CN102861116A - 一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法，该凝胶剂是以石榴皮多酚提取物为原料，加入辅料为药学上可接受的凝胶基质材料为卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠，保湿剂为丙二醇或甘油和丙二醇，增溶剂为吐温，防腐剂为羟苯甲酯或尼泊金乙酯，pH调节剂为三乙醇胺制成。采用先制备石榴皮多酚提取物，再将石榴皮多酚提取物用保湿剂或/及增溶剂先溶解，再加入已分散好的凝胶基质中，分散均匀，加防腐剂及余量水，搅拌均匀，调节pH至4.0-5.0，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。通过该方法获得的凝胶剂用于预防和治疗由细菌引起的妇科炎症***炎或***，具有给药方便，吸收好，疗效高的特点。

Description

一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法

技术领域

本发明涉及一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法，具体的说涉及一种以石榴皮多酚为原料制备的用于由细菌引起的妇科炎症中***炎或***的凝胶剂。

背景技术

***炎、***等妇科炎症，严重威胁着女性健康。由于女性生殖器官的特殊性，妇科炎症已成为成年女性的常见、多发病，其临床表现多种多样，病因复杂且常伴有多种严重并发症，对女性的生活和工作有很大影响。***炎是不同病因引起的多种***粘膜性疾病的总称。在正常生理状态，***由于解剖组织的特点，对病原体的侵入有自然防御功能，当***自然防御功能受到破坏时，病原体易侵入而导致发生***炎症。临床上***炎症以细菌性***炎最为常见，由于其病情易反复，不易速愈。中国女性生殖健康状况调查显示，在过去一年中，曾经患过***炎的成年女性占53.86%，其中有9.48%的人反复发作达4次以上；***是女性生殖器官炎症中最常见的一种，约占已婚妇女的半数以上。导致***的主要病菌为葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌及厌氧菌。

目前治疗***炎、***等妇科炎症的药物分为内服药和外用药。内服药以中成药为主，剂型包括胶囊、滴丸等；外用药则以化学药品为主，大多含有甲硝唑、克霉唑等药物，过多使用容易破坏***菌群间的制约关系，同时使致病菌产生耐药性，导致治疗周期延长，使疾病得不到有效治疗。由于妇女解剖和生理上的特点，外治法在妇科临床上具有特殊意义。近年来，对***炎、***等的研究中，采用中药外治法，取得了较好的效果。***局部用药由于具有局部药物浓度高、制剂剂量低及安全有效等特点，临床评价较高。***有丰富的毛细血管和***，且***没有明确的神经末梢，给药时患者的疼痛刺激小，对于***、***炎等特定的疾病是有效的药物释放部位。可通过将药物置于***内，通过***粘膜吸收进入局部或全身血液循环，避免了肝脏首过作用和胃肠道生理关卡效应，并且与人体产生较好的生物相容性，可增强黏附性，对药物具有缓释、控释作用，使病灶部位的有效浓度增加，提高了生物利用度，增强了药物疗效，从而来达到局部或全身治疗的目的。

目前市场上现有的***途径给药的药物有冲洗液、***泡腾片、栓剂、膜剂等10 种剂型。冲洗液作用时间短，不易深入***深处；片剂使用不方便，易造成***内有异物感，并易损伤***；栓剂溶化后成为液体易流出***，污染衣物，这样作用时间短、药物难以全部释放；***膜剂以高分子膜为载体制成膜剂塞入***使用，虽制备使用方便，但药物与黏膜接触面小。凝胶是一类含有两种或两种以上的、由固液两相组成、具有半固体性质的大分子网络体系。将药物溶解或均匀分布在凝胶中即为凝胶剂，具有较好的粘附性和成膜特性，与其它***给药剂型相比，能延长滞留时间，易于涂布，能渗入黏膜皱褶，无异物感，无刺激性，能提高患者的顺应性，且清洁易清洗，是近几年来在国际医药市场中表现最活跃的药品新剂型之一，也是最有市场潜力的一类外用药品。

石榴皮为《中国药典》收载的品种，具有涩肠、止血、驱虫等功效，主要用于久泻出血、久痢等。此外，石榴皮还具有促进溃疡粘膜愈合的药理活性。石榴皮中含有的多酚活性成分，如安石榴苷、鞣花酸、 没食子酸等均具有较强的抗炎抑菌活性。但多酚类物质不稳定，温度高、受热时间长易氧化，导致提取率低、活性下降，故将石榴皮采用低温提取浓缩技术，提高多酚类成分的稳定性和提取率；并利用大孔树脂吸附技术，制备出纯度较高的石榴皮多酚有效部位。本发明与中国专利ZL200910113497.7“石榴皮多酚抗菌消炎外用泡腾片制备方法及应用”、文献“石榴皮多酚凝胶的制备及质量控制”虽以石榴皮多酚为原料，但在不同提取温度、溶媒浓度，不同的大孔吸附树脂型号的影响下，石榴皮提取物和有效部位中多酚类成分及含量有所变化。本发明制备出的石榴皮提取物中总多酚的含量60-80%，其总多酚中的活性成分鞣花酸的含量2-4%，安石榴苷的含量15-20%。文献“石榴皮多酚凝胶的制备及质量控制”并未说明提取物的制备过程和凝胶剂处方的配比，且多酚有效成分以没食子酸控制，与本发明有效成分不一致；另一方面，该文献报道石榴皮多酚凝胶用于急慢性皮肤创伤的愈合，与本发明的用途不同。

本发明以凝胶剂应用于临床，因凝胶剂可与人体产生较好的生物相容性，可增强黏附性，对药物具有缓释、控释作用，使病灶部位的有效浓度增加，提高了生物利用度，增强了药物疗效，提高患者的顺应性，且清洁易清洗。经动物体内抗炎药效学二甲苯致小鼠耳肿胀、卡拉胶致小鼠足趾肿胀试验研究，结果表明本发明石榴皮多酚凝胶剂比石榴皮多酚泡腾片具有较好的抗炎效果。

发明内容

在本发明目的在于，提供一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法，该方法是以石榴皮多酚提取物为原料，加入辅料为药学上可接受的凝胶基质材料为卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠，保湿剂为丙二醇或甘油和丙二醇，增溶剂为吐温，防腐剂为羟苯甲酯或尼泊金乙酯，pH调节剂为三乙醇胺制成；采用先制备石榴皮多酚提取物，将石榴皮多酚提取物用保湿剂和/或增溶剂先溶解，加入用水分散的卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠溶液中，分散均匀，再加入防腐剂及余量水，搅拌均匀，加入三乙醇胺调节pH至4.0-5.0，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。通过该方法获得的凝胶剂用于由细菌引起的妇科炎症中的***炎或***的预防和治疗，具有给药方便，吸收好，疗效高的特点。

本发明所述的一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法，该方法是由石榴皮多酚提取物重量份为5-30份，辅料为药学上可接受的凝胶基质材料为卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠0.5-4份，保湿剂为丙二醇或甘油和丙二醇5-20份，增溶剂为吐温0-2份，防腐剂为羟苯甲酯或尼泊金乙酯0.1-0.5份，pH调节剂为三乙醇胺制成；采用先制备石榴皮多酚提取物，再以提取物为原料制备凝胶剂，其中石榴皮多酚提取物主要有效成分为总多酚、鞣花酸和安石榴苷，具体操作按下列步骤进行： 

石榴皮多酚提取物的制备：

a、取石榴皮粉碎成粗粉，加5-30倍量浓度为35-49%乙醇温浸，温度71-85℃，提取1-4次，每次1-3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；

b、将步骤a得到的浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔吸附树脂柱上，吸附3-12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2-5倍柱体积的50-80%%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成干浸膏，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物备用；

凝胶剂的制备：

c、将步骤b石榴皮多酚提取物用保湿剂或增溶剂或保湿剂和增溶剂先溶解，加入用水分散的卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠溶液中，分散均匀，再加入防腐剂和余量水，搅拌均匀，加入三乙醇胺调节pH至4.0-5.0，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

步骤b中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量60-80%。

步骤b中石榴皮多酚提取物中的总多酚的活性成分为鞣花酸的含量2-4%，安石榴苷的含量15-20%。

通过本发明所述方法获得的石榴皮多酚凝胶剂质地细腻均匀、质量稳定，在光、热、低温等因素的影响下，各项指标未见明显变化。在制备预防和治疗由细菌引起的妇科炎症***炎或***中采用药物新剂型与中药纯化物相结合的手段，在增强药效的同时，增加了用药的舒适性和适应性。

具体实施方式

实施例1：

石榴皮多酚提取物的制备：

取石榴皮粉碎成粗粉，加5倍量浓度为35%乙醇温浸，温度71℃，提取1次，时间3小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL含石榴皮0.15g的浓缩液；

将浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔吸附树脂柱色谱柱，吸附6h，先用去离子水洗脱至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的浓度为50%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成浸膏，粉碎，过80目筛，得到石榴皮多酚提取物备用，其中提取物总多酚的含量为62%，鞣花酸的含量为3.6%，安石榴苷的含量为15.4%；

凝胶剂的制备：

取保湿剂丙二醇5份与石榴皮提取物10份研磨均匀先溶解，加入用水分散的卡波姆2份溶液，分散均匀，加入防腐剂羟苯甲酯0.1份，余量水至100g，滴入三乙醇胺调节pH 4.0，搅拌均匀，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

实施例2：

石榴皮多酚提取物的制备：

取石榴皮粉碎成粗粉，加8倍量浓度为49%乙醇温浸，温度75℃，提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL含石榴皮0.18g的浓缩液；

将浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔吸附树脂色谱柱上，吸附8h，先用去离子水洗脱至流出液近无色，再用3倍柱体积的浓度为60%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成浸膏，粉碎，过100目筛，得到石榴皮多酚提取物备用，其中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量为68%，鞣花酸的含量为2.8%，安石榴苷的含量为16.2%；

凝胶剂的制备：

取保湿剂丙二醇5份与石榴皮提取物15份研磨均匀先溶解，加入用水分散的羟丙甲纤维素溶液3份，分散均匀，再加入防腐剂尼泊金乙酯0.1份，余量水至100g，滴入三乙醇胺调节pH 4.5，搅拌均匀，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

实施例3：

石榴皮多酚提取物的制备：

取石榴皮粉碎成粗粉，加15倍量浓度为40%乙醇温浸，温度80℃，提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL含石榴皮0.2g的浓缩液；

将浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔吸附树脂色谱柱上，吸附12h，先用蒸馏水洗脱至流出液近无色，再用4倍柱体积的浓度为60%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成浸膏，粉碎，过120目筛，得到石榴皮多酚提取物备用，其中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量为75%，鞣花酸的含量为2.4%，安石榴苷的含量为16.6%；

凝胶剂的制备：

取保湿剂甘油10份和丙二醇5份、石榴皮提取物20份研磨均匀先溶解，加入用水分散的羧甲基纤维素钠溶液3份，分散均匀，加入防腐剂羟苯甲酯0.1份，余量水至100g，滴入三乙醇胺调节pH 4.8，搅拌均匀，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

实施例4：

石榴皮多酚提取物的制备：

取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为45%乙醇温浸，温度74℃，提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL含石榴皮0.18g的浓缩液；

将浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔吸附树脂色谱柱上，吸附10h，先用去离子水洗脱至流出液近无色，再用5倍柱体积的浓度为80%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成浸膏，粉碎，过100目筛，得到石榴皮多酚提取物备用，其中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量为53%，鞣花酸的含量为3.3%，安石榴苷的含量为15.6%；

凝胶剂的制备：

取保湿剂甘油5份和丙二醇10份、增溶剂吐温1份、石榴皮提取物30份研磨均匀先溶解，加入用水分散的卡波姆溶液2份，分散均匀，加入防腐剂尼泊金乙酯0.3份，余量水至100g，滴入三乙醇胺调节pH为5.0，搅拌均匀，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

实施例5：

石榴皮多酚提取物的制备：

取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40%乙醇温浸，温度为80℃，提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL含石榴皮0.16g的浓缩液；

将浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔树脂色谱柱上，吸附6h，先用蒸馏水洗脱至流出液近无色，再用4倍柱体积的浓度为70%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成浸膏，粉碎，过120目筛，得到石榴皮多酚提取物备用，其中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量为71%，鞣花酸的含量为2.5%，安石榴苷的含量为17.6%；

凝胶剂的制备：

取保湿剂丙二醇15份、增溶剂吐温2份、石榴皮提取物25份研磨均匀先溶解，加入用水分散的羧甲基纤维素钠溶液4份，分散均匀，加入防腐剂羟苯甲酯0.5份，余量水至100g，滴入三乙醇胺调节pH为4.3，搅拌均匀，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

实施例6：

石榴皮多酚提取物的制备：

取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为45%乙醇温浸，温度85℃，提取4次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL含石榴皮0.15g的浓缩液；

将浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔树脂色谱柱上，吸附12h，先用蒸馏水洗脱至流出液近无色，再用3倍柱体积的浓度为60%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成浸膏，粉碎，过80目筛，得到石榴皮多酚提取物备用，其中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量为66%，鞣花酸的含量为3.2%，安石榴苷的含量为15.8%；

凝胶剂的制备：

取保湿剂丙二醇5份、石榴皮提取物15份研磨均匀先溶解，加入用水分散的卡波姆溶液1份，分散均匀，再加入防腐剂尼泊金乙酯0.2份，余量水至100g，滴入三乙醇胺至pH为4.5，搅拌均匀，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

实施例7

石榴皮多酚凝胶剂在制备预防和治疗由细菌引起的妇科炎症***炎或***。药效学实验：

（一）毒理学试验研究

***黏膜刺激试验

新西兰雌性大白兔，6只，体重1.8-2.0kg，受试物为样品最高应用液5倍浓度的溶液，对照组采用生理盐水，给实验动物缓慢注入2ml受试液对***进行染毒，对照组动物用生理盐水作同样处理，染毒24h后，采用气栓法处死动物，剖腹取出完整的***，纵向切开，肉眼观察是否有充血、水肿等表现，然后将***放入10%***溶液中固定24h以上，选取***的两端和中央三个部位制片，HE染色，进行组织病理学检查，按《消毒技术规范》（2002年版）***黏膜刺激反应评分标准表和强度分级表，对***黏膜刺激评分、强度进行评定，试验结果见表1： 

由表1的试验结果可见，受试组动物***黏膜刺激反应的平均积分与对照组平均积分之差为0，依据《消毒技术规范》（2002年版）***黏膜刺激强度分级表，属无刺激性；

（二）体内药效学试验研究：

二甲苯致小鼠耳肿胀试验：

取昆明种小鼠50只，体重18-22g，随机分为5个组，每组10只，分别为对照组，石榴皮多酚凝胶剂低、中、高三个剂量组（0.14 g/kg、0.28 g/kg、0.56 g/kg），石榴皮多酚泡腾片（0.30 g/kg）；各给药组灌胃给予相应药物，对照组给予等体积的0.5% CMC-Na，每天一次，连续7天，末次给药1h后，每只小鼠右耳外侧均匀涂二甲苯1ml/10g，左耳为对照，1h后将小鼠脱颈处死，在左右耳同样部位用直径9mm的巩膜环冲下耳片，用电子天平分别称耳片重，以两耳片重量之差为肿胀度，计算各组小鼠耳肿胀度均值与标准差，并计算肿胀度抑制率，结果见表2；

抑制率=（对照组平均耳肿胀度-给药组平均耳肿胀度）/对照组平均耳肿胀度x100%；

备注：与对照组比较，^﹡p<0.05 ，^﹡﹡p＜0.01

表2数据表明：石榴皮多酚凝胶剂高剂量组（0.56 g/kg）有明显的抑制小鼠耳肿胀的作用，石榴皮多酚泡腾片亦有同样作用；

卡拉胶致小鼠足跖肿胀的影响：

取昆明种小鼠50只，体重18-22g，随机分为5个组，每组10只，分别为溶媒对照组，石榴皮多酚凝胶剂低、中、高三个剂量组（0.14 g/kg、0.28 g/kg、0.56 g/kg），石榴皮多酚泡腾片（0.30 g/kg）；各给药组灌胃给予相应药物，溶媒对照组给予等体积的0.5% CMC-Na，每天一次，连续7天。末次给药1h后，每只小鼠用电子数显千分尺测定左后足跖厚度，然后皮下注射1%的0.1ml卡拉胶混悬液致炎，并分别在致炎后0.5h、1h、2h、6h用电子数显千分尺测定左后足跖厚度，以致炎前后足跖厚度之差作为肿胀度，计算各组小鼠足跖肿胀度均值与标准差，并计算足跖肿胀度抑制率，结果见表3表4；

抑制率=（对照组平均耳肿胀度-给药组平均耳肿胀度）/对照组平均耳肿胀度x100%；

备注：与对照组比较，^﹡p<0.05 ，^﹡﹡p＜0.01

表3表4数据表明：石榴皮多酚凝胶剂高剂量组（0.56 g/kg）在致炎后0.5h有明显的抑制小鼠耳肿胀的作用，石榴皮多酚泡腾片亦有同样作用。

Claims (3)

1.一种制备治疗妇科炎症的石榴皮多酚凝胶剂的方法，其特征在于该凝胶剂是由石榴皮多酚提取物重量份为5-30份，辅料为药学上可接受的凝胶基质材料为卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠0.5-4份，保湿剂为丙二醇或甘油和丙二醇5-20份，增溶剂吐温0-2份，防腐剂为羟苯甲酯或尼泊金乙酯0.1-0.5份，pH调节剂为三乙醇胺制成；其中石榴皮多酚提取物的主要有效成分为总多酚、鞣花酸和安石榴苷，具体操作按下列步骤进行：

石榴皮多酚提取物的制备：

a、取石榴皮粉碎成粗粉，加5-30倍量浓度为35-49%乙醇温浸，温度71-85℃，提取1-4次，每次1-3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；

b、将步骤a得到的浓缩液加入已处理好的HPD600型大孔吸附树脂柱上，吸附3-12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2-5倍柱体积的50-80%%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥成干浸膏，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物备用；

凝胶剂的制备：

c、将步骤b石榴皮多酚提取物用保湿剂或增溶剂或保湿剂和增溶剂先溶解，加入用水分散的卡波姆或羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素钠溶液中，分散均匀，再加入防腐剂和余量水，搅拌均匀，加入三乙醇胺调节pH至4.0-5.0，即可得到石榴皮多酚凝胶剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中石榴皮多酚提取物中总多酚的含量60-80%。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤b中石榴皮多酚提取物中的总多酚的活性成分为鞣花酸的含量2-4%，安石榴苷的含量15-20%。