EA032485B1

EA032485B1 - Вакцина живая сухая против чумы верблюдов

Info

Publication number: EA032485B1
Application number: EA201600671A
Authority: EA
Inventors: Бахыт Бахияулы Атшабар; Тлеули Идрисович Тугамбаев; Галина Геннадьевна Ковалева; Ирина Владимировна Окулова; Татьяна Сергеевна Пономарева; Владислава Юрьевна Сущих
Priority date: 2015-06-26
Filing date: 2016-06-20
Publication date: 2019-06-28
Also published as: EA201600671A3; EA201600671A2

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой живую вакцину против чумы верблюдов. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении высокоиммуногенной, стабильной, нереактогенной вакцины, создающей напряженный иммунитет против чумы верблюдов. Вакцина живая сухая против чумы верблюдов, включающая антиген штамма Yersinia pestis EV и среду высушивания, содержит антиген штамма бактерии Yersinia pestis В-48-KA и дополнительно в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий, тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%: антиген штамма Yersinia pestis B-48-KA (20,0-25,0 млрд м.т. в см) - 84,0-90,0, желатин - 0,8-1,2, глютаминово-кислый - 1,0-1,7, тиомочевина - 0,3-0,7, пептон - 0,3-0,7, сахароза - остальное.

Description

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой живую вакцину против чумы верблюдов. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении высокоиммуногенной, стабильной, нереактогенной вакцины, создающей напряженный иммунитет против чумы верблюдов. Вакцина живая сухая против чумы верблюдов, включающая антиген штамма Уег81ша ρεδΐίδ ЕУ и среду высушивания, содержит антиген штамма бактерии Уегапйа рсЧЕ В-48-КА и дополнительно в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий, тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%: антиген штамма Усгчша ρεδίίδ В-48-КА (20,0-25,0 млрд м.т. в см³) - 84,0-90,0, желатин - 0,8-1,2, глютаминово-кислый - 1,0-1,7, тиомочевина - 0,3-0,7, пептон 0,3-0,7, сахароза - остальное.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой живую вакцину против чумы верблюдов.

Известна вакцина живая против чумы верблюдов, включающая антиген из культуры Уегаша рез118 ΕΥ и среду высушивания [Руководство по изучению штаммов чумного микроба, Некрасова Л.Е., Темиралиева Г.А., Мека-Меченко Т.В. и др. - Алматы, 2001. - 39 с].

Недостатком данной вакцины является то, что она имеет невысокий выход концентрации культуры Υе^8^η^а рез118, необходимой для более эффективной иммунологической активности препарата.

Задачей изобретения является разработка вакцины живой сухой против чумы верблюдов, которая создавала бы напряженный иммунитет при введении ее в организм животного, имела более длительный срок хранения и. не обладала бы реактогенными свойствами.

Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении высокоиммуногенной, стабильной, нереактогенной вакцины, создающей напряженный иммунитет против чумы верб людов.

Вакцина живая сухая против чумы верблюдов, включающая антиген штамма Υе^8^η^а рез118 Εν и среду высушивания, содержит антиген штамма бактерии Υе^8^η^а резйз В-48-КА и дополнительно в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий, тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:

антиген из штамма Уегыша рехйз В- 48 -ΚΛ ' (20,0-25,0 млрд. м. т. в см³) 84,0-90,0 желатин 0,8 -1,2

глютаминово-кислый натрий	1,0-1,7
тиомочевина	0,3-0,7
пептон	0,3 - 0,7

сахароза остальное

Штамм культуры Υе^8^η^а рез118 В-48-КА депонирован в музее живых культур РГКП Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций имени Масгута Айкимбаева (КНЦКЗИ).

Идентификацию штамма культуры Υе^81η^а резйз В-48-КА, входящего в вакцину, проводят по основным биологическим свойствам (морфологическим, культуральным, биохимическим), согласно определителю бактерий: Вегдеу'з Мапиа1 оГ 8уз1етайс Вас1ег1о1о§у/Пераг1теп1 оГ М1сгоЬю1о§у апб Мо1еси1аг Оепейсз; МЕЫдап 81а1е ИтуегзОу; И8А, 2005, Vо1ите, Т\\о, С1азз I, Рго1еоЬас1ег1а, Огбегз А1рЬарго1еоЬас1ег1а, РатРу 1. Еп1егоЬас1ег1асеае, Оепиз 2. Υе^8^п^а - р. 587 - 588).

Штамм характеризуется следующими признаками.

Штамм Υе^8^п^а резйз В-48-КА.

Морфологические свойства. Штамм Υе^8^п^а резйз В-48-КА обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя чумы верблюдов. Υе^8^п^а рез118 В-48-КА представляют собой полиморфные грамотрицательные овоидные палочки. В мазках из бульонных культур имеют биполярную окраску.

Культуральные свойства. Штамм Υе^8^η^а резйз В-48-КА растет на плотных и жидких питательных средах (агар, бульон Хоттингера) при температуре 28-30°С. На пластинках с агаром колонии мелкие, матовые в К-форме с бугристым, зернистым центром, окруженным нежной периферической кружевной зоной. Рост на бульоне прозрачный, на дне образует хлопьевидный осадок.

Ферментирует глюкозу, мальтозу, галактозу, маннит с образованием кислоты без газа, не фермен тирует глицерин, рамнозу и лактозу.

Спорообразование. Штамм Υе^8^η^а рез118 В-48-КА спор не образует, образует капсулу.

Антигенные свойства. Штамм Υе^8^η^а резбз В-48-КА дает положительный результат в РНГА и РНАт с эритроцитарными диагностикумами.

Υе^8^η^а резйз В-48-КА авирулентен для лабораторных животных.

Иммуногенность. Морские свинки после введения антигена, содержащего 20000 м.к./мл штамма Υе^8^η^а резбз В-48-КА в дозе 0,5 см³ в 80-90% случаях приобретают устойчивость к заражению 24часовой вирулентной культурой Υе^8^η^а резбз № 231, введенной в дозе 0,5 см³.

Антиген, полученный из штамма Υе^81η^а рез118 В-48-КА при подкожном введении в дозе 2,0 см³верблюдам обуславливает напряженный иммунитет у 80-85% с образованием агглютининов в титрах 1:32-1:128.

Реверсабельность. Штамм Υе^8^η^а рез118 В-48-КА по основным культуральным, морфологическим и биологическим свойствам не отличается от музейных культур.

Многократные пересевы не изменяет морфологических и культуральных свойств.

Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма Υе^8^η^а резбз В-48-КА стабильно сохраняются на агаре Хоттингера в течение 30 суток. 4-5-разовые пассажи культуры на питательных средах не изменяют его свойств.

- 1 032485

Лиофильно высушенные культуры сохраняют свои исходные свойства не менее 2 лет.

Штамм Уег81та ре8Й8 В-48-КА отобран по интенсивности роста на бактериологических средах и способности накапливать большое количество бактериальной массы.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Полученную вакцину живую сухую вводили однократно подкожно в область средней трети шеи верблюдам 1-2-летнего возраста в дозе 1,0-2,0 см³ соответственно. Наблюдение за опытными животными вели в течение 12 месяцев.

Профилактическую эффективность вакцины проверяли в эпизоотически неблагополучных по чуме хозяйствах Республики Казахстан.

В эксперименте использовали 4 группы животных по 50 голов (старше 2-летнего возраста) в каждой, в которых 3 опытные группы и одна контрольная.

Пример 1. Вакцину живую сухую против чумы верблюдов используют подкожно однократно при следующем соотношении компонентов:

антиген из штамма Уегзша резйз В- 48 -КА

(20,0-25,0 млрд. м. т. в см³)	. 84,0%
желатин	0,8%
глютаминово-кислый натрий	1,0%
тиомочевина	0,3%
пептон	0,3%

сахароза остальное

В опытной группе животных 50 голов через 12 месяцев заболело 3 головы (6,0%).

Таким образом, профилактическая эффективность при таком соотношении компонентов составляет 94,0%, а продолжительность иммунитета 12 месяцев.

Пример 2. Вакцину живую сухую против чумы верблюдов используют подкожно однократно при следующем соотношении компонентов:

антиген из штамма Уегзйна резйз В-48-КА

(20,0-25,0 млрд. м. т. в см³)	87,0%
желатин	1,0%
глютаминово-кислый натрий	1,5%
тиомочевина	0,5%
пептон	0,5% '
сахароза	остальное

В опытной группе животных 50 голов через 12 месяцев заболело 2 головы (4,0%). Таким образом, профилактическая эффективность при таком соотношении компонентов составляет 96,0%, а продолжительность иммунитета составляет 12 месяцев.

Пример 3. Вакцину живую сухую против чумы верблюдов используют подкожно однократно при следующем соотношении компонентов:

антиген из штамма Уегз'нпа резнз В- 48 -КА

(20,0-25,0 млрд. м. т. в см³)	90,0%
желатин	1,2%
глютаминово-кислый натрий	1,7%
тиомочевина	0,7%
пептон·	0,7%
сахароза ,	остальное

В третьей опытной группе животных профилактическая эффективность вакцины была выше и составила 98,0% (1 верблюд из 50 опытных) и продолжительность иммунитета 12 месяцев.

В контрольной группе животных (вакцина не применялась) заболело 7 голов (14,0%), причем течение патологического процесса было тяжелее, чем при заболевании в опытной группе.

Таким образом, наиболее эффективные результаты иммунизации были достигнуты в примерах 2 и 3, а соотношение компонентов в примере 2 является наиболее оптимальным для серийного выпуска предлагаемой вакцины.

Пример 4. Питательные среды для культивирования и концентрирования микроорганизма.

Для культивирования Уег81та ре§118 В-48-КА используют агар Хоттингера, включающий мясной и казеиновый гидролизаты, хлористый натрий, аммоний молибденовокислый, сульфит натрия, и агар бактериологический, и бульон Хоттингера, включающий мясной и казеиновый гидролизаты, и хлористый

- 2 032485 натрий.

Для получения антигенов для вакцины пробирки с агаром Хоотигера, засеянные культурой Уегыша реЧк В-48-КА, помещают в термостат с температурой 28°С и выдерживают 48 ч. После проверки чистоты роста путем микроскопии мазков культуры, каждую раздельно, высевают в матрацы объемом 2,0 л в бульон Хоттингера. Для засева одного матраца используют весь объем 48-часовой культуры, выращенной в двух пробирках. Посевы выдерживают при 28°С 48 ч и вновь проверяют на чистоту и типичность морфологии.

Пример 5. Изготовление вакцины сухой живой против чумы верблюдов.

Полученные культуры используют для засева в бутыли с бульоном Хоттингера, которые затем помещают на 2 суток в термостат при 28°С.

Для проверки чистоты и типичности морфологии микробных клеток выборочно делают мазки и микроскопируют. Чистую культуру с типичной морфологией микроорганизмов в концентрации 2-2,5 млрд см³ и с рН 7,1-7,3 пересевают в аппарат для культивирования микроорганизмов (АКМ-Ш).

Выращивание микробной массы в аппарате для культивирования микроорганизмов проводят на агаре Хоттингера при температуре 28°С 46-48 ч.

Через 2 суток полученную бактериальную массу смывают защитной средой и сливают в стерильные бутыли. Г отовую вакцинную взвесь проверяют на чистоту и типичность морфологии, концентрация микроорганизмов должна быть не ниже 50 млрд м.к. в 1 мл.

Полученную вакцинную взвесь расфасовывают по 2,0 мл в ампулы, которые накрывают стерильными салфетками и укладывают в кассеты. Кассеты, заполненные ампулами, сразу помещают в низкотемпературные холодильники -30-50°С и замораживают не менее 5 ч.

Кассеты с ампулами из холодильника загружают в сушильный котел лиофильных камер на 24-36 ч.

После полного высушивания лиофильные камеры отключают, открывают и выгружают вакцину. Герметизацию ампул с вакциной проводят метом опая под вакуумом 10-20 Па с помощью горелок. Пример 6. Контроль вакцины живой сухой против чумы верблюдов.

Физико-химические и биологические свойства.

Внешний вид, цвет. Перистая масса серовато-белого цвета.

Наличие посторонних примесей. Вакцина не должна содержать посторонних примесей, плесени, неразбивающихся конгломератов, а также трещин на ампулах.

Герметичность ампул (наличие вакуума). Голубое или розово-голубое свечение, сопровождающееся потрескиванием при проверке аппаратом типа д'Арсонваль.

Показатель рН (водородных ионов) от 7,0 до 7,4.

Потеря в массе при высушивании (массовая доля влаги). Не более 3%.

Время растворения. При добавлении 1,8 мл 0,9% раствора хлорида натрия в объеме содержимое ампулы должно раствориться в течение 3 мин.

Концентрация живых микробных клеток. Концентрация от 2-10¹⁰ до 6-10¹⁰ млрд/см³.

Стерильность (контаминация бактериальной и грибковой микрофлорой). В посевах вакцины на питательные среды (тиогликолевую, агар Хоттингера, бульон Хоттингера) не должно быть роста (посторонней микрофлоры) аэробной, анаэробной и грибковой микрофлоры в течение 14-сут инкубирования при температуре (22±2)°С, (33±1)°С и (37±1)°С.

Специфическая активность (процент живых микробных клеток). Не менее 25%. Колебания результатов определения в отдельных ампулах не должны превышать 20% от средней арифметической величины.

Безвредность. При подкожном введении морской свинке массой (275±25) г 15-10⁹ микробных клеток в 1 мл по отраслевому стандарту образца ОСО мутности (ОСО 42-28-59-85-П) 10 единиц, вакцина не должна вызывать потери массы к 6-м суткам после введения больше чем на 1/5, вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких, свойственных специфическому инфекционному процессу (кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов), в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.

Иммуногенная активность. ЕД₅₀ не должна превышать для морских свинок 1-10⁴ живых микробных клеток.

Длительность иммунитета. Не менее 12 месяцев.

Термостабильность. При температуре хранения вакцины (37±1)°С должна быть не менее 4 суток.

Срок годности при 2-8°С. Срок годности препарата 24 месяца.

Апробация вакцины живой сухой против чумы верблюдов в ТОО Даулет-Бежет, Илийского района на 1900 верблюдах и в КХ Береке, Алакольского района на 38 верблюдах, неблагополучных по данной инфекции, показала, что препарат является безвредным, ареактогенными и высокоиммуногенным препаратом - профилактическая эффективность составляет 96,0-98,5%.

Применение вакцины живой сухой против чумы верблюдов позволит профилактировать данную

- 3 032485 инфекцию у животных и значительно сократить материальные и трудовые затраты животноводческих хозяйств.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Вакцина живая сухая против чумы верблюдов, включающая антиген штамма Усгмша ροδίίδ Εν и среду высушивания, отличающаяся тем, что она содержит антиген штамма бактерии Усгмша рсЧЕ В-48КА и в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий, тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%: антиген штамма Уегыша рсЧЕ В48-КА (20,0-25,0 млрд кл.т. в см³) - 84,0-90,0; желатин - 0,8-1,2; глютаминово-кислый натрий - 1,0-1,7; тиомочевина - 0,3-0,7; пептон - 0,3-0,7; сахароза - остальное.