EA029955B1 - Препарат рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека и его применение - Google Patents
Препарат рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA029955B1 EA029955B1 EA201390194A EA201390194A EA029955B1 EA 029955 B1 EA029955 B1 EA 029955B1 EA 201390194 A EA201390194 A EA 201390194A EA 201390194 A EA201390194 A EA 201390194A EA 029955 B1 EA029955 B1 EA 029955B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- ρδη
- recombinant
- preparation
- glycans
- cells
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 134
- 102000003864 Human Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 title abstract description 4
- 108010082302 Human Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 title abstract description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 45
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims abstract description 31
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims abstract description 25
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 claims abstract description 25
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000011496 cAMP-mediated signaling Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 13
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 110
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 claims description 70
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 68
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 68
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 67
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 60
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims description 46
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 38
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 claims description 35
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 claims description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 27
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 17
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims description 16
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 claims description 15
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 claims description 15
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 11
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 10
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 10
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 9
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 8
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims description 7
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 6
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 6
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 6
- 108010067479 inhibin B Proteins 0.000 claims description 6
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 claims description 6
- 230000002513 anti-ovulatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 5
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 claims description 4
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 claims description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 claims description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009027 insemination Effects 0.000 claims description 3
- 125000001483 monosaccharide substituent group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 claims description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000036244 malformation Effects 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 14
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims 14
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims 10
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 claims 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 9
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims 6
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims 4
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 claims 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims 3
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 claims 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims 2
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 claims 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 2
- -1 progesterone Chemical class 0.000 claims 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZUQUTHURQVDNKF-KEWYIRBNSA-N 1-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]ethanone Chemical class CC(=O)C1(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1N ZUQUTHURQVDNKF-KEWYIRBNSA-N 0.000 claims 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 claims 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims 1
- 102100037355 Chromosome alignment-maintaining phosphoprotein 1 Human genes 0.000 claims 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims 1
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims 1
- 101000741320 Homo sapiens Cathelicidin antimicrobial peptide Proteins 0.000 claims 1
- 101000880066 Homo sapiens Chromosome alignment-maintaining phosphoprotein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 208000034702 Multiple pregnancies Diseases 0.000 claims 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 claims 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 claims 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 claims 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 claims 1
- 229940070021 anabolic steroids Drugs 0.000 claims 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 claims 1
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 claims 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 claims 1
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 claims 1
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 claims 1
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 claims 1
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 claims 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims 1
- 230000001609 comparable effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims 1
- 238000012786 cultivation procedure Methods 0.000 claims 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 claims 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 claims 1
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 claims 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 claims 1
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 claims 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims 1
- 210000004565 granule cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 1
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical class OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 1
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 claims 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 claims 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 1
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 claims 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 claims 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 claims 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 claims 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 claims 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 claims 1
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 claims 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 abstract 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 2
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002294 pubertal effect Effects 0.000 description 1
- 230000027272 reproductive process Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/24—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Данное изобретение относится к препарату рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека (FSH), фармацевтической композиции для лечения бесплодия, содержащей препарат рекомбинантного FSH, применению вышекуазанного препарата рекомбинантного FSH или вышеуказанной фармацевтической композиции для лечения бесплодия, для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов также независимо от цАМФ, для стимуляции или костимуляции созревания гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ, для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов при концентрациях FSH, при которых не индуцируется выделение цАМФ в определяемом количестве, превышающем количество цАМФ, выделяемого в отсутствие FSH, для индуцирования роста фолликула и/или созревания яйцеклетки.
Description
изобретение относится к препарату рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека (Ρ§Η), фармацевтической композиции для лечения бесплодия, содержащей препарат рекомбинантного Ρ§Η, применению вышекуазанного препарата рекомбинантного Ρ§Η или вышеуказанной фармацевтической композиции для лечения бесплодия, для индуцирования и/ или стимуляции секреции половых стероидов также независимо от цАМФ, для стимуляции или костимуляции созревания гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ, для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов при концентрациях Ρ§Η, при которых не индуцируется выделение цАМФ в определяемом количестве, превышающем количество цАМФ, выделяемого в отсутствие Ρ§Η, для индуцирования роста фолликула и/или созревания яйцеклетки.
029955
Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к области гонадотропинов. В частности, предоставлен улучшенный рекомбинантный фолликулстимулирующий гормон человека (гЬР§Н). Этот улучшенный г№§Н полезен при лечении бесплодия, в частности, у человека.
Уровень техники в области данного изобретения
Гонадотропины представляют собой группу белковых гормонов, которые регулируют функцию гонад у мужчин и женщин и, следовательно, играют важную роль в репродуктивной функции человека. Они секретируются гонадотропными клетками гипофиза позвоночных при стимуляции гонадотропинрилизинг гормоном (ОиКН). Гонадотропины представляют собой гетеродимерные гликопротеины, включающие в себя фолликулстимулирующий гормон (Р8Н), лютеинизирующий гормон (ЬН) и хорионический гонадотропин (СО). Гонадотропины обладают идентичными α-субъединицами, но содержат различные β-субъединицы, которые обеспечивают специфичность связывания с рецептором.
Р8Н содержит 92 аминокислоты в α-субъединице и 111 аминокислот в β-субъединице, что обеспечивает специфическое связывание с Р8Н-рецептором. Обе субъединицы природного белка модифицированы гликозилированием. α-Субъединица природно гликозилирована по Αδη52 и Αδη78, а β-субъединица по Αδη7 и Αδη24. Обе субъединицы продуцируются в клетках в виде предшественников белков, которые затем преобразовываются и секретируются. Р8Н регулирует развитие, рост, пубертатное созревание и репродуктивные процессы в организме. В частности, он стимулирует созревание гамет и, таким образом, вовлечен в сперматогенез и фолликулогенез.
Например, фолликулогенез индуцируется Р8Н связыванием Р8Н с Р8Н-рецепторами на поверхности зернистых клеток. Р§Н-рецепторы являются О-белок-связанными рецепторами, которые активируют связанный с ними О-белок при связывании Р8Н [рецептором]. О-белок, в свою очередь, активирует аденилатциклазу, что приводит к продукции цАМФ, молекулы, являющейся вторичным мессенджером. Повышение концентрации цАМФ в клетке активирует несколько последующих [в каскаде внутриклеточной передачи сигнала] мишеней, в частности цАМФ-зависимые протеинкиназы, что затем приводит к синтезу прогестерона и эстрадиола. Прогестерон и эстрадиол секретируются зернистыми клетками, индуцирующими фолликулогенез. При стимуляции Р8Н зернистых клеток они также выделяют ингибин-В, который образует петлю отрицательной обратной связи, ингибируя продукцию и секрецию Р8Н в гипофизе. Показано, что ингибин-В является хорошим суррогатным маркером стимуляции яичника Р8Н.
Р8Н широко используется для лечения бесплодия либо сам по себе, либо в комбинации с другими агентами, в частности ЬН. В данной области техники для лечения бесплодия человека, главным образом, Р8Н очищали из мочи женщин в постменопаузном периоде (Р8Н из мочи) или рекомбинантно продуцировали Р8Н в клетках яичников китайского хомячка (СНО). Однако существует значительная гетерогенность препаратов Р8Н, связанная с присутствием различных изоформ. Отдельные изоформы Р8Н демонстрируют идентичные аминокислотные последовательности, но различаются по степени и природе их гликозилирования. Конкретные изоформы характеризуются гетерогенностью структуры их углеводных ветвей и различающимся количеством включенной сиаловой кислоты (отрицательно заряженный концевой моносахаридный фрагмент), каждый из [этих факторов] влияет на специфическую биологическую активность изоформы. Таким образом, тип гликозилирования Р8Н имеет существенное влияние на его биологическую активность.
Однако Р8Н из мочи от различных доноров и в различных препаратах может существенно варьировать в углеводных структурах, что приводит к значительным отличиям между партиями [препарата]. Существуют также опасения, касающиеся безопасности, связанные с присутствием вирусов в продуктах, полученных из мочи. Кроме того, Р8Н, полученный из клеток СНО, демонстрирует тип гликозилирования, специфичный для этих клеток хомячка, который не идентичен типу гликозилирования человека. Эти различия приводят к колебаниям биологической активности и неблагоприятным побочным эффектам полученного Р8Н и, таким образом, фармацевтических препаратов, которые вводятся пациенту.
В этой связи одной из задач данного изобретения является получение улучшенных препаратов Р8Н.
Кроме того, задачей данного изобретения является получение препаратов Р8Н с новыми терапевтическими или фармакологическими характеристиками.
Кроме того, задачей данного изобретения является получение препаратов Р8Н, которые имеют улучшенный тип гликозилирования.
Сущность изобретения
Авторы данного изобретения обнаружили, что улучшенные препараты Р8Н, полученные из клеток человека, которые предпочтительно были отобраны для оптимизированного гликозилирования, способны индуцировать секрецию половых стероидов, таких как эстрадиол и прогестерон, в более низких концентрациях, чем соответствующие препараты Р8Н, полученные из мочи человека или клеток СНО. Следовательно, препараты Р8Н по данному изобретению имеют удивительные характеристики, которые полезны в терапии.
Настоящее изобретение относится к препарату рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека (Р8Н), который имеет тип гликозилирования, обладающий нижеследующими характеристи- 1 029955
ками:
(ί) относительное количество гликанов, несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (ΒίδΟΙοΝΛο). по меньшей мере 20% от общего количества гликанов. присоединенных к ΡδΗ; и
(ΐΐ) относительное количество 2.6-связанных сиаловых кислот по меньшей мере 40% от общего количества сиаловых кислот.
Вариантом настоящего изобретения является препарат. который
(ΐΐΐ) имеет относительное количество гликанов. несущих фукозу. по меньшей мере 30% от общего количества гликанов. присоединенных к ΡδΗ; и/или
(ΐν) содержит по меньшей мере 35 различных гликановых структур. где относительное количество каждой из этих различных гликановых структур составляет по меньшей мере 0.1% от общего количества гликановых структур ΡδΗ.
Другим вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ. продуцируемый в миелоидной клеточной линии СТ-58 человека. депонированной под номером ΌδΜΑΟΟ3078.
Также вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ. который имеет профиль гликозилирования. обладающий нижеследующими характеристиками:
(ί) относительное количество гликанов. несущих όίδ^αΝΛα. по меньшей мере 25% от общего количества гликанов. присоединенных к ΡδΗ; и
(ΐΐ) относительное количество 2.6-связанных сиаловых кислот по меньшей мере 40% от общего количества сиаловых кислот.
Еще одним вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ. который имеет профиль гликозилирования. обладающий нижеследующими характеристиками:
(ί) относительное количество гликанов. несущих όίδ^αΝΛα. по меньшей мере 30% от общего количества гликанов. присоединенных к ΡδΗ; и
(ΐΐ) относительное количество 2.6-связанных сиаловых кислот по меньшей мере 50% от общего количества сиаловых кислот.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ. который имеет одну или более из нижеследующих характеристик:
(a) тип гликозилирования имеет относительное количество гликанов. несущих один или более остатков сиаловой кислоты. по меньшей мере 85%;
(b) тип гликозилирования имеет относительное количество по меньшей мере четырехцепочечных гликанов по меньшей мере 18%;
(c) число Ζ составляет по меньшей мере 200;
(ά) ΡδΗ продуцирован клеточной линией человека или клетками человека. и/или
(е) ΡδΗ содержит α-субъединицу. имеющую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0:1. и β-субъединицу. имеющую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0:2.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ. который имеет одну или более из нижеследующих характеристик:
(ί) относительное количество гликанов. несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (Ь^8С1сNΑс). в диапазоне от около 25 до около 50%;
(ΐΐ) относительное количество по меньшей мере четырехцепочечных. гликанов по меньшей мере
16%;
(ΐΐΐ) относительное количество гликанов. несущих фукозу. по меньшей мере 35%;
(ΐν) относительное количество 2.6-связанной сиаловой кислоты по меньшей мере 53%;
(ν) относительное количество гликанов. несущих один или более остатков сиаловой кислоты. по меньшей мере 88%;
(νί) число Ζ по меньшей мере 220;
(νίί) относительное количество гликанов. несущих галактозу. по меньшей мере 95%;
(νΐΐΐ) относительное количество ветвей гликана. несущих концевые единицы галактозы. необязательно. модифицированных остатками сиаловой кислоты. по меньшей мере на 60%;
(ίχ) относительное количество гликанов. несущих сульфатные группы. по меньшей мере 3%;
(х) ΡδΗ содержит по меньшей мере 45 различных гликановых структур. причем каждая из гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0.05% от общего количества гликановых структур ΡδΗ;
(χΐ) ΡδΗ содержит по меньшей мере 35 различных гликановых структур. причем каждая из гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0.1% от общего количества гликановых структур ΡδΗ;
(χΐΐΐ) ΡδΗ содержит по меньшей мере 20 различных гликановых структур. причем каждая из гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0.5% от общего количества гликановых структур ΡδΗ; и/или
(χίν) ΡδΗ содержит по меньшей мере на 40% больше различных гликановых структур. чем ΡδΗ. полученный из клеток СНО. причем каждая из различных гликановых структур составляет относитель- 2 029955
ное количество по меньшей мере 0,05% от общего количества гликановых структур ΡδΗ.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет нижеследующие характеристики:
(ί) относительное количество гликанов, несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (ΒίδΟΙοΝΑο), в диапазоне от около 25 до около 50%;
(ίί) относительное количество по меньшей мере четырехцепочечных гликанов составляет по меньшей мере 16%;
(ίίί) относительное количество гликанов, несущих фукозу, составляет по меньшей мере 35%;
(ίν) относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот находится в диапазоне от около 53 до около 99%; и
(ν) относительное количество гликанов, несущих один или более остатков сиаловой кислоты, составляет по меньшей мере 88%.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ. который имеет тип гликозилирования, выбранный из перечисленных в табл. 1.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который способен стимулировать выделение прогестерона зернистыми клетками
(а) в концентрациях, при которых не определяется выделение цАМФ в количестве, превышающем количество цАМФ, выделяемого в отсутствие ΡδΗ; и/или
(Β) индуцированием пути передачи сигнала, который независим от сигнализации цАМФ.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который способен стимулировать или костимулировать созревание гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет одну или более из нижеследующих характеристик, которые могут быть определены тестированием на зернистых клетках:
(а) ΡδΗ способен стимулировать выделение прогестерона зернистыми клетками в концентрациях, которые ниже минимально необходимых для индукции выделения цАМФ зернистыми клетками;
(Β) ΡδΗ способен стимулировать выделение по меньшей мере 200 нг/мл прогестерона из около 5-104-1 -105 зернистых клеток/мл при концентрациях ΡδΗ, которые не индуцируют выделение цДМФ или которые индуцируют выделение менее чем 10 пмоль/мл цАМФ;
(с) ΡδΗ способен стимулировать выделение по меньшей мере 100 нг/мл прогестерона из около 5-104-1-105 зернистых клеток/мл, в концентрациях, которые ниже, чем концентрация, необходимая для ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантного ΡδΗ, продуцированного в клетках СНО (Оопа1 Ρ); и/или
(ά) ΡδΗ способен стимулировать выделение по меньшей мере 100 нг/мл прогестерона из около 5-104-1-105 зернистых клеток/мл в концентрации, в которой ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантный ΡδΗ, продуцированный в клетках СНО (Оопа1 Ρ), не приводят к соответствующему выделению прогестерона.
Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который способен индуцировать рост фолликула у женщин при введении единичной дозы, причем единичная доза предпочтительно содержит 25-500 ΐυ ΡδΗ и предпочтительно вводится парентерально, в частности путем подкожной инъекции.
Настоящее изобретение также касается фармацевтической композиции для лечения бесплодия, содержащей вышеуказанный препарат рекомбинантного ΡδΗ и носитель, растворитель или фармацевтический эксципиент.
Вариантом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, которая представлена в форме единичной дозы, содержащей примерно от 50 до примерно 400 ΐυ ΡδΗ.
Настоящим изобретением является применение вышекуазанного препарата рекомбинантного ΡδΗ или вышеуказанной фармацевтической композиции для лечения бесплодия.
Вариантом настоящего изобретения является применение вышеуказнного препарата рекомбинантного ΡδΗ или фармацевтической композиции, где доза, вводимая пациенту, приводит к концентрации ΡδΗ в кровотоке пациента в диапазоне от около 0,05 до около 2 ΐυ/л, предпочтительно от около 0,1 до около 1 ΐυ/л.
Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного ΡδΗ или фармацевтической композиции для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов независимо от цАМФ.
Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного ΡδΗ или фармацевтической композиции для стимуляции или костимуляции созревания гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ.
Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного ΡδΗ или фармацевтической композиции для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов при концентрациях ΡδΗ, при которых не индуцируется выделение цАМФ в определяемом количестве,
- 3 029955
превышающем количество цАМФ, выделяемого в отсутствие Р8Н.
Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, где лечение бесплодия включает в себя вспомогательные репродуктивные технологии, индукцию овуляции, оплодотворение ίη νίίτο, например оплодотворение ш νίίτο с помощью внутриплазматической инъекции спермия, внесение гамет в фаллопиевы трубы, внутриматочное осеменение, лечение ановуляторного заболевания у женщин, лечение заболеваний, связанных с тяжелыми гормональными недостаточностями, для созревания яйцеклеток у женщин, лечение пороков продукции спермы у мужчин и/или создания возможности или улучшения созревания гамет, таких как фолликулогенез и сперматогенез, в частности созревание фолликула у женщин, например, по протоколам стимуляции оплодотворения ίη νίίτο и/или для лечения ановуляторного заболевания.
Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, в котором препарат рекомбинантного Р8Н или фармацевтическая композиция имеют одну или более из нижеследующих характеристик:
(ί) способны индуцировать рост фолликула и/или созревание яйцеклетки после введения лишь единичной дозы; и/или
(ίί) имеют более низкое время полужизни в кровотоке у одного или более человек, яванских макак, крыс и/или мышей, чем препараты Р8Н, полученные из мочи человека и/или экспрессированные в клетках СНО; и/или
(ίίί) имеют более низкую биодоступность у одного или более человек, яванских макак, крыс и/или мышей, чем препараты Р8Н, полученные из мочи человека и/или экспрессированные в клетках СНО; и/или
(ΐν) имеют терапевтическую эффективность для одного или более человек, яванских макак, крыс и/или мышей, которая сходна или более высока, чем у препаратов Р8Н, полученных из мочи человека и/или экспрессированных в клетках СНО.
Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции для индуцирования роста фолликула и/или созревания яйцеклетки. Другие задачи, признаки, преимущества и объекты данного изобретения станут ясны специалистам в данной области техники из нижеследующего описания и прилагаемой формулы изобретения. Следует понимать, однако, что нижеследующее описание, прилагаемая
Claims (1)
- формула изобретения и конкретные примеры, которые указывают на предпочтительные варианты осуществления заявки, даны только путем иллюстрации. Различные изменения и модификации в духе и сфере описанного изобретения станут легко понятны специалистам в данной области техники из прочтения нижеследующего.Подробное описание изобретенияОпределения.Так, как это использовано в данном документе, нижеследующие выражения в целом предназначены преимущественно иметь значения, описанные ниже, за исключением случаев, когда контекст, в котором они использованы, указывает иное.Выражение "содержать", так, как оно используется в данном документе, помимо своего обычного значения также включает в себя и конкретно отсылает к выражениям "состоит в основном из" и "состоит из". Таким образом, выражение "содержать" относится как к вариантам осуществления, в которых объект изобретения, который "содержит" конкретно перечисленные элементы, не содержит других элементов, так же и к вариантам осуществления, в которых предмет изобретения "содержит" конкретно поименованные элементы и может охватывать и/или действительно охватывает другие элементы.Термин "Р8Н" относится к фолликулстимулирующему гормону, гонадотропину. Р8Н представляет собой гликопротеин, содержащий две субъединицы, обозначаемые как а- и β-субъединицы. Предпочтительно Р8Н представляет собой Р8Н человека, в частности Р8Н человека, содержащего а-субъединицу, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 1, и β-субъединицу, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2. Однако одно или более как 1, 1 или 2, до 3, до 5, до 10 или до 20 аминокислотных замещений, дополнений и/или делеций могут присутствовать в одной или обеих субъединицах. Предпочтительно аминокислотная последовательность а-субъединицы обладает общей гомологией или идентичностью по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0: 1. Кроме того, аминокислотная последовательность β-субъединицы предпочтительно обладает общей гомологией или идентичностью по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0: 2. Субъединицы Р8Н предпочтительно имеют две отдельные полипептидные цепи, однако термин "Р8Н", так, как он использован в данном документе, также охватывает варианты осуществления, в которых две субъединицы ковалентно присоединены друг к другу, например перекрестно-сшивающими агентами или сшивающей полипептидной цепью, и варианты осуществления, в которых одна или обе субъединицы также разделены на несколько полипептидных цепей. Предпочтительно Р8Н по данному изобретению способен связываться с рецепто- 4 029955ром ΡδΗ и/или активировать [его], предпочтительно с ΡδΗ-рецептором человека. Термин "ΡδΗ", так, как он использован в данном документе, в частности, относится ко всем белкам ΡδΗ в препарате. Таким образом, термин "ΡδΗ", в частности, относится ко всем белкам ΡδΗ в препарате или композиции ΡδΗ.Предпочтительно обе субъединицы белка ΡδΗ содержат одну или более углеводных структур, присоединенных к полипептидной цепи. Более предпочтительно углеводные структуры присоединены к остатку аспарагина в субъединицах. В особенно предпочтительных вариантах осуществления асубъединица содержит две углеводные структуры, присоединенные к Αδη52 и Άδη78, и/или βсубъединица содержит две углеводные структуры, присоединенные к Αδη7 и Α8η24. Аминокислотные остатки, несущие углеводные структуры, обозначены исходя из аминокислотной последовательности аи β-субъединиц человека согласно δΕφ ΙΌ N08: 1 и 2 соответственно. Углеводная часть ΡδΗ человека предпочтительно образована фукозой, галактозой, маннозой, галактозамином, глюкозамином и/или сиаловой кислотой.ΡδΗ, так как это используется по данному изобретению, предпочтительно представляет собой рекомбинантный ΡδΗ, более предпочтительно рекомбинантный ΡδΗ человека. Термин "рекомбинантный ΡδΗ" относится к ΡδΗ, который продуцирован не природным путем живым организмом человека или в организме животного, а затем получен из образца, полученного от них, такого как моча, кровь или другие биожидкости организма, выделения или ткани организмов человека или животного. Предпочтительно рекомбинантный ΡδΗ получают из клеток, полученных с помощью биоинженерии, в частности из клеток, которые были трансформированы или трансфецированы нуклеиновой кислотой, кодирующей ΡδΗ или а- или β-субъединицу ΡδΗ. По предпочтительным вариантам осуществления рекомбинантный ΡδΗ получают из клеток человека, содержащих экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую ΡδΗ. Соответствующие экзогенные нуклеиновые кислоты могут быть введены, например, с помощью одного или более векторов экспрессии, которые могут быть введены в клетки-хозяева, например, путем трансфекции. Соответствующие способы рекомбинантного продуцирования белков и ΡδΗ хорошо известны из предшествующего уровня техники и, таким образом, не нуждаются в дальнейшем описании.ΡδΗ по данному изобретению предпочтительно представляет собой ΡδΗ, более предпочтительно ΡδΗ человека, получаемый путем продукции в клетках человека, предпочтительно в клеточной линии человека. Клеточная линия человека предпочтительно происходит из клеток крови человека, в частности это миелоидная клеточная линия, предпочтительно клеточная линия миелоидного лейкоза. Клеточная линия предпочтительно иммортализована. В предпочтительном варианте осуществления клеточная линия для продукции ΡδΗ по данному изобретению представляет собой клеточную линию СТ-58, депонированную 28 июля 2010 г. под номером доступа ΌδΜ АСС3078 в соответствии с требованиями Будапештского Договора в Германском Банке микроорганизмов и клеточных культур (ΌδΜΖ), ΙηΙιοΠοηδίΗίβο 7В, 38124 Брауншвейг (Германия (ΌΕ)) фирмой С1усоЮре СтЬИ. КоЬей-КС]88ΐθ-δίτ. 10, 13125 Берлин (ΌΕ), или клеточную линию, происходящую от нее, или гомологичную клеточную линию. СТ-58 представляет собой иммортализованную клеточную линию миелоидного лейкоза человека, которая способна обеспечить специфический тип гликозилирования, как описано в данном документе. По данному изобретению термин "СТ-58" и "клеточная линия СТ-58" также включает в себя клетки или клеточные линии, происходящие от СТ-58. Клеточная линия, которая происходит от СТ-58, может быть, например, получена случайным образом или специальным отбором одного клона или группы клеток из культуры СТ-58, если требуется, после обработки клеток СТ-58 с целью повысить в них частоту мутаций или генетического изменения клеточной линии СТ-58. Выбранный клон или группа клеток могут быть затем обработаны, как описано выше, или проведены последующие циклы отбора. Клеточная линия, которая гомологична СТ-58, в частности, представляет собой иммортализованную миелоидную клеточную линию человека. Предпочтительно клеточная линия, происходящая от СТ-58 или гомологичная ей, способна обеспечивать ΡδΗ, имеющий тип гликозилирования, сходный с полученным от СТ-58.Предпочтительно ΡδΗ, который продуцируется клеточной линией, происходящей от СТ-58 или гомологичной ей, имеет одну или более характеристик гликозилирования, описанных в данном документе, в частности, относительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 20% разделяющих Νацетилглюкозаминов (Ь^8С1сNΑс); и/или сравнительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 30% фукозы; и/или относительное количество по меньшей мере 30% 2,6-связанной сиаловой кислоты; и/или с разнообразным типом гликозилирования. По одному из вариантов осуществления клеточная линия, происходящая от СТ-58 или гомологичная ей, способна экспрессировать ΡδΗ, имеющий тип гликозилирования, описанный в данном документе как предпочтительный, в частности, с типом гликозилирования, выбранным из табл. 1. Сходный тип гликозилирования ΡδΗ, который продуцирован клеточной линией, происходящей от СТ-58 или гомологичной ей, предпочтительно отличается от типа гликозилирования ΡδΗ, полученного в СТ-58 на 20% или менее, более предпочтительно на 15% или менее, 10% или менее или 5% или менее, в частности, в одном или более, предпочтительно всех свойствах гликозилирования, выбранных из группы, содержащей сравнительное количество Ь^8С1сNΑс, сравнительное количество сиалированных гликанов, сравнительное количество сульфатированных гликанов, сравнительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот, сравнительное количество фукозы, сравнительное коли- 5 029955чество четырехцепочечных гликанов, сравнительное количество ветвей гликана, несущих галактозу, и число Ζ. Кроме того, ΡδΗ по данному изобретению предпочтительно представляет собой ΡδΗ, более предпочтительно ΡδΗ человека, имеющий одну или более специфических характеристик гликозилирования, как описано в данном документе, предпочтительно тип гликозилирования, выбранный из табл. 1. Клеточная линия ОТ-5з, как и клеточные линии, происходящие из нее, и клеточные линии, гомологичные ей, являются, в частности, имеющими преимущество, так как предоставляют очень стабильную и гомогенную продукцию, в частности, в отношении белка ΡδΗ. Они имеют очень хорошую однородность характеристик от серии к серии, т.е. продуцированные белки и их тип гликозилирования сходны при получении из разных партий или при продуцировании в различных масштабах и/или при различных процедурах культивирования. В частности, разнообразный тип гликозилирования, как это описано в данном документе, хорошо повторяем в различных партиях продукции с помощью этих клеточных линий для экспрессирования ΡδΗ.ΡδΗ по данному изобретению гликозилирован, т.е. модифицирован одним или более, предпочтительно четырьмя, олигосахаридами, присоединенными к полипептидным цепям. Эти олигосахариды, также именуемые гликанами или углеводами, могут иметь линейные или разветвленные сахаридные цепи и предпочтительно являются сложными Ν-связанными олигосахаридными цепями. В зависимости от числа ветвей олигосахариды именуются одно-, двух-, трех- или четырехцепочечными (или даже пятицепочечными). Одноцепочечный олигосахарид является неразветвленным, тогда как одно-, двух- или четырехцепочечный олигосахарид имеет одну, две или три ветви соответственно. Гликопротеин с более высокой разветвленностью, таким образом, имеет более одного олигосахаридного конца и может нести больше функциональных концевых сахаридных единиц, как, например, сиаловые кислоты. [Термин] "по меньшей мере, трехцепочечный", так, как это используется в данном документе, обозначает олигосахариды, имеющие разветвленность по меньшей мере 3, включая в себя трехцепочечные, четырехцепочечные и пятицепочечные олигосахариды. [Термин] "по меньшей мере, четырехцепочечный", так, как он используется в данном документе, обозначает олигосахариды, имеющие разветвленность, по меньшей мере, 4, включая в себя четырехцепочечные и пятицепочечные олигосахариды. Что касается Ν-гликанов комплексного типа, то разделяющий их остаток ΟΙεΝΆε предпочтительно не рассматривается как ветвь или цепь и, таким образом, это не сказывается на разветвленности ΡδΗ.Тип гликозилирования ΡδΗ, так как это используется в данном документе, в частности, относится к общему типу гликозилирования всех белков ΡδΗ в препарате ΡδΗ по данному изобретению. В частности, какие-либо гликановые структуры, содержащиеся в белке ΡδΗ и, таким образом, присоединенные к полипептидным цепям ΡδΗ в препарате ΡδΗ, рассматриваются как тип гликозилирования и отражают его.Термин "сиаловая кислота", в частности, относится к каким-либо Ν- или О-замещенным производным нейраминовой кислоты. Он может относиться и к δ-Ν-ацетилнейраминовой кислоте, и к 5-Νгликольнейраминовой кислоте, но предпочтительно относится только к 5-Л-ацетилнейраминовой кислоте. Сиаловая кислота, в частности 5-Л-ацетилнейраминовая кислота, предпочтительно присоединена к углеводной цепи через 2,3- или 2,6-связь. Предпочтительно в препаратах ΡδΗ, описанных в данном документе, присутствуют и 2,3-, и 2,6-связанные сиаловые кислоты.Степень сиалирования ΡδΗ обычно выражена в числе Ζ. Число Ζ показывает относительный отрицательный заряд гликановой структуры гликопротеина. Число Ζ рассчитывают по формулеΖ=Α1%*1+А2%*2+АЗ%*3+А4%*4,где А1% представляет собой процент гликанов с зарядом -1, А2% представляет собой процент гликанов с зарядом -2, А3% представляет собой процент гликанов с зарядом -3, а А4% представляет собой процент гликанов с зарядом -4. Эти проценты рассчитывают с учетом всех гликанов, присоединенных к ΡδΗ, включая в себя как заряженные, так и незаряженные гликаны. Заряд гликанов может быть обусловлен какой-либо заряженной моносахаридной единицей или заместителем, содержащимся в гликане, в частности, остатками сиаловой кислоты и/или сульфатными группами и/или фосфатными группами. Так как заряд гликанов ΡδΗ в целом определяется только их остатками сиаловой кислоты, а ΡδΗ в целом имеет четыре гликановых структуры, число Ζ является показателем количества сиаловых кислот в ΡδΗ или кислотности ΡδΗ. Однако когда ΡδΗ также содержит существенное количество сульфатированных гликанов, число Ζ является показателем комбинированных количеств сиаловых кислот и сульфатных групп."Относительное количество гликанов" по данному изобретению обозначает конкретный процент или процентный диапазон гликанов, присоединенных к гликопротеинам ΡδΗ препарата ΡδΗ или в композиции, содержащей ΡδΗ, соответственно. В частности, относительное количество гликанов обозначает конкретный процент или процентный диапазон всех гликанов, содержащихся в белках ΡδΗ и, таким образом, присоединенных к полипептидным цепям ΡδΗ в препарате ΡδΗ или в композиции, содержащей ΡδΗ. 100% гликанов обозначают все гликаны, присоединенные к гликопротеинам ΡδΗ препарата ΡδΗ или композиции, содержащей ΡδΗ, соответственно. Например, относительное количество гликанов, несущих 60% разделяющего ΟΙεΝΑε, обозначает препарат ΡδΗ, в котором 60% всех гликанов, содержащихся в белках ΡδΗ и, таким образом, присоединенных к полипептидным цепям ΡδΗ в упомянутом препарате ΡδΗ, содержат разделяющий остаток ΟΙεΝΑε, тогда как 40% всех гликанов, содержащихся в бел- 6 029955ках Р8Н и, таким образом, присоединенных к полипептидным цепям Р8Н в упомянутом препарате Р8Н, не содержат разделяющего остатка О1сЫАс.Величины, указанные в данном документе, в частности, относительные количества гликозилирований с конкретными свойствами, предпочтительно следует понимать как приблизительные величины. В частности, величины предпочтительно могут быть до 10% выше и/или ниже, в частности до 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1% выше и/или ниже."Препарат Р8Н" может входить в какую-либо композицию или вещество, содержащее или состоящее из Р8Н. Он может существовать в твердой или жидкой форме и может содержать другие ингредиенты в дополнение к Р8Н. В частности, препарат Р8Н может представлять собой раствор, содержащий Р8Н и подходящий растворитель, такой как вода и/или спирт, или порошок, полученный, например, в результате лиофилизации раствора, содержащего Р8Н. Подходящие примеры препарата Р8Н представляют собой композицию, полученную после экспрессии Р8Н в клетках, в частности, после очистки Р8Н, или фармацевтические композиции, содержащие Р8Н. Препарат Р8Н может содержать в дополнение к Р8Н, например, растворители, разбавители, наполнители, стабилизаторы, консерванты, соли, адъюванты и/или поверхностно-активные вещества. Термин "препарат Р8Н" используется в данном документе, в частности, в значении "композиция, содержащая Р8Н". Эти термины в данном документе предпочтительно используется синонимически."Относительное количество 2,6-связанной сиаловой кислоты" обозначает конкретный процент или процентный диапазон общего количества сиаловых кислот, являющихся 2,6-связанными сиаловыми кислотами. Относительное количество 2,6-связанной сиаловой кислоты в 100%, таким образом, означает, что все сиаловые кислоты представляют собой 2,6-связанные сиаловые кислоты. Например, относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот, составляющее 60%, обозначает препарат Р8Н, в котором 60% всех сиаловых кислот, содержащихся в белках Р8Н и, таким образом, присоединенных к олигосахаридным цепям белков Р8Н в упомянутом препарате Р8Н, присоединены через 2,6-связь, тогда как 40% всех сиаловых кислот, содержащихся в белках Р8Н и, таким образом, присоединенных к олигосахаридным цепям белков Р8Н в упомянутом препарате Р8Н, присоединены не через 2,6-связь, а, например, через 2,3-связь или 2,8-связь.Термин "разнообразный тип гликозилирования", в частности, обозначает тип гликозилирования белков Р8Н в препарате или композиции, чей тип гликозилирования содержит многочисленные различные гликановые структуры. Различные гликановые структуры представляют собой олигосахаридные структуры, которые различаются наличием/отсутствием, количеством и/или положением по меньшей мере одной моносахаридной единицы и/или по меньшей мере одной химической модификации, такой как, например, сульфатные остатки, ацетильные остатки или им подобное.Конкретно "различные гликановые структуры" предпочтительно рассматриваются в этом отношении, если их относительное количество составляет по меньшей мере 0,02%, более предпочтительно по меньшей мере 0,03%, по меньшей мере 0,05%, по меньшей мере 0,07%, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,15%, по меньшей мере 0,2%, по меньшей мере 0,25%, по меньшей мере 0,3% или по меньшей мере 0,5% общего количества гликановых структур в типе гликозилирования. Разнообразный тип гликозилирования, в частности, представляет собой тип гликозилирования, который содержит по меньшей мере 5 различных гликановых структур. Предпочтительно разнообразный тип гликозилирования содержит по меньшей мере 7, более предпочтительно по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 55, а наиболее предпочтительно по меньшей мере 60 различных гликановых структур. Разнообразный тип гликозилирования, в частности, также обозначает тип гликозилирования Р8Н в препарате или композиции, когда тип гликозилирования содержит больше различных гликановых структур, чем в Р8Н, полученном из клеток СНО, в соответствующем препарате или композиции. В частности, тип гликозилирования содержит по меньшей мере 10%, предпочтительно по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, а наиболее предпочтительно по меньшей мере 100% более различающихся гликановых структур, чем в Р8Н, полученном из клеток СНО.Термин "нуклеиновая кислота" включает в себя одноцепочечные и двухцепочечные нуклеиновые кислоты и рибонуклеиновые кислоты, так же как и дезоксирибонуклеиновые кислоты. Они могут содержать как естественные, так и синтетические нуклеотиды и могут быть модифицированы естественным образом или синтетически, например, путем метилирования, 5'- и/или 3'-кэппирования.Термин "вектор" используется в данном документе в его наиболее общем значении и содержит какой-либо промежуточный носитель нуклеиновой кислоты, который дает возможность упомянутой нуклеиновой кислоте, например, быть введенной в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяин и, там, где это адекватно, быть интегрированной в геном клетки-хозяина. Векторы этого типа предпочтительно являются реплицируемыми и/или экспрессируемыми в клетках-хозяевах. Вектор предпочтительно содержит один или более маркеров отбора для селекции клеток-хозяев, содержащих вектор. Подходящие маркеры отбора представляют собой гены устойчивости, которые обеспечивают клеткам-хозяевам- 7 029955устойчивость против, например, специфических антибиотиков. Другими подходящими маркерами отбора являются, например, гены ферментов, таких как ΌΗΡΡ или С8. Векторы, делающие возможным экспрессию рекомбинантных белков, включающих в себя Ρ8Η, так же как и подходящие кассеты экспрессии и элементы экспрессии, которые делают возможным экспрессию рекомбинантного белка в клеткаххозяевах с высоким выходом, хорошо известны из предшествующего уровня техники, также являются коммерчески доступными и, таким образом, не нуждаются в подробном описании в данном документе.Термины "клетка" и "клетки" и "клеточная линия" используются взаимозаменяемо и предпочтительно обозначают одну или более клеток млекопитающего, в частности, клетки человека. Термин включает в себя потомство клетки или клеточной популяции. Специалистам в данной области техники понятно, что "клетки" включают в себя потомство единственной клетки, и то, что потомство может не обязательно быть полностью идентичным (по морфологии или по общему комплементу ДНК) исходным родительским клеткам вследствие естественных, случайных или направленных мутаций и/или изменений. "Клетка" предпочтительно обозначает изолированные клетки и/или культивируемые клетки, которые не инкорпорированы в живой организм человека или животного.Термин "пациент" означает по данному изобретению человеческое существо, примата, не являющегося человеком, или иное животное, в частности, млекопитающее, такое как корова, лошадь, свинья, овца, коза, собака, кошка или грызуны, такие как мышь и крыса. В частности, в предпочтительном варианте осуществления пациент представляет собой человеческое существо. В случае пациента человека Ρ8Η предпочтительно представляет собой Ρ8Η человека. Пациент может быть мужского или женского пола, но предпочтительно женского.Термин "фармацевтическая композиция", в частности, обозначает композицию, подходящую для введения человеку или животному, т.е. композицию, содержащую компоненты, которые являются фармацевтически приемлемыми. Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит активное соединение, или его соль, или его пролекарственную форму вместе с носителем, разбавителем или фармацевтическим наполнителем, таким как буфер, консервант и модификатор тоничности.Международные единицы (ΐυ) Ρ8Η приводятся по четвертому международному стандарту для Ρ8Η и ΡΗ из мочи человека (81отп§, Р.Ь. & Сашек Эак. Р.Е. (2001) 1оигиа1 о£ Епйосгто1оду 171, 119-129) и определяются в соответствии со способом увеличения веса яичников (81ее1шап, 8.Ь & РоЫеу, Р.М. (1953) Епйосгто1оду 53, 604-616).Термин "лечение бесплодия" по данному изобретению означает лечение дисфункции или заболевания, относящееся к воспроизводству или плодовитости человека или животного. В частности, лечение бесплодия включает в себя вспомогательные репродуктивные технологии, индукцию овуляции, оплодотворение ίη уйго, внутриматочное осеменение, так же как и разблокирование или усиление созревания гамет, такое как фолликулогенез и сперматогенез.По данному изобретению термин "при котором не выделяется существенных количеств цАМФ" или подобные выражения, соответственно, в частности, обозначают выделение клетками или тканями цАМФ в количестве, которое составляет менее чем 25%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 15%, менее чем 10%, менее чем 7,5%, менее чем 5% или менее чем 2,5% количества выделенного цАМФ, полученного клетками или тканями после стимуляции Ρ8Η в концентрации, которая приводит к максимальному выделению цАМФ. Эти клетки или ткани восприимчивы или реактивны на стимуляцию Ρ8Η, такие как зернистые клетки или клетки Сертоли. Выделение цАМФ независимо от Ρ8Η, т.е. выделение цАМФ, которое также происходит в отсутствие Ρ8Η, не должно рассматриваться в этой связи. Предпочтительно "выделение существенного количества цАМФ" или "существенное выделение цАМФ" представляет собой какое-либо выделение цАМФ свыше выделения цАМФ в отсутствие Ρ8Η, в частности, какое-либо заметное выделение цАМФ, превышающее точность измерения. Стандартная процедура измерения выделения цАМФ описана в примерах и может быть использована для определения существенного или несущественного выделения цАМФ. "Выделение цАМФ" обозначает внутриклеточное выделение цАМФ и/или внеклеточное выделение или секрецию цАМФ, предпочтительно только секрецию цАМФ. цАМФ обозначает циклический аденозин монофосфат, который действует как молекула вторичного мессенджера в передаче клеточного сигнала. цАМФ синтезируется в клетках из АТФ аденилатциклазой. Биологический процесс или путь передачи сигнала, который "независим от сигнализации цАМФ" предпочтительно не вовлекает активацию аденилатциклазы."Половые стероиды", так же известны как стероиды гонад или половые гормоны, в частности, обозначают стероидные гормоны, которые взаимодействуют с рецепторами андрогенов или эстрогенов позвоночных. Термин "половые стероиды" включает в себя андрогены, такие как анаболические стероиды, андростендион, дегидроэпиандростерон, дигидротестростерон и тестостерон; эстрогены, такие как эстрадиол, эстриол и эстрон; и прогестерон. Предпочтительно половые стероиды обозначают встречающиеся в природе половые стероиды, более предпочтительно природные половые стероиды человека. Предпочтительными половыми стероидами по данному изобретению являются эстрадиол и прогестерон, в частности прогестерон.Данное изобретение по одному из объектов основывается на том факте, что улучшенный препарат рекомбинантного Ρ8Η, имеющий оптимальный тип гликозилирования, способен индуцировать секрецию- 8 029955половых стероидов, таких как прогестерон, при низких концентрациях ΡδΗ, при которых не индуцируется значительного выделения цАМФ. В частности, в этом конкретном объекте улучшенный ΡδΗ по данному изобретению в значительно более низких концентрациях индуцирует секрецию полового стероида, чем те, в которых обычно используются для ΡδΗ из мочи или рекомбинантного ΡδΗ, полученного из клеток СНО. Таким образом, улучшенный ΡδΗ может быть введен в намного более низких дозах, что уменьшает риск неблагоприятных побочных эффектов и, кроме того, снижает расходы на производство. Кроме того, улучшенный ΡδΗ, данный в сравнимых дозах, в этом варианте осуществления дает более продолжительную активность в организме пациента по сравнению с обычно используемым ΡδΗ, поскольку даже через длительное время после введения, когда лишь низкая концентрация ΡδΗ остается в кровотоке, ΡδΗ по этому варианту осуществления данного изобретения все еще проявляет свою биологическую активность и предпочтительно стимулирует или костимулирует созревание гамет и/или выделение половых стероидов. Далее в высоких концентрациях улучшенный ΡδΗ по данному изобретению и обычно используемый ΡδΗ из мочи или происходящий из СНО демонстрируют сравнимые эффекты. Следовательно, отсутствует дополнительный риск передозировки по сравнению с обычно используемым ΡδΗ.Кроме того, авторы данного изобретения показали на обезьянах - яванском макаке - что улучшенный ΡδΗ по данному изобретению имеет сходный или даже более сильный фармакологический эффект по сравнению с обычно используемым ΡδΗ из мочи или происходящий из СНО. Это особенно удивительно, поскольку ΡδΗ по данному изобретению демонстрирует более низкие максимальные концентрации в сыворотке (Стах) и время полужизни в кровотоке, чем обычные препараты ΡδΗ, полученные из мочи или клеток СНО. Поскольку несмотря на более низкую биологическую доступность, улучшенный ΡδΗ имеет сходный или больший фармакологический эффект, можно заключить, что улучшенный ΡδΗ по данному изобретению имеет более высокую специфическую терапевтическую активность, чем ΡδΗ из мочи или происходящий из СНО. В соответствии с полученными клиническими данными у человека улучшенный ΡδΗ по данному изобретению имеет существенно более высокий Стах, чем у обычных препаратов ΡδΗ; однако время полужизни в кровотоке немного ниже, хотя и сравнимо, у улучшенного ΡδΗ. Наиболее удивительно то, что улучшенные препараты ΡδΗ по данному изобретению демонстрируют терапевтические эффекты на человеке, в частности рост фолликулов, даже после введения всего лишь единичной дозы. Напротив, после введения единичной дозы обычно используемых препаратов ΡδΗ никаких эффектов не наблюдалось. Следовательно, ожидается, что улучшенный ΡδΗ может дать более точное лечебное действие. В частности, возможно, использовать точно рассчитанное по времени и единичным дозам лечение, и конкретно улучшить плодовитость пациента, и потенциально не требуется длительное непрерывное лечение. Также уменьшается риск многоплодных беременностей.Суммарно, улучшенные препараты ΡδΗ по данному изобретению более эффективны. Следовательно, пациенту могут быть введены меньшие дозы, которые вызывают меньшие побочные эффекты, более подходят пациенту, и менее дорогостоящи. Кроме того, улучшенный ΡδΗ делает возможным более специфичный и детализированный режим приема. Кроме того, уменьшенное время полужизни уменьшает нежелательные побочные эффекты и, кроме того, обеспечивает более быстрое удаление ΡδΗ из организма человека после прекращения терапии.Не будучи связанными этой теорией, авторы данного изобретения предполагают, что более высокая терапевтическая активность препаратов ΡδΗ по данному изобретению основана на улучшенном типе гликозилирования. В частности, за более высокую активность могут быть ответственны большие количества разделяющих остатков С1сЫЛс и/или большие количества 2,6-связанных сиаловых кислот, так же как большие количества сульфатированных гликанов. Кроме того, препараты ΡδΗ по данному изобретению также демонстрируют значительно более разнообразный и сложный тип гликозилирования, что означает, что в препарате представлены более разнообразные гликановые структуры по сравнению с общепринятыми препаратами ΡδΗ, полученными, например, из клеток СНО. Полагают, что ΡδΗ, происходящий из СНО, способен активировать единственный путь [передачи сигнала] в клетках-мишенях, тогда как улучшенный ΡδΗ по данному изобретению, благодаря уникальному типу гликозилирования, очевидно, проявляет свою биологическую активность через многочисленные различные пути, что приводит к усилению биологического ответа. Как показано экспериментальными данными в данном документе, некоторые из этих путей вовлекают сигнализацию с участием цАМФ, тогда как другие, новые пути являются цАМФ-независимыми.В свете этих открытий первый объект данного изобретения предоставляет собой препарат рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека (ΡδΗ), который имеет тип гликозилирования, обладающий нижеследующими характеристиками:(ί) относительное количество гликанов, несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (ЫкОкЫЛс), по меньшей мере 20% от общего количества гликанов, присоединенных к ΡδΗ;(ίί) относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот по меньшей мере 40% от общего количества сиаловых кислот.Вариантом настоящего изобретения является препарат, который(ттт) имеет относительное количество гликанов, несущих фукозу, по меньшей мере 30% от общего- 9 029955количества гликанов,присоединенных к ΡδΗ; и/или(ίν) содержит по меньшей мере 35 различных гликановых структур, где относительное количество каждой из этих различных гликановых структур составляет по меньшей мере 0,1% от общего количества гликановых структур ΡδΗ.Другим вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, продуцируемый в миелоидной клеточной линии ΟΤ-5δ человека, депонированной под номером ΌδΜΑΟΟ3078.Также вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет профиль гликозилирования, обладающий нижеследующими характеристиками:(ί) относительное количество гликанов, несущих ΒίδΟΡΝΑο по меньшей мере 25% от общего количества гликанов, присоединенных к ΡδΗ; и(ίί) относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот по меньшей мере 40% от общего количества сиаловых кислот.Еще одним вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет профиль гликозилирования, обладающий нижеследующими характеристиками:(ί) относительное количество гликанов, несущих ΒίδΟΙοΝΑο, по меньшей мере 30% от общего количества гликанов, присоединенных к ΡδΗ; и(ίί) относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот по меньшей мере 50% от общего количества сиаловых кислот.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет одну или более из нижеследующих характеристик:(a) тип гликозилирования имеет относительное количество гликанов, несущих один или более остатков сиаловой кислоты, по меньшей мере 85%;(b) тип гликозилирования имеет относительное количество, по меньшей мере, четырехцепочечных, гликанов по меньшей мере 18%;(c) число Ζ составляет по меньшей мере 200;(Д) ΡδΗ продуцирован клеточной линией человека или клетками человека и/или(е) ΡδΗ содержит α-субъединицу, имеющую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0:1 и β-субъединицу, имеющую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0:2.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет одну или более из нижеследующих характеристик:(ί) относительное количество гликанов, несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (ΒίδΟΚΝΑΟ, в диапазоне от около 25 до около 50%;(ίί) относительное количество, по меньшей мере, четырехцепочечных, гликанов по меньшей мере16%;(ίίί) относительное количество гликанов, несущих фукозу, по меньшей мере 35%;(ίν) относительное количество 2,6-связанной сиаловой кислоты по меньшей мере 53%;(ν) относительное количество гликанов, несущих один или более остатков сиаловой кислоты, по меньшей мере 88%;(νί) число Ζ по меньшей мере 220;(νίί) относительное количество гликанов, несущих галактозу, по меньшей мере 95%;(νίίί) относительное количество ветвей гликана, несущих концевые единицы галактозы, необязательно, модифицированных остатками сиаловой кислоты, по меньшей мере на 60%;(ίχ) относительное количество гликанов, несущих сульфатные группы, по меньшей мере 3%;(х) ΡδΗ содержит по меньшей мере 45 различных гликановых структур, причем каждая из гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0,05% от общего количества гликановых структур ΡδΗ;(χί) ΡδΗ содержит по меньшей мере 35 различных гликановых структур, причем каждая из гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0,1% от общего количества гликановых структур ΡδΗ;(χίίί) ΡδΗ содержит по меньшей мере 20 различных гликановых структур, причем каждая из гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0,5% от общего количества гликановых структур ΡδΗ; и/или(χίν) ΡδΗ содержит по меньшей мере на 40% больше различных гликановых структур, чем ΡδΗ, полученный из клеток СНО, причем каждая из различных гликановых структур составляет относительное количество по меньшей мере 0,05% от общего количества гликановых структур ΡδΗ.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного ΡδΗ, который имеет нижеследующие характеристики:(ί) относительное количество гликанов, несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (ΒίδΟΚΝΑΑ, в диапазоне от около 25 до около 50%;(ίί) относительное количество, по меньшей мере, четырехцепочечных гликанов составляет по меньшей мере 16%;- 10 029955(ίίί) относительное количество гликанов, несущих фукозу, составляет по меньшей мере 35%;(ίν) относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот находится в диапазоне от около 53 до около 99%;(ν) относительное количество гликанов, несущих один или более остатков сиаловой кислоты, составляет по меньшей мере 88%.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного Р8Н, который имеет тип гликозилирования, выбранный из перечисленных в табл. 1.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного Р8Н, который способен стимулировать выделение прогестерона зернистыми клетками(a) в концентрациях, при которых не определяется выделение цАМФ в количестве, превышающем количество цАМФ, выделяемого в отсутствие Р8Н; и/или(b) индуцированием пути передачи сигнала, который независим от сигнализации цАМФ.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного Р8Н, который способенстимулировать или костимулировать созревание гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного Р8Н, который имеет одну или более из нижеследующих характеристик, которые могут быть определены тестированием на зернистых клетках:(a) Р8Н способен стимулировать выделение прогестерона зернистыми клетками в концентрациях, которые ниже минимально необходимых для индукции выделения цАМФ зернистыми клетками;(b) Р8Н способен стимулировать выделение по меньшей мере 200 нг/мл прогестерона из около 5-104-1 -105 зернистых клеток/мл при концентрациях Р8Н, которые не индуцируют выделение цДМФ или которые индуцируют выделение менее чем 10 пмоль/мл цАМФ;(c) Р8Н способен стимулировать выделение по меньшей мере 100 нг/мл прогестерона из около 5-104-1-105 зернистых клеток/мл, в концентрациях, которые ниже, чем концентрация, необходимая для Р8Н из мочи человека или рекомбинантного Р8Н, продуцированного в клетках СНО (Оопа1 Р); и/или(й) Р8Н способен стимулировать выделение по меньшей мере 100 нг/мл прогестерона из около 5-104-1-105 зернистых клеток/мл в концентрации, в которой Р8Н из мочи человека или рекомбинантный Р8Н, продуцированный в клетках СНО (Оопа1 Р), не приводят к соответствующему выделению прогестерона.Вариантом настоящего изобретения является препарат рекомбинантного Р8Н, который способен индуцировать рост фолликула у женщин при введении единичной дозы, причем единичная доза предпочтительно содержит 25-500 ΐυ Р8Н и предпочтительно вводится парентерально, в частности, путем подкожной инъекции.Настоящее изобретение также касается фармацевтической композиции для лечения бесплодия, содержащей вышеуказанный препарат рекомбинантного Р8Н и носитель, растворитель или фармацевтический эксципиент.Вариантом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, которая представлена в форме единичной дозы, содержащей примерно от 50 до примерно 400 ΐυ Р8Н.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или вышеуказанной фармацевтической композиции для лечения бесплодия.Вариантом настоящего изобретения является применение вышеуказнного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, где доза, вводимая пациенту, приводит к концентрации Р8Н в кровотоке пациента в диапазоне от около 0,05 до около 2 ΐυ/л, предпочтительно от около 0,1 до около 1 ΐυ/л.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов независимо от цАМФ.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции для стимуляции или костимуляции созревания гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов при концентрациях Р8Н, при которых не индуцируется выделение цАМФ в определяемом количестве, превышающем количество цАМФ, выделяемого в отсутствие Р8Н.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, где лечение бесплодия включает в себя вспомогательные репродуктивные технологии, индукцию овуляции, оплодотворение ίη νΐίτο, например оплодотворение ίη νΐίτο с помощью внутриплазматической инъекции спермия, внесение гамет в фаллопиевы трубы, внутриматочное осеменение, лечение ановуляторного заболевания у женщин, лечение заболеваний, связанных с тяжелыми гормональными недостаточностями, для созревания яйцеклеток у женщин, лечение пороков- 11 029955продукции спермы у мужчин, и/или создания возможности или улучшения созревания гамет, таких как фолликулогенез и сперматогенез, в частности созревание фолликула у женщин, например, по протоколам стимуляции оплодотворения ίη νίίτο и/или для лечения ановуляторного заболевания.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, в котором препарат рекомбинантного Р8Н или фармацевтическая композиция имеют одну или более из нижеследующих характеристик:(ί) способны индуцировать рост фолликула и/или созревание яйцеклетки после введения лишь единичной дозы; и/или(ίί) имеют более низкое время полужизни в кровотоке у одного или более человек, яванских макак, крыс и/или мышей, чем препараты Р8Н, полученные из мочи человека и/или экспрессированные в клетках СНО; и/или(ίίί) имеют более низкую биодоступность у одного или более человек, яванских макак, крыс и/или мышей, чем препараты Р8Н, полученные из мочи человека и/или экспрессированные в клетках СНО; и/или(ίν) имеют терапевтическую эффективность для одного или более человек, яванских макак, крыс и/или мышей, которая сходна или более высока, чем у препаратов Р8Н, полученных из мочи человека и/или экспрессированных в клетках СНО.Настоящим изобретением является применение вышеуказанного препарата рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции для индуцирования роста фолликула и/или созревания яйцеклетки.В определенных вариантах осуществления данное изобретение предоставляет препарат Р8Н, в котором Р8Н в препарате имеет тип гликозилирования, имеющий одну или более из нижеследующих характеристик:(ί) относительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 35% разделяющих Νацетилглюкозаминов (ΡίδΟΙεΝΆε);(ίί) относительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 60% фукозы;(ίίί) относительное количество 2,6-связанной сиаловой кислоты по меньшей мере 30%.Предпочтительно упомянутый Р8Н представляет собой рекомбинантный Р8Н и, таким образом, получен путем рекомбинантной продукции в клетке-хозяине, которая предпочтительно представляет собой клетку-хозяин человека. Подходящие клетки-хозяева человека, которые предоставляют соответствующий тип гликозилирования, описаны далее.Предпочтительно тип гликозилирования содержит по меньшей мере два признака из (ί), (ίί) и (ίίί) (в частности, признаки (ί) и (ίί), (ί) и (ίίί) или (ίί) и (ίίί)), а более предпочтительно все признаки (ί), (ίί) и (ίίί)). Кроме того, тип гликозилирования может также содержать относительное количество по меньшей мере 15%, по меньшей мере, четырехцепочечных гликанов и/или относительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 80% одного или более остатков сиаловой кислоты, и/или относительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 95% галактозы, и/или относительное количество ветвей гликана, несущих по меньшей мере 60% ветвей концевых единиц галактозы, и/или относительное количество гликанов, несущих по меньшей мере 1%, предпочтительно по меньшей мере 2,5% сульфатных групп. Концевая единица галактозы может, если требуется, нести остаток сиаловой кислоты. Рекомбинантный Р8Н в композиции предпочтительно имеет число Ζ по меньшей мере 200.Относительное количество гликанов, несущих ΡίδΟΙεΝΑε, предпочтительно составляет по меньшей мере 25%, по меньшей мере 27%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 38% или по меньшей мере 40%. Более предпочтительно оно находится в диапазоне от около 25 до около 60%, в частности в диапазоне от около 35 до около 60%, или в диапазоне от около 38 до около 50%, или в диапазоне от около 40 до около 45%. По одному из вариантов осуществления он составляет около 42%. Относительное количество гликанов, несущих один или более остатков сиаловой кислоты, составляет предпочтительно по меньшей мере 83%, по меньшей мере 85% или по меньшей мере 88%, а более предпочтительно в диапазоне от около 85 до около 98% или в диапазоне от около 88 до около 95%, наиболее предпочтительно около 90%. Число Ζ предпочтительно составляет по меньшей мере 210, более предпочтительно по меньшей мере 215, по меньшей мере 220, по меньшей мере 230 или по меньшей мере 240. Более высокие числа Ζ достижимы, например, путем обогащения препарата Р8Н кислыми и/или отрицательно заряженными белками Р8Н. Предпочтительно относительное количество, по меньшей мере, четырехцепочечных гликанов составляет по меньшей мере 16%, по меньшей мере 17%, по меньшей мере 18% или по меньшей мере 19%, более предпочтительно по меньшей мере 20% или по меньшей мере 21%. Относительное количество, по меньшей мере, трехцепочечных гликанов, в частности трех- и четырехцепочечных гликанов, предпочтительно составляет по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35% или по меньшей мере 40%, более предпочтительно по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50% или по меньшей мере 55%. Предпочтительно относительное количество гликанов, несущих фукозу, составляет по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%, более предпочтительно по меньшей мере 75% или по меньшей мере 78%. Оно может находиться в диапазоне от 70 до около 90%, в частности в диапазоне от около 75 до около 85%. Предпочтительно относительное количество 2,6-связанной сиаловой кислоты составляет- 12 029955по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 53%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 65%, в частности в диапазоне от около 40 до около 99%, предпочтительно от около 40 до около 80%, от около 50 до около 60% или от около 53 до около 70%. Предпочтительно отношение 2,3-связанной сиаловой кислоты к 2,6-связанной сиаловой кислоте находится в диапазоне от около 1:10 до около 7:3, более предпочтительно от около 1:5 до около 3:2 или от около 1:2 до около 1:1, наиболее предпочтительно от около 2:3 до около 1:1. В предпочтительных вариантах осуществления относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот превышает таковое 2,3-связанных сиаловых кислот. Относительное количество гликанов, несущих галактозу, предпочтительно составляет по меньшей мере 97%, а наиболее предпочтительно составляет около 98%. Предпочтительно относительное количество ветвей гликана, несущих единицы галактозы, если требуется, может быть модифицировано остатком сиаловой кислоты и составляет по меньшей мере 65%, более предпочтительно по меньшей мере 70% или по меньшей мере 73%. Оно находится предпочтительно в диапазоне от около 60 до около 95%, а более предпочтительно в диапазоне от около 70 до около 80%. Предпочтительно относительное количество гликанов, несущих сульфатную группу (сульфатированные гликаны) составляет по меньшей мере 1%, по меньшей мере 1,5%, по меньшей мере 2%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 3% или по меньшей мере 5%, более предпочтительно по меньшей мере 7%, по меньшей мере 10% или по меньшей мере 12%. По одному из вариантов осуществления относительное количество гликанов, несущих сульфатную группу, не превышает 50%, предпочтительно 40, 35, 30, 25 или 20%.В предпочтительных вариантах осуществления Р8Н в препарате имеет разнообразный тип гликозилирования, в котором Р8Н в препарате содержит по меньшей мере 45 или предпочтительно по меньшей мере 50 разных гликановых структур, в которых каждая из различных гликановых структур имеет относительное количество по меньшей мере 0,05% от общего количества гликановых структур Р8Н в препарате. По одному из вариантов осуществления Р8Н в препарате содержит по меньшей мере 35 или предпочтительно по меньшей мере 40 различных гликановых структур, в которых каждая из различных гликановых структур имеет относительное количество по меньшей мере 0,1% от общего количества гликановых структур Р8Н в препарате; и/или Р8Н в препарате содержит по меньшей мере 20 или предпочтительно по меньшей мере 25 различных гликановых структур, в которых каждая из различных гликановых структур имеет относительное количество по меньшей мере 0,5% от общего количества гликановых структур Р8Н в препарате. В еще одном варианте осуществления Р8Н в препарате содержит по меньшей мере на 40%, предпочтительно по меньшей мере на 50% больше гликановых структур, чем Р8Н, полученный из клеток СНО в соответствующем препарате, в котором каждая из различных гликановых структур имеет относительное количество по меньшей мере 0,05, 0,1 или 0,5% от общего количества гликановых структур Р8Н в соответствующем препарате.В предпочтительных вариантах осуществления препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению не содержит Ν-гликолилнейраминовых кислот (ЫеиОс) или обнаруживаемых количеств ЫеиОс. Кроме того, препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению предпочтительно также не содержит эпитопов Оа1Ш (структур Оа1а1,3-Оа1) или обнаружимых количеств эпитопа Оа1Ш.Данное изобретение, в частности, предоставляет Р8Н с типом гликозилирования человека. Благодаря таким свойствам гликозилирования отсутствуют чужеродные иммуногенные не принадлежащие человеку структуры, которые индуцируют побочные эффекты, что означает, что устранены нежелательные побочные эффекты или недостатки, о которых известно, что они обусловлены определенными чужеродными углеводными структурами, такими как иммуногенные не принадлежащие человеку сиаловые кислоты (№иОс) или эпитопы Оа1Ш (структуры Оа1-Оа1), которые оба известны в системах продукции грызунов, или другие структуры, подобные иммуногенным, обогащенные маннозой структуры, известные, например, в дрожжевых системах.В определенных вариантах осуществления тип гликозилирования рекомбинантного Р8Н в препарате по данному изобретению содержит одну или более, предпочтительно все из нижеследующих характеристик:(ί) относительное количество гликанов, несущих разделяющий Ν-ацетилглюкозамин (Ь^8О1сNΑс), в диапазоне от около 25 до около 50%;(ίί) относительное количество гликанов, несущих фукозу, по меньшей мере 35%;(ίίί) относительное количество 2,6-связанной сиаловой кислоты по меньшей мере 53%;(ΐν) относительное количество гликанов, несущих одну или более остатков сиаловой кислоты, по меньшей мере 88% и(ν) относительное количество, по меньшей мере, четырехцепочечных гликанов по меньшей мере16%.В определенных вариантах осуществления препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению имеет тип гликозилирования, перечисленный в нижеследующей табл. 1.- 13 029955Таблица 1Конкретные параметры гликозилирования
Вариант осуществления В 2, 6-3 сульфат 5>0 Ζ тетра 1 >2 0 >53 >2,5 2 >2 0 >53 >2,5 >80 >200 >15 3 >2 0 >53 >2,5 >85 4 >2 0 >53 >2,5 >220 5 >2 0 >53 >2,5 >17 6 >2 0 >53 >2,5 >85 >220 >17 7 20-50 >53 >2,5 8 >2 0 53-80 >2,5 9 >2 0 >53 2,5-30 10 >2 0 >53 >2,5 >80 200-260 >15 11 >2 0 >53 >2,5 >80 >200 15-30 12 20-50 53-80 2,5-30 80-100 200-260 15-30 13 >25 >55 >3 14 >30 >55 >3 15 >25 >60 >3 16 >25 >55 >10 17 >30 >60 >10 18 >25 >55 >3 >80 >200 >15 19 >25 >55 >3 >85 >220 >17 20 >30 >60 >10 >85 >220 >17 Показаны относительные количества гликанов, имеющих нижеследующие свойства.В: разделяющий ΟΙοΝΛο; 2,6-8: 2,6-связанная сиаловая кислота; сульфат: сульфатированные гликаны; 8>О: по меньшей мере одна сиаловая кислота; Ζ: число Ζ; тетра: по меньшей мере, четырехцепочечные гликаны.В вариантах осуществления 1-12, перечисленных в табл. 1, предпочтительно относительное количество разделяющего ΟΙοΝΛο составляет по меньшей мере 25%, а не по меньшей мере 20%; и/или относительное количество 2,6-связанных сиаловых кислот предпочтительно составляет по меньшей мере 55%, более предпочтительно по меньшей мере 60%, а не по меньшей мере 53%; и/или относительное количество сульфатированных гликанов предпочтительно составляет по меньшей мере 3%, более предпочтительно по меньшей мере 10%, а не по меньшей мере 2,5%. Типы гликозилирования, перечисленные в табл. 1, предпочтительно являются типами гликозилирования человека и/или не содержат №иОе и эпитопа ОаНН.Кроме того, данное изобретение предоставляет препарат рекомбинантного Р8Н, который может быть получен путем продукции в клетках-хозяевах человека или в клеточной линии человека. Предпочтительно рекомбинантный Р8Н может быть получен из миелоидной клеточной линии человека, предпочтительно иммортализованной клеточной линии миелоидного лейкоза человека, в частности клеточной лини ОТ-5з или клеточной линии, происходящей от нее, или клеточной линии, гомологичной ОТ-5з. Было обнаружено, что Р8Н, продуцированный в упомянутой клеточной линии, демонстрирует тип гликозилирования, как описано выше, и, в частности, демонстрирует благоприятный терапевтический и фармакологический эффекты, описанные в данном документе. Таким образом, данное изобретение также относится к способу продукции препарата рекомбинантного Р8Н путем рекомбинантной экспрессии Р8Н в подходящей клеточной линии, в частности, клеточной линии, как описано выше, предпочтительно клеточной линии ОТ-5 з, клеточной линии, происходящей от ОТ-5з, или клеточной линии, гомологичной ОТ-5з. Рекомбинантный Р8Н, продуцированный соответствующим образом, может быть выделен и, если требуется, очищен.Таким образом, препарат рекомбинантного Р8Н предпочтительно может быть получен путем процесса, содержащего стадии:- 14 029955(ί) культивирование клеток-хозяев человека, предпочтительно происходящих от клеточной линии ОТ-58 или гомологичной клеточной линии, содержащей нуклеиновые кислоты, кодирующие а- и βсубъединицы РЗН в условиях, подходящих для экспрессии РЗН; и(ίί) выделение РЗН.Клетки-хозяева человека, использованные для экспрессии, предпочтительно представляют собой миелоидные клетки, в частности иммортализованные клетки миелоидного лейкоза, а предпочтительно являются или происходят от клеточной линии ОТ-58 или клеточной линии, гомологичной ей. Клеткихозяева человека культивируются так, что они экспрессируют Р8Н. Подходящие условия культивирования известны специалистам. Выделение Р8Н предпочтительно содержит также стадии:a) получение супернатанта культуры, в который Р8Н секретируется клетками человека, или лизирование клеток человека, из которых Р8Н не секретируется;b) выделение Р8Н из супернатанта культуры или лизата клеток с использованием хроматографических стадий, таких как обращенно-фазовая хроматография, гель-хроматография и/или хроматография с гидрофобным взаимодействием; иc) если необходимо, получение кислой фракции Р8Н путем устранения основных изоформ Р8Н, предпочтительно путем использования анионообменной хроматографии, включающей в себя стадию отмывки, при которой удаляются основные изоформы Р8Н, такие как стадия отмывки при рН около 5,0, или около рН 4,5, или около рН 4,0.Предпочтительно нуклеиновая кислота, кодирующая а-субъединицу Р8Н, и нуклеиновая кислота, кодирующая β-субъединицу Р8Н, содержащиеся в кассетах экспрессии, содержали подходящий вектор экспрессии, который позволяет экспрессию в клетках-хозяевах человека. Нуклеиновая кислота, кодирующая а-субъединицу Р8Н, и нуклеиновая кислота, кодирующая β-субъединицу Р8Н, могут содержаться в одном и том же векторе, но предпочтительно содержатся в отдельных векторах. Кроме того, они могут экспрессироваться из одной кассеты экспрессии с помощью соответствующих элементов, таких как элементы 1КЕЗ. Предпочтительно Р8Н секретируется клетками человека. В предпочтительных вариантах осуществления культивирование клеток человека выполняется в ферментере и/или в бессывороточных условиях.Подходящий процесс очистки для рекомбинантного Р8Н описан, например, в заявке на патент США № ИЗ 61/263931, европейской заявке на патент ЕР 09014585.5 и заявке на патент РСТ № \νϋ 2011/063943.Препарат рекомбинантного РЗН, который можно получить путем продукции в клетках-хозяевах человека или в клеточной линии человека, предпочтительно демонстрирует признаки, описанные в данном документе, для препарата рекомбинантного РЗН по данному изобретению. В частности, его тип гликозилирования содержит одну или более характеристик, описанных выше, предпочтительно по меньшей мере один тип гликозилирования, описанный в табл. 1 и/или в пп.1-6 формулы изобретения.В предпочтительных вариантах осуществления объектов данного изобретения рекомбинантный РЗН по данному изобретению представляет собой рекомбинантный РЗН человека (гЬРЗН), предпочтительно тот, который можно получить путем продукции в клеточной линии человека, такой как клеточная линия ОТ-58, которая содержит одну или более нуклеиновых кислот, кодирующих субъединицы РЗН человека и элементы, [требующиеся] для экспрессии упомянутых одной или более нуклеиновых кислот в клетках-хозяевах. Предпочтительно а-субъединица гЬРЗН имеет аминокислотную последовательность в соответствии с ЗЕО ГО N0: 1 или аминокислотную последовательность, имеющую гомологию или предпочтительно идентичность с ЗЕО ГО N0: 1 по всей ее длине по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98%. В предпочтительных вариантах осуществления а-субъединица гЬРЗН содержит остаток аспарагина в положениях 52 и 78 и гликозилирована по аминокислотам А8п52 и А8п78. β-субъединица гЬРЗН предпочтительно имеет аминокислотную последовательность по ЗЕО ГО N0: 2 или аминокислотную последовательность, имеющую гомологию или предпочтительно идентичную ЗЕО ГО N0: 2 по всей ее длине, по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98%. В предпочтительных вариантах осуществления βсубъединица гЬРЗН содержит остатки аспарагина в положениях 7 и 24 и гликозилированы по аминокислотам А8п7 и А8п24.По одному из вариантов осуществления препарат рекомбинантного РЗН по данному изобретению способен стимулировать выделение прогестерона зернистыми клеткамиa) в концентрациях, при которых не выделяется существенных количеств цАМФ; и/илиb) путем индуцирования путей передачи [внутриклеточного] сигнала, которые независимы от сигнализации цАМФ.По одному из вариантов осуществления препарат рекомбинантного РЗН по данному изобретению способен стимулировать или костимулировать созревание гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ. Неожиданно было обнаружено, что тип гликозилирования, описанный выше, дает собственный новый фармакологический профиль рекомбинантного РЗН, который- 15 029955демонстрирует фармакологические и терапевтические преимущества, описанные в данном документе.Препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению может иметь одну или более из описанных далее характеристик, которые могут быть определены испытанием на зернистых клетках (как, например, описано в примере 2). Как продемонстрировано примерами, рекомбинантный ΡδΗ, имеющий описанный выше тип гликозилирования, и, в частности, рекомбинантный ΡδΗ, который может быть получен путем продукции в клеточной линии ΟΤ-5δ, демонстрирует описанные далее характеристики, которые дают фармакологические и терапевтические преимущества, описанные в данном документе.Препарат рекомбинантного ΡδΗ по одному из вариантов осуществления способен стимулировать выделение прогестерона в зернистых клетках при концентрациях, которые ниже минимальной концентрации, необходимой для индукции выделения цАМФ зернистыми клетками. Выделение прогестерона, эстрадиола и/или цАМФ, упомянутые ниже, относятся к выделению ίη νίίτο около 1-104 до около 1-106 зернистых клеток/мл, предпочтительно около 5-104 до около 1-105 зернистых клеток/мл, в частности в условиях, описанных ниже в примере 2.Предпочтительно препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению способен выделять по меньшей мере 100 нг/мл, по меньшей мере 150 нг/мл, по меньшей мере 200 нг/мл, предпочтительно по меньшей мере 250 нг/мл, по меньшей мере 300 нг/мл или по меньшей мере 400 нг/мл прогестерона при концентрациях, которые не индуцируют выделения цАМФ или которые индуцируют выделение цАМФ менее чем 20 пмоль/мл, менее чем 15 пмоль/мл, менее чем 10 пмоль/мл, менее чем 5 пмоль/мл.Кроме того, препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению предпочтительно способен выделять по меньшей мере 100 нг/мл, по меньшей мере 200 нг/мл, предпочтительно по меньшей мере 300 нг/мл или по меньшей мере 400 нг/мл прогестерона при концентрации ΡδΗ, которая ниже, чем концентрация, необходимая при [использовании] ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантного ΡδΗ, продуцированного клетками СНО (Оопа1 Ρ). Таким образом, предпочтительна способность выделять по меньшей мере 100 нг/мл, по меньшей мере 200 нг/мл, предпочтительно по меньшей мере 300 нг/мл или по меньшей мере 400 нг/мл прогестерона при концентрациях, в которых ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантный ΡδΗ, продуцированный в клетках СНО (Оопа1 Ρ), не приводят к соответствующему равному по величине выделению прогестерона. Как показано примерами, рекомбинантный ΡδΗ по данному изобретению индуцирует или, соответственно, стимулирует продукцию прогестерона более сильно, чем ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантный ΡδΗ, продуцированный в клетках СНО (Оопа1 Ρ).Кроме того, препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению предпочтительно способен выделять по меньшей мере 50 нмоль/л, по меньшей мере 75 нмоль/л, по меньшей мере 100 нмоль/л, по меньшей мере 125 нмоль/л или по меньшей мере по меньшей мере 150 нмоль/л эстрадиола при концентрации ΡδΗ, которая не индуцирует выделение цАМФ или которая индуцирует выделение цАМФ менее чем 20 пмоль/мл, менее чем 15 пмоль/мл, менее чем 10 пмоль/мл, менее чем 5 пмоль/мл.Кроме того, препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению предпочтительно способен к выделению по меньшей мере 50 нмоль/л, по меньшей мере 75 нмоль/л, по меньшей мере 100 нмоль/л, по меньшей мере 125 нмоль/л, по меньшей мере 150 нмоль/л, по меньшей мере 200 нмоль/л, по меньшей мере 250 нмоль/л, по меньшей мере 300 нмоль/л или по меньшей мере 350 нмоль/л эстрадиола при концентрации ΡδΗ, которая ниже, чем концентрация, необходимая при использовании ΡδΗ из мочи или рекомбинантного ΡδΗ, продуцированного в клетках СНО (Оопа1 Ρ). Таким образом, [препарат] предпочтительно способен выделять по меньшей мере 50 нмоль/л, по меньшей мере 75 нмоль/л, по меньшей мере 100 нмоль/л, по меньшей мере 125 нмоль/л, по меньшей мере по меньшей мере 150 нмоль/л, по меньшей мере 200 нмоль/л, по меньшей мере 250 нмоль/л, 300 нмоль/л или по меньшей мере 350 нмоль/л эстрадиола при концентрации, в которой ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантный ΡδΗ, продуцированный в клетках СНО (Оопа1 Ρ), не дает соответствующего равного выделения эстрадиола. Как показано в примерах, препараты рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению индуцируют соответственную стимуляцию продукции эстрадиола более сильно, чем ΡδΗ из мочи человека или рекомбинантный ΡδΗ, продуцированный клетками СНО (Оопа1 Ρ).Соответствующие характеристики, описанные в данном документе по выделению цАМФ и экспрессии половых стероидов, могут быть проанализированы и определены с помощью испытания на зернистых клетках, как это описано, например, в примере 2.Препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению предпочтительно представлен в виде фармацевтической композиции. Таким образом, еще один объект данного изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению для использования в лечении бесплодия, как определено в данном документе. Фармацевтическая композиция может включать в себя дополнительные фармацевтически активные агенты, в частности дополнительные агенты, полезные в лечении бесплодия, такие как другие гонадотропины, в частности ΠΗ и/или СО, предпочтительно рекомбинантный и/или ΠΗ или СО человека. В качестве альтернативы фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантный ΡδΗ, может быть скомпонована для использования в комбинации с такими дополнительными фармацевтически активными агентами.Кроме того, данное изобретение предоставляет препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобре- 16 029955тению или фармацевтическую композицию по данному изобретению для использования в лечении бесплодия, так же как и способ лечения бесплодия, содержащий введение пациенту препарата рекомбинантного Р8Н по данному изобретению или фармацевтической композиции по данному изобретению.Как обсуждено выше, в определенных вариантах осуществления препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению способен стимулировать или костимулировать выделение половых стероидов, таких как прогестерон, в частности, выделение прогестерона в зернистых клетках, уже в концентрациях, при которых не выделяется существенных количеств цАМФ. В частности, рекомбинантный Р8Н по данному изобретению может быть способен стимулировать выделение половых стероидов, таких как прогестерон в зернистых клетках в концентрациях, которые ниже минимальных концентраций, необходимых для индуцирования выделения цАМФ зернистыми клетками.Кроме того, в определенных вариантах осуществления препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению способен стимулировать выделение прогестерона, в частности выделение прогестерона зернистыми клетками путем индуцирования [внутриклеточного] пути передачи сигнала, который независим от сигнализации цАМФ. Предпочтительно лечение бесплодия включает в себя индукцию рекомбинантным Р8Н по данному изобретению пути передачи сигнала, независимого от сигнализации цАМФ, приводящую к стимуляции выделения прогестерона. Однако другие пути передачи сигнала, включающие в себя сигнализацию цАМФ, могут быть дополнительно активированы рекомбинантным Р8Н. В других вариантах осуществления лечения бесплодия не вовлекает индукции значительного выделения цАМФ рекомбинантным Р8Н по данному изобретению.В других вариантах осуществления, как описано выше, препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению способен стимулировать или костимулировать созревание гамет путем биологического процесса, независимого от сигнализации цАМФ.Таким образом, данное изобретение также относится к препарату рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, описанной выше, для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов, также независимых от цАМФ. Кроме того, данное изобретение также относится к препарату рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, описанной выше, для стимуляции или костимуляции созревания гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ. Дополнительно данное изобретение также относится к препарату рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, описанной выше, для индуцирования и/или стимуляции секреции половых стероидов при концентрациях Р8Н, при которых не индуцируется значительного выделения цАМФ. Кроме того, данное изобретение также относится к препарату рекомбинантного Р8Н или фармацевтической композиции, описанным выше, для индуцирования секреции половых стероидов при значительно более низких концентрациях, чем у обычно используемых Р8Н из мочи или рекомбинантного Р8Н, полученного из клеток СНО.Фармакологические и терапевтические преимущества соответствующего использования, в частности, в лечении бесплодия были подробно обсуждены выше.В частности, лечение бесплодия может включать в себя стимуляцию или костимуляцию созревания гамет путем биологического процесса, который независим от сигнализации цАМФ. Однако лечение бесплодия может дополнительно содержать стимуляцию созревания гамет путем одного или более других биологических процессов, которые вовлекают сигнализацию цАМФ. В других вариантах осуществления лечение бесплодия не вовлекает стимуляцию созревания гамет такими иными биологическими процессами.Созревание гамет предпочтительно включает в себя рост фолликула и/или сперматогенез. Кроме того, биологический процесс, в результате которого Р8Н стимулирует созревание гамет, может включать в себя секрецию половых стероидов, в частности прогестерона, предпочтительно зернистыми клетками. Предпочтительно биологический процесс, независимый от сигнализации цАМФ, относится к секреции половых стероидов, в частности прогестерона, предпочтительно зернистыми клетками, вызванной путем передачи сигнала, который не вовлекает цАМФ как молекулу-мессенджер.В предпочтительных вариантах осуществления препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению способен вызывать биологический эффект даже после введения только одной дозы. В частности, препарат Р8Н по данному изобретению или фармацевтическая композиция по данному изобретению способны индуцировать рост фолликула и/или созревание яйцеклетки у пациента, в частности у пациента, являющегося человеком, после введения всего одной дозы препарата Р8Н или фармацевтической композиции. Предпочтительно биологический эффект, в частности рост фолликула и/или созревание яйцеклетки, достигнутый после введения всего одной дозы, является более высоким и выраженным, и/или достигается при более высоком соотношении у леченых пациентов по сравнению с препаратами Р8Н, полученными из мочи человека и/или экспрессированными в клетках СНО. Упомянутая единичная доза, в частности, содержит по меньшей мере 10 ΐυ Р8Н, предпочтительно по меньшей мере 15 Щ Р8Н, по меньшей мере 20 ΐυ Р8Н или по меньшей мере 25 ΐυ Р8Н, и/или 1000 ΐυ Р8Н или менее, предпочтительно 750 ΐυ Р8Н или менее, 500 ΐυ Р8Н или менее, 300 ΐυ Р8Н или менее, 200 ΐυ Р8Н или менее, 150 ΐυ Р8Н или менее, 100 ΐυ Р8Н или менее или 50 ΐυ Р8Н или менее. Предпочтительно упомянутая единичная доза содержит от около 10 до около 500 ΐυ Р8Н, более предпочтительно от около 20 до около 300- 17 029955ΐυ ΡδΗ. например около 25 ΐυ ΡδΗ. около 75 ΐυ ΡδΗ или около 100 ΐυ ΡδΗ.В других вариантах осуществления препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению имеет меньшее время полужизни в кровотоке. чем препараты ΡδΗ. полученные из мочи человека и/или экспрессированные в клетках СНО. В частности. он имеет более низкое время полужизни в кровотоке у одного или более [видов]: человека. обезьяны - яванского макака. крысы и/или мыши. Предпочтительно время полужизни в кровотоке по меньшей мере на 5% ниже. более предпочтительно по меньшей мере на 10%. по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20% меньше. чем таковое у препаратов ΡδΗ. полученных из мочи человека и/или экспрессированных в клетках СНО. В определенных вариантах осуществления препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению имеет более низкую биодоступность. чем препараты ΡδΗ. полученные из мочи человека и/или экспрессированные в клетках СНО. в частности. у одного или более [видов]: человека. обезьяны - яванского макака. крысы и/или мыши. Предпочтительно биодоступность по меньшей мере на 5% ниже. более предпочтительно по меньшей мере на 10%. по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20% ниже. чем таковая для препаратов ΡδΗ. полученных из мочи человека и/или экспрессированных в клетках СНО. Биодоступность в этом отношении предпочтительно обозначает площадь под кривой (ΛυΟ) значения. полученного в фармакокинетических исследованиях. в которых концентрация ΡδΗ в сыворотке определена в различные моменты времени после введения определенного количества ΡδΗ. Время полужизни в кровотоке и биодоступность предпочтительно определяются после введения ΡδΗ путем подкожной инъекции. в частности после введения единичной дозы. причем единичная доза предпочтительно содержит от около 10 до около 1000 ΐυ ΡδΗ. более предпочтительно от около 25 до около 500 ΐυ ΡδΗ или от около 50 до около 300 ΐυ ΡδΗ. в частности около 100 ΐυ ΡδΗ. В частности. время полужизни в кровотоке и биодоступность определены. как ниже описано в примере 6.В предпочтительных вариантах осуществления препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению имеет терапевтическую эффективность. которая сходна с таковой или даже выше. чем у препаратов ΡδΗ. полученных из мочи человека и/или экспрессированных в клетках СНО. в частности у одного или более [видов] из человека. обезьяны - яванского макака. крысы и/или мыши. Термин "терапевтическая эффективность" предпочтительно обозначает способность стимулировать выделение эстрадиола и/или ингибина-В при введении объекту. Терапевтическая эффективность предпочтительно определяется путем измерения концентрации эстрадиола и/или ингибина-В в крови или сыворотке одного или более объектов после введения ΡδΗ подкожной инъекцией. в частности после введения единичной дозы. причем единичная доза предпочтительно содержит от около 10 до около 1000 ΐυ ΡδΗ. предпочтительно от около 25 до около 500 ΐυ ΡδΗ или от около 50 до около 300 ΐυ ΡδΗ. в частности около 100 ΐυ ΡδΗ. В частности. терапевтическую эффективность определяли. как описано ниже в примере 5. Сходные терапевтические эффективности. в частности. обозначают стимуляции выделения эстрадиола и/или ингибина-В соответствующими препаратами ΡδΗ. которые приводят к концентрациям эстрадиола и/или ингибина-В в сыворотке. которые отличаются друг от друга не более чем на 25%. предпочтительно не более чем на 20%. не более чем на 15% или не более чем на 10%.Препарат ΡδΗ. полученный из мочи человека. в частности. получали из мочи женщин в менопаузе. Препарат ΡδΗ. экспрессированный в клетках СНО. например. экспрессировался в СНО в клеточной линии ί'.’Η0ύ1ιΙϊ- [АТСС Νο. СКЬ-9096]. Препарат ΡδΗ. полученный из мочи человека. и препарат ΡδΗ. экспрессированный в клетках СНО. предпочтительно являются коммерчески доступными и утвержденными фармацевтическими препаратами. в частности Вгаус11с и Сопа1-Т соответственно. При сравнении эффектов различных препаратов ΡδΗ. в частности их времени полужизни в кровотоке. биодоступности и терапевтической эффективности. препараты ΡδΗ анализировали путем введения их сходным группам объектов при одинаковом режиме дозировки с использованием одного и того же способа введения и использовании сходных или одинаковых других условий.В определенных вариантах осуществления препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению вводится пациенту в дозе. которая приводит к концентрации ΡδΗ в кровотоке пациента менее чем 5 ΐυ/л. В определенных вариантах осуществления доза. вводимая пациенту. приводит к концентрации ΡδΗ в кровотоке пациента менее чем около 4 ΐυ/л. в частности менее чем около 3 ΐυ/л. менее чем около 2 ΐυ/л. менее чем около 1 ΐυ/л или менее чем около 0.5 ΐυ/л. Концентрация ΡδΗ в кровотоке пациента. например. находится в диапазоне около 0.01 до около 5 ΐυ/л. в частности от около 0.05 до около 2 ΐυ/л. от около 0.1 до около 1.5 ΐυ/л или от около 0.2 до около 1 ΐυ/л. В частности. ΡδΗ вводили пациенту в дозе. которая не индуцировала выделение цАМФ. Как показано в примерах. препарат рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению в определенных вариантах осуществления вызывает терапевтический эффект в этих концентрациях. Однако препараты рекомбинантного ΡδΗ по данному изобретению могут также быть введены в дозе. которая приводит к более высоким концентрациям ΡδΗ в кровотоке пациента.В предпочтительных вариантах осуществления лечение бесплодия включает в себя вспомогательные репродуктивные технологии. такие как индукция овуляции. оплодотворение ίη νίίΓο. например оплодотворение ίη νίίτο с помощью интрацитоплазматической инъекции спермия. внесение гамет в фаллопиевы трубы. внутриматочное оплодотворение. лечение ановуляторного заболевания у женщин. лечение- 18 029955заболеваний, связанных с тяжелыми гормональными недостаточностями для созревания яйцеклеток у женщин, лечение пороков продукции спермы у мужчин и/или создания возможности или улучшения созревания гамет, таких как фолликулогенез или сперматогенез, в частности созревание фолликулов у женщин, например, по протоколам стимуляции оплодотворения ίη νίίτο и/или лечения ановуляторного заболевания.Предпочтительно препарат рекомбинантного Р8Н по данному изобретению предназначен для парентерального введения пациенту. В частности, рекомбинантный Р8Н должен вводиться путем инъекции или вливания, например внутривенно, внутримышечно или подкожно. В определенных вариантах осуществления данного изобретения рекомбинантный Р8Н представлен в фармацевтической композиции. Подходящий режим дозировки может быть определен специалистом в данной области техники и может исходить из общих знаний в данной области.Фармацевтическая композиция по данному изобретению может существовать в форме единичной дозы или многократных доз. Предпочтительно фармацевтическая композиция представляет собой стерильный раствор, содержащий рекомбинантный Р8Н по данному изобретению, также содержащий один или более ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из растворителей, таких как вода, буферных веществ, стабилизаторов, консервантов, наполнителей, поверхностно-активных веществ и солей. Разовая доза предпочтительно содержитот около 10 до около 750 ΐυ Р8Н, более предпочтительно от около 25 до около 500 ΐυ Р8Н, от около 50 до около 400 ΐυ Р8Н или от около 100 до около 300 ΐυ Р8Н. Многоразовая дозировка содержит достаточно Р8Н, чтобы предоставить многократные разовые дозы, в частности по меньшей мере 5, по меньшей мере 10, по меньшей мере 20 или по меньшей мере 50 разовых доз. Фармацевтическая композиция может, например, существовать в форме шприц-ручки.Описание чертежей
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/EP2010/004769 WO2012016576A1 (en) | 2010-08-04 | 2010-08-04 | Improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
| PCT/EP2011/063492 WO2012017058A1 (en) | 2010-08-04 | 2011-08-04 | Improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201390194A1 EA201390194A1 (ru) | 2013-06-28 |
| EA029955B1 true EA029955B1 (ru) | 2018-06-29 |
Family
ID=43242604
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201390194A EA029955B1 (ru) | 2010-08-04 | 2011-08-04 | Препарат рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека и его применение |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9527899B2 (ru) |
| EP (2) | EP2601210B1 (ru) |
| JP (2) | JP6001534B2 (ru) |
| KR (1) | KR20130136448A (ru) |
| CN (2) | CN103068839B (ru) |
| AR (1) | AR082852A1 (ru) |
| AU (1) | AU2011287525B2 (ru) |
| BR (1) | BR112013004051A2 (ru) |
| CA (1) | CA2805134C (ru) |
| CU (1) | CU24043B1 (ru) |
| CY (1) | CY1117778T1 (ru) |
| DK (1) | DK2601210T3 (ru) |
| EA (1) | EA029955B1 (ru) |
| ES (2) | ES2764083T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20160671T1 (ru) |
| HU (1) | HUE028357T2 (ru) |
| IL (1) | IL223867B (ru) |
| MX (1) | MX336489B (ru) |
| NZ (1) | NZ604877A (ru) |
| PL (1) | PL2601210T3 (ru) |
| PT (1) | PT2601210T (ru) |
| RS (1) | RS54905B1 (ru) |
| SG (1) | SG186755A1 (ru) |
| SI (1) | SI2601210T1 (ru) |
| SM (1) | SMT201600219B (ru) |
| WO (2) | WO2012016576A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201209436B (ru) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI488640B (zh) * | 2008-04-16 | 2015-06-21 | Ferring Int Ct Sa | 藥學製劑 |
| WO2012016576A1 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Glycotope Gmbh | Improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
| AR090095A1 (es) | 2011-06-06 | 2014-10-22 | Ferring Bv | Preparacion farmaceutica que comprende hormona estimulante del foliculo recombinante |
| JO3092B1 (ar) * | 2011-08-08 | 2017-03-15 | Ferring Bv | مركب لتحفيز مسيطر عليه للمبيض |
| PT3572515T (pt) * | 2012-07-30 | 2021-10-22 | Trophogen Inc | Superagonistas de ação prolongada de hormonas glicoproteicas |
| CN104543416B (zh) * | 2013-10-09 | 2018-06-19 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种调节雌性动物繁殖性能的功能性单糖饲料及其应用 |
| CN103740754B (zh) * | 2013-10-25 | 2015-06-24 | 中国食品药品检定研究院 | 含有鼠神经生长因子的表达载体及细胞 |
| SG11201608132UA (en) * | 2014-04-18 | 2016-11-29 | Glycotope Gmbh | Controlled ovarian hyperstimulation with improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
| EP3091033A1 (en) * | 2015-05-06 | 2016-11-09 | Gamamabs Pharma | Anti-human-her3 antibodies and uses thereof |
| AR105669A1 (es) * | 2015-08-10 | 2017-10-25 | Glycotope Gmbh | Factor vii recombinante mejorado |
| US20180264086A1 (en) * | 2015-09-17 | 2018-09-20 | Glycotope Gmbh | Mammalian follicle-stimulating hormone composition with increased stability |
| CN106053861A (zh) * | 2016-07-28 | 2016-10-26 | 高常青 | 一种***生物活性强度检测方法 |
| EP4055038A4 (en) * | 2019-11-06 | 2023-11-15 | The Regents of the University of Colorado, a body corporate | MODIFIED FOLLICLE-STIMULATING HORMONE AND METHOD OF USE THEREOF |
| CN116102648A (zh) * | 2021-09-07 | 2023-05-12 | 苏州晟济药业有限公司 | 一种单域抗体或其抗原结合片段及其用途 |
| WO2023215914A1 (en) * | 2022-05-06 | 2023-11-09 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Modified follicle-stimulating hormone and methods of using the same |
| WO2024100548A1 (en) * | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Oncogreen Therapeutics S.A. | Compound with anti-metastatic effect |
| WO2024100549A1 (en) * | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Oncogreen Therapeutics S.A. | Compounds for use in macrophage reprogramming |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003035686A2 (en) * | 2001-10-22 | 2003-05-01 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Compositions of fsh with high sialylation degree and their use for the preparation of medicaments |
| WO2009127826A1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-10-22 | Ferring International Center Sa | Recombinant fsh including alpha 2,3- and alpha 2,6-sialylation |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE332705T1 (de) | 1999-05-07 | 2006-08-15 | Applied Research Systems | Verwendung von in der mittlere oder späte follikuläre phase verabreichte lh zur behandlung von anovulatorischen frauen |
| US8609370B2 (en) * | 2004-02-13 | 2013-12-17 | Glycotope Gmbh | Highly active glycoproteins-process conditions and an efficient method for their production |
| CA2662226C (en) * | 2006-09-10 | 2020-08-04 | Glycotope Gmbh | Fully human high yield production system for improved antibodies and proteins |
| GB2459641B (en) * | 2008-04-16 | 2012-06-27 | Ubiquisys Ltd | Basestation power control |
| EP2325194A1 (en) | 2009-11-24 | 2011-05-25 | Glycotope GmbH | Process for the purification of glycoproteins |
| WO2012016576A1 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Glycotope Gmbh | Improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
-
2010
- 2010-08-04 WO PCT/EP2010/004769 patent/WO2012016576A1/en active Application Filing
-
2011
- 2011-08-04 AU AU2011287525A patent/AU2011287525B2/en not_active Ceased
- 2011-08-04 US US13/814,059 patent/US9527899B2/en active Active
- 2011-08-04 NZ NZ604877A patent/NZ604877A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-08-04 AR ARP110102828A patent/AR082852A1/es unknown
- 2011-08-04 WO PCT/EP2011/063492 patent/WO2012017058A1/en active Application Filing
- 2011-08-04 ES ES16168841T patent/ES2764083T3/es active Active
- 2011-08-04 RS RS20160459A patent/RS54905B1/sr unknown
- 2011-08-04 PL PL11757190.1T patent/PL2601210T3/pl unknown
- 2011-08-04 EA EA201390194A patent/EA029955B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-08-04 PT PT117571901T patent/PT2601210T/pt unknown
- 2011-08-04 SG SG2012093191A patent/SG186755A1/en unknown
- 2011-08-04 KR KR1020137005553A patent/KR20130136448A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-08-04 ES ES11757190.1T patent/ES2576868T3/es active Active
- 2011-08-04 CN CN201180037096.3A patent/CN103068839B/zh active Active
- 2011-08-04 HU HUE11757190A patent/HUE028357T2/en unknown
- 2011-08-04 CA CA2805134A patent/CA2805134C/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-08-04 EP EP11757190.1A patent/EP2601210B1/en not_active Revoked
- 2011-08-04 CN CN201610363950.XA patent/CN106146646A/zh active Pending
- 2011-08-04 EP EP16168841.1A patent/EP3075744B1/en not_active Revoked
- 2011-08-04 DK DK11757190.1T patent/DK2601210T3/en active
- 2011-08-04 JP JP2013522259A patent/JP6001534B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-08-04 BR BR112013004051A patent/BR112013004051A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-08-04 SI SI201130854A patent/SI2601210T1/sl unknown
- 2011-08-04 MX MX2013000500A patent/MX336489B/es unknown
-
2012
- 2012-12-12 ZA ZA2012/09436A patent/ZA201209436B/en unknown
- 2012-12-25 IL IL223867A patent/IL223867B/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-02-04 CU CU2013000019A patent/CU24043B1/es active IP Right Grant
-
2016
- 2016-06-13 HR HRP20160671TT patent/HRP20160671T1/hr unknown
- 2016-06-16 CY CY20161100539T patent/CY1117778T1/el unknown
- 2016-06-24 JP JP2016125181A patent/JP2016168055A/ja not_active Withdrawn
- 2016-07-06 SM SM201600219T patent/SMT201600219B/it unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003035686A2 (en) * | 2001-10-22 | 2003-05-01 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Compositions of fsh with high sialylation degree and their use for the preparation of medicaments |
| WO2009127826A1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-10-22 | Ferring International Center Sa | Recombinant fsh including alpha 2,3- and alpha 2,6-sialylation |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BYRNE, B. DONOHOE, G.G. O'KENNEDY, R.: "Sialic acids: carbohydrate moieties that influence the biological and physical properties of biopharmaceutical proteins and living cells", DRUG DISCOVERY TODAY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 12, no. 7-8, 27 March 2007 (2007-03-27), AMSTERDAM, NL, pages 319 - 326, XP022003236, ISSN: 1359-6446, DOI: 10.1016/j.drudis.2007.02.010 * |
| OLIJVE W ET AL: "Molecular biology and biochemistry of human recombinant follicle stimulating hormone (Puregon).", MOLECULAR HUMAN REPRODUCTION., OXFORD UNIVERSITY PRESS, GB - BE, vol. 2, no. 5, 1 May 1996 (1996-05-01), GB - BE, pages 371 - 382, XP002494717, ISSN: 1360-9947, DOI: 10.1093/molehr/2.5.371 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA029955B1 (ru) | Препарат рекомбинантного фолликулстимулирующего гормона человека и его применение | |
| TWI657822B (zh) | 用於經控制的卵巢刺激之組成物 | |
| US20170035854A1 (en) | Controlled ovarian hyperstimulation with improved recombinant human follicle-stimulating hormone | |
| JP7079094B2 (ja) | 不妊症の処置のための組成物 | |
| CN108348465B (zh) | 具有提高的稳定性的哺乳动物促卵泡激素组合物 | |
| US20220281940A1 (en) | Modified follicle-stimulating hormone and methods of using the same | |
| EA012175B1 (ru) | Рекомбинантный мутантный fsh, способ его получения, композиция, содержащая мутантный fsh, и способы лечения бесплодия, стимуляции фолликулогенеза и индукции гиперстимуляции яичников у млекопитающего | |
| EA013975B1 (ru) | Мутантный fsh и способы его применения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |