EA029649B1

EA029649B1 - Гель на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения воспалительных заболеваний в гинекологии и способ его приготовления

Info

Publication number: EA029649B1
Application number: EA201590591A
Authority: EA
Inventors: Хацзи Акбер Айса; Юйцинь Ло; Рабигул Ислам; Рахима Абдулла; Хайчжун Лай
Original assignee: Синьцзян Текникал Инститьют Оф Физикс Энд Кемистри, Чайниз Экэдеми Оф Сайенсиз; Синьцзян Шафэйя Биотекнолоджи Ко., Лтд
Priority date: 2012-10-18
Filing date: 2013-09-30
Publication date: 2018-04-30
Also published as: WO2014059880A1; CN102861116A; EA201590591A1; CN102861116B

Abstract

Изобретение относится к способу приготовления геля на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений. Изготовление данного геля осуществляется на основе экстракта полифенолов гранатовой кожуры в качестве сырья при добавлении вспомогательных веществ - фармацевтически приемлемого материала матрицы геля - карбомера, гипромеллозы или натриевой карбоксиметилцеллюлозы, пропиленгликоля или смеси глицерина и пропиленгликоля в качестве увлажнителя и твин в качестве солюбилизатора. Консервантом является метилпарабен или этиловый эфир парагидроксибензойной кислоты, а регулятором pH - триэтаноламин. Готовят экстракт полифенолов гранатовой кожуры, затем его растворяют в увлажнителях и/или солюбилизаторах и добавляют в диспергируемый материал матрицы геля, равномерно диспергируют, потом добавляют консерванты и оставшуюся воду и равномерно перемешивают, доводят до pH 4,0-5,0, таким образом получая гель на основе полифенолов гранатовой кожуры. Гель, полученный данным способом, используется для профилактики и лечения таких гинекологических воспалений, как вагинит или цервицит, вызванных бактериями, и обладает следующими характеристиками: удобство применения препарата, лучшее поглощение и высокая эффективность.

Description

Изобретение относится к способу приготовления геля на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений. Изготовление данного геля осуществляется на основе экстракта полифенолов гранатовой кожуры в качестве сырья при добавлении вспомогательных веществ - фармацевтически приемлемого материала матрицы геля - карбомера, гипромеллозы или натриевой карбоксиметилцеллюлозы, пропиленгликоля или смеси глицерина и пропиленгликоля в качестве увлажнителя и твин в качестве солюбилизатора. Консервантом является метилпарабен или этиловый эфир парагидроксибензойной кислоты, а регулятором рН - триэтаноламин. Готовят экстракт полифенолов гранатовой кожуры, затем его растворяют в увлажнителях и/или солюбилизаторах и добавляют в диспергируемый материал матрицы геля, равномерно диспергируют, потом добавляют консерванты и оставшуюся воду и равномерно перемешивают, доводят до рН 4,0-5,0, таким образом получая гель на основе полифенолов гранатовой кожуры. Гель, полученный данным способом, используется для профилактики и лечения таких гинекологических воспалений, как вагинит или цервицит, вызванных бактериями, и обладает следующими характеристиками: удобство применения препарата, лучшее поглощение и высокая эффективность.

029649

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к способу приготовления геля на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений. В частности, это касается геля, полученного на основе полифенолов гранатовой кожуры, который используется для лечения гинекологических воспалений (подобных вагиниту или цервициту), вызванных бактериями.

Предшествующий уровень техники

Вагинит, цервицит и другие воспалительные гинекологические заболевания представляют серьезную угрозу для здоровья женщины. Из-за особенностей женских половых органов, воспалительные заболевания в гинекологии являются одними из самых распространенных заболеваний у взрослых женщин. Воспалительные заболевания в гинекологии характеризуются разнообразными клиническими проявлениями и сложным генезисом, часто сопровождаются серьезными осложнениями и оказывают большое влияние на жизнь и работу женщин. Вагинит - общее название разнообразных заболеваний слизистой оболочки влагалища, вызванных различными причинами. Из-за анатомических характеристик влагалища в нормальных физиологических условиях во влагалище образуется естественная защита от возбудителей болезни, но когда естественная защита влагалища нарушается, патогены могут проникнуть в организм и вызвать воспаление. В клинике наиболее распространенным среди воспалений влагалища является бактериальный вагинит из-за частых рецидивов и невозможности кратковременного лечения. Исследование состояния репродуктивного здоровья китайских женщин показало, что от вагинитов страдает 53,86% взрослых женщин, из которых у 9,48% возникает рецидив заболевания до 4-х раз и больше. Среди воспалительных заболеваний женских половых органов чаще всего встречается цервицит, которым страдает более половины замужних женщин. Основные возбудители, которые вызывают цервицит - стафилококки, стрептококки, кишечная палочка и анаэробные бактерии.

Современное лечение таких гинекологических воспалительных заболеваний, как вагинит и цервицит, осуществляется на базе лекарственных препаратов внутреннего и наружного применения. Препараты внутреннего применения включают в себя в основном запатентованный рецепт лекарства традиционной китайской медицины в форме капсул, пилюль и т.д. Для наружного применения в основном используются препараты, в химический состав большинства из которых входит метронидазол, клотримазол и другие активные вещества данной фармакологической группы. Чрезмерное использование таких препаратов может нарушить естественную микрофлору влагалища, вызвать толерантность у бактерий к лекарствам и привести к продлению срока терапии и неэффективности лечения болезни. Из-за анатомических и физиологических характеристик женщин лечение препаратами наружного применения имеет особое значение в гинекологической клинике. Исследования последних лет указывают на положительный эффект лечения вагинита и цервицита препаратами традиционной китайской медицины, используемыми наружно. Местное нанесение препарата во влагалище получило высокую оценку в клинике за такие характеристики, как высокая локальная концентрация, малая доза препарата, безопасность и эффективность и т.д. Влагалище богато капиллярами и лимфатическими сосудами, но в нем нет четких нервных окончаний. Поэтому нанесение препарата во влагалище может уменьшать дискомфорт и боль. Для таких специфических заболеваний, как вагинит и цервицит, влагалище является эффективным местом для введения лекарственного средства. При имплантации во влагалище препарат поступает в кровоток через слизистую, минуя прохождение лекарства через печень, кишечник, желудок, снижая этим эффективность, и своевременно повышает его биодоступность для организма человека. Таким образом, наблюдается повышенная адсорбция и процесс непрерывного или контролируемого высвобождения препарата, увеличивается его концентрация и эффективность в очаге повреждения, биодоступность и эффективность терапии при местном или общем применении.

В настоящее время на рынке лекарств для лечения гинекологических заболеваний представлены препараты в виде вагинальных растворов, вагинальных шипучих таблеток, вагинальных свечей, пленок и иных лекарственных форм. Действие вагинального раствора кратковременно, и он не всегда достигает глубины влагалища. Вагинальные таблетки неудобны в использовании и легко вызывают ощущение инородного тела, зачастую травмируют стенки влагалища. Растворяясь во влагалище, вагинальные свечи в виде жидкости вытекают из влагалища и легко загрязняют одежду. Действие вагинальных свечей кратковременно и само применение препятствует введению полной дозы препарата. При применении вагинальных пленок в качестве носителя лекарственного препарата выступают полимерные пленки. Несмотря на удобство использования вагинальных пленок, контакт препарата со слизистой оболочкой ограничен. Вагинальный гель включает макромолекулярный лекарственный состав, который представляет собой полутвердое вещество и состоит из двух или более систем двухфазной композиции твердого компонента и жидкости. Путем растворения или равномерного распределения препарата в геле получают гелеобразующий агент, имеющий хорошую адгезию и свойства формирования пленки. В сравнении с другими видами введения препарата, гель может продлить время пребывания лекарственного вещества во влагалище, его легко наносить и он легко проникает сквозь складки слизистой оболочки, что помогает улучшить состояние пациента, не вызывая ощущения дискомфорта и не вызывая раздражения. Поэтому гель представляет собой одну из самых активных новых лекарственных форм на международном фармацевтическом рынке, а также является наиболее перспективным лекарственным средством наружного

- 1 029649

применения.

Как вид лекарственного средства, записанного в Фармакопии КНР, гранатовая кожура описана как вяжущее средство при поносе, кровоостанавливающее, глистогонное и т.д., в основном используется для лечения затяжной дизентерии и кровотечения от длительного поноса. Кроме того, гранатовая кожура также обладает фармакологической активностью, способствующей заживлению язв слизистой оболочки. Полифенолы (такие как гликозиды граната, эллаговая кислота, галловая кислота) - активный ингредиент в гранатовой кожуре, обладают сильным противовоспалительным и антибактериальным свойством. Однако, полифенолы весьма неустойчивы, могут окисляться при высокой температуре и длительном нагревании, в результате чего возникает низкий коэффициент экстракции полифенолов и снижение их активности. Поэтому применяется техника концентрации и экстракции при низкой температуре, в целях улучшения стабильности и повышения коэффициента экстракции ингредиентов полифенолов. Также используется техника обработки макропористыми абсорбционными смолами, чтобы изготавливать эффективные части высокой степени чистоты из полифенолов гранатовой кожуры. В данном изобретении в соответствии с китайским патентным документом № ΖΕ200910113497.7 "Способ приготовления и применения антибактериальных и противовоспалительных шипучих таблеток на основе полифенолов гранатовой кожуры для наружного применения" и согласно статье "Изготовление и контроль качества геля на основе полифенолов гранатовой кожуры", в качестве сырья используются полифенолы гранатовой кожуры. Однако под влиянием разных температур экстракции, крепости растворителя, различных видов макропористых абсорбционных смол, экстракт гранатовой кожуры, компонент и содержание полифенолов в эффективной части отличаются. В экстракте гранатовой кожуры, изготовленном по данному исследованию, содержание общих полифенолов составляет 60-80 вес.%, среди которых содержание активного компонента - эллаговой кислоты - занимает 2-4 вес.%, а гликозиды граната - 15-20 вес.%. В статье "Приготовление и контроль качества геля на основе полифенолов гранатовой кожуры" не объясняется процесс приготовления экстракта и соотношение доз компонентов геля, так к примеру галловая кислота направлена на управление активными компонентами полифенолов, при этом не являясь активным ингредиентом данного изобретения. Кроме того, в данной статье описывается применение геля на основе полифенолов гранатовой кожуры при заживлении острых и хронических ран кожи, которое также отличается с назначением данного изобретения.

Данное изобретение направлено на применение геля в клинической практике, потому что гель может положительно влиять на биосовместимость с организмом человека и адгезию, способствовать процессу непрерывного высвобождения и контролируемого высвобождения препарата, увеличивать эффективную концентрацию в очаге повреждения, биодоступность и эффективность терапии, гель также легко удаляется с ткани. Результаты по экспериментальным исследованиям в противовоспалительной энтосоматической фармакодинамике на животных, таким как отек уха у мышей, развившийся в результате нанесения ксилола, и каррагениновый отек лапы у мышей, показывают, что данное изобретение - гель на основе полифенолов гранатовой кожуры - обладает лучшим противовоспалительным действием, чем шипучие таблетки на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на предложение способа приготовления геля на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений. Изготовление данного препарата осуществляется на основе экстракта полифенолов гранатовой кожуры в качестве сырья, при добавлении вспомогательных веществ - фармацевтически приемлемый материал матрицы геля - карбомер, гипромеллоза или натриевая карбоксиметилцеллюлоза, пропиленгликоль или смесь глицерина и пропиленгликоля в качестве увлажнителя и твин в качестве солюбилизатора. Консервантом является метилпарабен или этиловый эфир парагидроксибензойной кислоты, а регулятором рН - триэтаноламин. Подготавливают экстракт полифенолов гранатовой кожуры, затем его растворяют в увлажнителях и/или солюбилизаторах и вводят в раствор карбомера, гипромеллозы или натриевой карбоксиметилцеллюлозы, диспергируемый в воде, равномерно диспергируют, потом добавляют консерванты и оставшуюся воду до 100 г и равномерно перемешивают, доводят до рН 4,0-5,0 путем добавления триэтаноламина, таким образом получают гель на основе полифенолов гранатовой кожуры. Гель, полученный данным способом, направлен на профилактику и лечение таких гинекологических воспалений, как вагинит или цервицит, вызванных бактериями, и обладает следующими характеристиками: удобство применения препарата, хорошее поглощение и высокая эффективность.

Техническое решение настоящего изобретения является следующим.

Способ, предлагаемый настоящим изобретением, направлен на приготовление геля на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений и состоит из следующих составляющих: 5-30 частей массовых долей экстракта полифенолов гранатовой кожуры, 0,5-4 части вспомогательного вещества - фармацевтически приемлемого материала матрицы геля - карбомера, гипромеллозы или натриевой карбоксиметилцеллюлозы, 5-20 частей увлажнителей - пропиленгликоля или смеси глицерина и пропиленгликоля, 0-2 частей солюбилизатора твин, 0,1-0,5 части консерванта - метилпарабена или этилового эфира парагидроксибензойной кислоты и регулятора рН - триэтаноламина. После получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры изготавливается гель на основе экстракта в качестве сы- 2 029649

рья. При этом основными активными ингредиентами в экстракте полифенолов гранатовой кожуры являются следующие: общие полифенолы, эллаговая кислота и гликозиды граната. Конкретные действия выполняются по следующим этапам.

Получение экстракта полифенолов гранатовой кожуры:

а) растирают гранатовую кожуру в крупку, добавляя 5-30 частей гранатовой кожуры в этанол в концентрации 35-49 вес.%, и погружают в этанол при температуре 71-85°С, экстрагируют 1-4 раза, каждый раз по 1-3 ч, потом фильтруют, объединяют фильтрат, регенерируют этанол при пониженном давлении и концентрируют до концентрированного раствора, содержащего 0,15-0,2 г гранатовой кожуры в миллилитре;

б) вносят концентрированный раствор, полученный на этапе а), в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600, и адсорбируют в течение 3-12 ч; сначала промывают деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюируют 2-5 кратным объемом колонки 50-80 вес.% этанолом, собирают элюат, содержащий этанол, регенерируют этанол, концентрируют при пониженном давлении и сушат в вакууме до получения сухого экстракта, растирают и просеивают через сито в 80-120 меш до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления.

Получение геля

а) сначала растворяют экстракт полифенолов гранатовой кожуры из стадии б) в увлажнителях и/или солюбилизаторах и помещают в раствор карбомера, гипромеллозы или натриевой карбоксиметилцеллюлозы, диспергируемый в воде, равномерно диспергируют, потом добавляют консерванты и оставшуюся воду (до 100 г) и равномерно перемешивают, доводят до рН 4,0-5,0 путем добавления триэтаноламина с получением таким образом геля на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Содержание общих полифенолов в экстракте полифенолов гранатовой кожуры составляет 60-80 вес.%.

Содержание эллаговой кислоты - активного ингредиента общих полифенолов в экстракте полифенолов гранатовой кожуры составляет 2-4 вес.%, а содержание гликозидов граната - 15-20 вес.%.

Г ель на основе полифенолов гранатовой кожуры, полученный данным способом, получается с тонкой и равномерной текстурой и стабильным качеством, не наблюдается заметных изменений в различных показателях под влиянием света, тепла, холода и других факторов. В процессе приготовления геля, направленного на профилактику и лечение гинекологических воспалений, вызванных бактериями, таких как вагинит или цервицит, используется способ применения новых лекарственных средств в сочетании со средствами традиционной китайской медицины, в целях усиления эффективности и одновременно повышения удобства использования и легкости адаптации к лекарству.

Конкретные варианты применения

Пример 1

Получение экстракта полифенолов гранатовой кожуры.

Растирали гранатовую кожуру в крупку, добавляли 5 кратных гранатовой кожуры в этанол в концентрации 35-49 вес.% и погружали в этанол при температуре 71°С, экстрагировали 1 раз на 3 ч, потом фильтровали, объединяли фильтрат, регенерировали этанол при пониженном давлении и концентрировали до концентрированного раствора, содержащего 0,15 г гранатовой кожуры в миллилитре.

Вносили концентрированный раствор в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600 и адсорбировали 6 ч. Сначала промывали деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюировали 2-кратным объемом колонки 50 вес.% этанолом, собирали элюат, содержащий этанол, и регенерировали этанол, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме до получения сухого экстракта, растирали и просеивали через сито в 80 меш до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления. При этом содержание общих полифенолов в экстракте должно составлять 62 вес.%, содержание эллаговой кислоты - 3,6 вес.%, а содержание гликозидов граната - 15,4 вес.%.

Получение геля.

Сначала равномерно измельчали 10 частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры и растворяли в 10 частях увлажнителя пропиленгликоля, помещали в 2 части раствора карбомера, диспергируемого в воде, равномерно диспергировали, потом добавляли 0,1 части консерванта метилпарабена и оставшуюся воду до 100 г доводили до рН 4,0 путем добавления триэтаноламина, и равномерно перемешивали, таким образом получали гель на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Пример 2

Растирали гранатовую кожуру в крупку, добавляли 8 кратных гранатовой кожуры в этанол в концентрации 49 вес.% и погружали в этанол при температуре 75°С, экстрагировали 2 раза, каждый раз по 2 ч, потом фильтровали, объединяли фильтрат, регенерировали этанол при пониженном давлении и концентрировали до концентрированного раствора, содержащего 0,18 г гранатовой кожуры в миллилитре.

Вносили концентрированный раствор в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600 и адсорбировали 8 ч. Сначала промывали деионизированной водой до по- 3 029649

лучения вытекающего потока светлого цвета, затем элюировали 3-кратным объемом колонки 60 вес.% этанолом, собирали элюат, содержащий этанол, и регенерировали этанол, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме до получения сухого экстракта, растирали и просеивали через сито в 100 меш до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления. При этом содержание общих полифенолов в экстракте должно составлять 68 вес.%, содержание эллаговой кислоты - 2,8 вес.%, а содержание гликозидов граната - 16,2 вес.%.

Получение геля.

Сначала равномерно измельчали 15 частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры и растворяли в 5 частей увлажнителя пропиленгликоля, помещали в 3 части раствора гипромеллозы, диспергируемого в воде, равномерно диспергировали, потом добавляли 0,1 части этилового эфира парагидроксибензойной кислоты и оставшуюся воду (до 100 г) доводили до рН 4,5 путем добавления триэтаноламина и равномерно перемешивали с получением таким образом геля на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Пример 3

Растирали гранатовую кожуру в крупку, добавляли 15 кратных гранатовой кожуры в этанол в концентрации 40 вес.% и погружали в этанол при температуре 80°С, экстрагировали 3 раза, каждый раз по 1,5 ч, потом фильтровали, объединяли фильтрат, регенерировали этанол при пониженном давлении и концентрировали до концентрированного раствора, содержащего 0,2 г гранатовой кожуры в миллилитре.

Вносили концентрированный раствор в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600, и адсорбировали 12 ч. Сначала промывали деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюировали 4-кратным объемом колонки 60 вес.% этанолом, собирали элюат, содержащий этанол и регенерировали этанол, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме до получения сухого экстракта, растирали и просеивали через сито в 120 меш до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления. При этом содержание общих полифенолов в экстракте должно составлять 75 вес.%, содержание эллаговой кислоты - 2,4 вес.%, а содержание гликозидов граната - 16,6 вес.%.

Получение геля.

Сначала равномерно измельчали 10 частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры и растворяли в увлажнителях - 10 частей глицерина и 5 частей пропиленгликоля, помещали в 3 части раствора натриевой карбоксиметилцеллюлозы, диспергируемого в воде, равномерно диспергировали, потом добавляли 0,1 части консерванта метилпарабена и оставшуюся воду (до 100 г) доводили до рН 4,8 путем добавления триэтаноламина, и равномерно перемешивали, таким образом получали гель на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Пример 4

Растирали гранатовую кожуру в крупку, добавляли 20 кратных гранатовой кожуры в этанол в концентрации 45 вес.% и погружали в этанол при температуре 74°С, экстрагировали 2 раза, каждый раз по 3 ч, потом фильтровали, объединяли фильтрат, регенерировали этанол при пониженном давлении и концентрировали до концентрированного раствора, содержащего 0,18 г гранатовой кожуры в миллилитре.

Вносили концентрированный раствор в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600, и адсорбировали 10 ч.

Сначала промывали деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюировали 5-кратным объемом колонки 80 вес.% этанолом, собирали элюат, содержащий этанол и регенерировали этанол, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме до получения сухого экстракта, растирали и просеивали через сито до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления. При этом содержание общих полифенолов в экстракте должно составлять 53 вес.%, содержание эллаговой кислоты - 3,3 вес.%, а содержание гликозидов граната - 15,6 вес.%.

Получение геля.

Сначала равномерно измельчали 30 частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры и растворяли в увлажнителях - 5 частей глицерина, 10 частей пропиленгликоля и 1 часть солюбилизатора твин, помещали в 2 части раствора карбомера, диспергируемого в воде, равномерно диспергировали, потом добавляли 0,3 части консерванта этилового эфира парагидроксибензойной кислоты и оставшуюся воду (до 100 г) доводили до рН 5,0 путем добавления триэтаноламина, и равномерно перемешивали, таким образом получали гель на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Пример 5

Растирали гранатовую кожуру в крупку, добавляли 10 кратных гранатовой кожуры в этанол в концентрации 40 вес.% и погружали в этанол при температуре 80°С, экстрагировали 3 раза, каждый раз по 2 ч, потом фильтровали, объединяли фильтрат, регенерировали этанол при пониженном давлении и концентрировали до концентрированного раствора, содержащего 0,16 г гранатовой кожуры в миллилитре.

Вносили концентрированный раствор в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600 и адсорбировали 6 ч.

- 4 029649

Сначала промывали деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюировали 4-кратным объемом колонки 70 вес.% этанолом, собирали элюат, содержащий этанол, регенерировали этанол, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме до получения сухого экстракта, растирали и просеивали через сито в 120 меш до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления. При этом содержание общих полифенолов в экстракте должно составлять 71 вес.%, содержание эллаговой кислоты - 2,5 вес.%, а содержание гликозидов граната - 17,6 вес.%.

Получение геля

Сначала равномерно измельчали 25 частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры и растворяли в увлажнителях - 15 частей пропиленгликоля и 2 части солюбилизатора твин, помещали в 4 части раствора натриевой карбоксиметилцеллюлозы, диспергируемого в воде, равномерно диспергировали, потом добавляли 0,5 части консерванта метилпарабена и оставшуюся воду (до 100 г) доводили до рН 4,3 путем добавления триэтаноламина, и равномерно перемешивали, таким образом получали гель на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Пример 6

Растирали гранатовую кожуру в крупу, добавляли 20 кратных гранатовой кожуры в этанол в концентрации 45 вес.% и погружали в этанол при температуре 85°С, экстрагировали 4 раза, каждый раз по 1 ч, потом фильтровали, объединяли фильтрат, регенерировали этанол при пониженном давлении и концентрировали до концентрированного раствора, содержащего 0,15 г гранатовой кожуры в миллилитре.

Вносили концентрированный раствор в колонку, предварительно обработанную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600, и адсорбировали 12 ч. Сначала промывали деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюировали 3-кратным объемом колонки 60 вес.% этанолом, собирали элюат, содержащий этанол, регенерировали этанол, концентрировали при пониженном давлении и сушили в вакууме до получения сухого экстракта, растирали и просеивали через сито в 80 меш до получения экстракта полифенолов гранатовой кожуры для заготовления. При этом содержание общих полифенолов в экстракте должно составлять 66 вес.%, содержание эллаговой кислоты - 3,2 вес.%, а содержание гликозидов граната - 15,8 вес.%.

Получение геля.

Сначала равномерно измельчали 15 частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры и растворяли в увлажнителях - 5 частей пропиленгликоля, помещали в 1 часть раствора карбомера, диспергируемого в воде, равномерно диспергировали, потом добавляли 0,2 части консерванта этилового эфира парагидроксибензойной кислоты и оставшуюся воду (до 100 г) доводили до рН 4,5 путем добавления триэтаноламина и равномерно перемешивали, таким образом получали гель на основе полифенолов гранатовой кожуры.

Пример 7

Фармакодинамический эксперимент - применение геля на основе полифенолов гранатовой кожуры в процессе приготовления, профилактики и лечения гинекологических воспалений - вагинита или цервицита, вызванных бактериями.

1. Экспериментальное исследование токсикологии

Эксперимент стимуляции слизистой оболочки влагалища.

Готовили 6 новозеландских крольчих весом 1,8-2,0 кг. Исследуемое вещество -раствор, приложенный к образцу в 5-кратной концентрации, а в контрольных группах - физиологический раствор. Медленно впрыскивали экспериментальным животным 2 мл исследуемого вещества во влагалище. Наряду с экспериментальной группой в контрольной группе введена такая же обработка физиологическим раствором. После 24 ч заражения животные были выведены из эксперимента путем воздушной эмболии. Вскрывали живот и убирали целое влагалище, разрез вертикально. Производя визуальный осмотр, проверяли на наличие гиперемии, отека или других явлений. Затем помещали влагалище в 10% раствор формалина на более чем 24 ч. Выбирали оба конца и центр влагалища и делали их срез. Применяли способ окраски гематоксилином и эозином и проводили гистопатологическое обследование в соответствии с таблицей стандарта оценки реакции слизистой оболочки влагалища на раздражения и таблицей классификации интенсивности по "Нормам техники для дезинфекции" (издание 2002 г.), в целях оценки интенсивности реакции слизистой оболочки влагалища на раздражения. Результаты представлены в табл. 1.

- 5 029649

Таблица 1. Оценка реакции слизистой оболочки влагалища крольчих на раздражения исследуемого вещества (патологические результаты)

Группа	Номер животн ых	Вес (кг)	Оценка реакции на раздражения
Эпителиаль ная ткань	Лейкоцитарная инфильтрация	Гиперемия кровеносны х сосудов	Отек	Общи й итог
контрольная	1	1,8	0	0	0	3	3
2	2,0	0	0	0	3	3
3	1,9	0	0	0	3	3
средний интеграл						9	9
экспериментал ьная	4	1,9	0	0	0	3	3
5	2,0	0	0	0	3	3
6	1,9	0	0	0	3	3
средний интеграл						9	9

По результатам эксперимента в табл. 1 разница в среднем интеграле между экспериментальной группой и контрольной группой равна нулю (0). Согласно таблице классификации интенсивности в "Нормах техники для дезинфекции" (издание 2002 г.) оценка реакции слизистой оболочки влагалища на раздражения относится к нераздражающим.

2. Экспериментальные исследования в энтосоматической фармакодинамике.

Эксперимент: отек уха у мышей, развившийся в результате нанесения ксилола

Готовили 50 мышей Куньмина весом 18-22 г. Случайным образом делили на 5 групп, по 10 в каждой. Разделяемыми группами являются контрольная группа, 3 группы с введением низкой, средней и высокой дозы геля на основе полифенолов гранатовой кожуры (0,14, 0,28, 0,56 г/кг), группа с введением шипучих таблеток на основе полифенолов гранатовой кожуры (0,30 г/кг). В каждой группе с приемом лекарств вводился соответствующий лекарственный препарат в желудок с помощью зонда, а в контрольной группе - объем, равный 0,5% СМС-Να, один раз в день в течении 7 дней. После 1 ч последнего приема лекарств равномерно покрывали 1 мл/10 г ксилолом наружную часть правого уха у каждой из мышей, а левое ухо в качестве контраста. После 1 ч выводили мышей из эксперимента путем цервикальной дислокации. В симметричных участках левого и правого уха с помощью склеротического кольца диаметром 9 мм получали срезы уха, определяли их массу на электронных весах соответственно. Степенью отека являлась разница в весе между двумя срезами уха у мышей. Вычисляли средний показатель степени и стандартное отклонение степени отека уха у мышей в каждой группе, а также коэффициент ингибирования степени отека уха. Результаты представлены в табл. 2.

Коэффициент ингибирования = (средний показатель степени отека уха в контрольной группе средняя степень отека уха в экспериментальных группах с введением лекарств)/средняя степень отека уха в контрольной группех100%.

Таблица 2. Влияние эксперимента: отек уха у мышей, развившийся в результате нанесения ксилола (х±з)

Группа	Количество животных (и)	Доза (г/кг)	Степень отека (мг)	Коэффициент ингибирования (%)
контрольная	10	-	5,03±2,96	-
шипучие таблетки на основе полифенолов гранатовой кожуры	10	0,30	3,89±2,40	22,7
геля на основе полифенолов гранатовой кожуры	10	0,14	4,47±2,16	11,1
10	0,28	4,12±2,40	18,1
10	0,56	3,73±2,93	25,8

По сравнению с контрольной группой, * р < 0,05, ** р < 0,01.

Данные в табл. 2 показали, что в группе с введением высокой дозы (0,56 г/кг) геля, а также шипучих таблеток на основе полифенолов гранатовой кожуры наблюдается значительное действие при ингибировании отека уха у мышей.

Эксперимент: каррагениновый отек лапы у мышей.

Готовили 50 мышей Куньмина весом 18-22 г. Случайным образом делили на 5 групп, по 10 в каждой. Разделяемыми группами являются контрольная группа растворителя, 3 группы с введением низкой, средней и высокой дозы геля на основе полифенолов гранатовой кожуры (0,14, 0,28, 0,56 г/кг), группа с введением шипучих таблеток на основе полифенолов гранатовой кожуры (0,30 г/кг). В каждой группе с приемом лекарств вводился соответствующий лекарственный препарат в желудок с помощью зонда, а в контрольной группе растворителя - объем равен 0,5% СМС-Να, один раз в день в течение 7 дней. После 1 ч последнего приема лекарств измеряли толщину задней левой лапы у каждой мыши электронным циф- 6 029649

ровым микрометром, затем вводили подкожную инъекцию 1% суспензии каррагинана в количестве 0,1 мл до развития признаков воспаления. Через 0,5, 1, 2 и 6 ч после развития признаков воспаления соответственно измеряли толщину задней левой лапы электронным цифровым микрометром. Показателем степени отека являлась разница в толщине лапы до и после воспаления.

Вычисляли средний показатель и стандартное отклонение степени отека лапы у мышей в каждой группе, а также коэффициент ингибирования степени отека лапы. Результаты представлены в табл. 3 и 4.

Коэффициент ингибирования = (средний показатель степени отека лапы в контрольной группе средний показатель степени отека лапы в экспериментальных группах с введением лекарств)/средний степень отека лапы в контрольной группех100%.

Таблица 3. Влияние каррагенинового отека лапы у мышей (х±8, N = 10)

Группа	Доза г/кг	Степень отека лапы
0,5 ч	1ч	2ч	4ч	6 ч
контрольная	-	2,31±0,74	2,07±0,.63	2,51±0,49	2,62± 0,37	2,41±0,13
шипучие таблетки на основе полифенолов гранатовой кожуры	0,30	1,72±0,39	1,57±0,68	1,91±0,54	2,01± 0,43	1,82±0,38
гель на основе полифенолов гранатовой кожуры	0,14	2,07±0,51	1,82±0,43	2,21±0,49	2,34± 0,57	2,15±0,32
0,28	1,99±0,47	1,74±0,54	2,14±0,56	2,19± 0,51	1,97±0,26
0,56	1,68±0,35	1,53±0,28	1,83±0,48	1,88± 0,28	1,72±0,30

Таблица 4. Влияние коэффициента ингибирования степени каррагенинового отека лапы у мышей

Группа	Доза г/кг	Коэффициент ингибирования
0,5 ч	1 ч	2ч	4ч	6 ч
контрольная	-	-	-	-	-	-
шипучие таблетки на основе полифенолов гранатовой кожуры	0,30	25,54	24,15	23,90	23,28	24,48
гель на основе полифенолов гранатовой кожуры	0,14	10,39	12,08	11,95	10,69	10,79
0,28	13,85	15,94	14,74	16,41	18,26
0,56	27,27	26,09	27,09	28,24	28,63

Данные в табл. 3 и 4 показали, что в группе с введением высокой дозы (0,56 г/кг) геля, а также шипучих таблеток на основе полифенолов гранатовой кожуры наблюдается значительное действие при ингибировании отека лапы у мышей через 0,5 ч после воспаления.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Г ель на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений, который содержит 5-30 мас. частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры, 0,5-4 мас. части вспомогательного вещества, представляющего собой фармацевтически приемлемый материал матрицы геля, выбранный из карбомера, гипромеллозы или натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, 5-20 мас. частей увлажнителя, представляющего собой пропиленгликоль или смесь глицерина и пропиленгликоля, 0,1-0,5 мас. частей консерванта, выбранного из метилпарабена или этилового эфира парагидроксибензойной кислоты, и регулятора рН, представляющего собой триэтаноламин, при этом основными активными ингредиентами в экстракте полифенолов гранатовой кожуры являются общие полифенолы, эллаговая кислота и гликозиды граната.
2. Гель по п.1, дополнительно содержащий 1-2 мас. части солюбилизатора твин.
3. Гель по п.1 или 2, где содержание общих полифенолов в экстракте полифенолов гранатовой кожуры составляет 60-80 вес.%.
4. Гель по п.3, где содержание эллаговой кислоты в экстракте полифенолов гранатовой кожуры составляет 2-4 вес.%, а содержание гликозидов граната - 15-20 вес.%.
5. Способ приготовления геля на основе полифенолов гранатовой кожуры для лечения гинекологических воспалений, включающий следующие этапы:

получение экстракта полифенолов гранатовой кожуры, где:

а) растирают гранатовую кожуру в крупку, которую погружают в 35-49%-ный этанол, вес которого в 5-30 раз больше, при температуре 71-85°С, экстрагируют 1-4 раза, каждый раз по 1-3 ч, потом фильтруют, объединяют фильтрат, регенерируют этанол при пониженном давлении и концентрируют до получения концентрированного раствора, содержащего 0,15-0,2 г гранатовой кожуры в 1 мл;

б) вносят концентрированный раствор, полученный на этапе а), в колонку, предварительно обрабо- 7 029649

танную макропористой абсорбционной смолой ΗΡΌ600, и адсорбируют 3-12 ч, сначала промывают деионизированной водой до получения вытекающего потока светлого цвета, затем элюируют 50-80%-ным этанолом, объем которого в колонке в 2-5 раз больше, собирают элюат, содержащий этанол, и регенерируют этанол, концентрируют при пониженном давлении и сушат в вакууме до получения сухого экстракта, растирают и просеивают через сито в 80-120 меш с получением экстракта полифенолов гранатовой кожуры;

получение геля, где:

в) сначала растворяют 5-30 мас. частей экстракта полифенолов гранатовой кожуры, полученного на стадии б), в 5-20 мас. частях увлажнителя и помещают в 0,5-4 мас. части раствора карбомера, гипромеллозы или натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, диспергируемого в воде, равномерно диспергируют, потом добавляют 0,1-0,5 мас. частей консерванта и воду в количестве до 100 г и равномерно перемешивают, доводят до рН 4,0, 4,3, 4,5 или 4,8 путем добавления триэтаноламина и получают гель на основе полифенолов гранатовой кожуры;

причем увлажнителем является пропиленгликоль или смесь глицерина и пропиленгликоля; и консервантом является метилпарабен или этиловый эфир парагидроксибензойной кислоты.
6. Способ по п.5, в котором на стадии в) экстракт полифенолов гранатовой кожуры, полученный на

стадии б), дополнительно растворяют в 1-2 мас. частях солюбилизатора твин перед помещением в раствор карбомера, гипромеллозы или натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы.