EA028414B1 - Лечение рака ингибиторами tor киназы - Google Patents

Abstract

В изобретении представлен способ лечения сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.

Description

(57) В изобретении представлен способ лечения сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества 1-этил-7-(2метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.

Область техники, к которой относится изобретение

В настоящей заявке представлены способы лечения или профилактики сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

Предпосылки создания изобретения

Связь между аномальным фосфорилированием белка и причиной или следствием заболеваний известна уже более 20 лет. Соответственно протеинкиназы стали представлять очень важную группу мишеней для лекарственных средств (см. СоНеи, Ыа1иге, 1:309-315 (2002)). Различные ингибиторы протеинкиназ нашли клиническое применение в лечении широкого ряда заболеваний, таких как рак и хронические воспалительные заболевания, включая диабет и удар (см. СоНеи, Еиг. 1. ВюсНет., 268:5001-5010 (2001), Рго1ет Кшаке ΙηΙιίηίΐοΐΈ (Не ТгеаОпеШ оГ ОЕеахе: ТНе Ргонике аиб (Не РгоЫетк, НаибЬоок оГ ЕхрептеШа1 РНагтасо1о§у, 8ргш§ег ВегНп Не1бе1Ьег§, 167 (2005)).

Протеинкиназы представляют большое и разнообразное семейство ферментов, которые катализируют фосфорилирование белка и играют критическую роль в клеточной сигнальной активности. Протеинкиназы могут проявлять положительные или отрицательные регуляторные эффекты в зависимости от их белка-мишени. Протеинкиназы вовлечены в специфические сигнальные пути, которые регулируют клеточные функции, такие как, но не ограничиваясь этим, метаболизм, развитие клеточного цикла, клеточная адгезия, сосудистая функция, апоптоз и ангиогенез. Нарушения клеточной сигнальной активности ассоциируется со многими заболеваниями, наиболее характерные из которых включают рак и диабет. Регуляция сигнальной трансдукции цитокинами и связь сигнальных молекул с протоонкогенами и опухоль-супрессорными генами имеет достаточное документальное подтверждение. Подобным образом, была продемонстрирована связь между диабетом и связанным с ним состояниями и нерегулируемыми уровнями протеинкиназ (см., например, 8пбНаг е! а1., РНагтасеийса1 КекеагсН, 17(11):1345-1353 (2000)). Вирусные инфекции и связанные с ними состояния также ассоциируются с регуляцией протеинкиназ (Рагк е! а1., Се11 101 (7):777-787 (2000)).

Поскольку протеинкиназы регулируют почти каждый клеточный процесс, включая метаболизм, клеточную пролиферацию, клеточную дифференциацию и клеточное выживание, они являются привлекательными мишенями для терапевтического вмешательства при различных болезненных состояниях. Например, контроль клеточного цикла и ангиогенез, в которых протеинкиназы играют ключевую роль, представляют собой клеточные процессы, ассоциируемые с различными болезненными состояниями, такими как, но не ограничиваясь этим, рак, воспалительные заболевания, аномальный ангиогенез и связанные с этим заболевания, атеросклероз, дегенерация желтого пятна, диабет, ожирение и боль. Протеинкиназы стали привлекательными мишенями для лечения различных типов рака (РаЬЬго е! а1., РНагтасо1оду & ТНегареийск 93:79-98 (2002)). Было сделано предположение, что участие протеинкиназ в развитии злокачественных заболеваний человека может происходить посредством: (1) геномных реаранжировок (например, ВСК-АВЬ в хроническом миелогенном лейкозе), (2) мутаций, приводящих к конститутивно активной киназной активности, например острый миелогенный лейкоз и желудочно-кишечные опухоли, (3) нарушения регуляции киназной активности путем активации онкогенов или потери опухоль-супрессорных функций, например раковые заболевания с онкогенным КА8, (4) нарушения регуляции киназной активности путем чрезмерной экспрессии, как в случае ЕОРК, и (5) эктопической экспрессии ростовых факторов, которые могут способствовать развитию и поддержанию опухолевого фенотипа (РаЬЬго е! а1., РНагтасо1о§у & ТНегареийск 93:79-98 (2002)).

Выяснение сложности протеинкиназных путей и сложности взаимосвязей и взаимодействий среди и между различными протеинкиназами и киназными путями особо подчеркивает важность разработки фармацевтических средств, способных действовать как модуляторы, регуляторы или ингибиторы протеинкиназ, которые обладают полезным действием на различные киназы или сложные киназные пути. Соответственно остается необходимость получения новых модуляторов киназ.

Белок, имеющий название тТОК (мишень рапамицина у млекопитающих), который также называют как РКАР, КАРТ1 или КАРТ1, представляет собой 2549-аминокислотную Бег/ТНг протеинкиназу, которая, как было показано, является одним из наиболее критических белков в тТОК/Р13К/Ак! пути, который регулирует клеточный рост и пролиферацию (ОеогдаИк аиб Уоииек Ехрей Кеу. Аийсаисег ТНег. 6(1) : 131-140 (2006)). тТОК существует в двух комплексах: тТОКС1 и тТОКС2. В то время как тТОКС1 является чувствительным к аналогам рапамицина (таким как темсиролимус или эверолимус), тТОКС2, в основном не чувствителен к рапамицину. Следует отметить, что рапамицин не является ингибитором ТОК киназы. Некоторые ингибиторы тТОК были оценены или в настоящее время оцениваются в клинических испытаниях для лечения рака. Темсиролимус был одобрен для применения при почечноэпителиальной карциноме в 2007 году, и сиролимус был одобрен в 1999 году для профилактики отторжения почечного трансплантата. Эверолимус был одобрен в 2009 году для пациентов с почечноэпителиальной карциномой, прогрессирующей при приеме ингибиторов рецепторов сосудистого эндотелиального ростового фактора, в 2010 году для субэпендимальной гигантоклеточной астроцитомы (8ЕОА), ассоциированной с туберозным склерозом (Т8), у пациентов, которым требуется терапевтическое лечение, но которые не являются кандидатами для хирургической операции, и в 2011 году для про- 1 028414 грессирующих нейроэндокринных опухолей панкреатического происхождения (ΡΝΕΤ) у пациентов с неоперабельным локально развивающимся или метастатическим заболеванием. Остается необходимость получения дополнительных ингибиторов ТОК. киназы.

Цитирование или указание любого ссылочного документа в разделе 2 настоящей заявки не следует рассматривать как допущение, что этот ссылочный документ является прототипом настоящей заявки.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к способу лечения сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, где способ включат введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

В частности, способ по настоящему изобретению предусматривает введение пациенту от около 0,5 до около 128 мг/день 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.

В частности, способ по настоящему изобретению предусматривает введение пациенту 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 20, 30, 45, 60, 90, 120 или 128 мг/день 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.

В предпочтительном варианте пациенту вводят стандартную лекарственную форму, включающую 0,25, 1,0, 5,0, 7,5 или 10 мг 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера. Еще одним объектом изобретения является способ улучшения состояния в соответствии с критериями оценки ответа в солидных опухолях (КЕС13Т 1.1) у пациента, где способ включает введение эффективного количества 1 -этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3 -ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

Еще одним другим объектом изобретения является способ ингибирования фосфорилирования 36КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в биологическом образце пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, где способ включает введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту и сравнение количества фосфорилированного 36КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в биологическом образце пациента, полученном до и после введения указанного 1 -этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3 -ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, где меньшее фосфорилирование 36КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в указанном биологическом образце, полученном после введения указанного 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, по сравнению с количеством фосфорилированного 36КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в указанном биологическом образце, полученном до введения указанного 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, указывает на ингибирование.

Еще одним другим объектом изобретения является способ ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности в образце кожи пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, где способ включает введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту и сравнение количества фосфорилированной ДНК-РК в биологическом образце пациента, полученном до и после введения 1-этил-7(2-метил-6-(1Н-1, 2, 4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, где меньшее фосфорилирование ДНКРК в указанном биологическом образце, полученном после введения 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, по сравнению с количеством фосфорилированной ДНКРК в указанном биологическом образце, полученном до введения указанного 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, указывает на ингибирование. Еще одним другим объектом изобретения является способ измерения ингибирования фосфорилирования 36КР, 4Е-ВР1 или АКТ у пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, где способ включает введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту, измерение количества фосфорилированного 36КР, 4Е-ВР1 или АКТ у указанного пациента и сравнение указанного количества фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 или АКТ с количеством, определенным у указанного пациента до введения эффективного количества 1-этил-7-(2- 2 028414 метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3 -ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера. Еще одним другим объектом изобретения является способ измерения ингибирования фосфорилирования ДНК-РК §2056 в образце кожи пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, где способ включает введение эффективного количества 1 -этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту, измерение количества фосфорилированной ДНК-РК §2056, присутствующей в образце кожи и сравнение указанного количества фосфорилированной ДНК-РК §2056 с количеством, определенным в образце кожи указанного пациента до введения эффективного количества 1-этил-7-(2метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3 -ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера. В одном из конкретных вариантов осуществления предложенных способов в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК, в частноти, в результате потери ΡΤΕΝ, Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии ΕΟΡΚ, или комбинации этих факторов.

Представленные варианты воплощения можно гораздо лучше понять при ссылке на подробное описание и примеры, которые предназначены для иллюстрации неограничивающих вариантов воплощения.

Подробное описание изобретения

Определения.

Как используется в настоящей заявке, термин фармацевтически приемлемая сол(соли) относится к соли, полученной из фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоте или основанию, включая неорганическую кислоту и основание и органическую кислоту и основание. Подходящие фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли ингибиторов ТОК киназы включают, но не ограничиваются этим, соли металлов, образованные из алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия и цинка, или органические соли, образованные из лизина, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглумина (Ν-метилглюкамин) и прокаина. Подходящие нетоксичные кислоты включают, но не ограничиваются этим, неорганические и органические кислоты, такие как уксусная, альгиновая, антраниловая, бензолсульфоновая, бензойная, камфорсульфоновая, лимонная, этенсульфоновая, муравьиная, фумаровая, фуранкарбоновая, галактуроновая, глюконовая, глюкуроновая, глутаминовая, гликолевая, бромисто-водородная, хлористо-водородная, изетионовая, молочная, малеиновая, яблочная, миндальная, метансульфоновая, муциновая, азотная, памовая, пантотеновая, фенилуксусная, фосфорная, пропионовая, салициловая, стеариновая, янтарная, сульфаниловая, серная, винная кислота и п-толуолсульфоновая кислота. Конкретные нетоксичные кислоты включают хлористо-водородную, бромисто-водородную, фосфорную, серную и метансульфоновую кислоты. Конкретные примеры солей, таким образом, включают гидрохлоридные и мезилатные соли. Другие соли хорошо известны из уровня техники (см., например, РстйщЮп/ РНагтассиг1са1 §с1еиее8, 18* еб§., Маек РиЬШЫид, ЕаЧоп РА (1990) или Кетт§1ои: Тйе §с1еисе аиб Ргасйсе о! Рйаттасу, 19* еб8., Маек РиЬШЫид, Еа81ои РА (1995)).

Как используется в настоящей заявке, и если не указано иное, термин стереоизомер или стереомерно чистый означает один стереоизомер ингибитора ТОК киназы, который является, по существу, свободным от других стереоизомеров этого соединения. Например, стереомерно чистое соединение, содержащее один хиральный центр, будет, по существу, свободным от противоположного энантиомера этого соединения. Стереомерно чистое соединение, содержащее два хиральных центра, будет, по существу, свободным от других диастереомеров соединения. Типичное стереомерно чистое соединение включает больше чем около 80 мас.% одного стереоизомера соединения и меньше чем около 20 мас.% других стереоизомеров соединения, больше чем около 90 мас.% одного стереоизомера соединения и меньше чем около 10 мас.% других стереоизомеров соединения, больше чем около 95 мас.% одного стереоизомера соединения и меньше чем около 5 мас.% других стереоизомеров соединения или больше чем около 97 мас.% одного стереоизомера соединения и меньше чем около 3 мас.% других стереоизомеров соединения. Ингибиторы ТОК киназы могут содержать хиральные центры и могут существовать в виде рацематов, индивидуальных энантиомеров или диастереомеров и их смесей. Все такие изомерные формы включены в варианты воплощения, раскрытые в настоящей заявке, включая их смеси. Использование стереомерно чистых форм таких ингибиторов ТОК киназы, а также использование смесей таких форм охватывается вариантами воплощения, раскрытыми в настоящей заявке. Например, смеси, включающие равные или неравные количества энантиомеров конкретного ингибитора ТОК киназы, можно использовать в способах и композициях, раскрытых в настоящей заявке. Эти изомеры могут быть асимметрично синтезированы или разделены с использованием стандартных методов, таких как хиральные колонки или хиральные агенты разделения (см., например, 1асс.|ие5 1., е1 а1., Еиаийотегк, Касета1е8 аиб Ке8о1ийои8 (^йеуПйегеаеисе, №ν Уогк, 1981); ^йеи §.Н., е1 а1., Тейайебгои 33:2725 (1977); Ейе1 Е.Б., §1егеосйет18йу о! СагЬои Сотроиибк (МсОга^-НШ, ΝΥ, 1962); и ^йеи §.Н., ТаЬ1е8 о! КекоМид АдеШз аиб Орйса1 Ке8о1ийои8 р. 268 (Е.Б. Ейе1, Еб., Ищу. о! №1ге Эате Рге88, №1ге Иате, ΙΝ, 1972).

Также следует отметить, что ингибиторы ТОК киназы могут включать Е- и Ζ-изомеры или их смесь и цис- и транс-изомеры или их смесь. В некоторых вариантах воплощения ингибиторы ТОК киназы выделяют либо в виде цис-, либо транс-изомера. В других вариантах воплощения ингибиторы ТОК киназы

- 3 028414 представляют собой смесь цис- и транс-изомеров.

Таутомеры относится к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм зависят от среды, в которой присутствует соединение, и могут отличаться в зависимости от, например, является ли соединение твердым веществом или находится в органическом или водном растворе. Например, в водном растворе пиразолы могут демонстрировать следующие изомерные формы, которые называют таутомерами в отношении друг друга

Как должно быть понятно специалистам в данной области, широкий ряд функциональных групп и других структур могут демонстрировать таутомерию, и все таутомеры ингибиторов ТОК киназы охватываются объемом настоящего изобретения.

Лечение, как это используется в настоящей заявке, означает облегчение, полностью или частично, сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи или ее симптома или замедление или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи или ее симптома.

Профилактика, как это используется в настоящей заявке, означает предотвращение начала развития, рецидива или распространения, полностью или частично, сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи или ее симптома.

Термин эффективное количество в связи с ингибитором ТОК киназы означает количество, способное облегчить, полностью или частично, симптомы, связанные с сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, или замедлить или остановить дальнейшее прогрессирование или ухудшение этих симптомов, или обеспечить лечение или профилактику сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи. Эффективное количество ингибитора ТОК киназы, например, в фармацевтической композиции, может быть на уровне, который даст желаемый эффект; например от около 0,005 мг/кг массы тела субъекта до около 100 мг/кг массы тела пациента в стандартной дозе как для перорального, так и для парентерального введения. Как должно быть очевидно специалистам в данной области, следует ожидать, что эффективное количество ингибитора ТОК киназы, раскрытое в настоящей заявке, может варьироваться в зависимости от тяжести показания, подлежащего лечению.

Термины пациент и субъект, как они используются в настоящей заявке, включают животных, включая, но не ограничиваясь этим, животное, такое как корова, обезьяна, лошадь, овца, свинья, курица, индейка, перепелка, кошка, собака, мышь, крыса, кролик или морская свинка, в одном варианте воплощения млекопитающее, в другом варианте воплощения человека. В одном варианте воплощения пациент или субъект представляет собой человека, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи. В одном варианте воплощения пациент представляет собой человека, имеющего гистологически или цитологически подтвержденную сквамозно-клеточную карциному головы и шеи, включая субъектов, у которых заболевание прогрессирует при приеме стандартной противораковой терапии (или которые не могут переносить такую терапию) или для которых не существует стандартной противораковой терапии.

В контексте сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи лечение можно оценить по ингибированию прогрессирования заболевания, ингибированию роста опухоли, уменьшению первичной и/или вторичной опухоли(опухолей), облегчению связанных с опухолью симптомов, улучшению качества жизни, замедлению образования первичной и/или вторичной опухоли(опухолей), замедленному развитию первичной и/или вторичной опухоли(опухолей), уменьшенному возникновению первичной и/или вторичной опухоли(опухолей), замедленному развитию или уменьшенной тяжести вторичных эффектов заболевания, остановке опухолевого роста и/или регрессии опухолей среди прочего. В некоторых вариантах воплощения лечение сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи можно оценить по ингибированию фосфорилирования 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в кровотоке и/или опухолевых клетках и/или биопсиях кожи или опухолевых биопсиях/аспиратах до, в процессе и/или после лечения ингибитором ТОК киназы. В других вариантах воплощения лечение сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи можно оценить по ингибированию ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности в образцах кожи и/или опухолевых биопсиях/аспиратах, например, путем оценки количества пДНК-РК 82056 в качестве биомаркера для путей повреждения ДНК, до, в процессе и/или после лечения ингибитором ТОК киназы. В одном варианте воплощения образец кожи облучают УФ-светом. В особенно благоприятных случаях полное ингибирование в настоящей заявке называют профилактикой или химиопрофилактикой. В этом контексте термин профилактика включает либо предотвращение начала развития клинически очевидной сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи в целом или предотвращение начала развития предклинически очевидной стадии сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи. Также предполагается, что это определение охватывает предотвращение преобразования в злокачественные клетки или остановку или реверсирование развития предзлокачественных клеток в злокачественные клетки. Это включает профилактическое лечение субъектов, имеющих риск развития сквамозно-клеточной карциномы голо- 4 028414 вы и шеи.

Ингибиторы !ог киназы.

Согласно настоящему изобретению ингибитор ТОК киназы представляет собой собой 1-этил-7-(2метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3 -ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемую соль, стереоизомер или таутомер.

Способы получения ингибиторов ΐοτ киназы.

Ингибиторы ТОК киназы можно получить стандартными хорошо известными способами синтеза (см., например, Матей 1. Абуаисеб Отдашс СйепикИу; Кеасйоик Месйашкшк аиб 5>1гиеШгс. 41й еб., 1992). Исходные вещества, полезные для получения соединений формулы (III) и промежуточных соединений для их получения, являются коммерчески доступными или могут быть получены из коммерчески доступных веществ с использованием известных способов синтеза и реагентов.

Конкретные способы получения соединений формулы (I) раскрыты в патенте США № 7981893, выданном 19 июля 2011 года, включенном в настоящую заявку посредством ссылки во всей его полноте. Конкретные способы получения соединений формулы (II) раскрыты в патенте США № 7968556, выданном 28 июля 2011 года, включенном в настоящую заявку посредством ссылки во всей его полноте. Конкретные способы получения соединений формулы (III) и (IV) раскрыты в патенте США № 8110578, выданном 7 февраля 2012 года, и в публикации заявки США № 2011/0137028, поданной 25 октября 2010 года, включенных в настоящую заявку посредством ссылки во всей их полноте.

Способы применения.

В настоящей заявке представлены способы лечения или профилактики сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи (также известной как НЫ§СС), включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи. В некоторых вариантах воплощения ингибитор ТОК киназы вводят пациенту с локально развивающейся, рецидивирующей или метастатической сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, не поддающейся лечению путем хирургической резекции. В другом варианте воплощения ингибитор ТОК киназы вводят пациенту, который получал по меньшей мере одну из известных ранее химиотерапии на основе платины. В некоторых вариантах воплощения ингибитор ТОК киназы вводят пациенту, у которого имеется опухоль, показывающая чрезмерную экспрессию ДНК-РК.

В одном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы лечения или профилактики сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, которая метастазировала, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы пациенту, страдающему сквамозноклеточной карциномой головы и шеи, которая метастазировала. В конкретных вариантах воплощения сквамозно-клеточная карцинома головы и шеи, которая метастазировала, метастазирует в подмышечный лимфатический узел, небный, шейный лимфатический узел, легкое, верхний сегмент, нос или носовой проход, шею, основание черепа, шею, грудную стенку, плевральную жидкость, широкую спинную мышцу, небную миндалину или локально, как описано в табл. 3.

В некоторых вариантах воплощения в настоящей заявке представлены способы лечения сквамозноклеточной карциномы головы и шеи, которые включают введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, где лечение приводит к одному или более из следующих: ингибирование прогрессирования заболевания, ингибирование роста опухоли, уменьшение первичной опухоли, облегчение связанных с опухолью симптомов, ингибирование опухоль-секретируемых факторов (включая опухоль-секретируемые гормоны, такие как гормоны, которые способствуют карциноидному синдрому), замедление образования первичных или вторичных опухолей, замедленное развитие первичных или вторичных опухолей, уменьшенное возникновение первичных или вторичных опухолей, замедленное развитие или уменьшение тяжести вторичных эффектов заболевания, остановка опухолевого роста и регрессия опухолей, увеличение периода времени до прогрессирования (ТТР), увеличение периода выживания без прогрессирования (РР§) и/или увеличение общего периода выживания (О8) среди прочего.

В одном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы профилактики метастазирования сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи. В одном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы улучшения критериев оценки ответа в солидных опухолях (КЕО8Т 1,1) (см. Ещепйаиет Е.А., Тйегакке Р., Водаейк I., е! а1. Ыете гекроике еуайшОоп сгйепа ίη койб 1ишоигк: Кеу1кеб КЕО8Т дшбейие (уеткюи 1.1). Еигореап I. Саисег; 2009; (45) 228-247) пациента, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

В одном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы ингибирования фосфорилирования §6КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ у пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы указанному пациенту. В некоторых таких вариантах воплощения ингибирование фосфорилирования оценивали в биологическом образце пациента, например в кровотоке и/или опухолевых клетках, биопсиях кожи и/или опухолевых биопсиях или аспиратах. В таких вариантах воплощения количественную оценку

- 5 028414 ингибирования фосфорилирования осуществляли путем сравнения количества фосфо- 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ до и после введения ингибитора ТОК киназы. В некоторых вариантах воплощения, в настоящей заявке представлены способы измерения ингибирования фосфорилирования 86КР, 4Е-ВР1 или АКТ у пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы указанному пациенту, измерение количества фосфорилированного 86КР, 4Е ВР1 и/или АКТ у указанного пациента и сравнение указанного количества фосфорилированного 86КР, 4Е ВР1 и/или АКТ с количеством, определенным у указанного пациента, до введения эффективного количества ингибитора ТОК киназы.

В некоторых вариантах воплощения, представленных в настоящей заявке, раскрыты способы ингибирования фосфорилирования 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в биологическом образце пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы указанному пациенту и сравнение количества фосфорилированного 86КР, 4ЕВР1 и/или АКТ в биологическом образце пациента, полученном до и после введения указанного ингибитора ТОК киназы, где меньшее кольчество фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в указанном биологическом образце, полученном после введения указанного ингибитора ТОК киназы, по сравнению с количеством фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в указанном биологическом образце, полученном до введения указанного ингибитора ТОК киназы, указывает ингибирование. В одном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности у пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы указанному пациенту. В некоторых вариантах воплощения ДНК-РК ингибирование оценивали в коже пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, в одном примере в облучаемом УФ-светом образце кожи указанного пациента. В другом варианте воплощения ДНК-РК ингибирование оценивали в биопсии опухоли или аспиратах пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи. В одном варианте воплощения ингибирование оценивали путем измерения количества фосфорилированного ДНК-РК 82056 (также известный как пДНК-РК 82056) до и после введения ингибитора ТОК киназы. В некоторых вариантах воплощения в настоящей заявке представлены способы измерения ингибирования фосфорилирования ДНК-РК 82056 в образце кожи пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы указанному пациенту, измерение количества фосфорилированного ДНК-РК 82056, присутствующего в образце кожи, и сравнение указанного количества фосфорилированного ДНК-РК 82056 с количеством, определенным в образце кожи указанного пациента до введения эффективного количества ингибитора ТОК киназы. В одном варианте воплощения образец кожи облучали УФ-светом.

В некоторых вариантах воплощения, представленных в настоящей заявке, раскрыты способы ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности в образце кожи пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающие введение эффективного количества ингибитора ТОК киназы указанному пациенту и сравнение количества фосфорилированного ДНК-РК в биологическом образце пациента, полученном до и после введения указанного ингибитора ТОК киназы, где меньшее количество фосфорилированного ДНК-РК в указанном биологическом образце, полученном после введения указанного ингибитора ТОК киназы, по сравнению с количеством фосфорилированного ДНК-РК в указанном биологическом образце, полученном до введения указанного ингибитора ТОК киназы, указывает ингибирование.

В некоторых вариантах воплощения ингибитор ТОК киназы представляет собой соединение, описанное в настоящей заявке. В одном варианте воплощения ингибитор ТОК киназы представляет собой соединение 1 (ингибитор ТОК киназы, описанный в настоящей заявке, имеющий молекулярную формулу СкНкХхО). В одном варианте воплощения соединение 1 представляет собой 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н1,2,4-триазол-3 -ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-он.

Ингибитор ТОК киназы можно использовать в сочетании с лучевой терапией или хирургической операцией. В некоторых вариантах воплощения ингибитор ТОК киназы вводят пациенту, которого лечат лучевой терапией, которого ранее лечили лучевой терапией или которого будут лечить лучевой терапией. В некоторых вариантах воплощения ингибитор ТОК киназы вводят пациенту, которому уже была сделана хирургическая операция по удалению опухоли. Кроме того, в настоящей заявке представлены способы лечения пациентов, которых уже лечили по поводу сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, но которые являются нереспонсивными к стандартным терапиям, а также которых не лечили ранее. Кроме того, в настоящей заявке представлены способы лечения пациентов, которым уже была сделана хирургическая операция в попытке лечения рассматриваемого состояния, а также у которых не было операции. Поскольку пациенты со сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи могут иметь гетерогенные клинические проявления и различные клинические результаты, лечение, предоставляемое пациенту, может варьироваться в зависимости от его/ее прогноза. Опытный клиницист легко сможет определить без излишнего экспериментирования специфические вторичные средства, типы хирургической операции и типы нелекарственной стандартной терапии, которые можно эффективно использовать для лечения конкретного пациента со сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

- 6 028414

В одном варианте воплощения сквамозно-клеточная карцинома головы и шеи представляет собой такую, в которой активируется Р13К/тТОК путь. В некоторых вариантах воплощения сквамозноклеточная карцинома головы и шеи представляет собой такую, в которой Р13К/тТОК путь активируется из-за потери ΡΤΕΝ, Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии БОРК или комбинации этих факторов.

Фармацевтические композиции и пути введения.

В настоящей заявке представлены композиции, включающие эффективное количество ингибитора ТОК киназы, и композиции, включающие эффективное количество ингибитора ТОК киназы и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции, описанные в настоящей заявке, являются подходящими для перорального, парентерального, мукозального, чрескожного или местного введения.

Ингибиторы ТОК киназы можно вводить пациенту перорально или парентерально в традиционной форме препаратов, такой как капсулы, микрокапсулы, таблетки, гранулы, порошок, драже, пилюли, суппозитории, инъекции, суспензии и сиропы. Подходящие композиции можно получить обычно используемыми способами с использованием традиционных органических или неорганических добавок, таких как эксципиент (например, сахароза, крахмал, маннит, сорбит, лактоза, глюкоза, целлюлоза, тальк, фосфат кальция или карбонат кальция), связующее (например, целлюлоза, метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, полипропилпирролидон, поливинилпирролидон, желатин, аравийская камедь, полиэтиленгликоль, сахароза или крахмал), разрыхлитель (например, крахмал, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилкрахмал, низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза, бикарбонат натрия, фосфат кальция или цитрат кальция), смазывающее вещество (например, стеарат магния, светлая безводная кремневая кислота, тальк или лаурилсульфат натрия), отдушка (например, лимонная кислота, ментол, глицин или апельсиновый порошок), консервант (например, бензоат натрия, бисульфит натрия, метилпарабен или пропилпарабен), стабилизатор (например, лимонная кислота, цитрат натрия или уксусная кислота), суспендирующее вещество (например, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон или стеарат алюминия), диспергирующее вещество (например, гидроксипропилметилцеллюлоза), разбавитель (например, вода) и воск для основы (например, масло какао, вазелин или полиэтиленгликоль). Эффективное количество ингибитора ТОК киназы в фармацевтической композиции может находиться на уровне, который даст желаемый эффект; например от около 0,005 мг/кг массы тела пациента до около 10 мг/кг массы тела пациента в стандартной дозе как для перорального, так и для парентерального введения.

Доза ингибитора ТОК киназы, которую можно вводить пациенту, варьируется в достаточно широких пределах, и ее может определить лечащий врач. Как правило, ингибиторы ТОК киназы можно вводить от одного до четырех раз в день при дозе от около 0,005 мг/кг массы тела пациента до около 10 мг/кг массы тела пациента, но указанная выше доза может соответственно варьировать в зависимости от возраста, массы тела и медицинского состояния пациента и типа введения. В одном варианте воплощения доза составляет от около 0,01 мг/кг массы тела пациента до около 5 мг/кг массы тела пациента, от около 0,05 мг/кг массы тела пациента до около 1 мг/кг массы тела пациента, от около 0,1 мг/кг массы тела пациента до около 0,75 мг/кг массы тела пациента, от около 0,25 мг/кг массы тела пациента до около 0,5 мг/кг массы тела пациента или от около 0,007 мг/кг массы тела пациента до около 1,7 мг/кг массы тела пациента. В одном варианте воплощения вводят одну дозу в день. В другом варианте воплощения вводят две дозы в день. В любом конкретном случае вводимое количество ингибитора ТОК киназы будет зависеть от таких факторов, как растворимость активного компонента, используемая композиция и путь введения.

В другом варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы лечения или профилактики сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающие введение от около 0,375 до около 750 мг/день, от около 0,75 до около 375 мг/день, от около 3,75 до около 75 мг/день, от около 7,5 до около 55 мг/день, от около 18 до около 37 мг/день, от около 0,5 до около 60 мг/день или от около 0,5 до около 128 мг/день ингибитора ТОК киназы пациенту, нуждающемуся в этом. В другом варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты способы лечения или профилактики сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающие введение от около 0,5 до около 1200 мг/день, от около 10 до около 1200 мг/день, от около 100 до около 1200 мг/день, от около 400 до около 1200 мг/день, от около 600 до около 1200 мг/день, от около 400 до около 800 мг/день или от около 600 до около 800 мг/день ингибитора ТОК киназы пациенту, нуждающемуся в этом. В конкретном варианте воплощения способы, раскрытые в настоящей заявке, включают введение 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 20, 25, 30, 45, 60, 90, 120 или 128 мг/день ингибитора ТОК киназы пациенту, нуждающемуся в этом.

В другом варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты стандартные лекарственные формы, которые включают от около 0,1 до около 2000 мг, от около 1 до 200 мг, от около 35 до около 1400 мг, от около 125 до около 1000 мг, от около 250 до около 1000 мг или от около 500 до около 1000 мг ингибитора ТОК киназы.

В конкретном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты стандартные лекарственные формы, включающие около 0,1, 0,25, 0,5, 1, 5, 7,5, 10, 15, 20, 30, 45, 50, 60, 75, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 400, 600 или 800 мг ингибитора ТОК киназы.

В другом варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты стандартные лекар- 7 028414 ственные формы, которые включают 0,1, 0,25, 0,5, 1, 2,5, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 50, 70, 100, 125, 140, 175, 200, 250, 280, 350, 500, 560, 700, 750, 1000 или 1400 мг ингибитора ТОК киназы. В конкретном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты стандартные лекарственные формы, которые включают 5, 7,5, 10, 15, 20, 30, 45 или 60 мг ингибитора ТОК киназы. Ингибитор ТОК киназы можно вводить один, два, три, четыре или более раз в день.

Ингибитор ТОК киназы можно вводить перорально, учитывая удобство такого введения. В одном варианте воплощения при введении пероральным путем ингибитор ТОК киназы вводят с пищей и водой. В другом варианте воплощения ингибитор ТОК киназы диспергируют в воде или соке (например, яблочном соке или апельсиновом соке) и вводят перорально в виде суспензии. В другом варианте воплощения при введении пероральным путем ингибитор ТОК киназы вводят натощак.

Ингибитор ТОК киназы также можно вводить внутрикожным, внутримышечным, интраперитонеалным, чрескожным, внутривенным, подкожным, интраназальным, эпидуральным, сублингвальным, интрацеребральным, интравагинальным, чрескожным, ректальным, мукозальным путем, путем ингаляции или местным путем в уши, нос, глаза или кожу. Путь введения определяет лечащий врач, и он может зависеть частично от участка разития медицинского состояния.

В одном варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты капсулы, содержащие ингибитор ТОК киназы, без дополнительного носителя, эксципиента или наполнителя. В другом варианте воплощения, представленном в настоящей заявке, раскрыты композиции, включающие эффективное количество ингибитора ТОК киназы и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель, где фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель может включать эксципиент, разбавитель или их смесь. В одном варианте воплощения композиция представляет собой фармацевтическую композицию.

Композиции могут быть в форме таблеток, жевательных таблеток, капсул, растворов, парентеральных растворов, драже, суппозиториев и суспензий и т.п. Композиции могут быть сформулированы таким образом, чтобы они содержали суточную дозу или удобную часть суточной дозы в стандартной дозе, которая может представлять собой одну таблетку или капсулу или удобный объем жидкости. В одном варианте воплощения растворы получают из водорастворимых солей, таких как гидрохлоридная соль. Как правило, все композиции получают в соответствии со способами, известными в фармацевтической химии. Капсулы можно получить путем смешивания ингибитора ТОК киназы с подходящим носителем или разбавителем и заполнения капсул подходящим количеством смеси. Обычные носители и разбавители включают, но не ограничиваются этим, инертные порошкообразные вещества, такие как крахмал различных видов, порошкообразная целлюлоза, особенно кристаллическая и микрокристаллическая целлюлоза, сахара, такие как фруктоза, маннит и сахароза, мука из зерновых культур и подобные пищевые порошки.

Таблетки можно получить путем прямого прессования, способом мокрого гранулирования или сухого гранулирования. Их композиции обычно включают разбавители, связующие, смазывающие вещества и разрыхлители, а также соединение. Типичные разбавители включают, например, различные типы крахмала, лактозу, маннит, каолин, фосфат или сульфат кальция, неорганические соли, такие как хлорид натрия, и порошкообразный сахар. Порошкообразные производные целлюлозы также являются полезными. В одном варианте воплощения фармацевтическая композиция не содержит лактозу. Типичные связующие для таблеток представляют собой вещества, такие как крахмал, желатин и сахара, такие как лактоза, фруктоза, глюкоза, и подобные. Природные и синтетические камеди также являются подходящими, включая аравийскую камедь, альгинаты, метилцеллюлозу, поливинилпирролидин и подобные.

Полиэтиленгликоль, этилцеллюлоза и воски также могут служить в качестве связующих.

Смазывающее вещество может быть необходимым в композиции таблеток для предотвращения прилипания в пресс-форме таблеток и штампов. Смазывающее вещество можно выбрать из таких скользких твердых веществ, как тальк, стеарат магния и кальция, стеариновая кислота и гидрированные растительные масла. Разрыхлители для таблеток представляют собой вещества, которые набухают при смачивании, с разрушением таблетки и высвобождением соединения. Они включают крахмалы, глины, целлюлозы, альгины и камеди. Более конкретно, можно использовать, например, кукурузный и картофельный крахмалы, метилцеллюлозу, агар, бентонит, древесную целлюлозу, порошкообразную натуральную губку, катионообменные смолы, альгиновую кислоту, гуаровую камедь, мякоть цитрусовых и карбоксиметилцеллюлозу, а также лаурилсульфат натрия. На таблетки может быть нанесено покрытие из сахара в качестве отдушки и уплотнителя или из пленкообразующих защитных веществ для модификации свойств растворения таблетки. Композиции также могут быть сформулированы в виде жевательных таблеток, например, с использованием веществ, таких как манит, в композиции. Когда желательно введение ингибитора ТОК киназы в виде суппозитория, можно использовать типичные основы. Масло какао представляет собой традиционную основу для суппозиториев, которая может быть модифицирована путем добавления восков для некоторого повышения температуры плавления. Широко используются смешиваемые с водой основы для суппозиториев, включающие, в частности, полиэтиленгликоли с различными молекулярными массами. Действие ингибитора ТОК киназы можно сделать замедленным или пролонгированным с использованием подходящей композиции. Например, можно получить медленно рас- 8 028414 творимую гранулу ингибитора ТОК киназы и включить в таблетку или капсулу или использовать имплантируемое устройство медленного высвобождения. Способ также включает получение гранул с несколькими разными скоростями растворения и заполнение капсул смесью таких гранул. Таблетки или капсулы могут иметь пленочное покрытие, которое препятствует растворению в течение предсказуемого периода времени. Даже парентеральные препараты можно сделать долгодействующими путем растворения или суспендирования ингибитора ТОК киназы в масляных или эмульгированных носителях, которые обеспечивают возможность медленного диспергирования в сыворотке.

Наборы.

В некоторых вариантах воплощения, представленных в настоящей заявке, раскрыты наборы, включающие ингибитор ТОК киназы. В других вариантах воплощения в настоящей заявке представлены наборы, включающие ингибитор ТОК киназы и средства для мониторинга ответа пациента на введение указанного ингибитора ТОК киназы. В некоторых вариантах воплощения пациент страдает сквамозноклеточной карциномой головы и шеи. В конкретных вариантах воплощения ответ пациента, который измеряют, представляют собой ингибирование прогрессирования заболевания, ингибирование роста опухоли, уменьшение первичной и/или вторичной опухоли(опухолей), облегчение связанных с опухолью симптомов, улучшение качества жизни, замедление образования первичных и/или вторичных опухолей, замедленное развитие первичных и/или вторичных опухолей, уменьшенное возникновение первичных и/или вторичных опухолей, замедление развития или уменьшение тяжести вторичных эффектов заболевания, остановку опухолевого роста или регрессию опухоли.

В других вариантах воплощения в настоящей заявке представлены наборы, включающие ингибитор ТОК киназы и средства для количественного определения ингибирования фосфорилирования 86КР, 4ЕВР1 и/или АКТ у пациента. В некоторых вариантах воплощения наборы включают средства для количественного определения ингибирования фосфорилирования 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в кровотоке или опухолевых клетках и/или биопсиях кожи или опухолевых биопсиях/аспиратах пациента. В некоторых вариантах воплощения в настоящей заявке представлены наборы, включающие ингибитор ТОК киназы и средства для количественного определения ингибирования фосфорилирования, которое оценивают путем сравнения количества фосфо- 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ до, в процессе и/или после введения ингибитора ТОК киназы. В некоторых вариантах воплощения пациент страдает сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

В других вариантах воплощения в настоящей заявке представлены наборы, включающие ингибитор ТОК киназы и средства для количественного определения ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности у пациента. В некоторых вариантах воплощения наборы включают средства для количественного определения ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности в образце кожи и/или биопсии опухоли/аспирате пациента. В одном варианте воплощения наборы включают средства для количественного определения пДНК-РК 82056 в образце кожи и/или биопсии опухоли/аспирате пациента. В одном варианте воплощения образец кожи облучают УФ-светом. В некоторых вариантах воплощения в настоящей заявке представлены наборы, включающие ингибитор ТОК киназы и средства для количественного определения ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности до, в процессе и/или после введения ингибитора ТОК киназы. В некоторых вариантах воплощения в настоящей заявке представлены наборы, включающие ингибитор ТОК киназы и средства для количественного определения фосфорилированного ДНК-РК 82056 до, в процессе и/или после введения ингибитора ТОК киназы. В некоторых вариантах воплощения пациент страдает сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

В некоторых вариантах воплощения наборы, представленные в настоящей заявке, включают количество ингибитора ТОК киназы, эффективное для лечения или профилактики сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи. В некоторых вариантах воплощения наборы, представленные в настоящей заявке, включают ингибитор ТОК киназы, имеющий молекулярную формулу С₁₆Н₁₆М₈О. В некоторых вариантах воплощения наборы, представленные в настоящей заявке, включают соединение 1.

В некоторых вариантах воплощения наборы, представленные в настоящей заявке, дополнительно включают инструкции по применению, например, касающиеся введения ингибитора ТОК киназы и/или отслеживания ответа пациента на введение ингибитора ТОК киназы.

Примеры

Биологические примеры.

Биохимические анализы. тТОК НТК-РКЕТ анализ.

Далее представлен пример анализа, который можно использовать для определения ингибиторной активности испытываемого соединения относительно ТОК киназы. Ингибиторы ТОК киназы растворяли в ИМ8О и подготавливали в виде 10 мМ исходных растворов и разбавляли подходящим образом для экспериментов.

Реагенты были получены следующим образом.

Простой ТОК буфер (использовали для разбавления глицериновой фракции с высоким содержанием ТОК): 10 мМ Тп< рН 7,4, 100 мМ ЫаС1, 0,1% Т^ееи-20, 1 мМ ОТТ. Тиуйтодеи тТОК (еа!#РУ4753)

- 9 028414 разбавляли в этом буфере до используемой в анализе концентрации 0,200 мкг/мл.

Раствор АТР/субстрата: 0,075 мМ АТР, 12,5 мМ МпС1₂, 50 мМ Нерек, рН 7,4, 50 мМ (β-ΟΘΡ, 250 нМ микроцистина ЬК, 0,25 мМ ЕЭТА, 5 мМ ЭТТ и 3,5 мкг/мл О8Т-р7086.

Раствор реагента для детекции: 50 мМ ΗΕΡΕ8, рН 7,4, 0,01% Ττίΐοη Х-100, 0,01% Β8Α, 0,1 мМ ЕЭТА, 12,7 мкг/мл Су5-аО8Т Атеткйат (Са1#РА92002У), 9 нг/мл а-фосфор7086 (Тйт389) (Се11 81дпа1ш§ мышиное моноклональное #9206Ь), 627 нг/мл α-мышиного Ьапсе Ей (Реткш Е1тег Са1#АЭ0077).

К 20 мкл простого тТог буфера добавляли 0,5 мкл испытываемого соединения в ЭМ8О. Для инициирования реакции 5 мкл раствора АТР/субстрата добавляли к 20 мкл раствора простого ТОК буфера (контроль) и к раствору соединения, полученому как указано выше. Анализ останавливали через 60 мин путем добавления 5 мкл 60 мМ ЕЭТА раствора; затем добавляли 10 мкл раствора реагента для детекции, и смеси давали отстояться в течение по меньшей мере 2 ч перед считыванием на считывающем устройстве для микропланшетов Реткш-Е1тег Εηνίδίοη Мютор1а1е Кеабег, установленном на детекцию ЬАНСЕ Ей ТК-РКЕТ (возбуждение при 320 нм и эмиссия при 495/520 нм).

Ингибиторы ТОК киназы испытывали в тТог НТК-РКЕТ анализе, и было обнаружено, что они обладают активностью в этом анализе, при этом некоторые соединения имели значение ИК₅₀ ниже 10 мкМ в этом анализе, некоторые соединения имели значение ИК₅₀ в пределах от 0,005 до 250 нМ, другие имели значение ИК₅₀ в пределах от 250 до 500 нМ, другие имели значение ИК₅₀ в пределах от 500 нМ до 1 мкМ, а некоторые другие имели значение ИК₅₀ в пределах от 1 до 10 мкМ.

ДНК-РК анализ.

ДНК-РК анализы осуществляли с использованием процедур, представленных в наборе для анализа Рготеда ДНК-РК (са!а1од # У7870). ДНК-РК фермент закупали у компании Рготеда (Рготеда са!#У5811).

Выбранные ингибиторы ТОК киназы, описанные в настоящей заявке, имели или согласно ожиданиям должны были иметь значение ИК50 ниже чем 10 мкМ в этом анализе, при этом некоторые ингибиторы ТОК киназы, описанные в настоящей заявке, имели значение ИК50 ниже чем 1 мкМ, а другие имели значение ИК₅₀ ниже чем 0,10 мкМ.

Клеточные анализы.

Анализ ингибирования роста клеточных линий рака головы и шеи (ΗΝ).

Соединение 1 (ингибитор ТОК киназы, описанный в настоящей заявке, имеющий молекулярную формулу С’иНкНхО) растворяли в диметилсульфоксиде (ЭМ8О) для получения 10 мМ исходного раствора. Осуществляли серийное титрование для получения рабочей концентрации в пределах от 1,5 мкМ до 10 мМ. Аликвоты для получения конечной концентрации 1,5 нМ-10 мкМ вносили разбрызгиванием через акустический дозатор (ЕЭС АТ8-100) в пустой 384-луночный планшет. Соединение 1 добавляли в планшет в виде 10-точечного серийного разведения (3-кратное разведение) в двух повторах. ЭМ8О концентрацию поддерживали на постоянном уровне для конечной используемой в анализе концентрации 0,1% ЭМ8О. Получали несколько копий планшетов для использования разных клеточных линий и периодов испытания. После получения нескольких содержащих соединение планшетов все планшеты герметично закрывали (АдИеп! ТйеттоЬос) и хранили при -20°С вплоть до 1 месяца. Повторное испытание соединения 1 в контрольной клеточной линии (А549) показало постоянные значения ΟΙ ₅₀ и ИК₅₀ независимо от порядка дублирования планшетов или времени хранения при -20°С, и это говорит о том, что соединение 1 является подходящим в используемых условиях хранения для данного испытания в течение по меньшей мере 1 месяца. Когда планшеты были готовы для испытания, их извлекали из морозильника, оттаивали и открывали непосредственно перед добавлением испытываемых клеток. Перед испытанием клетки выращивали и увеличивали в объеме в колбах для культивирования для получения достаточных количеств исходного вещества. Клетки затем разбавляли до подходящих плотностей и добавляли непосредственно в содержащие соединение 384-луночные планшеты. Клеткам давали расти в течение 72 ч при 37°С/5% СО₂. В момент добавления соединения (!₀) исходное количество клеток оценивали с использованием анализа жизнеспособности (Се11 Тйет-О1о) путем количественного определения уровня люминесценции, генерируемой АТР, присутствующим в жизнеспособных клетках. Через 72 ч жизнеспособность обработанных соединением клеток оценивали при помощи Се11 Тйет-О1о и измерения люминесценции. Клеточные линии анализировали на ингибирование роста соединением 1 по меньшей мере в 3 независимых испытаниях. Контрольную клеточную линию (клеточная линия опухоли легкого, А549) включали в каждый анализ. Вызванный соединением ответ против этой контрольной клеточной линии внимательно отслеживали для обеспечения возможности сравнения данных, полученных в период осуществления анализа. Все данные были нормализованы и представлены в виде процента от ЭМ8Ообработанных клеток. Результаты затем выражали в виде ΟΙ 50 значения. ΟΙ 50 значение вводит поправку на подсчет клеток на время ноль. Кроме того, рассчитывали ИК50 значение соединения 1 для каждой клеточной линии. Результаты для соединения 1 для выбранных ΗΝ клеточных линий представлены в табл. 1.

- 10 028414

Таблица 1

ныс клеточные линии	η	6Ϊ50 (мкМ)	είδο 3ϋ	ει5ο 3ΕΜ	ИК50 (μκΜ)	ΠΚδο 3ϋ	ИКао 3ΕΜ	η	Са1 X
А253	3	0,3028	0, 056	0,0323	0,3779	0,0925	0,0534	1	10
ΒΗΥ	2	0,0395	0,0135	0,0096	0,2104	0,0736	0,0521	1	10
САЬ-27	3	0,1442	0,0367	0,0212	0,1768	0,057	0,0329	1	10
САЬ-33	3	0,0427	0,0041	0,0024	0,0698	0,0089	0,0051	1	0,8764
ОеЬго1Ь562	3	0,1691	0,0506	0,0292	0,2539	0,0477	0,0275	1	10
ΕΑϋυ	3	0,7925	0,0893	0,0516	1,162	0,0219	0,0127	1	10
ΗΝ	3	0,1166	0,0156	0, 009	0,1777	0,0183	0,0106	1	10
ΕΡΜΙ- 2650	3	0,2187	0,0615	0,0355	0,3888	0,0841	0,0486	1	10
ЗСС-15	3	0,0568	0,0147	0,0085	0,6792	0,2094	0,1209	1	10
ЗСС-25	3	0,1271	0,0419	0,0242	0,1788	0,044	0,0254	1	10
ЗСС-9	3	0,1292	0,06	0,0346	0,3625	0,0936	0, 054	1	10

- стандартное отклонение,

8ЕМ - стандартная ошибка средней.

Анализ апоптоза для ΗΝ раковой клеточной линии.

Перед испытанием клетки выращивали и увеличивали в объеме в колбах для культивирования для получения достаточных количеств исходного вещества. Клетки затем разбавляли до подходящих плотностей и добавляли непосредственно в содержащие соединение 384-луночные планшеты. Клеткам давали расти в течение 24 ч в 5% СО₂ при 37°С. Апоптический ответ оценивали путем количественного определения активностей каспазы 3 и каспазы 7 (Каспаза 3/7-О1о) в обработанных клетках и контрольных клетках в точке времени 24 ч. Все данные были нормализованы и представлены в виде значения относительно ЭМ8О-обработанных клеток. Результаты затем выражали в виде Са1Х, что означает минимальную концентрацию соединения, необходимую для удвоения уровней каспазы 3/7 по сравнению с ЭМ8Ообработанными клетками в течение периода обработки.

Результаты для соединения 1 для индукции апоптоза в выбранных ΗΝ раковых клеточных линиях представлены в табл. 2.

Таблица 2

ΗΝΟ клеточная линия	η	Са1Х μκΜ
Α253	1	>10
ΒΗΥ	1	>10
САЬ-27	1	>10
САЬ-33	1	0,8764
ЬеЬго1Ь562	1	>10
ЕАЫЗ	1	>10
ΗΝ	1	>10
ΚΡΜΙ-2650	1	>10
ЗСС-15	1	>10
ЗСС-25	1	>10
ЗСС-9	1	>10

Анализ пролиферации и апоптоза с использованием опухолевых клеток пациента. Криоконсервированные выделенные у пациента опухолевые клетки восстанавливали из хранения в жидком азоте и кондиционировали на покрытых планшетах до обработки лекарственным средством. Антипролиферативный потенциал соединения оценивали путем добавления 3-кратных разведений соединения, например соединения 1, от исходной концентрации (30 мкМ). Митотическую активность клеток оценивали путем измерения включения этинилдиоксиуридина (Е4И) в ходе 8-фазы. В необработанные контрольные лунки добавляли среду, содержащую ЭМ8О (носитель, используемый для растворения каждого соединения и Е4И). Потенциальную активацию апоптоза соединением анализировали путем добавления 10-кратных разведений от исходной концентрации соединения (например, соединения 1) при 10 мкМ. Апоптическую активность клеток оценивали путем измерения СеПЕуеп! включения в результате активации каспазы 3 и 7. В необработанные контрольные лунки добавляли среду, содержащую ЭМ8О (носитель, используемый для растворения каждого соединения и Се11Еуеп1). После кондиционирования клеточные линии высевали на 3Ώ матрицу в двух 96-луночных планшетах. Клеткам давали отстояться и образовать сфероидальные структуры в течение 48 ч. Затем через 48 ч после высевания клетки обрабатывали соединением.

Анализ пролиферации.

- 11 028414

Клетки обрабатывали только в день 1. В течение последних 48 ч обработки добавляли Еби для измерения клеточной пролиферации. После завершения обработки планшеты фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали для поглощения Еби (маркер пролиферации) и ΏΑΡΙ (ядерный маркер). Планшеты оценивали методом визуализации при 4х увеличении с использованием 1та§еХрг姧 Μϊογο (Мо1еси1аг Πβνίοβδ, 8иппууа1е, СА). Отбирали по семь ζ-стеков на 5 участках в каждой лунке и обрабатывали методом деконволюции для получения изображений для анализа. Для анализа пролиферации изображения анализировали с использованием алгоритма Ми1б Ша\е 8сопп§ А1§огбЕт (Мо1еси1аг Ре\1се8, 8иппу\а1е, СА) для количественного определения средних интенсивностей флуоресценции (ΜΡΙ) каждой лунки для Еби. Еби ΜΡΙ'δ для обработанных лунок нормализовали к значениям, полученным от необработанных лунок, для построения кривых ответа на соединение. Как показано в табл. 3, соединение 1 показало ингибирование пролиферации опухолевых клеток пациента со значениями ИК₅₀ в пределах от ~100 до 1800 нМ.

Анализ апоптоза.

Клетки обрабатывали только в день 1. После 48 ч обработки соединением добавляли Се11Е\еп! для измерения апоптической активности в клетках. После 1 ч инкубации с Се11Е\еп! клетки окрашивали при помощи НоесРз! (ядерное окрашивание) в течение 15 мин. Планшеты оценивали методом визуализации при 4х увеличении с использованием 1та§еХрге88 Мгого (Мо1еси1аг Ре\1се8, 8иппу\а1е, СА). Отбирали по семь ζ-стеков на 3 участках в каждой лунке и обрабатывали методом деконволюции для получения изображений для анализа. Для анализа апоптоза изображения анализировали с использованием алгоритма МиШ Ша\е 8согт§ А1§огбРт (Мо1еси1аг Ре\1се8, 8иппу\а1е, СА) для количественного определения средних интенсивностей флуоресценции (ΜΡΙ) каждой лунки для активированной каспазы 3 и 7 с использованием Се11Е\епЕ Полученные Се11Е\еп! средние интенсивности флуоресценции (ΜΡΙ) обработанных лунок и необработанных контролей усредняли и наносили на график. Апоптоз наблюдили в некоторых полученных у пациента образцах, обработанных соединением 1 при концентрации в пределах 0,1-10 мкМ.

Таблица 3

Возраст/пол	Клинический диагноз	Участок взятия образца	Пролиф. ИК50 (нМ)
71 год, муж.	Сквамозноклеточн. языка	правый подмышечный лимфатический узел	317,9
77 лет, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	правая плевральная биопсия	441,1
неизвестно	Не определен	левый небный	546, 9
60 лет, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	левый шейный лимфатический узел	498,9
67 лет, муж.	Η&Ν карцинома	легкое	341,9
70 лет, муж.	Η&Ν карцинома	левый верхний сегмент	260, 0
54 года, муж.	Сквамозноклеточн. карцинома Η&Ν	Правый назальный	240,5
54 года, жен.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Цервикальный лимфатический узел	145, 7
45 лет, жен.	Язык	Левая шейная масса	376, 8
54 года, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Масса, эксцизия основания черепа	157,2
44 года, жен.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	левый шейный, цервикальный	428,7

- 12 028414

74 года, жен.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Правая нижняя доля легкого	322,2
56 лет, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Правая нижняя доля легкого	139, 3
51 год, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	шея	1717,0
44 года, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Левая грудная стенка	156, 6
63 года, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Плевральная жидкость	536, 4
53 года, муж.	Карцинома гортани	Левая часть шеи	103,4
36 лет, жен.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	Масса, левая широкая спинная мышца	115, 4
43 года, муж.	Сквамозноклеточн. Η&Ν	левая небная миндалина	161,9

Ιη νίνο Анализы.

Анализы с использованием ксенотрансплантата осуществляли с использованием разных мышей со сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи (НЫ8СС). 8СГО или голых мышей инокулировали путем подкожного введения НЫ8СС клеток (например, РаИи, Са1-33, Са1-27) сбоку выше правой задней лапы. После инокуляции животных опухолям давали вырасти до около 150-200 мм³ до рандомизации. Соединение 1 было сформулировано в 0,5% СМС и 0,25% Тмееп 80 в воде (в виде суспензии). Животным перорально вводили носитель (СМС-Тмееп) или соединение 1 раз в день (фО) в течение 26-40 дней. Дозы соединения 1 находились в пределах от 1 до 5 мг/кг. Опухоли измеряли два раза в неделю с использованием циркулей, и объемы опухол рассчитывали с использованием формулы А²х1./2 (где представляет собой ширину опухоли, и Ь представляет собой длину опухоли).

Клиническое испытание.

Фаза 1А/1В, многоцентровое с открытой меткой дозоопределяющее испытание для определения безопасности, переносимости, фармакокинетических свойств и предварительной эффективности соединения 1, вводимого перорально субъектам со сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.

Соединение 1 следует вводить перорально субъектам со сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи. Безопасность и переносимость соединения 1 у людей, а также эффективность будут оценивать в этом испытании. Испытание проводят в двух частях: увеличение дозы (часть А) и расширение дозы (часть В). Субъекты будут зачисляться в испытание последовательно в части А. Зачисление в испытание в части В будет осуществляться в соответствии с типом опухоли.

Соединение 1 следует использовать в трех концентрациях (0,25, 1,0 и 5,0 мг) в виде желатиновых капсул, содержащих только активный фармацевтический ингредиент. Капсулы должны быть упакованы в бутыли из полиэтилена высокой плотности (НИРЕ), снабженные индукционными уплотнениями и полипропиленовыми крышками, чтобы дети не имели доступ к препарату. Проводящий исследования фармацевт сможет открыть и отмерить подходящим образом дозу для каждого субъекта.

От 30 до 60 субъектов зачисляют в испытание в часть А, предназначенную для установления исходной токсичности. Часть В должна включать приблизительно 100 субъектов с предварительно определенными типами опухолей, включая сквамозно-клеточную карциному головы и шеи, для дополнительной оценки профиля безопасности соединения 1 и обеспечения данных по эффективности. Ответ опухоли оценивают по типу опухоли и уровню доз. Участников испытания в части В будут определять по эффективности, наблюдаемой в части А, и по данным, осуществляемым в данный период предклинических испытаний.

Общий план исследования включает циклы периода скрининга (день 28 по день 1), периода лечения и оценки (28 дней (Д) (каждый день) и/или ΒΙΏ (два раза в день)) до прогрессирования опухоли, неприемлемой токсичности или решения субъекта/лечащего врача прекратить введение соединения 1), и период завершения лечения и отслеживания результатов (завершение лечебных процедур в течение 21 дня от последней дозы; отслеживание в течение 28 дней после последней дозы для окончательной оценки безопасности). Субъектам начинают вводить соединение 1 (Д) или ΒΙΏ (или используют другую подходящую схему введения) в день 1 цикла 1, и они будут принимать ежедневное лечение в 28-дневных циклах. Можно прекратить введение соединения 1, когда есть подтверждения прогрессирования опухоли, но субъекты могут продолжать принимать испытываемое лекарственное средство до тех пор, пока исследователь не сочтет, что они получают пользу. Введение соединения 1 прекращают, когда наблюдается неприемлемая токсичность или когда субъект решает выйти из испытания.

- 13 028414

Соединение 1 вводят перорально либо один раз, либо два раза в день (или используют другую подходящую схему введения) без перерыва между циклами. Каждую РР дозу принимают утром по меньшей мере с 200 мл воды, при этом субъект должен голодать в течение ночи (минимум 6 ч). Принятие пищи должно быть отложено по меньшей мере на 90 мин после введения в те дни, когда соединение 1 принимают дома. В дни посещения клиники утреннюю дозу соединения 1 можно вводить в клинике после завершения любых преддозовых испытаний. Пищу можно принимать после того, как взяты все пробы натощак, но ни в коем случае не раньше чем через 90 мин после введения средства (3 ч после введения в день 15). Для субъектов, принимающих соединение 1 РР, когда есть проблемы, связанные с ΟΙ симптомами, слабость или другие симптомы сохраняются после завершения цикла 1, введение дозы можно отложить на более позднее время дня, при условии, что субъект может поддерживать режим 3-часового перерыва между введением соединения 1 и последним приемом пищи и 90-минутного перерыва до следующего приема пищи. Соединение 1 можно принимать в более позднее время, вплоть до 12 ч позже, если эта отсрочка происходит в течение одного дня; в противном случае эту дозу следует пропустить.

Соединение 1 можно изначально вводить в режиме РР. Дозы можно вводить, постепенно их увеличивая, после получения удовлетворительных данных о безопасности более низкой дозы. Должно пройти минимум 28 дней после введения первой дозы последнему субъекту перед тем, как дозы можно увеличить. В каждой группе участие в испытании должно быть ступенчатым, так чтобы был промежуток минимум 24 ч между днем 1 цикла 1 для каждого субъекта, чтобы можно было определить исходную токсичность. Каждый цикл соединения 1 продолжается 28 дней, и нет никакого перерыва между циклами. Субъекты могут продолжать принимать соединение 1 до тех пор, пока они не получат пользу от лечения по мнению исследователя. Введение соединения 1 прекращают, когда есть признаки прогрессирования заболевания, неприемлемой токсичности или когда либо субъект, либо исследователь решают прекратить введение.

В части А группы субъектов должны изначально получать РР увеличивающиеся дозы соединения 1 для измерения РК и для определения ΜΤΡ. В части А 0,5 мг РР представляет собой исходную дозу соединения 2. Модифицированную схему ускоренного титрования (§1шои К., Ρτβίάΐίη В., РнЬиШеш Ь., с1 а1., Лссе1ега1е4 ΙίΙταΙίοη 4е81дп8 Гог Рйаке 1 οΙίηίοαΙ 1паЕ ίη опсо1оду, 1 ΝαΙ Сапе ΙηκΙίΙυΙο 1997; 89, (15): 11381147) можно использовать для установления исходной токсичности. В ходе ускоренной фазы исходные группы из одного субъекта будут получать соединение 1 с приращением доз 100% до первого случая первого цикла степени 2 или большей токсичности, предположительно связанной с лекарственным средством, в этот момент ускоренную фазу останавливают, и эту конкретную группу расширяют в целом до 6 субъектов. Затем начинают введение по стандартной схеме увеличения доз с приблизительным приращением доз 50% и с числом участников 6 субъектов на группу для определения ΝΤΡ и ΜΤΡ. Более низкие приращения и дополнительные субъекты в получающей дозу группе также могут быть оценены, если это необходимо, на основании токсичности, РК/РР результатов или биопсии опухоли. На основании предварительных РК и РР результатов от групп введения начальной дозы схему введения два раза в день (ВГО) также оценивают в части А. Это можно начинать в группах из 6 субъектов при общем уровне суточной дозы, который уже был показан как переносимый, или ниже этого уровня, но с разделением на две равные дозы, вводимые приблизительно с промежутком 12 ч.

После этого увеличение дозы для РР и ВГО групп введения может происходить независимо. Прерывистые схемы введения дозы сопоставимой или более низкой интенсивности по сравнению с непрерывным ежедневным введением также могут рассматриваться для оценки.

Доза считается непереносимой, когда 2 или более из 6 оцениваемых субъектов в группе введения испытывают РЬТ в ходе цикла 1. Когда определяют ΝΤΡ, увеличение дозы останавливают. ΜΤΡ определяют как последнюю испытанную дозу ниже ΝΤΡ, когда 0 или 1 из 6 оцениваемых субъектов в группе введения испытывают ΡΕΤ в ходе цикла 1. Может возникнуть необходимость использования промежуточной дозы (т.е. доза между ΝΤΡ и уровнем последней дозы перед ΝΤΡ) или включения дополнительных субъектов в любую группу введения для более точного определения ΜΤΡ, также можно чередовать схемы, если получаемые РК-РР результаты показывают, что это может быть подходящим.

В части В можно начинать введение субъектам соединения 1 по РР или ВГО схеме при ΜΤΡ и/или более низких уровнях доз, определенных на основании безопасности, РК и РР данных, полученных в части А испытания. В части В будут оценивать приблизительно 100 субъектов на безопасность и противоопухолевую активность после каждых двух циклов терапии.

Все субъекты, которые получают по меньшей мере одну дозу соединения 1, подходят для оценки безопасности. В части А субъекта, у которого оценивают дозоограничивающую токсичность (ΡΕΤ), определяют как субъекта, который в первые 28 дней после цикла 1 введения начинал либо (а) получал по меньшей мере 21 из запланированных 28 доз соединения 1 при определенной для данной группы дозе и имеет достаточно данных для оценки безопасности при помощи §КС, либо (Ь) испытывает связанную с испытываемым лекарственным средством ΡΕΤ. Субъектов, оценку которых невозможно осуществить, следует заменить в группе введения. В части В субъекта, у которого оценивают ответ опухоли для оценки эффективности, определяют как субъекта, который получал по меньшей мере один цикл соединения 1 и имеет оценку эффективности на базовой линии и по меньшей мере одну после базовой линии.

- 14 028414

В частях А и В уменьшение доз допускается в любом цикле, включая цикл 1. Уменьшения доз, которые имеют место в цикле 1 в части А, будут составлять ЭЬТ, но субъектам можно дать возможность продолжить испытание лекарственного средства при уменьшенной дозе. Ναΐίοηαΐ Сапсег ПъШШс Соттоп Тегш1по1о§у СгПепа Гог Абуете ЕуепЦ (Νί'.Ί СТСАЕ) Уегаоп 4, 2009 следует использовать для классификации ΆΕδ.

Когда показано уменьшение дозы, следует выбрать следующий более низкий уровень доз, вводимых по ΟΩ или ВГО схеме. Для уменьшения доз ВГО ниже исходной дозы 10 мг ВГО можно выбрать дозы 8 мг ВГО и 4 мг ВГО. Допускается два уменьшения доз. Дополнительные РК оценки можно осуществлять при модифицированном уровне дозы(доз) для характеризации РК профилей с изменяющимися дозами для конкретного субъекта.

В части А увеличение дозы для конкретного субъекта выше дозы, изначально предписанной субъекту, не допускается в цикле 1. Те субъекты, которые продолжают принимать соединение 1 после цикла 1 после одобрения посредством §КС могут увеличить уровень доз при условии, что альтернативный уровень доз, как было показано, является хорошо переносимым по меньшей мере одной группой других субъектов в этом испытании. В этих случаях возможно осуществление дополнительных РК оценок при более высоком уровне доз. В части В никакое увеличение дозы выше МТБ не допускается. Основными целями этого испытания фазы 1а/1Ь являются определение безопасности, переносимости, ΝΈΩ и МТЭ соединения 1 при введении перорально взрослым субъектам и определение РК характеристик перорального соединения 1. Вторичными целями являются определение степени ингибирования фосфорилирования §6КР и/или 4Е-ВР1 для шТОКС1 активности и АКТ и/или других соответствующих биомаркеров для тТОКС2 активности в крови, коже и/или опухолевых биопсиях/аспиратах и исследование противоопухолевой активности соединения 1 при выбранных уровнях доз/схемах введения для опухолевого типа. Дополнительными вторичными целями являются определение ингибирования ДНК-РК активности в образцах кожи, облученных УФ-светом, и/или опухолевых биопсиях/аспиратах с использованием рДНКРК §2056 и других соответствующих биомаркеров для путей ДНК повреждения до и в процессе лечения соединением 1.

Далее осуществляют статистические анализы путем исследования фазы, уровня доз, режима введения и группы, имеющей опухоль, если это необходимо или возможно.

Участники испытания определяются следующим образом: (а) участники испытания, имеющие намерение принимать лечение (1ТТ) - все субъекты, которые принимают по меньшей мере одну дозу соединения 1; (Ь) участники испытания для определения безопасности - все субъекты, которые принимают по меньшей мере одну дозу соединения 1, те же, что и 1ТТ участники для этого испытания; (с) участники испытания, у которых можно оценить эффективность (ЕЕ)- все 1ТТ субъекты, которые соответствуют критериям приемлемости, полностью прошли по меньшей мере один цикл приема соединения 1 и имеют оценку эффективности на базовой линии и по меньшей мере одну достоверную оценку эффективности после базовой линии.

Зачисление в испытание субъектов ограничивают, когда до 20 подходящих для оценки субъектов уже зачислено для каждого типа опухоли и уровня доз/схемы введения. В части В, в целом, размеры образцов выбирают не на основании статистического расчета, а скорее по клиническим эмпирическим и практическим соображениям, традиционным для фазы 1 испытания такого типа.

Все подходящие для оценки эффективности субъекты в части В должны быть включены для анализа эффективности. Эффективность анализируют по каждому типу опухоли сразу после того как все субъекты были отозваны из испытания или завершили 6 циклов испытания. Двухсторонние 35%-ные доверительные интервалы скорости ответа должны обеспечиваться опухолевым типом. Должно быть обеспечено описание каждого случая для всех субъектов, которые демонстрировали полный или частичный ответ в части А испытания. Описательный анализ других подтверждений противоопухолевой активности следует обеспечить на основании клинических, радиографических и биологических оценок эффективности.

Субъектов оценивают на эффективность в ходе циклов, обозначенных четными номерами. Основной переменной при оценке эффективности является скорость ответа. Ответ опухоли получают на основании КЕС1§Т 1.1. Другие дополнительные переменные при оценке эффективности, включая СТС оценки, суммируют с использованием частотных таблиц для категорийных переменных или описательной статистики для непрерывных переменных.

Для обеих частей увеличения дозы и расширения дозы этого протокола критерии включения являются следующими: (а) осмысление и добровольное подписание документа об информированном согласии до осуществления каких-либо связанных с испытанием оценок/процедур; (Ь) мужчины и женщины, 18 лет или старше, с гистологическим или цитологическим подтверждением сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи; (с) согласие на скрининговую биопсию опухоли; (б) ЕСОС Р§ 0 или 1; (е) следующие лабораторные показатели: (1) абсолютное число нейтрофилов (АЫС)>1,5х109/л; (2) гемоглобин (НдЬ)>9 г/дл; (3) тромбоциты (рИ)>100х109/л; (4) калий в пределах нормального или корректируемый при помощи добавок; (5) А§Т/§СОТ и АЬТ/§СРТ<2,5хверхний предел нормального (ϋΕΝ) или <5,0χυΕΝ, если присутствует опухоль печени; (6) общий сывороточный билирубин <1,5χυΕΝ; (7) сыво- 15 028414 роточный креатинин <1,5χυΕΝ или 24-ч клиренс >50 мл/мин; и (8) отрицательная проба сыворотки или мочи на беременность за 72 ч до начала испытания, включающего лечение женщин с потенциалом деторождения; и (£) способность соблюдать определенную для испытания схему посещений и другие требования протокола.

Для части расшинения дозы (часть В) этого протокола критерии включения являются следующими: (а) согласие субъекта на извлечение формалинфиксированной заключенной в парафин (РРРБ) архивированной опухолевой ткани, либо в образцах опухолевой блокады, либо секционированных/гистологических срезах; и (Ь) гистологически подтвержденная сквамозно-клеточная карцинома головы и шеи (локально развивающаяся, рецидивирующая или метастатическая сквамозно-клеточная карцинома головы и шеи, не поддающаяся лечению путем хирургической резекции; измеряемое заболевание в соответствии КБС18Т ν1.1; субъект должен уже пройти по меньшей мере одну из известных ранее химиотерапии на основе платины; группу можно увеличить, чтобы она включала минимум 5 субъектов с опухолью, показывающей чрезмерную экспрессию ДНК-РК; и согласие на двойную (скрининговую и в ходе лечения) биопсию опухоли).

Для обеих частей увеличения дозы и расширения дозы этого протокола критерии исключения являются следующими: (а) симптоматические метастазы в центральной нервной системе; (Ь) известный острый или хронический панкреатит; (с) любая периферическая невропатия >Νί'.Ί СТСАЕ стадии 2; (б) персистентная диарея или нарушение всасывания >Νί'.Ί СТСАЕ стадии 2, несмотря на медицинское лечение, нарушение способности проглатывания; (е) нарушение сердечной функции или клинически значимые сердечные заболевания; (£) сахарный диабет в стадии активного лечения; (д) другие сопутствующие тяжелые и/или неконтролируемые сопутствующие медицинские состояния (например, активная или неконтролируемая инфекция), которые могут вызвать риски неприемлемой безопасности или нарушить соответствие протоколу; (Ь) предшествующие системные нацеленные на рак лечения или проходящие клинические испытания способы терапевтического воздействия с периодами полужизни >5 или 4 недели, или короче, до начала испытания лекарственного средства, или субъекты, которые не восстановились от побочных эффектов такой терапии; (ί) серьезная хирургическая операция >2 недели до начала испытания лекарственного средства, или субъекты, которые не восстановились от побочных эффектов такого лечения; (]) беременность или кормление грудью; (к) взрослые субъекты репродуктивного потенциала, не использующие две формы предохранения; (1) известная ВИЧ-инфекция; (т) известный хронический вирусный гепатит В или С (НВУ/НСУ), если только это не присутствует совместно с НСС у субъектов; (п) любое серьезное медицинское состояние, аномальные лабораторные данные или психиатрическое заболевание, включая неспособность проглатывать капсулы, что может помешать субъектам участвовать в испытании; (о) любое состояние, включая аномальные лабораторные данные, что подвергает субъектов неприемлемому риску, если они будут участвовать в испытании; (р) любое состояние, которое препятствует интерпретации данных испытания; или (ц) сопутствующее второе злокачественное заболевание в активной стадии, по поводу которого субъект принимает лечение, за исключением не-меланоматозного рака кожи или карциномы шеи ίη 8Йи.

Для части расширения дозы (часть В) этого протокола критерии исключения являются следующими: предшествующее лечение средствами, нацеленными на оба тТОК комплекса (двойные ингибиторы ТОКС1+ТОКС2) и/или Р13К/АКТ пути. Однако предшествующее лечение отдельными ингибиторами ТОКС1 (например, рапалоги) допускается в обеих частях этого испытания.

В некоторых вариантах воплощения пациенты, участвующие в испытании согласно клиническому протоколу, представленному в настоящей заявке, обычно демонстрируют положительный ответ опухоли, такой как ингибирование роста опухоли или уменьшение размера опухоли. В некоторых вариантах воплощения у пациентов, следующих клиническому протоколу, представленному в настоящей заявке, обычно достигаются такие критерии оценки ответа в солидных опухолях (например, КБС18Т 1.1) как полный ответ, частичный ответ или стабильное заболевание, после введения эффективного количества соединения 1. В некоторых вариантах воплощения пациенты, следующие клиническому протоколу, представленному в настоящей заявке, обычно демонстрируют выживание без прогрессирования опухоли. В некоторых вариантах воплощения пациенты, следующие клиническому протоколу, представленному в настоящей заявке, обычно демонстрируют ингибирование прогрессирования заболевания, ингибирование роста опухоли, уменьшение первичной опухоли, облегчение связанных с опухолью симптомов, ингибирование опухоль-секретируемых факторов (включая опухоль-секретируемые гормоны, такие как способствующие карциноидному синдрому), замедление образования первичных или вторичных опухолей, замедленное развитие первичных или вторичных опухолей, уменьшенное возникновение первичных или вторичных опухолей, замедленное развитие или уменьшение тяжести вторичных эффектов заболевания, остановку роста опухоли и регрессию опухолей, увеличение периода времени до прогрессирования (ТТР), повышенное выживание без прогрессирования (РР8) и/или повышенное общее выживание (О8) среди прочего.

В настоящей заявке цитируется ряд ссылочных документов, раскрытия которых включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей их полноте. Варианты воплощения, раскрытые в настоящей

- 16 028414 заявке, не должны ограничиваться в объеме конкретными вариантами воплощения, раскрытыми в примерах, которые предназначены для иллюстрации некоторых аспектов раскрытых вариантов воплощения, и любые варианты воплощения, которые являются функционально эквивалентными, охватываются настоящим раскрытием.

Действительно, различные модификации вариантов воплощения, раскрытых в настоящей заявке, в добавление к тем, которые показаны и описаны в настоящей заявке, будут очевидны специалистам в данной области и предполагаются как охватываемые прилагаемой формулой изобретения.

Claims (21)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения сквамозно-клеточной карциномы головы и шеи, включающий введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3 -ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино [2,3Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.
2. 2. Способ по п.1, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК.
3. 3. Способ по п.2, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК в результате потери РТЕЫ, Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии БОРК или комбинации этих факторов.
4. 4. Способ по п.1, где указанному пациенту вводят от около 0,5 до около 128 мг/день 1-этил-7-(2метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3 -ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.
5. 5. Способ по п.4, где указанному пациенту вводят 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 20, 30, 45, 60, 90, 120 или 128 мг/день 1 -этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь]пиразин2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.
6. 6. Способ по п.1, где указанному пациенту вводят стандартную лекарственную форму, включающую 0,25, 1,0, 5,0, 7,5 или 10 мг 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.
7. 7. Способ улучшения состояния в соответствии с критериями оценки ответа в солидных опухолях (КЕС18Т 1.1) у пациента, включающий введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера пациенту, страдающему сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи.
8. 8. Способ по п.7, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК.
9. 9. Способ по п.8, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК в результате потери РТЕЫ, Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии ЕОРК или комбинации этих факторов.
10. 10. Способ ингибирования фосфорилирования 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в биологическом образце пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающий введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту и сравнение количества фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в биологическом образце пациента, полученном до и после введения указанного 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, где меньшее фосфорилирование 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в указанном биологическом образце, полученном после введения указанного 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, по сравнению с количеством фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 и/или АКТ в указанном биологическом образце, полученном до введения указанного 1этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, указывает на ингибирование.
11. 11. Способ по п.10, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК.
12. 12. Способ по п.11, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК в результате потери РТЕЫ, Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии ЕОРК или комбинации этих факторов.
13. 13. Способ ингибирования ДНК-зависимой протеинкиназной (ДНК-РК) активности в образце кожи пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающий введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указан- 17 028414 ному пациенту и сравнение количества фосфорилированной ДНК-РК в биологическом образце пациента, полученном до и после введения 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, где меньшее фосфорилирование ДНК-РК в указанном биологическом образце, полученном после введения 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, по сравнению с количеством фосфорилированной ДНК-РК в указанном биологическом образце, полученном до введения указанного 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера, указывает на ингибирование.
14. 14. Способ по п.13, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК.
15. 15. Способ по п.14, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК в результате потери РТЕК Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии ЕСРК или комбинации этих факторов.
16. 16. Способ измерения ингибирования фосфорилирования 86КР, 4Е-ВР1 или АКТ у пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающий введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту, измерение количества фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 или АКТ у указанного пациента и сравнение указанного количества фосфорилированного 86КР, 4Е-ВР1 или АКТ с количеством, определенным у указанного пациента до введения эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.
17. 17. Способ по п.16, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК.
18. 18. Способ по п.17, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК в результате потери РТЕК Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии ЕСРК или комбинации этих факторов.
19. 19. Способ измерения ингибирования фосфорилирования ДНК-РК 82056 в образце кожи пациента, страдающего сквамозно-клеточной карциномой головы и шеи, включающий введение эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино [2,3-Ь] пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера указанному пациенту, измерение количества фосфорилированной ДНК-РК 82056, присутствующей в образце кожи, и сравнение указанного количества фосфорилированной ДНК-РК 82056 с количеством, определенным в образце кожи указанного пациента до введения эффективного количества 1-этил-7-(2-метил-6-(1Н-1,2,4триазол-3-ил) пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-Ь]пиразин-2(1Н)-она или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или таутомера.
20. 20. Способ по п.19, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК.
21. 21. Способ по п.20, где в сквамозно-клеточной карциноме головы и шеи активирован путь Р13К/тТОК в результате потери РТЕК Р1К3Са мутации или чрезмерной экспрессии ЕСРК или комбинации этих факторов.