EA038685B1 - Use of forskolin for adipogenesis inhibition and methods of estimating forskolin results - Google Patents
Use of forskolin for adipogenesis inhibition and methods of estimating forskolin results Download PDFInfo
- Publication number
- EA038685B1 EA038685B1 EA201791155A EA201791155A EA038685B1 EA 038685 B1 EA038685 B1 EA 038685B1 EA 201791155 A EA201791155 A EA 201791155A EA 201791155 A EA201791155 A EA 201791155A EA 038685 B1 EA038685 B1 EA 038685B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- adipogenesis
- stage
- forskolin
- medium
- adipocytes
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0653—Adipocytes; Adipose tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/01—Modulators of cAMP or cGMP, e.g. non-hydrolysable analogs, phosphodiesterase inhibitors, cholera toxin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
- G01N2333/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
- G01N2333/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Obesity (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
Abstract
Description
Перекрестная ссылка на родственные патентные заявкиCross-reference to related patent applications
В данной заявке, представляющей собой подачу согласно РСТ, испрашивается приоритет по непервоначальной заявке на патент США 14936830, поданной 10 ноября 2015 г.This PCT filing claims priority over non-original U.S. patent application 14,936,830, filed November 10, 2015.
Предшествующий уровень техники Область техникиPrior art Technical field
В общем, изобретение относится к пищевым добавкам. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способам сравнительной оценки ингибирования адипогенеза форсколином и сравнительной оценки усиления экспрессии секреторных факторов при использовании форсколина на определенной физиологической стадии и стадии развития системы клеток млекопитающего.In general, the invention relates to food additives. More specifically, the present invention relates to methods for comparatively assessing the inhibition of adipogenesis by forskolin and comparatively assessing the increase in expression of secretory factors when using forskolin at a particular physiological stage and stage of development of the mammalian cell system.
Описание предшествующего уровня техникиDescription of the prior art
Подразумевают, что нарушение энергетического баланса у млекопитающих является причиной распространенных во всем мире эпидемий заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ, что влечет изменения в образе жизни и особенностях питания, а также терапевтическое вмешательство. Современные знания о режимах питания, физических упражнениях, охране здоровья или стратегии применения лекарственных средств, однако, часто не позволяют поддерживать энергетический гомеостаз в организме млекопитающего, при котором оптимально достигнут совершенный баланс между накоплением энергии и расходом энергии (Elattar S. и Satyanarayana, Can Brown Fat Win the Battle against White Fat?, J. Cell. Physiol, 11 марта 2015; Zafrir B., Brown adipose tissue: research milestones of a potential player in human energy balance and obesity, Horm Metab Res, октябрь 2013, 45(11):774-85). Стремление к пониманию ключевых биологических процессов, контролирующих активность и дифференцировку бурых адипоцитов, является популярным, ввиду методов лечения, сфокусированных на развитии бурой жировой ткани (ВАТ) для энергетического гомеостаза (Giralt M., White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions? Endocrinology, сентябрь 2013, 154(9):2992-3000), когда чрезмерный избыток энергии эффективно компенсируется оптимальным расходом энергии. В настоящем изобретении обсуждают потенциал форсколина в отношении достижения энергетического баланса у млекопитающих. Соответственно, основная цель настоящего изобретения заключается в том, чтобы описатьEnergy imbalance in mammals is understood to be the cause of worldwide epidemics of metabolic disease, resulting in lifestyle and nutritional changes and therapeutic interventions. Current knowledge of dietary, exercise, health or drug strategies, however, often does not allow for the maintenance of energy homeostasis in the mammalian body, in which a perfect balance between energy storage and energy expenditure is optimally achieved (Elattar S. and Satyanarayana, Can Brown Fat Win the Battle against White Fat ?, J. Cell. Physiol, March 11, 2015; Zafrir B., Brown adipose tissue: research milestones of a potential player in human energy balance and obesity, Horm Metab Res, October 2013, 45 (11 ): 774-85). The pursuit of understanding the key biological processes that control the activity and differentiation of brown adipocytes is popular because of therapies focused on the development of brown adipose tissue (BAT) for energy homeostasis (Giralt M., White, brown, beige / brite: different adipose cells for different functions? Endocrinology, September 2013, 154 (9): 2992-3000), when an excessive excess of energy is effectively compensated by optimal energy expenditure. The present invention discusses the potential of forskolin in achieving energy balance in mammals. Accordingly, the main object of the present invention is to describe
А) способность форсколина предотвращать образование липидов в зрелых адипоцитах во время дифференцировки преадипоцитов в адипоциты, когда ингибирование адипогенеза (отложения жира) значительно усилено при введении (приведении в контакт) форсколина в преадипоциты, нежели в зрелые адипоциты;A) the ability of forskolin to prevent lipid formation in mature adipocytes during differentiation of preadipocytes into adipocytes, when inhibition of adipogenesis (fat deposition) is significantly enhanced by the introduction (contact) of forskolin into preadipocytes rather than mature adipocytes;
Б) способность форсколина усиливать экспрессию секретируемых факторов, которые селективно рекрутируют бурую жировую ткань (ВАТ), таких как костный морфогенетический белок-7 (ВМР-7), костный морфогенетический белок-4 (ВМР-4), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF-A) и митохондриальный разобщающий белок 1 (UCP1), где указанная усиленная экспрессия секретируемых факторов, которые селективно рекрутируют бурую жировую ткань (ВАТ), значительно более усилена при введении (приведении в контакт) форсколина в преадипоциты, чем в зрелые адипоциты. Другими словами, преадипоциты, обработанные форсколином, селективно способны к дифференцировке в ВАТ.B) the ability of forskolin to enhance the expression of secreted factors that selectively recruit brown adipose tissue (BAT), such as bone morphogenetic protein-7 (BMP-7), bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), vascular endothelial growth factor (VEGF- A) and mitochondrial uncoupling protein 1 (UCP1), where the aforementioned increased expression of secreted factors that selectively recruit brown adipose tissue (BAT) is significantly more enhanced when forskolin is introduced (brought into contact) into pre-adipocytes than into mature adipocytes. In other words, pre-adipocytes treated with forskolin are selectively capable of differentiating into BAT.
Согласно настоящему изобретению достигают указанных выше целей и обеспечивают дополнительные связанные с ними преимущества.The present invention achieves the above objectives and provides additional associated benefits.
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
В настоящем изобретении описаныThe present invention describes
А) способность форсколина предотвращать образование липидов в зрелых адипоцитах во время дифференцировки преадипоцитов в адипоциты, где ингибирование адипогенеза (отложения жира) значительно более усилено при введении форсколина в преадипоциты, чем в зрелые адипоциты;A) the ability of forskolin to prevent the formation of lipids in mature adipocytes during differentiation of pre-adipocytes into adipocytes, where inhibition of adipogenesis (fat deposition) is significantly more enhanced with the introduction of forskolin into pre-adipocytes than in mature adipocytes;
Б) способность форсколина усиливать экспрессию секреторных факторов, которые селективно рекрутируют бурую жировую ткань (ВАТ), таких как костный морфогенетический белок-7 (ВМР-7), костный морфогенетический белок-4 (ВМР-4), фактор роста эндотелия сосудов типа A (VEGF-A) и митохондриальный разобщающий белок 1 (UCP1), где указанная усиленная экспрессия секретируемых факторов, которые селективно рекрутируют бурую жировую ткань (ВАТ), значительно усилена при введении форсколина в преадипоциты, по сравнению с введением в зрелые адипоциты. Другими словами, преадипоциты, обработанные форсколином, селективно способны к дифференцировке в ВАТ.B) the ability of forskolin to enhance the expression of secretory factors that selectively recruit brown adipose tissue (BAT), such as bone morphogenetic protein-7 (BMP-7), bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), vascular endothelial growth factor type A ( VEGF-A) and mitochondrial uncoupling protein 1 (UCP1), where said increased expression of secreted factors that selectively recruit brown adipose tissue (BAT) is significantly enhanced when forskolin is administered to pre-adipocytes, compared to when administered to mature adipocytes. In other words, pre-adipocytes treated with forskolin are selectively capable of differentiating into BAT.
Преимущества настоящего изобретения включают демонстрацию способов сравнительной оценки ингибирования адипогенеза форсколином и сравнительной оценки усиления экспрессии секреторных факторов при использовании форсколина на определенной физиологической стадии и стадии развития системы клеток млекопитающего, где форсколин демонстрирует больший потенциал в отношении (i) ингибирования адипогенеза и (ii) усиления экспрессии секретируемых факторов, которые селективно рекрутируют бурую жировую ткань (ВАТ), таких как костный морфогенетический белок-7 (ВМР-7), костный морфогенетический белок-4 (ВМР-4), фактор роста эндотелия сосудов типа A (VEGF-A) и митохондриальный разобщающий белок 1 (UCP1), при введении в преадипоциты, чем в зрелые адипоциты.The advantages of the present invention include the demonstration of methods for comparative assessment of adipogenesis inhibition by forskolin and a comparative assessment of the increase in the expression of secretory factors when using forskolin at a certain physiological stage and the stage of development of the mammalian cell system, where forskolin shows greater potential in relation to (i) inhibition of adipogenesis and (ii) enhancement of expression secreted factors that selectively recruit brown adipose tissue (BAT), such as bone morphogenetic protein-7 (BMP-7), bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), vascular endothelial growth factor type A (VEGF-A) and mitochondrial uncoupling protein 1 (UCP1), when injected into pre-adipocytes than into mature adipocytes.
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения очевидны из следующего более подробного описания в совокупности с сопровождающими графическими материалами, которые иллюстрируют в качестве примера принцип данного изобретения.Other features and advantages of the present invention will be apparent from the following more detailed description in conjunction with the accompanying drawings, which illustrate, by way of example, the principle of the present invention.
- 1 038685- 1 038685
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
На фиг. 1 показано графическое представление ВМР-7 в супернатанте клеточной культуры культивируемых адипоцитов 3T3-L1 при добавлении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) соответственно перед дифференцировкой преадипоцитов в адипоциты и после дифференцировки преадипоцитов в адипоциты.FIG. 1 shows a graphical representation of BMP-7 in the cell culture supernatant of cultured 3T3-L1 adipocytes with the addition of forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml), respectively, before differentiation of pre-adipocytes into adipocytes and after differentiation of pre-adipocytes into adipocytes.
На фиг. 2 показано графическое представление ВМР-4 в супернатанте клеточной культуры культивируемых адипоцитов 3T3-L1 при добавлении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) соответственно перед дифференцировкой преадипоцитов в адипоциты и после дифференцировки преадипоцитов в адипоциты.FIG. 2 shows a graphical representation of BMP-4 in the cell culture supernatant of cultured adipocytes 3T3-L1 with the addition of forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml), respectively, before the differentiation of pre-adipocytes into adipocytes and after differentiation of pre-adipocytes into adipocytes.
На фиг. 3 показано графическое представление VEGF-A в супернатанте клеточной культуры культивируемых адипоцитов 3T3-L1 при добавлении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) соответственно перед дифференцировкой преадипоцитов в адипоциты и после дифференцировки преадипоцитов в адипоциты.FIG. 3 shows a graphical representation of VEGF-A in the cell culture supernatant of cultured adipocytes 3T3-L1 with the addition of forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml), respectively, before differentiation of pre-adipocytes into adipocytes and after differentiation of pre-adipocytes into adipocytes.
На фиг. 4 показано графическое представление UCP1 в супернатанте клеточной культуры культивируемых адипоцитов 3T3-L1 при добавлении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) соответственно перед дифференцировкой преадипоцитов в адипоциты и после дифференцировки преадипоцитов в адипоциты.FIG. 4 shows a graphical representation of UCP1 in the cell culture supernatant of cultured 3T3-L1 adipocytes with the addition of forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml), respectively, before differentiation of pre-adipocytes into adipocytes and after differentiation of pre-adipocytes into adipocytes.
Подробное описание наиболее предпочтительных воплощений (фиг. 1, 2, 3 и 4)Detailed Description of the Most Preferred Embodiments (Figures 1, 2, 3 and 4)
В наиболее предпочтительном воплощении настоящее изобретение относится к способу сравнительной оценки ингибирования адипогенеза форсколином при добавлении форсколина отдельно к преадипоцитам перед дифференцировкой и к зрелым адипоцитам, причем указанный способ включает следующие стадии:In a most preferred embodiment, the present invention relates to a method for comparatively assessing the inhibition of adipogenesis by forskolin by adding forskolin separately to pre-adipocytes prior to differentiation and to mature adipocytes, said method comprising the steps of:
A) посев преадипоцитов млекопитающих в лунки микропланшетов, где приблизительно 60х104 клеток высевают в течение 48-72 ч для получения 70-80% конфлюентности;A) plating mammalian pre-adipocytes into microplate wells, where approximately 60x10 4 cells are plated for 48-72 hours to obtain 70-80% confluence;
Б) добавление форсколина в концентрациях 50 мкг/мл и 100 мкг/мл в предварительно засеянные микропланшеты стадии А, состоящие из недифференцированных преадипоцитов;B) addition of forskolin at concentrations of 50 μg / ml and 100 μg / ml in pre-seeded microplates of stage A, consisting of undifferentiated pre-adipocytes;
B) добавление в лунки 200 мкл свежеприготовленной среды для индукции адипогенеза;B) adding to the wells 200 μl of freshly prepared medium for the induction of adipogenesis;
Г) добавление 200 мкл свежеприготовленной среды для развития адипогенеза после 72 ч инкубации со средой для индукции адипогенеза на стадии В;D) adding 200 μl of freshly prepared medium for the development of adipogenesis after 72 h of incubation with medium for the induction of adipogenesis at stage B;
Д) инкубирование клеток, обработанных форсколином, средой для индукции адипогенеза и средой для развития адипогенеза в течение 48 ч в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2 и 95% воздуха, при 37°C;E) incubation of cells treated with forskolin, medium for the induction of adipogenesis and medium for the development of adipogenesis for 48 hours in a humidified atmosphere containing 5% CO 2 and 95% air at 37 ° C;
Е) фиксирование клеток стадии Д посредством добавления 100 мкл 10% формалина и окрашивание с использованием масляного красного О;F) fixation of stage D cells by adding 100 μl of 10% formalin and staining with oil red O;
Ж) снятие значений оптической плотности клеток стадии Е при 492 нм в микропланшетном ридере и выражение результатов в виде значений 50% ингибирующей концентрации (IC50) с использованием программного обеспечения GraphPad Prism;G) Reading the optical density of the stage E cells at 492 nm in a microplate reader and expressing the results as 50% inhibitory concentration (IC 50 ) values using GraphPad Prism software;
З) расчет выраженного в процентах ингибирования адипогенеза в клетках с использованием формулы С-Т/Тх100, где С представляет собой поглощение масляного красного О в дифференцирующихся/недифференцированных клетках и Т представляет собой поглощение масляного красного О в дифференцирующихся/недифференцированных клетках, обработанных образцом;H) Calculation of the percentage inhibition of adipogenesis in cells using the formula C-T / Tx100, where C is the uptake of oil red O in differentiating / undifferentiated cells and T is the uptake of oil red O in differentiating / undifferentiated cells treated with the sample;
И) добавление в лунки 200 мкл свежеприготовленной среды для индукции адипогенеза стадии А;I) adding 200 μl of freshly prepared medium to the wells for the induction of stage A adipogenesis;
К) добавление 200 мкл свежеприготовленной среды для развития адипогенеза, содержащей возрастающие концентрации форсколина 50 мкг/мл и 100 мкг/мл соответственно, в лунки стадии И после 72 ч инкубации со средой для индукции адипогенеза;K) adding 200 μl of freshly prepared medium for the development of adipogenesis, containing increasing concentrations of forskolin of 50 μg / ml and 100 μg / ml, respectively, into the wells of stage I after 72 h of incubation with a medium for induction of adipogenesis;
Л) инкубирование клеток, обработанных форсколином, средой для индукции адипогенеза и средой для развития адипогенеза в течение 48 ч в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2 и 95% воздуха, при 37°C;K) incubation of cells treated with forskolin, medium for the induction of adipogenesis and medium for the development of adipogenesis for 48 hours in a humidified atmosphere containing 5% CO2 and 95% air at 37 ° C;
М) фиксирование клеток стадии Л посредством добавления 100 мкл 10% формалина и окрашивание с использованием масляного красного О;M) fixation of stage L cells by adding 100 μl of 10% formalin and staining with oil red O;
Н) снятие значений оптической плотности клеток стадии М при 492 нм в микропланшетном ридере и выражение результатов в виде значений 50% ингибирующей концентрации (IC50) с использованием программного обеспечения GraphPad Prism;H) Reading the optical density values of M cells at 492 nm in a microplate reader and expressing the results as 50% inhibitory concentration (IC 50 ) values using GraphPad Prism software;
О) расчет выраженного в процентах ингибирования адипогенеза в клетках с использованием формулы С-Т/Тх100, где С представляет собой поглощение масляного красного О в дифференцирующихся/недифференцированных клетках и Т представляет собой поглощение масляного красного О в дифференцирующихся/недифференцированных клетках, обработанных образцом; иO) Calculation of the percentage inhibition of adipogenesis in cells using the formula C-T / Tx100, where C is the uptake of oil red O in differentiating / undifferentiated cells and T is the uptake of oil red O in differentiating / undifferentiated cells treated with the sample; and
П) сравнение выраженного в процентах ингибирования адипогенеза в клетках стадий З и О, где стадию А повторяют перед стадией И.P) Comparison of percentage inhibition of adipogenesis in stage 3 and stage 0 cells, where stage A is repeated before stage I.
В другом наиболее предпочтительном воплощении настоящее изобретение также относится к способу сравнительной оценки усиления экспрессии секреторных факторов, которые селективно рекрутиIn another most preferred embodiment, the present invention also relates to a method for comparatively assessing the enhancement of expression of secretory factors that selectively recruit
- 2 038685 руют бурую жировую ткань (ВАТ), при введении форсколина в преадипоциты и в зрелые адипоциты, причем указанный способ включает следующие стадии:- 2 038685 brown adipose tissue (BAT) is recovered by injecting forskolin into pre-adipocytes and mature adipocytes, the method comprising the following steps:
A) посев преадипоцитов млекопитающих в лунки микропланшетов, где приблизительно 60x104 клеток высевают в течение 48-72 ч для получения 70-80% конфлюентности;A) plating mammalian preadipocytes into microplate wells, where approximately 60x104 cells are plated for 48-72 hours to obtain 70-80% confluence;
Б) добавление форсколина в концентрациях 50 мкг/мл и 100 мкг/мл в предварительно засеянные микропланшеты стадии А, состоящие из недифференцированных преадипоцитов;B) addition of forskolin at concentrations of 50 μg / ml and 100 μg / ml in pre-seeded microplates of stage A, consisting of undifferentiated pre-adipocytes;
B) добавление в лунки 200 мкл свежеприготовленной среды для индукции адипогенеза;B) adding to the wells 200 μl of freshly prepared medium for the induction of adipogenesis;
Г) добавление 200 мкл свежеприготовленной среды для развития адипогенеза после 72 ч инкубации со средой для индукции адипогенеза на стадии В;D) adding 200 μl of freshly prepared medium for the development of adipogenesis after 72 h of incubation with medium for the induction of adipogenesis at stage B;
Д) инкубирование клеток, обработанных форсколином, средой для индукции адипогенеза и средой для развития адипогенеза, в течение 48 ч в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2 и 95% воздуха, при 37°C;E) incubation of cells treated with forskolin, medium for the induction of adipogenesis and medium for the development of adipogenesis, for 48 hours in a humidified atmosphere containing 5% CO 2 and 95% air at 37 ° C;
Е) количественное определение усиления экспрессии секреторных факторов в клеточном супернатанте;E) quantifying the increase in the expression of secretory factors in the cell supernatant;
Ж) добавление в лунки 200 мкл свежеприготовленной среды для индукции адипогенеза стадии А;G) adding 200 μl of freshly prepared medium to the wells for the induction of stage A adipogenesis;
З) добавление 200 мкл свежеприготовленной среды для развития адипогенеза, содержащей возрастающие концентрации форсколина 50 мкг/мл и 100 мкг/мл соответственно, в лунки стадии Ж после 72 ч инкубации со средой для индукции адипогенеза;H) adding 200 μl of freshly prepared medium for the development of adipogenesis, containing increasing concentrations of forskolin of 50 μg / ml and 100 μg / ml, respectively, into the wells of stage G after 72 h of incubation with medium for the induction of adipogenesis;
И) инкубирование клеток, обработанных форсколином, средой для индукции адипогенеза и средой для развития адипогенеза, в течение 48 ч в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2 и 95% воздуха при 37°C; иI) incubation of cells treated with forskolin, medium for the induction of adipogenesis and medium for the development of adipogenesis, for 48 hours in a humidified atmosphere containing 5% CO 2 and 95% air at 37 ° C; and
К) количественное определение усиления экспрессии секреторных факторов в клеточном супернатанте;K) quantitative determination of the increase in the expression of secretory factors in the cell supernatant;
Л) сравнение усиления экспрессии секреторных факторов в стадиях Е и К, где стадию А повторяют перед стадией Ж, и где секреторные факторы выбраны из группы, состоящей из костного морфогенетического белка-7 (ВМР-7), костного морфогенетического белка-4 (ВМР-4), фактора роста эндотелия сосудов типа А (VEGF-А) и митохондриального разобщающего белка 1 (UCP1).L) Comparison of the increase in the expression of secretory factors in stages E and K, where stage A is repeated before stage G, and where the secretory factors are selected from the group consisting of bone morphogenetic protein-7 (BMP-7), bone morphogenetic protein-4 (BMP- 4), vascular endothelial growth factor type A (VEGF-A), and mitochondrial uncoupling protein 1 (UCP1).
В еще одном наиболее предпочтительном воплощении изобретение относится к применению форсколина для ингибирования адипогенеза в адипоцитах млекопитающих.In yet another most preferred embodiment, the invention relates to the use of forskolin for inhibiting adipogenesis in mammalian adipocytes.
Иллюстративные примерыIllustrative examples
В качестве иллюстративных примеров наиболее предпочтительных воплощений, изложенных выше в данном документе, следующие результаты представлены для того, чтобы показать, что форсколин при введении в возрастающей концентрации является более эффективным в (а) предотвращении адипогенеза и (б) также в стимулировании экспрессии секреторных факторов, таких как ВМР-7, ВМР-4, VEGF-А и UCP1, которые рекрутируют бурые адипоциты, при введении на стадии преадипоцитов, чем когда произошло превращение преадипоцитов в адипоциты.As illustrative examples of the most preferred embodiments set forth above in this document, the following results are presented in order to show that forskolin when administered at increasing concentrations is more effective in (a) preventing adipogenesis and (b) also in stimulating the expression of secretory factors. such as BMP-7, BMP-4, VEGF-A and UCP1, which recruit brown adipocytes when administered at the pre-adipocyte stage than when pre-adipocytes are converted to adipocytes.
Результат 1. Предотвращение адипогенеза.Result 1. Prevention of adipogenesis.
В таблице показано, что при каждой тестируемой концентрации форсколина введение форсколина на стадии преадипоцитов млекопитающих оказывает сильное действие на предотвращение адипогенеза по сравнению с действием при введении после дифференцировки преадипоцитов в адипоциты. Двукратное или более чем двукратное ингибирование, выраженное в процентах, наблюдают при введении форсколина на стадии преадипоцитов по сравнению с введением на стадии адипоцитов.The table shows that at each concentration of forskolin tested, administration of forskolin at the mammalian pre-adipocyte stage has a potent effect on the prevention of adipogenesis compared to the effect of administration after differentiation of pre-adipocytes into adipocytes. Twofold or more than twofold inhibition, expressed as a percentage, is observed with the administration of forskolin at the pre-adipocyte stage as compared to the administration at the adipocyte stage.
Результат 2. Экспрессия секреторных белков, которые рекрутируют бурые адипоциты.Result 2. Expression of secretory proteins that recruit brown adipocytes.
А. ВМР-7.A. BMP-7.
Биологическую роль ВМР-7 как рекрутера линии дифференцировки бурых адипоцитов обсуждают в следующей научной литературе:The biological role of BMP-7 as a recruiter of the lineage of differentiation of brown adipocytes is discussed in the following scientific literature:
1. Mathew Harms и Patrick Seale, Brown and beige fat: development, function and therapeutic potential, Nature Medicine, т. 19, № 10, октябрь 2013, стр. 1252-1263.1. Mathew Harms and Patrick Seale, Brown and beige fat: development, function and therapeutic potential, Nature Medicine, vol. 19, no. 10, October 2013, pp. 1252-1263.
2. BMP7 Activates Brown Adipose Tissue and Reduces Diet-Induced Obesity at Sub thermoneutrality. Mariette R. Boon, опубликовано 16 сентября 2013, PLOS One.2. BMP7 Activates Brown Adipose Tissue and Reduces Diet-Induced Obesity at Sub thermoneutrality. Mariette R. Boon, published September 16, 2013, PLOS One.
3. New role of bone morphogenetic protein 7 in brown adipogenesis and energy expenditure. Tseng и др. Nature, 21 августа 2008; 454(7207): 1000-4, doi: 10.1038/nature07221.3. New role of bone morphogenetic protein 7 in brown adipogenesis and energy expenditure. Tseng et al. Nature, August 21, 2008; 454 (7207): 1000-4, doi: 10.1038 / nature07221.
- 3 038685- 3 038685
4. Transcriptional Control of Brown Fat Development. Kajimure и др. Cell Metabolism; т. 11, изд. 4, 7 апреля 2010, стр. 257-262.4. Transcriptional Control of Brown Fat Development. Kajimure et al. Cell Metabolism; vol. 11, ed. 4, 7 April 2010, pp. 257-262.
Иммуноанализы (иммуноферментный анализ) для количественной оценки ВМР-7 в супернатанте клеточной культуры при введении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) на стадии преадипоцитов и сразу после того, как произошла дифференцировка в адипоциты, показали, что форсколин сильно повышал экспрессию ВМР-7 на стадии преадипоцитов по сравнению со стадией адипоцитов.Immunoassays (enzyme-linked immunosorbent assay) to quantify BMP-7 in cell culture supernatant when forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml) was administered at the pre-adipocyte stage and immediately after differentiation into adipocytes, showed that forskolin strongly increased expression BMP-7 at the pre-adipocyte stage versus the adipocyte stage.
Таким образом, при сопоставлении с приведенной выше литературой можно сделать вывод о том, что форсколин демонстрирует больший потенциал преадипоцитов в отношении превращения бурого жира (фиг. 1), чем полностью дифференцированных белых адипоцитов. Пример, представленный на фиг. 1, обеспечивает обоснованность описанного наиболее предпочтительного воплощения, что форсколин направляет селективную дифференцировку преадипоцитов млекопитающих в бурые адипоциты, делая возможной экспрессию секреторного фактора ВМР-7.Thus, when compared with the above literature, it can be concluded that forskolin demonstrates a greater potential of pre-adipocytes in relation to the conversion of brown fat (Fig. 1) than fully differentiated white adipocytes. The example shown in FIG. 1, provides the rationale for the described most preferred embodiment that forskolin directs selective differentiation of mammalian pre-adipocytes into brown adipocytes, allowing expression of the secretory factor BMP-7.
Б. ВМР-4.B. VMR-4.
Действуя вместе с ВМР-7 ВМР-4 представляет собой новый адипокин и воздействует на адипогенез и превращение белых адипоцитов в бурые (Qian S.W. и др. Proc. Natl. Acad. Sci USA 110: E798-807, 2013). Иммуноанализы (иммуноферментный анализ) для количественной оценки ВМР-4 в супернатанте клеточной культуры при введении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) на стадии преадипоцитов и сразу после того, как произошла дифференцировка в адипоциты, показали, что форсколин сильно повышал экспрессию ВМР-4 на стадии преадипоцитов по сравнению со стадией адипоцитов.Together with BMP-7, BMP-4 is a novel adipokine and acts on adipogenesis and the conversion of white adipocytes to brown (Qian S.W. et al. Proc. Natl. Acad. Sci USA 110: E798-807, 2013). Immunoassays (enzyme-linked immunosorbent assay) for the quantitative assessment of BMP-4 in cell culture supernatant when forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml) was injected at the pre-adipocyte stage and immediately after differentiation into adipocytes, showed that forskolin strongly increased the expression BMP-4 at the pre-adipocyte stage versus the adipocyte stage.
Таким образом, при сопоставлении с приведенной выше литературой можно сделать вывод о том, что форсколин демонстрирует больший потенциал в отношении превращения белых преадипоцитов в бежевые адипоциты (адипоциты, подобные бурым) (фиг. 2) в результате сочетания усиленной экспрессии и биологического действия секреторных факторов ВМР-4 и ВМР-7. Пример, представленный на фиг. 2, обеспечивает обоснованность наиболее предпочтительного воплощения, что форсколин обеспечивает превращение белых преадипоцитов в бежевые адипоциты.Thus, when compared with the above literature, it can be concluded that forskolin shows a greater potential for the transformation of white pre-adipocytes into beige adipocytes (adipocytes like brown) (Fig. 2) as a result of the combination of enhanced expression and biological action of BMP secretory factors -4 and BMP-7. The example shown in FIG. 2, provides the rationale for the most preferred embodiment that forskolin converts white pre-adipocytes to beige adipocytes.
В. VEGF-A.B. VEGF-A.
Сверхэкспрессия VEGF-A приводит к повышению термогенеза в бурой жировой ткани (ВАТ), а также стимулирует ВАТ-подобный фенотип в депо белой жировой ткани. У мышей с алиментарным ожирением локальное введение VEGF-A в ВАТ избавляет от капиллярного разрежения, восстанавливает дисфункцию бурых адипоцитов и снижает вредные воздействия на метаболизм глюкозы и липидов, вызванные рационом с высоким содержанием жиров. Данные результаты демонстрируют непосредственную положительную роль VEGF-A в активации и разрастании ВАТ. Сверхэкспрессия VAGF-A также оказывает свое действие на макрофаги посредством усиления рекрутирования противовоспалительных макрофагов М2 в жировые депо. Сниженный уровень ожирения и противовоспалительная среда, вызванные VEGF-A в жировой ткани, обуславливает понижение инсулинорезистентности у трансгенных мышей (Bagchi и др., Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance, FASEB J. 27, 3257-3271 (2013). Иммуноанализы (иммуноферментный анализ) для количественной оценки VEGF-A в супернатанте клеточной культуры при введении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) на стадии преадипоцитов и сразу после того, как произошла дифференцировка в адипоциты, показали, что форсколин сильно повышал экспрессию VEGF-A на стадии преадипоцитов по сравнению со стадией адипоцитов. Таким образом, при сопоставлении с приведенной выше литературой можно сделать вывод о том, что форсколин демонстрирует больший потенциал в отношении превращения белых преадипоцитов в клетки, подобные бурым адипоцитам (бежевые) (фиг. 3), среди депо белых адипоцитов в организме млекопитающего.Overexpression of VEGF-A leads to an increase in thermogenesis in brown adipose tissue (BAT) and also stimulates a BAT-like phenotype in a depot of white adipose tissue. In obese mice, local administration of VEGF-A to BAT eliminates capillary pressure, restores brown adipocyte dysfunction, and reduces deleterious effects on glucose and lipid metabolism caused by a high-fat diet. These results demonstrate a direct positive role for VEGF-A in the activation and proliferation of BAT. Overexpression of VAGF-A also exerts its effect on macrophages by enhancing the recruitment of anti-inflammatory M2 macrophages to fat depots. The reduced level of obesity and anti-inflammatory environment caused by VEGF-A in adipose tissue leads to a decrease in insulin resistance in transgenic mice (Bagchi et al., Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance, FASEB J. 27, 3257-3271 ( 2013) Immunoassays (enzyme-linked immunosorbent assay) for the quantitative assessment of VEGF-A in cell culture supernatant with the introduction of forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml) at the pre-adipocyte stage and immediately after differentiation into adipocytes showed that forskolin greatly increased the expression of VEGF-A at the pre-adipocyte stage compared to the adipocyte stage.Therefore, when compared with the above literature, it can be concluded that forskolin shows a greater potential for converting white pre-adipocytes into cells like brown adipocytes (beige) ( Fig. 3), among the depot of white adipocytes in the body of a mammal.
Г. Разобщающий белок 1 (UCP1).D. Uncoupling protein 1 (UCP1).
Система термогенеза, которая эволюционировала для защиты организма от гипотермии, основана на разобщении окислительного фосфорилирования в бурых адипоцитах посредством митохондриального разобщающего белка 1 (UCP1). Показано, что повышенная регуляция UCP1 посредством генетических манипуляций или лекарственных агентов может уменьшать ожирение и улучшать чувствительность к инсулину (International Journal of Obesity (2008) 32, S32-S38; doi:10.1038/ijo.2008.236 UCP1: its involvement and utility in obesity. L.P. Kozak и R. Anunciado-Koza). Иммуноанализы (иммуноферментный анализ) для количественной оценки UCP1 в супернатанте клеточной культуры при введении форсколина (50 мкг/мл и 100 мкг/мл) на стадии преадипоцитов и сразу после того, как произошла дифференцировка в адипоциты, показали, что форсколин сильно повышал экспрессию UCP1 на стадии преадипоцитов по сравнению со стадией адипоцитов. Таким образом, при сопоставлении с приведенной выше литературой, можно сделать вывод о том, что форсколин демонстрирует больший потенциал в отношении превращения преадипоцитов в ВАТ-подобные или бурые адипоциты, и усиленная экспрессия UCP1 в данных клетках, как можно ожидать, стимулирует обеспечение энергетического баланса через соответствующий расход энергии (фиг. 4).The thermogenesis system, which has evolved to protect the body from hypothermia, is based on the uncoupling of oxidative phosphorylation in brown adipocytes through mitochondrial uncoupling protein 1 (UCP1). It has been shown that upregulation of UCP1 through genetic manipulation or drug agents can reduce obesity and improve insulin sensitivity (International Journal of Obesity (2008) 32, S32-S38; doi: 10.1038 / ijo.2008.236 UCP1: its involvement and utility in obesity. LP Kozak and R. Anunciado-Koza). Immunoassays (enzyme-linked immunosorbent assay) to quantify UCP1 in cell culture supernatant when injected forskolin (50 μg / ml and 100 μg / ml) at the pre-adipocyte stage and immediately after differentiation into adipocytes showed that forskolin strongly increased the expression of UCP1 at pre-adipocyte stage versus adipocyte stage. Thus, when compared with the above literature, it can be concluded that forskolin demonstrates a greater potential for converting pre-adipocytes into BAT-like or brown adipocytes, and increased expression of UCP1 in these cells can be expected to stimulate energy balance through the corresponding energy consumption (Fig. 4).
Уже сообщалось, что введение форсколина у человека явно не вызывает клинически значимых побочных эффектов (Shonteh Henderson и др., Effect of Coleus forskolii supplementation on body composition and haematological profiles in mildly overweight women, J. Int. Soc. Sports Nutr. 2005; 2(2): 54-62). ИсследоIt has already been reported that administration of forskolin in humans clearly does not cause clinically significant side effects (Shonteh Henderson et al., Effect of Coleus forskolii supplementation on body composition and haematological profiles in mildly overweight women, J. Int. Soc. Sports Nutr. 2005; 2 (2): 54-62). Explored
- 4 038685 вание устанавливает, что добавление пищевой добавки на основе форсколина Forslean® (250 мг 10% экстракта Coleus forskolii, 25 мг форсколина) два раза в сутки в течение 12 недель явно не оказывало клинических побочных эффектов. Таким образом, можно сделать вывод о том, что иллюстративные примеры in vitro, включенные выше в данный документ, с достижением энергетического баланса в системах адипоцитов млекопитающих, также применимы для исследований in vivo на животных (млекопитающих), включая человека.- 4038685 found that the addition of Forslean® forskolin-based dietary supplement (250 mg 10% Coleus forskolii extract, 25 mg forskolin) twice daily for 12 weeks had no apparent clinical side effects. Thus, it can be concluded that the illustrative in vitro examples included above in this document, with the achievement of energy balance in mammalian adipocyte systems, are also applicable for in vivo studies in animals (mammals), including humans.
Несмотря на то что изложенное выше изобретение описывают довольно подробно путем иллюстрации и примера в целях ясности понимания, очевидно, что в пределах объема прилагаемой формулы изобретения можно осуществлять на практике определенные изменения и модификации.While the foregoing invention has been described in some detail by way of illustration and example for purposes of clarity of understanding, it will be appreciated that certain changes and modifications may be practiced within the scope of the appended claims.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14/936,830 US10085963B2 (en) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Process and compositions for achieving mammalian energy balance |
| PCT/US2015/060176 WO2017082896A1 (en) | 2015-11-10 | 2015-11-11 | Process and compositions for achieving mammalian energy balance |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201791155A1 EA201791155A1 (en) | 2017-09-29 |
| EA038685B1 true EA038685B1 (en) | 2021-10-05 |
Family
ID=58668245
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201791155A EA038685B1 (en) | 2015-11-10 | 2015-11-11 | Use of forskolin for adipogenesis inhibition and methods of estimating forskolin results |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10085963B2 (en) |
| EP (1) | EP3194575B1 (en) |
| JP (1) | JP6472453B2 (en) |
| KR (1) | KR102169620B1 (en) |
| CN (1) | CN108138141B (en) |
| AU (1) | AU2015351423B2 (en) |
| EA (1) | EA038685B1 (en) |
| MX (1) | MX2018004735A (en) |
| MY (1) | MY188869A (en) |
| PL (1) | PL3194575T3 (en) |
| SG (1) | SG11201801873TA (en) |
| WO (1) | WO2017082896A1 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019073414A1 (en) | 2017-10-11 | 2019-04-18 | Telefonaktiebolaget Lm Ericsson (Publ) | Uci on grant-free pusch |
| JP2023554642A (en) * | 2020-12-17 | 2023-12-28 | サミ－サビンサ グループ リミテッド | Anti-obesity ability of bisdemethoxycurcumin composition |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050158706A1 (en) * | 1999-01-29 | 2005-07-21 | Artecel Sciences, Inc. | Methods and compositions for the differentiation of human preadipocytes into adipocytes |
| WO2013188138A1 (en) * | 2012-06-11 | 2013-12-19 | The Regents Of The University Of California | Inhibitors of hippo-yap signaling pathway |
| US20150030662A1 (en) * | 2012-03-12 | 2015-01-29 | National University Of Singapore | Generation of Brown Adipose Tissue (BAT) from Mesenchymal Cells |
| US20150216935A1 (en) * | 2012-08-09 | 2015-08-06 | Brown University | Autologous Cell-Based Therapy for Treating Obesity |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06133731A (en) * | 1992-10-23 | 1994-05-17 | Zenetsukusu Kk | Diet food |
| US6153432A (en) * | 1999-01-29 | 2000-11-28 | Zen-Bio, Inc | Methods for the differentiation of human preadipocytes into adipocytes |
| JP4432069B2 (en) * | 2002-09-03 | 2010-03-17 | ビーエイチエヌ株式会社 | Obesity inhibitor |
| US20090098220A1 (en) * | 2007-10-12 | 2009-04-16 | Lance Ashworth | Liquid pharmaceutical preparation comprising forskolin for promoting lean body mass |
| FR2960549B1 (en) * | 2010-05-25 | 2015-06-19 | Univ Paris Curie | PROCESS FOR CULTIVATION OF ADIPOCYTES |
| US8577013B1 (en) * | 2011-01-10 | 2013-11-05 | West Corporation | Automatic communications forwarding to displaced employees |
| CA2863710A1 (en) * | 2012-02-29 | 2013-09-06 | Avon Products, Inc. | Use of cpt-1 modulators and compositions thereof |
| EP2877670A4 (en) * | 2012-08-31 | 2016-07-27 | Halliburton Energy Services Inc | System and method for measuring gaps using an opto-analytical device |
| US20170014455A1 (en) * | 2014-03-13 | 2017-01-19 | The J. David Gladstone Instiutes, a testamentary trust established under the Will of J. David Glads | Inducing brown fat fate and function |
-
2015
- 2015-11-10 US US14/936,830 patent/US10085963B2/en active Active
- 2015-11-11 KR KR1020187012914A patent/KR102169620B1/en active IP Right Grant
- 2015-11-11 MY MYPI2018700903A patent/MY188869A/en unknown
- 2015-11-11 EP EP15888720.8A patent/EP3194575B1/en active Active
- 2015-11-11 WO PCT/US2015/060176 patent/WO2017082896A1/en active Application Filing
- 2015-11-11 MX MX2018004735A patent/MX2018004735A/en unknown
- 2015-11-11 PL PL15888720T patent/PL3194575T3/en unknown
- 2015-11-11 AU AU2015351423A patent/AU2015351423B2/en active Active
- 2015-11-11 CN CN201580083933.4A patent/CN108138141B/en active Active
- 2015-11-11 EA EA201791155A patent/EA038685B1/en unknown
- 2015-11-11 JP JP2016547618A patent/JP6472453B2/en active Active
- 2015-11-11 SG SG11201801873TA patent/SG11201801873TA/en unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050158706A1 (en) * | 1999-01-29 | 2005-07-21 | Artecel Sciences, Inc. | Methods and compositions for the differentiation of human preadipocytes into adipocytes |
| US20150030662A1 (en) * | 2012-03-12 | 2015-01-29 | National University Of Singapore | Generation of Brown Adipose Tissue (BAT) from Mesenchymal Cells |
| WO2013188138A1 (en) * | 2012-06-11 | 2013-12-19 | The Regents Of The University Of California | Inhibitors of hippo-yap signaling pathway |
| US20150216935A1 (en) * | 2012-08-09 | 2015-08-06 | Brown University | Autologous Cell-Based Therapy for Treating Obesity |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| QIAN et al., BMP4-mediated brown fat-like changes in white adipose tissue alter glucose and energy homeostasis. Proc. Natl. Acad. Sci USA, 26 February 2013, Vol. 110, No 9, pp. E798-807. Especially abstract * |
| SUN et al., Brown adipose tissue derived VEGF-A, modulates cold tolerance and energy expenditure. Mol Metab, July 2014, Vol. 3, No 4, pp. 474, 483. Especially abstract * |
| YANG et al., cAMP/PKA Regulates Osteogenesis, Adipogenesis and Ratio of RANKL/OPG mRNA Abstract - Expression in Mesenchymal Stem Cells by Suppressing Leptin. PLOS ONE, 2008, Vol. 3, No 2, page e1540. Especially abstract * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20170128410A1 (en) | 2017-05-11 |
| EP3194575B1 (en) | 2020-04-29 |
| CN108138141A (en) | 2018-06-08 |
| JP2018508179A (en) | 2018-03-29 |
| WO2017082896A1 (en) | 2017-05-18 |
| KR20180057718A (en) | 2018-05-30 |
| EP3194575A1 (en) | 2017-07-26 |
| AU2015351423B2 (en) | 2018-08-09 |
| AU2015351423A2 (en) | 2017-08-24 |
| JP6472453B2 (en) | 2019-02-20 |
| EA201791155A1 (en) | 2017-09-29 |
| SG11201801873TA (en) | 2018-05-30 |
| US10085963B2 (en) | 2018-10-02 |
| CN108138141B (en) | 2021-12-03 |
| MX2018004735A (en) | 2018-07-06 |
| PL3194575T3 (en) | 2020-11-02 |
| NZ720422A (en) | 2019-08-30 |
| KR102169620B1 (en) | 2020-10-23 |
| AU2015351423A1 (en) | 2017-05-25 |
| MY188869A (en) | 2022-01-11 |
| EP3194575A4 (en) | 2017-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Muscle‐bone crosstalk and potential therapies for sarco‐osteoporosis | |
| Zhang et al. | Irisin exerts dual effects on browning and adipogenesis of human white adipocytes | |
| Kawao et al. | Interactions between muscle tissues and bone metabolism | |
| Li et al. | Myokine IL-15 regulates the crosstalk of co-cultured porcine skeletal muscle satellite cells and preadipocytes | |
| Irving et al. | Does IRISIN have a BRITE future as a therapeutic agent in humans? | |
| Sheriff et al. | Des-acyl ghrelin exhibits pro-anabolic and anti-catabolic effects on C2C12 myotubes exposed to cytokines and reduces burn-induced muscle proteolysis in rats | |
| Chen et al. | Ghrelin induces cell migration through GHSR1a-mediated PI3K/Akt/eNOS/NO signaling pathway in endothelial progenitor cells | |
| WO2017009263A1 (en) | Method for obtaining human brown/beige adipocytes | |
| Hamrick et al. | Injections of leptin into rat ventromedial hypothalamus increase adipocyte apoptosis in peripheral fat and in bone marrow | |
| Bei et al. | Lymphangiogenesis contributes to exercise-induced physiological cardiac growth | |
| Kwan | Osteoporosis: From osteoscience to neuroscience and beyond | |
| Poretsky et al. | Reproductive effects of irisin: initial in vitro studies | |
| Lamers et al. | Differential impact of oleate, palmitate, and adipokines on expression of NF-κB target genes in human vascular smooth muscle cells | |
| EA038685B1 (en) | Use of forskolin for adipogenesis inhibition and methods of estimating forskolin results | |
| Xiao et al. | Calorie restriction combined with high-intensity interval training promotes browning of white adipose tissue by activating the PPARγ/PGC-1α/UCP1 pathway | |
| Ambati et al. | Central leptin versus ghrelin: effects on bone marrow adiposity and gene expression | |
| Bonetto et al. | Bone and muscle | |
| KR20160137864A (en) | Pharmaceutical Compositions for Improving or Treating Muscle Atrophy Comprising Conditioned Medium of Stem Cells Derived from Umbilical Cord | |
| Kartika et al. | Role of myostatin protein in sarcopenia (aging muscle) after conditioned medium umbilical cord mesenchymal stem cells (secretome) therapy: mini review | |
| Kim et al. | Mesenchymal stem cells suppress muscle atrophy induced by hindlimb suspension | |
| Fu et al. | Bone marrow sympathetic activation regulates post-myocardial infarction megakaryocyte expansion but not platelet production | |
| Rajic et al. | A novel dairy-derived isolate that inhibits adipogenesis and significantly reduces weight gain in a high fat animal model | |
| CA2934156A1 (en) | Use of forskolin in the treatment of obesity | |
| Wang et al. | FAP Beige Adipogenesis in Volumetric Muscle Loss | |
| NZ720422B (en) | Process and compositions for achieving mammalian energy balance |