EA039434B1 - Химерное собачье анти-cd20 антитело - Google Patents
Химерное собачье анти-cd20 антитело Download PDFInfo
- Publication number
- EA039434B1 EA039434B1 EA201891499A EA201891499A EA039434B1 EA 039434 B1 EA039434 B1 EA 039434B1 EA 201891499 A EA201891499 A EA 201891499A EA 201891499 A EA201891499 A EA 201891499A EA 039434 B1 EA039434 B1 EA 039434B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- amino acid
- acid sequence
- canine
- Prior art date
Links
- 241000282465 Canis Species 0.000 title claims abstract description 38
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 31
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 24
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 101100495231 Canis lupus familiaris MS4A1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 abstract description 43
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 10
- 208000028564 B-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 abstract description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 16
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 4
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 4
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 4
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101100495232 Homo sapiens MS4A1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000013584 assay control Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000003738 lymphoid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000027174 regulation of B cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000021821 regulation of B cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1271—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Micrococcaceae (F), e.g. Staphylococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Данное изобретение относится к канинизированным химерным антителам анти-CD20 против белка CD20 собаки и способам их использования для лечения определенных заболеваний, таких как неходжкинская В-клеточная лимфома у собак.
Description
Перечень последовательностей
Данная заявка содержит перечень последовательностей, представленный в электронном виде в формате ASCII и включенный в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Упомянутая копия ASCII, созданная 10 февраля 2016 г., называется перечнем последовательностей Р20914 и имеет размер 14 КБ.
Данное изобретение относится к канинизированным химерным антителам анти-CD20 против белка CD20 собаки и способам их использования для лечения определенных заболеваний, таких как неходжкинская В-клеточная лимфома у собак.
Данное изобретение относится к области лечения рака.
Лимфомы у собак представляют собой группу различных видов рака и являются одними из наиболее распространенных раковых патологий, диагностируемых у собак. Они в совокупности составляют приблизительно 7-14% всех случаев рака, диагностируемых у собак. Существует более 30 описанных типов лимфомы у собак, и эти виды рака сильно варьируются по течению. Для некоторых видов рака характерно быстрое прогрессирование и в случае отсутствия лечения они остро угрожают жизни, в то время как другие виды рака развиваются очень медленно и протекают как хронические, медленно прогрессирующие заболевания. Лимфомы могут поражать любой орган в организме, но чаще всего возникают в лимфатических узлах, прежде чем распространиться в другие органы, такие как селезенка, печень и костный мозг.
CD20 представляет собой белок клеточной поверхности с четырьмя спиральными трансмембранными областями. Молекула CD20 участвует в регуляции пролиферации и дифференцировки В-клеток. Антиген CD20 присутствует исключительно на поверхности почти всех В-клеток, как непораженных раком, так и злокачественных.
Ритуксимаб представляет собой химерное моноклональное антитело против белка CD20 человека, который в основном находится на поверхности В-клеток иммунной системы. Ритуксимаб разрушает В-клетки и поэтому применяется для лечения заболеваний у людей, которые характеризуются чрезмерным количеством В-клеток, сверхактивных В-клеток или дисфункциональных В-клеток. Эти заболевания включают в себя многие лимфомы, лейкозы, отторжение трансплантата и аутоиммунные нарушения.
Ритуксимаб разрушает как непораженные, так и злокачественные В-клетки человека, которые имеют CD20 на своих поверхностях. Эффект приводит к элиминации В-клеток (включая раковые) из организма, что позволяет создать новую популяцию здоровых В-клеток из лимфоидных стволовых клеток.
К сожалению, излечение собак с лимфомами по-прежнему остается труднодостижимым, поэтому существует потребность в дополнительных и новых методах терапии, которые могут оказаться эффективными при их лечении.
K9LO-133 представляет собой химерное антитело против CD20, которое нацелено на зрелые Влимфоциты у собак. K9LO-133 связывается с CD20 на В-лимфоцитах собаки. K9LO-133 является потенциально пригодным для лечения неходжкинской В-клеточной лимфомы и других типов лимфомы у собак.
Соответственно в данном изобретении предлагается антитело, которое специфически связывается с собачьим CD20. В данном изобретении также предлагается способ лечения лимфомы у пациента-собаки путем введения пациенту-собаке со злокачественной лимфомой, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антитела, которое специфически связывается с CD20 собаки. В данном изобретении также предлагается фармацевтическая композиция, включающая антитело, которое специфически связывается с CD20 собаки, и один или большее количество фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ. В данном изобретении также предлагается антитело, которое специфически связывается с CD20 собаки, а также связывается с белком А.
Краткое описание графических материалов
На фигуре проиллюстрированы уровни В-лимфоцитов CD21+ и CD22+ и Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ в сыворотке от 5 до 37 дня у собак, получавших антитело K9LO-133.
Подробное описание
Если не указано иное, термин антитело (Ат) относится к молекуле иммуноглобулина, содержащей две тяжелые цепи (НС) и две легкие цепи (LC), связанные между собой дисульфидными связями. Аминотерминальная часть каждой цепи включает в себя вариабельный участок от около 100 до около 110 аминокислот, в основном ответственный за распознавание антигена через определяющие комплементарность области (CDR), содержащиеся в нем. С-концевая часть каждой цепи определяет константную область, главным образом ответственную за эффекторную функцию.
В данном контексте термин антигенсвязывающий фрагмент относится к любому фрагменту антитела, который сохраняет способность связываться с его антигеном. Такие антигенсвязывающие фрагменты могут быть выбраны из группы, состоящей из фрагментов Fv, scFv, Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc и диател. Антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, содержит по меньшей мере одну вариабельную область. Предпочтительно антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) и вариабельную область легкой цепи (LCVR). Более предпочтительно антигенсвязывающий фрагмент в данном контексте включает HCVR и LCVR и обеспечивает антигенсвязывающую
- 1 039434 специфичность к CD20 собаки (т.е. фрагмент, связывающий CD собаки).
В данном контексте термины определяющая комплементарность область и CDR относятся к несмежным антигенсвязывающим центрам, находящимся в вариабельной области полипептидов LC и НС антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Эти конкретные области были описаны другими авторами, включая Kabat et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:66096616 (1977); Kabat et al.: Последовательности протеинов иммунологического интереса, пятое издание, Департамент здравоохранения и социальных служб США, публикация NIH № 91-3242 (1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262:732-745 (1996); и North et al., J. Mol. Biol., 406, 228-256 (2011), где определения включают перекрывающиеся или подмножества аминокислотных остатков при сравнении друг с другом.
В данном контексте термин вариабельная область легкой цепи относится к части LC молекулы антитела, которая включает в себя аминокислотные последовательности областей, определяющих комплементарность (CDR, т.е. LCDR1, LCDR2 и LCDR3), и каркасных областей легкой цепи (LFRW).
В данном контексте термин вариабельная область тяжелой цепи (HCVR) относится к части НС молекулы антитела, которая включает в себя аминокислотные последовательности областей, определяющих комплементарность (CDR, т.е. HCDR1, HCDR2 и HCDR3), и каркасных областей тяжелой цепи (HFRW).
CDR чередуются с областями, которые являются более консервативными и называются каркасными областями (FRW'j. Каждая LCVR и HCVR состоит из трех CDR и четырех FRW, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FRW1, CDR1, FRW2, CDR2, FRW3, CDR3, FRW4. Три CDR легкой цепи обозначаются как LCDR1, LCDR2 и LCDR3, а три CDR НС обозначаются как HCDR1, HCDR2 и HCDR3. CDR содержат большую часть остатков, которые формируют специфические взаимодействия с антигеном.
Нумерация и позиционирование аминокислотных остатков CDR в областях LCVR и HCVR соответствует известным конвенциям (например, Кабат (1991), Чотиа (1987) и/или Норс (2011)). В различных вариантах осуществления данного изобретения FRW антитела могут быть идентичны последовательностям зародышевой линии или могут быть модифицированы естественным путем или искусственно.
В некоторых вариантах осуществления данного изобретения анти-CD20 Ат для способов и/или использований данного изобретения изменяется для увеличения или уменьшения степени, до которой указанное антитело является гликозилированным. Добавление или удаление участков гликозилирования в антитело может быть с легкостью осуществлено путем изменения аминокислотной последовательности, в результате чего создается или удаляется один или большее количество участков гликозилирования.
Если не указано иное, когда аминокислотный остаток в антителе обозначается с помощью числа, в данном документе применяется система нумерации ЕС, поскольку она является общепринятой для использования в данной области техники (см. Kabat et al.: Последовательности протеинов иммунологического интереса, пятое издание, Департамент здравоохранения и социальных служб США, публикация NIH № 91-3242 (1991)).
В данном контексте термин набор относится к упаковке, содержащей по меньшей мере два отдельных контейнера, при этом первый контейнер содержит K9LO-133 Ат, а второй контейнер содержит фармацевтически приемлемые носители, разбавители или вспомогательные вещества. В данном контексте термин набор также относится к упаковке, содержащей по меньшей мере два отдельных контейнера, при этом первый контейнер содержит K9LO-133 Ат и другое антитело, которое является предпочтительным для лечения раковых опухолей, не относящихся к лимфомам. Набор может также включать в себя инструкции по введению всего или части содержимого этих первого и второго контейнеров пациенту с раком. Необязательно эти наборы также включают в себя третий контейнер, содержащий композицию, содержащую известный химиотерапевтический агент.
В данном контексте термин лечение, лечить или воздействие относится к сдерживанию, замедлению, приостановке, уменьшению или обратному развитию прогрессирования или тяжести существующего симптома, нарушения, патологического состояния или заболевания.
В данном контексте термин эффективное количество относится к количеству, или дозе, канинизированного анти-CD20 Ат, которое при однократном или множественном введении пациенту обеспечивает эффективный ответ у пациента при диагностике или лечении.
В данном контексте термины эффективный ответ пациента, или восприимчивость пациента к лечению комбинацией агентов, или терапевтический эффект относятся к клиническому или терапевтическому эффекту(ам), наблюдаемому(ым) у пациента при введении канинизированного анти-CD20 Ат. Такой эффект(ы) включает(ют) в себя любой один или большее количество из параметров: продление выживаемости (включая общую выживаемость и выживаемость без прогрессирования); получение объективного ответа (включая полный ответ или частичный ответ); уменьшение количества В-клеток, уменьшение концентрации В-клеток в крови или других тканях и жидкостях пациента, регрессия опухоли, уменьшение веса или размера опухоли, более длительный период до прогрессирования заболевания, увеличение продолжительности выживаемости, более длительная выживаемость без прогрессирования, повышение частоты общего ответа, увеличение продолжительность ответа и улучшение качества жизни
- 2 039434 и/или ослабление признаков или симптомов рака и т.д.
Эффективное количество может быть легко определено врачом-диагностом, представляющим собой специалиста в данной области техники, с помощью известных методов и путем анализа результатов, полученных при аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного количества для пациента врач-диагност оценивает ряд факторов, включая, но не ограничиваясь этим, вид или породу пациента; его размер, возраст и общее состояние здоровья; наблюдаемое специфическое заболевание или нарушение; степень или вовлечение, или тяжесть заболевания или нарушения; ответ отдельного пациента; определенное вводимое соединение; способ введения; характеристики биодоступности вводимого препарата; выбранную схему введения; использование сопутствующих лекарственных препаратов; и другие соответствующие обстоятельства.
K9LO-133.
AME-133V представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG1 второго поколения. K9LO-133 представляет собой частично канинизированный (вариабельные области человека с константными областями собак) вариант изотипа С моноклонального антитела AME-133V, который специфически связывается с белком CD20 у собак.
В одном варианте осуществления данного изобретения K9LO-133 содержит модифицированные вариабельные области тяжелых и легких цепей, CDR и каркасов. В одном варианте осуществления данного изобретения вводят вариант остатка в LCDR1 K9LO-133. В одном варианте осуществления данного изобретения вариант остатка в LCDR1 K9LO-133 представляет собой V165G. В одном варианте осуществления данного изобретения вводят вариантную шарнирную область. В одном варианте осуществления данного изобретения добавляют вариантную область по ходу транскрипции от шарнира. В одном варианте осуществления вариантная область по ходу транскрипции от шарнира позволяет K9LO-133 связываться с белком А.
K9LO-133 имеет аминокислотную последовательность тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 1, и соответствующую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2, которая кодирует аминокислоту SEQ ID NO: 1. K9LO-133 имеет последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3. Область вариабельной последовательности тяжелой цепи дополнительно состоит из HFWK 1 (SEQ ID NO: 4), HCDR1 (SEQ ID NO: 5), HFWK 2 (SEQ ID NO: 6), HCDR2 (SEQ ID NO: 7), HFWK3 (SEQ ID NO: 8) и HCDR3 (SEQ ID NO: 9).
K9LO-133 имеет аминокислотную последовательность легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 10, и соответствующую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 11, которая кодирует аминокислоту SEQ ID NO: 10. K9LO-133 имеет последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 12. Область вариабельной последовательности легкой цепи дополнительно состоит из LFWK 1 (SEQ ID NO: 13), LCDR1 (SEQ ID NO: 14), LFWK 2 (SEQ ID NO: 15), LCDR2 (SEQ ID NO: 16), LFWK 3 (SEQ ID NO: 17), LCDR3 (SEQ ID NO: 18) и области J (SEQ ID NO: 19).
Экспрессия CD20 в ткани лимфомы собак.
Экспрессия CD20 в ткани лимфомы собак может быть оценена с помощью иммуногистохимии (ИГХ) с AME-133V и K9LO-133. С целью обнаружения связывания AME-133V и K9LO-133 могут быть нанесены для криосрезы образцов лимфомы собак в одной концентрации, например 10 мкг/мл. Кроме того, AME-133V и K9LO-133 могут быть заменены подходящим видом и изотипом соответствующего антитела отрицательного контроля, которое имеет антигенную специфичность, отличающуюся от антигенной специфичности детекторных антител, например либо IgG1 человека, обозначаемого как ЧелIgG1 (для AME-133V), либо IgG собаки, обозначаемого как CoбIgG (для K9LO-133). Другие контроли могут быть получены путем исключения из анализа детекторных антител или антител отрицательного контроля (контроль анализа).
При анализе, как описано выше, AME-133V и K9LO-133 продуцировали 3+ окрашивание >75% мононуклеарных лейкоцитов положительного контроля. В случае с K9LO-133 окрашивание 3+ наблюдали в лимфоцитах в белой пульпе селезенки собаки. AME-133V и K9LO-133 специфически не реагировали с гладкими миоцитами отрицательного контроля (в частности, с ядрами в случае с K9LO-133) в селезенке собаки. Антитела отрицательного контроля ЧелIgG1 и CoбIgG специфически не реагировали с элементами ткани селезенки собаки ни положительного, ни отрицательного контроля. Также не наблюдали окрашивания контрольных срезов. Специфические реакции AME-133V и K9LO-133 с элементом ткани положительного контроля и отсутствие специфической реактивности с элементом ткани отрицательного контроля, а также отсутствие реактивности антитела отрицательного контроля свидетельствовали о том, что анализ был чувствительным, специфичным и воспроизводимым. CD20 был обнаружен в >75% неопластических клеток в 8 из 10 исследованных образцов лимфомы собак. В других образцах 1-5% неопластических клеток были положительно окрашены на CD20.
Собаки, получавшие K9LO-133.
Доза Ритуксимаба, применяемая у человека для лечения неходжкинской лимфомы, составляет 375 мг/м2. Как правило, химиотерапевтическая доза для собак составляет 40% от дозы человека, независимо от типа рака. Поэтому, не ограничиваясь теорией, подходящая начальная доза антитела анти-CD20 для собак при неходжкинской лимфоме составляет около 150 мг/м2. С целью определения дозы относи- 3 039434 тельно площади поверхности тела собаки весом 7 кг количество 150 мг/м2 было скорректировано путем умножения на 0,37. Полученная доза K9LO-133, вводимая собакам, составляла около 57 мг/собаку.
В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 140 до около 160 мг/м2 площади поверхности тела.
В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 130 до около 170 мг/м2 площади поверхности тела. В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 110 до около 190 мг/м2 площади поверхности тела. В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 50 до около 250 мг/м2 площади поверхности тела.
В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 50 до около 60 мг/собаку. В другом варианте осуществления данного изобретения доза K9LO133, вводимая собаке, составляет от около 40 до около 70 мг/собаку. В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 30 до около 100 мг/собаку. В одном варианте осуществления данного изобретения доза K9LO-133, вводимая собаке, составляет от около 10 до около 1000 мг/собаку.
Эффективность K9LO-133 определяли у собак путем внутривенного (в/в) введения им указанного антитела в дозе около 150 мг/м2 в дни 0, 7 и 35. Три собаки женского пола породы бигль акклиматизировали к условиям исследования в течение 7 дней, на протяжении которых они подвергались физическим обследованиям, измерениям веса тела и ежедневным клиническим наблюдениям. В дни введения собаки получали 57 мг K9LO-133 посредством медленной в/в инфузии со скоростью 0,5-1 мл/мин.
Кровь собирали для определения пропорций лимфоцитов и сохраняли сыворотки в дни 2, 5, 9, 16, 23, 30 и 37.
Как изображено на фигуре, было отмечено снижение доли В-лимфоцитов крови после лечения с использованием K9LO-133. Доля В-лимфоцитов (CD21+ и CD22+) снизилась на день 2, продемонстрировала восстановление между днями 2 и 30, но до дня 37 еще не вернулась к исходным уровням. CD8+ Т-лимфоциты продемонстрировали снижение на день 16, но ко дню 23 вернулись к исходным уровням. Доля CD4+ Тлимфоцитов оставалась относительно постоянной.
Таким образом, в/в введение K9LO-133 уменьшало количество В-лимфоцитов в циркулирующей крови с временным снижением CD8+ Т-лимфоцитов у пролеченных собак.
В одном аспекте, описанном в данном документе, предлагается антитело, имеющее вариабельную область легкой цепи (LCVR), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 12, и вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 3. В одном варианте осуществления данного изобретения антитело специфически связывается с CD20 собаки.
В другом аспекте, описанном в данном документе, предлагается антитело, имеющее легкую цепь (LC), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь (НС), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления данного изобретения антитело специфически связывается с CD20 собаки.
В одном аспекте, описанном в данном документе, предлагается антитело, имеющее две легкие цепи (LC), каждая из которых имеет аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и две тяжелые цепи (НС), каждая из которых имеет аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления данного изобретения антитело специфически связывается с CD20 собаки.
В другом аспекте предлагается способ лечения лимфомы у пациента-собаки, который включает в себя введение пациенту-собаке со злокачественной лимфомой, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антитела, имеющего вариабельную область легкой цепи (LCVR), аминокислотная последовательность которой приведена в SEQ ID NO: 12, и вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), аминокислотная последовательность которой приведена в SEQ ID NO: 3, при этом указанное антитело специфически связывается с CD20 собаки. В одном варианте осуществления данного изобретения антитело имеет легкую цепь (LC), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь (НС), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления данного изобретения антитело представляет собой K9LO-133.
В одном аспекте предлагается набор, который содержит фармацевтическую композицию, содержащую K9LO-133, с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.
В другом аспекте предлагается антитело, имеющее легкую цепь (LC), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь (НС), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 1, при этом указанное антитело специфически связывается с CD20 собаки и указанное антитело связывается с белком А.
Примеры
K9LO-133.
K9LO-133 может поставляться в 10 мМ цитрата, 150 мМ NaCl, pH 6,5 в концентрации 26,3 мг/мл.
- 4 039434
Носителем может быть физиологический солевой раствор с концентрацией 0,9% NaCl.
Расчет вводимой дозы K9LO-133 может быть основан на площади поверхности тела, которая была рассчитана для собак в этом исследовании как 0,37 м2. Каждая собака получала 150 мг/м2 (57 мг) K9LO-133 в каждой дозе. Дозы готовили путем отбора 57 мг (2,2 мл) K9LO-133 и разведения в 27,8 мл физиологического солевого раствора, чтобы довести общий объем до 30 мл для инфузии.
Проточная цитометрия.
Количество Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+) и В-лимфоцитов (CD21+ и CD22+) может быть определено с помощью проточной цитометрии. Сбор крови для проточной цитометрии выполняли до кормления. Около 1 мл крови, антикоагулированной ЭДТК, получали от 3 собак на исходном уровне (день -5) и в дни 2, 9, 16, 23, 30 и 37. Эритроциты лизировали гипотоническим буфером хлорида аммония, а лейкоциты окрашивали антителами, реагирующими с CD4, CD8, CD21 и CD22 собаки. Затем удаляли несвязанные антитела и получали 10000 лейкоцитарных объектов в проточном цитометре FACScan или FACSAria.
Образцы лимфомы.
Десять замороженных образцов лимфомы собак иссекали, помещали в состав Tissue-Tek® ОСТ (оптимальная температура иссекания) и хранили в морозильной камере для поддержания -80°С до приготовления срезов. Срезы готовили толщиной около 5 мкм, чтобы получить соответствующее количество микропрепаратов для последующего окрашивания ИГХ.
Иммуногистохимическое окрашивание.
Срезы из каждого образца лимфомы окрашивали с использованием AME-133V, моноклонального антитела IgG1, направленного против человеческого CD20 человека, и K9LO-133, изотипа С химерного моноклонального антитела собаки, направленного против CD20 собаки, с помощью ИГХ, как подробно описано ниже. AME-133V находилось в растворе 19,5 мг/мл в фосфатно-солевом буфере (ФСБ), pH 7,4. K9LO-133 находилось в растворе 2,5 мг/мл в ФСБ, рН 7,4.
Окрашивание ИГХ проводили, включая использование материалов положительного и отрицательного контроля на каждом этапе окрашивания и использование дополнительных микропрепаратов для антитела отрицательного контроля и контроля анализа с целью обеспечения специфичности окрашивания. Процедуры окрашивания, разведения первичных и вторичных антител и контрольные образцы для AME-133V проверяли на соответствие требованиям на этапах предварительного окрашивания. Процедуры окрашивания, разведения первичных и вторичных антител и контрольные образцы для K9LO-133 проверяли на соответствие требованиям в ходе осуществления способа окрашивания.
Окрашивание AME-133V.
Процедуру непрямого иммунопероксидазного окрашивания можно использовать для окрашивания ткани лимфомы собак с использованием AME-133V с целью обнаружения CD20. Микропрепараты фиксировали в ацетоне в течение 10 мин при комнатной температуре во время секционирования. Криосрезы, фиксированные в ацетоне, дважды промывали в фосфатно-солевом буферном растворе, 0,15 М NaCl, pH 7,2 ФСБ. Затем эндогенную пероксидазу гасили путем инкубации микропрепаратов с использованием Biocare PeroxAbolish в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем микропрепараты дважды промывали ФСБ, инкубировали с авидиновым раствором в течение 15 мин, промывали один раз ФСБ, инкубировали с раствором биотина в течение 15 мин и промывали один раз ФСБ. Затем в течение 20 мин микропрепараты обрабатывали белковым блоком, предназначенным для уменьшения неспецифического связывания. Белковый блок готовили следующим образом: ФСБ+1%-ный бычий сывороточный альбумин (БСА), 0,5%-ный казеин и 3%-ная сыворотка осла.
После белкового блока первичные антитела AME-133V, IgG1 человека или ни одно из них наносили на микропрепарат в концентрации 10 мкг/мл на 1 ч. Затем микропрепараты дважды промывали ФСБ и наносили на микропрепараты биотинилированное вторичное антитело (ослиный анти-человеческий IgG) на 30 мин. Затем микропрепараты дважды промывали ФСБ, оставляли для реакции на 30 мин с реагентом ABC Elite и дважды промывали ФСБ. Затем DAB наносили в течение 4 мин в качестве субстрата для пероксидазной реакции. Все микропрепараты промывали водопроводной водой, контрастно окрашивали, обезвоживали и фиксировали. ФСБ+1% БСА применялись в качестве разбавителя для первичных антител и реагента ABC Elite. (ФСБ+1%-ный БСА)+IgG собаки (разбавление 1:25) применялись в качестве разбавителя для вторичного антитела.
Окрашивание K9LO-133.
Процедуру непрямого иммунопероксидазного окрашивания можно использовать для окрашивания ткани лимфомы собак с использованием K9LO-133 с целью обнаружения CD20. Необходимость мечения (например, биотином, пероксидазой или флуоресцеином) K9LO-133 и неспецифическую реактивность между вторичным меченым анти-собачьим IgG и IgG, эндогенным к исследуемым тканям, можно устранить в соответствии со следующим процессом. Меченому вторичному антителу давали возможность специфически прикрепиться к немеченому первичному антителу (K9LO-133, CoбIgG или ни одному) путем инкубации в течение ночи смесей первичного/вторичного антител перед нанесением на криосрезы ткани. Детекторный реагент или антитело отрицательного контроля (в концентрации 10 мкг/мл) смешивали с биотинилированным кроличьим антисобачьим IgG, антителом, специфическим к Fc-фрагменту
- 5 039434 (RbαCoбIgG), в концентрации 15 мкг/мл для достижения соотношения первичного и вторичного антитела 1:1,5 в день перед окрашиванием.
Предварительно комплексованные антитела инкубировали в течение ночи на качающемся механизме в холодильнике, установленном на поддержание температуры 4°С. Перед использованием антитела в последующий день в каждый флакон добавляли гамма-глобулины собаки для достижения конечной концентрации 3 мг/мл, а затем инкубировали в течение по меньшей мере 2 ч на качающемся механизме в холодильнике, установленном на поддержание температуры 4°С. Микропрепараты фиксировали в ацетоне в течение 10 мин при комнатной температуре во время секционирования. В день окрашивания микропрепараты дважды промывали трис-буферным солевым раствором, 0,15 М NaCl, pH 7,6 ТБС. Затем эндогенную пероксидазу гасили путем инкубации микропрепаратов с использованием соответствующего реагента, такого как реагент Biocare PeroxAbolish, в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем микропрепараты дважды промывали ТБС, инкубировали с авидиновым раствором в течение 15 мин, промывали один раз ТБС, инкубировали с раствором биотина в течение 15 мин и промывали один раз ТБС. Затем в течение 20 мин микропрепараты обрабатывали белковым блоком, предназначенным для уменьшения неспецифического связывания.
Белковый блок готовили следующим образом: ТБС+1%-ный бычий сывороточный альбумин (БСА), 0,5%-ный казеин и 3%-ная нормальна сыворотка кролика. После белкового блока предварительно комплексованные первичные и вторичные антитела наносили на микропрепараты на 2 ч. Затем микропрепараты дважды промывали ТБС, обрабатывали реагентом ABC Elite в течение 30 мин, дважды промывали ТБС и затем обрабатывали DAB в течение 4 мин в качестве субстрата для пероксидазной реакции. Все микропрепараты промывали водопроводной водой, контрастно окрашивали, обезвоживали и фиксировали. ТБС+1%-ный БСА применялись в качестве разбавителя для всех антител и реагента ABC. Каждый этап окрашивания включал положительный контроль (мононуклеарные лейкоциты) и отрицательный контроль (миоциты гладких мышц) криосрезов селезенки собаки.
Перечень последовательностей
SEQ И) NO: 1; PRT; Искусственная последовательность
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGRTFTSYNMHWVRQMPGKGLEWMGAIYPLT
GDTSYNQKSKLQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSTYVGGDWQFDVWGKG TTVTVSSASTTAPSVFPLAPSCGSQSGSTVALACLVSGYIPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSV LQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPATNTKVDKPVPKRENGRVPRPPDCPKCPAP ELLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQ
- 6 039434
SNGTYRWSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDE
MSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSR
WQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
SEQ ID NO: 2; ДНК; Искусственная последовательность
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTG AAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGCCGTACATTTACCAGTTACAATATGCACTGGGTGCG CCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGGCTATTTATCCCTTGACGGGTGAT ACTTCCTACAATCAGAAGTCGAAACTCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAG CACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTG CGAGATCGACTTACGTGGGCGGTGACTGGCAGTTCGATGTCTGGGGCAAGGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCACGGCCCCCTCGGTTTTCCCGCTAGCGCCCAGCT GTGGGTCCCAATCCGGCTCCACGGTGGCCCTGGCCTGCCTGGTGTCAGGCTACATCCCC GAGCCTGTAACTGTGTCCTGGAATTCCGGCTCCTTGACCAGCGGTGTGCACACCTTCCC GTCCGTCCTGCAGTCCTCAGGGCTCTACTCCCTCAGCAGCATGGTGACAGTGCCCTCCA GCAGGTGGCCCAGCGAGACCTTCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCCACCAACACTAA AGTAGACAAGCCAGTGCCCAAAAGAGAAAATGGAAGAGTTCCTCGCCCACCTGATTGT CCCAAATGCCCAGCCCCTGAACTGCTGGGAGGGCCTTCGGTCTTCATCTTTCCCCCAAA ACCCAAGGACACCCTCTTGATTGCCCGAACACCTGAGGTCACATGTGTGGTGGTGGATC TGGACCCAGAAAACCCTGAGGTGCAGATCAGCTGGTTCGTGGATAGTAAGCAGGTGCA AACAGCCAACACGCAGCCTCGTGAGGAGCAGTCCAATGGCACCTACCGTGTGGTCAGT GTCCTCCCCATTGGGCACCAGGACTGGCTTTCAGGGAAGCAGTTCAAGTGCAAAGTCA ACAACAAAGCCCTCCCATCCCCCATTGAGGAGATCATCTCCAAGACCCCAGGGCAGGC CCATCAGCCTAATGTGTATGTCCTGCCGCCATCGCGGGATGAGATGAGCAAGAATACG GTCACCCTGACCTGTCTGGTCAAAGACTTCTTCCCACCTGAGATTGATGTGGAGTGGCA GAGCAATGGACAGCAGGAGCCTGAGAGCAAGTACCGCATGACCCCGCCCCAGCTGGAT GAAGATGGGTCCTACTTCCTATACAGCAAGCTCTCCGTGGACAAGAGCCGCTGGCAGC GGGGAGACACCTTCATATGTGCGGTGATGCATGAAGCTCTACACAACCACTACACACA GATATCCCTCTCCCATTCTCCGGGTAAATGATGATAG
SEQ ID NO: 3; PRT; Искусственная последовательность
- 7 039434
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGRTFTSYNMHWVRQMPGKGLEWMGAIYPLT
GDTSYNQKSKLQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSTYVGGDWQFDVWGKG
TTVTVSS
SEQ ID NO: 4; PRT; Искусственная последовательность
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISC
SEQ ID NO: 5; PRT; Искусственная последовательность
KGSGRTFTSYNMH
SEQ П) NO: 6; PRT; Искусственная последовательность
WVRQMPGKGLEWMG
SEQ П) NO: 7; PRT; Искусственная последовательность
AIYPLTGDTSYNQKSKL
SEQ ID NO: 8; PRT; Искусственная последовательность
QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYC
SEQ П) NO: 9; PRT; Искусственная последовательность
ARSTYVGGDWQFDV
SEQ П) NO: 10; PRT; Искусственная последовательность
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRSVPYIHWYQQKPGQAPRLLIYATSALASGIPD RFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWLSNPPTFGQGTKLEIKRNDAQPAVYLFQPSP DQLHTGS ASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDKDSTYSLS STLTMS STE YLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
SEQ П) NO: 11; ДНК; Искусственная последовательность
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAG CCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGCCGGAGTGTACCGTACATCCACTGGTACCAGCAGAA ACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGCCACATCCGCTCTGGCTTCTGGCATCCC AGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTG
- 8 039434
GAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTGGCTGAGTAACCCACCCACTTT TGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAAATGATGCCCAGCCAGCCGTCTATTTG TTCCAACCATCTCCAGACCAGTTACACACAGGAAGTGCCTCTGTTGTGTGCTTGCTGAA TAGCTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAAGTGGATGGTGTCATCCAAGAC ACAGGCATCCAGGAAAGTGTCACAGAGCAGGACAAGGACAGTACCTACAGCCTCAGCA GCACCCTGACGATGTCCAGTACTGAGTACCTAAGTCATGAGTTGTACTCCTGTGAGATC ACTCACAAGAGCCTGCCCTCCACCCTCATCAAGAGCTTCCAAAGGAGCGAGTGTCAGA GAGTGGAC
SEQ ID NO: 12; PRT; Искусственная последовательность
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRSVPYIHWYQQKPGQAPRLLIYATSALASGIPD
RFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQWLSNPPTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 13; PRT; Искусственная последовательность
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC
SEQ ID NO: 14; PRT; Искусственная последовательность RASRSVPYIH
SEQ ID NO: 15; PRT; Искусственная последовательность
WYQQKPGQAPRLLI
SEQ ID NO: 16; PRT; Искусственная последовательность
YATSALAS
SEQ ID NO: 17; PRT; Искусственная последовательность
GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC
SEQ ID NO: 18; PRT; Искусственная последовательность QQWLSNPPT
SEQ ID NO: 19; PRT; Искусственная последовательность FGQGTKLEIK
Claims (8)
1. Антитело, которое специфически связывается с CD20 собаки, содержащее вариабельную область легкой цепи (LCVR), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 12, и вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 3.
2. Антитело, которое специфически связывается с CD20 собаки, содержащее легкую цепь (LC), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь (НС), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 1.
3. Антитело, которое специфически связывается с CD20 собаки, содержащее две легкие цепи (LC), каждая из которых имеет аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и две тяжелые цепи (НС), каждая из которых имеет аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO: 1.
4. Способ лечения лимфомы у пациента-собаки, который включает в себя введение пациенту-собаке со злокачественной лимфомой, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества антитела, содержащего вариабельную область легкой цепи (LCVR), аминокислотная последовательность которой приведена в SEQ ID NO: 12, и вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), аминокислотная последовательность которой приведена в SEQ ID NO: 3, при этом указанное антитело специфически связывается с
- 9 039434
CD20 собаки.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанное антитело содержит легкую цепь (LC), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь (НС), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 1.
6. Набор для лечения лимфомы у пациента-собаки, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую антитело по любому из пп.1-3, с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.
7. Применение антитела, содержащего вариабельную область легкой цепи (LCVR), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 12, и вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 3, при этом указанное антитело специфически связывается с CD20 собаки для лечения лимфомы у пациента-собаки.
8. Применение по п.7, отличающееся тем, что указанное антитело содержит легкую цепь (LC), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь (НС), аминокислотная последовательность которой указана в SEQ ID NO: 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662296729P | 2016-02-18 | 2016-02-18 | |
| PCT/US2017/017337 WO2017142800A1 (en) | 2016-02-18 | 2017-02-10 | Chimeric canine anti-cd20 antibody |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201891499A1 EA201891499A1 (ru) | 2019-01-31 |
| EA039434B1 true EA039434B1 (ru) | 2022-01-27 |
Family
ID=58098709
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201891499A EA039434B1 (ru) | 2016-02-18 | 2017-02-10 | Химерное собачье анти-cd20 антитело |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US10519244B2 (ru) |
| EP (1) | EP3416984B1 (ru) |
| JP (1) | JP6661019B2 (ru) |
| KR (1) | KR102131544B1 (ru) |
| CN (1) | CN108699152B (ru) |
| AU (1) | AU2017219596B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018016367A2 (ru) |
| CA (1) | CA3014461C (ru) |
| DK (1) | DK3416984T3 (ru) |
| EA (1) | EA039434B1 (ru) |
| ES (1) | ES2868650T3 (ru) |
| MX (2) | MX2018009955A (ru) |
| NZ (1) | NZ744192A (ru) |
| WO (1) | WO2017142800A1 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA039434B1 (ru) * | 2016-02-18 | 2022-01-27 | Эланко Юэс Инк. | Химерное собачье анти-cd20 антитело |
| BR112020002871A2 (pt) * | 2017-08-15 | 2020-07-28 | Kindred Biosciences, Inc. | variantes fc de igg para uso veterinário |
| JP2021059499A (ja) | 2019-10-03 | 2021-04-15 | 日本全薬工業株式会社 | イヌｃｄ２０に対するモノクローナル抗体又は抗体フラグメント |
| BR112023026592A2 (pt) * | 2021-06-17 | 2024-03-05 | Petmedix Ltd | Anticorpos cd20 anti-canino |
| WO2023010057A1 (en) * | 2021-07-28 | 2023-02-02 | Atreca, Inc. | Atrc-101 target expression assay |
| GB202217993D0 (en) * | 2022-11-30 | 2023-01-11 | Petmedix Ltd | Therapeutic antibodies |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013054127A1 (en) * | 2011-10-13 | 2013-04-18 | Nvip Pty Ltd | Canine/feline cd20 binding epitope and compositions for binding thereto |
| WO2016016859A1 (en) * | 2014-07-31 | 2016-02-04 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Optimized cross-species specific bispecific single chain antibody constructs |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101914158A (zh) * | 2002-02-14 | 2010-12-15 | 免疫医疗公司 | 抗cd 20抗体及其融合蛋白和使用方法 |
| AR044388A1 (es) * | 2003-05-20 | 2005-09-07 | Applied Molecular Evolution | Moleculas de union a cd20 |
| JP4745242B2 (ja) * | 2003-05-20 | 2011-08-10 | アプライド モレキュラー エボリューション，インコーポレイテッド | Ｃｄ２０結合分子 |
| AU2008342956A1 (en) * | 2007-12-21 | 2009-07-09 | Genentech, Inc. | Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients |
| US8569460B2 (en) * | 2009-03-25 | 2013-10-29 | Vet Therapeutics, Inc. | Antibody constant domain regions and uses thereof |
| WO2011057188A1 (en) * | 2009-11-06 | 2011-05-12 | Idexx Laboratories, Inc. | Canine anti-cd20 antibodies |
| EP2542262A4 (en) | 2010-03-04 | 2014-02-26 | Vet Therapeutics Inc | MONOCLONAL ANTIBODIES DIRECTED AGAINST CD20 |
| GB201114858D0 (en) * | 2011-08-29 | 2011-10-12 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of using the same |
| EP2771694A4 (en) * | 2011-10-26 | 2015-08-05 | Novartis Tiergesundheit Ag | MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHOD FOR THEIR USE |
| EA039434B1 (ru) * | 2016-02-18 | 2022-01-27 | Эланко Юэс Инк. | Химерное собачье анти-cd20 антитело |
-
2017
- 2017-02-10 EA EA201891499A patent/EA039434B1/ru unknown
- 2017-02-10 KR KR1020187023393A patent/KR102131544B1/ko active IP Right Grant
- 2017-02-10 CN CN201780011511.5A patent/CN108699152B/zh active Active
- 2017-02-10 BR BR112018016367A patent/BR112018016367A2/pt unknown
- 2017-02-10 EP EP17706644.6A patent/EP3416984B1/en active Active
- 2017-02-10 WO PCT/US2017/017337 patent/WO2017142800A1/en active Application Filing
- 2017-02-10 JP JP2018539354A patent/JP6661019B2/ja active Active
- 2017-02-10 ES ES17706644T patent/ES2868650T3/es active Active
- 2017-02-10 MX MX2018009955A patent/MX2018009955A/es unknown
- 2017-02-10 AU AU2017219596A patent/AU2017219596B2/en active Active
- 2017-02-10 NZ NZ74419217A patent/NZ744192A/en unknown
- 2017-02-10 DK DK17706644.6T patent/DK3416984T3/da active
- 2017-02-10 US US16/073,927 patent/US10519244B2/en active Active
- 2017-02-10 CA CA3014461A patent/CA3014461C/en active Active
-
2018
- 2018-08-16 MX MX2022014375A patent/MX2022014375A/es unknown
-
2019
- 2019-11-14 US US16/683,518 patent/US10941206B2/en active Active
-
2021
- 2021-02-04 US US17/167,685 patent/US20210163618A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-04-20 US US18/303,769 patent/US20230257476A1/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013054127A1 (en) * | 2011-10-13 | 2013-04-18 | Nvip Pty Ltd | Canine/feline cd20 binding epitope and compositions for binding thereto |
| WO2016016859A1 (en) * | 2014-07-31 | 2016-02-04 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Optimized cross-species specific bispecific single chain antibody constructs |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX2018009955A (es) | 2018-11-29 |
| ES2868650T3 (es) | 2021-10-21 |
| EP3416984B1 (en) | 2021-03-31 |
| CA3014461A1 (en) | 2017-08-24 |
| MX2022014375A (es) | 2022-12-15 |
| US20230257476A1 (en) | 2023-08-17 |
| US10519244B2 (en) | 2019-12-31 |
| CA3014461C (en) | 2023-02-28 |
| US20200131273A1 (en) | 2020-04-30 |
| CN108699152A (zh) | 2018-10-23 |
| WO2017142800A1 (en) | 2017-08-24 |
| JP6661019B2 (ja) | 2020-03-11 |
| AU2017219596A1 (en) | 2018-07-19 |
| NZ744192A (en) | 2019-11-29 |
| EP3416984A1 (en) | 2018-12-26 |
| AU2017219596B2 (en) | 2019-07-04 |
| DK3416984T3 (da) | 2021-04-26 |
| US20190194342A1 (en) | 2019-06-27 |
| BR112018016367A2 (pt) | 2019-01-22 |
| US20210163618A1 (en) | 2021-06-03 |
| KR102131544B1 (ko) | 2020-07-07 |
| JP2019507128A (ja) | 2019-03-14 |
| EA201891499A1 (ru) | 2019-01-31 |
| CN108699152B (zh) | 2022-08-19 |
| KR20180096804A (ko) | 2018-08-29 |
| US10941206B2 (en) | 2021-03-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10941206B2 (en) | Chimeric canine anti-CD20 antibody | |
| JP6611709B2 (ja) | 腫瘍成長および転移を阻害するための免疫調節療法との組み合わせでのセマフォリン−４ｄ阻害分子の使用 | |
| JP5950824B2 (ja) | 抗腫瘍抗体療法を増強するための方法 | |
| JP2020512354A (ja) | Ｐｄ−１のアンタゴニストと抗ｃｔｌａ４抗体との組み合わせでがんを処置するための組成物および方法 | |
| JP7419262B2 (ja) | 抗ｐｃｓｋ９抗体を含む製剤およびその使用 | |
| JP2023551559A (ja) | 抗ｃｄ１９併用療法 | |
| WO2010145895A1 (en) | Compositions containing antibodies for treating cd5+ hla-dr+ b or t cell related diseases | |
| WO2012119077A1 (en) | Co -administration of eribulin and farletuzumab for the treatment of breast cancer | |
| JP5566374B2 (ja) | 形質細胞の腫瘍性増殖をきたす疾患の治療薬 | |
| WO2018075408A1 (en) | Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin | |
| WO2021155840A1 (zh) | 抗pd-1抗体在治疗恶性肿瘤中的用途 | |
| US8309091B2 (en) | CEACAM8-related method for treating autoimmune diseases | |
| KR20190034238A (ko) | 종양 관련 대식세포를 표적화하는 항체 및 이의 용도 | |
| US20030180799A1 (en) | Antibodies against plasma cells | |
| AU2022386674A1 (en) | Methods to reverse treml1-induced immune suppression | |
| JP2023511331A (ja) | 骨髄腫細胞および卵巣がん細胞に特異的なヒト化抗体 | |
| EP4204003A1 (en) | Antibodies specific to ccl21 and methods of use | |
| EA046283B1 (ru) | Способы лечения рака с помощью комбинации средства на основе платины и конъюгата антитела к тканевому фактору с лекарственным средством |