3,4-дихлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1 -(4-хлор-3 -фторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 4-(пиперазин-1 -ил)-1 -(1,3-тиазол-2-илметил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 1 -(4-хлор-3 -фторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 1-(Φуран-2-илметил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

1 -(3 -метоксибензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1 -(3 -фторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1 -(3 -хлорбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 1-(Φуран-2-илметил)-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол, 1 -(3,4-дифторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 1-(3-метоксибензил)-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

1 -(3 -фторбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол,

1 -(3,4-дифторбензил)-4-(пиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 1-бензил-4-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол,

1 -(3 -хлорбензил)-4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 1-[(5-метилфуран-2-ил)метил]-4-(пиперазин-1-ил)-2-(трифторметил)-1H-индол, 1-[(5 -метилтиофен-2-ил)метил] -4-(пиперазин-1 -ил)-2 -(трифторметил)-1 H-индол, 4-(пиперазин-1-ил)-1-(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)-1H-индол, 4-(пиперазин-1 -ил)-1 -(тиофен-3 -илметил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-1 -(тиофен-3-илметил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-1 -(тиофен-2-илметил)-2-(трифторметил)-1 H-индол, 4-(4-метилпиперазин-1 -ил)-1 -[(5 -метил-1,3-тиазол-2 -ил)метил] -2-(трифторметил)-1 H-индол.

- 54 040709
8. Соединение по п.1, где соединение представляет собой

или его фармацевтическая соль.
9. Соединение по п.1, где соединение представляет собой

Н

или его фармацевтическая соль.
10. Соединение по п.1, где соединение представляет собой

или его фармацевтическая соль.
11. Соединение по п.1, где соединение представляет собой

Н

или его фармацевтическая соль.
12. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-11 для лечения болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, деменции с тельцами Леви, психоза, связанного с деменцией, шизофрении, бредовых синдромов и других психотических состояний, связанных и не связанных с приемом психоактивных веществ, депрессии, тревожных расстройств различной этиологии, нарушений сна различной этиологии.

^gj) Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2