EA032318B1

EA032318B1 - Сахаридная фракция пшеницы, способ её получения и её применение

Info

Publication number: EA032318B1
Application number: EA201401322A
Authority: EA
Inventors: Родольфо Риччо
Original assignee: Фармачеутичи Дамор С.П.А.
Priority date: 2012-06-04
Filing date: 2013-06-04
Publication date: 2019-05-31
Also published as: ITFI20120104A1; WO2013182551A1; EP2863926A1; KR20150021043A; ES2604471T3; SMT201700015B; PL2863926T3; PT2863926T; EP2863926B1; EA201401322A1; BR112014030431B1; KR102095696B1; US9895392B2; CN104470528A; JP6169170B2; CN104470528B; JP2015518871A; US20150148309A1; BR112014030431A2

Abstract

Описываются фракции, экстрагируемые из пророщенных и мацерированных в воде семян пшеницы, с молекулярной массой от 3 до 30 кДа.

Description

Настоящее изобретение относится к области натуральных экстрактов, в частности экстрактов из зерновых культур, и способам их получения.

Существующий уровень техники

В настоящее время макромолекулы белкового типа (такие как, например, факторы роста) или макромолекулы глицинового типа (такие как, например, гиалуроновая кислота, необработанный крахмал или гидролизованный крахмал и его фракции, прочие ОАО, гликозаминогликаны и т.д.), также как и экстракты с неопределенным химическим составом, получаемые из различных растений (например, алоэ вера, центелла азиатская и т.п.), широко применяются в клинической и косметической практике; эти продукты широко используются, например, для лечения поражений и болезней эпидермальной ткани (например, ран и язв) или в косметических целях.

Например, в ЕР 743323 (от имени этих же заявителей) описываются сахаридные фракции, полученные из крахмала.

В нескольких исследованиях, см., например, О'АдоШио и др. А ЕгасИои рипйеб Ггот Тпйсит уи1даге Бак 1горЫс сГГсс15 ои сасо-2 (Очищенная фракция из ТгШсит уи1даге оказывает трофический эффект на сасо-2) [Оа81гоеи1его1оду, Ейс^тет. РЫ1а6е1рЫа, том 104, № 4, 8ирр1, 1 января 1993 г., стр. 819] и Ноге и др. ’ΌίГГегеи(1а1 асйуйаек оГ Тпйсит уи1даге ех1гас! аиб ίΐδ Егасйоик ίη тоике ЕЬгоЫакй (Дифференциальная активность экстракта Тпйсит уи1даге и ее фракций в фибробластах мыши) |Ас1а Тйегареийса, том 19, № 2, 1993, стр.151-162], описываются сахаридные фракции, полученные без указания способа, использовавшегося для проращивания и выращивания растений, и также содержащие пептидную фракцию, гексозу и гексозамин.

Эти экстракты используются как стимуляторы фазы реэпителизации и образования, таким образом, рубца, в качестве успокаивающих средств в случаях раздражения кожи, например, смягчающих веществ, и, в целом, при любых неинфекционных поражениях кожи или слизистых оболочек.

Тем не менее, выполняются поисковые исследования с целью получения новых соединений упомянутого выше типа как для повышения доступности предназначенных для описанных выше целей продуктов, так и для получения соединений с повышенной активностью и получения необходимых продуктов без чрезмерных затрат, таких как, например, факторы роста и различные, обозначенные выше материалы на основе глюкозы.

Однако, как уже сказано выше, все описанные выше натуральные экстракты (включая экстракты пшеницы) состоят из неопределенного и большего количества веществ различных типов и/или макромолекул, большинство из которых не идентифицированы; также не всегда представляется возможным отнести их активность на счет определенных компонентов.

Также именно поэтому средства получения растительного материала и фракций, которые при необходимости могут быть выделены из него, не в полной мере описаны в соответствии со стандартизованными методиками.

Напротив, как ни удивительно, фракция, являющаяся объектом настоящего изобретения, которая при этом идентифицируется и химически характеризуется, демонстрирует все виды активности общего экстракта и, таким образом, представляет основное вещество, обуславливающее действие общего экстракта

Краткое описание чертежей

На чертеже представлены хроматограммы, полученные посредством анализа соответственно холостой пробы (вода), фракции согласно изобретению (обозначена на чертеже как фракция СР), и фракции, из которой выделяется фракция, полученная в п. (6) способа согласно настоящему изобретению, обозначенная на чертеже как ТУЕ.

Краткое описание существа изобретения

Описываются фракции, экстрагированные из вымоченных в воде зародышей пшеницы, причем эти фракции имеют молекулярную массу в пределах диапазона от 3 до 30 кДа.

Подробное описание существа изобретения

Настоящее изобретение относится к фракции экстракта, полученного из вымоченных в воде зародышей пшеницы, которая обладает рядом биологических признаков, типичных для факторов роста, за исключением того, что имеет очевидное растительное, а также животное происхождение, и имеет химическую структуру полисахарида, а не белка; указанные совершенно неожиданные характеристики делают эту фракцию особенно интересной для получения лекарств и продуктов, пригодных для лечения ран и язв.

Более конкретно, настоящее изобретение относится к фракции, полученной из семян проросшей пшеницы в условиях, которые обычно используются для получения аналогичных, уже известных экстрактов, и которые описывается выше в отношении существующего уровня техники, фракции, имеющей молекулярную массу в пределах диапазона от 3 до 30 кДа.

Следует принять во внимание, что эта фракция согласно настоящему изобретению отсутствует в непроросших семенах, и только (или преимущественно) эта фракция (т.е. с молекулярной массой в пределах диапазона от 3 до 30 кДа) обладает описанными выше свойствами.

- 1 032318

Согласно настоящему изобретению, данный способ обеспечивает получение сырого экстракта, получаемого из проросшей пшеницы, согласно известным способам, а также последующую очистку активной фракции.

Упомянутый выше способ содержит следующие этапы:

a) проращивание семян пшеницы в воде и/или на инертном натуральном или искусственном ростовом субстрате, в любых условиях освещения (предпочтительно в темноте), влажности (предпочтительно при влажности более 60%), температуры (предпочтительно при температуре 5-20°С), с обеспечением ростков, предпочтительно достигающих высоты до 3-15 см;

b) нагревание полученного растительного материала (при необходимости предварительно измельченного с добавлением воды) при температуре в интервале 85-125°С, необязательно с добавлением воды, для подготовки к следующему этапу и предотвращения роста микроорганизмов;

c) мацерация полученного материала, который помещается в воду (предпочтительно с рН 2-4) и, необязательно, оставляется для мацерации при низких температурах (максимум 10°С);

4) удаление твердого остатка посредством фильтрации, прессования или с помощью прочих эквивалентных систем, таких как экстракторы, для получения первого прозрачного раствора (рассматривается в качестве сырого экстракта), который может быть стерилизован;

е) обогащение фракции с молекулярной массой в диапазоне между 3000 и 30000 Да из упомянутого выше раствора для получения, таким образом, второго раствора, имеющего повышенное процентное содержание активной фракции

1) получение очищенной активной фракции с молекулярной массой в диапазоне от 3000 до 30000 Да из упомянутого выше второго раствора;

если это необходимо, семена могут быть перед этапом а) увлажнены очищенной водой.

Этап Ь) и стерилизация, упомянутая на этапе 4), выполняются в соответствии с требованиями обычных технологий, предпочтительно в автоклаве.

Этап с) предпочтительно выполняется при рН между 2 и 4, предпочтительно в течение 1-72 ч.

Этап с) и удаление твердого остатка на этапе 4) могут выполняться с применением способа циклирования. В этом случае раствор, полученный на этапе 4), добавляется вместо воды этапа с) к новым семенам, пророщенным согласно этапу Ь), и этапы с-4 повторяются. Таким образом оказывается возможным достижение большего выхода.

Удаление фракций с молекулярной массой ниже 3000 более 30000 Да (этап е) может выполняться с использованием обычных способов, известных специалистам в данной области, например, посредством гель-фильтрации или ультрафильтрации.

Аналогично, рассматриваемая фракция изолируется посредством упомянутых выше технологий.

Упоминаемые до сих пор значения молекулярной массы относятся к мембранам для ультрафильтрации, используемым для очистки фракции, являющейся объектом настоящего изобретения: такие величины относятся к глобулярным белкам и, следовательно, должны рассматриваться только в качестве ориентировочных значений молекулярной массы выделяемых из них фракций - тем более для выбора обсуждаемой фракции, которая является фракцией сахаридного типа и имеет линейную и разветвленную структуру, то есть любую, кроме глобулярной.

В ее конечной форме фракция, являющаяся объектом настоящего изобретения, может быть высушенной или лиофилизированной с применением обычных способов, или предпочтительно оставленной в водном растворе при известной и предварительно установленной концентрации; необязательно с добавлением консерванта и/или стерилизованной.

Описанный выше в общем виде способ будет более ясно иллюстрироваться с помощью следующего конкретного примера.

Пример

1. Проращивание.

кг увлажненной древесной целлюлозы распределяется в нескольких подходящих резервуарах из нержавеющей стали; затем на нее помещается 2,4 кг предварительно смоченных семян пшеницы; семенам дают прорасти в темноте в течение нескольких суток (4-10 суток) в камере с кондиционированием воздуха до тех пор пока высота всходов не достигнет 5-15 см. Во время роста субстрат ежедневно увлажняется добавлением достаточного количества воды.

Температура в камере поддерживается в диапазоне 5-20°С; а относительная влажность составляет >60%.

2. Нагревание.

Содержимое резервуаров помещается в подходящие, герметически упакованные контейнеры и затем автоклавируется в течение 1 ч при давлении 1 атм (при температуре приблизительно 121°С).

3. Мацерация и экстракция.

Затем материал переносится в стальной контейнер подходящей емкости и добавляется 100 л очищенной воды, содержащей 120 мл 10 об.% серной кислоты и 60 мл 10 об.% соляной кислоты. Мацерация может проходить в течение 1-72 ч. Водная фаза затем экстрагируется под давлением в 300 атм и использованная твердая фаза удаляется.

- 2 032318

В полученную таким образом жидкость (определяется как 1-й отжим) добавляются 120 мл 10 об.% серной кислоты и 60 мл 10 об.% соляной кислоты и выполняется смешивание с содержимым эквивалентного количества других контейнеров. Затем процедура, описанная как 1-й отжим повторяется с получением, таким образом, 2-го отжима.

Эти же операции повторяются снова, приводя к получению, таким образом, 3-го отжима и 4-го отжима.

При контакте с растительным материалом для выполнения экстракции жидкая фаза энергично перемешивается и затем хранится в холодном месте (5-9°С) в течение 24-72 ч.

Конечная жидкость также может храниться в холодном месте (5-9°С) в течение приблизительно 2472 ч.

4. Фильтрация и стерилизация.

Жидкость из 4-го отжима фильтруется с применением обычных способов; в подходящих контейнерах она затем автоклавируется с применением цикла, эквивалентного 1 ч при давлении в 1 атм.

5. Ультрафильтрация.

Используя подходящее оборудование для выполнения ультрафильтрации с картриджами, имеющими отсечение молекулярной массы в 3 кДа, выполняется ультрафильтрация полученной выше жидкости до максимальной степени, допускаемой данным оборудованием; в оставшуюся жидкость добавляется вода и процесс ультрафильтрации повторяется 2-3 раза для удаления фракций с низкой молекулярной массой, которые содержатся в элюируемой фазе.

Затем, используя такой же способ, но заменив картриджи другими с молекулярной массой отсечения 30 кДа, выполняется дальнейшая ультрафильтрация остатков, содержащих фракции с молекулярной массой выше 3000 кДа: однако в этом случае удерживаемый остаток представляет фракции с молекулярной массой более 30000 кДа и отбрасывается, в то время как элюируемая фаза содержит активную фракцию с молекулярной массой в пределах от 3000 до 30000 Да.

Раствор, содержащий активную фракцию, затем лиофилизируется (или обезвоживается) сам по себе или на подходящей подложке; или же стерилизуется (сам по себе, с добавлением консерванта, например 2 мас.% феноксиэтанола).

А. Данные химического анализа активной фракции.

1. Хроматографический анализ фракции.

Была выбрана система высокоэффективной анионообменной хроматографии (НРАЕ), совмещенная с импульсным амперометрическим детектором (РАИ), которая особенно подходит для анализа углеводов.

Характеристики хроматографической системы

Система насосов с линейным элюированием, имеющим бинарный градиент

Элюент 1:0,5М ИаОН

Элюент 2: 1 М ацетат натрия в 0,5 М ИаОН

Градиент задается следующей линейной программой (с постоянным потоком равным 1,0 мл/мин), где % 2 означает процентную долю элюента насоса 2 по отношению к общей смеси.

ПРОГРАММА ГРАДИЕНТНОГО ЭЛЮИРОВАНИЯ
ЭТАП	ВРЕМЯ	% Элюента 2
0	0,0	5
1	0,1	5
2	5,0	5
3	15,0	15
4	30,0	15
5	30,1	20
6	40,1	20
7	40,2	30
8	50,2	30
9	50,3	35
10	60,3	35
И	75,0	100
12	76,0	5
13	85,0	5

Хроматографическая колонка

СагЬорас РА1 (4*250 мм) с предколонкой СагЬорас РА1 Сиагд (10-32) или эквивалентная, поддерживаемая при температуре 35°С;

РАИ детектор, снабженный золотым электродом, в следующих рабочих условиях.

- 3 032318

Ориентировочная программа детектирования
Время (сек.)	Е (вольты)
0,00	+0,10
0,20	+0,10 начало интегрирования
0,40	+0,10 конец интегрирования
0,41	-2,00
0,42	-2,00
0,43	+0,60
0,44	-0,10
0,50	-0,10

* Получение стандартного раствора.

Готовится серия растворов активной фракции с концентрациями в диапазоне от 4 до 12 мг в 100 мл деионизированной воды на основе концентрированного раствора чистой Активной фракции, рассматриваемой в качестве стандартного раствора сравнения; или используя, в качестве варианта, рабочий стандартный раствор, калиброванный по стандартному раствору сравнения.

* Методика

Вводятся 100 мкл холостой пробы, чтобы убедиться в том, что соответствующая хроматограмма является планарной (т.е. не имеет пиков), за исключением небольшого количества пиков, вызываемых скачками градиента в элюирующей системе.

Затем вводится по 100 мкл каждого испытуемого раствора.

Хроматограмма образца очищенной активной фракции имеет единичный пик со временем удерживания К1 ® 44 мин, что точно соответствует активной фракции (см. фиг. 1, образец, обозначенный как СР фракция).

Хроматограмма образца очищенного или частично очищенного экстракта демонстрирует характерный ряд с серией пиков, среди которых пик с К1 ® 44 мин относится к активной фракции.

2. Хроматографический анализ фракции после выполнения гидролиза

Эта контрольная проверка выполняется для подтверждения природы отдельных моносахаридов, из которых состоит олигосахаридная структура исследуемой фракции.

Для анализа гидролизованного образца применяется высокоэффективная ионообменная хроматография (НРА).

Тип оборудования является эквивалентным упомянутому выше в связи с исследованием интактной, т.е. негидролизованной, фракции.

Методика

Гидролиз выполняется посредством добавления к фракции 0,35 об.% НС1 и проведения гидролиза при температуре 100°С в течение 20 ч на образце с концентрацией активной фракции в диапазоне 5-75 мг/100 мл.

Аналитические условия НРА были следующими.

Колонка СагЬораск РА1,4+250 мм

Изократический элюент 0,017 N ЫаОН

Постоянный поток (1 мл/мин)

Импульсное электромеханическое (ΡΕΏ) детектирование

Впрыскиваемый объем: 75 мкл раствора гидролизованного образца, разведенного водой до 1:100.

Выполняется аналогичный анализ с использованием наиболее распространенных моносахаридов в качестве стандарта.

Исследуемый образец подтвердил значимое и преобладающее присутствие глюкозы, где прочие пики (относящиеся к моносахаридам или сходным соединениям: маннозе, галактозе, глюкозамину, пентозе и т.д.) отсутствуют или имеются только в следовых количествах.

Идентичный анализ, выполненный перед проведением гидролиза, аналогичным образом показывает отсутствие моносахаридов, демонстрируя, что данная фракция состоит из олигосахаридной структуры.

В. Биологическая активность фракции

Доказано, что фракция согласно настоящему изобретению обладает ΐη νΐνο выраженной реэпителизирующей и лечебной активностью по отношению к ранам и/или язвам любого типа, аналогичной активности факторов роста животного происхождения, и, следовательно, она может использоваться в производстве лекарственных средств для лечения ран и язв.

Она также показывает ΐη νΐίΓο значимую активацию роста клеток в фибробластах и повышение активности орнитиндекарбоксилазы (ООС).

Также была продемонстрирована активация механизма гидролиза инозитольных фосфолипидов, что является типичным для факторов роста.

Лечебное действие иллюстрируется результатами следующих различных фармакологических исследований.

1. Проверка стимулирования роста клеток-фибробластов

Фибробласты являются клетками, которые играют фундаментальную роль в механизме восстанов

- 4 032318 ления тканей. Поэтому данное испытание выполняется для подтверждения наличия лечебного эффекта продукта, наблюдаемого в результате стимулирования механизма роста клеток этих организмов.

Методика

Культуры 3Т3 фибробластов мыши выдерживаются в ΌΜν-среде с добавлением 10 об.% телячьей сыворотки (С8), пенициллина (10 Ед/мл). Эти культуры культивируются во флаконах компании Еа1соп, емкостью 25 мл, при температуре 37°С, во влажной атмосфере, содержащей 5% СО₂ и пересеиваются каждые 4-6 дней. Конфлюэнтные культуры вследствие этого промываются 3 мл фосфатно-солевого буферного раствора (РВ8) и трипсинизируются 0,25% трипсином при температуре 37°С. Для деактивации трипсина добавляются 2 мл ΌΜΕ, а полученный после центрифугирования осадок разбавляется свежей питательной средой до достижения плотности, подходящей для диссеминации.

Стимулирующий эффект проверяется на фибробластах, оставленных в состоянии покоя в среде с низкими концентрациями С8. Посев клеток выполняется с плотностью приблизительно 2000-4000 клеток на чашку в ΌΜΕ с добавлением 5% С8. Среда обновляется через 18 ч и заменяется свежей средой, содержащей 0,6% С8, после чего клетки оставляют для роста еще на 48 ч перед каждым последующим испытанием активности. Для рассматриваемого испытания продукт (разведенный в воде до концентрации 20 мг/100 мл) добавляется каждый день с увеличением концентрации в интервале между 2 и 20 об.% на протяжении времени роста.

В конце пятого дня это количество клеток стимулируется посредством трипсинизации культур и подсчета клеток в счетчике Коултера.

Результаты

Добавление продукта с указанной кратностью разведения обеспечивает заметное, зависимое от дозы стимулирование роста клеток. Эффект становится значимым при доле содержания продукта (разведенного как указано выше) в 5%, и является максимальным между 10 и 20%; количественно несколько меньшим, чем демонстрируется при добавлении С8 с аналогичной концентрацией, но по меньшей мере в четыре раза большим, чем у контроля, в максимальной точке.

2. Испытание активации ОЭС (орнитиндекарбоксилазы)

Орнитиндекарбоксилаза является ключевым ферментом в синтезе спермидина -полиамина, катализирующего преобразование аминокислоты орнитина в путресцин. Эти полиамины совместно участвуют в контроле процесса деления клеток. Испытание проводится посредством проверки наличия корреляции между стимулирующим рост полученных фибробластов действием и увеличением активности ОЭС.

Методика

Активность ОЭС проверяется на клетках 3Т3, выращенных в среде, содержащей 0,6% С8 (телячья сыворотка) и приготовленной, как описано выше в испытании стимуляции роста фибробластов.

Активность ОЭС измеряется с использованием способа, описанного Ри55с11 [Ргос. Ν;·ι11. Асаб. 8с1. И8А 60 1420 (1968)], через 6 ч после добавления продукта (разведенного в воде до концентрации 20 мг/100 мл), при увеличении количества с 1 до 10 об.%.

Результаты

При концентрациях и условиях испытания продукт показывает (спустя 6 часов после добавления и зависящую от дозы) заметную стимуляцию ОЭС, приблизительно в 4 раза большую, чем у контроля, и подобную при равных концентрациях стимуляции С8.

3. Испытание стимуляции гидролиза инозитольных фосфолипидов.

Один из основных биохимических механизмов, с помощью которого вещество способно активировать процессы, отвечающие за активацию и деление клеток, заключается в специфической стимуляции гидролиза инозитольных фосфолипидов, что, в свою очередь, вызывает увеличение количества вторичных мессенджеров, трифосфата инозитола (1п&Р3) и диацилглицерина; этот механизм является широко описанным в литературе. Этот механизм, среди прочего, тесно связан с другой системой сигнальной трансдукции, активацией тирозинкиназы, ответственной, например, за действие ΕΟΕ (эпидермального фактора роста), инсулина или инсулиноподобных факторов.

Поэтому считается предпочтительным выполнение оценки действия продукта на накопление фосфата инозитола (в качестве специфического показателя гидролиза фосфоинозитида) в клетках 3Т3, как в базовых условиях, так и после стимуляции С8 сывороткой, которая является известным активатором метаболизма фосфолипидов в фибробластах.

Методика

Гидролиз инозитольных фосфолипидов испытывается на клетках 3Т3, выращенных в среде, содержащей 0,6% С8 (телячья сыворотка) и приготовленной, как описано выше в испытании стимуляции роста фибробластов.

После достижения состояния покоя клетки промываются средой Нат Е-10 (с низкой концентрацией инозитола) и инкубируются при температуре 37°С в течение 24 ч с добавлением 0,6% С8 и 0,6 мкмоль 2[3Н]-миоинозитола в течение 24 ч для мечения инозитольных фосфолипидов клеточных мембран. По завершении инкубации клетки промываются буферным раствором Кребса-Хенселейта, содержащим 10 ммоль Ь1С1 и 0,1% В8А. Затем клетки инкубируются в течение 24 ч с увеличением количества продукта от 0 до 20 об.% (в водном растворе с концентрацией 4 мг/100 мл) с и без 10% С8.

- 5 032318

Затем измеряется содержание инозитол-фосфатов с применением следующей методики: питательная среда отсасывается, а клетки экстрагируются раствором хлороформ/метанол/вода 1/1/1 (по объему), после центрифугирования водная фаза отбирается и подается по 1 мл на колонки Эо^сх-1 в форме формиата, колонки промываются 24 мл воды для удаления меченого инозитола, который не был инкорпорирован; затем фосфаты инозитола элюируются промыванием 0,2 М формиатом аммония и 0,1 М муравьиной кислотой. Затем определяется радиационная активность с помощью сцинтилляционной спектрометрии.

Результаты

При таких концентрациях и в таких условиях испытаний данный продукт демонстрирует дозозависимую стимуляцию гидролиза инозитольных фосфолипидов, приблизительно в 4 раза большую, чем у контроля, и близкую к аналогичному показателю для С8 при равных концентрациях. Следует отметить, что одновременное присутствие продукта и С8 ведет к более интенсивной активации, чем в случае одной телячьей сыворотки (или только одного данного продукта), что дает основание предполагать наличие благоприятного синергетического эффекта применения этих двух компонентов.

4. Испытание заживления ίη νίνο экспериментальных ран

Испытание заживления ίη νίνο выполняется на животных посредством местного применения и демонстрирует эффективность этого продукта в лечении ран.

Методика

Испытание выполняется на самцах крыс линии \У18(аг с массой тела в диапазоне от 220 до 250 г. В течение одной недели перед выполнением испытания животные выдерживаются в условиях контролируемой температуры, влажности и освещения со свободным доступом к воде и пище. Животных равномерно распределяются по экспериментальным группам по 10 животных в каждой; одна группа используется в качестве контрольной группы и животные в ней получают плацебо, а животные в другой группе получают продукт.

Утром первого дня испытания все животные подвергаются хирургической процедуре для нанесения стандартной раны, получаемой следующим способом: после введения препарата для легкой анестезии (10% этилуретан в дозе 10 мл/кг) поясничная область каждого животного аккуратно выбривается и кожа вокруг кромки металлического диска диаметром 2,5 см (8,5 см в случае местного лечения) после дезинфицирования аккуратно рассекается; затем кожа и подкожная ткань удаляются с использованием пинцета с изогнутыми браншами. В результате всех животные получают по существу идентичные раны.

После каждого дня лечения раны надлежащим образом покрываются, а животные содержатся в отдельных клетках.

Величина раны измеряется с помощью планиметра (копируя профиль раны на листе прозрачной бумаги) каждый день в течение 9 дней (5 дней в случае местного лечения).

Ежедневное лечение с применением местного применения

Раны животных в группе контроля обрабатываются стерильной марлей, пропитанной плацебо, состоящим из физиологического раствора (0,9% №1С1).

Раны животных в другой группе обрабатываются стерильной марлей, пропитанной продуктом, растворенным в воде при концентрации 20 мг/100 мл.

Результаты

У животных, получавших лечение данным продуктом, наблюдалось ускорение процесса заживления, свидетельством чего было заметное снижение площади раневой поверхности в сравнении с животными в группе контроля, в среднем на 20-30% в конце лечения.

Получение фармацевтических и/или косметических продуктов

Активная фракция, являющаяся объектом настоящего изобретения, может использоваться для получения продуктов, обладающих лечебным или косметическим действием.

Доза может варьировать в зависимости от патологии и типа обрабатываемой ткани, степени расширения, параметров пациента (возраст, пол, вес) и типа фармацевтической или косметической композиции. Дозировка активной фракции может также варьировать в зависимости от степени очистки используемой фракции.

Фракция, которая является объектом настоящего изобретения, может вводиться в форме композиций, содержащих эффективное количество указанной фракции, смешанной со вспомогательными веществами и обычными веществами-носителями, известными специалистам в данной области.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены с использованием известных способов и обычных технологий.

В конечном препарате могут присутствовать и другие активные компоненты.

В качестве примера фармацевтических и косметических композиций могут использоваться ампулы, лосьоны, мази, гели, растворы, лекарственные вещества, медицинские свечи, вагинальные суппозитории, мыла, пены, таблетки, порошки, косметическое молочко.

- 6 032318

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения фракции из проросших семян пшеницы, имеющей молекулярную массу в пределах диапазона от 3000 до 30000 Да, который включает:

a) проращивание семян пшеницы в воде или на натуральном или искусственном субстрате, которое осуществляется в темноте, при влажности больше 60% и температуре 5-20°С, до получения проростков высотой вплоть до 3-15 см;

b) тепловую обработку проростков в цельном или измельченном виде, которая осуществляется при высоких температурах (85-150°С) и в течение 25-120 мин;

c) мацерацию материала, полученного на стадии (Ь), которая осуществляется при рН 2-7 и при низкой температуре (2-10°С) в водном растворе;

б) удаление твердого остатка, которое осуществляется с применением синтетической мембраны, бумажного фильтра, пресса или экстрактора жидкость-твердая фаза для получения первого прозрачного раствора, который стерилизуется;

е) удаление фракции с молекулярной массой менее 3000 Да и более 30000 Да с целью обогащения фракции с молекулярной массой в диапазоне от 3000 до 30000 Да.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что измельчение проростков на стадии Ь) осуществляют с добавлением воды.
3. Сахаридная фракция, полученная способом по п.1 или 2, с любым уровнем очистки.
4. Применение фракции, полученной способом по п.1, для лечения расстройств на коже или слизистых оболочках.
5. Применение по п.4, отличающееся тем, что расстройства на коже или слизистых оболочках выбираются из язв или ран.
6. Применение фракции, полученной способом по п.1, для приготовления средств косметического ухода за кожей.
7. Фармацевтическая композиция для лечения расстройств на коже или слизистых оболочках, содержащая эффективное количество фракции, полученной способом по п.1, или фракции по п.3, смешанных с вспомогательными веществами.
8. Фармацевтическая композиция по п.7, отличающаяся тем, что расстройства на коже или слизистых оболочках выбираются из язв или ран.
9. Композиция по п.8 в форме лосьонов, кремов, мазей, гелей, растворов, медицинских свечей, вагинальных суппозиториев, мыла, пены, таблеток, порошков или косметического молочка.
10. Косметическая композиция, содержащая эффективное количество фракции, полученной способом по п.1, или фракции по п.3, смешанных с вспомогательными веществами.
11. Композиция по п.8 в форме лосьонов, кремов, мазей, гелей, растворов, медицинских свечей, вагинальных суппозиториев, мыла, пены, таблеток, порошков или косметического молочка.